ПРОГРАММА И ДНЕВНИК ПРАКТИКИ

ПРОГРАММА И ДНЕВНИК
ПРАКТИКИ
студента V курса
фармацевтического факультета
«Стандартизация лекарственного
растительного сырья»
3
I. Цели и задачи практики
Целью практики является закрепление знаний по фармакогнозии, полученных студентами в лекционно-лабораторном курсе, приобретение умений и практических навыков по вопросам заготовки лекарственного растительного сырья с учетом рационального использования и
воспроизводства природных ресурсов.
Цель практики определяется следующими задачами:
- освоение методов сушки растительного сырья, а также приведения сырья в стандартное состояние;
- освоение методик определения ресурсов лекарственных растений на примере травянистых, древесных и кустарниковых растений с использованием различных методов определения урожайности (учетных площадок, модельных экземпляров, проективного покрытия), а
также расчета эксплуатационного запаса, объема ежегодных промышленных заготовок с учетом воспроизводства дикорастущих лекарственных растений;
- изучение правил хранения лекарственного растительного сырья в условиях аптеки,
склада, завода по переработке лекарственного растительного сырья. Знакомство с правилами
приёмки лекарственного растительного сырья;
- знакомство с порядком проведения анализа лекарственного растительного сырья в условиях аналитической лаборатории;
- знакомство с методами фитохимического анализа лекарственного растительного сырья в
полевых условиях (см. Приложение 3);
- знакомство с основными мероприятиями по охране ресурсов лекарственных растений
области.
Во время учебной практики предусматривается также освоение основных приемов возделывания лекарственных растений, а также развитие навыков в пропаганде знаний о лекарственных растениях.
Студенты за время учебно-полевой практики должны овладеть основными умениями и
практическими навыками:
- знать различные методы определения ресурсов дикорастущих лекарственных растений
Саратовской области и уметь пользоваться этими методиками;
- знать правила хранения, требования к качеству упаковки лекарственного растительного
сырья;
- проводить первичную обработку и сушку лекарственного растительного сырья, приводить сырье в стандартное состояние.
II. Порядок проведения практики
Учебно-полевая практика по стандартизации лекарственного растительного сырья проводится в Саратовской области в течение недели, объемом 36 часов (6 рабочих дней) на группу студентов. Каждую группу студентов возглавляет преподаватель кафедры общей биологии
СГМУ. Продолжительность рабочего дня – 6 часов. В первый день практики студенты обязательно прослушивают инструктаж по технике безопасности на полевой практике, что должно
быть зафиксировано в журнале проведения инструктажа по технике безопасности.
4
Примерный график распределения учебного времени в течение учебно-полевой практики по стандартизации лекарственного растительного сырья
№
1.
2.
3.
4.
5.
6.
Вид работы
Знакомство с программой, календарным планом, базой практики.
Инструктаж по ТБ. Получение индивидуального задания. Заготовка ЛР с учетом их рационального использования и воспроизводства.
Сушка лекарственного растительного сырья. Приведение сырья в
стандартное состояние.
Хранение лекарственного растительного сырья. Фитохимический
анализ ЛРС в полевых условиях (экспресс – методы).
Распр. времени
в часах (днях)
6 (1)
6 (1)
6 (1)
Основные приемы возделывания различных лекарственных растений.
Определение ресурсов дикорастущих лекарственных растений на
примере ЛР различных растительных сообществ.
Экзамен по полевой практике
6 (1)
Итого
36 (6)
6 (1)
6 (1)
На экскурсиях студенты работают бригадами по 3–4 человека и индивидуально. На экскурсии студенты собирают 6–8 видов лекарственных растений и их основных примесей для
морфолого-анатомического описания, закладывают по 2–3 растения каждого вида для
оформления гербария и цельное лекарственное растительное сырье по указанию преподавателя.
Каждый день учебной практики должен быть оформлен в дневнике (Приложение 1).
В дневнике описываются лекарственные растения в природе, местообитание, распространение, способы сбора сырья, первичной обработки, сушки и хранения. Описывая растения
в культуре, обращают внимание на приемы их возделывания, агротехнические мероприятия,
переработку, сушку, приведение сырья в стандартное состояние согласно нормативной документации. В дневнике должно быть описано не менее 30 лекарственных растений и не менее
10 примесей к ним.
Дневник необходимо иллюстрировать рисунками, высушенными растениями, фотографиями и т.д.
В конце каждого учебного дня руководитель практики делает отметки в дневнике студента о выполнении предусмотренного объема работы.
До дня зачета, указанного в плане практики, студенты обязаны отчитаться по индивидуальному заданию. Индивидуальные задания студенты получают от преподавателя в первый
день практики. Индивидуальное задание включает в себя сбор 0,5 кг воздушно-сухого сырья
разных морфологических групп. Сырье для индивидуального задания могут собираться как на
экскурсиях, так и в свободное время студента. Наименование сырья, собираемого для индивидуального задания, обязательно согласовывается с руководителем практики.
В последний день прохождения летней учебной практики студенты сдают экзамен, на котором должны иметь:
1. Оформленный дневник по практике с отметкой преподавателя о выполненной работе в
каждый учебный день и отметку о выполненном индивидуальном задании.
2. Выполненное индивидуальное задание.
5
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
Техника безопасности при прохождении летней учебно-полевой практики
по стандартизации лекарственного растительного сырья
Соблюдать особую осторожность при работе у линий электропередач, железных дороги
т.д.
Категорически запрещается курить при проведении экскурсий в поле, лесу, ботаническом
саду и др. местах.
Работать в соответствующей (экскурсионной) одежде. При экскурсиях в лес необходимо
иметь головные уборы.
Собирая растения нельзя портить и уничтожать их бесцельно: следует брать только необходимое количество для гербаризации и изучения.
Нельзя собирать растения, которые в данной местности встречаются редко (охраняемые,
эндемичные и реликтовые виды), а также растения, занесенные в «Красную книгу» Саратовской области.
Соблюдать осторожность при работе со специальным оборудованием для гербаризации
растений (ножи, копалки, ножницы и др.).
Соблюдать меры предосторожности при сборе ядовитых растений.
Оборудование и принадлежности, необходимые студентам
для прохождения практики
1. Бумага для засушивания растений (фильтровальная бумага или газеты).
2. Ботанические копалки или лопатки для выкапывания растений.
3. Лупы экскурсионные 10х.
5. Блокноты для полевых дневников.
6. Бумага для полевых этикеток.
7. Простые карандаши и ручки.
8. Пакеты для сбора лекарственного растительного сырья.
9. Садовые складные ножи для срезания веток с деревьев и кустарников.
10. Пинцеты.
11. Препаровальные иглы.
12. Ножницы.
13. Линейки.
14. Рулетки (5 и 10 метровые).
15. Шнуры для разметки площадок.
6
Ресурсоведение лекарственных растений
Ресурсоведение – наука, изучающая природные ресурсы. К природным, или естественным, ресурсам относятся растительные и животные ресурсы, а также водные, земельные,
минеральные и др. Природные ресурсы делятся на исчерпаемые и неисчерпаемые, которые,
в свою очередь, делятся на возобновляемые и невозобновляемые. Растительные ресурсы относятся к исчерпаемым природным ресурсам.
Основными задачами ресурсоведения как науки являются:
1. Поиск новых лекарственных растений, особенно по принципу филогенетического
родства.
2. Определение запасов лекарственных растений.
3. Расчет возможных объемов ежегодной заготовки лекарственных растений.
4. Обеспечение условий для получения лекарственного растительного сырья высокого
качества.
5. Проведение химической таксации зарослей лекарственных растений с целью выявления перспективных высокопродуктивных популяций и зарослей.
6. Разработка мероприятий по рациональному использованию ресурсов лекарственных
растений.
7. Разработка мероприятий по охране дикорастущих лекарственных растений.
8. Обоснование необходимости интродукции и введения в культуру тех или
иных растений.
Лекарственные растения и получаемые из них препараты играют важную роль в арсенале лечебных средств отечественного здравоохранения. В настоящее время лекарственные
растения входят в состав около 40% всех используемых в России лекарственных средств, поэтому одной из важнейших задач фармакогнозии является изучение географического распространения дикорастущих лекарственных растений на территории нашей страны, выявление и картирование зарослей и определение запасов сырья.
Часть лекарственных растений, используемых в научной медицине, уже введена в
культуру, поэтому сбор их в природе не имеет существенного значения. Малоактуально также изучение ресурсов растений, запасы которых в целом по стране в сотни раз превышают
потребности здравоохранения в их сырье, например, береза повислая, горец птичий, дуб черешчатый, мать-и-мачеха, одуванчик лекарственный, подорожник большой, полынь горькая,
тысячелистник обыкновенный и др.
Первоочередного и наиболее обстоятельного обследования заслуживают виды, включенные в «Красную книгу» (горец змеиный, горицвет весенний и др.), а также виды, являющиеся источником дефицитного сырья (девясил высокий, зверобой продырявленный, жостер
слабительный, калина обыкновенная, кровохлебка лекарственная и др.)
В лекарственном ресурсоведении имеются следующие понятия:
Заросль (популяция или ее часть) – совокупность особей одного вида, произрастающих в растительном сообществе на участке, пригодном для проведения промысловой заготовки.
Промысловый массив – несколько близко расположенных зарослей (популяций) изучаемого вида, пригодных для организации заготовок.
Учетные площадки – участки размером от 0,25 м2 до 10 м2, заложенные в пределах заросли или промыслового массива для подсчета численности, проективного покрытия или
7
урожайности изучаемого вида.
Товарные экземпляры (модельные экземпляры) – взрослые, неповрежденные экземпляры, подлежащие сбору. В их число не входят особи, оставляемые для семенного или вегетативного возобновления заготавливаемого растения.
Урожайность (плотность запаса сырья) – величина сырьевой фитомассы, полученная с единицы площади, занятой зарослью (г/м2, кг/га).
Проективное покрытие – процент площади, занятой проекцией надземных органов
изучаемого вида на почву в пределах учетной площадки или всей заросли.
Трансекта (маршрутный ход или визир) – узкая прямоугольная площадка, закладываемая для изучения численности проективного покрытия, урожайности.
Ключевой участок – площадка, служащая эталоном данного типа угодий.
Квадрат-сетка – деревянная или металлическая рамка площадью 1 м2, разделенная тонкой проволокой или леской на 100 квадратов по 1 дм2. Каждый квадрат при этом составляет 1%
площади. Квадрат-сетку накладывают сверху на учетную площадку и определяют, сколько
квадратиков полностью или более чем наполовину закрыто надземными частями изучаемого
вида.
Биологический запас – величина сырьевой фитомассы, образованная всеми (товарными
и нетоварными) экземплярами данного вида на любых участках как пригодных, так и непригодных (низкоурожайных, труднодоступных или незначительных по площади) для заготовки.
Эксплуатационный запас – величина сырьевой фитомассы, образованной товарными
экземплярами на участках, пригодных для промысловых заготовок.
Оборот заготовки – период, включающий год заготовки и число лет, необходимых для
восстановления запасов сырья.
Возможный ежегодный объем заготовок – количество сырья, которое можно заготавливать ежегодно на данной территории без ущерба для сырьевой базы, определяется как частное от деления величины эксплуатационного запаса сырья на всех участках заготовки на
оборот заготовки.
Ресурсоведческие исследования включают в себя несколько этапов:
1. Подготовительные работы, включающие в себя определение задач, сбор необходимых
исходных данных (полная эколого-ценотическая характеристика), выбор маршрута и методов
оценки запасов лекарственных растений.
2. Собственно экспедиционные работы, включающие определение площадей и зарослей
лекарственных растений, урожайности и оценку величины запасов (биологического и эксплуатационного).
3. Расчет объемов ежегодных заготовок сырья.
4. Составление отчета, включающего рекомендации по охране и рациональной эксплуатации растительных ресурсов.
Определение запасов лекарственных растений проводится двумя основными методами:
1 . Определение запасов на конкретных зарослях.
2. Определение запасов сырья методом ключевых участков.
Оценка запасов на конкретных зарослях дает достоверные для обследованных массивов,
но в целом неполные для всего изучаемого региона сведения. Данные, полученные таким об8
разом, целесообразно использовать для организации заготовок, но они недостаточны для долгосрочного ресурсного прогнозирования и сравнительно быстро устаревают.
Метод ключевых участков дает менее точные (по условиям конкретных зарослей), но более полные и стабильные данные. Их целесообразно использовать для долгосрочного прогнозирования обеспеченности сырьем и планирования его заготовок. Однако для практической
организации заготовок они дают меньше информации. Следует помнить, что данный метод
можно применять лишь для определения запасов сырья, получаемого от видов, четко приуроченных к определенным растительным сообществам или элементам рельефа.
Выбор того или иного способа зависит от целей исследования.
На летней учебной практике по фармакогнозии студенты должны освоить методы определения запасов сырья на конкретных зарослях.
Для определения запаса сырья необходимо знать две величины: площадь заросли и
урожайность.
Площадь заросли определяют, приравнивая ее очертания к какой-либо геометрической
фигуре (квадрату, треугольнику, кругу), и измеряют параметры (длину ширину, диаметр), необходимые для расчета площади этой фигуры. Измерять можно мерной лентой или шагами.
Если популяции изучаемого вида располагаются неравномерно, образуя отдельные пятна в пределах растительного сообщества, то сначала определяют площадь всего участка, на
котором встречается вид, а затем процент площади этого участка, занятого изучаемым видом.
Урожайность можно определить несколькими методами:
1) на учетных площадках;
2) по модельным экземплярам;
3) по проективному покрытию.
Определение урожайности на учетных площадках
Этот способ приемлем для некрупных травянистых и кустарниковых растений, у которых в качестве сырья используются надземные органы.
Для этого в пределах заросли изучаемого вида закладывают от 15 (при равномерном
распределении особей) до 50 (при неравномерном распределении) учетных площадок. На каждой из учетных площадок собирают все сырье и сразу же взвешивают с точностью ± 5%.
Сбор сырья необходимо производить в сухую погоду. Результат по каждой площадке записывают отдельно. Подсчитывают среднюю арифметическую урожайности (Мср) и ошибку средней арифметической (m) по следующим формулам:
Σ(V)
Мср = -----------------------, где
n
(1)
V (варианта) – масса сырья, собранная с одной учетной площадки,
n – число учетных площадок (число вариант)
С
2
∑ (x
=
I
− x)
n −1
2
,
где
(2)
С – дисперсия.
9
Далее рассчитывается квадратическое отклонение σ по формуле:
σ =
С
n −1
(3)
Ошибка m рассчитывается по формуле:
m=
σ
(4)
n
Урожайность равна Мср ± m.
Определение урожайности методом модельных экземпляров
Этот метод применяют, когда ресурсными объектами являются деревья или кустарники, а также травянистые растения, встречающиеся рассеянно.
Для определения урожайности этим методом необходимо получить два показателя:
а) Среднюю численность экземпляров на единицу площади (М1 ± m1). Для этого закладываются 25-50 учетных площадок или 25-40 маршрутных ходов в пределах заросли, на
площадках (маршрутных ходах) подсчитывается число экземпляров растений и далее определяется среднее число экземпляров растений на 1 м2 (подсчет производится при помощи
формул 1, 2, 3, 4).
б) Среднюю массу сырья, получаемую с каждого 2, 5, 10 модельного экземпляра в
пределах учетной площадки или маршрутного хода. При определении массы подземных органов или соцветий собирают сырье с 40-60 модельных экземпляров. Надземные вегетативные органы варьируют сильнее, поэтому число модельных экземпляров может увеличиваться
до 100 и более. Взвешивают сырье свежесобранным. Расчет М2 ± m2 производят по формулам 1, 2, 3, 4.
Урожайность Мз и ошибка m3, определяемая методом модельных экземпляров, подсчитываются по следующим формулам:
M3 = M1 + M2
(5)
m3 = M 1 • m 2 ) 2 + ( M 2 • m1 ) 2
(6)
Определение урожайности методом проективного покрытия
Этот метод применяется для травянистых видов с невысоким древостоем, образующих сплошные заросли или куртины, где трудно вычленить отдельные экземпляры.
Для определения урожайности этим методом необходимо знать две величины:
1. Среднее проективное покрытие M1 ± m1. Определяют с помощью квадрат сетки (сетка
площадью в 1м2, разделенная тонкой проволокой на 100 квадратов по 1 дм2). Закладывают
15-20 учетных площадок и, накладывая квадрат-сетку на участок с интересующими растениями, подсчитывают, сколько процентов поверхности почвы занято листьями и стеблями
этого растения. Вычисляют М1± m1 по формулам 1, 2, 3, 4.
2. «Цену» 1% проективного покрытия М2 ± m2. Для этого накладывают квадрат-сетку
и с каждой площадки срезают (выкапывают) и взвешивают сырье с одной клетки в 1 дм2.
Вычисляют М2 ± m2 по формулам 1, 2, 3, 4.
Урожайность (М3) и ошибка (m3) подсчитываются по формулам 5 и 6.
Величину биологического запаса определяют умножением площади заросли S на
10
верхний предел урожайности (М + 2m), а эксплуатационного запаса – умножением площади заросли на нижний предел урожайности (М – 2m).
Ебиол = S•(М + 2m)
(7)
Eэкспл = S•(М - 2m)
Оборот заготовки подсчитывается по формуле:
а = срок восстановления заросли + 1
(8)
(9),
а объем возможной ежегодной заготовки (V):
V =
E экспл
а
(10)
Сроки восстановления запасов устанавливаются для каждого вида растения отдельно. Данные по выходу воздушно-сухого сырья из свежесобранного приводятся в приложении 2.
Расчет величины запаса на конкретных зарослях
Полученные данные по определению урожайности и площади конкретных зарослей и
массивов позволяют рассчитать запас сырья. В ресурсоведении различают два вида запасов сырья: биологический и эксплуатационный.
Биологический запас – величина сырьевой фитомассы, образованной всеми (товарными
и нетоварными) экземплярами данного вида на любых участках, как пригодных, так и непригодных для заготовки. Эта величина важна для биологов, так как говорит о наличии вида в
природе, его способности к естественному размножению.
Расчет биологического запаса сырья ведется по верхнему пределу урожайности (М +
2m).
Эксплуатационный (промысловый) запас – величина сырьевой фитомассы, образованной товарными экземплярами на участках, пригодных для промысловых заготовок.
Расчет величины эксплуатационного запаса ведется по нижнему пределу урожайности
(М- 2m).
В тех случаях, когда урожайность определяется непосредственно на учетных площадках, заложенных в конкретной заросли, запас лекарственного растительного сырья на этой
заросли рассчитывают как произведение средней урожайности на общую площадь заросли.
При определении величины запаса с помощью методов модельных экземпляров и по
проективному покрытию вначале рассчитывается урожайность в данной заросли, так как это
указано в соответствующих разделах, а затем полученная величина умножается на величину
площади заросли.
Расчет объемов ежегодных заготовок
Эксплуатационный запас сырья показывает, сколько сырья можно заготовить при однократной эксплуатации заросли. Однако ежегодная заготовка на одной и той же заросли допустима лишь для лекарственных растений, у которых используются плоды. В этом случае
суммарная величина эксплуатационного запаса на все зарослях равна возможному объему
ежегодных заготовок. В остальных случаях при расчете возможной ежегодной заготовки необходимо знать, за сколько лет после проведения заготовок заросль восстанавливает перво11
начальный запас сырья.
Считается, что для соцветий и надземных органов однолетних периодичность заготовок – один раз в 2 года; для надземных органов («травы») многолетних растений – один раз в
4-6 лет; для подземных органов большинства растений – не чаще одного раза в 15-20 лет.
При этом в северных районах и зарослях, располагающихся в худших условиях местообитания, следует брать максимальную продолжительность периода восстановления. Объем
возможной ежегодной заготовки сырья рассчитывают как частное отделения эксплуатационных запасов сырья на оборот заготовки, включающий год заготовки и продолжительность
периода восстановления («отдыха») заросли. Так, если эксплуатационный запас ландыша в
массиве заготовок составляет 200 кг, а восстанавливается он в данных географических условиях за 4 года, то в пределах данного массива ежегодная возможная заготовка не должна
превышать 200/(4+1)=40 кг.
При определении мест заготовки исходят из того, чтобы каждая заросль в массиве эксплуатировалась не чаще одного раза в 5 лет.
Камеральная обработка данных
Этот вид обработки включает все расчеты, которые невозможно или нецелесообразно
выполнять в полевых условиях, а также составление отчета по проделанному ресурсоведческому обследованию.
Все полученные данные должны быть статистически обработаны. Их сводят в инвентаризационную ведомость, раздельно по каждому растению. При работе на конкретных зарослях указываются номер заросли, ее географическая привязка с указанием удаленности от
ближайших населенных пунктов и транспортных путей, растительное сообщество, в котором
обитает изучаемое растение, проективное покрытие или численность экземпляров на единицу площади, урожайность, площадь заросли и эксплуатационный запас сырья. В конце сводки по каждому растению приводят суммарный эксплуатационный запас и возможный ежегодный объем заготовок для обследованной территории.
Аналогичным образом оформляют данные о запасах сырья на ключевых участках,
имеющих промысловые заросли. Данные по ключевым участкам, не имеющим промысловых
зарослей, в ведомости не отражают, указывают лишь их число и площадь. Для каждого вида
указывают, в каких местообитаниях он встречается и где его лучше заготавливать.
В конце отчета приводят сводную таблицу запасов, выявленных по каждому виду, и
таблицу объемов фактических заготовок лекарственного сырья, проводимых в районе ресурсного обследования. На основе анализа имеющихся запасов и объема проводимых заготовок дают необходимые рекомендации о возможностях их увеличения или необходимости
уменьшения. Кроме того, вносятся предложения о создании заказников для охраны редких
лекарственных растений или высокопродуктивных промысловых зарослей и массивов. Отчет
иллюстрируется необходимыми картографическими материалами.
Культивируемые лекарственные растения
Культивируемые лекарственные растения являются одним из важнейших источников
лекарственного сырья, обеспечивая более половины его массы, заготавливаемой в странах
СНГ. В настоящее время в промышленную культуру взяты более 50 видов лекарственных
растений. Заготовка лекарственного сырья культивируемых растений имеет ряд преимуществ
перед сбором на диких зарослях:
12
- сохраняются природные популяции лекарственных растений;
- становится возможным механизация возделывания и уборки лекарственных растений;
- увеличение урожайности за счет агротехники и селекции;
- улучшение качества сырья за счет сбора сырья в оптимальные сроки и обеспечения
рациональных условий сушки;
- возможность планирования объема заготовок по потребности в лекарственном растительном сырье;
- независимость объема заготовок от сроков восстановления зарослей;
- меньшая зависимость объема заготовок и качества сырья от погодных условий.
Повышению производства лекарственных растений способствуют проведение правильных севооборотов, внесение удобрений, защита растений от вредителей, болезней и сорняков,
проведение мелиоративных работ. Большое значение имеют разработка рекомендаций по агротехнике для культивируемых растений, внедрение в практику индустриальных технологий
возделывания и семеноводства.
Введение лекарственных растений в культуру как в пределах ареала, так и в новых областях, где эти виды не встречаются называется интродукцией.
Приспособление растений к новым климатическим условиям называется акклиматизацией.
Натурализацией называется высшая степень акклиматизации, при которой растение
хорошо и самостоятельно размножается, удачно конкурируя с видами аборигенной флоры в
естественных растительных сообществах, например, аморфа кустарниковая.
Культивирование — это выращивание лекарственных растений в промышленных масштабах по рекомендациям агротехники в данных условиях с целью получения лекарственного растительного сырья.
Интродукцией лекарственных растений занимаются в основном Всероссийский научно-исследовательский институт лекарственных и ароматических растений (НПО «ВИЛАР»)
и его зональные опытные станции (ЗОС).
Интродукция включает в себя два основных аспекта: изучение биологических особенностей растения в новых условиях и отработка систем агротехники возделывания лекарственных растений.
Введение растений в культуру – длительный и трудоемкий процесс, который осуществляется в несколько этапов:
- сбор посевного или посадочного материала;
- изучение биологических особенностей растения;
- проведение географических посевов и выявление оптимальной зоны размещения новых культур;
- отбор хозяйственно-ценных популяций;
- разработка эффективных способов возделывания.
Для введения в культуру однолетников требуется в среднем 3-4 года, многолетников –
более 10 лет.
В культуру вводятся или введены следующие группы растений:
1. Отечественные лекарственные растения, дающие крупнотоннажное сырье, например: валерьяна лекарственная, ромашка аптечная, облепиха крушиновидная, солодка голая,
13
шалфей лекарственный, тимьян ползучий, хмель обыкновенный.
2. Лекарственные растения с ограниченным ареалом или ограниченными запасами,
например: женьшень, лимонник китайский, безвременник великолепный, марена красильная.
3. Лекарственные растения с большим ареалом, но произрастающие спорадически и
не образующие зарослей, например: зверобой продырявленный, бессмертник песчаный,
синюха голубая, душица обыкновенная.
4. Источники новых лекарственных средств и препаратов с необеспеченной сырьевой
базой, например: датиска коноплевая, расторопша пятнистая.
5. Иноземные растения, не имеющие аналогов во флоре нашей страны, например:
алоэ, каланхое перистое, почечный чай, подорожник блошный.
6. Растения встречающиеся только в культуре и в диком виде неизвестные, например,
мята перечная.
Некоторые растения из-за биологических особенностей не поддаются введению в
культуру, например: аир болотный, горицвет весенний, горец птичий. Эти растения заготавливаются только от дикорастущих растений.
ПРИЛОЖЕНИЯ
Приложение 1
Дневник
летней полевой практики
по стандартизации лекарственного растительного сырья
студента (ки) ______________________________________________________
5 курса ___________
группы фармацевтического факультета СГМУ
Место прохождения практики _______________________________________
Время прохождения практики _______________________________________
Руководитель практики ____________________________________________
Дата
Место
практики
Содержание
работы
Отметки о
выполнении
14
Приложение 2
Ориентировочный % выхода воздушно-сухого сырья из свежесобранного
№
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
8.
9.
10.
11.
12.
13.
14.
15.
16.
17.
18.
19.
20.
21.
22.
23.
24.
25.
26.
27.
28.
29.
30.
31.
32.
33.
34.
35.
36.
37.
38.
Название лекарственного растения
Алтей лекарственный
Белена черная
Береза повислая
Бессмертник песчаный
Горец перечный
Горец почечуйный
Дуб черешчатый
Душица обыкновенная
Боярышник отогнуточашелистиковый цветки / плоды
Валериана лекарственная
Жостер слабительный
Зверобой продырявленный
Калина обыкновенная
Крапива двудомная
Кровохлебка лекарственная
Крушина ломкая
Кубышка желтая
Кукуруза обыкновенная
Ландыш майский
Липа сердцевидная
Малина обыкновенная
Мать-и-мачеха
Одуванчик лекарственный
Пастушья сумка
Пижма обыкновенная
Подорожник большой
Полынь горькая
Пустырник сердечный
Ромашка аптечная
Смородина черная
Сушеница топяная
Тысячелистник обыкновенный
Фиалка трехцветная
Хвощ полевой
Череда трехраздельная
Черемуха обыкновенная
Чистотел большой
Шиповник
% выхода воздушносухого сырья
20
20
40
33
25
20
40
25
20 / 25
25
17
30
40
25
25
40
8—10
25
20
25
20
15
35
28
25
20
22
25
20 — 27
18 — 20
23—25
22
20
25
20
42 — 45
23—25
32
15
Приложение 3
Фитохимический анализ лекарственного растительного сырья
в полевых условиях
Для выявления новых перспективных в лекарственном отношении растений часто используют так называемый метод «сита». Этот метод используется при проведении массового
полевого фитохимического анализа на основные биологически активные вещества всех без
выбора видов растений определенной местности или района.
Некоторые растения «сигнализируют» о наличии некоторых групп химических веществ.
Например, наличие запаха некоторых органов растения, может свидетельствовать о присутствии эфирных масел, кумаринов или хромонов. Оранжевая, желтая или красная окраска позволяет сделать предположение о наличие каротиноидов, антраценпроизводных, некоторых
алкалоидов. Сладковатый привкус говорит о содержании сахаров, реже сапонинов. Слизистый вкус бывает чаще всего у сырья, содержащего полисахариды. Горький вкус связан с наличием алкалоидов или горечей. Вяжущий – с присутствием дубильных веществ, кислый – с
присутствием органических кислот или витамина С.
Однако предварительные предположения, точно так же, как и некоторые качественные
реакции не могут дать полной уверенности о содержании той или иной группы веществ, поэтому, окончательный ответ о наличии группы биологически активных веществ можно дать
только в результате полного анализа в условиях химической лаборатории.
В условиях экспедиционной работы, когда за сравнительно короткий срок необходимо
проанализировать большое количество ботанических видов, химический анализ растительного материала должен быть быстрым и удобным. Для проведения полевых анализов были разработаны упрощенные методы качественного и количественного определения веществ.
Для проведения химического анализа в полевых условиях все реактивы, химическая посуда и необходимое оборудование должны находиться в портативной упаковке (походная лаборатория), удобной для перевозки.
Необходимые реактивы и оборудование для проведения
фитохимического анализа в полевых условиях
Реактивы:
1. Реактивы Вагнера, Майера, Драгендорфа.
2. Соляная кислота, 1% раствор.
3. Соляная кислота, 10% раствор.
4. Соляная кислота концентрированная.
5. Кремневольфрамовая кислота, 1% раствор.
6. Изотонический раствор хлорида натрия.
7. Едкий натр, 10% раствор.
8. Железоаммониевые квасцы, 1% раствор.
9. Вода дистиллированная 3 литра.
10. Желатин, 1% раствор в изотоническом растворе.
11. Спирт этиловый, 96%.
12. Спирт этиловый, 24%.
13. Раствор Люголя.
16
14. Карбонат натрия, 2% раствор.
15. Ацетат свинца, насыщенный раствор.
16. Сернокислый натрий, насыщенный раствор.
17. Пикриновая кислота, 1% раствор.
18. Раствор Фелинга I.
19. Раствор Фелинга II.
20. Хлорное железо, 1% раствор.
21. Смесь уксусного ангидрида с конц. серной кислотой (50:1).
22. Серная кислота концентрированная.
23. Сернокислое железо, 10% раствор.
24. Нитрат натрия 10% раствор.
25. Бумага, пропитанная раствором Драгендорфа.
26. Бумага, пропитанная 0,5% раствором хлорного железа.
27. Цинк металлический.
Химическая посуда, оборудование и другие материалы:
(из расчета на одну группу студентов)
Спиртовки — 4 шт.
Пробирки — 25 шт.
Часовые стекла — 10 шт.
Воронки для фильтрования — 5 шт.
Бумажные фильтры, гигроскопическая вата.
Полоски фильтровальной бумаги (1x10), пропитанные реактивом Драгендорфа (бумага
Крафта).
Плоскогубцы.
Полоски фильтр. бумаги (1x10), пропитанные 0,5% р-ром FeCl3
Выпарительные чашки на 100 мл —10 шт.
Треножники для спиртовок — 4 шт.
Аптечная сумка — 4 шт.
Стеклянные палочки — 5 шт.
Колбы на 100 мл — 10 шт.
Ручные весы — 4шт.
Разновес — 2 шт.
Пипетки на 100 мл — 6 шт.
Водяная баня — 3 шт.
Методики определения различных групп
биологически активных веществ в полевых условиях
Определение алкалоидов
Метод Крафта. Метод Крафта может быть рекомендован в качестве полевого экспресс-метода для рекогносцировочной оценки растений на наличие алкалоидов.
а) Каплю свежевыжатого из растения сока наносят на фильтровальную бумагу, пропитанную реактивом Драгендорфа. При наличии алкалоидов в соке на бумаге появляется оранжевое пятно.
б) О наличии алкалоидов можно судить также по оранжевым пятнам, возникающим на мес17
тах соприкосновения свежего растения и бумаги при их сжатии. Для проведения анализа
методом Крафта необходимо иметь щипцы для сдавливания и индикаторную бумагу, качество которой имеет решающее значение.
Небольшой срез того или иного органа растения (лист, стебель, цветы) накладывают на
полученную бумагу и с помощью плоскогубцев сдавливают. При наличии алкалоидов,
выступивший при сжатии сок окрашивает бумагу в оранжево-красный цвет. При наличии
хлорофилла оранжевое окрашивание наблюдается в виде каймы вокруг зеленого пятна
или в виде оранжево-красных участков между зелеными пятнами.
Способ приготовления бумаги. Полоски бумаги для хроматографии размером 10x70 см погружают в реактив, состоящий из смеси раствора А, раствора В и 40% уксусной кислоты,
после чего высушивают в вертикальном положении при комнатной температуре до воздушно-сухого состояния, и разрезают на полоски размером 2,5х6 см. Бумага должна быть
желтого цвета.
Раствор А: 0,42 г основного нитрата висмута растворяют в 25 мл 20% уксусной кислоты.
Раствор В: 8,0 г йодистого калия растворяют в 20 мл дистиллированной воды.
Примечание: названный метод не может быть применен к растениям, содержащим пигмент,
маскирующий на бумаге алкалоидную реакцию, а также к органам, выжать сок из которых
не всегда можно (семена, коры и т.д.)
Недостатком метода является нечувствительность реактивной бумаги к эфедрину и псевдоэфедрину, вследствие чего алкалоидность различных видов эфедры определению этим методом не подлежит.
Определение алкалоидов методом извлечения.
Растения грубо измельчают, помещают в пробирку, заливают 1% раствором соляной кислоты так, чтобы кислота покрывала весь материал (1:10) и нагревают до начала кипения.
До охлаждения жидкость фильтруют через фильтр и испытывают на присутствие в нем алкалоидов, для чего 1-2 капли фильтрата помещают при помощи стеклянной палочки на часовое стекло, рядом с ним наносят каплю реактива Вагнера и осторожно наклоняя стекло,
обе капли соединяют. При слиянии капель, в случае присутствия алкалоидов жидкость
мутнеет, а затем происходит выпадение трудно растворимых солей алкалоидов с реактивом Вагнера (осадок бурого цвета).
Определение сапонинов
Реакция пенообразования.
Растение грубо измельчают и в пробирке готовят извлечение 1:10 на дистиллированной воде, фильтруют. В одну пробирку помещают 5 мл фильтрата, а в другую – 5 мл дистиллированной воды (контроль). Обе пробирки энергично встряхивают. Содержащие сапонины
настои при этом дают обильную пену, не исчезающую в течение длительного времени.
Реакция с раствором ацетата свинца
К 2 мл настоя прибавляют несколько капель ацетата свинца. Образуется осадок. Причем,
тритерпеновые сапонины осаждаются средним ацетатом свинца, а стероидные – основным.
Реакция Лафона
К 2 мл водного настоя прибавляют 1 мл концентрированной серной кислоты, 1 мл этилового спирта и 10 капель 10% раствора сернокислого железа. При нагревании появляется
сине-зеленое окрашивание.
18
Определение сердечных гликозидов
Общая реакция на углеводный комплекс.
Готовят водный отвар из измельченного сырья 1:50. Отвар фильтруют, делят на две части
по 10 мл. К одной части отвара в колбе добавляют около 1 мл 10% раствора соляной кислоты и кипятят 2-3 минуты (при этом происходит гидролиз предполагаемого гликозида, с
образованием агликона и сахарной части). К обеим частям отвара добавляют по 2 мл раствора Фелинга (Фелинга I и Фелинга II), кипятят 3 минуты и сравнивают результаты в
обоих случаях. Появление кирпично-красного осадка в пробирке, где был проведен гидролиз, указывает на присутствие гликозидов.
Реакция на пятичленное ненасыщенное лактонное кольцо (Реакция Балье)
5.0 г измельченного растительного сырья заливают двадцатикратным количеством 24%
спирта и оставляют на 4-5 часов при частом взбалтывании. После фильтрования прибавляют насыщенный раствор ацетата свинца. Для осаждения избытка свинца добавляют насыщенный раствор сульфата натрия, отстаивают и фильтруют. К 1-2 мл фильтрата добавляют равный объем 1% раствора пикрата натрия. Если через 5-15 минут появится оранжевая окраска, это говорит о наличии сердечных гликозидов в данном сырье.
Пикрат натрия готовится по мере надобности смешением водных растворов 1% пикриновой кислоты (9 частей) и 10% раствора щелочи (1 часть). Смесь готовится в количестве, необходимом для проведения анализа в течении одного дня.
Примечание: если в спиртово-водных извлечениях находятся моносахара, способные оказывать влияние на окраску раствора, то качественную оценку необходимо производить в интервале 5-20 минут, не позднее, иначе произойдет усиление окраски за счет
реакции пикрата натрия с сахаром.
Реакция на стероидное ядро (реакция Либермана-Бурхарда)
5 мл фильтрата, полученных в предыдущем опыте, помещают в выпарительную чашку и
выпаривают на спиртовке. Сухой остаток растворяют в 1 мл ледяной уксусной кислоты и
добавляют смесь уксусного ангидрида и концентрированной серной кислоты (5:1). Через
некоторое время появляется розовая окраска, переходящая сначала в зеленую, а затем в
синюю.
Определение полисахаридов
Приготовить водный отвар 1:10. К 5 мл отвара добавляют 15 мл этилового спирта. Наличии осадка характеризует возможное присутствие слизи, пектиновых веществ или инулина.
Определение крахмала
1-2 г сырья растереть в ступке, прибавить 1-2 капли раствора Люголя. При наличие крахмала появляется сине-фиолетовое окрашивание.
Определение инулина
1-2 г сырья растереть в ступке, перенести в фарфоровую чашку и аккуратно по стенкам
добавить 20% раствора α-нафтола и концентрированной серной кислоты. Появляется
красно-фиолетовое окрашивание.
Определение фенольных соединений
Качественный анализ фенольных соединений имеет свои особенности, в связи с тем что
под этим термином подразумеваются вещества с близкими биогенетическими связями, а
результаты реакции с солями Fе не всегда позволяют сделать заключение о присутствии
19
фенольных соединений в сырье. Многие соединения имеют свободный фенольный гидроксил (алкалоиды), а в некоторых фенольных соединениях фенольный гидроксил этерифицирован.
Определение флавоноидов
1 г свежего сырья заливают 10 кратным количеством 96% этанола, раствор фильтруют, выпаривают до густого осадка, остаток обрабатывают этанолом. Полученный раствор фильтруют, и проводят реакции.
Проба Синода (цианидиновая проба)
К 2 мл извлечения добавляют 5-7 капель концентрированной соляной кислоты и 10-15 мг
металлического Мg или Mn, через 3-5 минут наблюдается красное, оранжевое или розовое окрашивание. Для усиления окраски смесь подогревают на водяной бане.
К 1 мл извлечения добавляют 3-5 капель 2% основного ацетата свинца. Появление
желто-оранжевого окрашивания свидетельствует о наличии флавоноидов.
Определение антраценпроизводных
Приготовить водный отвар свежего сырья 1:10. Полученную водную вытяжку фильтруют
и разливают в две пробирки по 2-3 мл. К одной из них приливают 2-3 капли 10 % раствора едкой щелочи. Вторая пробирка является контрольной. Появление вишнево-красного
окрашивания указывает на присутствие антраценпроизводных (сравнить с контролем).
Определение дубильных веществ
Экспресс-метод.
Кусочек свежего растения закладывают между кусочками индикаторной бумаги и сдавливают плоскогубцами. При наличии дубильных веществ на бумаге образуется окрашенное
пятно (синее или зеленое в зависимости от группы дубильных веществ).
Приготовление индикаторной бумаги
1. Полоски хроматографической фильтровальной бумаги смачивают 0,5% раствором хлорного железа и высушивают. Раствор хлорного железа содержит 1 мл соляной кислоты в
100 мл раствора.
2. Готовят водный отвар свежего сырья (1:10). Извлечение фильтруют. Полученный прозрачный раствор наливают в три пробирки по 2-3 мл (одна из них является контролем). В
одну пробирку прибавляют 2-3 капли железо-аммиачных квасцов (окрашивание вытяжки в
синий или зеленый цвета указывает на присутствие как дубильных веществ, так и соединений фенольного характера).
В другую пробирку приливают 1-2 капли 1% раствора желатина в изотоническом растворе. Наличие осадка указывает на присутствие дубильных веществ.
Примечание: в реакции с желатином следует избегать избытка реактива, т.к. при этом
осадок может раствориться.
20
Литература
1. Атлас ареалов и ресурсов лекарственных растений СССР. - М, 1976.- 340с.
2. Государственная фармакопея СССР, издание XI, вып. 1. - М.: Медицина, 1987. - 336с.
3. Государственная фармакопея СССР, издание XI, вып. 2. - М.: Медицина, 1990. - 400с.
4. Гаммерман А.Ф., Кадаев Г.Н., Яценко-Хмелевский А.А. Лекарственные растения.- М.:
Высшая школа, 1983. - 400с.
5. Долгова А. А., Ладыгина Е. Я. Руководство к практическим занятиям по фармакогнозии.
- М.: Медицина, 1977. - 275с.
6. Забалуев А.П. Ресурсы лекарственных растений Саратовской области. - Саратов,
2000. - 141с.
7. Интродукция лекарственных, технических и ароматических растений. - М.: Наука,
1965.
8. Куркин В.А. Фармакогнозия: Учебник для студентов фармацевтических вузов (факультетов)/ В.А. Куркин. - Самара: ООО «Офорт»; ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава», 2007. 1239с.
9. Курнишкова Т.В., Петров В.В. География растений с основами ботаники.- М.: Просвещение, 1987. - 207с.
10. Курочкин Е.И. Лекарственные растения. - Самара: Парус, 1998. - 225с.
11. Лекарственное сырье растительного и животного происхождения. Фармакогнозия:
Учебное пособие / Под.ред.Г.П.Яковлева. - СПб.: СпецЛит, 2006.
12. Лекарственные растения Государственной фармакопеи. Фармакогнозия / Под ред. И.А.
Самылиной, В.А. Северцева. - М.: АНМИ, 2003. - 534с.
13. Муравьева Д.А., Самылина И.А., Яковлев Г.П. Фармакогнозия: Учебник. Изд.4-е. - М.:
Медицина, 2002. - 656с.
14. Махлаюк В.П. Лекарственные растения в народной медицине. - Саратов, 1967. - 560с.
15. Правила сбора и сушки лекарственных растений. Сборник инструкций. - М.: Медицина, 1985.
16. Справочник по сбору лекарственных растений / Под ред. А.Ф.Гаммерман. - М.: Контора «Союзхимфармторг», 1959. - 288с
17. Скворцов А.К. Гербарий. Пособие по методике и технике. - М.: Наука, 1977. - 199с.
18. Чибилев А.А. Лик степи (эколого-географические очерки о степной зоне СССР). - Л.:
Гидрометеоиздат, 1990. - 192 с.
19. Чиков П.С. Лекарственные растения: Справочник. - М.: Агропромиздат, 1989. - 431с.
20. Шретер А.И. и др. Методика определения запасов лекарственных растений. - М., 1986.
- 51с.
21. Энциклопедический словарь лекарственных растений и продуктов животного происхождения: Учебное пособие /Под ред. Г.П. Яковлева, К.Ф. Блиновой. - СПб.: СпецЛит, 1999.
- 407с.
Составители: Н.А.Дурнова, А.М. Павловский, С.И.Веретенников
21