Вирусная диарея-болезнь слизистых оболочек (ВД

УДК 619:616.98:578.835.2
ЭФФЕКТИВНОСТЬ
НОВОГО
ПРЕПАРАТА В ОТНОШЕНИИ ВИРУСА
ВИРУСНОЙ
ДИАРЕИ
КРУПНОГО
РОГАТОГО СКОТА
Т.И. Глотова, доктор биол. наук,
профессор; А.Г. Глотов, доктор вет.
наук, профессор; О.В. Семенова,
кандидат биол. наук; А.А. Никонова
ГНУ ИЭВСиДВ Россельхозакадемии
UDC 619:616.98:578.835.2
EFFECTIVENNES OF THE NEW DRUG
AGAINST VIRUS OF BOVINE VIRAL
DIARRHEA
Glotova T.I., Dr. Biol. Sci.
Glotov A.G., Dr. Vet. Sci.
Semenova O.V., Cand. Biol. Sci.
Nikonova A.A.
IEVSiDV RAAS
t-glotova@mail.ru
Представлены результаты изучения The results of studies the effectiveness of
эффективности препарата Виталанг-2 в the preparation Vitalang-2 against virus of
отношении
возбудителя
вирусной BVD-MD are submitted. The preparation had
диареи – болезни слизистых оболочек antiviral activity in cell culture leading to a
(ВД – БС) крупного рогатого скота. significant reduction in viral titer at 1,97 lg10
Препарат проявил противовирусное TCD 50/cm 3. Similar results were obtained in
действие в культуре клеток КСТ, снизив experiments
on
infected
calves.
титр вируса на 1,97 lg ТЦД50/см3. Administration the drug at a dose of 0,5
Аналогичные данные получили в опытах mg/kg lead to reducing the excretion of
на
естественно
инфицированных agent with nasal secretion, the normalization
телятах. Препарат в дозе 0,5 мг/кг of body temperature and hematological
массы тела при введении животным с parameters in calves with subclinical form of
субклинической
формой
инфекции the disease.
привел к сокращению сроков выделения
вируса
с
носовыми
секретами,
нормализации температуры тела и
гематологических показателей.
Ключевые слова: дрожжи, олеиновая Key words: yeast, oleic acid, high-polymeric
кислота, высокополимерная РНК, вирус RNA, virus diarrhea-mucosal disease.
диареи-болезни слизистых
Вирусная диарея-болезнь слизистых оболочек (ВД-БС) контагиозное заболевание, вызываемое РНК-содержащим вирусом,
относящимся к роду Pestivirus семейства Flaviviridae. ВД-БС может
проявляться в виде расстройства органов дыхания, желудочнокишечного
тракта,
репродуктивной,
сердечно-сосудистой,
лимфатической, иммунологической, покровной или центральной
нервной систем зараженного скота [1]. Но наиболее характерными и
экономически значимыми последствиями этой инфекции для индустрии
скотоводства являются репродуктивные проблемы и болезни
респираторного тракта.
Во многих странах в качестве мероприятий против ВД – БС КРС
используют вакцинацию восприимчивого поголовья 3, выявление и
уничтожение
персистентно
инфицированных
животных
2.
Химиопрепаратов для эффективного лечения и профилактики данного
заболевания в настоящее время нет.
В связи с этим разработка новых препаратов и оценка их
противовирусной активности в отношении вируса ВД-БС КРС является
актуальной задачей.
МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ
Новый препарат (серии: 151012; 160611; 181012) был
предоставлен для изучения разработчиками и изготовителями ООО
«Виталанг-2», г. Новосибирск.
Для проверки его противовирусной активности использовали
цитопатогенный штамм ВК-1 вируса ВД-БС КРС с титром 6,5 log10
ТЦД50/см3. Культивирование, накопление и титрование вируса ВД-БС
проводили в перевиваемой культуре клеток коронарных сосудов теленка
(КСТ). Культуры клеток выращивали во флаконах для клеточных культур
(Nunc, Дания) в среде Игла МЕМ (производство ФГУП «Предприятие по
производству бактерийных и вирусных препаратов Института
полиомиелита и вирусных энцефалитов им. М. П. Чумакова РАМН») с
добавлением 5–10 % эмбриональной сыворотки крови теленка (HyClone,
лот № ASA28574). При выращивании культур клеток использовали 0,25
%-й раствор трипсина, 0,01 %-й раствор химопсина в 0,02 %-м растворе
Версена. Контаминацию культуры клеток нецитопатогенными штаммами
вируса исключали методом ПЦР.
Токсичность препарата оценивали в опытах in vitro в соответствии
с «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению
новых фармакологических веществ» [6]. Максимально переносимую
концентрацию (МПК) его вычисляли по формуле: МПК = ТЦД50/4.
Для определения профилактической противовирусной активности
препарат вносили в монослой культуры клеток КСТ, а через 1 ч после
контакта с ним культуру клеток заражали вирусом в дозе 100
ТЦД50/0,1см3. При определении лечебной активности препарат вносили
в монослой используемой культуры клеток через 1 ч после ее контакта с
тест – вирусом. При изучении вирулицидного действия препарат
вносили в монослой клеток одновременно с вирусом. В качестве
контроля во всех случаях использовали культуру клеток без препарата.
Для определения противовирусного действия препарата пробы
отбирали через 24 ч после заражения культуры клеток и титровали.
Степень редукции возбудителя определяли по формуле: R = (log10A0) –
(log10An), где A0 – титр вируса в исходном образце; An – его титр в пробе,
взятой после обработки препаратом. Антивирусный эффект считали
значимым при снижении титра на 1,7 – 2,0 log [6].
На втором этапе испытаний изучали противовирусную активность
препарата в неблагополучном по ВД – БС КРС хозяйстве на естественно
инфицированных 3 – 4-мес. телятах с субклинической формой
инфекции.
Телятам первой опытной группы интраназально вводили препарат
в дозе 0,15 мг/кг массы тела ежедневно в течение 10 дней; второй – 0,5
мг/кг массы тела. Животные третьей и четвертой групп служил
контролем, им интраназально вводили физиологический раствор.
На протяжении 15 дней ежедневно проводили клиническое
обследование телят опытных и контрольных групп, измеряли
температуру тела, отбирали тампонные пробы носовых выделений для
установления длительности выделения вируса ВД – БС КРС. Наличие
возбудителя в носовых выделениях молодняка определяли до и в
течение 15 дней после начала применения препарата.
Лечебное действие нового препарата оценивали по изменению
гематологических показателей, снижению инфекционной активности и
длительности выделения вируса с носовым секретом в период и после
завершения использования препарата.
Данные
статистически
обрабатывали
в
соответствии
с
общепринятыми методами [4]. Титр вируса рассчитывали по методу
Рида и Менча [5].
РЕЗУЛЬТАТЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
МПК препарата для культуры клеток КСТ составила 5 мг/см3. Все
серии препарата не различались по токсичности.
Результаты исследований свидетельствуют о том, что новый
препарат в максимально переносимой дозе оказывал ингибирующее
действие на вирус ВД – БС КРС при внесении его через 1 ч после
тестируемого штамма. Титр вируса снизился на 1,97 log ТЦД 50/см3.
Препарат в дозе 0,15 мг/кг при ежедневном применении в течение
10 дней не обладал противовирусным эффектом.
Улучшение клинического состояния телят второй опытной группы
отмечали на 5 – 6-й день, а выздоровление – на 8 – 9-й день после
начала обработки препаратом. У животных восстанавливался аппетит,
повышалась
активность,
прекращались
выделения
из
носа,
нормализовались температура тела и гематологические показатели
Длительность выделения вируса с носовым секретом у телят
второй опытной группы составила 5 – 6 дней, а у четвертой группы - 7 –
9 дней. Максимальные титры вируса в носовых секретах животных
обеих групп регистрировали с 1-го по 3-й день. Они составляли 2,5 – 3,0
log ТЦД 50/см3 с последующим снижением до 0,5±0,12 log ТЦД 50/см3 во
второй группе на 5 – 6-й день, а у контрольных животных – на 8 – 9-й
день.
Таким образом, у животных второй группы сроки выздоровления и
выделения вируса с носовым секретом сократились в среднем на 2 дня
по сравнению с таковыми контрольной группы. Это свидетельствует о
том, что новый препарат в дозе 0,5 мг/кг при ежедневном использовании
в течение 10 дней проявляет противовирусную активность in vivo.
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Новый препарат подавляет репродукцию вируса ВД – БС КРС в
культуре клеток КСТ, что проявляется достоверным снижением титра
возбудителя на 1,97 log10 ТЦД 50/см3. Препарат в дозе 0,5 мг/кг при
ежедневном в течение 10 дней интраназальном введении телятам с
субклинической формой ВД – БС КРС сокращает сроки выделения
вируса с носовым секретом, нормализует температуру тела и
гематологические показатели и может быть использован для лечения
субклинических форм ВД-БС КРС у телят.
ЛИТЕРАТУРА:
1. Ашмарин. И. П. Быстрые методы статистической обработки и планирования экспериментов/И.П.
Ашмарин., Н. Н. Васильев, В. А. Амбросов //. – Л.: Ленинградского университета. 1974. 76 с.
2. Медицинская вирусология: руководство / под ред. Д. К. Львова. – М.: ООО «Мед. информ.
агентство». 2008. 656 с.
3. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических
веществ / под общ. ред. Р. У. Хабриева. М.: Медицина, 2005. 832 с.
4. Control of bovine viral diarrhea virus in ruminants// Walz P.H. [et al] // Journal of Veterinary Internal
Medicine. 2010. № 24. P. 476–486.
5. Oirschot J.T. Vaccination of cattle against bovine viral diarrhea / J.T. Oirschot, C.J. Bruschke, P.A. Rijn //
Vet. Microbiol. 1999. № 64. P. 169–183.
6. Sockett D. Bovine Viral Diarrhea Virus: A 50 Year Review //Cornell University College of Veterinary
Medicine, Ithaca – NY. 1996. P. 207.