IMTEC- Анти-RA33 Антитела

IMTEC-RA33-Antibodies, HUMAN GmbH
1
_____________________________________________________________________________________________________
IMTEC- Анти-RA33 Антитела
(IMTEC- RA33-Antibodies)
Иммуноферментный тест для количественного определения аутоантител класса IgG к антигену RA33 в
сыворотке крови человека
REF Номер по каталогу: ITC60015
Набор рассчитан на 96 определений
Перед ведением анализа внимательно прочтите инструкцию.
Соблюдайте меры предосторожности во время проведения анализа:
• Не используйте реагенты после истечения срока годности.
• DIL DВ05 – буфер для разведения образцов, WASH 20x WB03 – промывочный буфер, SUB TMB
ELISA – субстратный реагент и STOP STOP ELISA – стоп-реагент могут быть взаимозаменяемы
между лотами и наборами, которые используют реагенты с такой же маркировкой.
• Все другие реагенты специфичны для каждого конкретного набора и не могут быть заменены на
реагенты из другого лота и набора.
• Храните реагенты при температуре 2-8 °С.
ВВЕДЕНИЕ
Набор IMTEC- RA33-Antibodies основан на методе твердофазного иммуноферментного анализа (ИФА) и
предназначен для количественного определения аутоантител класса к антигену RA33 (hnRNP A2) в
сыворотке крови человека. Данный набор применяется только для диагностики in vitro, а полученные
результаты должны использоваться как вспомогательные при постановке диагноза ревматоидного артрита
на ранней стадии.
Изолированное появление антител направленных против RA33 рассматривается как маркер ревматоидного
артрита (РА), но их диагностическая ценность зависит от обследуемой популяции. Эти антитела возникают
независимо от ревматоидного фактора и их частая встречаемость при РА при отсутствии РФ
(приблизительно в 45 %) играет важную роль при диагностике ранней стадии РА.
Антитела к RA33 возникают у 70 % пациентов, страдающих СКВ с эрозивным артритом (ЭА) и поэтому
могут служить предсказательным маркером развития ЭА при СКВ.
Показания:
• Подозрение на РА.
• Аутоантитела при диагностике СКВ.
• У пациентов, положительных по ANA-антителам, страдающих артритом, после того как были исключены
другие ANA специфичные заболевания.
Определение антител к RA33 имеет большую диагностическую ценность в случае РФ-отрицательных
сывороток. Набор фирмы IMTEC является первым коммерчески доступным ИФА набором, в котором
использованы рекомбинатные RA33.
ПРИНЦИП МЕТОДА
В основе теста лежит связывание иммобилизованного рекомбинантного антигена RA33 (на твердой фазе
стрипов планшета) с антителами к RA33 сыворотки пациентов. Связавшиеся антитела выявляют с
помощью меченых пероксидазой антивидовых антител к IgG человека. После внесения субстратного
раствора в лунках планшета развивается окрашивание, интенсивность которого пропорциональна
концентрации и/или авидности определяемых антител. В результате добавления стоп-реагента происходит
изменение цвета раствора с синего на желтый.
МАТЕРИАЛЫ, РЕАГЕНТЫ И ИХ СОСТАВ
MTP
CAL
Стрипы 8-луночные (в рамке-держателе)
Стрипы, разделяемые на отдельные лунки, с иммобилизованным
антигеном RA33, готовы к использованию
Калибраторы 1-5 IgG (белая крышка)
На основе человеческой сыворотки, степень окрашивания зависит от
концентрации, готовые к использованию
1
12,5
Ед/мл
2
25
Ед/мл
3
50
Ед/мл
4
100
Ед/мл
5
200
Ед/мл
12 шт.
5×1,5 мл
_____________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
IMTEC-RA33-Antibodies, HUMAN GmbH
2
_____________________________________________________________________________________________________
NC
PC
WASH 20×
WB03
DIL
DB05
CON
SUB
ТМВ ELISA
STOP
STOP ELISA
Отрицательная контрольная сыворотка (зеленая крышка)
Сыворотка крови человека, готовая к использованию
Положительная контрольная сыворотка (красная крышка)
Сыворотка крови человека, готовая к использованию
концентрация указана на этикетке флакона
Промывочный буфер (черная крышка)
Концентрат (20×) для приготовления примерно 1 л
Трис буфер
pH 6,9 ± 0,2
Буфер для разведения образцов (синяя крышка)
Готовый к использованию
Фосфатный буфер
pH 6,7 ± 0,2
Раствор конъюгата (белая крышка)
Готовый к использованию раствор антител к IgG человека, меченых
пероксидазой хрена
Раствор ТМБ (черная крышка);
pH 3,7 ± 0,2
Готовый к использованию, бесцветный или голубоватый раствор 3,3’,5,5’
тетраметилбензидина
1,2 ммоль/л
с перекисью водорода
3 ммоль/л
Стоп-реагент (красная крышка)
Готовый к использованию
Содержит 0,5М серную кислоту
Пленка для заклеивания планшета
1×1,5 мл
1×1,5 мл
1×50 мл
1×100 мл
1×15 мл
1×15 мл
1×15 мл
1 шт.
МЕРЫ ПРЕДОСТОРОЖНОСТИ
Не допускайте проглатывания реагентов. Избегайте контакта с глазами, кожей и слизистыми оболочками.
Обращайтесь со всеми образцами пациентов и контролями как с потенциально инфекционным
материалом. Проверка контролей, входящих в состав набора, на наличие антител к ВИЧ 1 и 2, вирусу
гепатита С, а также HВsAg, проводившаяся на уровне исследования донорской крови, дала отрицательный
результат. В соответствии с правилами надлежащей лабораторной практики (GLP) пользуйтесь защитной
одеждой и одноразовыми перчатками.
После исследования все материалы, контактировавшие с образцами пациентов или контролями, должны
быть инактивированы официально регламентированными методами (автоклавированием или химической
обработкой).
Стоп-реагент STOP и раствор ТМБ (субстратный реагент) SUB могут оказывать раздражающее
воздействие на глаза, кожу и слизистые покровы. При контакте с этими реагентами тщательно промойте
пораженное место большим количеством проточной воды, после чего обратитесь к врачу.
ХРАНЕНИЕ И СТАБИЛЬНОСТЬ РЕАГЕНТОВ
Реагенты стабильны в течение срока годности, указанного на этикетках, при хранении при 2-8 °С.
ПОДГОТОВКА РЕАГЕНТОВ
Перед использованием прогрейте набор и все его компоненты до комнатной температуры. После
использования флаконы с оставшимися реагентами следует тщательно закрыть и хранить при температуре
2-8 °С. Раствор ТМБ SUB храните в защищенном от света месте.
При работе с конъюгатом CON не используйте посуду из полистирола.
Во избежание микробной и/или химической контаминации растворов, никогда не переносите остатки
неиспользованных реагентов обратно в оригинальные флаконы.
Рабочий раствор промывочного буфера WASH
Перед использованием концентрата промывочного буфера любые кристаллизованные соли внутри
флакона следует растворить. Разведите 1 часть концентрата WASH 20× в 19 частях дистиллированной
воды. Рабочий раствор промывочного буфера WASH может быть использован в течение 6 недель при
хранении при температуре 2-8 °С.
ПОДГОТОВКА ОБРАЗЦОВ
Сыворотка пациентов
Используйте свежесобранные образцы или образцы, замороженные и хранящиеся при температуре –20 °С.
Допускается только однократное замораживание и оттаивание образцов. Не используйте сыворотки,
прошедшие тепловую инактивацию при 56 °С.Прогрейте образцы до комнатной температуры (30 минут).
_____________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
IMTEC-RA33-Antibodies, HUMAN GmbH
3
_____________________________________________________________________________________________________
Разведите сыворотки 1:101 буфером для разведения образцов DIL (добавьте 10 мкл сыворотки к 1 мл DIL).
ПРОЦЕДУРА ИССЛЕДОВАНИЯ
−
Внесите в лунки планшета MTP по 100 мкл разведенных образцов, калибраторов CAL,
положительной PC или отрицательной NC контрольных сывороток; в лунку, используемую для
бланка, вместо образца внесите буфер для разведения образцов DIL. Заклейте планшет MTP
пленкой.
−
Инкубируйте 1 час при комнатной температуре.
−
Удалите содержимое лунок планшета MTP. Промойте планшет MTP, внося по 300 мкл рабочего
раствора промывочного буфера WASH на лунку. Повторите процедуру промывки 3 раза.
−
Удалите буфер из лунок, затем полностью освободите лунки от остатков жидкости, постукивая
перевернутым планшетом о фильтровальную бумагу.
−
Внесите в каждую лунку по 100 мкл раствора конъюгата CON и заклейте планшет MTP пленкой.
−
Инкубируйте 30 минут при комнатной температуре.
−
Удалите содержимое лунок планшета MTP. Промойте планшет MTP, внося по 300 мкл рабочего
раствора промывочного буфера WASH на лунку. Повторите процедуру промывки 3 раза.
−
Удалите буфер из лунок, затем полностью освободите лунки от остатков жидкости, постукивая
перевернутым планшетом о фильтровальную бумагу.
−
Внесите в каждую лунку по 100 мкл раствора ТМБ SUB и инкубируйте 10 минут. При комнатной
температуре выше 25 °С инкубацию с субстратом следует укоротить, но ее длительность должна
составлять не менее 5 минут.
−
Добавьте в каждую лунку по 100 мкл стоп-реагента STOP.
−
Измерьте оптическую плотность при 450 нм не позднее, чем через 10 минут после остановки
реакции. Рекомендуется использовать референсную длину волны 620-690 нм.
Автоматизация анализа:
Процесс постановки анализа с использованием данного набора может быть автоматизирован при помощи
подходящей модели автоматического ИФА анализатора. Однако прежде чем проводить диагностику,
пользователь должен провести проверку качества совместной работы набора и конкретного прибора.
ВАЛИДАЦИЯ ТЕСТА
Результаты теста могут считаться достоверными, если для полученных средних значений выполняются
следующие условия:
• ОПср для положительной контрольной сыворотки PC попадает в установленный диапазон значений
(указанный на этикетке).
• ОПср для 5-го калибратора CAL 5 не ниже 0,6.
• ОПср возрастают от калибратора 1 до калибратора 5 CAL 1 – 5.
• Для повышения точности анализа производитель рекомендует анализировать калибраторы CAL 1 – 5,
положительную PC и отрицательную NC контрольные сыворотки, исследуемые образцы в дубликатах.
АНАЛИТИЧЕСКИЕ ХАРАКТЕРИСТИКИ
Сведения об аналитических характеристиках можно получить по запросу.
ИНТЕРПРЕТАЦИЯ РЕЗУЛЬТАТОВ
Постройте полулогарифмический график зависимости измеренных значений ОПср калибраторов CAL 1 – 5
от концентрации этих калибраторов в Ед/мл. По полученной калибровочной кривой, откладывая на ней ОП
образцов, определяют концентрацию аутоантител в образцах пациентов.
Результаты выше 25 Ед/мл следует считать положительными.
ОГРАНИЧЕНИЯ
При постановке диагноза положительные результаты анализа, полученные на данном наборе, всегда
необходимо учитывать в совокупности с другими исследованиями и клиническими симптомами пациента.
При постановке диагноза, результаты данного исследования должны использоваться только как
вспомогательные.
Повышенные уровни антител к антигену RA33 могут быть обнаружены у пациентов с невыраженной
клинической картиной заболевания и отсутствием характерных симптомов.
В случае если в образцах пациентов содержится повышенная концентрация иммунных комплексов и других
образованных иммуноглобулинами агрегатов нельзя исключать появление ложноположительных
результатов и неспецифических реакций.
Данный набор не предназначен для анализа образцов плазмы пациентов.
_____________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru
IMTEC-RA33-Antibodies, HUMAN GmbH
4
_____________________________________________________________________________________________________
СПИСОК ЦИТИРУЕМОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
Список литературы приведен в оригинале инструкции на английском языке.
Внимание! Перевод сделан с английского оригинала инструкции. Перед постановкой исследования
сверьте номер и дату издания вложенного в набор оригинала с указанными в настоящем переводе (см.
внизу справа). При несовпадении номеров или дат обратитесь в «Аналитику» за новым переводом, либо
руководствуйтесь оригиналом инструкции.
IMTEC-RA33-Antibodies_60015.doc
11/19/2009 12:58:00 PM
Оригинал – EL-60015
INF ITC60015 GB
05-2009-11
_____________________________________________________________________________________
© Перевод на русский язык ЗАО «АНАЛИТИКА», Москва, 2009
тел.: 737-0363, факс: 737-0365, e-mail: info@analytica.ru