Babesia canis canis—основной инфекционный агент бабезиоза
advertisement
ПАРАЗИТОЛОГИЯ Babesia canis canis—основной инфекционный агент бабезиоза собак в Новосибирской области ÓÄÊ 616.99:619 В.А. Рар1, С.А. Боляхина2, Л.П. Захаренко3, В.П. Астанин4 1 Институт химической биологии и фундаментальной медицины СО РАН (Новосибирск). Институт экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН (Новосибирск). 3 Институт цитологии и генетики, СО РАН (Новосибирск). 4 Территориальное управление роспотребнадзора по Новосибирской области (Новосибирск). 2 Êëþ÷åâûå ñëîâà: áàáåçèîç ñîáàê, Babesia canis canis, ãåíåòè÷åñêèå âàðèàíòû, Dermacentor reticulatus, äâóõðàóíäîâàÿ ÏÖÐ Ñîêðàùåíèÿ: ÀËÒ — àëàíèíàìèíîòðàíñôåðàçà, ÀÑÒ — àñïàðòàòàìèíîòðàíñôåðàçà, ÏÖÐ — ïîëèìåðàçíàÿ öåïíàÿ ðåàêöèÿ, ðÐÍÊ — ðèáîñîìàëüíàÿ ðèáîíóêëåèíîâàÿ êèñëîòà, ÙÔ — ùåëî÷íàÿ ôîñôàòàçà Введение Бабезиоз — широко распространенное заболевание раз личных видов домашних и диких животных, вызываемое простейшими гемопаразитами рода Babesia (сем. Babesiidae, отр. Piroplasmida) и переносимое клещами. Бабезий, наряду с филогенетически близкими тейлериями (сем. Theileriidae, отр. Piroplasmida, род Theileria), также называют пироплазма ми, а вызываемые ими заболевания — пироплазмозами. У больных животных развиваются лихорадка, гемолитическая анемия, тромбоцитопения, отмечают увеличение селезенки. Цикл развития бабезий включает стадии размножения как внутри клещей, так и внутри эритроцитов. Бабезий подразде ляют по морфологическим признакам на две группы: малые (размер внутриэритроцитарных форм 1,0…2,5 мкм) и боль шие (2,5…5,0 мкм). Морфологическая классификация в ос новном соответствует результатам филогенетического ана лиза, основанного на сравнении нуклеотидных последова тельностей гена 18S рРНК [11]. Развитие бабезиоза у собак ранее связывали лишь с Babesia gibsoni (малые пироплазмы) и Babesia canis (боль шие). В настоящее время известно по крайней мере три гене тически отдельных ветви малых пироплазм (включая Азиат ский и Калифорнийский геноварианты B. gibsoni), изолиро ванных от собак [12]. B. gibsoni широко распространены в Северной Америке, Азии и Австралии, их специфичные пе реносчики — клещи Rhipicephalus sanguineus и Haemaphisalis longicornis [10]. Среди больших пироплазм патогенными для собак считают три подвида Babesia canis (Babesia canis canis, Babesia canis vogeli и Babesia canis rossi) [14], а также бабезий, генетически сходных с Babesia bigemina и Babesia caballi [6]. Подвиды B. canis различаются между собой по специфичным переносчикам, антигенным свойствам [9], а также по данным филогенетического анализа. Наиболее патогенен южноаф риканский изолят B. canis rossi, переносимый клещами Haemaphysalis leachi. Слабопатогенные B. canis vogeli перено сятся клещами Rhipicephalus sanguineus и встречаются в ос новном в субтропических и тропических зонах. B. canis canis широко распространены в Европе и вызывают заболевания различной степени тяжести; их специфичные переносчики — клещи Dermacentor reticulatus [7, 8]. В России первые сообщения о пироплазмозе собак по 14 явились в 1909 г. В последующие годы случаи заболевания пироплазмозом были зарегистрированы в различных регио нах России (в Пятигорске, Самаре, Томске и т.д.) [5]. В насто ящее время инфекция широко распространена как в европейс кой части России [1, 2], так и в Западной Сибири [4]. Около 30 % собак от числа поступающих в ветеринарные клиники в крупных городах Сибири во время сезона активности клещей инвазированы бабезиями [3]. Однако, насколько нам извест но, молекулярногенетических исследований этиологическо го агента этого заболевания в России (и в частности на юге За падной Сибири) до сих пор никто не проводил. Цель исследования Цель настоящей работы: определить видовую принад лежность инфекционного агента бабезиоза собак и изучить его распространение в природном очаге. Материалы и методы В течение 2003—2005 гг. были обследованы 980 собак в ин ституте экспериментальной ветеринарии Сибири и Дальнего Востока СО РАСХН, пос. Краснообск Новосибирской области. Диагноз на бабезиоз ставили на основании клинических при знаков и микроскопического исследования мазков перифери ческой крови, окрашенных по методу Романовского—Гимзы. Образцы крови от 35 собак с диагнозом бабезиоз были отобраны в пробирки с ЭДТА (конечная концентрация 0,05 М) в августе—сентябре 2003 г. и в мае 2005 г. Имаго 72 луговых клещей D. reticulatus и 115 таежных клещей Ixodes persulcatus были собраны на флаг с растительности на терри тории Новосибирской области в 2003—2004 гг. ДНК, выде ленную из образцов крови и из клещей, исследовали на нали чие ДНК бабезий методом двухраундовой ПЦР в присутствии родоспецифичных праймеров из области гена 18S рРНК [13]. Вид и генетические варианты бабезий устанавливали, опре деляя нуклеотидные последовательности продуктов ПЦР в Центре секвенирования ДНК СО РАН и сравнивая их с пос ледовательностями из базы данных GenBank с использова нием компьюторных программ Blastn и ClustalW. Нуклеотидные последовательности фрагмента гена 18S рРНК B. canis canis, выявленные в образцах крови собак и в D. reticulatus, зарегестрированы в базе данных GenBank под номерами AY527063, AY527064, AY962186, AY962187, AY649326. Результаты и обсуждение Несмотря на активную неспецифическую профилактику (применение противоклещевых ошейников, спреев, аэрозо лей), заболеваемость собак бабезиозом продолжает оставать ся на высоком уровне. В Новосибирской области случаи ба безиоза регистрируют с конца апреля по начало ноября, при этом наблюдают весеннюю (май) и осеннюю (август—сен тябрь) вспышки заболеваемости (табл. 1). ПАРАЗИТОЛОГИЯ 1. Ñåçîííàÿ äèíàìèêà çàáîëåâàåìîñòè ñîáàê áàáåçèîçîì â ïîñ. Êðàñíîîáñê â 2003—2005 ãã. Ìåñÿö Îáùåå ÷èñëî îáñëåäîâàííûõ ñîáàê ×èñëî ñîáàê, áîëüíûõ áàáåçèîçîì Èíöèäåíòíîñòü, % Àïðåëü Ìàé Èþíü Èþëü Àâãóñò Ñåíòÿáðü Îêòÿáðü 84 110 74 75 120 102 112 7 38 6 4 22 38 17 8,3 34,5 8,1 5,3 18,3 37,3 15,2 Âñåãî 677 132 19,5 Как правило, болезнь развивается через тричетыре дня после укуса клеща. Возраст заболевших собак варьировал от 2 мес до 13 лет (средний возраст 3,8 года). Заболевание проте кало преимущественно в острой форме, у животных наблюда ли резкое угнетение, лихорадку, одышку, отказ от еды, гемо глобинурию, увеличение селезенки. У 98,4 % обследованных собак снижалось содержание гемоглобина и эритроцитов [до (4…5)×1012/л], количество лейкоцитов практически не изменя лось. У 86 % собак уменьшилась концентрация общего белка до 45…52 г/л (норма 54…71 г/л), что свидетельствует о развитии в организме острой воспалительной реакции. В крови больных животных повысился уровень ЩФ (у 78 % собак), билирубина (у 56 %), АЛТ (у 57 %), АСТ (у 57 %) и мочевины (у 36 %). Клинические симптомы заболевания во всех случаях были подтверждены результатами микроскопического ис следования мазков переферической крови (рис.). Лечение собак, состоявшее в использовании препарата верибен и сим птоматической терапии, приводило к выздоровлению во всех случаях. Образцы крови от 35 собак с подтвержденным диагнозом бабезиоза были исследованы на наличие ДНК бабезий. ПЦР с последующим определением нуклеотидных последователь ностей показала, что все образцы крови содержали ДНК ба Ìèêðîôîòîãðàôèÿ ìàçêà ïåðèôåðè÷åñêîé êðîâè ñîáàêè, îêðàøåííîãî ïî ìåòîäó Ðîìàíîâñêîãî—Ãèìçû, ñ âíóòðèýðèòðîöèòàðíûìè âêëþ÷åíèÿìè безий, относящихся к подвиду B. canis canis. Ранее в крови больных собак в Европе было выявлено три генетических ва рианта B. canis canis, различающихся по двум вариабельным нуклеотидным остаткам гена 18S рРНК (табл. 2) [7, 8]. Нук леотидная последовательность фрагмента рибосомального гена бабезий, обнаруженная в образце крови одной собаки из Новосибирской области, соответствовала широко распрост раненному в Европе генетическому варианту 1, а нуклеотид ные последовательности в образцах крови 23 собак соответ ствовали генетическому варианту 3, обнаруженному ранее только в Словении. В образцах крови 11 собак была выявле на ДНК одновременно двух генетических вариантов [13]. Собак в Новосибирской области в основном атакуют луговые клещи D. reticulatus и таежные клещи I. persulcatus. Клещи D. reticulatus хорошо известны как специфичные переносчики B. canis canis [9], в то время как способность таежных клещей пе реносить возбудителей бабезиоза собак не выявлена. Для клещей D. reticulatus характерны два пика активности (в мае и сентябре), что соответствует периодам с наибольшим числом случаев забо левания собак бабезиозом. В настоящей работе ни в одном из 115 исследованных клещей I. persulcatus ДНК бабезий не обнаружи ли, в то время как в 3 из 72 клещей D. reticulatus была выявлена ДНК B. canis canis. Следует отметить, что нуклеотидные после 2. Ñðàâíåíèå ãåíåòè÷åñêèõ âàðèàíòîâ B. canis canis Ãåíåòè÷åñêèé âàðèàíò Èñòî÷íèê èçîëÿöèè Íóêëåîòèäíûå ïîñëåäîâàòåëüíîñòè âàðèàáåëüíîãî ôðàãìåíòà ãåíà 18S ðÐÍÊ (ïîçèöèè 607…642 í.ï., ïðèâåäåíû ïî ïîñëåäîâàòåëüíîñòè AY072926) Íîìåð äîñòóïà â GenBank 1 Êðîâü ñîáàêè, Õîðâàòèÿ TTGACGGTTTGACCATTTGGTTGGTTATTTCGTTTT AY072926 2 Êðîâü ñîáàêè, Ñëîâåíèÿ TTAACGGTTTGACCATTTGGTTGGTTATTTCGTTTT AY259123 3 Òî æå TTAGCGGTTTGACCATTTGGTTGGTTATTTCGTTTT AY259124 1 Êðîâü ñîáàêè, Íîâîñèáèðñêàÿ îáëàñòü TTGACGGTTTGACCATTTGGTTGGTTATTTCGTTTT 3 Òî æå TTAGCGGTTTGACCATTTGGTTGGTTATTTCGTTTT AY527064 3 1 Òî æå TTAGCGGTTTGACCATTTGGTTGGTTATTTCGTTTT TTGACGGTTTGACCATTTGGTTGGTTATTTCGTTTT AY962186 AY962187 3 D.reticulatus, Íîâîñèáèðñêàÿ îáëàñòü TTAGCGGTTTGACCATTTGGTTGGTTATTTCGTTTT AY649326 3 1 Òî æå TTAGCGGTTTGACCATTTGGTTGGTTATTTCGTTTT TTGACGGTTTGACCATTTGGTTGGTTATTTCGTTTT 4 Òî æå TTAGCGGTTTGACCATTTGGTTGGTTATTTCGGTTT AY527063 Ï ð è ì å ÷ à í è å. Íóêëåîòèäíûå ïîñëåäîâàòåëüíîñòè, ïîëó÷åííûå â äàííîé ðàáîòå, âûäåëåíû æèðíûì øðèôòîì, âàðèàáåëüíûå íóêëåîòèäíûå îñòàòêè — áåëûì öâåòîì. РВЖ МДЖ №22006 15 ПАРАЗИТОЛОГИЯ довательности фрагмента рибосомального гена бабезий от двух клещей, собранных вблизи Новосибирска, соответствовали ге нетическим вариантам бабезий, обнаруженным в крови собак, в то время как нуклеотидная последовательность фрагмента гена бабезий от клеща, собранного в удаленном от Новосибирска Сузунском районе, содержала уникальную замену в консерван тивном участке (генетический вариант 4) (см. табл. 2). Выводы Был разработан метод обнаружения ДНК бабезий в кро ви собак и в клещах с использованием двухраундовой ПЦР. Было показано, что основным этиологическим агентом бабе зиоза собак в Новосибирской области является B. canis canis, данным патогеном инфицировано 4,2 % D. reticulatus. Генети ческие варианты B. canis canis, обнаруженные в крови собак, соответствовали ранее выявленным на территории Европы, в то время как в D. reticulatus был обнаружен новый генетичес кий вариант бабезий. ÁÈÁËÈÎÃÐÀÔÈß 1. Êîøåëåâà Ì.È., Îëåéíèêîâ Ñ.È., Ìîë÷àíîâ È.À. è Ñîøåíêî Ë.Ï. Ïîïóëÿöèîííàÿ ýïèçîîòîëîãèÿ áàáåçèîçà ñîáàê â Ìîñêîâñêîé îáëàñòè // Âåòåðèíàðèÿ, 2004; 4:51—53. 2. Ëóöóê Ñ.Í., Äüÿ÷åíêî Þ.Â. è Êàçàðèíà Å.Â. Ïèðîïëàçìèäîçû ñîáàê â ã. Ñòàâðîïîëå // Âåñòíèê âåòåðèíàðèè. 2002; 24:3, 34—37. 3. Íèêèòèíà Å.À., Øàéêèí Â.È., Áîëÿõèíà Ñ.À. Õàðàêòåð ïàòîëîãè÷åñêèõ è ðåïàðàòèâíûõ ïðîöåññîâ ïðè áàáåçèîçå ñîáàê // Âåñòíèê âåòåðèíàðèè. 2002; 24:3, 30—31. 4. Øàéêèí Â.È., Íèêèòèíà Å.À. Áàáåçèîç ñîáàê â Ñèáèðè // Âåñòíèê âåòåðèíàðèè. 2002; 24:3, 31—32. 5. ßêèìîâ Â.Ë. Áîëåçíè äîìàøíèõ æèâîòíûõ, âûçûâàåìûå ïðîñòåéøèìè. — Ì.-Ë.: Èçäàòåëüñòâî ñåëüñêîõîçÿéñòâåííîé è êîëõîçíîé êîîïåðàòèâíîé ëèòåðàòóðû, 1931. 6. Birkenheuer A.J., Neel J., Ruslander D., Levy M.G. and Breitschwerdt E.B. Detection and molecular characterization of a novel large Babesia species in a dog. // Vet Parasitol 2004; 124:151—160. 7. Caccio S.M., Antunovi B., Moretti A., Mangili V. et al. Molecular characterisation of Babesia canis canis and Babesia canis vogeli from naturally infected European dogs. //Vet Parasitol 2002; 106:285—292. 8. Duh D., Tozon N., Petrovec M., Strasek K. and Avsic-Zupanc T. Canine babesiosis in Slovenia: molecular evidence of Babesia canis canis and Babesia canis vogeli.// Vet Res 2004; 35:363—368. 9. Hauschild S., Schein E. The subspecies specificity of Babesia canis. // Berl Munch Tierarztl Wochenschr 1996; 109:216—219. 10. Higuchi S., Kuroda H., Hoshi H., Kawamura S. and Yasuda Y. Development of Babesia gibsoni in the midgut of the nymphal stage of the tick, Rhipicephalus sanguineus.// J Vet Med Sci. 1999; 61:697—699. 11. Homer M.J., Aguilar-Delfin I., Telford III S.R., Krause P.J. and Persing D.H. Babesiosis. // Clin Microbiol Rev. 2000; 13:451—469. 12. Kjemtrup A.M., Kocan A.A., Whitworth L., Meinkoth J. et al. There are at least three genetically distinct small piroplasms from dogs.// Int J Parasitol. 2000; 30:1501—1505. 13. Rar V.A., Maksimova T.G., Zakharenko L.P., Bolykhina S.A. et al. Babesia DNA detection in canine blood and Dermacentor reticulatus ticks in southwestern Siberia, Russia.// Vector Borne Zoonotic Dis. 2005; 5:285—287. 14. Uilenberg G., Franssen F.F., Perie N.M. and Spanjer A.A. Three groups of Babesia canis distinguished and a proposal for nomenclature. //Vet Q 1989; 11:33—40. SUMMARY V.A. Rar, S.A. Bolyakhina, L.P. Zakharenko, V.P. Astanin. Babesia canis canis — the prevalent infectious agent of canine babesiosis in Novosibirsk region. Babesia infection was studied in 35 blood samples of dogs with symptoms of babesiosis as well as among 72 Dermacentor reticulatus and 115 Ixodes persulcatus ticks from Novosibirsk region, South-Western Siberia, Russia. Babesia DNA was detected using nested PCR based on the 18S rRNA gene with subsequent direct sequencing. All the analyzed canine blood samples and 3 D. reticulatus were shown to contain Babesia canis canis DNA. Thus, the main etiological agent of canine babesiosis in Novosibirsk region is B. canis canis and D. reticulatus could serve as a vector of this infectious agent. 16 ÓÄÊ 616.61:619 Периренальные псевдоцисты у 26 кошек Дж.А. Бек1,2, К.Р. Белленгер1,3, В.А. Лэмб4, Р.К. Чарчер5, Г.Б. Хант1, Р.Г. Николл1, Р. Малик1 1 Department of Veterinary Clinical Sciences, The University of Sydney, New South Wales 2006 (Австралия). 2 Department of Veterinary Clinical Sciences, Washington State University, Pullman WA 991647060, USA (США). 3 Department of Veterinary Surgery, University College Dublin, Ballsbridge, Dublin 4, Ireland (Ирландия). 4 Veterinary Specialist Centre, PO Box 307, North Ryde, New South Wales 2113 (Австралия). 5 North Shore Veterinary Hospital, 94 Alexander Street, Crows Nest, New South Wales 2065 (Астралия). Êëþ÷åâûå ñëîâà: êîøêà, ïåðèíåôðàëüíàÿ ïñåâäîöèñòà, ïåðèðåíàëüíûé, ïî÷å÷íûé, ïî÷êà, ïñåâäîöèñòà, õèðóðãèÿ Ñîêðàùåíèÿ: ÃÍ — ãëîìåðóëîíåôðèò, ËÆ — ëåâûé æåëóäî÷åê, ËÏ — ëåâîå ïðåäñåðäèå, ÏÍ — ïî÷å÷íàÿ íåäîñòàòî÷íîñòü, ÏÖ — ïñåâäîöèñòà (û), Ò — òðàíññóäàò, ÓÇÈ — óëüòðàçâóêîâîå èññëåäîâàíèå, ÕÏÍ — õðîíè÷åñêàÿ ïî÷å÷íàÿ íåäîñòàòî÷íîñòü Цель: оценить клинические характеристики, анатомичес кую локализацию и характер содержимого ПЦ, результаты хирургического лечения и связь периренальных ПЦ с заболе ваниями почек у кошек. Методы: ретроспективное исследование 26 случаев забо левания кошек, включая 8 случаев хирургического лечения. Результаты: 19 (73 %) больных животных были самцами. Средний возраст составил 11 лет. У большинства пациентов на момент обследования наблюдали увеличение живота и на рушение функции почек различной степени. У 13 (50 %) жи вотных обнаружили билатеральные ПЦ. Содержимое ПЦ во всех случаях представляло собой Т или измененный Т. У всех кошек, подвергнутых хирургическому лечению, обнаружили субкапсулярные периренальные ПЦ. При биопсии или де тальном УЗИ у всех пациентов выявили сопутствующие па тологии почек. Хирургическое лечение уменьшало клини ческие проявления, но не останавливало развитие заболева ния. Средняя продолжительность жизни пациентов после операции составила 9 мес и достоверно коррелировала со сте пенью азотемии на момент обследования. Чрескожное дре нирование ПЦ оказалось неэффективным приемом в плане долговременного контроля за накоплением жидкости. Заключение: субкапсулярные периренальные ПЦ обра зуются у кошек при скоплении Т между капсулой и паренхи мой почек в результате поражения почечной паренхимы. ПЦ могут развиваться на различных стадиях почечной дисфунк ции. Резекция стенки ПЦ обычно облегчает симптомы болез ни, но не останавливает развитие патологии. У кошек про гноз зависит от степени почечной дисфункции на момент по становки диагноза.
