краткая инструкция - ДНК

117587, Москва, Варшавское ш., д.125ж, к.6
Тел./факс +7 (495) 980-45-55
Е-mail: help@dna-technology.ru
www.dna-technology.ru
Комплект реагентов для проведения
ПЦР-амплификации ДНК
возбудителя туляремии (Francisella tularensis)
Формат «Flash»
Состав набора (на 50 определений):





Реактив
Смесь для амплификации, запечатанная парафином
Раствор Taq-полимеразы
ПЦР-буфер
Минеральное масло
Положительный контрольный образец «К+»
Количество
50 пробирок
1 пробирка
1 пробирка
1 пробирка
1 пробирка
20 мкл
500 мкл
200 мкл
1,0 мл
75 мкл
Инструкция по применению
1.
Подготовка и проведение полимеразной цепной реакции
1.1.
Промаркируйте пробирки с запечатанной парафином смесью для амплификации (с учётом пробирок для
отрицательного контрольного образца – «K–», положительного контрольного образца – «K+»). Также
необходимо промаркировать дополнительно две пробирки («ФОН») для контроля фона флуоресценции.
1.2.
Добавьте в каждую пробирку (кроме пробирок «ФОН»), не повреждая слой парафина, по 10 мкл
тщательно перемешанного раствора Taq-полимеразы. В пробирки, маркированные «ФОН», добавьте по
10 мкл ПЦР-буфера.
1.3.
Добавьте в каждую пробирку по 1 капле минерального масла.
1.4.
Добавьте в каждую пробирку, не повреждая слой парафина, по 5,0 мкл препарата ДНК (кроме пробирок
«K–», «K+», «ФОН»). В пробирки, маркированные «K–» и «ФОН», внесите 5,0 мкл отрицательного
контрольного образца, прошедшего пробоподготовку, в пробирку, маркированную «K+», внесите
5,0 мкл положительного контрольного образца.
1.5.
Центрифугируйте пробирки при 1000 об/мин в течение 3–5 сек.
1.6.
Установите все пробирки в амплификатор и проведите ПЦР в режиме, приведенном в таблицах 1 и 2, с
учётом объёма реакционной смеси 35 мкл. При использовании амплификатора «Терцик» необходимо
выбрать алгоритм регулирования «Точный».
Таблица 1
Режим амплификации
№ п.п.
1
Для амплификаторов с активным
регулированием
Время
Температура, °С
мин
сек
94,0
1
00
Количество
циклов
1
2
94,0
67,0
0
0
5
15
5
3
94,0
67,0
0
0
1
15
40
4
10,0
…
…
Хранение
Таблица 2
Режим амплификации
№ п.п.
1
Для амплификаторов без активного
регулирования
Время
Температура, °С
мин
сек
94,0
1
00
Количество
циклов
1
2
94,0
67,0
0
0
50
50
45
3
10,0
…
…
Хранение
2.
Регистрация и учёт результатов ПЦР
Детекция и учёт результатов осуществляются с помощью ПЦР-детектора «Джин» согласно инструкции к
прибору. Пороговые значения для специфического продукта составляют 1,75-2,10; для внутреннего контроля2,50.
Условия хранения и эксплуатации
Комплект реагентов для ПЦР-амплификации ДНК следует хранить в темном месте при температуре 2-8 С
в течение всего срока годности.
Срок годности комплекта – 9 месяцев с даты изготовления.
По вопросам, касающимся качества комплекта реагентов для проведения ПЦР-амплификации ДНК возбудителя
туляремии (Francisella tularensis), следует обращаться к официальному представителю производителя по адресу:
ООО «ДНК-Технология», 117587, Москва, Варшавское шоссе, д.125ж, к.6, Тел./факс +7 (495) 980-45-55, Е-mail:
help@dna-technology.ru, www.dna-technology.ru
Анкета для осуществления обратной связи находится на сайте компании «ДНК-Технология»:
http://www.dna-technology.ru/support/
Номер: 217
13.08.12
117587, Москва, Варшавское ш., д.125ж, к.6
Тел./факс +7 (495) 980-45-55
Е-mail: help@dna-technology.ru
www.dna-technology.ru
Комплект реагентов для проведения
ПЦР-амплификации ДНК
возбудителя туляремии (Francisella tularensis)
Формат «Flash»
Состав набора (на 50 определений):





Реактив
Смесь для амплификации, запечатанная парафином
Раствор Taq-полимеразы
ПЦР-буфер
Минеральное масло
Положительный контрольный образец «К+»
Количество
50 пробирок
1 пробирка
1 пробирка
1 пробирка
1 пробирка
20 мкл
500 мкл
200 мкл
1,0 мл
75 мкл
Инструкция по применению
1.
Подготовка и проведение полимеразной цепной реакции
1.1.
Промаркируйте пробирки с запечатанной парафином смесью для амплификации (с учётом пробирок для
отрицательного контрольного образца – «K–», положительного контрольного образца – «K+»). Также
необходимо промаркировать дополнительно две пробирки («ФОН») для контроля фона флуоресценции.
1.2.
Добавьте в каждую пробирку (кроме пробирок «ФОН»), не повреждая слой парафина, по 10 мкл
тщательно перемешанного раствора Taq-полимеразы. В пробирки, маркированные «ФОН», добавьте по
10 мкл ПЦР-буфера.
1.3.
Добавьте в каждую пробирку по 1 капле минерального масла.
1.4.
Добавьте в каждую пробирку, не повреждая слой парафина, по 5,0 мкл препарата ДНК (кроме пробирок
«K–», «K+», «ФОН»). В пробирки, маркированные «K–» и «ФОН», внесите 5,0 мкл отрицательного
контрольного образца, прошедшего пробоподготовку, в пробирку, маркированную «K+», внесите
5,0 мкл положительного контрольного образца.
1.5.
Центрифугируйте пробирки при 1000 об/мин в течение 3–5 сек.
1.6.
Установите все пробирки в амплификатор и проведите ПЦР в режиме, приведенном в таблицах 1 и 2, с
учётом объёма реакционной смеси 35 мкл. При использовании амплификатора «Терцик» необходимо
выбрать алгоритм регулирования «Точный».
Таблица 1
Режим амплификации
№ п.п.
1
Для амплификаторов с активным
регулированием
Время
Температура, °С
мин
сек
94,0
1
00
Количество
циклов
1
2
94,0
67,0
0
0
5
15
5
3
94,0
67,0
0
0
1
15
40
4
10,0
…
…
Хранение
Таблица 2
Режим амплификации
№ п.п.
1
Для амплификаторов без активного
регулирования
Время
Температура, °С
мин
сек
94,0
1
00
Количество
циклов
1
2
94,0
67,0
0
0
50
50
45
3
10,0
…
…
Хранение
2.
Регистрация и учёт результатов ПЦР
Детекция и учёт результатов осуществляются с помощью ПЦР-детектора «Джин» согласно инструкции к
прибору. Пороговые значения для специфического продукта составляют 1,75-2,10; для внутреннего контроля2,50.
Условия хранения и эксплуатации
Комплект реагентов для ПЦР-амплификации ДНК следует хранить в темном месте при температуре 2-8 С
в течение всего срока годности.
Срок годности комплекта – 9 месяцев с даты изготовления.
По вопросам, касающимся качества комплекта реагентов для проведения ПЦР-амплификации ДНК возбудителя
туляремии (Francisella tularensis), следует обращаться к официальному представителю производителя по адресу:
ООО «ДНК-Технология», 117587, Москва, Варшавское шоссе, д.125ж, к.6, Тел./факс +7 (495) 980-45-55, Е-mail:
help@dna-technology.ru, www.dna-technology.ru
Анкета для осуществления обратной связи находится на сайте компании «ДНК-Технология»:
http://www.dna-technology.ru/support/
Номер: 217
13.08.12