ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «МОСКОВСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ И БИОТЕХНОЛОГИИ ИМЕНИ К.И. СКРЯБИНА» На правах рукописи ЛАЗУТИНА Руслана Рафаилевна ПРИМЕНЕНИЕ НЕСТЕРОИДНЫХ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫХ ПРЕПАРАТОВ ПРИ ЛЕЧЕНИИ СОБАК С АСЕПТИЧЕСКИМ СИНОВИТОМ КОЛЕННОГО СУСТАВА (экспериментальное исследование) 06.02.04- ветеринарная хирургия ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук Научный руководитель: Почетный работник высшей школы РФ, доктор ветеринарных наук, доцент Борисов М.С. Москва-2011 2 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ………………………………………………………………………4 ГЛАВА 1. НЕСТЕРОИДНЫЕ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫЕ ПРЕПАРАТЫ. АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ……………………9 1.1.Нестероидные противовоспалительные препараты. Классификация...9 1.2. Механизм действия нестероидных противовоспалительных препаратов………………………..………………………………………………………………12 1.3. Фармакокинетика нестероидных противовоспалительных препаратов………………………………………………………………………………………..22 1.4. Побочные эффекты нестероидных противовоспалительных препаратов………………………………….…………………………………………………….25 1.5. Клиническое использование нестероидных противовоспалительных препаратов………………………………..……………………………………………30 ГЛАВА 2. ХАРАКТЕРИСТИКА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО МАТЕРИАЛА И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ…………………………….………………..37 2.1. Методика моделирования острого асептического синовита коленного сустава у собак………………………………………………………………………...39 2.2. Методика клинического исследования крови……………………………….42 2.3. Методика исследования биохимического состава сыворотки крови…43 2.4. Методика исследования синовиальной жидкости сустава…………….43 2.5. Методика определения белка в синовиальной жидкости……………….44 2.6. Методика бактериологического исследования синовиальной жидкости………………………………………………………………………………………..44 2.7. Методика рентгенографии коленного сустава у собак………………….45 3 ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ……………………………………………………………...46 3.1. Эффективности применения димексида и новокаиновых блокад у собак контрольной группы…….…………………………………………………………….51 3.2. Эффективность применения препарата кетофен у собак первой опытной группы……………………………………………………………………….58 3.3. Эффективность применения препарата римадил у собак второй опытной группы……………………………………………………………………….68 3.4. Эффективность применения препарата кетофен в сочетании с лигфолом у собак третьей опытной группы…………………………………………....80 3.5. Эффективность применения препарата римадил в сочетании с лигфолом у собак четвертой опытной группы…………………………………………92 ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ…………………………..102 ЗАКЛЮЧЕНИЕ………………………………………………………………………..117 ВЫВОДЫ………………………………………………………………………………..119 ПРИЛОЖЕНИЕ……………………………………………………………………..…121 БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ…………………………………………………………………………… ……………125 4 ВВЕДЕНИЕ В последние годы заболевания суставов у собак получили значительное распространение. Их причины различны: механические, физические, химические, многочисленные биологические факторы (специфические и неспецифические возбудители микробного, вирусного, грибкового характера); нарушение обменных процессов, связанные с кормлением и содержанием животных; генетическая предрасположенность и, наконец, аллергические воздействия, возникающие как под влиянием указанных причин, так и вследствие аутоиммунизации организма продуктами воспаления. Этим объясняется широкий интерес ветеринарных врачей к методам диагностики, лечения и профилактики данной патологии. По данным литературы известно, что болезни суставов и конечностей у животных в целом составляют до 30% от числа всех незаразных болезней, а по отдельным регионам страны до 40%, среди собак этот показатель составляет 10-15%. А по данным московского региона заболевания костносуставной системы составляют 30%. Степень распространения заболеваний суставов увеличивается с возрастом; 95% всех случаев приходится на собак старше 5 лет и более 50%- старше 10 лет. Почти половина случаев артритов встречается у собак крупных пород, особенно часто у немецких овчарок, ротвейлеров, лабрадоров и др. [125,141]. Одним их основных диагностических и прогностических критериев при суставной патологии является исследование синовиальной жидкости. Синовия в здоровых суставах образуется и постоянно пополняется за счет веществ, транссудирующих из крови, и активной секреции клеток покровного слоя синовиальной оболочки. В процессе транссудации в синовиальную жидкость поступают вода, электролиты, протеины и другие вещества. Интенсивность этих процессов обеспечивается структурными особенностями по- 5 кровного слоя синовиальной оболочки, т.е. синовиоцитами, являющимися источником образования синовиальной жидкости. В широко известной работе В.Н. Павловой [47] и других исследователей биохимически и радиоавтографически показана возможность синтеза в синовиоцитах гиалуроната из его предшественников, накопление меченного глюкозамина в зоне аппарата Гольджи, транспортирование гранул к поверхности клетки и поступление в суставную щель. Актуальность темы. К настоящему времени в научной литературе представлено большое количество работ, посвященных всестороннему изучению суставной патологии животных, однако подавляющее большинство данных исследований освещают главным образом вопросы этиологии, патогенеза и лечения заболеваний, связанных со связочным аппаратом и суставным хрящом: Шитов С.Т. [63], Дедух Н.В. [14], Шабалаев И.В [61], Самошкин И.Б. [51,52], Слесаренко Н.А. [51,56], Сomerfold E.J. [90] и другие. При этом исследования синовиальной жидкости суставов животных отражены в немногочисленных работах Павловой В.Н. [47], Березкина А.Г. [4], Борисова М.С. [6,7,8] и требуют дальнейшего всестороннего изучения. Наиболее широко распространенными лекарственными средствами, применяемыми в клинической практике при лечении животных с заболеваниями суставов, являются нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) [62]. Частота их применения определяется тем, что они трудно заменимы при многих заболеваниях, сопровождающихся воспалением, болями и лихорадкой. Эти препараты широко применяются, прежде всего, при воспалительных и дегенеративных заболеваниях суставов и позвоночника (ревматоидный артрит, остеоартроз, межпозвонковый остеохондроз, деформирующий спондилез и т.д.), однако, в последнее время область применения нестероидных противовоспалительных препаратов существенно расширилась, их стали использовать при аутоиммунных заболеваниях собак [33]. 6 Однако, несмотря на несомненную клиническую эффективность, применение нестероидных противовоспалительных препаратов имеет свои ограничения. Это связано с тем, что даже кратковременный прием данных средств в небольших дозах может приводить к развитию побочных эффектов, которые в среднем встречаются примерно в 25% случаев. Поэтому в последние годы особое внимание привлечено к проблеме безопасного применения данных средств [79]. Класс нестероидных противовоспалительных препаратов включает в себя большое количество средств, которые имеют как общие, так и отличительные черты. Они различаются по выраженности анальгетической и антивоспалительной активности, спектру нежелательных осложнений, путям введения и ингибированию циклооксигеназы (ЦОГ)[209]. Большая часть этих препаратов предназначена для гуманной медицины и лишь в последние годы в лечебной практике активно начинают применять НПВП, разработанные специально для ветеринарии. Однако данные, имеющиеся в доступной литературе об эффективности и безопасности применения данных средств у животных противоречивы. Учитывая вышесказанное, разработка и научное обоснование применения нестероидных противовоспалительных препаратов при суставной патологии и коррекция возможных осложнений является актуальной проблемой в ветеринарной медицине. Цель исследования: экспериментальное обоснование эффективности применения нестероидных противовоспалительных препаратов последнего поколения при лечении собак с острым асептическим синовитом коленного сустава. Для реализации цели были поставлены следующие задачи: 1. Установить эффективность применения римадила и кетофена при ле- чении собак с острым асептическим синовитом коленного сустава; 7 2. Изучить динамику морфологических и физико-химических показателей синовиальной жидкости у собак при лечении нестероидными противовоспалительными препаратами; 3. Выявить возможные осложнения при кратковременном применении данных препаратов на основании клинических данных, морфологических и биохимических показателей крови; 4. Подтвердить целесообразность применения препарата лигфол для про- филактики осложнений при использовании кетофена и римадила; 5. Разработать наиболее эффективный и безопасный метод консерватив- ного лечения собак с острым асептическим синовитом коленного сустава нестероидными противовоспалительными препаратами. Научная новизна. Впервые изучена динамика цитоморфологического и физико-химического состава синовиальной жидкости при использовании нестероидных противовоспалительных препаратов у собак с острым асептическим синовитом коленного сустава. Выявлено преимущество лечения асептического синовита нестероидными противовоспалительными препаратами кетофен и римадил в сравнении с традиционным методом, определены более ранние сроки восстановления функции конечности. Установлено отрицательное действие кетофена и римадила на гематологические показатели. Предложен комплексный метод лечения острых асептических воспалительных процессов суставов: сочетанное применение нестероидных противовоспалительных средств и препарата лигфол. Теоретическая и практическая значимость работы. Определена сравнительная эффективность применения кетофена и римадила в эксперименте при остром асептическом воспалении коленного сустава у собак. Показано преимущество применения нестероидных противовоспалительных препаратов при остром асептическом синовите с более быстрым восстановлением функций пораженного сустава животного по сравнению с традиционным методом лечения. 8 Изучены закономерности влияния кетофена и римадила на морфологический состав крови собак при применении нестероидных противовоспалительных препаратов: отмечено умеренное снижение показателей гемоглобина, эритроцитов и тромбоцитов у всех экспериментальных животных. Разработанные схемы лечения собак с использованием нестероидных противовоспалительных средств в сочетании с лекарственным препаратом лигфол успешно применяются в ряде ветеринарных клиник г. Москвы и Московской области, а также используются при прочтении лекций студентам старших курсов (Приложение 1,2,3,4). Основные положения диссертации, выносимые на защиту. 1. Клинико-морфологические показатели синовиальной жидкости и показатели крови при патологии суставов, как оценка эффективности применения нестероидных противовоспалительных препаратов. 2. Клинические и биохимические показатели крови, как контроль влияния нестероидных противовоспалительных препаратов на гомеостаз организма собак. 3. Осложнения при применении кетофена и римадила, их коррекция при помощи препарата лигфол. 4. Методика сочетанного применения НПВП кетопрофен и карпрофен с препаратом лигфол при лечении заболеваний суставов, сроки реабилитации и восстановления функции конечности у собак. Апробация и публикация результатов исследования. По теме диссертации опубликовано 6 работ, из них 4 в изданиях, входящих в перечень ВАК РФ, основные положения которых были доложены и обсуждены на Всероссийской конференции «Ветеринарная медицина – теория, практика и обучение» (Санкт-Петербург, 2007) и на I Всероссийской межвузовской конференции по ветеринарной хирургии (Москва, 2010). 9 ГЛАВА 1. НЕСТЕРОИДНЫЕ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНЫЕ ПРЕПАРАТЫ. АНАЛИТИЧЕСКИЙ ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1. Нестероидные противовоспалительные препараты. Классификация Нестероидные противовоспалительные средства (НПВС) – большая, химически гетерогенная группа лекарственных средств, обладающих сходными механизмом действия и фармакологическими эффектами. НПВС относятся к числу наиболее часто используемых лекарственных препаратов в мировой лечебной практике [12, 13, 21, 32, 34, 35, 36]. История применения противовоспалительных средств уходит в древность. Как написано в египетских папирусах, в XV веке до н.э. для облегчения ревматических болей и лечения различных воспалительных заболеваний использовали вытяжки из растений, содержащих салициловую кислоту (мирт, листья ивы, мелиссы). В 1899 г. на немецкой фирме Байер химиком Феликсом Хоффманом был синтезирован аспирин (ацетилсалициловая кислота), который стал первым из группы нестероидных противовоспалительных препаратов (НПВП) [194]. Широкое применение НПВС определяется уникальным сочетанием противовоспалительных, анальгетических, жаропонижающих и антитромбических свойств, перекрывающих почти весь спектр основных симптомов, наиболее характерных для заболеваний ревматической природы. Такого одновременного сочетания положительных эффектов не наблюдается ни у одного из известных в медицине лекарственных средств. Нестероидные противовоспалительные средства вызывают меньше системных побочных эффектов, чем кортикостероиды. Основными показаниями для их назначения являются воспалительные процессы различного генеза, боль, лихорадка, заболевания соединительной ткани [205]. На сегодняшний день имеется большой арсенал НПВС (более 80), различных по химической струк- 10 туре (таблица 1) [5, 35, 36, 64, 68]. В практической медицине используют для лечения более 100 созданных на их основе одно- и многокомпонентных готовых лекарственных форм (таблетки, капсулы, свечи, растворы для инъекций, кремы, гели, мази и т.д.). Таблица 1 Классификация нестероидных противовоспалительных препаратов по химической структуре (Насонов Е.Л., 1999) Группы препаратов Действующее вещество (торговое название препарата) 1 2 аспирин дифлунисал («Долобид») трисалицилат («Отинум») Производные салициловой кислоты: бенорилат («Бенорал») салицилат натрия метилсалицилат («Санитас») амоксиприн флуфенамовая кислота («Арлеф»**) мефенамовая кислота («Понстан») Производные N-антраниловой кисло- меклофенамовая кислотая («Меклоты (фенаматы): мет») толфенаминовая кислота («Толфедин*») диклофенак («Вольтарен», «Дикло- ген», «Ортофен» ) Производные арилуксусной кислоты: фенклофенак («Фленак»**) алклофенак (**) бромфенак (**) фентиазак («Норведан») толметин («Толектин») 11 Производные гетероарилуксусной кислоты: зомепирак («Зомакс»**) кеторолак трометамин («Кеторол») Продолжение таблицы 1 1 2 индометацин (препараты пролонгированного действия**: «Осмозин», Производные индол/инден уксусные кислоты: «Осмогит», «Амуно Гитс») сулиндак («Клинорил») этодолак («Лодин») ацеметацин ибупрофен («Ибусан», «Ипрен») карпрофен («Римадил», «Норо- карп»*) флурбипрофен («Фробен») локсопрофен кетопрофен («Кетофен»*) напроксен («Напросин») Производные арилпропионовой кислоты: ведапрофен («Квадрисол»*) фенопрофен («Фенопрон») фенбуфен («Ледерфен») супрофен («Супрол»**) индопрофен («Флозинт»**) тиапрофеновая кислота («Сургам») беноксапрофен («Опрен», лекс»**) пирпрофен («Ренгазил») фенилбутазон («Бутакот») «Ораф- 12 оксифенилбутазон Пиразолидиндионы: («Тандакот», «Тандерин»**) азапропазон («Ревмокс») фепразон («Метразон»**) Продолжение таблицы 1 1 2 пироксикам («Фелден») изоксикам («Максикам»**) судоксикам Оксикамы: лорноксикам («Ксефокам») теноксикам («Мобифлекс») мелоксикам («Метакам»*, «Мовалис») целекоксиб Коксибы: рофекоксиб эторикоксиб Сульфанилиды: Нимесулид проквазон буфексамак эпиразол Другие: флюрпроквазон тиноридин колхицин * - НПВП специально разработанные для животных; ** - НПВП изъятые в промышленно развитых странах. 1.2. Механизм действия нестероидных противовоспалительных препаратов В 1971 г. группа исследователей из Великобритании во главе с J. Vane выдвинули гипотезу, что механизм действия аспирина и ему подобных пре- 13 паратов заключается в ингибировании циклооксигенезы (ЦОГ) – ключевого фермента метаболизма арахидоновой кислоты [40,46,121,145,163,174,195]. Арахидоновая кислота, образующаяся из мембранных фосфолипидов под действием фосфолипазы А2, с одной стороны, является источником медиаторов воспаления (противовоспалительных простагландинов и лейкотриенов), а с другой стороны, из нее синтезируется ряд веществ, участвующих в физиологических процессах организма (простациклин I2, тромбоксан А2, гастропротекторные и вазодилатирующие простагландины и др.). Механизм арахидоновой кислоты идет по двум путям – циклооксигеназному (с образованием простагландинов, простациклина I2, тромбоксан А2) и липооксигеназному (с образованием лейкотриенов) [104,144] (рис. 1). Фосфолипидная мембрана Стероидные ингибиторы Фосфолипаза А2 НПВП Арахидоновая кислота PGG2 PGН2 ЦОГ1,2 lyso-PAF PAF 12lipoxy genas 5-lipoxygenase 15-lipoxygenase 5 HPETE 12 HPETE PGD2 PGE2 PGF2 DiHETEs 12 HETE 5,15 diH(P)ETES 5 HETE LTA4 15 - HPETE LTB4 PGI2 LTC4 LTD4 14,15 diHETEs TXA2 LTE4 8,15 diH(P)ETE 15 HETE 5,14,15 triHETE 5,6,15 triHETE 14 Рис. 1. Механизм действия НПВП (Lees P., May S.A., McKellar Q.A., 1991) Простагландины (ПГ) являются главными медиаторами воспаления благодаря наличию широкого спектра биологических эффектов [205]. ПГ (PGE2,PGD2,PGI2) вызывают дилатацию артериол, но не сказываются напрямую на сосудистую проницаемость. Тем временем, действие медиаторов, подобных гистамину и брадикинину, которые усиливают сосудистую проницаемость, улучшается через сосудорасширяющий ПГ - это важный пример совместного действия воспалительных медиаторов. Медиаторы, лежащие в основе клеточных миграций – лейкотриены В4, фактор тромбоцитарной активности (FAP или PAF) и цитокины, например, интерлейкин-1. Медиаторы, вызывающие боль состоят из гистамина и брадикинина, действие этих медиаторов на ноцицепторы значительно улучшаются через сенсибилизацию ПГ, PGE2,PGD2,PGI2. Таким образом, признаки воспаления возникают из-за действий и комплексных взаимодействий между воспалительными медиаторами [94]. Особенно большой прогресс в расшифровке механизмов противовоспалительной активности и природы побочных эффектов НПВП был достигнут в начале 90-х годов. Во-первых, было установлено, что циклооксигеназа является бифункциональным, связанным с мембраной гемопротеином, располагающимся в эндоплазматическом ретикулуме вблизи места высвобождения арахидоновой кислоты из мембранных фосфолипидов. Циклооксигеназа имеет двойную каталитическую активность: катализирует окисление арахидоновой кислоты в простагландин G2, а за счет своей пероксидазной активности конвертирует ПГG2 и ПГН2, который является предшественником всех типов простагландинов и тромбоксана [35, 36, 103]. 15 Во-вторых, появились новые факты, позволившие рассматривать ПГ как центральные паракринно/аутокринные медиаторы важнейших процессов, протекающих в организме человека: эмбриогенез, овуляция и беременность, костный метаболизм, рост и развитие клеток нервной системы, репарация тканей, функция почек и ЖКТ, тонус сосудов и свертывание крови, иммунный ответ и воспаление, клеточный апоптоз и др. В-третьих, было открыто существование двух изоформ ЦОГ: структурного изофермента (ЦОГ-1) и индуцируемого изофермента (ЦОГ-2) [35,36,59,92,103,104,110, 111, 123, 157, 180, 182, 208, 209]. Хотя приблизительно 60% изоформ ЦОГ-1 и ЦОГ-2 являются гомологичными, с молекулярным весом 70 kD, они имеют сходные механизмы метаболизма арахидоновой кислоты и определенные различия [179]: различные генетические последствия для каждой изоформы. Гены регулируются двумя независимыми системами, хотя ферментные реакции, катализируемые ими, идентичны; место связывания ЦОГ-2 структурно на 25% больше, чем для ЦОГ-1, с вторичным местом связывания дополнительно к каталитическому центру. Это позволило создавать препараты, блокирующие активность ЦОГ-2 в концентрациях с минимальным эффектом на ЦОГ-1. Одно и то же вещество может действовать как ингибитор ЦОГ-2 в низкой концентрации и как конкурентный ингибитор ЦОГ-1 в высокой. Молекулярная основа для такого взаимодействия не вполне понятна; ЦОГ-1 представлена в большинстве тканей, в условиях воспаления активность этой изоформы остается неизменной или с небольшим увеличением — в 2-4 раза. В меньших количествах ЦОГ-2 найдена в таких тканях, как мозг, кишечник, почки, яички, щитовидная и поджелудочная железы. При воспалении экспрессия ЦОГ-2 увеличивается в 20 и более раз; 16 кроме арахидоновой кислоты, ЦОГ-2 способна участвовать в метаболизме других субстанций, таких как линолевая и линоленовая кислоты. установлено, что ЦОГ-1 находится в основном в цитоплазме или связана с эндоплазматическим ретикулумом, тогда как ЦОГ-2 в больших количествах определяется в перинуклеарном пространстве. Методами молекулярной биологии расшифрована трехмерная пространственная структура циклооксигеназы. Трехмерные структуры ЦОГ-1 и ЦОГ2 сходны, но все же, имеют небольшие различия. Так, ЦОГ-2 имеет гидрофильный и гидрофобный карманы (каналы), в то время как в структуре ЦОГ1 определяется лишь гидрофобный карман (канал). Этот факт позволил разработать ряд относительно селективных (мелоксикам, нимесулид, набуметон) и высокоселективных (целекоксиб, рофекоксиб) ингибиторов ЦОГ-2 [88]. Молекулы этих лекарственных средств своей гидрофобной частью связываются с гидрофильным карманом (каналом), а гидрофильной частью – с гидрофобным карманом. Таким образом, они способны связываться лишь с ЦОГ-2, содержащей оба кармана (канала). Большинство других НПВС, взаимодействуя лишь с гидрофобным карманом, связываются как с ЦОГ-2, так и с ЦОГ-1. В верхней части гидрофобного канала присутствуют молекулы аминокислот тирозина в положении 385 и серина в положении 530. Необратимое ингибирование ЦОГ ацетилсалициловой кислоты связано с ацетилированием серина в положении 530 [75,103]. Установлено также, что связывающий участок ЦОГ-2 несколько шире, чем у ЦОГ-1, более «гибок» и имеет дополнительную боковую гидрофильную «полость» (карман, канал), формирование которой объясняют заменой крупной молекулы изолейцина в положении 523 и 434 в ЦОГ-1 на небольшую молекулу валина в ЦОГ-2, а также гистидина в положении 513 на аргинин [114]. Химическая структура некоторых НПВС, синтезированных в последние годы, более селективных в отношении ЦОГ-2 in vitro, отличается от структуры «традиционных» НПВС 17 наличием ригидной боковой цепи, содержащей сульфоновую, сульфониловую или сульфонамидные группы [114]. Гипотеза селективности изоферментов ЦОГ способствовала созданию классификации блокаторов ЦОГ [22,103,150]. 1. ЦОГ-1 - селективные ингибиторы (низкие дозы аспирина). 2. ЦОГ - неселективные блокаторы (большинство нестероидных противовоспалительных препаратов, включая используемые в ветеринарии: карпрофен, кетопрофен, ведапрофен, флуниксин, толфенаминовая кислота [135,136,137,138,139]). 3. Преимущественные ЦОГ-2 - ингибиторы (мелоксикам и нимесулид, которые имеют меньшее количество побочных эффектов в сравнении со стандартными НПВП, но сохраняется риск развития их при использовании в высоких дозах). 4. Селективные ЦОГ-2 - ингибиторы (целекоксиб, рофекоксиб, валдекоксиб, парекоксиб, эторикоксиб). Эта классификация базируется на данных биологических, биохимических, фармакологических и клинических исследований, среди которых важное место занимает характеристика функциональной активности НПВС в отношении изоформ ЦОГ in vivo и in vitro. При этом определяют дозу препарата, необходимую для 50% подавления (IC50) ЦОГ-1 и ЦОГ-2. Так, преимущественные ингибиторы ЦОГ-2 в некоторых системах in vitro подавляют ЦОГ2 примерно в 2-3 раза сильнее, чем ЦОГ-1. Однако, in vivo (при использовании метода цельной крови) в максимальной терапевтической концентрации (мелоксикам) в определенной степени ингибируют ЦОГ-1 [165]. К специфическим ингибиторам ЦОГ-2 относят препараты, которые в максимальной терапевтической концентрации не вызывают значительного подавления ЦОГ1, а при исследовании in vitro подавляют ЦОГ-2 более чем в 100 раз активнее, чем ЦОГ-1. Современная концепция гласит, что ЦОГ-1 является конституциональной формой фермента, выполняющего важные физиологические 18 функции в организме и ответственного за синтез простагландинов, простациклина I2 и тромбоксана А2. ЦОГ-1 структурный фермент, постоянно присутствующий в клетках различных органов, регулирует продукцию простагландинов, участвующих в обеспечении нормальной функциональной активности клеток. ЦОГ-1 присутствует в тромбоцитах и необходима для синтеза тромбоксана А2. Фармакологическое ингибирование биосинтеза тромбоксана ведет к потере способности тромбоцитов к нормальной агрегации в ответ на многие, но не все стимулы [54,97]. Ацетилсалициловая кислота – единственная из НПВС – ингибирует ЦОГ-1 в тромбоцитах необратимо, в то время как другие нестероидные противовоспалительные препараты ингибируют активность циклооксигеназы-1 в тромбоцитах обратимо, и агрегационная функция тромбоцитов восстанавливается полностью в течение первых суток (диклофенак, ибупрофен, флурбипрофен, индометацин) – 4 (напроксен) суток после отмены препарата. Активность ЦОГ-1 в эндотелиальных клетках ответственна за продукцию простациклина I2, который осуществляет контроль естественной физиологической цитопротекции (защиты клеток слизистой оболочки от действия повреждающих факторов) в слизистой оболочке желудка. Простагландины, синтезируемые при участии ЦОГ-1, обеспечивают защиту слизистой от повреждающего действия вводимых в желудок веществ, так же как от действия желудочного сока [13,201]. В почках простагландины синтезируются в основном в мозговом веществе, восходящем сегменте петли Генли и в корковом слое. Почечные простагландины осуществляют контроль следующих функций: общий почечный кровоток, распределение почечного кровотока между отделами почек, реабсорбция ионов натрия и воды, высвобождение ренина. Все эти функции (за исключением секреции ренина) являются ЦОГ-1 зависимыми [103]. Секреция ренина связана с активностью ЦОГ-2, так как её конституциональное 19 присутствие в macula densa было показано иммуногистохимически, а активность зависит от снижения уровня ионов натрия [103]. ЦОГ-2 в норме присутствует в тканях в крайне низкой концентрации, но при развитии воспаления её уровень резко возрастает [59,112,116]. ЦОГ-2 является индуцируемой изоформой фермента, участвующего в синтезе противовоспалительных простагландинов. Существование ЦОГ-2 впервые предложили Needleman с соавторами (1990), которые продемонстрировали, что бактериальные липополисахариды увеличивают синтез простагландинов в моноцитах человека in vivo [104]. Это увеличение ингибировалось дексаметазоном, и было связано с синтезом de novo ЦОГ-2. Циклооксигеназа -2 стимулируется в мигрирующих и других клетках медиаторами воспаления цитокинами. В последующем ЦОГ-2 была клонирована [130]. Полагают, что именно ЦОГ-2 принимает участие в продукции простагландинов, вовлеченных в процессы воспаления, мутагенеза, клеточной пролиферации и деструкции [35,36,104,114,130,152,179,180]. Действительно, мощными индукторами активности гена ЦОГ-2 являются интерлейкин-1, фактор некроза опухоли, эпидермальный фактор роста, и другие биологически активные вещества, которые являются противовоспалительными агентами [35,36,103,104,112]. ЦОГ-2 является индуцируемой формой, она экспрессируется макрофагами, синовиоцитами, фибробластами, гладкой мускулатурой сосудов, хондроцитами и эндотелиальными клетками после индуцирования их цитокинами или факторами роста и является ответственной за воспалительные процессы в организме [78,93,127,149,197,199]. В 1994 г. J. Vane сформулировал гипотезу, согласно которой противовоспалительное, анальгетическое и жаропонижающее действие НПВП связано с их способностью ингибировать ЦОГ-2, в то время как наиболее часто встречающиеся побочные эффекты (поражение ЖКТ, почек, нарушение агрегации тромбоцитов) связаны с подавлением активности ЦОГ-1 [198]. Это 20 создало теоретические предпосылки для создания нового класса НПВП, обладающих способностью селективно ингибировать ЦОГ-2, применение которых может сделать лечение этими препаратами более безопасным [198]. Получены данные о том, что большинство НПВС в большей степени подавляют активность циклооксигеназы-1, чем ЦОГ-2 [33,34,97,113,119]. Открытие циклооксигеназы-2 определило новый подход к разработке новых нестероидных противовоспалительных средств. ЦОГ-2, в отличии от ЦОГ-1, индуцируется в мигрирующих клетках бактериальными липополисахаридами, цитокинами, факторами роста. Предполагается, что избирательное ингибирование ЦОГ-2 должно избирательно подавлять биосинтез простагландинов в очагах воспаления, при этом активность ЦОГ-1 не будет изменяться, и биосинтез простагландинов в других тканях, таких как желудочнокишечный тракт, почки не будут затронуты. Разработаны новые соединения, имеющие высокую избирательность по отношению к ЦОГ-2 [146]. Предполагалось, что внедрение таких препаратов позволит создать новые высокоэффективные НПВС, без повреждающего влияния на слизистую желудочнокишечного тракта. Из новой генерации НПВС одним из первых был препарат предшественник набуметон [3,35,36], а затем создан препарат этодалак, который в отличие от набуметона вводится в метаболически активной форме. В последующем на фармацевтическом рынке появился препарат мелоксикам [35,36,125,152]. По своей терапевтической активности эти препараты не уступают пироксикаму, напроксену, диклофенаку, но оказывают значительно менее выраженное воздействие на слизистую оболочку желудочнокишечного тракта [10,35,36,125,152]. В последние годы появились новые аспекты о роли ЦОГ-зависимого синтеза простагландинов в норме и патологии и ЦОГ-независимых механизмах эффективности и токсичности НПВС. Точка зрения о том, что ЦОГ-1 является «физиологическим», а ЦОГ-2 – «патологическим» ферментом, некоторыми авторами в настоящее время пересматривается [40,72,97]. Имеют- 21 ся данные о повышении проницаемости защитного барьера кишечника для макромолекул при длительном применении НПВС [28]. Полученные данные о физиологической роли ЦОГ-2 зависимого синтеза простагландинов в заживлении язв, «адаптивной цитопротекции» клеток желудочно-кишечного тракта к токсическим веществам и стрессу, регуляции овуляции, синтезе простациклина клетками эндотелия сосудов, репарации при переломах костей [32]. Применение специфических ингибиторов ЦОГ-2 при эффективности, сопоставимой с другими, в том числе, неселективными нестероидными противовоспалительными средствами, сопряжено с достоверно меньшей частотой развития желудочно-кишечных изъязвлений и кровотечений из язв [108]. В то же время, в обзоре кокрановской библиотеки показано, что применение рофекоксиба связано с большим риском развития сердечно-сосудистых заболеваний и нефатального инфаркта миокарда на фоне развития тромботических осложнений [108]. В связи с чем, препарат отозван с рынка США. Вполне возможно, что развитие этого побочного эффекта характерно для всего класса коксибов – селективных ингибиторов ЦОГ-2. Ранее предполагалось, что нестероидные противовоспалительные препараты, в том числе и специфические ингибиторы ЦОГ-2, могут замедлять прогрессирование болезни Альцгеймера, особенностью которой является воспалительная реакция в структурах головного мозга. Однако в более поздних клинических исследованиях [85] и систематических обзорах [188] данное подтверждение не подтвердилось. В настоящее время признано, что НПВС выполняют большое разнообразие дополнительных действий на молекулярном и клеточном уровнях, хотя степень их участия в терапевтических эффектах неясна [144,195]. Ингибиция ЦОГ в каскаде арахидоновой кислоты, ингибиция действия ПГ на их рецепторы, ингибиция 5-липооксигеназы, которая действует на арахидоновую кислоту для образования лейкотриенов, ингибиция действия брадикинина, су- 22 прессия освобождения цитокинов, например интерлейкина-1, ингибиция освобождения лизосомальных и нелизосомальных ферментов, модуляция синтеза оксида азота, ингибиция нейтрофильной активности, угнетающей также освобождение свободных радикалов, например, гидроксил, и супероксидных радикалов и ферментов, например, β-глюкоронидазы. Недавно из тканей мозга собаки была выделена третья изоформа фермента циклооксигеназы – ЦОГ-3, после этого было предложено, что она является центральным медиатором болевых реакций. Далее было показано, что ЦОГ-3 является разновидностью ЦОГ-1 и ее фактическая функция до сих пор не ясна. Однако, существует предположение, что некоторые НПВП, давно существующие на рынке препаратов, такие как парацетамол, дипирон и изопирин являются селективными ингибиторами ЦОГ-3 [85,185]. Механизм анальгетического и антипиретического действия ацетаминофена (парацетамола) отличается от механизма действия НПВС. Считается, что ацетаминофен угнетает синтез простагландинов путем блокады ЦОГ непосредственно в гипоталамических центрах терморегуляции и боли. Слабая периферическая ЦОГ-ингибирующая активность позволяет объяснить отсутствие у ацетоминофена (который является простым анальгетиком), в отличие от НПВС, противовоспалительной активности, а также отсутствие антиагрегатного, токолитического эффектов, бронхоспазма и язвообразования. Ацетаминофен вызывает снижение концентрации метаболитов простагландинов в моче, но не ингибирует их синтез тромбоцитами и клетками слизистой оболочки желудка [85,113]. За границей введен новый класс НПВП - двойные ингибиторы (dual inhibitors), которые ингибируют два фермента, регулирующих биотрансформацию арахидоновой кислоты, ЦОГ и 5-липоксигеназу (5-LO). На данный момент лицензирование прошли два препарата: тепоксалин, используемый в ветеринарии [66,99,107,128,159,193]. и ликофелон, применяемый в медицине 23 1.3. Фармакокинетика нестероидных противовоспалительных препаратов Большинство НПВС являются органическими малолипофильными кислотами (рКа=3,0 а 5,5). Отсюда, поглощение, начиная с желудка и тонкой кишки собак и кошек, улучшается посредством блокады ионов и их диффузии (желудочный сок и химус имеют значение рН низкие, которые для плазмы составляют 7,4). В случае, когда НПВС сильно связаны с плазматическими протеинами, переход в интерстициальную жидкость ограничен, и объем центрального отделения, как объем распределения имеют тенденцию быть слабыми. Имеются несколько исключений, например толкофеноменовая кислота, у телят, собак и поросят и флюниксин у телят имеют объемы распределения более высокие, действительно, кажется по причине желчной секреции и энтерогепатической рециркуляции. Фармакокинетика рециркуляции объединенной формы толкофеноменовой кислоты стала объектом изучения на собаках [166]. Благодаря ограниченному распределению НПВС аккумулируются в воспалительном экссудате, тогда как молекулы, связанные с плазматическим протеином минуют циркуляцию в то время, когда образуется отечная жидкость. Некоторые важные фармакокинетические свойства НПВС изложены в таблице 2 [143]. Таблица 2 Фармакокинетические свойства НПВС (Lees.P, Landoni M.F., Giraudel J., Toutain P.L., 2004) Фармакокинетические свойства Значения 1 2 У моногастричных видов желудочная абсорбция облегчена блокадой диффузии Биодоступность в общем более 70% и воз- (механизм Хендерсона – Хасельбака) можное приближение к 100% вследствие присутствия кислой рН в желудке Хорошо и быстро абсорбируется, начиная Биодоступность может приближаться к с момента инъекции подкожной или внут- 100% римышечной 24 Очень высокая степень связывания с плаз- 1.Объем распределения слабый – менее 0,3 матическими протеинами – в общем, пре- л/кг; вышает 99% 2.Внутренняя аккумуляция немедленная, долгое освобождение в воспалительном экссудате (протеиновая утечка связана с молекулами отечной жидкости); Варианты, отмеченные по видам и периоду Данные периоды полувыведения не пред- полувыведения сказуемы и не являются видоспецифичными. Необходимо обосновывать различное использований для каждого вида. Таблица 3 Время полувыведения НПВС (в час) у лошадей (Landoni M.F., Lees P., 1996) Молекула Плазма (полувыведение) Воспалительный экссудат (полувыведение). Кетопрофен S + 1,5 23 Кетопрофен R - 1,1 20 Флюниксин 3,0 16 Фенилбутазон 5,6 24 Все нестероидные противовоспалительные препараты – являются слабыми органическими кислотами, выделения которых через почки будет варьироваться, теоретически, в соответствии с рН мочи. Таким образом, щелочная моча жвачных животных и лошадей, будет способствовать ее захвату, и будет выделяться с мочой в ионизированной форме. Соответственно, кислая моча собак и кошек будет разрушать ионизацию, и неионизированные молекулы будут хорошо реабсорбироваться, начиная с почечных каналец (т.к. они растворимы в жире). Между тем, высокое содержание плазматических протеинов, связывающих большую часть НПВС, в первом случае сильно уменьшат их проход в клубочковый ультрафильтрат. Отсюда только маленькие количества могут быть выделены в мочу. У собак почечная недостаточность ассоциировалась с увеличением освобождения толфеноменовой ки- 25 слоты и была высказана мысль, что почечная недостаточность могла увеличить печеночный метаболизм или изменить энтерогепатический цикл молекулы [143]. Опубликованные данные ограничены, вероятно, что большая часть НПВС метаболизирована на уровне печени в менее активный метаболит. Это предполагается главным механизмом уменьшения активности молекулы, к тому же генетическая изменчивость в зависимости от видов, от времени полувыведения (таблица 4) отражает изменения гепатической метаболитической способности в зависимости от видов. Все метаболиты НПВС не являются неактивными. Таблица 4 Периоды полувыведения НПВС(ч) (Lees.P, Landoni M.F., Giraudel J., Toutain P.L., 2004) Лекарства Собака Кошка Лошадь Аспирин (салици- 9 22-45 1-3 лат) 8-15 (RS) 15 (S) 15(S) Карпрофен% 3,7 20 (R) 32 (R) Флюниксин 3,5(RS) 2 1,6-2,1 Кетопрофен % 12-36 1,36 (S) 1,0 (S) Мелоксикам 35-74 0,53 (R) 0,7 (R) Напроксен 2,6-6,0 - 3 Фенилбутазон 48 - 5 Пироксикам 5-6,5 - 4,5-9,0 Толфенаменовая 13-17 (RS) - - 11 7,5 - 0,76(S), 2,22 (R) к-та Ведапрофен % - %-эти лекарства вводятся в виде рацемической смеси (50\50), времена полувыведения различаются в зависимости от составляющих. S,R- энантомеры, RS=полувыведение для всего лекарства. 1.4. Побочные эффекты нестероидных противовоспалительных препаратов 26 Существенными факторами, ограничивающими использование НПВП, являются их побочные эффекты [23]. Между 1984 и 1991 годами CNITV было проинформировано о 248 случаев острых отравлений домашних животных (собак, кошек, лошадей) [129], связанных с приемом НПВП [122]. Среди побочных эффектов можно выделить общие, характерные для данной группы, связанные с механизмом их действия и специфические, свойственные каждому конкретному препарату. Побочные действия НПВП подразделяются на гематологические, токсическое действие на желудочнокишечный тракт, печень, почки, центральную нервную систему, сердечнососудистую и дыхательные системы, тератогенные эффекты, эмбриотоксичность и аллергенные свойства [53,120]. Установлено, что наиболее частыми побочными эффектами для большинства НПВП являются их повреждающее действие на слизистую желудочно-кишечного тракта, которое может достигать 75% среди всех их побочных эффектов [1,62]. 1.4.1.НПВП-гастропатии В настоящее время связь между приемом НПВП и повреждениями желудочно-кишечного тракта четко установлена [4,11,12,14,15,17,64,67,103, 115,167,169,187,201,210]. У пациентов с остеоартритом, принимающих НПВП, язвообразование отмечается в 15-20% случаев. Осложнения язвенной болезни (например, кровотечение и перфорация) гораздо чаще встречаются у пациентов, принимающих эти препараты, по сравнению с пациентами, не принимающими их. Суммарный риск поражения желудочно-кишечного тракта примерно в 3 раза выше, чем в контроле [77,80,102,117,160,162,171, 177,183,189,203]. НПВС, прерывая циклооксигеназный путь метаболизма арахидоновой кислоты, блокируют синтез простагландинов и нестабильных метаболитов не только в очагах воспаления, но и в других органах и тканях. В связи с этим развитие гастропатии рассматривается как одно из их системных проявлений побочного действия, обязательно присущего данным средствам. Угнетение 27 ЦОГ-1 – основной патогенетический механизм развития НПВП- индуцированных гастро - и дуоденопатий [11,14,15,59,64]. Гастроэнтерологические побочные эффекты НПВП условно подразделяются на несколько основных категорий [43,147]. 1. Симптоматические (диспепсия): тошнота, рвота, диарея, запоры, изжога, боли в эпигастральной области. 2. НПВП-гастропатия (NSAID-induced gastropathy): субэпителиальные геморрагии, эрозии и язвы желудка, реже – двенадцатиперстной кишки, выявляемые при эндоскопическом исследовании, и желудочно-кишечные кровотечения. 3. Энтеропатия и воспаление кишечника. Современная концепция профилактик НПВП-гастропатии опирается на выделение пациентов с высоким риском осложнений со стороны желудочнокишечного тракта. Все они условно могут быть разделены на две большие группы. Первую составляют модифицируемые факторы риска: прием высоких доз НПВП или нескольких препаратов этой группы одновременно. Ко второй группе относятся пожилой возраст, язвенный анамнез, применение низких доз аспирина, антикоагулянтов, глюкокортикоидов [133,134,185]. Лечение гастродуоденальных эрозий и язв, вызванных приемом НПВП, предполагает их отмену, уменьшение дозы НПВП или замену препарата парацетамолом. Если отмена препарата нестероидного противовоспалительного средства по каким-либо причинам невозможна, противоязвенную терапию проводят на фоне продолжающегося приема НПВП, сроки заживления гастродуоденальных язв и эрозий в таких случаях увеличивается [2].Наиболее эффективными препаратами для лечения являются мизопростол (200 мкг 2-3 раза в сутки) и, вероятно, омепразол (20-40 мг/сут). Антагонисты Н2рецепторов можно использовать при рубцевании язвенного поражения двенадцатиперстной кишки и желудка (особенно при наличии инфекции Н.pylory), однако возможность применения этих препаратов (по крайней ме- 28 ре в стандартных дозах) для профилактики НПВП-индуцированных язв желудка в настоящее время не доказана[173].Ряд исследователей считают, что только ингибированием синтеза простагландинов в слизистой желудочнокишечного тракта нельзя объяснить гастротоксическое действие. Ингибирование циклооксигеназы неизбежно влечет за собой избыточную продукцию лейкотриенов, активных констрикторов микрокапилляров и повышенное генерирование свободных радикалов вследствие повышенной активности 5-липооксигеназы, способствует углублению сосудистых нарушений и развитию локальной ишемии [126]. Показано, что ингибиторы 5липооксигеназы [151] и антагонисты 5-лейкотриенов при совместном введении с индометацином значительно снижали ульцерогенное действие индометацина у мышей [168]. Более десяти лет внимание исследователей сосредоточено на изыскании средств, способных избирательно тормозить липооксигеназный путь метаболизма арахидоновой кислоты. Изучаются представители различных классов соединений: частично насыщенные ароматические соединения, гидроксаматы, восстанавливающие агенты и другие [69]. Обсуждению эффективности различных препаратов посвящены обзоры [70,156]. Блокатор СуsLT1-рецепторов пептидолейкотриенов монтелукаст натрия оказывал профилактическое действие при повреждении слизистой желудка у крыс аспирином [25]. Вехой в понимании противовоспалительных эффектов стероидов стало установление ингибирующего их влияния на индукцию NO – синтетазы (синтетазы оксида азота (II)) – фермента, экспрессируемого в воспалительных клетках при их активации [96]. Этот эффект стероидов опосредуется через активацию их рецепторов и имеет место при низких концентрациях, достигаемых введением их в терапевтических дозах. Сила ингибирующего действия стероидов на индукцию NO – синтетазы коррелирует с их противовоспалительной активностью [158]. Этот механизм объясняет ряд сопутствующих эффектов глюкокортикоидов, в частности, провокацию язвообразова- 29 ния, способствование распространению инфекции [75,118,186]. В качестве представителей поколения НПВС, высвобождающих оксид азота, можно назвать нитрофенак (диклофенак, обогащенный донором NO) [63], NCX-530 (индометацин, освобождающий оксид азота) [132]. Дальнейшая разработка NO- высвобождающих НПВС позволит создать новые эффективные противовоспалительные средства без ульцерогенных свойств [61,95, 131,176, 202]. 1.4.2.Нарушение функций почек К нарушениям функций почек, связанным с применением НПВП относятся: вазоконстрикция, снижающая скорость клубочковой фильтрации и увеличивающая содержание креатинина в крови; задержка натрия и увеличение объема циркулирующей крови; папиллярный некроз; гиперкалиемия; гипонатриемия; острый аллергический интерстициальный нефрит, обусловленный использованием фенопрофена; острый канальцевый некроз при лечении фенилбутазоном; интерстициальный нефрит в ответ на применение аспирина и фенацетина; острая и хроническая почечная недостаточность [75,89,109]. ПГ играют важную роль в физиологической регуляции сосудистого тонуса и функции почек. Модулируя вазоконстрикторный и антинатрийуретический эффект ангиотензина II, они взаимодействуют с компонентами ренин-ангиотензиновой системы, обладают вазодилатирующей активностью в отношении сосудов почек (ПГЕ2 и простациклина), оказывают прямое натрийуретическое действие (ПГЕ2). Ингибируя системный и локальный (внутрипочечный) синтез ПГ, НПВП могут вызывать увеличение артериального давления не только у больных с артериальной гипертензией, но и у пациентов с нормальным артериальным давлением [98]. Риск НПВПиндуцированной АГ особенно высок у старых животных, длительно принимающих НПВП, с сопутствующими заболеваниями сердечно-сосудистой системы. 30 В последние годы определенное подтверждение получила точка зрения о том, что НПВП, более селективные в отношении ЦОГ-2, чем ЦОГ-1, не только в меньшей степени повреждают ЖКТ, но проявляют и меньшую нефротоксическую активность. Установлено, что именно ЦОГ-1 экспрессируется в атериолах, клубочках почки и собирательных канальцах. ЦОГ-1 – зависимый синтез ПГ играет важную роль в регуляции периферической сосудистой резистентности, почечного кровотока, клубочковой фильтрации, экскреции натрия, синтеза антидиуретического гормона и ренина. По данным Л.Е. Насонова, лечение препаратами, более селективными в отношении ЦОГ-2 (например, ибупрофен в низких и средних дозах), ассоциируется с меньшим риском АГ по сравнению с менее селективными препаратами (индометацин и пироксикам). 1.4.3.Другие побочные эффекты Гепатотоксичность. Клиренс нестероидных противовоспалительных препаратов осуществляется преимущественно путем печеночного метаболизма с образованием неактивных метаболитов, экскретируемых с мочой. Некоторый подъем печеночных ферментов, особенно аминотрансфераз (АЛТ, АСТ), в определенной степени характерен при применении любого НПВС. Подобная реакция впервые была замечена при использовании аспирина у пациентов с системной красной волчанкой и ювенильным ревматоидным артритом. Случаи тяжелого идиосинкразического гепатита имели место при применении диклофенака, сулиндата и фенилбутазона. Отмечены случаи холестаза. Гепатотоксичность обычно выявляется в первые 6 месяцев лечения. Поэтому необходим контроль функций печени в течение первого месяца приема препарата и в дальнейшем - каждые 3 месяца. [170,190]. К прочим побочным эффектам относится снижение свертываемости крови, агранулоцитоз, арегенеративная и гемолитическая анемия, нарушение познавательной функции, сердечная недостаточность, эмбриотоксичность, возможность тератогенности. 31 1.5.Клиническое использование нестероидных противовоспалительных препаратов Основные показания для применения НПВП – острые и хронические заболевания различной природы и локализации, сопровождающиеся болью и воспалением. Салицилат натрия – первое синтетическое НПВС, было применено клинически в медицине и ветеринарии около 150 лет назад. Появление ацетилсалициловой кислоты (аспирин) 100 лет назад, ознаменовало начало эры борьбы с болью и воспалением через применение НПВС. С того времени многочисленные действующие начала применялись в медицине человека и ветеринарии, например, фенилбутазон стал применяться с 60-х гг. И аспирин и фенилбутазон используются в ветеринарии до сих пор. Другие средства сейчас уже применяются в европейской ветеринарии домашних животных, включая кетопрофен, карпрофен, ведапрофен, меклофенаменовая кислота, толкофенаменовая кислота, флуниксин, мелоксикам, нимесулид, дипирон и рамифеназон, тепоксалин. За исключением нимесулида и новых молекул, НПВС являются по химическому строению карбоксиловыми или эноловыми кислотами. Терапевтическое применение НПВП [82,142,143,148,153,155] представлено в таблице 5. Лечение заболеваний опорно-двигательной системы У собак и лошадей НПВП чаще всего применяют при заболеваниях опорно-двигательного аппарата (артрозы, артриты, травмы, вывихи, послеоперационные отеки, грыжи межпозвоночных дисков и т.д.). НПВП в основном назначаются старым животным, которые страдают артропатиями, в первую очередь с точки зрения того, что эта группа препаратов эффективно устраняют боль, которой сопровождаются данные заболевания (рисунок 2). Таблица 5 Фармакологическое действие и терапевтическое использование НПВС (Lees.P, Landoni M.F., Giraudel J., Toutain P.L., 2004) Фармакологическое действие Терапевтическое использование 32 Анальгетическое Устранение воспалительной боли Уменьшение анормально повышенной Антипиретическое температуры тела в случае лихорадки Противовоспалительное Уменьшение оэдемы и или инфильтрации лейкоцитов Устранение сердечно-сосудистых и биохи- Антиэндотоксемическое мических изменений производимых бактериальными эндотоксинами Ингибиция образования тромбов через су- Антитромботическое прессию агрегации тромбоцитов Хондропротективное Защита хряща от разрушения Предполагается положительный эффект Противораковое (антиканцерогенное) благодаря ингибиции ЦОГ-2 при раке ободочной кишки людей Воспаление Да Нет Безопасный НПВП в низкой дозе (кетофен, римадил) Простой аналгетик 7 – 10 дней Эффективность терапии? Нет Подобрать эффективную дозу или другой НПВП Риск побочных эффектов Нет Да Профилактика побочных эффектов (ранитидин, мизопростол) 33 Да Продолжить лечение Контролировать эффективность лечения и побочные эффекты Рис. 2. Алгоритм лечения нестероидными противовоспалительными препаратами (Насонов Е.Л., 2000) Существует мнение о дегенеративных изменениях хряща при лечении остеоартритов НПВП. Экспериментальные исследования показали, что некоторые НПВП, включая аспирин, ускоряют эрозию хряща. Другие НПВП не вызывают никакого побочного эффекта, а некоторые увеличивают скорость синтеза хрящевого матрикса (протеогликанов) хондроцитами или хрящевыми эксплантами в тканевой культуре. Это было показано в исследованиях in vitro на хрящевых эксплантатах собак [73,200] и лошадей [141], которые могут составлять основу действия хондропротекции in vivo. Однако подтверждение, что хрящевые эрозии уменьшаются у пациентов, страдающих остеоартритом, пока еще не получены. Повышенная нагрузка на сустав усиливает скорость развития эрозии, но умеренная нагрузка необходима для нормального функционирования хряща. Нестероидные противовоспалительные препараты являются сильными анальгетиками при воспалительных артритах (таблица. 6). К тому же экспериментальные модели артрита у собак, сделанные в Adjuvant Complet de Freund, установили, используя значения ЕС50 для моделирования РК\РД для 34 нимесулида (5 мг\кг per os), 2,72 и 6,26 μg\ml для уменьшения температуры и контроля хромоты [76,192]. Таблица 6 Преимущества НПВП для применения в ветеринарии (Lees.P, Landoni M.F., Giraudel J., Toutain P.L., 2004) Обладают комбинацией анальгетических, противовоспалительных и антиперетических свойств. Обычно хорошо переносят в рекомендуемых дозах. Производят в основном терапевтические эффекты в течение 12-24 часов. Следовательно, можно не вводить более 2-х доз в сутки. Введение парентеральными и энтеральными путями. В противовес кортикостероидам, не являются иммуносупрессорами и не замедляют заживление ран. Немедленно аккумулируются в местах острых воспалений Антиатерогенные эффекты НПВП В последние годы получены данные о важной роли ЦОГ–2–зависимого воспаления в развитии и прогрессировании атеросклеротического поражения сосудов. Учитывая современную концепцию о воспалительной природе атеросклеротического поражения сосудов [172,191], это позволяет по–новому взглянуть на перспективы применения ингибиторов ЦОГ–2 в кардиологии. Установлено, что в атеросклеротической бляшке (у человека и экспериментальных животных) наблюдается гиперэкспрессия ЦОГ–2, что ассоциируется с прогрессированием атеросклеротического поражения сосудов, а ингибиторы ЦОГ–2 тормозят этот процесс [68,71,81,86,171]. Высказано предположение, что подавление ЦОГ–2 зависимого воспалительного компонента атеросклеротического поражения сосудов приводит к улучшению функции эндотелия (например, за счет увеличения синтеза оксида азота и уменьшения окислительного стресса), способствует атеросклеротической стабилизации бляшки [86]. Действительно, по данным экспериментальных исследований, у мышей с дефицитом ЛНП–рецепторов, у которых на фоне приема продуктов 35 питания с высоким содержанием жира развивается тяжелое атеросклеротическое поражение сосудов, введение индометацина и рофекоксиба тормозит прогрессирование атеросклероза [81]. Этот эффект наблюдался несмотря на подавление синтеза PGI2. Имеются данные, что ингибиторы ЦОГ–2 улучшают функцию миокарда при экспериментальном инфаркте миокарда [175]. Анальгетический эффект Контроль острой боли у животных очень важен. В течение последних лет, участилось использование нестероидных противовоспалительных средств в качестве анальгетиков при сильных болевых реакциях, связанных с травматизмом, некоторыми заболеваниями и хирургическими вмешательствами (таблица 7). Таблица 7 Заболевания, при которых НПВП проявляют анальгетический эффект (Lees.P, Landoni M.F., Giraudel J., Toutain P.L., 2004) Заболевания, провоцирующие интенсивную или умеренную боль Ортопедические заболевания, например, заживление переломов Восстановление сухожилий (связок), вывих коленной чашки Абдоминальная хирургия, разрыв диафрагмы Оральная и зубная хирургия Ушная хирургия Анальная хирургия Костные злокачественные опухоли Повреждения межпозвоночных дисков Панкреатит Отит Различные офтальмологические заболевания 36 Недавние клинические исследования доказали, что НПВС, введенные в послеоперационный период могут являться мощными обезболивающими средствами, подобными опиоидам. В том числе НПВС действуют более долго и не вызывают побочных седативных эффектов, в отличие от α2антогонистов и опиоидов. Было выдвинуто мнение, что превентивная анальгезия, т.е. введение анальгетиков в качестве составляющего программы премедикации до общей анестезии, улучшает условия проведения хирургического вмешательства и предотвращает необходимость контролировать боль в послеоперационный период. *** Подводя итог вышеизложенному, необходимо отметить, что нестероидные противовоспалительные препараты (НПВП) составляют неотъемлемую часть лекарственных средств, которые ежедневно используются ветеринарными специалистами в практической деятельности. Однако, препаратов, разработанных специально для животных гораздо меньше, чем спектр НПВП, используемых в медицине и, главным образом, они представлены ЦОГ-неселективными производными арилпропионовой кислоты (по химической структуре). В литературе обнаруживаются лишь немногочисленные данные, касающиеся применения нестероидных противовоспалительных препаратов у животных, в частности у собак. В основном это сведения, описанные практикующими врачами, рассматривающие клинические случаи, а также исследования иностранных авторов, раскрывающие вопросы механизма действия, 37 фармакокинетики и выявления побочных эффектов (главным образом, НПВП-гастропатий) при применении данных средств. Наиболее широко используемыми ветеринарными НПВП в последние годы являются препараты кетофен (действующее вещество кетопрофен) и римадил (действующее вещество карпрофен). Вопрос о том, какой из этих препаратов наиболее эффективен и безопасен, остается долгое время открытым и является актуальным для практикующих специалистов. Поэтому несомненный интерес представляют исследования, посвященные выявлению лечебной эффективности данных препаратов, сравнивая их между собой и с другими средствами, используемыми при лечении суставной патологии у животных. Для изучения данных вопросов мы воспользовались экспериментальной моделью острого асептического синовита коленного сустава, воссозданной у собак. Параллельно часть исследований посветили изучению цитоморфологического состава синовиальной жидкости, и выявлению возможных побочных эффектов при терапии данными средствами и их медикаментозной коррекции. ГЛАВА 2. ХАРАКТЕРИСТИКА ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОГО МАТЕРИАЛА И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ Исследования проводились в условиях кафедры ветеринарной хирургии МГАВМиБ им. К.И. Скрябина и лабораторные исследования проводились на базе ветеринарной клиники «Астин», г.Балашиха в период с 2005 по 2009 г. Материалом для экспериментальных исследований нами были определены 25 беспородных собак в возрасте от 1,5 до 4 лет, весом от 18 до 25 кг. Содержание животных в стандартных клетках в стационаре кафедры ветеринарной хирургии, в котором имеется принудительная вентиляция, освещение естественное и электрическое. Микроклимат удовлетворительный. Моцион в пределах 1 часа утром и вечером. Кормление готовыми сухими сбалансированными кормами премиумкласса, норма рассчитывалась согласно весу животных. В 100 граммах сухого корма содержалось: белок 26%, жиры 14%, зо- 38 ла 6%, клетчатка 4%, влажность10%, кальций 1,05%, фосфор 0,83%, витамин А 12,941 lU/кг, витамин Д3 1,896 lU/кг, витамин Е 133 мг/кг, медь (сульфат меди)17,5 мг/кг, омега-6 >2,70%, омега-3 >0,45%.Доступ к воде неограничен. Поение, раздача корма и уборка осуществлялась вручную. Для проведения исследований нами были определены 5 групп собак. Условия содержания и кормления в контрольной и опытных группах были одинаковы. Подбор групп животных проводили по принципу аналогов. Отбор собак для исследования проводили на основе полного обследования с анализом анамнестических, клинических и лабораторных данных. Все животные были клинически здоровы, физиологические и лабораторные показатели были в пределах нормы. При проведении экспериментальной работы нами были использованы следующие методики: моделирование острого асептического синовита коленного сустава у собак, клинические и биохимические исследования крови, исследование синовиальной жидкости суставов (физические свойства, цитологический состав, определение белка и рН), рентгенологические, бактериологические и клинические исследования. Исследования проводили на собаках, у которых экспериментально вызвали острый асептический синовит коленного сустава. Первую опытную группу составили 5 собак, для лечения которых мы использовали нестероидный противовоспалительный препарат кетофен (действующее вещество кетопрофен). В первый день лечения мы проводили артроцентез и на протяжении 3-х первых суток применяли подкожные инъекции 1% раствора кетофена (из расчета 2 мг\кг массы тела 1 раз в сутки), далее использовали таблетированную форму кетофена (из расчета 1 мг\кг массы тела 1 раз в сутки) до клинического выздоровления. Вторая опытная группа состояла из 5 собак, для лечения которых мы использовали нестероидный противовоспалительный препарат римадил (действующее вещество карпрофен). В первый день лечения проводили артроцентез, с интервалом 12 часов двукратно подкожно вводили раствор римади- 39 ла (из расчета 4 мг/кг массы тела), далее использовали таблетированную форму римадила (из расчета 2 мг/кг массы тела 2 раза в день) до клинического выздоровления. Для лечения животных третьей опытной группы (5 собак) применяли нестероидный противовоспалительный препарат кетофен. В первый день лечения производили артроцентез и на протяжении 3-х первых суток применяли подкожные инъекции 1% раствора кетофена (из расчета 2 мг\кг массы тела 1 раз в сутки), далее использовали таблетированную форму кетофена (из расчета 1 мг\кг массы тела 1 раз в сутки) до клинического выздоровления. Одновременно мы применяли препарат лигфол внутримышечно 1 раз в день в дозе 1 мл на 1,2,5,7 сутки от начала лечения. Четвертую опытную группу составили 5 собак, для лечения животных применяли нестероидный противовоспалительный препарат римадил. В первый день лечения проводили артроцентез, с интервалом 12 часов двукратно подкожно вводили раствор римадила (из расчета 4 мг/кг массы тела), далее использовали таблетированную форму римадила (из расчета 2 мг/кг массы тела 2 раза в день) до клинического выздоровления. Одновременно использовали препарат лигфол внутримышечно в дозе 1 мл на 1,2,5,7 сутки от начала лечения. Контрольная группа состояла из 5 собак. Для лечения животных в первый день проводили артроцентез, применяли пара- и интраартикулярные блокады с 0,5%-ым раствором новокаина (одна инъекция в 3 дня), компрессы с димексидом (действующее вещество диметилсульфоксид) в разведении 1:1 с дистиллированной водой до клинического выздоровления. 2.1. Методика моделирования острого асептического синовита коленного сустава у собак Собак фиксировали в боковом лежачем положении таким образом, чтобы пунктируемый сустав находился сверху. В области введения иглы вы- 40 бривали волосы, кожу обрабатывали 950 этиловым спиртом с дальнейшей двукратной обработкой 5% раствором йода. Место инъекции пальпировали пальцем левой руки и проводили пункцию у медиального края связки коленной чашки примерно посередине между коленной чашкой и местом прикрепления к большеберцовой шероховатости. При введении инъекционной иглы (20G) в бедроберцовый сустав из ее канюли начинала стекать синовиальная жидкость, из нормального сустава она была прозрачной, тягучей, дополнительно аспирировалась шприцом (рис. 3). В полость сустава вводили скипидар однократно в дозе 0,4-0,5 мл, после чего проводили 5-6 пассивных движений конечностью (рис. 4). Ко 2-3 дню после введения раздражающего раствора у собак развивался острый асептический синовит коленного сустава (рис. 5,6). Рис. 3. Пункция бедроберцового сустава 41 Рис. 4. Введение скипидара в полость сустава 42 Рис. 5. Коленный сустав до индуцирования патологического процесса Рис. 6. Коленный сустав на 3-й сутки после введения скипидара 2.2. Методика клинического исследования крови Для исследования забор крови у собак мы проводили из кончика ушной раковины до кормления. Предварительно место пункции тщательно выбривали, кожу обрабатывали 950 этиловым спиртом. Иглу вводили на глубину до 5 мм. Вторую и третью капли крови наносили непосредственно на обезжиренные предметные стекла, делали мазок. Мазки высушивали на воздухе. Окраска мазков по Паппенгейму. На нефиксированный мазок наносили 1-2 мл готовой краски Май-Грюнвальда, представляющей собой раствор эозиновокислого метиленового синего (0,5мл) в метиловом спирте (100%) плюс чистый глицерин (50мл). По истечении 3 мин. к краске добавляли равное количество дистиллированной воды и продолжали окрашивать еще 1-2 мин. После этого краску смывали и мазок докрашивали свежеприготовленным раствором краски Романовского-Гимза в течение 10-15 мин. 43 Подсчет цитограмм крови проводили при помощи светового микроскопа «Биолам» под иммерсионным объективом х90 и окуляром х10. Для подсчета лейкоцитов использовали 11-клавишный счетчик. Определение содержания гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов и тромбоцитов проводили с помощью автоматического гематологического анализатора Abacus (Junior Vet). Определение скорости оседания эритроцитов (СОЭ) по способу Панченкова. Аппарат Панченкова состоит из деревянного штатива, специально градуированных капиллярных пипеток, имеющих просвет 1 мм и длину 100 мм. Каждый капилляр градуирован от 9 до 100 делений, на уровне нулевой точки нанесена метка К (кровь), а на уровне цифры 50 – метка Р – реактив. Для постановки СОЭ в капилляр набирали 5%-ый раствор лимоннокислого натрия до отметки Р и выдували на часовое стекло. В этот же капилляр набирали кровь 2 раза до отметки К и также выдували. Стеклянной палочкой перемешивали кровь с антикоагулянтом, набирали капиллярной пипеткой до отметки нуль и ее устанавливали в штатив. СОЭ учитывали через 1 час [50]. 2.3. Методика исследования биохимического состава сыворотки крови Для исследования забор крови у собак проводили из подкожной вены грудной конечности. Вену пережимали резиновой трубкой, туго наложенной проксимально по отношению к локтевому суставу. Волос в месте пункции выбривали, кожу обрабатывали 950 этиловым спиртом и 5% раствором йода. Захватывали конечность каудально таким образом, чтобы вена в месте прокола находилась между большим и указательным пальцем. После прокола кожи и фасций иглу вводили в просвет вены на 1-2 см. Кровь набирали в специальные одноразовые пробирки. Получали сыворотку, которую подвергали дальнейшему исследованию на биохимическом анализаторе Рефлотрон Плюс (Reflotron Plus) Roche Diagnostics. 2.4. Методика исследования синовиальной жидкости сустава 44 Синовиальную жидкость мы получали путем пункции бедроберцового сустава с соблюдением правил асептики и антисептики. В нормальную синовиальную жидкость добавляли 1-2 капли лидазы для растворения гиалуроновой кислоты, аккуратно взбалтывали пробирку, далее центрифугировали 2-3 минуты (700-800 об/мин). Полученный осадок наносили на обезжиренное предметное стекло, затем другим стеклом распределяли ровным слоем и высушивали на воздухе. В период острого воспаления тканей сустава синовиальный экссудат дополнительно не подготавливали, а сразу же наносили каплю экссудата на обезжиренное предметное стекло и готовили мазок. Цитологический состав клеточных элементов в мазках синовиальной жидкости определяли так же, как и в мазках крови. На чистые обезжиренные стекла наносили 1 каплю синовиальной жидкости, затем другим стеклом распределяли ровным тонким слоем и высушивали на воздухе. Мазок окрашивали по Паппенгейму. Подсчитывали количество лейкоцитов и эритроцитов в синовиальной жидкости следующим образом. Синовиальную жидкость из сустава набирали в два смесителя (для лейкоцитов и эритроцитов) до метки 0,5, затем в смеситель для лейкоцитов набирали жидкость Тюрка до метки 11, а в смеситель для эритроцитов 1% раствор хлорида натрия до метки 101 и осторожно переворачивали смесители в течение 2-3 минут. Определение количества лейкоцитов и эритроцитов проводили по методике А.И. Гладштейн. Подсчет лейкоцитов и эритроцитов осуществляли в камере Горяева в 100 больших квадратах. Полученное число умножали на 50, что указывало на количество клеток в 1 мм3. Методика исследования рН среды синовиальной жидкости. рН синовиальной жидкости собак определяли сразу после ее забора, используя портативный рН-метр-милливольтметр рН-410. 45 2.5. Методика определения белка в синовиальной жидкости (биуретовый метод) Метод основан на образовании в щелочной среде окрашенных комплексных соединений меди при взаимодействии пептидных группировок молекул белков с биуретовым реактивом. Интенсивность окраски образовавшихся продуктов прямо пропорциональна концентрации общего белка, измеряемой при 540 (500-560) нм. Расчет концентрации белка проводили по следующей формуле: С=(Еon/Ek)*60, где: С-концентрация белка, г/л; Еon – оптическая плотность анализируемой пробы; Ek – оптическая плотность калибровочной пробы; 60 – концентрация белка в калибровочном растворе. 2.6. Методика бактериологического исследования синовиальной жидкости Данное исследование проводилось с целью подтверждения асептического течения воспалительного процесса в суставе после вызывания экспериментального синовита коленного сустава у собак. Пунктат, забранный из полости сустава с соблюдением правил асептики и антисептики помещали в стерильную пробирку. Содержимое наносили на предметное стекло, окрашивали по Грамму, помещали в пробирки с мясо-пептоновым бульоном (МПБ) и производили посев на скошенный мясо-пептоновый агар (МПА). Пробирки помещали в термостат на 24 часа при температуре 370С, по истечению данного срока мы проводили визуальную оценку. 2.7. Методика рентгенографии коленного сустава у собак Рентгенографию суставов проводили в клинике кафедры ветеринарной хирургии МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, при этом использовали рентгеновский аппарат Siemens. У животных снимки проводили в двух проекциях – 46 боковой и прямой в норме, при остром воспалении и в период клинического выздоровления. ГЛАВА 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Выполняя поставленные задачи, нами была проведена серия опытов на беспородных собаках возрастом от 1,5 до 4 лет, весом от 18 до 25 кг, хорошей упитанности, правильным телосложением. Всего в опытах находилось 25 собак, из которых было сформировано 5 групп. Животным была воссоздана модель острого асептического синовита коленного сустава и применялись различные методы лечения с использованием традиционного способа лечения в качестве контроля (компрессы димексида, новокаиновые блокады), и с применением нестероидных противовоспалительных препаратов кетофен, римадил и препарата лигфол. Полученные данные эксперимента затем были подвергнуты анализу и обобщению в сопоставлении с немногочисленными данными литературы. 47 До введения животных в эксперимент проводили тщательное обследование всех особей, учитывая клинические и лабораторные исследования. За две недели до введения собак в опыт им проводили дегельминтизацию препаратом «Каниквантел» из расчета 1 таблетка на 10 кг массы тела животного. Для предупреждения возможного инфицирования собак, проводили пассивную иммунизацию подкожным введением препарата «Витакан С» по 1 дозе на животное двукратно с интервалом 24 часа. Животные содержались в стандартных клетках в стационаре кафедры ветеринарной хирургии МГАВМиБ им. К.И.Скрябина. Освещение дневное и электрическое, вентиляция приточно-вытяжная, микроклимат удовлетворительный. Поение, кормление и уборку осуществляли вручную. Моцион в пределах часа утром и вечером. Кормление сбалансированным сухим кормом премиум-класса согласно весу собак. В 100 граммах сухого корма содержалось: белок 26%, жиры 14%, зола 6%, клетчатка 4%, влажность10%,, кальций 1,05%, фосфор 0,83%, витамин А 12,941 lU/кг, витамин Д3 1,896 lU/кг, витамин Е 133 мг/кг, медь (сульфат меди)17,5 мг/кг, омега-6 >2,70%, омега-3 >0,45%. По данным исследований все собаки были клинически здоровы, активны, энергичны в движениях, корм поедали охотно. Прием воды в пределах физиологической нормы, естественные отправления без особенностей, рвоты и диареи не отмечали. Изменений со стороны опорно-двигательного аппарата и других систем организма не наблюдалось. Рентгенографическими исследованиями патологических изменений в суставах не выявлено. Температура тела составляла 37,9-38,50С, частота пульса 72-98 ударов в минуту, дыхательные движения 17-25 в минуту. При исследовании морфологические показатели крови были следующими: гемоглобин 126-165 г/л, эритроциты 6,45-8,24 млн./мм3, тромбоциты 267-467 тыс./мм3, лейкоциты 8,3-10,2 тыс./мм3, СОЭ-1-2. Популяции лейкоцитов распределялись следующим образом: базофилы 0-1, эозинофилы 1-3, палочкоядерные нейтрофилы 1-6, сегментоядерные нейтрофилы 57-70, лим- 48 фоциты 18-37, моноциты 1-5 %. При аспирации суставов синовиальная жидкость была клейкой, тягучей, прозрачной, бесцветной, без запаха и видимых включений. Количество до 1 мл, рН среды 7,4-7,7, содержание лейкоцитов 0,120-0,230 тыс.кл/мм3. Клеточный состав распределялся следующим образом: лимфоциты 62-77, моноциты 1-3, ретикулоциты 13-26, плазмоциты 3-9, гистиоциты 1-4, макрофаги 0-1, синовиоциты 0-3 % (рис. 7,8,9,10,11,12). Биохимическое исследование сыворотки крови: общий белок 55,8-72,4 г/л, альбумин 23,4-38,1 г/л, креатинин 59,8-98,4 мкмоль/л, мочевина 2,7-6,5 ммоль/л, общий билирубин 3,1-8,9 мкмоль/л, АЛТ 26-69 ед./л, АСТ 21-67 ед./л. Гематологические и цитоморфологические показатели синовиальной жидкости находятся в пределах физиологическиой нормы. После изучения клинического статуса, животных вводили в опыт. Собакам экспериментально была воссоздана модель острого асептического воспаления коленного сустава. В полость сустава вводили скипидар однократно в дозе 0,4-0,5 мл, после чего проводили 5-6 пассивных движений конечностью. К второму-третьему дню у собак развивалось воспаление. Животные были разделены на 5 групп. гиалуроновая кислота 49 митоз ретикулоцита Рис. 7,8. Синовиальная жидкость коленного сустава собак в норме. Окраска по Паппенгейму. Объектив 90, окуляр 10 50 синовиоцит гиалуроновая кислота лимфоцит Рис. 9,10. Синовиальная жидкость коленного сустава собак в норме. Окраска по Паппенгейму. Объектив 90, окуляр 10 гиалуроновая кислота 51 Рис.11,12. Синовиальная жидкость коленного сустава собак в норме. Окраска по Паппенгейму. Объектив 90, окуляр 10 3.1. Эффективность применения димексида и новокаиновых блокад у собак контрольной группы Контрольная группа была сформирована из 5 беспородных собак, возрастом 1,5-3,5 года, весом 18-24 кг, хорошей упитанности, суки. У собак наблюдали повышение температуры тела до 39,6-39,70С, пульса до 128-136 ударов в минуту, дыхательных движений до 26-29 в минуту. Животные были угнетены, большее время суток лежали, вставали неохотно. Прием корма был снижен или отсутствовал, воды повышен. Естественные отправления в норме, изменений со стороны желудочно-кишечного тракта и других систем организма не обнаруживали. Область пораженного коленного сустава была горячей, отечной, кожа напряженной, неподвижной (рис. 15). Контуры сустава были сглажены, синовиальные вывороты напряжены, при бимануальной пальпации ощущалась флюктуация. При проводке отмечали хромоту смешанного типа от средней до высшей степени, при пассивных движениях выявляли резкую болезненность. На рентгенограммах определяли увеличение суставной щели на 2-3 мм (рис. 13,14). При артропункции свободно аспири- 52 ровали жидкий, мутноватый экссудат без видимых примесей, без ощутимого запаха, рН среды составляла 7,0-7,2. Количество лейкоцитов повышалось до 2,500-3,500 тыс.кл/мм3, цитологический состав синовии был следующим: палочкоядерные нейтрофилы 17-29, сегментоядерные нейтрофилы 39-54, лимфоциты 20-41, моноциты 2-4 %, ретикулоциты, плазмоциты, гистиоциты, макрофаги, синовиоциты не выявлялись (рис. 16). Исчезновение лимфоидноретикулярных клеток, с одновременным нарастанием уровня нейтрофилов. В крови обнаруживали: гемоглобина 115-147 г/л, эритроцитов 5,67-7,97 млн./мм3, тромбоцитов 234-392 тыс./мм3, лейкоцитов 14,2-15,9 тыс./мм3, СОЭ-3-5. Лейкограмма приобрела следующий вид: эозинофилы 1-3, палочкоядерные нейтрофилы 14-17, сегментоядерные нейтрофилы 41-51, лимфоциты 27-37, моноциты 3-5 %. Наблюдался регенеративный сдвиг. В сыворотке крови содержалось: общий белок 88,3-99,6 г/л, альбумин 25,3-40,5, креатинин 52,1-89,0 мкмоль/л, мочевина 3,5-6,8 ммоль/л, общий билирубин 5,8-8,9 мкмоль/л, АЛТ 58-74 ед./л, АСТ 52-76 ед./л. 53 Рис. 13. Рентгенграмма бедроберцового сустава собаки в норме. Прямая проекция Рис. 14. Рентгенограмма бедроберцового сустава собаки на 3-й день после индуцирования острого асептического синовита. Прямая проекция Рис.15. Собака №4. Острый асептический синовит правого коленного сустава 3-й день болезни 54 нейтрофил эритроциты Рис. 16. Синовиальная жидкость. 3-й день острого асептического синовита коленного сустава. Наличие большого количества нейтрофилов и эритроцитов. Окраска по Паппенгейму. Объектив 90, окуляр 10 Для лечения собак контрольной группы применяли традиционный метод лечения. В первый день проводили артроцентез и применяли компрессы с димексидом (действующее вещество диметилсульфоксид) в разведении 1:1 с 0,5 % раствором новокаина, пара- и интраартикулярно вводили 0,5% раствор новокаина 5-7 мл (одна инъекция в 3 дня) до клинического выздоровления. Контрольное обследование собак проводили на 6-8 сутки лечения. У животных данной группы значительных улучшений в клиническом течении болезни не наблюдали. Температура тела составляла 38,9-39,40С, частота пульса 118-126 ударов в минуту, дыхательные движения 19-26 в минуту. Общее состояние удовлетворительное, прием корма и воды активный, естественные отправления в норме. При пальпации обнаруживали болезненность, кожа в области сустава малоподвижная, ткани уплотненные, местная темпе- 55 ратура и промеры сустава незначительно повышены, чем противоположного здорового сустава. При пассивных движениях конечностью болезненность сохранялась. Животные ходили и вставали неохотно. Хромота опирающегося типа на поврежденную конечность сохранялась (рис. 17). На рентгенограммах отмечалось незначительное увеличение суставной щели до 1мм. Гематологические показатели были следующими: гемоглобин 120-146 г/л, эритроциты 6,12-8,01 млн./мм3, тромбоциты 254-396 тыс./мм3, лейкоциты 12,9-14,2 тыс./мм3, СОЭ-2-4. В качественном составе лейкоцитов обнаруживалось: эозинофилы 1-2, палочкоядерные нейтрофилы 10-15, сегментоядерные нейтрофилы 41-55, лимфоциты 25-39, моноциты 3-4 %. При аспирации синовиальная жидкость суставов была прозрачной, вязкость снижена, видимых включений не наблюдали, рН среды 7,1-7,2. Лейкоциты 2,200-3,150 тыс.кл/мм3, из которых палочкоядерных нейтрофилов 1319, сегментоядерных нейтрофилов 17-21, лимфоцитов 31-46, моноцитов 2-5, обнаруживали единичные тканевые клетки (ретикулоцитов 0-2, плазмоцитов 0-1, гистиоцитов 0-1 %), синовиоциты, макрофаги не обнаруживали (рис. 18). 56 Рис. 17. Собака № 3. Острый асептический синовит правого коленного сустав, 7-й день лечения контрольная группа эритроцит нейтрофил плазмоцит Рис. 18. Синовиальная жидкость. Острый асептический синовит коленного сустава, 7 день лечения. Наличие большого количества нейтрофилов, эритроцитов и единичных плазмоцитов. Окраска по Паппенгейму. Объектив 90, окуляр 10 В сыворотке крови определяли: общий белок 80,2-92,3 г/л, альбумины 24,2-38,5 г/л, креатинин 63,0-93,7 мкмоль/л, мочевина 4,3-5,9 ммоль/л, общий билирубин 4,8-7,9 мкмоль/л, АЛТ 55-69 ед./л, АСТ 49-73 ед./л. Микробиологическими исследованиями экссудата из полости сустава (на МПБ, МПА, окраска мазков по Граму) микрофлоры нами не обнаружено. Полное клиническое выздоровление животных контрольной группы наблюдали на 18-20 сутки лечения (рис. 19). Температура тела 38,2-38,40С, частота пульса 88-100 ударов в минуту, дыхательные движения 17-19 в минуту. Собаки были активны, энергичны в движении, охотно бегали. Аппетит, жажда, естественные отправления были в пределах физиологической нормы, расстройств со стороны желудочно-кишечного тракта и других систем орга- 57 низма при обследовании не наблюдали. При пальпации коленного сустава и пассивных движениях конечностью отклонений от нормы не обнаруживали. Промеры суставов были одинаковы с интактными. Синовиальные вывороты при пальпации не напряжены, безболезненны, местная температура не повышена, хромота отсутствовала. На рентгенограмме патологических изменений не обнаруживали. Клинические, морфологические, биохимические показатели крови и синовиальной жидкости были в пределах физиологической нормы. Показатели крови следующие: гемоглобина 121-150 г/л, эритроцитов 6,28-8,11 млн./мм3, тромбоцитов 278-406 тыс./мм3, лейкоцитов 10,6-12,7 тыс./мм3, СОЭ-1-2. В лейкограмме основные популяции распределялись следующим образом: эозинофилы 1-3, палочкоядерные нейтрофилы 5-6, сегментоядерные нейтрофилы 53-70, лимфоциты 20-36, моноциты 3-4 % . Состав и свойства синовиальной жидкости нормализовались: показатель рН составил 7,2-7,4, количество лейкоцитов 0,330-0,580 тыс.кл/мм3. В составе клеточных элементов: палочкоядерные нейтрофилы 5-10, сегментоядерные нейтрофилы 16-29, лимфоциты 44-64, моноциты 2-4, ретикулоциты 3-7, плазмоциты 1-3, гистиоциты 1-2, макрофаги 0-1, синовиоциты 1-2 %. Показатели сыворотки крови также были в пределах физиологической нормы: общий белок 72,1-84,5 г/л, альбумин 23,8-32,1, креатинин 65,4-89,9 мкмоль/л, мочевина 3,2-6,0 ммоль/л, общий билирубин 4,9-7,0 мкмоль/л, АЛТ 43-65 ед./л, АСТ 43-69 ед./л. 58 Рис. 19. Собака №4. Острый асептический синовит коленного сустава. 18-ый день лечения. Клиническое выздоровление *** Подводя итог можно отметить следующее, выздоровление собак контрольной группы наступало к 18-20 суткам наблюдения. В этот период исследуемые гематологические показатели, включая эритроциты, гемоглобин и тромбоциты соответствовали нормативным показателям. Биохимические показатели крови на всем протяжении эксперимента оставались в пределах физиологической нормы, следовательно, на гомеостаз организма данный метод лечения отрицательного действия не оказывал. Цитоморфологические показатели синовиальной жидкости приближались к нормативным показателям, отмечалось значительное снижение количества лейкоцитов, однако в синовии обнаруживались единичные клетки палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов. 3.2. Эффективность применения препарата кетофен у собак первой опытной группы Первую опытную группу составили 5 собак. Возраст животных от 1,5 до 4 лет, беспородные, хорошей упитанности, массой 18-23 кг, суки. У собак 59 наблюдали повышение температуры тела до 39,5-39,80С, пульса до 108-136 ударов в минуту, дыхательных движений до 27-34 в минуту. В области коленного сустава отмечали разлитую, горячую, болезненную, отечную припухлость. Синовиальные вывороты напряжены, при бимануальной пальпации ощущали флюктуацию. Пассивными движениями выявляли резкую болезненность в коленном суставе, при проводке отмечали хромоту смешенного типа от средней до высшей степени. У собак наблюдали апатию, угнетение в общем состоянии, аппетит был значительно снижен или отсутствовал, жажда повышена. Естественные отправления в норме. Собаки большее время суток находились в вынужденном лежачем положении, вставали неохотно, пораженной конечностью частично касались пола (рис. 20). Рис. 20. Собака № 6. Острый асептический синовит правого коленного сустава 3-й день болезни На рентгенограммах определяли увеличение суставной щели на 2-3 мм. Из полости сустава свободно аспирировали жидкий, мутный экссудат без видимых включений, рН- 7,0-7,2, лейкоциты 2,500-3,500 тыс.кл/мм3, палочкоядерные нейтрофилы 17-32, сегментоядерные нейтрофилы 42-51, лимфоциты 60 20-33, моноциты 2-4 %, ретикулоциты, плазмоциты, гистиоциты, макрофаги, синовиоциты не выявлялись. В крови обнаруживали: гемоглобин 129-150 г/л, эритроциты 6,02-7,69 млн./мм3, тромбоциты 215-304 тыс./мм3, лейкоциты 13,7-15,8 тыс./мм3, СОЭ3-4. Популяции лейкоцитов распределялись следующим образом: эозинофилы 1-2, палочкоядерные нейтрофилы 9-15, сегментоядерные нейтрофилы 5364, лимфоциты 21-28, моноциты 4-5 %. В сыворотке крови: общего белка 89,5-94,9 г/л, альбуминов 30,1-40,1 г/л, креатинина 54,5-90,5 мкмоль/л, мочевины 5,0-7,9 ммоль/л, общего билирубина 7,4-10,1 мкмоль/л, АЛТ 45-81 ед./л, АСТ 42-79 ед./л. Для лечения собак первой опытной группы использовали НПВП кетофен (действующее вещество кетопрофен). В первый день лечения проводили артроцентез. На протяжении трех первых суток применяли подкожные инъекции 1% раствора кетофена (из расчета 2 мг\кг массы тела один раз в сутки), далее в виде таблеток (из расчета 1 мг\кг массы тела один раз в сутки) до полного клинического выздоровления. На 6-8 сутки лечения у животных первой опытной группы отмечали улучшения в клиническом течении болезни. Температура тела -38,5-39,10С, частота пульса 90-100 ударов в минуту, дыхательные движения 23-28 в минуту. У собак появлялись клинические симптомы активности, наблюдалось уменьшение хромоты, полное исчезновение воспалительного отека. В области коленного сустава ткани были с незначительным уплотнением, кожа подвижная, эластичная, при пассивных движениях болезненность не определялась. Глубокой пальпацией в области связок отмечали слабую болевую реакцию. При активном движении отмечали слабую хромоту типа опирающейся конечности. В крови собак обнаруживали: гемоглобин 116-144 г/л, эритроциты 5,93-7,23 млн./мм3, тромбоциты 234-311 тыс./мм3, лейкоциты 11,2-12,6 тыс./мм3, СОЭ-2-3. В лейкограмме: эозинофилов 0-2, палочкоядерных нейтрофилов 4-7, сегментоядерных нейтрофилов 57-67, лимфоцитов 24-35, мо- 61 ноцитов 3-5 %. Наблюдалось снижение показателей гемоглобина, эоритроцитов, тромбоцитов, лейкоцитов, СОЭ. Синовиальная жидкость из ранее поврежденных суставов была прозрачной, тягучей, без видимых включений, рН- 7,3-7,4. Насчитывали лейкоцитов 1,200-1,800 тыс.кл/мм3, в мазках - палочкоядерных нейтрофилов 5-7, сегментоядерных нейтрофилов 17-21, лимфоцитов 59-63, моноцитов 2-3, ретикулоцитов 5-8, плазмоцитов 2-3, гистиоцитов 0-1, макрофагов 0-1, синовиоцитов 0-2 %. Отмечалось появление лимфоидно-ретикулярных клеток. В сыворотке крови определяли: общего белка 68,2-79,1 г/л, альбуминов 28,2-38,3, креатинина 63,4-86,2 мкмоль/л, мочевины 4,4-6,7 ммоль/л, общего билирубина 6,3-8,9 мкмоль/л, АЛТ 43-82 ед./л, АСТ 39-74 ед./л. Бактериологическими исследованиями экссудата из полости пораженного сустава микрофлоры не было выделялось. Полное клиническое выздоровление животных первой группы наблюдали на 10-13 сутки лечения (рис. 21). Температура тела 38,1-38,40С, частота пульса 80-86 ударов в минуту, дыхательные движения 19-23 в минуту. Собаки были активны, энергичны в движении. Прием корма, воды, естественные отправления были в пределах физиологической нормы, расстройств со стороны желудочно-кишечного тракта и других систем организма при клиническом обследовании не наблюдалось. При пальпации коленного сустава и его пассивных движениях отклонений от нормы не обнаруживали. Промеры суставов были одинаковы с интактными. Синовиальные вывороты при пальпации не напряжены, безболезненны, местная температура не повышена, хромота отсутствовала. На рентгенограмме патологических изменений в суставе не обнаруживали. Содержание в крови было: гемоглобина 109-140 г/л, эритроцитов 5,836,94 млн./мм3, тромбоцитов 245-317 тыс./мм3, лейкоцитов 9,9-11,8 тыс./мм3, СОЭ-1-3. В лейкограмме показатели изменялись следующим образом: эозинофилы 0-3, палочкоядерные нейтрофилы 2-4, сегментоядерные нейтрофилы 60-68, лимфоциты 25-35, моноциты 1-4 % (таблица 8, рис. 22,23). Анализируя 62 полученные данные, необходимо отметить, что при возникновении воспалительного процесса, у всех животных, введенных в эксперимент, наблюдалось снижение показателей гемоглобина, эритроцитов и тромбоцитов. При этом данные показатели в контрольной группе приближались к первоначальным (до проведения эксперимента) в период нормализации воспалительного процесса и клиническом выздоровлении животных. В группе же кетофена наблюдается продолжающееся снижение данных показателей на всем протяжении терапии и к периоду клинического выздоровления собак. Показатели лейкоцитов и СОЭ в группе кетофена приближаются к нормативным раньше, чем в контрольной группе примерно на 7-10 дней. Состав и свойства синовиальной жидкости нормализовались: показатель рН составил 7,4-7,5, количество лейкоцитов 0,210-0,540 тыс.кл/мм3. В составе клеточных элементов: сегментоядерные нейтрофилы 2-4, лимфоциты 68-74, моноциты 1-2, ретикулоциты 13-16, плазмоциты 3-6, гистиоциты 1-2, макрофаги 1-2, синовиоциты 1-3, фибробласты 0-1 % (таблица 9). Из приведенных данных, очевидно, что синовиальная жидкость в нормальном суставе собак содержит лейкоциты (моноциты, лимфоциты) и тканевые клетки, включая клетки покровного слоя – синовиоциты. Некоторые авторы [45] отмечают присутствие в нормальном суставе нейтрофилов и эритроцитов, полученные нами результаты противоречат данным утверждениям. Развитие воспалительного процесса в суставе сопровождается снижением показателя рН до 7,1, к концу первой недели лечения (что соответствует окончанию первой фазы воспалительного процесса), отмечается значительное повышение уровня рН до 7,3 в опытной группе животных, при этом у контрольных собак данный показатель достигает соответствующего показателя в период клинического выздоровления. Количественный состав лейкоцитов не зависимо от способа лечения изменялся одинаково. Показатели сыворотки крови также были в пределах физиологической нормы: общий белок 64,3-73,8 г/л, альбумина 27,0-37,6 г/л, креатинин 65,189,3 мкмоль/л, мочевина 3,7-5,8 ммоль/л, общий билирубин 5,6-9,1 мкмоль/л, 63 АЛТ 39-62 ед./л, АСТ 27-70 ед./л, щелочная фосфатаза 170-215 ед./л, αамилаза 786-1152 ед./л (таблица10).При возникновении синовита коленного сустава отмечается подъем уровня общего белка, за счет повышения уровня глобулинов, данные показатели нормализуются к клиническому выздоровлению собак у животных обеих групп. Данные таблицы указывают на отсутствие патологических изменений в остальных исследуемых показателях, как в контрольной, так и в опытной группе собак. Рисунок 21. Собака №6. Острый асептический синовит правого коленного сустава. 10-й день лечения препаратом кетофен. Клиническое выздоровление. Опорная функция конечности восстановлена 64 Таблица 8 Показатели крови при остром асептическом синовите коленного сустава у собак на фоне лечения кетофеном Периоды исследования Количество животных Группы Тромб, тыс./мм3 Э М М±m М±m М±m М±m 9,11 ± 0,206 12,10 ± 0,226 13,52 ± 0,266 13,54 ± 0,296 0,1 ± 0,075 1,8 ± 0,351 - - 1,6 ± 0,251 - В норме 10 При воспалении до лечения 10 291,5 ± 16,218 10-13 сутки клиническое выздоровление животных 1 опытной группы 18-20 сутки клиническое выздоровление животных контрольной группы Б М±m 339,6 ± 15,382 6-8-е сутки лечения Лейк., тыс./мм3 Лейкограмма Нейтрофилы Ю П М±m М±m С М±m - 2,9 ± 0,460 65,5 ± 1,212 - - 13,8 ± 0,702 52,1 ± 2,717 1,0 ± 0,251 - - 5,4 ± 0,551 61,2 ± 1,654 - 1,4 ± 0,301 - - 12,8 ± 1,153 49,6 ± 2,706 Лимф Мо СОЭ мм/ч М±m М±m М±m 26,2 ± 1,572 28,1 ± 2,140 28,6 ± 1,955 31,8 ± 2,606 3,5 ± 0,376 1,1 ± 0,075 4,4 ± 0,284 3,8 ± 0,201 3,8 ± 0,401 2,8 ± 0,200 4,4 ± 0,301 3,2 ± 0,401 5 1 279,8 ± 17,191 5 2 320,2 ± 21,201 5 1 291,0 ± 14,034 11,08 ± 0,341 - 1,0 ± 0,501 - - 3,0 ± 0,251 63,0 ± 1,504 30,0 ± 1,504 3,0 ± 0,752 2,0 ± 0,251 5 2 335,4 ± 20,850 11,70 ± 0,401 - 1,6 ± 0,451 - - 5,6 ± 0,301 61,8 ± 3,358 27,4 ± 2,807 3,6 ± 0,301 1,8 ± 0,200 1- опытная группа; 2- контрольная группа. Различия достоверности р<0,05-0,02 65 165 150 135 120 105 90 75 60 45 30 15 0 первая опытная группа контрольная группа до проведения эксперимента при выра женном 6-8 сутки лечения клиническое воспалении выздоровление Рисунок 22. Показатели гемоглобина (г/л) при лечении острого асептического синовита препаратом кетофен 8 7 6 5 4 3 2 1 0 первая опытная группа контрольная группа до проведения эксперимента при выраженном воспа лении на 5-8 сутки лечения клиническое выздоровление Рисунок 23. Показатели эритроцитов (млн./мм3) при лечении острого асептического синовита препаратом кетофен 66 Таблица 9 Показатели СЖ* при остром асептическом синовите коленного сустава у собак на фоне лечения кетофеном Периоды исследования Количество животны х В норме 10 При воспалении до лечения 10 Груп пы Лейкоциты, тыс.кл/м м3 М±m 7,56 ± 0,050 7,09 ± 0,030 7,34 ± 0,030 7,14 ± 0,030 М±m 0,18 ± 0,014 2,94 ± 0,122 2,54 ± 0,155 2,54 ± 0,155 Клетки группы А, % Нейтрофилы Лимфо- Моноциты циты П С М±m М±m - - 23,2 ± 1,588 6,2 ± 0,401 16,8 ± 1,153 Ретикуло-циты Клетки группы В, % Плазмо- Гистио- Макроциты циты фаги Синовиоциты Фибробласты М±m М±m 1,7 ± 0,293 3,1 ± 0,301 2,2 ± 0,200 3,4 ± 0,551 М±m 19 ± 1,254 М±m 6,3 ± 0,627 М±m 2,3 ± 0,401 М±m 0,2 ± 0,134 М±m 1,7 ± 0,376 44,4 ± 1,789 19,2 ± 0,902 37,6 ± 2,706 М±m 68,8 ± 1,254 29,3 ± 2,299 61,0 ± 0,752 40,0 ± 2,256 - - - - - - 6,4 ± 0,551 1,0 ± 0,501 2,4 ± 0,301 0,6 ± 0,301 1,0 ± 0,000 0,6 ± 0,301 0,8 ± 0,200 0,8 ± 0,401 - - - - - 5 1 5 2 5 1 7,44 ± 0,030 0,37 ± 0,054 - 2,8 ± 0,401 71,2 ± 1,153 1,6 ± 0,301 14,2 ± 0,652 4,4 ± 0,551 1,8 ± 0,200 1,4 ± 0,301 2,0 ± 0,251 0,6 ± 0,301 5 2 7,32 ± 0,040 0,47 ± 0,045 7,6 ± 0,802 22,8 ± 2,907 55,2 ± 3,408 3,0 ± 0,251 5,2 ± 0,652 2,6 ± 0,401 1,8 ± 0,200 0,4 ± 0,301 1,4 ± 0,451 - 6-8-е сутки лечения 10-13 сутки клиническое выздоровление животных 1 опытной группы 18-20 сутки клиническое выздоровление животных контрольной группы рН 1- опытная группа; 2- контрольная группа. СЖ* – синовиальная жидкость. Различия достоверности р<0,05-0,02. 67 Таблица 10 Биохимические показатели крови при остром асептическом синовите коленного сустава у собак на фоне лечения кетофеном Периоды исследования В норме При воспалении до лечения 6-8-е сутки лечения 10-13 сутки клиническое выздоровление животных 1 опытной группы 18-20 сутки клиническое выздоровление животных контрольной группы Количество животных Группы Общий белок, г/л Альбумин, г/л Креатинин, мкмоль/л Мочевина, ммоль/л АЛТ, ед./л АСТ, ед./л М±m 4,54 ± 0,371 Общий билирубин, мкмоль/л М±m 6,38 ± 0,475 10 М±m 63,77 ± 1,319 М±m 29,47 ±1,239 М±m 80,11 ± 4,134 М±m 48,1 ± 3,653 М±m 46,0 ± 4,682 10 92,29 ± 1,074 34,67 ± 1,927 71,29 ± 4,686 5,85 ± 0,372 8,06 ± 0,318 66,8 ± 3,428 60,6 ± 4,381 33,32 ± 2,070 31,96 ± 3,037 71,02 ± 5,152 74,24 ± 5,618 5,40 ± 0,451 5,10 ± 0,276 7,50 ± 0,501 6,56 ± 0,757 58,8 ± 7,368 62,8 ± 2,606 53,0 ± 8,019 62,0 ± 3,508 5 1 5 2 74,56 ± 2,436 86,60 ± 2,055 5 1 69,10 ± 2,055 32,24 ± 2,311 77,34 ±4,892 4,88 ± 0,466 7,34 ± 0,596 52,2 ± 7,418 44,6 ± 10,726 5 2 77,58 ± 1,734 27,96 ± 1,423 77,80 ± 4,736 4,58 ± 0,642 5,88 ± 0,511 52,6 ± 3,559 54,2 ± 5,162 1- опытная группа; 2- контрольная группа. Различия достоверности р<0,01-0,001. 68 *** Клиническое выздоровление собак первой опытной группы, при лечении препаратом кетофен наступало на 10-13 сутки наблюдения. Можно отметить, что к 6-8 суткам лечения в гематологических показателях сохранялся нейтрофильный лейкоцитоз с небольшим регенераторным сдвигом, что указывало на легкость течения воспалительного процесса и благоприятный прогноз. Также как и в контрольной группе собак наблюдалось снижение СОЭ, уровень лейкоцитов достоверных различий не имел. Наиболее значимые изменения обнаруживались в показателях эритроцитов, тромбоцитов и гемоглобина. У собак первой опытной группы до болезни гемоглобин составля 152,6±3,308 г/л, эритроцитыл 7,21±0,230 млн./мм3, тромбоциты 323,0±18,294 тыс./мм3. В разгар воспаления: гемоглобин 137,4±4,060 г/л, эритроциты 6,70±0,329 млн./мм3, тромбоциты 269,0±22,303 тыс./мм3, при контрольном обследовании на 6-8 сутки отмечены изменения в показателях крови: гемоглобин 128,8±5,112 г/л, эритроциты 6,37±0,216 млн./мм3, тромбоциты 279,8±17,191 тыс./мм3. При этом к наступлению клинического выздоровления гемоглобин, эритроциты, тромбоциты составили 122,2±5,112 г/л, 6,21±0,183 млн./мм3, 291,0±14,034 тыс./мм3 соответственно. Следовательно, кетофен приводил к снижению данных показателей, при этом у собак контрольной группы аналогичных изменений не наблюдалось. Биохимические показатели (креатинин, мочевина, общий билирубин, АЛТ, АСТ) на протяжении наблюдений оставались в пределах нормы. В синовиальной жидкости к моменту выздоровления обнаруживались единичные сегментоядерные нейтрофилы, при этом общее количество лейкоцитов достигало уровня 0,37±0,054 тыс.кл /мм3, появлялись лимфоидно-ретикулярные клетки, и единичные фибробласты, рН 7,44±0,030. В разгар воспаления отмечалось повышение уровня белка в синовии и сыворотке крови, при этом концентрация белка синовиальной жидкости возрастала минимум в два раза. 69 3.3. Эффективность применения препарата римадил у собак второй опытной группы Вторая опытная группа была сформирована из 5 беспородных собак, возрастом от 2 до 3 лет, хорошей упитанности, массой тела от 19 до 23 кг, 4 суки и 1 кобель. У собак наблюдали повышение температуры тела до 39,639,80С, пульса до 115-136 ударов в минуту, дыхательных движений до 27-32 в минуту. В общем состоянии отмечали угнетение, вялый прием корма. Естественные отправления в норме. Животные дольше, чем обычно лежали. Хромота смешанного типа на поврежденную конечность от средней до высшей степени. На рентгенограммах определяли незначительное увеличение суставной щели. При пальпации устанавливали отечную, горячую, болезненную припухлость вокруг суставов. Синовиальные вывороты были напряжены и при пальпации болезненны. Пассивными движениями выявляли резкую болевую реакцию. В покое поврежденной конечностью слегка опирались на пальцевые мякиши. В крови обнаруживали гемоглобин 118-147 г/л, эритроциты 6,31-7,05 млн./мм3, тромбоциты 259-351 тыс./мм3, лейкоциты 13,9-15,4 тыс./мм3, СОЭ3-4. Популяции лейкоцитов распределялись следующим образом: эозинофилы 1-3, палочкоядерные нейтрофилы 9-15, сегментоядерные нейтрофилы 4756, лимфоциты 24-37, моноциты 3-4 %. В сыворотке крови содержалось: общий белок 75,9-89,4 г/л, альбумин 27,0-38,4 г/л, креатинин 50,9-71,9 мкмоль/л, мочевина 4,1-7,6 ммоль/л, общий билирубин 5,9-9,4 мкмоль/л, АЛТ 17-57 ед./л, АСТ 17-52 ед./л. При пункции сустава свободно аспирировался жидкий, мутный без видимых включений серозный экссудат до 5-8 мл, без ощутимого запаха, рН среды составлял 6,9-7,2. Количество лейкоцитов 2,450-3,450 тыс.кл/мм3. В мазках синовиальной жидкости определяли: палочкоядерные нейтрофилы 19-27, сегментоядерные нейтрофилы 39-52, лимфоциты 19-37, моноциты 3-5 %, лимфоидно-ретикулярные клетки (ретикулоциты, плазмоциты, гистиоциты, макрофаги, синовиоциты, фибробласты) не выявляли (рис. 24,25). 70 плазмоцит эритроциты нейтрофилы Рис. 24,25. Синовиальная жидкость. На 3-й день острого асептического синовита коленного сустава. Окраска по Паппенгейму. Объектив 90, окуляр 10 71 Для лечения собак второй опытной группы использовали нестероидный противовоспалительный препарат римадил (действующее вещество карпрофен). В первый день лечения проводили артроцентез, при котором из полости сустава аспирировался мутноватый, жидкий серозный экссудат. С интервалом 12 часов двукратно подкожно вводили раствор римадила (из расчета 4 мг/кг массы тела), далее применяли таблетированную форму римадила (из расчета 2 мг/кг массы тела два раза в день) до полного клинического выздоровления животных. Значительные улучшения в клиническом течении болезни собак наблюдали на 6-8 сутки лечения. Общая температура снижалась до 38,6-38,90С, частота пульса 90-114 ударов в минуту, дыхательные движения 24-27 в минуту. Исчезал воспалительный отек вокруг суставов, местная температура и явная болезненность значительно снижались. Уменьшалась хромота до слабой степени типа опирающейся конечности при удовлетворительном общем состоянии. У животных повышалась активность и энергичность в движениях. Корм поедали охотно, естественные отправления были в пределах физиологической нормы. В области коленного сустава кожа подвижная, эластичная, при пассивных движениях болезненность не определяли. Глубокой пальпацией в области боковых связок сустава отмечали слабую болевую реакцию. На рентгенограммах видимых изменений не наблюдали. В крови собак обнаруживалось: гемоглобина 97-117 г/л, эритроцитов 5,01-6,32 млн./мм3, тромбоцитов 232-301 тыс./мм3, лейкоцитов 10,8-12,0 тыс./мм3, СОЭ-2-3. В лейкограмме: эозинофилов 1-2, палочкоядерных нейтрофилов 4-7, сегментоядерных нейтрофилов 53-63, лимфоцитов 26-36, моноцитов 1-4 %. Синовиальная жидкость суставов была прозрачной, тягучей, без видимых включений, рН среды 7,1-7,3. Лейкоциты – 1,050-1,650 тыс.кл/мм3, в мазках синовиальной жидкости определяли: палочкоядерные нейтрофилы 58, сегментоядерные нейтрофилы 14-21, лимфоциты 61-66, моноциты 2-4, ре- 72 тикулоциты 4-7, плазмоциты 1-2, гистиоциты 1-2, макрофаги 0-1, синовиоциты 0-1 %. В сыворотке крови: общий белок 67,8-79,5 г/л, альбумин 25,4-37,1 г/л, креатинин 60,2-75,7 мкмоль/л, мочевина 3,7-7,3 ммоль/л, общий билирубин 4,9-8,6 мкмоль/л, АЛТ 20-49 ед./л, АСТ 19-57 ед./л. Бактериологическими исследованиями экссудата микрофлоры не было выявлено, что подтверждает асептическое течение воспалительного процесса в суставе. Клиническое выздоровление у собак второй опытной группы наступало на 12-14 день лечения. К этому сроку у собак полностью восстанавливалась функция конечности. Общие клинические, биохимические показатели крови и синовиальной жидкости суставов были в пределах физиологической нормы. Температура тела 38,1-38,40С, частота пульса 80-94 ударов в минуту, дыхательные движения 19-22 в минуту. Собаки были активными, энергичными в движениях. Прием воды и корма, естественные отправления были в пределах физиологической нормы, расстройств со стороны желудочнокишечного тракта и других систем организма при обследовании не наблюдалось. При пальпации коленного сустава и пассивных его движениях конечностью отклонений от нормы не обнаруживали. Промеры суставов были идентичными с интактными. Синовиальные вывороты при пальпации не напряжены, не флюктуировали, безболезненны, местная температура не повышена, хромота отсутствовала (рис. 27,28). На рентгенограмме патологических изменений не обнаруживали. Показатели крови следующие: гемоглобина 89-105 г/л, эритроцитов 4,22-5,23 млн./мм3, тромбоцитов 176-276 тыс./мм3, лейкоцитов 9,5-11,1 тыс./мм3, СОЭ-1-2. В лейкограмме основные популяции распределялись следующим образом: базофилы 0-1, эозинофилы 1-3, палочкоядерные нейтрофилы 2-3, сегментоядерные нейтрофилы 54-66, лимфоциты 27-38, моноциты 2-4 % (таблица 11, рис. 29,30). Обобщенные данные указывают на ряд общих 73 изменений морфологического состава крови, характерных для развития острого асептического воспаления в суставе. Во-первых, отмечается возрастание уровня СОЭ с 1,0 до 4,0, что указывает на наличие очага воспаления в организме собак. Во-вторых, отмечается лейкоцитоз и снижение показателей гемоглобина, эритроцитов и тромбоцитов. Анализируя морфологический состав крови на 6-8 сутки, у собак контрольной группы сохраняется нейтрофильный лейкоцитоз, но отмечается снижение значение СОЭ. В опытной же группе, на фоне терапии римадилом отмечается снижение уровня лейкоцитов и лейкограмма практически не отличаются от лейкоформулы здоровых собак. Однако при этом римадил значительно и достоверно приводит к снижению уровня гемоглобина, эритроцитов и тромбоцитов. Данное воздействие к моменту клинического выздоровления собак только усиливается и выражено сильнее, чем у собак в группе кетофена. Состав и свойства синовиальной жидкости нормализовались: показатель рН составил 7,3-7,5, количество лейкоцитов 0,340-0,475 тыс.кл/мм3. В составе клеточных элементов: сегментоядерные нейтрофилы 1-3, лимфоциты 67-82, моноциты 1-4, ретикулоциты 9-18, плазмоциты 2-4, гистиоциты 2-3, макрофаги 0-1, синовиоциты 1-2, фибробласты 1-2 % (таблица 12, рис. 26). Изменения синовии при асептическом синовите у собак второй опытной группы, соответствуют синовии собак первой опытной и контрольной группы. Изменения синовиоцитограммы также находятся в прямой зависимости от стадии воспалительного процесса. В первой фазе отмечается полное исчезновение тканевых клеток, при этом в клетках кровяного русла отмечается значительное преобладание нейтрофилов, а переход острой фазы в пролиферативную (6-8 сутки) характеризуется сдвигом синовиоцитограммы влево, т.е. уменьшением числа нейтрофилов за счет повышенного содержания лимфоцитов. Следует отметить, что при клиническом выздоровлении собак отмечается присутствие единичных нейтрофилов. Показатель рН на фоне лечения римадила достигает уровня 7,4 к 12-14 суткам терапии, при этом рН у собак контрольной группы достигает только 7,3 к 18-20 суткам. 74 Показатели сыворотки крови определялись в пределах физиологической нормы: общий белок 61,8-76,1 г/л, альбумина 20,9-35,3 г/л, креатинин 65,6-78,4 мкмоль/л, мочевина 3,2-6,9 ммоль/л, общий билирубин 4,8-9,0 мкмоль/л, АЛТ 22-43 ед./л, АСТ 16-63 ед./л (таблица13). Данные обобщенных таблиц свидетельствуют о том, что развитие асептического воспаления сопровождается повышение уровня, прежде всего общего белка, главным образом за счет возрастания количества глобулинов. К периоду клинического выздоровления собак отмечается снижение данных показателей до нормативного уровня. Остальные показатели без изменений на протяжении всего периода терапии. гиалуроновая кислота лимфоциты Рис. 26. Синовиальная жидкость на 12-й день лечения собак препаратом римадил при остром асептическом синовите коленного сустава. Окраска по Паппенгейму. Объектив 90, окуляр 10 75 Рис. 27. Собака №13. Острый асептический синовит правого коленного сустава, 3-й день болезни Рис. 28. Собака №13. Острый асептический синовит правого коленного сустава, 12-й день лечения препаратом римадил. Клиническое выздоровление 76 Таблица 11 Показатели крови при остром асептическом синовите коленного сустава у собак на фоне лечения препаратом римадил Периоды исследования Количество животных Группы Тромб, тыс./мм3 В норме 10 М±m 356,7 ± 14,212 При воспалении до лечения 10 310,5 ± 12,958 6-8-е сутки лечения 12-14 сутки клиническое выздоровление животных 2 опытной группы 18-20 сутки клиническое выздоровление животных контрольной группы Лейк, тыс../мм3 Б Э М М±m - Лейкограмма Нейтрофилы Ю П М±m М±m 2,7 ± 0,518 СОЭ С М±m 64,1 ± 1,379 Лимф Мо М±m 27,7 ± 1,881 31,8 ± 1,672 М±m 3,3 ± 0,401 М±m 1,3 ± 0,176 3,9 ± 0,477 3,9 ± 0,150 30,6 ± 2,205 31,8 ± 2,606 3,2 ± 0,601 2,8 ± 0,200 4,4 ± 0,301 3,2 ± 0,401 М±m 9,22 ± 0,201 14,97 ± 0,255 М±m 0,2 ± 0,134 М±m 2,0 ± 0,251 - 1,8 ± 0,268 - - 13,2с ± 0,986 49,3 ± 1,881 11,52 ± 0,341 13,54 ± 0,296 - 1,6 ± 0,301 - - 5,4 ± 0,551 59,2 ± 2,606 - 1,4 ± 0,301 - - 12,8 ± 1,153 49,6 ± 2,706 0,2 ± 0,200 1,6 ± 0,551 - - 2,6 ± 0,301 60,4 ± 2,456 32,2 ± 2,656 3,0 ± 0,501 1,8 ± 0,200 - 1,6 ± 0,451 - - 5,6 ± 0,301 61,8 ± 3,358 27,4 ± 2,807 3,6 ± 0,301 1,8 ± 0,200 5 1 257,2 ± 14,936 5 2 320,2 ± 21,201 5 1 223,4 ± 17,091 10,26 ± 0,321 5 2 335,4 ± 20,850 11,70 ± 0,401 1- опытная группа; 2- контрольная группа. Различия достоверности р<0,05-0,02 77 165 150 135 120 105 90 75 60 45 30 15 0 вторая опытная группа контроль ная группа до проведения эксперимента при выраженном воспа лении 6-8 сутки лечения клиническое выздоровление Рис. 29. Показатели гемоглобина (г/л) при лечении острого асептического синовита препаратом римадил 8 7 6 5 4 3 2 1 0 вторая опытная группа контрольная группа до проведения при эксперимента выраженном воспалении на 6-8 сутки клиническое лечения выздоровление Рис. 30. Показатели эритроцитов (млн./мм3) при лечении острого асептического синовита римадилом. 78 Таблица 12 Показатели СЖ* при остром асептическом синовите коленного сустава у собак на фоне лечения препаратом римадил Периоды исследования Количество животных В норме 10 При воспалении до лечения 10 Группы Лейкоциты, тыс.кл/мм3 М±m 7,55 ± 0,038 7,07 ± 0,032 7,26 ± 0,030 7,14 ± 0,030 М±m 0,18 ± 0,014 2,90 ± 0,119 1,35 ± 0,112 2,54 ± 0,155 Клетки группы А, % Нейтрофилы Лимфо- Моноциты циты П С М±m - М±m - 23,0 ± 1,254 6,6 ± 0,551 16,8 ± 1,153 Ретикулоциты Клетки группы В, % Плазмо- Гистио- Макроциты циты фаги Синовиоциты Фибробласты М±m - 44,3 ± 1,990 17,8 ± 1,152 37,6 ± 2,706 М±m 69,6 ± 1,639 29,1 ± 2,642 63,8 ± 0,902 40,0 ± 2,256 М±m 1,6 ± 0,251 3,6 ± 0,284 2,8 ± 0,401 3,4 ± 0,551 М±m 18,6 ± 1,538 - М±m 5,2 ± 0,752 - М±m 3,0 ± 0,334 - М±m 0,1 ± 0,075 - М±m 1,9 ± 0,385 - 5,8 ± 0,652 1,0 ± 0,501 1,2 ± 0,200 0,6 ± 0,301 1,2 ± 0,200 0,6 ± 0,301 0,2 ± 0,200 0,6 ± 0,301 - - - - - 5 1 5 2 1 7,40 ± 0,050 0,42 ± 0,032 - 5 2,0 ± 0,501 75,0 ± 2,005 2,2 ± 0,451 13,0 ± 1,754 2,6 ± 0,451 2,2 ± 0,200 0,6 ± 0,301 1,6 ± 0,301 0,8 ± 0,401 5 2 7,32 ± 0,040 0,47 ± 0,045 7,6 ± 0,802 22,8 ± 2,907 55,2 ± 3,408 3,0 ± 0,251 5,2 ± 0,652 2,6 ± 0,401 1,8 ± 0,200 0,4 ± 0,301 1,4 ± 0,451 - 6-8-е сутки лечения 12-14 сутки клиническое выздоровление животных 2 опытной группы 18-20 сутки клиническое выздоровление животных контрольной группы рН 1- опытная группа; 2- контрольная группа. СЖ* – синовиальная жидкость. Различия достоверности р<0,05-0,02 79 Таблица 13 Биохимические показатели крови при остром асептическом синовите коленного сустава у собак на фоне лечения препаратом римадил Периоды исследования Количество животных Группы В норме 10 Общий белок, г/л М±m 64,10 ± 1,488 При воспалении до лечения 10 87,38 ± 2,359 32,94 ± 1,968 65,50 ± 3,653 5,56 ± 0,359 7,73 ± 0,464 48,3 ± 8,544 48,4 ± 7,407 Креатинин, мкмоль/л Мочевина, ммоль/л АЛТ, ед./л АСТ, ед./л М±m 4,80 ± 0,426 Общий билирубин, мкмоль/л М±m 5,68 ± 0,535 М±m 27,70 ± 1,028 М±m 80,41 ± 3,005 М±m 43,5 ± 4,013 М±m 44,6 ± 4,264 5 1 74,50 ± 2,907 28,86 ± 2,075 65,00 ± 2,706 5,42 ± 0,561 6,84 ± 0,832 31,4 ± 4,411 32,8 ± 8,119 5 2 86,60 ± 2,055 31,96 ± 3,037 74,24 ± 5,618 5,10 ± 0,276 6,56 ± 0,757 62,8 ± 2,606 62,0 ± 3,508 5 1 66,72 ± 2,546 25,98 ± 2,817 71,96 ± 3,203 5,12 ± 0,586 6,38 ± 1,012 31,2 ± 3,909 33,2 ± 9, 423 5 2 77,58 ± 1,734 27,96 ± 1,423 77,80 ± 4,736 4,58 ± 0,642 5,88 ± 0,511 52,6 ± 3,559 54,2 ± 5,162 6-8-е сутки лечения 12-14 сутки клиническое выздоровление животных 2 опытной группы 18-20 сутки клиническое выздоровление животных контрольной группы Альбумин, г/л 1- опытная группа; 2- контрольная группа. Различия достоверности р<0,01-0,001 80 *** Выздоровление собак второй опытной группы, при лечении препаратом римадил наблюдалось к 12-14 суткам. В морфологическом составе крови к 6-8 суткам отмечалось достоверное снижение лейкоцитов, при этом лейкограммы практически не отличались от лейкоформулы здоровых животных, о чем свидетельствуют данные сравнительной таблицы 11. При этом римадил приводил к снижению уровня гемоглобина, эритроцитов и тромбоцитов. У собак второй опытной группы были получены следующие данные: до болезни гемоглобин – 145,2±5,613 г/л, эритроциты – 7,13±0,229 млн./мм3, тромбоциты – 357,0±19,046 тыс./мм3, до лечения (в разгар воспаления) гемоглобин 136,4±4,611 г/л, эритроциты 6,63±0,202 млн./мм3, тромбоциты 307,0±14,535 тыс./мм3, при контрольном обследовании на 6-8 сутки лечения гемоглобин составил 108,4±2,957 г/л, эритроциты 5,67±0,248 млн./мм3, тромбоциты 257,2±14,936 тыс./мм3, при клиническом выздоровлении гемоглобин снижался до 97,6±2,807 г/л, эритроциты до 4,77±0,199 млн./мм3, тромбоциты 223,4±17,091 тыс./мм3. Приведенные данные свидетельствуют, что снижение уровня данных показателей у собак второй опытной группы выражено сильнее, чем у собак группы кетофена. Биохимические показатели побочных эффектов не выявляли. Изменения синовиоцитограммы находились в прямой зависимости от стадии воспалительного процесса. В первой фазе отмечалось полное исчезновение тканевых клеток, при этом в клетках кровяного русла отмечалось значительное преобладание нейтрофилов, а переход острой фазы в пролиферативную характеризовался сдвигом синовиоцитограммы влево, т.е. уменьшением числа нейтрофилов за счет повышенного содержания лимфоцитов. При клиническом выздоровлении в синовии уровень лейкоцитов снижался до 0,42±тыс.кл/мм3, рН 7,40±0,050, обнаруживались единичные сегментоядерные нейтрофилы, уровень лимфоидно-ретикулярных клеток приближался к показателям здоровых животных. 81 3.4. Эффективность применения препарата кетофен в сочетании с лигфолом у собак третьей опытной группы Третья опытная группа была сформирована из 5 собак, возрастом 1,53,5 года, массой тела 19-25 кг, хорошей упитанности, правильного телосложения, 4 суки и 1 кобель. У собак наблюдали повышение температуры тела до 39,5-39,90С, пульса до 114-136 ударов в минуту, дыхательных движений до 27-34 в минуту. Собаки были угнетены, прием корма значительно снижен или отсутствовал, воды повышен. Естественные отправления в норме, изменений со стороны остальных систем организма не наблюдали. Собаки вставали неохотно, пораженной конечностью касались пола. В области коленного сустава ткани были отечными, кожа напряжена, неподвижна, образовавшаяся припухлость вокруг сустава горячая при пальпации и болезненная (рис. 31). Синовиальные вывороты напряжены, при бимануальной пальпации ощущалась флюктуация. Пассивными движениями выявлялась резкая боль в коленном суставе, при проводке отмечалась хромота смешанного типа от средней до высшей степени. На рентгенограммах определялось увеличение суставной щели. Рис. 31. Собака №18. Острый асептический синовит правого коленного сустава на 3-й день болезни 82 При артропункции аспирировался жидкий, мутный экссудат без видимых включений, рН- 7,0-7,2, лейкоциты 2,600-3,550 тыс.кл/мм3. Клеточный состав распределялся следующим образом: палочкоядерные нейтрофилы 1327, сегментоядерные нейтрофилы 44-54, лимфоциты 17-38, моноциты 3-5 %, ретикулоциты, плазмоциты, гистиоциты, макрофаги, синовиоциты, фибробласты не выявлялись (рис. 32). Морфологический состав крови: гемоглобина 103-142 г/л, эритроцитов 5,47-6,38 млн./мм3, тромбоцитов 274-309 тыс./мм3, лейкоцитов 13,4-15,2 тыс./мм3, СОЭ-3-5. Популяции лейкоцитов распределялись следующим образом: эозинофилы 0-1, палочкоядерные нейтрофилы 9-14, сегментоядерные нейтрофилы 46-54, лимфоциты 31-40, моноциты 2-5 %. В сыворотке крови содержалось: общего белка 79,5-85,2 г/л, альбуминов 21,8-30,4 г/л, креатинина 54,9-66,1 мкмоль/л, мочевины 4,1-5,6 ммоль/л, общего билирубина 4,2-7,1 мкмоль/л, АЛТ 31-58 ед./л, АСТ 43-56 ед./л. нейтрофилы эритроцит Рис. 32. Синовиальная жидкость при остром асептическом синовите на 3-й день болезни. Окраска по Паппенгейму. Объектив 90, окуляр 10 83 Для лечения собак третьей опытной группы применяли нестероидный противовоспалительный препарат кетофен (действующее вещество кетопрофен). В первый день лечения проводили артроцентез. На протяжении трех первых суток применяли инъекции 1% раствора кетофена (из расчета 2 мг\кг массы тела 1 раз в сутки), далее кетофен в виде таблеток (из расчета 1 мг\кг массы тела 1 раз в сутки) до полного клинического выздоровления. Одновременно использовали препарат лигфол 1 раз в сутки внутримышечно, в дозе 1 мл на первые, вторые, пятые и седьмые сутки от начала лечения. На 6-8 сутки лечения у животных третьей опытной группы отмечали улучшения в клиническом течении болезни (рис. 33,34). Одна из собак к седьмому дню лечения была клинически здорова. Температура тела -38,538,80С, частота пульса 84-106 ударов в минуту, дыхательные движения 22-28 в минуту. Собаки были активны, энергичны в движениях, наблюдалось уменьшение хромоты или полное исчезновение хромоты и воспалительного отека в зоне патологического процесса. В области коленного сустава кожа была подвижной, эластичной, при пассивных движениях болезненность в суставе не определялась. Глубокой пальпацией в области связок у одной собаки отмечалась слабая болевая реакция. На рентгенограммах видимых изменений в суставах не наблюдали. При клиническом исследовании крови получены следующие результаты: гемоглобин 117-146 г/л, эритроциты 6,08-7,17 млн./мм3, тромбоциты 309337 тыс./мм3, лейкоциты 11,4-12,2 тыс./мм3, СОЭ-2-3. Клеточный состав лейкоцитов следующий: эозинофилы 0-2, палочкоядерные нейтрофилы 4-7, сегментоядерные нейтрофилы 54-62, лимфоциты 30-37, моноциты 1-3 %. В сыворотке крови: общий белок 68,6-83,4 г/л, альбумин 22,8-31,2 г/л, креатинин 63,4-76,5 мкмоль/л, мочевина 3,8-4,9 ммоль/л, общий билирубин 4,8-6,9 мкмоль/л, АЛТ 32-58 ед./л, АСТ 34-61 ед./л. 84 Рис. 33. Коленный сустав собаки №19, острый асептический синовит коленного сустава на 3-й день после индуцирования патологического процесса, наличие воспалительного отека Рис. 34. Коленный сустав собаки №19, острый асептический синовит на 5-е сутки лечения препаратом кетофен в сочетании с лигфолом, отсутствие воспалительного отека 85 При исследовании синовиальной жидкости суставов получены следующие данные: рН- 7,2-7,4. Обнаруживалось уменьшение лейкоцитов до 1,150-1,600 тыс.кл/мм3, из которых палочкоядерные нейтрофилы 4-8, сегментоядерные нейтрофилы 12-21, лимфоциты 57-72, моноциты 2-4, ретикулоциты 6-9, плазмоциты 1-3, гистиоциты 1-2, макрофаги 0-1, синовиоциты 0-1 %. В сегментоядерных лейкоцитах было отмечено набухание сегментов, последние имели большую округленность. При бактериологическом исследовании экссудата из полости пораженного сустава микрофлоры не выявлено, что свидетельствует об асептическом течении воспалительного процесса. Клиническое выздоровление животных третьей группы наблюдали на 8-10 сутки лечения. Температура тела 38,0-38,40С, частота пульса 78-94 ударов в минуту, дыхательные движения 21-22в минуту. Животные были активными, охотно бегали на прогулке, хромоту на поврежденную конечность не наблюдали. Прием корма и воды охотный, естественные отправления были в пределах физиологической нормы, расстройств со стороны желудочнокишечного тракта и других систем организма при обследовании не наблюдали. Пальпацией и пассивными движениями конечностью отклонений от нормы не выявляли. Промеры суставов были идентичными с интактными. Контуры суставов ярко выделялись, синовиальные вывороты при пальпации были не напряжены, безболезненны, местная температура не повышена, хромота отсутствовала. На рентгенограмме суставов патологических изменений не обнаруживали, суставная щель не расширена. Содержание в крови гемоглобина 122-150 г/л, эритроцитов 6,21-7,22 млн./мм3, тромбоцитов 319-360 тыс./мм3, лейкоцитов 10,2-11,1 тыс./мм3, СОЭ-1-2. В лейкограмме основные популяции распределялись следующим образом: эозинофилы 0-1, палочкоядерные нейтрофилы 2-3, сегментоядерные нейтрофилы 57-65, лимфоциты 30-38, моноциты 1-3 % (таблица 14, рис. 86 36,37). Из приведенных таблиц видно, что к 6-8 дню при контрольном обследовании собак третьей опытной группы отмечается снижение лейкоцитов и СОЭ, лейкограмма приближена к показателям здоровых животных. При этом необходимо отметить, что побочные эффекты фармакологического действия кетофена, проявившиеся у собак первой опытной группы и проявляющийся в снижении уровня гемоглобина, эритроцитов и гемоглобина, сглаживаются, если в схеме лечения дополнительно использовался препарат лигфол. Состав и свойства синовиальной жидкости следующие: показатель рН составил 7,3-7,6, количество лейкоцитов 0,335-0,490 тыс.кл/мм3, из них в мазках установлено: сегментоядерные нейтрофилы 1-3, лимфоциты 68-78, моноциты 2-3, ретикулоциты 11-18, плазмоциты 2-6, гистиоциты 1-3, макрофаги 0-1, синовиоциты 1-3, фибробласты 0-1 % (таблица 15, рис. 35). Развитие воспалительного процесса в суставе сопровождается снижением показателя рН до 7,1, к концу первой недели лечения (что соответствует окончанию первой фазы воспалительного процесса), отмечается значительное повышение уровня рН до 7,3 в третьей опытной группе животных, при этом у контрольных собак данный показатель достигает соответствующего показателя в период клинического выздоровления. Количественный состав лейкоцитов у собак третьей опытной группы подвергается значительному снижению уже к 6-8 суткам терапии, у собак контрольной группы снижение происходит медленнее. Изменения синовиоцитограммы соответствуют стадии воспалительного процесса. В первой фазе отмечается полное исчезновение тканевых клеток, при этом в клетках кровяного русла отмечается значительное преобладание нейтрофилов, а переход острой фазы в пролиферативную характеризуется сдвигом синовиоцитограммы влево, т.е. уменьшением числа нейтрофилов за счет повышенного содержания лимфоцитов. При клиническом выздоровлении в синовии обнаруживаются единичные нейтрофилы. В сыворотке крови показатели были в пределах нормы: общий белок 62,9-74,2 г/л, альбумина 22,7-31,3 г/л, креатинин 68,2-92,8 мкмоль/л, мочеви- 87 на 2,0-4,8 ммоль/л, общий билирубин 5,1-7,0 мкмоль/л, АЛТ 27-49 ед./л, АСТ 41-52 ед./л, щелочная фосфатаза 179-289 ед./л, α-амилаза 739-935 ед./л (таблица 16). Изменения исследуемых показателей соответствуют изменениям у собак первой, второй и контрольной группы, введение лигфола способствует более раннему снижению уровня общего белка у собак третьей опытной группы, на фоне терапии кетофеном. гиалуронат (мукоидные клетки) лимфоцит Рис. 35. Синовиальная жидкость. Острый асептический синовит коленного сустава, 10 день лечения, наличие гиалуроната и лимфоцитов, клиническое выздоровление. Окраска по Паппенгейму. Объектив 90, окуляр 10 88 Таблица 14 Показатели крови при остром асептическом синовите коленного сустава у собак на фоне лечения кетофеном в сочетании с лигфолом Периоды исследования Количество животных Группы Тромб, тыс./мм3 В норме 10 М±m 352,4 ± 11,671 При воспалении до лечения 10 307,2 ± 10,617 6-8-е сутки лечения 5 1 5 2 8-10 сутки клиническое выздоровление животных опытной группы 5 1 18-20 сутки клиническое выздоровление животных контрольной группы 5 2 Лейк, тыс./мм3 Б М±m 9,29 ± 0,222 14,76 ± 0,226 11,82 ± 0,185 13,54 ± 0,296 М±m 0,1 ± 0,075 338,6 ± 9,222 10,62 ± 0,185 - 335,4 ± 20,850 11,70 ± 0,401 320,0 ± 5,764 320,2 ± 21,201 - - - - Э М±m 1,9 ± 0,301 1,2 ± 0,284 1,0 ± 0,251 1,4 ± 0,301 0,4 ± 0,301 1,6 ± 0,451 М М±m - Лейкограмма Нейтрофилы Ю П М±m М±m 2,5 ± 0,585 СОЭ С М±m 64,7 ± 1,572 Лимф Мо М±m 27,6 ± 1,889 34,3 ± 1,296 33,8 ± 1,403 31,8 ± 2,606 М±m 3,2 ± 0,502 М±m 1,3 ± 0,176 3,8 ± 0,435 4,0 ± 0,167 2,2 ± 0,652 2,6 ± 0,301 4,4 ± 0,301 3,2 ± 0,401 - - 13,5 ± 0,752 47,2 ± 1,170 - - 5,4 ± 0,802 57,6 ± 1,203 - - 12,8 ± 1,153 49,6 ± 2,706 - - 2,2 ± 0,200 62,0 ± 1,253 33,4 ± 1,554 2,0 ± 0,501 1,6 ± 0,301 - - 5,6 ± 0,301 61,8 ± 3,358 27,4 ± 2,807 3,6 ± 0,301 1,8 ± 0,200 1- опытная группа; 2- контрольная группа. Различия достоверности р<0,05-0,02 89 160 140 120 третья опытная группа 100 контрольная группа 80 60 40 20 0 до проведения эксперимента при выра женном 6-8 сутки лечения клиническое воспалении выздоровление Рис. 36. Показатели гемоглобина (г/л) при лечении острого асептического синовита препаратом кетофен в сочетании с лигфолом 8 7 6 5 4 3 2 1 0 третья опытная группа контрольная группа до проведения эксперимента при выраженном воспалении на 6-8 сутки лечения клиническое выздоровление Рис. 37. Показатели эритроцитов (млн./мм3) при лечении острого асептического синовита препаратом кетофен в сочетании с лигфолом 90 Таблица 15 Показатели СЖ* при остром асептическом синовите коленного сустава у собак на фоне лечения препаратом кетофен в сочетании с лигфолом Периоды исследования Количество животных В норме 10 При воспалении до лечения 10 Группы Лейкоциты, тыс.кл/мм3 Клетки группы А, % Нейтрофилы Лимфо- Моноциты циты П С Ретикулоциты Клетки группы В, % Плазмо- Гистио- Макроциты циты фаги Синовициты Фиб робласты М± m - М±m М±m М±m М±m М±m М±m М±m М±m М±m М±m М±m 7,56 ± 0,037 7,08 ± 0,027 7,28 ± 0,040 7,14 ± 0,030 0,18 ± 0,014 2,93 ± 0,125 1,36 ± 0,108 2,54 ± 0,155 - - 21,4 ± 1,672 6,2 ± 0,902 16,8 ± 1,153 45,7 ± 2,107 17,0 ± 2,255 37,6 ± 2,706 67,8 ± 1,338 29,2 ± 2,692 62,6 ± 3,208 40,0 ± 2,256 1,7 ± 0,234 3,7 ± 0,259 3,0 ± 0,251 3,4 ± 0,551 19,1 ± 1,388 - 6,5 ± 0,585 - 2,7 ± 0,485 - 0,1 ± 0,075 - 2,1 ± 0,376 - 7,0 ± 0,752 1,0 ± 0,501 2,0 ± 0,251 0,6 ± 0,301 1,4 ± 0,301 0,6 ± 0,301 0,2 ± 0,200 0,6 ± 0,301 - - - - 1,0 ± 0,00 0 5 1 5 2 1 7,44 ± 0,055 0,40 ± 0,038 - 5 2,0 ± 0,251 72,0 ± 2,255 2,2 ± 0,200 14,2 ± 1,603 4,4 ± 0,702 2,2 ± 0,601 0,6 ± 0,301 1,4 ± 0,401 5 2 7,32 ± 0,040 0,47 ± 0,045 7,6 ± 0,802 22,8 ± 2,907 55,2 ± 3,408 3,0 ± 0,251 5,2 ± 0,652 2,6 ± 0,401 1,8 ± 0,200 0,4 ± 0,301 1,4 ± 0,451 6-8-е сутки лечения 8-10 сутки клиническое выздоровление жив. опытной группы 18-20 сутки клиническое выздоровление животных контрольной группы рН - 1- опытная группа; 2- контрольная группа. СЖ* – синовиальная жидкость. Различия достоверности р<0,05-0,02 - 91 Таблица 16 Биохимические показатели крови при остром асептическом синовите коленного сустава у собак на фоне лечения кетофеном в сочетании с лигфолом Периоды исследования Количество животных Группы Общий белок, г/л Альбумин, г/л Креатинин, мкмоль/л Мочевина, ммоль/л АЛТ, ед./л АСТ, ед./л М±m 3,93 ± 0,349 Общий билирубин, мкмоль/л М±m 5,76 ± 0,296 М±m 28,20 ± 1,070 М±m 79,17 ± 3,087 М±m 40,7 ± 3,720 М±m 43,3 ± 3,327 В норме 10 М±m 64,98 ± 1,436 При воспалении до лечения 10 87,56 ± 2,115 29,84 ± 2,369 65,34 ± 2,883 5,10 ± 0,309 6,99 ± 0,465 55,1 ± 5,217 58,4 ± 3,461 27,42 ± 1,544 31,96 ± 3,037 70,72 ± 2,621 74,24 ± 5,618 4,30 ± 0,251 5,10 ± 0,276 5,94 ± 0,456 6,56 ± 0,757 44,4 ± 6,215 62,8 ± 2,606 45,8 ± 5,162 62,0 ± 3,508 6-8-е сутки лечения 8-10 сутки клиническое выздоровление животных опытной группы 18-20 сутки клиническое выздоровление животных контрольной группы 5 1 5 2 76,00 ± 2,982 86,60 ± 2,055 5 1 68,74 ± 2,135 28,14 ± 1,925 77,88 ± 4,320 3,48 ± 0,466 6,04 ± 0,406 37,4 ± 4,561 45,2 ± 2,406 5 2 77,58 ± 1,734 27,96 ± 1,423 77,80 ± 4,736 4,58 ± 0,642 5,88 ± 0,511 52,6 ± 3,559 54,2 ± 5,162 1- опытная группа; 2- контрольная группа. Различия достоверности р<0,01-0,001 92 *** После обнаружения достоверного снижения показателей гемоглобина, эритроцитов и тромбоцитов у собак первой и второй опытной группы, нами были созданы третья и четвертая группы, в схему лечения которых был введен препарат лигфол. Выздоровление собак третьей опытной группы, при лечении кетофеном в сочетании с препаратом лигфол наблюдалось на 8-10 сутки. Необходимо отметить значительные изменения в гематологических показателях, которые характеризуются значительным снижением уровня лейкоцитов уже к 6-8 суткам терапии. К 8-10 суткам уровень лейкоцитов достигал 10,62±0,185 тыс./мм3, уровень СОЭ снижался до уровня 1,6±0,301. Наиболее значимыми для нас являлись показатели гемоглобина, эритроцитов и гемоглобина. Были получены следующие данные. До проведения эксперименты гемоглобин 146,6±7,568 г/л, эритроциты 7,14±0,211 млн./мм3, тромбоциты 348,6±11,327 тыс./ мм3, в разгар воспаления: гемоглобин 124,6±7,468 г/л, эритроциты 6,03±0,165 млн./мм3, тромбоциты 300,4±7,468 тыс./ мм3, на 6-8 сутки лечения: гемоглобин - 131,2±5,914 г/л, эритроциты 6,46±0,185 млн./мм3, тромбоциты 320,0±5,764 тыс./ мм3, при клиническом выздоровлении: гемоглобин 137,6±6,065 г/л, эритроциты 6,69±0,204 млн./мм3, тромбоциты 338,6±9,222 тыс./ мм3. Приведенные данные указывают на то, что введение препарата лигфол в схему лечения собак приводит выраженному приближению исследуемых показателей к их уровню до проведения эксперимента. Биохимические показатели не выходили за уровень показателей здоровых собак. В показателях синовиальной жидкости также не отмечалось значимых различий с показателями собак первой и второй опытных групп, рН к моменту выздоровления составлял 7,44±0,055, количество лейкоцитов 0,40±0,038 тыс.кл./мм3, обнаруживались единичные сегментоядерные нейтрофилы. Учитывая, что данные изменения происходили в более ранние сроки, это указывает на то, что лигфол обеспечивает стимуляцию регенераторных процессов в коленном суставе, с более ранним восстановлением функции конечности. 93 3.5. Эффективность применения препарата римадил в сочетании с лигфолом у собак четвертой опытной группы Четвертая опытная группа состояла из 5 беспородных собак, возрастом 1,5-3,5 года, массой тела 19-25 кг, хорошей упитанности, правильного телосложения, 4 суки и 1 кобель. У собак наблюдали следующие изменения: повышение температуры тела до 39,6-39,90С, пульса до 108-144 ударов в минуту, дыхательных движений до 25-34 в минуту. Собаки были вялые, угнетенные, большую часть времени лежали. Прием корма вялый, воды повышен. Естественные отправления в норме, изменений со стороны остальных систем организма не наблюдалось. При пальпации области коленного сустава устанавливалась горячая, отечная, болезненная припухлость (рис. 38,39). Синовиальные вывороты напряжены и болезненны, при бимануальной пальпации ощущалась флюктуация. Пассивными движениями выявляли резкую болезненность в коленном суставе, хромота была на поврежденную конечность смешанного типа от средней до высшей степени. На рентгенограммах определяли увеличение суставной щели до 3 мм. В крови определялось: гемоглобина 119-149 г/л, эритроцитов 6,03-7,54 млн./мм3, тромбоцитов 299-394 тыс./мм3, увеличение лейкоцитов до 14,2-15,6 тыс./мм3, СОЭ-3-5. В мазках насчитывалось: эозинофилы 1-3, палочкоядерные нейтрофилы 9-15, сегментоядерные нейтрофилы 41-51, лимфоциты 3242, моноциты 3-5 %. В сыворотке крови содержалось: общий белок 79,0-84,5 г/л, альбумин 25,0-39,0 г/л, креатинин 54,4-69,8 мкмоль/л, мочевина 3,7-5,8 ммоль/л, общий билирубин 4,8-8,4 мкмоль/л, АЛТ 38-62 ед./л, АСТ 38-75 ед./л. Из полости сустава свободно аспирировался жидкий, мутный экссудат без видимых включений, рН- 7,0-7,1, лейкоциты 2,350-3,250 тыс. кл/мм3, из которых палочкоядерные нейтрофилы 18-28, сегментоядерные нейтрофилы 44-53, лимфоциты 20-31, моноциты 3-5 %, ретикулоциты, плазмоциты, гистиоциты, макрофаги, синовиоциты не выявлялись. 94 Рис. 38. Собака №21. Острый асептический синовит коленного сустава на 3-й день после индуцирования патологического процесса. Рис. 39. Коленный сустав собаки №21, острый асептический синовит, 3-й день после индуцирования патологического процесса, наличие воспалительного отека 95 Для лечения животных четвертой опытной группы применяли нестероидный противовоспалительный препарат римадил (действующее вещество карпрофен). В первый день лечения проводили артроцентез, с интервалом 12 часов двукратно подкожно вводили раствор римадила (из расчета 4 мг/кг массы тела), далее перорально применяли его в таблетках (из расчета 2 мг/кг массы тела 2 раза в день) до клинического выздоровления. Одновременно использовали препарат лигфол 1 раз в сутки, внутримышечно в дозе 1 мл на первые, вторые, пятые, седьмые сутки от начала лечения. На 6-8 сутки лечения у животных четвертой опытной группы отмечали улучшение в клиническом течении болезни. Температура тела снижалась до 38,5-38,70С, частота пульса до 80-92 ударов в минуту, дыхательные движения до 21-24 в минуту. Общее состояние собак было хорошим, поедание корма было активным. Исчезал отек вокруг тканей сустава, местная температура не повышена, промеры соответствовали интактным. Хромота типа опирающейся конечности уменьшалась до слабой степени или не отмечалась, при пассивных движениях болезненность в суставе не определялась. На рентгенограммах видимых изменений не устанавливали. В крови собак обнаруживалось: гемоглобина 116-141 г/л, эритроцитов 5,65-7,36 млн./мм3, тромбоцитов 316-392 тыс./мм3, лейкоцитов 10,7-12,5 тыс./мм3, СОЭ-2. В лейкограмме: эозинофилы 1-2, палочкоядерные нейтрофилы 5-8, сегментоядерные нейтрофилы 49-59, лимфоциты 30-41, моноциты 2-4 %. В сыворотке крови: общий белок 69,7-78,2 г/л, альбумин 23,6-34,7 г/л, креатинин 57,8-72,3 мкмоль/л, мочевина 4,1-5,0 ммоль/л, общий билирубин 4,9-7,2 мкмоль/л, АЛТ 29-57 ед./л, АСТ 28-65 ед./л. Синовиальная жидкость суставов была прозрачной, тягучей, без видимых включений, рН повышалась до 7,2-7,4. Количество лейкоцитов снижалось до 1,200-1,550 тыс.кл/мм3, в мазках клеточный состав был следующим: палочкоядерные нейтрофилы 5-8, сегментоядерные нейтрофилы 13-21, лимфоциты 54-66, моноциты 2-3, ретикулоциты 5-11, плазмоциты 2-4, гистиоциты 1-2, синовиоциты 0-1 %. 96 В серозном экссудате из полости пораженного сустава бактериальной микрофлоры не выделялось. Полное клиническое выздоровление животных четвертой группы наблюдалось на 11-12 сутки лечения. Температура тела 38,1-38,40С, частота пульса 74-90 ударов в минуту, дыхательные движения 20-22 в минуту. Общее состояние собак было хорошим, прием корма, воды, естественные отправления были в пределах физиологической нормы, расстройств со стороны желудочно-кишечного тракта и других систем организма при обследовании не наблюдали. Пассивными движениями конечностью не обнаруживали нарушений функции сустава, движения не ограничены, свободные, безболезненные. Контуры суставов были четко выражены, синовиальные вывороты не напряжены, при бимануальной пальпации флюктуации не выявляли. При активных движениях хромоты не наблюдали. Промеры суставов были идентичными с интактными. Кожа в области сустава была подвижной, эластичной, местная температура была не повышена. Содержание в крови гемоглобина 111-129 г/л, эритроцитов 5,12-7,01 млн./мм3, тромбоцитов 264-342 тыс./мм3, лейкоцитов 9,9-11,2 тыс./мм3, СОЭ1-2. В лейкограмме основные популяции распределялись следующим образом: эозинофилы 0-2, палочкоядерные нейтрофилы 1-4, сегментоядерные нейтрофилы 56-62, лимфоциты 29-37, моноциты 1-5 % (таблица 17, рис. 41,42). Из приведенных таблиц видно, что к 6-8 дню при контрольном обследовании собак четвертой опытной группы отмечается снижение лейкоцитов и СОЭ, лейкограмма приближена к показателям здоровых животных. При этом необходимо отметить, что ярко выраженные побочные эффекты фармакологического действия римадила, проявившиеся у собак второй опытной группы и проявляющийся в снижении уровня гемоглобина, эритроцитов и гемоглобина, сглаживаются, если в схеме лечения дополнительно использовался препарат лигфол, также как и у собак третьей опытной группы. 97 Артропункцией аспирировалась нормальная синовиальная жидкость. Она была прозрачной, нормальной вязкости, в небольшом количестве. Показатель рН составил 7,4-7,6, количество лейкоцитов 0,355-0,460 тыс.кл/мм3. В составе клеточных элементов обнаруживалось следующее: сегментоядерные нейтрофилы 1-3, лимфоциты 63-72, моноциты 1-3, ретикулоциты 14-21, плазмоциты 4-8, гистиоциты 1-3, макрофаги 0-1, синовиоциты 1-2, фибробласты 0-1 % (таблица 18, рис. 40). Показатели сыворотки крови также были в пределах физиологической нормы: общий белок 65,4-71,4 г/л, альбумин 21,4-32,3 г/л, креатинин 58,076,5 мкмоль/л, мочевина 3,1-4,9 ммоль/л, общий билирубин 4,6-6,8 мкмоль/л, АЛТ 25-48 ед./л, АСТ 24-54 ед./л (таблица 19). Изменения исследуемых показателей соответствуют изменениям у собак первой, второй, третьей и контрольной группы, введение лигфола способствует более раннему снижению уровня общего белка у собак третьей опытной группы, на фоне терапии римадилом. гиалуроновая кислота Рис. 40. Синовиальная жидкость, острый асептический синовит коленного сустава, 11 день лечения. Окраска по Паппенгейму. Объектив 90, окуляр 10 98 Таблица 17 Показатели крови при остром асептическом синовите коленного сустава у собак на фоне лечения римадилом в сочетании с лигфолом Периоды исследования Количество животных Группы Тромб, тыс./мм3 В норме 10 М±m 362,9 ± 15,667 При воспалении до лечения 10 323,9 ± 14,329 6-8-е сутки лечения 11-12 сутки клиническое выздоровление животных 4 опытной группы 18-20 сутки клиническое выздоровление животных контрольной группы Лейк, тыс./мм3 М±m 9,15 ± 0,192 14,96 ± 0,196 11,84 ± 0,346 13,54 ± 0,296 М±m 0,1 ± 0,075 - 5 1 317,8 ± 16,389 5 2 320,2 ± 21,201 5 1 330,2 ± 15,136 10,64 ± 0,221 2 335,4 ± 20,850 11,70 ± 0,401 5 Б - - - - Э М±m 2,2 ± 0,268 1,7 ± 0,293 1,6 ± 0,301 1,4 ± 0,301 0,8 ± 0,401 1,6 ± 0,451 М М±m - Лейкограмма Нейтрофилы Ю П М±m М±m 2,7 ± 0,518 С М±m 64,4 ± 1,471 Лимф Мо СОЭ мм/ч М±m 27,1 ± 1,889 34,8 ± 1,354 35,0 ± 1,504 31,8 ± 2,606 М±m 3,5 ± 0,418 М±m 1,2 ± 0,134 4,2 ± 0,435 3,9 ± 0,226 3,0 ± 0,501 2,0 ± 0,000 4,4 ± 0,301 3,2 ± 0,401 - - 13,6 ± 0,819 45,7 ± 1,404 - - 6,4 ± 0,551 54,0 ± 2,005 - - 12,8 ± 1,153 49,6 ± 2,706 - - 2,8 ± 0,451 59,0 ± 1,253 34,2 ± 1,353 3,2 ± 0,652 1,8 ± 0,200 5,6 ± 0,301 61,8 ± 3,358 27,4 ± 2,807 3,6 ± 0,301 1,8 ± 0,200 - - 1- опытная группа; 2- контрольная группа. Различия достоверности р< 0,05-0,02 99 160 140 120 100 80 60 40 20 0 четвертая опытная группа контрольная группа до проведения эксперимента при выраженном воспалении 6-8 сутки лечения клиническое выздоровление Рис. 41. Показатели гемоглобина (г/л) при лечении острого асептического синовита препаратом римадил в сочетании с лигфолом 8 7 6 5 4 3 2 1 0 четвертая опытная группа контрольная группа до проведения эксперимента при выраженном воспалении на 6-8 сутки лечения клиническое выздоровление Рис. 41. Показатели эритроцитов (млн./мм3) при лечении острого асептического синовита препаратом римадил в сочетании с лигфолом 100 Таблица 18 Показатели СЖ* при остром асептическом синовите коленного сустава у собак на фоне лечения препаратом римадил в сочетании с лигфолом Периоды исследования Количество животных В норме 10 При воспалении до лечения 10 Группы Лейкоциты, тыс./мм3 Клетки группы А, % Нейтрофилы Лимфо- Моноциты циты П С Ретикулоциты Клетки группы В, % Плазмо- Гистио- Макроциты циты фаги Синовициты Фиб робласты М± m - М±m М±m М±m М±m М±m М±m М±m М±m М±m М±m М±m 7,55 ± 0,033 7,07 ± 0,023 7,32 ± 0,040 7,14 ± 0,030 0,17 ± 0,014 2,85 ± 0,113 1,35 ± 0,075 2,54 ± 0,155 - - 22,8 ± 1,287 6,6 ± 0,551 16,8 ± 1,153 45,4 ± 1,923 17,4 ± 1,554 37,6 ± 2,706 67,0 ± 1,003 28,2 ± 2,441 60,4 ± 1,955 40,0 ± 2,256 1,5 ± 0,251 3,6 ± 0,284 2,4 ± 0,301 3,4 ± 0,551 19,8 ± 1,421 - 6,7 ± 0,568 - 2,7 ± 0,401 - 0,1 ± 0,075 - 2,2 ± 0,334 - 8,2 ± 1,153 1,0 ± 0,501 2,8 ± 0,401 0,6 ± 0,301 1,4 ± 0,301 0,6 ± 0,301 - 0,8 ± 0,200 - - - - 0,8 ± 0,20 0 5 1 5 2 1 7,46 ± 0,045 0,41 ± 0,019 - 5 2,2 ± 0,401 67,4 ± 1,554 2,0 ± 0,251 17,8 ± 1,403 5,4 ± 0,802 2,4 ± 0,451 0,4 ± 0,301 1,6 ± 0,301 5 2 7,32 ± 0,040 0,47 ± 0,045 7,6 ± 0,802 22,8 ± 2,907 55,2 ± 3,408 3,0 ± 0,251 5,2 ± 0,652 2,6 ± 0,401 1,8 ± 0,200 0,4 ± 0,301 1,4 ± 0,451 5-7-е сутки лечения 8-11 сутки клиническое выздоровление жив. 4 опытной группы 16-18 сутки клиническое выздоровление жив. контрольной группы рН 1- опытная группа; 2- контрольная группа. СЖ* – синовиальная жидкость. Различия достоверности р<0,05-0,02 - - 101 Таблица 19 Биохимические показатели крови при остром асептическом синовите коленного сустава у собак на фоне лечения римадилом в сочетании с лигфолом Периоды исследования Количество животных Группы Общий белок, г/л Альбумин, г/л Креатинин, мкмоль/л Мочевина, ммоль/л Общий билирубин, мкмоль/л АЛТ, ед./л АСТ, ед./л М±m М±m М±m М±m М±m М±m М±m 27,77 ± 1,072 78,06 ± 3,433 4,59 ± 0,255 5,32 ± 0,493 43,1 ± 2,884 44,7 ± 3,754 В норме 10 64,19 ± 1,742 При воспалении до лечения 10 86,74 ± 2,458 32,60 ± 2,366 65,43 ± 3,482 5,11 ± 0,329 7,19 ± 0,540 57,5 ± 4,347 61,0 ± 4,013 5 1 74,68 ±2,070 28,8 ± 2,907 65,66 ± 3,864 4,46 ± 0,221 6,04 ± 0,471 42,6 ± 5,463 49,8 ± 6,115 5 2 86,60 ± 2,055 31,96 ± 3,037 74,24 ± 5,618 5,10 ± 0,276 6,56 ± 0,757 62,8 ± 2,606 62,0 ± 3,508 5 1 68,78 ± 0,942 26,28 ± 2,967 67,58 ± 3,999 4,12 ± 0,261 5,76 ± 0,446 37,6 ± 4,711 40,0 ± 6,014 5 2 77,58 ± 1,734 27,96 ± 1,423 77,80 ± 4,736 4,58 ± 0,642 5,88 ± 0,511 52,6 ± 3,559 54,2 ± 5,162 5-7-е сутки лечения 9-12 сутки клиническое выздоровление животных опытной группы 16-18 сутки клиническое выздоровление животных контрольной группы 1- опытная группа; 2- контрольная группа. Различия достоверности р<0,01-0,001 102 *** Выздоровление собак четвертой опытной группы при лечении римадилом в сочетании с препаратом лигфол наступало к 11-12 суткам. Следовательно, в сравнении с собаками группы римадила, раньше на 2-3 суток, группы кетофена в сочетании с лигфолом позже на 2-4 суток, контрольной группы – раньше на 6-8 суток. Интересующие нас гематологические показатели были следующими. До проведения эксперимента: гемоглобин 145,6±5,212 г/л, эритроциты 7,25±0,371 млн./мм3, тромбоциты 369,6±24,759 тыс./ мм3, в разгар воспаления: гемоглобин 133,8±4,416 г/л, эритроциты 6,67±0,338 млн./мм3, тромбоциты 333,8±20,148 тыс./ мм3, контрольное обследование на 6-8 сутки: гемоглобин 129,8±3,458 г/л, эритроциты 6,38±0,335 млн./мм3, тромбоциты 317,8±16,389 тыс./ мм3, при клиническом выздоровлении гемоглобин 123,8±3,208 г/л, эритроциты 6,94±0,328 млн./мм3, тромбоциты 330,2±15,136 тыс./ мм3. Анализируя выше изложенное необходимо отметить, что ярко выраженные побочные эффекты фармакологического действия римадила, проявившиеся у собак второй опытной группы, сглаживаются, если в схеме лечения дополнительно использовался препарат лигфол, также как и у собак третьей опытной группы. Изменения синовиоцитограммы находятся в прямой зависимости от стадии воспалительного процесса. В первой фазе отмечается полное исчезновение тканевых клеток, при этом в клетках кровяного русла отмечается значительное преобладание нейтрофилов, а переход острой фазы в пролиферативную характеризуется сдвигом синовиоцитограммы влево, т.е. уменьшением числа нейтрофилов за счет повышенного содержания лимфоцитов. При этом к моменту выздоровления у собак также как и в других опытных группах обнаруживались единичные сегментоядерные нейтрофилы, уровень рН снижался до 7,46±0,045, лейкоцитов до 0,41±0,019 тыс./ мм3. Биохимические показатели сыворотки крови находились в пределах физиологической нормы на протяжении всего периода исследования. 103 ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ Нестероидные противовоспалительные препараты многие десятилетия широко применяются в медицине, с каждым годом в арсенале врачей появляются новые средства, обладающие различными характеристиками, но основным действие которых остаются противовоспалительный, анальгетический и жаропонижающий эффекты. С развитием ветеринарии в России специалисты изначально стали применят нестероидные противовоспалительные препараты, разработанные для человека, но столкнулись с рядом трудностей, основными из которых явились: дозировка лекарственных средств и ярко выраженные побочные эффекты. Что и послужило толчком к разработке нестероидных противовоспалительных препаратов для лечения животных. Некоторые из данных средств более 10 лет используются в практике ветеринарными специалистами, однако, данные, имеющиеся в доступной литературе об эффективности и безопасности применения НПВП у животных, противоречивы и недостаточно аргументированы. Учитывая выше сказанное, нами проводились исследования с использованием наиболее распространенных нестероидных противовоспалительных препаратов нового поколения (карпрофен, кетопрофен) на экспериментальных животных (собаки). Были изучены влияние данных средств на общее состояние, костную основу сустава, цитоморфологические и биохимические показатели крови и синовиальной жидкости у собак при остром асептическом синовите коленного сустава. Изучалась целесообразность одновременного применения НПВП и препарата лигфол. Для достижения поставленных целей нами были сформированы четыре опытные и одна контрольная группы собак. После изучения клинического статуса, животных вводили в опыт. Собакам экспериментально была воссоздана модель острого асептического воспаления коленного сустава и проведено соответствующее лечение. 104 Полученные данные выявили высокую эффективность применения нестероидных противовоспалительных препаратов при лечении собак с острым асептическим синовитом коленного сустава по сравнению с традиционными средствами лечения (интра- и параартикулярные блокады 0,5% раствором новокаина и компрессы с димексидом). Так, применение нестероидных противовоспалительных препаратов значительно сокращает период выздоровления животных, что подтверждают следующие данные. Собаки первой опытной группы, для лечения которых использовали нестероидный противовоспалительный препарат кетофен (действующее вещество кетопрофен), выздоравливали к 10-13 суткам наблюдения. Лечение осуществлялось по следующей схеме. В первый день лечения проводился артроцентез коленного сустава и на протяжении первых трех суток применялись подкожные инъекции 1% раствора кетофена (из расчета 2 мг\кг массы тела 1 раз в сутки), далее таблетированная форма кетофена (из расчета 1 мг\кг массы тела 1 раз в сутки) до клинического выздоровления животных. Клиническое выздоровление собак второй опытной группы, для лечения которых использовали нестероидный противовоспалительный препарат римадил (действующее вещество карпрофен), наступало на 12-14 сутки. Терапия осуществлялась по следующей схеме. В первый день лечения производился артроцентез коленного сустава, далее с интервалом 12 часов двукратно подкожно вводили раствор римадила (из расчета 4 мг/кг массы тела), далее таблетированная форма римадила (из расчета 2 мг/кг массы тела 2 раза в день) до клинического выздоровления собак. Клиническое выздоровление собак третьей опытной группы, для лечения применяли нестероидный противовоспалительный препарат кетофен (действующее вещество кетопрофен) в сочетании с препаратом лигфол, наступало к 8-10 суткам. Терапия осуществлялась по следующей схеме. В первый день лечения производилась опоражнивающая пункция сустава и на протяжении первых трех суток применялись подкожные инъекции 1% раствора кетофена (из расчета 2 мг\кг массы тела 1 раз в сутки), далее таблети- 105 рованная форма кетофена (из расчета 1 мг\кг массы тела 1 раз в сутки). Одновременно использовался препарат лигфол внутримышечно 1 раз в день в дозе 1 мл на 1,2,5,7 сутки от начала лечения. Клиническое выздоровление собак четвертой опытной группы, для лечения животных применяли нестероидный противовоспалительный препарат римадил (действующее вещество карпрофен) в сочетании с препаратом лигфол, наступало к 11-12 суткам наблюдения. Лечение осуществлялось по следующей схеме: в первый день лечения проводилась опоражнивающая пункция сустава, далее с интервалом 12 часов двукратно подкожно вводили раствор римадила (из расчета 4 мг/кг массы тела), далее таблетированная форма римадила (из расчета 2 мг/кг массы тела 2 раза в день). Одновременно использовали препарат лигфол внутримышечно в дозе 1 мл на 1,2,5,7 сутки от начала лечения В свою очередь, клиническое выздоровление собак контрольной группы наступало на 18-20 сутки. Лечение данных животных осуществлялась традиционным методом без применения нестероидных противовоспалительных препаратов. В первый день проводился артроцентез коленного сустава, применялись компрессы с димексидом (действующее вещество диметилсульфоксид) в разведении 1:1 с дистилированной водой, пара- и интраартикулярно вводили 0,5% раствор новокаина 5-7 мл (одна инъекция раз в три дня) до клинического выздоровления. В литературе наиболее полные исследования, посвященные применению НПВП при лечении заболеваний опорно-двигательного аппарата у собак, освещены в работах Lees P. [143], Lipcomb V.J. [148], Landoni M.F. [138], Mathewsk K.A. [153], Toutain P.L. [192] и касаются изучения анальгетического, антипиритического, хондропротективного, антитромбического и противовоспалительного действия данных средств. Также имеются исследования, которые посвящены влиянию НПВП на суставной хрящ, Benton H.P. [73] и Lees P. [141] в своих работах показали, что под влиянием данных средств увеличивается скорость синтеза хрящевого матрикса (протеогликанов) хондроци- 106 тами в тканевой культуре in vitro. Учитывая, всестороннее изучение данных вопросов, в задачи нашего исследования освещение данных свойств НПВП не входило. Результаты исследования белка синовиальной жидкости и сыворотки крови. 30 25 20 15 10 5 0 1 группа 2 группа 3 группа 4 группа Контрол ьная группа Клиническое выздоровление 10,4 11,1 9,9 10,8 12,2 6-8 сутки лечения 12,1 14,3 11,2 12,3 18,3 при синовите 24,3 25,3 24,5 23,9 25,2 Норма 9,2 9,3 9,1 10,2 9,5 Рис. 42. Динамика белка в синовиальной жидкости (г/л) 100 90 80 70 60 50 40 30 20 10 0 1 группа 2 группа 3 группа 4 группа Контрол ьная группа Клиническое выздоровление 69,1 66,2 68,7 68,8 77,6 6-8 сутки лечения 74,6 74,5 75,9 74,7 86,6 при синовите 91,9 82,1 82,5 80,9 92,6 Норма 62,8 63,5 65,3 63,7 64,7 Рис. 43. Динамика белка в сыворотке крови (г/л) 107 При развитии синовита наблюдается повышение концентрации белка в синовиальной жидкости, что обусловлено повышенной сосудистой проницаемостью при воспалении. Как видно из рисунков 42 и 43 уровень белков в синовии зависит от содержания протеинов в плазме крови. При этом необходимо отметить, что воспаление суставов вызывало более значимое увеличение белка в синовиальной жидкости, чем в плазме крови. Добавление препарата лигфол в схему лечения собак третьей и четвертой групп на концентрацию белка значимого влияния не оказывало. В опубликованных работах Борисова М.С. [6,7,8] изучены ткани коленных, скакательных суставов в норме и при асептических воспалительных процессах у собак, крупного рогатого скота и других животных. Особое внимание в данных работах уделено изучению морфологического и белкового состава синовиальной жидкости. Цитологический состав синовии нами распределялся по двум основным типам: 1) тип «А» - клетки, поступающие из кровяного русла (лимфоциты, моноциты, палочкоядерные и сегментоядерные нейтрофилы); 2) тип «Б» - клетки лимфоидно-ретикулярного происхождения, поступающие из тканей субсиновиального слоя суставной сумки и клетки эпителиального слоя синовиальной оболочки – синовиоциты (кроющие клетки). Данные об изменениях цитологического состава синовиальной жидкости важны для ранней диагностики повреждений суставов и сухожильных влагалищ. При этом изменение количественного соотношения клеток синовии не является специфическим, однако оно позволяет дифференцировать воспалительный и невоспалительный процесс, а также судить о степени воспаления. О воспалительных изменениях в синовии свидетельствуют увеличение содержания нейтрофилов, низкое содержание лимфоцитов. В дегенеративно измененных суставах в отсутствие обострения синовио-цитограмма приближается к нормальной. Проведенные нами исследования синовиальной жидкости коленного сустава у собак согласуются с данными Борисова М.С. [6,7,8], Павловой В.Н. 108 [47], Березкина А.Г. [4].Однако, изучая клеточный состав синовии, было отмечено, что появление фибробластов во второй фазе течения воспалительного процесса (пролиферации) указывает на начало явлений пролиферации, а исчезновение их определяет нормализацию синовиальной жидкости и клиническое выздоровление животных. Также, фагирование макрофагами (ретикулярного происхождения) нейтрофилов, определяет восстановление рН среды, при нормализации которой нейтрофилы исчезают. Из приведенных данных, очевидно, что синовиальная жидкость в нормальном суставе собак содержит лейкоциты (моноциты, лимфоциты) и тканевые клетки, включая клетки покровного слоя – синовиоциты. Некоторые авторы [47] отмечают присутствие в нормальном суставе нейтрофилов и эритроцитов, полученные нами результаты не противоречат данным утверждениям. Нами обнаруживались данные клетки в составе синовии при клиническом выздоровлении собак опытных групп. Клетки синовиальной жидкости как тканевого, так и кровяного происхождения находятся на различных стадиях своего жизненного цикла: одни из них полностью жизнеспособны, другие находятся в состоянии разрушения и распада. У собак в содержимом здорового сустава отмечено колебание числа различных клеток. При этом результаты наших исследований совпадают с данными других авторов Борисова М.С. [6,7,8], Павловой В.Н. [47], Березкина А.Г. [4] и свидетельствуют о том, что характерным для синовии собак, как и других млекопитающих, является преобладание форменных элементов крови (моноцитов и лимфоцитов) над клетками тканевого происхождения. В нашем эксперименте, у всех собак до лечения из поврежденного коленного сустава апспирировался жидкий экссудат, рН 6,9-7,2, количество лейкоцитов достигало 2,2-3,5 тыс. кл/мм3. В цитоморфологическом составе преобладали палочкоядерные нейтрофилы, сегментоядерные нейтрофилы, лимфоциты, моноциты, в тоже время ретикулоциты, плазмоциты, гистиоциты, синовиоциты, макрофаги, фибробласты не обнаруживались или обнаруживались единично. 109 В то же время отмечаются и различия в полученных данных, это объясняется, прежде всего, различием материала, методов получения синовии, условиями обработки препаратов, особенностями состояния сустава и обмена веществ организма, которые не поддаются учету, а также связано с неодинаковым подходом исследователей к анализу полученного фактического материала. При этом из всех известных данных следует, что общее число и процентное содержание клеток в синовии, различное у разных животных, связано с видовой, породной спецификой их локомоции, функциональной нагрузкой, а также с индивидуальными особенностями каждого животного: условиями его жизни, степенью подвижности, условиями кормления, содержания и т.д. Даже у одного и того же животного в различное время и в различном функциональном состоянии синовия имеет отличия в своем клеточном составе именно потому, что отражает состояние синовиальной оболочки, хряща, сосудистых русел, нервного аппарата сустава в данный конкретный момент его жизнедеятельности. Даже самое небольшое отклонение от нормы еще более резко скажется на характере клеток синовии и их соотношении. Следует подчеркнуть, что закономерности изменения в синовиоцитограмме при определенном патологическом процессе является одним из важных показателей состояния синовиальной среды сустава и может служить целям диагностики, а динамика изменений синовиоцитограммы информировать о закономерностях течения болезни. Так, по нашим данным, в активной фазе острого асептического воспаления клеточный компонент синовии имеет свои характерные особенности. Отмечено исчезновение тканевых клеток и появление в значительном количестве элементов крови, среди которых преобладают нейтрофильные лейкоциты, между ними и лимфоцитами обнаружена достоверная обратная зависимость. Следует отметить характерное соотношение основных клеточных элементов синовии в различные стадии процесса. Благодаря тому, что выпот для исследования получали неоднократно, удалось проследить динамику и направленность процесса: переход острой фазы в пролиферативную характери- 110 зуется сдвигом синовиоцитограммы влево, т.е. уменьшением числа сегментоядерных и палочкоядерных нейтрофилов за счет повышенного содержания лимфоцитов. При контрольных обследованиях собак опытных групп на 6-8 сутки наблюдения, изменения в соотношении клеток синовиальной жидкости в мазках были характерны для нормализации воспалительного процесса: значительное снижение палочкоядерных нейтрофилов, сегментоядерных нейтрофилов, повышение количества лимфоцитов и моноцитов, появление тканевых клеток (ретикулоцитов, плазмоцитов, гистиоцитов). При этом было отмечено повышение рН 7,1-7,4, количество лейкоцитов снижалось до 1,051,80 тыс.кл/мм3. При клиническом выздоровлении собак состав и свойства синовиальной жидкости соответствовали физиологической норме. Показатель рН составлял 7,3-7,6, определялось незначительное количество лейкоцитов. В составе клеточных элементов преобладали лимфоциты, ретикулоциты, плазмоциты, синовиоциты, а также моноциты, гистиоциты, макрофаги и фибробласты. Однако в синовии обнаруживались единичные сегментоядерные нейтрофилы. В проведенной работе особое внимание нами было уделено изучению побочных эффектов, которые могут возникнуть при применении нестероидных противовоспалительных препаратов. Побочные действия НПВП связаны с тем с механизмом действия данных препаратов и существовании двух форм циклооксигеназы - ЦОГ-1 и ЦОГ-2. структурный фермент, постоянно присутствующий в клетках различных органов, регулирует продукцию простагландинов, участвующих в обеспечении нормальной функциональной активности клеток. Простагландины, синтезируемые при участии ЦОГ-1, обеспечивают защиту слизистой от повреждающего действия вводимых в желудок веществ, так же как и от действия желудочного сока. ЦОГ-1 зависимые почечные простагландины осуществляют контроль следующих функций: общий почечный кровоток (вазодилатирующая активность в отношении сосу- 111 дов почек), распределение почечного кровотока между отделами почек, реабсорбция натрия и воды, клубочковой фильтрации, синтеза антидиуретического гормона и ренина (нарушения: вазоконстрикция, снижающая скорость клубочковой фильтрации и увеличивающая содержание креатинина в крови, задержка натрия, нефрит, почечная недостаточность). Печеночный метаболизм. Побочные эффекты нестероидных противовоспалительных препаратов связаны именно с тем, что они «отключают» ЦОГ-1 и оставляют без защиты жизненно-важные органы [35,36,59,92,103,104,110, 111, 123, 157, 180, 182, 208, 209]. В литературе встречается достаточно данных, устанавливающих связь между приемом нестероидных противовоспалительных препаратов и повреждениями желудочно-кишечного тракта [4,129,122]. В связи со сложностью проведения у собак ряда манипуляций, таких как гастродуоденоскопия, в изучении данного вопроса мы ориентировались только на одну категорию гастроэнтерологических побочных эффектов (Насонов В.А.) - симптоматические (диспепсия), в которой учитываются: рвота, диарея, запоры, боли в эпигастральной области. В нашей работе у животных не выявлено выше перечисленных изменений со стороны желудочно-кишечного тракта. Хотелось бы особо отметить, что все собаки до эксперимента были клинически здоровы с отсутствием язвенного анамнеза. Следовательно, назначение нестероидных противовоспалительных препаратов курсом до двух недель, у здоровых собак не требует никакой медикаментозной коррекции (отсутствует необходимость вводить антагонисты Н2-рецепторов). В вопросе обязательной медикаментозной коррекции целесообразно придерживаться современной концепции профилактики НПВП-гастропатии, принятой во многих странах мира, как в гуманной медицине, так и в ветеринарии [133,134,184]. Согласно которой, необходимо отдельно выделять пациентов с высоким риском осложнений со стороны желудочно-кишечного тракта. Условно они могут быть разделены на две группы. Первую составля- 112 ют модифицирующие факторы риска: прием высоких доз нестероидных противовоспалительных средств или нескольких препаратов этой группы одновременно, индикация H.pylori. Ко второй группе относятся пожилой возраст, язвенный анамнез, применение антикоагулянтов и глюкокортикоидов. Blower P.R. [75] и Clive D.M. [89] в своих работах изучали нарушения со стороны функций почек, связанные с применением нестероидных противовоспалительных препаратов. Для выявления возможной нефротоксичности, в нашей работе всем животным проводился биохимический анализ крови, включающий показатели креатинин и мочевина – как контроль функциональных изменений в работе почек. За время проведения экспериментальной работы в показателях отклонений от нормы не выявлено. При применении нестероидных противовоспалительных препаратов у людей отмечен некоторый подъем печеночных ферментов, особенно аминотрансфераз (АлТ, АсТ) согласно данным Rodriguez L.A.G., Williams R. [170], Tolman K.G. [190]. При проведении наших исследований на собаках эти данные не подтвердились, что возможно связано с продолжительность употребления нестероидных противовоспалительных препаратов и требует дальнейшего изучения. В литературе имеются упоминания о возможных побочных эффектах связанных со снижением свертываемости крови, агранулоцитозом, арегенеративной, гипохромной и гемолитической анемией, но исследований в литературе, ни в гуманной, ни в ветеринарной медицине в данной области нами не обнаружено. В проведенной работе были выявлены следующие данные . У собак первой опытной группы до проведения эксперимента гемоглобин составил 152,6±3,308 г/л, эритроциты 7,21±0,230 млн./мм3, тромбоциты 323,0±18,294 тыс./мм3, до лечения в разгар воспаления: гемоглобин 137,4±4,060 г/л, эритроциты 6,70±0,329 млн./мм3, тромбоциты 269,0±22,303 тыс./мм3, при контрольном обследовании на 6-8 сутки отмечены изменения в показателях крови: гемоглобин 128,8±5,112 г/л, эритроциты 6,37±0,216 млн./мм3, тромбоци- 113 ты 279,8±17,191 тыс./мм3. При этом к наступлению клинического выздоровления гемоглобин, эритроциты, тромбоциты составили 122,2±5,112 г/л, 6,21±0,183 млн./мм3, 291,0±14,034 тыс./мм3соответственно. У собак второй опытной группы были получены следующие данные: до проведения эксперимента гемоглобин – 145,2±5,613 г/л, эритроциты – 7,13±0,229 млн./мм3, тромбоциты – 357,0±19,046 тыс./мм3, до лечения (в разгар воспаления) гемоглобин 136,4±4,611 г/л, эритроциты 6,63±0,202 млн./мм3, тромбоциты 307,0±14,535 тыс./мм3, при контрольном обследовании на 6-8 сутки лечения гемоглобин составил 108,4±2,957 г/л, эритроциты 5,67±0,248 млн./мм3, тромбоциты 257,2±14,936 тыс./мм3, при клиническом выздоровлении гемоглобин снижался до 97,6±2,807 г/л, эритроциты до 4,77±0,199 млн./мм3, тромбоциты 223,4±17,091 тыс./мм3. У собак же контрольной группы до проведения эксперимента гемоглобин – 146,4±5,313 г/л, эритроциты 7,33±0,289 млн./мм3, 356,2±23,657 тыс./мм3, до лечения (в разгар воспаления) гемоглобин, эритроциты, тромбоциты составляли 130,2±8,170 г/л, 6,49±0,378 млн./мм3, 314,0±24,308 тыс./мм3соответственно, при контрольном обследовании на 6-8 сутки лечения гемоглобин 131,0±5,012 г/л, эритроциты 6,67±0,335 млн./мм3, тромбоциты 320,2±21,201 тыс./мм3, и при клиническом выздоровлении гемоглобин 132,4±5,814 г/л, эритроциты 6,86±0,315 млн./мм3, 335,4±20,850 тыс./мм3 (p≤0,05-0,02). Полученные данные свидетельствуют об умеренном снижении гематологических показателей (гемоглобина, эритроцитов, тромбоцитов) даже при кратковременном применении нестероидных противовоспалительных препаратов (курсом до двух недель). И наиболее значительно и достоверно снижение наблюдалось у собак второй опытной группы, для лечения которых применяли препарат римадил. Проанализировав выше изложенное, нами были созданы еще две опытные группы животных, в схему лечения которых был введен препарат лигфол. 114 Лигфол – модифицированный природный продукт растительного происхождения, изготовленный на основе гуминовых веществ, получаемых путём гидролиза и окисления лигнина. С целью стабилизации и модификации свойств к нему в равных количествах добавлен десяти водный пирофосфат натрия. В соответствии с техническими условиями лигфол представляет собой: 25 мг гуминовых веществ, 25 мг пирофосфата натрия, растворённые в 1 мл физиологического раствора. Фармакотоксилогические исследования показали, что препарат малотоксичен, относится к препаратам IV группы токсичности, не обладает токсичностью при накожном применении и не оказывает раздражающего действия, не проявляет мутагенного и эмбриотоксического действия. [8]. Учеными и практикующими специалистами показан чрезвычайно широкий спектр биологической активности препаратов гуминовых веществ на животных. Он включает стимулирование продуктивности, антитоксическое действие, энтеросорбцию, антиоксидантную, антигипоксическую, адаптогенную, стресс-протекторную активность, улавливание и выведение из организма тяжелых металлов, иммуномодулирующее, противоопухолевое действие. Основное положительное действие лигфола связано с мобилизацией фагоцитоза, т.е. клеточного иммунитета [8,46,48]. У собак третьей опытной группы (для лечения применяли кетофен и лигфол) были получены следующие данные: до проведения эксперимента гемоглобин составил 126-164 г/л, эритроциты 6,57-7,62 млн./мм3, тромбоциты 348,6±11,327 тыс./ мм3 в разгар воспаления уровень гемоглобина составлял 103-142 г/л, эритроциты 5,47-6,38 млн./мм3, тромбоцитов 300,4±7,468 тыс./ мм3 , при контрольном обследовании на 6-8 сутки лечения гемоглобин 117-146 г/л, эритроциты 6,08-7,17 млн./мм3, тромбоциты 320,0±5,764 тыс./ мм3 , при клиническом выздоровлении гемоглобин 122-150 г/л, эритроциты 6,21-7,22 млн./мм3, тромбоциты 338,6±9,222 тыс./ мм3. 115 У собак четвертой опытной группы (для лечения применяли римадил и лигфол) показатели крови были следующие: до проведения эксперимента гемоглобин составил 132-165 г/л, эритроциты 6,45-8,02 млн./мм3, тромбоциты 369,6±24,759 тыс./ мм3 ,в разгар воспаления гемоглобин 119-146 г/л, эритроциты 6,03-7,54 млн./мм3, тромбоциты 333,8±20,148 тыс./ мм3 , при контрольном обследовании на 6-8 сутки лечения гемоглобин 116-141 г/л, эритроциты 5,65-7,36 млн./мм3, тромбоциты 317,8±16,389 тыс./ мм3 , при клиническом выздоровлении гемоглобин и эритроциты, тромбоциты 111-129 г/л и 5,127,01 млн./мм3, 330,2±15,136тыс./ мм3 соответственно. Из приведенных данных видно, что введение лигфола значительно изменяет уровень исследуемых показателей. При этом прослеживается чёткая динамика их увеличения до нормативных показателей. Следовательно, лигфол влияет на активность обменных процессов в организме собак, что выражается не только в увеличении интенсивности окислительных процессов, но и в повышении их эффективности, т.е. препарат, увеличивает долю аэробно протекающих окислительных реакций в организме и способствует более полному извлечению энергии, уменьшению энергетических потерь в виде рассеивания тепла. Одновременно, лигфол способствует более полному извлечению кислорода из крови, протекающей по тканевым капиллярам, а также полноценному насыщению эритроцитов гемоглобином. [48]. Следовательно, побочные эффекты фармакологического действия кетофена и римадила сглаживаются, если в схеме лечения дополнительно использовать лигфол. Таким образом, мы установили, что включение лигфола в общую схему химиотерапии асептического синовита коленного сустава совместно с нестероидными противовоспалительными препаратами обеспечивает стимуляцию регенераторных процессов в коленном суставе, снижает проявление побочных эффектов и сокращает сроки выздоровления. Проведенная нами экспериментальная работа выявила наиболее эффективный и безопасный метод консервативного лечения собак с острым асеп- 116 тическим синовитом коленного сустава нестероидными противовоспалительными препаратами. Данная схема лечения подразумевает под собой одновременное применение кетофена и препарата лигфол. В первый день лечения необходимо проводить пункцию сустава с целью удаления воспалительного экссудата, три дня применять подкожные инъекции 1% раствора кетофена (из расчета 2 мг\кг массы тела 1 раз в сутки), далее таблетированную форму кетофена (из расчета 1 мг\кг массы тела 1 раз в сутки), в сочетании с препаратом лигфол внутримышечно 1 раз в день в дозе 1 мл на 1,2,5,7 сутки от начала лечения. Как вариант, возможно использование исключительно таблетированной формы препарата кетофен. Выздоровление собак третьей опытной группы наступало на 8-10 сутки наблюдения. Это наиболее ранние сроки в сравнении с остальными экспериментальными группами. Цитоморфологические показатели к клиническому выздоровлению находились в пределах нормы: рН 7,44±0,055, лейкоциты 0,40±0,038 тыс.кл/мм3, синовиоцитограмма: сегментоядерные нейтрофилы 2,0±0,251, лимфоциты 72,0±2,255, моноциты 2,2±0,200, ретикулоциты 14,2±1,603, плазмоциты 4,4±0,702, гистиоциты 2,2±0,601, макрофаги 0,6± 0,301, синовиоциты 1,4±0,401, единичные фибробласты. Гематологические показатели: гемоглобин 137,6±6,065 г/л, эритроциты 6,69±0,204 млн./мм3, тромбоциты 338,6± 9,222 тыс./мм3, лейкоциты 10,62±0,185 тыс./мм3, лейкограмма: эозинофилы 0,4±0,301, палочкоядерные нейтрофилы 2,2±0,200, сегментоядерные нейтрофилы 62,0±1,253, лимфоциты 33,4±1,554, моноциты 2,0±0,501. Биохимические показатели: общий белок 68,74±2,135 г/л, альбумины 28,14± 1,925г/л, креатинин 77,88±4320 мкмоль/л, мочевина 3,48±0,466 ммоль/л, общий билирубин 6,04±0,406 мкмоль/л, АЛТ 37,4±4,561 ед./л, АСТ 45,2±2,406 ед./л. Приведенные данные указывают на то, что введение препарата лигфол в схему лечения собак приводит к выраженному приближению исследуемых показателей к их уровню до проведения эксперимента. Биохимические показатели крови не выходили за уровень показателей здоровых собак на всем 117 протяжении наблюдения. В цитоморфологическом составе синовиальной жидкости обнаруживались единичные сегментоядерные нейтрофилы, при этом количестов лимфоидно-ретикулярных клеток приближалось к уровню здоровых собак в более ранние сроки в сравнении с животными остальных опытных и контрольной групп. Это указывает на то, что лигфол дополнительно обеспечивает стимуляцию регенераторных процессов в тканях коленного сустава. Выявленные данные позволяют рекомендовать выше приведенную схему лечения, как основную при лечении собак с острым асептическим синовитом коленного сустава. Полученные нами результаты будут использованы для дальнейшего изучения нестероидных противовоспалительных препаратов при лечении дегенеративных заболеваний суставов (таких, как артроз) у спонтанно больных животных, прежде всего для снятия болевого симптома в периоды обострения (рецидива), а также в период ремиссии с профилактической целью. Интерес представляет углубленное изучение данных препаратов в сочетании с хондропротекторами, что будет представлено в наших последующих работах. 118 ЗАКЛЮЧЕНИЕ В ходе нашей экспериментальной работы выявлена высокая эффективность нестероидных противовоспалительных препаратов при лечении собак с острым воспалением коленного сустава. Полученные результаты исследований свидетельствуют о значительном сокращении периода выздоровления животных при применении данных лекарственных средств. Терапия препаратом кетофен до клинического выздоровления продолжалась 10-13 суток, препаратом римадил 12-14 суток, сочетанным применением препаратов кетофен – лигфол и римадил – лигфол 8-10 суток, 11-12 суток соответственно. В то же время терапия традиционными методами (компрессы с димексидом, пара- и интраартикулярные блокады 0,5% раствора новокаина) составляла 18-20 суток, т.е. на 7-9 суток дольше, чем при применении НПВП. Одним из ключевых моментов наших исследований, было изучение морфологического состава синовиальной жидкости в динамике при применении НПВП. В стадии воспалительного отека при остром асептическом воспалении в синовиальном экссудате наблюдалось снижение рН с 7,4-7,7 до 6,97,2, увеличение числа лейкоцитов со 120-230 клеток до 2,2-3,5 тыс. В клеточном составе, в значительном количестве появлялись сегментоядерные и палочкоядерные нейтрофилы, лимфоциты и моноциты, остальные клетки в большинстве своем вовсе исчезали. При контрольном обследовании животных опытных групп наблюдалось: повышение рН до 7,2-7,4, значительное уменьшение лейкоцитов до 1,2-1,6 тыс., появление в клеточном составе ретикулоцитов и единичных плазмоцитов, гистиоцитов, макрофагов и синовиоцитов. Появление в синовиальной жидкости лимфоидно-ретикулярных клеток указывало на нормализацию тканей сустава. К моменту клинического выздоровления собак клеточный состав синовии значительно приближался к физиологической норме, рН 7,3-7,6, количество лейкоцитов было в пределах 300-500 клеток. 119 Отмечено, что для различных стадий асептического воспалительного процесса характерно определенное соотношение основных клеточных элементов синовии. Удалось проследить динамику и направленность данного процесса: переход острой фазы в пролиферативную характеризуется сдвигом синовиоцитограммы влево, т.е. уменьшением числа палочкоядерных и сегментоядерных нейтрофилов за счет повышенного содержания лимфоцитов. Одновременно отмечено пропорциональное увеличение тканевых клеток синовии. Несмотря на бесспорную эффективность, терапия НПВП имела совершенно одинаковый побочный эффект, который к концу курса лечения только усиливался. Кетофен и римадил вызывали умеренное снижение показателей гемоглобина, эритроцитов и тромбоцитов. Причём данное действие у римадила было выражено сильнее, чем у кетофена. Данный побочный эффект значительно изменял свою направленность и активность, если дополнительно в общую схему терапии совместно с кетофеном и римадилом включали препарат лигфол. Кроме этого, его использование привело к сокращению курса лечения, и период клинического выздоровления собак наступал раньше. Таким образом, мы установили, что включение лигфола в общую схему лечения собак с асептическим синовитом коленного сустава совместно с нестероидными противовоспалительными препаратами обеспечивает стимуляцию регенераторных процессов в коленном суставе, ликвидирует побочные эффекты и сокращает сроки лечения. В итоге, нами выявлена наиболее эффективная и безопасная схема лечения, соответствующая терапии собак третьей опытной группы. И заключается она в следующем: опоражнивающая пункция сустава в первый день лечения; подкожные инъекции 1% раствора кетофена (из расчета 2 мг\кг массы тела 1 раз в сутки) первые три дня; таблетированная форма кетофена (из расчета 1 мг\кг массы тела 1 раз в сутки) до выздоровления; лигфол внутримышечно 1 раз в день в дозе 1 мл на 1,2,5,7 сутки от начала лечения. 120 ВЫВОДЫ 1. Установлена высокая эффективность нестероидных противовоспалительных препаратов при лечении собак с острым асептическим синовитом коленного сустава. При этом выявлено преимущество кетофена по сравнению с традиционным методом лечения, поскольку при его использовании наступает более раннее (на 7-10 дней) клиническое выздоровление животных. 2. Выявлены параллели между гематологическими и цитоморфологическими показателями синовиальной жидкости при асептическом синовите коленного сустава у собак, что позволяет выявлять патогенез заболевания и проводить его дифференциальную диагностику. Так, переход острой фазы воспаления в пролиферативную сопровождается сдвигом синовиоцитограммы влево (уменьшение числа нейтрофилов за счет повышенного содержания лимфоцитов) и увеличением тканевых клеток синовии, а возрастание количества лейкоцитов прямопропорционально увеличению показателя рН синовиальной жидкости. 3. Схемы лечения с применением препаратов кетофен и римадил не вызывают изменений в биохимических показателях крови и клиническом состоянии собак. Вместе с тем в картине крови к моменту выздоровления при применении кетофена установлено достоверное снижение уровня гемоглобина с 152,6 г/л до 122,2 г/л, эритроцитов с 7,21 млн./мм3 до 6,21 млн./мм3, тромбоцитов с 323,0 тыс./мм3 до 291,0 тыс./мм3, при применении римадила: гемоглобина с 145,2 г/л до 97,6 г/л, эритроцитов с 7,13 млн./мм3 до 4,77 млн./мм3, тромбоцитов с 357,0 тыс./мм3 до 223,4 тыс./мм3 (p≤0,02-0,05), что свидетельствует о развитии анемии и тромбоцитопении. 4. Включение препарата лигфол в разработанную схему лечения собак при асептическом синовите коленного сустава в дозе 1 мл один раз в 121 день на 1,2,5,7 сутки в сочетании с нестероидными противовоспалительными препаратами нормализует гематологические показатели и цитоморфологический состав синовиальной жидкости. 5. Выявлено положительное действие лигфола на восстановление цитоморфологического состава синовиальной жидкости сустава. Наилучшие результаты получены при использовании кетофена, что подтверждается снижением уровня лейкоцитов к 8-10 дню наблюдения с 2,93±0,125 до 0,40±0,038 тыс.кл/мм³ и отсутствием палочкоядерных нейтрофилов, в то время как у контрольной группы животных лейкоциты достигали уровня 0,47±0,045 тыс.кл/мм³ только к 18-20 дню (р<0,05-0,02), при сохранении единичных палочкоядерных нейтрофилов. 6. На основании анализа схем лечения собак с асептическим синовитом, установлено преимущество применения нестероидного противовоспалительного препарата кетофен в сочетании с лигфолом. Данный метод является наиболее безопасным и эффективным, поскольку ускоряет на 2-4 дня по сравнению с римадилом и на 9-11 дней по сравнению с традиционными препаратами восстановление функции сустава, гематологические и цитоморфологические показатели синовиальной жидкости. 122 123 124 125 126 БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ 1. Алексеев, В.Г. Профилактика и лечение изъязвлений в желудке и двенадцатиперстной кишке, обусловленных НПВП / В.Г. Алексеев, В.А. Яковлев, Т.Е. Полунина // Врач. – 1996. - №10. – С. 15-16. 2. Балабанова, Р.М. Профилактика и лечение поражений слизистой оболочки желудка, обусловленных применением нестероидных противовоспалительных средств (НПВС-гастропатии). Клинические рекомендации / Р.М.Балабанова, В.Т. Ивашкин, В.А. Насонова, В.П. Фисенко, А.А. Шептулин, А.Е. Каратеев, М.Л. Макарьянц, Л.В. Прохорова // Клин. фармакология и терапия. – 2000. - №9(1). – С.42-44. 3. Барскова, В.Г. Применение нимесила при подагрическом артрите / В.Г. Барскова, И.А. Якунина, В.А. Насонова // Тер.архив. – 2003. - №5. С.60-64. 4. Березкин, А. Г. Синовиальная жидкость суставов конечностей млекопитающих / А.Г. Березкин. — Киев: Наукова думка, 1987. — 164 с. 5. Бондарев, А.И. К механизму ульцерогенного действия нестероид- ных противовоспалительных препаратов / А.И. Бондарев // Экспериментальная и клиническая фармакология – 1994. - №1. – С.66-73. 6. Борисов, М.С. Клинические и некоторые цитологические показа- тели синовиальной жидкости при спонтанном остеоартрите коленного сустава у собак на фоне ультразвуковой терапии / М.С. Борисов. – М.: МВА, 1978. – С.15. 7. Борисов, М.С. Морфологические и биохимические особенности синовиальной жидкости в суставе, сухожильном влагалище в норме и при патологии у животных. Методические рекомендации / М.С. Борисов. - М.: ФГОУ ВПО МГАВМиБ им. К.И. Скрябина, 2006. – С.7. 127 8. Борисов, М.С. Острые и хронические синовиты у собак / М.С. Бо- рисов // Ветеринария. – 1995. - №2. – С.47-50. 9. Бузлама, В.С. Механизм действия препаратов гуминовых веществ / В.С. Бузлама, В.Н. Долгополов, А.В. Сафонов, С.В. Бузлама. - М., 2006. - С. 24-35. 10. Вахрушев, Я.М. К вопросу о патогенезе и лечении эрозивных га- стритов и дуоденитов / Я.М. Вахрушев, Е.В. Никишина // Клиническая медицина. - 1998. - №2. - С. 28-31. 11. Верткин, А.Л. Сравнительная безопасность диклофенака, мело- ксикама и комбинации диклофенака и мизопростола у больных остеоартрозом / А.Л. Верткин, М.И. Захарченко, Б.В. Еремин, А.А. Машарова, Я.В. Соломенцев, Я.Б. Лейцанс // Клин.фарм. и терапия. – 2001. - №1. – С.74-78. 12. Гребенева, Л.С. Побочные эффекты лечения нестероидными про- тивовоспалительными препаратами и пути их коррекции / Л.С. Гребенева // Клин.мед. – 1997. - №5. – С. 42-45. 13. Григореев, П.Я. Повреждение желудка и двенадцатиперстной кишки при лечении нестероидными противовоспалительными препаратами / П.Я. Григореев, Э.П. Яковенко // Клин. мед. – 1997. - №3. – С.69-71. 14. Дедух, Н.В. Остеоартрозы. Пути фармакологической коррекции / Н.В. Дедух, И.А. Зупанец, В.Ф. Черных, С.М. Дороговоз. – Харьков: Основа, - 1992. – 140с. 15. Ивашкин, В.Т. Актуальные вопросы безопасности ненаркотиче- ских анальгетиков / В.Т. Ивашкин // Клин. фармакология и терапия. – 1999. №8. – С.51-54. 16. Ивашкин, В.Т. Влияние анальгетиков на слизистую оболочку же- лудка и состояния печени / В.Т. Ивашкин // Клин. фармакология и терапия. – 2003. – №12. – С.57-60. 17. Ивашкин, В.Т. Патогенез гастропатии, обусловленной приемом НПВП / В.Т. Ивашкин // Рос. Журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии. – 1994. – Т.3. - №1. – С. 11-14. 128 18. Каратеев, А.Е. Рецидивирование гастропатий, связанных с прие- мом нестероидных противовоспалительных препаратов / А.Е. Каратеев // Тер. архив. – 2003. -№5. – С.74-78. 19. Каратеев, А.Е. Эффективная профилактика ЖКТ-осложнений у больных ревматическими заболеваниями: реальное состояние дел / А.Е. Каратеев // Научно-практическая ревматология. – 2006. - №2. – С.88. 20. Каратеев, А.Е. НПВП-ассоциированная патология ЖКТ: реаль- ное состояние дел в России / А.Е. Каратеев, Е.Л.Насонов // РМЖ. – 2006. №15. – С.1073-1078. 21. Клебанов, Б.М. Фармакологическая регуляция воспаления: со- временные проблемы и перспективы развития / Б.М. Клебанов // Экспериментальная и клиническая фармакология – 1992. – Т. 55. - №4. – С. 4-8. 22. Клиническая ревматология (руководство для практикующих вра- чей) / под ред. В.И. Мазурова. - СПб.: ООО "Издательство Фолиант", 2001. 416 с. 23. Логинов, А.Ф. НПВП: клинические проблемы / А.Ф. Логинов, В.В. Квасовка, И.В. Буйванов // Российский журнал Гастроэнтерологии, Гепатологии. – 1994. – Т.3. - №1. – С. 15-18. 24. Манихае, Г.М. Сравнительная оценка применения кетопрофена и кеторонала в послеоперационном периоде у онкологических больных / Г.М. Манихае // Вестник интенсивной терапии. – 2005. - №3. – С.46-48. 25. Марусова, И.Б. Потенциальное гастропротекторное действие блокатора СуsLT1-рецепторов монтелукаста натрия при остром аспириновом повреждении слизистой оболочки желудка у крыс / И.Б.Марусова, Т.Д. Власов, И.В. Марусова, А.В. Панченко // Экспериментальная и клинич.фарм. – 2002. - №3. – С.16-18. 26. Матвеев, В.А. Некоторые вопросы патогенеза и терапии синови- тов / В.А. Матвеев // Ветеринария. – 1983. - №10. – С.84-86. 129 27. Машарова, А.А. Эффективность и безопасность применения НПВП различных поколений у больных остеоартрозом / А.А. Машарова // Леч.врач. – 2002. - №6. – С.78-80. 28. Муравьев, Н.В. Проницаемость защитного барьера кишечника у больных ревматическими заболеваниями, длительно получающих НПВП / Н.В. Муравьев, В.В. Лебедева, В.К. Мазо, И.В. Глюшинская // Клин. фармакология и терапия. – 2003. - №12. – С.23-26. 29. Мусалатов, Х.А. Применение НПВП нового поколения в трав- матологии и ортопедии / Х.А. Мусалатов // Веет.травматология и ортопедия им. К.Н. Пирогова. – 2002. - №1. – С.49-53. 30. Надеев, А.А. Причинно-следственные связи в этиопатогенезе арт- роза и их определяющая роль в методе лечения / А.А. Надеев // Клин. геронтология. – 2006. – №2. – С.47-50. 31. Надеин, К.А. Обоснование кратности применения диметилсуль- фоксида при лечении асептических артритов у крупного рогатого скота: автореф. дис. … к-та вет.наук / К.А. Надеин. - СПб.,2000. – 18 с. 32. Насонов, Е.Л. Анальгетическая терапия в ревматологии: путеше- ствие между Сциллой и Харибдой / Е.Л. Насонов // Клиническая фармакология и терапия – 2003. - №12 (1). – С. 64-69. 33. Насонов, Е.Л. Нестероидные противовоспалительные препараты / Е.Л. Насонов //М., 2000. - С.143. 34. Насонов, Е.Л. Нестероидные противовоспалительные препараты (Перспективы применения в медицине) / Е.Л. Насонов // М.: Издательство Анко, 2000. – С.142. 35. Насонов, Е.Л. Новые аспекты противовоспалительной терапии ревматических болезней: теоретические предпосылки и клиническое применение мелоксикама / Е.Л. Насонов // Клин. мед. – 1996. - №4. – С.4-8. 36. Насонов, Е.Л. Новый нестероидный противовоспалительные пре- парат набуметон: клинические перспективы / Е.Л. Насонов // Клин. мед. – 1996. - №8. – С.13-16. 130 37. Насонов, Е.Л. Перспективы применения неселективных НПВП (кетопрофен) и селективных ингибиторов ЦОГ-2 в клинической практике / Е.Л. Насонов // РМЖ. – 2002. – Т.10. - №22. - С.1041-1042. 38. Насонов, Е.Л. Перспективы применения нового нестероидного противовоспалительного препарата нимесулид / Е.Л. Насонов // Клин. фармакол. и терапия. – 1999. - №8. – с.65-69. 39. Насонов, Е.Л. Применение нестероидных противовоспалитель- ных препаратов в медицине в начале 21 века / Е.Л. Насонов // Российский Медицинский Журнал. – 2003. - №11. - С. 375-378. 40. Насонов, Е.Л. Специфические ингибиторы ЦОГ-2: решенные и нерешенные проблемы / Е.Л. Насонов // Клин. фармакология и терапия. – 2000. - №1. – С.57-64. 41. Насонов, Е.Л. Новые аспекты противовоспалительной терапии ревматических заболеваний: теоретические предпосылки и клиническое применение мелоксикама / Е.Л. Насонов, Е.С. Цветкова, Р.М. Балабанова и др. // Клин. медицина. – 1996. - №4. – С.4-8. 42. Насонов, Е.Л. Селективные ингибиторы циклооксигеназы -2: но- вые перспективы лечения заболеваний человека / Е.Л. Насонов, Е.С. Цветкова, Н.Л. Тов // Тер.архив. - 1998. - №5. - С.8-14. 43. Насонова, В.А. Гастропатии, связанные с приемом нестероидных противовоспалительных препаратов / В.А. Насонова // Российский журнал гастроэнтерологии, гепатологии. – 1994. - №1. – с.7-10. 44. Насонова, В.А. Значение ЦОГ-2 в развитии боли / В.А. Насонова // Тер.архив. – 2001. - №5. – С.56-64. 45. Николаев, А.Н. Нестероидные противовоспалительные препараты эффективность и безопасность / А.Н. Николаев // РМЖ. – 2001. – Т.9. - №15. – С.664-666. 46. Новые пути лечения ревматических болезней (по материалам Х симпозиума Европейской антиревматической лиги, 19-22 октября 1997 г., Вена, Австрия). // Лiкувания та Дiагностика. – 1998.-№1.-С.76. 131 47. Павлова, В.Н. Синовиальная среда сустава / В.Н. Павлова. – М.: Медицина, 1980. – 268 с. 48. Платонов, В.В. Химический состав гуминовых кислот бурого уг- ля подмосковного бассейна / В.В. Платонов, В.А. Проскуряков, М.Б. Никишина, И.Л. Новикова // Журнал прикладной химии. – 1996. - Т.69. - С.20592061. 49. Плахотин, М.В. Общая ветеринарная хирургия / М.В. Плахотин и др. – М.: Колос, 1981. – С.86-168. 50. Попов, А.И. Гуминовые вещества: свойства, строение, образова- ние / А.И. Попов. - СПб., 2004.-С.248. 51. Самошкин, И.Б. Реконструктивно-восстановительные операции при врожденной и посттравматической патологии тазобедренного сустава у собак: автореф. дис. …докт. вет. Наук / И.Б. Самошкин. - М., 1999. – 21с. 52. Самошкин, И.Б. Дисплазия локтевых суставов у собак / И.Б. Са- мошкин, Н.А. Слесаренко, А.И. Торба, И.И. Самошкин – М.: Лань, 2006. – 32с. 53. Сигидин, Я.А. Лекарственная терапия воспалительного процесса / Я.А. Сигидин, Г.Я. Шварц, А.П. Арзамасцев, С.С. Либерман. - М.: Медицина, 1988. - 16 с. 54. Симонян, Г.А. Ветеринарная гематология / Г.А.Симонян, Ф.Ф. Хисамутдинов. – М.: Колос, 1995. - С. 53-76. 55. Сидидин, Я.А. Диффузные болезни соединительной ткани / Я.А. Сидидин, Н.Г. Гусева, М.М. Иванова. - М. , 2004. - 638с. 56. Слесаренко, Н.А. Анатомия собаки. Соматические системы / Н.А. Слесаренко, Н.В. Бабичев, Е.С. Дурткаринов, Ф.Р. Капустин. – М.: Колос, 2000. – С. 9 -47. 57. Тимофеев, С.В. Общая хирургия животных / С.В. Тимофеев, Ю.И. Филиппов, С.Ю. Концевая и др. - М.: Зоомедлит, 2007. - 687с. 58. Тинус, Ф.П. Фармакологическая регуляция воспаления / Ф.П. Ти- нус, Б.М. Клебанов, И.М. Гаиджа // - Киев: Здоровья, 1987. - С.14. 132 59. Харкевич, Д.А. Роль фундаментальных исследований в создании новых лекарственных средств / Д.А. Харкевич // Клин.мед. – 1998. - №12. – С.4-9. 60. Цветкова, Е.С. Мовалис при остеоартрозе / Е.С. Цветкова // Тер.архив. – 1999. - №11. - С.48-50 61. Шабалаев, И.В. Лечение собак при коксите / И.В. Шабалаев // Ве- теринария. – 1998. - №10. – С. 60. 62. Шептулин, А.А. Ненаркотические анальгетики и НПВС и эрозив- но-язвенные поражения слизистой оболочки желудка / А.А. Шептулин // Клиническая медицина. – 1998. – №2. – С. 12-16. 63. Шитов, С.Т. Гидрокортизон при лечении некоторых заболеваний конечностей / С.Т. Шитов //Ветеринария.-1973.- №6.- С. 100-101. 64. Шостак, Н.А. Желудочно-кишечные кровотечения как осложне- ния гастропатий, связанных с приемом НПВП / Н.А. Шостак, А.А. Рябкова, В.С. Савельев, Л.П. Малярова // Тер. архив. – 2003. -№5. – С.70-73. 65. Шухов, Л.С. Анальгезия в России: проблемные вопросы / Л.С. Шухов // Клиническая фармакология и терапия – 1999. - №8 (6). – С.10-18. 66. Argentieri, D.C. Tepoxalin: A dual cyclooxigenase/5-lipoxigenase in- hibitor pf arachidonic acid metabolism with potent anti-inflammatory activity and a favorable gastrointestinal profile / D.C. Argentieri, D.M. Ritchie, M.P. Ferro, et al. // Journal of Pharmacology and Experimental Therapeutics. – 1994. – 271. – P. 1399-1408. 67. Ballinger, A. Prevention of peptic ulceration in patients receiving NSAIDs / A. Ballinger // Br. Journal Hosp.Med. – 1993. – V.49. – P.767-772. 68. Baker, C.S. Cyclooxygenase 2 is widely expressed in atherosclerotic lesions affecting native and transplanted human coronary arteries and colocalized with inducible nitric oxide synthase and nitrotyrosine particularly macrophages / C.S. Baker, R.J. Hall, T.J. Evans et al. // Atheroscler Thromb .Vasc. Biol. – 1999. – V.19. – P. 646–655. 133 69. Bat, D.G. 5-Lipooxygenase inhibitors and their anti-inflammatory ac- tivities / D.G. Bat // Prog.Med.Chem. – 1992. – V.29. – P.1-63. 70. Barbier, A. Comparative study of etidronate and SR 41319, a new di- phosphonate, on passive cutaneous anaphylaxis and phospholipase A2 activity / A. Barbier, J.S. Breliere, R. Paul // Agent Actions. – 1985. – V.16. – P.41-42. 71. Belton, O. Cyclooxygenase–1 and – 2 dependent prostacyclin forma- tion in patients with atherosclerosis / O. Belton, D. Byrne, D. Kearney, et al // Circulation. – 2000. – V.102. – P. 840–845. 72. Bennett, W.M. Analgesic nephropathy – a preventable renal disease / W.M. Bennett, M.E. DeBroe // N.Eng. Journal Med. – 1989. – V.320. - №19. – Р.1269-1271. 73. Benton, H.P. Effect of carprofen on sulfated glycosaminoglycan me- tabolism, protein synthesis, and prostoglandin release by cultured osteoarthritic canine chondrocytes / H.P. Benton, G.A. Broderick-Villa, M. Koolpe // American Journal of Veterinary Research. – 1997. – Vol. 58. – P. 286-292. 74. Billar, T.R. A role for inducible nitric oxide biosynthesis in the liver in inflammation and in the allogeneic immune response / T.R. Billar, R.A. Hoffman, M.J. Curran // Journal Lab.Clin.Med. – 1993. – V.120. – P.192-197. 75. Blower, P.R. Non-steroidal anti-inflammatory drugs / P.R. Blower // Br. Journal Pheumatol. – 1993. – V.32. – P.35-38. 76. Botrel, M.A. Quantitative evaluation of an experimental inflammation induced with Freunds complete adjuvant in dogs / M.A. Botrel, T. Haak, C. Legrand et al. // Journal Pharmacol.Toxicol.Methods. – 1994. – V.32. – P.63-71. 77. Boulay, J.P. Effect of cimetidine on aspirin-induced gastric hemor- rhage / J.P. Boulay, A.J. Lipowitz, J.S. Klausner // American Journal of Veterinary Research. – 1986. – Vol. 47. – P. 1744-1746. 78. Brandt, K.D. The mechanism of action of nonsteroidal antiinflamma- tory drugs / K.D. Brandt // Journal Rheumatol. suppl. – 1991. – Vol. 27. – P. 120121. 134 79. Brooks, P.M. Treatment of rheumatoid arthritis: from symptomatic re- lief to potential cure / P.M. Brooks // Br.J. Rheumatol. – 1998. - V. 37. - P. 126571. 80. Burleigh, M.E. Cyclooxygenase –2 promotes early atherosclerotic le- sion formation in LDL receptor deficiency mice / M.E. Burleigh, V.R. Babaev, J.A. Oates, et al. // Circulation. – 2002. – V. 105. – P. 816–1823. 81. Bush, T.M. Non-steroidal anti-inflammatory drugs: proposed guide- lines for monitoring toxicity / T.M. Bush, T.L. Sholtzhauer, K.Imai //Western Journal of Medicine. – 1991. – Vol. 155. – P. 39-42. 82. Cashman, J.N. The mechanisms of action of NSAIDs in analgesia / J.N. Cashman // Drugs. - 1996. – Vol. 52. – Suppl.5. – P. 13-23. 83. Catella-Lawson, F. Cyclooxygenase-2 inhibitors and the antiplatelet affect of aspirin / Catella-Lawson F., Reilly M., Kapoor S. et al. // N.Engl. Journal Med. – 2001. – V.345. – P.1809-1817. 84. Ceisen, P.S. Effects of rofecocxib or naproxen us placebo on Alz- heimer disease progression: a randomized controlled trial / P.S. Ceisen // JAMA. – 2003. – V.289. – P.2819-2826. 85. Chandrasekharan, N.V. COX-3, a cyclooxygenase-1 variant inhibited by acetaminophen and other analgesic/antipyretic drugs: cloning, structure, and expression. / N.V. Chandrasekharan, H. Dai, K.L. Roos, N.K. Evanson, J. Tomsik, T.S. Elton, D.L. Simmons // Proc.Nalt.Acad.Sci.USA. – 2002. – V.99(21). – P. 13926-13931. 86. Cippilone, F. Overexpression of functionally coupled cyclooxy- genase E synthase in symptomatic atherosclerotic plaques as a basis of prostaglandin E2–dependent plaque instability / F. Cippilone, C. Prontera, B. Pini, et al.// Circulation. - 2001. – V. 104. – P. 921–930. 87. Churchill, L. Selective inhibiyion of human cyclooxygenase-2 by meloxicam / L. Churchill, A. Graham, C.K. Shih // Inflammopharmacology. – 1996. - №4. - P.125-135. 135 88. Clements, P.J. Textbook of Rheumatology / P.J. Clements, H.E. Pau- lus // Philadelphia. - 1993. – V.1. - P.700-730. 89. Clive, D.M. Renal syndromes associated with NADS / D.M. Clive, J.S.Stoff // N.Engl. Journal Med. – 1984. – V.310. – P.563-572. 90. Сomerfold, E.J. Metabolism and composition of the canine anterior cruciate ligament relate to differences in knee joint mechanics and predisposition to ligament rupture / E.J. Сomerfold, J.F. Tarlton// J. of Orthopedic Reseach. – 2005. – V.21. – P.1136-1141. 91. Crofford, L. Basic biology and clinical application of specific cyclooxygenase-2 inhibitors / L.Crofford // Arthritis Rheumaut. – 2000. – V.43. – P. 33157-33160. 92. Croffor, L. COX-1 and COX-2 tissue expression: implications and predictions / L. Croffor // Journal Rheumatol. suppl. -1997. - №24. - suppl.49. - P. 15-19. 93. Cryer, B. Effects of nonsteroidal anti-inflammatory drugs on endoge- nous gastrointerstinal prostaglandins and therapeutic strategies for prevention and treatment of nonsteroidal anti-inflammatory drug-induced damage / B. Cryer, M. Feldman // Arch. Intern. Med. – 1992. – Vol.152. – P. 1145-1155. 94. Cunningham, F.M. Advances in anti-inflammatory therapy / F.M. Cunningham, P. Lees // Brit.Vet.Journal. – 1994. – V. 150 – P. 115-134. 95. Derg, J. The analgesic NSAID lornoxicam inhibits cyclooxygenase (COX) – 1/-2, inducible nitric oxide sinthase (iNOS), and the formation of interleikin (JL)-6 in vitro / J. Derg, H. Feller et al. // Inflammayory Res. – 1999. – V.48. – P.369-379. 96. Rosa, Di Rosa, M. Activated macrophages express NO-sinthase / M. Di M.W. Radomski, R. Carnuccio, S. Moncada // Bio- chem.Biopnys.Res.Commun. – 1990. – V.172. – P.1246-1252. 97. Feuba, D. Gastrointestinal safety and tolerability of non-selective non- steroidal anti-inflammatory agents and cyclooxygenase-2 selective inhibitors / D. Feuba // Clevelend Clinic Journal Med. – 2002. - №69. – P.31-39. 136 98. Fierro-Carrion, G. Non-steridal anti-inflammatory drugs (NSAIDs) and blood pressure / G. Fierro-Carrion, C.V. Ram // Amer. Journal Cardiol. – 1997. – Vol. 80. – P. 775-776. 99. Fiorucci, S. Dual inhibitors of cyclooxygrnase and 5-lipoxigenase. A new avenue in anti-inflammatory therapy? / S. Fiorucci, R. Meli, M. Bucci, G. Cirino // Biochemical Pharmacology. – 2001. – V. 62. – P. 1433-1438. 100. FitzGerald, G.A. The Coxibs, selective inhibitors of cyclooxygenase– 2 / G.A. FitzGerald, C. Patrono // New Engl. Journal Medicine – 2001. – Vol. 345. – P. 433–442. 101. Flower, R. Drugs which inhibit prostaglandin biosynthesis / R. Flower // Pharmacol. Rev. – 1974. – V.26. – P.33-67. 102. Forsyth, S.F. Endoscopic evalution of the gastroduodenal mucosa following non-steroidal anti-inflammatory drug administration in the dog / S.F. Forsyth, W.G. Guilford, C.R.O. Lawoko // New Zealand Veterinary Journal. – 1996. – Vol. 44. – P. 179-181. 103. Frolich, J.C. A Classification of NSAIDs according to the relative inhibition of cyclooxygenase: Review / J.C. Frolich // TiPS. – 1997. – P.203-228. 104. Fu, J.Y. The induction and suppression of prostaglandin H2 synthase (cyclooxygenase) in human monocytes / J.Y. Fu, J.L. Masferrer, K. Seibert, A. Raz, P. Needleman // Journal Biol. Chem. – 1990. – V.265. – P.16737-16740. 105. Gabriel, S.E. Is misoprostol prophylaxis indicated for NSAID induced adverse gastrointestinal events? An epidemiologic opinion / S.E. Gabriel // Journal of Rheumatology. – 1991. – Vol. 18. - No 7. - P. 958-961. 106. Gabriel, S.E. Risk for serious gastrointestinal complications related to use of non-steroidal anti-inflammatory drugs: a meta-analysis / S.E. Gabriel, L. Jakkimainen, Bombardier // Annals of Internal Medicine. – 1991. – Vol. 115. - No 10. - P.787-796. 107. Gaetano de, G. Prevention of trombosis and vascular inflammation: benefits and limitations of selective or combined COX-1, COX-2 and 5- 137 lipoxigenase inhibitors / Gaetano de G., M.B. Donaty, C. Cerletti // Trends in Pharmacological Sciences. – 2003. - №24. – P. 245-252. 108. Garner, S. Rofecoxib for rheumatoid arthritis (Cochrane Review) / S. Garner, D. Fidan, R. Frankish, M. Judd, T.Towheed et al. // The Cochrane Library. - Issue 2. - 2004. 109. Garella, S. Renal effects of prostaglandins and clinical adverse effects of n.a. agents. / S. Garella, R.A. Matarese // Medicine. – 1984. – V.63. – P.165181. 110. Gierse, J.K. Expression and selective inhibition of the constitutive and inducible forms of human cyclooxygenase / J.K. Gierse, S.D. Hauser, D.P. Creely, C. Koboldt, S.H. Rangwala, P.C. Isakson, K.Seibert // Biochem. Journal – 1995.-Vol. 305. -P. 479-484. 111. Goodwin, J.S. Are prostoglandins proinflammatory, anti- inflammatory, both or neither? / J.S. Goodwin // Journal Rheumatol. suppl. - 1991. - Vol. 28. – P. 26-29. 112. Goppelt, S.M. Cyclooxygenase-2 in the spinal cord: localization and regulation after peripheral inflammatory stimulus / S.M. Goppelt, F. Beiche // Adv. Exp. Med. Biol. – 1997. – V.433. – P.213-216. 113. Green, K. Pronounced reduction of in vivo prostaglandin synthesis in humans by acetaminophen (paracetamol) / K. Green, V. Drvota, O. Vesterqvist // Prostaglandins. – 1989. – V.37. – P.311-315. 114. Hawkey, C.J. COX-2 inhibitors / C.J. Hawkey // Lancet. – 1999. – V.353. – P.307-314. 115. Hawkey, C.J. Therapeutic interventions in gastrointestinal disease based on an understanding of inflammatory mediators / C.J. Hawkey, Y.R. Mahida, A.B. Hawthorne // Agents Actions. – 1992. – Spec. No. – P.22-26. 116. Hay, C. Carrageenan-induced hyperalgesia is associated with increased cyclooxygenase-2 expression in spinal cord / Hay C., de Belleroche J. // Neuroreport. – 1997. – V.5. – P.1249-1251. 138 117. Hayllar, J. Gastroprotection and non-steroidal anti-inflammatory drugs (NSAIDs): rationale and clinical implications / J. Hayllar, A. Macpherson, I. Bjarnason // Drug Safety. – 1992. – Vol. 7. - No 2. - P. 86-105. 118. Hibbs, J.B.Jr. Nitric oxide: a cytotoxic activated macrophage effector molecule8/ J.B.Jr. Hibbs, R.R. Taintor, Z. Vavrin // Biochem.Res.Commun. – 1988. – Vol.157. – P.87. 119. Hirata, T. Cyclooxygenase isozymes in mucosal ulcergenic and functional responses following barrier disruption in rat stomachs / T. Hirata, H. Ukawa, H. Yamakuni // Br. Journal Pharmacol. – 1997. – Vol.122. – P.447-454. 120. Ibanez, L. Adverse drug reactions leading to hospital admission / L. Ibanez, J.R. Laporte, X. Carne // Drug.Saf. - 1991. - Vol.6. - №6. - P. 450-459. 121. Johnston, S.A. Mechanism of action of anti-inflammatory medications used for the treatment of osteoarthritis / S.A. Johnston, S.M. Fox // Journal of the American Veterinary Medical Association. – 1997. – Vol. 210. – P. 1486-1492. 122. Jones, R.D. Non-steroidal anti-inflammatoires drug toxicosis in dogs and cats: 240 cases (1989-1990) / R.D. Jones, R.E. Baynes, C.T. Nimitz // JAVMA. – 1992. – Р. 475-477. 123. Jouzeau, J.Y. Cyclooxygenase isoenzyme: how recent findings affect thinking about NSAID / Jouzeau J.Y., Terlain B., Abid A., Nedelec E., Netter P. // Drugs. – 1997. – Vol. 53. – P. 563-582. 124. Julou, L. Ketoprofen, main pharmacological properties / L. Julou, J.C. Guyonnet , R. Ductor, J. Fournel, J. Pasquet // Scandinavian Journal of Rheumatology. – 1976. – Vol. 14. – P. 33-44. 125. Kang, R.Y. Expression of cyclooxygenase-2 in human and animal model of rheumatoid arthritis / R.Y. Kang, M.J. Freire, E.Sigal // Br. Journal Rheumatol. – 1996. – Vol.35. – P.711-718. 126. Kapui, Z. Investigations of indomethacin-induced gastric ulcer in rats / Z. Kapui, K. Boer, I. Rozsa // Arzneimittelforschung. – 1993. – Vol.43. – P.767771. 139 127. Kargman, S. Characterization of Prostaglandin G/H synthase 1 and 2 in rat, dog, monkey, and human gastrointerstinal tracts / Kargman S., Charleson S., Cartwright M., Frank J., Riendeau D., Mancini J., Evans J., O`Neill G. // Gastroenterology. – 1996. – Vol. 111. – P.445-454. 128. Kay – Mugford, P. Effect of preoperative administration of tepoxalin on hemostasis and hepatic and renal function in dogs / P. Kay – Mugford, K.A. Grimm, A.J. Weingarten, et.al. // Veterinary Therapeutics. – 2004. – V.4. – P. 120-127. 129. Keck, P. Toxicite et effets indesirabies des anti-inflammatoires nonsteroidiens / Keck P. //Rec.Med.Vet. – 1992. - P. 615-620. 130. Kennedy, B.P., Chan C.C., Culps S.A. Cloning and expression of rat prostaglandin endoperoxide synthase (cyclooxygenase) – 2 cDNA / B.P. Kennedy, C.C.Chan, S.A. Culps // Biochem. Biophys. Res. Commun. – 1993. – Vol.197. – P.494-500. 131. Klaus, K. Gastric mucosal protection by acetazolamide derivates: role of carbonic anhydrase and sulfhydryls / K. Klaus // Eur. Journal Pharmacol. – 1987. – Vol. 141. – Р. 7-13. 132. Koji, T. Lack of Gastric Toxicity of Nitric Oxide-Releasing Indomethacin, NCX-530, in Experimental Animals / T. Koji, M. Hiroyuki, A. Hideo et al. // Digestive Diseases and Scienses. – 2001. – Vol. 46. – P. 1005-1018. 133. Lain, L. Proton pump inhibitor co-therapy with nonsteroidal antiinflammatory drugs-nice or necessary? / L. Lain // Rev. Gastroenterol. Dis. - 2004. – V.4. – P. 33-41. 134. Lanas, A. Prevention and treatment of NSAID-induced gastrointestinal injury/ A. Lanas // Curr. Treat. Options Gastroenterol. - 2006. - Vol.9. - P.147156. 135. Landoni, M.F. Comparative pharmacodynamics of flunixin, ketoprofen and tolfenamic acid in calves / M.F. Landoni, F.M. Cunningharm, P. Lees // Vet. Rec. – 1995. – Vol. 137. – P. 428-431. 140 136. Landoni, M.F. Determination of pharmacokinetics and pharmacodynamics of flunixin in calves by use of pharmacokinetics/pharmacodynamics modeling / M.F. Landoni, F.M. Cunningharm, P. Lees // Am. Journal Vet. Res. – 1995. – Vol. 56. – P. 786-793. 137. Landoni, M.F. Comparison of the anti-inflammatory action of flunixin and ketoprofen in horses applying PK/PD modeling / M.F. Landoni, P. Lees // Equine Vet. Journal. – 1995. – Vol. 27. – P. 247-256. 138. Landoni, M.F. Pharmacokinetics and pharmacodynamics of ketoprofen enantomers in calves / M.F. Landoni, P. Lees // Chirality. – 1995. – Vol. 7. – P. 586-597. 139. Landoni, M.F. Pharmacokinetics and pharmacodynamics of ketoprofen enantomers in horse / M.F. Landoni, P. Lees // Journal Vet. Pharmacol. Therap. – 1996. – Vol. 19. – P. 466-474. 140. Lapicque, F. Protein binding and stereoselectivity of NSAIDs / F. Lapicque, N. Muller, E. Payan, N. Dubois, P. Nettr // Clinical Pharmacokinetics. – 1993. – Vol. 25. – P. 115-125. 141. Lees, P. Inflammation and the pharmacology of anti-inflammatory drugs. Proceedings of the 15th AnnualVeterinary Medical Forum, ACVIM, Buena Vista, Florida, USA. – 1997. – P. 60-64. 142. Lees, P. PK-PD integration and PK-PD modeling of non-steroidal anti-inflammatory drugs: principles and applications in veterinary pharmacology / P. Lees, J. Giraudel, M.F. Landoni, P.L. Toutain // Journal of Veterinary Pharmacology and Therapeutics. – 2004. – Vol. 27. – P. 491-502. 143. Lees, P. Pharmacokinetics and pharmacodynamics of non-steroidal anti-inflammatory drugs in species of veterinary interest / P. Lees, M.F. Landoni, J. Giraudel, P.L. Toutain // Journal of Veterinary Pharmacology and Therapeutics. - 2004. – Vol. 27. – P. 479-490. 144. Lees, P. Pharmacology and therapeutics of non-steroidal antiinflammatory drugs in the dog and cat: General pharmacology / P. Lees, S. A. May, Q.A. McKellar // Journal small Anim.Prac. – 1991. – V.32. – P. 183-193. 141 145. Lefebvre, H.P. Drug prescription in renal-impaired dogs / H.P. Lefebvre, J.P. Braun, P.L. Toutain // Revue Med. Vet. - 1996. – Vol. 147. – P. 757782. 146. Li, J.J. Novel terphenyls as selective cyclooxygenase-2 inhibitors and orally active anti-inflammatory agents / J.J. Li, M.B. Norton, E.J. Reinhard // Journal Med.Chem. – 1996. – Vol. 39. - №9. – P. 1846-1856. 147. Lichtenstein, D.R. Non-steroidal antiinflammatory drugs and the gastrointestinal tract: the double-edged sword / D.R. Lichtenstein, S. Syngal, M.M. Wolfe // Arthritis Rheum. – 1995 – Vol. 38. – P. 5-18. 148. Lipcomb, V.J. Clinical efficacy and pharmacokinetics of carprofen in the treatment of dogs with osteoarthritis / V.J. Lipcomb, F.S. AliAbadi, P. Lees, et.al. // The Veterinary Record. - 2002. – Vol.150. – P.684-689. 149. Lipsky, L.P.E. The classification of cyclooxygenase ingibitors / L.P.E. Lipsky, S.B. Abramson, L. Crofford, et al. // The Journal of Rheumatology. – 1998. – Vol. 25. – P. 2298-2303. 150. Lisky, P. The classification of cyclooxygenase inhibitors / P. Lisky, S. Abramson, L. Crofford et al. // Journal Rheumatol. - 1998. – Vol. 25. – P. 22982302. 151. Lygumsky, M. Aspirin can inhibit gastric mucosal cyclooxygenase without causing lesions in rat / M. Lygumsky, E.M. Golanska, D.G. Hansen // Gastroenterology. – 1984. – Vol. 84. – P. 756-761. 152. Masferrer, J.L. Selective inhibition of inducible cyclooxygenase-2 in vivo is anti-inflammatory and nonulcerogenic / J.L. Masferrer, B.S. Zweifel // Proc.Natl.Acad.Sci.USA. – 1994. – Vol. 91. – P. 3228-3232. 153. Mathews, K.A. Non-steroidal anti-inflammatory analgesics in pain management in dogs and cats / K.A. Mathews // Canadian Veterinary Journal. – 1996. – Vol. 37. – P. 539-545. 154. McCormack, K. The spinal actions of NSAIDs and the dissociation between their anti-inflammatory and analgesic effects / K. McCormack // Drugs. – 1994. – P.1-18. 142 155. McCormack, K. Toward defining the analgesic role of NSAID in the management of acute soft tissue injuries / K. McCormack, K. Brune // Clinical Journal of Sports Medicine. – 1993. – V.3. – P. 106-117. 156. McMillan, R.M. Designing therapeutically effective 5-lipooxygenase inhibitors / R.M. McMillan // TiPS. – 1992. – Vol. 13. – P. 323-330. 157. Meade, E.A. Differental ingibition of prostaglandin endoperoxide synthase (cyclooxygenase) isozimes by aspirin and other non-steroidal antiinflammatory drugs / E.A. Meade, W.L. Smith, D.L. Dewitt // Journal Biol. Chem. – 1993. – Vol. 268. – P. 6610-6614. 158. Moncada, S. Inhibition of the induction of nitric oxide synthase by glucocorticoids: yet another explanation for their anti-inflammatory effects? / S. Moncada, R.M.J. Palmer // TipS. – 1991. – Vol. 12. – P. 130-131. 159. Moreau, M. Superiority of the gastroduodenal safety profile of licofelone over rofecoxib in dogs / M. Moreau, S. Daminet, et.al. // Journal of Veterinary Pharmacology and Therapeutics. – 2005. – V.6. – P. 120-123. 160. Murtaugh, R.J. Use of synthetic prostaglandin E1 (misoprostol) for prevention of aspirin-induced gastroduodenal ulceration in arthritic dogs / R.J. Murtaugh, M.E. Matz, M.A. Labato, R.J. Boudrieau // Journal of the American Veterinary Medical Association. – 1993. – Vol. 202. – P. 251-256. 161. Netter, P. Diffusion of ketoprpfen in cerebrospinal fluid / P. Netter, F. Lapicque, B. Bannwarth, J. Tamisier, P. Thomas, R.J. Royer // European Journal of Clinical Pharmacology. - 1985. - Vol. 29. - P. 319-321. 162. Nuki, G. Pain control and the use of non-steroidal analgesic antiinflammatory drugs / G. Nuki // British Medical Bulletin. – 1990. – Vol. 46. - No 1. - P.262-278. 163. Oates, J.A. Clinical implications of prostaglandin and trombaxane A2 formation (First of two parts) / J.A. Oates, G.A. Fitzgerald, R.A. Branch, E.K. Jackson, H.R. Knapp, L.J. Roberts // The New England Journal of Medicine. 1988. – Vol. 319. – P. 689-767. 143 164. Owens, J.G. Pharmacokinetics of ketoprofen in healthy houses and houses with acute synovitis / J.G. Owens, S.G. Kamerling, S.A. Barker // Journal of Vet. Pharmacology and Therapeutics. – 1995. – Vol. 18. – P.187-195. 165. Panara, M.R.. Dose-dependent inhibition of platelet cyclooxygenase-1 and monocyte cyclooxygenase-2 by meloxicam in healthy subjects / M.R. Panara, G. Renda, M.G. Sciulli, G.Santini, Di M.Giamberardino et al. // Journal Pharmacol & Experimental Ther. – 1999. – Vol. 290. – P. 276-280. 166. Priymenko, N. Migrating motor complex of the intestine and absorption of a biliary excreted drug in the dog/ N. Priymenko, J.P. Ferre, G.Rascol, P.L. // Journal Pharmacol.Exp.Therap. – 1993. – Vol. 267. – P. – 1161-1167. 167. Rainsford, K.D. Mechanisms of gastrointestinal Toxicity of nonsteroidal anti-inflammatory drugs / K.D. Rainsford // Scandinavian Journal Gastroenterology. – 1989. – Vol. 24. – P. 9-16. 168. Rainsford, K.D. The effect of 5-lipooxygenase inhibitors and leukotriene antagonists on the development of gastric lesions induced by non-steroidal anti-inflammatory drugs in mice / K.D. Rainsford // Agent Actions. – 1987. – Vol. 21. – P. 316-319. 169. Raoul, J.L. Digestive hemorrhage following gastroduodenal ulcers caused by non-steroidal anti-inflammatory agents / J.L. Raoul, P. Emery, J.F. Bretagne // Gastroenterol.Clin.Biol. – 1991. – Vol. 15. – P. 950-955. 170. Rodriguez, L.A.G. Acute liver injury associated with NADS and the role of risk factors / L.A.G. Rodriguez, R. Williams, L.E. Derly et al. // Arch.Intern.Med. – 1994. – Vol. 154. – P. 311-316. 171. Rooney, P.J. NSAID gastropathy / P.J. Rooney, I. Bjarnason// Journal of Rheumatology – 1991. – Vol. 18. - No 6. - P. 796-797. 172. Ross, R. Atherosclerosis – an inflammatory disease / R. Ross // N. Engl. J. Med. – 1999. – Vol. 340. – P.115–126. 144 173. Rostom, A. Prevention of NSAID-indused gastroduodenal ulcers (Cochrane Review) / A. Rostom, C. Dube, G. Wells, P. Tugwell, V. Welch, E. Jolicoeur, J. McGowan // The Cochrane Library. - Issue 2. - 2004. 174. Rubin, S.I. Non-steroidal anti-inflammatory drugs, prostaglandins and the kidney / S.I. Rubin // Journal of the American Veterinary Medical Association. – 1986. – Vol. 188. – P. 1065-1068. 175. Saito, T. Inhibition of cyclooxygenase–2 improves cardiac function in myocardial infarction / T. Saito, I.W. Rodger, E.Hu, et al. // Biochem Biophys Res Commun. – 2000. – Vol. 273. – P. 772–775. 176. Salim, A.S. Sulfhydryl-containing agents in the treatment of gastric bleeding induced by nonsteroidal anti-inflammatory drugs / A.S. Salim // Can. Journal Surg. – 1993. – Vol. 36. - №1. – P. 53-58. 177. Scheiman, J.M. Pathogenesis of gastroduodenal injury due to nonsteroidal anti-inflammatory drugs: implications for prevention and therapy / J.M. Scheiman // Seminars in Arthritis and Rheumatism. – 1992. – Vol. 21. - No 4. P.201-210. 178. Schmassmann, A. Mechanisms of ulcer healing and effects of nonsteroidal anti-inflammatory drugs / A. Schmassmann // Amer.Journal Med. – 1998. – Vol. 104. - №3. – P.43-51. 179. Schonbek, U. Augmented expression of COX-2 in human atherosclerotic lesions / U. Schonbek, G.K.Suckova, P.Graber et al. // Am Journal Pathol. – 1990. – Vol. 15. – P. 1281-1291. 180. Seibert, K. Distribution of COX-1 and COX-2 in normal and inflamed tissues / K. Seibert // Adv. Exp. Med. Biol. – 1997. – V.400. – P.167-170. 181. Seibert, K. Pharmacological and biochemical demonstration of the role of cyclooxygenase-2 in inflammatory and pain/ K. Seibert, Y. Zhang, K. Leahy // Proc.Natl.Acad.Sci.USA. – 1994. – Vol. 91. - №25. – P.12013-12017. 182. Simmons, D.L. Multiple cyclooxygenases: cloning of a mitogeninducible form. In: Bailey J.M. ed / D.L. Simmons, W. Xie, J.G. Chipman, et.al. // 145 Prostoglandins, Leukotriens and PAF. Plenum Press, New York. – 1991. – P.6778. 183. Singh, G. Recent considerations in non-steroidal anti-inflammatory drug gastropathy / G. Singh // American J. of Medicine. - 1998. – P.-315-385. 184. Singh, G. Appropriat e choice of proton pump inhibitor therapy in the prevention and management of NSAID-related gastrointestinal damage / G. Singh // Int. Journal Clin. Pract. – 2005. – Vol.59. – P.1210-1215. 185. Streppa, H.K. Cyclooxigenase selectivity of non-steroidal antiinflammatory drugs in canine blood / H.K. Streppa, C.J. Jones, S.C. Budsberg // American Journal of Veterinary Research. - 2002 – Vol. 63. - P. 91-94. 186. Stuehr, D.G. Nitric oxide: a macrophage product responsible for cytostasis and respiratory inhibition in tumour target cells / D.G. Stuehr // Journal Exp.Med. – 1989. – Vol. 169. – P.1543. 187. Swift, G.L. Risk of ulceration with long-term indomethacin: endoscopic and histological changes in upper gastro-intesnal mucosa / G.L. Swift, J. Arnold, G.T. Williams // Digestion. – 1992. – Vol. 53. – P.88-93. 188. Tabet, N. Ibuprofen for Alzheimers disease (Cochrane Review) / N. Tabet, H. Feldmand // The Cochrane Library. - Issue 2. - 2004. 189. Tatley, N.J. Chronic peptic ulceration and non-steroidal antiinflammatory drugs: more to be said about NSAIDs? / N.J. Tatley // Gastroenterology. – 1992. – Vol. 102. - No 3. - P.1074-1077. 190. Tolman, K.G. Hepatotoxicity of antirheumatic drugs / K.G. Tolman // Journal Rheumatol. – 1990. – Vol. 17. – P. 6—11. 191. Tousoulis, D. Inflammatory and thrombotic mechanisms in coronary atherosclerosis / D. Tousoulis, G. Davies, C. Stefanadis, P. Toutouzas, J.A. Ambrose // Heart . – 2003. – Vol. 89. – P.993–997. 192. Toutain, P.L. Plasma concentrations and therapeutic efficacy of phenylbutazone and flunixin meglumine in horses: harmacoki- 146 netic/pharmacodynamic modeling / P.L. Toutain, A. Autefage, C. Legrand et al. // Journal Vet. Pharmacol. Ther. – 1994. – Vol. 17. – P. 459-469. 193. Tries, S. The pharmacological profile of ML3000: A new pyrrolizine derivative inhibiting the enzims cyclooxygrnase and 5-lipoxigenase / S. Tries, S. Laufer // Inflammopharmacology. - 2001. - №9. - P. 113-124. 194. Vainio, H. Aspirin for the second hundred years: new uses for an old drug / H.Vainio, G. Morgan //Pharmacol.Toxicol.-1997-Vol.81.-№4.-P.151-152. 195. Vane, J.R. Inhibition of prostaglandin synthesis as a mechanism of action for aspirin-like drugs / J.R. Vane // Nature New Biology. – 1971 – Vol. 231. P 232-235. 196. Vane, J.R. Towards a better aspirin / J.R. Vane // Nature New Biology. – 1994. – Vol. 367. – P. 215-216. 197. Vane, J.R. Cyclooxygenases 1 and 2 / J.R.Vane, J.S.Bakhle, R.M. Botting // Annu. Rev. Pharmacol. Toxicol. – 1998. – Vol. 38. – P. 97-120. 198. Vane, J.R. Mechanism of action of anti-inflammatory drugs: an overview. In. Selective COX-2 inhibitors. Pharmacology, clinical effects and therapeutic potential / J.R.Vane, R.M. Botting // Kluwer Academic Publisher. – 1997 - P. 117. 199. Vane ,J.R. Inducible isoforms of cyclooxygenase and nitric oxide synthase in inflammation / J.R.Vane, J.A.Mitchell, J.Appleton, A.Tomlinson, D.A.Bishop – Bailey, J.Croxtall, D. Willoughby // Proc. Natl. Acod. Sci. USA. – 1994. - № 91. – P. 2046-2050. 200. Vasseur, P.B. Randomised, controlled trial of the efficacy of carprofen, a non-steroidal anti-inflammatory drug, in the treatment of osteoarthritis in dogs / Vasseur P.B., Johnson A.L., Budsberg S.C., Lincoln J.D., Toombs J.P., Whitehair J.C., Lentz E.L. // JAVMA. – 1995. – Р. 343-351. 201. Wallace, J.L. Cyclooxygenase-1 contributes to inflammatory responses in rats and mice: implications for gastrointestinal toxicity / J.L. Wallace // Gastroenterology. – 1998. – Vol. 115. - №1. – P.101-109. 147 202. Wallace, J.L. Pathogenesis of NSAID gastropathy: are neutrophil the culprits? / J.L.Wallace, D.N. Granger // TiPS. – 1992. – Vol. 13. – P. 129-131. 203. Wallace, M.S. Gastric ulceration in the dog secondary to the use of non-steroidal anti-inflammatory drugs / M.S.Wallace, D.A.Zawie, M.S. Garvey // Journal of the American Animal Hospital Association. – 1990. – Vol. 26. – P. 465472. 204. Wang, L.M. The anti-inflammatory effects of ketoprofen in animals / L.M. Wang, A. Toyoshima, S. Mineshita, X.X. Wang, T. Yamamoto, Y.Nomura, L. Yang, Y. Koikei, K. Shiba, Y. Honda // Drug Experimental and Clinical Research. - 1997. – Vol. 23. – P. 1-6. 205. Watson, M.C. Non-aspirin, non-steroidal anti-inflammatory drugs for treating osteoarthritis of the knee (Cochrane Review) / M.C. Watson // In: The Cochrane Library, Issue 3. – 2004. 206. Weissman, G. Prostaglandins as modulators rather than mediators of inflammation / G. Weissman // Journal Lipid Med. – 1993. – Vol. 6. – P.275-286. 207. Wilson, J.E. Determination of expression of cyclooxygrnase—1 and – 2 isozymes in canine tissues and their differential sensitivity to non-steroidal antiinflammatory drugs / J.E. Wilson, N.V. Chandrasekharan, K.D. Westover, et al. // American Journal of Veterinary Research.- 2004. – Vol. 65. – P. 810-818. 208. Xie, W. Expression of a mitogen-responsive gene encoding prostaglandin synthase is regulated by RNAm splicing / W. Xie, J.G. Chipman, D.L. Robertson, et.al. // Proc. Nalt. Acad. Sci. USA. - 1991. – Vol. 88. - P. 2692-2696. 209. Zeidler, H. NICE risk factors for gastrointestinal adverse events in diclofenac users in general practice in Germany: comment on the article of Thompson et al / H. Zeidler, M. May, M.Uberall, H.Vergin // Rheumatology. – 2006. – Vol. 45. – P. 494-496. 210. Zimmerman, J. Acute upper gastrointestinal bleeding in Jerusalem 1988-1991: causes, haracteristics and relation to non-steroidal anti-inflammatory drugs/ J. Zimmerman, R. Arnon, M. Ligumski // Isr. Journal Med.Sci. – 1993. – Vol. 29. - P.292-297.