«утве «молекулярно-цитогенетический анализ днк района

«УТВЕ
Директор Федераль
бюджетного учреждения науки Институт общей
генетики им.Н.И.Вавилова Российской
академии наук
член-корреспондент РАН Н.К. Янковский
Официальный отзыв
Ведущей организации на диссертацию Пищелко Анны Олеговны
«МОЛЕКУЛЯРНО-ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЙ АНАЛИЗ ДНК РАЙОНА
ПРИКРЕПЛЕНИЯ ХРОМОСОМЫ 2L К ЯДЕРНОЙ ОБОЛОЧКЕ
ТРОФОЦИТОВ ЯИЧНИКОВ МАЛЯРИЙНОГО КОМАРА ANOPHELES
BEKLEM ISH EVI (DIPTERA, CULICIDAE)»,
представленную на соискание учёной степени кандидата биологических наук
по специальности: 03.02.07 - «Генетика»
Диссертационная работа
А.О. Пищелко посвящена фундаментальной
проблеме современной генетики - изучению структурно-функциональной
организации генома.
В работе были поставлены и решены следующие
задачи: получение
минибиблиотеки левого плеча хромосомы 2 An. beklemishevi и определение
первичной последовательности полученных фрагментов ДНК; проведение
сравнительного анализа локализации нуклеотидных последовательностей,
гомологичных
нуклеотидным
последовательностям
библиотеки
Ап.
beklemishevi в хромосомах An. beklemishevi, An. atroparvus, An. messeae;
проведена проверка возможности наличия/отсутствия взаимосвязи между
морфологическим типом отношения хромосомы к ядерной оболочке и
1
паттерном нуклеотидных последовательностей районов прикрепления к
ядерной оболочке на примере близкородственных видов рода Anopheles и
рода Drosophila; проведено определение нуклеотидной последовательности
ДНК
клонов
фрагментов
минибиблиотеки
и
аннотирование
последовательностей ДНК минибиблиотеки; выявление фрагментов ДНК из
районов прикрепления к ядерной оболочке хромосомы 2L An. beklemishevi и
их возможное участие в формировании петель хроматина разных типов.
В работе изучен район прикрепления хромосомы 2L An. beklemishevi к
ядерной оболочке. Показано, что он имеет гетерохроматиновую природу и
содержит
последовательности,
характерные
для
прицентромерного
гетерохроматина отряда Diptera. В районах прикрепления хромосомы 2L Ап.
beklemishevi обнаружены мобильные элементы, тандемные и сателлитные
повторы, а также последовательности, гомологичные фрагментам генов D.
melanogaster. Показано, что состав ДНК районов прикрепления к ядерной
оболочке хромосомы 2L An. beklemishevi характеризуется частичным
сходством с составом ДНК районов прикрепления хромосом других видов
комплекса maculipennis. Гомологичные последовательности фрагментов
района прикрепления хромосомы 2L90 An. beklemishevi были найдены в
геномах других Diptera, где они не являются районами прикрепления к
ядерной оболочке у этих видов. Интересным результатом является сходство
района прикрепления к ядерной оболочке хромосомы 2L An. beklemishevi с
прицентромерными участками хромосом трех видов рода Drosophila
подгруппы Sophophora с различным морфологическим типом организации
хромосом
по
отношению
к
ядерной
оболочке.
Проведен
анализ
последовательностей библиотеки прицентромерных районов хромосом Ап.
beklemishevi на принадлежность к «структурным» участкам хромосом.
Важным результатом работы можно считать то, что расположение хромосом
в ядре и их взаимоотношение с ядерной оболочкой не определяется
универсальными последовательностями ДНК, а возможно определяется
сложными
сочетаниями
определенного
числа
копий
определенных
нуклеотидных
последовательностей
или
композициями
нуклеотидных
последовательностей районов прикрепления.
Диссертация имеет стандартную структуру и содержит следующие
разделы: введение, обзор литературы, экспериментальная часть, включающая
описание методов исследования, результаты исследования и их обсуждение,
заключение и выводы.
Обзор литературы состоит из нескольких частей. Он включает анализ
исследований гетерохроматина как эволюционно значимой части генома,
особенностей гетерохроматина интерфазных ядер, молекулярного состава
гетерохроматина, особенностей гетерохроматина политенных хромосом
некоторых представителей родов Drosophila и Anopheles, а также таксономии
комплекса Anopheles maculipennis. Обзор литературы соответствует теме
диссертации, написан на 36 страницах, читается с интересом, автор хорошо
знаком
с
фундаментальными
работами
в
области
структурно­
функциональной организации генома.
В методическом разделе экспериментальной части автор достаточно
подробно
описывает
необходимости
они
экспериментальные
могут
быть
процедуры,
воспроизведены
так
без
что
при
привлечения
дополнительной литературы. Выбранные методы адекватны поставленной
задаче.
Научная новизна определяется фундаментальностью поставленных задач
в области эволюционной генетики, развитием представлений о механизмах
структурной
реорганизации
генома
в
процессе
видообразования.
Практическая значимость работы связана с возможностью использования
полученных результатов в лекционных курсах и методических пособиях при
обучении студентов биологических специальностей профильных вузов.
Однако в представленной работе имеются некоторые недостатки.
Литературный обзор представляется излишне объемным, хотелось бы видеть
в нем больше ссылок на современные исследования по структурно­
функциональной организации генома и прицентромерных районов хромосом.
3
В тексте обзора допущен ряд неточностей и неоднозначных высказываний. В
разделе 1.5. на странице 42 указано, что в настоящее время известно девять
видов комплекса Anopheles maculipennis. Автор не учел в списке вид
Anopheles persiensis Linton, Sedaghat & Harbach, описанный в 2003 году и
являющийся десятым
представителем комплекса.
Далее указано, что
«таксономия этой группы затруднена, так как они идентифицируются только
по окраске экзохориона яиц». Предложение несогласованно. Вероятно, речь
идет о сложностях идентификации видов по морфологическим признакам на
стадии имаго. Вопросы же видовой идентификации в комплексе разработаны
и не представляют проблемы, если решаются с использованием молекулярно­
генетических методов. В разделе «Результаты» на страницах 56-57 частично
повторяется методика исследований, описанная ранее. Вывод 1 и 2 относятся
к одному и тому же результату и поэтому могут быть объединены в один.
Имеется и ряд мелких неточностей. Указанная в обзоре ссылка
«Прокофьева-Бельговская,
1938» отсутствует в списке использованной
литературы, на странице 50 в методической части работы поставлены скобки,
предполагающие ссылку на источник литературы,
однако последний
отсутствует, на странице 67 видовые названия не выделены курсивом. В
тексте присутствуют синтаксические ошибки. Указанные замечания не
влияют на результаты и выводы и не снижают высокой ценности
исследования.
Работа
А.О.
Пищелко
является
целостным
и
оригинальным
исследованием. Полученные результаты представляют большой интерес для
эволюционной биологии.
Результаты диссертационной работы достоверны, опубликованы в
отечественных и зарубежных журналах, в том числе две работы в журналах
из перечня ведущих рецензируемых научных журналов и изданий ВАК РФ.
Автореферат достаточно полно отражает содержание диссертации.
Диссертация
А.О.
ЦИТОГЕНЕТИЧЕСКИЙ
Пищелко
АНАЛИЗ
на
ДНК
4
тему:
"МОЛЕКУЛЯРНО-
РАЙОНА
ПРИКРЕПЛЕНИЯ
ХРОМОСОМЫ 2L К ЯДЕРНОЙ ОБОЛОЧКЕ ТРОФОЦИТОВ ЯИЧНИКОВ
МАЛЯРИЙНОГО КОМАРА ANOPHELES BEKLEMISHEVI (DIPTERA,
CULICIDAE)"
полностью
соответствует
п.9
«Положения
о
порядке
присуждения ученых степеней» от 24 сентября 2013 года, а её автор
заслуживает присуждения ученой степени кандидата биологических наук по
специальности 03.02.07 - «Генетика».
Отзыв утверждён на заседании межлабораторного семинара отдела
генетики
животных
Федерального
государственного
бюджетного
учреждения науки Институт общей генетики им.Н.И.Вавилова Российской
академии наук (Протокол №1/09 от 02 сентября 2014 года).
к.б.н., доц., заведующий
лабораторий генетики насекомых
Федерального государственного
бюджетного учреждения науки
Институт общей генетики им.
Ирина Игоревна Г орячева
Российской академии наук
Подпись
удостоверяю
Ученый секретарь ИОГен РАН |
ДОКТОр биологических наук
5