E.coli O157:H7 Тест

28 Pierre Köenig St., Talpiot Industrial Area
P.O.B 53231 Jerusalem 91531 ISRAEL
Phone: 972-2-6781861; Fax : 972-2-6781852
e-mail: info@novamed.co.il
E.coli O157:H7 Тест
ЭКСПРЕСС-ТЕСТ ДЛЯ КАЧЕСТВЕННОГО ОДНОЭТАПНОГО ВЫЯВЛЕНИЯ АНТИГЕНА
Escherichia coli (E. coli) O157:H7 В ФЕКАЛИЯХ ЧЕЛОВЕКА.
Кат. № R-6029
ИНСТРУКЦИЯ ПО ПРИМЕНЕНИЮ
НАЗНАЧЕНИЕ
E. coli O157:H7 Тест производства Novamed Ltd, Израиль
представляет собой иммунохроматографическую экспресс
тест-систему для качественного определения антигена
O157:H7 в фекалиях человека с целью помощи в диагностике
инфекций обусловленных E. coli O157:H7.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ
E.coli O157:H7 – один из многочисленных штаммов
кишечной палочки, продуцирующий веротоксин. Несмотря на
то что большинство штаммов кишечной палочки являются
естественными
обитателями
кишечника
животных
(комменсалами), штамм O157:H7 вызывает серьезные
повреждения эпителия и эндотелия толстого кишечника.
E.coli O157:H7 обнаруживают в кишечнике здоровых
животных – крупного рогатого скота, оленей, коз, овец,
которые являются резервуаром инфекции. E.coli O157:H7
была
идентифицирована
как
причина
тяжелого
геморрагического колита во время вспышки в 1982 г.,
связанной с употреблением в пищу контаминированных
кишечной палочкой мясных продуктов. Начиная с первой
вспышки и до настоящего момента было зафиксировано
значительное количество случаев инфекции, связанной
главным образом с употреблением в пищу непроваренного
говяжьего мяса, сырого молока, некипяченой воды и т. п.
ПРИНЦИП
E. coli O157:H7 Тест производства компании Novаmed Ltd,
Израиль представляет собой помещенную в пластиковый
футляр (кассету) полоску нитроцеллюлозной мембраны с
фиксированными на ней, в области добавления пробы,
моноклональными антителами специфичными к антигенам E.
coli O157 и конъюгированными с цветными частицами
латекса. В области тестового окошка также зафиксированы
моноклональные антитела к антигенам E. coli O157.
Поликлональные
анти-антитела
зафиксированы
в
контрольной зоне полоски. Антигены E. coli O157:H7
содержащиеся в пробе реагируют
со специфическими
моноклональными антителами, формируя комплекс антигенантитело, который мигрирует по мембране, образуя красную
линию в тестовой зоне кассеты (Т), что оценивается как
положительный результат. Непрореагировавший конъюгат
мигрирует далее к контрольной зоне, где захватывается
поликлональными анти-антителами, формируя зеленую
линию в контрольной зоне (С) кассеты. Зеленая контрольная
линия появляется всегда. Наличие контрольной линии
подтверждает корректность результатов теста (правильный
объем пробы, необходимый темп миграции, требуемое
качество реагентов).
1
КОМПЛЕКТАЦИЯ НАБОРА
В состав набора входит:
20 тест-систем (кассет) E. coli O157:H7 Тест для выявления
антигена E. coli O157:H7 в фекалиях человека, производства
компании
Novаmed
Ltd,
Израиль,
упакованных
в
индивидуальные алюминиевые пакетики;
20 одноразовых пластиковых пробирок-капельниц содержащих
буфер для разведения проб;
инструкция к применению.
ПРЕДУПРЕЖДЕНИЯ И МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
1. Не допускается использование набора и его компонентов после
истечения срока годности.
2.Все компоненты набора предназначены только для
профессионального использования "in vitro" в целях
лабораторной диагностики.
3.Исследование проб фекалий регламентируется правилами
работы с инфекционными агентами.
4.Не проводить исследование, используя компоненты наборов
разных серий.
5.Нарушение временного и температурного режимов инкубации
при проведении исследования может привести к получению
ошибочных результатов.
6.Тест должен быть проведен в течение двух часов после
вскрытия индивидуальной упаковки.
7.Внимательно прочтите инструкцию перед использованием.
ХРАНЕНИЕ
E. coli O157:H7 Тест необходимо хранить при температуре 430оС. Не замораживать!.
ОТБОР И ХРАНЕНИЕ ПРОБ
Образцы фекалий следует собрать в чистый сухой контейнер не
содержащий каких-либо презервантов или транспортной среды.
Образец можно хранить в холодильнике при температуре 2-4ºC в
течение 1-2 дней до тестирования. Для более длительного
хранения образец следует заморозить и хранить в морозильной
камере при –20ºC. В этом случае образец следует полностью
разморозить и довести до комнатной температуре перед началом
тестирования.
С целью обогащения культуры, образец инокулируют в
Триптозо-Соевый Бульон и инкубируют в течение ночи при
постоянном встряхивании при 37ºC. В данном случае в качестве
образца используется обогатительная среда.
ТЕХНИКА ВЫПОЛНЕНИЯ АНАЛИЗА
Подготовка образца к тестированию (см. Рис.1):
Для каждого образца фекалий следует использовать отдельную
пробирку-капельницу с буфером для разведения. Открутить
крышку пробирки-капельницы и с помощью пластмассовой
палочки прикрепленной к внутренней стороне крышки забрать
200-300 мг фекалий втыкая палочку не менее двух раз в разные
части образца. Перенести взятую пробу в пробирку, плотно
закрыть крышкой и энергично встряхивая довести образец до
максимального разведения в буфере. В случае жидкого стула,
забрать в качестве образца 200-300 мкл испражнений пипеткой и
перенести в пробирку-капельницу с буфером.
Рисунок 1
Pick up the sample
Mix the sample with
the buffer
Break the cap
FAECES
Процедура выполнения теста (см. Рис.2):
Перед началом тестирования следует довести тестовую кассету и
образец до комнатной температуры (15-30ºC). Не вскрывать
индивидуальную упаковку теста до начала исследования.
Непосредственно перед проведением исследования вскрыть
индивидуальную упаковку теста.
Маркировать
тестовую
кассету
инициалами
или
идентификационным номером пациента.
Суспендировать пробу энергичным встряхиванием пробиркикапельницы.
Отломить кончик крышки-капельницы и через открывшееся
отверстие внести 4 капли (100 мкл) тестируемой суспензии в
окошко для внесения пробы (S).
Результат анализа учитывают через 10 мин после загрузки
тестовой кассеты пробой.
Рисунок 2
4 drops of the mixture “sample + buffer”
S
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Рисунок 3
POSITIVE
NEGATIVE
INVALID
INVALID
Положительный результат
Появляются красная линия в тестовой зоне (T) и зеленая линия
в контрольной зоне (C) тестовой кассеты .
Отрицательный результат
Появляется зеленая линия только в контрольной зоне (C)
тестовой кассеты.
Сомнительный (недействительный) результат
При отсутствии видимой зеленой линии в контрольной зоне (C)
вне зависимости от наличия или отсутствия красной линии в
тестовой зоне (Т), результаты анализа оценивают как
сомнительные. Неправильный объем пробы, несоблюдение
процедуры тестирования или качество реагентов – наиболее
частые
причины
отсутствия
контрольной
линии.
Проанализируйте процедуру тестирования и повторите ее с
использованием новой тест-кассеты. Если проблема остается,
следует прекратить тестирование и связаться с
местным
дистрибьютором.
Замечания по интерпретации результатов
Интенсивность окраски красной и голубой линий в тестовой зоне
кассеты меняется в зависимости от концентрации антигенов в
образце. Однако ни количественное содержание антигенов, ни
степень их возрастания не могут быть установлены с помощью
данного качественного теста.
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
1. Тест предусматривает
внутренний контроль за
правильностью проведения процедуры. Зеленая линия
появляющаяся в контрольной зоне (C) тестовой кассеты,
указывает на правильность проведения процедуры теста.
2. Результаты теста не учитывают в случае если неясный фон
мешает интерпретировать результаты.
ОГРАНИЧЕНИЯ
1.Тест
E.coli
O157:H7
предназначен
только
для
профессионального использования в диагностике "in vitro".
2.Тест E.coli O157:H7 идентифицирует исключительно антигены
E.coli O157:H7 и не дифференцирует жизнеспособных и
нежизнеспособных микроорганизмов.
Избыточное
количество
образца
может
обусловить
неправильный результат Теста E.coli O157:H7 в виде коричневой
линии в тестовом окошке (Т). В подобном случае следует
развести образец в буфере и повторить процедуру тестирования.
Некоторые образцы фекалий могут уменьшать интенсивность
окраски контрольной линии.
3.Тест E.coli O157:H7 является скрининговым тестом для
качественного определения присутствия антигенов E.coli
O157:H7 в исследуемом материале и применяется только для
определения антигенов E.coli O157:H7 в образцах фекалий
человека. Ни количественное содержание антигенов, ни степень
их возрастания не могут быть установлены с помощью данного
качественного теста..
4.Отрицательный результат Теста E.coli O157:H7 не исключает
возможность
наличия инфекции в отдельных случаях по
причине низкой концентрации бактериальных антигенов.
Для
постановки
корректного
диагноза
необходимо
сопоставление результатов Теста E.coli O157:H7 с прочей
клинической информацией.
5.Тест E.coli O157:H7 дает лишь предполагаемый диагноз
инфекции обусловленной E.coli O157:H7. Только лечащий врач
может оценивать полученные результаты в свете других
клинических данных, включая результаты других лабораторных
исследований.
6.Для проведения исследования необходимо использовать только
материалы, поставляемые в наборе E.coli O157:H7 Тест.
Использование материалов, не поставляемых в наборе, может
повлиять на качество отбора пробы.
ХАРАКТЕРНЫЕ ОСОБЕННОСТИ ТЕСТА
Чувствительность теста : 100% Специфичность теста: 85,0%
Прогностическая ценность положительного результата (positive
predictive value) - 70% и прогностическая ценность
отрицательного результата (negative predictive value) - 100%.
Точность теста: 94%
Тест не дает неспецифических перекрестных реакций с
основными
патогенами
желудочно-кишечного
тракта:
ротавирусом, аденовирусом, кампилобактером и лямблией.
ЛИТЕРАТУРА:
1.Rangel, J. M., Sparling, P. H., Crowe, C., Griffin, P. M. & Swerdlow, D. L.
2005 Epidemiology of Escherichia coli O157:H7 outbreaks, United States,
1982–2002. Emerg. Infect. Dis. 11, 603–609.
2.Griffin, P.M. “The Epidemiology of infections caused by Escherichia coli
O157:H7, other enterohemorrhagic E. coli, and the associated haemolytic
uremic syndrome”. Epidemiol. Rev , 1991, 13:60-98.
УТВЕРЖДАЮ
Генеральный директор
ООО «ГЕМ»
________________С.А.
Гольдберг
«17» сентября 2010 г.
Представительств
о в РФ:
ООО
«ГЕМ»
г.
Москва,
Новый
Зыковский проезд, д.
4А.
+7 (495) 787-04-32
www.hemltd.ru
IFU-E.coli-R-6029-HEM-russ-v.01-04.08.11.doc