Сифилис РПГА тест (Syphilis TPHA Test liquid)

Syphilis TPHA Test, HUMAN GmbH
1
_____________________________________________________________________________________________________
Регистрационное удостоверение ФС №2009/04766 от 13.07.2009 г.
Сифилис РПГА тест (Syphilis TPHA Test liquid)
Гемагглютинационный тест для качественного и полуколичественного определения антител к Treponema
pallidum в сыворотке крови человека
Номер по каталогу: 50101
Набор рассчитан на 100 определений
ПРИНЦИП МЕТОДА
Тест основан на реакции непрямой (пассивной) гемагглютинации. Антигены Treponema pallidum
адсорбированы на поверхности птичьих эритроцитов. В присутствии специфических антител к T. pallidum
эритроциты слипаются, что ведет к появлению характерной картины в лунках планшета. Антитела к
непатогенным формам адсорбируются с помощью экстракта трепонем Райтера, входящего в состав
клеточной суспензии.
МАТЕРИАЛЫ И РЕАГЕНТЫ
Необходимые реагенты, входящие в состав набора
Набор содержит реагенты, достаточные для выполнения 100 определений:
STC
SCC
PC
NC
DIL
Тестовая клеточная суспензия (клетки птицы) (флакон с белой крышкой)
Контрольная клеточная суспензия (клетки птицы) (флакон с голубой крышкой)
Положительный контроль (флакон с красной крышкой).
Стабилизированный жидкий контроль, дающий положительную реакцию с рабочей
клеточной суспензией (человеческая сыворотка).
Отрицательный контроль (флакон с зеленой крышкой).
Стабилизированный жидкий контроль, дающий отрицательную реакцию с рабочей
и контрольной клеточной суспензией (бычья сыворотка).
Буфер для разведения (кроличья сыворотка желтого цвета)
2×4,0 мл
2×5,0 мл
1×0,5 мл
1×0,5 мл
1×20 мл
• Все реагенты готовы к применению. Содержат азид натрия <0,1%.
Необходимое оборудование и материалы, не входящие в состав набора
1. Автоматические микропипетки с объемами дозирования 25, 75 и 100 мкл,
2. Чистые круглодонные планшеты.
Внимание! Для проведения реакции рекомендуется использовать жесткие микропланшеты с U–образными
лунками, например, планшеты Dynex фирмы Labsystems c каталожным номером M24A.
ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ
Все невскрытые реагенты стабильны в течение всего срока годности при хранении при температуре 2-8 °С.
После вскрытия флаконов находящиеся в них реагенты стабильны в течение 6 недель при 2-8 °С (не
допускайте контаминации!).
ПОДГОТОВКА ПРОБ
Исследования проводятся только с сывороткой крови (не используйте плазму). Избегайте контаминации и
гемолиза. Свежие образцы могут храниться до 48 часов при температуре 2-8 °С или в течение 4 недель при
температуре –20 °С.
ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ
Качественное определение (скрининг)
1. Приготовьте три последовательных разведения пробы или контроля в лунках планшета. Для этого
внесите в лунку 1 100 мкл, а в лунки 2 и 3 – по 25 мкл DIL. После этого добавьте в лунку 1 25 мкл пробы,
PC или NC, перемешайте и перенесите 25 мкл полученной смеси в лунку 2 (контрольная лунка),
перемешайте содержимое второй лунки и перенесите 25 мкл смеси в лунку 3 (рабочая лунка),
перемешайте содержимое лунки 3 и удалите из нее 25 мкл жидкости.
2. Добавьте в контрольную лунку 2 75 мкл тщательно перемешанной SCC, а в рабочую лунку 3 – 75 мкл
тщательно перемешанной STC.
3. Осторожно встряхните планшет так, чтобы содержимое лунок перемешалось.
4. Поместите планшет на горизонтальную поверхность и оставьте его на 45-60 минут для прохождения
реакции. Можно оставить планшет на ночь. Избегайте вибрации и прямых солнечных лучей.
5. По истечении времени инкубации произведите учет результатов.
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2010
Тел.: 737-0363, Факс: 737-0363, E-mail: info@analytica.ru
Syphilis TPHA Test, HUMAN GmbH
2
_____________________________________________________________________________________________________
Полуколичественное определение (титрование)
1. Приготовьте 10 серийных разведений пробы или контроля в лунках планшета. Для этого внесите в лунку
1 100 мкл, а в последующие лунки 2-10 этого же ряда – по 25 мкл DIL. После этого добавьте в лунку 1 25
мкл пробы PC или NC, перемешайте и перенесите 25 мкл полученной смеси в лунку 2 (контрольная
лунка), перемешайте содержимое второй лунки и перенесите 25 мкл смеси в третью лунку, и так далее
до последней лунки с DIL, из которой после внесения смеси из предыдущей лунки и перемешивания
удалите 25 мкл жидкости.
2. Добавьте в лунку 2 75 мкл тщательно перемешанной SCC, а во все следующие лунки (3-10) по 75 мкл
тщательно перемешанной STC.
3. Осторожно встряхните планшет так, чтобы содержимое лунок перемешалось.
4. Поместите планшет на горизонтальную поверхность и оставьте его на 45-60 минут для прохождения
реакции. Можно оставить планшет на ночь. Избегайте вибрации и прямых солнечных лучей.
5. По истечении времени инкубации произведите учет результатов.
СХЕМА ВНЕСЕНИЯ (примечание от АНАЛИТИКИ)
Номер лунки
Буфер для
разведения, мкл
Образец, мкл
1
2
(контрольная)
3
(тестовая)
100
25
25
25
Перемешать и
перенести, мкл
Разведение
Контрольная
клеточная суспензия
Тестовая клеточная
суспензия
25
25
25
1:5
1:10
1:20
-
75
-
-
-
75
1:40
1:80
Конечное разведение
Инкубировать 45-60 минут при комнатной температуре.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Качественное определение
Отрицательный результат
Наличие в центре рабочей ячейки плотной пуговки из
неагглютинированных клеток с очень маленьким отверстием в
середине, или совсем без отверстия
Неопределенный результат
Наличие пуговки из клеток с небольшим отверстием в центре,
(толстое плотное кольцо на чистом фоне). Такие пробы
должны быть исследованы повторно
Положительный результат
Дно лунки выстлано гладким слоем агглютинированных клеток
(возможно наличие вокруг дополнительного кольца из клеток).
Положительные пробы должны быть исследованы повторно
полуколичественным методом
Результаты исследования могут быть учтены только при отсутствии агглютинации в контрольной лунке 2 (в
центре плотная пуговка из неагглютинированных клеток). Наличие агглютинации в контрольной лунке
свидетельствует о присутствии в сыворотке неспецифических агглютининов. Такая сыворотка должна
подвергаться специальной обработке (см. раздел: ПРИМЕЧАНИЕ).
Полуколичественное определение
Титр пробы определяется по наибольшему разведению, при котором различается агглютинация (например,
для лунки 3 это 1:80, для лунки 4 – 1:160 и т.д.). Пробы с титром ≥ 1:80 считаются положительными на
наличие антител к T. pallidum.
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2010
Тел.: 737-0363, Факс: 737-0363, E-mail: info@analytica.ru
Syphilis TPHA Test, HUMAN GmbH
3
_____________________________________________________________________________________________________
КОНТРОЛЬ КАЧЕСТВА
1. Для получения надежных результатов необходимо в каждой серии проб ставить положительные и
отрицательные контроли.
2. Отрицательный контроль должен давать плотные пуговки неагглютинированных клеток во всех лунках.
3. Положительный контроль должен давать четкую картину агглютинации. Титр положительного контроля
в полуколичественном исследовании – 1:2560 ± 1 разведение. Степень агглютинации должна снижаться
от 3 к 9 лунке.
ПРИМЕЧАНИЯ
1. SYPHILIS TPHA liquid является скрининговым тестом. Все пробы, дающие положительный результат в
РПГА тесте, должны быть подвернуты дальнейшим серологическим исследованиям для уточнения
диагноза. Независимые испытания данного набора показали, что диагностическая чувствительность
теста составляет 98,5%, а специфичность – 100%. Пробы от пациентов с первичным сифилисом,
содержащие, главным образом, специфические IgM антитела, могут давать отрицательные результаты.
Если в таких случаях остается подозрение на сифилис, следует повторить тест через две недели со
свежим образцом. Сыворотки больных, прошедших лечение, сохраняют положительные результаты
РПГА. По литературным данным ложноположительные результаты исследования могут наблюдаться
при лепре, инфекционном мононуклеозе и системных болезнях соединительной ткани. Поэтому
окончательная постановка диагноза должна базироваться на совокупности клинических и лабораторных
данных.
2. Пробы, в которых обнаружены неспецифические агглютинины (см. раздел: ИНТЕРПРЕТАЦИЯ
РЕЗУЛЬТАТОВ), могут быть очищены с помощью контрольной клеточной суспензии. Для этого к 25 мкл
сыворотки нужно добавить 0,5 мл контрольной клеточной суспензии, тщательно перемешать и
проинкубировать 30-60 мин при комнатной температуре. После инкубации смесь отцентрифугировать в
течении 5 минут, отобрать супернатант и внести 25 мкл супернатанта в 75 мкл [STC]. Продолжите
исследование согласно стандартной процедуре, описанной для качественного определения.
3. Все реагенты данного набора, приготовленные на основе человеческого материала, были исследованы
на наличие HBsAg и антител к ВИЧ и показали отрицательные результаты. Тем не менее, обращаться с
этими реагентами надлежит, как с потенциально инфицированными.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Сведения об аналитических характеристиках можно найти в Отчете об испытаниях, опубликованном в
Интернете на сайтах:
http://www.human.de/data/gb/vr/lx-tpha.pdf
или
http://www.human-de.com/data/gb/vr/lx-tpha.pdf
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Список литературы приведен в оригинале инструкции на английском языке.
Внимание! Перевод сделан с английского оригинала инструкции. Перед постановкой исследования
сверьте номер и дату издания вложенного в набор оригинала с указанными в настоящем переводе (см.
внизу справа). При несовпадении номеров или дат обратитесь в «Аналитику» за новым переводом, либо
руководствуйтесь оригиналом инструкции.
50101-Syphilis-TPHA.doc
25.01.2010 9:51:00
Оригинал LX-TPHA.doc
INF 5010101 GB
05-2008-19
_____________________________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2010
Тел.: 737-0363, Факс: 737-0363, E-mail: info@analytica.ru