1
advertisement
1 ФЕДЕРАЛЬНОЕ ГОСУДАРСТВЕННОЕ БЮДЖЕТНОЕ ОБРАЗОВАТЕЛЬНОЕ УЧРЕЖДЕНИЕ ВЫСШЕГО ПРОФЕССИОНАЛЬНОГО ОБРАЗОВАНИЯ «КАЗАНСКАЯ ГОСУДАРСТВЕННАЯ АКАДЕМИЯ ВЕТЕРИНАРНОЙ МЕДИЦИНЫ ИМЕНИ Н.Э. БАУМАНА» На правах рукописи ПАВЛОВА ОЛЬГА НИКОЛАЕВНА «РОЛЬ БИОМАССЫ СПИРУЛИНЫ, ШРОТОВ СЕМЯН ВИНОГРАДА И КУНЖУТА, А ТАКЖЕ ГУМАТА КАЛИЯ В МОДУЛЯЦИИ НЕКОТОРЫХ СОСТАВЛЯЮЩИХ ГОМЕОСТАЗА» 03.03.01 – физиология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени доктора биологических наук Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор Т.В. Гарипов Казань 2015 2 ОГЛАВЛЕНИЕ ВВЕДЕНИЕ ...................................................................................................................... 6 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ............................................................................................. 17 1.1 Биологически активные вещества – регуляторы гомеостаза ....................... 17 1.1.1 Биологически активные вещества как компоненты биологически активных добавок ........................................................... 17 1.1.2 Роль биологически активных соединений в коррекции гомеостаза ................................................................................................ 20 1.1.3 Природные источники биологически активных соединений ............ 23 1.1.3.1 Биомасса сине-зеленой микроводоросли Spirulina platensis ..................................................................... 23 1.1.3.2 Шрот семян винограда ............................................................. 27 1.1.3.3 Шрот семян кунжута ................................................................ 29 1.1.3.4 Гуминовые вещества. Гумат калия ......................................... 32 1.2 Концепция гоместаза ........................................................................................ 34 2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ ..................................................................... 53 2.1 Материал и методы исследования ................................................................... 53 2.2 Краткая характеристика, использованных в экспериментах биологически активных добавок ..................................................................... 66 2.3 Морфобиохимический состав крови крыс как физиологический критерий функционального состояния организма ........................................ 71 2.3.1 Реактивные приспособления морфологического состава крови крыс к нагрузке биологически активными добавками ....................... 71 2.3.2 Реактивные приспособления биохимического состава крови крыс к нагрузке биологически активными добавками ....................... 73 3 2.4 Биохимический состав крови цыплят-бройлеров как один из физиологических критериев функционального состояния организма ........ 76 2.5 Исследование системы ПОЛ-АО печени крыс .............................................. 82 2.5.1 Система ПОЛ-АО печени на фоне нагрузки биологически активными добавками ............................................................................ 82 2.5.2 Ответная реакция системы ПОЛ-АО печени половозрелых крыс на нагрузку тетрахлорметаном ........................... 88 2.5.3 Ответная реакция системы ПОЛ-АО печени здоровых половозрелых крыс на нагрузку тетрахлорметаном, на фоне введения в организм биологически активных добавок ...................... 90 2.5.3.1 Ответная реакция системы ПОЛ-АО печени половозрелых крыс на нагрузку тетрахлорметаном, на фоне введения в организм биомассы спирулины............. 90 2.5.3.2 Ответная реакция системы ПОЛ-АО печени половозрелых крыс на нагрузку тетрахлорметаном, на фоне введения в организм шрота семян винограда ......... 91 2.5.3.3 Ответная реакция системы ПОЛ-АО печени половозрелых крыс на нагрузку тетрахлорметаном, на фоне введения в организм шрота семян кунжута ............ 93 2.5.3.4 Ответная реакция системы ПОЛ-АО печени половозрелых крыс на нагрузку тетрахлорметаном, на фоне введения в рацион гумата калия ............................... 94 2.5.4 Сравнение гепатопротекторного эффекта биомассы спирулины, шротов семян винограда и кунжута, а также гумата калия с эффектом эталонного антиоксидантагепатопротектора β-каротина. ............................................................... 95 2.6 Реактивные изменения ткани печени крыс в антенатальном и раннем постнатальном периодах онтогенеза на фоне нагрузки БАД ........ 100 2.6.1 Гистоструктурный анализ ткани печени крыс контрольной группы .................................................................................................... 100 4 2.6.2 Реактивные изменения ткани печени крыс в результате нагрузки суспензией биомассы спирулины ................. 104 2.6.3 Реактивные изменения ткани печени крыс в результате нагрузки суспензией шрота семян кунжута................. 109 2.6.4 Реактивные изменения ткани печени крыс в результате нагрузки раствором гумата калия ................................. 113 2.6.5 Реактивные изменения ткани печени крыс в результате нагрузки суспензией шрота семян винограда.............. 120 2.7 Реактивные изменения репродуктивной системы крыс и развития их потомства в антенатальный и ранний постнатальный периоды онтогенеза на фоне нагрузки биологически активными добавками ......... 126 2.7.1 Реактивные изменения репродуктивной системы крыс и развитие их потомства в антенатальный период онтогенеза на фоне нагрузки биологически активными добавками ................... 126 2.7.1.1 Реактивные изменения репродуктивной системы крыс и их потомства в антенатальный период онтогенеза на фоне нагрузки шротом семян кунжута ............................ 127 2.7.1.2 Реактивные изменения репродуктивной системы крыс и их потомства в антенатальный период онтогенеза на фоне нагрузки гуматом калия........................................... 134 2.7.1.3 Реактивные изменения репродуктивной системы крыс и их потомства в антенатальный период онтогенеза на фоне нагрузки шротом семян винограда......................... 141 2.7.1.4 Реактивные изменения репродуктивной системы крыс и их потомства в антенатальный период онтогенеза на фоне нагрузки биомассой спирулины ............................. 148 2.7.2 Изучение скорости созревания сенсорно-двигательных рефлексов потомства крыс в ранний постнатальный период онтогенеза .............................................................................................. 154 5 2.7.2.1 Развитие и становление нервной системы крыс на фоне нагрузки шротом семян кунжута............................ 155 2.7.2.2 Развитие и становление нервной системы крыс на фоне нагрузки гуматом калия........................................... 164 2.7.2.3 Развитие и становление нервной системы крыс на фоне нагрузки шротом семян винограда......................... 172 2.7.2.4 Развитие и становление нервной системы крыс на фоне нагрузки биомассой спирулины ............................. 181 2.8 Научно-хозяйственный опыт использования БАД при выращивании цыплят бройлеров и кур-несушек ................................. 191 2.8.1 Исследование влияния БАД на изменение живой массы, степень накопления тяжелых металлов и микроэлементов в мясе, а также витаминов группы В в печени цыплят-бройлеров ................................................................................. 191 2.8.2 Биохимический состав крови и яичная продуктивность кур-несушек на фоне нагрузки биологически активными добавками .............................................................................................. 196 3 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ .......................................................................... 201 ЗАКЛЮЧЕНИЕ ........................................................................................................... 215 ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ .................................................................... 219 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ................................................. 220 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ........................................................................................... 221 Приложение 1 .............................................................................................................. 253 Приложение 2 .............................................................................................................. 254 Приложение 3 .............................................................................................................. 255 Приложение 4 .............................................................................................................. 256 Приложение 5 .............................................................................................................. 257 6 ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы исследования. В связи с ухудшением экологической ситуации организм человека и животных, подвергаясь воздействию вредных факторов, вынужден постоянно мобилизовывать свои компенсаторно- приспособительные механизмы, резервы которых ограничены и со временем могут истощаться. Интенсивное и длительное воздействие экологически неблагоприятных факторов окружающей среды может вызывать перенапряжение и срыв адаптационных процессов организма. Гарантом выполнения жизненных процессов является гомеостаз включая механизмы регуляции. По современным представлениям [24, 26, 28, 40, 65, 66, 67, 111] гомеостаз целостного организма определяется деятельностью различных функциональных систем, результатом которых являются гомеостатические константы. Перестройка систем гомеостаза может осуществляться двумя путями: как изменением структуры включенных механизмов систем регулирования, так и изменением допустимого диапазона регулируемых констант. Использование биологически активных добавок (БАД) открывает широкие возможности для модуляции физиологических процессов в организме [6, 16, 29, 164]. Использование БАД из природного сырья повышает резистентность организма, облегчает клиническое течение многих экологически обусловленных заболеваний и практически не имеет негативных побочных эффектов. В настоящее время ведется интенсивный поиск новых биологически активных веществ – антиоксидантов, способных поддерживать гомеостаз. Биомасса спирулины, шроты семян винограда и кунжута, а также гумат калия – субстанции природного происхождения, которые нашли достаточно широкое применение в животноводстве и птицеводстве в качестве премиксов и кормовых добавок, а также в ветеринарии, в качестве средств профилактики и лечения экологически обусловленных заболеваний домашних животных. Имеются данные об их использовании в качестве БАД и компонентов 7 лекарственных препаратов, применяемых для человека, однако весь спектр биологической активности их компонентов не раскрыт. В связи с этим необходимы исследования, дополняющие и вносящие новые сведения о потенциальных положительных эффектах биомассы спирулины, шротов семян винограда и кунжута, а также гумата калия в модуляции гомеостаза организма. Степень разработанности проблемы. Биомасса спирулины, шроты семян винограда и кунжута, а также гумат калия являются достаточно известными субстанциями и нашли широкое применение в различных отраслях птицеводства и животноводства [8, 22, 39, 50, 78, 129, 132, 133, 236, 237]. Они не токсичны, не обладают аллергизирующими и тератогенными свойствами. В литературе имеются данные об использовании биомассы спирулины в качестве средства повышения выносливости при физических нагрузках [18, 52, 83, 98, 198], доказано, что она обладает выраженной противоопухолевой и противовирусной активностью [72]. Гумат калия является средством активации обмена веществ и проявляет высокую сорбционную способность, препятствует накоплению тяжелых металлов и токсинов в организме [116, 128]. Гумат калия обладает высокой антибактериальной и противовирусной активность, обладает иммуностимулирующим эффектом за счет активации фагоцитоза и выраженным эрготропным эффектом [1, 2, 53, 93]. Установлено, что шрот семян винограда обладает выраженным антиоксидантным действием, является гипотензивным средством, кардиопротектором и онкопротектором [30, 31]. Шрот семян кунжута является желчегонным средством, улучшает свертываемость крови [34]. Биомассу спирулины и гумат калия используют в качестве средств повышения продуктивности сельскохозяйственных животных, но без учета особенностей их влияния на организм. Известно, что богатый минеральный состав и ценный набор биологически активных соединений, содержащихся в биомассе спирулины, шротах семян винограда и кунжута, а также гумат калия, способен обеспечивать более глубокое и равновесное воздействие на функциональную активность организма, и вследствие этого сочетать высокий терапевтический эффект с минимальным спектром противопоказаний к применению. В литературе 8 отсутствуют данные об изменениях морфологического и биохимического состава крови крыс и цыплят-бройлеров на фоне нагрузки биомассой спирулины, шротами семян винограда и кунжута, а также гумата калия в сравнительном аспекте. Несмотря на важную роль системы перекисного окисления липидов – антиоксидантов (ПОЛ-АО) в регуляции гомеостаза в организме не изучена ее ответная реакция на нагрузку биомассой спирулины, шротами семян винограда и кунжута, а также гуматом калия в норме и при оксидативном стрессе. Нет сведений о сравнительном анализе с эталонными гепатопротекторами эффективности применения изучаемых субстанций в коррекции оксидативного стресса. Отсутствует гистологическая оценка изменений ткани печени животных в антенатальном и раннем постнатальном периодах онтогенеза, возникающих в результате внутрижелудочной нагрузки биомассой спирулины, шротами семян винограда и кунжута, а также гуматом калия. Не изучены ответные реакции репродуктивной системы животных и особенности развития их потомства в антенатальном периоде онтогенеза на фоне нагрузки биомассой спирулины, шротами семян винограда и кунжута, а также гуматом калия. Не изучены процессы становления сенсорно-двигательных рефлексов у животных в ранний постнатальный период внутрижелудочно онтогенеза, указанные родившихся субстанции от самок, природного получавших происхождения. Отсутствуют исследования по применению шротов семян винограда и кунжута при выращивании цыплят-бройлеров и кур-несушек. Все это сдерживает широкое использование указанных субстанций в качестве биологически активных добавок в ветеринарии и при откорме животных. Поэтому, данная проблема требует более глубоких научных исследований, раскрывающих благотворное действие биомассы спирулины, шротов семян винограда и кунжута, а также гумата калия на организм животных. Цель и задачи исследования. Цель – изучение роли биомассы спирулины, шротов семян винограда и кунжута, а также гумата калия в модуляции гомеостаза организма животного. Для достижения поставленной цели были определены следующие задачи: 9 1) изучить изменения морфобиохимического состава крови животных на фоне нагрузки биомассой спирулины, шротами семян винограда и кунжута, а также гумата калия; 2) исследовать ответную реакцию системы ПОЛ-АО печени крыс на фоне нагрузки биомассой спирулины, шротами семян винограда и кунжута, а также гуматом калия и сравнить их эффективность с эталонным антиоксидантом β-каротином; 3) выявить реактивные изменения ткани печени крыс в антенатальном и раннем постнатальном периодах онтогенеза на фоне нагрузки биомассой спирулины, шротами семян винограда и кунжута, а также гуматом калия; 4) изучить ответную реакцию репродуктивной системы крыс и развитие их потомства в антенатальный период онтогенеза на фоне нагрузки биомассой спирулины, шротами семян винограда и кунжута, а также гуматом калия; 5) исследовать процесс становления сенсорно-двигательных рефлексов в ранний постнатальный период онтогенеза у крысят, рожденных от самок, получавших биомассу спирулины, шроты семян винограда и кунжута, а также гумат калия; 6) изучить возможности применения БАД для выращивания цыплят- бройлеров и повышения качества яиц кур-несушек. Научная новизна результатов исследования. Впервые в сравнительном аспекте изучены основные морфологические и биохимические составляющие крови крыс и цыплят-бройлеров на фоне нагрузки биомассой спирулины, шротами семян винограда и кунжута, а также гуматом калия. Установлено, что при длительном внутрижелудочном поступлении в организм крыс биомассы спирулины в дозе 10 мг/100 г массы тела животного в крови увеличивается количество эритроцитов на 21,1 %, концентрация гемоглобина – на 21,9 %, количество лейкоцитов – на 13,1 %, палочкоядерных нейтрофилов – на 27,1 % и снижается количество эозинофилов – на 9,5 % по сравнению с контролем. Биохимический состав крови крыс на поступление биомассы спирулины отвечает достоверным увеличением концентрации общего белка на 12,9 %, альбуминов – 10 на 10,6 %, α2-глобулинов – на 20,0 % и снижением концентрации γ-глобулинов – на 15,8 % (р < 0,05). На внутрижелудочную нагрузку шротом семян винограда в течение 35 суток в дозе 10 мг/100 г массы тела организм крыс отвечает увеличением количества эритроцитов в крови на 24,0 %, концентрации гемоглобина – на 32,4 %, палочкоядерных нейтрофилов – на 31,2 % и сегментоядерных нейтрофилов – на 12,0 %, а также снижением количества моноцитов – на 20,4 % по сравнению с контролем. Эффект воздействия шрота семян винограда на биохимический состав крови крыс наиболее ярко проявляется увеличением количества альбуминов на 13,9 % и снижением концентрации γ-глобулинов на 11,8 % (р < 0,05). Нагрузка шрот семян кунжута при равных условиях увеличивает количество эритроцитов в крови на 13,3 %, концентрацию гемоглобина – на 15,2 %, а в лейкоцитарной формуле, по сравнению с контролем, снижет количество моноцитов на 9,6 %, при этом биохимический состав крови крыс не претерпевает существенных изменений (р < 0,05). Организм крыс на длительное поступление гумата калия в дозе 10 мг/100 г массы тела животного отвечает увеличением в крови количества лейкоцитов на 15,3 %, палочкоядерных нейтрофилов – на 18,2 %, снижением количества эозинофилов на 20,4 % и количества моноцитов – на 15,0 %, повышает концентрацию общего белка на 14,1 %, альбуминов – на 16,6 %, α2-глобулинов – на 12,7 % и снижает количество γ – глобулинов на 30,3 % (р < 0,05). Нагрузка биомассой спирулины цыплят-бройлеров в течение 35 суток вызывает увеличение в сыворотке крови количества α – глобулинов на 17,6 % и γглобулинов на 32,9 %, снижает количество β-глобулинов на 18,3 % и концентрацию β-липопротеидов на 25,96 %, увеличивает концентрацию холестерина на 88,02 %, аспартатаминотрансферазы (АсАТ) – на 29,54 %, аланинаминотрансферазы (АлАТ) – на 41,79 %, кальция – на 50,96 % и фосфора – на 25,33 % (р < 0,05). Длительная нагрузка гуматом калия способствует увеличению количества α – глобулинов на 22,3 % и γ-глобулинов на 20,7 %, снижает концентрацию β- 11 липопротеидов на 31,99 % и пировиноградной кислоты (ПВК) на 14,79 %, увеличивает концентрацию холестерина на 63,02 %, АлАТ – на 16,49 %, кальция – на 38,22 % и фосфора – на 19,21 % (р < 0,05). Организм цыплят-бройлеров на поступление шрота семян винограда в течение 35 суток отвечает увеличением количества γ-глобулинов на 16,7 %, снижением концентрации β-липопротеидов на 38,19 % и ПВК на 37,24 %, увеличением концентрации холестерина на 57,80 %, АсАТ – на 18,62 %, кальция – на 72,58 % и фосфора – на 27,94 % (р < 0,05). Шрот семян кунжута при равных условиях поступления в организм способствует увеличению в сыворотке крови цыплят-бройлеров концентрации общего белка на 13,3 %, количества α-глобулинов на 15,5 % и γ-глобулинов на 33,9 %, снижает количество β-глобулинов на 19,4 %, концентрацию βлипопротеидов на 34,64 % и ПВК на 30,07 %, увеличивает концентрацию холестерина на 54,17 %, АсАТ – на 13,16 %, АлАТ – на 27,47 %, кальция – на 61,77 % и фосфора – на 15,22 % (р < 0,05). Впервые проведена оценка системы ПОЛ-АО на фоне нагрузки биомассой спирулины, шротами семян винограда и кунжута, а также гуматом калия в норме в различных дозах и на модели оксидативного стресса в сравнении с эталонным антиоксидантом β-каротином. Установлено, что нагрузка организма крыс биомассой спирулины, шротами семян винограда и кунжута, а также гуматом калия в дозе 5, 10, 15 и 20 мг/100 г массы тела не вызывает негативных изменений в системе ПОЛ-АО печени. Определена оптимальная дозировка 10 мг/100 г массы тела для применения биомассы спирулины, шротов семян винограда и кунжута, а также гумата калия. Выявлено, что данные природные субстанции обладают противотоксическими свойствами, способствуя нормализации гомеостаза в системе ПО-АО в состоянии оксидативного стресса. Впервые на гистологическом уровне изучено становление структуры печени, явления апоптоза и пролиферации на фоне нагрузки биомассой спирулины, шротами семян винограда и кунжута, а также гуматом калия. Установлено, что на 12 фоне нагрузки биомассой спирулины у эмбрионов печень более продолжительное время сохраняет роль органа кроветворения, увеличивается число митотически делящихся гепатоцитов и количество слоев клеток наружной терминальной пластинки. На фоне нагрузки шротом семян кунжута на 21 сутки эмбриогенеза в ткани печени отмечается усиленная пролиферация клеток желчевыводящих протоков и их расширение, удлиняются сроки эритропоэза у плодов до момента рождения. На длительную нагрузку гуматом калия ткань печени эмбрионов отвечает ускоренным формированием печеночных балок и угнетением эритропоэза, отмечено наличие двуядерных и полиплоидных гепатоцитов, особенно выраженное в центральной части долек печени. На нагрузку суспензией шрота семян винограда, ткань печени крыс отвечает отсутствием ингибиторов апоптоза в гепатоцитах периферической части долек печени, что проявляется повышением синтетической активности клеток, синтезирующих альбумины и другие белки плазмы крови, усиливается пролиферация клеток центральной части органа. Впервые доказано отсутствие патологического действия биомассы спирулины, шротов семян винограда и кунжута, а также гумата калия на репродуктивную систему самцов и самок и на развитие их потомства в антенатальном периоде. Доказано отсутствие отрицательного действия биомассы спирулины, шротов семян винограда и кунжута, а также гумата калия на становление сенсорнодвигательных рефлексов у крыс в ранний постнатальный период онтогенеза. Биологически активные добавки в организме крыс приводят к увеличению среднего количества крысят в помете; снижению общей смертности эмбрионов, увеличению массы и кранио-каудального размера плодов, а также средней массы плаценты, изменяют динамику созревания сенсорно-двигательных рефлексов и уровень предметного действия, связанный с мелкой моторикой и эмоциональной сферой. Доказано, что БАД в организме цыплят-бройлеров способствуют в разной степени увеличению массы тела и снижению накопления тяжелых металлов в 13 мышцах, повышению концентрацию каротина в сыворотке крови и накоплению витаминов А и В2 в тканях печени. Биомасса спирулины, шроты семян винограда и кунжута в организме кур-несушек способствуют повышению содержания общего белка в сыворотке крови и концентрации кальция и фосфора в зависимости от длительности поступления в организм. На фоне нагрузки БАД отмечается увеличение массы кур-несушек, массы и плотности яиц, содержания питательных веществ в яйце, а также утолщение скорлупы. Теоретическая значимость работы. Установлена роль биомассы спирулины, шротов семян винограда и кунжута, а также гумата калия в модуляции функциональных составляющих гомеостаза животных. Результаты нашего исследования обогащают информацию о роли биомассы спирулины, шротов семян винограда и кунжута, а также гумата калия в регуляции процессов в организме, дополняют известную и вносят новое в теорию влияния БАД на организм животных, раскрывают возможности использования их в производстве животноводческой продукции. Полученная информация может быть использована в учебном процессе при изучении таких дисциплин, как физиология, этология и экология, а также в практических целях в ветеринарии и птицеводстве. Практическая значимость. Результаты исследований физиологически обосновывают возможность применения биомассы спирулины, шротов семян винограда и кунжута, а также гумата калия в регуляции гомеостаза и целесообразность их использования при откорме цыплят-бройлеров и выращивании кур-несушек. Методология и методы исследования. Изучение роли биомассы спирулины, шротов семян винограда и кунжута, а также гумата калия в модуляции гомеостаза проведено стандартными общепринятыми гематологическими, биохимическими, гистологическими и физиологическими методами. Предметом исследования служила ответная реакция организма крыс, цыплятбройлеров и кур-несушек на введение биомассы спирулины, шротов семян 14 винограда и кунжута, а также гумата калия. Объектами исследования служили белые беспородные крысы, цыплята-бройлеры и куры-несушки. Цифровой материал экспериментов подвергали статистической обработке с определением критерия Стьюдента с использованием программы Sigma Stat 6.0. Основные положения, выносимые на защиту: биомасса спирулины, шроты семян винограда и кунжута, а также гумат калия, как биологически активные добавки являются активными регуляторами гомеостаза. биомасса спирулины, шроты семян винограда и кунжута, а также гумат калия при внутреннем введении в организм восстанавливают нарушенное равновесие в системе ПОЛ-АО печени. реактивные изменения структуры ткани печени крыс в антенатальном и раннем постнатальном периодах онтогенеза на фоне нагрузки БАД характеризуются разнообразными проявлениями, зависящими от биологической активности биомассы спирулины, шрота семян винограда, шрота семян кунжута и гумата калия. потомство крыс, получавших биологически активные добавки, по сравнению с контролем, отличается большим количеством и массой тела, размерами и ускоренным проявлением сенсорно-двигательных рефлексов. биологически активные добавки в организме цыплят-бройлеров способствуют в разной степени увеличению массы тела и снижению накопления тяжелых металлов в мышцах, повышению концентрацию каротина в сыворотке крови и накоплению витаминов А и В2 в тканях печени. Биомасса спирулины, шроты семян винограда и кунжута и гумат калия у кур-несушек способствуют, в разной степени, повышению содержания общего белка и концентрации кальция и фосфора в сыворотке крови, увеличению веса и плотности яиц, повышению содержания питательных веществ в яйце и утолщению скорлупы. Степень достоверности и апробация результатов научных исследований. Цифровой материал экспериментов подвергали статистической обработке с определением критерия Стьюдента с использованием программы Sigma Stat 6.0. 15 Основные положения диссертации доложены и обсуждены на XXXIV научной конференции студентов и аспирантов (Самара 2007); Медико-фармацевтическом конгрессе, 14-й Международной фармацевтической выставке «Аптека 2007» (Москва, 2007); Всероссийской научно-практической конференции «Современное состояние и перспективы развития пищевой промышленности и общественного питания» (Челябинск 2007); Всероссийской научно-технической конференции «Современные сервисные технологии» (Самара 2007); «IV Международной научно-практической транспортного конференции комплекса» (Самара, «Актуальные 2008); «III проблемы развития Всероссийской научно- практической конференций «Процессы, технологии, оборудование и опыт переработки отходов и вторичного сырья» (Самара 2008); «XIII конгрессе «Экология и здоровье человека» (Самара, 2008); «IV Всероссийской конференции с международным участием «Медико-физиологические проблемы экологии человека» (Ульяновск, 2011); «Российской научно-практической конференции «Наука, образование, медицина» «Самара, 2011); «Региональной научнопрактической межвузовской конференции «Актуальные задачи ветеринарии, медицины и биотехнологии в современных условиях и способы их решения»» (Самара, 2013); «Шестой международной научно-практической конференции «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине»» (СанктПетербург, 2014); «VII Международной научно-практической конференции «Теория и практика актуальных исследований» (Краснодар, 2014); «Proceedings of the 2nd European Conference on Biology and Medical Sciences» (August, 2014); «Международной конференции, посвященной 85-летию Самарской научноисследовательской ветеринарной станции Российской академии сельскохозяйственных наук «Актуальные проблемы развития ветеринарной науки» (Самара, 2014). Результаты исследования внедрены в учебный процесс на кафедре физиологии и патофизиологии ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия имени Н.Э. Баумана», кафедре ботаники, общей биологии, экологии и биоэкологического образования ФГБОУ ВПО «Поволжская государственная 16 социально-гуманитарная академия», на кафедре биоэкологи и физиологии сельскохозяйственных животных ФГБОУ ВПО «Самарская государственная сельскохозяйственная академия», на кафедрах медико-биологических дисциплин и естественнонаучных «РЕАВИЗ». Результаты выращиванию дисциплин ЧУООВО исследования сельскохозяйственной и «Медицинский методические птицы внедрены университет рекомендации в производство по в компаниях ООО «Эмульсионные технологии» и ООО «Доминант». По теме диссертации опубликовано 56 научных работ, из которых 26 – в рекомендуемых ВАК изданиях. 17 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1 БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫЕ ВЕЩЕСТВА – РЕГУЛЯТОРЫ ГОМЕОСТАЗА 1.1.1 Биологически активные вещества как компоненты биологически активных добавок С развитием человеческого общества меняются не только потребности в широком спектре, от материальных до тенденции фактического изменения сроков биологического существования индивидуума, изменяется доступность ресурсов и культуральные особенности их использования. При видимом расширении спектра доступных ресурсов, по факту в целом ряде случаев мы имеем сужение их применения. В первую очередь мы говорим об элементах питания, которые с каждым годом исчезают из употребления, так официально в России используется 41 пищевая культура, а реально потребляется всего лишь 27 видов пищевых растений [7, 13, 29, 46, 49]. Таким образом, факт, что современное общество стало индустриальным и высоко урбанизированным, отнюдь не снизил уровень дефицита и необходимость потребления биологически активных соединений, удовлетворяющих основные потребности организма. Эмпирический и культовый поиск различных природных компонентов растительного, животного и минерального происхождения и их применение с профилактическими и лечебными целями известны с глубокой древности. Еще во II в. н. э. древнеримским врачом Клавдием Галеном были впервые разработаны технологические приемы изготовления лекарств (настоев, экстрактов, порошков) из природного сырья [29, 113]. 18 По мнению нутрициологов, удовлетворить основные потребности организма в биологически активных веществах можно с помощью биологически активных добавок [29, 49, 64, 99, 173, 231]. Биологически активные добавки к пище – это природные или идентичные природным биологически активные вещества, предназначенные для употребления с пищей или введения в состав пищевых продуктов [29, 164, 205, 243]. По одной из классификаций биологически активные добавки подразделяются на нутрицевтики, парафармацевтики и эубиотики [148, 164]. Нутрицевтики – это БАД, применяемые для коррекции химического состава пищи человека и животных. Они представляют собой эссенциальные нутриенты – природные ингредиенты пищи: витамины и их близкие предшественники (например, бета-каротин и другие каротиноиды); полиненасыщенные жирные кислоты, омега-3 и другие ПНЖК; макро- и микроэлементы (кальций, железо, селен, цинк, йод, фтор и др.); отдельные аминокислоты; некоторые моно- и дисахариды; пищевые волокна (целлюлоза, пектин и т.п.). Использование БАД данного вида позволяет: ¾ легко и быстро ликвидировать дефицит эссенциальных пищевых веществ; ¾ индивидуализировать питание конкретного человека или животного в зависимости от потребностей организма, существенно отличающихся не только по полу, возрасту, интенсивности физической нагрузки, но и в связи с генетически обусловленными особенностями биохимической конституции отдельного индивидуума, его биоритмами, физиологическим состоянием (беременность, лактация, эмоциональный стресс и т. п.), а также экологическими условиями зоны обитания; ¾ удовлетворить измененные физиологические потребности в пищевых веществах больного и по принципу метаболического шунтирования – обойти поврежденное патологией звено метаболического конвейера; ¾ повысить, за счет усиления элементов ферментной защиты клетки, неспецифическую резистентность организма к воздействию неблагоприятных факторов окружающей среды; ¾ усилить и ускорить связывание и выведение ксенобиотиков из организма; 19 ¾ направленно изменить путем воздействия, прежде всего, на ферментные системы метаболизма ксенобиотиков промежуточный обмен отдельных веществ, в частности токсикантов. Иными словами, применения БАД-нутрицевтиков является эффективной формой первичной и вторичной профилактики многих хронических заболеваний [164, 205, 243]. Парафармацевтики – это БАД к пище, применяемые для профилактики, вспомогательной терапии и поддержки в физиологических границах функциональной активности органов и систем. Они как правило, являются минорными компонентами пищи: органические кислоты, флавоноиды, кофеин, биогенные амины, регуляторные ди- и олигопептиды, некоторые олигосахариды и многие другие, так называемые, натурпродукты. Использование парафармацевтиков открывает безопасный немедикаментозный путь регулирования, поддержания функций отдельных органов и систем организма, то есть поддержания гомеостаза организма. Широкое применение БАД парафармацевтического ряда расширяет адаптационные возможности организма человека и животного в условиях постоянно нарастающего техногенного, физического, химического и эмоционального стресса [164, 205, 243]. Пробиотики (эубиотики) представляют собой живые микроорганизмы и (или) их метаболиты, оказывающие нормализующее действие на состав и биологическую активность микрофлоры желудочно-кишечного тракта. Большинство специалистов и исследователей относят к пробиотикам – эубиотикам представителей нормальной микрофлоры кишечника, бифодобактерии и молочнокислые микроорганизмы рода Lactobacillus. Пробиотики оказывают нормализующее воздействие на состав и биологическую активность микрофлоры желудочно-кишечного тракта. Концепция оздоровления организма при помощи кисломолочных продуктов впервые была выдвинута почти сто лет назад выдающимся русским ученым И. И. Мечниковым. По его мнению, молочнокислые микроорганизмы способны проявлять антагонистиче- 20 ские свойства к гнилостной микрофлоре желудочно-кишечного тракта, выводить ее из организма, предупреждая всасывание в кровь токсических метаболитов. Эта концепция послужила толчком для практического применения микроорганизмов, входящих в состав нормальной микрофлоры желудочно-кишечного тракта, с целью коррекции различных нарушений микробиоценоза человека и животных, вызванных чрезмерным применением антибиотиков, ухудшением экологической обстановки, неправильным питанием, стрессом и другими факторами [164, 205, 243]. 1.1.2 Роль биологически активных соединений в коррекции гомеостаза В связи с ухудшением мировой экологической ситуации ведется интенсивный поиск новых биологически активных веществ-антиоксидантов, способных стабилизировать гомеостаз при негативных воздействиях токсических веществ и патологических процессах [13, 46, 49, 88, 99, 211, 212]. Особое внимание привлекают растения, содержащие такие соединения, как флавоноиды, фенилпропаноиды, кумарины и другие биологически активные вещества. Применение растительных флавоноидов улучшает клиническое течение многих экологически обусловленных заболеваний и практически не имеет негативных побочных эффектов. Ряд авторов считает, что флавоноиды и фенилпропаноиды представляют интерес не только как потенциальные антиоксидантные препараты. Они интересны и как биологически активные соединения, которые могут оказывать в комплексах сопутствующий антиоксидантный эффект, способствующий успешной профилактике заболеваний, обусловленных оксидативным стрессом [4,11,31,47,48,60,61,77,89,101,212,120,214,248,282,289]. Фенилпропаноиды – ароматические, в основном фенольные соединения, имеющие в структуре один или несколько С6-С3–фрагментов (фенилпропан). Спектр биологической активности фенилпропаноидов необычайно широк. Практически все 21 изученные фенилпропаноиды обладают антиоксидантной активностью. Являясь донорами водорода, и обладая свойствами стимулировать утилизацию кислорода супероксиддисмутазой и каталазой, они выступают в роли «ловушки свободных радикалов» и предотвращают перекисное окисление липидов в отношении фагоцитарных клеток и окружающих их тканей [4, 10, 31, 89, 94, 114, 211, 131, 283]. Ключевым механизмом обезвреживания различных химических факторов путем гидроксилирования на цитохроме Р-450 и последующих превращений является микросомальная оксигеназная система. Хотя ее функционирование в лимфатической системе в плане интенсивности биохимических процессов происходит не так активно, как в печени, она имеет определенное значение. В результате биохимических процессов генерируется супероксидазный радикал, который затем превращается в перекись водорода. При токсическом типе повреждения клетки накапливают токсические продукты (генерация АФК, перекись водорода, свободные радикалы) в результате взаимодействия химических агентов (ксенобиотиков) с цитохромом Р-450 с высокой вероятностью вызывают повреждение ДНК и запускают механизмы канцерогенеза [47, 60, 63, 96, 104, 110, 123, 138]. Участие фенилпропаноидов как антиоксидантов в этой связи представляется крайне актуальным, фенилпропаноиды повышают неспецифическую сопротивляемость организма и способны минимизировать повреждающее действие перекисных соединений [110, 112, 113, 114, 136]. Эти вещества ингибируют свободные радикалы, тормозят повышение ПОЛ, активируют эндогенные антиоксидантные механизмы (антиоксидантные ферменты), стабилизируют клеточные мембраны, ускоряют процесс рассасывания соединительной ткани, благотворно влияют на генерацию гепатоцитов, нормализуют антиоксидантную, антитоксическую, метаболическую функцию печени [5, 10, 12, 17, 23, 31, 35, 60, 94, 100, 216, 220, 239]. Фенилпропаноиды широко встречаются в растительном мире. Установлено, что биофлавоноиды в организме стимулируют антиоксидантную защиту не только печени, но и миокарда от повреждающего действия перекисного окисления липидов, вызванного стрессом [4, 31, 108, 113, 114]. Гуматы – органические соединения сложной физико-химической структуры, широко распространенные в природе, обладающие большим спектром биологическо- 22 го действия, экологически чистые и безопасные в применении [1, 2, 3, 9, 38, 128, 209]. Для гуматов характерны нестереохимичность состава, нерегулярность строения, гетерогенность структурных элементов и полидисперстность. Структурными единицами солей гуминовых кислот являются ароматические конденсированные системы с боковыми цепями и гетероциклами. Функциональными группами являются карбоксильные, карбонильные, фенольные и спиртовые гидроксиды, хиноидные группировки, метоксилы, амино- и аминдогруппы, моно-, ди-, полисахариды, пептиды, до двадцати аминокислот, витамины, минеральные компоненты [9, 38, 128, 209, 259]. Полиморфность строения обуславливает разнообразие положительных эффектов гуминовых соединений на организм, поскольку, если одни молекулы вещества не могут участвовать в химических и физиологических процессах, то всегда найдутся другие, подходящие для таких процессов по размерам и свойствам [9, 38, 93, 128, 208, 257]. Соли гуминовых кислот благодаря карбоксильным, карбонильным и ароматическим фрагментам вступают в ионные, донорно-акцепторные и гидрофобные взаимодействия, способны связывать различные классы экотоксикантов, образуя комплексы с металлами и соединения с различными классами органических веществ. Тем самым они являются своеобразными посредниками, смягчающими действие токсинов на живые организмы [16, 38, 93, 128, 204, 208, 257]. Несмотря на вариабельность функциональных групп, все гуминовые вещества обладают набором сходных свойств, позволяющих им действовать по общим механизмам, важнейшими из которых являются: активация нуклеинового и белкового обменов; усиление и нормализация энергетического обмена клетки; транспорт электронов в электронных транспортных цепях митохондрий; активация окислительного фосфорилирования; сорбционная способность [38, 128, 204, 208]. Экспериментально установлено, что соли гуминовых кислот способны эффективно интенсифицировать обменные процессы в живом организме. Как показали опыты in vitro на митохондриях печени крысы, в их присутствии ускоряются окислительно-восстановительные процессы, улучшается газообмен в тканях, увеличивается скорость свободно-радикального окисления, тем самым нормализует- 23 ся гомеостаз в системе перекисного окисления липидов – антиоксидантов печени и в организме в целом [93, 204]. 1.1.3 Природные источники биологически активных соединений В настоящее время большое значение имеют исследования, направленные на поиски новых растений и природных минеральных веществ с лекарственными свойствами, в частности, с антиоксидантной активностью [6, 14, 16, 31, 64]. 1.1.3.1 Биомасса сине-зеленой микроводоросли Spirulina platensis Spirulina platensis – многоклеточная нитчатая водоросль, ее нити скручены в правильную спираль и способны к поступательным и вращательным движениям [198, 200]. Пигменты спирулины сосредоточены в хроматоплазме в тилакоидах, в мембранах которых заключен весь содержащийся в клетке хлорофилл и каротиноиды [198, 200]. Характерным признаком внутриклеточной мембранной системы Spirulina platensis является ее ламелларное строение, попарное объединение мембран с образованием тилакоидов, которые расположены преимущественно перпендикулярно клеточной стенке и параллельно клеточным перегородкам [198, 200]. Химический состав биомассы Spirulina platensis. Исследования состава биологически активных соединений Spirulina platensis и их воздействия на организм человека проводились в крупнейших научных центрах и клиниках мира [7, 198, 200]. Spirulina platensis представляет собой уникальный биологический объект благодаря своему необычному химическому составу. 24 Большая часть макро- и микроэлементов, содержащихся в биомассе Spirulina platensis, находится в форме органических соединений (таблица 1). В частности, микроэлементы – катионы d-элементов образуют хелатные комплексы с аминокислотами и полипептидами [98, 200]. Таблица 1 – Минеральный состав высушенной биомассы спирулины Минеральные компоненты Содержание, мг/кг Кальций Фосфор Железо Натрий Хлор Магний Цинк Калий Медь Йод Селен 1180 8280 528 344 4200 1663 3 14353 5 3 2 Белки являются значимой группой биологически активных соединений биомассы Spirulina platensis благодаря высокому содержанию и сбалансированному аминокислотному составу. По данным различных литературных источников, содержание белка в биомассе спирулины составляет 40–70 % [54, 55, 199, 230]. Среди свободных аминокислот в клетках в наибольшем количестве содержатся гистидин, аргинин, аспарагиновая и глутаминоая кислота, α-аланин, лейцин [55, 199, 230]. Сине-зеленая микроводоросль Spirulina platensis, в отличие от других растений, содержит водорастворимые фикобилиновые пигменты – аллофикоцианин и С-фикоцианин (рисунок 1) [102, 202]. 25 Рисунок 1 – Схематичное изображение мономера фикоцианина: справа α-субъединица, слева – β-субъединица Фикоцианин – билипротеид, имеет молекулярную массу 275000 D и содержит в качестве простетической группы фикобилины – тетрапиррольные соединения с открытой цепью в количестве 20–30 на молекулу пигмента. Белковая часть фикоцианина состоит из 17 аминокислот с преобладанием кислых аминокислот; N- и С-концевыми аминокислотами являются соответственно треонин и серии [36, 102, 202]. Углеводы Spirulina platensis представлены, главным образом, сложными полимерами. Полисахариды входят в состав клеток, клеточных стенок и слизистых чехлов, преобладают полисахариды типа гемицеллюлоз и пектиновых веществ (10–16 %) [198, 234]. Полисахариды, выделенные из клеток Spirulina platensis, имеют молекулярную массу 250000–300000 D и содержат рамнозу, фруктозу, галактозу, ксилозу, маннозу, глюкуроновую и галактуроновую кислоты [198, 234]. В биомассе спирулины представлены практически все водо- и жирорастворимые витамины, однако данные по их количественному содержанию довольно противоречивы, что связано с использованием различных методов определения, а также влиянием условий культивирования на биосинтетические процессы [198, 234]. Спирулина богата каротиноидами. Кроме β-каротина в биомассе спирулины идентифицированы и другие виды каротиноидов, среди которых присутствуют кето-каротиноиды: эхиненон и гидроксиэхиненон, характерные для животных организмов [201, 202, 213]. 26 Липидная фракция биомассы Spirulina platensis представлена полярными и нейтральными соединениями. Основными и наиболее биологически значимыми представителями группы нейтральных липидов являются жирные кислоты. В зависимости от условий культивирования общее содержание жирных кислот для спирулины составляет от 2 до 11,4 % [198, 203, 234]. Большой практический интерес представляют полиненасыщенные жирные кислоты: γ-линоленовая, α-линоленовая, линолевая; их количество может достигать 60 % от общего количества жирных кислот [198, 203]. Основные представители фракции полярных липидов биомассы спирулины глицеролипиды: дигалактозилдиацилглицерол, сульфохиновозилдиацилглицерол, фосфатидилглицерол являются структурными компонентами мембранного аппарата и матрикса [198, 203]. Рядом авторов выявлен антиоксидантный эффект спирулины в опытах на крысах, подвергавшихся токсическому действию свинца. Отмечены ингибирование процессов перекисного окисления липидов, защитный эффект в отношении эндогенных антиоксидантов и снижение накопления в мозге животных свинца [137, 198, 271]. Сейчас многие исследователи обратили свое внимание на один из уникальных компонентов химического состава спирулины, с которым связывают многие проявляемые спирулиной фармакологические эффекты – фикоцианин. Было зарегистрировано определение антиоксидантной способности очищенного фикоцианина in vitro [32, 198, 271, 272, 284]. В экспериментах показана способность фикоцианина ингибировать циклооксигеназу [269]. Авторы считают, что с этим связано иммуномодулирующие, противовоспалительное и гепатопротекторное действие спирулины [32, 52, 198, 272, 280, 285]. В опытах in vivo и in vitro на микросомах печени крысы было показано подавление фикоцианином реакции перекисного окисления липидов. За данное свойство отвечает хромофор (билин) [198, 269, 280, 288]. 27 1.1.3.2 Шрот семян винограда Шрот (нем. Schrot – мелкие куски, обрезки), побочный продукт маслоэкстракционного производства, получаемый после извлечения масла из семян винограда экстрагированием органическими растворителями. В результате получается порошок красно-коричневого цвета с характерным запахом и вкусом [85, 217, 242]. Шрот богат биофлавоноидами и другими биологически активными гидрофильными веществами, остающимися в нем после отжима масла, что облегчает и ускоряет их усвоение организмом по сравнению с цельными семенами винограда (таблица 2) [30, 51, 85, 95, 167, 217, 258]. Таблица 2 – Химический состав шрота семян винограда Вещества Содержание веществ, мг% Гиперозид 2,97 Геспередин 0,66 Галловая кислота 67,27 Кофейная кислота 0,34 Лютеолин-7-гликозид 23,23 Рутин 1,23 Шрот виноградных семян также богат минеральными веществами (таблица 3) [163]. Еще в древности знали о целебных свойствах винограда. Об этом свидетельствуют рекомендации древнеримских ученых Гиппократа, Цельсия, Плиния Старшего, Галена, Авиценны [105, 113]. Молодые листья с побегами использовались при различных воспалениях, опухолях и болезнях суставов. Настой листьев, собранных в мае, рекомендовался при гипертонической болезни. 28 Таблица 3 – Микроэлементный состав шрота семян винограда Микроэлементы Содержание на 100 г шрота винограда Калий 255 мг Кальций 30 мг Магний 17 мг Натрий 26 мг Фосфор 22 мг Железо 600 мкг Йод 8 мкг Кобальт 2 мкг Марганец 90 мкг Медь 80 мкг Молибден 13 мкг Фтор 12 мкг Цинк 91 мкг Сок, который выделяется весной из побегов винограда, смешанный с различными смолами, использовался как средство при экземе. Зола виноградных побегов входила в состав многочисленных растворов, которые применялись в лечении ожогов, а также при укусе скорпионов и собак. Масло семян винограда (Ольфациум) использовалось при заболеваниях глаз, нарушении зрения, заболеваниях полости рта, при увеличении миндалин. Со временем возникла отдельная отрасль медицины – ампелотерапия, то есть лечение виноградом. Виноград применяют в качестве средства, которое усиливает обмен веществ и повышает тонус организма больного человека [222]. В настоящее время применение винограда обширно. Виноград и продукты его переработки имеют диетическое значение и применяются при лечении многих болезней и для общего укрепления здоровья [89, 139, 217]. Установлено, что виноград оказывает стимулирующее действие на костный мозг, способствует улучшению функций кроветворных органов [139, 278]. Виноград и виноградный сок рекомендуются при заболеваниях желудочнокишечного тракта, сопровождающихся пониженной секрецией желудочного сока, полезен при острых воспалительных процессах дыхательных путей, при бронхи- 29 альной астме и плеврите. Виноградные ягоды или сок – это эффективное средство лечения многих заболеваний сердечно-сосудистой системы [277, 278]. Белые сорта винограда и красные, в большей степени, благодаря содержанию большого количества антиоксидантов, полифенолов, флавоноидов, нормализуют ритм сердечных сокращений, артериальное давление крови, улучшают ее состав и повышают уровень гемоглобина, а также нормализуют работу печени, способствуют очистке организма от накопившихся токсинов, повышают общий тонус организма и помогают быстро восстанавливаться после перенесенных стрессов и физических нагрузок. К.А. Айтбеков и соавторы показали, что шрот винограда «Баян Ширей» частично ингибируют активацию свободнорадикальных процессов в печени и полностью блокирует их активацию в крови за счет своей антиоксидантной активности [139, 218, 247, 277]. В.И. Гикавый и соавторы [63] выявили антиоксидантную активность масла, полученного из семян винограда, что обусловлено высоким содержанием жирных кислот и токоферолов. В целом влияние шрота семян винограда на организм животных и человека до сих пор изучено недостаточно. 1.1.3.3 Шрот семян кунжута Шрот семян кунжута побочный продукт маслоэкстракционного производства, получаемый после извлечения масла из семян кунжута экстрагированием органическими растворителями. В результате получается порошок белого цвета с характерным запахом и вкусом [147, 242]. В настоящее время полный химический состав шрот семян кунжута не выяснен до конца, однако известно, что он содержит заменимые и незаменимые аминокислоты, клетчатку, поли- и мононенасыщенные жирные кислоты (линолевая, олеиновая, альфа-линоленовая и др.), витамины (витамин Е, каротиноиды, 30 витамин T, витамины группы B, фенольные антиоксиданты (сезамол, сезаминол), антиоксиданты-лигнаны (сезамин и сезамолин), углеводы, пектины, органические кислоты, фитостеролы (в том числе β-систостерин) [6, 29, 113, 147]. Шрот семян кунжута также богат минеральными веществами (таблица 4) [167]. Таблица 4 – Микроэлементный состав шрота семян кунжута Микроэлементы Mg Na Si P К Ca Fe Концентрация, мг % 15,77 3,56 2,25 3,15 18,55 45,23 11,49 По мнению ряда исследователей [242, 243, 247], регулярное употребление в пищу шрота семян кунжута рекомендуется в составе профилактики и комплексного лечения заболеваний желудочно-кишечного тракта. Благодаря высокому содержанию в семени кунжута веществ, оказывающих противовоспалительное и ранозаживляющее действие при эррозивно-язвенных повреждениях слизистых оболочек пищеварительного тракта (витамин Е, каротиноиды, гистидин, сезамин, сезамолин и др.), а также благодаря присутствию в биохимическом составе семян кунжута компонентов, улучшающих пищеварение и перистальтику кишечника (органические кислоты, пектины и грубая клетчатка), и веществ, оказывающих гепатопротекторное действие и препятствующих жировой инфильтрации печени (аминокислоты метионин, треонин, аргинин) шрот полезно вводить в рацион питания при частых и хронических запорах, гастрите и язве желудка и двенадцатиперстной кишки, колите, энтероколите, заболеваниях печени и поджелудочной железы. Шрот семян кунжута обладает противопаразитарным свойством поэтому его рекомендуют регулярно употреблять в пищу в составе профилактики и комплексного лечения гельминтозов [144, 150, 151, 153, 161, 168]. 31 Шрот семян кунжута рекомендовано применять для профилактики заболеваний сердечно-сосудистой системы, так как он богат компонентами, которые обеспечивают полноценное питание сердечной мышцы, регулируют силу и ритм сокращений миокарда, способствуют снижению уровня холестерина в крови и оказывают сосудорасширяющее действие, укрепляют стенки кровеносных сосудов и препятствуют образованию тромбов и атеросклеротических бляшек (витамин Е, магний, калий, марганец, фитостеролы, аргинин и гистидин, сезамин) [149, 168]. Кунжутный шрот богат веществами, способствующими нормализации гормонального баланса в организме женщины (эстрогеноподобные фитостеролы и сезамин, магний, витамин B6, цинк и др.), усиливающими лактацию (витамин Е), а также содержит в своем составе компоненты, оказывающие противовоспалительное действие при заболеваниях женской половой сферы (заболевания молочных желез, яичников, матки и др.). Именно поэтому употребление в пищу шрота кунжута можно рекомендовать при различных инфекционно-воспалительных гинекологических заболеваниях, при беременности и кормлении грудью. Также употребление в пищу шрота кунжута приносит ощутимую пользу женщинам, регулярно испытывающим болезненные ощущения и психоэмоциональный дискомфорт в предменструальный или климактерический период [179, 182]. В кунжутном шроте высока концентрация веществ, оказывающих благотворное влияние на функциональное состояние предстательной железы, улучшающих эрекцию, нормализующих процесс выработки и качество спермы (витамин Е, цинк, марганец, селен, β-ситостерин) [179, 182, 185]. Богатый веществами, необходимыми для полноценного формирования костной и хрящевой ткани (кальций, фосфор, магний, предотвращающие резорбцию костей эстрогеноподобные фитостеролы, способствующие естественному синтезу коллагена аминокислоты лейцин, метионин, фенилаланин, лизин, треонин) шрот кунжута полезен при профилактике и лечении таких заболеваний, как остепороз, артрит, артроз, подагра, остеохондроз и других заболеваниях костей, суставов и позвоночника [150, 152, 156, 187]. 32 1.1.3.4 Гуминовые вещества. Гумат калия Гуминовые вещества – это основная органическая составляющая почвы, воды, а также твердых горючих ископаемых. Гуминовые вещества образуются при разложении растительных и животных остатков под действием микроорганизмов и абиотических факторов среды. В.И. Вернадский называл гумус продуктом коэволюции живого и неживого планетарного вещества. Образование гуминовых веществ, или гумификация – это второй по масштабности процесс превращения органического вещества после фотосинтеза. В отличие от синтеза в живом организме, образование гуминовых веществ не направляется генетическим кодом, а идет по принципу естественного отбора – остаются самые устойчивые к биоразложению структуры. В результате получается стохастическая, вероятностная смесь молекул, в которой ни одно из соединений не тождественно другому. Таким образом, гуминовые вещества – это очень сложная смесь природных соединений, не существующая в живых организмах. Гуминовые препараты – балластные и безбалластные препараты нового поколения, содержащие в качестве основного действующего вещества природный гумат с высокой биологической активностью, а также другие биологически активные вещества и элементы питания в хелатной форме [1, 2, 9, 38, 128, 209, 279, 281]. Гуминовые кислоты добывают из различных природных объектов, в частности из бурого угля, торфа, сапропеля и горючих сланцев. Для наших исследований наибольший интерес представляет соль гуминовых кислот – гумат калия, полученная из бурых углей. Гуминовые кислоты выделяют из образцов бурого угля традиционным способом водно-щелочной экстракции с последующим их осаждением в кислой среде [9, 128, 209]. Гумат калия в настоящее время используется в качестве кормовых добавок и представляют собой мелкодисперсный порошок темно-коричневого цвета с массовой долей влаги не более 12 %, золы не более 20 %, содержанием гумино- 33 вых кислот не более 70 %, полностью растворим в воде, без запаха, вкуса, не гигроскопичен, нелетуч, стойкий, не слеживается, не токсичен для животных и птицы, обладает выраженным антитоксичным действием. Гумат в сухом виде может храниться 3–5 лет [9, 208, 209, 225, 273]. Гуматы широко применяются в животноводстве, ветеринарии. Биологическая активность гуминовых веществ связана с влиянием их на окислительновосстановительные процессы и этот эффект объясняется наличием в составе гуминовых кислот химических группировок (полифенолы, оксихионы, хиноны), которые выполняют роль переносчиков кислорода, что стабилизирует в живом организме внутриклеточное дыхание. Преимуществом гуминовых препаратов, в отличии от классических фитоадаптогенов (женьшеня, элеутерококка, родиолы розовой), является возможность их производства промышленным путем из широко доступного сырья [38, 53, 116, 128, 204, 228, 232, 262, 268, 273]. Исследования по применению гуминовых веществ животным начались в 1990 году руководством профессора Бузлама В.С. [38, 254]. Результаты показали, что применение препарата на основе гумата цыплятам-бройлерам в дозе 100–200 мг/кг массы тела оказывает положительное влияние на их рост и развитие. В период скармливания препарата цыплята опытных групп лучше развивались, среднесуточные привесы и средний вес тушки у них были выше, чем у цыплят контрольной группы [38, 226, 229]. Установлено, что включение гумата в рационы цыплятам-бройлерам с 10–20 дневного возраста из расчета 250 мг/кг корма в течение 21 дня повышает живую массу на 5–10 %, сохранность птицы на 3–5 %, нормализует показатели минерального обмена, способствуя перераспределению жизненно важных макро- и микроэлементов в крови и печени цыплят [118, 227]. Результаты морфологических и биохимических исследований крови цыплят показали, что применение кормовой добавки на основе гуматов калия и натрия не провоцирует нарушений обменных процессов и дисфункций внутренних органов, гомеостаза, не вызывает изменений в биохимической картине крови, характерных для токсигенных процессов [53, 118]. 34 Применение гуминовых препаратов обеспечивает нормализацию белкового обмена, что проявляется тенденцией к повышению содержания общего белка у кур на 5,5 %, приводит к повышению содержания γ-глобулинов, характеризуя иммуностимулирующую направленность действия, способствует нормализации функции печени, снижая признаки цитолиза гепатоцитов и многое другое [116, 118]. 1.2 КОНЦЕПЦИЯ ГОМЕСТАЗА Базовое определение гомеостаза «как относительное динамическое постоянство состава и свойств внутренней среды и устойчивость основных физиологических функций организма человека, животных и растений» [6], открывает одновременно несколько концепций, которые формируются в зависимости от уровня организации изучаемой системы: молекулярно-клеточный; тканевый и органный; организменный; надорганизменный. Понятие гомеостаза является основным для всех естественных наук. Как любой термин с глубоким смыслом, понятие гомеостаз можно трактовать в несколько разных ключах. Например, рассматривать его согласно «уменьшительной» тенденции. «Уменьшительная» тенденция ориентируется на абсолютизации понятия «постоянство» в этом определении. Только «абсолютное постоянство» каких либо переменных во внутренней среде, имеет право именоваться гомеостазом. В идеале это неизменное равенство каждого из показателей некоему заданному значению. Подобная концепция восходит еще к Норберту Винеру и в самом простом виде звучит так: постоянство какой-либо переменной во внутренней среде организма возможно только в том случае, если имеется специальная система регулирования, целью которой является поддержание постоянства этой переменной на уровне заданного значения выходного сигнала [43]. Неадекватность этой концепции в столь простой трактовке подверглась критике уже в работах Л. фон Берта- 35 ланфи [27, 28], но ее рецидивы время от времени можно встретить на страницах научных публикаций. Если обнаруживается «несовершенство» внутренней среды, несоответствие параметров исходным у приверженцев этого подхода исчезает точка опоры. Максимализм в «уменьшительной» трактовке гомеостаза выражается в утверждении: гомеостаза нет вообще. «Уменьшительная» трактовка имела среди своих сторонников и больших ученых. Например, известный советский физиолог и медик И. В. Давыдовский образно говорил, что гомеостаз возникает только при затухании, деградации жизненных явлений [79]. Были и другие достаточно серьезные попытки «отменить» концепцию гомеостаза, в частности идея замены ее «гомеокинезом», принадлежавшая американскому физиологу А. С. Ибераллу [90]. В основе «расширительной» тенденции лежат возможности, заложенные в самой идее гомеостаза, и привлекательность самого термина для описания все более широкого круга свойств биосистем. При таком подходе под понятие гомеостаза часто попадают многие другие свойства, связанные с их самосохранением: устойчивость (в том числе и простая устойчивость, согласно А.М. Ляпунову) [67, 91, 92, 121], надежность, целесообразность и тому подобное. В работах по физиологии в этой связи часто говорят и о «постоянстве функции», причем это постоянство ставится в параллель с постоянством внутренней среды. Подобное раскрытие понятия «гомеостаз» нельзя признать обоснованным, так как основной линией развития концепции гомеостаза остается именно постоянство состояния, а не процессов. Этому есть две причины. Во-первых, сам термин «гомеостаз» «по определению» относится не к процессам, а к состояниям («стазис», а не «рео»). Во-вторых, и это самое главное, функция биосистем вовсе непостоянна. Чем выше уровень организации биосистем, тем разнообразнее процессы ее жизнедеятельности, тем сложнее, изменчивее и гибче ее функционирование. Система активно реагирует на изменения среды, избирательно меняет свои функции, заменяя одни другими, варьируя и само поведение. На «фронтах» внешней жизни затишье – исключение, а не правило [67]. 36 В случае обсуждения постоянства функций системы, следует иметь в виду постоянство круга этих функций, стабильные возможности системы, сохранение одинаковых реакций на одинаковые стимулы. Попытки присоединения разнообразных жизненных процессов в круг «гомеостатируемых» явлений, связанные с заменой термина «гомеостаз» более объемным понятием – «гомеорез», успехом не увенчались [244]. Термин этот предлагался для описания факта однонаправленности и независимости от конкретных условий процессов запрограммированного развития биосистем. И хотя все пути развития ведут к достижению запрограммированного конечного состояния, выбор конкретного пути все же во многом определяется тем текущим состоянием, которое возникает в конкретных и вариабельных условиях среды. Гарантом выполнения жизненных процессов является именно гомеостаз – постоянство внутренней среды – вместе с постоянством структуры организма и включаемых механизмов управления во всем их непостоянстве и многообразии [88]. Есть еще одна линия в «расширительной» трактовке гомеостаза, которая связана с интерпретацией понятия «состояние системы». В начальном определении У. Б. Кеннона состояние организма понималось как набор физических и химических констант для межклеточной жидкости. Их постоянство обеспечивает координированные физиологические процессы, протекающие в различных тканях и органах, работающих совместно. Структура клеточных образований, тканей этих систем и органов, их внутреннее устройство выступало у У.Б. Кеннона в качестве стабильных и постоянно действующих факторов, механизмов поддержания гомеостаза [275]. В основе расширительной линии лежит тенденция включения в число «гомеостатируемых» переменных различных характеристик самих организменных структур. Такое расширение концепции гомеостаза происходит во многом неосознанно и стихийно. С принципиальной точки зрения такое расширение границ применимости концепции гомеостаза никаких возражений вызывать не может. Так как, разница между переменными, относящимися к структуре системы и к ее функции, методологически субъективна и определяется только точкой зрения исследователя. Организа- 37 ция живого есть единство структуры как медленного процесса большой продолжительности и функции быстрых процессов короткой продолжительности [223]. На таких позициях базируется ДНК-гомеостаз [42]. Принимая во внимание разноуровневую организацию жизни, выделяют двойственность явления гомеостаза – это набор средств и способов поддержания постоянства конкретного организма, и за счет увеличения выживаемости и развития вида в целом формирование гомеостаза биосистемы следующего, более высокого уровня. Это свойство гомеостаза получило в свое время развитие в работах В. А. Шидловского [250], где оно рассматривалось в терминах мультипараметрического поддержания гомеостаза. Таким образом, складывается «пирамида гомеостаза», состоящая от постоянства клеточного состава, до систем органов или биосистем. В этом случае на каждом уровне смысл и понятие гомеостаза становится вариабельным в определенных пределах. В итоге жизнь клетки может быть обеспечена внутриклеточными механизмами только в очень узком (по сравнению с более высокими уровнями организации) диапазоне – в жидкостной среде, содержащей в достатке питательные вещества и кислород при нужных температурах и рН. Суть организменных регуляции состоит в том, что следующий уровень организации жизни дает своим элементарным составляющим, клеткам, нужную им жидкостную среду. Но на организменном уровне постоянство внутренней среды возможно лишь при условии постоянного притока извне веществ для работы «химической машины» организма, непрерывно расходующей топливо, окислитель и сырье для своих производств. Вторым условием постоянства является непрерывный отвод отходов производства. Эти задачи решает физиологический комплекс систем организма. Следовательно анализ концепции гомеостаза на организменном уровне всегда идет параллельно с анализом свойств биосистем как открытых систем. Физиологические регуляции в норме отлично справляются со своими функциями. Если в физиологическом комплексе возникают неполадки, их можно скорректировать инженерно-физиологическими методами [135, 260, 261]. В отличие от одноклеточных, живущих в гомогенной среде, животные организмы часто действуют в сложной неоднородной среде, где пища и вода распределены неравномерно 38 и непредсказуемо. Задача, состоящая в непрерывной подаче на вход физиологических механизмов нужных веществ – пищи и воды, оказывается в таких условиях намного труднее. Живые системы для ее решения пошли по пути создания сложных информационно-кибернетических систем обеспечения жизнедеятельности. Структура животного организма сформировалась как единство метаболической части – биохимической машины с физиологическим оснащением и информационно-кибернетической части, позволяющей физиологическим процессам работать во все более сложных условиях окружения. В этом смысле можно говорить и об информационно-кибернетических механизмах гомеостаза в организме. Расширение информационно-кибернетических механизмов освоения окружающей среды и их совершенствование привело к развитию экзоэволюционных процессов [126]. Вся специфика гомеостатических процессов на надорганизменном уровне связана с расширением круга внешних факторов, характеризующих окружающую среду. На этом уровне гомеостаз должен рассматриваться по отношению к действию таких необычных возмущающих факторов, как наличие микро- или макрохищников или даже факторов социальной опасности [67]. История развития понятия гомеостаза уже достаточно продолжительна. Первоначально понятие гомеостаза ввел в науку, в 1857 г. французский физиолог Клод Бернар, подчеркнувший что «постоянство внутренней среды является обязательным условием свободной жизни». Он выделял особую значимость возможности организма, не взирая на условия окружающей среды, поддерживать постоянство внутренней. Указал, что саморегуляция затрагивает все уровни и действует не только на уровне клеток, но и на уровне органов. Основное заключение К. Бернара сводится к тому, что постоянство внутренней среды является условием свободной и независимой жизни. Среди главных условий для жизни К. Бернар выделял следующие: наличие воды, кислорода, соответствующей температуры, а также химических веществ, необходимых для построения и восполнения постоянно разрушающихся элементов организма. Под влиянием изменений внешних условий постоянство внутрен- 39 ней среды организма обеспечивается уравновешиванием и компенсацией при действии сложных физиологических механизмов, управление которыми осуществляется нервной и гормональной системами. При повреждениях нервной системы гармоническое поддержание условий внутренней жизни может быть нарушено. Важным выводом в учении К. Бернара является и то, что питание есть двухактный процесс: накопление резервов и расход резервов. К. Бернар считал это очень важным в поддержании свободной и независимой жизни [25]. Согласно К. Бернару, в латентной жизни организм целиком подчинен влиянию внешней среды; в осциллирующей – периодически зависит от окружающей среды, а в постоянной – организм свободен и его проявления образуются и направляются внутренними жизненными процессами. При этом К. Бернар подчеркивал, что независимость проявлений внутренней жизни является в значительной степени иллюзорной, поскольку в механизмах постоянной или свободной жизни взаимоотношения внутренней и внешней среды наиболее тесные и наиболее очевидные. Это кардинальное положение К. Бернара было в дальнейшем подтверждено в многочисленных работах по гомеостазу. В широко известной книге Дж. Баркрофта «Основные черты архитектуры физиологических функций» [80] первые три главы имеют название «Постоянство внутренней среды есть условие свободной жизни», где, исходя из концепции К. Бернара, на примерах различных физиологических функций – поддержания постоянства концентрации водородных ионов, дыхания, температуры, функции ферментов, сокращения сердца, уровня сахара в крови – рассматриваются принципы на которых построены физиологические процессы. Указания на значение постоянства внутренней среды для сохранения нормальной жизнедеятельности организма имеются в работах немецкого физиолога Э. Пфлюгера, бельгийского – Б. Фридерика, французского Ш. Рише [97, 210]. В этот же период протекала научная деятельность великого русского физиолога И. М. Сеченова. В лекции «О значении так называемых растительных актов в животной жизни» И. М. Сеченов [224] писал: «...совокупное действие всех растительных актов в организме дает в результате для зрелого человека количествен- 40 ный и качественный status quo всех частей его тела: для ребенка – пребывание массы при неизменности качества, для старости – уменьшение массы тела с той же неизменностью его физиологических свойств». При этом И. М. Сеченов проводит аналогию саморегуляции в живых системах с автоматическим регулятором в паровиках Д. Уатта. Он пишет: «Чувствование соответствует сигнальной части регулятора. Приходя в деятельность под влиянием измененных условий в состоянии или ходе той или иной части животной машины, сигнальный снаряд, в свою очередь, приводит в деятельность приспособление (в виде движения или отделения сока), направленное к устранению ненормальности. Таких регуляторов в теле множество, и деятельность их, в сущности, направлена к тому, чтобы сохранять анатомическую и физиологическую целостность тела». Таким образом, И. М. Сеченов одним из первых внес существенный вклад в развитие идей К. Бернара. Американский физиолог У. Кеннон в 1932 году в своей книге «The Wisdom of the Body» («Мудрость тела») развил идеи К. Бернара и предложил термин «гомеостаз» использовать как название для «координированных физиологических процессов, которые поддерживают большинство устойчивых состояний организма». С точки зрения эволюционного учения гомеостаз – это наследственно закрепленные адаптации организма к обычным условиям окружающей среды. Любые адаптации к изменяющимся условиям внешней среды опираются на внутренние механизмы поддержания гомеостаза. Английским ученым У. Эшби была построена техническая модель, названная им гомеостатом, обладающая способностью к адаптации [263, 276]. Утверждение о том, что организм обладает большим «запасом прочности» принадлежит У. Кеннону. В физиологии известно, что организм устроен не по принципам ограниченного лимита или строжайшей экономии. Возможности функции многих органов в несколько раз превышают потребности организма для нормальной деятельности. «Запас прочности» в организме достигается различными путями, усиление функции какого-либо органа может происходить не только за счет резервных сил, но и путем снижения обмена веществ, включения других систем организма, изменения структуры и так далее. Принцип анатомической парности мно- 41 гих органов значительно повышает надежность их функции (почки, легкие, надпочечники и др.). Соответственно этому действует принцип дублирования функций. Так, расщепление белков осуществляется ферментами, как желудочного сока, так и поджелудочной железы; расщепление углеводов – ферментами слюны и сока поджелудочной железы и так далее. В соответствии с утверждениями К. Бернара и У. Кеннона, основную часть внутренней среды организма составляют кровь, лимфа и межтканевая жидкость [25, 26, 264, 275]. Как известно, кровь не вступает в непосредственное соприкосновение с клетками тканей. Между кровью и тканями находятся так называемые гистогематические барьеры, учение о которых развито школой физиологов под руководством академика Л. С. Штерн. Гистогематические барьеры состоят из эндотелия капилляров, базальной мембраны, соединительной ткани, клеточных липопротеидных мембран. Избирательная проницаемость барьеров способствует сохранению гомеостаза и известной специфики внутренней среды, необходимой для нормальной функции каждого органа или ткани. Согласно К. Бернару [25, 26], основные компоненты жидкой среды организма, которые должны постоянно поддерживаться в определенных пределах, – это вода, кислород, питательные вещества, а также температура среды. У. Кеннон расширил этот список и привел свою классификацию: материалы, обеспечивающие клеточные потребности: компоненты для образования энергии, роста и восстановления – глюкоза, белки, жиры; вода; ионы Na+, Са2+ и других элементов; кислород; гормоны [275]. Окружающие факторы, влияющие на клеточную активность: осмотическое давление; температура; концентрация водородных ионов. У. Кеннон считал, что любая классификация условна и будет неполной, так как всегда появляются новые взгляды и новые данные. Согласно П.Д. Горизонтову [65], к основным компонентам гомеостаза добавлены также механизмы, обеспечивающие структурное и функциональное 42 единство организма, как наследственность; иммунобиологическая реактивность; регенерация и репарация. В настоящее время общепризнанно, что наследственная индивидуальность организма (генотип) представляет основу биологических свойств живого. Иммунобиологическая реактивность – это один из самых действенных и в то же время лабильных механизмов гомеостаза, позволяющий узнавать «чужое» и «бороться» с ним. Этими процессами обеспечиваются определенная стерильность живых существ и генетическое постоянство клеток. Так же в условиях нормы или при действии различных вредоносных факторов в организме происходит гибель паренхиматозных и соединительно-тканных элементов, что, в свою очередь, обусловливает необходимость восстановления клеточного состава. Гормональные влияния также участвуют в обеспечении адаптации к воздействиям внешней среды и, в свою очередь, находятся под контролем нервной системы. Велика роль гипоталамуса в эндокринной регуляции. При этом регулирование метаболических функций эндокринной системой может осуществляться путем каскадного, поэтапного усиления, что позволяет достичь большего конечного эффекта с помощью ничтожных количеств гормона. Согласно учению И. П. Павлова о нервизме, низшие отделы нервной системы регулируют в основном внутреннюю среду и обычные вегетативные функции организма, в то время как адаптация к изменениям свойств окружающей среды осуществляется центральной нервной системой, в которой особая роль принадлежит головному мозгу. И. П. Павлову принадлежат слова о том, что «...тончайшее и точнейшее уравновешивание организма со средой падает на долю больших полушарий», которые путем образования условных рефлексов осуществляют «...высшее приспособление животных, высшее уравновешивание с окружающей средой...». Таким образом, большие полушария – «...орган животного организма, который специализирован на то, чтобы постоянно осуществлять все более совершенное уравновешивание организма с внешней средой...» [65]. Это, конечно, не означает того, 43 что кора головного мозга постоянно вмешивается во все процессы организма. И. П. Павлов показал, что в нервной системе существует известная соподчиненность (иерархия) в механизмах регуляции постоянства внутренней среды организма [140, 141]. Таким образом, взгляды П. П. Павлова были также близки идеям К. Бернара, И. М. Сеченова и позднее У. Кеннона. В 1906 г. английским ученым Ч. С. Шеррингтоном были опубликованы представления об интегративных механизмах регуляции организма и приспособлении к окружающей среде, которые стали классическими в физиологии и оказали существенное влияние на понятие устойчивости организма: «Если живой организм представлять себе как некую совокупность, обусловленную проявлением всех составляющих ее частей, то любая часть организма – интегрирующая» [249]. К проблеме устойчивости организмов была обращена работа другого классика физиологической науки – А. А. Ухтомского. В своей работе, посвященной физиологической лабильности и равновесию, он дает анализ концепции равновесия в биологических науках и той большой роли, которую она сыграла в философских построениях древних мыслителей и мыслителей эпохи Возрождения. Равновесие (устойчивость) рассматривается А. А. Ухтомским [245] в самом широком смысле. Так, он пишет: «Что касается динамического равновесия, стационарного процесса как steady state и производных из них колебательных явлений нелинейного типа, то их с одинаковым правом можно находить в возбуждении нерва или мышцы и в конкуренции двух видов на одну и ту же пищу при встречном влиянии паразитов. Повсюду, где есть все время, нарушающееся и все время восстанавливающееся, длительно поддерживаемое равновесно, есть и почва для колебательных явлений периодического типа (запаздывание компонентов, инерция их)». Анализ физиологических механизмов регуляции невозможен без кибернетики и теории автоматического регулирования. При этом любая система должна иметь аппарат связи для передачи информации от управляющего устройства к объекту управления. 44 Имея в виду человека и его высшую нервную деятельность, И. П. Павлов писал, что эта система «единственная по высочайшему саморегулированию» и что она «сама себя поддерживающая, восстанавливающая и далее совершенствующая». Говоря языком кибернетики, живые системы – это сложные вероятностные системы; поведение их может быть предсказано только с известным приближением. Исследование вероятностных процессов в гомеостатических системах – одно из самых сложных направлений современной биокибернетики. Применение методов математической статистики, столь распространенных сегодня, дает лишь оценки действия механизмов гомеостаза и само по себе не позволяет проникнуть в их сущность. Динамические же модели стохастических систем весьма сложны. Живой организм представляет собой пример ультрастабильной системы, которая осуществляет активный поиск наиболее оптимального и наиболее устойчивого состояния, что выражается в адаптации, то есть в удержании переменных показателей организма в физиологических пределах, несмотря на изменения условий существования [65]. Ультрастабильность биологических и технических систем объясняется избыточностью системы. Это означает, что один и тот же управляемый процесс может регулироваться несколькими управляющими системами благодаря наличию связей между ними или возникновению цепной реакция. Включение различных уровней регуляции во многом зависит от интенсивности возмущающего воздействия и от степени отклонения физиологических параметров. Так, обычные изменения внутренней среды организма компенсируются местной ауторегуляцией. Воздействия, превышающие норму, требуют привлечения корригирующих влияний более высокого уровня, и, наконец, чрезвычайные раздражители и экстремальные воздействия вызывают в организме нейроэндокринную стресс-реакцию с мобилизацией всех функциональных систем [65]. Гомеостаз поддерживается на разных системных уровнях. На генетическом уровне «смысл существования» систем репарации состоит в поддержании целостности генетических структур, в репарации «ошибок» ДНК, возникающих в процессе редупликации и транскрипции [86, 107]. 45 Таким образом, прежде всего на основании радиобиологических исследований ДНК было сформулировано положение о том, что генетическая стабильность является динамической, что гены сохраняют целостность благодаря не только стабильности химических связей, ни и «благодаря волшебной палочке квантовой химии», как выразился Э. Шредингер [256]. Это было одним из основных направлений исследований по работе систем репарации ДНК. На тканевом и органогенном уровне – цитоплазматический контроль, как показал Дж. Гердон [62], имеет первостепенное значение в развитии, а неравномерное распределение материала в яйцеклетке создает основу для возникновения различий между клетками. Такое распределение материала в яйце в виде конкретных субклеточных структур (ооплазматическая сегрегация – основа последующей эмбриональной индукции) появляется благодаря внеклеточным (для ооцита) факторам – ультраструктурам питающих клеток. Имеются данные, в том числе и исследования Дж. Гердона по пересадке ядер в энуклеированное яйцо у амфибий, в пользу зависимости активности определенного набора генов (экспрессии их) от состава внутриклеточной среды. Такие опыты подтверждают, что в генотипе в принципе не может быть записана программа пространственно-временного развития эмбриональных процессов и становления организма. Поэтому и принципы эмбрионального развития должны строиться на непрерывной взаимоиндукции разнородных клеточных популяций [56]. Явлению эмбриональной индукции служит надежным тому подтверждением. Таким образом, становление организма, а тем более формирование и поддержание подвижной устойчивости цитогомеостаза в процессе развития многоклеточного организма определяется регуляционным взаимодействием разнородных клеточных популяций. До сих пор проблема регуляции межклеточных взаимодействий как основы подвижной устойчивости цитогомеостаза рассматривается исключительно в рамках так называемого химического детерминизма. Идеология межклеточных взаимодействий в общем виде сводится к тому, что средством передачи информации от клетки к клетке служат выделяемые ими особые вещества, обнаруживаемые в аутолизирующихся тканях, тканевых мацератах, гомогенатах, лизатах и экстрак- 46 тах [119]. Однако при этом не уточняется: носит такой обмен информацией регуляционный характер или нет. Иными словами, являются ли эти вещества носителями биологически ценной информации, играющими роль в приспособительных клеточных реакциях цитогомеостаза напрямую, или они вызывают лишь неспецифический ответ, выступая в роли переносчиков сигналов или модификаторов. Обобщая литературные данные и собственные результаты по воздействию разнообразных биологически активных веществ, таких как ДНК, РНК, нуклеопротеиды, гликопротеиды, цитотоксические сыворотки, ферментные белки, гомогенаты, лизаты, на клетки как in vivo, так и in vitro, отметим, что эффективность применения сравнительно малых доз большинства биологически активных соединений, как и обратный эффект больших доз этих веществ, являются общим феноменом. Зачастую разнообразные БАВ, повреждая клеточные структуры, воздействуют на регуляцию ростовых и восстановительных процессов в организме. Естественно, при этом ткане- и органоспецифическая стимуляция роста и регенерации органа, вызванная использованием препаратов биологически активных соединений (извлеченных из соответствующей ткани или органа), моделирует способность продуктов, выделяемых поврежденными клетками, косвенно влиять на эту стимуляцию в многоклеточном организме. В целом здесь важно подчеркнуть следующие выявленные закономерности. Воздействие всего спектра БАВ, как и различных физических агентов, моделирует (в той или иной степени адекватности): 1) повреждение клеток в организме, возникающее в ходе его жизнедеятельности; 2) эффект вводимой дозы БАВ или воздействующей дозы физического агента; 3) воздействие БАВ по принципу: «чужое + свое». Рассматривая влияние уровней элементности (физические агенты) или вещественности (химическая индивидуальность) на межклеточные взаимодействия, можно осветить только одну сторону общей картины, а именно повреждение и даже разрушение клеток и (или) их внутренних ультраструктур, с выходом субклеточных образований в окружающую среду. 47 На энергетическом уровне – термин «гомеостаз» предложен У. Кенноном для организма, но не для клетки, поэтому Л. Гейльбрун [59], доказывая способность уже клетки поддерживать свое постоянство, использовал термин «биостаз», сводя его сущность к тому, что сама природа ответной реакции (или ряда реакций) тормозит избыточную реакцию. Для понимания природы такого поведения клетки важен биоэнергетический принцип регуляции метаболизма, согласно которому уменьшение энергетического заряда аденилатов стимулирует катаболические реакции, ведущие к повышению энергообразования, а его увеличение активирует анаболизм и энергозатраты. В клетке, таким образом, автоматически поддерживается определенное соотношение АТФ, АДФ и АМФ, а оптимуму любой реакции нагрузки соответствует стационарное состояние адениловой системы [68, 81, 196]. Энергетический механизм гомеостаза клетки включает различные метаболические приспособления к разным по силе, скорости и длительности, функциональным нагрузкам: включение метаболических шунтов и альтернативных путей обмена, смена субстратов и изменение соотношения дыхания и гликолиза. На клеточном уровне – изменение степени синхронизации дыхательной активности митохондрий по их ультраструктуре и цитохромоксидазной активности, изменение ритмики агрегации митохоидрий и колебаний напряжения кислорода над поверхностью клетки. В тканях такой способ временного согласования темпа дыхания с ритмикой кровотока может иметь ведущее значение. Такая же система разных по скорости и продолжительности адаптаций характерна и для структурных основ гомеостаза клетки, связанных с ее пластическим обменом и внутриклеточной регенерацией. Энергетический, пластический и функциональный (ионный) гомеостаз оказываются тесно связанными в клетке как целостной интегральной системе. Отсюда возникает вопрос о природе сопряжения и координации отдельных гомеостатических процессов клетки в целостной ее реакции на внешние воздействия [197, 207]. Дж. Баркрофт [80] отмечал, что приспособление к работе является интеграцией большого числа факторов, ни один из которых в отдельности не может настолько измениться, чтобы стать вполне эффективным. П. П. Загоскиным [1982] предложена гипотеза кальцийэнергетического сопряжения и ко- 48 ординации всех внутриклеточных процессов. Важно, что любой внутриклеточный процесс – ионный транспорт, биосинтез белка, секреция, активность генома и другие – тесно связан с энергозависимой аккумуляцией кальция в соответствующих структурах и, следовательно, кооперативно взаимодействует со всеми другими процессами в клетке через общий фактор – концентрацию кальция в цитозоле – и осуществляет распределение потоков энергии между всеми энергопотребляющими внутриклеточными процессами в соответствии с их энергоемкостью и скоростью [265, 266, 267, 270, 274]. Важнейшее следствие такой пространственно-временной организации внутриклеточных процессов – их координация в направлении минимизации энергетического дисбаланса в клетке в целом. По Э.С. Бауэру, формирование структурно-функционального гомеостаза представляет собой не что иное, как способ сохранения «неустойчивого равновесия» клеточной системы в новых условиях [20, 21, 219]. Поскольку из всех видов молекул живого вещества именно белковые молекулы (протеиды) находятся в неравновесном состоянии и способны поддерживать его своими ненасыщенными валентностями и деформациями структуры, можно считать, что в основе тканевой устойчивости лежит прежде всего адаптация (конформационная перестройка) клеточных макромолекул (некробиоз – по Р. Вирхову, паранекроз или обратимая альтерация – по Д. Н. Насонову и В. Я. Александрову). Стратегия этой адаптации универсальна для разных тканей и направлена на изменение функции макромолекул (изменение скорости метаболизма) и (или) на увеличение их количества (синтез так называемых «стрессовых белков» [37]. На уровне систем организма – жизнь организма, на биохимическом уровне представляющая собой сложную совокупность «технологических» процессов, своего рода биохимическую производственную машину, которая требует прежде всего непрерывного поступления топлива и окислителя. В этом отношении биохимическая машина организма не отличается от любой другой химической машины. Топливо – прежде всего углеводы, а также жиры и другие вещества – поступает в организм через систему пищеварения, «технология» которой становится 49 все более понятной [57, 68]. Окислитель – кислород – подается в организм системными механизмами дыхания. На уровне нервной системы – представление о гомеостазе разрабатывала Л. С. Штерн. Она показала существование гистогематических барьеров – физиологических преград, разделяющих кровь и ткани [252, 253]. Гистогематический, или сосудисто-тканевый, барьер – это, в сущности, физиологический механизм, определяющий относительное постоянство состава и свойств собственной среды органа и клетки. Гистогематические барьеры имеются почти во всех органах и имеют соответствующие названия: гематоэнцефалический, гематоофтальмический, гематолабиринтный, гематоликворный, гематолимфатический, гематопульмональный и гематоплевральный, гематоренальный, а также барьер «кровь–половые железы» (например, гематотестикулярный) и др. Нервная компонента гомеостатической регуляции проявляется на уровне любой физиологической системы внутренней сферы, осуществляет управление состоянием органов, входящих в систему, и регуляцию потоков веществ в жидких средах организма на уровне ЦНС. С помощью нервного компонента на органы и системы внутренней сферы передаются установки по основным показателям жизнедеятельности, а сами установки, в свою очередь, подвергаются коррекции и изменению через различные контуры обратной связи ЦНС [117, 122]. Применительно к нервной системе предлагается ввести понятие о нервно-психическом гомеостазе как основе уравновешивания организма со средой [69, 70, 75], то есть, по нашему мнению, понятие системно-средового гомеостаза. Таким образом, с одной стороны все уровни нервной системы являются объектом исследования с целью выявления гомеостатических свойств, а с другой – нервная система является одним из главных механизмов параметрического гомеостаза физиологических систем внутренней среды. Энтропийно-организационный механизм гомеостаза проявляется в том, что гомеостатический детерминизм наличия системной функции обеспечивается случайной организацией структуры (онтогенез) и вероятностной структурно- 50 функциональной активацией элементов системы, зависящей от внутреннего состояния элементов и набора воздействий среды [15, 33, 117]. Системно-иерархический гомеостаз нервной системы – это неизбежное и постоянное усложнение системных функций при восхождении по уровням иерархии. Система каждого уровня иерархии ЦНС за счет действия механизмов функционального гомеостаза обладает вполне определенной функцией. Совокупность систем нижележащего уровня иерархии, объединяясь на основе действия энтропийно-организационных механизмов в систему вышележащего уровня, образует качественно новую систему, характеризующуюся отличной системной функцией. Появление такой функции является закономерным детерминированным выражением системно-иерархического гомеостаза. Речь идет о неизбежности появления нового качества при восхождении по уровням иерархии ЦНС. Применение этой теории к эволюции функций дало возможность П.К. Анохину сформулировать понятие системогенеза как общей закономерности эволюционного процесса. Учение о гомеостазах и гомеостатах, берущее начало от К. Бернара, У. Кеннона и У. Эшби, прошло несколько этапов развития, подъемов и спадов. Можно выделить следующие направления исследований по гомеостазу: физиологические и морфологические (Г. Н. Кассиль, В. М. Дильман, Д.С. Саркисов); модельные, с использованием классических методов теории автоматического регулирования (В. Н. Новосельцев, А. Б. Лищук и др.); технические, с проведением кибернетических аналогий между живой системой и сложным производством (С. Бир и др.). При этом существует несколько моментов, определяющих новую ступень развития: – гомеостаз проявляется не только в живых организмах, но и в природных системах, в общественных явлениях, экономике и в больших искусственных системах, где существуют глубинные вопросы живучести или конкуренции; – между гомеостатами живых организмов и организационными структурами малых человеческих коллективов существует глубокая аналогия [71]. Гомеостаз – атрибут системности, способность поддержания организмом относительного постоянства или подвижной устойчивости внутренней среды (в 51 частности, тканевой жидкости) в процессе непрерывно изменяющихся условий жизнедеятельности, приводит к тому, что осуществление гомеостаза возможно только благодаря регуляционному взаимодействию элементов и компонентов организма как системы. Отсюда регуляция межклеточных взаимодействий (системный признак) как на тканевом, так и на органном уровне является основополагающим условием реализации гомеостаза многоклеточным организмом. В системных механизмах гомеостаза действует кибернетический принцип отрицательной обратной связи: при любом возмущающем воздействии происходит включение нервных и эндокринных механизмов, которые тесно взаимосвязаны. Примером решения проблемы гомеостаза с позиций кибернетики является попытка У. Эшби (W.R. Ashby, 1948) сконструировать саморегулирующее устройство, моделирующее способность живых организмов поддерживать уровень некоторых величин в физиологически допустимых границах. Идею саморегуляции в биологических системах углубил и развил Л. Берталанфи, понимавший биологическую систему как «упорядоченное множество взаимосвязанных элементов». Он же рассмотрел и общий биофизический механизм гомеостаза в контексте открытых систем («Общая теория систем», 1968). Следующий шаг в развитии гомеостатики сделал С. Бир, указавший на два новых принципиальных момента: иерархический принцип построения гомеостатических систем для управления сложными объектами и принцип живучести. С. Бир попытался применить определенные гомеостатические принципы при практической разработке организованных систем управления, выявил некоторые кибернетические аналогии между живой системой и сложным производством. Качественно новый этап развития этого направления наступил после создания формальной модели гомеостата Ю.М. Горским. Его взгляды сложились под влиянием научных представлений Г. Селье, утверждавшего, что «...если удастся включить в модели, отражающие работу живых систем, противоречия, да еще при этом понять, почему природа, создавая живое, пошла по такому пути, – это будет новым прорывом в тайны живого с большим практическим выходом» [221]. 52 Таким образом, различные исследователи по-разному объясняют механизмы общебиологического характера, лежащие в основе гомеостаза. Так, У. Кеннон особое значение придавал высшей нервной системе, Л. А. Орбели одним из ведущих факторов гомеостаза считал адаптационно-трофическую функцию симпатической нервной системы. Организующая роль нервного аппарата (принцип нервизма) лежит в основе широко известных представлений о сущности принципов гомеостаза (И. М. Сеченов, И. П. Павлов, А. Д. Сперанский и другие). Однако ни принцип доминанты (А. А. Ухтомский), ни теория барьерных функций (Л. С. Штерн), ни общий адаптационный синдром (Г. Селъе), ни теория функциональных систем (П. К. Анохин), ни гипоталамическое регулирование гомеостаза (Н. И. Гращенков) и многие другие теории пока не позволяют полностью решить проблему гомеостаза [67]. Анализ источников отечественной и зарубежной литературы показал, что проблема поддержания гомеостаза организма является многогранной и всеобъемлющей, а, следовательно, для ее решения требуются аналогичные подходы. Использование биологически активных добавок открывает широкие возможности для модуляции всех физиологических процессов в организме. Использование БАД из природного сырья улучшает клиническое течение многих экологически обусловленных заболеваний и практически не имеет негативных побочных эффектов. Биомасса спирулины, шроты семян винограда и кунжута, а также гумат калия нашли достаточно широкое применение в животноводстве и птицеводстве в качестве премиксов и кормовых добавок, а также в ветеринарии в качестве средств профилактики экологически обусловленных заболеваний домашних животных. Имеются данные о их использовании в качестве БАД и компонентов лекарственных препаратов, применяемых для человека. Однако весь спектр их биологической активности не раскрыт. В связи с этим необходимы исследования, дополняющие и расширяющие сведения о потенциальных положительных эффектах биомассы спирулины, шротов семян винограда и кунжута, а также гумата калия в отношении поддержания организма и разработки их применения в ветеринарии и зоотехнии. 53 2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1 МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Основная часть экспериментальной работы выполнена на кафедре физиологии и патофизиологии ФГБОУ ВПО «Казанская государственная академия ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана». Эксперименты проведены на 2559 белых беспородных крысах массой 190–210 г, на 300 курах несушках и 1050 цыплятах-бройлерах. Всего поставлено 8 серий опытов в трех повторностях. Экспериментальные исследования проводили в соответствии с «Правилами проведения работ с использованием экспериментальных животных» [41, 115, 215]. Схема экспериментов представлена на рисунке 2. 1. Исследование морфологического и биохимического состава крови на фоне нагрузки биологически активными добавками проводили на 50 беспородных белых крысах-самцах массой 190-210 г. Животных содержали в стандартных условиях вивария при свободном доступе к воде и пище. Они были разделены на 5 групп, по 10 крыс в каждой. Одна группа являлась контрольной и получала воду дистиллированную, животные опытных групп получали: 2 группа – суспензию биомассы спирулины; 3 группа – суспензию шрота семян винограда; 4 группа – суспензию шрота семян кунжута; 5 группа – раствор гумата калия. Все вещества вводили однократно в желудок с помощью зонда в виде суспензии, приготовленной на воде дистиллированной в дозе 10 мг/100 г массы животного, объемом 1 мл ежедневно в течение 35 дней. Эксперимент проведен в трех повторностях. Взятие крови у крыс проводили до начала эксперимента и на 35 день исследований. 54 Этапы исследования Реактивные изменения морфологического и биохимического состава крови на фоне нагрузки БАД Система ПОЛ-АО крыс на фоне нагрузки БАД в дозе 5 мг, 10 мг, 15 мг и 20 мг на 100 г массы тела Система ПОЛ-АО крыс на фоне нагрузки БАД в дозе 10 мг на 100 г массы тела при оксидативном стрессе Реактивные изменения ткани печени крыс в антенатальном и раннем постнатальном периодах онтогенеза на фоне нагрузки БАД Исследование реактивных изменений репродуктивной системы крыс и развития их потомства в антенатальный и ранний постнатальный период онтогенеза на фоне нагрузки БАД Предмет исследования Объект исследования эритроциты; гемоглобин; лейкоцитарная формула; СОЭ; общий белок; альбумины; фракции глобулинов общий белок; альбумины; фракции глобулинов; β-липопротеиды; холестерин; АсАт; АлАТ; глюкоза; ПВК; кальций; фосфор АсАТ; АлАТ; активность каталазы, СОД, ГП; концентрация МДА Структура печени 15 и 20 суточных эмбрионов; печень 4-х месячных крыс Гибель зародышей до- и постимплантационная; общая смертность; масса плодов; кранио-каудальный размер; коэффициент массы/длины плодов; масса плаценты; аномалии внутреннего и внешнего развития плодов; функциональные показатели органов репродуктивной системы самцов и самок, скорость созревания сенсорнодвигательных рефлексов в ранний постнатальный период у крысят, динамика длины и массы тела крысят Исследование влияния БАД на привесы, степень накопления тяжелых металлов и микроэлементов в мясе, а также витаминов группы В в печени цыплятбройлеров Исследование яйценоскости курнесушек на фоне нагрузки биологически активными добавками Масса птицы; содержание Cu, Co, Pb, Zn, Fe, Mn, каротина, витаминов А и В общий белок, кальций, фосфор в сыворотке крови; масса птицы; масса яйца; плотность яйца; толщина скорлупы; состав яйца (жир, протеин, кальций, фосфор, каротин) Рисунок 2 – Схема проведения исследований 55 В крови определяли: количество эритроцитов, концентрацию гемоглобина, количество лейкоцитов и лейкоцитарную формулу. Количество эритроцитов и лейкоцитов подсчитывали в камере Горяева, содержание гемоглобина определяли в гемометре Сали, уровень СОЭ – в аппарате Панченко. Подсчет клеток лейкограммы проводили в окрашенных по Романовскому – Гимзе мазках крови [127, 215, 238]. В сыворотке крови определяли содержание общего белка, содержание альбуминов и фракции глобулинов. Общий белок в крови определяли методом Козлова А.В., Слепышовой В.В. [127, 238]. Содержание альбуминов и фракций глобулинов определяли рефрактометрически. 2. Исследование реактивных изменений гематологических показателей цыплят-бройлеров на фоне нагрузки биологически активными добавками проводили на базе ФГОУ ВПО «Самарская государственная сельскохозяйственная академия» на 5 суточных цыплятах кросса Иза s 15 в количестве 250 особей, которые были разделены поровну на 5 групп: 1 группа – интактные птицы, 2 группа – получала биомассу спирулины, третья – гумат калия, четвертая – шрот семян винограда, пятая – шрот семян кунжута. Материалы исследования на протяжении всего эксперимента добавляли в рацион в дозе 10 мг/100 г массы цыпленка. Из каждой группы на 35 день эксперимента методом случайной выборки отбирали по 10 цыплят, у которых брали кровь из подкрыльной вены для определения концентрации общего белка и его фракций, β-липопротеидов, холестерина, АсАТ, АлАТ, глюкозы, ПВК, кальция и фосфора. Общий белок определяли методом Козлова А.В., Слепышовой В.В. Содержание альбуминов и фракций глобулинов определяли рефрактометрически. Содержание β-липопротеидов оценивали методом М. Буштейна. Холестерин определяли методом Ильке. Определение активности аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы проводили с использование стандартного набора реактивов унифицированным методом Райтмана – Френкеля. Глюкозу определяли колориметрически методом М. Самоджи. Определение ПВК проводили методом 56 П.М.Бабаскина. Концентрацию кальция определяли по Де-Ваарду, концентрацию фосфора – по Бригсу [73, 74, 127, 238]. 3. Изучение функциональной активности системы ПОЛ-АО печени крыс на фоне нагрузки биологически активными добавками в различной концентрации у клинически здоровых животных осуществляли на 170 белых беспородных крысах-самцах одного возраста, массой 190–210 г. Крыс содержали в стандартных условиях вивария при свободном доступе к воде и пище. Животные были разбиты на 17 групп, по 10 крыс в каждой (таблица 5). Эксперимент проведен в трех повторностях. Таблица 5 – Группы экспериментальных животных 1 группа Интактные животные 2 группа Получали биомассу спирулины в дозе 5 мг/100 г массы животного 3 группа Получали биомассу спирулины в дозе 10 мг/100 г массы животного 4 группа Получали биомассу спирулины в дозе 15 мг/100 г массы животного 5 группа Получали биомассу спирулины в дозе 20 мг/100 г массы животного 6 группа Получали шрот семян винограда в дозе 5 мг/100 г массы животного 7 группа Получали шрот семян винограда в дозе 10 мг/100 г массы животного 8 группа Получали шрот семян винограда в дозе 15 мг/100 г массы животного 9 группа Получали шрот семян винограда в дозе 20 мг/100 г массы животного 10 группа Получали шрот семян кунжута в дозе 5 мг/100 г массы животного 11 группа Получали шрот семян кунжута в дозе 10 мг/100 г массы животного 12 группа Получали шрот семян кунжута в дозе 15 мг/100 г массы животного 13 группа Получали шрот семян кунжута в дозе 20 мг/100 г массы животного 14 группа Получали гумат калия в дозе 5 мг/100 г массы животного 15 группа Получали гумат калия в дозе 10 мг/100 г массы животного 16 группа Получали гумат калия в дозе 15 мг/100 г массы животного 17 группа Получали гумат калия в дозе 20 мг/100 г массы животного Образцы БАД вводили однократно в желудок с помощью зонда в виде суспензии (гумат калия в виде раствора), приготовленной на воде дистиллированной в соответствующей концентрации, объемом 1 мл ежедневно в течение 30 дней. 57 На 31 день крыс убивали в соответствии с этическими нормами методом декапитации, затем проводили извлечение печени, промывали физиологическим раствором и замораживали. Гомогенат готовили механическим измельчением ткани печени массой 1 г с 9 мл трис-буфера (рН 7,4), со скоростью 5000 об/мин в сосуде с двойными стенками, постоянно охлаждаемым проточной водой [215]. В гомогенатах определяли активность АсАТ, АлАТ, СОД, каталазы, ГП и концентрацию малонового диальдегида [73, 74, 125, 127, 238]. Определение активности аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы проводили с использование стандартного набора реактивов унифицированным методом Райтмана – Френкеля. Определение активности каталазы проводили по стандартной методике Королюка М.А. [109]. Определение активности глутатионпероксидазы осуществляли по методу В.М. Мойн [125, 127]. Активность супероксиддисмутазы определяли по методу В.С. Гуревича и соавторов [238, 124]. Концентрацию малонового диальдегида определяли по методу Рогожина В.В. и соавторов [106, 127]. 4. Изучение функциональной активности системы ПОЛ-АО печени крыс на фоне нагрузки биологически активными добавками в состоянии оксидативного стресса в сравнении с эталонным антиоксидантом β-каротином осуществляли на 70 белых беспородных крысах-самцах массой 190–210 г. Как и в предыдущем эксперименте все крысы были половозрелыми, одного месяца рождения. Крыс содержали в стандартных условиях вивария при свободном доступе к воде и корму. Животные были разделены на 7 групп, по 10 крыс в каждой (таблица 6). Эксперимент проведен в трех повторностях. Исследуемые образцы БАД вводили однократно в желудок с помощью зонда в виде суспензии, приготовленной на воде очищенной (гумат калия вводили в виде раствора, β-каротин использовали в виде аптечного масляного раствора) в дозе 10 мг/100 г массы животного, объемом 1 мл ежедневно в течение 30 дней до инициации оксидативного стресса и в течение 6 дней параллельно с введением четыреххлористого углерода. На седьмой день крыс убивали в соответствии с этическими нормами методом декапитации, затем проводили извлечение печени, 58 которую промывали. физиологическим раствором и сразу замораживали. Гомогенат готовили механическим измельчением ткани печени массой 1 г с 9 мл трисбуфера (рН 7,4), со скоростью 5000 об/мин в сосуде с двойными стенками, постоянно охлаждаемым проточной водой [215]. Таблица 6 – Группы экспериментальных животных Объекты исследования Вода дистиллированная CCl4 Номера группы 1 2 + + + Суспензия биомассы спирулины Суспензия шрота винограда 3 4 5 6 7 + + + + + + + Суспензия шрота семян кунжута Гумат калия (водный раствор) Β-каротин (масляный раствор) + + + Четыреххлористый углерод также вводили внутримышечно в виде 50 % масляного раствора на абрикосовом массе в дозе 2 г/кг веса животного в течение 6 дней. В гомогенатах определяли активность АсАТ, АлАТ, СОД, каталазы, ГП и концентрацию малонового диальдегида. Определение активности и концентрации ферментов определяли методами предыдущего эксперимента. 5. Исследование реактивных изменений ткани печени крыс в антенатальном и раннем постнатальном периодах онтогенеза на фоне нагрузки БАД проводили на 50 (35 самок, 15 самцов) белых беспородных крысах массой 190–210 г, которые были поделены поровну на 5 групп по 10 крыс в каждой (7 самок и 3 самца). Первая группа – интактные животные, вторая – получала биомассу спирулины, третья – шрот семян винограда, четвертая – шрот семян кунжута, пятая – гумат калия. Эксперимент проведен в трех повторностях. Материалом для гистоструктурного анализа послужили ткани печени эмбрионов 15 и 21-суточного развития, полученные от крыс контрольной и экспериментальных групп, которые в течение 30 дней до наступления беременности и в 59 период беременности в качестве нагрузки внутрижелудочно получали суспензии биомассы спирулины, шрота семян винограда, шрота семян кунжута и гумат калия в виде раствора в дозе 10 мг/100 г массы тела, объемом 1 мл. Суспензии и раствор готовили на дистиллированной воде [41, 215]. Интактные животные получали воду аналогичного объема. Также мы исследовали печень взрослых половозрелых крыс, которые в течение 30 дней получали указанные БАД. Контролем послужил материал от интактных крыс аналогичных сроков развития. Для получения самок с датированным сроком беременности использовали 4–4,5 месячных крыс, которым, с учетом эстрального цикла, вечером подсаживали самцов, а утром брали влагалищные мазки. Так как у крыс оплодотворение происходит в 1–2 часа ночи, считали день обнаружения спермиев в мазке первым днем беременности. По окончанию эксперимента животных подвергали декапитации после ночного голодания, а затем извлекали печень. Фиксацию печени взрослых крыс и эмбрионов проводили в 10 %-м забуференном формалине, затем осуществляли проводку гистологического материала с помощью аппарата гистологической проводки замкнутого типа Tissue-Tek® Vip 5 junior, а после заливали в парафиновые блоки, из которых готовили срезы толщиной 6–7 мкм. Срезы ткани печени окрашивали гематоксилином и эозином. Также проведено иммуногистохимическое исследование печени с применением набора моноклональных антител к ингибитору апоптоза (Bcl-2) и антигену пролиферации (Ki-67). Типирование проводили с использованием антител фирмы DACO. Гистологические исследования проведены классическим методом светопольной микроскопии. Фотографическую съемку образцов ткани печени проводили с помощью светового микроскопа «Микромед» при увеличении 40х, 100х, 200х и 400х. Визуализацию препаратов проводили при помощи светового микроскопа «Микромед» и цифровой фотовидеокамеры. 60 6. Исследование изменений репродуктивной системы крыс и развития их потомства в антенатальный период онтогенеза на фоне нагрузки биологически активными добавками проведено на белых беспородных половозрелых клинически здоровых 448 крысах (320 самок и 128 самцов), массой 190–210 г, которые были разделены поровну на 32 группы и в соответствии с групповой принадлежностью, а так же установленным сроком получали ежедневно внутрижелудочно биологически активные добавки в виде суспензии (гумат калия в виде раствора) в дозе 10 мг/100 г массы тела, объемом 1 мл (таблица 7). Таблица 7 – Группы экспериментальных животных Номер группы Шрот семян кунжута 1 Самки и самцы получали суспензию шрота семян кунжута в течение 21 дня до спаривания 2 Самки получали суспензию шрота семян кунжута в течение 21 дня до оплодотворения, самцы получали воду дистиллированную 3 Самцы получали суспензию шрота семян кунжута в течение 21 дня до спаривания с самками, самки получали воду дистиллированную 4 Самки получали суспензию шрота семян кунжута 21 день до наступления беременности, и до 13 суток беременности 5 Самки получали суспензию шрота семян кунжута 21 день до наступления беременности, а также с 14 по 20 сутки беременности 6 Самки получали суспензию шрота семян кунжута только с 1 по 13 сутки беременности 7 Самки получали суспензию шрота семян кунжута только с 14 по 20 сутки беременности 8 Контрольная группа животных 9 Самцы получали суспензию шрота семян кунжута на протяжении 41 дня Номер группы Гумат калия 1 Самки и самцы получали раствор гумата калия в течение 21 дня до спаривания 2 Самки получали раствор гумата калия в течение 21 дня до оплодотворения, самцы получали воду дистиллированную 61 Продолжение таблицы 7 3 Самцы получали раствор гумата калия в течение 21 дня до спаривания с самками, самки получали воду дистиллированную 4 Самки получали раствор гумата калия 21 день до наступления беременности, и до 13 суток беременности 5 Самки получали раствор гумата калия 21 день до наступления беременности, а также с 14 по 20 сутки беременности 6 Самки получали раствор гумата калия только с 1 по 13 сутки беременности 7 Самки получали раствор гумата калия только с 14 по 20 сутки беременности 8 Контрольная группа животных 9 Самцы получали раствор гумата калия на протяжении 41 дня Номер группы Шрот семян винограда 1 Самки и самцы получали суспензию шрота семян винограда в течение 21 дня до спаривания 2 Самки получали суспензию шрота семян винограда в течение 21 дня до оплодотворения, самцы получали воду дистиллированную 3 Самцы получали суспензию шрота семян винограда в течение 21 дня до спаривания с самками, самки получали воду дистиллированную 4 Самки получали суспензию шрота семян винограда 21 день до наступления беременности, и до 13 суток беременности 5 Самки получали суспензию шрота семян винограда 21 день до наступления беременности, а также с 14 по 20 сутки беременности 6 Самки получали суспензию шрота семян винограда только с 1 по 13 сутки беременности 7 Самки получали суспензию шрота семян винограда только с 14 по 20 сутки беременности 8 Контрольная группа животных 9 Самцы получали суспензию шрота семян винограда на протяжении 41 дня Номер группы Биомасса спирулины 1 Самки и самцы получали суспензию биомассы спирулины в течение 21 дня до спаривания 2 Самки получали суспензию биомассы спирулины в течение 21 дня до оплодотворения, самцы получали воду дистиллированную 62 Продолжение таблицы 7 3 Самцы получали суспензию биомассы спирулины в течение 21 дня до спаривания с самками, самки получали воду дистиллированную 4 Самки получали суспензию биомассы спирулины 21 день до наступления беременности, и до 13 суток беременности 5 Самки получали суспензию биомассы спирулины 21 день до наступления беременности, а также с 14 по 20 сутки беременности 6 Самки получали суспензию биомассы спирулины только с 1 по 13 сутки беременности 7 Самки получали суспензию биомассы спирулины только с 14 по 20 сутки беременности 8 Контрольная группа животных 9 Самцы получали суспензию биомассы спирулины на протяжении 41 дня Условия содержания и кормления крыс соответствовали стандартным требованиям. Доступ к воде был свободным. Суспензии и раствор БАД готовили на дистиллированной воде и вводили животным ежедневно в соответствии с групповой принадлежностью и установленным сроком внутрижелудочно в дозе 10 мг/100 г массы тела, объемом 1 мл. Контрольным животным вводили дистиллированную воду объемом 1 мл. За животными вели ежедневное наблюдение. Для получения самок с датированным сроком беременности использовали методику предыдущего эксперимента. Беременных крыс содержали в отдельных клетках, обеспечив их необходимой подстилкой для устройства гнезда. С первого дня беременности за животными устанавливали наблюдение. Контролировали состояние и поведение самок, регистрировали динамику изменения массы тела, продолжительность беременности. Учет результатов эксперимента проводили на 20-й день беременности путем эвтаназии животных. В яичниках подсчитывали количество желтых тел, в матке – места имплантации, число живых и погибших зародышей. Учитывали также состояние плаценты. Эмбриональный материал внимательно осматривали, 63 оценивали анатомическое строение плодов, определяли массу плодов и краниокаудальные размеры [5]. Показателями негативного действия считали эмбриональную (пред- и постимплантационную) гибель плодов и отставание в развитии, проявляющееся уменьшением массы тела и кранио-каудальных размеров плодов. Предимплантационную эмбриональную смертность рассчитывали по разнице между количеством желтых тел и количеством мест имплантации в матке. Постимплантационную гибель определяли по разнице между числом имплантаций и числом живых плодов. Изучали также общую эмбриональную смертность, размер помета, выход живых плодов [215]. 7. Изучение скорости созревания сенсорно-двигательных рефлексов крыс в ранний постнатальный период онтогенеза проводили на крысятах, полученных от самок, получавших в течение 30 дней до наступления беременности биологически активные добавки в качестве нагрузки. В эксперименте участвовало 65 крыс (50 самок и 15 самцов), массой 190-210 г, которые были разделены поровну на 5 групп: 1 группа – интактные животные; 2 – получала шрот семян кунжута, 3 – гумат калия; 4 – шрот семян винограда; 5 – биомассу спирулины. В соответствии с групповой принадлежностью крысы получали ежедневно внутрижелудочно биологически активные добавки в виде суспензии (гумат калия в виде раствора) в дозе 10 мг/100 г массы тела, объемом 1 мл. Суспензии и раствор готовили на дистиллированной воде [215]. Оценку формирования рефлексов у крысят проводили классическими методами и методом «Открытое поле». Также контролировали динамику массы их тела и изменение длины тела (без хвоста). Исследование изменения репродуктивной системы крыс и развития их потомства в антенатальный период онтогенеза на фоне нагрузки биологически активными добавками проводили по методическим рекомендациям по доклиническому изучению репродуктивной токсичности фармакологических средств, предложенной Б.И. Любимовым и соавторами [215]. 64 8. Исследование влияния БАД на изменение массы, степень накопления тяжелых металлов и минеральных соединений в мясе, а также витаминов группы В в печени цыплят-бройлеров проводили в весенне-летний период. Для этого были сформированы 5 групп цыплят-бройлеров кросса Иза s 15 (по 20 птиц в группе), с 7 дневного возраста поставленные на откорм. Цыплятабройлеры всех групп получали комбикорма согласно технологии откорма. Цыплята контрольной группы получали только комбикорм, во второй группе цыплята с 10 дневного возраста в течение 31 дня получали гумат калия в дозе 10 мг/100 г массы, цыплята третьей группы получали биомассу спирулины, цыплята 4 группы – шрот семян винограда, а пятой – шрот семян кунжута [215]. В ходе эксперимента определяли массу тела птицы. По окончанию эксперимента в мясе устанавливали содержание железа, меди, цинка, кобальта, марганца и свинца методом сухой минерализации на атомно-абсорбционном спектрофотометре (ГОСТ 26929-94, ГОСТ 30176-96) [127]. Содержание витамина А в печени определяли по реакции Карр-Прайса, а витамина В2 – флуориметрически по Г.Д. Елисеевой [127]. 9. Исследование яйценоскости кур-несушек на фоне нагрузки биологически активными добавками проводили на предприятии ООО «Обшаровская птицефабрика» на курах кросса Хайсекс белый, начиная с 70-суточного возраста. В цехах птицефабрики практикуется клеточное содержание кур-несушек с использованием системы ниппельного поения и скребково-скреперная система уборки помета. Куры-несушки в предкладковый период содержались в клеточных батареях КБУ-3. В возрасте 102 дня птицу перевели в промышленный цех. Плотность посадки – 5 птиц в клетке типа ККТ. Состояние микроклимата в помещениях: температура воздуха в птичнике в теплое время года 25–30 °С, в холодное – 19–24 °С; влажность в зависимости от времени года и погодных условий – 57–78 %; скорость движения воздуха – 0,1–1,5 м/с; часто в корпусах отмечается наличие так называемых «мертвых зон», где скорость движения воздуха 0 м/с. Эти зоны располагаются между воздухово- 65 дами обычно в середине и конце зала. Кормление кур-несушек проводилось 2 раза в день комбикормом ПК-4. Для определения влияния БАД на состояние минерального обмена у курнесушек в 125-дневном возрасте в сыворотке крови определяли концентрацию общего кальция, фосфора, уровень общего белка. Белок, его фракции, а также концентрацию кальция и фосфора определили методами, указанными в предыдущих экспериментах. Исследование морфологических показателей яиц проводили по общепринятым методикам. Массу яиц определяли индивидуальным взвешиванием на весах. Плотность яиц измеряли ареометром в солевых растворах. Толщину скорлупы измеряли микрометром с точностью до 0,01 мм на трех участках – экваториальной части, тупом и остром конце. Вычисляли среднюю величину. В составе яйца определяли сырой жир, сырой протеин, кальций, фосфор, каротиноиды классическими методами. Для опыта было сформировано пять групп по 20 кур в возрасте 70 дней. Птицы во всех группах получали комбикорм ПК-4. Экспериментальным группам в комбикорм вводили биологически активные добавки: первой группе – биомассу спирулины; второй – гумат калия; третьей – шрот семян винограда; четвертой – шрот семян кунжута. Все БАД вводили в рацион в дозе 10 мг/100 г массы птицы. Продолжительность опыта составила 90 дней [215]. Цифровой материал всех экспериментов подвергали статистической обработке с определением критерия Стьюдента с использованием программы Sigma Stat 6.0 [76, 130, 206] . 66 2.2 КРАТКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА, ИСПОЛЬЗОВАННЫХ В ЭКСПЕРИМЕНТАХ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫХ ДОБАВОК Биомасса сине-зеленой микроводоросли Spirulina platensis Культивирование микроводоросли Spirulina platensis осуществляется на базе ООО «Неофит» (г. Самара). Культивирование спирулины осуществляли в непрерывном режиме закрытым способом на среде Зарукка до достижения плотности 1,5–1,6 г/л (4–5 суток) [199], при постоянном освещении (9–15 тыс. эрг/см2 С), температуре 35±2 ºС и рН 9,0–9,5 в закрытых фотобиореакторах [199]. Биомассу отделяли фильтрованием, промывали, сушили и упаковывали. Для получения биомассы использовали штамм Spirulina platensis (Nords.) Geilt. – 835, который депонируется в институте физиологии РАМН. Нами установлено: ¾ методом рентгенфлоуресцентной спектрометрии было выявлено, что биомасса спирулины, получаемая на ООО «Неофит», отличается специфическим микроэлементным составом. Она не содержит селена, йода, меди цинка, но характеризуется повышенным содержанием кальция (3,68 мг%), железа (1,67 мг%), натрия (17,39 мг%), магния (6,34 мг%), фосфора (19,5 мг%) и серы (14,94 мг%), что обусловлено особенностями технологического процесса выращивания и составом субстратной среды [152, 157, 172]. ¾ методом аутоокисления низких концентраций адреналина [233] было установлено, что 1 % экстракт биомассы спирулины обладает выраженной антиоксидантной активностью и ингибирует аутоокисление адреналина на 76 % [191]; ¾ исследование токсичности экстрактов биомассы спирулины по стандартной методике Строганова Н.С. на тест – объектах дафниях [240, 241] в концентрациях 1,25 мг/л, 2,50 мг/л и 5,00 мг/л показало, что водный экстракт биомассы спирулины является объектом средней степени токсичности для дафний (четвертый класс токсичности). Токсическая концентрация для дафний составила 5 мг/л [171, 191]. 67 ¾ методом ВЭЖХ было установлено, что содержание β-каротина в биомассе спирулины составляет 0,15±0,01 мг%, а фикоцианина – 80,25±0,65 мг% [157, 172]. Шрот семян винограда Шрот семян винограда является продуктом вторичной переработки при получении виноградного масла на базе ООО «Золотой Корень» г. Самара. Порошок (шрот) семян винограда, обезжиренный в ходе экстрагирования масла из семян, является отходом производства, но представляет собой определенную ценность, так как содержит такие биологически активные вещества, как галловая кислота, катехины, флавоноиды и другие [157, 160, 190]. Нами установлено: ¾ методом рентгенфлоуресцентной спектрометрии было выявлено, что шрот семян винограда, получаемый на ООО «Золотой корень», имеет богатый микроэлементный состав с преобладанием калия (19,88 мг%), кальция (37,41 мг%), серы (13,12 мг%), фосфора (19,13 мг%), магния (4,35 мг%) [163]; ¾ методом аутоокисления низких концентраций адреналина [233] было установлено, что 1 % экстракт шрота семян винограда обладает выраженной антиоксидантной активностью и ингибирует аутоокисление адреналина на 53 % [163]; ¾ исследование токсичности экстрактов шрота семян винограда по стандартной методике Строганова Н.С. на тест – объектах дафниях [240, 241] в концентрациях 0,1, 1,25 мг/л, 2,50 мг/л и 5,00 мг/л показало, что в водных экстрактах шрота семян винограда не содержится токсичных для дафний веществ растворимых в воде [157]. ¾ методом ВЭЖХ было установлено, что содержание галловой кислоты в шроте семян винограда составляет 8,27±0,61 мг% [157]. Шрот семян кунжута Шрот семян кунжута является продуктом вторичной переработки при получении кунжутного масла на базе ООО «Золотой Корень» г. Самара. 68 Порошок семян кунжута, обезжиренный в ходе экстрагирования масла из семян, также является отходом производства, но содержит такие ценные биологически активные соединения, как заменимые и незаменимые аминокислоты, каротиноиды, витамины группы B, фенольные антиоксиданты (сезамол 0,1 %, сезаминол 0,4 %), антиоксиданты-лигнаны (сезамин и сезамолин 0,4 %), фитостеролы (β-систостерин) и другие соединения [113, 147]. Нами установлено: ¾ методом рентгенфлоуресцентной спектрометрии было выявлено, что шрот семян кунжута, получаемый на ООО «Золотой корень», имеет богатый микроэлементный состав с преобладанием магния (15,77 мг%), калия (18,55 мг%), кальция (45,23 мг%) и железа (11,49 мг%) [147]; ¾ методом аутоокисления низких концентраций адреналина было установлено, что 1 % экстракт шрота семян кунжута обладает выраженной антиоксидантной активностью и ингибирует аутоокисление адреналина на 54,5 % [149]; ¾ исследование токсичности экстрактов шрота семян кунжута по стандартной методике Строганова Н.С. [240,241] на тест – объектах дафниях в концентрациях 0,25 мг/л, 0,5 мг/л, 1,00 мг/л, 2,00 мг/л, 3,00 мг/л, 4,00 мг/л и 5,00 мг/л показало, что в водных экстрактах шрота семян кунжута не содержится токсичных для дафний веществ растворимых в воде [156]. Гумат калия Гумат калия, используемый нами в экспериментах, был получен компанией ООО «Эмульсионные технологии» из бурых углей, добываемых в городе Липецк. Для наших исследований наибольший интерес представляет соль гуминовых кислот – гумат калия, полученная из бурых углей. Гуминовые кислоты выделяли из образцов бурого угля традиционным способом водно-щелочной экстракции с последующим их осаждением в кислой среде [128, 209]. Реакции извлечения гуминовых веществ сводятся к следующим уравнениям: 69 БУ + NaOH → ГК-COONa + ГМК-СООNa + ФК-СООNa, 2ГК-СООNa + 2ГМК-СООNa + 2ФК-СООNa + 3Н2SO4 → → 2ГК-СООН+ 2ГМК-СООН+ 2ФК-СООН + 3Na2SO4. где БУ – бурые угли или иное природное образование, содержащее гуминовые вещества, ГК – гуминовая кислота, ФК – фульвокислота, ГМК – гиматомелановая кислота (гиматомелановая кислота – hymatomelanic acid – разновидность гуминовой кислоты, растворимая в этаноле; термин введен Ф. Гоппе-Зейлером в 1889 году). Экстракция гуминовых кислот осуществляется на предприятии ООО «Эмульсионные технологии» 1 % и 2 % NaOH, КОН и 5 % раствором Na2CO3. К полученному щелочному экстракту добавляют какой-либо кислоты до рН 1-2 и выпадет осадок гуминовой и гиматомелановой кислот, а фульвокислоты остаются в растворе. При осаждении гуминовых кислот используют концентрированную Н2SO4 и концентрированную H3PO4 до рН = 2. Осадок отделяют центрифугированием и промывают дистиллированной водой до нейтральной среды. Осадки гуминовой и гиматомелановой кислот легко отделимы, их высушивают и получают темно-бурые или почти черные порошки. Полученный порошок гумата калия обладает следующими характеристиками, представленными в таблице 8 [128, 209]. Таблица 8 – Характеристика гумата калия, полученного из бурых углей Наименование показателя 1. Внешний вид Гумат калия, полученный из бурых углей Порошок темно-коричневого цвета 2. Массовая доля гуматов в пересчете на сухое вещество, %, не менее 60,0 3. Влажность препарата, %, не более 40,0 70 Продолжение таблицы 8 Наименование показателя Гумат калия, полученный из бурых углей 4. Массовая доля тяжелых металлов, мг/кг сухого продукта, не более медь 33,0 кадмий 0,5 свинец 32,0 мышьяк 2,0 5. Уровень радиоактивности Бк/кг, не более 617 6. Массовая доля, % N, не менее 1,2 Р, не менее 0,5 К, не менее 0,3 Нами установлено: ¾ методом аутоокисления низких концентраций адреналина было установлено, что 1 % раствор гумата калия обладает выраженной антиоксидантной активностью и ингибирует аутоокисление адреналина на 58,9 % [155,]; ¾ исследование токсичности экстрактов гумата калия по стандартной методике Строганова Н.С. на тест – объектах дафниях [240, 241] в концентрациях 0,1, 1,25 мг/л, 2,50 мг/л и 5,00 мг/л показало, что в водных растворах гумата калия не содержится токсичных для дафний веществ растворимых в воде [192, 194]. 71 2.3 МОРФОБИОХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ КРОВИ КРЫС КАК ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЙ КРИТЕРИЙ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ОРГАНИЗМА 2.3.1 Реактивные приспособления морфологического состава крови крыс к нагрузке биологически активными добавками Общее состояние и поведение животных, получавших суспензии спирулины, шрота семян винограда, шрота семян кунжута и раствор гумата калия не отличались от контрольной группы животных. Животные были активны, прием воды и пищи без особенностей, естественные отправления не нарушены. Динамика изученных нами, показателей крови представлена в таблице 9. Количество эритроцитов крови в группах животных, получавших биомассу спирулины, шрот семян винограда и шрот семян кунжута на 35 день эксперимента было больше чем в контроле на 21,1 %, 24,0 %, и 13,3 % соответственно. А в группе животных, получавших гумат калия, количество эритроцитов практически совпадало с показателем контрольной группы. Концентрация гемоглобина в крови крыс к этому сроку во всех экспериментальных группах была выше, чем в контроле: в группе животных получавших биомассу спирулины – на 21,9 %, в группе животных, получавших шрот семян винограда – на 32,4 %, в группе животных, получавших шрот семян кунжута – на 15,2 %, а в группе, получавшей гумат калия – на 8,7 % (таблица 9). Количество лейкоцитов, в группе животных, получавших шрот семян кунжута, почти совпадало с контролем, а в группе крыс, получавших шрот семян винограда, было незначительно выше. В группах животных, получавших биомассу спирулины и гумат калия количество лейкоцитов было достоверно больше, чем в контроле на 13,1 % и 15,3 % соответственно. 72 Таблица 9 – Морфологические показатели периферической крови крыс на фоне нагрузки БАД Показатель Дни Контроль Спирулина Виноград Кунжут Гумат Эритроциты, 0 5,80±0,21 5,71±0,20 5,93±0,18 5,78±0,23 5,85±0,19 М·1012/л 35 6,55±0,26 7,93±0,251 8,12±0,301 7,42±0,211 6,81±0,24 Гемоглобин, 0 74,5±3,5 75,4±2,6 77,2±2,4 68,7±2,2 83,7±2,3 1 1 1 г/л 35 87,0±3,4 106,1±3,4 Лейкоциты, 0 11,03±0,39 10,67±0,42 10,91±0,34 11,09±0,40 10,89±0,41 М·109/л 35 12,33±0,44 13,95±0,451 13,21±0,49 12,04±0,47 14,22±0,411 Палочкоядерные 0 1,73±0,06 1,71±0,06 1,69±0,06 1,52±0,05 1,50±0,05 нейтрофилы, % 35 1,70±0,06 2,16±0,081 2,23±0,081 1,85±0,06 2,01±0,061 Сегментоядерные 0 20,83±0,67 20,88±0,69 20,79±0,72 20,77±0,69 20,55±0,66 нейтрофилы, % 35 20,24±0,71 22,21±0,69 22,66±0,811 21,84±0,72 22,39±0,76 Эозинофилы, % 0 1,33±0,04 1,17±0,04 1,50±0,05 1,33±0,04 1,33±0,04 35 1,47±0,04 1,33±0,041 1,50±0,05 1,47±0,05 1,17±0,041 0 1,83±0,06 1,85±0,06 1,85±0,06 1,67±0,05 1,79±0,06 1 1 1,42±0,051 Моноциты, % Лимфоциты, % 115,2±3,1 100,2±3,6 1,51±0,05 94,6±3,7 35 1,67±0,05 1,75±0,06 1,33±0,04 0 65,31±2,29 67,44±2,49 64,19±2,25 65,97±2,18 66,21±2,05 35 66,01±2,31 67,27±2,62 66,65±2,20 67,03±2,55 66,94±2,48 Примечание. В таблице различия достоверны при P < 0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы. Количество палочкоядерных нейтрофилов в крови животных, получавших шрот семян кунжута на 35 день эксперимента соответствовало контролю, а в остальных группах было значительно выше: в группе животных, получавших биомассу спирулины – на 27,1 %, в группе животных, получавших шрот семян винограда – на 31,2 %, а в группе животных, получавших гумат калия – на 18,2 %. Количество сегментоядерных нейтрофилов во всех экспериментальных группах было практически на одном уровне с контролем, кроме группы, получавшей шрот семян винограда (на 12,0 % больше, чем в контроле). Количество эозинофилов в крови у животных, получавших шрот семян винограда и кунжута, на момент окончания эксперимента практически не отлича- 73 лось от интактных животных, а у животных, получавших биомассу спирулины и гумат калия – было достоверно ниже, чем в контроле на 9,5 % и 20,4 % соответственно (таблица 9). Количество базофилов в крови животных всех групп колебалось незначительно. Содержание моноцитов в крови крыс, получавших биомассу спирулины, соответствовало группе интактных животных. В группе крыс, получавших шрот семян винограда, количество моноцитов было ниже, чем в контроле на – 20,4 %, в группе, получавшей шрот семян кунжута – ниже на 9,6 %, а в группе, получавшей гумат калия – ниже 15,0 %. Содержание лимфоцитов и базофилов в крови животных всех опытных групп было примерно на одном уровне и соответствовало физиологической норме. Отклонения в СОЭ у подопытных животных также происходили в минимальных и статистически незначимых пределах. 2.3.2 Реактивные приспособления биохимического состава крови крыс к нагрузке биологически активными добавками Результаты исследований представлены в таблице 10. Исходное содержание общего белка, альбуминов и различных фракций глобулинов в сыворотке крови крыс всех групп до начала эксперимента было практически одинаковым. К 35 дню эксперимента в группе крыс, получавших биомассу спирулины, содержание общего белка в сыворотке крови было на 12,9 % больше, чем в контроле, в группе животных, получавших гумат калия – больше на 14,1 % относительно контроля. В остальных экспериментальных группах содержание общего белка соответствовало контролю. 74 Таблица 10 – Биохимические показатели сыворотки крови крыс на фоне нагрузки БАД Показатель Общий белок, г/л Альбумины, % α1 – глобулины, % α2 – глобулины, % β-глобулины, % γ- глобулины, % Дни Контроль Спирулина Виноград Кунжут Гумат 0 61,3±2,39 65,8±2,43 61,9±2,29 63,7±2,61 64,3±2,25 35 66,5±2,92 75,1±2,481 67,2±2,82 66,9±1,94 75,9±2,351 0 34,1±1,26 34,6±1,18 35,6±1,32 36,9±1,25 36,5±1,50 35 36,8±1,29 40,7±1,13 1 41,9±1,51 1 39,5±1,15 42,9±1,671 0 35,8±1,39 33,3±1,39 34,2±1,29 33,5±1,27 33,1±1,29 35 31,5±1,32 29,3±0,83 28,7±1,12 29,9±1,14 28,4±1,11 0 6,5±0,21 7,3±0,26 6,8±0,23 6,7±0,26 6,9±0,24 35 5,5±0,15 6,6±0,221 5,4±0,18 5,9±0,22 6,2±0,221 0 17,1±0,65 17,9±0,61 16,9±0,73 16,9±0,52 17,1±0,53 35 18,6±0,67 17,0±0,71 17,3±0,65 17,6±0,51 17,2±0,57 0 6,5±0,23 6,9±0,22 6,5±0,24 6,0±0,20 6,4±0,25 35 7,6±0,28 6,4±0,261 6,7±0,251 7,1±0,26 5,3±0,21 Примечание. В таблице различия достоверны при P < 0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы Содержание альбуминов в сыворотке крови животных, получавших шрот семян кунжута, соответствовало контролю, а в остальных группах было достоверно выше: в группе животных, получавших биомассу спирулины – на 10,6 %, получавших шрот семян винограда – на 13,9 %, а в группе, получавших гумат калия – на 16,6 %. Содержание α1-глобулинов во всех экспериментальных группах и в начале и на 35 день эксперимента колебалось незначительно в пределах физиологической нормы. Содержание α2-глобулинов в группах животных, получавших шроты, также соответствовало контролю, а в остальных группах было значительно выше: в группах животных, получавших биомассу спирулины и гумат калия выше – на 20,0 %, и 12,7 % соответственно. 75 Содержание β-глобулинов во всех экспериментальных группах и в начале и на 35 день эксперимента также колебалось незначительно в пределах физиологической нормы. Содержание γ-глобулинов в группе животных, получавших шрот семян кунжута, соответствовало контролю, а в остальных группах было существенно ниже: в группе животных, получавших биомассу спирулины – на 15,8 %, шрот семян винограда – на 11,8 %, а в группе животных, получавших гумат калия – на 30,3 % (таблица 10). Таким образом установлено, что биомасса спирулины при длительном поступлении в организм крыс вызывает достоверное увеличение количества эритроцитов на 21,1 %, концентрации гемоглобина на 21,9 %, количества лейкоцитов на 13,1 %, палочкоядерных нейтрофилов на 27,1 % и снижение количества эозинофилов на 9,5 % по сравнению с контролем. Биохимический состав крови крыс на поступление биомассы спирулины отвечает достоверным увеличением концентрации общего белка на 12,9 %, альбуминов на 10,6 %, α2-глобулинов на 20,0 % и снижением концентрации γ-глобулинов на 15,8 %. Длительная нагрузка шротом семян винограда способствует достоверному увеличению количества эритроцитов в крови крыс на 24,0 %, концентрации гемоглобина на 32,4 %, палочкоядерных нейтрофилов на 31,2 % и сегментоядерных нейтрофилов на 12,0 %, а также снижением моноцитов на 20,4 % по сравнению с контролем. Эффект воздействия шрота семян винограда на биохимический состав крови крыс наиболее ярко проявляется достоверным увеличением количества альбуминов на 13,9 % и снижением концентрации γ-глобулинов на 11,8 %. В этом эксперименте шрот семян кунжута показал себя менее активным. При равных условиях поступления в организм крыс он достоверно увеличивает количество эритроцитов в крови на 13,3 %, концентрацию гемоглобина на 15,2 %, а в лейкоцитарной формуле по сравнению с контролем снижал количество моноцитов на 9,6 %. 76 Содержание общего белка и его фракций в сыворотке крови крыс на фоне нагрузки шротом семян кунжута не имели значительных отклонений от контрольных значений. Организм крыс на длительное поступление гумата калия отвечает достоверным увеличением в крови количества лейкоцитов на 15,3 %, палочкоядерных нейтрофилов на 18,2 %, снижением количества эозинофилов на 20,4 % и количества моноцитов на 15,0 %, повышает концентрацию общего белка на 14,1 %, альбуминов – на 16,6 %, α2-глобулинов – на 12,7 % и снижает количество γ-глобулинов на 30,3 %. Таким образом, на нагрузку биологически активными добавками организм крыс отвечает разнообразными приспособлениями морфологического и биохимического состава крови, которые выражаются в снижении или увеличении интенсивности проявления того или иного параметра, но все эти проявления лежат в пределах физиологической нормы, что позволяет подбирать комбинации и схемы применения БАД для поддержания гомеостаза и коррекции патологических состояний организма. 2.4 БИОХИМИЧЕСКИЙ СОСТАВ КРОВИ ЦЫПЛЯТ-БРОЙЛЕРОВ КАК ОДИН ИЗ ФИЗИОЛОГИЧЕСКИХ КРИТЕРИЕВ ФУНКЦИОНАЛЬНОГО СОСТОЯНИЯ ОРГАНИЗМА Реактивные изменения гематологических показателей цыплят-бройлеров на фоне нагрузки биомассой спирулины, гуматом калия и шротами семян винограда и кунжута изучены на 250 цыплятах 5-ти суточного возраста, разделенных на 5 равных по численности групп. Все биологически активные добавки задавали в течение 35 дней в дозе 10 мг/100 г массы цыпленка. Из каждой группы на 40 день эксперимента методом случайной выборки отбирали по 10 цыплят, у которых брали кровь из подкрыльной вены для определения концентрации общего белка и 77 его фракций, β-липопротеидов, холестерина, АсАТ, АлАТ, глюкозы, ПВК, кальция и фосфора. Результаты исследования представлены в таблице 11. Таблица 11 – Биохимический состав сыворотки крови цыплят-бройлеров на фоне нагрузки биологически активными добавками Группы животных Показатели Контроль Спирулина Виноград Кунжут Гумат Общий белок, г/л 38,41±1,49 41,25±1,94 40,39±1,36 43,51±1,871 42,15±1,77 Альбумины, % 56,34±2,37 50,88±1,84 52,32±1,59 51,12±1,64 51,23±2,04 α-глобулины, % 11,61±0,48 13,65±0,721 12,21±0,71 13,41±0,681 14,20±0,741 β-глобулины, % 13,97±0,52 11,42±0,411 13,37±0,55 11,26±0,461 12,74±0,51 γ-глобулины, % 18,08±0,81 24,05±1,111 22,10±0,891 24,21±1,291 21,83±1,041 β-липопротеиды, г/л 42,83±1,79 31,71±1,361 26,47±1,031 27,99±1,151 29,13±1,091 Холестерин, ммоль/л 1,92±0,075 3,61±0,1521 3,03±0,1301 2,96±0,1151 3,13±0,1281 АсАТ, нкат/л 197,39±7,69 255,69±10,741 234,15±8,891 223,36±8,931 217,74±8,27 АлАт, нкат/л 29,77±1,61 42,21±1,731 31,57±1,23 37,95±1,591 34,68±1,411 Глюкоза, ммоль/л 14,21±0,55 13,05±0,49 13,11±0,46 13,47±0,49 12,88±0,45 597,71±24,51 463,64±19,47 Кальций, ммоль/л 2,59±0,098 3,91±0,1561 4,47±0,1741 4,19±0,1591 3,58±0,1431 Фосфор, ммоль/л 2,29±0,094 2,87±0,1121 2,93±0,1051 2,64±0,1001 2,73±0,1171 Пировиноградная кислота, мкмоль/л 375,12±15,761 417,95±16,721 509,31±21,391 Примечание. В таблице различия достоверны при P < 0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы. У цыплят-бройлеров, получавших суспензию биомассы спирулины содержание общего белка в сыворотке крови было выше, чем в контроле на 7,4 %, у птиц, получавших гумат калия – выше на 9,7 %, в группе, получавшей шрот семян винограда – выше на 5,2 %, а в группе, получавшей шрот семян кунжута – выше на 13,3 % (таблица 11). Количество альбуминов в сыворотке крови цыплят-бройлеров, употреблявших биомассу спирулины, было на 9,7 % ниже, чем в контроле, в группе, упот- 78 реблявший гумат калия – ниже на 9,1 %, у цыплят, употреблявших шрот семян винограда – ниже на 7,1 %, а у цыплят, получавших шрот семян кунжута – ниже на 9,3 %. Количество α-глобулинов в сыворотке крови цыплят-бройлеров, употреблявших биомассу спирулины, на момент окончания эксперимента было на 17,6 % больше, чем в контроле, в группе, употреблявший гумат калия – больше на 22,3 % относительно контроля, у цыплят, употреблявших шрот семян винограда – больше на 5,2 %, а в группе, получавшей шрот семян кунжута – больше на 15,5 %. Количество β-глобулинов в сыворотке крови цыплят-бройлеров, употреблявших биомассу спирулины, на момент окончания эксперимента было на 18,3 % ниже, чем в контроле, в группе, употреблявшей гумат калия, количество β-глобулинов в сыворотке крови было ниже на 8,8 % относительно контроля, у цыплят, употреблявших шрот семян винограда количество β-глобулинов практически соответствовало контролю, а в группе птиц, получавших шрот семян кунжута было ниже чем в контроле на 19,4 %. Количество γ-глобулинов в сыворотке крови цыплят-бройлеров, употреблявших биомассу спирулины, на момент окончания эксперимента было на 32,9 % больше, чем в контроле, в группе, употреблявший гумат калия – больше на 20,7 % относительно контроля, у цыплят, употреблявших шрот семян винограда – больше на 16,7 %, а в группе, получавшей шрот семян кунжута – выше на 33,9 %. Изменение содержания различных видов глобулинов в сыворотке крови птиц экспериментальных групп относительно контроля свидетельствуют о нормализации белковообразовательной функции печени при добавлении в рацион цыплят БАД. Содержание глюкозы в сыворотке крови цыплят-бройлеров, употреблявших биомассу спирулины, на момент окончания эксперимента, было на 8,2 % ниже, чем в контроле. В группе, употреблявшей гумат калия – ниже на 8,9 % относительно контроля, у цыплят, употреблявших шрот семян винограда – ниже на 7,7 %, а в группе, получавшей шрот семян кунжута – ниже на 5,2 %. 79 Содержание пировиноградной кислоты в сыворотке крови цыплятбройлеров, употреблявших биомассу спирулины, на момент окончания эксперимента было на 22,43 % ниже, чем в контроле, в группе, употреблявший гумат калия – ниже на 14,79 % относительно контроля, у цыплят, употреблявших шрот семян винограда – ниже на 37,24 %, а в группе, употреблявшей шрот семян кунжута – ниже на 30,07 %. Холестерин в основном содержится в печени и играет важную роль в жировом обмене. В стенке кишечника холестерин этерифицируется и в этерифицированной форме, попадая в большой круг кровообращения, образует комплексные соединения с α- и β-липопротеидами. Липопротеиды в основном выполняют транспортную функцию. β-липопротеиды содержат больше холестерина, чем α-фракция, и их концентрация имеет важное клинико-физиологическое значение. Содержание холестерина в сыворотке крови цыплят-бройлеров, употреблявших биомассу спирулины, на момент окончания эксперимента было на 88,02 % выше, чем в контроле, в группе, употреблявший гумат калия – выше на 63,02 % относительно контроля, у цыплят, употреблявших шрот семян винограда – выше на 57,80 %, а в группе, получавшей шрот семян кунжута – выше на 54,17 %. Во всех экспериментальных группах содержание холестерина соответствовало физиологической норме. Содержание β-липопротеидов в сыворотке крови цыплят-бройлеров, употреблявших биомассу спирулины, на момент окончания эксперимента было на 25,96 % ниже, чем в контроле, в группе, употреблявший гумат калия – ниже на 31,99 % относительно контроля, у цыплят, употреблявших шрот семян винограда – ниже на 38,19 %, а в группе, получавшей шрот семян кунжута – ниже на 34,64 %. При изучении закономерности изменений параметров крови большое внимание уделяют ферментам, особенно тем, которые участвуют в белковом обмене – аспартатаминотрансферазе и аланинаминотрансферазе. Это ключевые ферменты аминокислотного обмена. Содержание аспартатаминотрансферазы в сыворотке крови цыплят- бройлеров, употреблявших биомассу спирулины, на момент окончания экспери- 80 мента было на 29,54 % выше, чем в контроле. В группе, употреблявшей гумат калия – выше на 10,31 % относительно контроля, у цыплят, получавших шрот семян винограда – выше на 18,62 %, а у птиц, получавших шрот семян кунжута – выше на 13,16 %. Содержание аланинаминотрансферазы в сыворотке крови цыплят- бройлеров, употреблявших биомассу спирулины, на момент окончания эксперимента было на 41,79 % выше, чем в контроле, в группе, употреблявший гумат калия – выше на 16,49 % относительно контроля, у цыплят, получавших шрот семян винограда – выше на 6,04 %, а у птиц, получавших шрот семян кунжута – выше на 27,47 %. Повышенное содержание АсАТ и АлАТ в сыворотке крови цыплят опытных групп по сравнению с контролем вполне закономерно, особенно в группе, принимавшей биомассу спирулины поскольку она содержит 18 аминокислот, а аминотрансферазы в основном выполняют транспортную функцию по перемещению аминогрупп аминокислот. Более высокий уровень аминотрансфераз в крови птиц опытных групп по сравнению с контрольной группой объясняется более интенсивным ростом и развитием опытной птицы. Мы также изучали влияние растительных субстанций на накопление кальция и фосфора в сыворотке крови птиц. Содержание кальция в сыворотке крови цыплят-бройлеров, употреблявших биомассу спирулины, на момент окончания эксперимента было на 50,96 % выше, чем в контроле, в группе, употреблявший гумат калия – выше на 38,22 % относительно контроля, у цыплят, получавших шрот семян винограда – выше на 72,58 %, а у птиц, получавших шрот семян кунжута – выше на 61,77 %. Содержание фосфора в сыворотке крови цыплят-бройлеров, употреблявших биомассу спирулины, на момент окончания эксперимента было на 25,33 % выше, чем в контроле, в группе, употреблявший гумат калия – выше на 19,21 % относительно контроля, у цыплят, получавших шрот семян винограда – выше на 27,94 %, а у птиц, получавших шрот семян кунжута – выше на 15,28 %. 81 Таким образом, установлено, что биомасса спирулины при длительном поступлении в организм цыплят-бройлеров вызывает достоверное увеличение в сыворотке крови количества α-глобулинов на 17,6 % и γ-глобулинов на 32,9 %, снижает количество β-глобулинов на 18,3 % и концентрацию β-липопротеидов на 25,96 %, увеличивает концентрацию холестерина на 88,02 %, АсАТ – на 29,54 %, АлАТ – на 41,79 %, кальция – на 50,96 % и фосфора – на 25,33 %. Длительная нагрузка гуматом калия способствует достоверному увеличению количества α-глобулинов на 22,3 % и γ-глобулинов на 20,7 %, снижает концентрацию β-липопротеидов на 31,99 % и ПВК на 14,79 %, увеличивает концентрацию холестерина на 63,02 %, АлАТ – на 16,49 %, кальция – на 38,22 % и фосфора – на 19,21 %. Организм цыплят-бройлеров на длительное поступление шрота семян винограда отвечает достоверным увеличением количества γ-глобулинов на 16,7 %, снижением концентрации β-липопротеидов на 38,19 % и ПВК на 37,24 %, увеличивает концентрацию холестерина на 57,80 %, АсАТ – на 18,62 %, кальция – на 72,58 % и фосфора – на 27,94 %. Длительная нагрузка шротом семян кунжута способствует достоверному увеличению в сыворотке крови концентрации общего белка на 13,3 %, количества α-глобулинов на 15,5 % и γ-глобулинов на 33,9 %, снижает количество β-глобулинов на 19,4 %, концентрацию β-липопротеидов на 34,64 % и ПВК на 30,07 %, увеличивает концентрацию холестерина на 54,17 %, АсАТ – на 13,16 %, АлАТ – на 27,47 %, кальция – на 61,77 % и фосфора – на 15,22 %. Таким образом, на нагрузку биологически активными добавками организм цыплят-бройлеров отвечает разнообразными приспособлениями биохимического состава крови, которые выражаются в снижении или увеличении интенсивности проявления того или иного параметра, что позволяет подбирать комбинации и схемы применения БАД для поддержания гомеостаза и повышения продуктивности сельскохозяйственной птицы. 82 2.5 ИССЛЕДОВАНИЕ СИСТЕМЫ ПОЛ-АО ПЕЧЕНИ КРЫС 2.5.1 Система ПОЛ-АО печени на фоне нагрузки биологически активными добавками Одним из показателей функциональной активности печени является деятельность системы ПОЛ-АО. В связи с этим нами проведено изучение активности этой системы у крыс при внутрижелудочной нагрузке биологически активными добавками в разной концентрации. Важным фактором также является изменение массы печени. Результаты изучения массы печени крыс и показателей системы ПОЛ-АО на фоне нагрузки биологически активными добавками представлены в таблицах 12 и 13. Таблица 12 – Масса печени клинически здоровых крыс при внутрижелудочной нагрузке биологически активными добавками Группа животных Доза Масса печени (г) 1 – Контроль 7,93±0,31 2 – Спирулина 7,97±0,27 3 – Шрот семян винограда 5 мг/100 г массы 8,02±0,32 4 – Шрот семян кунжута 8,15±0,33 5 – Гумат калия 7,87±0,24 6 – Спирулина 8,18±0,27 7 – Шрот семян винограда 8 – Шрот семян кунжута 10 мг/100 г массы 8,31±0,38 8,45±0,31 9 – Гумат калия 7,84±0,28 10 – Спирулина 7,79±0,26 11 – Шрот семян винограда 12 – Шрот семян кунжута 15 мг/100 г массы 7,81±0,33 8,16±0,26 83 Продолжение таблицы 12 Группа животных Доза Масса печени (г) 13 – Гумат калия 8,09±0,28 14 – Спирулина 7,99±0,29 15 – Шрот семян винограда 16 – Шрот семян кунжута 8,17±0,35 20 мг/100 г массы 8,22±0,22 17 – Гумат калия 8,13±0,28 Установлено, что введение в организм животных биомассы спирулины, шротов семян винограда и кунжута, а также гумата калия в разных дозировках не отражается на массе печени. Таблица 13 – Показатели системы ПОЛ-АО крыс при внутрижелудочной нагрузке биологически активными добавками № Показатель п/п Группы животных Контроль Спирулина Шрот семян Шрот семян винограда кунжута Гумат калия Концентрация БАД 5 мг/100 г массы тела животного 1 Активность 0,285±0,012 0,272±0,009 0,291±0,010 0,287±0,011 0,299±0,011 1,601±0,051 1,589±0,059 1,593±0,065 1,631±0,063 50,31±1,96 50,97±1,63 51,01±1,89 51,49±2,01 АЕД/мг белка пе- 1,308±0,057 1,269±0,048 1,311±0,045 1,277±0,039 1,317±0,042 1,691±0,064 1,674±0,055 1,671±0,062 3,91±0,15 3,82±0,14 3,89±0,13 АсАТ, мкмоль/с·л 2 Активность АлАТ, мкмоль/с·л 3 Активность каталазы, мкат/л 4 1,596±0,058 51,37±1,91 Активность СОД, чени 5 Активность ГП, мкмоль/мин/мг 1,680±0,053 1,689±0,057 белка печени 6 Концентрация МДА, мкмоль/л 3,95±0,15 3,97±0,13 84 Продолжение таблицы 13 № Показатель п/п Группы животных Контроль Спирулина Шрот семян Шрот семян винограда кунжута Гумат калия Концентрация БАД 10 мг/100 г массы тела животного 1 Активность АсАТ, мкмоль/с·л 2 Активность АлАТ, мкмоль/с·л 3 Активность каталазы, мкат/л 4 0,285±0,012 0,291±0,011 0,301±0,013 0,312±0,011 0,368±0,0131 1,596±0,058 1,613±0,074 1,622±0,069 1,593±0,056 1,798±0,0671 43,95±1,631 42,54±1,451 49,74±1,74 50,78±1,86 1,308±0,057 1,215±0,053 1,159±0,0381 1,138±0,042 1,332±0,047 1,680±0,053 1,579±0,055 1,522±0,0441 1,615±0,061 1,722±0,062 4,16±0,19 3,91±0,14 3,81±0,13 51,37±1,91 Активность СОД, АЕД/мг белка печени 5 Активность ГП, мкмоль/мин/мг белка печени 6 Концентрация МДА, мкмоль/л 3,95±0,15 4,02±0,17 Концентрация БАД 15 мг/100 г массы тела животного 1 Активность 0,285±0,012 0,297±0,011 0,325±0,0131 0,313±0,012 0,391±0,0151 1,596±0,058 1,591±0,060 1,609±0,055 1,587±0,062 1,891±0,0621 42,31±1,611 40,25±1,491 47,95±1,63 50,05±1,90 АЕД/мг белка пе- 1,308±0,057 1,201±0,044 1,136±0,0351 1,109±0,0391 1,274±0,048 1,497±0,0541 1,611±0,047 1,761±0,060 4,03±0,14 3,92±0,15 3,78±0,13 АсАТ, мкмоль/с·л 2 Активность АлАТ, мкмоль/с·л 3 Активность каталазы, мкат/л 4 51,37±1,91 Активность СОД, чени 5 Активность ГП, мкмоль/мин/мг 1,680±0,053 1,523±0,059 белка печени 6 Концентрация МДА, мкмоль/л 3,95±0,15 3,91±0,13 85 Продолжение таблицы 13 № Показатель Группы животных п/п Контроль Спирулина Шрот семян Шрот семян винограда кунжута Гумат калия Концентрация БАД 20 мг/100 г массы тела животного 1 Активность АсАТ, мкмоль/с·л 2 Активность АлАТ, мкмоль/с·л 3 Активность каталазы, мкат/л 4 0,285±0,012 0,291±0,010 0,321±0,0121 0,322±0,0111 0,446±0,0171 1,596±0,058 1,589±0,054 1,603±0,063 1,590±0,056 1,955±0,0701 41,31±1,321 40,11±1,561 46,43±1,76 49,76±1,79 1,114±0,0371 1,294±0,045 1,601±0,051 1,785±0,061 3,92±0,15 3,71±0,13 51,37±1,91 Активность СОД, АЕД/мг белка пе- 1,308±0,057 1,203±0,046 1,131±0,0431 чени 5 Активность ГП, мкмоль/мин/мг 1,680±0,053 1,519±0,056 1,499±0,0541 белка печени 6 Концентрация МДА, мкмоль/л 3,95±0,15 3,84±0,12 3,91±0,14 Примечание. В этой таблице различия достоверны при P < 0,05: 1 – по сравнению с показателями контрольной группы (интактных) животных. Введение БАД в дозе 5 мг/100 г массы животного не выявило достоверных изменений в активности и концентрации изучаемых ферментов по отношению к интактным животным. Установлено, что нагрузка крыс в дозе 10 мг/100 г массы тела биомассой спирулины, шротами семян винограда и кунжута не влияет на активность аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы, а в группе животных, получавших гумат калия, вызывает возрастание активности АсАТ и АлаТ по сравнению с интактными животными на 29,1 % и 12,7 % соответственно. Активность ферментов каталаза, супероксиддисмутаза и глутатионпероксидаза у здоровых животных, на фоне нагрузки биомассой спирулины имела тен- 86 денцию к снижению и была ниже чем в контроле на 14,44 %, 7,11 % и 6,01 % соответственно. На внутрижелудочное введение шрота семян винограда организм крыс отвечает выраженным снижением активности каталазы, супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы на 17,19 %, 11,39 % и 9,4 % соответственно. Уровень антиоксидантных ферментов у животных, получавших шрот семян кунжута, почти полностью совпадает с результатами, полученными в группе интактных крыс, за исключением активности СОД, которая была достоверно ниже на 13 %. Концентрация малонового диальдегида у животных всех экспериментальных групп была примерно на одном уровне, без достоверных различий. Нагрузка БАД в дозе 15 мг/100 г массы животного проводит к следующим изменениям в системе ПОЛ-АО печени: ¾ Активность АсАТ в группе животных, получавших биомассу спирулины и шрот семян кунжута, не отличалась от контроля, а в группах, получавших шрот семян винограда и гумат калия, была выше на 14,04 % и 37,19 % соответственно. ¾ Активность АлАТ в группах животных, получавших биомассу спирулины и шроты почти совпадала с контролем, а группе, получавшей гумат калия, была выше на 18,48 %. ¾ Активность каталазы в группах животных, получавших шрот семян кунжута и гумат калия не существенно отличалась от контроля, а в группах, получавших биомассу спирулины и шрот семян винограда была ниже на 17,64 % и 21,65 % соответственно. ¾ Активность СОД в группах животных, получавших биомассу спирулины и гумат калия, не отличалась от контроля, а в группах, получавших шроты семян винограда и кунжута, была достоверно ниже на 13,15 % и 15,21 % соответственно. ¾ Активность ГП отличалась от контроля только в группе животных, получавших шрот семян винограда, она была ниже на 10,89 % по отношению к интактным животным. ¾ Концентрация МДА во всех группах была примерно на одном уровне. 87 ¾ Нагрузка БАД в концентрации 20 мг/100 г массы животного проводит к следующим изменениям в системе ПОЛ-АО печени: ¾ Активность АсАТ в группах животных, получавших биомассу спирулины, не отличалась от контроля, а в группах, получавших шроты семян винограда и кунжута, а также гумат калия была выше на 12,63 %, 12,98 % и 56,49 % соответственно. ¾ Активность АлАТ в группах животных, получавших биомассу спирулины и шроты, не существенно отличалась от контроля, а группе, получавшей гумат калия, была выше на 22,49 %. ¾ Активность каталазы в группах животных, получавших шрот семян кунжута и гумат калия была не существенно ниже, чем в контроле, а в группах, получавших биомассу спирулины и шрот семян винограда была ниже на 19,58 % и 21,92 % соответственно. ¾ Активность СОД в группах животных, получавших биомассу спирулины и гумат калия, также не отличалась от контроля, а в группах, получавших шроты семян винограда и кунжута была достоверно ниже на 13,53 % и 14,83 % соответственно. ¾ Активность ГП отличалась от контроля только в группе животных, получавших шрот семян винограда, она была ниже на 10,77 % по отношению к интактным животным. ¾ Концентрация МДА во всех группах была примерно на одном уровне. На основании полученных результатов мы приходим к выводу, что биомассу спирулины и шрот семян винограда в дальнейших экспериментах следует использовать в дозе 10 мг/100 г массы тела животного, что соответствует суточной норме потребления для человека биологически активных соединений содержащихся в этих субстанциях. Гумат калия также следует использовать в концентрации 10 мг/100 г массы тела животного, так как нагрузка в дозе 5 мг/100 г массы не приводит к существенным сдвигам в системе ПОЛ-АО, а в концентрации 15 и 20 мг/100 г массы тела животного ведет к патологическим сдвигам активности трансаминаз. 88 Шрот семян кунжута также решено использовать в дозе 10 мг/100 г массы животного, так как нагрузка им клинически здоровых животных приводит к смещению только одного из изучаемых нами показателей системы ПОЛ-АО и достоверные смещения уже наблюдаются в этой концентрации. Исходя из этого решено использовать эти БАД в качестве корректоров оксидативного стресса. 2.5.2 Ответная реакция системы ПОЛ-АО печени половозрелых крыс на нагрузку тетрахлорметаном Прежде, чем приступить к исследованию БАД на предмет их гепатопротекторных свойств, мы изучили систему ПОЛ-АО на примере малонового альдегида и активности таких ферментов, как каталаза, супероксиддисмутаза, глутатионпероксидаза, аланинаминотрнсфераза и аспартатаминотрансфераза у крыс, подвергшихся воздействию тетрахлорметана. Также нами оценивался внешний показатель негативного воздействия на печень четыреххлористого углерода – увеличение массы органа. Исследования проведены в 2-х группах животных. Первая группа: интактные крысы – клинически здоровые половозрелые самцы, весом 190–210 грамм, вторая группа – половозрелые самцы, массой 190–210 грамм, получавшие тетрахлорметан внутримышечно в дозе 2 г/кг массы тела животного в виде 50 % масляного раствора в течение 6 дней. На седьмые сутки животных подвергали эвтаназии с соблюдением этических норм и печень извлекали для анализа. Установлено, что внутримышечное введение тетрахлорметана в дозе 2 мг/100 г массы тела животного в течение 7 дней вызывает достоверное увеличение массы печени крыс на 61,15 % (12,86±0,29 г) при норме 7,98±0,30 г. У животных, получавших тетрахлорметан произошли существенные изменения в системе ПОЛ-АО (таблица 14). 89 Таблица 14 – Показатели системы ПОЛ-АО Показатель 1. Активность АсАТ 2. Активность АлАТ 3. Активность каталазы 4. Активность СОД 5. Активность ГП 6. Концентрация МДА Группы животных Интактные ССl4 0,285±0,012 1,989±0,0781 мкмоль/с·л мкмоль/с*л 1,596±0,058 2,284±0,0761 мкмоль/с·л мкмоль/с*л 51,37±1,91 29,31±1,081 мкат/л мкат/л 1,308±0,057 0,706±0,0231 АЕД/мг белка печени АЕД/мг белка печени 1,680±0,053 1,036±0,0411 мкмоль/мин/мг белка печени мкмоль/мин/мг белка печени 3,95±0,15 7,44±0,221 мкмоль/л мкмоль/л Примечание. В этой таблице различия достоверны при P < 0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы. Выявлено, что активность аспартатаминотрансферазы в группе крыс, которым вводили четыреххлористый углерод, возросла примерно 7 раз, а активность аланинаминотрансферазы возросла на 43,11% по сравнению с показателями интактных животных. Организм крыс на введение тетрахлорметана отвечает снижением активности каталазы на 42,94 %, активности супероксиддисмутазы на 46,02 % и активности глутатионпероксидазы на 38,33 % относительно контрольной группы. При оксидативном стрессе происходит повышение содержание конечного продукта перекисного окисления липидов – малонового диальдегида (+ 88,35 %). 90 2.5.3 Ответная реакция системы ПОЛ-АО печени здоровых половозрелых крыс на нагрузку тетрахлорметаном, на фоне введения в организм биологически активных добавок Нами были использованы биомасса спирулины, шрот семян винограда, шрот семян кунжута и гумат калия, которые вводили крысам внутрижелудочно в виде суспензий (кроме гумата калия) в дозе 10 мг/100 г массы тела в течение 30 дней с последующим параллельным введением тетрахлорметана в дозе 2 г/кг массы тела животного в виде 50 % масляного раствора в течение 6 дней. 2.5.3.1 Ответная реакция системы ПОЛ-АО печени половозрелых крыс на нагрузку тетрахлорметаном, на фоне введения в организм биомассы спирулины Установлено, что внутрижелудочное введение биомассы спирулины, на фоне внутримышечного введения тетрахлорметана в дозе 2 мг/100 г массы тела животного в течение 6 дней вызывает достоверное снижение массы печени крыс на 22,62 % (9,95±0,37 г) относительно животных, получавших только тетрахлорметан (12,86±0,29 г). У животных, получавших биомассу спирулины, на фоне тетрахлорметана произошли существенные изменения в системе ПОЛ-АО (таблица 15). Биомасса спирулины снижает активность аспартатаминотрансферазы на 27,65 % и аланинаминотрансферазы на 16,91 % в сыворотке крови на фоне четыреххлористого углерода. Активность каталазы, супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы в тканях печени несмотря на оксидативный стресс, на фоне внутрижелудочного введения биомассы спирулины возрастала на 35,21 %, 41,22 % и на 20,17 % соответственно (таблица 15). 91 Таблица 15 – Показатели системы ПОЛ-АО на фоне оксидативного стресса и нагрузки внутрижелудочно суспензией биомассы спирулины Группы животных Показатель Контроль + ССl4 Спирулина + ССl4 1. Активность АсАТ, мкмоль/с·л 1,989±0,078 1,439±0,0421 2. Активность АлАТ, мкмоль/с·л 2,284±0,076 1,898±0,0721 3. Активность каталазы, мкат/л 29,31±1,08 39,63±1,331 0,706±0,023 0,997±0,0421 1,036±0,041 1,245±0,0471 7,44±0,22 6,08±0,201 4. Активность СОД, АЕД/мг белка печени 5. Активность ГП, мкмоль/мин/мг белка печени 6. Концентрация МДА, мкмоль/л Примечание. В этой таблице различия достоверны при P < 0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы, получавшей четыреххлористый углерод. В группе крыс, получавшей биомассу спирулины, на фоне оксидативного стресса, концентрация малонового диальдегида снизилась на 18,28 % относительно контрольной группы. 2.5.3.2 Ответная реакция системы ПОЛ-АО печени половозрелых крыс на нагрузку тетрахлорметаном, на фоне введения в организм шрота семян винограда Установлено, что внутрижелудочное введение шрота семян винограда, на фоне внутримышечного введения тетрахлорметана в дозе 2 мг/100 г массы тела животного в течение 6 дней вызывает достоверное снижение массы печени крыс на 19,52 % (10,35±0,56 г) относительно животных, получавших только тетрахлорметан (12,86±0,29 г). 92 У животных, получавших шрот семян винограда, на фоне тетрахлорметана произошли существенные изменения в системе ПОЛ-АО (таблица 16). Таблица 16 – Показатели системы ПОЛ-АО на фоне оксидативного стресса и нагрузки внутрижелудочно суспензией шрота семян винограда Показатель Группы животных Контроль + ССl4 Шрот семян винограда + ССl4 1. Активность АсАТ, мкмоль/с·л 1,989±0,078 1,717±0,0711 2. Активность АлАТ, мкмоль/с·л 2,284±0,076 1,958±0,0701 3. Активность каталазы, мкат/л 29,31±1,08 36,15±1,101 0,706±0,023 0,896±0,0331 1,036±0,041 1,178±0,0511 7,44±0,22 6,58±0,171 4. Активность СОД, АЕД/мг белка печени 5. Активность ГП, мкмоль/мин/мг белка печени 6. Концентрация МДА, мкмоль/л Примечание. В этой таблице различия достоверны при P < 0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы, получавшей четыреххлористый углерод. Шрот семян винограда на фоне оксидативного стресса способствует снижению активности аспартатаминотрансферазы на 13,68 % и аланинаминотрансферазы на 14,27 % в сыворотке крови, повышает активность каталазы, супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы в тканях печени на 23,34 %, 26,91 %, и 13,71 % соответственно. У крыс, получавших суспензию шрота семян винограда, на фоне введения четыреххлористого углерода, концентрация малонового диальдегида снизилась на 11,56 % относительно контрольной группы. 93 2.5.3.3 Ответная реакция системы ПОЛ-АО печени половозрелых крыс на нагрузку тетрахлорметаном, на фоне введения в организм шрота семян кунжута Установлено, что внутрижелудочное введение шрота семян кунжута, на фоне внутримышечного введения тетрахлорметана в дозе 2 мг/100 г массы тела животного в течение 6 дней вызывает достоверное снижение массы печени крыс на 21,10 % (10,15±0,37 г) относительно животных, получавших только тетрахлорметан (12,86±0,29 г). Результаты изучения системы ПОЛ-АО в тканях опытных крыс на 7-й день после шестидневного внутримышечного введения четыреххлористого углерода, на фоне внутрижелудочной нагрузки суспензией шрота семян кунжута приведены в таблице 17. Таблица 17 – Показатели системы ПОЛ-АО на фоне оксидативного стресса и нагрузки внутрижелудочно суспензией шрота семян кунжута Показатель Группы животных Контроль + ССl4 Шрот семян кунжута + ССl4 1. Активность АсАТ, мкмоль/с·л 1,989±0,078 1,541±0,0571 2. Активность АлАТ, мкмоль/с·л 2,284±0,076 1,901±0,0701 3. Активность каталазы, мкат/л 29,31±1,08 35,78±1,211 4. Активность СОД, АЕД/мг белка печени 0,706±0,023 0,888±0,0291 1,036±0,041 1,311±0,0471 7,44±0,22 7,01±0,24 5. Активность ГП, мкмоль/мин/мг белка печени 6. Концентрация МДА, мкмоль/л Примечание. В этой таблице различия достоверны при P < 0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы, получавшей четыреххлористый углерод. Установлено, что шрот семян кунжута достоверно снижает активность аспартатаминотрансферазы на 22,5 % и активность аланинаминотрансферазы на 94 16,8 % в сыворотке крови на фоне оксидативного стресса. Шрот семян кунжута также способствует росту активности каталазы, супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы на 22,1 %, 25,8 % и 26,5 % соответственно относительно животных, получавших тетрахлорметан. В группе крыс, получавшей суспензию шрота семян кунжута, на фоне введения четыреххлористого углерода, концентрация малонового диальдегида практически совпадала с концентрацией в контрольной группе. 2.5.3.4 Ответная реакция системы ПОЛ-АО печени половозрелых крыс на нагрузку тетрахлорметаном, на фоне введения в рацион гумата калия Установлено, что внутрижелудочное введение гумата калия, на фоне внутримышечного введения тетрахлорметана в дозе 2 мг/100 г массы тела животного в течение 7 дней вызывает достоверное снижение массы печени крыс на 25,80 % (10,15±0,37 г) относительно животных, получавших только тетрахлорметан (9,54±0,31 г). В таблице 18 приведены результаты изучения системы ПОЛ-АО в тканях опытных крыс на 7-й день после шестидневного внутримышечного введения четыреххлористого углерода, на фоне внутрижелудочной нагрузки раствором гумата калия. Результаты эксперимента показали, что гумат калия не оказывает влияние на активность аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы в сыворотке крови крыс на фоне оксидативного стресса, так как показания по этим ферментам почти совпали с контрольной группой животных, которым вводили тетрахлорметан. 95 Таблица 18 – Показатели системы ПОЛ-АО на фоне оксидативного стресса и нагрузки внутрижелудочно раствором гумата калия Показатель Группы животных Контроль + ССl4 Гумат калия + ССl4 1. Активность АсАТ, мкмоль/с·л 1,989±0,078 1,933±0,0661 2. Активность АлАТ, мкмоль/с·л 2,284±0,076 2,291±0,085 3. Активность каталазы, мкат/л 29,31±1,08 33,12±1,191 0,706±0,023 0,799±0,0241 1,036±0,041 1,101±0,042 7,44±0,22 6,23±0,231 4. Активность СОД, АЕД/мг белка печени 5. Активность ГП, мкмоль/мин/мг белка печени 6. Концентрация МДА, мкмоль/л Примечание. В этой таблице различия достоверны при P < 0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы, получавшей четыреххлористый углерод. Гумат калия при внутрижелудочном введении в организм крыс в виде водного раствора способствует росту активности каталазы на 13,0 %, супероксиддисмутазы на 13,2 % и глутатионпероксидазы на 6,3 % в тканях печени на фоне введения четыреххлористого углерода. Концентрация малонового диальдегида снизилась на 16,3 % относительно контрольной группы. 2.5.4 Сравнение гепатопротекторного эффекта биомассы спирулины, шротов семян винограда и кунжута, а также гумата калия с эффектом эталонного антиоксиданта-гепатопротектора β-каротина Проведен сравнительный анализ гепатопротекторной активности биомассы спирулины, шротов семян винограда и кунжута, а также гумата калия с эталонным антиоксидантом-гепатопротектором - β-каротином (таблица19, 20). 96 Таблица 19 – Масса печени крыс Группа животных Масса печени, г Контроль 7,98±0,30 Контроль + ССl4 12,86±0,29 β-каротин + ССl4 11,45±0,511 Спирулина + ССl4 9,95±0,371,2 Шрот семян винограда + ССl4 10,35±0,561 Шрот семян кунжута + ССl4 10,15±0,371,2 Гумат калия + ССl4 9,54±0,311,2 Примечание. В этой таблице различия достоверны при P < 0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы, получавшей четыреххлористый углерод; 2 – по сравнению с показателями животных, группы, получавшей композицию β-каротин В контрольной группе крыс в течение шестидневного введения четыреххлористого углерода, произошло увеличение массы печени относительно интактных животных на 61,15 %, а в группе животных, получавших помимо четыреххлористого углерода суспензию биомассы спирулины, печень увеличилась только на 24,7 % (таблица 19); у животных, получавших суспензию шрота семян винограда на фоне яда, печень увеличилась на 27,7 %, получавших шрот семян кунжута – на 27,2 %, гумат калия – на 19,55 %, а при применении β-каротина – на 43,5 %. Биомасса спирулины, шроты семян винограда и кунжута, а также гумат калия, содержащие комплекс природных антиоксидантов, способствуют снижению роста массы печени, при негативном воздействии тетрахлорметана, они эффективнее β-каротина на 18,8 %, 15,8 % и 16,3 % соответственно. Результаты сравнительного изучения системы ПОЛ-АО в тканях печени крыс на 7-й день после шестидневного внутримышечного введения четыреххлористого углерода на фоне употребления биологически активных добавок и β-каротина приведены в таблице 20. 97 98 Активность аспартатаминотрансферазы в группе крыс, принимавших только четыреххлористый углерод, возросла примерно в 7 раз относительно интактных животных; в группе, получавших суспензию биомассы спирулины на фоне яда, активность возросла – в 5 раз, в группе, получавшей шрот семян винограда – в 6 раз, в группе, получавшей шрот семян кунжута – в 5,4 раза, в группе, получавшей гумат калия – в 6,8 раза, а в группе, получавшей β-каротин – в 6 раз. Следовательно, наиболее эффективно способствуют снижению роста активности аспартатаминотрансферазы в тканях печени, при воздействии тетрахлорметана, суспензия биомассы спирулины и шрот семян кунжута, действуя эффективнее β-каротина. В группе крыс, получавшей дистиллированную воду, на фоне введения четыреххлористого углерода, активность аланинаминотрансферазы возросла на 43,11 % относительно интактных животных; в группе, получавшей помимо яда, суспензию биомассы спирулины, активность АлАТ возросла на 18,9 %, в группе, получавшей шрот семян винограда, активность АлАТ возросла на 22,6 %, в группе, получавшей шрот семян кунжута – на 19,1 %, в группе, получавшей гумат калия – на 43,5 %, а в группе, получавшей β-каротин – на 27,6 %. Таким образом, биомасса спирулины, шрот семян винограда и шрот семян кунжута способствуют снижению роста активности аланинаминотрансферазы в плазме крови при воздействии тетрахлорметана эффективнее β-каротина на 8,7 %, 5 % и 8,5 % соответственно. Активность каталазы в группе крыс, получавшей воду дистиллированную, на фоне введения четыреххлористого углерода, снизилась на 42,94 % относительно контроля; в группе, получавшей, помимо четыреххлористого углерода, суспензию биомассы спирулины активность каталазы снизилась на 22,9 %; в группе, получавшей шрот семян винограда на фоне яда – на 29,6 %, в группе, получавшей шрот семян кунжута – на 30,3 %, в группе, получавшей гумат калия – на 35,5 %, а в группе, получавшей β-каротин – на 26,90 %. 99 Таким образом, выявлено, что биомасса спирулины несколько эффективнее чем β-каротин нормализуют активность каталазы в тканях печени при воздействии тетрахлорметана. Активность супероксиддисмутазы в группе крыс, получавшей дистиллированную воду, на фоне введения четыреххлористого углерода, снизилась на 46,02 % относительно интактных животных; в группе, получавшей, помимо четыреххлористого углерода, суспензию биомассы спирулины, активность СОД снизилась на 23,8 %, в группе, получавшей помимо яда, шрот семян винограда – снизилась на 31,5 %, в группе, получавшей шрот семян кунжута, – на 32,1 %, в группе, получавшей гумат калия – на 38,9 %, в группе, получавшей β-каротин – на 22,78 %. Следовательно, по данному параметру ни один из протекторов природного происхождения не превосходит эффективность β-каротина. В этом эксперименте активность глутатионпероксидазы в группе крыс, получавшей воду дистиллированную, на фоне введения четыреххлористого углерода, снизилась на 38,33 % относительно интактных животных; в группе, получавшей, помимо четыреххлористого углерода, суспензию биомассы спирулины, активность ГП снизилась на 25,9 %, в группе, получавшей помимо тетрахлорметана, шрот семян винограда – на 29,9 %, в группе, получавшей шрот семян кунжута – на 22,0 %, в группе, получавшей гумат калия – на 34,5 %, а в группе, получавшей β-каротин – на 30,5 %. Установлено, что биомасса спирулины и шрот семян кунжута эффективнее чем β-каротин нормализуют активность глутатионпероксидазы в тканях печени при воздействии тетрахлорметана, существенно повышая ее на 4,6 % и 8,5 % соответственно. Также выявлено, что в группе крыс, получавшей воду очищенную, на фоне введения четыреххлористого углерода, концентрация малонового диальдегида возросла на 88,35 % относительно интактных животных; в группе, получавшей помимо яда, суспензию биомассы спирулины, концентрация МДА возросла на 53,9 %, в группе, получавшей шрот семян винограда, концентрация МДА возросла на 66,6 %, в группе, получавшей шрот семян кунжута – на 77,5 %, в группе, получавшей гумат калия – на 57,7 %, а в группе, получавшей β-каротин – на 72,7 %. 100 Установлено, что биомасса спирулины, шрот семян винограда и гумат калия способствуют снижению роста концентрации малонового диальдегида в тканях печени при воздействии тетрахлорметана эффективнее β-каротина на 18,8 %, 6,1 % и 15 % соответственно. По результатам проведенных экспериментов можно сделать вывод, что нагрузка крыс биомассой спирулины, шротом семян винограда и кунжута, а также гуматом калия не оказывает негативного влияния на систему ПОЛ-АО печени здоровых крыс в дозе 10 мг/100 г массы тела животного, а дополнительное их введение животным, находящихся в состоянии оксидативного стресса нормализует нарушенное равновесие в системе перекисного окисления липидов- антиоксидантов печени, то есть способствует восстановлению нарушенного гомеостаза. 2.6 РЕАКТИВНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ ТКАНИ ПЕЧЕНИ КРЫС В АНТЕНАТАЛЬНОМ И РАННЕМ ПОСТНАТАЛЬНОМ ПЕРИОДАХ ОНТОГЕНЕЗА НА ФОНЕ НАГРУЗКИ БАД Оценку реактивных изменений ткани печени крыс в антенатальном и постнатальном периодах онтогенеза проводили с помощью гистоструктурного анализа, материалом для которого послужила печень 15 и 21 суточных эмбрионов, а также печень 4-х месячных крыс. 2.6.1 Гистоструктурный анализ ткани печени крыс контрольной группы Исследование ткани печени крыс контрольной группы в антенатальном периоде онтогенеза показало, что на 15 сутки балочное строение печени находится в 101 стадии формирования. Заметна структурная организация правой и левой долей печени (рисунок 3). Рисунок 3 – Печень на 15 сутки эмбриогенеза. Окраска гематоксилин – эозин. Увеличение 40х Капилляры печени синусоидного типа, ветвящиеся с выраженными расширениями, заполнены эритробластами и другими дифференцирующимися клетками эритроцитарного ряда (рисунок 4). Рисунок 4 – Печеночные балки с расширенными капиллярами, заполненными дифференцирующимися клетками эритроцитарного ряда. Окраска гематоксилин – эозин. Увеличение 200х 102 Капсула печени крыс контрольной группы на 15 сутки находится в стадии формирования, развитие печени соответствует физиологической норме. Сформированное балочное строение печени наблюдается в 21 сутки эмбриогенеза. Преобладает железистая ткань печени, просветы синусоидных капилляров сужены (рисунок 5). Рисунок 5 – Ткань печени крыс контрольной группы на 21 сутки эмбриогенеза. Окраска гематоксилин – эозин. Увеличение 100х Сохраняются участки кроветворения, наиболее выраженные на периферии органа (рисунок 6). Рисунок 6 – Ткань печени крыс контрольной группы на 21 сутки эмбриогенеза. Участки эритропоэза на периферии. Окраска гематоксилин – эозин. Увеличение 200х 103 Гепатоциты с высоким ядерно-цитоплазматическим индексом (ядро занимает 60 % от объема цитоплазмы). Встречаются единичные клетки с признаками мелкокапельной жировой дистрофии, отмечается смена миелоцитарного гемопоэза лимфоцитарным (рисунок 7). Рисунок 7 – Ткань печени крыс опытной группы на 21 сутки эмбриогенеза. В просветах синусоидных капилляров лимфобласты и дифференцирующиеся лимфоциты. Окраска гематоксилин – эозин. Увеличение 400х Междольковая соединительная ткань и портальные тракты не развиты, но центральные вены сформированы и дольки печени угадываются (рисунок 8). Рисунок 8 – Ткань печени опытных крыс на 21 сутки эмбриогенеза. Дольки печени с центральными венами. Окраска гематоксилин – эозин. Увеличение 40х 104 Структура печени взрослых 4-х месячных крыс контрольной группы соответствует физиологической норме. Портальные тракты в тканях печени сформированы, между дольками соединительная ткань отсутствует, структура долек четко определяется (рисунок 9). Рисунок 9 – Ткань печени крыс контрольной группы на 4 месяц онтогенеза. Окраска гематоксилин – эозин. Увеличение Х40 Таким образом, состояние тканей печени крыс контрольной группы в антенатальный и постнатальный периоды онтогенеза соответствует истинному физиологическому возрасту. 2.6.2 Реактивные изменения ткани печени крыс в результате нагрузки суспензией биомассы спирулины Исследование реакции ткани печени на нагрузку суспензией биомассы спирулины показало, что в целом развитие органа в эмбриогенезе не нарушено. На 15 сутки эмбриогенеза доли печени сформированы, присутствуют радиальные балки, портальные тракты не выражены. Синусоидные капилляры расширены, заполнены клетками эритроцитарного ряда (рисунок 10). 105 Рисунок 10 – Печень на 15 сутки эмбриогенеза. Окраска гематоксилин – эозин. Увеличение 40х Гепатоциты с высоким ядерно-цитоплазматическим соотношением (3:1), делятся митотически, встречаются единичные двуядерные клетки, в ядрах преобладает гетерохроматин. В отдельных полях зрения встречаются участки мелко- и средневакуольной жировой дистрофии (рисунок 11). Рисунок 11 – Расширенные капилляры, заполненными дифференцирующимися клетками эритроцитарного ряда. Митотически делящиеся гепатоциты (15 сутки эмбриогенеза). Окраска гематоксилин – эозин. Увеличение 200х По сравнению с печенью крыс контрольной группы, у животных опытной группы, получавшей биомассу спирулины, на 15 сутки эмбриогенеза печень отличается увеличенным количеством митозов (18,61±0,66, по сравнению с 4,37±0,17 в контрольной группе). 106 У 21 суточных эмбрионов наблюдается сформированное балочное строение печени. Соединительная ткань между дольками в виде тонких прослоек. Имеет место диффузная белковая зернистая дистрофия. По периферии органа наблюдаются активные регенеративные процессы, о чем свидетельствует расширение наружной терминальной пластинки от 18 до 26 слоев клеток, имеющих небольшие размеры и более базофильную цитоплазму (рисунок 12). Рисунок 12 – Ткань печени опытных крыс на 21 сутки эмбриогенеза. Подкапсулярная зона с расширенной наружной терминальной пластинкой. Окраска гематоксилин – эозин. Увеличение 100х В пересинусоидальных пространствах сохраняются островки гемопоэза, в которых лимфопоэз преобладает над эритропоэзом (рисунок 13). Рисунок 13 – Ткань печени опытных крыс на 21 сутки эмбриогенеза. Бластные клетки лимфоидного ряда в пересинусоидальных пространствах. Окраска гематоксилин – эозин. Увеличение 200х 107 Структура печени взрослых 4-х месячных крыс, получавших биомассу спирулины, не имеет нарушений. Отмечается сформированное дольчатое строение печени, портальные тракты мелкие, соединительная ткань в виде тонких прослоек. Гепатоциты крупные, имеют большие ядра, в которых видны от 1 до 3 ядрышек. Встречаются единичные двуядерные клетки (рисунок 14). Пересинусоидальные пространства расширены и в них встречаются мелкие участки лимфопоэза и выявляются очаги эритропоэза (рисунок 14) Рисунок 14 – Ткань печени опытных крыс на 4 месяц онтогенеза. Участки активного лимфопоэза и эритропоэза. Окраска гематоксилин – эозин. Увеличение 400х Иммуногистохимические исследования тканей печени крыс на 15 и 21 сутки эмбриогенеза с применением моноклональных антител к ингибитору апоптоза (Bcl-2) и антигену пролиферации (Ki-67) не выявили экспрессии. При исследовании печени 4-х месячных крыс с применением набора моноклональных антител к ингибитору апоптоза (Bcl-2) и антигену пролиферации (Ki-67) были полученные следующие данные, представленные на рисунках 15–16. Эндотелий сосудов слабо пролиферирует (рисунок 15). 108 Рисунок 15 – Печень экспериментальной крысы на 4 месяц онтогенеза. Иммуногистохимическое исследование экспрессии антигена пролиферации Ki-67. Увел. Х200. Положительная реакция экспрессии маркера пролиферации Кi-67в эндотелии сосудов Рецепторы ингибиторов апоптоза, экспрессии антигена не выявили, имеются единичные участки в центролобулярной части долек печени (рисунок 16). Рисунок 16 – Печень экспериментальной крысы на 4 месяц онтогенеза. Иммуногистохимическое исследование антител к ингибитору апоптоза Bcl-2. Слабая экспрессия антигена. Увеличение Х100 Таким образом, установлено что у эмбрионов печень более продолжительное время сохраняет роль органа кроветворения. В печени взрослых крыс на фоне нагрузки биомассой спирулины формируются участки эритропоэза. Паренхиматозные клетки печени на нагрузку суспензией водоросли отвечают увеличением 109 количества митотически делящихся гепатоцитов и увеличением слоев клеток наружной терминальной пластинки. 2.6.3 Реактивные изменения ткани печени крыс в результате нагрузки суспензией шрота семян кунжута Исследование реакции ткани печени на нагрузку суспензией шрота семян кунжута показало, что в целом развитие органа в антенатальном и постнатальном периодах онтогенеза не нарушено. На 15 сутки эмбриогенеза балочное строение печени находится в стадии формирования (рисунок 17). Рисунок 17 – Печень на 15 сутки эмбриогенеза. Окраска гематоксилин – эозин. Увеличение 40х Гепатоциты хорошо выражены и крупнее ближе к капсуле, вглубь, к центру печеночной бухты, печеночные балки разветвляются. Дольчатое строение печени не развито. Капилляры синусоидного типа ветвящиеся с выраженными расширениями, заполненными эритробластами и другими дифференцирующимися клетками эритроцитарного ряда. Наблюдаются участки эритропоэза и лимфопоэза (рисунок 18). 110 Рисунок 18 – Печеночные балки с расширенными капиллярами, заполненными дифференцирующимися клетками эритроцитарного ряда. Окраска гематоксилин – эозин. Увеличение 400х В целом развитие печени в эмбриогенезе на 15 сутки у крыс, получавших суспензию шрота семян кунжута, не отличается от животных контрольной группы. Балочное строение печени полностью формируется к 21 суткам антенатального периода онтогенеза (рисунок 19). Рисунок 19 – Ткань печени опытных крыс на 21 сутки эмбриогенеза. Окраска гематоксилин – эозин. Увеличение 200х 111 Отмечается развитое радиальное строение органа, а также, по сравнению с животными контрольной группы, желчные протоки в печени экспериментальных крыс несколько крупнее, а желчные капилляры расширены (рисунок 20). Рисунок 20 – Расширенные желчные протоки на 21 сутки эмбриогенеза. Окраска гематоксилин – эозин. Увеличение 100х Также в печени крыс, получавших в качестве нагрузки шрот семян кунжута, отмечается мелковакуольная и мелко-, среднекапельная жировая дистрофия. Расширенные синусоидные капилляры содержат единичные эритробласты. Структура печени взрослых 4-х месячных крыс экспериментальной группы не имеет нарушений. Отмечается сформированное балочное строение печени, некоторые гепатоциты двуядерные с просветленной цитоплазмой, морфологическая картина наиболее характерна для гепатоцитов, лишенных гликогена (рисунок 21). Рисунок 21 – Ткань печени опытных крыс на 4 месяц онтогенеза. Окраска гематоксилин – эозин. Увеличение 200х 112 Наблюдается мелкокапельная и среднекапельная жировая дистрофия (рисунок 22). Рисунок 22 – Мелкокапельная и среднекапельная жировая дистрофия в ткани печени опытных крыс на 4 месяц онтогенеза. Окраска гематоксилин – эозин. Увеличение 100х Иммуногистохимические исследования тканей печени крыс на 15 и 21 сутки антенатального периода онтогенеза и на 4 месяц постнатального периода с применением моноклональных антител к ингибитору апоптоза (Bcl-2) не выявили угнетения апоптоза, а с применением моноклональных антител к маркеру пролиферации (Ki-67) выявлено, что на 15 сутки эмбриогенеза наблюдается пролиферация в ядрах эндотелия пересинусоидальных пространств, в ядрах гепатоцитов и в ядрах клеток крови (рисунок 23). Рисунок 23 – Печень экспериментальной крысы на 15 сутки эмбриогенеза. Иммуногистохимическое исследование экспрессии антигена пролиферации Ki-67. пролиферация в ядрах эндотелия пересинусоидальных пространств, в ядрах гепатоцитов и в ядрах клеток крови. Увеличение 200х 113 На 21 сутки эмбриогенеза пролиферация в тканях печени наблюдается только в отдельных гепатоцитах и в эпителии желчевыводящих протоков, а в тканях печени 4-х месячных крыс отсутствует. Следовательно, ткань печени эмбрионов и взрослых половозрелых крыс не отвечает патологическими изменениями на длительное внутрижелудочное введение шрота семян кунжута, но на 21 сутки эмбриогенеза отмечается усиленная пролиферация клеток желчевыводящих протоков. Кунжут пролонгирует эритропоэз у эмбрионов до момента рождения (по сравнению с животными контрольной группы). На основании эксперимента достоверных данных о гепатопротекторном действии шрота семян кунжута не получено, но, вероятно, на фоне нагрузки шротом изменяется экзокринная функция печени, проявляющаяся в образовании желчи и синтезе альбуминов. 2.6.4 Реактивные изменения ткани печени крыс в результате нагрузки раствором гумата калия Исследование реакции ткани печени на нагрузку раствором гумата калия показало, что в целом развитие органа не нарушено. На 15 сутки эмбриогенеза балочное строение печени находится в стадии формирования (рисунок 24). Рисунок 24 – Печень на 15 сутки эмбриогенеза. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение Х100 114 Дольчатое строение печени не развито, но печеночные балки более сформированы по сравнению с печенью животных контрольной группы. В формировании печеночных балок отмечается более плотное скопление клеток по периферии в подкапсулярной зоне и рыхлое расположение к центру, за счет расширенных синусоидных пространств (рисунок 25). Рисунок 25 – Печеночные балки с расширенными капиллярами, заполненными дифференцирующимися клетками эритроцитарного ряда (15 сутки эмбриогенеза). Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение Х40 Капилляры синусоидного типа имеют расширения, которые заполнены дифференцирующимися клетками эритроцитарного ряда, но в целом, эритропоэз выражен слабо, островков кроветворения мало, встречаются единичные эритробласты, по сравнению с эмбрионами, полученными от интактных крыс (рисунок 26). а б Рисунок 26 – Ткань печени опытных крыс (а) и крыс контрольной группы (б) на 15 сутки эмбриогенеза. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение Х200 115 В целом развитие печени в эмбриогенезе на 15 сутки у крыс, получавших, гумат калия, не отличается от контрольной группы за исключением менее интенсивного эритропоэза и более ускоренного формирования печеночных балок. К 21 суткам эмбриогенеза наблюдается сформированное балочное строение печени (рисунок 27). Расширенные перисинусоидальные пространства заполнены участками эритро- и лимфопоэза, лимфопоэз более выражен. Рисунок 27 – Ткань печени опытных крыс на 21 сутки эмбриогенеза. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение Х200 Максимальная концентрация гемопоэтических клеток наблюдается ближе к центральным венам (рисунок 28). Рисунок 28 – Ткань печени опытных крыс на 21 сутки эмбриогенеза. Центральная вена. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение Х200 116 Дольки печени мелкие. Клетки имеют вид «булыжной мостовой», что характерно для гепатоцитов, лишенных гликогена (клетки Краевского). Портальные тракты развиты слабо (рисунок 29). Рисунок 29 – Ткань печени опытных крыс на 21 сутки эмбриогенеза. Центральная вена. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение Х100 В 4-х месячном возрасте, в печени экспериментальных крыс отмечается сформированное четкое балочное строение, выраженные портальные тракты (рисунок 30). Рисунок 30 – Ткань печени опытных крыс на 4 месяц онтогенеза. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение Х200 117 Также наблюдается слабая пролиферация клеток соединительной ткани со стороны портальных трактов (рисунок 31). Рисунок 31 – Пролиферация клеток соединительной ткани со стороны портальных трактов. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение Х400 В ткани печени животных экспериментальной группы имеются единичные мелкие очаги инфильтрации, представленные моноцитами, единичными гранулярными лейкоцитами и преобладающим числом лимфоцитов (рисунок 32). Рисунок 32 – Очаги круглоклеточной инфильтрации в ткани печени. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение Х60 Структура печени взрослых 4-х месячных крыс, получавших в качестве нагрузки раствор гумата калия, также имеет некоторые особенности, которые не наблюдаются в тканях печени животных контрольной группы. 118 В ткани печени опытных крыс встречаются гепатоциты в состоянии мелковакуольной дистрофии (рисунок 33). Рисунок 33 – Мелкокапельная жировая дистрофия в ткани печени опытных крыс на 4 месяц онтогенеза. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение Х100 Также, среди клеток паренхимы, отмечены двуядерные и многоядерные клетки, клетки с пикнотически измененными ядрами, имеют место очаги мелкого некроза (рисунок 34). Рисунок 34 – Печень экспериментальной крысы на 4 месяц онтогенеза. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение Х60 При исследовании рецепторов ингибиторов апоптоза, экспрессия антигена наблюдалась в центролобулярной части дольки печени (рисунок 35 и 36). 119 Пролиферация в единичных гепатоцитах заметна на периферии долек печени (рисунок 37 и 38). Рисунок 35 – Печень экспериментальной Рисунок 36 – Печень экспериментальной кры- крысы на 4 месяц онтогенеза. Иммуногисто- сы на 4 месяц онтогенеза. Иммуногистохими- химическое исследование антител к ингибито- ческое исследование антител к ингибитору ру апоптоза Bcl-2. Увеличение Х100. В цен- апоптоза Bcl-2. Увеличение Х200. В центро- тролобулярной части дольки видна выражен- лобулярной части дольки видна выраженная ная экспрессия антигена экспрессия антигена Рисунок 37 – Печень экспериментальной кры- Рисунок 38 – Печень экспериментальной кры- сы на 4 месяц онтогенеза. Иммуногистохими- сы на 4 месяц онтогенеза. Иммуногистохими- ческое исследование экспрессии антигена ческое исследование экспрессии антигена пролиферации Ki-67. Увеличение Х100. Про- пролиферации Ki-67. Увел. Х200. Пролифера- лиферация клеток заметна на периферии доль- ция клеток заметна на периферии дольки в ки в единичных клетках единичных клетках 120 Таким образом, на длительную нагрузку раствором гумата калия ткань печени эмбрионов отвечает ускоренным формированием печеночных балок и угнетением эритропоэза. Нагрузка раствором гумата калия не оказывает выраженного влияния на пролиферативную активность гепатоцитов, о чем свидетельствуют результаты иммуногистохимического анализа с применением моноклональных антител к антигену пролиферации (Ki-67). Наличие двуядерных и полиплоидных гепатоцитов, особенно выраженное в центральной части долек печени, следует расценить как усиление их функциональной активности, что, возможно, связано с угнетением апоптоза клеток, о чем свидетельствуют результаты иммуногистохимического анализа с применением моноклональных антител к ингибитору апоптоза (Bcl-2). 2.6.5 Реактивные изменения ткани печени крыс в результате нагрузки суспензией шрота семян винограда Исследование реакции ткани печени на нагрузку суспензией шрота семян винограда показало, что в целом развитие органа в эмбриогенезе и онтогенезе соответствует физиологической норме. На 15 сутки эмбриогенеза балочное строение печени находится в стадии формирования (рисунок 39). Рисунок 39 – Печень на 15 сутки эмбриогенеза. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение Х40 121 Капилляры синусоидного типа ветвящиеся с выраженными расширениями, которые заполнены эритробластами и другими дифференцирующимися клетками эритроцитарного ряда. Наблюдаются участки эритропоэза и лимфопоэза (рисунок 40). Рисунок 40 – Печеночные балки с расширенными капиллярами, заполненными дифференцирующимися клетками эритроцитарного ряда. Окраска гематоксилин – эозин. Увеличение 200х Печень крыс, получавших в качестве нагрузки шрот семян винограда, на 15 сутки эмбриогенеза находится в стадии формирования, развитие печени соответствует физиологической норме. К 21 суткам эмбриогенеза наблюдается сформированное балочное строение печени, встречаются участки лимфо- и эритропоэза. Междольковая соединительная ткань и портальные тракты не развиты (рисунок 41). 122 Рисунок 41 – Ткань печени опытных крыс на 21 сутки эмбриогенеза. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение Х100 Встречаются двуядерные гепатоциты и клетки лимфоцитарного ряда (рисунок 42). Рисунок 42 – Ткань печени опытных крыс на 21 сутки эмбриогенеза. Двуядерные клетки, клетки лимфоцитарного ряда. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение Х200 Междольковая соединительная ткань и портальные тракты не развиты, но центральные вены сформированы, дольки печени заметны. Отмечается формирование соединительной ткани по ходу междолевых и сегментарных желчных протоков, вокруг вен отмечается более плотное скопление гепатоцитов (рисунок 43). 123 Рисунок 43 – Ткань печени опытных крыс на 21 сутки эмбриогенеза. Дольки печени. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение Х200 В 4-х месячном возрасте в печени крыс, получавших шрот семян винограда, отмечается сформированное четкое балочное строение, портальные тракты выражены, желчные капилляры не видны, гемопоэз отсутствует (рисунок 44). Рисунок 44 – Ткань печени опытных крыс на 4 месяц онтогенеза. Окраска гематоксилином и эозином. Увеличение Х100 Иммуногистохимические исследования тканей печени крыс на 15 и 21 сутки эмбриогенеза с применением моноклональных антител к антигену пролиферации (Ki-67) не выявили экспрессии, но в тканях печени 4-х месячных крыс наблюдалась пролиферация эндотелия сосудов и пролиферация отдельных гепатоцитов (на 100 клеток 12–18 пролиферируют) (рисунок 45). 124 Рисунок 45 – Печень экспериментальной крысы на 4 месяц онтогенеза. Иммуногистохимическое исследование экспрессии антигена пролиферации Ki-67. Увеличение Х100. Положительная экспрессия маркера в ядрах отдельных гепатоцитов и ядрах эндотелия сосудов В результате иммуногистохимического исследования тканей печени крыс на 15 и 21 сутки антенатального периода онтогенеза, а также печени 4-х месячных крыс с применением набора моноклональных антител к ингибитору апоптоза (Bcl-2) было выявлено, что на 15 сутки эмбриогенеза экспрессии антигена не наблюдается. На 21 сутки угнетения апоптоза гепатоцитов также не наблюдается, но имеет место выраженная экспрессия в клетках лимфоидного ряда и в эндотелии (рисунок 46). Рисунок 46 – Печень экспериментальной крысы на 4 месяц онтогенеза. Иммуногистохимическое исследование антител к ингибитору апоптоза Bcl-2. Увеличение Х200. В клетках лимфоидного ряда выраженная экспрессия антигена 125 В тканях печени 4-х месячных крыс имеет место выраженная экспрессия антигена, наблюдается ингибирование апоптоза в гепатоцитах по периферии печени (рисунок 47). Рисунок 47 – Печень экспериментальной крысы на 4 месяц онтогенеза. Иммуногистохимическое исследование антител к ингибитору апоптоза Bcl-2. Увеличение Х200. В гепатоцитах по периферии печени выраженная экспрессия антигена Таким образом, на нагрузку суспензией шрота семян винограда, печень крыс отвечает отсутствием ингибиторов апоптоза в гепатоцитах периферической части долек печени, что сказывается на повышении синтетической активности клеток, синтезирующих альбумины и белки плазмы крови. Также усиливается пролиферация клеток центральной части печени. Таким образом, по результатам проведенного эксперимента можно сделать следующие выводы: ¾ на фоне нагрузки биомассой спирулины у эмбрионов печень более продолжительное время сохраняет роль органа кроветворения, поскольку сроки эритропоэза существенно удлиняются по сравнению с животными контрольной группы. Также в печени взрослых крыс на фоне нагрузки биомассой спирулины имеются сформированные участки эритропоэза. Печень на нагрузку суспензией спирулины отвечает увеличением количества митотически делящихся гепатоцитов и увеличением слоев клеток наружной терминальной пластинки; 126 ¾ на фоне нагрузки шротом семян кунжута у плодов крыс на 21 сутки эмбриогенеза в ткани печени отмечается усиленная пролиферация клеток желчевыводящих протоков, удлиняются сроки эритропоэза, изменяется экзокринная функция печени, проявляющаяся в образовании желчи и синтезе альбуминов. ¾ на длительную нагрузку гуматом калия ткань печени эмбрионов отвечает ускоренным формированием печеночных балок и угнетением эритропоэза, отмечается наличие двуядерных и полиплоидных гепатоцитов, особенно выраженное в центральной части долек печени. ¾ на нагрузку суспензией шрота семян винограда, печень крыс отвечает отсутствием ингибиторов апоптоза в гепатоцитах периферической части долек печени, что сказывается на повышении синтетической активности клеток, синтезирующих альбумины и другие белки плазмы крови, усиливается пролиферация клеток центральной части печени. 2.7 РЕАКТИВНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ КРЫС И РАЗВИТИЯ ИХ ПОТОМСТВА В АНТЕНАТАЛЬНЫЙ И РАННИЙ ПОСТНАТАЛЬНЫЙ ПЕРИОДЫ ОНТОГЕНЕЗА НА ФОНЕ НАГРУЗКИ БИОЛОГИЧЕСКИ АКТИВНЫМИ ДОБАВКАМИ 2.7.1 Реактивные изменения репродуктивной системы крыс и развитие их потомства в антенатальный период онтогенеза на фоне нагрузки биологически активными добавками Оптимальное функционирование организма сказывается на состоянии репродуктивной системы, отражающей физиологическую активность всего организма и состояние гомеостаза. Физиологические параметры систем зависят от совокупности множества факторов, но смещение равновесия в ту или иную сторону 127 может быть вызвано единичным, точеным воздействием. Смещение гомеостаза естественно влияет на процесс воспроизведения потомства, а также сказывается на интенсивности и продуктивности процесса размножения, как в положительном, так и в отрицательном смысле. На всех стадиях онтогенетического развития формирование репродуктивной системы и поддержание ее функций является наиболее энергоемким, требующим максимально разнообразных элементов питания. 2.7.1.1 Реактивные изменения репродуктивной системы крыс и их потомства в антенатальный период онтогенеза на фоне нагрузки шротом семян кунжута Эксперимент проводился на половозрелых 80 самках и 32 самцах, которые были поделены поровну на 8 групп. В соответствии с групповой принадлежностью животные получали шрот семян кунжута согласно схеме эксперимента. Подробная схема приведена в разделе материал и методы исследований. На протяжении эксперимента мы отслеживали динамику массы тела беременных крыс на фоне нагрузки шротом семян кунжута (таблица 21). Таблица 21 – Динамика массы тела беременных самок на фоне нагрузки шротом семян кунжута Группы Масса крысы до наступления Срок беременности крысы животных беременности 7 дней 14 дней 20 дней 1 209,6±8,17 245,6±7,85 281,6±10,14 310,6±9,94 2 197,1±7,29 247,1±7,17 284,3±11,09 316,3±11,07 3 205,5±6,98 229,9±8,05 257,9±8,78 289,1±9,54 4 192,8±7,52 231,8±8,34 272,5±10,08 309,2±9,59 5 201,3±7,85 232,3±7,20 265,3±8,22 304,7±10,06 6 213,4±6,62 246,4±9,36 283,4±10,20 306,3±9,80 7 202,2±6,67 229,1±7,10 252,1±8,32 288,6±10,68 8 208,7±7,51 237,3±7,59 268,7±9,14 301,6±10,56 128 На протяжении всего периода беременности не было отмечено достоверных различий в динамике массы тела беременных самок во всех экспериментальных группах по сравнению с контролем (таблица 21). Результаты количественной оценки репродуктивной функции крыс и состояния потомства в антенатальном периоде онтогенеза на фоне нагрузки шротом кунжута, представлены в таблице 22. Установлено (таблица 22), что среднее количество плодов в помете в 7 экспериментальной группе почти соответствовало контролю, а в остальных группах оно было достоверно больше: в 1 группе – на 22,4 %, во 2 – на 26,2 %, в 3 группе – 18,7 %, в 4 – на 31,8 %, в 5 группе – на 24,3 % и в 6 группе – на 13,1%. Количество желтых тел из расчета на одну самку во 1, 2, 3, 6 и 7 экспериментальных группах было примерно на одном уровне с контролем. Среднее количество желтых тел из расчета на одну самку в 4 группе было больше на 21,0 %, а в пятой группе – на 12,3 % относительно контроля. Количество мест имплантации из расчета на одну самку в группах 3 и 7 так же соответствовало контролю, а в группах 1, 2, 4, 5 и 6 было больше на 19,82 %, 24,32 %, 41,44 %, 27,93 % и 12,62 % соответственно. Доимплантационная гибель зародышей во всех экспериментальных группах была достоверно ниже, чем в контроле: в первой группе – 33,33 %, во второй – на 59,26 %, в третьей – на 18,52 %, в четвертой – на 62,96 %, в пятой – на 51,85 %, в шестой – на 48,15 % и в седьмой – на 55,56 %. Постимплантационная гибель зародышей в 6 экспериментальной группе соответствовала контролю. В группах 1 и 3 она была ниже, чем в контроле на 50 %, а во второй экспериментальной группе ниже на 25 %. В экспериментальных группах 4, 5 и 7 постимплантационная гибель зародышей была выше, чем в контрольной группе в 4, 2,25 и 1,75 раза соответственно. Общая смертность зародышей во всех экспериментальных группах была достоверно ниже, чем контрольной группе: в первой группе ниже на 35,48 %, во второй – на 54,84 %, в третьей – на 22,59 %, в четвертой – на 16,13 %, в пятой – на 29,03 %, в шестой – ниже на 41,94 % и в седьмой группе – ниже на 38,71 %. 129 Продолжение таблицы 22 130 131 Средняя масса плодов у животных 3, 6 и 7 групп почти не отличалась от контроля. В остальных экспериментальных группах масса плодов была достоверно выше, чем у животных контрольной группы: в 1 группе – на 18,3 %, во 2 группе – на 15,3 %, в 4 группе – на 17,5 %, а в 5 группе – на 13,1 %. Кранио-каудальный размер плодов в группах 3, 6 и 7 соответствует контролю, а в группах 1, 2, 4 и 5 достоверно больше на 15,6 %, 18,3 %, 19,8 % и 12, 6 % соответственно относительно контроля. При этом коэффициент массы/длины плодов во всех группах был примерно одинаков и соответствовал контролю. Средняя масса плаценты в группах 2, 6 и 7 соответствовала контролю. В группах 1, 4 и 5 масса плаценты была больше, чем в контроле на 13,2 %, 28,9 % и 23,7 % соответственно, а в группе 3 она была меньше, чем в контроле на 10,5 %. Плодово-плацентарный индекс во всех экспериментальных группах, кроме 4 группы был примерно одинаков и соответствовал контролю. В 4 группе он на 11,1 % был выше, чем в контроле. В группах 1, 2, 4 и 7 аномалий развития не установлено. В контрольной группе был выявлен 1 плод с нарушениями внешнего развития (0,9 %), в группе 3 – 1 плод (0,8 %) и в группе 5 – 2 плода (1,6 %), и в группе 6 – 2 плода (1,7 %). Аномалии в развитии внутренних органов плодов наблюдались в контрольной группе у 7 плодов (6,1 %), во 2 и 5 группах по 1 плоду (0,7 % и 0,8 %), в 3 группе у 2 плодов (1,6 %) и в 6 группе у 3 плодов (2,5 %). Задержка оссификации грудной кости установлена у 1 плода (0,9 %) в 7 экспериментальной группе. Задержка оссификации подъязычной кости была зафиксирована у 2 плодов в контрольной (1,7 %), а также в 3 и 6 экспериментальных группах (1,6 % и 1,7 % соответственно). Задержка оссификации костей пясти и плюсны зафиксирована у 1 плода во 2, 5 и 6 экспериментальных группах (0,7 %, 0,8 % и 0,8 % соответственно). Полнокровие сосудов печени установлено у 1 плода (0,8 %) в 6 группе, кровоизлияния в печени зафиксированы у 1 плода (0,8 %) в 3 группе, подкожные кровоизлияния – у 1 плода во 2 и 6 группах (0,7 и 0,8 % соответственно). Крово- 132 излияния в почках зафиксированы у 1 (0,8 %) плода в 6 экспериментальной группе, в желудке и кишечнике – у 1 плода (0,8 %) в 3 и 5 группах. Кровоизлияние в мозговых оболочках наблюдалось у 7 (6,7 %) плодов контрольной группы. Результаты функционального состояния репродуктивных органов самцов и самок на фоне нагрузки шротом семян кунжута представлены (таблица 23 и 24). Таблица 23 – Функциональные показатели состояния семенников крыс на фоне нагрузки шротом семян кунжута Показатель Массовый коэффициент Контрольная группа Группы, получавшие шрот семян кунжута 1 9 8,5±0,29 8,7±0,27 9,4±0,311 3,9±0,13 4,3±0,15 4,2±0,14 3,3±0,12 3,3±0,10 3,7±0,131 38,7±1,35 31,2±1,061 32,5±1,141 семенников Массовый коэффициент придаточных половых желез Массовый коэффициент предстательной железы Патологические формы спермиев, % Примечание. В этой таблице различия достоверны при P<0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы. Результаты оценки состояния репродуктивной системы самцов крыс показали, что массовый коэффициент семенников в 1 экспериментальной группе схож с контрольной, а в 9 группе достоверно больше на 10,6 %. Массовый коэффициент придаточных половых желез в экспериментальных группах не отличался от контроля. Массовый коэффициент предстательной железы в 9 экспериментальной группе был выше, чем в контрольной на 12,1 %, а в 1 группе был равен контролю. У крыс, получавших кунжутный шрот, патологические формы спермиев встречались реже, чем в контроле на 19,4 % в 1 экспериментальной группе и реже на 16,0 %, чем в 9 группе. 133 Таблица 24 – Результаты количественной оценки структурных элементов яичников крыс на фоне нагрузки шротом семян кунжута Структурные элементы яичников Масса яичников, мг Атретические тела яичников, шт Граафовы пузырьки, шт Фолликулы с одним слоем гранулезных Контрольная группа (8) Группа 1 31,81±1,29 35,47±1,171 1193,5±42,93 947,4±32,211 6,5±0,21 7,7±0,241 657,8±24,95 629,9±17,55 82,3±2,72 106,2±3,821 клеток, шт Фолликулы с двумя и более слоями гранулезных клеток, шт Примечание. В этой таблице различия достоверны при P<0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы. Масса яичников крыс 1 экспериментальной группы больше на 11,51 % по сравнению с контролем. В 1 экспериментальной группе количество атретических тел яичников меньше на 20,6 % по сравнению с контролем; граафовых пузырьков больше на 18,5 % по сравнению с контролем; фолликул с двумя и более слоями гранулезных клеток больше на 29,0 %. Однако, фолликул с одним слоем гранулезных клеток меньше на 4,2 % по сравнению с контролем. Таким образом, по результатам эксперимента можно сделать следующие выводы: - нагрузка шротом семян кунжута обладает гонадотропным действием, проявляющимся у самцов в увеличении массового коэффициента семенников и предстательной железы; уменьшением патологических форм спермиев, а у самок увеличением массы яичников, уменьшением атретических тел яичников и увеличением количества зрелых фолликул. - в зависимости от длительности поступления шрота семян кунжута в организм самок отмечено увеличение среднего количества крысят в помете и мест имплантации из расчета на самку; 134 - на фоне нагрузки шротом семян кунжута снижается общая смертность эмбрионов, увеличивается масса и кранио-каудальный размер плодов, также средняя масса плаценты. 2.7.1.2 Реактивные изменения репродуктивной системы крыс и их потомства в антенатальный период онтогенеза на фоне нагрузки гуматом калия Эксперимент проводился на 80 самках и 32 самцах, которые были поделены поровну на 8 групп. В соответствии с групповой принадлежностью животные получали гумат калия согласно схеме эксперимента. На протяжении эксперимента мы отслеживали динамику массы тела беременных крыс на фоне нагрузки раствором гумата калия (таблица 25). На протяжении всего периода беременности не было отмечено достоверных различий в динамике массы тела беременных самок во всех экспериментальных группах по сравнению с контролем (таблица 25). Таблица 25 – Динамика массы тела беременных самок на фоне нагрузки гуматом калия Группы Масса крысы животных до наступления Срок беременности крысы 7 дней 14 дней 20 дней беременности 1 197,1±6,50 230,6±8,30 262,9±8,94 298,4±10,44 2 191,7±5,56 224,2±7,85 258,8±9,32 296,3±10,67 3 206,3±7,01 233,5±8,17 264,1±9,77 392,7±10,24 4 194,4±6,99 229,7±7,81 264,4±9,52 301,5±10,55 5 205,1±7,59 237,6±9,03 271,1±9,22 306,8±8,89 6 198,6±6,36 232,1±6,49 266,8±9,60 296,2±9,77 7 209,2±7,32 238,5±8,59 269,1±9,42 305,7±10,39 8 208,7±7,51 237,3±7,59 268,7±9,14 301,6±10,56 135 Результаты количественной оценки репродуктивной функции крыс и состояния потомства в антенатальном периоде на фоне нагрузки раствором гумата калия, представлены в таблице 26. Установлено, что среднее количество плодов в помете в 3 и 7 экспериментальных группах соответствует контролю. В остальных экспериментальных группах оно достоверно больше, чем в контроле: в 1 группе больше на 24,3 %, во 2 – на 13,1 %, в 4 группе – 33,6 %, в 5 – на 28,0 % и в 6 группе – на 19,6 %. Количество желтых тел из расчета на одну самку во 2, 3, 6 и 7 экспериментальных группах было примерно на одном уровне и соответствовало полученным от животных контрольной группы. При этом в 1 группе среднее количество желтых тел из расчета на одну самку было больше на 16,66 %, в 4 группе – больше на 20,29 %, а в пятой группе – на 15,22 % относительно контроля. Количество мест имплантации из расчета на одну самку в группах 3 и 7 так же соответствовало контролю, а в группах 1, 2, 4, 5 и 6 было больше на 31,53 %, 21,62 %, 38,74 %, 27,03 % и 18,92 % соответственно. Доимплантационная гибель зародышей в 7 экспериментальной группе соответствовала контролю. В третьей экспериментальной группе доимплантационная гибель зародышей была больше, чем в контрольной группе на 59,3 %, а в 1, 2, 4, 5 и 6 экспериментальных группах гибель была ниже, чем в контроле, на 44,4 %, 37,0 %, 55,6 %, 33,3 % и 59,3 % соответственно. Постимплантационная гибель зародышей в 5 и 6 экспериментальных группах соответствовала контролю, в 1, 2 и 4 группах была существенно выше, чем в контрольной на 225 %, 250 % и 175 % соответственно. В 3 экспериментальной группе она была на 75 % ниже относительно контроля. Таким образом, общая смертность зародышей во 2 и 7 экспериментальных группах соответствовала контрольной группе, а в 1, 4, 5 и 6 экспериментальных группах была достоверно ниже, чем в контроле на 9,7 %, 25,8%, 29,0 % и 51,6 % соответственно. Во второй группе общая смертность зародышей превышала уровень контроля на 41,9 %. 136 Продолжение таблицы 26 137 138 Средняя масса плодов у животных 3 группы почти не отличалась от контроля. В остальных экспериментальных группах масса плодов была достоверно выше, чем у животных контрольной группы: в 1 группе – на 25,6 %, во 2 группе – на 29,2 %, в 4 группе – на 34,3 %, в 5 группе – на 57,2 %, в 6 группе – на 13,1 % и в 7 группе – на 19,0 %. Кранио-каудальный размер плодов в группах 3 и 7 соответствует контролю, а в группах 1, 2, 4, 5 и 6 достоверно больше на 13,3 %, 16,4 %, 19,8 %, 17,9 % и 9,9 % соответственно относительно контроля. Коэффициент массы/длины плодов в 3 и 6 группах соответствовал контролю, а в 1, 2 и 7 группах был достоверно выше на 11,5 %, в 4 группе выше на 13,5 % и в 5 группе выше на 17,3 % чем в контроле. Средняя масса плаценты в группах 3, 6 и 7 соответствовала контролю, а в остальных группах была достоверно больше: в 1 группе – на 15,8 %, во 2 группе – на 21,1 %, в 4 группе – на 26,3 % и в 5 группе – на 18,4 % относительно контроля. Плодово-плацентарный индекс в 1, 2, 3, 4 и 6 группах был примерно одинаков и соответствовал контролю. В 5 и 7 группах он был достоверно ниже, чем в контроле на 11,1 % и 18,5 % соответственно. Результаты внешнего осмотра плодов показали, что в группах 2, 5 и 6 аномалий развития не наблюдается. В контрольной группе выявлен 1 плод с нарушениями внешнего развития (0,9 %), в группе 1 – 1 плод (0,8 %), в группе 3 – 4 плода (3,8 %), в группе 4 – 2 плода (1,5 %) и в группе 7 – 4 плода (1,9 %) . Аномалии в развитии внутренних органов плодов выявлены в контрольной группе у 7 плодов (6,1 %), во 2 группе – у 1 плода (0,8 %), в 3 группе – у 3 плодов (2,8 %), в 4 группе – у 4 плодов (3,0 %), в группе 5 – у 1 плода (,7 %) и в 6 группе – у 5 плодов (3,8 %). Задержка оссификации грудной кости наблюдалась у 3 плодов (2,3 %) в 6 экспериментальной группе. Задержка оссификации подъязычной кости наблюдалась у 2 плодов (1,7 %) контрольной группы, 1 плода в 1 и 7 экспериментальных группах (0,8 % и 1,0 % соответственно). Задержка оссификации костей пясти и плюсны наблюдалась у 2 плодов (1,9 %) в 3 и 7 экспериментальных группах. 139 В ходе подробного обследования внутренних органов плодов, было установлено наличие кровоизлияния в печени у 1 плода во 2, 3 и 5 группах (0,8 %, 0,9 % и 0,7 % соответственно), а также у 2 плодов (1,5 %) в 4 и 6 группах. Подкожные кровоизлияния не наблюдались. Кровоизлияние в почках зафиксировано у 2 плодов в 3 и 4 группах (1,9 % и 1,5 % соответственно), а также у 3 плодов (2,3 %) в 6 группе. Кровоизлияние в желудке и кишечнике не зафиксировано. Кровоизлияние в мозговых оболочках наблюдалось у 7 (6,7 %) плодов контрольной группы. Нами было изучено функциональное состояние репродуктивных органов самцов и самок на фоне нагрузки гуматом калия (таблица 27 и 28). Таблица 27 – Функциональные показатели состояния семенников крыс на фоне нагрузки раствором гумата калия Показатели Контрольная Группы, получавшие группа (8) гумат калия 1 9 Массовый коэффициент семенников 8,5±0,29 8,9±0,32 9,4±0,271 Массовый коэффициент придаточных половых желез 3,9±0,13 3,7±0,11 4,3±0,121 Массовый коэффициент предстательной железы 3,3±0,12 3,3±0,14 3,5±0,13 Патологические формы спермиев, % 38,7±1,35 34,7±1,291 32,1±1,061 Примечание. В этой таблице различия достоверны при P < 0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы. Массовый коэффициент семенников в 1 экспериментальной группе схож с контрольной, а в 9 группе достоверно выше на 10,6 %. Массовый коэффициент придаточных половых желез в 1 экспериментальной группе также схож с контрольной, а в 9 группе достоверно выше на 10,3 %. Массовый коэффициент предстательной железы во всех группах был примерно одинаков. У крыс, получавших гумат калия, патологические формы спермиев в 1 группе встречались реже, чем в контроле на 10,3 %, а в 9 группе – реже на 17,0 %. 140 По результаты оценки состояния репродуктивной системы самок крыс было выявлено, что масса яичников крыс экспериментальной группы почти совпадает с контролем (таблица 28). В 1 экспериментальной группе количество атретических тел яичников меньше на 17,3 % по сравнению с контролем; граафовых пузырьков больше на 10,8 % по сравнению с контролем; фолликул с двумя и более слоями гранулезных клеток больше на 43,3 %. Однако, количество фолликул с одним слоем гранулезных клеток в экспериментальной группе было почти как в контроле. Таблица 28 – Результаты количественной оценки структурных элементов яичников крыс на фоне нагрузки раствором гумата калия Структурные элементы яичников Масса яичников, мг Атретические тела яичников, шт Граафовы пузырьки, шт Фолликулы с одним слоем гранулезных Контрольная группа (8) Группа 1 31,81±1,29 32,08±1,22 1193,5±42,93 987,2±34,551 6,5±0,21 7,2±0,231 657,8±24,95 624,6±22,49 82,3±2,72 117,9±3,891 клеток, шт Фолликулы с двумя и более слоями гранулезных клеток, шт Примечание. В этой таблице различия достоверны при P < 0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы. Таким образом, по результатам проведенного эксперимента можно сделать следующие выводы: - введение гумата калия в организм в дозе 10 мг/100 г массы тела оказывает несомненное гонадотропное действие, проявляющееся у самцов увеличением массового коэффициента семенников; уменьшении патологических форм спермиев; у самок в уменьшении атретических тел яичников и увеличении количества зрелых фолликул; - в зависимости от длительности поступления гумата калия в организм отмечено увеличение желтых тел и мест имплантации из расчета на самку; 141 - введение гумата калия до оплодотворения и на ранних сроках беременности способствует увеличению количества желтых тел, мест имплантации, а, следовательно, повышает результативность оплодотворения, вызывает количественное увеличение потомства, повышение кранио-каудального размера плодов, средней массы плаценты и выживаемости плодов Следовательно, можно утверждать что, введение в рацион питания гумата калия положительно влияет на репродуктивную систему и потомство крыс. 2.7.1.3 Реактивные изменения репродуктивной системы крыс и их потомства в антенатальный период онтогенеза на фоне нагрузки шротом семян винограда Эксперимент проводился на 80 самках и 32 самцах, которые были поделены поровну на 8 групп. В соответствии с групповой принадлежностью животные получали шрот семян винограда согласно схеме эксперимента. На протяжении эксперимента мы отслеживали динамику массы тела беременных крыс на фоне нагрузки шротом семян винограда (таблица 29). Таблица 29 – Динамика массы тела беременных самок на фоне нагрузки шротом семян винограда Группы Масса крысы животных до наступления Срок беременности крысы 7 дней 14 дней 20 дней беременности 1 205,4±7,19 239,1±7,41 274,9±9,62 313,3±9,71 2 203,8±7,33 237,2±8,54 268,1±9,11 301,5±11,46 3 200,1±7,20 238,9±7,64 272,2±9,53 309,4±11,45 4 211,6±6,98 241,5±8,94 277,3±9,43 307,2±9,53 5 198,8±7,16 244,4±10,02 282,2±9,88 316,1±12,01 6 207,7±7,89 233,3±8,39 274,2±9,59 303,6±9,41 7 197,8±6,52 231,2±8,09 279,4±10,89 315,9±11,69 8 208,7±7,51 237,3±7,59 268,7±9,14 301,6±10,56 142 На протяжении всего периода беременности не было отмечено достоверных различий в динамике массы тела беременных самок во всех экспериментальных группах по сравнению с контролем (таблица 29). Результаты количественной оценки репродуктивной функции крыс и состояния потомства в антенатальном периоде на фоне нагрузки шротом семян винограда, представлены в таблице 30. Установлено, что среднее количество плодов в помете в экспериментальных группах 2, 3, 4, 6, и 7 соответствовало контролю. В 1 группе среднее количество крысят в помете по сравнению с контрольными животными было достоверно меньше на 14,00 %, а в пятой группе – достоверно больше на 11,21 %. Количество желтых тел из расчета на одну самку во 3, 4, 5, 6 и 7 экспериментальных группах было примерно на одном уровне и соответствовало контролю. В 1 группе среднее количество желтых тел из расчета на одну самку было больше на 13,04 %, а во второй группе – на 17,39 % относительно контроля. Количество мест имплантации из расчета на одну самку в группах 3, 5, 6 и 7 так же соответствовало контролю, а в группах 1, 2 и 4 было выше на 15,32 %, 18,02 % и 19,82 % соответственно. Доимплантационная гибель зародышей в 1 и 5 экспериментальных группах соответствовала контролю. Во второй экспериментальной группе наблюдалась большая доимплантационная гибель зародышей, чем в контрольной группе на 14,8 %, а в 3, 4, 6 и 7 экспериментальных группах гибель была ниже, чем в контроле, на 18,5 %, 55,6 %, 22,2 % и 33,3 % соответственно. Постимплантационная гибель зародышей в 5 экспериментальной группе соответствовала контролю, а во всех остальных группах была существенно выше: в 1 группе на выше на 800 %, во второй – на 550 %, в 3 и 7 группах – выше на 75 %, в 4 – выше на 325 % и в 6 группе – выше на 100 % относительно контроля. Таким образом, общая смертность зародышей в 3, 4, 5 и 6 экспериментальных группах соответствовала контрольной группе, а в 1 группе была выше почти в 2 раза, чем в контроле, во 2 группе выше на 83,9 % чем в контроле. В седьмой группе общая смертность зародышей была ниже на 19,4 % по отношению к контролю. 143 Продолжение таблицы 30 144 145 Средняя масса плодов у животных 1, 3, 4, 6 и 7 групп почти не отличалась от контроля. В остальных экспериментальных группах масса плодов была достоверно выше, чем у животных контрольной группы: во 2 группе – на 13,1 %, в 5 группе – на 16,1 %. Кранио-каудальный размер плодов в группах 3, 4, 6 и 7 соответствует контролю, а в группах 1,2, и 5 достоверно больше на 11,8 %, 18,7 % и 12, 6 % соответственно относительно контроля. При этом коэффициент массы/длины плодов во всех группах был примерно одинаков и соответствовал контролю. Средняя масса плаценты в группах 1, 3, 4, 6 и 7 соответствовала контролю, а в остальных группах была достоверно больше: во 2 группе – на 13,2 %, в 5 группе – на 23,7 % относительно контроля. При этом плодово-плацентарный индекс во всех группах был примерно одинаков и соответствовал контролю. Результаты внешнего осмотра плодов показали, что в группах 3, 5 и 7 аномалий развития не наблюдается. При этом в контрольной группе был выявлен 1 плод с нарушениями внешнего развития (0,9 %), в группе 1 – 4 плода (4,1 %) и в группе 2 – 2 плода (1,9 %), в группе 4 – 2 плода (1,6 %) и в группе 6 – 5 плодов (4,2 %) . Аномалии развития внутренних органов плодов наблюдались в контрольной группе у 7 плодов (6,1 %) в 1 группе – у 3 плодов (3,1 %), во 2 группе – у четырех плодов (3,7 %), в 3 и 5 группах по одному плоду (0,9 и 0,8 % соответственно) и в 6 группе – у трех плодов (2,5 %). Задержка оссификации грудной кости наблюдалась только у 2 плодов (1,7 %) в 6 экспериментальной группе и 1 плода (0,9 %) в 7 экспериментальной группе. Задержка оссификации подъязычной кости наблюдалась у 2 плодов (1,7 %) контрольной группы и 1 плода (0,9 %) в 7 экспериментальной группе. Задержка оссификации костей пясти и плюсны наблюдалась у 1 плода (0,8 %) 6 группы и 2 плодов (1,8 %) 7 экспериментальной группы. 146 В ходе подробного обследования внутренних органов плодов, было установлено наличие полнокровия сосудов печени во 2 группе у двух плодов (1,85 %); кровоизлияния в печени у одного плода в 3 и 5 группах (0,9 % и 0,8 % соответственно). Подкожные кровоизлияния наблюдались у 1 (1,03 %) плода в 1 группе. Кровоизлияние в почках зафиксировано у одного плода в 1 (1,03 %) группе, кровоизлияния в желудке и кишечнике зафиксированы у двух плодов (1,85 %) во 2 группе, кровоизлияния в мозговых оболочках наблюдалось у семи (6,7 %) плодов контрольной группы, у одного плода (1,03 %) в 1 группе и трех плодов (2,5 %) в 6 группе. Нами было изучено функциональное состояние репродуктивных органов самцов и самок на фоне нагрузки шротом семян винограда (таблица 31 и 32). Таблица 31 – Функциональные показатели состояния семенников крыс на фоне нагрузки шротом семян винограда Показатели Контрольная Группы, получавшие шрот группа (8) семян винограда 1 9 Массовый коэффициент семенников 8,5±0,29 8,3±0,31 8,7±0,33 Массовый коэффициент придаточных 3,9±0,13 3,2±0,121 3,4±0,121 3,3±0,12 3,2±0,09 3,0±0,11 38,7±1,35 41,6±1,49 44,4±1,691 половых желез Массовый коэффициент предстательной железы Патологические формы спермиев, % Примечание. В этой таблице различия достоверны при P < 0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы. Результаты оценки состояния половых органов самцов крыс показали (таблица 31), что массовый коэффициент семенников, придаточных половых желез и предстательной железы у 1 и 9 групп получавших виноградный шрот практически совпадает с контрольной группой, а патологические формы спермиев, у этих же групп, встречаются чаще на 2,9 % и 5,7 % соответственно. 147 По результаты оценки состояния репродуктивной системы самок крыс, на фоне нагрузки шротом семян винограда, было выявлено, что масса яичников крыс экспериментальной группы почти совпадает с контролем (таблица 32). Таблица 32 – Результаты количественной оценки структурных элементов яичников крыс на фоне нагрузки шротом семян винограда Структурные элементы яичников Контрольная Группа 1 группа (8) Масса яичников, мг Атретические тела яичников, шт Граафовы пузырьки, шт Фолликулы с одним слоем гранулезных клеток, шт Фолликулы с двумя и более слоями гранулезных кле- 31,81±1,29 31,91±1,18 1193,5±42,93 1341,2±50,961 6,5±0,21 6,8±0,25 657,8±24,95 603,5±21,73 82,3±2,72 99,1±3,671 ток, шт Примечание. В этой таблице различия достоверны при P < 0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы. В 1 экспериментальной группе количество атретических тел яичников больше на 12,37 % по сравнению с контролем; граафовых пузырьков больше на 4,62 % по сравнению с контролем; фолликул с двумя и более слоями гранулезных клеток меньше на 8,25 %, количество фолликул с одним слоем гранулезных клеток в экспериментальной группе больше 20,41 %. По результатам проведенного эксперимента приходим к следующим выводам: - на фоне нагрузки шротом семян винограда не наблюдается достоверных различий в динамике массы тела беременных самок во всех группах; - в зависимости от длительности поступления шрота в организм отмечено увеличение среднего количества плодов в помете и мест имплантации из расчета на самку; - на фоне нагрузки виноградным шротом снижается общая смертность эмбрионов, увеличивается масса и кранио-каудальный размер плодов, а также средняя масса плаценты; 148 - виноградный шрот на репродуктивную систему самцов практически не оказывает положительного влияния, но выявлена положительная динамика в развитии репродуктивной системы самок. 2.7.1.4 Реактивные изменения репродуктивной системы крыс и их потомства в антенатальный период онтогенеза на фоне нагрузки биомассой спирулины Эксперимент проводился на 80 самках и 32 самцах, которые были поделены поровну на 8 групп. В соответствии с групповой принадлежностью животные получали биомассу спирулины согласно схеме эксперимента. На протяжении эксперимента мы отслеживали динамику массы тела беременных крыс на фоне нагрузки биомассой спирулины (таблица 33). Таблица 33 – Динамика массы тела беременных самок на фоне нагрузки биомассой спирулины Группы Масса крысы животных до наступления Срок беременности крысы 7 дней 14 дней 20 дней беременности 1 205,4±7,19 239,1±7,41 274,9±9,62 313,3±9,71 2 207,8±6,85 239,4±7,90 275,5±10,19 313,6±9,72 3 199,4±6,18 229,5±7,57 260,8±8,61 294,9±10,32 4 210,1±6,93 244,6±8,81 281,7±9,01 320,1±10,89 5 197,9±7,52 232,1±7,89 268,4±9,13 308,5±10,79 6 201,9±6,26 232,2±8,36 265,1±9,54 300,7±10,22 7 206,4±6,81 234,5±8,68 264,8±9,270 305,2±10,07 8 208,7±7,51 237,3±7,59 268,7±9,14 301,6±10,56 На протяжении всего периода беременности не было отмечено достоверных различий в динамике массы тела беременных самок во всех экспериментальных группах по сравнению с контролем (таблица 33). 149 Результаты количественной оценки репродуктивной функции крыс и состояния потомства в антенатальном периоде на фоне нагрузки биомассой спирулины, представлены в таблице 34. По результатам, представленным в таблице 3 видно, что среднее количество плодов в помете в экспериментальных группах 3, 6 и 7 соответствовало контролю. В 1 группе среднее количество плодов в помете по сравнению с контрольными животными было выше на 15,9 %, во второй группе – на 14,0 %, в 4 группе – на 16,8 %, а в 5 – на 14,9 %. Количество желтых тел из расчета на одну самку во всех экспериментальных группах было примерно на одном уровне с контролем. Количество мест имплантации из расчета на одну самку в группах 3, 6 и 7 так же соответствовало контролю, а в группах 1, 2, 4 и 5 было выше на 12,6 %, 13,5 %, 10,8 % и 11,7 % соответственно. Доимплантационная гибель зародышей во всех экспериментальных группах была ниже, чем в контроле: в 1 группе – ниже на 62,9 %, во 2 группе – на 59,3 %, в 3 – на 25,9 %, в 4 и 5 группах – на 48,1 %, в 6 – на 37,0 %, в 7 группе – на 25,9 %. Постимплантационной гибели зародышей практически не наблюдалось ни в одной из групп животных, участвовавших в эксперименте. Установлено, что общая смертность зародышей связана с доимплантационной гибелью, но во всех экспериментальных группах была достоверно ниже, чем в контроле. Средняя масса плодов у животных 3 и 6 групп почти не отличалась от контроля. В остальных группах масса плодов была существенно выше, чем у животных в контроле: в 1 группе – выше на 32,8 %, в группе 2 – на 30,6 %, в группе 4 –на 29,9 %, в группе 5 – на 31,4 %, в группе 7 – на 18,2 %. Кранио-каудальный размер плодов в группах 3, 6 и 7 соответствовал контролю, а в группах 1,2, 4 и 5 был достоверно выше на 18,7 %, 22,1 %, 17,9 % и 17, 6 % соответственно относительно контроля. При этом коэффициент массы/длинны плодов во всех группах был примерно одинаков и соответствовал контролю. Средняя масса плаценты в группах 3 и 7 соответствовала контролю, а в остальных группах была достоверно выше: в 1 группе – выше на 26,3 %, в группе 2 – на 21,0 %, в группе 4 – на 34,2 %, в группе 5 – на 15,6 % и в 6 группе – на 13,1 %. 150 Продолжение таблицы 34 151 152 При этом плодово-плацентрный индекс достоверно выше на 11,1 %, по сравнению с контролем только в 5 экспериментальной группе. Результаты внешнего осмотра плодов показали, что в группах 1, 2, 4, 6, и 7 аномалий развития не наблюдается. В контрольной группе был выявлен 1 плод с нарушениями внешнего развития (0,9 %), в группе 3 – 1 плод (0,83 %) и в группе 5 – 2 плода (1,39 %). Аномалии в развитии внутренних органов наблюдались в контрольной группе у 7 крысят (6,1 %) в 1 группе – у одного плода (0,74 %), в 5 группе – у трех плодов (2,09 %) и в 6 группе – у двух плодов (1,5 %). Задержка оссификации грудной кости наблюдалась только у 1 плода (0,71 %) во 2 экспериментальной группе. Задержка оссификации подъязычной кости наблюдалась у двух плодов (1,7 %) в контрольной и трех плодов экспериментальной группах. Задержка оссификации костей пясти и плюсны наблюдалась у одного плода (0,8 %) 6 группы. В ходе подробного обследования внутренних органов плодов, было установлено наличие кровоизлияния в печени у 1 плода в 5 группе (0,8 %), подкожные кровоизлияния у 3 (2,09 %) плодов в 6 группе, кровоизлияния в почках зафиксированы у 1 плода в 1 (0,74 %) группе, в мозговых оболочках – у 7 (6,7 %) плодов контрольной группы. Нами было изучено функциональное состояние репродуктивных органов самцов и самок на фоне нагрузки шротом семян винограда (таблица 35 и 36). Массовые коэффициенты семенников, придаточных половых желез и предстательной железы у 1 и 9 групп, получавших биомассу спирулины практически совпадают с показателями контроля, а патологические формы спермиев, у этих же групп, встречаются реже на 19,6 % и 20,7 % соответственно. По результаты оценки состояния репродуктивной системы самок крыс, на фоне нагрузки биомассой спирулины, было выявлено, что масса яичников крыс экспериментальной группы на 13,20 % больше, чем в контроле (таблица 36). 153 Таблица 35 – Функциональные показатели состояния семенников крыс на фоне нагрузки биомассой спирулины Показатели Контрольная Группы, получавшие группа (8) биомассу спирулины Массовый коэффициент семенников Массовый коэффициент придаточных половых желез Массовый коэффициент предстательной железы Патологические формы спермиев, % 1 9 8,5±0,29 8,8±0,31 9,2±0,33 3,9±0,13 3,7±0,11 4,2±0,13 3,3±0,12 3,4±0,11 3,6±0,13 38,7±1,35 31,1±1,061 30,7±1,141 Примечание. В этой таблице различия достоверны при P<0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы. Таблица 36 – Результаты количественной оценки структурных элементов яичников крыс на фоне нагрузки биомассой спирулины Структурные элементы Контрольная группа яичников (8) Масса яичников, мг Атретические тела яичников, шт Граафовы пузырьки, шт Фолликулы с одним слоем гранулезных клеток, Группа 1 31,81±1,29 36,01±1,401 1193,5±42,93 1369,3±50,961 6,5±0,21 7,1±0,23 657,8±24,95 725,3±25,39 82,3±2,72 87,6±3,15 шт Фолликулы с двумя и более слоями гранулезных клеток, шт Примечание. В этой таблице различия достоверны при P < 0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы. В 1 экспериментальной группе количество атретических тел яичников больше на 14,73 % по сравнению с контролем; граафовых пузырьков больше на 9,23 % по сравнению с контролем; фолликул с двумя и более слоями гранулезных 154 клеток больше на 10,26 %, количество фолликул с одним слоем гранулезных клеток в экспериментальной группе больше 6,44 %. Таким образом, по результатам проведенного эксперимента можно сделать следующие выводы: - на фоне нагрузки биомассой спирулины не наблюдается достоверных различий в динамике массы тела беременных самок; - в зависимости от длительности поступления водоросли в организм отмечено увеличение среднего количества крысят в помете и мест имплантации из расчета на самку; - на фоне нагрузки биомассой спирулины снижается общая смертность эмбрионов, увеличивается масса и кранио-каудальный размер плодов, также средняя масса плаценты. - биомасса спирулины на репродуктивную систему самцов практически не оказывает положительного влияния, кроме уменьшения патологических форм спермиев, но выявлена положительная динамика в развитии репродуктивной системы самок. 2.7.2 Изучение скорости созревания сенсорно-двигательных рефлексов потомства крыс в ранний постнатальный период онтогенеза Одним из показателей постоянства гомеостаза организма является скорость проведения импульса нервным волокном, а, следовательно, скорость проявления безусловных рефлексов, скорость выработки условных навыков и общая стрессовая устойчивость животного. Функциональная активность нервной системы может быть стимулирована введением биологически активных агентов. 155 2.7.2.1 Развитие и становление нервной системы крыс на фоне нагрузки шротом семян кунжута Выявлена положительная динамика массы крысят контрольной и экспериментальной групп (таблица 37). Таблица 37 – Динамика массы крысят опытной и контрольной групп, (г) Дни Контроль Шрот семян кунжута 1 3,65±0,09 3,91±0,12 7 9,65±0,29 11,44±0,391 14 19,99±1,37 26,01±0,831 28 42,16±0,59 49,51±1,681 Примечание. В этой и всех последующих таблицах, различия достоверны при P < 0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы. В результате внутрижелудочного введения самкам суспензии шрота семян кунжута к 28 дню жизни прослеживается увеличение массы тела крысят экспериментальной группы на 17,4 % по сравнению с животными контрольной группы. Установлена положительная динамика изменения длины тела крысят (таблица 38). Таблица 38 – Динамика длины тела крысят (без хвоста) опытной и контрольной групп, (см) Дни Контроль Шрот семян кунжута 1 4,31±0,11 4,65±0,17 7 6,08±0,09 6,49±0,21 14 7,29±0,10 7,75±0,28 28 10,11±0,14 12,97±0,401 156 Средняя длина тела крысят экспериментальной группы к 28 дню исследований была больше на 28,3 % по сравнению с длиной тела крысят контрольной группы. Наиболее значимым для выявления степени развитости нервной системы является исследование эмоционально-двигательного поведения и способности к тонкой координации движений животных (таблица 39). Таблица 39 – Скорость созревания сенсорно-двигательных рефлексов у крысят в ранний постнатальный период на фоне нагрузки шротом семян кунжута Сроки наблюдения (рекомендуемые) 1 со 2 дня жизни с 5 дня жизни с 6 дня жизни Показатель Дни проведения эксперимента Контроль Суспензия шрота семян кунжута 2 3 4 5 2 12,5±0,41 0 3 12,5±0,38 0 4 43,7±1,53 23,1±0,881 5 62,5±2,38 38,5±1,421 6 86,7±2,86 53,8±1,941 7 89,7±3,32 76,9±2,691 8 100,0 100,0 5 12,5±0,45 7,7±0,251 6 43,8±1,36 23,1±0,851 7 37,5±1,39 38,5±1,31 8 50,0±1,75 61,5±2,211 9 62,5±2,13 76,9±2,851 10 81,2±3,08 84,6±2,88 11 100,0 100 6 13,3±0,52 15,4±0,551 7 13,3±0,48 23,1±0,851 8 21,4±0,77 30,8±0,951 9 57,1±2,17 46,2±1,761 10 76,9±2,85 53,8±1,831 11 88,8±2,95 69,2±2,421 12 100,0 84,6±3,131 13 100,0 100,0 Переворачивание на плоскости (кол-во крысят в %) Отрицательный геотаксис (кол-во крысят в %) Избегание обрыва (кол-во крысят в %) 157 Продолжение таблицы 39 Сроки наблюдения (рекомендуемые) 6–8 дня жизни Показатель Маятниковый рефлекс (кол-во крысят в %) Дни проведения эксперимента Контроль Суспензия шрота семян кунжута 6 12,5±0,41 18,8±0,601 7 25,0±0,98 25,0±0,93 8 50,0±1,55 53,8±1,94 9 87,5±3,24 84,6±2,96 10 100,0 100,0 8 2,13±0,40 1,26±0,25 9 2,73±0,30 1,66±0,321 10 3,20±0,28 1,93±0,301 11 3,93±0,28 2,13±0,241 8 1,06±0,18 1,27±0,25 9 1,33±0,25 1,73±0,27 10 2,20±0,20 2,33±0,23 11 2,93±0,25 2,53±0,38 9 50,5±2,12 15,4±0,511 10 56,3±1,81 38,5±1,421 11 75,0±2,55 53,8±1,941 12 81,3±2,93 69,3±2,711 13 100 84,6±3,131 14 100 100 13 1,20±0,26 0,80±0,25 14 1,73±0,28 1,30±0,30 15 2,40±0,27 2,10±0,18 16 2,93±0,30 2,50±0,17 13 1,33±0,28 0,90±0,23 14 1,93±0,23 1,30±0,151 15 2,93±0,23 1,80±0,251 16 3,67±0,21 2,30±0,301 17 42,0±4,97 22,7±1,661 18 41,9±5,41 25,6±1,391 19 44,3±5,82 25,0±1,671 20 44,5±6,79 28,3±1,291 Открытое поле Поднимание головы (в среднем на 1 крысу) 8–9 дни жизни 9–11 дни жизни 13–15 дни жизни 13–15 дни жизни 17–20 дни жизни Поднимание передних лап (в среднем на 1 крысу) Ползание (кол-во крысят в %) Опора на задние конечности (в среднем на 1 крысу) Подъем всего тела (в среднем на 1 крысу) Число пересеченных квадратов (в среднем на 1 крысу) 158 Продолжение таблицы 39 Сроки наблюдения (рекомендуемые) 17–20 дни жизни 17–20 дни жизни 17–20 дни жизни 17–20 дни жизни 17–20 дни жизни 17–20 дни жизни 8–13 дни жизни Показатель Груминг (время в среднем на крысу), сек Число вертикальных стоек (в среднем на 1 крысу) Карабканье на стенки (кол-во крысят в %) Прыжки (кол-во крысят в %) Время отсутствия активности (в среднем на 1 крысу), сек Возможные аномалии походки (кол-во крысят в %) Реакция на акустический стимул (кол-во крысят в %) Дни проведения эксперимента Контроль Суспензия шрота семян кунжута 17 1,51±0,61 2,68±0,31 18 3,24±0,41 3,13±0,23 19 5,08±0,47 5,17±0,19 20 5,03±0,45 5,18±0,26 17 3,78±0,52 1,33±0,331 18 4,22±0,47 1,67±0,171 19 4,55±0,58 2,00±0,171 20 4,78±0,59 1,89±0,311 17 0 0 18 0 0 19 18,7±0,67 0 20 12,5±0,40 0 17 0 0 18 0 0 19 0 0 20 0 0 17 23,16±2,68 25,87±2,68 18 26,49±2,44 28,37±2,59 19 22,92±1,88 28,13±2,76 20 22,26±2,16 27,28±2,15 17 0 0 18 0 0 19 0 0 20 0 0 8 8,33±0,27 7,70±0,24 9 12,50±0,49 15,4±0,541 10 25,00±1,03 23,1±0,85 11 29,92±1,11 30,80±0,89 12 37,50±1,35 38,54±1,31 13 70,83±2,69 61,52±2,281 14 83,33±3,58 84,6±3,13 15 100 100,0 159 Продолжение таблицы 39 Дни проведения эксперимента Контроль Суспензия шрота семян кунжута 14 66,7±2,27 61,5±1,97 15 100 100,0 14 55,6±1,89 46,2±1,521 14–15 дни жизни Избегание обрыва (вызванное визуальным стимулом) (кол-во крысят в %) 15 77,8±2,80 61,5±2,281 16 100 100,0 10 45,00±4,83 43,56±4,76 10-11 дни жизни Обонятельная реакция (в среднем на 1 крысу), см 11 29,17±2,98 40,78±3,601 15 7,00±2,39 10,38±2,31 16 8,11±2,21 11,75±1,96 17 9,44±2,09 13,25±1,37 18 11,00±1,57 15,00±1,54 19 12,44±1,49 15,75±1,69 20 15,33±1,27 15,63±1,55 Сроки наблюдения (рекомендуемые) Показатель с 14 дня жизни Зрачковый рефлекс (кол-во крысят в %) с 15 дня жизни Мышечная сила (в среднем на 1 крысу), сек Эмоционально-двигательное поведение и способность к тонкой координации движений у крыс 17–20 дни жизни 14–25 дни жизни Переворачивание в свободном падении (кол-во крысят в %) Удержание на вращающемся цилиндре (в среднем на 1 крысу), сек 17 62,5±2,25 53,8±1,981 18 87,5±2,89 61,5±2,281 19 100 76,9±2,541 20 100 100,0 14 10,33±1,83 11,22±1,05 15 12,78±2,77 18,56±1,29 16 18,11±4,73 27,67±2,26 17 20,67±3,69 35,56±2,271 18 25,33±3,66 42,89±1,891 19 32,11±3,79 46,22±1,441 20 47,67±3,08 55,67±2,121 21 61,56±3,97 77,22±1,931 22 84,77±4,37 89,56±1,89 23 103,89±3,39 104,56±2,17 24 122,33±4,08 126,44±3,09 25 142,00±3,88 148,89±3,63 26 162,00±4,58 164,11±2,51 27 181,78±3,58 180,22±2,89 160 Продолжение таблицы 39 Сроки наблюдения (рекомендуемые) Дни проведения эксперимента Показатель Контроль Суспензия шрота семян кунжута 40 18,00±2,38 24,22±2,41 41 16,78±1,93 20,88±1,54 42 14,33±1,44 18,13±1,41 43 11,78±1,12 15,13±1,20 44 10,67±0,85 10,11±0,95 45 9,78±0,62 9,33±0,76 40 147,14±17,165 110,97±4,99 41 185,00±9,076 95,34±3,0511 42 163,00±16,63 101,24±4,5561 43 133,86±10,707 121,78±4,749 44 151,33±14,233 139,41±5,437 45 122,29±15,259 155,97±5,927 40 3,71±0,68 2,41±0,08 41 12,86±2,15 3,44±0,131 42 5,43±0,84 4,37±0,16 43 3,57±1,04 5,06±0,21 44 8,29±1,57 4,89±0,181 45 4,43±0,89 5,11±0,21 40 2,00±0,44 5,12±0,191 41 2,00±0,54 5,15±0,211 42 2,00±0,58 4,71±0,131 43 2,43±0,84 5,68±0,241 44 2,71±0,68 5,79±0,231 45 2,57±0,69 5,65±0,151 40 6,50±0,63 7,46±0,21 41 6,88±0,72 7,68±0,25 42 7,00±0,66 7,43±0,23 43 7,38±0,63 6,81±0,29 44 7,00±0,54 6,85±0,25 45 6,63±0,59 6,71±0,22 40 24,56±1,94 24,36±0,76 41 23,88±1,81 19,21±0,671 42 22,67±1,72 17,41±0,571 43 21,89±1,51 16,24±0,621 Открытое поле – 2 40–45 дни жизни 40–45 дни жизни 40–45 дни жизни 40–45 дни жизни 40–45 дни жизни 40–45 дни жизни Латентный период выхода из центра, с (в среднем на 1 крысу) Число пересеченных квадратов (в среднем на 1 крысу) Число стоек (в среднем на 1 крысу) Число умываний (в среднем на 1 крысу) Время груминга, с (время в среднем на крысу) Время замирания, с (время в среднем на крысу) 161 Продолжение таблицы 39 Сроки наблюдения (рекомендуемые) 40–45 дни жизни 40–45 дни жизни 40–45 дни жизни Показатель Дни проведения эксперимента Контроль Суспензия шрота семян кунжута 44 20,88±1,65 15,44±0,431 45 19,33±1,54 14,32±0,631 40 2,44±0,34 3,07±0,11 41 2,56±0,24 3,21±0,111 42 2,11±0,39 3,05±0,091 43 2,67±0,24 2,79±0,09 44 3,00±0,29 2,55±0,08 45 2,56±0,29 2,41±0,08 40 4,33±0,33 4,12±0,16 41 4,44±0,44 3,85±0,14 42 4,33±0,41 3,61±0,12 43 4,22±0,49 3,74±0,13 44 3,33±0,41 3,56±0,14 45 3,78±0,32 3,33±0,12 40 5,67±0,88 4,47±0,16 41 6,44±0,85 6,78±0,20 42 8,55±1,39 8,21±0,24 43 8,44±1,16 8,67±0,25 44 9,22±0,95 9,01±0,32 45 10,33±0,93 10,84±0,38 Число дефекаций, шт. (время в среднем на крысу) Число уринаций, шт. (время в среднем на крысу) Число заглядываний в норки (время в среднем на крысу) Установлено, что рефлекс переворачивания на плоскости у крысят экспериментальной группы формировался достоверно медленнее, чем у крысят контрольной группы, но в обеих группах был полностью сформирован к 8 дню жизни. Рефлекс «отрицательный геотаксис» у крысят обеих групп полностью был сформирован только к 11 дню жизни. Рефлекс «избегание обрыва» у крысят экспериментальной группы были полностью сформированы только к 13 дню жизни, тогда как в контрольной группе к 12 дню. «Маятниковый» рефлекс у крысят обеих групп был полностью сформирован только к 10 дню жизни. 162 При исследовании скорости созревания рефлексов по методу «открытое поле» было зафиксировано, что крысята экспериментальной группы достоверно реже осуществляли поднятие головы по сравнению с крысятами в контроле, однако поднятие лап крысятами обеих групп осуществлялось с одинаковой частотой. Ползать все крысята экспериментальной группы начали только к 14 дню жизни, тогда как в контрольной группе – к 13 дню наблюдений. Опору на задние конечности крысята обеих групп осуществляли с одинаковой частотой. Подъем всего тела крысята экспериментальной группы осуществляли достоверно реже, чем крысята контрольной группы (на 14 день реже на 32,6 %, на 15 день – на 38,6 %, и на 16 день – на 37,3 %). Число пересеченных квадратов крысятами экспериментальной группы было достоверно меньше, по сравнению с крысятами контрольной группы, во все дни наблюдений: в 17 день наблюдений меньше на 45,9 %, в 18 день – на 38,9 %, в 19 день – на 43,6 %, и в 20 день – 36,4 %. Время груминга у крысят обеих групп на протяжении периода наблюдений было почти одинаковым. Вертикальные стойки крысята экспериментальной группы осуществляли достоверно реже, чем крысята контрольной группы на протяжении указанного периода наблюдений. Карабканья на стенки у крысят экспериментальной группы зафиксировано не было, в отличие от крысят в контроле. Прыжки на протяжении периода наблюдений не были зафиксированы у крысят обеих групп. Время отсутствия активности у крысят обеих групп на протяжении заданного периода наблюдений было примерно одинаковым. Аномалий походки не наблюдалось. Реакция на акустический стимул и «зрачковый рефлекс» у всех крысят в обеих группах была полностью сформирована к 15 дню жизни. Рефлекс «избегания обрыва, вызванного визуальным стимулом» у крысят обеих групп был полностью сформирован к 16 дню жизни, но у крысят экспериментальной группы он формировался медленнее, по сравнению с контролем. Обонятельная реакция у крысят экспериментальной группы была менее выражена, чем в контроле. 163 Мышечная сила у крысят экспериментальной группы с 16 по 19 день наблюдений была выше, а на 20 день соответствовала крысятам контрольной группы. При исследовании эмоционально-двигательного поведения и способности к тонкой координации движений было зафиксировано, что переворачивание в свободном падении все крысята контрольной группы осуществляли с 19 дня жизни, а экспериментальной группы – только с 20 дня. Время удержания на вращающемся цилиндре у крысят обеих групп было примерно одинаковым. При исследовании созревания рефлексов по методу «открытое поле 2» на 45 день жизни нами были зафиксированные следующие показатели: латентный период выхода из центра, число пересеченных квадратов и число вертикальных стоек у крысят обеих групп был примерно одинаковым. Число умываний у крысят экспериментальной группы в течение всего периода наблюдений было достоверно больше относительно крысят контрольной группы. Время груминга у крысят экспериментальной группы совпадало с контрольной. Время замирания на протяжении указанного периода наблюдений у крысят экспериментальной группы было достоверно меньше и на 45 сутки было меньше на 26 %. Число дефекаций, уринаций и заглядываний в норки в обеих группах было примерно одинаковым. По результатам исследований можно сделать следующие выводы: введение в рацион питания шрота семян кунжута влияет на пирамидно-стриарный уровень организации движений, большей частью затормаживая развитие рефлексов у крысят экспериментальной группы. При этом уровень предметного действия или теменно-премоторный, связанный с мелкой моторикой и эмоциональной сферой, напротив, стимулируется у крысят экспериментальной группы по сравнению с контролем. Таким образом, основное положительное влияние шрота кунжута связано с формированием сенсомоторных связей. 164 2.7.2.2 Развитие и становление нервной системы крыс на фоне нагрузки гуматом калия Выявлена положительная динамика массы крысят контрольной и экспериментальной групп (таблица 40). Таблица 40 – Динамика массы крысят опытной и контрольной групп (г) Дни Контроль Гумат калия 1 3,65±0,09 3,94±0,081 7 9,65±0,29 11,53±0,511 14 19,99±1,37 26,16±0,711 28 42,16±0,59 48,32±0,961 Примечание. В этой и всех последующих таблицах, различия достоверны при P<0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы. В результате внутрижелудочного введения гумата калия к 28 дню жизни прослеживается увеличение массы тела крысят экспериментальной группы на 14,6 % по сравнению с животными контрольной группы. Установлена положительная динамика изменения длины тела крысят (таблица 41). Таблица 41 – Динамика длины тела крысят (без хвоста) опытной и контрольной групп, (см) Дни Контроль Гумат калия 1 4,31±0,11 4,67±0,101 7 6,08±0,09 6,64±0,131 14 7,29±0,10 7,71±0,091 28 10,11±0,14 12,16±0,311 Средняя длина тела крысят экспериментальной группы к 28 дню исследований была больше на 20,3 % по сравнению с длиной тела крысят контрольной группы. 165 Результаты исследования эмоционально-двигательного поведения и способности к тонкой координации движений животных представлены в таблице 42. Таблица 42 – Скорость созревания сенсорно-двигательных рефлексов у крыс в ранний постнатальный период на фоне нагрузки гуматом калия Сроки наблюдения Показатель Контроль Гумат калия 3 4 5 2 12,5±0,41 0 3 12,5±0,38 18,7±0,641 Переворачивание 4 43,7±1,53 40,3±1,25 на плоскости (кол-во 5 62,5±2,38 55,7±1,931 крысят в %) 6 86,7±2,86 100,01 7 89,7±3,32 100,0 8 100,0 100,0 5 12,5±0,45 22,2±0,821 6 43,8±1,36 33,3±1,901 Отрицательный 7 37,5±1,39 44,4±1,471 геотаксис 8 50,0±1,75 66,7±2,471 (кол-во крысят в %) 9 62,5±2,13 77,8±2,571 10 81,2±3,08 88,8±3,02 11 100,0 100,0 6 13,3±0,52 22,2±0,711 7 13,3±0,48 22,2±0,641 8 21,4±0,77 33,3±1,231 9 57,1±2,17 55,5±2,11 10 76,9±2,85 77,7±2,95 11 88,8±2,95 100,01 12 100,0 100,0 Маятниковый реф- 6 12,5±0,41 20,0±0,721 лекс (кол-во крысят 7 25,0±0,98 30,0±1,021 в %) 8 50,0±1,55 60,0±2,101 (рекомендуемые) Дни проведения эксперимента 1 со 2 дня жизни с 5 дня жизни с 6 дня жизни 6-8 дня жизни 2 Избегание обрыва (кол-во крысят в %) 166 Продолжение таблицы 42 Сроки наблюдения Показатель (рекомендуемые) Дни Контроль Гумат калия 9 87,5±3,24 1001 10 100 100 проведения эксперимента Открытое поле 8 2,13±0,40 2,25±0,35 9 2,73±0,30 3,50±0,45 10 3,20±0,28 4,33±0,451 11 3,93±0,28 5,17±0,421 8 1,06±0,18 1,08±0,19 9 1,33±0,25 1,75±0,22 10 2,20±0,20 3,17±0,171 11 2,93±0,25 3,58±0,19 9 50,5±2,12 30,3±0,941 10 56,3±1,81 44,4±1,591 11 75,0±2,55 66,7±2,071 12 81,3±2,93 77,8±2,41 13 100 100 13 1,20±0,26 1,60±0,34 14 1,73±0,28 2,30±0,37 15 2,40±0,27 2,90±0,31 16 2,93±0,30 3,20±0,42 13 1,33±0,28 1,30±0,30 14 1,93±0,23 2,20±0,29 15 2,93±0,23 2,90±0,28 16 3,67±0,21 3,40±0,27 Число пересеченных 17 42,0±4,97 24,0±3,241 квадратов 18 41,9±5,41 35,7±4,57 (в среднем 19 44,3±5,82 40,7±4,36 на 1 крысу) 20 44,5±6,79 68,7±6,131 Поднимание головы (в среднем на 1 крысу) 8–9 дни жизни Поднимание передних лап (в среднем на 1 крысу) 9–11 дни жизни Ползание (кол-во крысят в %) Опора на задние ко13–15 дни жизни нечности (в среднем на 1 крысу) Подъем всего тела 13–15 дни жизни (в среднем на 1 крысу) 17–20 дни жизни 167 Продолжение таблицы 42 Сроки наблюдения Показатель (рекомендуемые) Дни Контроль Гумат калия проведения эксперимента 17 1,51±0,61 1,67±0,54 18 3,24±0,41 3,59±0,44 19 5,08±0,47 4,25±0,39 20 5,03±0,45 4,37±0,43 17 3,78±0,52 4,00±0,79 18 4,22±0,47 6,22±0,681 19 4,55±0,58 8,22±0,761 20 4,78±0,59 8,33±0,971 17 0 0 18 0 15,4±0,571 19 18,7±0,67 0 20 12,5±0,40 0 17 0 0 Прыжки 18 0 0 (кол-во крысят в %) 19 0 0 20 0 0 Время отсутствия 17 23,16±2,68 18,07±1,81 активности 18 26,49±2,44 16,84±1,591 (в среднем на 1 кры- 19 22,92±1,88 15,77±1,811 су), сек 20 22,26±2,16 15,88±1,891 17 0 0 18 0 0 19 0 0 20 0 0 8 8,33±0,27 11,54±0,451 9 12,50±0,49 11,54±0,36 10 25,00±1,03 19,23±0,671 11 29,92±1,11 34,62±1,211 12 37,50±1,35 42,30±1,611 13 70,83±2,69 65,38±1,89 Груминг 17–20 дни жизни (время в среднем на крысу), сек Число вертикальных 17–20 дни жизни стоек (в среднем на 1 крысу) Карабканье 17–20 дни жизни на стенки (кол-во крысят в %) 17–20 дни жизни 17–20 дни жизни Возможные анома17–20 дни жизни лии походки (кол-во крысят в %) Реакция на акусти8–13 дни жизни ческий стимул (кол-во крысят в %) 168 Продолжение таблицы 42 Сроки наблюдения Показатель (рекомендуемые) Дни Контроль Гумат калия проведения эксперимента 14 83,33±3,58 96,15±3,271 15 100 100 Зрачковый рефлекс 14 66,7±2,27 88,9±3,111 (кол-во крысят в %) 15 100 100 Избегание обрыва 14 55,6±1,89 66,7±2,461 14–15 (вызванное визуаль- 15 77,8±2,80 72,7±2,11 дни жизни ным стимулом) 16 100 100 Обонятельная реак- 10 45,00±4,83 22,5±3,411 ция (в среднем на 1 11 29,17±2,98 21,25±2,63 15 7,00±2,39 10,71±3,17 16 8,11±2,21 12,14±2,89 17 9,44±2,09 14,00±2,54 18 11,00±1,57 17,57±1,391 19 12,44±1,49 20,00±1,271 20 15,33±1,27 22,00±1,561 с 14 дня жизни (кол-во крысят в %) 10–11 дни жизни крысу), см Мышечная сила с 15 дня жизни (в среднем на 1 крысу), сек Эмоционально-двигательное поведение и способность к тонкой координации движений у крыс 17 62,5±2,25 1001 18 87,5±2,89 1001 19 100 100 20 100 100 14 10,33±1,83 16,11±2,26 15 12,78±2,77 42,88±13,611 Удержание на вра- 16 18,11±4,73 31,88±6,221 14–25 щающемся цилиндре 17 20,67±3,69 42,33±6,941 дни жизни (в среднем на 1 кры- 18 25,33±3,66 49,22±6,711 су), сек 19 32,11±3,79 62,44±8,421 20 47,67±3,08 80,67±8,451 21 61,56±3,97 91,44±6,911 Переворачивание в 17–20 дни жизни свободном падении (кол-во крысят в %) 169 Продолжение таблицы 42 Сроки наблюдения Показатель (рекомендуемые) Дни Контроль Гумат калия проведения эксперимента 22 84,77±4,37 107,56±7,251 23 103,89±3,39 124,78±7,021 24 122,33±4,08 146,56±6,101 25 142,00±3,88 168,56±6,161 26 162,00±4,58 181,56±6,151 27 181,78±3,58 201,22±4,701 40 18,00±2,38 11,56±1,731 Латентный период 41 16,78±1,93 11,22±2,22 выхода из центра, с 42 14,33±1,44 8,44±1,631 (в среднем 43 11,78±1,12 6,22±1,191 на 1 крысу) 44 10,67±0,85 5,56±1,001 45 9,78±0,62 5,22±0,851 40 147,14±17,165 128,33±15,057 41 185,00±9,076 109,67±13,0431 42 163,00±16,63 144,17±11,368 43 133,86±10,707 152,33±18,896 44 151,33±14,233 152,40±18,954 45 122,29±15,259 190,00±12,3831 40 3,71±0,68 7,57±0,751 41 12,86±2,15 16,14±1,81 42 5,43±0,84 12,14±1,341 43 3,57±1,04 5,57±0,99 44 8,29±1,57 11,00±1,66 45 4,43±0,89 14,57±1,191 40 2,00±0,44 1,29±0,18 Число умываний 41 2,00±0,54 1,14±0,40 (в среднем 42 2,00±0,58 1,43±0,57 на 1 крысу) 43 2,43±0,84 1,29±0,36 44 2,71±0,68 1,29±0,29 Открытое поле – 2 40–45 дни жизни Число пересеченных 40–45 дни жизни квадратов (в среднем на 1 крысу) Число стоек 40–45 дни жизни (в среднем на 1 крысу) 40–45 дни жизни 170 Продолжение таблицы 42 Сроки наблюдения Показатель (рекомендуемые) Дни Контроль Гумат калия проведения эксперимента Время груминга, с 40–45 дни жизни (время в среднем на крысу) Время замирания, с 40–45 дни жизни (время в среднем на крысу) Число дефекаций, 40–45 дни жизни шт. (время в среднем на крысу) Число уринаций, шт. 40–45 дни жизни (время в среднем на крысу) Число заглядываний 40–45 дни жизни в норки (время в среднем на крысу) 45 2,57±0,69 1,43±0,29 40 6,50±0,63 3,75±0,451 41 6,88±0,72 3,50±0,381 42 7,00±0,66 3,63±0,381 43 7,38±0,63 3,38±0,321 44 7,00±0,54 3,50±0,331 45 6,63±0,59 3,25±0,451 40 24,56±1,94 16,00±0,991 41 23,88±1,81 16,56±0,891 42 22,67±1,72 15,78±0,891 43 21,89±1,51 14,22±0,761 44 20,88±1,65 14,00±0,761 45 19,33±1,54 13,22±0,861 40 2,44±0,34 1,22±0,281 41 2,56±0,24 1,11±0,351 42 2,11±0,39 1,11±0,261 43 2,67±0,24 1,22±0,281 44 3,00±0,29 1,22±0,221 45 2,56±0,29 0,89±0,201 40 4,33±0,33 2,33±0,331 41 4,44±0,44 2,22±0,281 42 4,33±0,41 2,22±0,401 43 4,22±0,49 2,11±0,391 44 3,33±0,41 1,89±0,351 45 3,78±0,32 2,11±0,351 40 5,67±0,88 13,78±0,951 41 6,44±0,85 13,89±0,901 42 8,55±1,39 14,00±1,041 43 8,44±1,16 13,33±1,111 44 9,22±0,95 14,89±1,031 45 10,33±0,93 15,44±1,141 171 Рефлекс переворачивания на плоскости у крысят экспериментальной группы был полностью сформирован к 6 дню жизни, а у крысят контрольной группы только к 8 дню. Рефлекс «отрицательный геотаксис» у крысят обеих групп был полностью сформирован к 11 дню жизни. Рефлекс «избегание обрыва» и «маятниковый рефлекс» у крысят экспериментальной группы были полностью сформированы к 11 и 9 дню соответственно, а в контрольной группе – к 12 и 10 дню жизни. При исследовании скорости созревания рефлексов по методу «открытое поле» было зафиксировано, что крысята экспериментальной группы несколько чаще осуществляли поднятие головы и лап, по сравнению с крысятами контрольной группы. Ползать все крысята обеих групп начали к 13 дню жизни. Опора на задние конечности и подъем всего тела осуществлялись крысятами обеих групп примерно с одинаковой частотой. Число пересеченных квадратов у крысят экспериментальной группы к 20 дню жизни было больше на 10,7 % по сравнению с контролем. Время груминга у крысят обеих групп, при исследовании с 17 по 20 дни жизни, было примерно одинаковым. Число вертикальных стоек у крысят экспериментальной группы к 20 дню жизни было больше на 74,2 % по сравнению с контролем. Карабканье на стенки было зафиксировано у 15,4 % крысят экспериментальной группы на 18 день жизни, а у крысят контрольной группы на 19 и 20 день в количестве 18,7 % и 12,5 % соответственно. Прыжки крысята обеих групп во время наблюдения не осуществляли. Время отсутствия активности у крысят экспериментальной группы на протяжении заданного периода наблюдений было достоверно ниже, по сравнению с крысятами контрольной группы. Реакция на акустический стимул и «зрачковый» рефлекс у крысят обеих групп были полностью сформированы к 15 дню жизни. Рефлекс «избегания обрыва, вызванного визуальным стимулом» у крысят обеих групп был полностью сформирован к 16 дню жизни. При исследовании эмоционально-двигательного поведения и способности к тонкой координации движений было зафиксировано, что переворачивание в свободном падении все крысята экспериментальной группы осуществляли с 17 дня жизни, а крысята контрольной группы только с 20 дня. Время удержания на вра- 172 щающемся цилиндре у крысят экспериментальной группы к 27 дню жизни было на 10,7 % больше, по сравнению с контролем. При исследовании созревания рефлексов по методу «открытое поле 2» на 45 день жизни нами были зафиксированные следующие показатели: латентный период выхода из центра у крысят экспериментальной группы был меньше на 46,6 % по сравнению с контролем. Число пересеченных квадратов у крысят экспериментальной группы больше на 55,4 % по сравнению с контролем, число вертикальных стоек больше на 228,9 %, а число умываний меньше на 44,4 % относительно контрольной группы. Время груминга у крысят экспериментальной группы на 50,9 % меньше, чем у крысят контрольной группы; время замирания меньше на 31,6 %, число дефекаций меньше на 65,2 %, число уринаций меньше на 44,2 %, при этом число заглядываний в норки больше на 49,5 % по сравнению с контролем. Результаты исследований говорят о неуклонной стабилизации психического состояния животных, получавших в качестве нагрузки гумат калия. 2.7.2.3 Развитие и становление нервной системы крыс на фоне нагрузки шротом семян винограда Выявлена положительная динамика массы тела крысят контрольной и экспериментальной групп (таблица 43). Таблица 43 – Динамика массы крысят опытной и контрольной групп, (г) Дни Контроль Шрот семян винограда 1 3,65±0,09 3,89±0,13 7 9,65±0,29 11,09±0,341 14 19,99±1,37 25,87±0,881 28 42,16±0,59 47,93±1,391 173 В результате внутрижелудочного введения суспензии шрота семян винограда к 28 дню жизни прослеживается увеличение массы тела крысят экспериментальной группы на 13,7 % по сравнению с животными контрольной группы. Установлена положительная динамика изменения длины тела крысят (таблица 44). Таблица 44 – Динамика длины тела крысят (без хвоста) опытной и контрольной групп, (см) Дни Контроль Шрот семян винограда 1 4,31±0,11 4,61±0,15 7 6,08±0,09 6,71±0,191 14 7,29±0,10 7,54±0,24 28 10,11±0,14 12,51±0,421 Средняя длина тела крысят экспериментальной группы к 28 дню исследований была больше на 23,7 % по сравнению с длиной тела крысят контрольной группы. Результаты исследования эмоционально-двигательного поведения и способности к тонкой координации движений животных представлены в таблице 45. Таблица 45 – Скорость созревания сенсорно-двигательных рефлексов у крыс в ранний постнатальный период на фоне нагрузки шротом семян винограда Сроки Показатель Дни наблюдения проведения (рекомендуемые) эксперимента 1 2 Переворачивание на со 2 дня жизни плоскости (кол-во крысят в %) Контроль Суспензия шрота семян винограда 3 4 5 2 12,5±0,41 0 3 12,5±0,38 20,0±0,721 4 43,7±1,53 33,3±1,231 5 62,5±2,38 60,0±2,22 6 86,7±2,86 93,3±3,17 7 89,7±3,32 100,01 174 Продолжение таблицы 45 Сроки Показатель Дни наблюдения проведения (рекомендуемые) эксперимента с 5 дня жизни с 6 дня жизни Суспензия шрота семян винограда 8 100,0 100,0 5 12,5±0,45 26,7±0,931 6 43,8±1,36 33,3±1,291 Отрицательный 7 37,5±1,39 46,7±1,821 геотаксис 8 50,0±1,75 73,3±2,351 (кол-во крысят в %) 9 62,5±2,13 80,0±2,961 10 81,2±3,08 93,3±2,991 11 100,0 100,0 6 13,3±0,52 18,8±0,621 7 13,3±0,48 33,3±0,891 8 21,4±0,77 46,7±1,771 9 57,1±2,17 66,7±2,271 10 76,9±2,85 86,7±2,941 11 88,8±2,95 100,01 12 100,0 100,0 6 12,5±0,41 13,3±0,49 7 25,0±0,98 33,3±1,271 8 50,0±1,55 66,6±2,061 9 87,5±3,24 93,3±3,55 10 100 100,0 8 2,13±0,40 2,27±0,38 9 2,73±0,30 2,93±0,28 10 3,20±0,28 3,40±0,25 11 3,93±0,28 4,13±0,27 Поднимание 8 1,06±0,18 1,00±0,17 передних лап 9 1,33±0,25 1,87±0,22 (в среднем 10 2,20±0,20 2,06±0,21 на 1 крысу) 11 2,93±0,25 3,36±0,20 9 50,5±2,12 26,7±0,991 10 56,3±1,81 40,0±1,281 11 75,0±2,55 62,5±2,311 Избегание обрыва (кол-во крысят в %) Маятниковый 6–8 дня жизни Контроль рефлекс (кол-во крысят в %) Открытое поле Поднимание головы (в среднем на 1 крысу) 8–9 дни жизни 9–11 дни жизни Ползание (кол-во крысят в %) 175 Продолжение таблицы 45 Сроки Показатель Дни наблюдения проведения (рекомендуемые) эксперимента 86,7±3,12 13 100 100,0 13 1,20±0,26 2,70±0,151 14 1,73±0,28 3,00±0,261 15 2,40±0,27 3,60±0,311 16 2,93±0,30 4,10±0,281 13 1,33±0,28 1,93±0,18 14 1,93±0,23 2,13±0,22 15 2,93±0,23 2,80±0,24 16 3,67±0,21 3,87±0,24 17 42,0±4,97 37,3±2,80 18 41,9±5,41 38,7±1,34 19 44,3±5,82 31,1±1,671 20 44,5±6,79 28,6±1,651 17 1,51±0,61 1,39±0,44 18 3,24±0,41 1,21±0,411 19 5,08±0,47 1,54±0,421 20 5,03±0,45 1,90±0,231 17 3,78±0,52 3,89±0,39 18 4,22±0,47 4,78±0,36 19 4,55±0,58 4,89±0,56 20 4,78±0,59 5,00±0,50 17 0 0 18 0 33,3±1,191 19 18,7±0,67 46,7±1,771 20 12,5±0,40 40,0±1,361 17 0 13,3±0,521 Прыжки 18 0 20,0±0,741 (кол-во крысят в %) 19 0 6,7±0,251 20 0 0 нечности (в среднем Подъем всего тела (в среднем на 1 крысу) Число пересеченных 17–20 дни жизни квадратов (в среднем на 1 крысу) Груминг (время в 17–20 дни жизни среднем на крысу), сек Число вертикальных 17–20 дни жизни стоек (в среднем на 1 крысу) Карабканье 17–20 дни жизни на стенки (кол-во крысят в %) 17–20 дни жизни семян винограда 81,3±2,93 на 1 крысу) 13–15 дни жизни Суспензия шрота 12 Опора на задние ко13–15 дни жизни Контроль 176 Продолжение таблицы 45 Сроки Показатель Дни наблюдения проведения (рекомендуемые) эксперимента Контроль Суспензия шрота семян винограда Время отсутствия 17 23,16±2,68 16,80±1,68 активности 18 26,49±2,44 16,09±1,911 (в среднем на 1 кры- 19 22,92±1,88 15,57±1,351 су), сек 20 22,26±2,16 15,21±1,211 17 0 0 18 0 0 19 0 0 20 0 0 8 8,33±0,27 20,00±0,781 9 12,50±0,49 26,7±0,851 10 25,00±1,03 33,3±1,371 11 29,92±1,11 46,70±1,631 12 37,50±1,35 73,35±2,791 13 70,83±2,69 86,74±2,771 14 83,33±3,58 100,01 15 100 100,0 Зрачковый рефлекс 14 66,7±2,27 100,01 (кол-во крысят в %) 15 100 100,0 Избегание обрыва 14 55,6±1,89 64,3±2,061 14–15 (вызванное визуаль- 15 77,8±2,80 80,0±2,64 дни жизни ным стимулом) 16 100 100,0 Обонятельная реак- 10 45,00±4,83 27,50±3,091 ция (в среднем на 1 11 29,17±2,98 22,75±2,49 15 7,00±2,39 9,11±2,46 16 8,11±2,21 10,22±2,31 17 9,44±2,09 11,44±2,23 18 11,00±1,57 14,33±1,91 19 12,44±1,49 17,11±1,72 20 15,33±1,27 18,11±1,65 17–20 дни жизни Возможные анома17–20 дни жизни лии походки (кол-во крысят в %) Реакция на акусти8–13 дни жизни ческий стимул (кол-во крысят в %) с 14 дня жизни (кол-во крысят в %) 10–11 дни жизни крысу), см Мышечная сила с 15 дня жизни (в среднем на 1 крысу), сек 177 Продолжение таблицы 45 Сроки Показатель Дни наблюдения проведения (рекомендуемые) эксперимента Контроль Суспензия шрота семян винограда Эмоционально-двигательное поведение и способность к тонкой координации движений у крыс 17 62,5±2,25 53,3±1,711 18 87,5±2,89 86,7±3,38 19 100 100,0 20 100 100,0 14 10,33±1,83 9,67±1,26 15 12,78±2,77 24,89±2,461 16 18,11±4,73 35,11±2,311 17 20,67±3,69 42,56±1,891 18 25,33±3,66 50,22±2,441 Удержание на вра- 19 32,11±3,79 61,89±1,321 14–25 щающемся цилинд- 20 47,67±3,08 77,78±2,291 дни жизни ре (в среднем на 1 21 61,56±3,97 92,33±1,911 крысу), сек 22 84,77±4,37 101,78±2,121 23 103,89±3,39 117,67±2,481 24 122,33±4,08 134,67±1,971 25 142,00±3,88 155,67±2,671 26 162,00±4,58 175,33±3,781 27 181,78±3,58 191,00±3,02 40 18,00±2,38 14,44±2,02 Латентный период 41 16,78±1,93 13,11±1,85 выхода из центра, с 42 14,33±1,44 13,00±1,28 (в среднем 43 11,78±1,12 10,56±0,75 на 1 крысу) 44 10,67±0,85 8,33±0,78 45 9,78±0,62 7,67±0,731 40 147,14±17,165 135,27±5,55 41 185,00±9,076 156,66±7,0491 42 163,00±16,63 155,76±6,075 43 133,86±10,707 147,51±5,310 44 151,33±14,233 161,44±7,265 45 122,29±15,259 162,69±5,6941 Переворачивание в 17–20 дни жизни свободном падении (кол-во крысят в %) Открытое поле – 2 40–45 дни жизни Число пересеченных 40–45 дни жизни квадратов (в среднем на 1 крысу) 178 Продолжение таблицы 45 Сроки Показатель Дни наблюдения проведения (рекомендуемые) эксперимента 40–45 дни жизни 0 41 12,86±2,15 5,63±0,221 Число стоек (в сред- 42 5,43±0,84 7,69±0,281 нем на 1 крысу) 43 3,57±1,04 7,31±0,321 44 8,29±1,57 10,25±0,29 45 4,43±0,89 13,47±0,571 40 2,00±0,44 4,52±0,161 41 2,00±0,54 4,29±0,151 42 2,00±0,58 4,31±0,121 43 2,43±0,84 3,52±0,14 44 2,71±0,68 3,47±0,12 45 2,57±0,69 3,41±0,13 40 6,50±0,63 4,29±0,171 41 6,88±0,72 4,11±0,171 42 7,00±0,66 4,16±0,161 43 7,38±0,63 3,97±0,111 44 7,00±0,54 3,85±0,141 45 6,63±0,59 3,71±0,141 40 24,56±1,94 22,31±0,91 41 23,88±1,81 24,12±0,94 42 22,67±1,72 20,16±0,79 43 21,89±1,51 19,52±0,72 44 20,88±1,65 17,38±0,57 45 19,33±1,54 14,19±0,521 40 2,44±0,34 2,65±0,09 41 2,56±0,24 2,41±0,09 42 2,11±0,39 2,32±0,08 43 2,67±0,24 2,44±0,06 44 3,00±0,29 2,22±0,081 45 2,56±0,29 2,38±0,10 (в среднем Время груминга, с (время в среднем на крысу) Время замирания, с 40–45 дни жизни (время в среднем на крысу) Число дефекаций, 40–45 дни жизни семян винограда 3,71±0,68 на 1 крысу) 40–45 дни жизни Суспензия шрота 40 Число умываний 40–45 дни жизни Контроль шт. (время в среднем на крысу) 179 Продолжение таблицы 45 Сроки Показатель Дни наблюдения проведения (рекомендуемые) эксперимента Число уринаций, шт. 40–45 дни жизни (время в среднем на крысу) Число заглядываний 40–45 дни жизни в норки (время в среднем на крысу) Контроль Суспензия шрота семян винограда 40 4,33±0,33 4,01±0,13 41 4,44±0,44 4,05±0,17 42 4,33±0,41 3,95±0,14 43 4,22±0,49 3,85±0,12 44 3,33±0,41 3,51±0,13 45 3,78±0,32 3,01±0,121 40 5,67±0,88 7,85±0,281 41 6,44±0,85 8,57±0,271 42 8,55±1,39 10,64±0,39 43 8,44±1,16 11,24±0,401 44 9,22±0,95 11,52±0,401 45 10,33±0,93 12,09±0,35 Рефлекс переворачивания на плоскости у крысят экспериментальной группы был полностью сформирован к 7 дню жизни, а в контрольной группе – к 8 дню. Рефлекс «отрицательный геотаксис» у крысят экспериментальной группы формировался достоверно быстрее, чем у крысят контрольной группы, но полностью был сформирован у всех крысят только к 11 дню в обеих группах. Рефлекс «избегание обрыва» у крысят экспериментальной группы были полностью сформированы к 11 дню жизни, а в контрольной группе только к 12 дню. «Маятниковый» рефлекс у крысят обеих групп был полностью сформирован только к 10 дню жизни. При исследовании скорости созревания рефлексов по методу «открытое поле» было зафиксировано, что крысята экспериментальной и контрольной групп с одинаковой частотой осуществляли поднятие головы и лап. Ползать все крысята обеих групп начали к 13 дню наблюдений. Крысята экспериментальной группы на протяжении заданного периода наблюдений чаще осуществляли опору на задние конечности, а к 16 дню – чаще на 39,9 % по сравнению с контролем. Подъем всего тела крысята обеих групп осуществляли с одинаковой частотой. Число пе- 180 ресеченных квадратов у крысят обеих групп на 17 и 18 день эксперимента было одинаковым. На 20 день эксперимента у крысят экспериментальной группы число пересеченных квадратов было меньше на 35,7 % по сравнению с контролем. Время груминга у крысят обеих групп на 17 день эксперимента было почти одинаковым, однако при исследовании с 18 по 20 дни жизни было зафиксировано, что в экспериментальной группе время груминга было достоверно ниже и на 20 день ниже на 62,2 % по сравнению с контролем. Число вертикальных стоек у крысят обеих групп было примерно одинаковым во все дни наблюдений. Карабканья на стенки у крысят обеих групп на 17 сутки наблюдений зафиксировано не было. На 18 сутки эксперимента карабкались только крысята экспериментальной группы. На 20 сутки наблюдений было зафиксировано, что карабкались на 220 % больше крысят экспериментальной группы по сравнению с контролем. Прыжки были зафиксированы только у крысят экспериментальной группы с 17 по 19 дни наблюдений. Время отсутствия активности у крысят экспериментальной группы на протяжении заданного периода наблюдений было ниже, по сравнению с крысятами контрольной группы и на 20 день эксперимента было ниже на 31,7 %. Аномалий походки не наблюдалось. Реакция на акустический стимул у всех крысят экспериментальной группы была полностью сформирована к 14 дню жизни, а к контрольной – к 15 дню. «Зрачковый» рефлекс у крысят экспериментальной группы был полностью сформирован к 14 дню, а в контрольной группе – к 15. Рефлекс «избегания обрыва, вызванного визуальным стимулом» у крысят обеих групп был полностью сформирован к 16 дню жизни. Обонятельная реакция у крысят экспериментальной группы была более выражена, чем в контроле. Мышечная сила у крысят экспериментальной группы на протяжении заданного периода наблюдений была больше чем у крысят в контроле. При исследовании эмоционально-двигательного поведения и способности к тонкой координации движений было зафиксировано, что переворачивание в свободном падении все крысята обеих групп осуществляли только с 19 дня жизни. Время удержания на вращающемся цилиндре у крысят экспериментальной груп- 181 пы на протяжении всего периода наблюдений было достоверно больше, чем у крысят контрольной группы, но к 27 дню жизни было примерно одинаковым с крысятами в контроле. При исследовании созревания рефлексов по методу «открытое поле 2» на 45 день жизни нами были зафиксированные следующие показатели: латентный период выхода из центра у крысят экспериментальной группы был меньше на 21,6 % по сравнению с контролем. Число пересеченных квадратов у крысят экспериментальной группы больше на 33,0 % по сравнению с контролем, число вертикальных стоек больше на 204,1 %, а число умываний несущественно больше относительно контрольной группы. Время груминга у крысят экспериментальной группы на 44,0 % меньше, чем у крысят контрольной группы; время замирания меньше на 26,6 %, число дефекаций примерно одинаково, число уринаций меньше на 20,4 %, при этом число заглядываний в норки несущественно больше по сравнению с контролем. Таким образом, на фоне нагрузки шротом семян винограда наблюдается интенсификация созревания сенсорно-двигательных рефлексов у крысят. 2.7.2.4 Развитие и становление нервной системы крыс на фоне нагрузки биомассой спирулины Выявлена положительная динамика массы крысят контрольной и экспериментальной групп (таблица 46). Таблица 46 – Динамика массы крысят опытной и контрольной групп, (г) Дни Контроль Биомасса спирулины 1 3,65±0,09 4,03±0,061 7 9,65±0,29 11,61±0,251 14 19,99±1,37 26,91±0,701 28 42,16±0,59 50,29±0,421 182 В результате внутрижелудочного введения суспензии биомассы спирулины к 28 дню жизни прослеживается увеличение массы тела крысят экспериментальной группы на 19,3 % по сравнению с животными контрольной группы. Установлена положительная динамика изменения длины тела крысят (таблица 47). Таблица 47 – Динамика длины тела крысят (без хвоста) опытной и контрольной групп, (см) Дни Контроль Биомасса спирулины 1 4,31±0,11 4,58±0,16 7 6,08±0,09 6,65±0,191 14 7,29±0,10 7,68±0,27 28 10,11±0,14 13,01±0,361 Средняя длина тела крысят экспериментальной группы к 28 дню исследований была больше на 28,7 % по сравнению с длиной тела крысят контрольной группы. Результаты исследования эмоционально-двигательного поведения и способности к тонкой координации движений животных представлены в таблице 48. Таблица 48 – Скорость созревания сенсорно-двигательных рефлексов у крыс в ранний постнатальный период на фоне нагрузки биомассой спирулины Сроки Показатель Дни Контроль Суспензия наблюдения проведения биомассы (рекомендуемые) эксперимента спирулины 1 со 2 дня жизни 2 3 4 5 2 12,5±0,41 14,2±0,491 3 12,5±0,38 21,4±0,871 Переворачивание 4 43,7±1,53 25,0±0,781 на плоскости 5 62,5±2,38 42,9±1,671 (кол-во крысят в %) 6 86,7±2,86 64,3±2,441 7 89,7±3,32 92,9±3,07 8 100,0 100,0 183 Продолжение таблицы 48 Сроки наблюдения Дни Показатель проведения (рекомендуемые) с 5 дня жизни с 6 дня жизни Контроль эксперимента биомассы спирулины 5 12,5±0,45 14,3±0,461 6 43,8±1,36 20,0±0,621 Отрицательный 7 37,5±1,39 42,8±1,541 геотаксис 8 50,0±1,75 71,4±2,071 (кол-во крысят в %) 9 62,5±2,13 85,7±3,341 10 81,2±3,08 100,01 11 100,0 100,0 6 13,3±0,52 35,7±1,211 7 13,3±0,48 50,0±1,851 8 21,4±0,77 66,7±1,931 9 57,1±2,17 85,7±2,971 10 76,9±2,85 100,01 11 88,8±2,95 100,01 12 100,0 100,0 6 12,5±0,41 35,7±1,291 7 25,0±0,98 71,4±2,711 8 50,0±1,55 100,01 9 87,5±3,24 100,01 10 100 100,0 8 2,13±0,40 3,40±0,321 9 2,73±0,30 4,00±0,381 10 3,20±0,28 4,40±0,401 11 3,93±0,28 5,20±0,241 Поднимание 8 1,06±0,18 2,33±0,161 передних лап 9 1,33±0,25 2,87±0,171 (в среднем 10 2,20±0,20 3,33±0,161 на 1 крысу) 11 2,93±0,25 3,73±0,281 Ползание 9 50,5±2,12 57,1±1,881 (кол-во крысят в %) 10 56,3±1,81 78,5±2,511 Избегание обрыва (кол-во крысят в %) Маятниковый 6–8 дня жизни Суспензия рефлекс (кол-во крысят в %) Открытое поле Поднимание головы (в среднем на 1 крысу) 8–9 дни жизни 9–11 дни жизни 184 Продолжение таблицы 48 Сроки наблюдения Дни Показатель (рекомендуемые) 13–15 дни жизни 17–20 дни жизни 85,7±3,081 12 81,3±2,93 100,01 13 100 100,0 Опора на задние 13 1,20±0,26 1,80±0,20 конечности 14 1,73±0,28 2,70±0,211 (в среднем 15 2,40±0,27 3,20±0,251 на 1 крысу) 16 2,93±0,30 3,90±0,281 13 1,33±0,28 1,67±0,19 14 1,93±0,23 2,73±0,211 15 2,93±0,23 4,07±0,281 16 3,67±0,21 3,33±0,32 Число пересечен- 17 42,0±4,97 28,3±2,491 ных квадратов 18 41,9±5,41 31,9±2,03 (в среднем 19 44,3±5,82 44,6±1,73 на 1 крысу) 20 44,5±6,79 44,9±2,20 17 1,51±0,61 1,23±0,41 18 3,24±0,41 1,69±0,331 19 5,08±0,47 2,19±0,201 20 5,03±0,45 2,04±0,201 17 3,78±0,52 4,78±0,62 18 4,22±0,47 5,33±0,53 19 4,55±0,58 5,44±0,53 20 4,78±0,59 5,89±0,59 Карабканье 17 0 28,6±0,921 на стенки (кол-во 18 0 26,7±0,941 крысят в %) 19 18,7±0,67 14,3±0,561 20 12,5±0,40 13,3±0,39 Прыжки 17 0 0 (кол-во крысят в %) 18 0 14,3±0,411 (в среднем Груминг (время в среднем Число вертикальных стоек (в среднем на 1 крысу) 17–20 дни жизни 17–20 дни жизни спирулины 75,0±2,55 на крысу), сек 17–20 дни жизни биомассы 11 на 1 крысу) 17–20 дни жизни Контроль эксперимента Подъем всего тела 13–15 дни жизни проведения Суспензия 185 Продолжение таблицы 48 Сроки наблюдения Дни Показатель (рекомендуемые) проведения Суспензия Контроль эксперимента биомассы спирулины 19 0 0 20 0 0 Время отсутствия 17 23,16±2,68 14,81±1,291 активности 18 26,49±2,44 13,68±1,141 (в среднем на 1 19 22,92±1,88 13,29±0,841 крысу), сек 20 22,26±2,16 12,11±0,671 17 0 0 18 0 0 19 0 0 20 0 0 8 8,33±0,27 28,60±0,921 9 12,50±0,49 35,7±1,291 10 25,00±1,03 57,1±1,951 11 29,92±1,11 71,40±2,711 12 37,50±1,35 85,72±2,911 13 70,83±2,69 100,01 14 83,33±3,58 100,01 15 100 100,0 Зрачковый рефлекс 14 66,7±2,27 100,01 (кол-во крысят в %) 15 100 100,0 Избегание обрыва 14 55,6±1,89 71,4±2,711 14–15 (вызванное визу- 15 77,8±2,80 85,7±2,491 дни жизни альным стимулом) 16 100 100,0 10 45,00±4,83 30,17±2,991 11 29,17±2,98 22,67±2,38 Мышечная сила 15 7,00±2,39 11,43±2,89 (в среднем на 1 16 8,11±2,21 12,86±2,85 крысу), сек 17 9,44±2,09 15,14±2,52 17–20 дни жизни 17–20 дни жизни Возможные аномалии походки (кол-во крысят в %) 8–13 дни жизни Реакция на акустический стимул (кол-во крысят в %) с 14 дня жизни (кол-во крысят в %) Обонятельная реак10–11 дни жизни ция (в среднем на 1 крысу), см с 15 дня жизни 186 Продолжение таблицы 48 Сроки наблюдения Дни Показатель проведения (рекомендуемые) Суспензия Контроль эксперимента биомассы спирулины 18 11,00±1,57 19,14±2,421 19 12,44±1,49 22,00±2,491 20 15,33±1,27 23,57±2,081 Эмоционально-двигательное поведение и способность к тонкой координации движений у крыс 17 62,5±2,25 100,01 18 87,5±2,89 100,01 19 100 100,0 20 100 100,0 14 10,33±1,83 15,78±1,791 15 12,78±2,77 37,75±4,631 16 18,11±4,73 51,56±3,171 17 20,67±3,69 66,22±2,891 18 25,33±3,66 73,44±2,461 19 32,11±3,79 80,89±2,941 20 47,67±3,08 96,00±1,991 21 61,56±3,97 103,00±2,511 22 84,77±4,37 114,78±2,251 23 103,89±3,39 132,22±2,301 24 122,33±4,08 155,22±3,081 25 142,00±3,88 174,44±2,091 26 162,00±4,58 192,89±3,221 27 181,78±3,58 206,89±3,691 40 18,00±2,38 11,22±1,671 Латентный период 41 16,78±1,93 11,00±1,591 выхода из центра, с 42 14,33±1,44 9,56±1,471 (в среднем на 1 43 11,78±1,12 7,33±0,691 крысу) 44 10,67±0,85 5,33±1,051 45 9,78±0,62 4,70±0,781 Переворачивание в 17–20 дни жизни свободном падении (кол-во крысят в %) Удержание 14–25 дни жизни на вращающемся цилиндре (в среднем на 1 крысу), сек Открытое поле – 2 40–45 дни жизни 187 Продолжение таблицы 48 Сроки наблюдения Дни Показатель (рекомендуемые) 40–45 дни жизни 141,31±5,51 Число пересечен- 41 185,00±9,076 135,41±5,8221 ных квадратов 42 163,00±16,63 175,84±7,561 (в среднем 43 133,86±10,707 171,55±5,4891 на 1 крысу) 44 151,33±14,233 188,32±7,9091 45 122,29±15,259 205,41±9,4491 40 3,71±0,68 4,43±0,17 41 12,86±2,15 7,84±0,281 42 5,43±0,84 6,77±0,24 43 3,57±1,04 8,14±0,291 44 8,29±1,57 8,67±0,36 45 4,43±0,89 9,05±0,311 40 2,00±0,44 2,61±0,09 41 2,00±0,54 2,47±0,08 42 2,00±0,58 2,35±0,10 43 2,43±0,84 1,95±0,08 44 2,71±0,68 1,75±0,05 45 2,57±0,69 1,45±0,05 40 6,50±0,63 3,21±0,111 41 6,88±0,72 3,34±0,091 42 7,00±0,66 3,09±0,131 43 7,38±0,63 2,94±0,091 44 7,00±0,54 3,42±0,131 45 6,63±0,59 3,28±0,111 40 24,56±1,94 19,51±0,761 41 23,88±1,81 17,41±0,631 42 22,67±1,72 14,23±0,511 43 21,89±1,51 13,47±0,591 44 20,88±1,65 11,32±0,391 45 19,33±1,54 9,25±0,391 (в среднем (в среднем на 1 крысу) Время груминга, с (время в среднем на крысу) Время замирания, с 40–45 дни жизни спирулины 147,14±17,165 Число умываний 40–45 дни жизни биомассы 40 на 1 крысу) 40–45 дни жизни Контроль эксперимента Число стоек 40–45 дни жизни проведения Суспензия (время в среднем на крысу) 188 Продолжение таблицы 48 Сроки наблюдения Дни Показатель (рекомендуемые) спирулины 2,44±0,34 2,02±0,08 41 2,56±0,24 1,89±0,071 42 2,11±0,39 1,41±0,04 43 2,67±0,24 1,23±0,041 44 3,00±0,29 1,11±0,051 45 2,56±0,29 0,54±0,021 40 4,33±0,33 2,15±0,071 41 4,44±0,44 2,32±0,081 42 4,33±0,41 2,06±0,071 43 4,22±0,49 1,85±0,051 44 3,33±0,41 1,93±0,061 45 3,78±0,32 1,74±0,061 40 5,67±0,88 14,23±0,511 Число заглядываний 41 6,44±0,85 14,03±0,451 в норки (время в 42 8,55±1,39 14,06±0,391 среднем на крысу) 43 8,44±1,16 14,86±0,551 44 9,22±0,95 15,23±0,581 45 10,33±0,93 15,98±0,461 шт. (время в сред- Число уринаций, шт. (время в среднем на крысу) 40–45 дни жизни биомассы 40 нем на крысу) 40–45 дни жизни Контроль эксперимента Число дефекаций, 40–45 дни жизни проведения Суспензия Установлено, что рефлекс переворачивания на плоскости у крысят опытной и экспериментальной групп был полностью сформирован к 8 дню жизни. Рефлекс «отрицательный геотаксис» у крысят экспериментальной группы был полностью сформирован к 10 дню жизни, а в контрольной – к 11 дню. Рефлекс «избегание обрыва» и «маятниковый рефлекс» у крысят экспериментальной группы были полностью сформированы к 10 и 8 дню жизни соответственно, а в контрольной группе – к 12 и 10 дню. При исследовании скорости созревания рефлексов по методу «открытое поле» было зафиксировано, что крысята экспериментальной группы несколько чаще осуществляли поднятие головы и лап, по сравнению с крысятами контрольной 189 группы. Ползать все крысята экспериментальной группы начали к 12 дню жизни, а контрольной группы – к 13 дню. Опора на задние конечности и подъем всего тела осуществлялись крысятами экспериментальной группы достоверно чаще, чем крысятами контрольной группы. Число пересеченных квадратов у крысят экспериментальной группы на 17 день эксперимента было меньше на 32,6 % по сравнению с контролем, а к 20 дню жизни было одинаковым в обеих группах. Время груминга у крысят обеих групп на 17 день эксперимента было почти одинаковым, однако при исследовании с 18 по 20 дни жизни было зафиксировано, что в экспериментальной группе время груминга было достоверно ниже и на 20 день ниже на 59,4 % по сравнению с контролем. Число вертикальных стоек у крысят обеих групп было примерно одинаковым во все дни наблюдений. Карабканье на стенки было зафиксировано у крысят экспериментальной группы на 17 и 18 сутки наблюдений, при этом крысята контрольной группы подобной активности не проявляли. На 19 сутки эксперимента крысята экспериментальной группы карабкались реже, чем крысята контрольной, а на 20 сутки – одинаково. Прыжки были зафиксированы только у крысят экспериментальной группы только на 18 день наблюдений. Время отсутствия активности у крысят экспериментальной группы на протяжении заданного периода наблюдений было достоверно ниже, по сравнению с крысятами контрольной группы и на 20 день эксперимента было ниже на 45,6 %. Аномалий походки не наблюдалось. Реакция на акустический стимул у всех крысят экспериментальной группы была полностью сформирована к 13 дню жизни, а к контрольной – к 15 дню. «Зрачковый» рефлекс у крысят экспериментальной группы был полностью сформировался к 14 дню, а в контрольной группе – к 15. Рефлекс «избегания обрыва, вызванного визуальным стимулом» у крысят обеих групп полностью сформировался к 16 дню жизни. Обонятельная реакция у крысят экспериментальной группы была более выражена, чем в контроле. Мышечная сила у крысят экспериментальной группы на протяжении заданного периода наблюдений была больше чем в контроле и на 20 сутки эксперимента больше на 53,8 %. 190 При исследовании эмоционально-двигательного поведения и способности к тонкой координации движений было зафиксировано, что переворачивание в свободном падении все крысята экспериментальной группы осуществляли с 17 дня жизни, а крысята контрольной группы только с 19 дня. Время удержания на вращающемся цилиндре у крысят экспериментальной группы на протяжении всего периода наблюдений было достоверно больше, чем у крысят контрольной группы и к 27 дню жизни было на 13,8 % больше, по сравнению с контролем. При исследовании созревания рефлексов по методу «открытое поле 2» на 45 день жизни нами были зафиксированные следующие показатели: латентный период выхода из центра у крысят экспериментальной группы был меньше на 51,9 % по сравнению с контролем. Число пересеченных квадратов у крысят экспериментальной группы больше на 68,0 % по сравнению с контролем, число вертикальных стоек больше на 104,3 %, а число умываний несущественно меньше относительно контрольной группы. Время груминга у крысят экспериментальной группы на 50,5 % меньше, чем у крысят контрольной группы; время замирания меньше на 52,1 %, число дефекаций меньше на 78,9 %, число уринаций меньше на 54,0 %, при этом число заглядываний в норки больше на 55,0 % по сравнению с контролем. Результаты исследований говорят о высокой функциональной активности организма крысят и повышении всех показателей жизнедеятельности на фоне нагрузки биомассой спирулины. Таким образом, введение биологически активных добавок в организм крыс приводит к увеличению среднего количества крысят в помете и мест имплантации из расчета на самку; снижению общей смертности эмбрионов, увеличению массы и кранио-каудального размера плодов, а также средней массы плаценты, а также стабилизирует психическое состояние животных, изменяет динамику созревания сенсорно-двигательных рефлексов, уровень предметного действия или теменнопремоторный, связанный с мелкой моторикой и эмоциональной сферой. 191 2.8 НАУЧНО-ХОЗЯЙСТВЕННЫЙ ОПЫТ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ БАД ПРИ ВЫРАЩИВАНИИ ЦИПЛЯТ БРОЙЛЕРОВ И КУР-НЕСУШЕК 2.8.1 Исследование влияния БАД на изменение живой массы, степень накопления тяжелых металлов и микроэлементов в мясе, а также витаминов группы В в печени цыплят-бройлеров Результаты по оценке набора массы цыплятами на фоне употребления биологически активных добавок представлены в таблице 49. Таблица 49 – Динамика прироста живой массы цыплят-бройлеров на фоне употребления БАД, (г) Примечание. В таблице различия достоверны при P < 0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы. По результатам эксперимента, представленным в таблице, видно, что цыплята экспериментальных групп набирали вес быстрее, чем цыплята контрольной группы. Наиболее эффективные приросты массы наблюдались в группе птиц, получавших гумат калия и биомассу спирулины. У цыплят по окончанию периода выращивания (45 день) в мышцах было определено содержание некоторых тяжелых металлов и микроэлементов. Результаты испытаний приведены в таблице 50. 192 Таблица 50 – Содержание тяжелых металлов и микроэлементов в мясе цыплятбройлеров (мг/кг) Показатели Группы животных ПДК Контроль Спирулина Гумат Виноград Кунжут Медь 3,01±0,126 3,34±0,130 3,52±0,1441 3,74±0,1351 3,91±0,1601 5,0 Кобальт 2,13±0,085 1,97±0,077 1,99±0,080 1,81±0,0581 2,06±0,060 2,0 0,298±0,010 0,5 1 0,274±0,011 0,255±0,008 1 Свинец 0,295±0,012 0,261±0,010 Цинк 97,42±4,19 66,91±2,741 77,25±3,091 70,53±2,681 79,47±2,941 70 Железо 34,78±1,43 57,21±2,401 52,13±2,091 45,34±1,631 61,44±2,211 50 Марганец 1,94±0,074 3,34±0,1341 3,07±0,1171 2,09±0,077 3,57±0,1211 0,6 Примечание. В таблице различия достоверны при P < 0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы. Содержание меди в мясе цыплят бройлеров всех опытных групп находится в пределах допустимой концентрации. Наибольшая концентрация меди 3,91±0,160 мг/кг наблюдалась у цыплят, употреблявших в качестве дополнительного премикса к корму шрот семян кунжута, наименьшая концентрация 3,01±0,126 – наблюдалась у цыплят контрольной группы. Концентрация меди в мясе цыплят-бройлеров в группе, употреблявшей биомассу спирулины, была выше, чем в контрольной группе на 11 %, в группе, употреблявшей гумат калия – выше на 17 %, в группе, употреблявшей шрот семян винограда – выше на 24 %, а в группе, употреблявшей шрот семян кунжута – выше на 30 % по сравнению с контролем. Концентрация кобальта у цыплят контрольной группы и группы, получавшей шрот семян кунжута, несколько превышала предельно допустимую норму. У цыплят получавших биомассу спирулины и гумат калия концентрация кобальта была почти на одном уровне (различия не превышали 3 %) и лежала в пределах допустимой нормы. У цыплят получавших шрот семян винограда концентрация кобальта была достоверно ниже, чем у цыплят контрольной группы на 15 %. 193 Содержание свинца в тканях цыплят всех групп также находилось в пределах нормы, но наиболее высокая концентрация, не превышающая ПДК, 0,298±0,010 мг/кг наблюдалась у цыплят, получавших шрот семян кунжута, а наименьшая – 0,255±0,008 мг/кг, в группе, употреблявшей шрот семян винограда. Концентрация свинца в мясе цыплят-бройлеров в группе, употреблявшей биомассу спирулины, была ниже, чем в контрольной группе на 11,5 %, в группе, употреблявшей гумат калия – ниже на 7,2 %, а в группе, употреблявшей шрот семян винограда – ниже на 13,5 %. При этом в группе, получавшей шрот семян кунжута концентрация свинца была незначительно выше, чем у цыплят контрольной группы. Концентрация цинка в мясе бройлеров контрольной группы существенно превышала предельно допустимую. В опытных группах цыплят, получавших биомассу спирулины и шрот семян винограда, содержание цинка было в пределах нормы. Концентрация цинка в мясе цыплят-бройлеров в группе, употреблявшей биомассу спирулины, была ниже, чем в контрольной группе на 31,3 %, в группе, употреблявшей гумат калия – ниже на 20,7 %, в группе, употреблявшей шрот семян винограда – ниже на 27,6 %, а в группе, получавшей шрот семян кунжута – ниже на 17,4 %. Концентрация железа в мясе цыплят контрольной группы и группы, получавшей шрот семян винограда, была ниже предельно допустимой концентрации, а в остальных группах наблюдалась обратная тенденция. Таким образом, концентрация железа в мясе цыплят-бройлеров в группе, употреблявшей биомассу спирулины, была выше, чем в контрольной группе на 64,5 %, в группе, употреблявшей гумат калия – выше на 49,9 %, в группе, употреблявшей шрот семян винограда – выше на 30,4 %, а в группе, получавшей шрот семян кунжута – выше на 76,7 %. Концентрация марганца во всех экспериментальных группах цыплятбройлеров была существенно выше предельно допустимой. Наименьшее содер- 194 жание марганца 1,94±0,074 мг/кг наблюдалось у цыплят контрольной группы, наибольшее – 3,57±0,121 мг/кг – в группе, употреблявшей шрот семян кунжута. Концентрация марганца в мясе цыплят-бройлеров в группе, употреблявшей биомассу спирулины, была выше, чем в контрольной группе на 72 %, в группе, употреблявшей гумат калия – выше на 58 %, а в группе, употреблявшей шрот семян винограда – выше на 7,7 %, а в группе, получавшей шрот семян кунжута – выше на 84,0 %. Также мы исследовали содержание каротина в сыворотке крови и накопление витаминов А и В2 в печени кур после нагрузки БАД. Каротин является важным компонентом рациона цыплят-бройлеров. Его добавляют в корм цыплятам для повышения сопротивляемости организма, профилактики заболеваний желудочно-кишечного тракта и ускорения темпов роста птицы. Содержание каротина в сыворотке крови цыплят-бройлеров после нагрузки в течение 35 дня биологически активными добавками представлено в таблице 51. Таблица 51 – Содержание каротина в сыворотке крови, витаминов А и В2 в тканях печени цыплят-бройлеров Показатели Каротин (мкмоль/л) Витамин А (мкг/г) Витамин В2 (мкг/г) Группы животных ПДК Контроль Спирулина Гумат Виноград Кунжут 1,95±0,082 5,93±0,2491 1,99±0,0,79 4,41±0,1581 3,67±0,1431 1,90–5,70 223,47±8,04 267,46±10,971 228,65±9,60 257,26±10,031 241,31±8,93 220–270 14,94±0,58 18,69±0,771 15,76±0,65 17,35±0,711 19,97±0,761 15–17,5 Примечание. В таблице различия достоверны при P < 0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы. Во всех экспериментальных группах птиц содержание каротина в сыворотке крови было в пределах физиологической нормы, но особенно высокое значение отмечалось в группе, употреблявшей биомассу спирулины. 195 Таким образом, концентрация каротина в сыворотке крови цыплятбройлеров в группе, употреблявшей биомассу спирулины, была выше, чем в контрольной группе на 204 %, в группе, употреблявшей гумат калия – практически равна контролю (различия не превышают 3%), в группе, употреблявшей шрот семян винограда – выше на 126 %, а в группе, получавшей шрот семян кунжута – выше на 88 %. Такая тенденция вполне объяснима, биомасса спирулины содержит большое количество каротина в легкоусвояемой форме. Витамин А образуется в организме из каротина (провитамина А). Основным депо витамина А является печень и утилизация этого витамина строго пропорциональна количеству поступающего с пищей каротина. В отношении концентрации витамина А в печени наблюдалась схожая тенденция, что и с содержание каротина в сыворотке крови и это вполне закономерно. Концентрация витамина А в печени цыплят-бройлеров в группе, употреблявшей биомассу спирулины, была выше, чем в контрольной группе на 16 %, в группе, употреблявшей гумат калия – практически равна контролю (различия не превышают 3%), в группе, употреблявшей шрот семян винограда – выше на 15 %, а в группе, получавшей шрот семян кунжута – выше на 8 %. Витамин В2 играет важную роль в минеральном и углеводном обмене организма цыплят-бройлеров. Более 95 % витамина В2, циркулирующего в крови, откладывается в органах и тканях и самая высокая его концентрация отмечается в печени. В контрольной группе цыплят содержание витамина В2 в тканях печени было несколько ниже нормы, а в группах, употреблявших биомассу спирулины и шроты – превышало границы физиологической нормы. Концентрация витамина В2 печени цыплят-бройлеров в группе, употреблявшей биомассу спирулины, была выше, чем в контрольной группе на 25 %, в группе, употреблявшей гумат калия – выше на 5 %, в группе, употреблявшей шрот семян винограда – выше на 16 %, а в группе, получавшей шрот семян кунжута – выше на 34 %. 196 2.8.2 Биохимический состав крови и яичная продуктивность кур-несушек на фоне нагрузки биологически активными добавками Результаты исследования биохимических показателей сыворотки крови курнесушек представлены в таблице 52. Таблица 52 – Биохимический состав сыворотки крови кур-несушек на фоне нагрузки биологически активными добавками Дни эксперимента Группы животных Контроль Спирулина Гумат Норма Виноград Кунжут Общий белок, г/л 70 100 38,54±1,23 38,97±1,36 38,63±1,31 38,71±1,47 38,66±1,43 47,37±1,52 1 1 60,71±2,25 1 56,51±2,03 1 55,51±1,99 1 59,42±2,08 130 61,94±2,35 70,03±2,24 68,44±2,60 69,08±2,56 70,12±2,521 160 65,28±2,42 71,08±2,49 68,31±2,53 72,13±2,38 71,75±2,80 43–59 Кальций, ммоль/л 70 2,28±0,08 2,25±0,09 2,31±0,08 2,26±0,07 2,22±0,07 100 2,51±0,09 2,68±0,08 2,59±0,10 2,74±0,10 2,71±0,09 2,45– 130 3,19±0,12 3,28±0,11 3,37±0,12 3,61±0,111 3,75±0,121 3,49 3,79±0,12 1 1 5,25±0,19 1 5,28±0,16 1 160 4,99±0,17 4,85±0,18 Фосфор, ммоль/л 70 2,21±0,07 2,28±0,09 2,25±0,08 2,19±0,07 2,31±0,08 100 2,27±0,09 2,54±0,091 2,43±0,09 2,58±0,091 2,61±0,101 2,26– 130 2,51±0,09 2,87±0,101 2,69±0,08 2,93±0,111 3,01±0,111 2,58 160 2,64±0,10 3,09±0,131 2,94±0,11 3,22±0,121 3,31±0,121 Примечание. В таблице различия достоверны при P < 0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы. На момент начала эксперимента содержание общего белка, кальция и фосфора в сыворотке крови кур было примерно на одном уровне во всех группах. На 100 день опыта в экспериментальных группах концентрация общего белка была 197 существенно выше, чем в контроле: в группе получавшей биомассу спирулины – выше на 25,4 %, в группе, получавшей гумат калия – выше на 28,1 %, в группе, получавшей шрот семян винограда – выше на 19,3 %, в группе, получавшей шрот семян кунжута – выше на 17,2 %. На 130 день исследования в экспериментальных группах птиц, получавших биомассу спирулины и шрот семян кунжута концентрация общего белка была достоверно выше, чем в контроле на 13,1 % и 13,2 % соответственно. В остальных экспериментальных группах концентрация общего белка была не значительно выше, чем в контроле. На 160 день исследования в экспериментальных группах птиц концентрация общего белка была не значительно выше, чем в контроле. Достоверное увеличение концентрации кальция в сыворотке крови птиц экспериментальных групп по отношению к контролю наблюдалось только со 130 дня исследований в группах, получавших шроты: в группе птиц, получавшей шрот семян винограда на 13,2 % и в группе, получавшей шрот семян кунжута на 17,6 %. К 160 дню опыта концентрация кальция в сыворотке крови птиц всех экспериментальных групп была существенно выше, чем в контроле: в группе получавшей биомассу спирулины – на 31,7 %, в группе, получавшей гумат калия – на 27,9 %, в группе, получавшей шрот семян винограда – на 38,5 %, в группе, получавшей шрот семян кунжута – на 39,3 %. Концентрация фосфора на протяжении всего периода исследований в группе птиц, получавших гумат калия была незначительно выше чем в контроле, а в остальных экспериментальных группах она была достоверно выше: на 100 день эксперимента в группе птиц, получавших биомассу спирулины – на 11,9 %, в группе птиц, получавших шрот семян винограда –на 13,7 %, в группе птиц, получавших шрот семян кунжута – на 14,9 %; на 130 день эксперимента в группе птиц, получавших биомассу спирулины – на 14,3 %, в группе птиц, получавших шрот семян винограда – на 16,7 %, в группе птиц, получавших шрот семян кунжута – на 19,9 %; на 160 день эксперимента в группе птиц, получавших биомассу спирули- 198 ны – на 17,0 %, в группе птиц, получавших шрот семян винограда – на 22,0 %, в группе птиц, получавших шрот семян кунжута – на 25,4 %; Результаты изучения влияния БАД на массу тела и характеристики яиц приведены в таблице 53. Учет продуктивности кур проводили в течение 30 дней. Таблица 53 – Масса кур-несушек и состояние яиц на фоне нагрузки биологически активными добавками Показатель Живая масса птицы, г Начало яйцекладки Количество яиц Масса яйца, г Плотность яйца, г/см 3 Толщина скорлупы, мм Группы животных Контроль Спирулина Виноград Кунжут Гумат 1309±45,82 1358±46,17 1331±50,58 1339±48,20 1367±48,75 130 день 124 день 125 день 130 день 127 день 41 56 50 51 58 50,34±1,61 60,41±1,931 56,34±2,081 55,97±2,071 58,44±2,041 2,12±0,07 2,42±0,081 2,31±0,08 2,30±0,09 2,36±0,091 0,531±0,019 0,555±0,020 0,558±0,021 0,560±0,019 0,547±0,020 Масса кур-несушек на момент начала яйцекладки в экспериментальных группах была незначительно выше, чем в контроле. Яйцекладка в группе, получавшей биомассу спирулины началось на 6 дней раньше, чем в контроле, в группе, получавшей гумат калия – на 3 дня раньше, в группе, получавшей шрот семян винограда – на 5 дней раньше, а шрот семян кунжута – в один день с контролем. Количество яиц во всех экспериментальных группах за период наблюдения было существенно выше, чем контроле: в группе получавшей биомассу спирулины – на 15 штук, в группе, получавшей гумат калия – на 17, получавшей шрот семян винограда – на 9 штук, в группе, получавшей шрот семян кунжута – на 10 штук. Вес яйц, полученных от птиц экспериментальных групп был достоверно выше, чем в контроле: в группе птиц, получавших биомассу спирулины – выше на 199 20,0 %, в группе птиц, получавших гумат калия – выше на 16,1 %, в группе птиц, получавших шрот семян винограда – выше на 11,9 %, в группе птиц, получавших шрот семян кунжута – выше на 11,2 % Для племенных целей используют яйца весом 53-62 г, а для промышленных - 50-65 г. Яйца, полученные от кур экспериментальных групп, можно использовать для племенных и промышленных целей, тогда как яйца, полученные от кур контрольной группы, - только для промышленных. Плотность яиц в группах птиц, получавших биомассу спирулины и гумат калия, была достоверно выше, чем в контроле на 14,2 % и 11,3 % соответственно. Толщина скорлупы у яйц, полученных от кур экспериментальных групп была несколько больше, чем в контроле. Результаты исследования состава яйц представлены в таблице 54. Таблица 54 – Содержание питательных веществ в яйце без скорлупы Показатель Группы животных Контроль Спирулина Виноград Кунжут Гумат Сырой жир, % 8,49±0,27 8,61±0,33 8,73±0,29 8,63±0,32 8,91±0,32 Сырой протеин, % 10,55±0,37 11,32±0,41 10,76±0,41 10,59±0,40 11,77±0,421 Кальций, % 0,046±0,001 0,055±0,0021 0,063±0,0021 0,062±0,0011 0,051±0,0021 Фосфор, % 0,161±0,005 0,159±0,006 0,186±0,0061 0,189±0,0071 0,172±0,007 0,151±0,005 1 0,157±0,006 0,153±0,006 0,151±0,005 Каротиноиды, мкг/г 0,169±0,006 Примечание. В таблице различия достоверны при P<0,05: 1 – по сравнению с показателями животных контрольной группы. Содержание сырого жира в яйцах всех групп было примерно на одном уровне. Содержание сырого протеина в яйце было достоверно выше на 11,6 % по отношению к контролю в группе птиц, получавших гумат калия. Содержание кальция в яйце у всех экспериментальных птиц было достоверно выше, чем в контроле: в группе птиц, получавших биомассу спирулины – на 19,6 %, в группе птиц, получавших гумат калия – на 10,9 %, в группе птиц, полу- 200 чавших шрот семян винограда – на 36,9 %, в группе птиц, получавших шрот семян кунжута – на 34,8 % Содержание фосфора в яйце в группах птиц, получавших шроты семян винограда и кунжута было достоверно выше на 15,5 % и 17,4 % соответственно по отношению к контролю. Содержание каротиноидов в яйце в группе птиц, получавших биомассу спирулины было достоверно выше, чем в контроле на 11,9 %. В остальных группах содержание каротиноидов в яйцах было примерно на одном уровне с контролем. По результатам эксперимента установлено, что введение БАД в организм цыплят-бройлеров способствует в разной степени набору массы тела и снижению накопления тяжелых металлов в мышцах, повышает концентрацию каротина в сыворотке крови и накоплению витаминов А и В2 в тканях печени. У кур- несушек способствует повышению содержания общего белка в сыворотке крови и концентрации кальция и фосфора в зависимости от длительности поступления в организм, На фоне нагрузки БАД отмечается увеличение живой массы курнесушек, увеличение веса и плотности яиц, а также утолщение скорлупы и содержания питательных веществ в яйце. 201 3 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ Высокую актуальность приобретает вопрос о критериях обратимых нарушений гомеостаза, которые можно выявить и использовать в качестве индикаторов адаптационного потенциала (Полушина А.В., Лесовская М.И.). По мнению авторов (Полушина А.В., Лесовская М.И.) в основе функционирования всех живых систем в земных условиях является использованием кислорода, метаболизм которого связан с обязательным образованием свободных радикалов. Сдвиг редокс-баланса является ключевым условием нарушения гомеостаза и развития стресса, который влечет за собой изменения с составе крови, репродуктивной системе, пищеварительной и нервной системой [19, 44, 45, 58, 82, 84, 87, 103, 195, 216]. В связи с ухудшением мировой экологической ситуации ведется интенсивный поиск новых биологически активных веществ-антиоксидантов, способных стабилизировать гомеостаз при негативных воздействиях токсических веществ и патологических процессах. По мнению физиологов, удовлетворить основные потребности организма в биологически активных веществах можно с помощью биологически активных добавок [29, 49, 64, 99, 173, 231]. Нами был проведен ряд исследований по применению биомассы спирулины, шротов семян винограда и кунжута, а также гумата калия в качестве БАД для стабилизации гомеостаза применительно к различным системам организма. Так как кровь играет важнейшую роль в обмене веществ организма, первоначально нами были исследованы реактивные приспособления морфологического состава крови крыс и кур к нагрузке биологически активными добавками [147, 149, 156, 162, 174]. По результатам эксперимента на крысах было установлено: ¾ Наиболее выраженные изменения в сторону увеличения количества эритроцитов на фоне нагрузки БАД, наблюдаются у животных, получавших биомассу 202 спирулины и шрот семян винограда. Количество эритроцитов у животных этих групп было больше чем в контроле на 21,1 % и 24,0 % соответственно. ¾ В группе животных, получавших биомассу спирулины возрастает концентрация гемоглобина на 21,9 % по сравнению с контролем, а в группе, получавшей шрот семян винограда – на 32,4 %. Повышение количества эритроцитов в крови крыс в пределах физиологической нормы на фоне нагрузки биомассой спирулины и шротом семян винограда позволяет их использовать как стимуляторы эритропоэза при нарушениях гомеостаза в системе крови. ¾ Наиболее выраженная тенденция к увеличению количества лейкоцитов в крови на фоне нагрузки БАД наблюдалась у животных, получавших гумат калия. Количество лейкоцитов у животных этой группы было на 15,3 % больше, чем в контроле. Таким образом, на наш взгляд, гумат калия может выступать в качестве иммуностимулирующего средства, применение которых играет важную роль в коррекции экологически обусловленных заболеваний и восстановлении нарушенного гомеостаза. ¾ Наибольшее количество палочкоядерных нейтрофилов по сравнению с контролем наблюдалось у крыс, получавших биомассу спирулины (+ 27,1 %) и шрот семян винограда (+ 31,2 %). Увеличение количества палочкоядерных нейтрофилов в крови крыс в пределах физиологической нормы на фоне нагрузки биомассой спирулины и шротом семян винограда, на наш взгляд, может свидетельствовать о повышении защитной функции организма. ¾ Колебания количества эозинофилов в крови животных были наиболее выражены в группе, получавшей гумат калия. Установлено достоверное снижение их количества на 20,4 % по сравнению с контролем. Так как колебания эозинофилов во всех экспериментальных группах находились в пределах физиологической нормы, это свидетельствует об отсутствии аллергизирующих свойств у применяемых нами БАД. 203 ¾ Колебания численности моноцитов в крови животных были наиболее выражены в группе, получавшей шрот семян винограда. Установлено достоверное снижение количества моноцитов на 20,4 % по сравнению с контролем. ¾ Наиболее выраженные изменения в сторону увеличения концентрации общего белка в крови на фоне нагрузки БАД, наблюдаются у животных, получавших биомассу спирулины и гумат калия. Концентрация общего белка у животных этих групп была больше чем в контроле на 12,9 % и 14,1 % соответственно. Повышение концентрации общего белка в сыворотке крови в пределах физиологической нормы свидетельствует о высокой синтетической активности гепатоцитов на фоне нагрузки биомассой спирулины и гуматом калия. ¾ Колебания концентрации альбуминов в сыворотке крови животных были наиболее выражены в группе, получавшей гумат калия. Установлено достоверное увеличение концентрации альбуминов на 16,6 % по сравнению с контролем. ¾ Колебания концентрации α2-глобулинов в сыворотке крови животных были наиболее выражены в группе, получавшей биомассу спирулины. Установлено достоверное увеличение концентрации α2-глобулинов на 20,0 % по сравнению с контролем. ¾ Установлено, что наиболее выраженная тенденция к снижению количества γ-глобулинов наблюдалась в группе животных, получавших гумат калия (ниже на 30,3 % по сравнению с контролем). Полученные нами результаты согласуются с результатами других исследователей. По мнению Войщевой Е.А., Овчинниковой Л.А. Певеня В.Г., Милогородского Е.Н. и других авторов [8, 132, 129, 133, 234, 251, 255], биомасса спирулины способствует увеличению количества эритроцитов и концентрации гемоглобина в крови, повышению количества палочкоядерных нейтрофилов, увеличению концентрации общего белка в крови и концентрации α2-глобулинов. Шрот семян винограда является достаточно малоизученной субстанцией, но достоверно известно, что он содержит широкий спектр биофлавоноидов и имеет богатый микроэлементный состав. Ряд авторов [30, 85, 95, 258] считают, что шрот семян винограда обладает гемопоэтической функцией и в наших экспериментах 204 это подтверждает тем, что он повышает количество эритроцитов в крови и концентрацию гемоглобина. Гумат калия в настоящее время имеет широкий спектр применения в различных отраслях сельского хозяйства и фармации. По мнению П.Д. Артеменко, В.С. Бузлама, Ж.С. Майорова, Г.П. Логинова, С.А. Симаковой и ряда других авторов [16, 38, 78, 118, 225] гумат калия способствует повышению концентрации общего белка в крови и концентрации альбуминов за счет повышения синтетической активности гепатоцитов. По результатам изучения реактивных изменений биохимического состава крови цыплят-бройлеров на фоне нагрузки БАД установлено: ¾ Биомасса спирулины, шроты семян винограда и кунжута, а также гумат калия способствуют повышению содержания общего белка в крови птиц. Наибольшая концентрация наблюдалась в группах птиц, получавших гумат калия (на 9,7 % больше, чем в контроле) и шрот семян кунжута (на 13,3 % больше, чем в контроле). Полученные результаты согласуются с исследованиями С.А. Симаковой, предложившего применение в птицеводстве минеральной добавки на основе гумата калия, повышающей содержания общего белка в крови птиц [225]. ¾ Установлено, что количество альбуминов в сыворотке крови цыплятбройлеров на фоне нагрузки БАД снижается в среднем на 9,5 % по сравнению с контролем, во всех экспериментальных группах. Полученные данные о влиянии биомассы спирулины на концентрацию альбуминов в сыворотке крови птиц согласуются с исследованиями Милогородского Е.М. [129] Однако, в отношении гумата калия В.А. Кубасов и Б.Л. Белкин отмечают тенденцию к повышению содержания альбуминов в крови цыплятбройлеров при его употреблении [78, 226, 229]. Белогрудов И.Г., Грибан В.Т., Грачев А.Д., Кулешов С.М. и еще ряд авторов при применении гумата натрия и гумата калия отмечают увеличение уровня общего белка в сыворотке крови при одновременном снижении уровня альбуминов у сельскохозяйственных животных. Аналогичные факты изменений уровня общего белка в сыворотке крови под дей- 205 ствием данных препаратов у кроликов и крыс установили Базелян В.А.и Лотош Т.Д. [78, 226, 229]. ¾ БАД способствуют увеличению количества α-глобулинов в сыворотке крови цыплят-бройлеров. Наибольшая концентрация α-глобулинов наблюдалась в группе птиц, получавших гумат калия ( на 22,3 % больше, чем в контроле). ¾ Биомасса спирулины, гумат калия и шрот семян кунжута способствуют снижению количества β-глобулинов, по сравнению с контролем на 18,3 %, 8,8 % и 19,4 % соответственно. ¾ Количество γ-глобулинов в сыворотке крови цыплят-бройлеров, употреблявших биомассу спирулины, на момент окончания эксперимента было на 32,9 % больше, чем в контроле, в группе, употреблявший гумат калия – больше на 20,7 % относительно контроля, у цыплят, употреблявших шрот семян винограда – больше на 16,7 %, а в группе, получавшей шрот семян кунжута – выше на 33,9 %. Полученные данные о влиянии биомассы спирулины на концентрацию γ-глобулинов в сыворотке крови согласуются с исследованиями Милогородского Е.М. [129] Повышение концентрации γ-глобулинов в сыворотке крови цыплят-бройлеров свидетельствует о повышении естественной резистентности птицы. ¾ БАД способствуют снижению концентрации глюкозы в крови птиц. Наибольшую эффективность в этом отношении проявляют биомасса спирулины и гумат калия (установлено снижение концентрации глюкозы по сравнению с контролем более чем на 8 %). Полученные данные о влиянии биомассы спирулины на концентрацию глюкозы в сыворотке крови согласуются с исследованиями Милогородского Е.М. [129]. В опытах на крысах Габдуллиным Ф.Х. также установлено снижение концентрации глюкозы в крови на фоне нагрузки гуматом калия [38]. ¾ Шрот семян винограда наиболее эффективно стабилизирует концентрацию ПВК в сыворотке крови птиц (отмечено снижение концентрации ПВК на 37,24 % по сравнению с контролем). ¾ Содержание холестерина в крови птиц, получавших БАД, было выше, чем в контроле, но в пределах физиологической нормы. 206 ¾ Все использованные нами БАД способствуют снижению концентрации β-липопротеидов в крови птиц. Наибольшую эффективность в этом отношении проявляет шрот семян винограда (установлено снижение концентрации β-липопротеидов по сравнению с контролем на 38,19 %). ¾ БАД способствуют увеличению содержания аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы в крови птиц. Наибольшую эффективность в этом отношении проявляет биомасса спирулины (установлено повышение концентрации аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы по сравнению с контролем более чем на 29,54 % и 41,79 % соответственно). Полученные данные о влиянии биомассы спирулины на активность АсАТ и АлАТ в сыворотке крови цыплят-бройлеров согласуются с исследованиями Милогородского Е.М. [129]. В опытах на бычках Овчинникова Л.А. установила повышение активности АсАТ и АлАТ на фоне нагрузки биомассой спирулины [255]. ¾ Шрот семян винограда способствует повышению концентрации кальция и фосфора в сыворотке крови птиц (отмечено повышение концентрации кальция и фосфора по сравнению с контролем на 72,58 % и 27,94 % соответственно). Так как шроты семян винограда и кунжута являются малоизученными объектами, в литературе отсутствуют данные об их влиянии на морфологические и биохимические параметры крови крыс и цыплят-бройлеров. Так как сдвиг редокс-баланса является ключевым условием нарушения гомеостаза и развития стресса мы провели исследование системы ПОЛ-АО печени на фоне нагрузки биологически активными добавками. Известно, что перекисное окисление липидов – это физиологический процесс, принимающий участие в нормальных метаболических процессах и регуляторных функциях клетки. Тормозя или ускоряя ПОЛ можно изменить состав клеточных мембран, их структурную организацию и функциональную активность клетки. Известно, что работа мембранных ферментов в высокой степени зависит от липидного окружения, поэтому изменение состава биологических мембран в результате модификации процессов липопероксидации вызывает торможение активности одних и активацию других 207 мембранзависимых и мембрансвязанных ферментов, то есть смещение равновесия гомеостаза. В проведенных исследованиях [151, 165, 175, 177, 193, 286] отслеживались изменения, происходящие в системе ПОЛ-АО, на фоне нагрузки БАД в концентрациях 5 мг/100 г массы тела, 10 мг/100 г массы тела, 15 и 20 мг/100 г массы тела изучая активности таких ферментов, как аспартатаминотрансфераза, аланинаминотрансфераза, каталаза, супероксиддисмутаза, глутатионпероксидаза и концентрацию малонового диальдегида. Установлено, что введение БАД в дозе 5 мг/100 г массы животного не выявило достоверных изменений в активности и концентрации изучаемых ферментов по отношению к интактным животным. Нагрузка крыс в дозе 10 мг/100 г массы тела биомассой спирулины, шротами семян винограда и кунжута не влияет на активность аспартатаминотрансферазы и аланинаминотрансферазы, а в группе животных, получавших гумат калия, вызывает возрастание активности АсАТ и АлАТ по сравнению с интактными животными на 29,1 % и 12,7 % соответственно. По мнению Лотош Д. гумат калия оказывает нормализующее влияние на активность АсАТ и АлАТ и увеличение активности аминотрансфераз в пределах физиологической нормы свидетельствует о повышении общей резистентности организма и антитоксической функции печени. Активность ферментов каталаза, супероксиддисмутаза и глутатионпероксидаза у здоровых животных, на фоне нагрузки биомассой спирулины имела тенденцию к снижению и была ниже чем в контроле на 14,44 %, 7,11 % и 6,01 % соответственно. На внутрижелудочное введение шрота семян винограда организм крыс отвечает выраженным снижением активности каталазы, супероксиддисмутазы и глутатионпероксидазы на 17,19 %, 11,39 % и 9,4 % соответственно. Уровень антиоксидантных ферментов у животных, получавших шрот семян кунжута, почти полностью совпадает с результатами, полученными в группе интактных крыс, за исключением активности СОД, которая была достоверно ниже на 13 %. 208 Концентрация малонового диальдегида у животных всех экспериментальных групп была примерно на одном уровне, без достоверных различий. Нагрузка БАД в дозе 15 мг/100 г массы животного проводит к следующим изменениям в системе ПОЛ-АО печени: ¾ Активность АсАТ в группе животных, получавших биомассу спирулины и шрот семян кунжута, не отличалась от контроля, а в группах, получавших шрот семян винограда и гумат калия, была выше на 14,04 % и 37,19 % соответственно. ¾ Активность АлАТ в группах животных, получавших биомассу спирулины и шроты почти совпадала с контролем, а группе, получавшей гумат калия, была выше на 18,48 %. ¾ Активность каталазы в группах животных, получавших шрот семян кунжута и гумат калия не существенно отличалась от контроля, а в группах, получавших биомассу спирулины и шрот семян винограда была ниже на 17,64 % и 21,65 % соответственно. ¾ Активность СОД в группах животных, получавших биомассу спирулины и гумат калия, не отличалась от контроля, а в группах, получавших шроты семян винограда и кунжута, была достоверно ниже на 13,15 % и 15,21 % соответственно. ¾ Активность ГП отличалась от контроля только в группе животных, получавших шрот семян винограда, она была ниже на 10,89 % по отношению к интактным животным. ¾ Концентрация МДА во всех группах была примерно на одном уровне. ¾ Нагрузка БАД в дозе 20 мг/100 г массы животного проводит к следующим изменениям в системе ПОЛ-АО печени: ¾ Активность АсАТ в группах животных, получавших биомассу спирулины, не отличалась от контроля, а в группах, получавших шроты семян винограда и кунжута, а также гумат калия была выше на 12,63 %, 12,98 % и 56,49 % соответственно. ¾ Активность АлАТ в группах животных, получавших биомассу спирулины и шроты, не существенно отличалась от контроля, а группе, получавшей гумат калия, была выше на 22,49 %. 209 ¾ Активность каталазы в группах животных, получавших шрот семян кунжута и гумат калия была не существенно ниже, чем в контроле, а в группах, получавших биомассу спирулины и шрот семян винограда была ниже на 19,58 % и 21,92 % соответственно. ¾ Активность СОД в группах животных, получавших биомассу спирулины и гумат калия, также не отличалась от контроля, а в группах, получавших шроты семян винограда и кунжута была достоверно ниже на 13,53 % и 14,83 % соответственно. ¾ Активность ГП отличалась от контроля только в группе животных, получавших шрот семян винограда, она была ниже на 10,77 % по отношению к интактным животным. ¾ Концентрация МДА во всех группах была примерно на одном уровне. На основании полученных результатов мы пришли к выводу, что биомассу спирулины и шрот семян винограда в дальнейших экспериментах следует использовать в дозе 10 мг/100 г массы тела животного, что соответствует суточной норме потребления для человека биологически активных соединений содержащихся в этих субстанциях. Гумат калия также следует использовать в концентрации 10 мг/100 г массы тела животного, так как нагрузка в дозе 5 мг/100 г массы не приводит к существенным сдвигам в системе ПОЛ-АО, а в концентрации 15 и 20 мг/100 г массы тела животного ведет к патологическим сдвигам активности трансаминаз. Шрот семян кунжута также решено использовать в дозе 10 мг/100 г массы животного, так как нагрузка им клинически здоровых животных приводит к смещению только одного из изучаемых нами показателей системы ПОЛ-АО и достоверные смещения уже наблюдаются в этой концентрации. Исходя из полученных данных было решено провести исследование изменений в системе ПОЛ-АО, на фоне воздействия тетрахлорметана и применения БАД в сравнительном аспекте с β-каротином для выявления их гепатопротекторного эффекта. По результатам эксперимента установлено, что активность аспартатаминотрансферазы в группе крыс, принимавших только четыреххлористый углерод, 210 возросла в ≈ 7 раз относительно интактных животных; в группе, получавших суспензию биомассы спирулины на фоне яда, активность возросла ≈ в 5 раз, в группе, получавшей шрот семян винограда ≈ в 6 раз, в группе, получавшей шрот семян кунжута – в 5,4 раза, в группе, получавшей гумат калия – в 6,8 раза, а в группе, получавшей β-каротин – в ≈ 6 раз. Следовательно, наиболее эффективно способствуют снижению роста активности аспартатаминотрансферазы в тканях печени при воздействии тетрахлорметана суспензия биомассы спирулины и шрот семян кунжута, действуя эффективнее β-каротина. В группе крыс, получавшей дистиллированную воду, на фоне введения четыреххлористого углерода, активность аланинаминотрансферазы возросла на 43,11 % относительно интактных животных; в группе, получавшей помимо яда, суспензию биомассы спирулины, активность АлаТ возросла на 18,9 %, в группе, получавшей шрот семян винограда, активность АлаТ возросла на 22,6 %, в группе, получавшей шрот семян кунжута – на 19,1 %, в группе, получавшей гумат калия – на 43,5 %, а в группе, получавшей β-каротин – на 27,6 %. Таким образом, биомасса спирулины, шрот семян винограда и шрот семян кунжута способствуют снижению роста активности аланинаминотрансферазы в плазме крови при воздействии тетрахлорметана эффективнее β-каротина на 8,7 %, 5 % и 8,5 % соответственно. При исследовании активности каталазы было выявлено, что в группе крыс, получавшей воду очищенную, на фоне введения четыреххлористого углерода, наблюдалось снижение уровня активности каталазы на 42,94 % относительно контроля, в группе, получавшей, помимо четыреххлористого углерода, суспензию биомассы спирулины активность каталазы снизилась на 22,9 %; в группе, получавшей шрот семян винограда на фоне яда, активность каталазы снизилась на 29,6 %, в группе, получавшей шрот семян кунжута – 30,3 %, в группе, получавшей гумат калия – на 35,5 %, а в группе, получавшей β-каротин – на 26,90 %. 211 Таким образом, выявлено, что биомасса спирулины несколько эффективнее чем β-каротин нормализуют активность каталазы в тканях печени при воздействии тетрахлорметана. Изучение уровня активности супероксиддисмутазы выявило, что в группе крыс, получавшей дистиллированную воду, на фоне введения четыреххлористого углерода, наблюдалось снижение уровня активности супероксиддисмутазы на 46,02 % относительно интактных животных; в группе, получавшей, помимо четыреххлористого углерода, суспензию биомассы спирулины, активность СОД снизилась на 23,8 %, в группе, получавшей помимо яда, шрот семян винограда – снизилась на 31,5 %, в группе, получавшей шрот семян кунжута, – на 32,1 %, в группе, получавшей гумат калия – на 38,9 %, в группе, получавшей β-каротин – на 22,78 %. Следовательно, по данному параметру ни один из протекторов природного происхождения не превосходит эффективность β-каротина. По результатам изучения активности глутатионпероксидазы было выявлено, что в группе крыс, получавшей воду очищенную, на фоне введения четыреххлористого углерода, наблюдалось снижение уровня активности глутатионпероксидазы на 38,33 % относительно интактных животных; в группе, получавшей, помимо четыреххлористого углерода, суспензию биомассы спирулины, активность ГП снизилась на 25,9 %, в группе, получавшей помимо яда, шрот семян винограда, активность ГП снизилась на 29,9 %, в группе, получавшей шрот семян кунжута – на 22,0 %, в группе, получавшей гумат калия – на 34,5 %, а в группе, получавшей β-каротин – на 30,5 %. Установлено, что биомасса спирулины и шрот семян кунжута эффективнее чем β-каротин нормализуют активность глутатионпероксидазы в тканях печени при воздействии тетрахлорметана, существенно повышая ее на 4,6 % и 8,5 % соответственно. Также выявлено, что в группе крыс, получавшей воду очищенную, на фоне введения четыреххлористого углерода, концентрация малонового диальдегида возросла на 88,35 % относительно интактных животных; в группе, получавшей помимо 212 яда, суспензию биомассы спирулины, концентрация МДА возросла на 53,9 %, в группе, получавшей шрот семян винограда, концентрация МДА возросла на 66,6 %, в группе, получавшей шрот семян кунжута – на 77,5 %, в группе, получавшей гумат калия – на 57,7 %, а в группе, получавшей β-каротин – на 72,7 %. Установлено, что биомасса спирулины, шрот семян винограда и гумат калия способствуют снижению роста концентрации малонового диальдегида в тканях печени при воздействии тетрахлорметана эффективнее β-каротина на 18,8 %, 6,1 % и 15 % соответственно. Установив эффективность противотоксических свойств биомассы спрулины, шротов семян винограда и кунжута, а также гумата калия, нами было решено провести исследование реактивных изменений ткани печени крыс в антенатальном и раннем постнатальном периодах онтогенеза на фоне нагрузки БАД [145, 146, 150, 153, 159, 161, 168, 169, 170]. По результатам проведенного эксперимента было установлено: ¾ на фоне нагрузки биомассой спирулины у эмбрионов печень более продолжительное время сохраняет роль органа кроветворения, поскольку сроки эритропоэза существенно удлиняются по сравнению с животными контрольной группы. Также в печени взрослых крыс на фоне нагрузки биомассой спирулины формируются участки эритропоэза. Паренхиматозные клетки печени на нагрузку суспензией водоросли отвечают увеличением количества митотически делящихся гепатоцитов и увеличением слоев клеток наружной терминальной пластинки. Отсутствие негативного влияния биомассы спирулины на гистоструктуру печени установлено в опытах Н.В. Литвинова, А.Н. Марченко, Е.Л. Левицкий, Ю.И. Губский [198]. ¾ на фоне нагрузки шротом семян кунжута на 21 сутки эмбриогенеза в ткани печени отмечается усиленная пролиферация клеток желчевыводящих протоков, удлиняются сроки эритропоэза у эмбрионов до момента рождения, изменяется экзокринная функция печени, проявляющаяся в образовании желчи и синтезе альбуминов. 213 ¾ на длительную нагрузку раствором гумата калия ткань печени эмбрионов отвечает ускоренным формированием печеночных балок и угнетением эритропоэза, отмечается наличие двуядерных и полиплоидных гепатоцитов, особенно выраженное в центральной части долек печени. ¾ на нагрузку суспензией шрота семян винограда, печень крыс отвечает отсутствием ингибиторов апоптоза в гепатоцитах периферической части долек печени, что сказывается на повышении синтетической активности клеток, синтезирующих альбумины и белки плазмы крови, усиливается пролиферация клеток центральной части печени. Полученные результаты по реактивным изменениям печени на фоне нагрузки гуматом калия согласуются с данными, полученными А.В. Бузлама, В.Н. Долгополовым и А.В. Сафоновым. В литературных источниках гистологические исследования печени крыс на фоне нагрузки шротами семян винограда и кунжута не представлены [38]. Еще один из наиболее значимых факторов отражения оптимального функционирования организма является состояние репродуктивной системы, так как оно обычно отражает физиологическую активность всего организма, а, следовательно, состояние гомеостаза. Физиологические параметры систем зависят от совокупности множества факторов, но смещение равновесия в ту или иную сторону может быть вызвано единичным, точеным воздействием. Смещение гомеостаза естественно влияет на процесс воспроизведения потомства, а также сказывается на интенсивности и продуктивности процесса размножения, как в положительном, так и в отрицательном смысле. Нами были проведены исследования реактивных изменений репродуктивной системы крыс и развития их потомства в антенатальный период онтогенеза на фоне нагрузки биологически активными добавками [142, 143, 154, 155, 158, 176, 178, 180, 181, 183, 184, 186, 188, 189, 287]. Установлено, что введение биологически активных добавок в организм приводит к увеличению среднего количества крысят в помете и мест имплантации из расчета на самку; снижению общей смертности эмбрионов, увеличению массы и кранио-каудального размера плодов, а также средней массы плаценты, а также 214 стабилизирует психическое состояние животных, изменяет динамику созревания сенсорно-двигательных рефлексов, уровень предметного действия или теменнопремоторный, связанный с мелкой моторикой и эмоциональной сферой. Установив позитивную динамику в регуляции гомеостаза при помощи БАД было решено провести хозяйственный опят на цыплятах-бройлерах и курах несушках для выявления эффективность применения добавок для выращивания сельскохозяйственной птицы [147, 152, 166]. Установлено, что введение БАД в рацион цыплят-бройлеров способствует в разной степени набору массы тела и снижению накопления тяжелых металлов в мышцах, повышает концентрацию каротина в сыворотке крови и накоплению витаминов А и В2 в тканях печени. Введение БАД в рацион кур-несушек способствует повышению содержания общего белка в сыворотке крови и концентрации кальция и фосфора в зависимости от длительности поступления в организм, На фоне нагрузки БАД отмечается увеличение живой массы кур-несушек, увеличение веса и плотности яиц, а также утолщение скорлупы и содержания питательных веществ в яйце [235]. Полученные данные о влиянии на организм птиц биомассы спирулины согласуются с исследованиями Милогородского Е.М. [129], Фионина Н.В. и ряда других авторов [246]. В исследованиях Шантала А.Я. и др., Лобача П.И. и др., Чалого А.С. и др. установлено, что гумат калия увеличивает прирост птиц и стимулирует яйценоскость. При изучении действия гуматов на цыплят-бройлеров установлено, что его применение повышает эффективность белкового обмена, так как повышается общее количество белка в сыворотке и мышцах птицы. Происходит лучшее усвоение кормов за счет нормализации обмена веществ, что в спою очередь, вызывает перераспределение уровня макро- и микроэлементов в крови и печени цыплят. В литературе отсутствуют данные о влиянии на организм птиц шротов семян винограда и кунжута [38, 78, 226, 229]. 215 ЗАКЛЮЧЕНИЕ 1. Биомасса спирулины, шроты семян винограда и кунжута, а также гумат калия в дозе 10 мг/100 г массы тела животного при внутрижелудочном поступлении в организм в течение 35 суток являются активными модуляторами гомеостаза, проявляющимися: 1.1. Увеличением количества эритроцитов и концентрации гемоглобина: при поступлении биомассы спирулины на 21,1 и 21,9 %, шрота семян винограда – на 24,0 и 32,4 %, шрота семян кунжута – на 15,2 и 13,3 % соответственно. 1.2. Увеличением количества лейкоцитов в крови на фоне нагрузки био- массой спирулины и гуматом калия на 13,1 и 15,3 % соответственно, что повышает резистентность организма животных. 1.3. Увеличением палочкоядерных нейтрофилов при поступлении биомас- сы спирулины, шрота семян винограда и гумата калия на 27,1; 31,2 и 18,9 % соответственно, повышая устойчивость организма к действию патогенных агентов. Количество сегментоядерных нейтрофилов на фоне нагрузки шротом семян винограда увеличивается на 12,0 %. 1.4. Возрастанием концентрации общего белка в крови на фоне нагрузки биомассой спирулины, шротом семян кунжута и гуматом калия на 12,9 % (крысы), 13,3 % (цыплята-бройлеры) и 14,1 % (крысы) соответственно, что свидетельствует о повышении усвояемости питательных веществ и об уменьшении распада белков в организме. 1.5. Уменьшением концентрация γ-глобулинов в крови крыс на фоне нагрузки биомассой спирулины и шротом семян винограда на 15,8 и 11,8 % соответственно, а при нагрузке гуматом калия – увеличением на 30,3 %. А в крови цыплят-бройлеров увеличением концентрации γ-глобулинов на фоне нагрузки биомассой спирулины на 32,9 %, шротом семян винограда – на 16,7 %, шротом семян кунжута – на 33,9 % и гуматом калия – на 20,7 %. 216 1.6. Возрастанием концентрации альбуминов в крови крыс на фоне нагрузки биомассой спирулины, шротами семян виноград и кунжута на 10,6; 13,9 и 16,6 % соответственно, что обеспечивает интенсификацию водного обмена в организме за счет повышения синтетической активности гепатоцитов. 1.7. Увеличением концентрации γ-глобулинов при поступлении биомассы спирулины, шрота семян кунжута и гумата калия на 17,6; 15,6 и 22,3 % соответственно, повышая гуморальный иммунитет. 1.8. Увеличением концентрации α2-глобулинов в крови крыс на фоне нагрузки биомассой спирулины и гумата калия на 20,0 и 12,7 %, интенсифицируя деятельность транспортных белков, транспорт ретинола и кальциферола. 1.9. Возрастанием концентрации β-глобулинов при поступлении шрота семян кунжута и биомассы спирулины в крови цыплят бройлеров на 19,4 и 18,3 % соответственно, интенсифицируя транспорт холестерола, ионов меди и витамина В12 в организме. 1.10. Снижением концентрации β-липопротеидов и увеличением концентрации холестерина в крови цыплят-бройлеров на фоне нагрузки биомассой спирулины на 25,96 и 88,02 %, шротом семян винограда – на 38,19 и 57,80 %, шротом семян кунжута – на 34,64 и 54,17 % и гуматом калия – на 31,99 и 63,02 % соответственно, что свидетельствует высокой активности гепатоцитов и смещении равновесия в системе ПОЛ-АО в сторону образования антиоксидантов и снижения концентрации кетоновых тел. 1.11. Увеличением концентрации АсАТ в крови цыплят-бройлеров фоне нагрузки биомассой спирулины на 29,54 %, шротом семян винограда – на 18,62 % и шротом семян кунжута – на 13,16 %, а также концентрация АлАТ на фоне нагрузки биомассой спирулины на 41,79 %, шротом семян кунжута – на 27,47 % и гуматом калия – на 16,49 %, что свидетельствует об интенсификации белкового обмена. 1.12. Возрастанием концентрации кальция и фосфора в крови цыплятбройлеров на фоне нагрузки биомассой спирулины на 50,96 и 25,33 %, шротом 217 семян винограда – на 72,58 и 27,94 %, шротом семян кунжута – на 61,77 и 15,22 % и гуматом калия – на 38,22 и 19,21 % соответственно. 2. Нагрузка организма клинически здоровых крыс биомассой спирулины, шротами семян винограда и кунжута, а также гуматом калия в дозах 5, 10, 15 и 20 мг на 100 г массы тела не вызывает негативных изменений в системе ПОЛ-АО печени. При этом интенсифицируется распад продуктов перекисного окисления и снижается активность антиоксидантных ферментов за счет проявления биологической активности компонентов БАД, что подтверждается биохимическими параметрами крови. Биомасса спирулины, шроты семян винограда и кунжута, а также гумат калия обладают противотоксическими свойствами, способствуют нормализации гомеостаза в системе ПОЛ-АО в состоянии оксидативного стресса, вызванного тетрахлорметаном. Оптимальная дозировка для применения БАД составляет 10 мг/100 г массы тела. 3. На фоне нагрузки биомассой спирулины беременных самок у эмбрионов печень более продолжительное время сохраняет роль органа кроветворения. В печени взрослых крыс увеличивается число митотически делящихся гепатоцитов и количество слоев клеток наружной терминальной пластинки. На фоне нагрузки шротом семян кунжута на 21 сутки эмбриогенеза в ткани печени отмечается усиленная пролиферация клеток желчевыводящих протоков, удлинение сроков эритропоэза у эмбрионов до момента рождения, усиливается желчевыделительная функция печени и синтез альбуминов. При длительном поступлении гумата калия ткань печени эмбрионов отвечает ускоренным формированием печеночных балок, имеются двуядерные и полиплоидные гепатоциты в центральной части долек печени. На нагрузку суспензией шрота семян винограда, ткань печени крыс отвечает отсутствием ингибиторов апоптоза, повышается синтетическая активность клеток, синтезирующих альбумины и белки плазмы крови, усиливается пролиферация клеток центральной части органа. 218 4. Биомасса спирулины, шроты семян винограда и кунжута, а также гумат калия не оказывают патологического действия на репродуктивную систему самцов и самок и на развитие их потомства в антенатальном периоде онтогенеза. 5. Нагрузка организма крыс биомассой спирулины, шротами семян винограда и кунжута, а также гуматом калия увеличивает среднее количество крысят в помете и количество мест имплантации из расчета на самку; снижает общую смертность эмбрионов, увеличивает массу и кранио-каудальный размер плодов, среднюю массу плаценты, а также изменяет динамику созревания сенсорнодвигательных рефлексов у плодов и уровень предметного действия, связанный с мелкой моторикой и эмоциональной сферой. 6. На введение биомассы спирулины, шротов семян винограда и кунжута, а также гумата калия организм цыплят-бройлеров отвечает в разной степени увеличением массы тела и снижением накопления тяжелых металлов в мышцах, повышением концентрации каротина в сыворотке крови и накоплением витаминов А и В2 в тканях печени. В организме кур-несушек повышается содержание общего белка в сыворотке крови и концентрации кальция и фосфора в зависимости от длительности поступления БАД в организм, увеличивается масса тела курнесушек, яйценоскость и содержания питательных веществ в яйце, масса и плотность яиц. 219 ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 1. Результаты изучения морфологического и биохимического состава крови, маркеров системы ПОЛ-АО, репродуктивной системы самцов и самок, развития плодов в антенатальном и постнатальном периодах онтогенеза, гистологические изменения ткани печени под влиянием биомассы спирулины, шротов семян винограда и кунжута, а также гумата калия могут быть использованы в научноисследовательской работе, в качестве физиологической нормы, при решении вопросов, связанных со становлением структуры и функции органов и организма животных. 2. Результаты экспериментов рекомендуется использовать для обоснования приемов воздействия на организм биологически активных веществ в целях модуляции гомеостаза. 3. Материалы о роли биомассы спирулины, шротов семян винограда и кунжута, а также гумата калия в модуляции гомеостаза рекомендуется использовать в учебном процессе в профильных высших учебных заведениях при изучении физиологии, гистологии, биохимии и других дисциплин. 220 СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННЫХ СОКРАЩЕНИЙ АлАТ – аланинаминотрансфераза АсАТ – аспартатаминотрансфераза БАД – биологически активная добавка ГП – глутатионпероксидаза МДА – малоновый диальдегид ПВК – пировиноградная кислота ПОЛ-АО – перекисное окисление липидов-антиоксиданты СОД – супероксиддисмутаза 221 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Аввакумова Н.П. Биохимические аспекты терапевтической эффектив- ности гумусовых кислот лечебных грязей : монография / Н.П. Авакумова. – Самара : Перспектива; CамГМУ, 2002. – 124 с. 2. Аввакумова Н.П. Антиоксидантные свойства гуминовых веществ пе- лоидов / Н.П. Аввакумова, А.Я. Герчиков, В. Р. Хайруллина // Химикофармацевтический журнал. – 2011. – Т. 45, № 3. – С. 50–51. 3. Аввакумова Н.П. Репаративное действие пелоидопрепаратов: сравни- тельные аспекты / Н. П. Аввакумова, Е.В. Орлов, М.А. Кривопалова // Аллергология и иммунология. – 2006. – Т. 7. – С. 147. 4. Авдеева Е.В. Гепатопротекторные свойства фенилпропаноидов и их производных / Е.В. Авдеева // Х Всероссийский конгресс «Экология и здоровье человека». Материалы конгресса. – Самара, 2007. – С. 89–96. 5. Активность ферментов антиоксидантной защиты организма и изменения липидного состава микросом при действии витамина Е и его производных / Г.В. Донченко [и др.] // Тезисы докл. VI конф. «Биоантиоксидант». – М., 2002. – С. 167–169. 6. Актуальные проблемы применения биологически активных веществ и производства премиксов / Т.М. Околелова [и др.]. – Сергиев Посад, 2002. – 283 с. 7. Алешко-Ожевский Ю.П. Spirulina platensis перспективный пищевой ис- точник эссенциальпых микроэлементов / Ю.П. Алешко-Ожевский, И.С. Зилова, В.К. Мазо [и др.]. // Вестн. новых мед. технологий. – 2002. – Т. 9, № 1. – С. 3–10. 8. Алтунин А.Д. Микроводоросль спирулина платенсис в рационе мелких домашних животных и птиц / А.Д. Алтунин, Г.А. Шмелева, Е.В. Белик, М.М. Коган // Золотое кольцо России : Материалы IV регион, конф. – Владимир, 2001. – С. 11–12. 222 9. Анисимов М.М. Некоторые химические и медико-биологические свой- ства гуминовых кислот / М.М. Анисимов // Труды растениеводства и животноводства.– Хабаровск, 2001. – Т. 2. – С. 34–44. 10. Антиокислительная активность флавоноидов в системе микросомального перекисного окисления / А.И. Потапович [и др.] // Сборник научн. трудов «Кислородные радикалы в химии, биологии и медицине». – Рига, 1998. – С. 187–190. 11. Антиокислительная эффективность экстрактов корней солодки голой / Г.Г. Гарифулина [и др.] // Тезисы докл. VI конф. «Биоантиоксидант». – М., 2002. – С. 100–101. 12. Антиоксидантный эффект некоторых метаболитов организма / Е.В. Дятлова [и др.] // Тезисы докл. VI конф. «Биоантиоксидант». – М., 2002. – С. 178–179. 13. Антипанов Н.А. Аспекты управления риском здоровью в системе городского социально-гигиенического мониторинга / Н.А. Антипанова, Н.Н. Котляр // Труды XI Всероссийского конгресса «Экология и здоровье человека» на тему: «Проблемы выживания человека в техногенной среде современных городов». – Самара, 2006. – С. 332. 14. Антипов В.А. Современное состояние ветеринарного лекарствоведения / В.А. Антипов // Новые фармакологические средства для животноводства и ветеринарии: сб. науч. тр. – Краснодар, 2001. – Т 1. – С. 37–38. 15. Антомонов Ю.Г. О нейронных механизмах дифференцирования оператором входных сигналов / Ю.Г. Антомонов, М.Ю. Антомонов // Тез. докл. XXI науч. тех. конф. НТО РЭС им. А.С. Попова. – Киев : Изд-во НТО РЭС, 1972. – С. 5–6. 16. Артеменко П.Д. Современные медико-биологические проблемы использования минеральных и органических энтеросорбентов в качестве компонентов биологически активных добавок к пище / П.Д. Артеменко, А.В. Посохова, Г.А. Тарасенко // Тихоокеанский медицинский журнал. – 2009. – № 1. – С. 29–32. 17. Артюхов В.Г. Биологические мембраны: структурная организация, функции, модификация физико-химическими агентами : уч. пособие / В.Г. Артюхов, М.А. Наквасина. – Воронеж : ВГУ, 2000. – 296 с. 223 18. Байковская И. Спирулина – биологически активная добавка / И. Байковская, Т. Околелева, Л. Криворучко // Птицеводство. – 1993. – № 6. – С. 5–6. 19. Барабой В.А. Окислительно-антиоксидантный гомеостаз в норме и при патологии / В.А. Барабой, Д.А. Сутковый. – Киев : Наукова думка, 1997. – 420 с. 20. Бауэр Э.С. Теоретическая биология / Э.С. Бауэр. – М.–Л. : Изд. ВИЭМ, 1935. – 206 с. 21. Бауэр Э.С. Физические основы в биологии / Э.С. Бауэр. – М.: Изд. Мособлздравотдел, 1930. – 103 с. 22. Белова Н.Ф. Использование биологически активных веществ в кормлении цыплят-бройлеров / Н.Ф. Белова // Материалы международной научнопрактической конференции молодых ученых и специалистов. – Воронеж, 2008. – С. 111–112. 23. Белозерова Л.А. Роль перекисного окисления липидов и системы антиоксидантной защиты в патологии печени и эритроцитов / Л.А. Белозерова, Т.П. Генинг ; под. ред. д.б.н., проф. Т.П. Генинг // Система перекисного окисления липидов – антиоксиданты в норме и патологии. – Ульяновск : Вектор-С, 2008. – С. 113–141. 24. Березовский В.А. Кислородный гомеостазис в норме и патологии // Кислородный гомеостазис и кислородная недостаточность : сб. ст. – Киев : Наукова думка, 1978. – С. 5–18. 25. Бернар К. Лекции по экспериментальной патологии. – М.–Л.: Государственное издательство биологической и медицинской литературы, 1937. – 512 с. + 72 с. 26. Бернар К. Курс общей физиологии. Жизненные явления общие животным и растениям. Лекции, читанные в музее Естественной Истории в Париже : пер. с фр. / К. Бернар. – СПб. : Изд-во И.И. Билибина, 1978. – 319 с. 27. Берталанфи Л. фон. Общая теория систем – обзор проблем и результатов. В кн.: Системные исследования. Ежегодник. – М.: Наука, 1969. – 203 с. 28. Берталанфи Л. Общая теория систем. Исследования по общей теории систем : пер. с англ. – М.: Прогресс, 1969. – С. 23–82. 224 29. Биологически активные добавки к пище в профилактической и клинической медицине / И.В. Маев, А.Б. Петухов, В.А. Тутельян [и др.]. – М., 1999. – 74 с. 30. Биологически активные соединения винограда: перспективы призводства и применения в медицине и питании / В.М. Монченко [и др.] // Мат. международной, научно-практической конференции. – Симферополь, 2001. – С. 7–15. 31. Биофлавоноид – содержащие растения как потенциальные антиоксиданты / М.А. Рыжикова [и др.] // Тезисы докл. VI конф. «Биоантиоксидант». – М., 2000. – С. 5001–503. 32. Блинкова Л.П. Биологическая активность спирулины / Л.П. Блинкова, О.Б. Горобец, А.П. Батуро // Журн. микробиологии. – 2001. – № 2. – С. 14–18. 33. Блюменфельд Л.А. Информация, термодинамика и конструкция биологических систем // Соровский образовательный журнал. – 1996. – № 7. – С. 88–92. 34. Большакова И.В. Антиоксидантные свойства ряда экстрактов лекарственных растений / И.В. Большакова, Е.Л. Лозовская, И.И. Сапежинский // Биофизика. – 1997. – Т. 42. – Вып. 2. – С. 480–483. 35. Бондырев А.А. Дискриминация между апоптозом и некрозом нейронов под влиянием окислительного стресса // Биохимия. – 2000. – Т. 65, № 7. – С. 981–990. 36. Боронец Т.Ю. Выделение и очистка фикоцианина из биомассы спирулины // Тезисы межвузовской конференции молодых ученых. Приложение к межвузовскому журналу. Аспирантский вестник Поволжья. – Самара, 2007. – С. 197– 203. 37. Браун А.Д., Моженок Т.П. Неспецифический адаптационный синдром клеточной системы. – Л.: Наука, 1987. – 228 с. 38. Бузлама В.С. Механизм действия препаратов гуминовых веществ / В.С. Бузлама, В.Н. Долгополов, А.В. Сафонов, С.В. Бузлама // Итоги и перспективы применения гуминовых препаратов и кормовых добавок в ветеринарии: Материалы IV Всероссийской конференции. – М., 2006. – С. 24–35. 39. Буяров B.C. Новое в технологии выращивания бройлеров // Аграрная наука. – 2005. – № 10. – С. 15–17. 225 40. Вапняр В.В. Структура иерархической двухуровневой модели гомеостаза человека в определении роли неравновесной термодинамики и синергетики при инфекционном процессе // Успехи современного естествознания. – 2007. – № 7. – С. 43–45. 41. Венгеровский А.И. Методические указания по изучению гепатозащитной активности фармакологических веществ / А.И. Венгеровский, И.В. Марков, А.С. Саратиков ; под ред. В.П. Фисененко // Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению любых фармакологических веществ. – М.: ИИА «Ремодиум», 2000. – С. 228–231. 42. Виленчик М.М. Биологические проблемы старения и долголетия. – 2-е изд. – М.: Знание, 1987. – 224 с. 43. Винер Н. Кибернетика, или управление и связь в животном и машине. 1948–1961. – 2-е изд. – М.: Наука; Главная редакция изданий для зарубежных стран, 1983. – 344 с. 44. Владимиров Ю.А. Свободные радикалы в биологических системах // Соросовский образовательный журнал. – 2000. – № 12. – С. 13–19. 45. Владимиров Ю.А. Биологические мембраны и незапрограммированная смерть клетки // Соровский образовательный журнал. – 2000. – Т. 6, № 9. – С. 2–9. 46. Влияние антропогенного загрязнения окружающей среды на состояние антиоксидантной системы жителей Оренбургской области / Г.П. Котельников [и др.] // Известия Самарского научного центра Российской академии наук, спец. выпуск «XIII конгресс «Экология и здоровье человека»». – 2008. – Том 1. – С. 173–177. 47. Влияние биофлавоноидов на микросомальное и митохондриальное оксиление при CCl4 – гепатозе / Е.Г. Доркина [и др.] // Тезисы докл. XIII Рос. нац. конгресса «Человек и лекарство». – М., 2006. – С. 520. 48. Влияние масляного экстракта из корня лопуха на антиоксидантную систему животных с экспериментальным гепатитом / Ж.Ж. Нургалиева [и др.] // Тезисы докл. XIII Рос. нац. конгресса «Человек и лекарство». – М., 2006. – С. 232. 226 49. Влияние окружающей среды на заболеваемость органов пищеварения / О.В. Сазонова [и др.] // Известия Самарского научного центра Российской академии наук, спец. выпуск «XIII конгресс «Экология и здоровье человека»». – 2008. – Том 2. – С. 151–154. 50. Влияние препаратов спирулины на качественные показатели мяса бройлеров / С.А. Тимофеевская // Пищевая и перерабатывающая промышленность. Реферативный журнал. – 2007. – № 4. – С. 1257. 51. Влияние режимов механохимической активации на активность ферментативного комплекса виноградных семян / Н.Н. Корнен [и др.] // Известия высших учебных заведений. Пищевая технология. – Краснодар, 2000. – № 5–6. – С. 42–43. 52. Влияние спирулины и ее компонентов на иммунную систему (обзор литературы) / С.А. Кедик, Е.И. Ярцев, И.В. Сакаева, Е.С. Жаворонок, А.В. Панов // Биофармацевтический журнал. – 2011. – Т. 3, № 3. – С. 3–10. 53. Возможные механизмы биологического действия гуминовых веществ / Д.И. Стом [и др.] // Сибирский медицинский журнал. – 2008. – № 6. – С. 76–79. 54. Влияние различных источников углерода на рост культуры Spirulina platensis (Nords.) Geilt / А.В. Воронин, С.В. Первушкин, И.Ф. Шаталаев // Вестник СамГУ. – 2006. – № 2 (42). – С. 161–166. 55. Изучение фракционного состава белков микроводоросли Spirulina platensis / А.В. Воронин, С.В. Первушкин, А.А. Сохина // Новые и нетрадиционные растения и перспективы их использования : материалы IV Междунар. симп. – М., 2001. – Т. III. – С. 436–438. 56. Высокопроницаемые контактные мембраны / М.Б. Беркинблит, В.П. Божкова, Л.Ю. Бойцова ; ред. Л.М. Чайлахян ; АН СССР, Науч. совет по комплекс. пробл. «Биол. мембраны и использ. принципов их функционирования в практике», Ин-т пробл. передачи информ., МГУ им. М.В. Ломоносова. – М. : Наука, 1981. – 464 с. – (Биология и техника мембраны). 57. Гальперин Ю.М. Пищеварение и гомеостаз. – М.: Наука, 1986. –303 с. 58. Гамалей И.Г. О регуляторной роли активных форм кислорода в клетках // Цитология. – 1999. – Т. 41, № 9. – 767 с. 227 59. Гейльбрун Л. Динамика живой протоплазмы / пер. с англ. и предисловие В.А. Дорфмана. – М.: Изд. ИЛ, 1957. – 347 с. 60. Гепатозащитное действие флавоноидов вики изменчивой и вики обрубленной / Э.Т. Оганесян [и др.] // Фармация. – 2004. – № 4. – С. 41–42. 61. Гепатозащитное действие цветков бархатцев распростертых / Е.Г. Доркина [и др.] // Фармация. – 2004. – № 2. – С. 33–35. 62. Гердон Дж. Регуляция функции генов в развитии животных / пер. с англ., предисловие Г.В. Лопашова. – М.: Мир, 1977. – 196 с. 63. Гикавый В.И. Цитопротекторное и антиоксидантное действие регесана / В.И. Гикавый, Л.А. Подгурский, Л.И. Павлов // Тезисы докл. XIII Рос. нац. конгресса «Человек и лекарство». – М., 2006. – С. 510. 64. Гичев Ю.П. Загрязнение окружающей среды и здоровье человека. – Новосибирск : СО РАМН, 2002. – 203 с. 65. Гомеостаз / П.Д. Горизонтов, A.B. Вальдман, Б.В. Алешин [и др.] ; под ред. П.Д. Горизонтова. – 2-е изд., перераб., доп. – М.: Медицина, 1981. – 576 с. 66. Гомеостаз и регуляция физиологических систем организма / Е.Д. Гольдберг, A.M. Дыгай, В.П. Нефедов [и др.]. – Новосибирск : Наука, 1992. – 254 с. 67. Гомеостаз на различных уровнях организации биосистем / В.П. Нефедов, A.A. Ясайтис, В.Н. Новосельцев [и др.]. – Новосибирск : Наука, 1991. – 232 с. 68. Гомеостазирование физиологических функций на уровне митохондрий / М.Н. Кондрашова, Е.В. Григоренко, A.M. Бабский, В.А. Хазанов // Молекулярные механизмы клеточного гомеостаза : сб. / Институт биофизики СО РАН. – Новосибирск : Наука, 1987. – С. 40–66. 69. Гомеостазис // Энциклопедия кибернетики. – Киев : Украинская Советская энциклопедия, 1974. – Т. 1. – С. 232. 70. Гомеостатическая система // Энциклопедия кибернетики. – Киев : Украинская Советская энциклопедия, 1974. – Т. 1. – С. 232–233. 71. Гомеостатические принципы в экономико-политических процессах и в живых организмах / Ю. М. Горский, А. М. Степанов, С. В. Покровский, О. В. Кудреватова // Проблемы информатизации. – 2000. – № 4. – С. 43–49. 228 72. Горбань Е.Н. Антиоксидантные свойства спирулины / Е.Н. Горбань, Н.Н. Юрженко, Т. Брюзгина [и др.]. // Вестник гигиены и энидемиологии. – 2002. – Т.6, № 1. – С. 25–27. 73. Государственная Фармакопея СССР. Вып. 1. Общие методы анализа / МЗ СССР. – 11-е изд. – М.: Медицина, 1987. – 336 с. 74. Государственная Фармакопея СССР. Вып. 2. Общие методы анализа. Лекарственное растительное сырье / МЗ СССР. – 11-е изд. – М.: Медицина, 1989. – 400 с. 75. Григорян Р.Д. Самоорганизация гомеостаза и адаптации. – Киев : Академпериодика, 2004. – 501 с. 76. Грошовый Т.А. Математическое планирование эксперимента в фармацевтической технологии / Т.А. Грошовый, Е.В Маркова, В.А. Головкин. – Киев : Вища школа, 1992. – 185 с. 77. Гузь Н.И. Влияние масляного экстракта из корня девясила на систему перекисного окисления липидов у больных, употребляющих психостимулятор амфетаминной группы // Тезисы докл. XIII Рос. нац. конгресса «Человек и лекарство». – М., 2006. – С. 113. 78. Майорова Ж.С. Гумат калия в рационах цыплят-бройлеров / Инновационные направления и методы реализации научных исследований в АПК. Сборник научных трудов преподавателей и аспирантов Рязанского государственного агротехнического университета имени П.А. Костычева. – Рязань, 2012. – С. 222–225. 79. Давыдовский И.В. Проблемы причинности в медицине: (Этиология). – М.: Медгиз, 1962. – 176 с. 80. Дж. Баркрофт Основные черты архитектуры физиологических функций. – М., Биомедгиз, 1937. – 308 с. 81. Долгушин И.И. Нейтрофилы и гомеостаз / И.И. Долгушин, О.В. Бухарин. – Екатеринбург, 2001. – 283 с. 82. Дубинина Е.Е. Активные формы кислорода и их роль в развитии оксидативного стресса // Труды международной конференции «Фундаментальные и при- 229 кладные аспекты современной биохимии». – СПб. : Изд-во СПбМЦ, 1998. – С. 386–395. 83. Елисеева Л.Г. Опыт применения биомассы спирулины для обогащения продуктов питания / Л.Г. Елисеева, Г.Г. Жарикова, А.Т. Ширшов [и др.]. // Индустрия продуктов здорового питания – третье тысячелетие. Международная научно-практическая конференция. – М., 1999. – Ч. 1. – С. 150–151. 84. Еремин А.Н. Влияние полидисульфида галловой кислоты на активность и стабильность каталазы в разных средах / А.Н. Еремин, Ю.П. Лосев, Д.И. Метелица // Биохимия. – 2000. – Т. 65, № 2. – С. 298–308. 85. Ерёмина А.В. Определение полифенольного состава сухого экстракта гребней винограда методом ВЭЖХ / А.В. Ерёмина, В.Ю. Решетняк, М.О. Везиришвили // Московская медицинская академия им. И. М. Сеченова. – 2004. – 75 с. 86. Жестянников В.Д. Репарация ДНК и ее биологическое значение. – Л., 1979. – 285 с. 87. Заводник И.Б. Процессы окисления гомеостаза человека / И.Б. Заводник, Е.А. Лапшина // Биохимия. – 1996. – Т. 61, вып. 1. – С. 42–48. 88. Загускин С.Л. Время жизни человека и условия активного долголетия Время и человек (Человек в пространстве концептуальных времен): сборник научных трудов / под науч. ред. В.С. Чуракова. – Новочеркасск : «НОК», 2008. – С. 138–156. – (Библиотека времени. Вып. 5). 89. Запрометов М.Н. Специализированные функции фенольных соединений в растениях // Физиология растений. – 1993. – Т. 40, № 6. – С. 921. 90. Ибеpалл А., Мак-Каллок У. Гомеокинез – оpганизационный пpинцип сложных живых систем // Общие вопpосы физиологических механизмов. – М. : Наука, 1970. – С. 55–78. 91. Ильинских H.H. Цитогенетический гомеостаз и иммунитет / H.H. Ильинских, И.Н. Ильинских, Е.Ф. Бочаров. – Новосибирск : Наука, 1986. – 159 с. 92. Иммунный гомеостаз в экстремальных природных условиях / М.М. Миррахимов, Н.В. Васильев, Т.И. Коляда [и др.]. – Фрунзе : Илим, 1985. – 273 с. 230 93. Перспективы использования в медицине гумата натрия, выделенного из торфа томской области / Р. Р. Исматова, А. У. Зиганшин // Эфферентная терапия. – 2007. – Т. 13, № 4. – С. 45–47. 94. Исследование нитротропной активности некоторых фитопрепаратов содержащих фенилпропаноиды / В.А. Куркин [и др.] // IX научно-практическая конференция Пензенского института совершенствования врачей МЗ РФ с участием регионов России «Актуальные вопросы диагностики, лечения и реабилитации больных»: материалы конференции. – Пенза, 2002. – С. 246–249. 95. Исследование химического состава виноградных семян с целью использования их в качестве кормовой добавки / А.Ю. Шаззо [и др.] // Известия высших учебных заведений. Пищевая технология. – Краснодар, 2002. – № 1. – С. 38–39. 96. К механизму обеспечения антиоксидантного гомеостаза / Н.М. Сторож [и др.] // Цитология. – 1999. – Т. 41, № 9. – С. 828. 97. Кассиль Г.Н. Боль и обезболивание / Г.Н. Кассиль ; Академия наук СССР. – М.: Изд-во Акад. наук СССР, 1958. – 318 с : ил. 98. Кедик С.А. Спирулина – пища XXI века / С.А. Кедик, Е.И. Ярцев, Н.В. Гультяева. – М.: Фарма Центр, 2006. – 166 с. 99. Кичигин В.И. Влияние экологических факторов среды обитания на здоровье населения / В.И. Кичигин, Е.Д. Палагин, Ю.П. Пономарева // Труды XI Всероссийского конгресса «Экология и здоровье человека» на тему: «Проблемы выживания человека в техногенной среде современных городов» 5–7 декабря 2006. – Самара, 2006. – С. 113–144. 100. Клебанов Г.И. Антиоксиданты. Антиоксидантная активность. Методы исследования // Материалы 16 сессии школы-семинара в Пущино-на-Оке, Академическая школа им. A.M. Уголева «Современные проблемы физиологии и патологии пищеварения». – 2001. – С. 109–118. 101. Климнюк Е.В. Экспериментальная фармакотерапия растительными флавоноидами поражений печени, вызванных индометацином // Фармакология и токсикология: Респ. Межвед. Сб. МЗ УССР. – 1991. – № 26. – С. 94–97. 231 102. Количественное определение фикоцианина в биомассе спирулины / С.В. Первушкин [и др.] // Фармация. – 2005. – № 5. – С. 16–17. 103. Кольтовер В.К. Свободнорадикальная теория старения: исторический очерк // Успехи геронтологии. – 2000. – Вып. 4. – С. 33–40. 104. Кондрашова М.Н. Отрицательные ионы и активные формы кислорода // Биохимия. – 1999. – Т. 64, № 3. – С. 430–432. 105. Консистентные свойства шоколадных изделий с добавлением измельченных ядер виноградных семян / Н.А. Басий [и др.] // Известия высших учебных заведений. Пищевая технология. – Краснодар, 2005. – № 1. – С. 51–53. 106. Коробейникова О.Н. Модификация определения продуктов перекисного окисления липидов в реакции с тиобарбитуровой кислотой // Лаб. дело. – 1989. – № 7. – C. 8–10. 107. Корогодин В.И. Проблемы пострадиоционного восстановления. – М., 1966. – С. 50–60. 108. Королева Л.Р. Современные гепатопротекторы // Клиническая фармакология и лекарственные средства. – 2005. – № 2.– С 35–37. 109. Королюк М.А. Метод определения активности каталазы / М.А. Королюк, Л.И. Иванова, И.Т. Майорова // Лаб. дело.– 1988.– № 1.– С. 16–19. 110. Ксейко Д.А. Процессы перекисного окисления липидов в норме и патологии / Д.А. Ксейко; под. ред. д.б.н., проф. Т.П. Генинг // Система перекисного окисления липидов – антиоксиданты в норме и патологии. – Ульяновск : ВекторС, 2008. – С. 6–48. 111. Кулаев Б.С. Эволюция гомеостазиса в биологическом пространстве – времени. – М.: Научный мир, 2006. – 229 с. 112. Куркин А.В. Флавоноиды как перспективный источник экопротекторов // Труды XI Всероссийского конгресса «Экология и здоровье человека» на тему: «Проблемы выживания человека в техногенной среде современных городов» 5–7 декабря 2006. – Самара, 2006. – С. 159–160. 113. Куркин В.А. Перспективы использования лекарственных растений, содержащих фенилпропаноиды // Современное состояние и перспективы научных 232 исследований в области фармации: Тез. докл. научн.-практ. конф. СамГМУ. – Самара, 1996. – С. 134–135. 114. Куркин В.А. Фенилпропаноиды – перспективные природные биологически активные соединения // Актуальные вопросы медицины. – Самара, 1996. – С. 37–40. 115. Лабораторные животные. Разведение, содержание, использование в эксперименте : монография / И.П. Западнюк [и др.]. – Киев : Виша школа, 1983. – 363 с. 116. Левинский Б.В. Гуминовые препараты нового поколения // Агро XXI. – 2003. – № 1. – С. 69–70. 117. Логинов A.A. Гомеостаз: Философские и общебиологические аспекты. – Минск : Вышэйшая школа, 1979. – 176 с. 118. Логинов Г.П. Эффективность использования кормовой добавки «ГумоСпир» при выращивании сельскохозяйственной птицы / Г.П. Логинов, С.А. Симакова // Ученые записки казанской государственной академии ветеринарной медицины им Н.Э. Баумана. – Казань, 2011. – Том 205. – С. 124–130. 119. Лопашов Г.В., Ротт Н.Н., Туманишвили Г.Д. Межклеточные взаимодействия в дифференцировке и росте. – М.: Наука, 1970. – 256 с. 120. Лошаков Л.А. Лекарственные растения – основной источник эффективных природных антиоксидантов / Л.А. Лошаков, В.П. Пахомов // Тезисы докл. XIII Рос. Нац. Конгресса «Человек и лекарство». – М., 2006. – С. 25. 121. Лубяко A.A. Гомеостаз, механизмы формирования, адаптации, единообразного устройства / A.A. Лубяко. – М., 2004. – 523 с. 122. Меделяновский А.Н. Системные механизмы гомеостаза // Успехи физиологических наук. – 1982. – № 3. – С. 96–126. 123. Макаров В.Г. Антиоксиданты и реакционно–активные формы кислорода. Их роль и механизмы действия / В.Г. Макаров, М.Н. Макарова // VIII Международный съезд «Фитофарм – 2004». – Миккели, 2004. – С. 121–132. 233 124. Матюшин Б.Н. Определение супероксиддисмутазной активности в материале пункционной биопсии печени при ее хроническом поражении // Лаб. дело. – 1991. – № 7. – С. 16–19. 125. Матюшин Б.Н. Современные подходы к лабораторной диагностике свободнорадикальных процессов в печени при ее вирусном поражении / Б.Н. Матюшин, А.С. Логинов, В.Д. Ткачев // Клинич. и лаб. диагностика. – 1997.– № 6. – С. 37–38. 126. Медавар П., Медавар Дж. Наука о живом / предисл. Б.М. Медникова. – М.: Мир, 1983. – 207 с. 127. Методики клинических лабораторных исследований. Справочное пособие. – Т. 2. Клинико-биохимические исследования. Иммуноло-гические исследования / под ред. В. В. Меньшикова. – М.: Лабора, 2009. – 304 с. 128. Механизм действия гуминовых кислот / В.С. Бузлама, В.Н. Долгополов, А.В. Сафонов, С.В. Бузлама // Итоги и перспективы применения гуминовых препаратов в продуктивном животноводстве, коневодстве и птицеводстве: всероссийская конференция, Москва, 21 декабря 2006 г.: сб.науч.тр. – М., 2006. – С. 24–35. 129. Милогородский Е.Н. Влияние спирулины платенсис на биохимический статус крови кур // Актуальные проблемы ветери–нарной медицины : Материалы междунар. науч.-практич. конф. сб. науч. тр. / УГАВМ. – Троицк, 2003. – С. 75–76. 130. Мироненко Г.А. Математическая обработка результатов измерений и вычислений // Фармация. – 1980. – № 5. – С. 69–74. 131. Мирошниченко О.С. Биогенез, физиологическая роль и свойства каталазы // Биополимеры и клетка. – 1992. – № 66. – С. 3–25. 132. Многофакторный анализ оценки влияния биологически активной добавки на основе спирулины на гематологические показатели крыс / В.В. Зайцев, В.В. Тарабрин, Е.А. Войщева // Вестник медицинского института «РЕАВИЗ»: реабилитация, врач и здоровье. – 2011. – № 1. – С. 17–21. 234 133. Войщева Е.А. Морфобиохимический состав крови и естественная резистентность животных при нагрузке организма биологически активной добавкой на основе спирулины : дис. … канд. биол. наук : 03.03.01. – Самара, 2011. – 122 с. 134. Семашко Н.А. Большая Медицинская Энциклопедия. Том 6. – М., 1929. – 452 с. 135. Новосельцев В.Н. Гомеостаз и здоровье: анализ с позиций теории управления // Автоматика и Телемеханика. – 2012. – № 5. – С. 97–110. 136. О влиянии биологически активных веществ на антиоксидантную активность фитопрепаратов / Е.И. Шкарина [и др.] // Хим.-фармац. журн.– 2001.– Т. 35, № 6.– С. 40–47. 137. Овсянникова Т.Н. Состав и антиоксидантная активность комплекса биополимеров из Spirulina platensis (Nordst.) Geilt. / Т.Н. Овсянникова, Н.Г. Миронова, А.Г. Губанова // Альгология. – 1998. – Т. 8, № 1. – С. 75–81. 138. Определение защитного эффекта некоторых веществ от действия свободных радикалов / Н.В. Машнина [и др.] // Тезисы докл. XIII Рос. нац. конгресса «Человек и лекарство». – М., 2006. – С. 26. 139. Оценка показателей антиоксидантной активности препаратов на основе лекарственного растительного сырья / А.П. Арзамасцев [и др.] // Хим.-фармац. журн. – 1999. – Т. 33, № 11. – С. 17–20. 140. Павлов A.C. Физиологические механизмы гомеостатического обеспечения человека при стрессе // Физиология человека. – 2001.– Т. 27, № 1. – С. 65–73. 141. Павлов П.О. Гомеостат наркомана / П.О. Павлов, Н.И. Моисеева // Вестник психотерапии. – 2004. – № 11 . – С. 144–147. 142. Павлова O.Н., Пинаева О.Н., Гарипов Т.В., Желонкин Н.Н., Первушкин С.В. Изучение скорости созревания сенсорно–двигательных рефлексов у крыс на фоне нагрузки биомассой спирулины // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. – 2014. – Выпуск 4 (24). – С. 3–10. 143. Павлова О.Н., Гарипов Т. В., Пинаева O.Н. Становление рефлексов у крыс на фоне нагрузки биомассой спирулины // Ученые записки Казанской госу- 235 дарственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана: Т. 221. – Казань, 2015. – С. 163–165. 144. Павлова О.Н., Гарипов Т.В., Григорьева Ю.В. Гистоморфологическая характеристика ткани печени крыс как реакции на шрот семян кунжута // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины имени Н.Э. Баумана: Т. 213. – Казань, 2013. – С. 212–216. 145. Павлова О.Н., Гарипов Т.В., Григорьева Ю.В., Желонкин Н.Н., Первушкин С.В. Реактивные изменения ткани печени крыс в результате нагрузки шротом семян винограда // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. – 2013. – Выпуск 3. – С. 85–89. 146. Павлова О.Н., Герасимова О.В. Морфофункциональный аспект реактивных изменений печени в результате нагрузки шротом семян винограда // Физиология и медицина. Исследования, высокие технологии, стартапы: сборник статей VI международной научно-практической конференции «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине», 22–23 мая 2014 г., Санкт–Петербург, Россия / научные редакторы А.П. Кудинов, Б.В. Крылов. – СПб.: Изд-во политехн. ун-та, 2014. – С. 101–104. 147. Павлова О.Н. Изучение морфологического и биохимического состава крови цыплят-бройлеров на фоне введения в их рацион смеси шрота семян кунжута и биомассы спирулины // Известия Самарской государственной сельскохозяйственной академии. – 2012. – Выпуск № 1. – С. 36–38. 148. Павлова О.Н. Классификация биологически активных добавок к пище и их применение в медицине и лечебном питании // Сборник материалов 34 научной конференции студентов и аспирантов «Дни студенческой науки».– Самара : СамГУПС, 2007. – Выпуск 8. – С. 108. 149. Павлова О.Н., Колесников Е.В. Влияние шрота семян кунжута на основные показатели периферической крови // Биология – наука XXI века : 16-я Международная Пущинская школа-конференция молодых ученых (Пущино, 16– 21 апреля 2012 года). Сборник тезисов. – Пущино, 2012. – С. 435. 236 150. Павлова О.Н., Колесников Е.В. Гистоморфологическая характеристика ткани печени эмбрионов крыс как реакции на шрот семян кунжута // Биология – наука XXI века : 17-я Международная Пущинская школа-конференция молодых ученых (Пущино, 21–26 апреля 2013 года). Сборник тезисов. – Пущино, 2013. – С. 442–443. 151. Павлова О.Н. Колесников Е.В. Изучение гепатопротекторных свойств шрота семян кунжута // Тенденции и инновации современной науки : Материалы II Международной научно-практической конференции (24 сентября 2012 г.). Сборник научных трудов. – Краснодар, 2012. – С. 51. 152. Павлова О.Н., Колесников Е.В. Обоснование применения кормовой добавки на основе биомассы спирулины и шрота семян кунжута при выращивании цыплят-бройлеров // Материали за VIII международна научно практична конференция «Образованието и науката на XXI век – 2012» (17–25 октомври, 2012). Том 42. Селско стопанство. Ветеринарна наука. – София : «Бял ГРАД-БГ» ООД, 2012. – С. 88–91. 153. Павлова О.Н., Колесников Е.В. Реактивные изменения печени крыс в эмбриогенезе и онтогенезе на фоне нагрузки шротом семян кунжута // Тенденции и инновации современной науки : Материалы X Международной научнопрактической конференции (17 сентября 2013 г.). Сборник научных трудов. – Краснодар, 2013. – С. 62. 154. Павлова О.Н. Корреляционный анализ изменений репродуктивной системы крыс на фоне нагрузки биомассой спирулины // Актуальные проблемы медицинских наук : сб. науч. тр. III межрегион. студ. науч. форума с уч. молодых исследователей / под ред. Л. В. Матвеевой. – Саранск : ООО «Референт», 2014. – С. 97–98. 155. Павлова О.Н., Пинаева О.Н., Леонов В.В., Гарипов Т.В., Зайцев В.В. Оценка влияния гумата калия на репродуктивную систему крыс // Актуальные проблемы развития ветеринарной науки : Материалы Международной конференции, посвященной 85-летию Самарской научно-исследовательской ветеринарной 237 станции Российской академии сельскохозяйственных наук / ГНУ НИВС Россельхозакадемии. – Самара, 2014. – С. 282–286. 156. Павлова О.Н. Оценка морфологического состава крови крыс на фоне нагрузки внутрижелудочно шротами семян винограда, граната и кунжута // Известия Самарской государственной сельскохозяйственной академии. – 2012. – Выпуск № 1. – С. 43–47. 157. Павлова О.Н. Разработка биологически активной добавки к пище на основе сине-зеленой микроводоросли Spirulina platensis и виноградного шрота // Труды межвузовской конференции молодых ученых «Аспирантские чтения – 2007». – Самара : СамГМУ, 2007. – С. 242–249. 158. Павлова О.Н. Реактивные изменения репродуктивной системы крыс на фоне нагрузки биомассой спирулины Физиология и медицина // Исследования, высокие технологии, стартапы: сборник статей Шестой международной научно– практической конференции «Высокие технологии, фундаментальные и прикладные исследования в физиологии и медицине», 22–23 мая 2014 г., СанктПетербург, Россия / научные редакторы А.П. Кудинов, Б.В. Крылов. – СПб.: Издво Политехн. ун-та, 2014. – С. 97–100. 159. Павлова О.Н. Реактивные изменения ткани печени крыс в результате нагрузки гепатопротекторами природного происхождения // Актуальные задачи ветеринарии, медицины и биотехнологии в современных условиях и способы их решения : Материалы Региональной научно-практической межвузовской конференции / ГНУ Самарская НИВС Россельхозакадемии. – Самара, 2013. – С. 212–223. 160. Павлова О.Н. Физиологическое обоснование применения фитогепатопротектора «ВинСпир» в ветеринарии // Известия Самарской государственной сельскохозяйственной академии . – 2011. – Выпуск № 1. – С. 101–105. 161. Павлова О.Н., Гарипов Т.В., Григорьева Ю.В., Желонкин Н.Н., Первушкин С.В., Бормотов А.В. Реактивные изменения ткани печени крыс в результате нагрузки шротами семян винограда и кунжута // Известия Самарского научного центра Российской академии наук: Т. 15 № 3(6). – Самара, 2013. – С. 1898–1903. 238 162. Павлова О.Н., Гарипов Т.В., Зайцев В.В. Сравнительная оценка морфологического состава крови крыс на фоне нагрузки внутрижелудочно фитоантиоксидантами // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана : Т. 212. – Казань, 2012. – С. 109–115. 163. Павлова О.Н., Герасимов Ю.Л., Пурыгин П.П. Исследование виноградного шрота для получения биологически активных добавок к пище // Процессы, технологии, оборудование и опыт переработки отходов и вторичного сырья : Материалы 3 Всероссийской научно-практической конференции; Известия Самарского научного центра Российской академии наук. Спец. выпуск СНЦ РАН. – Самара, 2008. – С. 152–156. 164. Павлова О.Н., Грибанова Е.А., Желонкин Н.Н., Боронец Т.Ю., Первушкин С.В., Пурыгин П.П. Современные подходы к классификации биологически активных добавок к пище Современные подходы к классификации биологически активных добавок к пище // Вестник Самарского государственного университета // Вестник СамГУ, № 9/1 (59). – Самара: СамГУ, 2007.– С. 256–269. 165. Павлова О.Н., Грибанова Е.А., Желонкин Н.Н., Зайцев В.В., Первушкин С.В., Тархова М.О. Исследование гепатопротекторного действия фитоантиоксидантов // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. – 2010. – Т. 12 (33), № 1 (8). – С. 2088–2090. 166. Павлова О.Н., Грибанова Е.А., Каримова Р.Г., Гарипов Т.В. Содержание микроэлементов в мышцах и витаминов в печени цыплят-бройлеров при нагрузке гуматом калия // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана. – 2013. – Т. 215. – С. 81–85. 167. Павлова О.Н., Грибанова Е.А., Пурыгин П.П. Преимущества сверхкритической экстракции как способа получения биологически активных добавок к пище // Современные сервисные технологии. Научные исследования аспирантов и молодых ученых : Материалы Всероссийской научно-технической конференции (27–28 ноября 2007 г.). – Самара : МГУС, 2007. – С. 256–260. 168. Павлова О.Н., Григорьева Ю.В. Гистоморфологическая характеристика ткани печени и морфологического состава крови крыс как реакции на шрот се- 239 мян кунжута // Вестник медицинского института «РЕАВИЗ»: Реабилитация, Врач и Здоровье. – 2012. –Выпуск № 2 (6). – С. 65–73. 169. Павлова О.Н., Григорьева Ю.В., Грибанова Е.А., Желонкин Н.Н., Первушкин С.В., Зайцев В.В. Реактивные изменения ткани печени крыс в результате нагрузки суспензией биомассы спирулины // Актуальные вопросы ветеринарной биологии. – 2013. – Выпуск 2. – С. 51–55. 170. Павлова О.Н., Григорьева Ю.В., Грибанова Е.А., Зайцев В.В. Реактивные изменения ткани печени крыс в результате нагрузки гуматом калия // Известия Самарской государственной сельскохозяйственной академии. – 2013. – Выпуск № 1. – С. 45–51. 171. Павлова О.Н., Дмитриев В.Б., Герасимов Ю.Л., Пурыгин П.П. О размножении дафний в растворах и экстрактах биомассы спирулины и шрота косточек винограда и их композиции в соотношении 1:1 и о решении интегродифференциального уравнения // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. – 2009. – Т. 11, № 1(2). – С. 114–119. 172. Павлова О.Н., Желонкин Н.Н., Боронец Т.Ю., Симонова Т.И. Перспективы использования сине-зеленой водоросли спирулина платенсис для производства биологически активных добавок к пище // Материалы Всероссийской научно–практической конференции, посвященный 10-тилетию кафедры «Технология и организация питания» «Современное состояние и перспективы развития пищевой промышленности и общественного питания» 19 октября 2007 г. – Челябинск : ЮУрГУ, 2007. – С. 92–96. 173. Павлова О.Н., Желонкин Н.Н., Первушкин С.В., Пурыгин П.П., Боронец Т.Ю., Кашавцева В.Б. Роль биологически активных добавок к пище в питании работников железнодорожной отрасли // Актуальные проблемы развития транспортного комплекса : Материалы 4 Международной научно-практической конференции. Самара, 4–5 марта 2008 г. – Самара : СамГУПС, 2008. – С. 318–321. 174. Павлова О.Н., Желонкин Н.Н., Воишева Е.А., Первушкин С.В., Пурыгин П.П., Тархова М.О. Влияние биологически активной добавки «ВинСпир» на основные показатели крови // Известия Самарского научного центра Российской 240 академии наук «13 конгресс «Экология и здоровье человека»». Т. 2. – Самара : Самарский научный центр Российской академии наук, 2008. – С. 249–252. 175. Павлова О.Н., Желонкин Н.Н., Первушкин С.В., Пурыгин П.П., Тархова М.О. Исследование гепатопротекторного действия биологически активной добавки «ВинСпир» // Известия Самарского научного центра Российской академии наук «13 конгресс «Экология и здоровье человека»». Т. 2. – Самара : Самарский научный центр Российской академии наук, 2008. – С. 253–257. 176. Павлова О.Н., Зайцев В.В., Желонкин Н.Н., Первушкин С.В. Влияние спирулины на репродуктивную систему крыс // Известия Самарской государственной сельскохозяйственной академии. – 2014. – Выпуск № 1. – С. 18–21. 177. Павлова О.Н., Логинов Г.П. Исследование противотоксических свойств фитогепатопротектора «ВинСпир» // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана: Т. 204. – Казань, 2010. – С. 135–140. 178. Павлова О.Н., Пинаева О.Н. Реактивные онтогенетические изменения нервной системы крыс на фоне нагрузки гуматом калия // Вестник медицинского института «РЕАВИЗ»: Реабилитация, Врач и Здоровье. – 2014. – Выпуск № 2 (14). – С. 54–61. 179. Павлова О.Н., Пинаева О.Н., Гарипов Т.В. Реактивные изменения репродуктивной системы крыс и их потомства в антенатальный период онтогенеза на фоне нагрузки шротом семян кунжута // Ученые записки Казанской государственной академии ветеринарной медицины им. Н.Э. Баумана: Т. 220 – Казань, 2014. – С. 184–187. 180. Павлова О.Н., Пинаева О.Н., Гарипов Т.В. Супильников А.А. Реактивные изменения репродуктивной системы крыс на фоне нагрузки шротом семян винограда Известия Самарского научного центра Российской академии наук. – 2014. – Т. 16, № 5 (4). – С. 1233–1237. 181. Павлова О.Н., Пинаева О.Н., Гарипов Т.В., Желонкин Н.Н., Первушкин С.В. Изучение скорости созревания сенсорно-двигательных рефлексов у крыс 241 на фоне нагрузки шротом семян винограда // Известия Самарского научного центра Российской академии наук. – 2014. – Т. 16, № 5 (2). – С. 1003–1008. 182. Павлова О.Н., Пинаева О.Н., Герасимова О.В. Состояние потомства крыс в антенатальном периоде при нагрузке шротом семян кунжута // Национальная Ассоциация Ученых (НАУ). – 2014. – № 2, ч. 4. – С. 42–44. 183. Павлова О.Н., Пинаева О.Н., Грибанова Е.А. Некоторые особенности онтогенетических изменений нервной системы крыс на фоне нагрузки гуматом калия // Теория и практика актуальных исследований : Материалы VII Международной научно-практической конференции. 19 августа 2014 г. : Сборник научных трудов. – Краснодар, 2014. – С. 165–173. 184. Павлова О.Н., Пинаева О.Н., Зайцев В.В. Реактивные изменения репродуктивной системы крыс на фоне нагрузки гуматом калия // Известия Самарской государственной сельскохозяйственной академии. – 2015. – Выпуск № 1. – С. 36–40. 185. Павлова О.Н., Пинаева О.Н., Колесников Е.В. Состояние потомства крыс в антенатальном периоде при нагрузке шротом семян кунжута Актуальные проблемы развития ветеринарной науки: Материалы Международной конференции, посвященной 85-летию Самарской научно-исследовательской ветеринарной станции Российской академии сельскохозяйственных наук / ГНУ НИВС Россельхозакадемии. – Самара, 2014. – С. 287–293. 186. Павлова О.Н., Пинаева О.Н., Леонов В.В. Изменения репродуктивной системы крыс на фоне нагрузки биомассой спирулины // Proceedings of the 2nd European Conference on Biology and Medical Sciences (August 15,2014). «East West» Association for Advanced Studies and Higher Education GmbH. – Vienna, 2014. – 291 p. 187. Павлова О.Н., Пинаева О.Н., Леонов В.В. Изучение скорости созревания сенсорно-двигательных рефлексов у крыс на фоне нагрузки шротом семян кунжута // Известия Самарской государственной сельскохозяйственной академии. – 2015. – Выпуск № 1. – С. 43–45. 188. Павлова О.Н., Пинаева О.Н., Леонов В.В., Гарипов Т.В., Зайцев В.В. Влияние гумата калия на репродуктивную систему крыс // Вестник медицинского 242 института «РЕАВИЗ»: Реабилитация, Врач и Здоровье. – 2014. – Выпуск № 3 (15). – С. 48–51. 189. Павлова О.Н., Пинаева О.Н., Леонов В.В., Грибанова Е.А. Состояние потомства крыс в антенатальном периоде при нагрузке гуматом калия // Вестник медицинского института «РЕАВИЗ»: Реабилитация, Врач и Здоровье. – 2014. – Выпуск № 4 (16). – С. 59–63. 190. Павлова О.Н., Пурыгин П.П. Характеристика винограда как потенциального компонента биологически активных добавок к пище // Современные сервисные технологии. Научные исследования аспирантов и молодых ученых : Материалы Всероссийской научно-технической конференции (27–28 ноября 2007 г.). – Самара : МГУС, 2007. – С. 265–270. 191. Павлова О.Н., Пурыгин П.П., Желонкин Н.Н., Первушкин С.В., Куркин В.А., Герасимов Ю.Л., Боронец Т.Ю. Определение токсичности и антиоксидантной активности биомассы Спирулины платенсис и лекарственных форм на ее основе // Вестник Самарского государственного университета // Вестник Самгу, №6 (56). – Самара: СамГУ, 2007. – С. 393–400. 192. Павлова О.Н., Симакова С.А. Использование кормовых добавок природного происхождения при выращивании сельскохозяйственной птицы как способ сохранения здоровья человека // Медико-физиологические проблемы экологии человека : Материалы IV Всероссийской конференции с международным участием (26–30 сентября 2011 г.). – Ульяновск : УлГУ, 2011. – С. 242–244. 193. Павлова О.Н., Симакова С.А. Природа оксидативного стресса и способы его коррекции // Медико-физиологические проблемы экологии человека : Материалы IV Всероссийской конференции с международным участием (26–30 сентября 2011 г.). – Ульяновск : УлГУ, 2011. – С. 244–246. 194. Павлова О.Н., Токарев И.П. Эффективность использования кормовой добавки «СпироГумат» при выращивании цыплят-бройлеров // Известия Самарской государственной сельскохозяйственной академии. – 2011. – Выпуск № 1. – С. 119–122. 243 195. Павлова О.Н., Чигарева А.А., Желонкин Н.Н., Первушкин С.В. Реактивные изменения тканей печени и морфологического состава крови крыс в результате нагрузки шротом семян граната // Известия Самарской государственной сельскохозяйственной академии. – 2014. – Выпуск № 1. – С. 35–40. 196. Панин Л.Е. Энергетический гомеостаз как функциональная система // Механизмы адаптации гомеостатических систем при действии на организм субэкстремальных и экстремальных факторов : сб. ст. – Новосибирск : Наука, 1980. – С. 83–87. 197. Пептидергическая регуляция гомеостаза / В.Х. Хавинсон, И.М. Кветной, В.В. Южаков и др. ; отв. ред. И.П. Ашмарин. – СПб.: Наука, 2003. – 196 с. 198. Первушкин С.В. Биомасса спирулины: исследования и перспективы использования : монография / С.В. Первушкин, А.В. Воронин, А.А. Сохина. – Самара : СамГМУ, 2004. – 100 с. 199. Первушкин С.В. Закрытый способ культивирования биомассы Spirulina platensis / С.В. Первушкин, М.О. Тархова, А.В. Воронин // Человек и лекарство : тез. докл. VII Рос. нац. конгр. 10–14 апр. 2000 г. – М., 2000. – С. 463. 200. Первушкин С.В. Исследования по стандартизации биомассы Spirulina platensis / С.В. Первушкин, А.В. Воронин, А.А. Сохина // Достижения, проблемы, перспективы фармацевтической науки и практики : сб. материалов конф. – Курск, 2001. – С. 216–217. 201. Первушкин С.В. Метод количественного анализа хлорофилла и каротиноидов микроводоросли Spirulina platensis / С.В. Первушкин, А.В. Воронин, И.Ф. Шаталаев // Человек и лекарство : тез. докл. VIII Рос. нац. конгр. 12–16 апр. 2001 г. – М., 2001. – С. 703. 202. Первушкин С.В. Методики идентификации различных пигментов и количественного спектрофотометрического определения суммарного содержания каротиноидов и белка в фитомассе Spirulina platensis (Nords.) Geilt. / С.В. Первушкин, В.А. Куркин, А.В. Воронин // Раст. ресурсы. – 2002. – Т. 38, вып. 1. – С. 112–119. 203. Первушкин С.В. Стандартизация биомассы спирулины / С.В. Первушкин, А.В. Воронин, А.А. Сохина // Актуальные проблемы фармацевтической нау- 244 ки и образования: итоги и перспективы : материалы науч.-практ. конф. – Пермь, 2001. – С. 132–133. 204. Перспективы применения препаратов гуминовых кислот в медицинской практике / Н. П. Аввакумова [и др.] // Выпускник фармацевтического вуза (факультета) в прошлом, настоящем и будущем: междунар. науч.-практ. конф., посвящ. 85-летию академии, Санкт– Петербург, 2004 : сб. науч. тр. – СПб., 2004. – С. 157–159. 205. Пилат Т.Л. Биологически активные добавки к пище (теория, производство, применение) / Т.Л. Пилат, А.А. Иванов. – М.: Аввалон, 2002. – 710 с. 206. Платонов А.Е. Статистический анализ в медицине и биологии: задачи, терминология, компьютерные методы. – М., 2000. – 52 с. 207. Полетаев А.Б. Регуляторная метасистема. Иммунонейроэндокринная регуляция гомеостаза / А.Б. Полетаев, С.Г. Морозов, И.Е. Ковалев. – М. : Медицина, 2002. – 168 с. 208. Попов А.И. Биологическая активность гуминовых веществ – интегральное проявление их свойств // Почвы – национальное достояние России: материалы IV съезда Докучаевского общества почвоведов : сб. науч. тр. – Новосибирск : НаукаЦентр, 2004. – С. 551. 209. Попов А.И. Гуминовые вещества: свойства, строение, образование / под ред. Е.И. Ермакова. – СПб.: Изд-во С.-Петерб. ун-та, 2004. – 248 с. 210. Почки и гомеостаз в норме и при патологии / С. Клар, Э. Белло-Ресс, А. Робсон и др. ; под ред. С. Клара; пер. с англ. Е.И. Дайхина. – М. : Медицина, 1987. – 440 с. 211. Природные антиоксиданты – как гепатопротекторы / Н.Д. Бунятян [и др.] // Экспериментальная и клиническая фармакология. – 1999. – Т. 62, № 3. – С. 64–67. 212. Природные антиоксиданты (биотехнологические, биологические и медицинские аспекты) : монография / Л.В. Кричковская [и др.]. – Харьков : ОАО «Модель Вселенной», 2001. – 367 с. 245 213. Прохорова Л.В. Разработка методики количественного определения суммы каротиноидов в препарате «Биомасса Спирулины платенсис» / Л.В. Прохорова, С.А. Кедик, В.В. Шелестова // Ведомости науч. центра экспертизы и гос. контроля лек. средств. – 2001. – № 4 (8). – С. 97–99. 214. Пупыкина К.А. Изучение сборов для лечения панкреатита и гепатита / К.А. Пупыкина, Т.И. Плеханова, Ч.А. Петрова // Фармация. – 2005. – № 3.– С. 25–27. 215. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ / под общ. ред. Р.У. Хабриева. – 2–изд., перераб. и доп. – М.: Медицина, 2005. – 832 с. 216. Саенко Ю.В. Свободнорадикальные молекулы и их роль в клеточных функциях и патологии. Роль редокс-чувствительных сигнальных путей в механизмах клеточной полиферации / Ю.В. Саенко ; под. ред. д.б.н., проф. Т.П. Генинг // Система перекисного окисления липидов – антиоксиданты в норме и патологии. – Ульяновск : Вектор-С, 2008. – С. 48–75. 217. Сапрыкина О.А. Химические и биохимические особенности экстрактов из твердых частей грозди винограда / О.А. Сапрыкина, С.Х. Абдуразакова // Известия высших учебных заведений. Пищевая технология. – Краснодар, 2001. – № 1. – С. 19–22. 218. Саратиков А.С. Новые гепатопротекторы природного происхождения / А.С. Саратиков, А.И. Венгеровский // Эксперим. и клинич. терапия. – 1995. – Т. 58, № 1. – С. 8–11. 219. Саркисов Д.С. Структурные основы гомеостаза / Д.С. Саркисов. – М. : Медицина, 1977. – 351 с. 220. Свиридкина Л.П. Влияние антиоксидантов на скорость выведения продуктов перекисного окисления из околоклеточного окружения / Л.П. Свиридкина, С.А. Попова, С.Г. Топоров // Тезисы докл. XIII Рос. нац. Конгресса «Человек и лекарство». – М., 2006. – С. 278. 221. Селье Г. Стресс без дистресса. – М.: Прогресс, 1979. – 123 с. 246 222. Сергеев В.Н. Биологически активное растительное сырье в пищевой промышленности / В.Н. Сергеев, Ю.И. Конаев // Пищевая промышленность. – 2001. – № 6. – С. 28. 223. Сетров М.И. Основы функциональной теории организации. – Л. : Наука, 1972. – 164 с. 224. Сеченов И.М. Избранные произведения. Том 2. – М. : АН СССР, 1956. – 944 с. 225. Симакова С.А. Влияние кормовой добавки на основе гумата калия и спирулины на биохимические показатели крови цыплят-бройлеров / С.А. Симакова, В.В. Зайцев // Известия Самарской государственной сельскохозяйственной академии. – 2011. – Выпуск № 1. – С. 97–100. 226. Симакова С.А. Использование кормовых добавок природного происхождения при выращивании сельскохозяйственной птицы как способ сохранения здоровья человека / С.А. Симакова, О.Н. Павлова // Медико-физиологические проблемы экологии человека : Материалы IV Всероссийской конференции с международным участием (26–30 сентября 2011 г.). – Ульяновск : УлГУ, 2011. – С. 242–244. 227. Симакова С.А. Исследование влияния кормовой добавки «ГумоСпир» на степень накопления тяжелых металлов и микроэлементов в мясе и витаминов группы В в печени цыплят-бройлеров / С.А. Симакова, В.В. Зайцев // Известия Самарской государственной сельскохозяйственной академии. – 2011. – Выпуск № 1. – С. 112–115. 228. Симакова С.А. Исследования влияния кормовой добавки на основе гумата калия на систему перекисного окисления липидов-антиоксидантов печени / С.А. Симакова, В.В. Зайцев, И.П. Токарев, Т.П. Кацюба // Актуальные проблемы ветеринарии и животноводства : практической конференции. Материалы Межрегиональной научно– – Самара : ГНУ СамНИВС Россельхозакадемии, 2010. – С. 295–299. 229. Симакова С.А. К вопросу о состоянии проблемы создания пищевых добавок на основе гумата калия / П.П. Пурыгин, Г.М. Исхакова, С.А. Симакова // 247 Современные сервисные технологии. Научные исследования аспирантов и молодых ученых : Материалы Всероссийской научно-технической конференции. – Самара : РГУТиС, 2009. – С. 417–418. 230. Симакова С.А. Обоснование применения микроводоросли spirulina platensis в качестве биологически активной добавки / С.А. Симакова, П.П. Пурыгин // Состояние и перспективы развития сервиса: образование, управление, технологии : Материалы Всероссийской научно-технической конференции. – Самара : РГУТиС, 2010. – С. 88–92. 231. Симакова С.А. Применение композиции гумата калия и спирулины в качестве биологически активной добавки к пище / С.А. Симакова, Г.М. Исхакова, П.П. Пурыгин // Известия самарского научного центра РАН. Т. 11 (27), № 1 (5). – Самара : (СНЦ) РАН, 2009. – С. 1097–1099. 232. Симакова С.А. Природа оксидативного стресса и способы его корректировки / С.А. Симакова // Медико-физиологические проблемы экологии человека : Материалы IV Всероссийской конференции с международным участием (26– 30 сентября 2011 г.). – Ульяновск : УлГУ, 2011. – С. 244–246. 233. Сирота Т.В. Новый подход в исследовании процесса аутоокисления адреналина и использование его для измерения активности супероксиддисмутазы // Вопросы мед. химии. – 1999. – Т. 45, № 3. – С. 263–272. 234. Певень В.Г. Спирулина в кормлении племенной птицы : автореф. дис. … канд. сельскохоз. наук. – Сергиев Посад, 1998. 235. Спирулина для улучшения яичной продуктивности птицы / Н. Фионин, И. Сорокина, О. Куликова // Птицеводство. – 2008. – № 5. – С. 29–32. 236. Берестов В. Спирулина повысила яйценоскость и привесы // Кормление сельскохозяйственных животных и кормоводство. – 2007. – № 8. – С. 32–33. 237. Мельник Н, Лебедева Н., Лебедев В., Панфилов Р. Спирулина стимулирует сперматогенез // Птицеводство. – 2004. – № 6. – С. 15. 238. Справочник по клиническим лабораторным методам исследованиям / под. ред. Е.А. Коста.– 2–е изд., испр. и доп. – М.: Медицина, 1975. – 384 с. 248 239. Сравнительная эффективность антиоксидантов при защите бактериальной плазматической мембраны от активных форм кислорода / А.Ю. Иванов [и др.] // Биофизика. – 2000. – Т. 45, № 4. – С. 660–665. 240. Строганов Н.С. Ведение лабораторной культуры и определение плодовитости дафний в ряду поколений / Н.С. Строганов, Л.В. Колосова // Методики биологических исследований по водной токсикологии. – М.: Наука, 1971. – С. 210–216. 241. Строганов Н.С. Методика определения токсичности водной среды // Методики биологических исследований по водной токсикологии. – М.: Наука, 1971. – С. 14–60. 242. Технологические свойства растительных БАД, полученных из вторичных ресурсов / А.П. Прибытко [и др.] // Известия высших учебных заведений. Пищевая технология. – Краснодар, 2007. – № 2. – С. 95–96. 243. Тутельян В.А. Безопасность и эффективность биологически активных веществ растительного происхождения / В.А. Тутельян, Ю.Б. Белоусов, К.Г. Гуревич. – Новосибирск : Экор-книга, 2007. – 316 с. 244. Уоддингтон К.Х. На пути к теоретической биологии. I. Пролегомены. – М.: Мир, 1970. – С. 156. 245. Ухтомский А. А. Избранные труды / под редакцией акад. Е. М. Крепса; Статья Н.В. Голикова; составление и комментарии Э.Ш. Айрапетьянца, В.Л. Меркулова, Ф.П. Некрылова. – Л.: Наука, Ленинградское отделение, 1978. – 358 с. ; ил. – (Классики науки). 246. Филоненко В.И. Биологически активные вещества в кормлении цыплят-бройлеров // Птицеводство. – 2004. – № 7. – С. 12–14. 247. Характеристика антирадикальной активности и состава экстрактов растительного сырья / М.Н. Макарова [и др.] // VIII Международный съезд «Фитофарм – 2004». – Миккели, 2004. – С. 121–123. 248. Чучалин А.Г. Система оксиданты – антиоксиданты и пути медикаментозной коррекции // Пульманология. – М., 2004. – С. 40–47. 249 249. Шеррингтон Ч. Интегративная деятельность центральной нервной системы. – Л., 1969. – 284 с. 250. Шидловский В. А. Современные теоретические представления о гомеостазе. – В кн.: Итоги науки и техники. Сер. Физиология человека и животных. – М., 1982. – Т. 25. – С. 3–18. 251. Шмелева Г.А. Эффективность применения снирулины платенсис в птицеводстве / Г.А. Шмелева, А.Д. Алтунин, М.М. Коган, Д.В. Трофимов, А.В. Борисов // Девятый Моск. междунар. вет. конгр. : материалы. – М., 2001. – С. 90–91. 252. Штерн Л. С. Проблемы гисто-гематических барьеров. – М.: Наука, 1965. – 331 с. 253. Штерн Л.С. Физиология и патология гистогематических барьеров. – М.: Наука. 1968. – 431 с. 254. Шуганов В.М. Выращивание бройлеров с использованием экологически чистых препаратов // Аграрная наука. – 2003. – № 7. – С. 27. 255. Овчинникова Л.А. Экспериментальная оценка фармакологического влияния препарата Spirulina platensis на организм бычков : дис. … канд. веет. наук : 16.00.04. – Троицк, 2008. – 135 с. 256. Эрвин Шредингер. Что такое жизнь с точки зрения физики? – М.: Атомиздат, 1972. – 62 с. 257. Юдина Н.В. Антиоксидантные свойства и биологическая активность гуминовых препаратов // Гуминовые вещества в биосфере : Материалы III Всероссийской конференции, Санкт–Петербург, 1–3 марта 2005 г. – СПб.: СанктПетербургский государственный университет, 2005. – С. 125. 258. Якименко Е.Н. Влияние минеральных удобрений и стимулятора роста на минеральный состав виноматериалов из винограда сорта Левокумский / Е.Н. Якименко, Т.И. Гугучкина // Известия высших учебных заведений. Пищевая технология. – 2005. – № 2–3. – С. 46–47. 259. Якименко О. Промышленные гуминовые препараты: перспективы и ограничения использования // Достиж. науки и техн. АПК. – 2004. – № 4. – С. 10–12. 250 260. A Critical Role for ABCG1 in Macrophage Inflammation and Lung Homeostasis / A.J. Wojcik, M.D. Skaflen, S. Srinivasan, C.C. Hedrick // J. Immunol. – 2008. – Vol. 180. – P. 4273–4282. 261. A novel role for cyclic nucleotide-gated cation channels in lung liquid homeostasis in sheep / R.W.J. Junor, A.R. Benjamin, D. Alexandrou et al. // J. Physiol. – 1999. – Vol. 520. – P. 255–260. 262. Aeschbacher M. Novel electrochemical approach to assess the redox properties of humic substances / M. Aeschbacher, M. Sander, R. P. Schwarzen- bach //Environ Sci Technol. – 2010. – Vol. 44, №1. – P. 87–93. 263. Allostasis, homeostasis and the costs of physiological adaptation / ed. J. Schulkin. –Cambridge : Cambridge University Press, 2004. – 372 p. 264. Almeida, A.R.M. T Cell Homeostasis: Thymus Regeneration and Peripheral T Cell Restoration in Mice with a Reduced Fraction of Competent Precursors / A.R.M. Almeida, J.A.M. Borghans, A.A. Freitas // J. Exp. Med. – 2001. – Vol. 194. – P. 591–600. 265. Altered Calcium/Calmodulin Kinase П Activity Changes Calcium Homeostasis That Underlies Epileptiform Activity in Hippocampal Neurons in Culture / D.S. Carter, S.N. Haider, R.E. Blair et al. // J. Pharmacol. Exp. Ther. – Vol. 319. – P. 1021–1031. 266. Altered calcium-homeostasis of cisplatin-resistant non small cell (NSLC) and small cell lung (SCLC) cancer cells / A. Bergner, K. Schroedl, H. Oelmez, R.M. Huber // ASCO Meeting Abstracts. – 2008. – Vol. 26. – P. 22185. 267. Altered surfactant homeostasis and alveolar type II cell morphology in mice lacking surfactant protein D / C. Botas, F. Poulain, J. Akiyama et al. // PNAS. – 1998. – Vol. 95. – P. 11869–11874. 268. Anesio A.M. Influence of humic substances on bacterial and viral dynamics in freshwaters / A. M. Anesio [et al.] // Appl. and Environ. Microbiol. – 2004. – № 8. – Р. 4848–4854. 269. Badrish, Soni A novel method of single step hydrophobic interaction chromatography for the purification of phycocyanin from Phormidium fragile and its charac- 251 terization for antioxidant property / Soni Badrish, Ujjval Trivedi, Datta Madamwar // BRD School of Biosciences. – Gujarat, 2006. – Р. 535–537. 270. Beaty S.R. Diverse and Potent Chemokine Production by Lung CDllbhigh Dendritic Cells in Homeostasis and in Allergic Lung Inflammation / S.R. Beaty, C.E. Rose, S.J. Sung. // J. Immunol. – 2007. – Vol. 178. – P. 1882–1895. 271. Belay A. The potential application of Spirulina (Arthrospira) as a nutrition and therapeutic supplement in health management //JANA. – 2002. – Vol. 5. – P. 27–48. 272. Bhat V. В., Madyastha K. M. Scavenging of peroxynitrite by phycocyanin and phycocyanobilin from Spirulina platensis: protection against oxidative damage to DNA Biochem // Biophys. Res. Commun. – 2001. – Vol. 285. – P. 262–266. 273. Biopolymers, Lignin, Humic Substances and Coal // Hofrichter M., Steinbuechel (Eds.). – Wiley-VCH, 2001. – 523 p. 274. Calcium Homeostasis and Mitochondrial Dysfunction in Striatal Neurons of Huntington Disease / D. Lim, L. Fedrizzi, M. Tartari et al. // J. Biol. Chem. – 2008. – Vol. 283. – P. 5780–5789. 275. Cannon W. The wisdom of this body. – New York, 1932. – Р. 281; 25. 276. Эшби У.Р. Конструкция мозга. Происхождение адаптивного поведения / пер. с англ. – М.: ИЛ, 1966. – 397 с. 277. Dubick M. Evidence for grape, wine and tea polyphenols as modulators ofatherosclerosis and ischemic heart disease in humans / M. Dubick, S. Omaye // Journal of Nutraceuticals Functionaland Medical Foods. – 2001. – № 3. – Р. 67–93. 278. Effect of inclusion of defatted grape seed meal in the diet on digestion and performance of growing rabbits / J. Garcia [at al] // J. Anim. Sci. – 2002. – Vol. 80. – P. 162–170. 279. Gostishcheva M.V. Research of biological activity humic acids of peats / M.V. Gostishcheva, L.I. Inisheva, I.V. Fedko // Humic Substances – Linking Structure to Functions: 13th Meeting of the International Humic Substances Society, Karlsruhe, Germany, 2006. – Karlsruhe, 2006. – P. 445–448. 252 280. Haizhen, Wang The recombinant b subunit of C-phycocyanin inhibits cell proliferation and induces apoptosis / Haizhen Wang, Yongding Liu, Xueliang Gao // Department of Biology. – Atlanta, 2006. – Р. 125–129. 281. Humic substances: structures, models and functions / M. S. Diallo [et al.] /eds. G. Davies, E. A. Ghabbour. – Cambridge : Royal Society of Chemi-stry, 2001. – 221 p. 282. Janbas K.N. Protective effects of rutin on paracetamol fnd CCL4-induced hepatotoxicity in rodents / K.N. Janbas, S.A. Saeed, A.H. Gilani // Fitoterapia. – 2002. – DEC; 73(7–8). – Р. 557–563. 283. Kurkin V.A. Phenylpropanoids from Medicinal Plants: Distribution, Classification, Structural Analysis, and Biological Activity / V.A. Kurkin // Chemistry of Natural Compounds. – 2003. – Vol. 39, № 2. – Р. 123–153. 284. Manoj G., Venkataraman L.V., Srinivas L. Antioxidant properties of Spirulina (Spirulina platensis). In: Seshadri and Bai. Spirulina // MCRC. – 1992. – P. 48–154. 285. Mao T. K., Van De Water J., Gershwin M. E. Effect of Spirulina on the secretion of cytokines from peripheral blood mononuclear cells // J. Medicinal Food. – 2000. – Vol. 3. – P. 135–140. 286. Pavlova O.N., Garipov T.V., Grigorieva Y.V., Supilnikov A.A. Reactive changes in rats’ liver tissue caused by potassium humate load // European Journal Of Natural History. – 2013. –№ 4. – С. 3–7. 287. Pavlova O.N. Variazioni reattivo sistema riproduttivo dei ratti sullo sfondo del carico spirulina biomassa // Italian Science Review. – 2014. – 5(14). – PP. 44–48. 288. Pinero J.E. Antioxidant activity of different fractions of Spirulina platensis protean extract / J.E. Pinero, P. Bermejo Bescos, A.M. Villar del Fresno // Farmacol. – 2001. – Vol. 56, № 5. – P. 497–500. 289. Time – course of changes in hepatic lipid peroxidotion and glutathione metabolism in rats with carbon tetrachloride – induced cirrhosis / M. Cabre [at all] // Clin. Exp. Pharmacol. Physiol. – 2000. – Vol. 27, № 9. – P. 694–699. 253 Приложение 1 254 Приложение 2 255 Приложение 3 256 Приложение 4 257 Приложение 5
