Адеметионин и препараты на его основе.

Адеметионин и препараты на его основе.
Подтверждение подлинности и количественный хроматографический анализ.
Введение
Адеметионин часто называют активным метионином, поскольку является производным
незаменимой серосодержащей кислоты метионина и аденозинтрифосфата. Он является
предшественником незаменимых аминокислот и пептидов, включая цистеин, таурин и глутатион.
Препараты на его основе применяют для восстановления функции клеток печени (как
гепатопротектор), а также адеметионин используется как антидепрессант, в том числе в качестве
биологически активной добавки к пище. Сам адеметионин не сохраняет стойкость в течение
длительного времени и для его стабилизации используются различные растворы кислот и солей
(органических полианионов) для образования стабильных солей адеметионина, например 1,4бутандисульфоната или п-толуолсульфоната. При образовании стабильных солей достигается еще
одна цель - обеспечивается повышение содержания активного S-изомера (именно S-изомер имеет
высокую фармакологическую активность). При производстве препаратов используются
субстанции -S-аденозилметионин (внутренняя соль), S-аденозилметионина 1,4-бутандисульфонат
и S-аденозилметионина дисульфат ди-п-толуолсульфонат.
Известные способы получения устойчивых солей адеметионина включают использование
токсичных реактивов, что не только требует сложной очистки, но также применение надежных
методов контроля качества. К тому же известные соли адеметионина относительно нестабильны,
что также требует контроля качества при транспортировке и хранении.
Существует несколько распространённых методов качественного и количественного анализа
адеметионина и его препаратов, из которых высокоэффективная жидкостная (ВЭЖХ) и ионная
хроматографии (ИХ) наиболее информативны, поскольку позволяют не только надежно
идентифицировать вещества, но и определить количественное содержание не только активного
компонента, но и побочных продуктов и прочие примеси. Поэтому хроматографическое решение,
изложенное в данной статье, будет интересным не только производителям субстанции и
препаратов на его основе, но и контрольным лабораториям, чья задача оценить качество и
подлинность лекарственных средств, представленных на отечественном рынке.
В данной статье изложены вопросы идентификации (подтверждения подлинности) препаратов на
основе адеметионина, а также определение чистоты субстанции и препарата, количественное
определение активного вещества и противоионов методами ВЭЖХ и ИХ.
(S)-5'-[(3-Амино-3-карбоксипропил)метилсульфонио]-5-дезоксиаденозин гидроксид
(внутренняя соль).
Наличие в молекуле адеметионина двух первичных и четырех
третичных атомов азота обуславливает его основные свойства.
Таким образом, молекула адеметионина может присоединить от
одного до 6 протонов. Данное свойство используется для
повышения стабильности адеметионина. Известно приготовление
стабильных солей адеметионина с солями лития и других
катионов. Данные соли стабильны до полугода.
Адеметионин и препараты на его основе.docx
стр 1 из 5
Более стабильные композиции адеметионина образуются с органическими веществами, в
частности с сульфокислотами. Процесс получения данных солей является относительно
несложным, соотношение адеметионина к сульфокислоте равно 1:3.
Адеметионина п-толуолсульфат дисульфонат. (S–(5´ аденозил)-L-метионин п-толуолсульфат
дисульфонат)
Двойная соль адеметионина с серной и п-толуолсульфокислотой.
Адеметионина 1,4-бутандисульфонат (S-аденозил-L-метионина 1,4-бутандисульфонат).
Наиболее распространенная на рынке солевая форма
адеметионина.
ВЭЖХ определение адеметионина и побочных продуктов
На хроматограмме (рис 1.)представлено разделение следующих веществ:
Adenine - Аденин
SAO – S-аденозил-L-гомоцистеин
PSSD4 - Адеметионина 1,4-бутандисульфонат
MTA – Метилметионин
DecaSAMe – декарбоксилированная форма S-аденозил-L-метионина
Разделение осуществлено с использованием утра-ВЭЖХ системы UltiMate3000 RSLC и 2-х
микронной колонки Acclaim PA2, отличительной особенностью которой является разделение
веществ, как кислотной, основной, так и нейтральной природы и работа в самом широком
диапазоне рН от 1.5 до 10. Высокоэффективное изократическое разделение смеси и
детектирование на УФ-детекторе при 260 нм позволяет выполнить полный анализ на чистоту
преперата и колличественное определение активного вещества всего за 3 минуты.
Адеметионин и препараты на его основе.docx
стр 2 из 5
Рис.1
Ионохроматографическое определение противоионов в препаратах адеметионина
Около половины всех фармпрепаратов производится в виде солевых форм. Образование
фармацевтической соли – это крайне важный шаг в разработке стабильного лексредства, с
пониженной токсичностью и гигроскопичностью. Хотя доля солей сульфокислот как
противоионов активных инградиентов не столь велика, по сравнению с другими солевыми
формами, их использование увеличивается в разы за последние двадцать лет. Определение
концентрации противоионов в субстанции необходимо для установления стехиометрии,
правильной молекулярной массы вещества и полноты образования солевой формы. Не менее
важно по противоиону подтверждать подлинность субстанции.
Ионная хроматография зарекомендовала себя как надежный, чувствительный и селективный
метод определения широкого круга как неорганических, так и органических ионов в различных
объектах, включая фармацевтические средства. Весь накопленный опыт этого метода
демонстрирует его способность определять противоионы, примеси и продукты деградации
ионного характера в различных субстанциях и готовых лекарственных формах.
Ионохроматографическое определение 1,4-бутандисульфоновой кислоты (в виде 1,4бутандисульфоната) и других сульфокислот.
Существует как минимум два детально отработанных варианта определения 1,4бутандисульфоната. Вариант с ион-парной хроматографией в сочетании с кондуктометрическим
детектированием с подавлением фонового сигнала осуществлен на колонке IonPac NS1.
Данная колонка является полимерной обращенно-фазной колонкой, специально предназначенной
для ион-парных разделений высокомолекулярных органических веществ ионной природы таких,
как органические кислоты и сульфоктанты, чье разделение по ионо-обменному механизму не
Адеметионин и препараты на его основе.docx
стр 3 из 5
всегда осуществимо. На рис.2 приведена хроматограмма
разделения алифатических сульфокислот с использованием
тетрабутиламоний гидроксида в качестве ион-парного
реагента. Где 1- метансульфоновая кислота, а 7декансульфоновая кислота.
Рис.2.
Поскольку сульфокислоты, как правило, являются
сильными кислотами, в воде они полностью диссоциируют с
образованием сульфонатов, которые в свою очередь можно
разделить по ионо-обменному механизму и продетектировать на кондуктометрическом детекторе
с подавлением фонового сигнала элюента.
Т.о. второй вариант определения сульфокислот – ионная хроматография с подавлением.
Здесь, в свою очередь также возможны два варианта – непосредственно определение
сульфокислот и определение сульфокислот в лекарственных формах с предварительным
удалением матрицы.
На рис.3 приведен вариант прямого определения 1,4бутандисульфоната с использованием ионообменной
колонки IonPac AS9-SC и кондуктометрического
детектора с мембранным саморегенерируемым
подавителем ASRS. Элюент 5 мМ NaCO3/1,8 mM
NaHCO3, скорость 2 мл/мин, объем инжекции 100мкл.
Пики: 1 -1,4-бутандисульфонат; 2- 1,2-этандисульфонат
(вн. стандарт).
Рис.3.
Однако для контроля качества готовых лекарственных форм возможно интересным решением
будет использование автоматической пробоподготовки (удаление матрицы) для определения
сульфокислот в составе препарата.
Для экстракции сульфокислоты из сухого препарата обычно используют смесь вода:метанол
20:80. Для этого 25 мг образца тщательно растворяют в 250 мл экстрагента для получения
раствора препарата с концентрацией 10 мг/л. Полученный экстракт фильтруют через 0,45 мкм
шприцевой фильтр до инжекции в ионный хроматограф. В качестве колонки для удаления
матрицы используется IonPac NG1 колонка, которая удерживает водонерастворимые гидрофобные
компоненты экстракта и пропускает через себя водорастворимые, такие как сульфокислоты.
Которые, в свою очередь, поступают на аналитическую анионообменную колонку для разделения
и детектирования на кондуктометрическом детекторе с подавлением.
Адеметионин и препараты на его основе.docx
стр 4 из 5
На рис.4 приведены хроматограммы определения п-толуолсульфоната в составе лекарственной
формы с использованием ионообменной колонки IonPac AS22* и кондуктометрического детектора
с мембранным саморегенерируемым подавителем ASRS. Элюент 4,5 мМ NaCO3/1,4 mM NaHCO3,
скорость 1,2 мл/мин, объем инжекции 25мкл. Хроматограммы: А- бланк, В-стандарт 20 мг/л, Собразец лекарственной формы 1, D- образец лекарственной формы 2.
Рис.4.
Использование колонки AS9-SC дает схожие аналитические результаты.
*
Для дополнительной информации и/или запроса коммерческого предложения, просим
обращаться по адресу:
Представительство Abacus Analytical Systems GmbH,
Рыбаковой Е.В.
Россия, Москва, 127106, Гостиничный пр-д, д.4Б, оф.413
Тел.: (495) 726 5540
Факс: (495) 726 5541
Email elena.rybakova@abacus-lab.ru
www.abacus-lab.ru
Адеметионин и препараты на его основе.docx
стр 5 из 5