антитела к кардиолипину в элюатах кожи и мышцы у больных

НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ РЕВМАТОЛОГИЯ № 4, 2004
24
АНТИТЕЛА К КАРДИОЛИПИНУ
В ЭЛЮАТАХ КОЖИ И МЫШЦЫ У БОЛЬНЫХ
ПЕРВИЧНЫМ И ВТОРИЧНЫМ
АНТИФОСФОЛИПИДНЫМ СИНДРОМОМ
З.С.Алекберова, Я .Заб ек1, Т. М. Решетняк, Б. Войцеховска1, С.Г. Раденска-Лоповок, В.А.Насонова
ГУ Институт ревматологии РАМН, Москва,
Институт ревматологии, Варш ава1
Резюме
Цель. О пределить наличи е аК Л , антител к (З2 -ГП I, ф р акц и и к о м п л ем ен та СЗ и С4 в составе
имм унны х ком п л ексов, в том числе содерж ащ их аКЛ в элю атах кож и и м ы ш ц больны х С К В и
А Ф С.
Материал и методы. У 7 больны х, 6 из которы х - с тром б оти чески м и осл о ж н ен и ям и (6 ж ен. и
1 муж.), 2 с П А Ф С , 3-х с С К В + А Ф С и у 2-х с С К В , бы ла проведена би о п си я к ож н о-м ы ш ечного лоскута. Разм еры биоптатов равн ял ись 1,5 х 0,5 см и 0,5x0,5 см соответственно. И з-за м а­
лы х разм еров би оптатов п р и м ен ен и е тради цион ны х методов дроб лен и я т ка н е й , таких как ост­
рая гом огенизация в гомогенаторах с растиркой и последую щ им проц ессом за м о р аж и в а н и я -р а з­
м ораж ивания, сопровож даю щ егося больш ой потерей белка, делало невозм ож н ы м серологичес­
кий анали з ткан ей . И сп ол ьзован и е метода кислы х элю атов T .E .W .F eltkam p и J.H .B oode в со б ­
ственной м од и ф и к ац и и позволило обеспечить м ини м альны е потери ткан ев о го белка и дало воз­
м ож ность серологического исследования тканей.
Результаты. У всех больны х в сы воротке крови вы являлись аФ Л : у 3-х Ig G -аК Л и у 5 - сочета­
ние IgG и JgM - aK Jl.B 5 из 7 элю атов вы являлись IgG -аК Л , превы ш авш и е зн ач ен и я 0,109
ед.О П ., в некоторы х обн аруж ивали сь ком плекс ком лем ента СЗ и С4 и разл и чн ы е белковы е п ро­
дукты , среди которы х преобладали им м уноглобулины . А нтитела к Р2"^П I отсутствовали.
Заключение. Впервы е п ок азан о наличи е в тканях больны х А Ф С аК Л , что представляет особы й
интерес при изучении м орф огенеза местны х тканевы х наруш ений с участием им м унны х к о м ­
плексов, содерж ащ их аК Л .
К л ю ч е в ы й с л о в а : антифосфолипидный синдром, антифосфолипидные ант ит ела, системная
красная волчанка, элюат ы биоптатов кож и и мышцы
Н аличие антител к ф осф ол и п и дам (аФ Л ) в крови ассо­
циируется с определенн ы м к л и н и ческ и м с и м п том оком п лексом - ан ти ф осф оли п и д н ы м синдром ом (А Ф С ) [1,2,3,4],
основны м и проявл ен и ям и которого являю тся рециди виру­
ющ ие артериальны е и \и л и вен озн ы е тром б озы , акуш ерская
патология, тром б оц и топ ен и я [5,6,7]. С пектр к л ини ческих
проявлений, связан ны х с окк л ю зи ей сосудов различн ой л о ­
кали зац ии и калибра, довол ьн о ш и рок и во м ногом зависит
от свойств органов или т кан ей , вовлеченн ы х в процесс о к ­
клю зии. Д ругими п ри зн акам и А Ф С являю тся сетчатое л и ­
ведо, гем олитическая а н ем и я, патология кл ап ан ов сердца,
язвы на ниж них конечностях, н еврологич еские н аруш ения,
артериальная гипертония.
П редполагается, что важ ную роль в процессе взаи м о­
действия аФЛ и эн дотелиальны х клеток (Э К ) играет пл аз­
менны й белок (32-гликопротеин I ((32-ГП I) [7,8]. В н астоя­
щее время получены дан н ы е о том , что антитела, присутст­
вующие в сы воротке больны х А Ф С , на сам ом деле р асп оз­
наю т антигенны е детерм инанты не к ард и ол и п и н а, а кон ф орм ацион ны х эп итоп ов, ф орм ирую щ ихся в проц ессе вза­
им одействия (32-ГП I или реже других п лазм ен ны х белков
крови с кардиолипи ном . Э тот эп и топ м ож ет эк с п р е сс и р о ­
ваться в молекуле кард и ол и п и н а или, что более вероятно, в
молекуле (32-ГП I [7,9]. Ч асто в ткан ях больны х А Ф С при
гистологическом исследовании им ею т м есто изм ен ен и я,
напом ин аю щ ие васкулит [10], одн ако остается не ясны м ,
каким образом аФЛ вы зы ваю т н аруш ения в системе свер­
ты вания крови и повреж дени я ткан ей различн ы х органов.
В этой связи уместно привести гипотезу о м еханизм е р аз­
вития пораж ения клап ан ов сердца при А Ф С , согласно к о ­
Адрес: 115522 Москва, Каширское ш., 34а
ГУ Институт ревматологии РАМН. Тел.: 114-44-52
торой аФЛ активирую т Э К и тром боциты [ 11,12], при этом
не исклю чается возм ож н ость и м м уноком плексн ого п о­
вреж дения эн дотел и я сосудов и эн докард а [13,14]. На о с ­
новании гистохим ических исследований сердечны х к л ап а­
нов, полученны х на аутопсии и при операц иях п ротезиро­
вания кл ап ан ов у больны х А Ф С , L. Z iporen и соавт. [14]
предполож или патоген ети ч еское зн ач ен и е аФЛ в повреж де­
нии кл ап ан н ого ап п арата сердца, вы явив л ен тообразн ы е
(ribbon-like) субэн дотел и ал ьн ы е депози ты им м уноглобули­
нов, содерж авш их к ом п он ен ты ком плем ента и анти и ди оти пические анти тела к к ард и ол и п и н у (аК Л ). Важно, что п о ­
добны е и м м у н ом орф ологи ч еск и е наруш ения в клапанах
бы ли обнаруж ены только при А Ф С и не вы являлись в н о р ­
мальны х клапанах и при других заболевани ях, ассоции рую ­
щ ихся с п ораж ени ем к л ап ан н о го аппарата сердца.
Целью настоящ его исследования было определить нали­
чие различных классов аК Л , антител к (32-ГП 1, ф ракции
комплемента СЗ и С4 в составе иммунных комплексов в элю ­
атах биоптатов кож и и мы ш цы у больных С КВ с / без А Ф С и
ПА Ф С, используя разработанны й метод элю ации, позволя­
ющ ий оценить состав антител, находящ ихся в тканях.
Материал и методы
У 7 больны х (6 ж ен. и 1 муж.): 2-х с первичны м А Ф С
(П А Ф С ), 4-х- с С К В + А Ф С и 1-го - с С К В - бы ла п ро­
ведена би опси я к о ж н о -м ы ш е ч н о го лоскута.
Всем больны м в сы воротке крови определяли аКЛ и волчаночны й анти коагулянт (ВА). О пределение аКЛ проводи­
лось им м уноф ерм ентн ы м методом (И Ф М ) согласно м етоди­
ке, опи санной ранее в ГУ И нститут ревматологии РАМН [9].
За верхнюю границу нормы была принята концентрация
аКЛ , превы ш авш ая среднее значение данного показателя у
доноров на 5 стандартны х отклон ени й (SD ) (M + 5S D ), что
НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ РЕВМАТОЛОГИЯ № 4, 2004
составило 23 G P L для IgG -аК Л и 26 M PL для IgM -аКЛ.
К линико-им м унологическая характеристика больны х на мо­
мент проведения биопсии приведена в табл. 1.
Всего было получено 7 ф рагм ентов кож и и м ы ш ечной
ткани разм ером 1,5x0,5 см и 0,5x0,5 см соответственно. И зза малого размера биоптатов п ри м ен ен и е тради цион ны х
методов дроблени я ткан ей , таких как острая гом огенизация
в гомогенаторах с растиркой их и с последую щ им проц ес­
сом зам о р аж и в ан и я-р азм о р аж и в ан и я, сопровож даю щ ихся
больш ой потерей белка, делает н евозм ож н ы м серологичес­
кий анализ тканей. И сп ол ьзован и е метода кислы х элю атов
T.E.W . Feltkam p и J.H . Boode [15] в собствен ной м од и ф и ­
кации позволило вы полнить два важ ны х условия: обесп е­
чить м иним альны е потери ткан евого белка и возм ож ность
серологического исследования ткан ей . М етодика исследо­
вания элю ата представлена на рисунке .
Рисунок
СХЕМА ПОЛУЧЕН И Я ЭЛЮАТОВ
ИЗ БИОПТАТОВ КОЖ И И М Ы Ш Ц Ы
I
нейтрализаци я
Белок в элюате-1 после пром ы вки в PBS составил от 0,1
до 0,5 м г/м л, а в элю ате-2 (р Н = 2 ,5 ) - от 0,01 до 0,05 м г/м л,
что позволило провести их и м м унологическое и серологи­
ческое исследование методами ELISA и W estern - blotting.
О пределяли белок методом Lowry О .Н . с соав. [16], уровни
IgG -аК Л , а такж е антитела к (32 ГП1 И Ф М . Т ест-систем ы
ф ирм ы Cogent (В ели кобри тан и я) в W estern - blotting ис­
пользовали для вы явления им м уноглобулинов, определе­
ния уровня ком плем ента и антител к (32 ГП1. Ц И К опреде­
ляли ком бин ирован ны м методом , оп и сан н ы м ранее [17].
У ровень аКЛ дан в ед. О П 450 п т или в виде отнош ения
активности к количеству белка в дан н о м элю ате в мг , как
это при нято в эн зи м ол оги и , что лучш е показы вает с оотн о­
ш ение уровня аКЛ к другим белкам в элю атах тканей
(табл. 2).
Уровни IgG -аК Л и IgG -aH T H -[322-rni в тканях опреде­
ляли И Ф М . У ровень IgG -анти-(322-ГП1 в крови более
0,184 ед. ОП (М + 5SD ) считался пози ти вн ы м , от 0,147 до
0,184 - сом н ительн ы м и и - до 0,147 ед.О П . - отрицателы м и
П олож ительны ми для IgG -аК Л зн ач ен и ям и были выше
0,109 ед.О П (средний уровен ь у здоровы х л и ц , определ ен ­
ный ранее, плю с 4 стандартн ы х о ткл о н ен и я), зн ачени я от
0,092 ед. ОП до 0,109 ед.О П считали сь сом н ительн ы м и .
Результаты и обсуждение
Как видно из табл. 2, в 5 из 7 э л ю а т о в -1 И Ф М вы явл я­
лись IgG -аК Л , превы ш авш ие зн ач ен и я 0,109 ед О П . Ни в
одном случае в элю атах-2 не бы ли вы явлены аК Л , превы ­
ш аю щ ие зн ачени я 0,109 ед О П . О днако, ед. ОП изм ерений
аКЛ при И Ф М в элю атах-2 им ели такие вели чин ы , что мы
предполож или необходим ость повы ш ен и я к онцентрац ии
белка тканей в 5 - 10 раз (т.е. до его уровня в элю ате-1). В
связи с отсутствием возм ож ности увели чения исследуемого
материала в элю атах-2 для вы явл ен и я антител ОП была с о ­
25
отнесена к весу белка в мг (отнош ение активости к к о л и ­
честву белка -в столбце табл. 2 -бел ок по методу Lowry),
что позволило уравн ять кон ц ен трац и ю аКЛ с белковой
к онцентрац ией в обоих элю атах. Т акой подход к оценке к о ­
личества белка в ткан ях позволил соотнести содерж ание
аКЛ в обоих элю атах, причем в 4-х случаях в элю атах-2 оно
оказалось зн ачительны м . При этом бы ли получены резуль­
таты , свидетельствовавш ие о повы ш ени и концентрац ии
белка в элю тах-2 в 5-10 раз (т.е. до его уровня в элю атах1). П одобная м етодика, о п и са н н а я нам и, позволяет придти
к заклю чению о наличи и в элю атах IgG -анти-[32-ГП1 к о ­
жи и мы ш цы больны х с А Ф С IgG -аК Л . При этом не были
обнаруж ены . К оличественны й анали з состава белка м ето­
дом W estern-blotting в элю атах 1 вы явил л иш ь следы имм у­
ноглобулинов G и М, а такж е СЗ и С4 ком поненты к о м ­
племента.
У всех исследованны х нами больны х в сы воротке крови
вы являлись аФЛ (табл. 1): у 3-х - IgG -аК Л и у 5 - сочета­
ние IgG - и IgM -аК Л . Т ром боти чески е ослож нения имели 6
из 7 п ациентов при этом 3 ( больны е N 4,6,7) из них нахо­
ди ли сь в пероид острого тром б оза (период времени после
эп изода тром боза не превы ш ал 1 мес.). В элюатах тканей
обнаруж ивались IgG -аК Л им ен н о у этих трех больны х, а
такж е у одной больной (N 5) без кли н и ки тромбоза, но в
период обострени я С К В , ещ е до назн ачен и я ей глю кокортикоидов. П оследняя, кром е кли н и чески х проявлений, с о ­
ответствую щ их обострени ю С К В , имела вы раж енны е и м ­
м унологические наруш ен и я, и по-видим ом у, вы явление
аКЛ в тканях в дан н ом случае ассоции ровалось с а кти в н о ­
стью СКВ.
Г истологический ан ал и з биоптатов кожи и мы ш цы по­
казал наличие деструкти вного васкулита в 4-х из 7-и о б ­
разцов (1- с С К В , 3 С К В + А Ф С ). П родуктивны й васкулит
имел место только у одной больной С К В (№ 5). В двух слу­
чаях (1- с П А Ф С и 1 -С К В + А Ф С ) отмечались при знаки васкулопатии при отсутствии восп алительной ин ф ильтрации
в биоптатах ткан ей . И м м уногистохи м ически м методом в
биптатах ткан ей как в стенке сосудов, так и д ерм о-эп и д ермальном сты ке бы ли обнаруж ены IgG, IgM, IgA и СЗф ракц и я ком плем ента.
О тлож ения им мунны х ком плексов в дерм о-эпидерм альном стыке кож и, известное как Lupus band test (LBT), явл я­
ется диагностическим тестом для СК В . LBT отмечался в на­
шем исследовании и при П А Ф С (больны е 2,3), что под­
тверж дает аутоиммунную природу этого синдрома. Этот ф е ­
номен, вероятно, носит более универсальны й характер, чем
считали до сих пор. О трицательны й LBT у двух больных
СКВ мож но объяснить влиянием гормональной терапии, а
также м иним альной активностью СКВ. Выявление аКЛ в
элюатах в различной ком бин ац ии с иммуноглобулинами и
имм унны ми ком плексами в сосудах биоптатов и позитивны й
LBT при первичном и вторичном варианте А Ф С, а такж е ги­
стологические признаки как васкулита, так и васкулопатии,
свидетельствуют об им м уноком плексном характере сосудис­
тых изменений при А Ф С и о возмож ной роли аКЛ в пато­
логическом процессе. Следует отметить, что изучение би о­
птатов кожи и м ы ш цы больны х С К В с/б ез А Ф С и ПА Ф С на
наличие в них депозитов различны х классов иммуноглобу­
л инов, ком понентов ком плем ента, аКЛ и IgG -aH T H -p2-rni
было предпринято в определенной степени по аналогии с
С КВ, при которой много лет обсуждается значим ость субэпидермальны х отлож ений иммуноглобулинов. Еще более
важной представляется расш иф ровка антительного состава
иммунных комплексов. Т ак наприм ер, доказано, что д еп ози ­
ты иммунных ком плексов не только в дерм о-эпидерм альном
стыке [18], но и в других тканевы х структурах, включая по­
чечные клубочки и капилляры , чащ е всего содержат имму­
ноглобулины и ком поненты ком плем ента [19,20]. Сочетание
иммуноглобулинов нескольких классов в дерм о-эпи дерм аль­
ном сты ке кожи встречается чащ е у больных активной СКВ
и в случаях вы раж енности органны х поражений. В экстрак­
тах почечной ткани больны х С К В обнаруж иваю тся такж е
антитела к одно- и двуспиральной Д Н К и к нуклеопротеину
G [20].И звестно и то, что тканевое повреждение при волчаночном нефрите является следствием имм уноком плексного
воспаления.
Заклю чая, м ож но предполож ить, что в генезе тканевого
повреж дения при как С К В с /б е з А Ф С , так и ПА Ф С уча-
Таблица 1
to
ON
КЛИН И КО -И М М УН ОЛО ГИ ЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА БОЛЬНЫ Х ВО ВРЕМ Я ВЗЯТИЯ БИ О П С И И КОЖИ И М Ы Ш Ц Ы .
1
Ф , возраст, (годы)
пол
M, 22,Ж
Д иагноз
СКВ+АФС
2
Г, 23, М
ПАФС
3
Л, 2 8 ,Ж
ПАФС
Клинические признаки
СКВ
Полисерозит,
лихорадка, «бабочка»
АФ Л-ассоциированные
признаки
СЛ, с-м Рейно, тромбоз
артерии стопы
Рецидив.тромбозы
нижней полой вены,
ТЭЛА, трикуспид.
порок, легочная
гипертензия, дигит.
некрозы
ТФ, язвы ног, СЛ,
пнмк
Ф, 46,Ж
СКВ+АФС
5
Р, 20, Ж
СКВ
6
Р, 49,Ж
СКВ+АФС
7
В, 45,Ж
СКВ+А Ф С
ТФ, СЛ, с-м Рейно
ТФ, СЛ, с-м Рейно
Рецидив.Н М К , ПНМ К,
СЛ, ТФ, язвы ног, митр,
порок, энцефалопатия с
когнитивны м и
наруш ениями
IgG-aKJI-86, IgM аКЛ - 46, ВА+
РФ 1/40, АНФ
1/64H, ЛПРВ, ВА+,
IgG-aKH-56
АНФ 1/512, а-ДНК
>100, IgG -аКЛ - 120
Д епозиты IgG, IgM, Сз в
стенке сосудов, LBT+
Депозиты IgG в стенке
сосудов
АНФ 1/128, IgGаКЛ - 200, IgM -аКЛ
- 98, ВА+, ЛПРВ
АНФ 1/512, а-ДНК70, IgG-aKJI 198,
ВА+
Депозиты IgG, Сз в
стенке сосудов
Депозиты IgG, Сз в
стенке сосудов, LBT+
Депозиты IgG, IgM, Сз в
стенке сосудов, LBT+
Депозиты Сз. IgM в
стенке сосудов, LBT+
№
Примечание: в клинические признаки внесены проявления, имевшиеся на момент проведения биопсии; В иммунологических нарушениях - те показатели, которые были повышенными.
Аббревеатура: CJ1- сетчатое ливедо, ТФ- тромбофлебит глубоких вен ног, НМК - нарушение мозгового кровообращения, ПНМК - преходящее нарушение мозгового кровообращения, ЛПРВ ложноположительная реакция Вассермана
, ТЦП - тромбоцитопения, LBT - линейные депозиты иммунных комплексов в дермо-эпидермальном стыке биоптата кожи.
РЕВМАТОЛОГИЯ
Артриты, полисерозит,
капилляриты, мочевой
синдром
Л ихорадка, эритема,
капилляриты, артриты,
полисерозит, .
лейкопения, анемия,
ТЦ П
Артриты, полисерозит,
капилляриты, анемия,
лейкопения
Артриты, нефрит,
полисерозит, анемия,
ТЦП
Иммуногистохимия
биоптатов
Депозиты IgG, IgM в
стенке сосудов, LBT+
НА У ЧН О-ПРАКТИЧЕСКА Я
4
И ммунологические
нарушения
АНФ 1/32, а-ДНК53, IgG-aKJI-78,
ВА+
РФ 1/40, IgG аКЛ43, BA+
4, 2004
СКВ+АФС
2
ПАФС
3
4
ПАФС
СКВ+АФС
5
СКВ
Белок в мг по методу
О.Н. Lowry ОПб50шп
Э лю ат-1* Элюат-2
К ожа +
мыш ца
Кожа +
мыш ца
Кожа
Кожа +
мыш ца
К ожа +
мыш ца
Кожа
6
СКВ+АФС
7
СКВ+АФС К ожа +
мыш ца
* - средняя величина из 3-х
W estern-blotting в элю ате 1
Антитела в элюате в ед.ОП
Ig G - аКЛ
Э л ю ат-Г
Элюат-2*
0,043
0,125
а-р2-ГП1
(-)
И ммуногло­
булины
+G
(-)
Комплемент
Сз и С4
Следы
(-)
(-)
(-)
(-)
АНЦА
а-'р2-ГП1
(-)
0,55
0,055
0,44
0,01
0,048
0,019
(-)
0,35
0,75
0,01
0,095
0,083
0,163
0,019
0,024
(-)
(-)
(-)
(-)
(-)
+G
(-)
(-)
Следы
(-)
4
0,33
0,017
0,17
0,035
(-)
(-)
(-)
(-)
(-)
0,505
0,515
0,075
0,07
0,418
0,486
0,034
0,026
(-)
(-)
(-)
(-)
(- )
+G
+G
Следы
Следы
измерений, ОП - оптическая плотность
* - средняя величина из 3-х измерений, ОП - оптическая плотность
(-)
№ 4, 2 0 0 4
1
Ткань
РЕВМАТОЛОГИЯ
Д иагноз
НА УЧН О-ПРАКТИЧЕСКА Я
Таблица 2
И М М УН О Л О ГИ ЧЕСК И Е ПОКАЗАТЕЛИ ЭЛЮАТОВ И З БИОПТАТОВ КОЖ И И М Ы Ш Ц Ы
28
НАУЧНО-ПРАКТИЧЕСКАЯ РЕВМАТОЛОГИЯ № 4, 2004
ствуют не только ранее известны е анти тела, но и аФ Л . В то
же время при П А Ф С вы явление и м м ун н ы х’ ком плексов и
ф ракции ком племента подтверж дает им м унн ы е м еханизм ы
повреж дения тканей. О б наруж ение аКЛ в элю атах из б и о ­
птатов тканей при А Ф С является важ ны м этапом изучения
местных м еханизм ов п овреж дени я, ин дуцированного им ­
мунны м и ком п л ексам и , содерж ащ им и аКЛ. П редставляет­
ся, что дал ьн ей ш и е исследования би оп си й н ого материала
различны х органов послуж ат осн ован и ем для вы работки
усоверш енствованны х ди агн ости ч ески х и терапевтических
методик при А Ф С.
ЛИТЕРАТУРА
1.
Hughes G .R.V . T hrom bosis, abortion, cerebral disease and
the "lupus anticoagulant". Brit. M ed. J., 1983, 287, 10881089
2. Hughes G .R .V ., H arris E .N ., Charavi A.E. T he a nticardi­
olipin syndrom e. J.R eum atol., 1986, 13, 486-489
3. Asherson R.A., R ham ashta M .A., O rdi-R os J. et al. The
"primary" antiphosphilipid syndrom e: m ajor clinical and
serological features. M edicine (B altim ire), 1989, 68, 366374
4. Alarcon-Segovia D., Deleze М ., Oria C.V., SanchezG u errero J. et al. A n tip h o sp h o lip id an tib o d ies and
antiphospholipid syndrom e in system ic lupus tryrthem atosus. M edicine, 1989, 68, 353-365
5. Н асонов Е.Л. А н ти ф о сф о л и п и д н ы й синдром : к л и н и ч е­
ская и им м унологическая характеристика. К лин.м ед.,
1989, 1, 5-13
6. Wilson W.A., G haravi А .Е., Koike Т., Lockshin M .D ., et
al. International consensus statem ent on prelim inary classi­
fication
c riteria
for
defin ite
a n tip h o sp h o lip id
syndrom e:report o f an intern atio n al w orkshop. Arthr.
Rheum ., 1999, 42, 1309-1311
7. Н асонов Е.Л. П атогенетические механизм ы ан ти ф о с­
ф олип идного синдром а. В книге "А нти ф осф оли пид­
ный синдром" М .,Л иттера, 2004, 73-109
8. Н асонов Е.Л., Б аранов А.А., Ш и лки н а Н .П ., А лекберова З.С. П атология сосудов при ан ти ф осф оли п и д н ом
синдром е (кл и н и ка, д и агн ости к а, л ечен ие). М оскваЯрославль. 1995, 161
9. Н асонов Е.Л., А лекберова З.С ., А лександрова Л .З., и
соавт. А нтитела к кардиолипи ну: метод определени я и
клини ческое зн ачени е. К лин.м ед ., 1987, 11, 100-104
10. А лекберова З .С ., Р еш етн як Т .М ., Раден ска-Л оп овок
С.Г., и соавт. Васкулопатия у больны х систем н ой крас­
ной волчанкой с ан ти ф о сф о л и п и д н ы м синдром ом .
Тер.архив, 1995, 5, 41-44
11. Afek A., Shoenfeld Y., M anor R. et al. Increased e n d o th e ­
lial cell expression o f alpha3betal integrin in cardiac valvulopathy in the prim ary (H ughes) and second aryantiphospholipid syndrom e. Lupus, 1999, 8, 502-507
12. Cervera R. R ecent advances in antiphospholipid antibodyrelated valvulopathies. J.A utoim m un., 2000, 15, 123-125
13. Amital H., Langevitz P., Levy Y., Afek A. et al. Valvular
deposition o f antiphospholipid antibodies in the antiphos­
pholipid syndrom e: A clue to the origin o f the disease.
C lin.E xp.R heum atol., 1999, 17, 99-102
14. Z iporen L., G olberg Arod M. et al. Libm an-Sacks e n d o ­
carditis in the antiphospholipid syndrom e: im m unopathologic findings inderform ed heart valve. Lupus, 1996, 5, 196205
15. Feltkam p T .E .W ., Boode J.H .: Elution o f autoantibodies
from biopsy tissue. J. Clin. Pathol., 1970, 23, 629-631
16. Lowry O .H ., Rosebrough N .J., Farr A.L., Randall R.J.
Protein m easurem ent with Folin phenol reagent. J. Biol.
C hem ., 1951, 193, 265
17. Zabek J., Radenska S., R eshetniak T. et al. The presence o f
anti-cardiolipin antibodies in eluates from skin and skinm uscle bioptates in the group o f SLE, prim ary and second­
ary antiphospholipid syndrom e. R eum atologia (Pol)., 2000,
38, 8-10
18. Dahl M.V. Usefulness o f direct im m unofluorescence in
patients with lupus erythem atosus. A rch.D erm atol., 1983,
119, 1010-1017
19. Koffer D., Sehur P .H ., Kunkel H .G . Im m unological stud­
ies concerning the nephritis o f SLE. J.Exp. Med. ,1967,
126, 607
20. Davis B.M ., G illiam J.N . Prognostic significance o f subepiderm al im m une deposits in uninvolved skin o f patients with
system ic lupus erythem atosus: 10-year longitudinal study.
J.Invest.D erm atol., 1984, 83, 242-247
П оступила 20.08.04
Abstract
Z .S . Alekberova, Y. Zabek, T .M . Reshetnyak, B. Voycehovska, S.G . Radenska-Lopovok, V.A. Nassonova
Anticardiolipine antibodies in skin and muscle eluates of pts with primary and secondary antiphospholipid
syndrome.
Objective. To detect anticardiolipin antibodies (АСА), anti-(32-G Pl antibodies, C3 and C4 com plem ent
com ponents in im m une com plexes including those containing АСА in skin and m uscle eluates o f pts
with system ic lupus erythem atosus (SLE) and antiphospholipid syndrom e (APS).
Material and methods . In 7 pts (6 female and 1 m ale, 2 with prim ary APS, 3 with SL E +A PS and 2
with SLE) skin and m uscle biopsies were taken. 6 from 7 pts had throm botic com plications. Eluates were
obtained from frozen skin and skeletal m uscle biopsies (size was 1,5x0,5 and 0,5x0,5 respectively).
Because o f small size o f biopsies it was not possible to use traditional m ethods o f tissue pounding such
as sharp hom ogenization o f tissues in hom ogenizers with pulverizing and subsequent process o f freez­
ing-unfreezing which lead to large protein loss and m ake im possible serological tissue analysis.
A pplication o f acid eluates m ethod by T.E.W . Feltkam p and J.H . Boode o f own m odification allowed
to m inim ize tissue protein loss and perform serological tissue analysis.
Results. Serum o f all 7 pts contained antiphospholipid antibodies - IgG -АСА in 3, com bination o f IgG and IgM -АСА in 5. In 5 from 7 eluates IgG АСА exceeded 0,109 OO units were revealed. T hey c o n ­
tained СЗ, C4 and different protein products mostly im m unoglobulines. Anti-(32GP1 antiboddies were
absent.
Conclusion. F or the first tim e presence o f АСА in tissues o f APS pts was showed w hich m ay be o f par­
ticular interest in studying m orphogenesis o f local tissue disturbances with participation o f im m une co m ­
plexes containing АСА.
K e y w o r d s : antiphospholipid syndrome, antiphospholipid antibodies, systemic lupus erythematosus, skin
and muscles biopsies eluates