По ветеринарной вирусологии

Федеральное государственное образовательное учреждение
высшего профессионального образования
«Московская государственная академия ветеринарной медицины и биотехнологии имени К.И.Скрябина»
Р.В.Белоусова, И.В.Третьякова, М.С.Калмыкова, Е.И.Ярыгина
ПОСОБИЕ
ПО ВЕТЕРИНАРНОЙ ВИРУСОЛОГИИ
Москва 2011 г.
2
УДК 619:578 (07)
Р.В.Белоусова, И.В.Третьякова, М.С.Калмыкова, Е.И.Ярыгина
Пособие
к самостоятельному изучению вопросов частной вирусологии для студентов ветеринарно-биологического факультета и факультета ветеринарной медицины
очной, очно-заочной (вечерней) и заочной форм обучения ветеринарных высших учебных заведений
Описаны все вирусы, изучаемые студентами в разделе «Частная вирусология»,
их таксономическая характеристика (семейство, род, вид), особенности репродукции, принципы постановки предварительного и окончательного диагноза на
основании лабораторной диагностики, принципы серологических реакций, используемых в лабораторной диагностике. Кроме того, представлены основы
современных методов лабораторной диагностики - иммуноферментного анализа и полимеразной цепной реакции, а также варианты диагностических задач и
тем рефератов для студентов очной, очно-заочной (вечерней) и заочной форм
обучения.
Предназначены для студентов ветеринарно-биологического факультета и факультета ветеринарной медицины очной, очно-заочной (вечерней) и заочной
форм обучения ветеринарных высших учебных заведений, врачей - вирусологов ветеринарных лабораторий и научно-исследовательских учреждений Российской Федерации.
Утверждены учебно-методической комиссией ветеринарно-биологического факультета ФГОУ ВПО МГАВМиБ.
3
Содержание
страницы
1. Введение
4
2. Таксономическая характеристика (семейство, род, вид) и
6
особенности репродукции вирусов животных
3. Принципы постановки предварительного диагноза на ви-
16
русную болезнь
4. Патологический материал: правила отбора, транспортиров-
27
ки и хранения.
5. Лабораторная диагностика вирусных болезней. Устройство
29
и правила работы вирусологической лаборатории. Подготовка патологического материала для исследования. Этапы
лабораторной диагностики.
6. Специфическая профилактика вирусных болезней
49
7. Список изучаемых вирусов. Диагностические задачи по ча-
51
стной вирусологии.
8. Требования к оформлению реферата по частной вирусологии.
63
4
1. Введение
В последнее время наука о вирусах и болезнях, которые они вызывают,
развивается стремительными темпами. Вирусы в инфекционной патологии человека, животных и растений в настоящее время играют большую роль. С одной стороны, это этиологические агенты многих инфекционных болезней, с
другой – удобная биологическая модель для решения фундаментальных задач в
области биологии, иммунологии, генетики, генной инженерии.
Вирусы, подобно другим инфекционным агентам, содержат генетическую информацию в форме последовательности нуклеотидов в молекулах ДНК
или РНК, но реализуют её с помощью триплетного кода только в чувствительной клетке. Они не имеют своего обмена веществ, системы выделения, белоксинтезирующих и энергообразующих систем.
Вирусы являются этиологическими агентами многих респираторных,
кишечных и особо опасных (конвенционных) болезней. Некоторые из них вызывают мёртворождение и внутриутробные патологии у плода. Установлена
роль вирусов в возникновении некоторых хронических заболеваний. Считают,
что одной из возможных причин возникновения опухолевых болезней также
являются вирусы.
Особенностью вирусов является их способность мутировать под действием внешних факторов и внутренней среды организма. Это может приводить к
появлению совершенно новых эпидемических и эпизоотических штаммов вирусов с изменёнными антигенными свойствами, которые «ускользают» от факторов иммунитета, а существующие вакцины оказываются не эффективными в
защите организма от этих вирусов.
Современная вирусология исходит из того, что все вирусы на основании
определённых критериев занимают соответствующий уровень - таксон. Исходя
из этого, была разработана уникальная систематика вирусов, которая получила
название таксономия вирусов. Она требует всестороннего изучения вирусов с
5
использованием последних достижений науки, включая современные нанотехнологии.
Для изучения ветеринарной вирусологии студентами ветеринарных
высших учебных заведений авторы настоящих Методических рекомендаций
предлагают краткую характеристику основных семейств вирусов позвоночных
с ДНК – и РНК – геномом, методы индикации и идентификации, общие принципы диагностики и профилактики вирусных болезней.
Эти темы студенты изучают в лекционном курсе и на лабораторнопрактических занятиях, где осваивают методы и методики по вышеуказанным
темам. Всё это закладывает общие основы представления о вирусах, болезнях,
вызываемых вирусами, методах диагностики и профилактики вирусных болезней, особенностях патогенеза и противовирусного иммунитета.
Для самостоятельного изучения раздела «Частная вирусология» рекомендуется использовать соответствующую литературу, в которой описаны болезни животных вирусной этиологии.
Студентам необходимо изучить более 30 наиболее актуальных с практической точки зрения вирусных болезней, регистрируемых на территории РФ
и приносящих значительный экономический ущерб. Знать характеристику каждого возбудителя, методы его диагностики и профилактики. Изучение такого
объёма материала удобно проводить, используя настоящие методические рекомендации. В них отражены все вирусы, изучаемые студентами в разделе «Частная вирусология», их таксономическая характеристика (семейство, род, вид) и
особенности репродукции, принципы постановки предварительного и окончательного диагноза на основании лабораторной диагностики, принципы серологических реакций, используемых в лабораторной диагностике. Кроме того,
представлены основы современных методов лабораторной диагностики - иммуноферментного анализа и полимеразной цепной реакции.
Рекомендуемые методические рекомендации по изучению вопросов частной вирусологии способствуют формированию врачебного мышления и вырабатывают навыки практической деятельности ветеринарного врача.
6
2. Таксономическая характеристика (семейство, род, вид) и особенности репродукции вирусов
животных
Разные вирусы, вызывающие болезни у млекопитающих и птицы, объединяются, согласно международной таксономии, в семейства, имеющие определённый механизм репродукции. Знания особенностей репродукции вирусов, относящихся к различным таксонам, позволяют проводить эффективную лабораторную диагностику и разрабатывать надёжные препараты специфической профилактики вирусных болезней. В таблице 1 указаны таксономические характеристики и особенности репродукции вирусов животных.
Таблица 1. Таксономические характеристики и особенности репродукции вирусов животных
Семейства, виды
1
1. Герпесвирусы
в. болезни Марека.
в. болезни Ауэски
в. инфекционного ринотрахеита крс
в. инфекционного ларинготрахеита (птиц)
в. ринопневмонии лошадей
в. ринотрахеита кошек
Характеристика вириона (тип
НК и структура, форма, размер,
тип симметрии)
2
ДНК-геномные вирусы
ДНК, двуспиральная, линейная;
форма изометрическая (икосаэдр)
80-260 нм
кубический тип симметрии
наличие суперкупсидной оболочки
Этапы репродукции
3
Репродукция - в ядре и цитоплазме:
1. Адсорбция вируса на клетке;
2. Проникновение вируса в клетку;
3. Депротеинизация;
4. Синтез и-РНК (транскрипция);
5. Синтез белков и ферментов полимераз (трансляция);
6. Синтез двуспиральной ДНК (репликация);
7. Сборка вириона;
8. Выход вируса из клетки
7
1
2
3
2. Поксвирусы (оспенные вирусы)
в. оспы коров
вирус вакцины (осповакцина)
в. контагиозного пустулёзного дерматита
(контагиозная эктима)
в. оспы кур и др. птиц
в. оспы овец
в. миксомы кроликов (миксоматоз)
в. фибромы кроликов
в. оспы свиней
ДНК, двуспиральная, линейная
(концы ковалентно замкнуты);
форма параллелепипеда (кирпичеобразная)
220-450 нм
сложный (смешанный) тип симметрии
наличие суперкапсидной оболочки
Репродукция – только в цитоплазме:
1. Адсорбция вируса на клетке;
2. Проникновение вируса в клетку;
3. Депротеинизация;
4. Синтез и-РНК(транскрипция);
5. Синтез белков и ферментов полимераз (трансляция);
6. Синтез двуспиральной ДНК (репликация);
7. Сборка вириона;
8. Выход вируса из клетки
3. Аденовирусы
бычий аденовирус (аденовирус КРС)
аденовирус кур и др. видов птиц
аденовирусы собачьих: (CAV I вызывает
инфекционный гепатит, CАV II вызывает
аденовироз)
ДНК, двуспиральная, линейная;
форма изометрическая (икосаэдр)
70-90 нм
кубический тип симметрии
отсутствие суперкапсидной оболочки
4. Папилломавирусы (по старой классификации – Паповавирусы)
бычий папилломавирус
папилломавирус собачьих
папилломавирус овец
ДНК, двуспиральная, циркулярная;
форма изометрическая (икосаэдр)
55 нм
кубический тип симметрии
отсутствие суперкапсидной оболочки
Репродукция - в ядре и цитоплазме:
1. Адсорбция вируса на клетке;
2. Проникновение вируса в клетку;
3. Депротеинизация;
4. Синтез и-РНК (транскрипция);
5. Синтез белков и ферментов полимераз
(трансляция);
6. Синтез двуспиральной ДНК (репликация);
7. Сборка вириона;
8. Выход вируса из клетки
Репродукция - в ядре и цитоплазме:
1. Адсорбция вируса на клетке;
2. Проникновение вируса в клетку;
3. Депротеинизация;
4. Синтез и-РНК (транскрипция);
5. Синтез белков и ферментов полимераз
(трансляция);
6. Синтез двуспиральной ДНК (репликация);
7. Сборка вириона; 8. Выход вируса из клетки
8
1
2
5. Полиомавирусы (по старой классификации – Паповавирусы)
бычий полиомавирус
ДНК, двуспиральная, циркулярная;
форма изометрическая (икосаэдр)
40 нм
кубический тип симметрии
отсутствие суперкапсидной оболочки
6. Асфавирусы
в.африканской чумы свиней
ДНК, двуспиральная, линейная
(концы ковалентно замкнуты);
форма изометрическая (икосаэдр)
175-215 нм
кубический тип симметрии
наличие суперкапсидной оболочки
3
Репродукция - в ядре и цитоплазме:
1. Адсорбция вируса на клетке;
2. Проникновение вируса в клетку;
3. Депротеинизация;
4. Синтез и-РНК (транскрипция);
5. Синтез белков и ферментов полимераз
(трансляция);
6. Синтез двуспиральной ДНК (репликация);
7. Сборка вириона;
8. Выход вируса из клетки
Репродукция – только в цитоплазме:
1. Адсорбция вируса на клетке;
2. Проникновение вируса в клетку;
3. Депротеинизация;
4. Синтез и-РНК (транскрипция);
5. Синтез белков и ферментов полимераз
(трансляция);
6. Синтез двуспиральной ДНК (репликация);
7. Сборка вириона;
8. Выход вируса из клетки
9
1
3
Репродукция
в
ядре
и
цитоплазме:
7. Парвовирусы
ДНК, односпиральная, линейв. Алеутской болезни норок
ная, минус-нитевая (негативная) 1. Адсорбция вируса на клетке;
2. Проникновение вируса в клетку;
бычий парвовирус
или плюс-нитевая и минус3. Депротеинизация;
парвовирус собак (вирусный энтерит)
нитевая (позитивная и негатив- 4. Синтез и-РНК (транскрипция);
парвовирус кошек
ная)
5. Синтез белков и ферментов полимераз
парвовирус свиней
форма изометрическая (икосаэдр) (трансляция);
6. Синтез комплементарной родительской
в. панлейкопении кошек
18-26,5 нм
ДНК нити («+» или «-») (стадия репликации)
в. энтерита норок
кубический тип симметрии
7. Синтез комплементарной двуспиральной
аденоассоциированные вирусы (птиц,
отсутствие суперкапсидной оборепликативной формы ДНК (стадия репликаКРС, собак, лошадей, овец), репродуцилочки
ции)
руются в присутствии вируса-помощника 8. Синтез ДНК («+» или «-» нити) нового виаденовируса
русного потомства (стадия репликации)
9. Сборка вириона;
10. Выход вируса из клетки
8. Цирковирусы
цирковирусы свиней
в. анемии цыплят
в. болезни клюва и перьев
2
ДНК, односпиральная, циркулярная, минус-нитевая (негативная);
форма изометрическая (икосаэдр)
19-26 нм
кубический тип симметрии
отсутствие суперкапсидной оболочки
Репродукция - в ядре и цитоплазме:
1. Адсорбция вируса на клетке;
2. Проникновение вируса в клетку;
3. Депротеинизация;
4. Синтез и-РНК (транскрипция);
5. Синтез белков и ферментов полимераз
(трансляция);
6. Синтез комплементарной родительской
ДНК «+» нити (стадия репликации)
7. Синтез комплементарной двуспиральной
репликативной формы ДНК (стадия репликации)
8. Синтез ДНК «-» нити нового вирусного потомства (стадия репликации)
9. Сборка вириона; 10. Выход вируса из клетки
10
1
2
3
РНК-геномные вирусы
1. Пикорнавирусы
в. ящура
в. болезни Тешена
в.везикулярной болезни свиней
в.гепатита утят
2.Калицивирусы
в.геморрагической лихорадки кроликов
в. везикулярной экзантемы свиней
калицивирус кошек
бычий калицивирус
РНК, односпиральная линейная,
плюс-нитевая;
форма изометрическая (икосаэдр)
22-30 нм
кубический тип симметрии
отсутствие суперкапсидной оболочки
Репродукция – только в цитоплазме:
1. Адсорбция вируса на клетке;
2. Проникновение вируса в клетку;
3. Депротеинизация;
4. Синтез белков и ферментов РНКрепликаз (трансляция)
5. Синтез комплементарной родительской
минус-нити РНК (стадия репликации)
6. Образование двуспиральной репликативной формы РНК (стадия репликации)
7. Синтез плюс-нитей РНК нового вирусного потомства (стадия репликации)
8. Сборка вириона;
9. Выход вируса из клетки
РНК, односпиральная линейная,
плюс-нитевая;
форма изометрическая (икосаэдр)
27-40 нм
кубический тип симметрии
отсутствие суперкапсидной оболочки
Репродукция – только в цитоплазме:
1. Адсорбция вируса на клетке;
2. Проникновение вируса в клетку;
3. Депротеинизация;
4. Синтез белков и ферментов РНКрепликаз (трансляция)
5. Синтез комплементарной родительской
минус-нити РНК (стадия репликации)
6. Образование двуспиральной репликативной формы РНК (стадия репликации)
7. Синтез плюс-нитей РНК нового вирусного потомства (стадия репликации)
8. Сборка вириона;
9. Выход вируса из клетки
11
1
2
3.Коронавирусы
коронавирус собак
коронавирус кошек
в. трансмиссивного гастроэнтерита свиней
бычий коронавирус
бычий торовирус
торовирус лошадей
торовирус свиней
РНК, односпиральная линейная,
плюс-нитевая;
форма сферическая
120-160 нм
кубический тип симметрии
наличие суперкапсидной оболочки
4.Артеривирусы
РНК, односпиральная линейная,
плюс-нитевая;
форма сферическая
45-60 нм
кубический тип симметрии
наличие суперкапсидной оболочки
в. артериита лошадей
в. респираторно-репродуктивного синдрома свиней
3
Репродукция – только в цитоплазме:
1. Адсорбция вируса на клетке;
2. Проникновение вируса в клетку;
3. Депротеинизация;
4. Синтез белков и ферментов РНКрепликаз (трансляция)
5. Синтез комплементарной родительской
минус-нити РНК (стадия репликации)
6. Образование двуспиральной репликативной формы РНК (стадия репликации)
7. Синтез плюс-нитей РНК нового вирусного потомства (стадия репликации)
8. Сборка вириона;
9. Выход вируса из клетки
Репродукция – только в цитоплазме:
1. Адсорбция вируса на клетке;
2. Проникновение вируса в клетку;
3. Депротеинизация;
4. Синтез белков и ферментов РНКрепликаз (трансляция)
5. Синтез комплементарной родительской
минус-нити РНК (стадия репликации)
6. Образование двуспиральной репликативной формы РНК (стадия репликации)
7. Синтез плюс-нитей РНК нового вирусного потомства (стадия репликации)
8. Сборка вириона;
9. Выход вируса из клетки
12
1
5.Флавивирусы
в. классической чумы свиней (холера свиней)
вирус диареи КРС
6.Тогавирусы
в. энцефалитов лошадей
2
РНК, односпиральная линейная,
плюс-нитевая;
форма сферическая
40-60 нм
кубический тип симметрии
наличие суперкапсидной оболочки
РНК, односпиральная линейная,
плюс-нитевая;
форма сферическая
70 нм
кубический тип симметрии
наличие суперкапсидной оболочки
3
Репродукция – только в цитоплазме:
1. Адсорбция вируса на клетке;
2. Проникновение вируса в клетку;
3. Депротеинизация;
4. Синтез белков и ферментов РНКрепликаз (трансляция)
5. Синтез комплементарной родительской
минус-нити РНК (стадия репликации)
6. Образование двуспиральной репликативной формы РНК (стадия репликации)
7. Синтез плюс-нитей РНК нового вирусного потомства (стадия репликации)
8. Сборка вириона;
9. Выход вируса из клетки
Репродукция – только в цитоплазме:
1. Адсорбция вируса на клетке;
2. Проникновение вируса в клетку;
3. Депротеинизация;
4. Синтез белков и ферментов РНКрепликаз (трансляция)
5. Синтез комплементарной родительской
минус-нити РНК (стадия репликации)
6. Образование двуспиральной репликативной формы РНК (стадия репликации)
7. Синтез плюс-нитей РНК нового вирусного потомства (стадия репликации)
8. Сборка вириона;
9. Выход вируса из клетки
13
1
6. Ортомиксовирусы
в. гриппа А птиц
в. гриппа А лошадей
в. гриппа А свиней
7. Парамиксовирусы
в. парагриппа-3 КРС
в. ньюкаслской болезни
в. респираторно-синцитиальный КРС
в. ринотрахеита индеек (пневмовирус
птиц)
в. чумы КРС
в. чумы плотоядных
в. парамиксовирусной болезни птиц
2
РНК, односпиральная сегментированная минус-нитевая:
форма сферическая
80-120 нм
спиральный тип симметрии
наличие суперкапсидной оболочки
РНК , односпиральная линейная
минус-нитевая ;
форма сферическая или нитевидная
150 и более нм
спиральный тип симметрии
наличие суперкапсидной оболочки
3
Репродукция –в ядре и цитоплазме:
1. Адсорбция вируса на клетке;
2. Проникновение вируса в клетку;
3. Депротеинизация;
4. Синтез и-РНК (транскрипция);
5. Синтез белков и ферментов РНКрепликаз (трансляция)
6. Синтез комплементарной родительской
плюс-нити РНК (стадия репликации)
7. Образование двуспиральной репликативной формы РНК (стадия репликации)
8. Синтез минус-нитей нового вирусного
потомства (стадия репликации)
9. Сборка вириона;
10. Выход вируса из клетки
Репродукция – только в цитоплазме:
1. Адсорбция вируса на клетке;
2. Проникновение вируса в клетку;
3. Депротеинизация;
4. Синтез и-РНК (транскрипция);
5. Синтез белков и ферментов РНКрепликаз (трансляция)
6. Синтез комплементарной родительской
плюс-нити РНК (стадия репликации)
7. Образование двуспиральной репликативной формы РНК (стадия репликации)
8. Синтез минус-нитей нового вирусного
потомства (стадия репликации)
9. Сборка вириона;
10. Выход вируса из клетки
14
1
8. Рабдовирусы
в. бешенства
9. Ретровирусы
в. инфекционной анемии лошадей
в.лейкоза (лейкемии) КРС
в. иммунодефицита КРС
в. лейкемии кошек
в. иммунодефицита кошек
в. лейкоза птиц
в. иммунодефицита человека (ВИЧ)
2
РНК , односпиральная линейная
минус-нитевая ;
форма пулевидная
100-430 нм
спиральный тип симметрии
наличие суперкапсидной оболочки
РНК- димер, односпиральная, линейная, плюс-нитевая
(в цикле репродукции есть этап обратной транскрипции, вирус имеет
фермент обратная транскриптаза
или ревертаза)
форма сферическая
80-100 нм
спиральный тип симметрии
наличие суперкапсидной оболочки
3
Репродукция – только в цитоплазме:
1. Адсорбция вируса на клетке;
2. Проникновение вируса в клетку;
3. Депротеинизация;
4. Синтез и-РНК (транскрипция);
5. Синтез белков и ферментов РНКрепликаз (трансляция)
6. Синтез комплементарной родительской
плюс-нити РНК (стадия репликации)
7. Образование двуспиральной репликативной формы РНК (стадия репликации)
8. Синтез минус-нитей нового вирусного
потомства (стадия репликации)
9. Сборка вириона;
10. Выход вируса из клетки
Репродукция –в ядре и цитоплазме:
1. Адсорбция вируса на клетке;
2. Проникновение вируса в клетку;
3. Депротеинизация;
4. Синтез 2- нитчатого ДНК-провируса (обратная транскрипция)
5. Интеграция ДНК-провируса с клеточным геномом;
6. Синтез и-РНК (транскрипция);
7. Синтез вирусных белков (трансляция);
8. Синтез дочерних вирусных плюс-РНК
(репликация)
9. Сборка вириона;
10. Выход вируса из клетки
15
1
10. Реовирусы
в. катаральной лихорадки овец (блутанг)
ротавирус КРС
11. Бирнавирусы
в.инфекционной бурсальной болезни (болезнь Гамборо)
2
РНК, двуспиральная, фрагментированная;
форма изометрическая (икосаэдр)
60-80 нм
кубический тип симметрии
отсутствие суперкапсидной оболочки
РНК, двуспиральная, фрагментированная;
форма изометрическая (икосаэдр)
60 нм
кубический тип симметрии
отсутствие суперкапсидной оболочки
3
Репродукция – только в цитоплазме:
1. Адсорбция вируса на клетке;
2. Проникновение вируса в клетку;
3. Депротеинизация;
4. Синтез и-РНК (транскрипция);
5. Синтез белков и ферментов полимераз
(трансляция);
6. Синтез двуспиральной РНК (репликация);
7. Сборка вириона;
8. Выход вируса из клетки
Репродукция – только в цитоплазме:
1. Адсорбция вируса на клетке;
2. Проникновение вируса в клетку;
3. Депротеинизация;
4. Синтез и-РНК (транскрипция);
5. Синтез белков и ферментов полимераз
(трансляция);
6. Синтез двуспиральной РНК (репликация);
7. Сборка вириона
8. Выход вируса из клетки
16
3. Принципы постановки предварительного диагноза
на вирусную болезнь
Диагноз на вирусную болезнь ставят комплексно с учётом предварительного диагноза и лабораторных исследований. Основным звеном в постановке диагноза являются результаты лабораторного исследования, которые
оформляют в виде экспертизы – официального документа, выдаваемого ветеринарными лабораториями о результатах лабораторных исследований.
Предварительный диагноз на вирусную болезнь ставят на основании
следующей «триады»: эпизоотологические данные, клинические признаки и патологоанатомические изменения.
К эпизоотологическим данным относятся эпизоотическая ситуация в хозяйстве, вид и возраст животных, широта охвата болезнью, скорость и территориальное распространение болезни, процент летальности, сезонность, вакцинопрофилактика и другие показатели эпизоотического процесса.
К клиническим признакам относят видимые проявления болезненного
процесса в различных системах организма животных (по сравнению с нормой),
такие как, температура тела, частота пульса, нарушение аппетита, поведения,
состояние кожных покровов и слизистых оболочек, функционировании органов
пищеварения, выделения, репродуктивных и т.д.
К патологоанатомическим изменениям относят изменения в органах,
обнаруженные при патологоанатомическом вскрытии павших и вынужденного
убитых животных и присущие данной болезни. Различают макроскопические
изменения (по сравнению с нормой) формы, размера, цвета, консистенции органов, наличие кровоизлияний, папул, везикул и других образований и микроскопические изменения, обнаруживаемые только при гистологическом исследовании.
В таблице 2 указаны основные данные для постановки предварительного диагноза на вирусные болезни.
17
Таблица 2. Основные данные для предварительного диагноза вирусной болезни
Название
болезни
Болезнь Ауэски
(псевдобешенство)
Бешенство
1
Предварительный диагноз ставят на основании:
эпизоотологических
клинических
патанатомиданных
признаков
ческих изменений
2
Особо опасная болезнь, болеют теплокровные животные всех возрастов. 100%-ая
летальность при «городском» бешенстве. Резервуар
- лисицы, волки, енотовидная собака, летучие мыши и
др. («лесное» бешенство).
Источник инфекции – больные животные и вирусоносители (дикие животные).
Путь передачи - через укус,
ослюнение повреждённой
кожи. Фактор передачи –
инфицированная слюна.
Острая, высококонтагиозная
болезнь разных видов с/х,
домашних и диких животных (птицы и приматы не
чувствительны) с высокой
летальностью у свиней и
пушных зверей.
Источник – больные животные и вирусоносители. Резервуар вируса – грызуны.
Чаще болеют свиньи. Путь
передачи – респираторный,
алиментарный, контактный,
трансплацентарный. Вирус
пожизненно персистирует в
латентном состоянии.
Факторы передачи - инфицированные корма, вода,
подстилка, загрязнённые
секретами носовой и ротовой
полостей, молоко, боенские
отходы, субпродукты.
3
Две формы течения:
1. типичная (буйная) - угнетение, свето- и шумобоязнь,
слюнотечение; возбуждение
(агрессия к людям), параличи глотки, гортани, атония
желудка, гибель от паралича
дыхательного центра.
2. атипичная (паралитическая) – угнетение, отках от
корма, атония рубца, параличи скелетной и дыхательной мускулатуры, гибель.
4
Не специфические.
Вскрывать трупы
в полевых условиях, подозрительные в заражении вирусом
бешенства запрещено.
Признаки поражения головного и спинного мозга: угнетение, слюнотечения, шаткость походки, манежные
движения, судороги, сильный зуд и расчёсы у всех видов животных, кроме свиней. Доброкачественно болеют лошади (без поражения
ЦНС), взрослые свиньи - с
гриппоподобным синдромом. У плотоядных животных наблюдается агрессивность к другим животным
(не к человеку).
Застойная гиперемия и кровоизлияния во внутренних органах и
головном мозге,
лёгких, расчёсы
и повреждения
кожи. В ЖКТ
кровоизлияния,
дифтеретические
плёнки.
18
Парагрипп-3
КРС
Чума КРС
Ящур
1
2
Особо опасная высококонтагиозная болезнь с/х и дикие
парнокопытных, мозоленогих.
Высокая летальность у молодняка. Взрослые животные
выздоравливают. Источник
инфекции – больные животные и вирусносители. Путь
передачи – аэрогенный, алиментарный, контактный.
Факторы передачи- корма,
вода, инвентарь, подстилка,
мясо, субпродукты, шерсть и
др. Переносчики – человек и
латентно больные животные
– собаки, кошки, лошади,
птицы.
Особо опасная высококонтагиозная болезнь. Наиболее
восприимчивы КРС, зебу,
буйволы; менее – МРС, яки,
верблюды, дикие животные
болеют в лёгкой форме, оставаясь вирусоносителями.
Летальность– до 100%. Источник болезни – больные и
переболевшие животных.
Путь заражения – алиментарный, аэрогенный, контактный. Механические переносчики – кровососущие
насекомые, собаки, хищники, птицы, обслуживающий
персонал, транспорт. В РФ
не регистрируется с 1928 г.
Острая контагиозная болезнь, главным образом молодняка КРС. Источник инфекции – больные животные
и вирусоносители (вирусоносительство до 100%), массовый охват, течение доброкачественное. Пути передачи
– аэрогенный, возможен –
половой. Факторы передачи
– корма, вода, инвентарь,
подстилка.
3
Лихорадка, слюнотечение,
афты у КРС на слизистой
ротовой полости, языка, на
коже молочных желёз, конечностей, у МРС афты на
венчике и в межкопытцевой
щели, у свиней афты на пятачке и хромота.
4
Геморрагическое
воспаление кишечника, дегенеративные изменения в миокарде
(«тигровое»
сердце) у молодняка.
Лихорадка, катаральногеморрагическое, крупознодифтеретическое воспаление
слизистых оболочек с образованием язв и эрозий.
Конъюнктивит, болезненный
кашель, вульво-вагинит,
диарея с кровью, истощение,
гибель.
Изъязвления и
кровоизлияния
на слизистых
оболочках пищеварительного
тракта, паренхиматозных органах и лимфоузлах, поражения
лёгких, увеличение и гиперемия
лимфоузлов.
Лихорадка, одышка, поражение респираторного тракта
(риниты, выделения из носовой полости, глаз, ротовой
полости, кашель). Аборты,
рождение нежизнеспособных
телят.
Катаральное
воспаление слизистых оболочек
верхних дыхательных путей,
бронхопневмония, отёчность и
кровоизлияния
региональных
лимфоузлов,
кровоизлияния в
кишечнике.
19
Вирусная диарея
КРС
Аденовирусная
инфекция КРС
Инфекционный
ринотрахеит КРС
1
2
Острая контагиозная болезнь
КРС всех возрастов. Летальность у молодняка – 2-15%.
Источник инфекции – больные животные и латентные
вирусоносители. Особенно
опасны быки-производители.
Путь заражения - контактный, аэрогенный, половой,
трансплацентарный. Факторы передачи – корма, вода,
инвентарь, подстилка. Механические переносчики – персонал,
невосприимчивые
животные, птицы, клещи.
Острая болезнь преимущественно телят с 2-х недельного
до 4-х месячного возраста.
Взрослые животные болеют
латентно и являются вирусоносителями. Летальность до
60%. Источник болезни больные животные. Пути заражения - аэрогенный, алиментарный. Факторы передачи – корма, вода, инвентарь, подстилка.
Контагиозная болезнь преимущественно
молодняка
КРС, восприимчивы дикие
жвачные и свиньи. Источник
инфекции – больные, персистентно инфицированные (до
80%). Путь передачи - алиментарный, аэрогенный, половой, трансплацентарный.
Резервуар возбудителя - дикие животные. Факторы передачи – корма, вода, инвентарь, подстилка.
3
Респираторная форма у молодняка – лихорадка, отказ
от корма, лёгочная недостаточность, дистрофия, риниты
(«красный нос»), конъюнктивиты, на слизистых оболочках
–
серознофибринозные плёнки.
Генитальная форма (инфекционный вульвовагинит, баланопостит), эндометриты,
аборты и гибель новорождённых телят. При злокачественном течении у молодняка – менингоэнцефалиты.
Лихорадка, слёзотечение,
кашель, затруднённое дыхание, диарея, отставание в
росте.
4
Воспалительные
процессы в органах верхних дыхательных путей,пенистая
жидкость в трахее и бронхах,
поражения половых органов,
увеличение, гиперемия и кровоизлияния регионарных лимфоузлов
Лихорадка, общее угнетение,
истощение, эрозивный и язвенный стоматит с обильным
слюнотечением,
слизистогнойные истечения из носовой полости, диарея (болезнь слизистых оболочек),
аборты.
При персистентной инфекции у коров наблюдается
врождённая курчавость волосяного покрова у телят и
диарея.
.
Эрозивноязвенное воспаление слизистых
оболочек дыхательных путей,
глаз, ЖКТ.
Катаральногеморрагический
гастроэнтерит,
изменения в органах дыхания,
увеличение регионарных лимфоузлов.
20
Болезнь
Тешена
Катаральная
лихорадка овец
(«синий язык»,
блутанг)
Лейкоз КРС
Респиратносинцитиальная
инфекция КРС
1
2
Контагиозная острая болезнь
КРС всех возрастов с сезонным течением, протекающая
доброкачественное. Источник инфекции – больные
животные и вирусоносители.
Пути передачи – аэрогенный, алиментарный, трансплацентарный. Факторы передачи – корма, вода, инвентарь, подстилка.
Хроническая болезнь КРС 58 летнего возраста опухолевой природы. Восприимчивы
овцы, зебу, буйволы, лоси.
Источник болезни – больные
животные. Пути передачи
контактный (при ветеринарных и зоотехнических мероприятиях), трансплацентарный, алиментарный, половой. Больные животные не
выздоравливают.
Неконтагиозная, трансмиссивная инфекция, передающаяся кровососущими насекомыми из рода Culicoides.
Носит сезонный характер. В
РФ регистрируют в Бурятии.
Гибель от 2 до 30%. Источник болезни –больные животные и вирусоносители. У
КРС проявляется в латентной форме, является резервуаром вируса в природе.
3
Клинически болезнь более
выражена у телят. Лихорадка, кашель, слюнотечение,
ринит,
бронхопневмония,
аборты.
4
Эмфизема лёгких,
увеличение региональных лимфоузлов.
Клинические признаки проявляются через несколько
лет после инфицирования:
потеря массы, анемия, снижение молочной продуктивности, увеличение периферических лимфоузлов, гибель. У клинически здоровых, но инфицированных
вирусом лейкоза животных,
развивается стойкий лимфолейкоз.
Лихорадка, гиперемия кожных и слизистых покровов,
кровоизлияния на конъюнктиве глаз, цианоз языка и губ
в результате кровоизлияний,
отёк морды, хромота, истощение, гибель. Аборты.
Значительное увеличение, диффузная инфильтрация
и опухоли в селезёнке, лимфоузлах, почках, костном мозге, скелетной мускулатуре.
Вирусная болезнь только
свиней, наиболее восприимчив молодняк. Источник инфекции – больные свиньи и
вирусоносители. Пути заражения - алиментарный, аэрогенный. Резервуар – дикие
свиньи. Гибель 3 %.
Ухудшение аппетита, рвота,
ринит, поражение ЦНС, нарушение координации движения, мышечный тремор,
судороги, «ходульная походка», параличи конечностей,
мышц шеи и глотки.
Отёк подкожной
клетчатки и мышечной
ткани,
жидкость в грудной, брюшной полости и перикарде,
некроз слизистых
оболочек губ и
языка, дегенерация
скелетной
мускулатуры, увеличение селезёнки, лимфоузлов.
Гиперемия,
инфильтрация и отёки в ЦНС, катаральное воспаление в дыхательных путях.
21
Трансмиссивный
гастроэнтерит свиней
Африканская чума
свиней
Классическая
чума свиней
1
2
Высококонтагиозная вирусная болезнь диких и домашних свиней всех возрастов с
массовым охватом и высоой
летальностью (60-100%).
Источник болезни – больные
животные и вирусоносители.
Пути передачи – аэрогенный, алиментарный, трансплацентарный. Резервуар
инфекции - дикие кабаны.
3
Пантропный вирус поражает
все органы и ткани. Лихорадка, тяжёлая депрессия,
анорексия, ринит, запор или
диарея. На коже внутренних
поверхностей бедёр, живота,
шеи, у основания ушных раковин образуются пустулы,
затем точечные кровоизлияния, которые сливаются и
образуют тёмно-багровые
пятна, не исчезающие при
надавливании.
Высококонтагиозная болезнь Лихорадка,
краснодомашних и диких свиней
фиолетовые пятна на коже
всех возрастов. Летальность ушей, рыла, брюха, анорекдо 100%. Регистрируется в
сия, обезвоживание, паралиюжных областях России.
чи и парезы конечностей. на
Источник инфекции – болькоже Пневмонии, расстройныеживотные и вирусносиство пищеварения (диарея с
тели, трупы павших свиней. кровью). Гибель.
Пути передачи - контактный,
алиментарный, аэрогенный,
трансмиссивный (клещи,
мухи). Резервуар - дикие
свиньи и клещи. механические переносчики - невосприимчивые животные, птицы, персонал, насекомые.
Остропротекающая высоко- Инкубационный период в
нтагиозная болезнь в основ- среднем - от нескольких чаном поросят 3-месячного
сов у новорожденных поровозраста. Восприимчивы
сят до 3-7 дней у взрослых
также собаки. Резервуаром
животных.
инфекции могут быть собаки Наблюдается
лихорадка,
и лисы, особенно при инапрвота, диарея, развивается
парантной форме. Основные обезвоживание. После выисточники инфекции – боль- здоровления поросята отные свиньи, выделяющие
стают в весе с признаками
вирус на всех стадиях болез- энцефаломиелита.
ни, и вирусоносители. Основной путь передачи – алиментарный, реже - аэрогенный. Механическими переносчиками являются домашние и дикие животные, а
также мухи. Летальность
среди поросят 2-нед. возраста может достигать 100%.
4
Точечнопятнистые кровоизлияния на коже
ушей, шеи, живота, внутренней
стороны бёдер,
геморрагический
диатез во внутренних органах,
кровоизлияния в
слизистой оболочке лоханки, мочевом пузыре.
Багровофиолетовые пятна
на коже, увеличение и мраморность лимфоузлов,
увеличение и
кровоизлияния в
паренхиматозных
органах, кровоизлияния в слизистой кишечника,
желчного пузыря.
Геморрагическое
воспаление слизистой тонкого кишечника, некроз
ворсинок, кровоизлияния в желудке, дистрофия в
паренхиматозных
органах.
22
Вирусный
артериит
лошадей
Инфекционная
анемия
лошадей
Оспа свиней
Грипп свиней
1
2
Высококонтагиозная, остро
протекающая,
характеризующаяся сезонностью течения болезнь. Регистрируется
на территории РФ и стран
СНГ. Наиболее восприимчивы поросята-отъёмыши, летальность 1-4%. Источник
инфекции – больные свиньи
и вирусоносители. Резервуар
– лёгочные гельминты, переносчики -дождевые черви.
Пути передачи - аэрогенный, алиментарный, трансплацентарный.
Контагиозная болезнь свиней всех возрастов. Регистрируется повсеместно. Источник инфекции – больные
животные. Пути передачи –
контактный и аэрогенный.
Переносчик и резервуар –
вошь свиная.
Вирусная болезнь однокопытных с длительным вирусоносительством до 18 лет.
Восприимчивы лошади всех
возрастов. Источник инфекции – больные животные и
вирусоносители. Пути передачи – трансмиссивный,
трансплацентарный, алиментарный (молоко и молозиво).
Резервуар в природе – лошади, мулы, ослы.
В РФ не регистрируют. Болеют лошади всех возрастов
и обезьяны. Источник инфекции – больные лошади и
вирусоносители. Пути передачи – аэрогенный и половой.
3
Лихорадка, конъюнктивит,
ринит, струп на пятачке, кашель, затруднённое дыхание,
пневмония, синюшность в
области живота, сердечнолёгочная недостаточность.
4
В просвете бронхов
слизистые
пробки, на слизистой оболочке носовой полости –
пенистая
слизь
красного цвета, в
просвете бронхов
– слизистые пробки,
катаральное
воспаление
лёгких,
гиперемия,
отёк и увеличение
бронхиальных и
средостенных
лимфоузлов.
На коже морды, ушей, живо- Характерные пота, бёдер развивается оспен- ражения на коже.
ный процесс, в котором различают следующие стадии:
1. розеола
2. папула с красным ободком
3. везикула (у свиней образуются редко)
4. пустула (редко везикула)
с гнойным содержимым
5. струп (корочки)
6. рубец
Лихорадка, геморрагический Истощение, желгастроэнтерит, сердечная не- тушность, отеки,
достаточность,
параличи кровоизлияния,
задних конечностей.
увеличение селезенки,
печени,
сердца, кровь в
желудке.
Лихорадка, риниты, кашель,
отёк век, светобоязнь, помутнение роговицы, слёзотечение. Некротические поражения малых артерий и
вен. Аборты.
Кровоизлияния в
дыхательных путях и ЖКТ, селезёнке, печени и
почках. Панваскулиты.
23
Миксоматоз кроликов
Геморрагическая болезнь
кроликов
Ринопев
мония
лошадей
1
2
Контагиозная болезнь жеребят и кобыл во второй половине жерёбости. Источник
инфекции – больные лошади. Пути передачи – аэрогенный, половой, трансплацентарный.
Механические
переносчики – собаки, лисицы, птицы.
Острая,
высоконтагиозная
болезнь кроликов всех возрастов. Регистрируется повсеместно. Источник инфекции - больные и вирусоносители. Путь передачи – аэрогенный. Факторы передачи –
корм, вода, подстилка, навоз,
пух, шкурки. Летальность до
100%.
Остропротекающая, высококонтагиозная болезнь кроликов и зайцев. Источник инфекции – больные животные.
Пути передачи – контактный, аэрогенный. переносчики – комары, вши, блохи.
Резервуары в природе – насекомые.
3
У жеребят - лихорадка,
конъюнктивит, ринит, лимфоденит. Аборты у жерёбых
кобыл на 8-10 месяце.
4
Признаки гепатита, отёк лёгких,
кровоизлияния в
мышцах, в грудной полости - серозногеморрагическая
жидкость. У кобыл - признаки
менингоэнцефалита.
Лихорадка, угнетение, судо- Внутренние оргароги, отсутствие аппетита, ны
увеличены,
ринит, гибель.
отёчны, наполнены несвернувшейся кровью, дряблой консистенции,
от серо-розового
до
краснокоричневого цвета.
3 формы течения:
1. классическая форма – отёки в области головы, подгрудка, половых органов,
гнойный конъюнктивит, ринит, затруднённое дыхание,
гибель до 100%.
2. нодулярная форма – на
различных участках кожи
формируются папулы без
отёков, переходящие в очагинекроза, гибель до 70-80%.
3. респираторная форма –
поражение органов дыхания,
ринит, слёзотечение, снижение репродуктивной функции, гибель (крольчат).
Студенистообразные инфильтраты
в
подкожной
клетчатке
туловища, шеи, головы, конечностей,
половых органов;
на коже очаги
некроза, корочки;
в лёгких - кровоизлияния.
24
Ньюкаслская
болезнь
Болезнь Марека
Грипп птиц
1
2
Острая контагиозная болезнь, поражающая домашнюю и дикую птицу. распространена повсеместно. протекает в виде эпизоотических вспышек. Источник
инфекции – больная птица,
вирусоносители. Пути передачи - аэрогенный и алиментарных. Факторы передачи –
инфицированные фекалиями
вода и корм. Распространяют
вирус на большие расстояния дикие перелётные птицы
(лебеди, чайки, утки). Резервуар – дикие утки. Летальность – более 80%.
Высококонтагиозная болезнь
кур и индеек. Наиболее восприимчивы цыплята первых
2-х недель жизни, болеют
куры, индейки, утки, фазаны.
Летальность не высокая, но в
отдельных случаях может
достигать 80%. Источник
болезни- больная птица и
вирусоносители. Путь передачи – аэрогенный и контактный. Факторы передачи
– перья и перхоть.
Особо опасная высококонтагиозная болезнь куриных.
Протекает по типу эпизоотий. Источник инфекции –
больная птица, вирусоносители. Пути заражения –
контактный, алиментарный,
аэрогенный.
3
Разные формы течения: 1.
классическая чума птиц –
депрессия, синюшность слизистых и кожных покровов,
потеря
чувствительности,
отёки подкожной клетчатки,
гибель 80%; 2. респираторная – сонливость, чихание,
хрипы, одышка, ринит, взъерошенность, снижение яйценоскости, гибель 1-80%; 3.
желудочно-кишечная форма
– угнетение, отказ от корма,
снижение
яйценоскости,
диарея, гибель – 5%; 4. – латентная - среди домашних
уток.
Две формы:
классическая (поражение
нервной системы: хромота,
порезы и параличи конечностей, крыльев, шеи) и острая
(лимфоидный лейкоз: лимфоидные опухоли на внутренних органах).
«Сероглазие».
4
Кровоизлияния в
паренхиматозных
органах, скелетных
мышцах,
ЖКТ. Некроз во
внутренних органах и ЦНС. Катаральное воспаление носовых ходов, синусов, трахеи, лёгких. Катаральногеморрагические
энтериты и нефриты.
Четыре формы клинического
проявления: 1. велогенная
(поражение органов дыхания, ЖКТ, нервной системы,
летальность до 90%), 2. поражение только органов дыхания (кашель, удушье) и
нервной системы (летальность до 50 %), 3. незначительные поражения респираторного и герминативного
трактов, 4. асимптоматическая форма.
Воспаление и кровоизлияния в слизистых оболочках
дыхательных путей и ЖКТ, на
границе мышечного и железистого отделов желудка кровоизлияния
в виде пояска; селезёнка увеличена, бледная, пятнистая.
Опухоли в паренхиматозных органах, лимфоузлах,
фабрициевой сумке, тимусе, гонадах, негнойный
диффузный энцефалит, отёки головного и спинного мозга, дистрофия крупных
нервных стволов.
25
Оспа птиц
Инфекционный
ларинготрахеит
птиц
Инфекционный
бронхит птиц
1
2
Высококонтагиозная болезнь
кур всех возрастов. Летальность до 60%. Источник инфекции – больная птица и
вирусоносители. Пути передачи – аэрогенный, алименатрный, контактный, трансовариальный.
3
Три формы течения:
1. респираторная (у цыплят
1-2 мес.) – кашель, хрипы,
ринит, затруднённое дыхание, конъюнктивит, синусит,
гибель
2. нефрозо-нефритная (у цыплят до 2 нед.) – диарея и
гибель.
3. репродуктивная (у кур
старше 6 мес.) - снижение
яйценоскости, дефект скорлупы яиц.
Острая болезнь кур всех воз- 2 формы течения:
растов, наиболее восприим1. конъюнктивальная форма:
чивы цыплята 1-6 мес. Лекатаральное или фибринозтальность 15- 60%. Источник ное воспаление конъюнктиинфекции- больные птицы и вы, козеозные массы под
вирусоносители (до 2-х лет). третьим веком, деформация
Пути передачи – аэрогенглазного яблока;
ный, алиментарный, кон2.ларинготрахеальная форма:
тактный.
угнетение, кашель, хрипы,
дифтеретические плёнки в
гортани, гибель от асфиксии.
Контагиозная болезнь птиц
разных видов. Распространена повсеместно. Источник
инфекции – больная птица.
переносчики – клопы и клещи. Пути передачи – аэрогенный, алиментарный, контактный. Факторы передачи
– загрязнённый корм, вода,
инвентарь.
Три формы течения:
1. кожная - образование оспин на неоперённых участках кожи
2. дифтеретическая – дифтеретические плёнки на слизистых оболочках ротовой, носовой полостей, гортани,
трахеи, бронхов и конъюнктивы глаз (гибель до 70% от
асфиксии)
3. кожно-дифтеретическая оспины на коже и дифтеретические поражения дыхательных путей и глаз.
4
Экссудат в трахее
и бронхах, поражение почек и мочеточников, недоразвитость яйцевых фолликуло.
Гиперемия и кровоизлияния на
слизистой трахеи,
желтоватые наложения с образованием казеозных
пробок в трахеи,
которые суживают
просвет. Фибринозные наложения
на слизистых оболочках.
На коже желтовато-белые папулы,
иногда покрытые
кровяным
струпом; творожистые
некротические
массы или плёнки
в
дыхательных
путях и кишечнике.
26
Панлейкопения
кошек
Ринотрахеит
кошек
Аденовирусная инфекция
собак
Чума
плотоядных
1
2
Высококонтагиозная болезнь
плотоядных (пушных зверей,
собак и др.) всех возрастов.
Гибель более 35% среди молодняка. Источник инфекции
– больные и вирусоносители.
Путь передачи – аэрогенный,
алиментарный, контактный.
Переносчики – грызуны,
птицы, человек.
3
4 формы течения:
1. кишечная – рвота, запоры,
диареи, обезвоживание, судороги, 2. лёгочная – ринит,
трахеит, бронхит, пневмония.
3. нервная – угнетение, возбуждение, судороги, припадки.
4 – кожная - пустулёзная
сыпь на бесшерстных участках кожи.
Инфекционный гепатит собак (болезнь Рубарта)
4
Катаральногеморрагическое
воспаление ЖКТ,
лёгких, ателектазы, очаги некроза
в ЦНС.
Высококонтагиозная болезнь
собак всех возрастов. Летальность высокая у невакцинированных щенков.
Источник инфекции - больные животные и вирусоносители. Пути передачи –
алиментарный, аэрогенный.
Лихорадка, признаки гепатита – рвота с примесью желчи, жажда, болезненность в
области мечевидного отростка. Желтушность слизистых оболочек. Кератит с
помутнением роговицы –
«голубой глаз». Белый кал.
Печень увеличена,
охряно-жёлтого
цвета; селезёнка и
почки увеличены,
с кровоизлияниями, граница между
корковым и мозговым слоями
сглажена.
Аденовироз собак (инфекционный ларинготрахеит собак)
Контагиозная болезнь собак
всех возрастов.
Источник – больные животные и вирусоносители. Пути
передачи – аэрогенный, алиментарный.
Депрессия, сухой кашель,
фарингит, увеличение миндалин, истечения из глаз.
Венозный застой
крови и кровоизлияния в респираторном тракте,
особенно в лёгких.
Контагиозная болезнь домашних кошек всех возрастов. Заболеваемость достигает 50%, летальность – до
30%. Источник болезни –
больные животные и вирусоносители. Путь передачи алиментарный, контактный.
Высококонтагиозная болезнь
домашних и диких кошек
всех возрастов. Источник
болезни- больные животные
и вирусоносители. Путь передачи – контактный. летальность 65-90%.
Лихорадка, ринит, конъюнктивит, язвенный кератит,
слюнотечение, бронхит, трахеит, судороги и манежные
движения. При затяжном течении - некрозы кончика
языка.
Серозно-гнойные
поражения конъюнктивы и слизистой оболочки
дыхательных путей.
Лихорадка, рвота, лейкопения, истощение, анемия.
Не характерны.
27
4. Патологический материал: правила отбора, транспортировки,
хранения.
Так как многие вирусные болезни имеют сходные эпизоотологические
данные, клинические признаки и патологоанатомические изменения, а также
могут быть вызваны двумя и более этиологическими агентами, то окончательный диагноз на вирусную болезнь может быть поставлен только с учётом результатов лабораторных исследований.
В лабораторной диагностике вирусных болезней точность диагноза зависит, прежде всего, от соблюдения требований и правил отбора, транспортировки, хранения патологического материала, правильности его подготовки к
исследованию и выбора методов и методик исследования.
Для проведения лабораторных исследований от больных, павших или
вынужденно убитых животных отбирают патологический материал с учётом
патогенеза предполагаемой болезни (входные ворота, пути диссеминации в организме, органы-мишени репродукции вируса, пути выделения и клинические
признаки).
Патологическим материалом следует считать материал, полученный от
больных или павших животных, в котором предположительно находится возбудитель (вирус), который вызвал заболевание, или антитела, как результат
иммунного ответа.
Патологический материал отбирают с учётом следующих правил:
 от больных животных в острый период болезни на фоне выраженных клинических симптомов, от павших и вынужденно убитых - не позднее одного - двух часов с момента гибели или убоя («правило времени»);
 из тех органов, где развивался патологический процесс, с учётом
тропизма вируса («правило место»);
 с соблюдением правил асептики и антисептики (используют одноразовый или стерильный инструментарий, контейнеры с этикетками, на которых указывают вид материала и вид или инвентарный номер животного, рас-
28
творы антибиотиков широкого спектра действия и противогрибковых препаратов);
 доставляют в лабораторию с нарочным и сопроводительным письмом не позднее 4-х часов после взятия в термосе со льдом или хладагентом, а
также можно использовать консервирующие растворы (например, 50% раствор
глицерина на физ.растворе) для кусочков органов и тканей. В сопроводительном письме указывают хозяйство, ферму или отделение, вид животных, предварительный диагноз, вид и количество патматерила, какие исследования следует провести, дату и фамилию ветеринарного врача, направившего патматериал. Патматериал, доставленный в лабораторию, условно считают первичным,
т.е. полученным непосредственно от больных или павших животных подозрительных на вирусную болезнь.
От больных животных, подозрительных в заражении вирусом, отбирают
различные виды патологического материала:
 Смывы, соскобы берут ватно-марлевым тампоном или жёстким одноразовым зондом со слизистых оболочек носа, конъюнктивы глаз, ротовой полости, задней стенки глотки, половых органов, прямой кишки, клоаки у птиц
(например, при подозрении на вирусные пневмоэнтериты КРС, трансмиссивный гастроэнтерит свиней, грипп птиц и др.) и помещают во флакон с транспортной средой (физиологический раствор, рН 7,0-7,2) с антибиотиками.
 Поражённые участки кожи и слизистых оболочек (например, при
подозрении на оспу – стенку папул или корочки; на ящур – стенку афт; на кожную форму чумы плотоядных - стенку папул или пустул).
 Фекалии непосредственно из прямой кишки (например, при подозрении на ротавирусную или коронавирусную инфекции и др.).
 Кровь цельная для выделения вируса (например, при подозрении на
лейкоз КРС и др.).
 Кровь для получения парных проб сыворотки крови для обнаружения и определения титра антител (первую пробу берут в острый период болезни
29
(в начале болезни), вторую – через две недели в период выздоровления), которые исследуют в лаборатории одномоментно после доставки второй пробы.
От трупов, подозрительных в заражении вирусом отбирают кусочки
различного патологического материала весом не более 5-10 грамм:
 паренхиматозных органов (печень, селезёнка, почки);
 региональных лимфоузлов
 изменённых органов и тканей;
 органов и тканей, в которых можно обнаружить вирус (например,
при инфекционном ринотрахеите КРС – абортплоды, плодные оболочки; при
болезни Ауэски и ньюкаслской болезни – головной мозг; при бешенстве – голова целиком; при классической и африканской чуме свиней – лёгкие и т.д.);
5. Лабораторная диагностика вирусных болезней. Устройство и правила работы вирусологической лаборатории. Подготовка патологического
материала для исследования. Этапы лабораторной диагностики.
Лабораторную диагностику вирусных болезней и мониторинг напряжённости постинфекционного и поствакцинального вирусного иммунитета проводят в вирусологических отделах ветеринарных лабораторий. Структура вирусологического отдела определяется задачами и особенностями деятельности. Отдел располагают в изолированном отсеке ветеринарной лаборатории. Он имеет
следующие изолированные помещения:

виварии для содержания здоровых (не заражённых) и заражённых
(опытных) лабораторных животных;

вскрывочная для приёма, первичной обработки и отбора первично-
го патматериала;

боксированное помещение (бокс) для работы с культурой клеток,
для серологических и вирусологических исследований;

автоклавная (для стерилизации инструментария и лабораторной по-
суды, обеззараживания инфекционного материала и спецодежды);

моечная для обработки лабораторной посуды;
30

кабинет для персонала отдела.
При работе в вирусологическом отделе строго соблюдаются требования
безопасности при работе с инфекционным материалом:

соблюдение личной безопасности

предупреждение распространения вируса в окружающую среду

предупреждение контаминации вируссодержащего материала микрофлорой
Для выполнения этих требований работу в лаборатории проводят в соответствии с правилами асептики, антисептики, дезинфекции и стерилизации.
Асептика – система мероприятий, предупреждающих попадание микроорганизмов и вирусов из окружающей среды в организм человека, а также в исследуемый материал. Она включает использование стерильных инструментария
и материалов, соблюдения особых санитарно-гигиенических правил и приёмов
работы.
Антисептика – комплекс мероприятий, направленных на уничтожение
микроорганизмов и вирусов, способных вызвать инфекционный процесс при
попадании на повреждённые или интактные участки кожи и слизистых оболочек.
Дезинфекция – комплекс мероприятий по обеззараживание объектов окружающей среды от патогенных для человека и животных микроорганизмов и
вирусов физическими способами и с помощью химических средств.
Стерилизация - обеспложивание (полное уничтожение) микроорганизмов
и вирусов на различных объектах физическими способами и с помощью химических средств.
В лаборатории патматериал, его принято считать первичным, разделяют:
одну часть полученного патматериала замораживают и хранят до окончания
экспертизы для дополнительных исследований, из второй части готовят вируссодержащую суспензию по следующей методике:
1. Приготовление вируссодержащей суспензии из органов и тканей.
- ткани измельчают и перетирают в фарфоровой ступке;
31
- готовят 10% суспензию на фосфатном буфере или растворе Хенкса;
- центрифугируют при 1500-3000 об/мин в течение 15-20 минут, надосадочную жидкость отбирают и освобождают от контаминантов антибиотиками
широкого спектра действия (пенициллин, стрептомицин, нистатин, цефазолин,
гентамицин);
- материал подвергают бактериологическому контролю путём посева на
МПА, МПБ, МППБ, среду Сабуро;
- при отрицательном результате бактериологического контроля проводят
исследование вируссодержащей суспензии; в случае положительного бактериологического контроля суспензию дополнительно обрабатывают антибиотиками
и повторно ставят контроль.
Суспензию хранят при температуре минус 20-70°С.
2. Приготовление вируссодержащей суспензии из смывов, соскобов.
- тампон отполаскивают в транспортной среде, отжимают;
- центрифугируют 1500-3000 об/мин в течение 15-20 минут, надосадочную
жидкость отбирают и освобождают от контаминантов антибиотиками широкого
спектра действия;
- материал подвергают бактериологическому контролю путём посева на
МПА, МПБ, МППБ, среду Сабуро;
- из осадка делают мазок для постановки РИФ.
3. Приготовление вируссодержащей суспензии из фекалий.
- фекалии гомогенизируют в фосфатно-буферном растворе;
- центрифугируют 1500-3000 об/мин в течение 15-20 минут, надосадочную жидкость отбирают и освобождают от контаминантов антибиотиками широкого спектра действия;
- материал подвергают бактериологическому контролю путём посева на
МПА, МПБ, МППБ, среду Сабуро.
4. Приготовление вируссодержащей суспензии из кожных поражений.
- стенки папул, корочки растирают с фосфатно-буферным раствором;
32
- центрифугируют 1500-3000 об/мин в течение 15-20 минут, надосадочную жидкость отбирают и освобождают от контаминантов антибиотиками широкого спектра действия;
- материал подвергают бактериологическому контролю путём посева на
МПА, МПБ, МППБ, среду Сабуро.
5. Кровь используют цельную с антикоагулянтом, её замораживают и
после оттаивания гемолизированную кровь центрифугируют 1500-3000 об/мин
в течение 15-20 минут, освобождают от контаминантов антибиотиками широкого спектра действия и подвергают бактериологическому контролю. Чаще используют «лаковую» кровь, получаемую смешиванием равных объёмов крови и
дистиллированной воды.
6. Для получения проб сыворотки кровь без антикоагулянтов выдерживают при комнатной температуре (или в термостате) до образования сгустка,
обводят сгусток для отделения от стенок, помещают в холодильник на 18-20
час. и затем отбирают сыворотку стерильно, добавляют антибиотики широкого
спектра действия. Хранят при температуре +4°С или замораживают.
Готовую вируссодержащую суспензию исследуют в соответствии с этапами вирусологического исследования по следующему плану, который включает следующие задачи:
1. Индикация (обнаружение) вируса в патматериале;
2. Изоляция (выделение) вируса из патматериала;
3. Идентификация (определение вида) выделенного вируса;
4. При необходимости – доказательство этиологической роли выделенного вируса
5. Ретроспективная диагностика.
Лабораторную диагностику проводят в соответствии с методическими
указаниями или наставлениями по диагностике конкретной вирусной болезни,
утверждёнными Департаментом ветеринарии Минсельхоза России. В соответствии с ними на каждом этапе используют только определённые для каждой
33
инфекции методы, диагностические наборы для которых выпускает биологическая промышленность России.
На первом этапе проводят индикацию вируса в вируссодержащей суспензии (мазках-отпечатках). Независимо от полученного результата в дальнейшем проводят второй этап - изоляцию методом биологической пробы в трёх
«слепых» пассажах. Пассаж – это заражение живой системы, с целью получения новой популяции вируса. «Слепой» пассаж – заражение без видимых признаков репродукции вируса. Через три пассажа в клетках живой системы происходит накопление вируса, что сопровождается появлением признаков репродукции, видимых на уровне макроорганизма. Например, при биопробе на животных: клинические признаки, гибель, патизменения; на куриных эмбрионах –
гибель, патизменения, гемагглютинация; на культуре клеток – ЦПД, гемадсорбция. Такие зараженные живые системы определяют как положительная
биопроба. Однако точно установить вид инфекционного агента еще нельзя.
Поэтому от положительной биопробы отбирают патологический материал, который условно считают вторичным, т.е. отобранным из живой системы с признаками положительной биопробы. Из него готовят вируссодержащую суспензию или мазки-отпечатки (выделенный вирус) и на третьем этапе проводят его
идентификацию в серологических реакциях (см. таблицу №3) или методом
ПЦР-анализа.
В некоторых случаях после выделения вируса требуется доказать его
роль (этиологическая роль) в возникновении вспышки заболевания. Обычно это
касается тех вирусов, которые могут находиться в организме животного и не
вызывать болезнь при отсутствии предрасполагающих и осложняющих факторов. В этом случае на четвёртом этапе исследований проводят серологические
реакции, в которых в качестве антигена используют выделенный вирус и в качестве антител – парные пробы сыворотки крови в двукратных последовательных разведениях. Положительным результатом, доказывающим этиологическую роль выделенного вируса, является увеличение титра антител во второй
пробе сыворотки крови по сравнению с первой в 4 и более раз.
34
Таблица 3. Серологические реакции в вирусологии
Реакция
Принцип
реакции
ПРИМЕНЕНИЕ
Признаки
положительной
реакции
Индикация
вируса
Идентификация
вируса
Обнаружение
антител
Титрование
антител
РДП
АГ + АТ
= комплекс
в агаре
линия
преципи
тации
РИФ: варианты
прямой
непрямой
АГ + АТ*
= комплекс
флуоресцирующий
АГ+АТ=
комплекс
+антивидо
вые АТ* =
комплекс
флуоресцирующий
Свечение
в люминисцентном
микроскопе
ИФА: варианты
«сэндвич» непрямой
ф
АТ+АГ+АТ ,
= комплекс+
субстрат =
комплекс +
цветной продукт
АГ+АТ=
комплекс
+антивидо
вые АТф
+ субстрат
= комплекс
+ цветной
продукт
РНГА
Эр.- АS
+ АТ =
комплекс+
гемагглютинация
Окрашивание
Эр.АТS +
АГ
=
комплекс
+ гемагглютинация
Зонтик
РСК
РН
РТГА
РТГАд
АГ + АТ +
комплемент
=комплекс +
гемсистема
Вирус + АТ
= комплекс
→ биопроба
на
живой
чувствительной системе
АГ+АТ=
комплекс +
эритроциты = комплекс
+
осадок
эритроцитов
Вирус в
культуре
клеток +
АТ = комплекс +
эритроциты = комплекс
Задержка
гемолиза
Биопроба
отрицательная
Пуговка
Гемадсорбция
отсутствует
+
+
+
+
+
-
+
+
-
-
-
+
+
+
+
+
-
+
+
+
+
+
+
-
+
-
+
+
-
+
+
+
+
+
-
+
-
+
+
-
+
+
+
+
Примечание: АТ* - специфические антитела, меченые флуорохромом (конъюгат); АТф - специфические антитела, меченые ферментом (конъюгат); антивидовые АТ*и антивидовые АТф - антивидовые конъюгаты.
РДП, РИФ, ИФА, РНГА, РСК относят к экспресс-методам лабораторной диагностики; РН, РТГА и РТГАд не относят к
экспресс-методам.
35
Отдельным этапом в лабораторной диагностике вирусных болезней является ретроспективная серодиагностика, т.е. диагностика, проводимая по парным пробам сыворотки крови на этапе выздоровления («ретро»). Она играет
очень важную роль, т.к. в большинстве случаев крайне трудно выделить вирус
и провести его идентификацию. С этой целью используют парные пробы сыворотки крови, которые исследуют в серологических реакциях со стандартным
специфическим антигеном в соответствии с предварительным диагнозом на вирусную болезнь. Нарастание в 4 и более раз титра антител во второй пробе по
сравнению с первой свидетельствует об активном инфекционном процессе,
протекающем в организме животного в период взятия у него крови. При этом
болезнь вызвана тем вирусом, к которому установлено повышение титра антител в парных пробах сыворотки.
Основными требованиями современной диагностики вирусных болезней являются высокая специфичность и чувствительность лабораторного метода, быстрота постановки диагноза, удобство в проведении исследования, снижение себестоимости, минимальное приборное обеспечение. Всем этим параметрам отвечают такие современные методы экспресс-диагностики, как иммуноферментный анализ (ИФА) и полимеразная цепная реакция (ПЦР-анализ).
Иммуноферментный анализ (ИФА), в основе которого лежит высокоспецифическое взаимодействие антигенов (АГ) с антителами (АТ), используют
в современной ветеринарной лабораторной практике при решении целого ряда
задач.
Использование ИФА
Для обнаружения антигенов
Для обнаружения антител
1. Ранняя экспресс - диагностика ви- 1. Эпизоотологический анализ и изурусных болезней
чение его закономерностей (мониторинг)
2. Количественная оценка вирусных 2. Ретроспективная диагностика виантигенов при изготовлении вакцин и русных болезней
диагностических препаратов
36
3. Этиологический анализ эпизоотии 3. Оценка напряжённости поствакци(мониторинг) и изучение его законо- нального иммунитета у животных
мерностей
4. Определение уровня колостральных
антител у животных первых дней жизни
5. Изучение механизмов формирования иммунитета и роли различных
факторов иммунной системы в патогенезе вирусных болезней
Для этих целей выпускают диагностические наборы для определения АГ
(методами сэндвич-, конкурентного и ингибиторного ИФА) и АТ (методом непрямого ИФА).
Сэндвич-ИФА
1.АТ специфические (стандарт)
в буферном растворе
иммобилизируют в лунках планшета (подложка). Отмывают неадсорбированные АТ.
2. Добавляют исследуемый АГ, который связывается с
АТ. Несвязавшиеся белки удаляют отмыванием.
3. Вносят специфический коньюгат (специфические АТ,
меченные ферментом, например пероксидазой – АТ-Ф).
Отмывают не связавшиеся АТ-Ф
4. Добавляют субстрат (субстратно-хромогенная смесь,
например: Н2О2 + бензидин), который под влиянием фермента в составе АТ-Ф (например: пероксидаза хрена)
превращается в продукт цветной реакции.
5. Учет реакции (качественное и количественное содержание АГ) проводят по определению окрашенного продукта реакции путем сканирования оптической плотности
(ОП). Зависимость между ОП и АГ прямопропорциональная: чем больше исследуемого АГ содержится в растворе, тем больше связывается АТ-Ф и выше значение
ОП.
37
Конкурентный ИФА
1. АГ (стандарт) иммобилизируют на подложке.
Отмывают не адсорбированный АГ.
2. Добавляют исследуемый АГ и АТ-Ф.
Несвязавшиеся белки удаляют отмыванием.
3. Добавляют субстрат. При этом АГ ингибирует связывание АГ-Ф с АТ на подложке.
4. Сканируют ОП. Зависимость между ОП и АГ обратнопропорциональная: чем больше исследуемого АГ содержится в растворе, тем меньше связывается АГ-Ф и ниже
значение ОП.
Непрямой ИФА
1.АГ (стандарт) иммобилизируют на подложке, отмывают
не адсорбированный АГ.
2. Добавляют исследуемые АТ.
Несвязавшиеся белки удаляют отмыванием.
3. Вносят антивидовые антитела, меченые ферментом
(антиАТ-Ф), отмывают.
4. Добавляют субстрат и следят за образованием продукта цветной реакции.
5. Сканируют ОП и проводят качественный и количественный учет исследуемых АТ. Зависимость между ОП и
АТ прямопропорциональная: чем больше исследуемых
АТ содержится в растворе, тем больше связывается антиАТ-Ф и выше значение ОП.
38
Информация обо всём многообразии свойств любого организма заключена в его генетическом материале. Геном вирусов, как и других биологических
объектов, является той уникальной структурой, которая наиболее полно и адекватно отражает биологическую сущность данного вируса, является его исчерпывающей характеристикой на молекулярном уровне. Поэтому использование
информации, заложенной в структуре нуклеиновых кислот, является надёжным
критерием их идентификации. С этой целью можно использовать методы, позволяющие выявлять специфические фрагменты генома возбудителя болезни,
на основании которых и делается заключение о наличии или отсутствии этого
возбудителя в исследуемом материале. Одним из таких методов является полимеразная цепная реакция (Polymerase chain reaction – PCR).
Полимеразная цепная реакция, более известная как "ПЦР" не сходит с
заголовков статей научных журналов с тех пор, как была открыта Кэри Б.
Мюллисом в 1983 году, за что в 1995 г. он был удостоен Нобелевской премии.
Причина достаточно проста: ПЦР делает невозможное возможным.
Часто её описывают как метод, с помощью которого ученые могут находить иглу в стоге сена и затем строить стог из этих игл. "Иглой" является крошечный фрагмент генетического материала, а ПЦР не только точно обнаруживает этот фрагмент, но и затем, используя естественное свойство ДНК- репликацию, делает его копии. В результате в течение нескольких часов с помощью
ПЦР из одного фрагмента ДНК можно получить более 50 млрд. идентичных
молекул. Таким образом, можно изучить генетический материал, присутствующий в минимальных количествах.
ПЦР - это циклический процесс, принцип которого сводится к следующему: молекулу ДНК подвергают температурному плавлению при температуре
95ºС (денатурация) для расплетения двойной цепи ДНК; затем при охлаждении
до 56-62ºС праймеры комплементарно присоединяются к специфическому
фрагменту одноцепочечной ДНК (отжиг праймеров) и при последующем повышении температуры до 72ºС начинается ферментативный процесс достройки
(синтеза, элонгации) молекулы ДНК при участии фермента Taq-полимеразы.
39
Эти три операции составляют один цикл ПЦР и приводят к удвоению количества ДНК в исследуемом образце с последующей детекцией продуктов амплификации методом горизонтального электрофореза.
Стандартный цикл ПЦР – денатурация, отжиг праймеров и элонгация –
воспроизводится многократно и количество специфических фрагментов ДНК
(ДНК-ампликонов) растёт в геометрической прогрессии, причём любая из
вновь синтезированных цепей ДНК служит матрицей для синтеза новых молекул в последующих циклах ПЦР.
Основными компонентами ПЦР являются:
1. Термостабильный фермент Taq-ДНК-полимераза, первоначально выделенный из термофильного микроорганизма Thermus aquaticus, сохраняет
свою ферментативную активность при многократных нагреваниях до 95°С, что
дало возможность проведения реакции в автоматическом режиме в амплификаторе.
2. Праймеры - искусственно синтезированные одноцепочечные ДНК
размером 20-30 нуклеотидов, комплементарные участкам матричной ДНК, между которыми находится последовательность-мишень, и ориентированы таким
образом, что синтез протекает только между ними, обеспечивая удвоение искомого фрагмента. Нуклеотидная последовательность праймеров подбирается таким образом, чтобы она была статистически уникальна и не встречалась в двух
участках ДНК, присутствующих в реакционной смеси.
3. Дезоксинуклеозидтрифосфаты (дАТФ, дТТФ, дГТФ, дЦТФ), служащие материалом для синтеза ДНК.
4. Магний - необходим для функционирования фермента Таq-ДНКполимеразы.
5. Буфер для ПЦР обеспечивает оптимальные условия для работы фермента. Наиболее распространен Трис-НСl-буфер, который удерживает рН во
время амплификации между 6,8 и 7,8.
6. Суммарная ДНК
40
В последнее время более широкое распространение получил усовершенствованный метод ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией в
режиме «реального времени». Поскольку накопление продуктов амплификации зависит от исходной концентрации ДНК, то с помощью этой технологии
можно получить количественные характеристики исследуемых нуклеиновых
кислот с автоматизацией полученных результатов. Эта модификация метода
ПЦР позволяет проводить детекцию продуктов амплификации во время реакции и вести мониторинг кинетики накопления ампликонов. Детекция продуктов
амплификации проводится в реакционном растворе за счет специфичной гибридизации продукта с олигонуклеотидным зондом, несущим флуоресцентную
метку. В процессе реакции происходит высвобождение флуоресцентной метки
в раствор, что дает возможность ее определения на флуоресцентном детекторе.
Данный способ детекции является альтернативой методу электрофореза и имеет два основных преимущества - возможность проведения реакции амплификации и детекции в одном приборе, что существенно снижает риск контаминации
и значительно сокращает риск ошибки оператора и возможность количественной оценки исходной ДНК матрицы.
Преимуществом ПЦР является то, что этот метод позволяет выявить
генетический материал непосредственно самого возбудителя, даёт возможность
амплифицировать
искомый
участок
нуклеиновых
кислот,
даже
если
анализируемый материал содержит сложную смесь молекул, возможен анализ
препаратов, содержащих деградированную ДНК. Для диагностики многих
болезней методом ПЦР не требуется сохранения целостности структур
возбудителя и
его
биологической активности. В качестве источника
нуклеиновых кислот подходит любой биологический и патологический
материал.
Эффективность, простота исполнения, высокие показатели чувствительности и специфичности предопределили широкие возможности практического
применения метода ПЦР в различных областях медицины и ветеринарии. В настоящее время ПЦР широко используют при диагностике инфекционных бо-
41
лезней, в том числе вызванных возбудителями, трудно культивируемыми и
медленно растущими, а также требующими особых условий культивирования;
при генотипировании, оценке вирулентности и определении устойчивости к антибиотикам различных микроорганизмов и вирусов; в генодиагностике и генетической дактилоскопии; в пренатальной диагностике и биологическом контроле препаратов крови; для контроля бактериемии и вирусемии; для оценки
стадии болезни, прогноза и эффективности проводимого лечения. С помощью
ПЦР в одной пробе можно определять неограниченное количество возбудителей острых, хронических, персистирующих и латентных инфекций, а также варианты возбудителей, которые трудно диагностировать другими методами.
Полимеразная цепная реакция обладает значительными преимуществами по сравнению с классическими методами лабораторного исследования. В
случаях, когда традиционные методы лабораторной диагностики оказываются
фактически неэффективными или принципиально неприемлемыми, единственными методами становятся методы, основанные на прямой идентификации генетического материала возбудителя.
Однако ПЦР имеет и существенные недостатки: получение ложноположительных и ложноотрицательных результатов.
Причиной получения ложноположительных результатов является контаминация (загрязнение) проб или помещений лаборатории. Различают два основных вида контаминации:
 от пробы к пробе на этапах отбора и подготовки проб;
 ампликонами (при попадании ампликонов в реакционную смесь,
они будут являться мишенью для реамплификации)
Получение ложноотрицательных результатов связано в основном с преаналитическими процедурами: не правильный отбор проб без учёта патогенеза
болезни (отсутствие возбудителя в исследуемом материале), хранение и транспортировка материала в лабораторию, многократная дефростация материала;
возможны потери или разрушения нуклеиновых кислот в процессе их выделения, присутствие в пробе большого количества ингибиторов ПЦР и т.д.
42
Высокая чувствительность метода ПЦР определяет очень строгие требования, предъявляемые к организации ПЦР-лаборатории: разделение лаборатории на отдельные зоны (зона пробоподготовки и выделения нуклеиновых кислот, зона проведения ПЦР и зона детекции продуктов ПЦР), в которых должны работать отдельные сотрудники, закрепление за зонами лабораторного оборудования, расходных материалов, одноразового пластика, спецодежды, уборочного инвентаря.
Движение персонала и исследуемых проб должно проходить строго в
одном направлении: от зоны пробоподготовки и выделения нуклеиновых кислот к зоне постановки ПЦР и детекции продуктов ПЦР.
43
Так как многие инфекционные болезни различной этиологии (вирусные,
бактериальные, грибковые, паразитарные и др.) имеют сходные эпизоотологические данные, клинические признаки и патологоанатомические изменения, то для
постановки окончательного диагноза необходимо провести лабораторные исследования. Студентам предлагается рассматривать лабораторную диагностику вирусных болезней согласно принципам, изложенным в таблице.
№ Название
п/ болезни
п
Последовательность этапов лабораторной диагностики
ПатматеОбнаружение
Выделение
ИдентиРетрориал
вируса (инвируса (изофикация
спективдикация)
ляция)
выделенная диного виру- агностиса
ка
3
4
5
6
7
От трупов - го- Световая мик- Биопроба
на Световая
лова с двумя роскопия
белых мышах
микроскошейными
по- (тельца Бабе- (+ клиника, ги- пия (тельца
звонками
от ша–Негри)
бель)
Бабешакрупного
жи- РИФ
Негри)
вотного
или РДП
РИФ
труп
мелкого Биопроба на
РДП
животного цели- белых мышах
ком.
1
1.
2
Бешенство
2.
Болезнь
Ауэски
(псевдобешенство)
От больных –
кровь на парные
сыворотки. От
трупов
головной мозг
миндалины, лёгкие, паренхиматозные органы,
абортплоды.
4.
Чума КРС
От трупов - ПЦР
лимфоузлы, се- ИФА
лезёнка.
РИФ
РСК
РДП
РНГА
ПЦР
ИФА
РИФ
РНГА
Биопроба на
кроликах
(+
клиника: зуд,
расчёсы, нервные явления)
Биопроба
в.
культуре клеток почек и
щитовидной
железы свиней,
семенников
телят, перевиваемых: РК-15,
ВНК-21.
ПЦР
ИФА
РН
РИФ
РДП
РНГА
ИФА
РН
РНГА
РСК
РДП
РЛА
Биопроба
на
культуре клеток
(+ ЦПД, образование телецвключений)
ПЦР
ИФА
РН
РИФ
РНГА
РН
РСК
ИФА
44
1
6.
2
Аденовирусная инфекция КРС
3
4
От больных – ПЦР
смывы носовые, ИФА
глазные,
рек- РИФ
тальные, кровь
на парные сыворотки. От трупов
- паренхиматозные органы и
регионарные
лимфоузлы.
От больных смывы носовые,
глазные,
ректальные, кровь
на парные сыворотки; от трупов
– паренхиматозные органы, кусочки кишечника, регионарные
лимфоузлы.
8. Парагрипп- От больных смывы носовые,
3 крупного
глазные,
рекКРС
тальные, кровь
на парные сыворотки; от трупов
– паренхиматозные органы, кусочки кишечника, регионарные
лимфоузлы.
9. Респиратор- От больных но-синцити- смывы носовые,
рекальная ин- глазные,
фекция КРС тальные, кровь
на парные сыворотки; от трупов
– паренхиматозные органы, кусочки кишечника, регионарные
лимфоузлы.
инфициро10 Лейкоз КРС От
ванных – кровь
цельная и на сыворотку; от трупов – паренхиматозные органы и лимфоузлы.
7.
Вирусная
диарея КРС
5
6
Биопроба
на ПЦР
культуре кле- ИФА
ток (+ЦПД)
РСК
7
РНГА
ИФА
ПЦР
РИФ
ИФА
Биопроба
на ПЦР
культуре кле- ИФА
ток (+ ЦПД)
РН
РНГА
ИФА
ПЦР
ИФА
РИФ
Биопроба
на РТГАд
культуре кле- РН
ток (+ ЦПД, +
РГАд с эритроцитами
морской свинки)
РНГА
ИФА
ИФА
РИФ
Биопроба
на РН
культуре клеток (+ ЦПД)
ПЦР
ПЦР
ИФА
ИФА
РИД
45
1
2
11 Катаральная лихорадка овец
12 Болезнь
Тешена
13 Классическая чума
свиней
14 Африканская чума
свиней
15 Трансмиссивный
гастроэнтерит свиней
16 Грипп
свиней
3
От больных –
кровь цельная и
на
сыворотку;
от трупов – селезёнка, лимфоузлы.
От больных –
кровь на парные
сыворотки, фекалии, мазки со
слизистой прямой кишки; от
трупов - головной и спинной
мозг,
кусочки
слизистой ободочной кишки.
От больных –
кровь. Труп поросят целиком
или от трупа селезёнка, лимфоузлы, миндалины,
почки,
лёгкие.
От больных –
кровь. Труп поросят целиком
или от трупа селезёнка, лимфоузлы, миндалины,
почки,
лёгкие.
От больных –
кровь на парные
сыворотки. От
трупов - кишечник с содержимым, мезентериальные лимфоузлы, паренхиматозные органы.
От больных носовые смывы;
от трупов –
лёгкие, трахея,
лимфоузлы.
4
ПЦР
5
6
Биопроба на. РИФ
КЭ (на ХАО + ПЦР
фокусы); куль- РСК
туре клеток .
7
РСК
РИФ
Биопроба
на ИФА
культуре кле- РН
ток (+ ЦПД)
РН
ИФА
ПЦР
ИФА
РИФ
РНГА
Биопроба на
интактных
(неиммунных)
подсвинках
ПЦР
ИФА
Биопроба на
иммунных
подсвинках
против КЧС и
не иммунных
Биопроба
на ПЦР
культуре кле- РНГА
ток РK-15 (± РН
ЦПД с постановкой РИФ)
ПЦР
РИФ
ИФА
Биопроба
на ПЦР
культуре кле- РН
ток (+ ЦПД) .
ИФА
РНГА
ПЦР
ИФА
Биопроба
на
белых мышах,
КЭ
(+РГА),
культуре клеток
(+ЦПД,
РГАд с эритроцитами кур)
РТГА
ИФА
Биопроба
на ПЦР
культуре кле- РТГАд
ток (+ ЦПД,
РГАд с эритроцитами свиньи)
ПЦР
ИФА
РТГА
РТГАд
46
1
2
17 Оспа свиней
18 Инфекционная
анемия
лошадей
19 Ринопневмония
лошадей
20 Вирусный
артериит
лошадей
(«розовый
глаз»)
21 Миксоматоз
кроликов
22 Геморрагическая болезнь кроликов
3
4
От больных жи- Световая вивотных стенки русоскопия
папул и корочки. (окраска
по
Морозову).
Биопроба на 23 мес. поросятах
От больных – ПЦР
кровь; от трупов РСК
паренхиматозРДП
ные органы и Параллельно с
лимфоузлы.
индикацией
проводят гематологические и гистологические
исследования.
5
6
Биопроба на 2- Световая
3 мес. порося- вирусоскотах
пия (окраска по Морозову).
Биопроба
на ПЦР
культуре кле- РТГАд
ток (+ ЦПД, + ИФА
РГАд с эритороцитами морской свинки)
РДП
ИФА
РТГА
От больных животных – смывы
со
слизистых
носа, конъюнктивы,
парные
пробы сывороток; от трупов –
кусочки головного и спинного
мозга, абортированные плоды.
От
больных
смывы носовые
глазные, кровь
на парные сыворотки; от трупов
– лёгкие, паренхиматозные органы, лимфоузлы, абортплоды.
Клинически
больных кроликов (участки кожи) и свежие
трупы.
Биопроба
на
КЭ (+ РГА с
эритроцитами
лошадей или
морских свинок); культура
клеток (+ЦПД,
+ РГАд с эритроцитами лошадей и морских свинок)
Культура клеток (+ЦПД)
РТГАд
ИФА
ПЦР
ИФА
РТГА
РН
РН
РСК
ИФА
Свежие трупы
или от трупов
паренхиматозные
органы
(особенно
печень)
РИФ
ИФА
РСК
ПЦР
Световая микроскопия телецвключений.
РСК
ИФА
Параллельно
проводят гистологические
исследования
Биопроба
на
крольчатах (+
клиника и гибель)
Заражение КЭ
на ХАО (+ фокусы)
РГА (+) (с Биопроба
на
эритроцитами кроликах, заовец, птиц и ражение
в/м,
человека
0 и/н. Через 12группы);
72 ч. появляРДСК, ИФА
ются
клин.
признаки.
ИФА
РТГА
ИФА
РДСК
7
47
1
2
23 Грипп птиц
3
От больной птицы - мазки из
трахеи и клоаки,
кровь на парные
сыворотки и вирусовыделение,
помёт. От трупов – селезёнка,
головной мозг,
трахея, лёгкие,
участки кишечника.
От больных 24 Ньюкаслпробы
ская болезнь парные
сыворотки крови, смывы из
трахеи и клоаки;
от трупов – голова,
лёгкие,
трахея, селезёнка.
От больных –
25 Инфекцисмывы с гортаонный
ни, трахеи, кровь
бронхит
на парные сывоптиц
ротки; от трупов – лёгкие,
почки, яйцеводы
От больных –
26 Инфекцикровь на парные
онный лаот
ринготрахе- сыворотки;
трупов
–
горит птиц
тань, паренхи(ИЛТ)
матозные органы, лимфоузлы.
27 Болезнь
Марека
От больных кровь,
очины
вырванных
перьев. От трупов – паренхиматозные органы, опухолевые
образования,
нервные стволы,
лимфоузлы.
4
5
6
Заражение КЭ РТГА
(гибель
±, ИФА
РГА+)
ПЦР
7
РТГА
ИФА
ПЦР
РИФ
Заражение КЭ РТГА
(гибель
±,
РГА+)
РТГА
ИФА
РИФ
Заражение КЭ
РИФ
( гибель ±, кар- РДП
ликовость или
мумификация
зародыша)
ИФА
РНГА
РИФ
Световая микроскопия
телецвключений
Зейфрида
Биопроба на
цыплятах 3090 дн.
РДП
ИФА
Параллельно
проводят гистологические
исследования.
Биопроба на
суточных цыплятах
Биопроба
на ИФА
КЭ (+ фокусы РН
на ХАО).
ИФА
Биопроба
на РДП
КЭ ( + очаги ИФА
клеточной пролиферации на
ХАО.
РДП
ИФА
ПЦР
ИФА
РИФ
48
1
2
28 Оспа птиц
3
4
5
6
От больных – Световая ви- Заражение КЭ Световая
оспины и короч- русоскопия на на ХАО (обра- вирусоскоки.
обнаружение
зование оспин) пия
элементарных
РИФ
телец (вирионы оспы)
Биопроба на
цыплятах (заражают в скарифицированную
кожу
гребня
или
фолликулы
бедра)
Биопроба
на ПЦР
29 Чума плото- От больных - ПЦР
смывы носовые, ИФА
культуре кле- ИФА
ядных
глазные, кровь
ток
(+ЦПД); РТГА
на вирусовыдеКЭ (+ гибель,
ление и парные
фокусы
на
сыворотки, феХАО, РГА ± с
калии. От трупов
эритроцитами
– трахея, лёгкие,
кур и морских
паренхиматозсвинок)
ные органы, головной
мозг,
мочевой пузырь,
лимфоузлы.
30 АденовиИнф. гепатит собак (болезнь Рубарта)
русная инОт больных - ПЦР
Биопроба
на ПЦР
фекция сосмывы с конъ- ИФА
культуре кле- ИФА
бак
юнктивы, моча,
ток (+ ЦПД)
фекалии, кровь
на парные сыворотки, от трупов
– печень и мочевой пузырь, асцитная
жидкость.
Аденовироз собак (инфекционный ларинготрахеит собак)
От больных - ПЦР
Биопроба
на ПЦР
сыворотка кро- ИФА
культуре кле- ИФА
ви, смывы носоток (+ ЦПД)
РН
вые, глазные.
Биопроба
на ПЦР
31 Ринотрахеит От больных - ПЦР
смывы носовые, РИФ
культуре кле- РН
кошек
глазные, кровь
ток (+ ЦПД)
на парыне сыворотки; от трупов
паренхиматозные органы и
лимфоузлы.
7
Редко
РДП
ИФА
ИФА
ИФА
ИФА
в
49
1
2
32 Панлейкопения кошек
3
4
От больных – ПЦР
кровь, от трупов ИФА
– селезёнка, головной
мозг,
участок кишечника.
5
6
Биопроба
на РН.
культуре кле- ИФА
ток (+ЦПД)
7
РН
РИФ
ИФА
Специфическая профилактика вирусных болезней
Специфическая профилактика занимает ведущее место в борьбе со многими вирусными болезнями человека и животных. Вакцинопрофилактика многих
вирусных болезней животных достигла широких масштабов и стала неотъемлемой частью технологии ведения животноводства. Создание высокоэффективных
вакцин и современных методов их производства позволили разработать национальные и международные программы контроля и искоренения ряда вирусных
болезней человека и животных.
На сегодняшний день отсутствует общепринятая научно обоснованная
классификация вакцин. Предложено разделять вакцины по поколениям, технологии изготовления и по составу компонентов.
Вакцины I-го поколения (цельновирионные):
- живые вирус-вакцины готовят из вирусов (а) природно ослабленных, (б)
гетерологичных, (в) аттенуированных пассажами в гетерологичных организмах
или в культурах клеток;
- инактивированные вакцины готовят из инактивированных целых вирионов.
Живые вакцины обладают следующими преимуществами перед инактивированными вакцинами:

создают высокую напряжённость и длительность иммунитета;

большинство из них используют в малых дозах при однократном вве-

возможно применение перорально и интраназально;

иммунитет вырабатывается в более короткий срок.
дении;
50
Однако живые вакцины могут вызывать поствакцинальные осложнения
у молодых, ослабленных и беременных животных, не исключена реверсия вирулентности вакцинного штамма.
Инактивированные вакцины отличаются большей стабильностью
свойств и они безопаснее, однако, они стимулируют менее длительный иммунитет, требуются более высокие дозы введения и ревакцинации.
Вакцины II-го поколения (субъединичные – молекулярные).
Получить антигены для этих вакцин можно несколькими путями:
- Сплит-вакцины (расщеплённые вакцины) представляют собой взвесь
поверхностных и внутренних структурных компонентов вируса без удаления нуклеиновых кислот (генома), который разрушается в процессе обработки детергентами, ультразвуком в сочетании с замораживанием и оттаиванием вируссодержащей суспензии. Для вакцины используют только только протективные антигены
вируса, которые индуцируют в организме животных факторы специфического
иммунитета (защита от заболевания). Эти вакцины не содержат геномов вируса и
избыточного количества балластных антигенов;
- Синтетические вакцины готовят методом биоорганического синтеза
протективных антигенов из отдельных аминокислот, полипептидов, аналогичных
нативным вирусным белкам.
Перспективы создания субъединичных вакцин безграничны, особенно, если они будут производиться с применением методов генной инженерии.
Под генной инженерией понимают конструирование in vitro функционально активных генетических программ, т.е. рекомбинанатных ДНК.
Основные этапы конструирования. С помощью ферментов – рестриктаз из
генома вируса «вырезают» интересующий нас ген (кодирующий иммунный белок), этот ген встраивают с помощью ферментов – лигаз в вектор (в качестве вектора, например, используют плазмиды E.coli). Полученную рекомбинантную ДНК
вносят в E.coli. В этих клетках происходит экспрессия генов в составе рекомбинантных ДНК, продукт экспрессии – иммунные белки вируса, их выделяют и используют в качестве вакцины.
51
Вакцины III-го поколения (ДНК-вакцины, полинуклеотидные вакцины).
Основой ДНК-вакцины является бактериальная плазмида (кольцевая автономная ДНК из 4-6 тыс. пар нуклеотидов), способная эффективно размножаться в
клетках E.coli. В плазмиду генно-инженерными методами встраивают «смысловой» ген, кодирующий иммуногенный белок того вируса, от которого будет защищать ДНК-вакцина. Полученную рекомбинантную плазмиду культивируют в
необходимых количествах в бактериальных клетках E.coli, после соответствующей очистки и концентрации эти плазмиды используют в качестве вакцины.
Основным преимуществом вакцин II-го и III-го поколений является их
минимальная реактогенность, высокая антигенная активность для создания протективного иммунитета, отсутствие побочных реакций, неограниченные возможности для ассоциации антигенов, длительность сохранения и минимальные дозы
введения. Однако технологический процесс получения данных вакцин сложный,
требует дорогостоящего специального оборудования, но за этими вакцинами будущее.
В зависимости от количества типов или видов возбудителей вакцины бывают:
- моновалентные содержат антигены одного вида (типа) вируса;
- поливалентные (би-, трёхвалентные и т.д.) содержат несколько типов
(вариантов) одного вида вируса;
- ассоциированные содержат антигены вирусов разных видов;
-смешанные содержат вирусные и бактериальные антигены.
52
При изучении «Частной вирусологии» студенты знакомятся с вирусными болезнями животных, пишут реферативную работу и решают диагностические
задачи.
Список изучаемых вирусов
1. Вирус бешенства
2. Вирус болезни Ауески
3. Вирус ящура
4. Вирус чумы КРС
18. Вирус оспы кур
19. Вирус ньюкаслской болезни
20. Вирус гриппа кур
21. Вирус болезни Марека
5. Вирус инфекционного ринотрахеита
КРС
6. Вирус аденовирусной инфекции КРС
7. Вирус диареи КРС
8. Вирус парагриппа
9. Вирус лейкоза крупного рогатого
скота
10. Вирус классической чумы свиней
11. Вирус африканской чумы свиней
12. Вирус инфекционного гастроэнтерита свиней
13. Вирус гриппа свиней
14. Вирус болезни Тешена свиней
15. Вирус оспы свиней
16. Вирус оспы овец
17. Вирус катаральной лихорадки овец
(вирус блютанга)
22. Вирус инфекционного ларинготрахеита кур
23. Вирус инфекционного бурсита птиц
24. Вирус инфекционной анемии лошадей
25. Вирус гриппа лошадей
26. Вирус ринопневмонии лошадей
27. Вирус артериита лошадей
28. Геморрагическая болезнь кроликов
29. Миксоматоз кроликов
30. Вирус чумы плотоядных
31. Вирус парвовирусной инфекции
плотоядных
32. Вирус инфекционного гепатита
плотоядных
33. Вирус лейкемии кошек
34. Вирус ринотрахеита кошек
Диагностические задачи по частной вирусологии
Студенты изучают диагностику вирусных болезней животных на примере
решения задач.
Задача 1.
На ферме крупного рогатого скота заболели две коровы и одна нетель. Заболевание сопровождалось следующими клиническими признаками: отсутствие
аппетита, атония рубца, паралич глотки, обильное слюнотечение, стремление
53
убежать, проявление агрессивности по отношению к людям. Через 3-4 дня животные пали.
Патологоанатомическое вскрытие павших животных не проводили.
Задача 2.
Через две недели после возвращения с дачи хозяева собаки обратили внимание на изменение её поведения: собака неадекватно реагировала на резкие звуки, впадала в ярость, через несколько минут её поведение резко менялось, появилась обильная саливация, изменился голос, собака щёлкала зубами, как будто ловила мух. Через 3 дня собака пала.
Патологоанатомическое вскрытие павшей собаки не проводили.
Задача 3.
В сельской местности кот находился на свободном выгуле. В начале лета
хозяева обратили внимание на изменение поведения кота. Он прятался в тёмные
углы дома, стал очень ласковым, стремился облизать руки хозяев. Через несколько дней поведение кота изменилось, появилась агрессия по отношению к хозяевам, наблюдались судороги, обильная саливация, отсутствовал аппетит, затем наступил паралич задних конечностей. Через 2 дня кот пал.
Патологоанатомическое вскрытие павшего кота не проводили.
Задачи 4.
На свиноферме заболели поросята-сосуны и отъёмыши со следующими
клиническими признаками: лихорадка, угнетение, слизистые истечения из носа и
глаз. Внешне здоровые поросята впадают в состояние возбуждения, появляются
манежные движения, стремление вперёд, животные упираются головой в стену,
принимают позу сидячей собаки. В течение 3-х суток погибает 70-100% заболевших.
У взрослых свиней отмечались признаки ринита и конъюнктивита, две супоросные свиноматки абортировали.
На вскрытии павших поросят установлено: слизистые оболочки носовой
полости и гортани гиперемированы и отёчны, отёк лёгких, очаги острой катаральной бронхопневмонии, катаральный гастроэнтерит. Оболочки головного мозга
воспалены, с кровоизлияниями.
54
Задача 5.
Заболела собака, живущая на свиноферме. У неё отмечали беспокойство,
извращение аппетита, сильный зуд, нападение на других животных, но не на людей. Через 2 дня собака пала.
На трупе собаки видны расчёсы и разрывы кожи, лёгкие тёмно-вишнёвого
цвета с пенистой кровянистой жидкостью на разрезе. Слизистая желудочнокишечного тракта покрыта кровоизлияниями, в желудке обнаружены куски проволоки и мелкие металлические предметы. На паренхиматозных органах кровоизлияния. Кровеносные сосуды головного мозга расширены, мозговое вещество
отёчно.
Задача 6.
На ферме крупного рогатого скота заболели коровы, через 3 дня на соседней ферме заболели свиньи. Заболевание протекало со следующими клиническими признаками: у коров кратковременная лихорадка, обильно слюноотделение,
угнетение, отказ от корма. На языке, внутренней поверхности губ и щёк, вымени
появились афты, на месте лопнувших афт остались эрозии, заживавшие в течение
недели. Гибели среди животных не было. У свиней наблюдалось угнетение, лихорадка, афты на пятачке и сосках вымени, хромота. Гибель только среди поросятсосунов до 25%.
На вскрытии павших поросят установлено геморрагическое воспаление
кишечника, дегенеративные изменения мышц сердца.
Задача 7.
Весной заболел 5-ти месячный щенок. Клинические признаки: лихорадка с
температурой 410С, рвота, слизисто-гнойные истечения из носа и глаз, опухание
век, кашель, хромота за счёт опухания подушек пальцев, затем появились судороги и подёргивание мускулатуры конечностей. Временами наблюдали возбуждение
животного. Через 5 дней собака погибла.
Труп павшего щенка истощён, на роговице, губах и вокруг ноздрей мелкие
эрозии, Слизистая оболочка верхних дыхательных путей гиперемирована. Лёгкие
переполнены кровью. На слизистой желудка и двенадцатиперстной кишки эрозии
и язвы, в корковом слое почек и на слизистой мочевого пузыря точечные кровоизлияния.
55
Задача 8.
В пограничном хозяйстве вспыхнуло заболевание среди крупного рогатого
скота. Заболели животные всех возрастов со следующими клиническими признаками: лихорадка с температурой 420С, слабость, угнетение, жажда, отсутствие
жвачки, кал сухой тёмного цвета, затем жидкий профузный понос, усиленная саливация, слизисто-гнойные истечения из носа, в ротовой полости жёлтый налёт. У
коров из влагалища выделяется слизисто-гнойное, иногда кровянистое истечение.
Затруднённое дыхание, кашель. Заболевшие животные погибают.
На вскрытии павших животных установлено: слизистая оболочка ротовой
полости гиперемирована с очагами некроза и язвами, просветы бронхов закупорены фибринозными массами, эмфизема лёгких, слизистая оболочка сычуга и кишечника гиперемирована, отёчна с множественными кровоизлияниями, покрыта
язвами, лимфатические узлы гиперемированы, отёчны.
Задача 9.
В промышленном комплексе по откорму крупного рогатого скота заболели животные в возрасте 4-8 месяцев, в течение недели заболели все телята неблагополучных групп. Заболевание протекало со следующими клиническими признаками: повышение температуры до 420С, лихорадка, отказ от корма, животные
быстро худеют, гиперемия конъюнктивы и слизистой оболочки носа, распространяющаяся на носовое зеркальце (красный нос), обильные серозные выделения из
носа, повышенная саливация, на слизистых оболочках носа и ротовой полости поверхностные язвочки, кал разжижен. У некоторых животных наблюдались признаки беспокойства и нарушение координации движения. Летальность 5%.
На вскрытии павших животных установлено: слизистые оболочки носа,
гортани, глотки, трахеи гиперемированы, отёчны, с точечными кровоизлияниями,
в трахее пенистая жидкость, заглоточные и бронхиальные лимфоузлы увеличены
с кровоизлияниями, у некоторых животных эмфизема лёгких и бронхопневмония,
катаральное воспаление тонкого кишечника.
Задача 10.
В промышленном комплексе в группе телят 15-20 дневного возраста возникло заболевание, которое характеризовалось следующими клиническими признаками: температура 41,50С, отказ от корма, слёзотечение, серозные истечения из
56
носа, кашель, затруднённое дыхание, понос, иногда с примесью крови в фекалиях. Гибель до 60%.
При вскрытии установлены признаки катарально-геморрагического гастроэнтерита, очаговые уплотнения и эмфизема лёгких, увеличение регионарных
лимфоузлов.
Задача 11.
В промышленном комплексе среди телят 5-8 месячного возраста возникло
заболевание, которое протекало со следующими клиническими признаками: лихорадка (420С), учащённое и затруднённое дыхание, кашель, гиперемия и отёчность конъюнктивы и слизистой оболочки носовой и ротовой полостей, обильное
слёзотечение, слюноотделение и выделение из носа. Через 1-4 дня после появление первых признаков – понос. Животные быстро худеют. На слизистых оболочках появляются эрозии и язвы, аналогичные изменения обнаруживают в области
межкопытной щели. Около 10% заболевших телят имели помутнение роговицы.
Заболеваемость – 80%, детальность – 8%.
При вскрытии павших животных установлено: эрозии и язвы на слизистой
оболочке губ, щёк, дёсен, гортани, желудочно-кишечного тракта. Слизистая оболочка тонкого кишечника гиперемирована с кровоизлияниями.
Задача 12.
В животноводческом хозяйстве пала высокопродуктивная корова 5-ти
летнего возраста. Перед падежом у неё наблюдалось снижение молочной продуктивности, резкое исхудание, увеличение лимфатических узлов.
На вскрытии было установлено резкое увеличение, бугристость и очаги
кровоизлияний и некроза в селезёнке, увеличение и саловидность лимфоузлов.
Задача 13.
На свиноферме возникло заболевание среди свиней всех возрастов, гибель
животных составила 70%. Заболевание протекало со следующими клиническими
признаками: повышение температуры тела до 40-410С, угнетение, слабость, отказ
от корма, слизисто-гнойные истечения из глаз опухшие веки, у некоторых животных рвота и понос. На коже ушей, живота, внутренней поверхности конечностей
кровоизлияния. У отдельных животных болезнь сопровождалась судорогами и
парезами задних конечностей.
57
При вскрытии павших животных установлено: лимфатические узлы
чёрно-красные с мраморным рисунком на разрезе, кровоизлияния в селезёнке,
почках, слизистых оболочках гортани, мочеточников, мочевого пузыря.
Задача 14.
В свиноводческом хозяйстве вспыхнуло заболевание среди свиней всех
возрастов, которое в течение 3-4 дней распространилось на все фермы данного
хозяйства. Заболевание протекало со следующими клиническими признаками: повышение температуры тела до 41-420С, угнетение, сонливость, парез задней части
туловища, учащённое поверхностное дыхание, кашель. На ушах, животе, нижней
части шеи красно-фиолетовые пятна. У некоторых свиней понос с примесью крови. Летальность 90%.
На вскрытии павших животных установлено: цианотичные пятна на ушах,
животе, нижней части шеи, на серозных оболочках внутренних органов множественные кровоизлияния, селезёнка увеличена и гиперемирована. Печень и почки
тёмно-вишнёвого цвета с кровоизлияниями.
Задача 15.
В свиноводческом хозяйстве у некоторых свиноматок на 100-110 день супоросности наблюдались аборты, у других – рождались нежизнеспособные или
мёртвые поросята. Новорождённые поросята заболевали пневмонией и гибли в
первые дни жизни.
На вскрытии павших и мёртворожденных поросят обнаруживали транссудат в грудной полости, поражения лёгких, увеличение лимфоузлов и селезёнки.
Задача 16.
В свиноводческом хозяйстве заболели свиньи всех возрастов. Заболевание
у свиноматок протекало с повышением температуры тела, агалактией, рвотой, отсутствием аппетита. У новорождённых поросят появлялась внезапная рвота, диарея с выделениями серого или жёлтого цвета водянистой консистенции и неприятным запахом, резкое исхудание. У поросят-отъёмышей наблюдали отсутствие
аппетита и диарею. Гибель среди новорождённых поросят до 90%.
При вскрытии павших поросят установлено: очаговые уплотнения в лёгких, геморрагическое поражение желудочно-кишечного тракта, кровоизлияния в
тонком кишечнике.
58
Задача 17.
На Московском конном заводе №1 заболела кобыла. Клинические признаки: лихорадка, асфиксия, одышка, сердечная недостаточность, резкое исхудание,
отёки в области живота, конечностей, шаткость походки, паралич задних конечностей, быстрое развитие анемии. Через 3 недели кобыла пала.
При вскрытии павшей кобылы отмечали исхудание животного, желтушные отёки конъюнктивы, слизистой носа и рта с точечными кровоизлияниями, геморрагический диатез на слизистых и серозных оболочках, в паренхиматозных
органах. Селезёнка, печень, почки увеличены и кровенаполнены. Кровь водянистая, алая.
Задача 18.
На ипподроме заболели жерёбая кобыла и жеребята со следующими клиническими признаками: лихорадка, отсутствие аппетита, конъюнктивит, ринит,
лимфаденит. Кобыла на 9-ом месяце жерёбости абортировала. Смертность среди
жеребят составила 2%.
При вскрытии обнаружены признаки гепатита, в грудной полости – серозно-геморрагическая жидкость, отёк легких, кровоизлияния в мышцах.
Задача 19.
На птицефабрике быстро распространяется заболевание кур всех возрастов. Гибель среди цыплят составляет 70-80%, среди кур – 20-30%. Клинически
болезнь проявляется угнетением, сонливостью, затруднённым дыханием, кашлем,
слёзотечением, поносом, шаткостью походки, парезом крыльев и ног.
На вскрытии павших кур установлено катаральное воспаление слизистых
оболочек глаз, гортани, трахеи, полосчатые кровоизлияния на слизистой оболочке
пищевода. У взрослых кур обнаружены точечные кровоизлияния в виде пояска на
границе железистого и мышечного отделов желудка. В селезёнке, печени, лимфоузлах очаги некроза.
Задача 20.
На птицефабрике среди кур-несушек возникло заболевание, характеризующееся следующими клиническими признаками: выделения из носа и глаз, чихание, сонливость, синюшность слизистых и кожных покровов, отёк подкожной
клетчатки, снижение яйценоскости. Летальность составила около 80%.
59
На вскрытии установлены кровоизлияния и очаги некроза в паренхиматозных органах, скелетных мышцах, пищеварительном тракте, катаральное воспаление трахеи и лёгких.
Задача 21.
На птицефабрике возникло заболевание среди птицы 1-5 месячного возраста. Заболевание протекало со следующими признаками: у цыплят 1-2 месячного возраста массовые, быстро проходящие парезы ног, крыльев, шеи, хвоста; изменён цвет радужной оболочки (сероглазие). Гибель составила 2-3%. У цыплят 35 месячного возраста наблюдают вялость, угнетение, снижение аппетита, удушье,
депигментацию радужной оболочки, у некоторых птиц полная или частичная слепота, затем развиваются параличи и птица гибнет. Летальность до 35%.
На вскрытии павших птиц установлено: опухоли во внутренних органах. В
печени, селезёнке множественные очажки различной величины. Кишечник катарально воспалён. Диффузно-очаговое утолщение нервных стволов.
Задача 22.
На птицефабрике заболели куры старше 6 месяцев и цыплята месячного
возраста. У кур наблюдалось снижение яйценоскости, скорлупа яиц неправильной
формы. Одна курица пала. У цыплят – кашель, хрипы, носовые истечения, затруднённое дыхание, конъюнктивит, синусит, летальность до 30%.
При вскрытии павших цыплят обнаружили катаральный и казеозный экссудат в трахее и бронхах, у курицы – недоразвитость яйцевых фолликул.
Задача 23.
На птицефабрике возникло заболевание среди кур со следующими клиническими признаками: угнетение, отказ от корма, кашель, затруднённое дыхание,
сопровождающееся хрипами, под третьим веком у некоторых кур скапливаются
казеозные массы, изменяется форма глаза. Гибель составила 2 %.
На вскрытии павших кур в просвете гортани и трахеи обнаружены казеозные пробки, просвет трахеи сужен, слизистая оболочка трахеи воспалена, гиперемирована, с кровоизлияниями.
Задача 24.
В кролиководческом хозяйстве вспыхнуло и быстро распространилось заболевание среди кроликов. Наблюдались следующие клинические признаки: отё-
60
ки в области головы, подгрудка, половых органов, гнойные истечения из глаз и
носа, затруднённое дыхание. Летальность составила 80%. У некоторых животных
на коже образовались папулы, на их месте возникли очаги некроза, которые зажили через 30 дней.
При вскрытии павших животных обнаружили студенистообразные инфильтраты в подкожной клетчатке туловища, шеи, головы, конечностей, половых
органов, единичные кровоизлияния в лёгких.
Задача 25.
В овцеводческом хозяйстве среди овец всех возрастов быстро распространилось заболевание со следующими клиническими признаками: отечность губ,
языка, век, морды, изъязвления слизистой ротовой полости и носа, конъюнктивит,
пенистые истечения из носа, слюнотечение, геморрагии на коже, цианоз слизистой оболочки языка, у некоторых животных - воспаление копытного венчика и
хромота. У больных овец снижена продуктивность. Среди суягных овец наблюдались аборты. Летальность составила 80%.
На вскрытии павших овец обнаружено пенистое содержимое в трахее,
множественные кровоизлияния и отёк лёгких, кровоизлияния в сердечной мышце.
Задача 26.
На звероводческом комплексе хозяйстве вспыхнуло и быстро распространилось среди лис, песцов и соболей всех возрастов заболевание. Наиболее тяжелое течение наблюдались среди щенков трех-восьми недельного возраста с симптомами вялости, анорексии, лихорадки, малоподвижности. Гибель среди них составляла до 50%. У более старших животных наблюдались симптомы поражения
желудочно-кишечного тракта с рвотой, диареей. При пальпации живота – «веревкоподобные» слабоподвижные кишки. В каловых массах много слизи, цвет от коричневого до серо-белого. Животные выздоравливали, но отставали в развитии и
в качестве шерсти.
При вскрытии павших животных обнаружили признаки обезвоживания,
очаги некроза в сердечной мышце, кровоизлияния в желудке, желчном пузыре,
поджелудочной железе и стенке тонкого кишечника.
61
Задача 27.
В зверохозяйстве заболели норки. На протяжении длительного времени
наблюдалось снижение привесов, вялость животных, угнетение, кровотечения из
ротовой полости, понос с кровью, анемия, кахексия. У некоторых животных параличи и порезы. Летальность достигала 80%.
На вскрытии установлено увеличение лимфоузлов, селезёнки, печени, почек, кровоизлияния в стенках желудочно-кишечного тракта.
Задача 28.
У домашней кошки на протяжении двух лет в летне-осенний период наблюдались ухудшение общего состояния, субфебрильная температура, отказ от
корма, частая рвота, чередующаяся с диареей, кахексия. В общем анализе крови
стойкое снижение гемоглобина.
Задача 29.
У домашней кошки в течение двух лет рождались мёртвые котята и происходили аборты. У кошки наблюдали анемию, исхудание, расстройство пищеварения, асцит. В области живота пальпировалось несколько болезненных образований, увеличены подчелюстные, шейные, паховые лимфоузлы. Кошка пала.
На вскрытии отмечали истощение, увеличение и опухолевые поражения
селезёнки, лимфоузлов.
Одну из таких задач мы подробно разбираем в данном пособии.
Задача. В промышленном комплексе по откорму крупного рогатого скота
заболели животные в возрасте от 4 до 8 месяцев, в течение недели заболели все
телята неблагополучных групп. Заболевание протекало со следующими клиническими признаками: повышение температуры тела до 41-420С, угнетение, гиперемия слизистой оболочки носа, сухой кашель, слёзотечение, обильная саливация.
На слизистых оболочках носа и ротовой полости поверхностные язвочки, кал
разжижен. У некоторых животных проявлялись признаки беспокойства, нарушения координации движений. Летальность - 5%.
На вскрытии павших животных установлено: слизистые оболочки носа,
гортани, глотки, трахеи гиперемированы, отёчны, с точечными кровоизлияниями,
в трахее пенистая жидкость; лимфатические узлы (заглоточные, медиастинальные
62
и бронхиальные) увеличены с кровоизлияниями. У некоторых животных эмфизема лёгких и бронхопневмония. Катаральное воспаление тонкого отдела кишечника.
1. Ставят предварительный диагноз на основании анализа:
 эпизоотологических данных: болеет крупный рогатый скот в возрас-
те 4-8 месяцев (молодняк), массовый охват (эпизоотия среди молодняка КРС), летальность 5% (низкая);

клинических признаков: повышена температура тела, симптомы по-
ражения дыхательной, пищеварительной и нервной систем;
 патологоанатомических изменений: катаральное воспаление в раз-
личных отделах дыхательной и пищеварительной систем, точечные кровоизлияния во внутренних органах, увеличение регионарных лимфоузлов, у некоторых
животных - эмфизема лёгких.
Предварительный диагноз: инфекционный ринотрахеит КРС (ИРТ), вирусная диарея КРС (ВД), аденовирусная инфекция КРС (Адено), парагрипп-3
(ПГ-3), респираторно-синцитиальная инфекция (РС).
2.
Проводят отбор патматериала для лабораторного исследования исхо-
дя из патогенеза предполагаемой болезни.
Данное заболевание может иметь один или несколько этиологических
факторов и относится к вирусным пневмоэнтеритам КРС, для которых характерно
поражение дыхательной системы и желудочно-кишечного тракта. Таким образом
отбирают от:
 больных животных смывы со слизистых оболочек носовой полости,
конъюнктивы глаз, прямой кишки; кровь с антикоагулянтами (для постановки
ПЦР) и парные пробы сыворотки крови;
 павших животных: кусочки трахеи, лёгких, тонкого отдела кишечника, паренхиматозных органов, регионарных лимфоузлов.
Патматериал в термосе с охлаждающей жидкостью или хладагентом и сопроводительным письмом доставляют в ветлабораторию для проведения лабораторных исследований.
63
3. Проводят лабораторное исследование патологического материала по
следующей схеме.
Из доставленного патматериала готовят вируссодержащую суспензию и
мазки-отпечатки.
I этап. Проводят индикацию вируса методами ПЦР (ИРТ, ВД, ПГ-3) и
РИФ со специфическими конъюгатами (ПГ-3, ИРТ, ВД, Адено, РС).
II этап. Проводят изоляцию вируса методом биологической пробы на первичной культуре клеток тестикул бычка (ТБ), почки телёнка (ПТ) и перевиваемых
культурах клеток почки телёнка (Таурус-1, ПТ-80), коронарных сосудов телёнка
(КСТ), лёгкое эмбриона коровы (ЛЭК). Ставят РГАд с эритроцитами морской
свинки (для ПГ-3). Положительные биопробы определяют по положительной
РГАд и ЦПД методом световой микроскопии.
III этап. Проводят идентификацию выделенного вируса методами РТГАд
(для ПГ-3), РН (для ИРТ, ВД), ПЦР (ИРТ, ВД, ПГ-3), РИФ, РДП, РСК (Адено).
IV этап. Некоторые вирусы, вызывающие пневмоэнтериты КРС, могут
персистировать в организме животных и не вызывать клинических проявлений
болезни. После выделения вируса в некоторых случаях бывает необходимым доказать его роль в данной вспышке заболевания. Для этого используют те же серологические реакции, которые применяли для идентификации вируса, но с парными пробами сыворотки крови и выделенным вирусом.
V этап. Проводят ретроспективная диагностику, которая играет ключевую
роль в современной диагностике вирусных пневмоэнтеритов КРС, т.к. изоляция
вируса из патологического материала трудоёмкая и не всегда эффективная. Для
этой цели используют метод твёрдофазного ИФА (непрямой вариант), РНГА и
другие серологические реакции.
По результатам ретроспективной серодиагностики ветеринарная лаборатория выдаёт ответ. Если титр антител во второй пробе больше, чем в первой в 4 и
более раз, то это свидетельствует об активном инфекционном процессе в организме животного в период взятия крови. При этом болезнь была вызвана тем возбудителем, к которому был установлен прирост титра антител в парных сыворотках.
64
Требования к оформлению реферата по частной вирусологии.
Реферат – это обзор публикаций по данному семейству вирусов. Реферат
должен максимально объективно отражать известную на данный момент информацию по данному вопросу.
Реферат может быть написан от руки или набран на компьютере и отпечатан на
листах формата А4.
Структура реферата
1. Титульный лист
2. Оглавление / План (с указанием номеров страниц)
3. Введение:
 определение болезни;
 распространение;
 актуальность.
4. Основная часть.
а) Характеристика вируса:
 общая характеристика семейства;
 антигенная структура и антигенная вариабельность;
 гемагглютинирующие и гемадсорбирующие свойства;
 особенности культивирования.
б) Характеристика болезни:
 спектр патогенности;
 особенности патогенеза;
 клинические признаки;
 патологоанатомические изменения.
в) Лабораторная диагностика:
 патологический материал;
 индикация вируса;
 выделение вируса;
 идентификация выделенного вируса;
 доказательство этиологической роли выделенного вируса;
 ретроспективная серодиагностика.
65
г) Особенности иммунитета и специфическая профилактика:
 длительность иммунитета у переболевших животных;
 биопрепараты для специфической профилактики;
 серологическая оценка поствакцинального иммунитета.
5. Заключение
6. Библиографический список / Список использованной литературы
Оформление реферата
Левое поле – 3 см, остальные поля по 2 см.
Для рукописных рефератов: разборчивый почерк, междустрочный интервал – 1 см
(по трафарету).
Для печатных рефератов: шрифты Times New Roman, Courier New или аналогичные, кегль – 14, междустрочный интервал – 1,5.
Каждый абзац должен начинаться с красной строки.
Все страницы, начиная со 2-й, должны быть пронумерованы (титульный лист –
это 1-я страница, на ней номер не ставится).
Объем реферата должен быть не менее 7-8 печатных листов или 12-14 рукописных.
Орфографические ошибки не допускаются.
Оформление списка литературы
Ссылки на монографии, учебники или учебные пособия
1. Глик, Б. Молекулярная биотехнология: Принципы и применение / Б. Глик,
Дж. Пастернак. – М.: МИР, 2002. – 470 с.
2. Белоусова,
Р.В.
Ветеринарная
вирусология
/
Р.В.Белоусова,
Э.А.Преображенская, И.В.Третьякова; под ред. Р.В.Белоусовой. – М.: КолосС, 2007. – 423 с.
3. Щелкунов,
С.Н.
Генетическая
инженерия:
учеб.-
справ.пособие
/
С.Н.Щелкунов. – Новосибирск: Сибирское университетское издательство,
2004. – 496 с.
66
Ссылки на статьи из журналов и газет
1. Вазир, Я. Антигенные свойства экспериментальной ассоциированной вакцины против аденовирусной инфекции и вирусной диареи крупного рогатого скота / Я.Вазир, И.В.Третьякова, Е.И.Ярыгина, Р.В.Белоусова // Ветеринария. – 2008. - №4. – С.23-27.
Ссылки на иностранную литературу
Beishuizen, A. Macrophage migration inhibitory factor and hypothalamo-
1.
pituitary-adrenal function during critical illness / A. Beishuizen, GL. Thijs, C.
Haanen // Journal of Clinical Endocrinology & Metabolism. – 2001. - Vol. 86,
No. 6. – Р. 2811-2816.
Библиографический список
1. Белоусова, Р.В. Ветеринарная вирусология [Текст]: учеб. [для вузов /
Р.В.Белоусова, Э.А.Преображенская, И.В.Третьякова]: под ред. Р.В.Белоусовой. –
М.: КолосС, 2007. – 423 с.
2. Белоусова, Р.В. Ветеринарная вирусология [Текст]: метод. реком. [для
вузов /Р.В.Белоусова, Э.А.Преображенская, Н.И.Троценко]. – М.: МГАВМиБ,
2001. – 60 с.
3. Белоусова, Р.В. Практикум по ветеринарной вирусологии [Текст]:
/ Р.В.Белоусова, Н.И.Троценко, Э.А.Преображенская. – 3-е изд.,
перераб и доп. – М.:КолосС.–2006. – 248 с.
4. Классификация и номенклатура вирусов позвоночных [Текст]: пер. с
англ. и ред.В.Ю.Луговцева, Д.А.Васильева. – Ульяновск, 2002. –268 с.
5. Мюллис, К. Необычайная история о том, как родилась полимеразная
цепная реакция [Текст] / К. Мюллис // В мире науки, 1990. – №6.
6. Ройт, А. Иммунология [Текст]: пер. с англ. / А.Ройт, Дж. Бростофф, Д.Мейл. – М.: Мир, 2000. – 582 с.
7. Сюрин, В.Н. Вирусные болезни животных [Текст] / В.Н.Сюрин,
А.Я.Самуйленко, Б.В.Соловьёв, Н.В.Фомина. – М.:ВНИТИБП, 1998. –
928 с.
8. Щелкунов, С.Н. Генетическая инженерия [Текст] / С.Н.Щелкунов. –
Новосибирск: Сибирское университетское издательство, 2004. – 496 с.
9. http:www.pcr.ru