ОСОБЕННОСТИ ДЕТЕРМИНИРОВАНИЯ ИММУННЫХ НАРУШЕНИЙ ПРИ ИНФЕКЦИЯХ, ПЕРЕДАВАЕМЫХ ПОЛОВЫМ ПУТЕМ
advertisement
На правах рукописи Луцюк Андрей Григорьевич ОСОБЕННОСТИ ДЕТЕРМИНИРОВАНИЯ ИММУННЫХ НАРУШЕНИЙ ПРИ ИНФЕКЦИЯХ, ПЕРЕДАВАЕМЫХ ПОЛОВЫМ ПУТЕМ 14.00.16 – патологическая физиология 14.00.36 – аллергология и иммунология Автореферат диссертации на соискание ученой степени кандидата медицинских наук Кемерово- 2008 2 Работа выполнена в Государственном образовательном учреждении высшего профессионального образования «Кемеровская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» и Государственном учреждении здравоохранения «Областной кожно-венерологический диспансер» г. Кемерово Научные руководители: доктор медицинских наук, профессор Лисаченко Геннадий Васильевич доктор медицинских наук Шабалдин Андрей Владимирович Официальные оппоненты: доктор медицинских наук, профессор доктор медицинских наук, профессор Золоев Георгий Кимович Ведущая высшего Долгих Олег Владимирович организация: Государственном образовательном учреждении профессионального образования «Омская государственная медицинская академия Федерального агентства по здравоохранению и социальному развитию» Защита состоится «__» «____________» 2008 г. в __ часов на заседании диссертационного совета Д 208.035.02 при ГОУ ВПО КемГМА Росздрава по адресу: 650029, г. Кемерово, ул. Ворошилова, 22а. С диссертацией можно ознакомиться в библиотеке ГОУ ВПО КемГМА Росздрава. Автореферат разослан «__» _________ 2008 г. Ученый секретарь диссертационного совета, доктор медицинских наук, профессор Разумов А. С. 3 ОБЩАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА РАБОТЫ Актуальность проблемы Проблема высокой заболеваемости инфекциями, передаваемыми половым путем, продолжает оставаться актуальной во всем мире (Молочков В.А., 2006). При этом за последние 30 лет представления об этой патологии претерпели существенные изменения. Несмотря на то что в последние 5-7 лет в США и Западной Европе отмечается стойкая тенденция к снижению распространенности урогенитальных инфекций в целом, по ряду нозологий ситуация продолжает быть близкой к эпидемии (Radcliffe K.W., 2001, 2006). В первую очередь это относится к возбудителям «нового поколения» – Chlamydia trachomatis и Ureaplasma urealyticum (Handsfield H.H., 2006). То есть возрастает роль атипичных микроорганизмов с преимущественно внутриклеточной локализацией. Огромное значение также имеет Neisseria gonorrhoeae и Trichomonas vaginalis. Так частота урогенитального хламидиоза в некоторых регионах России достигает 20%, уреаплазмоза и микоплазмоза – 60%, герпетических инфекций – 15% (Посохова Д.Ф., 2005; Хрянин А.А., 2007). В последние годы отмечается рост числа больных с урогенитальной инфекцией и одновременным поражением суставов – реактивные артриты. По данным Института ревматологии РАМН, больные с реактивными артритами составляют около 10% пациентов ревматологических стационаров (Насонов Е.Л., 2008). Этот факт говорит о тяжелом и часто инвалидизирующим течении инфекций, передаваемых половым путем (Стрельников А.П., 2005). В настоящее время в клинической картине многих заболеваний, передаваемых половым путем, отмечаются малосимптомность, отсутствие характерных проявлений, наклонность к латентному течению (Мавров И.В., 2002; Кацамбаса А.Д., 2008). Так, для хламидийной инфекции свойственны отсутствие патогномоничных клинических симптомов, наклонность к затяжному, рецидивирующему течению, сочетание с другими инфекционными агентами (микоплазмы, уреаплазмы), что зачастую обуславливает сложность 4 установление этиологического диагноза (Лобзин Ю.В., 2003; Якубович А.И., 2007; Хрянин А.А., 2007). Трихомониазу свойственна широта клинических проявлений. Пик этого заболевания приходится на лиц репродуктивного возраста. Для мужчин характерны поражения уретры, семенных пузырьков, предстательной железы, куперовых желез. Клиническая картина трихомониаза зависит как от вирулентности возбудителя, так и от реактивности организма человека. Различают заболевания с острым, подострым и торпидным течением, а также хронический и асимптомный трихомониаз (Krieger J.N., Alderete J.F., 1999; Молочков В.А., Гущин А.Е., 2006). Уреаплазмоз, микоплазмоз и генитальный герпес часто ассоциированы с дефицитом местного или системного иммунитета (Посохова Д.Ф., 2005; Исаков В.А., 2006). Клиническая картина и эффективность терапии также часто связаны с различной степени выраженности иммунными нарушениями у индивидуума (Cassel, G.H., 1983; Борисенко К.К., 1997; Сухих Г.Т., 1997; Адаскевич В.Н., 2004). Одними из ведущих медиаторов иммунной системы являются цитокины, которые регулируют как первичный так и вторичный иммунный ответ и его напряженность (Ройт А., 1991; Симбирцев А.С., 2005). Для большинства генов интерлейкинов показан экзонный и интронный полиморфизм, обеспечивающий индивидуальные особенности синтеза этих медиаторов иммунной системы (Carter M.J., 2001; Genevay S., 2002; Vamvakopoulos J. E., 2002; M-C Wu, 2003). Возможно, что все этапы инфекционного процесса от момента заражения детерминированы по этим генам. Исходя из представленных выше данных видно, что в проблеме патогенетически обоснованных методов диагностики и лечения инфекций, передающихся половым путем, актуальными являются исследования особенностей иммунных нарушений при этой патологии и механизмов детерминирования иммунодепрессивных состояний. 5 Цель исследования Оценить патогенетическую детерминирования нарушений в значимость иммунной иммуногенетического системе при различных урогенитальных инфекциях. Задачи исследования 1. Изучить особенности клинической картины урогенитальных инфекций различной этиологии. 2. Оценить состояний иммунной системы при урогенитальных инфекциях различной этиологии. 3. Исследовать ассоциации генов интерлейкина 4 и антагониста рецептора интерлейкина 1 с урогенитальными инфекциями различными по этиологии. 4. Выявить особенности детермирования иммунных нарушений при различных по этиологии урогенитальных инфекций. Научная новизна исследования Установлено, что хроническое течение и частое рецидивирование инфекций, передаваемых половым путем, у мужчин обусловлено нарушениями функций иммунной системы. Показано, что при инфекциях, вызванных грам (+) возбудителем - характерна депрессия гуморального иммунитета; для грам (-) флоры и генитального герпеса – дефицит Т-клеточного звена иммунитета, функциональной активности фагоцитов и системы комплемента; а для трихомониаза – дефицит антиген-представляющих клеток. Установлено, что нарушение функции иммунной системы связано с генами интерлейкина 4 и антагониста рецептора интерлейкина 1. Впервые обнаружены неизвестные антагониста рецептора ранее ассоциации интерлейкина 1 с генов интерлейкина различными по 4 и этиологии урогенитальными инфекциями: для урогенитальных инфекций вызванных грам (+) флорой маркерным генотипом был IL1Ra*2R,2R; для грам (-) инфекций, передаваемых половым путем, таким генотипом был IL4*3R,3R и сочетанный генотип IL1Ra*4R,4R;IL4*3R,3R; для трихомонадной инфекции 6 специфического положительно ассоциированного генотипа не выявлено. Для урогенитального герпеса обнаружен положительно ассоциированный генотип IL1Ra*4R,4R. Выявлено, что различные комбинации аллелей генов интерлейкина 4 и антагониста рецептора интерлейкина 1, отличающихся по числу тандемных повторов в интронной области, влияют на состояние иммунорегуляторного потенциала и тем самым определяли механизм формирования иммунодепрессивного состояния при инфекциях, передающихся половым путем. Практическая значимость Выявленные специфические генетические маркеры для различных по этиологии инфекций, передаваемых половым путем, и нарушений в иммунной системе позволят проводить раннюю диагностику как самих урогенитальных инфекций, так и иммуноопосредованных осложнений; а также позволят прогнозировать развития данной патологии у декретированных лиц. Установленные особенности поражения иммунной системы при различных по этиологии инфекций, передаваемых половым путем, являются основой для разработки патогенетически обоснованных способов иммунокоррекции этой патологии. Основные положения, выносимые на защиту 1. Урогенитальные инфекции у мужчин имеют клинические особенности в зависимости от этиологии: торпидное, малосимптомное течение - при условно-патогенной и трихомонадной инфекциях; частые инфекционноаллергические осложнения - при хламидийной инфекции; высокий процент подострого течения - при уреа-микоплазменной и герпетической инфекциях. 2. У мужчин формирование урогенитальных инфекций связано с иммунными нарушениями. При инфекциях, вызванных грам (+) флорой имели место нарушения гуморального звена иммунитета, а при грам (-) урогенитальных инфекциях, трихомонадной инфекции и урогенитальном герпесе – нарушения клеточных механизмов иммунной защиты. Иммунные 7 нарушения при урогенитальных инфекциях являются ведущим патогенетическим звеном в формировании данной патологии. 3. Для различных по этиологии инфекций, передаваемых половым путем, выявлены специфические генетические маркеры, локализованные в локусах интерлейкина 4 и антагониста рецептора интерлейкина 1. Инфицирование грам (+) флорой ассоциировано с аллелями антагониста рецептора интерлейкина 1. Грам (-) инфекции, герпес и трихомониаз формируются у лиц с сочетанием гомозиготного генотипа антагониста рецептора интерлейкина 1, с 4 и гомозиготным генотипом интерлейкина 4. 4. Определенные комбинации аллелей генов интерлейкина антагониста рецептора интерлейкина 1, различающихся по числу тандемных повторов, ассоциированы с нарушениями в иммунной системе. Влияние этих генов на формирование различных по этиологии инфекций, передаваемых половым путем, связано с детерминированием первичных нарушений в иммунорегуляторном потенциале. Внедрение результатов исследования Основные результаты диссертационного исследования внедрены в практику Областного кожно-венерологического диспансера г. Кемерово и учебный процесс на кафедре клинической лабораторной диагностики ГОУ ВПО КемГМА Росздрава. Апробация материалов диссертации Материалы диссертации доложены и обсуждены на научно-практической конференции «Актуальные вопросы дерматовенерологии», (Кемерово, 2003); региональной научно-практической конференции «Актуальные вопросы дерматовенерологии», (Кемерово 2006); Российской конференции «Мужское здоровье – как демографический фактор», в рамках Российской выставки «Мединтекс», (Кемерово 2008); на международной конференции «Объединенный иммунологический форум – 2008», (Санкт-Петербург, 2008). Публикации По теме диссертации опубликовано 9 печатных работ, из них 1 - в журнале, рекомендуемом ВАК РФ для публикаций основных результатов диссертации на соискание ученой степени кандидата наук. 8 Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 118 страницах машинописного текста. Состоит из введения, обзора литературы, описания методов исследования, четырех глав собственных исследований, заключения и выводов. Диссертация иллюстрирована 4 рисунками и 12 таблицами. Библиографический список содержит 220 литературных источников, из них 113 отечественных и 107 иностранных. Личный вклад Формирование рабочей гипотезы, определение темы исследований, разработка программы и ее проведение, сбор, обработка и анализ материала проведен лично автором. Исследование показателей клеточного и гуморального иммунитета, молекулярное типирование генов интерлейкинов проводилось на базе лабораторий МУЗ «Детская городская клиническая больница №5» (зам. директора по поликлинике и лабораторной диагностике – Жилинская Н.К.) с учетом научно-методических рекомендаций (Филипенко М.Л., 2006). МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Общая характеристика клинического материала Обследовано 199 пациентов мужского пола Областного кожно- венерологического диспансера, которые вошли в исследуемую группу. Группа сравнения состояла из 32 здоровых мужчин, сопоставимых по возрасту с пациентами исследуемой группы. Возраст обследованных находился в интервале 19-37 лет, в среднем составил 27,41,76 лет. В процессе обследования пациенты были разделены на подгруппы по этиологии выявленного заболевания (табл. 1). Критерии включения в исследуемую группу были следующие: информированное согласие, обнаружение той или иной формы урогенитальных 9 инфекций, по критериям представленным в таблице 1. Критерии исключения: информированное несогласие, исключение инфекционной патологии. Т а б л и ц а 1 Критерии включения в группы с различными формами инфекциями, передаваемыми половым путем Методы диагностики Клиническая картина ПЦР ИФА БЛ БС ПИФ Грам (+) Серозно-гнойные или гнойные + выделения из уретры. Краснота отечность «губок» уретры. Дизурические расстройства. Мутная моча. Грам (-) + + + + Гнойные, обильные выделения из уретры. Жжение и зуд в уретре. Рези в канале при мочеиспускании. Выраженные гиперемия, отек губок уретры. Боль в яичках, промежности. Петехии и папулы на крайней плоти головки полового члена Трихомониаз + + + Скудные слизисто-пенистые выделения из уретры. Эрозивные высыпания на головке полового члена и на внутреннем листке крайней плоти. Генитальный + + Высыпания в виде везикул, эрозий + герпес и корочек на фоне гиперемии. Болезненность в местах высыпаний. Общие продромальные явления. Примечание: ПЦР – полимеразноцепная реакция, ИФА – иммуноферментный Этиология анализ, БЛ бактериология, БС бактериоскопия, ПИФ – прямая иммунофлуоресценция. Для диагностики инфекций, передаваемых половым путем, применялись бактериологический, бактериоскопический, серологический генетические методы исследования биологического материала. и молекулярно- 10 У всех обследованных забирали венозную кровь, из лимфоцитов периферической крови выделяли геномную ДНК с помощью метода фенолхлороформной экстракции с последующим осаждением в этаноле (Sambrook J., 1989). Для исследования полиморфизма антагониста рецептора интерлейкина 1 (IL1Ra) проводили ПЦР с праймерами фланкирующими полиморфный регион в пределах второго интрона (рис. 1), в котором находятся вариабельное количество тандемных повторов (VNTR) - 86 н.п. (Blakemore A.I., 1994). Полиморфизм этого гена был представлен четырьмя аллелями: 2r (repaid – повтор), 3r, 4r, 5r. Р и с у н о к 1 Электрофореграмма продуктов амплификации VNTR IL1Ra в 6%-ном полиакриламидном геле. Дорожки обозначены полученными генотипами, маркер молекулярного веса ДНК плазмиды pBluscriptSKII гидролизованная эндонуклеазой рестрикции MspI. Для полиморфизма интерлейкина 4 (IL4) использовался метод ПЦР с праймерами фланкирующими полиморфный регион в пределах второго интрона (рис. 2), в котором находятся вариабельное количество тандемных 11 повторов (VNTR) – 70 н.п. (Mout R., 1991). Полиморфизм этого гена был представлен двумя аллелями: 2r (repaid – повтор), 3r. Полиморфизм исследуемых генов детектировали с помощью электрофореза продуктов амплификации в 6% полиакриламидном геле. Р и с у н о к 2 – Электро-фореграмма продуктов амплификации VNTR IL4. Дорожки обозначены полученными генотипами, маркер молекулярного веса ДНК плазмиды pBluscriptSKII гидролизованной эндо-нуклеазой рестрикции MspI. Во всех группах были проведены следующий иммунологические анализы. Уровень иммуноглобулинов А, М и G в сыворотке крови – определяли с помощью нефелометрии. Фагоцитарная активность лейкоцитов исследовалась в тесте с нитро-синим тетразолем (НСТ-тест). Функциональная активность лимфоцитов определялась в реакции бластной трансформации с ФГА. Уровень Т-лимфоцитов в периферической крови устанавливался по маркерному рецептору - CD2. При помощи рутинного исследования определяли общее количество лейкоцитов и лейкоцитарную формулу. Уровень циркулирующих иммунных комплексов в периферической крови изучался по данным нефелометрии полиэтиленгликолевого осадка; а уровень комплементарной 12 активности сыворотки крови - по данным 50% гемолиза сенсибилизированных эритроцитов. Cтатистическую обработку полученных результатов проводили с помощью стандартных генетико-статистических методов, используя пакет прикладных программ Statistika for WINDOWS 6.0. В соответствии с равновесием Харди-Вайнберга, провели сопоставление частот аллелей и генотипов генов IL1Ra и IL4 в исследуемых и группе сравнения, с помощью критерия Фишера для малых выборок (Зарецкая Ю.М., 1983; Лакин Г.Ф., 1990). Непараметрические показатели сравнивали с помощью критерия Мани-Уитне, а параметрические – с помощью критерия Стьюдента. Результаты считали достоверными при ошибке менее 5%, что соответствует медико-биологическим исследованиям (Животовский Л.А., 1991). РЕЗУЛЬТАТЫ И ОБСУЖДЕНИЕ На первом этапе исследования для региональной оценки этиологической структуры инфекций, передаваемых половым путем, был проведен анализ частоты встречаемости различных по возбудителю урогенитальных инфекций. Проведенное исследование показало, что большую группу (31%) составили лица, у которых этиологию урогенитальных инфекций составили представители условно-патогенной флоры. Грамположительная флора была представлена: Staphylococcus неидентифицированными aureus, палочками, Streptococcus гарднереллами, haemolyticus, mobilunkus, лептотрихиями. Грамотрицательная: Enterobakter aerogenus, Proteus klebsiella и энтерококками. Второе место занимали инфекции вызванные Микоплазмой гоминис и/ или Уреаплазмой уреалитикум (30%). Трихомониаз выявлялся у 22% обследованных, хламидиоз и генитальный герпес у 9% и у 8% пациентов соответственно (рис. 3). 13 35 % 30 25 20 15 10 5 0 условнопатогенная инфекция уреамикоплазменная инфекция трихомониаз хламидиоз герпетическая инфекция Р и с у н о к 3 Этиологическая характеристика урогенитальных инфекций у мужчин в Кемеровской области Особенности клинической картины урогенитальных инфекций Во-первых, анализ жалоб при инфекциях, передаваемых половым путем, различной этиологии показал отсутствие их нозоспецифических особенностей. Такие жалобы как зуд, жжение, выделение из уретры, высыпания на половом члене, дизурические расстройства и даже артралгии встречались при любой этиологии урогенитальных инфекций. Это говорит о значимости лабораторной диагностики этих заболеваний. Во-вторых, часто выявлялись торпидные, малосимптомные формы трихомонадной инфекции. Было отмечено, что носительство трихомонад, обнаруженных при комплексной диагностике, не вызывало никаких воспалительных реакций на поверхности слизистой оболочки у 42% пациентов, в то время как по данным литературы доля таких пациентов не превышает 10% (Krieger J.N., 1999). Кроме того, у 63% пациентов с трихомонадной инфекцией формировались осложнения в виде простатитов. В целом это указывает на значимость ранней диагностики этой инфекции и своевременность назначения терапии. 14 В третьих, у 12% пациентов с хламидийной инфекцией имелись осложнения в виде инфекционно-аллергических артритов, а у 43% обследованных – в виде орхоэпидидимитов, везикулитов и простатитов. В 45% случаев при урогенитальном хламидиозе имела место региональная лимфоаденопатия. Инкубационный период свыше 10 дней встречался у 63% пациентов. Эффективность первого курса антибактериальной терапии составляла 81%, в то время как по данным литературы это показатель равен 95% (Хрянин А.А., 2007) Эти данные указывают на наличие сопутствующей иммунопатологии у 50% пациентов с урогенитальным хламидиозом. В четвертых, отмечено, что у 83% обследованных с диагностированной герпетической инфекцией заболевание протекало в подострой форме. Таким образом, анализ полученных данных позволяет заключить, что высокая частота осложнений при урогенитальных инфекциях, таких как реактивные артриты, простатиты, везикулиты и орхоэпидидимиты, является следствием сопутствующих иммунодефицитных состояний. То есть имеет место вовлеченность иммунной системы в формирование и течение большинства урогенитальных инфекций. Состояние иммунной системы у мужчин при инфекциях, передаваемых половым путем Для инфекций, вызванных грам (+) бактериями был характерен дефицит IgA, IgM (рис. 4). Так средний уровень IgA в сыворотке крови у пациентов был равен 1,50,10 г/л против 1,80,04 г/л у здоровых доноров (p<0,05). Концентрация IgM в сыворотке крови у лиц с грам (+) ИППП была 1,70,05 г/л против 1,90,08 г/л у здоровых доноров (p<0,05). Кроме того, средний уровень функциональной активности лимфоцитов, по данным реакции бластной трансформации лимфоцитов (РБТЛ), у обследованных с грам (+) инфекцией был 41,81,62%, а у здоровых 52,61,68% (p<0,05). Тем самым, изменения в гуморальном иммунитете и функциональной активности лимфоцитов лежали в основе слабой защиты индивидуума против грам (+) возбудителя. 15 2,5 г/л Группа сравнения Грамм (+) Грамм (-) Трихомониаз Урогенитальный герпес 2 * * 1,5 1 0,5 0 IgA IgM * p<0,05 Р и с у н о к 4 – Гуморальный иммунитет при урогенитальных инфекциях Для урогенитальной патологии, вызванных грам (-) бактериями существенное значение имел дефицит Т-клеточного звена иммунитета (рис. 5). Выявлен как дефицит Т-лимфоцитов в относительных величинах (47,13% против 58,94% в контроле, p<0,05), так и в абсолютных цифрах (1,09109 против 1,39109 в контроле, p<0,05). Кроме того, у этих пациентов была снижена РБТЛ (45,07% против 52,63% в контроле, p<0,05). Дополнительно обнаружена и функциональная недостаточность фагоцитоза, по данным НСТтеста (0,15 усл.ед. против 0,22 усл.ед. в контроле, p<0,05). Гуморальный дефицит при грам (-) ИППП связан с низкой концентрацией в сыворотке крови иммуноглобулинов М (1,71 г/л против 1,97 г/л в контроле, p<0,05) и с функциональной депрессией системы комплемента, по данным 50% гемолиза сенсибилизированных эритроцитов (14,73 усл.ед. против 23,81 усл.ед. в контроле, p<0,05). Тем самым, комплексный иммунодефицит способствует инфицированию индивидуума грам (-) инфекциями. 16 70 % Группа сравнения Трихомониаз Грамм (+) Урогенитальный герпес Грамм (-) 60 * * 50 * * 40 * 30 20 10 0 Лимфоциты Т-лимфоциты РБТЛ * p<0,05 Р и с у н о к 5 – Клеточный иммунитет при урогенитальных инфекциях Смешанный иммунодефицит выявлялся и при герпетической инфекции (рис. 5). Было показано выраженное снижение Т-лимфоцитов периферической крови у пациентов с генитальным герпесом: в относительных величинах (45,67% против 58,94% в контроле, p<0,05) и абсолютных (0,85109 против 1,39109 в контроле, p<0,05), а также общее количество лимфоцитов периферической крови (29,67% против 34,94% в контроле, p<0,05). Ответ лимфоцитов на стимуляцию фитогемагглютинином РБТЛ в группе с герпес инфекцией был ниже контрольного почти в 1,5 раза (35,33% против 52,63% в контроле, p<0,05). Этот показатель оказался самым низким среди исследуемых групп. Кроме того, в этой группе выявлено высокое содержание эозинофилов (5,67% против 3,06% в контроле, p<0,05 – рис. 6). На рисунке 6 также показаны основные иммунные нарушения, которые были характерны для трихомониаза. При этой патологии отмечали статистически значимое по отношению к контролю низкое содержание в периферической крови моноцитов (4,63% против 6,5% в контроле, p<0,05) и 17 высокий уровень эозинофилов (4,88% против 3,06% в контроле, p<0,05), базофилов (0,5% против 0,13% в контроле, p<0,05). Группа сравнения Грамм (-) Урогенитальный герпес * * % 7 6 Грамм (+) Трихомониаз 5 * 4 3 2 * 1 * 0 Эозинофилы Базофилы Моноциты * p<0,05 Рисунок 6 – Характеристика некоторых популяций лейкоцитов при урогенитальных инфекциях.. Иммуногенетические маркеры различных по этиологии инфекций, передаваемых половым путем Для урогенитальных инфекций вызванных грам (+) флорой маркерным генотипом был IL1Ra*2R,2R. Этот генотип встречался у 63% пациентов с этой патологией и не экспрессировался в группе сравнения p<0,001 (рис. 7). Для грам (-) инфекции, передаваемой половым путем, положительно ассоциированными генотипами были IL4*3R,3R (в исследуемой группе 77,5% против 31,5% в контроле, p<0,05) и сочетание IL1Ra*4R,4R;IL4*3R,3R (в исследуемой группе 72% против 13% в контроле, p<0,05). Для трихомонадной инфекции специфического положительно ассоциированного генотипа не выявлено. У пациентов с урогенитальным герпесом достоверно чаще, чем в группе сравнения, встречался генотип IL1Ra*4R,4R (в исследуемой группе 89% против 37% в контроле, p<0,05). 18 100 Группа сравнения Грам (-) Урогенитальный герпес % Грам (+) Трихомониаз * 90 * 80 * 70 * 60 50 40 30 20 10 0 IL1Ra*2R IL1Ra*2R,2R IL1Ra*4R,4R IL1Ra*3R,3R Р и с у н о к 7 Частота встречаемости аллелей и генотипов цитокинов в исследуемых группах. Как видно из представленных данных, на формирование инфекционной патологии мочеполового тракта у мужчин в основном влияли гомозиготные генотипы интерлейкина 4 и антагониста рецептора интерлейкина 1. Таким образом, анализ полученных результатов в сопоставлении с литературными данными позволил заключить, что механизм влияния анализируемых генов цитокинов на формирование инфекций, передаваемых половым путем, связан с иммунорегуляторный потенциал. особенностями их воздействия на Фенотипические характеристики иммунитета и ассоциированные с ними генетические маркеры различных по этиологии урогенитальных инфекций Оба исследуемых гена относятся к интерлейкинам – молекулам иммунной регуляции. Это свойство проявилось в ассоциациях полиморфизмов по этим генам с нарушениями функциональной активности лимфоцитом при большинстве урогенитальных инфекций и дефиците моноцитов при трихомониазе (табл. 2). В тоже время для каждой нозологии имелись свои особенности в детерминировании инфекционного процесса 19 Таблица 2 Детерминирования иммунных нарушений при различных формах инфекций, передаваемых половым путем Форма ИППП Грам (+) Ассоциированный генотип Иммунные нарушения IL1Ra*2R,2R Основной иммунный дефект, через который реализуется ИППП Дефицит регуляторного потенциала, первичного и местного гуморального ответа. Дефициты: 1. РБТЛ 3. IgA, 4. IgM. Грам (-) IL4*3R,3R Дефициты: Дефицит регуляторного Сочетанный 1.РБТЛ, потенциала, истощение НФЗ и IL4*3R,3R; 2.Фагоцитоза, первичного гуморального IL1Ra*4R,4R 3.Комплемента иммунного ответа. 4.IgM ТрихоДефициты: Дефект в АГ-представляющих мониаз 1.Моноцитов, клетках, развитие аллергических 2.Базофилия, реакций. 3.Эозинофилия УрогениIL1Ra*4R,4R Дефициты: Дефицит регуляторного тальный 1.РБТЛ, потенциала, Т- лимфоцитов, герпес 2.Тподавление гуморального лимфоцитов, иммунитета. 3.Лимфоцитов, 4.IgG Примечание : НФЗ – неспецифические факторы защиты При грам (+) ИППП через генотип IL1Ra*2R,2R был детерминирован дефицит функциональной активности лимфоцитов и истощение местного гуморального иммунитета. При грам (-) ИППП через генотип IL4*3R,3R и сочетанный IL4*3R,3R; IL1Ra*4R,4R был детерминирован дефицит функциональной активности лимфоцитов, а также снижение фагоцитоза, комплемента и первичного гуморального иммунного ответа. Трихомониаз не имел специфических маркеров в области генов IL1Ra и IL4, но все же при этой форме ИППП с высокой частотой встречался сочетанный генотип IL4*3R,3R; IL1Ra*4R,4R. Именно поэтому этот генотип 20 детерминировал дефект в антиген-представляющих клетках (моноцитах), а также высокую эозинофилию и базофилию. При генитальном герпесе через генотипы IL1Ra*4R,4R и сочетанный IL4*3R,3R; IL1 Ra*4R,4R были детерминированы дефициты: всего пула лимфоцитов, Т-лимфоцитов, их функциональной активности (РБТЛ), а так же гуморального иммунитета. Таким образом, совокупный анализ полученных результатов показал, что различные комбинации аллей генов интерлейкина 4 и антагониста рецептора интерлейкина 1 детерминируют потенциала, который иммунодепрессивных особенности определяет состояний различных иммунорегуляторного механизм по формирования этиологии инфекций, передаваемых половым путем. И сделаны соответствующие выводы. ВЫВОДЫ 1. Урогенитальные инфекции различной этиологии у мужчин имеют свои клинико-иммунологические торпидное, особенности. малосимптомное течение. При При трихомониазе хламидиозе частое формирование осложнений. При урогенитальном герпесе подострое течение, на фоне выраженного Т-клеточного иммунодефицита. 2. Иммунные нарушения при урогенитальных инфекциях у мужчин носят дифференцированный по этиологии характер: при инфекциях, вызванных грам (+) возбудителем - характерна депрессия гуморального иммунитета; для грам (-) флоры и генитального герпеса – дефицит Т-клеточного звена иммунитета, функциональной активности фагоцитов и системы комплемента; для трихомониаза – дефицит антиген-представляющих клеток. Эти нарушения в иммунной системе при урогенитальных инфекциях являются одним из ведущих патогенетических звеньев формирования патологии. 3. Урогенитальные инфекции различные по этиологии имеют свои специфические генетические маркеры. С грам (+) инфекцией, 21 передаваемой половым путем, положительно ассоциирован генотип IL1Ra*2R,2R. С грам (-) урогенитальной инфекцией - генотип IL4*3R,3R и сочетанный генотип IL1Ra*4R,4R;IL4*3R,3R. Для трихомонадной инфекции специфического положительно ассоциированного генотипа нет. Урогенитальный герпес положительно ассоциирован с генотипом IL1Ra*4R,4R. 4. Иммунные нарушения при урогенитальных инфекциях различной этиологии антагониста ассоциированы с полиморфизмами интерлейкина 4 и рецептора интерлейкина 1. Генотип IL1Ra*2R,2R положительно ассоциирован с дефицитами функциональной активности лимфоцитов и комплемента. функциональной Генотип IL1Ra*4R,4R – с дефицитами активности лимфоцитов, комплемента и иммуноглобулина А в сыворотке крови. Генотип IL4*3R,3R с дефицитом Т-лимфоцитов и их функциональной активностью, а также с недостаточностью системы комплемента и иммуноглобулина А в сыворотке крови. 5. Различные комбинации аллелей генов интерлейкина 4 и антагониста рецептора интерлейкина 1, отличающихся по числу тандемных повторов в интронной области, определяют состояние иммунорегуляторного потенциала и механизм формирования иммунодепрессивного состояния при инфекциях, передаваемых половым путем. ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ Для повышения эффективности ранней диагностики урогенитальных инфекций, прогнозирования формирования сочетанной иммунной патологии целесообразно проводить молекулярно-генетическое типирование генов IL1Ra и IL4, что определяющие позволит течение своевременно ИППП, иммунокоррегирующую терапию. выявлять и иммунные своевременно нарушения, применять 22 СПИСОК ОПУБЛИКОВАННЫХ РАБОТ ПО ДИССЕРТАЦИИ 1. Луцюк, А.Г. Полиморфизм генов интерлейкинов при инфекциях, передаваемых половым путем, у мужчин Кемеровской области / А.Г. Луцюк, А.В. Шабалдин, Г.В. Лисаченко // Российский иммунологический журнал. – 2008. – Т. 2. №2-3. – С. 265-266. 2. Каминская, Т.В. Комплексное лечение хронической хламидийной инфекции препаратом «Спарфло» и доксоциклином / Т.В. Каминская, Т.А. Овчарова, А.Г. Луцюк // Актуальные вопросы дерматовенерологии: материалы науч.-практ. конф., посвященной 60-летию Кемеровского областного кожновенерологического диспансера. –2003. – С.23-25. 3. Пирогова, Е.П. Наш опыт лечения острого урогенитального трихомониаза препаратом «Атрикан 250» / Е.П. Пирогова, Т.В. Каминская, А.Г. Луцюк и др. // Актуальные вопросы дерматовенерологии: материалы научнопрактической конференции, посвященной 60-летию Кемеровского областного кожно-венерологического диспансера. –2003. – С.51-54. 4. Опыт терапии урогенитального хламидиоза / Е.В. Григорьев, А.Г. Луцюк, Л.В. Стрига, и др. // Актуальные вопросы дерматовенерологии: материалы региональной науч.-практ. конф. – 2006. – С.20-23. 5. «Мужская консультация» новое направление в развитии дерматовенерологической службы в г. Кемерово / Е.А. Зотов, Е.Г. Белов, А.Г. Луцюк и др. // Актуальные вопросы дерматовенерологии: материалы региональной науч.-практ. конф. – 2006. – С.26-30. 6. Случаи неэффективности терапии урогенитального трихомониаза / А.Г. Луцюк, Е.В. Григорьев, Л.В. Стрига и др. // Актуальные вопросы дерматовенерологии: материалы региональной науч.-практ. конф. – 2006. – С.44-45. 7. Особенности клинической картины урогенитальных инфекций в Кемеровской области / А.Г. Луцюк, А.В. Шабалдин, Г.В. Лисаченко и др. // Медицина в Кузбассе. – 2008. №5. – С. 124-131. 8. Луцюк, А.Г. Особенности течения урогенитальных инфекций у мужчин в Кемеровской области / А.Г. Луцюк, А.В. Шабалдин, Г.В. Лисаченко // Мужское здоровье – как демографический фактор: материалы науч.-практ. конф. Кемерово – 2008. С.156-159. 23 9. Луцюк, А.Г. Клинические особенности урогенитальных инфекций у мужчин Кемеровской области / А.Г. Луцюк, А.В. Шабалдин, Г.В. Лисаченко // Вестник Кузбасского научного центра СО РАМН. – 2008. №4. – С.23-26. СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ ИППП – инфекции, передаваемые половым путем; ИФА НФЗ – иммуноферментный анализ; – неспецифические факторы защиты; ПИФ ПЦР РБТЛ ФГА – прямая иммунофлуоресценция; – полимеразная цепная реакция; – реакция бластной трансформации лимфоцитов; – фитогемагглютинин; IgA – иммуноглобулин А; IgG IgM – иммуноглобулин G; – иммуноглобулин М; IL4 – интерлейкин 4; IL1Ra – антагонист рецептора интерлейкина 1; VNTR – вариабельные нуклеотидные тандемные повторы.
