BBL Taxo Differentiation Discs for Haemophilus Species

 BBL Taxo Differentiation Discs for Haemophilus Species
(Диски BBL Taxo для дифференцирования видов Haemophilus)
BBL Taxo Differentiation Discs V,
BBL Taxo Differentiation Discs X,
BBL Taxo Differentiation Discs VX

L000156
2010/06
Русский
НАЗНАЧЕНИЕ
BBL Taxo Differentiation Discs (диски BBL Taxo для дифференцирования) используются для предположительного
дифференцирования видов Haemophilus на основании их потребности в X- или V-факторе (или обоих факторах).
КРАТКИЙ ОБЗОР И ОПИСАНИЕ
Виды Haemophilus являются частью нормальной флоры дыхательных путей человека и многих видов животных.
Haemophilus influenzae может быть условно-патогенным вторично внедряющимся видом, как правило, в результате
вирусной инфекции. Этот микроорганизм может вызывать ряд заболеваний, начиная от хронических респираторных
инфекций и заканчивая менингитом. Haemophilus parainfluenzae редко вовлекается в патологические процессы. В культуре
эти два микроорганизма схожи морфологически и по типу колоний, что затрудняет их дифференцирование. Для
дифференцирования этих видов используются их различные требования к факторам роста.
1
2
Дэвис (Davis) , а также Тотта (Thjotta) и Авери (Avery) определили, что типовому виду H. influenzae требуются два фактора
роста, один из них — фактор крови, названный X-фактором, и другой фактор, названный V-фактором. Было установлено,
что X-фактор представляет собой протопорфириновый комплекс железа. Источником этого фактора служит гемин. Львов
3
(Lwoff) и Львов (Lwoff)
приготовили V-фактор из пекарских дрожжей. V-фактор представляет собой
никотинадениндинуклеотид (NAD). Эти строгие требования к условиям роста позволяют дифференцировать и
идентифицировать виды.
Шоколадный агар, агар с конской кровью и агар с кровью кроликов содержат оба фактора роста и поддерживают рост
большинства видов Haemophilus. Источником X-фактора служит гемоглобин BBL, а источниками V-фактора служат добавки
B, C или VX. Обогащающая добавка Файлдса BBL Fildes Enrichment, используемая в питательной среде в концентрации
5 %, также служит источником X- и V-фактора. Сателлитный метод с использованием Staphylococcus также может
применяться для выделения Haemophilus. S. aureus служит источником V-фактора, и при посеве штрихами на агаре с
овечьей кровью он стимулирует рост Haemophilus вокруг штрихов Staphylococcus. Этот метод также используется для
идентификации и дифференцирования видов.
4
Паркер (Parker) и Хеприх (Hoeprich) приготовили диски, содержащие X- и V-факторы, и использовали их для
дифференцирования H. influenzae, требующего обоих факторов, от H. parainfluenzae, для роста которого необходим только
V-фактор. Посев культур выполнялся на агаре из сердечного экстракта, триптическом соевом агаре или питательном агаре.
5
Рассел (Russell) использовал диски, пропитанные растворами X- и V-фактора, для идентификации микроорганизмов,
принадлежащих к виду Haemophilus, на основании их потребности в этих факторах, и подтвердил пригодность данной
методики.
ПРИНЦИПЫ МЕТОДИКИ
Требования к факторам роста (X и V) различаются у разных видов Haemophilus. Это различие позволяет выделять и
дифференцировать различные виды. Для определения вида микроорганизма выполняется оценка наличия или отсутствия
роста вокруг и (или) между дисками, пропитанными растворами факторов V, X и VX.
РЕАГЕНТЫ
Диски BBL Taxo Differentiation Discs V, X и VX (диски BBL Taxo для дифференцирования V, X и VX) представляют собой
бумажные диски, пропитанные растворами указанных ниже веществ и имеющие соответствующую маркировку.
Предупреждения и меры предосторожности
Для диагностического использования in vitro.
Точно выполняйте установленные лабораторные методики
при работе с инфицированными материалами и их
утилизации.
Условия хранения. Храните диски BBL Taxo Differentiation
Discs V, X и VX при температуре 2 – 8 °C.
Код диска
Содержимое диска
Размер диска
V
NAD
6 мм
X
Гемин
6 мм
VX
NAD и гемин
6 мм
Указанный срок хранения действителен только для продукта, хранящегося в контейнере при соблюдении условий хранения.
Разложение продукта. Не используйте продукт, если он не соответствует спецификациям в отношении подлинности и
эффективности.
СБОР И ПРИГОТОВЛЕНИЕ ОБРАЗЦОВ
1. Образцы для выделения видов Haemophilus можно брать из горла, носоглотки, конъюнктивы, крови или спинномозговой
жидкости.
2. Первичные образцы для дифференцирования следует готовить посевом на шоколадном агаре. В качестве
альтернативы можно использовать кровяной агар с посевом стафилококков перекрестными штрихами.
3. Культуры, полученные на обогащенной среде, следует разбавить в соотношении 1:100 в триптическом соевом бульоне
для предотвращения переноса факторов роста из среды.
1
4. Равномерно распределите микроорганизмы по всей поверхности агара из сердечного экстракта или триптического
соевого агара. Для дифференцирования видов Haemophilus следует использовать только чистые культуры.
МЕТОДИКА
Поставляемые материалы. BBL Taxo Differentiation Discs V, X или VX.
Необходимые, но не поставляемые материалы. Пинцет, CO2 инкубатор (35 ± 2 °С), тампоны, бактериологическая петля,
горелка Бунзена или печь для сжигания, микроорганизмы для контроля качества, триптический соевый агар или агар из
сердечного экстракта, триптический соевый бульон.
Методика тестирования
1. Соблюдая правила асептической техники, поместите требуемый диск на агар с посевом, используя один из следующих
способов. Аккуратно прижмите диск.
Способ с двумя дисками. Поместите диски BBL Taxo Differentiation Discs V и X на расстоянии около 3 – 5 мм друг от
друга (рис. 1).
Способ с тремя дисками. Поместите диски BBL Taxo Differentiation Discs V, X и VX в форме равностороннего
треугольника с расстоянием между дисками не менее 30 – 35 мм (рис. 2).
Рис. 1=
Рис. 2=
=
V
V
X
X
VX
2. Инкубируйте при 35 ± 2 °C в атмосфере, содержащей 5 – 10 % CO2, в течение 18 – 24 ч.
3. Изучите картину роста вокруг дисков и (или) между ними.
Контроль качества
Спецификации подлинности
Диски BBL Taxo Differentiation Discs V — круглые бумажные диски белого цвета диаметром 6 мм с маркировкой V с обеих
сторон.
Диски BBL Taxo Differentiation Discs X — круглые бумажные диски коричневого цвета диаметром 6 мм с маркировкой X с
обеих сторон.
Диски BBL Taxo Differentiation Discs VX — круглые бумажные диски светло-коричневого цвета диаметром 6 мм с
маркировкой VX с обеих сторон.
Реакция культуры: диски V, X и VX. Выполните посев в
Стимуляция роста
Микроорганизм
ATCC
чашках с агаром из сердечного экстракта BBL
V
X
VX
разбавленной культуры тестовых микроорганизмов,
Haemophilus
influenzae
примерно соответствующей стандарту мутности
11116
–
–
+
биогруппы aegyptius
Макфарланда 0,5. Поместите диски BBL Taxo
Differentiation Discs V, BBL Taxo Differentiation Discs X и
Haemophilus parahaemolyticus
10014
+
–
+
BBL Taxo Differentiation Discs VX на поверхность чашек,
Haemophilus parainfluenzae
7901
+
–
+
как описано в разделе «Методика тестирования».
Инкубируйте чашки в атмосфере CO2 при температуре
35 ± 2 °C в течение 18 – 24 ч.
Следуйте требованиям контроля качества в соответствии с применимым местным, региональным и (или) федеральным
законодательством, требованиями аккредитации и методиками контроля качества, принятыми в лаборатории.
Пользователи должны сверяться с соответствующими руководствами Национального комитета по клиническим
лабораторным стандартам США (NCCLS) и положениями Закона о совершенствовании работы клинических лабораторий
(CLIA).
РЕЗУЛЬТАТЫ
Способ с двумя дисками. Рост только вокруг одного диска указывает на наличие потребности только в соответствующем
факторе. Рост между двумя дисками указывает на наличие потребности в обоих факторах V и X.
Способ с тремя дисками. Рост вокруг дисков V и VX или вокруг дисков X и VX указывает на наличие потребности в
факторе роста V или X (соответственно). Рост только вокруг диска VX указывает на наличие потребности в обоих факторах.
Определите вид Haemophilus в соответствии с требованиями к факторам роста, как указано ниже.
Результаты, отличные от указанных в таблице, могут служить признаком одной из следующих ситуаций (или обеих сразу).
1. Неправильное разбавление культур, взятых из обогащенной среды. Слишком сильно разбавленный посев может
приводить к отсутствию роста. Недостаточно разбавленный инокулят может содержать достаточное количество
факторов роста для влияния на рост по всей чашке или в областях вокруг одного или нескольких несоответствующих
дисков в чашке.
2
2. Смешанные культуры могут приводить к росту вокруг дисков.
Требования для роста
X
V
–
–
+
–
+
+
+
+
+
+
–
+
–
+
–
+
–
+
Вид Haemophilus
Haemophilus aphrophilus
Haemophilus
Haemophilus
Haemophilus
Haemophilus
Haemophilus
Haemophilus
ducreyi
haemolyticus
influenzae
influenzae биогруппы aegyptius
parahaemolyticus
parainfluenzae
Haemophilus paraphrophilus
Haemophilus segnis
Диски BBL Taxo Differentiation Discs позволяют выполнять предположительную идентификацию только видов Haemophilus.
Для подтверждения результатов предположительной идентификации может потребоваться определение гемолиза и других
характеристик. Для идентификации вида также может потребоваться биохимическое и серологическое тестирование.
Дополнительные сведения по дальнейшей идентификации видов Haemophilus приведены в соответствующих справочных
6,7
материалах.
ОГРАНИЧЕНИЯ ПРИМЕНЕНИЯ МЕТОДИКИ
Дифференцирование видов Haemophilus при помощи описанных выше методик является предположительным в части
идентификации требований к факторам роста. Тем не менее между видами существуют сходства в отношении этих
требований. Для полной идентификации необходимо выполнять дополнительные биохимические и серологические тесты.
ЭФФЕКТИВНОСТЬ
В исследовании, проведенном Паркером (Parker) и Хеприхом (Hoeprich), 255 мазков из носоглотки и 1317 мазков из горла
исследовали на присутствие видов, подобных Haemophilus, используя диски с X- и V-факторами. В мазках из носоглотки
было идентифицировано 59 H. influenzae (рост только между дисками X и V) и 12 H. parainfluenzae (рост только вокруг диска V).
В 1317 м азках из горл а было ид енти фицир ов ан о 129 H. influenz ae, а 302 м азка были идентифицир ов аны
4
как H. parainfluenzae.
НАЛИЧИЕ
№ по каталогу
231727
231728
231729
231730
231731
231732
Описание
BBL Taxo Differentiation Discs V, картридж с 50 дисками.
BBL Taxo Differentiation Discs V, 10 x 50 дисков.
BBL Taxo Differentiation Discs X, картридж с 50 дисками.
BBL Taxo Differentiation Discs X, 10 x 50 дисков.
BBL Taxo Differentiation Discs VX, картридж с 50 дисками.
BBL Taxo Differentiation Discs VX, 10 x 50 дисков.
СПРАВОЧНЫЕ МАТЕРИАЛЫ
1. Davis, J.D. 1917. Food accessory factors (vitamins) in bacterial culture with especial reference to hemophilic bacilli.
J. Infect. Dis. 21: 392-403.
2. Thjotta, T., and O.T. Avery. 1921. Studies on bacterial nutrition. II. Growth accessory substances in the cultivation of hemophilic
bacilli. J. Exper. Med. 34: 97-114.
3. Lwoff, A., and M. Lwoff. 1937. Studies on codehydrogenases. I. Nature of growth factor “V”. Proc. Roy. Soc. London. Ser. B.
122: 352-359.
4. Parker, R.H., and P.D. Hoeprich. 1962. Disk method for rapid identification of Haemophilus species. Am. J. Clin. Pathol. 37: 319327.
5. Russell, J.P. 1965. The identification of gram-negative pleomorphic bacilli. Am. J. Clin. Pathol. 44: 88-93.
6. Campos, J.M. 1995. Haemophilus, p. 556-566. In P.R. Murray, E.J. Baron, M. A. Pfaller, F.C. Tenover, and R.H. Yolken (ed.),
Manual of clinical microbiology, 6th ed. American Society for Microbiology, Washington, D.C.
7. Forbes, B.A., D.F. Sahm, and A.S. Weissfeld. 1998. Bailey & Scott’s diagnostic microbiology, 10th ed. Mosby, Inc.,
St. Louis.
3
4