диссертация Швец О_М 1
advertisement
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Курская государственная сельскохозяйственная академия имени профессора И.И. Иванова» На правах рукописи Швец Ольга Михайловна ТЕОРЕТИЧЕСКОЕ И ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ОБОСНОВАНИЕ ПРИМЕНЕНИЯ ЯНТАРНОЙ КИСЛОТЫ ДЛЯ ПОТЕНЦИРОВАНИЯ БИОЛОГИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ИММУНОМОДУЛЯТОРОВ И ИХ КЛИНИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ 06.02.02 – Ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология, микология с микотоксикологией и иммунология ДИССЕРТАЦИЯ на соискание учёной степени доктора ветеринарных наук Научный консультант: доктор ветеринарных наук, профессор Курск - 2015 Ал.А.Евглевский 2 ОГЛАВЛЕНИЕ стр. ВВЕДЕНИЕ………………………………………………………………………. 6 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ………………………………………………………... 13 1.1 Распространенность и коррекция нарушений обмена веществ у высокопродуктивных животных………………………………………………………… 13 1.2 Нарушения иммунного статуса и иммунокоррекция у глубокостельных коров и полученных от них телят………………………………………………... 18 1.3 Биологические свойства янтарной кислоты и перспективы ее применения при метаболических и иммунных нарушениях у животных ………………….. 30 1.4 Биологические свойства и применение в ветеринарии антисептикастимулятора Дорогова второй фракции……………………………………........ 40 1.5 Биологические свойства формальдегида……………………………………. 44 1.6 Биологическая роль микроэлементов……………………………….. ……... 46 1.7 Иммуномодулирующие свойства препаратов на основе нуклеиновых кислот………………………………………………………………………............ 51 1.8 Иммуномодулирующие свойства левамизола и эффективность его применения в ветеринарии…………………………………………………………… 54 2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ…………………………………………. 59 2.1 Материалы и методы исследований…………………………………………. 59 3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ………………………. 62 3.1 Теоретическое и экспериментальное обоснование применения янтарной кислоты для потенцирования биологической активности иммуномодуляторов………………………………………..………………………………………… 62 3.1.1 Обоснование состава и способ получения иммунометаболической композиции на основе янтарной кислоты и антисептика-стимулятора Дорогова второй фракции…................................................................................................... 63 3.1.2 Доклинические испытания иммунометаболической композиции на основе янтарной кислоты и антисептика-стимулятора Дорогова второй фракции на лабораторных животных…………………………………………………. 69 3 3.1.3 Клинические испытания иммунометаболической композиции на основе янтарной кислоты и антисептика-стимулятора Дорогова второй фракции на продуктивных животных……………………………………………………… 80 3.1.3.1 Оценка влияния иммунометаболической композиции на метаболический статус глубокостельных коров и полученных от них телят……………... 80 3.1.3.2 Оценка влияния иммунометаболической композиции на иммунный статус глубокостельных коров и полученных от них телят.............................. 94 3.1.3.3 Оценка влияния иммунометаболической композиции на оксидантно - антиоксидантный статус глубокостельных коров и полученных от них телят…………..………………………………………………………………........ 101 3.1.3.4 Оценка влияния иммунометаболической композиции на рост и развитие телят…………………………………………………………………………... 107 3.1.4 Результаты применения иммунометаболической композиции на основе янтарной кислоты и антисептика-стимулятора Дорогова второй фракции при клинически выраженных заболеваниях…………………………………...... 111 3.1.4.1 Эффективность применения иммунометаболической композиции при нарушениях обмена веществ у глубокостельных коров……………………….. 111 3.1.4.2 Эффективность применения иммунометаболической композиции при заболеваниях телят с диарейным синдромом……..………………………. 116 3.1.4.3 Результаты применения иммунометаболической композиции при респираторных заболеваниях телят…………………………………………….. 133 3.1.5 Применение иммунометаболической композиции для создания благоприятного иммунобиохимического фона при вакцинации……......................... 145 3.2 Теоретическое и экспериментальное обоснование включения формалина в иммунометаболическую композицию на основе янтарной кислоты и антисептика-стимулятора Дорогова второй фракции ……………………………… 156 3.2.1 Обоснование состава и способ получения иммунометаболической композиции с включением формалина…………………………......................... 156 3.2.2 Доклинические испытания иммунометаболической композиции с включением формалина на лабораторных животных…………………………. 160 4 3.2.3 Клинические испытания иммунометаболической композиции с включением формалина на продуктивных животных................................................. 163 3.2.3.1 Оценка эффективности применения иммунометаболической композиции с включением формалина при маститах и послеродовых эндометритах у коров……………………………………………………………………….... 163 3.2.3.2 Оценка эффективности применения иммунометаболической композиции с включением формалина при вирусных заболеваниях……………….. 172 3.3 Теоретическое и экспериментальное обоснование включения микроэлементов в иммунометаболическую композицию на основе янтарной кислоты и антисептика-стимулятора Дорогова второй фракции ………...……… 176 3.3.1 Обоснование состава и способ получения иммунометаболической композиции с включением микроэлементов……………………......................... 179 3.3.2 Эффективность применения иммунометаболической композиции с включением микроэлементов для коррекции метаболического статуса животных ……………………………………………………….................................. 179 3.4 Теоретическое и экспериментальное обоснование применения янтарной кислоты для потенцирования биологической активности солей нуклеиновых кислот…………………………………………………………………………….... 184 3.4.1 Обоснование состава и способ получения иммунометаболической композиции с янтарной кислотой и солями нуклеиновых кислот…………….. 184 3.4.2 Доклинические испытания иммунометаболической композиции с янтарной кислотой и солями нуклеиновых кислот на лабораторных животных………………………………………………………………………................. 186 3.4.3 Оценка эффективности иммунометаболической композиции с нуклеинатом натрия при гипотрофии телят…………………………………………..... 194 3.5 Теоретическое и экспериментальное обоснование включения в состав иммунометаболической композиции с солями нуклеиновых кислот микроэлементов………………………………………………………………………….. 196 3.5.1 Результаты применения иммунометаболической композиции с солями нуклеиновых кислот и микроэлементами при гепатозе коров…………… 198 5 3.6 Теоретическое и экспериментальное обоснование применения янтарной кислоты для потенцирования биологической активности и снижения токсического действия левамизола…………………………………………………… 202 3.6.1 Доклинические испытания левамизола в сочетании с янтарной кислотой на лабораторных животных…………………………………………………. 203 3.6.2 Клинические испытания левамизола в сочетании с янтарной кислотой на продуктивных животных…………………………………………………….... 206 3.6.2.1 Оценка иммуностимулирующей и метаболической активности левамизола в сочетании с янтарной кислотой ………………………………………. 206 3.6.2.2 Оценка влияния левамизола в сочетании с янтарной кислотой на функциональное состояние печени у коров………………...………. …………. 208 3.6.2.3 Оценка влияния левамизола в сочетании с янтарной кислотой на оксидантно- антиоксидантный статус телят………………………......................... 211 3.6.2.4 Оценка антигельминтной активности левамизола в сочетании с янтарной кислотой…………………………………………………………………... 213 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ…………………………… 215 ВЫВОДЫ………………………………………………………………………….. 232 РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ……... 236 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ………………………………... 238 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ………………………………………………………... 239 ПРИЛОЖЕНИЯ…………………………………………………………………… 280 6 ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы исследований. Теоретическое и практическое решение проблем обеспечения здоровья, профилактики и лечения инфекционных заболеваний, повышения иммунного статуса и коррекции патобиохимических процессов у животных с каждым годом привлекают всё большее внимание отечественной и зарубежной науки и практики (Жаров А.В. с соавт., 2012;. Малошевич В.Э., 2005; Мищенко В.А. с соавт., 2006; Сидоров М.А. с соавт., 2006; Федоров Ю.Н. с соавт., 2013; Шабунин С.В., 2005; Шахов А.Г., 2002). Это связано с неоправданно высокими показателями заболеваемости животных в промышленном животноводстве. Условия содержания и кормления, далёкие от потребностей организма животных, влекут за собой быстрое развитие патобиохимических процессов (Байматов В.Н., 2000;. Племяшев К.В., 2009). Нарушения обменных процессов, в той или иной степени выраженности, диагностируются у новорождённых, получают развитие при выращивании и становятся очевидными при проявлении патофизиологических состояний у взрослых животных. Об этом свидетельствуют многочисленные биохимические исследования и клинические наблюдения (Алехин Ю.Н., 2009; 2011; Алексеева Л.В., 2006; Евглевский А.А. с соавт., 2011; Жаков М.С. с соавт., 2000; Жаров А.В., 2012; Косорлукова З.Я., 2004; Масьянов Ю.Н., 2009; Мищенко В.А., 2008; Никулин И.А., 2002; Олейник Л.В., 2010; Самохин В.Т. с соавт., 2008). Следует отметить, что проблема нарушений обменных процессов у продуктивных животных была обозначена ещё на ранних этапах развития промышленного животноводства. Вскоре эта проблема породила другую - высокую чувствительность организма животных к возбудителям эндогенных инфекций, которые ранее не могли самостоятельно вызвать развитие инфекционного процесса и клиническое проявление болезни (Воронин Е.С., Шахов А.Г., 1999; Джупина С.И., 2002; Сулейманов С.М., 1986; Шахов А.Г., 2002). Для снижения остроты проблемы нарушений обмена веществ и повышения резистентности организма были востребованы препараты, стимулирующие мета- 7 болизм и иммунную систему. За короткий период времени было разработано множество разного рода стимуляторов, раскрыты новые представления об их роли и механизм действия. Многие достижения ветеринарной науки с высоким терапевтическим эффектом стали использоваться в клинике лечения наиболее проблемных патологий метаболизма и иммунной системы (Евглевский А.А. с соавт., 2010; 2011; Игнатов П.Е., 1995; Красочко П.А., 2009; Лебедев А.Ф. с соавт., 2009; Распутина О.В., 2007). В современной инфекционной патологии применение средств, стимулирующих обменные и иммунные процессы, стало рассматриваться, как существенно важное мероприятие в системе мер профилактики так называемых факторных болезней животных (Алехин Е.К., 1993; Атамась В.А. с соавт., 2005; Белопольский В.А., 1993; Буянов А.А., 1993; 2000; Ваизов В.Х. с соавт., 2003; Красочко П.А., 2009; Масьянов Ю.Н., 2009; Смоленцев С.Ю., 2013; Тулева Н.П., 2004; Придыбайло Н.Д., 1991). Несмотря на очевидный прогресс в решении целого ряда проблемных вопросов повышения иммунного и биохимического статуса продуктивных животных, тем не менее, изначально узкая направленность средств, стимулирующих обменные процессы или систему иммунитета, далеко не всегда обеспечивает желаемый клинический результат. Нередко применение иммуномодуляторов и вовсе приводит к обратному эффекту. Инфекционный процесс ещё более активизируется. В отдельных случаях применение вакцин (специфических иммуногенов) не только живых, но и инактивированных, вызывает активацию инфекционного процесса или рецидив заболевания (Евглевский А.А. с соавт., 2010; 2011; Воронин Е.С., 1991; Ефанова Л.И., Сайфулин Е.Т., 2004; Машеро В.А., 2006; Мищенко В.А. с соавт., 2006). Во многом это связано не только с иммунодефицитным состоянием, но и с патобиохимическим фоном. Это обстоятельство выдвигает перед исследователями новое научное направление поиска средств одновременно стимулирующих обменные и иммунные процессы (Лебедев А.Ф. с соавт., 2009). Именно это обстоятельство было принято во внимание при определении научной концепции авторских поисковых исследований в области сочетанного 8 применения иммуномодуляторов и метаболиков. Изначально разный механизм их действия позволял надеяться на получение благоприятных для организма адекватных клинических эффектов при разного генеза патологических состояниях, инфекционных и паразитарных заболеваниях. Уникальный спектр метаболического действия янтарной кислоты предопределил возможность её использования в сочетании с наиболее известными иммуностимулирующими препаратами, которые по ряду обстоятельств имеют ограничения и противопоказания для применения в клинической практике. Цель и задачи исследований: теоретическое и экспериментальное обоснование применения янтарной кислоты для потенцирования биологической активности иммуномодуляторов и оценка их клинической эффективности при патофизиологических состояниях и инфекционных заболеваниях животных. Для достижения этой цели были поставлены следующие задачи: 1. Теоретически и экспериментально обосновать применение янтарной кислоты для потенцирования биологической активности ACД второй фракции. 2. Изучить активность полученной композиции для коррекции патобиохимических процессов и стимуляции иммунитета при выраженных нарушениях обмена веществ и в клинике лечения желудочно-кишечных и респираторных заболеваний молодняка крупного рогатого скота. 3. Теоретически и экспериментально обосновать включение в иммунометаболическую композицию на основе янтарной кислоты и ACД второй фракции формалина, в качестве антиинфекционного компонента. 4. Изучить эффективность применения иммунометаболического комплекса с антиинфекционной активностью для профилактики и лечения инфекционных заболеваний животных. 5. Теоретически и экспериментально обосновать включение микроэлементов в иммунометаболические комплексы на основе янтарной кислоты с АСД второй фракции и солями нуклеиновых кислот. 9 6. Изучить эффективность применения иммунометаболических комплексов с микроэлементами для профилактики и лечения нарушений обмена веществ, повышения резистентности организма животных. 7. Теоретически и экспериментально обосновать применение янтарной кислоты для потенцирования биологической активности солей нуклеиновых кислот. 8. . Теоретически и экспериментально обосновать применение янтарной кислоты для потенцирования биологической активности и снижения токсического действия антгельминтика-иммуномодулятора левамизола. Научная новизна работы состоит в том, что впервые теоретически обосновано новое научное направление, касающееся получения иммунометаболических композиций на примере метаболика янтарной кислоты и иммуномодуляторов. Дано теоретическое и экспериментальное обоснование потенцирования биологической активности иммуномодуляторов при сочетанном применении с янтарной кислотой. Изучена эффективность и выявлено протективное преимущество сочетанного применения янтарной кислоты и иммуномодуляторов для коррекции метаболических процессов и стимуляции системы иммунитета при разного генеза патофизиологических состояниях и инфекционных заболеваниях животных. Новизна исследований защищена 9 патентами РФ на изобретение: 1. № 2261703 «Способ лечения лептоспироза и профилактика лептоспироносительства у животных» от 29.03.2004г. 2. № 2278678 «Способ получения препарата для повышения резистентности организма животных» от 25.05. 2004г. 3. № 2303979 « Способ получения препарата «Янтарный биостимулятор» для повышения резистентности организма животных» от23.05.2005г. 4. № 2339370 «Состав для комплексной терапии токсикоинфекционных заболеваний животных» от 28.02.2006 г. 5. № 2327453 « Состав для терапии и профилактики инфекционных заболеваний животных» от 28.03. 2006г. 10 6. № 2395278 «Способ получения комплексного препарата для профилактики и лечения патологии обмена веществ и нарушений функции иммунной системы» от 17.03.2009 г. 7. № 2411944 «Иммунометаболический антгельминтный препарат» от 10.06.2009 г. 8. №2404761 «Способ получения комплексного препарата для профилактики и лечения нарушений обмена веществ, микроэлементозов, повышения резистентности организма животных» от 24.03. 2009г. 9. № 514004 «Способ получения комплексного препарата с иммунометаболической и антгельминтной активностью» от 25.10 2012г. Теоретическая и практическая значимость работы. Результаты научных исследований открывают перспективу получения средств иммунометаболической направленности, обеспечивающих одновременную и эффективную коррекцию обменных процессов и системы иммунитета. Содержащиеся в диссертационном исследовании разработки носят прикладной характер и могут быть использованы для коррекции иммунометаболического статуса животных при различных патофизиологических состояниях и инфекционных заболеваниях животных. Материалы авторских научных разработок в 2007 г. отмечены дипломом администрации Курской области за 1-е место в конкурсе инновационных проектов «Инновация и изобретение года» в номинации «Научно-техническое обеспечение аграрно-промышленного комплекса»; удостоены золотой медали 9-й Российской агропромышленной выставки «Золотая осень -2006»; бронзовой медали 15-й Российской агропромышленной выставки «Золотая осень -2013»; серебряной медали 16-й Российской агропромышленной выставки «Золотая осень -2014». Основные разработки диссертационного исследования включены в Программу по обеспечению сохранности здоровья животных и повышению их продуктивности Курской области. Основные положения, выносимые на защиту: - теоретическое и экспериментальное обоснование применения янтарной кислоты для потенцирования биологической активности ACД второй фракции; 11 -результаты исследований по изучению эффективности полученной композиции для коррекции патобиохимических процессов и стимуляции иммунитета при выраженных нарушениях обмена веществ и в клинике лечения желудочнокишечных и респираторных заболеваний молодняка крупного рогатого скота; - оценка эффективности применения иммунометаболического комплекса с антиинфекционной активностью для профилактики и лечения инфекционных заболеваний животных; - изучение эффективности применения иммунометаболического комплекса с микроэлементами для профилактики и лечения нарушений обмена веществ, повышения резистентности организма животных; -результаты исследований по определению биологической активности антгельминтика-иммуномодулятора левамизола в сочетании с янтарной кислотой. Апробация работы. Материалы диссертационной работы доложены и обсуждены на ежегодной научно-практической конференции профессорско- преподавательского состава ФГБОУ ВПО Курской ГСХА (2004 - 2013 гг.); Всероссийской научно-практической конференции «120-лет ветеринарной службы Курской области» (Курск, 2005 г.); Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы ветеринарной медицины и производства продукции животноводства и растениеводства» (Троицк, 2006г.); Международной юбилейной научно-практической конференции, посвященной 110-летию Курской биофабрики и агробиологической промышленности России (Курск, 2006г.); Международной научно-практической конференции «Теоретические и прикладные проблемы социально-правовых, медико-биологических и технико-экономических сфер жизни общества» (Курск, РГСУ, 2007 г.); Международной научнопрактической конференции «Через инновации в науке и образовании к экономическому росту АПК» (поселок Персиановский, Донской ГАУ, 2008 г.); Международном конгрессе ветеринарных фармакологов «Эффективные и безопасные лекарственные средства» (Санкт-Петербург, 2008г.); Всероссийской научнопрактической конференции «Актуальные проблемы ветеринарного обеспечения Российского животноводства» (Новочеркасск, 2010 г.); Международной научно- 12 практической конференции «Научные основы производства и обеспечения качества биологических препаратов для АПК» (Щёлково, 2012 г.); Международной научно-практической конференции «Найновите постижения на европейската наука-2011» (София, .2011г.). 13 1 ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 1.1 Распространенность и коррекция нарушений обмена веществ у высокопродуктивных животных В условиях современного ведения животноводства отмечается чрезмерное функциональное напряжение организма животных, ведущее к биохимическим, клиническим и морфологическим изменениям в различных органах и тканях. Причинами изменений функциональных отправлений организма могут быть различные факторы вне и внутри организма. Механизм действия этих факторов может быть различным, но конечным результатом этих воздействий всегда являются расстройства в обмене веществ (Байматов В.Н., 2000; Самохин В.Т., 2003). На практике для поддержания высокой продуктивности коровам скармливают большое количество концентратов, что приводит к развитию гепатоза, ацидоза рубца, кетоза, токсикозов, метаболических иммунодефицитов, нарушению воспроизводства, снижению жирности молока (Жаров А.В., 2003). На таком фоне период производственной эксплуатации высокомолочных коров сокращается до 2-3 лактаций, рождается гипотрофичный молодняк с низким уровнем естественной резистентности и иммунобиологической реактивности. В организме животных создается состояние стрессовой дезадаптации, интенсифицируются процессы перекисного окисления липидов, которые лежат в основе патогенеза многих болезней (Джупина С.И., 2002; Самохин В.Т. с соавт., 2004; Рецкий М.И. с соавт.,2002). Исмагилова Э.Р. (1999; 2006) указывает, что в последние годы в Российской Федерации нарушения обмена веществ животных стали приобретать катастрофический характер. По мнению Требухова А.В. (2005) на их долю приходится до 30 % всех незаразных болезней животных. При этом указанные заболевания протекают преимущественно в скрытых (субклинических) формах, наносящих значительный экономический ущерб молочному скотоводству. 14 По данным Байматова В.Н. (2000) результаты биохимических исследований крови у крупного рогатого скота свидетельствуют, что только у 10-15% коров показатели обмена колеблются в пределах оптимальных величин. Особенно интенсивен дисбаланс обменных процессов в период лактации и беременности (Ивановский С.А., 1993; Шкуратова И.А. с соавт., 2007). Практически круглогодично у беременных животных отмечаются скрытые и клинически выраженные авитаминозы, микро- и макроэлементозы, гипопротеинемии (Терехов В.И., 2002). В этих условиях в организме коров регистрируют нарушения течения практически всех видов обмена веществ и, прежде всего, снижение интенсивности обмена нуклеиновых кислот, что определяет интенсивность биосинтеза белков, в том числе ферментов, гормонов, иммуноглобулинов и т.д. Это ведет к нарушениям внутритканевого обмена белков, липидов, углеводов, витаминов, минеральных веществ, что приводит к развитию субклеточных патологических изменений, определяющих характер течения процессов обмена в органах и тканях (Самохин В.Т., 2003). По данным Мищенко А.В. с соавт. (2014) результаты биохимических исследований крови от высокопродуктивных коров свидетельствует о глубоких нарушениях обмена веществ. У 60- 90% больных новотельных коров был отмечен недостаток сахаров (48-79%), цинка (60-80%), меди (65-85%), марганца (53-77%), магния (39-71%), каротина (11-53%), гамма-глобулинов (45-82%). В плазме крови у 50%-80% новотельных высокопродуктивных коров увеличена активность ферментов переаминирования, характеризующих функциональное состояние печени и других органов: АСТ, АЛТ, щелочной фосфатазы и лактатдегидрогеназы. Эти изменения свидетельствуют о значительных функциональных нарушениях паренхиматозных органов, что приводит к развитию ацидоза, кетоза, дистрофии печени, снижению естественной резистентности (Мищенко В.А. с соавт., 2006). Калюжный И.И. (1996) указывает, что ацидоз рубца имеет чрезвычайно широкое, а точнее повсеместное распространение и нередко поражает 25-75% по- 15 головья отдельных производственно-возрастных групп крупного рогатого скота. По мнению Mullena P.A. (1976), ни одно животное не может достичь взрослого состояния, не переболев ацидозом рубца. Ацидоз рубца приводит к пониженному потреблению кормов, уменьшению переваримости кормов и щелочного резерва организма, понижению использования кальция и фосфора, нарушению деятельности молочной железы (мастит, парез), органов воспроизводства (метрит, задержка последа, аборты, бесплодие), заболеванию конечностей (отслаивание рога копытец, нарушение их кровоснабжения) и жировому перерождению печени (S. Hachenberg, 2007). Ацидоз рубца нередко приводит к развитию кетоза. Заболевание кетозом может иметь вторичный характер и проявляться в виде осложнения ацидоза рубца или развиваться вследствие нарушения энергетического питания и дефицита энергии в рационах коров. Образование кетоновых тел способствуют низкие концентрации глюкозы и инсулина в крови, частично из-за повышенной мобилизации жирных кислот из жировых тканей. Результаты исследований ряда авторов (Иванов А.В., 2000; Кондрахин И.П., 1980;. Кумар Ю. А с соавт., 1989) указывают на то, что кетоз отмечается у 23-38 %, а по некоторым данным до 80 % (Кондрахин И.П., 1981) высокопродуктивных коров. Молочная продуктивность при этом снижается на 10-15 %, причем, даже после проведения комплекса лечебных мероприятий, первоначальная продуктивность животного так и не восстанавливается в полном объеме (Луцкий Д.Я. с соавт., 1978). Кетоз относится к болезням полиэтиологической природы, в возникновении, которого ведущее место занимают несколько основных причин: а) высоко-концентратный тип кормления при одновременном недостатке в рационе грубых кормов (сена, сенажа); б) дефицит энергии в фазу интенсивной лактации; в) скармливание не доброкачественных кормов; г) несбалансированность рационов (Иванов А.В. с соавт., 2000; Ярован Н.И. с соавт., 2012). 16 Кетоз в процессе своего развития приводит к нарушению всех видов обмена веществ в организме животного, что в свою очередь формирует клиническую картину заболевания. Заболевание наиболее ярко проявляется во второй половине стойлового периода и в первые 6-10 недель после отела, когда необходимы большие затраты энергии на образования молока. Кетоз преимущественно наблюдается у высокопродуктивных коров в хозяйствах с высоко-концентратным типом кормления (Тарнцев Ю.А. с соавт., 1987; Danuser J. et al., 1988; Gravert Н.О. et al., 1986). Хронические нарушения углеводного, липидного, белкового, минерального обмена и кислотно-щелочного равновесия у высокопродуктивных коров постепенно вызывают дистрофические изменения в печени (Баширова Э.М., 2010; Папуниди К. А., 2007). Причиной жировой инфильтрации печени является резкое нарушение адаптации липидно-углеводного (энергетического) обмена, который клинически проявляется непосредственно в последние дни перед отелом или в первые семь дней после отела. К возникновению липидоза печени в начале лактации чаще подвержены высокоупитанные и/или высокопродуктивные животные так как у них, в результате более интенсивной тканевой мобилизации липидов и замедленного развития функций потребления, больше расходуются жировые запасы собственного тела (Душкин Е.В. с соавт., 2008; Baird G.D., 1982). В связи с этим нарушаются основные функции печени: желчеобразование и желчевыделение, синтез белков, мочевины и гликогена, обезвреживание токсинов и др. По данным Байматова В.Н. (1986), Зенухиной Н.З. (1988), Постникова B.C. , Шкуратовой И.А. (2008), Klein Z.et al., (1988), гепатозы отмечаются у 30-60 % животных от общего поголовья. При жировом гепатозе наблюдается повышенное накопление жира, преимущественно нейтрального, в гепатоцитах. У животных с нарушениями обмена веществ наряду с ожирением печени отмечаются дистрофические явления в матке и яичниках, снижение процента оплодотворённых яйцеклеток. Гибель эмбрионов наступает на стадии морулы. При жировой дистрофии у высокоудойных коров волосяной покров теряет блеск; животные угнетены, от- 17 казываются от корма и воды, мало двигаются и больше лежат, отмечается снижение веса, гипотония, атония и ацидоз рубца, ламинит и гнойно-некротические поражения дистальных участков конечностей, задержка последа и эндометриты, дистрофические явления в матке и яичниках. Как правило, у высокопродуктивных коров с жировой дистрофией печени развиваются заболевания, вызванные условно-патогенными возбудителями, в том числе некробактериоз, злокачественный отёк. Генетические особенности высокопродуктивных коров, высокий энергетический обмен, способность превращения энергии корма в молоко приводят к снижению иммунитета и повышению стресс-чувствительности к негативным факторам, сопровождающим промышленную технологию (Мищенко В.А., 2008; Лейбова В.Б. с соавт., 2011). В последнее время справедливо возрастает интерес к использованию эндогенных регуляторов метаболизма (энзимы, простагландины, нейропептиды и пр.) и препаратов типа метаболитов в самых различных областях медицины, так как метаболиты являются естественными, долгосрочными факторами адаптации обмена веществ к экстремальным и патологическим воздействиям. «Метаболическая» терапия во многих случаях дает эффект, близкий к естественному благоприятному течению заболевания и создает предпосылки для повышения эффективности средств неотложной терапии (Амосова Е.Н., 2000; Бельков А.И., 2011; Визе-Хрипунова М.А., 1997; Лишневская В.Ю., 2008). В ветеринарии имеются многочисленные сообщения о проведении коррекции метаболических нарушений. В качестве средств метаболической коррекции используются витаминно – минеральные комплексы (Баринов Н.Д., Клищенко О.А., 2013; Племяшов К.В., 2010; Сащенко Р.В., 2007; Смоленцев С.Ю., 2013), аминокислоты (Аверкиева О.., 2001; Аитова М.Д. с соавт., 1986), антиоксиданты (Балым Ю.П., 2009; Боряев Г.И., 2000; Вальдман А.Р., 1977; Шпоганяч Н.Н., 2009); цеолиты (Гаврилов Ю.А., 2006; Гамидов М.Г., 2004; Герасев А.Д. с соавт., 2005; Горьковенко Н.Е., 2007), бентонитовая глина (Дерезина Т.Н., 2004; Коков Т.Н с соавт., 2011; Утижев А.З., 2010), пробиотики (Антипов В.А., 2004;. Баку- 18 лина Л.Ф, 2001; Деминова О.М., 2002; Бледнов М.А., 2009), биологически активные вещества (Бокова Т.И., 2008; Донченко А.С. с соавт., 1989; Крыжановская Е.В., 2008). В настоящее время все больше исследователей склоняются к признанию необходимости развития теоретических основ и прикладных аспектов «метаболической» терапии (Шкуратова И.А., 2008). 1.2 Нарушения иммунного статуса и иммунокоррекция у глубокостельных коров и полученных от них телят Постоянный интерес исследователей и практических специалистов вызывает проблема иммунодефицитов у животных, поскольку они сопровождают различные патологические процессы, в том числе инфекционные заболевания, вызванные вирусами, бактериями, грибами и простейшими. Высокопродуктивные коровы с интенсивным обменом веществ и более чувствительной нейрогуморальной регулирующей системой восприимчивы даже к незначительным нарушениям условий содержания и реагируют на это выраженным нарушением обмена веществ, затрагивающим их иммунобиологический статус (Мищенко В.А., 2008). Иммунодефицит (иммунодефицитное состояние, иммунологическая недостаточность) обусловлен выпадением одного или нескольких специфических компонентов иммунного ответа или взаимодействующих с ним неспецифических факторов защиты (фагоцитоз, система комплемента и др.). Вид и степень проявления иммунодефицита зависит от того, какое звено иммунной системы нарушено и на какой ступени онтогенетического развития оно произошло (Федоров Ю.Н., 2006; Шевырев Н.С., 1999; Egberink Н., 1992; Flaming К. et al., 1993). Различают· первичный, в большинстве случаев генетически детерминированный иммунодефицит, проявляющийся в раннем постнатальном периоде и· вторичный иммунодефицит, возникающий в результате действия (иммунодепрессии) на организм неблагоприятных факторов внешней среды. 19 Вторичные иммунодефициты в патогенетическом отношении имеют сложный механизм развития, как общие закономерности, так и определенные особенности, существенно влияют на патогенез заболеваний и их саногенез (Жаров А.В., 2003). Механизмы формирования иммунодефицитных состояний разнообразны и во многом зависят от иммундепрессантов. Различают инфекционные (вирусные и бактериальные), инвазионные, микотические, метаболические, цитотоксические, радиационные, экологические, связанные с загрязнением окружающей среды и накоплением в организме ксенобиотиков (солей свинца, кадмия и других тяжелых металлов) и другие в зависимости от природы физического, химического или биологического факторов (Анатенко С.А. , 1992; Барышников П.И., 1995; Бойко Т.В., 2008; Буянов А.А., 2000; Самохин В.Т., 2003; Шахов А.Г. с соавт., 2006;. Egli C.P, 1998). Для вторичных иммунодефицитов характерны изменения (понижение) естественной резистентности и иммунобиологической реактивности, нарушение функций лимфоцитов и фагоцитов, других клеточных и гуморальных факторов защиты, акцидентальная трансформация тимуса, атрофия селезенки, лимфоузлов, костного мозга, диффузной лимфоидной ткани, повышенный апоптоз, лимфоцито-, лейкоцито- и моноцитопения, анемия и, наконец, истощение. При этом нарушения возникают как в клеточных, так и в гуморальных звеньях иммунной системы, а также в системе естественной неспецифической резистентности, т.е. они носят комбинированный характер (Шахов А.Г. с соавт., 2006). Хронические, рецидивирующие, вялотекущие, трудно поддающиеся традиционному лечению инфекционно-воспалительные процессы различных локализаций у взрослых животных следует рассматривать как проявление иммунодефицитного состояния. (Федоров Ю.Н., 2006). Вторичные иммунодефициты представляют особый интерес для клинической ветеринарной иммунологии (Буянов А.А., 2000; Шахов А.Г. с соавт., 2006). Патологические изменения в обмене веществ, морфофункциональном состоянии органов и систем в организме беременных животных являются одной из основных причин изменений в обмене, структуре и функции всех органов и сис- 20 тем плода в процессе внутриутробного развития, в результате этого рождается молодняк с низким уровнем естественной резистентности и иммунобиологической реактивности. В связи с этим новорожденные не могут адекватно адаптироваться к воздействию различных факторов внешней среды (Горбов Ю.К., 1989; Самохин В.Т. с соавт., 2002). При этом снижаются упитанность, продуктивность, воспроизводительная способность, неспецифическая резистентность, появляются врожденные аномалии развития приплода (Маннапова Р.Г. с соавт., 2004; Попова О.М., 2005). Состояние иммунодефицита, снижение адаптационных способностей организма приводит к повышению восприимчивости к инфекционным заболеваниям (Аксененко С.А., 2005; Джупина С.И., 2002; Масьянов Ю.Н., 2009; Петрянкин Ф.П., 2008). Шахов А.Г. (2005) при разработке эффективных мер профилактики болезней телят биологический комплекс «мать-плод-новорожденный» рекомендует рассматривать как единую систему, так как установлена прямая взаимосвязь между уровнем обмена веществ и неспецифической резистентностью организма коров и внутриутробным развитием плода, состоянием здоровья и сохранностью новорожденных. Наиболее распространенной формой вторичной иммунологической недостаточности у животных являются нарушения в передаче материнских антител потомству, обуславливающие высокую заболеваемость и смертность новорожденного молодняка (Кармолиев Р.Х., 1993). Наибольшее распространение иммунодефициты у новорожденных телят отмечается в первые дни, что объясняется отсутствием или низким содержанием иммуноглобулинов в сыворотке крови у более 75% телят молозивного возраста (Шахов А.Г., 2003; Hammer С.J., 2004). Как известно, у новорожденных отмечается физиологическая гипогаммаглобулинемия. Иммунные глобулины и фагоциты они получают с молозивом матери (Жаров А.В., 2003). Напряженность колострального иммунитета во многом 21 зависит от иммунного и метаболического статуса матерей (Петрянкин Ф.П., 2003; Рецкий М.И. с соавт., 2005; Шахов А.Г., 2005). Несвоевременное и неадекватное поучение молозива новорожденными телятами является основной предрасполагающей причиной, которая приводит к высокой заболеваемости и смертности молодняка в ранний постнатальный период (Godden S.М. et al., 2003). На 2-3 неделе жизни у молодняка может развиваться второй возрастной иммунодефицит, обусловленный повышенным расходованием колостральных защитных факторов и недостаточностью собственного иммунопоэза (Сидоров М.А. с соавт., 2006). При хороших условиях кормления и содержания этот дефицит слабо выражен и сдвинут на более позднее время (Анатенко С.А., 1992; Korhonen Н. et al, 2000). Третий возрастной иммунодефицит возникает в период отъема при резком переводе молодняка на растительный корм. Вследствие кормового стресса истощаются механизмы защиты и нарушается образование иммуноглобулина А. Нарушение и несовершенство адаптационных процессов в первые дни жизни, проявляются, чаще всего, в развитии желудочно-кишечных, респираторных заболеваний, в том числе инфекционной этиологии (Ваизов В.Х. с соавт., 2003; Исмагилов Э.И., 2007; Самохин В.Т. с соавт., 2002). К патогенам, которые оказывают влияние на иммунную систему крупного рогатого скота, следует отнести вирус диареи болезни слизистых, который оказывает иммуносупрессивное действие, проявляющееся лимфопенией, разрушением Т- и В- клеток в лимфатических узлах, селезенке, тимусе, пейеровых бляшках. Кроме того, вирус угнетает такие функции нейтрофилов, как дегрануляция, антителозависимая клеточная цитотоксичность, фагоцитоз. Проникая через плаценту, вирус может вызывать иммунологическую толерантность у новорожденных телят (Андреев Е.В., 1984; Верховская А.Е., 2009; Глотов А.Г., 2002; Гоппе В.А., 2005; Жидков С.А., 1994). Вирусы парагриппа -3 и инфекционного ринотрахеита так же вызывают иммуносупррессию у крупного рогатого скота, воздействуя на функции макрофа- 22 гов, ингибируя синтез ИЛ-1, слияние фагосом и лизосом, открывая, тем самым ворота для вторичных инфекций (Атамась В.А., 1989; Будулов Р.Н., 2009; Кардашов А.М., 2005). Стратегия развития ветеринарии в настоящее время привела к пониманию того, что почти любая патология является причиной или следствием иммунологических нарушений, это обстоятельство требует применения иммунокоррегирующих средств, без которых быстрое и полное излечение больного животного представляется затруднительным (Белопольский В.А, 1993; Донченко А.С., 1989; Ивановский С.А., 1993; Кабанцев А.И.,1989; Федоров Ю.Н., 2006). Исследования, проведенные в последние годы российскими учеными, позволили разработать и внедрить новые комплексные подходы в лечении и профилактике различных иммунодефицитных состояний с использованием иммунотропных препаратов направленного действия с учетом уровня и степени нарушений в иммунной системе (Буланкин А.Л., 1996; Дейгин В.И., 2000; Терехов В.И., 2002; Сисягин П.Н., 2007; Урбан В.П., 1989; Федоров Ю.Н., 2005; Хаитов Р.М. с соавт., 2000; Шахов А.Г., 2005). Петрянкин Ф.П. (2008) указывает, что, иммуномодуляторы применяют в следующих «ключевых точках»: - при развитии инфекционного заболевания в наиболее ранние его периоды; - молодняку в первые дни после рождения и в иммунодефицитные периоды; -беременным животным в начальный и последний периоды беременности – для улучшения иммунного статуса материнского организма, повышения качества молозива, внутриутробного развития плода, профилактики гинекологических болезней; - при незаразных болезнях: энтеритах, бронхопневмониях, гепатитах, нефритах, отеках, гинекологических болезнях и других; - как антистрессовое средство; - для повышения напряженности иммунитета при вакцинациях; - для повышения клеточных факторов иммунитета при некоторых паразитарных болезнях, как лечебное и профилактическое средство. 23 С целью профилактики, коррекции иммунодефицитных состояний, повышения эффективности терапии больных, стимуляции роста и развития животных успешно используют препараты экзогенных природных РНК (Аликин Ю.С. с соавт., 1998; Ноздрин Г.А., 1996). Многочисленные литературные данные свидетельствуют о высокой иммунологической активности препаратов полученных из тимуса животных (Арион В.Я., 1990; Басова Н.Ю., 2002; Воронин Е.С., 1990; Ноздрин Г.А., 1996; Петров А. М., 1995; Тармакова О.С., 2005). В последние годы большой интерес у исследователей вызывают препараты на основе гуминовых кислот (Бузлама С.В., 2008; Лотош Т.Д., 1991; Шапошникова Ю.В., 2009; Deiana S. et al, 1990). При первичных иммунодефицитах самые значимые методы лечения – это заместительная терапия или воздействие на возбудителей инфекции, развивающихся на почве иммунодефицита. По мнению Петрянкина Ф.П. (2008) применение иммуномодуляторов более оправдано и целесообразно при вторичных иммунодефицитах. Применение только антибактериальных средств при пониженной функциональной активности неспецифических факторов резистентности и иммунологической реактивности организма малоэффективны. Поэтому оправдано применение комплекса терапевтических средств, обладающих антибактериальными свойствами и стимулирующих иммунологическую реактивность (Хаитов Р.М. с соавт., 1999; Шахов А.Г., 2005). Для стимуляции противоинфекционной защиты целесообразным является использование иммуномодуляторов, преимущественно действующих на клетки системы мононуклеарных фагоцитов. При активации этой системы приводится в движение вся совокупность неспецифических и специфических факторов защиты организма от инфекции. К высокоэффективным лечебным средствам последнего поколения с преимущественным воздействием на клетки моноцитарно-макрофагальной системы относятся препараты из полисахаридов микробных клеток (достим, полистим, ПС-1, ПС-2), полиоксидоний, гликопин, миелопид. 24 В исследованиях Мухутдиновой Д.М. (2001) применение препарата «Достим» на фоне лечения антибиотиками при неспецифической бронхопневмонии телят, оказывает нормализующее действие на гемопоэз (повышая содержание гемоглобина и эритроцитов соответственно на 15,0 и 8,0%) и лейкопоэз (нормализуя содержание лейкоцитов). Совместное применение препаратов «Достим» с «Янтарос плюс» и «Сувар» на фоне лечения антибиотиками при неспецифической бронхопневмонии телят оказывает нормализующее действие на гемопоэз (повышая содержание эритроцитов соответственно на 11,1 и 15,2%, гемоглобина на 19,1 и 15,5%), лейкопоэз и белковый обмен (нормализуя содержание лейкоцитов, повышая содержание общего белка соответственно на 17,0 и 10,0%, гамма-глобулина на 18,3 и 20,0%), минеральный обмен (повышая концентрацию общего кальция и неорганического фосфора), нормализует кислотно-щелочное равновесие. Топурия Г.М. (2003) предлагает для коррекции иммунобиологического статуса и профилактики желудочно-кишечных заболеваний у телят в условиях неблагополучной экологической обстановки применять достим - внутримышечно сразу после рождения и через 2 суток по 3 мл По данным Скорикова А.В. с соавт. (2013) применение полиоксидония-вет глубокостельным коровам в дозах 6 и 12 мг/голову стимулирует активность клеточного и гуморального звеньев иммунитета. При его применении снижается заболеваемость коров после отела, повышаются показатели репродукции, качество молозива и масса тела телят при рождении. К иммуномодуляторам, действующим на Т-систему иммунитета, относится ряд препаратов, полученных из тимуса крупного рогатого скота, а также их родоначальник – тактивин. К иммуномодуляторам последнего поколения с таким эффектом относятся миелопид (его фракция МП-1) и иммунофан (Федоров Ю.Н., 2005). Степанов О.Г. (2004) считает, что имунофан является эффективным этиопатогенетическим средством при различных заболеваниях органов пищеварения, дыхания, акушерско-гинекологической патологии, инфекционных болезнях. Лечебная эффективность имунофана при парагриппе-3 телят в исследованиях авто- 25 ра составила в первой серии опытов 99%, во второй - 98%, при ИРТ - 89-98%. Профилактическая эффективность имунофана при пневмоэнтернитах телят составила 51-64%, поросят – 19, 23%. У коров, обработанных имунофаном, на 16,7% реже регистрировалось задержание послёда, на 26,7% меньше отмечалась субинволюция матки, на 13,3% реже послеродовой период осложнялся острым послеродовым эндометритом, а также на 19,8 дня короче продолжительность бесплодия, чем у коров контрольной группы. Большинство авторов считают, что при одновременном применении антибиотика и иммуномодулятора, достигается больший терапевтический эффект, чем при их раздельном введении (Басова Н.Ю., 2002; Бояринцев Л.В., 2003; Воронин Е.С., 1999; Втюрин С.В., 2006; Сисягина Е.П., 2010; Щербаков П.Н., 2004). Длительное применение иммуностимуляторов в больших дозах противопоказано, так как длительное состояние гиперактивности иммунной системы приводит к срыву невосприимчивости к антигенам собственных тканей и развитию аутоиммунных воспалительных процессов, вызывающих отдаленные патологические состояния. В ветеринарии широко применяются средства специфической профилактики факторных болезней. Однако эффективность проводимых мероприятий по предупреждению и возникновению указанных болезней и оздоровлению неблагополучных хозяйств остается до сих пор недостаточно высокой, особенно в условиях промышленного животноводства. Это обусловлено тем, что на организм животных негативно влияют различные химические, биологические, технологические и другие стресс-факторы, угнетающие их иммунную реактивность, в результате чего наблюдается ослабление или отсутствие иммунного ответа на различные антигены (Бойко Т.В., 2008). Особенно сложно обстоит дело с вакцинацией при смешанных инфекциях. Поэтому для повышения эффективности иммунизации важным моментом является стимуляция поствакцинального иммунитета с помощью иммунотропных препаратов. 26 В ветеринарной медицине иммуномодуляторы используются с целью коррекции нарушений антиинфекционных механизмов и повышения эффективности антибактериальной терапии, усиления специфической иммунотерапии и иммунопрофилактики, экстренной индукции неспецифической резистентности в эпидемически опасной ситуации, при встрече с неизвестным возбудителем и в других случаях повышенного риска возникновения инфекции (Соколов А.В., 1995). Исследованиями Исмагиловой А.Ф. (1997) установлено, что 2-метил-4амино-6-оксипиримидин является эффективным иммуномодулятором, стимулирует гуморальный иммунный ответ у животных. По рекомендациям автора 2-метил-4-амино-6-оксипиримидин нужно вводить внутрь в течение недели в дозе 25 мг/кг, одновременно с иммунизацией. Для стимулирования иммунного ответа при вакцинации широкое применение нашли тимические препараты. По сообщениям Фисенко С.П. (1990) иммуномодуляторы тималин, тимоген, ганглиин, авиамин усиливали процесс формирования поствакцинального иммунитета к ИЛТ. Большой интерес исследователи проявили к синтетическому препарату тимогену. Иванова Т.А. с соавт. (1989) предлагали применять тимоген для коррекции иммунитета у телят. По данным Манжуриной О.А. (1998) однократное применение поросятам тимогена 10 мкг/ кг массы тела одновременно с введением противосальмонеллезных вакцин способствует коррекции показателей клеточного и гуморального иммунитета, повышению сохранности поросят при иммунизации на фоне поступления ПДД калия нитрата. Опыты Дамбаевой С.В. с соавт. (2000) показали, что тимоген оказывает стимулирующее влияние не поглотительную активность нейтрофилов. Артемов Б.Т. с соавт. (2002) рекомендуют в хозяйствах, неблагополучных по колибактериозу, для повышения иммуногенности инактивированных вакцин использовать тимоген дважды, в комплексе с вакциной, в дозе 2,5 мл 0,01 % раствора. По данным этих авторов применение тимогена коровам в день иммунизации против колибактериоза способствует достоверному увеличению показателей клеточного иммунитета: уровней лейкоцитов, лимфоцитов, ФАЛ и ФИ. 27 В исследованиях Кирпиченок В.А. (1991) В-активин повышает эффективность парентерального введения поросятам вакцины против сальмонеллеза, корректирует иммунный ответ у свиней при вакцинации против лептоспироза. С целью стимуляции иммунопоэза использовали тканевые препараты, естественные иммуномодуляторы на основе нуклеиновых кислот и препараты растительного происхождения. По данным Жмурова Н.Г. (1988) нуклеинат натрия и фосфолипиды грибка Стрептомицесс гризеус обладают действием, стимулирующим иммунологическую реактивность свиней при вакцинации против сальмонеллеза. Тритерпеновый гликозид кукумариозид, выделенный из голотурии, обладает иммуномодулирующим, неспецифическим протективным и адаптогенным свойством. Кукумариозид стимулирует процессы антителообразования как к модельным антигенам, так и к вакцинам, незначительно влияет на клеточные реакции, стимулирует фагоцитарную, киллерную и переваривающую способность макрофагов, усиливает кооперацию Т- и В-лимфоцитов (Бакуридзе А.Д. с соавт., 1993). Степанюк О.В. с соавт. (1989) рекомендовали для профилактики желудочно-кишечных болезней новорожденных телят применять наряду с вакцинами препараты ИС-1, ИС-7 и ИС-100. Применение в сочетании с герпесвирусными вакцинами иммуностимулятора полиоксидония, активатора реакции Т- и В-клеточного иммунитета, позволяет повысить иммуногенность герпесвирусных вакцин и снизить кратность вакцинаций. При применении полиоксидония установлено увеличение продукции вируснеитрализующих антител по сравнению с группой, где применяли только вакцины (Баринский И.Ф. с соавт., 2000). В связи с тем, что вакцинация поросят против большинства инфекционных болезней проводится до 3-х месячного возраста (иммунная система еще полностью не сформирована), многие исследователи считают, что повысить эффективность проводимых вакцинаций свиней возможно с помощью иммунокоррегирующих препаратов. Положительные результаты получены при использовании 30%-ного раствора тиосульфата натрия при иммунизации телят против колибак- 28 териоза (Гафаров Х.З. с соавт., 1997), поросят против сальмонеллеза, свиноматок - против сальмонеллеза и болезни Ауески (Прудников B.C., 2002) и классической чумы свиней (Жалдыбин В.В. с соавт., 2002). Исследования Жакова М.С. с соавт. (2000) показали высокое иммуностимулирующее влияние натрия тиосульфата на поствакцинальный иммунитет у телят, препарат, по данным авторов, активирует клеточный и гуморальный иммунный механизмы и снижает реактогенность вакцин. В экспериментах Жвания М.Ш. (2002) установлено, что иммунизация поросят против энтеротоксемии при применении тиосульфата натрия способствует повышению в сыворотке крови титров антител на 25% по сравнению с поросятами, привитыми без иммуностимулятора. Корсакова Е.Н. (2001) в качестве иммунокорректора при вакцинации поросят против паратифа применяла миелопид за 7 дней до и в день вакцинации и определила, что данный препарат преимущественно оказывает влияние на клеточное звено иммунокомпетентной системы. По сообщению Шилова В.Б., Корсаковой Е.Н. (2002) применение миелопептида и тетравита повышает эффективность вакцинации телят против лептоспироза в условиях территорий значительного техногенного загрязнения. Выявлено стимулируюшее влияние микроэлементов на поствакцинальный иммунный ответ. Соли железа, меди, цинка, марганца, вводимые перорально в определенных дозах, оказывают положительное влияние на формирование иммунитета и могут использоваться в качестве стимуляторов иммунного ответа. За 710 дней до вакцинации и 7-10 дней после введения эмульгированной вакцины против пастереллеза отмечается повышение бактерицидной активности, поглотительной способности нейтрофилов и т.д. (Андросик Л.Д., 1996). Алехин Е.К. с соавт. (1993) установили, что сочетание витамина Е в комбинации с продигиозаном обеспечивает более высокую иммуностимуляцию первичного иммунного ответа у телят, чем отдельные препараты, а при сочетании с оксиметацилом синергизма не отмечено. Поскольку комбинированное применение иммуностимуляторов не всегда более эффективно по сравнению с действием от- 29 дельных препаратов, необходимо с осторожностью подходить к использованию неопробированных комбинаций. По данным Шахова А.Г. с соавт. (2006), двукратное введение коровам Лигфола, в сочетании с иммунизацией и однократным введением препарата новорожденным телятам, способствовало стабилизации процессов свободного радикального окисления, активизации защиты иммунокомпетентных органов, созданию более напряженного специфического иммунитета у глубокостельных коров перед отелом и формированию высокого уровня специфического колострального иммунитета у телят, полученных от этих коров. Повышение эффективности профилактических мероприятий за счет разработки рациональных схем сочетанного применения вакцин и иммуномодуляторов представляет практический интерес (Урбан В.П. с соавт., 1989). Однако, необходимо учитывать, что вакцинация, зачастую проводимая на фоне глубоких нарушений обменных и иммунных процессов, не только не достигает нужного эффекта, но и может привести к дальнейшему угнетению иммунной системы (Ермилов И.В., 2012; Красочко П.А., 2009; Мищенко В.А. с соавт., 2006;. Сисягина Е.П. с соавт., 2010; Федоров Ю.Н., 2005). Вакцинация телят на фоне нарушения обменных процессов организма, угнетения иммунной системы приводит к значительному снижению эффективности вакцин (Машеро В.А., 2005). По мнению Мищенко В.А. с соавт. (2006) иммунодефицит на фоне инфекционного заболевания может повышать восприимчивость животных к разным патогенам и снижать иммунный ответ на применяемые вакцины. Использование классической схемы профилактики инфекционных болезней животных на фоне иммунодефицитных состояний их организма, как правило, не приводит к положительному результату. Все это необходимо учитывать при разработке средств и методов профилактики инфекций. В связи с этим большое значение приобретает разработка принципиально новых эффективных профилактических мероприятий, направленных на повышение резистентности организма и продуктивности сельскохозяйственных животных путем использования экологически безопасных препаратов, естественных 30 метаболитов, активно влияющих на энергетический обмен веществ в организме (Басанкин А.В., 2007). 1.3 Биологические свойства янтарной кислоты и перспективы ее применения при метаболических и иммунных нарушениях у животных В последние годы многие исследователи в области медицины и ветеринарии направляют свои усилия на разработку лекарственных средств, оказывающих влияние на метаболические и иммунные процессы в организме. При этом основной задачей в области ветеринарии является получение не дорогих, максимально эффективных и обладающих минимумом побочных эффектов препаратов. В этой связи весьма перспективным является разработка так называемых «умных лекарств» на основе янтарной кислоты (Кондрашова М.Н., 1996). Янтарная (этан-1,2-дикарбоновая, бутандионовая) кислота (ЯК) – универсальный промежуточный внутриклеточный метаболит, образующийся при взаимопревращениях углеводов, белков и жиров в растительных и животных клетках (Ивницкий Ю.Ю., 1998; Кондрашова М.Н., 1979; 1996). Для лучшего понимания механизма действия вводимой в организм экзогенной ЯК следует рассмотреть некоторые аспекты энергетического обмена и определить место, занимаемое в нем ЯК. В процессе обмена веществ при окислении глюкозы, жирных кислот и некоторых аминокислот образуется одинаковый конечный продукт - ацетил-КоА. При этом происходит «обезличивание» первичного источника энергии, поскольку ацетил-КоА не имеет никаких следов своего происхождения. Таким способом готовится «топливо» для основной биологической «топки» в митохондриях. Следовательно, в цикл трикарбоновых кислот поступают молекулы ацетил-КоА из разных энергетических источников. Цикл Кребса называют «общим метаболическим котлом» или «энергетическим котлом» т.к. большая часть энергии в организме производится и запасается за счет реакций этого цикла (Бышевский А.Ш. с соавт., 1994). Обнаруживаемая в органах и тканях ЯК, является продуктом пятой и субстратом шестой реакции цикла трикарбоновых кислот (цикла Кребса). 31 Для поддержания нормального тканевого дыхания теоретически достаточно лишь активированной уксусной кислоты (ацетил-КоА), другие субстраты не расходуются, однако в действительности ди- и трикарбоновые кислоты постоянно отвлекаются из цикла Кребса в качестве субстратов анаболических реакций. Потеря интермедиатов цикла возрастает при различных патологических состояниях, поэтому пополнение пула интермедиатов цикла Кребса является необходимым (Букин Ю.В., 1979;. Ивницкий Ю.Ю. с соавт., 1998). Фундаментальные и прикладные исследования научной школы профессора Кондрашовой М.Н. существенно расширили представления о роли ЯК. Установлено, что ЯК выполняет функцию регулятора физиологических и биохимических процессов. Окисление ЯК в шестой реакции цикла Кребса осуществляется с помощью сукцинатдегидрогеназы, характерной особенностью которой является локализация на внутренней поверхности мембран митохондрий и независимость ее активности от концентрации окисленной и восстановленной формы НАД/НАДН, т.к. она единственная из катализаторов цикла Кребса является ФАД-зависимой. ФАД восстанавливается в ФАД Н2 только при окислении сукцината (Бышевский А.Ш. с соавт., 1994; Виноградов А.Д., 1996; Кондрашова М.Н., 1987). В этом случае « срабатывает» укороченная цепь тканевого дыхания, обеспечивающая синтез двух молекул АТФ на пару атомов водорода, что позволяет сохранить энергосинтезирующую функцию митохондрий в условиях гипоксии и ишемии при нарушении НАД-зависимого дыхания клеток (Valle A.B. et al., 1978). При недостаточном поступлении кислорода в клетку, независимо от причин, в митохондриях происходит накопление НАДН и развивается недостаток НАД+, являющегося акцептором Н+. В результате нарушения функции электронтранспортной цепи в митохондриях ингибируется связанный с нею процесс окислительного фосфорилирования и образования АТФ. В этих условиях активизируется альтернативный путь работы дыхательной цепи митохондрий, осуществляемый при участии эндогенной ЯК, образующейся из ГАМК и ГОМК через промежуточную стадию янтарного альдегида (цикл Робертса). Кроме того, при окислительном стрессе происходит дезаминирование альфа-кетоглутаровой кислоты в 32 печени с образованием ЯК. Повышение активности сукцинатоксидазной системы является чувствительной характеристикой состояния клеточного дыхания при изменении физиологического состояния организма в условиях воздействия на него различных экзо - и эндогенных факторов. Превращение ЯК в организме связано с продукцией энергии, необходимой для обеспечения жизнедеятельности. При возрастании нагрузки на любую из систем организма поддержание ее работы обеспечивается преимущественно за счет окисления ЯК. Мощность системы энергопродукции, использующей ЯК, в сотни раз превышает все другие системы энергообразования организма. При окислении НАД-зависимых субстратов на одну пару электронов синтезируется три молекулы АТФ, что на одну молекулу АТФ больше, чем при окислении ЯК но, несмотря на это, скорость окисления сукцината настолько выше, что в единицу времени образуется больше АТФ (Браунштейн А.Е., 1987). В природе имеются механизмы, увеличивающие выработку ЯК в случае увеличения энергозатрат организма. Встает вопрос о целесообразности введения экзогенного сукцината, ведь его количество в любом случае будет существенно меньше, чем вырабатываемое в митохондриях клеток организма. И здесь мы сталкиваемся с весьма интересным фактом: введение экзогенной ЯК играет как бы сигнальную роль, появление ее вне митохондрий даже в небольших количествах, расценивается организмом, как знак того, что в каком – то участке организма не хватает энергетических ресурсов или имеется кислородное голодание. Организм реагирует на этот сигнал сдвигами в нейроэндокринной, гормональной регуляции, улучшением периферического кровотока, повышением силы сердечных сокращений, облегчением отдачи кислорода оксигемоглобином и рядом других компенсаторных реакций. Реакция мобилизации энергетического обмена происходит не в ответ на реально наступивший энергодефицит, а носит упреждающий характер (Ивницкий Ю.Ю., 1994). Эффективность регуляции физиологических функций организма при экзогенном введении ЯК оказывается неожиданно высокой. Сигнальное действие ЯК проявляется в активации различных функций при использовании в концентрациях, значительно меньших, чем необходимо для 33 обеспечения митохондрий субстратом, вплоть до единиц микрограммов (Маевский Е.И. с соавт., 2000; Кондрашова М.С. с соавт., 1995). В последние годы накопилось большое количество данных о влиянии ЯК на функциональное состояние различных систем организма человека и животных. Мы позволим себе привести некоторые из них, для подтверждения теоретического обоснования возможности применения ЯК при метаболических и иммунных нарушениях у животных. ЯК и ее соли (сукцинат натрия) по клинической классификации относится к субстратным антигипоксантам (Оболенский С.В., 2002). Преимущество сукцината в скорости окисления перед другими субстратами клеточного дыхания наиболее выражено в условиях гипоксии, когда НАД-зависимый транспорт электронов в дыхательной цепи тормозится, а активность сукцинатдегидрогеназы и продукция эндогенного сукцината возрастает (Кондрашова М.Н., 1976; Маевский Е.И. с соавт., 2000; Aithal H.N., Ramasarma T., 1968). Феномен быстрого окисления ЯК сукцинатдегидрогеназой, сопровождающийся АТФ-зависимым восстановлением пула пиримидиновых оснований получил название «монополизация дыхательной цепи сукцинатом», биологическое значение которого заключается в быстром ресинтезе клетками АТФ (Krebs H.A. et al., 1961). Поскольку соотношение концентраций окисленной и восстановленной форм НАД является вторым по значимости, после соотношения уровней АДФ и АТФ, положительным регулятором НАДзависимого окисления, последнее в присутствии сукцината тормозится (Кондрашова М.Н., 1976). В экспериментах in vitro ,было показано, что добавление небольших количеств фумарата, малата или сукцината к измельченной мышечной ткани приводило к увеличению потребления кислорода тканями, многократно большему, чем можно было бы объяснить только окислением добавленных субстратов до конечных продуктов – углекислоты, воды и тепла. Процесс носит каталитический характер, т.к. одна молекула добавленной к ткани дикарбоновой кислоты, обеспечивает окисление многих эндогенных субстратов. Окисление сукцината является необходимым условием каталитического действия любой другой из карбоновых 34 кислот на усвоение кислорода тканями. Выполняя каталитическую роль по отношению к циклу Кребса, ЯК снижает в крови содержание других интермедиатов данного цикла – лактата, пирувата и цитрата, накапливающихся в клетке на ранней стадии гипоксии. Введение сукцината натрия лабораторным животным или здоровым людям приводило к снижению уровня органических кислот в крови, экскреции кислых продуктов обмена из организма, что указывает на нормализацию аэробной фазы тканевого дыхания (Ивницкий Ю.Ю., 1994; Krebs H.A., 1943). Антигипоксическое действие ЯК обусловлено не только активацией сукцинатдегидрогеназного окисления, но, так же, восстановлением активности ключевого окислительно-восстановительного фермента дыхательной митохондриальной цепи - цитохромоксидазы и ее влиянием на транспорт медиаторных аминокислот (Брауштейн А.Е., 1987; Кондрашова М.Н., 1976; 1996; Петров А.Ю., 2002). Сукцинат положительно влияет на оксигенацию внутренней среды, стабилизирует структуру и функциональную активность митохондрий, является индуктором синтеза некоторых белков, влияет на ионный обмен в клетке. Повышение трансмембранного градиента концентрации кислорода и снижение оксигенации ядра и цитоплазмы свидетельствует о способности ЯК качественно интенсифицировать диффузию кислорода в различные ткани и органы, стимулируя клеточное дыхание (Миловский В.Г. с соавт., 1992). По величине прироста потребления кислорода тканевыми срезами, в ответ на внесение в инкубационную среду сукцината, здоровые ткани разделены на две группы: 1.Высоко реактивные: печень (стимулирующий эффект 3000-6000%); корковое вещество почек(450-500%); головной мозг; поперечно-полосатые мышцы(250-500%). 2. Низко реактивные: легкие, слизистые оболочки желудочно-кишечного тракта(50-150%) и в порядке убывания реактивности – кожа, молочная железа, лимфоидные ткани (Rosentahl O., 1944). ЯК, проявляя антиоксидантные свойства, ингибирует процессы перекисного окисления липидов. По данным Оболенского Н.В. (2002) разработанный на осно- 35 ве ЯК препарат реамберин активирует антиоксидантную систему ферментов и тормозит процессы перекисного окисления липидов в ишемизированных органах, оказывая мембраностабилизирующее действие. ЯК снижает токсическое действие на организм (Смирнова Н.Б., 2001). При исследованиях установлено, что применение ЯК повышает также уровень показателей антиоксидантной защиты, таких как сульфгидрильные группы (на 26%), витамин Е (на 64%) (Басанкин А.В., 2004). Ряд авторов, основываясь на том, что от состояния пула пиримидиновых динуклеотидов зависит антиоксидантная система глутатиона (Глушков С.М., 1998; Колесниченко Л.С., 1990; Кондрашова М.Н., 1979; Кулинский В.И., 1993; Путилина Ф.Е., 1982; Lu S.C. et al., 1994), рассматривает ЯК, как антиоксидант в биологических системах. Увеличение концентрации восстановленного глутатиона способствует усилению устойчивости митохондрий к перекисной деградации, стимулированной ксенобиотиками (Кондрашова М.Н, 1979; 1987; Domingo J.L. et al., 1986; Jean P.A., 1992; Ray S.D. et al., 1994). При этом ЯК, под действием сублетальных доз активного генератора радикальных частиц - нитрита натрия, полностью нивелирует блокирование дыхательной цепи митохондрий (Белякова Н.В., Коваленко А.Л., 2000). Экзогенное поступление в организм ЯК усиливает биоэлектрическую активность сердца, улучшает гемодинамику и увеличивает толерантность сердца к физическим нагрузкам (Гацура В.В., 1993; Гацура В.В. с соавт., 1996; Фролькис Р.А., 1978; Choudhy Z.M., 1986). Кардиопротекторное действие ЯК связано прежде всего с активацией сукцинатдегидрогеназного пути окислительного ресинтеза АТФ в кардиомиоцитах, с одновременным снижением уровня жирных кислот и НАД-зависимых субстратов цикла Кребса в зоне гипоксии (Вольский Г.Д., 1982; Ещенко Н.Д., Кондрашова М.Н., 1976; Меерсон Ф.З., 1984). Экспериментально показано, что в условиях острого инфаркта миокарда в крови, вытекающей из зоны ишемии, резко уменьшается содержание ЯК. Поступление ЯК ограничивает зону некроза в миокарде (Белякова Н.В., 2000; Вольский Г.Д., Ещенко Н.Д., 1982; Коваленко А.Л., 2000). 36 Противоишемический эффект ЯК связан не только с активацией сукцинатдегидрогеназного окисления, но и с восстановлением активности ключевого окислительно-восстановительного фермента дыхательной цепи митохондрий клеток – цитохромоксидазы (Сергеев П.В. с соавт., 1991). ЯК нормализует содержание гистамина и серотонина в крови и повышает микроциркуляцию в органах и тканях, не оказывая влияния на артериальное давление и показатели работы сердца (Бобков Ю.Г., 1984). Антиаритмическое действие ЯК обусловлено улучшением метаболических процессов в миокарде, подавлением процессов перекисного окисления липидов в кровотоке (Ernster L. et al., 1991), стабилизацией коронарного кровоснабжения (Семиголовский Н.Ю. с соавт., 1994; Фролькис Р.А., 1978). ЯК потенцирует действие других антиаритмических препаратов, что обусловлено ее влиянием на калиевый /кальциевый обмен в кардиомиоцитах (Балашов В.П. с соавт., 1996). У больных, перенесших операции по поводу врожденных пороков сердца, протезирование митрального клапана и митральные комиссуротомии применение ЯК оказывало положительное влияние на сердечную деятельность - уменьшение количества сердцебиений, снижение дефицита пульса, повышение ударного выброса сердца и повышение артериального систолического давления, увеличение сердечного индекса (Ивницкий Ю.Ю., 1998). По данным того же автора в условиях экспериментального шока, вызванного 10-минутной остановкой сердца, ЯК снижала уровень свободно радикальных процессов в мозге и сыворотке крови, ослабляла деструкцию мембранных элементов нейронов и способствовала полному восстановлению функций и структуры мозга. В постреанимационном периоде ЯК способствовала нормализации функций центральной нервной системы, снижала чувствительность животных к стрессу, накопление свободно-радикальных продуктов и восстанавливала морфологические изменения в крови и головном мозге (Ивницкий Ю.Ю., 1998). При экспериментальной острой гипоксии мозг ЯК ограничивала объем ишемических повреждений, уменьшала количество продуктов перекисного окис- 37 ления липидов и увеличивала выживаемость животных (Ваизов В.Х. с соавт., 1994). ЯК оказывает нормализующее действие на физиологическое состояние и показатели кислотно-щелочного равновесия при ацидозе. Механизм такого действия связан с усилением вклада в энергообеспечение окислительного фосфорилирования, при котором уменьшается количество ионов водорода, не вовлекаемых в ресинтез АТФ (Кондрашова М.Н., 1976). При лечении пневмонии у детей первого года жизни анализ кислотно– щелочного состояния, проведенный через неделю после начала терапии, показал менее выраженные нарушения в основной группе, получавшей сукцинат натрия, по сравнению с контрольной (Крайняя Ж.Б., Резник Б.Я., 2002). Аналогичные результаты получены при лечении у детей первого года жизни ацидоза, обусловленного сложной (сальмонеллез, пневмония с сопутствующим рахитом, анемией и гипотрофией) патологией (Румянцева С.А. с соавт., 2002). По данным Кондрашовой М.Н. (1976) у больных, перенесших операции на сердце введение сукцината натрия эффективно устраняло метаболический ацидоз. Введение сукцината натрия во время операций с искусственным кровообращением, уменьшало метаболические нарушения, значительно облегчало регуляцию и коррекцию кислотно-щелочного равновесия и способствовало нормализации функции жизненно важных органов (Парфенов В.Е., 1987). Гепатотропное действие ЯК обусловлено повышением уровня соотношения НАДН+/НАД (Дроговоз С.М. с соавт., 1997; Дорофеев Б.Ф. с соавт., 1997;. Омельянчик С.Н, 1997). При добавлении ЯК прирост скорости потребления кислорода клетками печени увеличивается в 60 раз, что связано со стимуляцией энергетического обмена в гепатоцитах (Топузов Э.Г. с соавт., 1999). Активация под действием ЯК сукцинатдегидрогеназы в митохондриях клеток печени нормализует нарушения синтеза мочевины, печеночного холестаза (Минушкин О.Н. с соавт., 1997; Aithal H.N., Ramasarma T., 1968; 1969), препятствует развитию жировой дистрофии и образованию коллагенозной ткани (Арямкина О.Л., Визе-Хрипунова М.А., 1997; АЗайчик.Ш., Чурилов М.П., 2000). 38 При поражении печени ксенобиотиками и сепсисе ЯК стимулирует метаболическую функцию печени с одновременным повышением устойчивости мембран гепатоцитов к радикальному окислению (Зиновьев Ю.В. с соавт., 1988). ЯК повышает активность гепатоцитов печени (Noack H. et al., 1994). Использование сукцинатсодержащих препаратов у больных туберкулезом легких с гепатотоксическими проявлениями химиотерапии повышает активность ферментов первой линии свободнорадикальной защиты (супероксиддисмутаза и каталаза) и стабилизирует уровень восстановленной части тиолдисульфидной антиоксидантной системы (общие тиоловые группы и тиолдисульфидный коэффициент). В литературе имеются данные о стимулирующем действии ЯК на синтез белка (Иванов А.И., 1999; Ивницкий Ю.Ю., 1998), гемоглобина (Щерба М.И. с соавт., 1975), радиозащитном действии ЯК (Антипов В.В. с соавт., 1989; Ивницкий Ю.Ю., 1994; Штурм Р.И. с соавт., 1992). ЯК используется в медицине для профилактики состояния пониженной иммунологической реактивности и для повышения адаптогенной устойчивости к стрессовым влияниям (Романцов М.Г., 2001). Сукцинат натрия проявляет профилактическое и лечебное действие при острых и хронических интоксикациях химического и бактериального происхождения (Domingo J.L. et al., 1986). Исследования последних лет показали наличие у ЯК биологической активности с уникальным сочетанием проявлений: по отношению к здоровому организму сукцинаты выступают в роли адаптогенов и актопротекторов, а при наличии патологических проявлений проявляют нетипично высокий для адаптогенов терапевтический эффект. При этом амплитуда и направленность модификаций под действием ЯК зависят от функционального исходного состояния тканей, а ее конечный результат выражается в оптимизации параметров их функционирования. Такие свойства позволяют отнести сукцинаты и , прежде всего, фенольные производные ЯК, к лечебно-профилактическим препаратам нового поколения, к так называемым «умным лекарствам» (Кондрашова М.Н., 1996). В животноводстве ЯК широко применяется в качестве биологически активных добавок (Басанкин А.В., 2007; Безбородова Е.А., 1995). Среди таких доба- 39 вок наиболее известны препараты серии «Гемовит», предназначенные для профилактики гипомикроэлементозов, повышения резистентности организма пушных зверей, продуктивных животных и птиц (Бабич В.А. с соавт., 2005; Козлов Ю.М., 2003; Прокофьева Г.Н., 2008). Хорошо известны в животноводстве препараты серии «Янтарос», разработанные в МСАЦ «Хромас» (г. Казань). Эффективность их применения показана в исследованиях Грачевой О.А. с соавт. (1997); Иванова А.В. (1999). ЯК, связывая ионы металлов в хелатные комплексы, обеспечивает не только усиление их биологического действия, но и исключает антагонизм между ними. Многие исследователи сообщают об успешном применения ЯК в животноводстве ветеринарии для повышения сохранности молодняка и увеличения продуктивности животных (Безбородова Е.А., 1994; 1995; Лузбаев К.В., 1997). На основе ЯК разработан ряд препаратов, нашедших широкое применение в медицине и ветеринарии. Одним из новых отечественных препаратов, способных эффективно купировать ишемические процессы, как при местном, так и при парентеральном применении, является цитофлавин. Препарат представляет собой метаболическую композицию на основе ЯК, направленную на лечение состояний, сопровождающихся нарушением свободно-радикального гомеостаза. В составе препарата — ЯК, никотинамид, рибофлавина мононуклеотид. Указанная композиция обеспечивает антиоксидантную и антигипоксическую активность цитофлавина на фоне различных ишемических состояний. Мексидол (2 - этил - 6 - метил - 3 - гидроксипиридина сукцинат) - инновационное, оригинальное лекарственное средство, созданное на уровне мировых стандартов отечественными учёными. Мексидол является препаратом с поликомпонентным спектром фармакологических эффектов и мультифакторным механизмом действия. Наиболее важными компонентами механизма действия мексидола являются его антиоксидантные и мембранотропные эффекты, способность модулировать функционирование рецепторов и мембраносвязанных ферментов, восстанавливать нейромедиаторный баланс. Действие мексидола направлено, прежде всего, на процессы свободно-радикального окисления. С одной стороны, 40 он ингибирует процессы перекисного окисления липидов, а с другой, - повышает активность антиоксидантных ферментов. Наряду с этим, он обладает гиполипидемическим действием ( Румянцева С.А., Федин А.И., 2002). Учитывая уникальную разносторонность проявлений биологического действия ЯК, сфера ее применения в ветеринарной практике является пока еще чрезмерно узкой. Поэтому направление по созданию препаратов на основе ЯК и расширение сферы применения уже известных препаратов, является весьма перспективным. 1.4 Биологические свойства и применение в ветеринарии антисептикастимулятора Дорогова второй фракции Препарат антисептик стимулятор Дорогова второй фракции (АСД-2Ф) является водной фракцией конденсата продуктов термического разложения мясокостной муки. Он представляет собой прозрачную летучую жидкость от желтого до темно-красного цвета с резким специфическим запахом, плотностью до 1,135 г/см, имеет щелочную реакцию (рН=9,5) и хорошо растворим в воде. Требования к качеству препарата были обоснованы Дерябиной З.И. (1963) и Николаевым А.В. (1958). Химический состав препарата зависит, главным образом, от качества исходного сырья - мясокостной муки, которая должна содержать не менее 50% протеина и 12-15% липидов. Разложение мясокостной муки производится со скоростью не более 5º в минуту в диапазоне 150-450ºС, давая при температурах 250ºС, 350ºС и 450 ºС выдержки не менее 1 часа. Такой режим возгонки тканей обеспечивает постепенное расщепление органических веществ до низкомолекулярных компонентов, которые по своей структуре подобны метаболитам клеточного обмена. Все эти соединения теряют сродство с исходным белком и не имеют ни гистологической, ни видовой специфичности, антигенные свойства у них отсутствуют. Они не подвергаются действию протеолитических ферментов желудочно-кишечного тракта (поскольку последние не способны так глубоко расщеплять белок) и всасываются в кровь в неизмененном виде. 41 С химической точки зрения препарат представляет сложную смесь неорганических азотистых веществ в виде солей аммония и органических веществ, среди которых были идентифицированы первичные и вторичные амины, карбоновые кислоты жирного ряда, их амиды и аммонийные соли, холиновые эфиры карбоновых кислот (Абрамов В.Е. с соавт., 2005). Состав органической части препарата уточнен методом спектроскопии протонного магнитного резонанса (Иоффе Б.В. с соавт., 1984). Так, было показано, что это – алифатические органические соединения, содержащие, главным образом, следующие функциональные группы: R- (N+ (CH3)4) – четвертичные аммониевые соли органических кислот; -CH 2S – замещенные меркаптаны; R- CH 2 (C=O)-NH – амиды органических кислот; СH3 - NH ( C=O)-NH – производные мочевины и – (CH 2 ) n – циклические соединения с n >5. Биохимический механизм фармакологического действия этих низкомолекулярных соединений на организм до конца еще не выяснен. Главный нормализующий эффект достигается через центральную и вегетативную нервную систему, а так же нейрогуморальную регуляцию (Абрамов В.Е. с соавт., 2005). АСД-2Ф повышает функциональную активность холинэргической системы ацетилхолин-ацетилхолинэстеразы. Обладая адренергическим влиянием, проявляет себя подобно катехоламинам, усиливая действие фермента аденилатциклазы. Предупреждает угнетающее действие гидрокортизона на лимфоидные органы и надпочечники, препятствуя развитию иммунопатии при стрессе. По данным Дерябиной З.И. (1951) и. Поповой - Батуевой Л.В (1954), при однократном введении АСД-2Ф собакам и лошадям в вену в дозе 30-40 мг/кг в 10% водном растворе наблюдаются следующие реакции: некоторое повышение температуры тела, замедление пульса на 2-4 удара сразу после введения АСД-2Ф , а затем его учащение, незначительное учащение дыхания, ускорение антриовентрикулярной проводимости сердца, повышение кровяного давления, увеличение наполнения артерий. Гематологические показатели при однократном применении препарата не меняются, а при длительном введении АСД-2Ф в крови увеличива- 42 ется содержание эритроцитов и гемоглобина, в белой крови увеличивается содержание эозинофилов и моноцитов, появляются ретикулоциты, что свидетельствует об активизирующем действии АСД-2Ф. Волоскова А.П. (1954), Попова-Батуева Л.В. (1954) при введении препарата АСД 2-Ф животным установили увеличение резервной щелочности крови, что является благоприятным фактором в жизнедеятельности организма, поскольку создаются условия для нейтрализации кислых продуктов. По данным Абрамова В.Е. с соавт., (2005) при применении АСД-2Ф активизируются неспецифические и специфические звенья иммунной защиты, система комплемента, фагоцитоз. Нормализуется количество В-лимфоцитов, корректируется уровень иммуноглобулинов, восстанавливаются взаимоотношения субпопуляций Т-лимфоцитов. Под воздействием препарата возрастает легочной газообмен, повышается потребление кислорода тканями и активность ферментных систем (натрий-, калий- АТФаза, РНК-аза, щелочная фосфотаза и др.), растет антиоксидантная защита. АСД-2Ф стимулирует работу желудочно-кишечного тракта, секрецию пищеварительных желез, нормализует процессы пищеварения Препарат относится к умеренно опасным веществам (3 класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76). В рекомендуемых дозах не оказывает резорбтивнотоксического и сенсилибирующего действия. Препарат АСД-2Ф назначают сельскохозяйственным животным (в том числе птице) и собакам, с лечебной и профилактической целью при болезнях желудочно-кишечного тракта, органов дыхания, мочеполовой системы, поражения кожных покровов, нарушениях обмена веществ, для стимуляции деятельности центральной и вегетативной нервной системы, повышения естественной резистентности у ослабленных и переболевших инфекционными и инвазионными болезнями животных , а так же для стимуляции роста и развития поросят, цыплят и повышения яйценоскости кур. В дозах, в которых препарат АСД-2Ф используется для лечения животных, он не оказывает специфического влияния на возбудителей инфекций. Толь- 43 ко в очень высоких концентрациях (в разведении 1:10, 1:5) препарат АСД-2Ф проявляет бактерицидное действие в отношении белого стафилококка, золотистого стрептококка, пневмококка, мытного стрептококка. Вместе с тем, препарат в небактерицидных концентрациях значительно повышает (в 8 раз) антимикробное действие пенициллина (Мозгов И.Е., 1964). В 1951 году препарат утвержден фармкомитетом МЗ СССР и рекомендован для лечения кожных заболеваний, у людей установлено его противоопухолевое действие. По мнению многих ученых, например профессора Архангельской медицинской академии Алеутского Н.Н., препарат не имеет аналогов в мировой практике (Кирюткин Г.В. с соавт., 2004). Препарат оказывает многостороннее влияние на организм. Он повышает обмен веществ и окислительные процессы, повышает резервную щелочность в крови, чем способствует нормализации обмена в тканях, улучшает процессы пищеварения, всасывания питательных веществ, стимулирует деятельность сердца и дыхания, стимулирует рост и развитие молодых с. животных. АСД-2Ф вызывает улучшение функционального состояния механизмов естественной резистентности, усиливает процессы регенерации тканей, стимулирует иммуногенез, вследствие чего повышается сопротивляемость к неблагоприятным воздействиям, в тем числе и к возбудителям инфекционных заболеваний. Стимуляция физиологических функций и иммунобиологических реакций осуществляется через нервную систему, которая реагирует на введение очень малых доз препарата. Высокая чувствительность нервной системы, по-видимому, обусловлена изменением активности ее ферментных систем и в первую очередь окислительно-восстановительных ферментов. Стимуляция роста животных и восстановление нарушенного обмена веществ у больных животных свидетельствует с том, что препарат повышает синтетические процессы в организме. По-видимому, стимулирующий эффект АСД обусловлен накоплением в организме животных биологически активных комплексов, в том числе ферментов. 44 Дальнейшее, более глубокое изучение химической структуры препарата АСД, выделение активных веществ в чистом виде, изучение биохимического механизма фармакологического действия этого препарата позволят разработать более рациональные рекомендации по применению препарата в животноводстве и ветеринарии. 1.5 Биологические свойства формальдегида Формальдегид (ФА); синонимы: метаноль, муравьиный альдегид; СН2О является первым членом гомологического ряда алифатических альдегидов. Химически чистый сухой ФА представляет собой бесцветный газ с резким, удушливым, едким запахом, сильно раздражающим слизитые оболочки глаз (вызывает слезотечение) и верхних дыхательных путей. ФА хорошо растворим в воде и полярных растворителях (спиртах, диэтиловом эфире и т.д.), но мало растворим в ацетоне, бензоле, хлороформе; нерастворим в петролейном эфире. ФА является весьма реакционно-способным соединением. ФА является одним из нормальных метаболитов в организме, связанных с обменом производных системы тетрагидрофолиевой кислоты (Thrasher D.J., 1987). По современным данным, в сыворотке крови крыс и людей, не подвергнутых внешнему воздействию ФА, его средняя концентрация составляет 2,24 мкг/мл и 2,61 мкг/мл соответственно (Heck D'A H. et al., 1985). Эти показатели имеют индивидуальные вариации. В очень низких концентрациях формальдегид распространен в природной среде (Loden M., 1986). При ингаляции значительных количеств формальдегида его содержание в крови крыс и людей увеличивается лишь на 1-10%, т.е. биологически незначимо (Heck D'A H. et al., 1994). Отмечается эффект «жесткого гомеостазирования» метаболически неизмененного ФА во внутренней среде организма. Это может быть связано со следующими тремя обстоятельствами. Во-первых, ФА является исключительно высоко реакционноспособным соединением, которое быстро не ферментативно реагирует и связывается с биологическими макромолекулами (белками, нуклеиновыми кислотами, а также, возможно, с глутатионом) непосредственно в месте внедрения в 45 организм (Алексеева О.Г., 1978). Во-вторых, на пути поступления ФА в организм находятся достаточно мощные барьерные системы, осуществляющие его ферментативную детоксикацию в месте внедрения (Heck D'A H. et al, 1987). В-третьих, в организме млекопитающих имеется мощная система формальдегиддегидрогеназы (ФДГ) и неспецифических альдегиддегидрогеназ печени, осуществляющая детоксикацию и регуляцию концентрации ФА на системном уровне. Она ответственна за гомеостазирование уровня эндогенного формальдегида. (H. Heck D'A et al., 1987). Активность ФДГ в организме достаточно велика, однако, при внешнем воздействии формальдегида она может испытывать дальнейшее увеличение. Введение ФА в кровь животным приводит к его быстрой и полной конверсии в печени в формиат; при этом 50% формальдегида метаболизируются уже за 1,5 мин и более 90% за 10 мин. Таким образом, поступающий из внешней среды ФА практически не циркулирует в неизменном виде, а сразу метаболизируется до формиата, который включается в пул одноуглеродных фрагментов, переносимых тетрагидрофолиевой кислотой (Marsh G.M., 1982). ФА может включаться в состав белков и нуклеиновых кислот как ферментативно, через пул одноуглеродных фрагментов, переносимых системой тетрагидрофолиевой кислоты, так и не ферментативно, путем образования метиленовых сшивок в биологических макромолекулах по реакции Шиффа (Horvath E.P., 1988). Еще в 1915 году выдающийся французский иммунолог Рамон Г. доказал, что формалин представляет собой прекрасный антисептик для сохранения стерильности биологических препаратов, в частности, сывороток терапевтического назначения. В дальнейшем Рамон Г. в 1923 г. открыл принцип получения «убитых» вакцин и анатоксинов, в основу которого было положено воздействие на микробы и их токсины формалином. Известно, что формалин обладает высокой антимикробной активностью. Так, в концентрации 1:4000 формалин в течение часа прекращает рост стойких микробов – возбудителей сибирской язвы и рожи свиней. Гибель золотистого 46 стафилококка происходит в растворе формалина в течение 30 минут (Мозгов И.Е., 1985). В исследованиях Ласкового В.Н. и Рыбина В.В. (1995); Степанова К.В. (1990) показано, что инъекции 0,15-0,3% растворы формалина оказывают иммуностимулирующее действие на организм животных и профилактируют желудочно-кишечные заболевания молодняка. В исследованиях Евглевского А.А. (1992; 1997) установлено, что инъекции 0,3% формалина оказывают выраженное десенсибилизирующее действие на организм животных при туберкулезе. Возможность применения низких концентраций формалина при локальных гнойно-септических заболеваниях показана в исследованиях Евглевского А.А. с соавт. (2004; 2005; 2006); Лебедевой М.Г. (2004); Воробьевой Н.В. (2006). 1.6 Биологическая роль микроэлементов Микроэлементами называется группа химических элементов, содержащихся в организме животных и человека в очень малых количествах. Исследование биологической роли микроэлементов в нашей стране ведет свое начало от работ Вернадского В.И. (1940). Недостаток макро- и микроэлементов в рационах животных приводит к снижению их продуктивности, ослаблению организма, возникновению различных заболеваний, ухудшению качества продукции, сдерживает рост поголовья, вследствие чего уменьшается валовое производство продуктов животноводства (Габрошински П., 1986; Горшков В.В., 2003, Исмаилова Э.Р., 1999). Одним из существенных для функционирования живых организмов микроэлементов является железо (Гасанов А.С., 2006). Физиологическая роль соединений железа в организме связана с тем, что они обеспечивают дыхание, окислительно-восстановительные процессы и влияют на кроветворение (Камышников В.С, 2000). Железосодержащие ферменты и негеминовое железо клетки находится в митохондриях, выполняют дыхательные и каталитические функции, участвуют в окислительно-восстановительных процессах (Георгиевский В.И., с соавт., 1979). 47 Камышников В.С. (2000) указывает, что при недостатке железа в организме развивается железодефицитная анемия, заболевание, выражающемся в уменьшении количества гемоглобина и числа эритроцитов в единице объема крови. При падении уровня гемоглобина в организме нарушаются окислительные процессы, развивается кислородное голодание тканей (гипоксия). Известно, что при дефиците железа снижается трансформация лимфоцитов, а следовательно нарушаются процессы клеточного иммунитета (Петров Р.В. с соавт., 1981). Медь необходима животным для процессов кроветворения, остеогенеза, для повышения защитных функций организма, пигментации и кератизации шерсти и пера. Роль меди связана с участием в построении ряда ферментов и белков. Она регулирует процессы биологического окисления и генерации АТФ, синтеза соединительнотканных белков (коллагена и эластина) и метаболизма железа, активирует гликолиз и действие адреналина. Медь входит в состав сложных белков эритроцитов и печени, катализирует включение железа в структуру гема и способствует созреванию эритроцитов на ранних стадиях развития. Медь вместе с железом участвует в кроветворении. Дефицит меди может привести к разрушению эритроцитов, а также нарушению остеогенеза с изменениями в скелете, аналогичными наблюдаемым при рахите (Георгиевский В.И. с соавт., 1979). Ряд исследований показывает положительное влияние меди на гематологические показатели, защитные функции организма при ее оптимальном содержании в рационе (Кальницкий Б.Д., 1986;. Метлякова М.Ю, 1999). Медь входит в состав многих ферментов, обеспечивающих функционирование системы ПОЛ- АОЗ (Рецкий М.И., 1997). Важную физиологическую функцию выполняет фермент супероксиддисмутаза , ускоряя реакцию разложения супероксид-иона *О2-, возникающего при свободнорадикальном окислении веществ в клетке. Этот радикал очень активно взаимодействует с разными компонентами клетки, разрушая их. Супероксиддисмутаза, взаимодействуя с супероксидионом *O2-, превращает его в молекулярный кислород и в пероксид водорода, при этом 48 атом меди фермента выступает и окислителем, и восстановителем (Рецкий М.И. с соавт. 2002). Важную роль в дыхательной цепи играет фермент цитохромоксидаза , которая кроме меди содержит еще и железо. Цитохромоксидаза катализирует перенос электронов от окисляемого вещества на молекулярный кислород. В ходе каталитического процесса степени окисления меди и железа обратимо изменяются, а восстанавливающийся кислород, присоединяя протоны, превращается в воду (Бербетова Н.Т., 2000; Рецкий М.И. с соавт., 2002). Многопрофильную функцию в организме выполняет медьсодержащий белок плазмы крови - церулоплазмин. В церулоплазмине присутствует 98 % меди, имеющейся в плазме крови, и он выполняет не только роль резервуара для меди, но и транспортную функцию, регулируя баланс меди и обеспечивая выведение избытка меди из организма. Кроме того, церулоплазмин катализирует окисление Fе2+ в Fе3+, участвуя в кроветворении (Владимиров Ю.А. , 1987). Считается, что медь лучше всасывается из хелатных комплексов, чем из неорганических солей. Из оксалатов и фумаратов эффективность всасывания меди почти на 20% выше, чем из сульфата меди. Медь из аминокислотных комплексов с незаменимыми аминокислотами используется также лучше, чем медь из сульфата меди (Кузнецов С.Г., 1986). Первые данные о биологической активности кобальта были получены. Waltner К. (1929), которые сообщили, что кобальт в больших дозах стимулирует эритропоэз у крыс и вызывает полицитемию. Это наблюдение, впоследствии подтвержденное и тщательно изученное, имеет историческое значение, так как оно вызвало интерес к физиологической роли кобальта. Кобальт принимает участие в процессах кроветворения. Его физиологическая функция непосредственно связана с витамином В12, в состав которого он входит. Он регулирует и активирует синтез протопорфирина, влияет на углеводный, минеральный, азотистый и нуклеиновый обмен. Кобальт также участвует в реакциях трансметилирования, активации щелочной фосфатазы, аргиназы, альдолазы, карбоангидразы, декарбоксилазы, дезоксирибонуклеазы и других фермен- 49 тов. Жвачным животным кобальт необходим для стимуляции роста бактерий и бактериального синтеза цианкобаламина (Георгиевский В.И. с соавт., 1979). Предполагается, что ионы кобальта необходимы для гемопоэза независимо от цианкобаламина, что возможно связано с блокированием двухвалентным кобальтом сульфгидрильных групп цистина и глютатиона. Это вызывает гипоксию с последующим образованием гемопоэтических факторов, в частности, эритропоэтина (Бабенко Г.А. с соавт., 1971). Кобальт активизирует гидролитические ферменты, увеличивает синтез нуклеиновых кислот и мышечных белков; в присутствии железа и меди повышается активность кроветворной системы. Установлено, что кобальт - важный возбудитель процессов образования эритроцитов, непосредственно оказывает влияние на кроветворные функции костного мозга, ускоряет синтез гемоглобина, повышает усвоение железа. Ионы кобальта принимают участие в реакциях гликолиза и цикла трикарбоновых кислот. При недостатке кобальта у животных снижается уровень гемоглобина и число эритроцитов, развиваются вторичные заболевания: расстройство пищеварения, бронхопневмония, снижается общая резистентность (Грачева Р.В., 1971). Известно, что кобальт ускоряет гидролиз глицил-глицина и саркозинглицина депептидазами, активирует аргиназу, повышает активность амилазы, гликолитическую активность крови, но главным действием кобальта является его стимулирующее влияние на органы кроветворения (Бабенко Г.А., 1971). Кроме повышения количества эритроцитов в периферической крови, кобальт вызывает гиперплазию костного мозга, весь желтый костный мозг заменяется красным и появляются экстрамедулярные очаги кроветворения. До настоящего времени вопросы механизма действия кобальта на эритропоэз остаются дискуссионными. По мнению ряда авторов кобальт усиливает ионизацию и резорбцию железа, способствует включению атома железа в молекулу гемоглобина, стимулирует выработку эритропоэтинов, увеличивает содержание ретикулоцитов, активирует функции костного мозга, ускоряет созревание эритроцитов (Виногра- 50 дова И.П., 1957; Грачева Р.В., 1971; Калимуллин Ю.Н., 1992; Школьник М.Я., 1963). Биологическая роль цинка определяется необходимостью для нормального роста, развития и полового созревания, поддержания репродуктивной функции, вкуса и обоняния, нормального течения заживления ран и т. д. В организме цинк связан с нуклеиновыми кислотами, ответственными за хранение и передачу наследственной информации. Усвояемость цинка из различных кормов и добавок колеблется в пределах 15-80%. У молодняка относительная величина абсорбции выше (Кузнецов С.Г., 1991). Всасывающийся цинк из плазмы крови поступает в скелет, в печень и другие мягкие ткани. В качестве неспецифического катиона цинк активирует дипептидазы кишечного сока, урокиназу и другие ферменты. Усиливает гипогликемический эффект инсулина, предохраняет молекулу инсулина от ее разрушений инсулиназой (Георгиевский В.И. с соавт., 1979). Продуктивное действие цинка подтверждают многочисленные исследования (Кальницкий Б.Д., 1990; Кузнецов С.Г., 1989). Цинк является наиболее важным элементом в развитии иммунитета, и его связь с летальным признаком А 46 (врожденный иммунодефицит) установлена Федоровым Ю.Н. и Верховским О.А. (1996), также отмечено прямое влияние данного элемента на функцию клеток «белой крови» (лимфоциты, нейтрофилы и макрофаги). Цинк и медь и отнесены по классификации Авцын А.П. с соавт. (1991) к эссенциальным иммуномодулирующим микроэлементам. Дефицит меди и цинка вызывает угнетение процесса выработки и дифференцировки Т-лимфоцитов, при этом отмечается нарушение продукции цитокинов. При всех аутоиммунных заболеваниях и иммунодефицитных состояниях обнаруживается дефицит данных нутриентов той или иной степени выраженности. Неорганическая форма соединений микроэлементов сравнительно трудно усваивается организмом животных, а включение в рацион неорганических микро- 51 элементов восполняет дефицит этих минералов лишь на время. Увеличение дозы скармливания для достижения оптимального уровня может вызывать токсикоз. Низкая эффективность неорганических солей микроэлементов связана с недостаточной биологической доступностью содержащихся в них катионов. Обычно она не превышает 20-30% (Георгиевский В.И., 1979). Одним из вариантов решения этой проблемы является создание препаратов, ускоряющих деградацию токсикантов, препятствующих их депонированию, либо способствующих их элиминации из организма, обладающих антитоксическим действием. Большинству этих требований отвечает ЯК 1.7 Иммуномодулирующие свойства препаратов на основе нуклеиновых кислот Нуклеиновые кислоты открыл швейцарский ученый Мишер Ф., который в 1868 г. выделил их в виде нуклеопротеида из ядер лейкоцитов гноя. Он показал, что эти нуклеопротеиды состоят из белка и добавочного соединения, названного им нуклеином (от лат. Nucleus - ядро). Это соединение, имеющее кислотный характер, получило название нуклеиновой кислоты. Поскольку использование гноя в качестве источника нуклеиновых кислот было связано с большими трудностями, Мишер Ф. перешел на молоки атлантического лосося, заходящего на нерест в Рейн. Молоки оказались очень богаты нуклеиновыми кислотами и особыми белками-протаминами, также открытыми Мишером Ф. (Каплина Э.Н., 2005). Молоки лососевых рыб служат с тех пор источником нуклеиновых кислот и протамина во многих исследованиях. Кроме этого, для получения нуклеиновых кислот используют дрожжевые клетки, бактерии, эритроциты цыплят, тимус телят, селезенку и печень мышей и крыс, молоки сельди, карпа, осетровых и других рыб, синтетические нуклеотиды различной длины и состава (Пашук Л.К., 1995). Публикации о способности нуклеиновой кислоты повышать общую сопротивляемость организма впервые появились в 1892 г. Нуклеиновую кислоту использовали для лечения волчанки, туберкулеза, холеры, сибирской язвы, стафи- 52 лококковой и стрептококковой инфекций, дифтерии и др. Особенно подчеркивалось, что под влиянием нуклеиновой кислоты возрастает число элементов белой крови (Пашук Л.К., 1995). В настоящее время установлено, что нуклеиновые кислоты - один из важных компонентов интегрального и иммунологического гомеостаза организма (Земсков В.М.,. Пашук Л.К, 1996). Как известно, в основе нарушения многих функций организма лежат структурные изменения, которые обусловлены метаболическими расстройствами, в первую очередь синтеза белка. Поскольку перенос генетической информации реализуется от ДНК и РНК на белок, расстройства нуклеинового обмена являются одной из причин индукции патологических процессов вообще и иммунопатологических в частности (Рыкова Е.Ю. с соавт., 2001; Серебряная Н.Б. с соавт., 2001) Это объясняет широкий спектр общебиологических эффектов (более 10 различных феноменов) лекарственных препаратов (нуклеинат натрия, деринат и др.) созданных на основе нуклеиновых кислот. Все эти соединения обладают радиозащитным, иммуномодулирующим действием, стимулируют устойчивость организма к различным инфекциям, устраняют малокровие, повышают содержание гемоглобина, понижают возбудимость нервной системы, увеличивают мышечную силу (Беседнова Н.Н. с соавт., 2002; Донченко А.С., 1992; Земсков В.М. с соавт., 1996; Пашук Л.К., 1996). Значимость нуклеиновых кислот в жизнедеятельности человека подчеркивает факт торможения клеточного иммунитета у лиц, исключающих их из питания даже при сохранении его достаточной калорийности. У стариков отмечается снижение содержания низкомолекулярных нуклеиновых кислот и повышение активности нуклеаз. Дефицит нуклеиновых кислот оказывается дополнительным фактором усугубления иммунологических расстройств (Караулов А.В., 2002). Одним из первых препаратов нуклеиновых кислот, полученных из микроорганизмов, является нуклеинат натрия (Земсков А..М, 1984). Нуклеинат натрия — натриевая соль низкомолекулярной дрожжевой РНК, содержащая 1,5-1,6% белка и 2% ДНК. Препарат активен при различных способах 53 введения, обладает иммунологическими свойствами и широким спектром общебиологических эффектов - радиопротекторным и интерфероногенным, способностью стимулировать кроветворение, усиливать регенерацию тканей, нормализовать метаболические расстройства. Все это обусловливает успешное применение иммуномодулятора в лечении более чем 50 различных заболеваний, показанием для его назначения является также дефицит любого звена иммунной системы (Земсков В.М., 1995). Наиболее известным препаратом животного происхождения является деринат - натриевая соль низкомолекулярной нативной ДНК, полученной из молок осетровых рыб (Каплина Э.Н., 2005). Главным фармакологическим свойством нуклеиновых кислот является стимуляция лейкопоэза, процессов регенерации и репарации, функциональной активности практически всех клеток иммунной системы. Препараты этой группы стимулируют функциональную активность нейтрофилов и моноци- тов/макрофагов, повышая их способность поглощать и убивать поглощенные бактерии, повышают антиинфекционную устойчивость к заражению патогенными микроорганизмами, вероятно за счет активации фагоцитоза, повышают функциональную активность Т-хелперов и Т-киллеров, пролиферацию В-клеток и синтез антител. Препараты нуклеиновых кислот обладают антиоксидантными свойствами, что проявляется их способностью удалять из организма свободные радикалы. Благодаря этим свойствам препараты нуклеиновых кислот могут снижать повреждающее действие на организм радио- и химиотерапии (Гончаренко Е.Н., 1991). Таким образом, препараты ДНК и РНК различного происхождения, несомненно, являются перспективными терапевтическими и иммуномодулирующими агентами. 54 1.8 Иммуномодулирующие свойства левамизола и эффективность его применения в ветеринарии Левамизол принадлежит к группе фенилимидотиазолов и является левовращающим изомером. Это - белый порошок, хорошо растворимый в воде, малотоксичный. Левамизол не аккумулируется, выделяется с мочой в виде метаболитов. Препарат быстро всасывается из желудочно-кишечного тракта, быстро распределяется в тканях, метаболизируется он в печени, где концентрация его максимальна, а в тканях количество его значительно меньше, чем в печени и кишечнике. Период полувыведения его при дозе в 150 мг равен 4 ч, а полное выведение наступает через 48 ч (Машковский М.Д., 1993). Левамизол является эффективным противоглистным средством. Он синтезирован в 1966 г. в результате целенаправленного синтеза антигельминтных препаратов. Влияние левамизола на иммунологические процессы обнаружено позднее (Ковалев И.Е., 1980). Механизм действия левамизола основывается на активации и пролиферативном росте Т-лимфоцитов, увеличении числа моноцитов и возрастании активности макрофагов (включающей фагоцитоз и хемотаксис), а так же в увеличении мобильности и хемотаксиса нейтрофильных гранулоцитов, несущих ответственность за иммуномодуляцию (Антонова Н.А., 2005). Способность левамизола имитировать тимусный гормон обеспечивается его имидазолоподобным воздействием на уровень циклических нуклеотидов в лимфоцитах. Возможно, что препарат стимулирует тимопоэтинрецепторы. Препарат благоприятно влияет на иммунологический статус вследствие восстановления эффекторных функций периферических Т-лимфоцитов и фагоцитов. Кроме того, он стимулирует процесс созревания предшественников Т-лимфоцитов в зрелые Тлимфоциты аналогично действию тимусных гормонов (Федоров Ю.Н., 2005). Левамизол является мощным индуктором дифференцировки. Об ускорении дифференцировки Т-лимфоцитов свидетельствует наступающее под влиянием ле- 55 вамизола уменьшение в селезенке мышей числа клеток, образующих розетки с аутологичными эритроцитами (Машковский М.Д., 1993). Beher B. (1999) установил, что Т-клетки селезенки интактных мышей реагируют на левамизол и in vitro. Левамизол стимулирует Е-розеткообразование. В концентрации 40 мкг/мл препарат увеличивает розеткообразование после инкубации с лимфоцитами периферической крови. Derek S. (2007) и Alec L. (2005) показали, что левамизол неспецифически стимулирует функцию лимфоцитов независимо от роли клеток в иммунном ответе человека, т. е. может в равной мере стимулировать функцию и супрессорных клеток, и хелперов, и киллеров. Однако Ковальчук Л. В. с соавт., (1991) считает, что левамизол в основном стимулирует функцию Т-супрессоров, а функцию Тхелперов - в меньшей степени и не постоянно. Левамизол повышает фагоцитарную активность человеческих мононуклеарных фагоцитов, пролиферацию и активность перитонеальных макрофагов морской свинки, увеличивает фагоцитарный индекс альвеолярных макрофагов (крыс), инкубированных in vitro (Борисова, A.M. 1984). Более подробные исследования продемонстрировали, что левамизол, избирательно стимулируя регуляторную функцию Т-лимфоцитов, может выполнять функции иммуномодулятора, способного усилить слабую реакцию клеточного иммунитета, ослаблять сильную и не действовать на нормальную (Кику В.Ф., 1980). В связи с этими свойствами, левамизол был предложен для лечения различных заболеваний, в патогенезе которых придают значение расстройствам иммуногенеза: первичные и вторичные иммунодефицитные состояния, аутоиммунные болезни, хронические и рецидивирующие инфекции, опухоли и др.Следует подчеркнуть, что иммунотропный эффект левамизола зависит от его дозы и антигенных различий, что обнаружено как in vitro, так и in vivo (Асквит П., 1983). В ветеринарии левамизол нашел широкое применение как в качестве антгельминтного средства, так и в роли иммуномодулятора, повышающего иммунный статус животных при различных заболеваниях. В исследованиях Абрамова 56 А.В. (2005) при дегельминтизации левамизолом поросят 3-5 мес. возраста с многокомпонентным паразитоценозом количество Т-лимфоцитов снижалось не значительно, содержание В-лимфоцитов повышалось на 22,5%. Экстенсэффективность против аскарисов и трихоцефал составила 100%. По данным Семко С.А. (2002) левамизол 10%-ный в дозе по ДВ 7,5 мг/кг массы подкожно однократно показал при аскаридозе 100%-ную экстенсэффективность, эзофагостомозе - 90%-ную и трихоцефалезе - 80,3%-ную. Трех- и пятикратно повышенные дозы рустомектина, альбендазола и левамизола хорошо переносятся поросятами 2-4-месячного возраста. В исследованиях Хабузова И.П. (2002) при трехкратном введении левамизола с интервалом в 24 часа у телят с 3-7 суточного возраста и в течении всего года наблюдений сохраняется в органах иммунной системы повышенная пролиферативная активность клеток плазмоцитарного ряда. Левамизол оказывает иммуномодулирующее влияние на естественную резистентность, на клеточный и гуморальный иммунитет и ликвидирует иммунодефицит у молодняка крупного рогатого скота. По данным того же автора левамизол при комбинированном использовании с вакциной из штамма БЦЖ сохраняет тесную прямую корреляцию динамики Т- и В-лимфоцитов с лимфоцитами, В-лимфоцитов с Т-лимфоцитами, с иммуноглобулинами класса М, БАСК с захватывающей активностью нейтрофилов и моноцитов, усиливая иммуномодулирующее влияние вакцины на клеточный и гуморальный иммунитет, пролонгируя его до двенадцати месяцев, повышая протективные свойства вакцины. В работе Кынина Е.С. с соавт. (1991) говорится о повышении эффективности антибиотикотерапии на фоне иммуномодулирующего влияния левамизола. К такому же выводу пришел Красников О.Н. (2003) В его исследованиях парентеральное введение линкомицина гидрохлорида больным бронхопневмонией телятам в дозе 10 тыс. ЕД/кг в сочетании с левамизолом (2,5 мг/кг двумя курсами с перерывом 4-5 дней) сокращает сроки выздоровления животных до 9,25±0,25 дня. Сочетанное назначение телятам линкомицина гидрохлорида (10 тыс. ЕД/кг) внутримышечно, левамизола (по вышеуказанной схеме) и настоя чабреца (три раза в 57 день в суточной дозе 10 г/голову лекарственной травы) обеспечивает нормализацию показателей лейкограммы, общей морфологической картины крови и выздоровление животных через 8,63±0,28 суток (Р<0,01). Применение левамизола телятам в начальной стадии заболевания несколькими курсами по три инъекции в дозе 2,5 мг/кг в течение трех дней с перерывом 4-5 дней повышает гемолитическую активность комплемента, как одного из показателей неспецифической резистентности на 21,7% - 22,2% . Копылович М.В. (2004) разработана научно-обоснованная методика дозированного применения аэрозолей сульфамонометоксина в сочетании с левамизолом и тиамина бромидом для лечения неспецифической бронхопневмонии телят. Комплексное аэрозольное введение сульфамонометоксина в дозе 75 мг/кг, левамизола 150 мг и тиамин бромида 10 мг создают терапевтическую концентрацию 2,84±0,63 мг% сульфаниламида в крови через 3 часа, максимальная концентрация - 3,71±1,59 мг% обнаруживается через 9 часов. Комплексное применение данных препаратов стимулируют гемопоэз и способствуют улучшению белковосинтезирующей функции печени. Левамизол может вызывать ряд побочных реакций. De Сгее J. делит их на 3 категории: желудочно-кишечные расстройства (наступают в 90% случаев), возбуждение ЦНС, гриппоподобные явления; аллергические кожные высыпания; агранулоцитоз (у 3% больных) как результат появления антилейкоцитарных антител. Прием левамизола сопровождается потерей аппетита, рвотой, поносом, головной болью, слабостью, сыпью, появлением афт в полости рта. Часто применение левамизола вызывает гранулоцитопению, агранулоцитоз, анемию иммунологической природы. Левамизол может вызывать острый агранулоцитоз и геморрагическую токсикодермию. При длительном (6-18 месяцев с перерывами) лечении левамизолом больных ревматоидным артритом наблюдаются токсикодермия, аллергический васкулит, гранулоцитопения, язвенный стоматит, тошнота, рвота, кожный зуд, язвы прямой кишки (Машковский М.Д., 1993; Фарбер H.A., 1980). 58 Таким образом, экспериментальные исследования и клинические наблюдения свидетельствуют о том, что эффект левамизола опосредован генетическими факторами, факторами среды, степенью иммунизации и зависит от индивидуальной к нему чувствительности, а также от его дозы и времени введения. Практическое использование иммуностимулирующих свойств левамизола в ветеринарии частыми побочными реакциями, которые ставят под сомнение возможность широкого использования препарата. Проблема снижения токсичности левамизола при сохранении его антгельминтных и иммуностимулирующих свойств представляет большой интерес для практической ветеринарии. Приведенные в обзоре литературы данные убедительно свидетельствуют о необходимости поиска новых средств, одновременно стимулирующих и обменные и иммунные процессы у животных, о перспективности применения уникальных свойств ЯК для потенцирования разнообразных биологических эффектов иммуномодуляторов, что и определило направление диссертационного исследования. 59 2 СОБСТВЕННЫЕ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1 Материалы и методы исследований Работа выполнена на кафедре ВСЭ и биотехнологии ФГБОУ ВПО «Курская ГСХА» и в лаборатории ветеринарной медицины ФГБНУ «Курский НИИ АПП», в период с 2004 по 2014 год. Экспериментальные исследования проведены на базе учхоза ФГБОУ ВПО КГСХА «Знаменское», СХПК «Амосовский» Медвенского района, ОАО «Курск Иволга». При выполнении диссертационной работы использовали эпизоотологический, клинический, бактериологический, биохимический, гематологический и иммунологический методы исследований. При проведении эпизоотологического анализа использованы статистические материалы районных управлений ветеринарии, данные результатов вирусологических и бактериологических исследований ОБУ Курская ОВЛ. Доклинические исследования проводили в соответствии с методическими указаниями, изложенными в Руководстве по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (2005) на белых мышах, крысах и собаках. При проведении клинических испытаний объектами исследований служили 450 коров, 545 телят, 78 поросят, 18 собак. Производственные испытания проведены в течение 2005-2008 г.г. в 201 хозяйстве 28 районов Курской области. Обработке иммунометаболическими составами с профилактической и лечебной целью было подвергнуто более 60000 стельных коров, 52265 новорожденных телят, в т.ч. 21150 с диарейным синдромом, 3473 с респираторными заболеваниями. В проведении широкомасштабных производственных испытаний принимали участие специалисты Управления ветеринарии Курской области и ветеринарные врачи хозяйств. 60 Определение клинического статуса подопытных животных, гематологические исследования и бактериологические исследования проводили по общепринятым методикам. Бактерицидная активность сыворотки крови устанавливалась по методике Смирновой О.В. и Кузьминой (Т.А. 1966). Фагоцитарную активность нейтрофилов определяли по методу Гостева В.С. (Плященко С.И., Сидоров В.Т., 1979). Количество Т- и В- лимфоцитов определяли по методике Коромыслова Г.Ф., Солодовникова В.Л. (1982). Уровень иммуноглобулинов классов G и M определяли методом прямой радиальной иммунодиффузии по методике Manchini (1965). В проведении исследований по определению иммунного статуса принимали участие сотрудники ОБУ Курская ОВЛ. Для биохимических исследований использовался анализатор Humalyzer Junior и реактивы фирмы Human (Германия). Вся работа проводилась электронными дозаторами с переменным объемом Biochit, фирмы Finbio, Финляндия. Сущность метода заключается в образовании окрашенного комплекса, оптическая плотность которого пропорциональна концентрации определяемого вещества. Отдельные биохимические исследования проводились совместно с врачом ветеринарной клиники «Центр» (г. Москва) Стребковой В.Н.. Для изучения состояния системы ПОЛ – АОЗ определяли содержание диеновых конъюгатов, малонового диальдегида, уровни каталазной активности и глутатионпероксидазы (Бузлама В.С. с соавт., 1997). Результаты экспериментальных исследований подвергались статистической обработке с использованием программы Microsoft Excel 2007. 61 Теоретическое обоснование применения янтарной кислоты для потенцирования биологической активности иммуномодуляторов ЯК с АСД -2Ф ЯК с АСД- 2Ф и формалином ЯК с солями ЯК с АСД -2Ф и микроэлементами ЯК с солями нуклеиновых кислот нуклеиновых кислот и микроэлементами ЯК с левамизолом Доклинические испытания на лабораторных животных Клинические испытания на продуктивных животных Оценка влияния на метаболический статус Оценка влияния на иммунный статус Оценка влияния на систему ПОЛ-АОЗ Эффективность при нарушении обмена веществ Эффективность при инфекционных заболеваниях Производственные испытания Рис.1 - Общая схема исследований 62 3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 3.1 Теоретическое и экспериментальное обоснование применения янтарной кислоты для потенцирования биологической активности иммуномодуляторов В данном разделе приведены основные положения концепции по одновременной стимуляции обменных и иммунных процессов в организме животных, путем сочетанного применения метаболика-янтарной кислоты и иммуномодуляторов. В последние годы в РФ нарушения обмена веществ и иммунодефициты животных приобрели глобальный характер. Установлена прямая связь между уровнем обмена веществ и неспецифической резистентностью организма коров и внутриутробным развитием плода, состоянием здоровья и инфекционной заболеваемостью молодняка. На этом фоне применение специфических и антибактериальных средств не дает нужного эффекта, а зачастую приводит к отрицательному результату. В попытке разрешить данную проблему широко практикуется применение разного рода стимулирующих препаратов, прежде всего иммуномодуляторов. В ветеринарной медицине иммуномодуляторы используются с целью коррекции нарушений антиинфекционных механизмов и повышения эффективности антибактериальной терапии, усиления специфической иммунотерапии и иммунопрофилактики. Однако, применение иммуномодуляторов, на фоне нарушения обмена веществ, зачастую не имеет положительного результата, а нередко приводит к обратному эффекту. В этой связи все актуальнее становится вопрос о одновременной коррекции метаболических и иммунных процессов, т.е. средств иммунометаболической направленности. В настоящее время это направление получило активное развитие в медицине. Использование янтарной кислоты в качестве метаболика позволило качественно улучшить десятки хорошо известных, жизненно необходимых для людей препаратов. В ветеринарии это направление исследований фактически не реализовано. Именно это обстоятельство нами было принято 63 во внимание при обозначении авторского научного направления и тех подходов, которые мы раскрыли в своем диссертационном исследовании. 3.1.1 Обоснование состава и способ получения иммунометаболической композиции на основе янтарной кислоты и антисептика-стимулятора Дорогова второй фракции Обозначенная концепция одновременной стимуляции обменных и иммунных процессов была положена в основу нового в ветеринарной медицине научного направления, касающегося разработки методологии получения средств иммунометаболической направленности. В обзоре литературы приведены данные, свидетельствующие об уникальной биологической активности ЯК. Для расширения спектра биологического воздействия ЯК необходимо подобрать сочетание лекарственных средств, оказывающих влияние на различные звенья метаболизма, нормализующих иммунный и антиоксидантный статус животных. На первых этапах поисковых исследований наше внимание привлек хорошо известный в ветеринарии тканевый иммунотропный препарат антисептик - стимулятор Дорогова второй фракции (АСД-2Ф). В обзоре литературы мы коснулись биологических свойств и клинических эффектов препарата АСД-2Ф. В данном разделе мы посчитали целесообразным отразить биохимическую характеристику препарата АСД-2Ф, а так же наши соображения, которые были положены в основу научно-экспериментальных опытов и исследований. АСД-2Ф является водной фракцией конденсата продуктов термического разложения мясокостной муки. Он представляет собой прозрачную летучую жидкость от желтого до темно-красного цвета с резким специфическим запахом, плотностью до 1,135 г/см, имеет щелочную реакцию (рН=9,5) и хорошо растворим в воде. 64 С химической точки зрения препарат представляет сложную смесь неорганических азотистых веществ в виде солей аммония и органических веществ, среди которых были идентифицированы первичные и вторичные амины, карбоновые кислоты жирного ряда, их амиды и аммонийные соли, холиновые эфиры карбоновых кислот (Абрамов В.Е. с соавт., 2005). Все вещества, входящие в состав АСД имеют выраженную биологическую активность. Так, например, ацетат метиламина ускоряет синтез биологических аминов (холина, серотонина, гистамина, адреналина и т.д.) Метилмеркаптан - донор в образовании тиолового кофактора глутатиона - принимает участие в синтезе аминокислот, метионина, холина, креатинина и, будучи радиозащитным агентом, блокирует аутоокисление SH-групп в белках. Уксусная кислота – активный компонент коэнзима А, необходимого для синтеза дикарбоновых, трикарбоновых и жирных кислот, кетоновых тел, стеринов, убихинона, ацетилхолина. Метилмочевина обеспечивает синтез производных жирных кислот, участвующих в обменных процессах. Циклопентан - промежуточный продукт в синтезе пуриновых и пиримидиновых оснований. Декан – важный элемент в создании эфиров, спиртов, кетонов, в процессах окисления-восстановления, в синтезе витаминов, жирных кислот, липидов, каратиноидов. Диметилпиррол входит в состав гемоглобина крови. Кроме того, в АСД присутствуют жирные кислоты, в том числе и незаменимые ненасыщенные – линолевая и линоленовая. Богатый многокомпонентный состав природных низкомолекулярных соединений в АСД-2Ф обеспечивает широкий спектр воздействия препарата на все звенья защиты живого организма. Препарат относится к умеренно опасным веществам (3 класс опасности по ГОСТ 12.1.007-76). В рекомендуемых дозах не оказывает резорбтивно-токсического и сенсибилизирующего действия. Таким образом, вышеперечисленные уникальные свойства ЯК и АСД -2Ф и определи наш выбор их сочетанного использования в виде лекарственной композиции для инъекций. Следует отметить, что АСД-2Ф, ввиду чрезвычайно высокой щелочной реакции может применяться только в низких концентрациях внутрь или наружно. 65 Однако, даже в низких концентрациях, таких как 2-3 %, растворы АСД -2Ф имеют рН >12. Именно это обстоятельство является важным препятствием для инъекционного применения АСД -2Ф. Тем не менее, из данных литературы известно о применении относительно высоких концентраций АСД -2Ф (от 4 до 20%) для внутривенного введения (К.И. Шакалов, 1961). По нашему мнению нейтрализация щелочной среды АСД- 2Ф ЯК позволит получить конечный продукт, обладающий целым рядом качественно новых иммунометаболических свойств. ЯК потенцирует фармакологические эффекты многих активных субстанций, входящих в состав АСД- 2Ф, что приводит к усилению эффективности действия комплексного состава, существенно превышающей активность отдельных компонентов. В свете вышеизложенного, вполне оправданным является применение ЯК для потенцирования уникальной биологической активности АСД-2Ф и применения для коррекции патофизиологических состояний, профилактики и лечения инфекционных заболеваний животных. Начальным этапом научно-экспериментальных поисковых исследований по разработке иммунометаболического состава явилось определение оптимального соотношения компонентов, обеспечивающего снижение высокой щелочной среды АСД-2Ф и обеспечивающего возможность парентерального применения. Окончательный вариант испытуемой комбинации получил рабочее название «Янтарный биостимулятор». Компонентный состав представлен в таблице 1. Способ получения иммунометаболической композиции основан на исключительно простой и доступной технологии, предполагающей смешивание исходных компонентов, расфасовку и автоклавирование при 1,2 атм. в течение 30 минут. Стерилизация автоклавированием не изменяет физико-химических свойств состава. Концентрация водородных ионов в пределах 6,8 – 7,0, что делает возможным его парантеральное применение. 66 Таблица 1- Состав иммунометаболической композиции Название вещества Нормативные документы Количество Янтарная кислота ГОСТ 6341-75 10 г АСД 2-Ф ТУ 9336-003-54935098-02 40 мл Новокаин ТУ 64-3-167-84 2,5 г Вода для инъекций ФС 42-2620-97 до 1 л Следующим этапом явилась разработка методов контроля качества полученной композиции и подлинности входящих в ее состав компонентов. Для определения внешнего вида, цвета флаконы с препаратом тщательно встряхивали и просматривали в проходящем свете. Комплекс ЯК с АСД - 2Ф должен представлять собой жидкость с зеленовато-коричневым оттенком. В процессе хранения возможно образование осадка, при встряхивании полностью растворимого. Концентрацию водородных ионов определяли в соответствии с инструкцией, прилагаемой к рН – метру. Препарат отвечает требованиям стандартности при рН от 6,8 до 7,1. Определение подлинности новокаина проводилось в соответствии с ТУ 9323-042-00482909-01. Для определения новокаина к 2 см3 композиции прибавляли 3 капли 10% раствора соляной кислоты, 3 капли 0,1 М раствора натрия азотистокислого и взбалтывали. Полученный раствор прибавляли к 3 см3 щелочного раствора 2-нафтола: появлялось вишнево- красное окрашивание, что свидетельствовало о подлинности новокаина. Для определения массовой доли новокаина к 25 см3 композиции прибавляли 10 см3 разведенной соляной кислоты, дистиллированной воды до общего объема 80 см3 , 1 г бромида калия и при постоянном помешивании титровали 0,05 М раствором нитрита натрия. Титрование вели при температуре 20º С. В качестве индикатора добавляли две капли 0,5% раствора нейтрального красного в начале или в конце титрования, 4 капли раствора тропеолина ОО и 2 капли раствора метиленового синего. Титрование вели до перехода окраски от малиновой до синей 67 (нейтральный красный) или от красно-фиолетовой до голубой (смесь тропеолина ОО с метиленовым синим). Содержание новокаина (Х) в 1 см3 композиции, в г рассчитывают по формуле: Х=(0,01364 ×V) / n, де Х – массовая доля новокаина в препарате, г 0,01364 – количество новокаина в г, соответствующее 1 см3 точно 0,05 н раствора натрия нитрита; V – объем точно 0,05 н раствора натрия нитрита, израсходованного на титрование, в см3; n – объем взятого препарата, см3. Содержание новокаина в 1мл композиции, включающей 1% ЯК, и 4% АСД 2-Ф должно быть от 0,00240 до 0,00260 г. Определение подлинности АСД-2Ф проводили разными методами. 1 способ. Определение подлинности АСД- 2Ф в реакции с треххлористым железом. К 10 см3 испытуемого состава прибавляли 5 капель 5 % раствора железа треххлористого, при этом должен выпадать осадок красно-бурого цвета. 2 способ. Определение подлинности АСД -2Ф методом тонкослойной хроматографии в насыщенной хроматографической камере на пластинках Сорбфил УФ-254 (Т.И. Кугелева, 2011). В качестве подвижной фазы применяли следующие смеси: 1. н-бутанол - пиридин - уксусная кислота - вода в соотношении 13:2:0,6:3,0; 2. уксусная кислота — вода в соотношении 1:2; 3. хлороформ- спирт - уксусная кислота в соотношении 20:10:3. В качестве индикатора использовали раствор нингидрина. Образцы испытуемой композиции разводили дистиллированной водой в соотношении 1:5. На линию старта пластинки Сорбфил УФ-254 на расстоянии 2 см от нижнего края пластинки микрошприцем наносили 5 мкл раствора испытуемого образца полосой 0,5 см. Высушенную на воздухе пластинку помещали в хроматографическую камеру (насыщенную) с подвижной фазой. Хроматографировали восходящим методом. Когда фронт смесей растворителей доходил до края пластинки, пластинку извлекали из камеры, высушивали теплым воздухом, опрыскивают раствором нингидрина и сушили при температуре 100-110°С. Хромато- граммы оценивали на предмет соответствия пятен, полученных при хроматогра- 68 фировании образца препарата и раствора эталонного образца субстанции АСД2Ф. 3 способ. Определение подлинности ЯК методом плазменно-десорбционной масс-спектрометрии на масс-спектрометре «МСБХ», ОАО SELMI. В этом исследовании большую практическую помощь нам оказал д.с./х.н. В.Д. Чиванов, за что мы выражаем искреннюю признательность. Атомная масса ЯК 118,07 а.е.м., при проведении масс-спектрометрии регистрируется квазимолекулярный ион со значением молекулярной массы, выражаемой в атомных единицах массы (а.е.м.) 117,06. Наличие в масс спектре пика со значением а.е.м. 117,06, подтверждает подлинность ЯК. Рис. 2 – Результаты масс - спектрометрии испытуемой композиции Определение сухого остатка проводили методом выпаривания. Остаток после выпаривания должен быть не менее 15,60 мг/см3 и не более 15,70 мг/см3. Плотность испытуемой композиции должна быть в пределах 1,005-1,010 г/ см3. Все показатели качества метаболической композиции остаются практически без изменений в течение 24 месяцев хранения при температуре 24±2°С. 69 3.1.2 Доклинические испытания иммунометаболической композиции на основе янтарной кислоты и антисептика-стимулятора Дорогова второй фракции на лабораторных животных Определение стерильности. При исследовании выборочных образцов методом прямого посева на стандартные питательные среды: жидкая тиогликолевая среда, рН 7,2 (для аэробных и анаэробных бактерий) и жидкая среда Сабуро, рН 5,6 (для грибов), в течение 14 дней рост микроорганизмов отсутствовал Изучение острой токсичности иммунометаболической композиции проводили на 30-ти нелинейных белых мышах, массой 21-22 г и 20 нелинейных белых крысах, массой 180-200 г. Для изучения острой токсичности состава мыши были разделены на пять опытных и одну контрольную группу по 5 животных в каждой. Мышам опытных групп испытуемую композицию вводили внутрибрюшинно, однократно, в дозах 0,1; 0,2; 0,3; 0,5 и 1мл. Мышам контрольной группы вводили внутрибрюшинно физиологический раствор в дозе 0,5 мл. Таблица 2 - Токсичность композиции ЯК с АСД-2Ф при внутрибрюшинном введении белым мышам Доза Эффект Пало/выжило 0,1 мл 0,2 мл 0,3 мл 0,5 мл 1 мл контроль норма норма норма норма норма норма 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 Крысы были разделены на 3 опытные и 1 контрольную группу, по 5 животных в каждой. Ведение препарата проводили внутривенно ( в подхвостовую вену), медленно, в дозах 0,5; 1 и 5мл. Крысам контрольной группы вводили внутривенно стерильный физиологический раствор в дозе 5 мл. 70 Таблица 3 – Токсичность композиции ЯК с АСД-2Ф при внутривенном введении белым крысам Доза 0,5 мл 1 мл 5 мл контроль Эффект норма норма норма норма 0/5 0/5 0/5 0/5 Пало/выжило Наблюдение за животными проводили ежедневно в течение 14 дней. Оценивали общее клиническое состояние, особенности поведения, интенсивность и характер двигательной активности, наличие признаков интоксикации, возможную смертность. Установлено, что иммунометаболическая композиция во всех испытанных дозах не вызывала гибели мышей и крыс и не оказывала выраженного токсического действия на организм. Изучение хронической токсичности проводили на 30 самцах нелинейных белых крыс и на 12 беспородных собаках. Опыт 1. Было сформировано три группы крыс, две опытные и контрольная, по 10 животных в каждой, массой 180-200 г. Длительность эксперимента – 30 суток. Крысам первой опытной группы ежедневно, внутримышечно, вводили испытуемую композицию в дозе 0,5 мл, крысам второй опытной группы - в дозе 1 мл. Крысам контрольной группы вводили физиологический раствор. Наблюдение за крысами вели в течение 3 месяцев. Установлено, что изучаемая иммунометаболическая композиция ни в одной из используемых доз, не вызвала изменений клинического состояния, внешнего вида, поведения, аппетита животных. Ни в одной из опытных групп не отмечено гибели животных. Трижды - до начала эксперимента, на 15 и 30 сутки проводили гематологические и биохимические исследования сыворотки крови. Результаты гематологического исследования представлены в таблице 4. 71 Таблица 4 – Гематологические показатели крыс Показатели Лейкоциты, (х 109/л) Эритроциты, (х 1012/л) Гемоглобин, г/л Группы Сроки исследований 1 сутки 15 сутки 30 сутки 1 опытная 12,3±0,3 12,2±0,2 12,2±0,1 2 опытная 11,9±0,1 11,7±0,3 12,1±0,2 3 контрольная 12,1±0,2 12,3±0,2 12,0±0,2 1 опытная 7,6±0,3 8,7±0,3* 8,5±0,3* 2 опытная 7,5±0,3 8,6±0,3* 8,7±0,3* 3 контрольная 7,4±0,2 7,4±0,4 7,4±0,2 1 опытная 112,4±5,3 123,4±5,6 127,4±6,3 2 опытная 114,4±6,7 124,4±5,7* 125,4±6,7* 114,8±7,5 112,9±7,7 3 контрольная 112,8±7,3 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы В опытных группах у животных на 15 и 30 сутки отмечено повышение содержания эритроцитов и гемоглобина (Р < 0,05 ). У крыс контрольной группы на протяжении всего опыта гематологические показатели существенно не изменились. В таблице 5 приведены результаты биохимического исследования сыворотки крови подопытных крыс. Таблица 5- Биохимические показатели сыворотки крови крыс Показатели Общий белок, г/л Глюкоза, ммоль/л Холестерин, ммоль/л Группы 1 опытная 2 опытная 3 контрольная 1 опытная 2 опытная 3 контрольная 1 опытная 2 опытная 3 контрольная 1 сутки 55,4±2,6 56,2±2,8 55,7±3,4 5,4±0,6 5,3±0,4 5,3±0,6 1,1±0,01 1,1±0,02 1,2±0,01 Сроки исследований 15 сутки 56,4±2,6* 57,2±2,8* 54,6±3,2 5,5±0,7 5,7±0,6 5,6±0,6 1,2±0,01 1,1±0,02 1,2±0,01 30 сутки 58,4±2,8* 59,2±2,9* 55,7±4,2 5,5±0,6 5,3±0,4 5,3±0,6 1,1±0,01 1,1±0,02 1,2±0,01 72 Продолжение таблицы 5 Мочевина, ммоль/л 1 опытная 2 опытная 3 контрольная 7,2±1,1 7,2±1,8 7,2±1,1 7,1±1,2 7,4±1,5 7,1±1,4 7,3±1,6 7,3±1,6 7,2±1,8 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы Фоновые биохимические показатели у подопытных и контрольных животных находились в пределах нормы. На 30 сутки отмечалось увеличение содержания общего белка, не выходящее за пределы физиологической нормы, в первой опытной группе на 7,2% и во второй опытной группе на 5,3% . По остальным показателям существенных изменений не отмечено. Опыт 2. Было сформировано 3 опытные группы собак, по 4 особи в каждой. Собаки беспородные, массой 20±3,2 кг. Собакам первой опытной группы метаболический состав вводили внутримышечно, в дозе 5 мл, собакам второй группы – внутривенно, в дозе 50 мл, ежедневно, в течение 10 дней. Собакам контрольной группы вводился физиологический раствор, внутривенно, в дозе 10 мл. Наблюдение за животными вели на протяжении 3 месяцев, за весь период наблюдений признаков токсикоза выявлено не было. Таким образом, длительное применение испытуемой композиции не оказывает отрицательного влияния на организм, т.к. не вызывает изменений общего клинического состояния животных, отклонений поведения, аппетита и др. параметров, не сопровождается летальностью даже при превышении средней терапевтической дозы в 10 раз. Изучение раздражающего действия композиции ЯК с АСД-2Ф проводили на 6 кроликах с массой тела 2,2-2,4 кг путем аппликации на кожные покровы. Было сформировано две группы животных, опытная и контрольная, по три животных в каждой. Предварительно, за два дня до эксперимента животным выстригали шерсть на спине, избегая механических повреждений кожных покровов. Испытуемую композицию наносили в чистом виде. Площадь нанесения составляла 10 см2. Состав равномерно распределяли по поверхности участка кожи в дозах 73 от 0, 1 до 1,0 мл на см2. Экспозиция составляла 4 часа, после чего кожу аккуратно протирали ватным тампоном, смоченным дистиллированной водой. Реакцию кожи на воздействие препарата оценили через 1 и 24 часа после однократного нанесения. Согласно полученным данным, однократная аппликация на кожные покровы кроликам при плотности нанесения от 0,1 до 1,0 мл/ см2 испытуемая композиция не вызывает видимого раздражения кожи. В следующем эксперименте провели оценку влияния композиции на слизистые оболочки. Для этого инстиллировали 2-3 капли на конъюнктиву глаз двух кроликов. Оценку раздражающего действия провели визуально, оценивая выраженность гиперемии, слезотечения, отека век. При визуальной оценке состояния конъюнктивы, роговицы и век глаз кроликов установлено, что испытуемая композиция не оказывает раздражающего действия на конъюнктиву глаз. Таким образом, на основании проведенных исследований установлено, что композиция ЯК с АСД-2Ф не обладает выраженным раздражающим действием при наружном применении. Оценка протективной активности иммунометаболической композиции 1 опыт. Моделирование генерализованной формы сальмонеллезной инфекции. Опыты были проведены на 40 белых мышах, весом 18-20 г. Было сформировано три опытные и одна контрольная группа животных, по 10 особей в каждой. Мышам первой опытной группы внутрибрюшинно, в дозе 0,2 мл, ввели испытуемую композицию. Животным второй и третьей опытных групп, внутрибрюшинно, в той же дозе, ввели 1 % р-р сукцината натрия и 4% р-р АСД-2Ф , соответственно. Мышам контрольной группы вводился физиологический раствор, в том же объеме. Спустя сутки провели заражение мышей смывом суточной культуры Salmonella spp. в смеси с голодным агаром в соотношении 1:4, в дозе 0,5 мл при концентрации 100000 тыс. микробных тел в 1 мл (по стандарту мутности). Результаты изучения защитного действия препаратов представлены в таблице 6. 74 Таблица 6 - Уровень защиты белых мышей при заражении культурой Salmonella spp. Число погибших мышей / % Группы 2 день 3 день 4 день 5 день 6 день 1 опытная 2 опытная 3 опытная 4 контрольная 2/20 4/40 6/60 2/20 2/20 2/20 4/40 1/10 1/10 - - Осталось живых на 10 день 7/70 % 6/60% 3/30% - У зараженных мышей контрольной группы отмечалось быстрое развитие септической формы болезни: повышение температуры тела, вздутие живота, жидкий стул. Гибель животных наступила на 2 -3- сутки после заражения. У животных первой опытной группы симптомы инфекционного процесса были менее выражены, семь особей выжили, одна мышь пала. У павшей мыши этой группы отмечалось незначительное увеличение продолжительности жизни по сравнению с контролем, гибель наступила на 5 сутки. Показатель выживаемости мышей второй опытной группы составил 60 %. Инфекционный процесс у них протекало намного легче, чем у животных контрольной группы. В третьей опытной группе отмечалось быстрое развитие клинических признаков, и гибель семи животных на 2-4 день. Данные вскрытия и макроскопического исследования внутренних органов павших мышей характерны для сальмонеллеза: шерсть тусклая, взъерошенная. Видимые слизистые оболочки блестящие, гладкие, бледного цвета. В грудной и брюшной полостях содержится красноватая жидкость, с примесью фибрина. В перикарде - серозный или серозно-фибринозный экссудат. Сердечная мышца дряблая и тусклая на разрезе. В легких воспалительные очаги. Мезентериальные лимфоузлы набухшие, сочные и гиперемированые. В кишечнике отмечается катаральное воспаление. Тонкий отдел кишечника вздут газами, в нём содержится мутная густая слизь. Слизистая оболочка кишечника отёчная, местами гиперемирована, резче на складках, иногда с точечными кровоизлияниями. Слизистая оболочка толстых кишок разрыхлена. Печень увеличена, ломкая и имеет тёмно - 75 оранжевый цвет. Поверхность печени окрашена неравномерно. Селезёнка увеличена, пульпа малиново-красного цвета. У выживших мышей, подвергнутых эвтаназии на 14 день эксперимента патологоанатомических изменений, характерных для сальмонеллеза не установлено. Испытуемая композиция обладает выраженным противоинфекционным действием, предохраняя от гибели 70 % мышей, при заражении их смертельной дозой Salmonella spp. Введение 4% АСД-2Ф обеспечило протективную защиту на уровне 60 %. Раствор 1% сукцината натрия предотвратил гибель лишь 30% мышей. Таким образом, противоинфекционная активность испытуемой композиции выше, чем у входящих в ее состав компонентов. 2 опыт. Моделирование острого токсикоза токсином E.coli Опыты были проведены на 40 белых мышах. Было сформировано три опытные и одна контрольная группа животных, по 10 особей в каждой. Мышам первой опытной группы внутрибрюшинно, в дозе 0,2 мл, ввели испытуемую композицию. Животным второй и третьей опытных групп внутрибрюшинно, в той же дозе, ввели 1 % р-р сукцината натрия и 4% р-р АСД Ф -2, соответственно. Мышам контрольной группы вводился физиологический раствор. Спустя сутки всем мышам был введен прогретый фильтрат суточной культуры токсигенной E.coli внутримышечно, в объеме 0,2мл. Результаты опыта представлены в таблице 7. Таблица 7 -Уровень защиты белых мышей при моделировании острого токсикоза токсином E.coli Группы 1 опытная 2 опытная 3 опытная 4 контрольная Число погибших мышей / %, 2 день 3 день 4день 5 день 6 день 2/20 1/10 4/40 1/10 2/20 1/10 1/10 7/70 3/30 - Осталось живых на 10 день 7/70% 5/50% 6/60% - При анализе полученных результатов видно, что испытуемая композиция обеспечила сохранность 70 % мышей, подвергшихся острому токсикозу. 4% раствор 76 АСД-2Ф обладает слабым антитоксическим действием, обеспечивая выживание лишь 50 % мышей, 1% р-р сукцината натрия предохраняет от гибели при моделировании острого токсикоза 60 % мышей. Проанализировав результаты проведенных экспериментальных опытов, можно с большой долей уверенности утверждать, что АСД-2Ф проявляет высокую антиинфекционную активность, а сукцинат натрия обладает выраженными антитоксическими свойствами. В свою очередь, испытуемая композиция сохраняет и усиливает полезные свойства входящих в ее состав компонентов, превосходя их по противоинфекционному и антитоксическому действию. Определение иммунотропных свойств иммунометаболической композиции При определении иммунотропных свойств испытуемой композиции пользовались Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ (2000). Иммунотропные свойства изучали в трех опытах на белых мышах линии CBA, массой 18 – 20 г. Оценку влияния предлагаемой композиции на гуморальный иммунитет проводили путем определения числа анителообразующих клеток (АОК) и титров агглютинирующих антител после иммунизации мышей эритроцитами барана (ЭБ). Опыт 1. Исследования были проведены на 40 белых мышах. Было сформировано три опытные и одна контрольная группа животных, по 10 особей в каждой. Мышам первой опытной группы, внутримышечно, в дозе 0,1 мл ввели испытуемую композицию. Животным второй и третьей опытных групп, в той же дозе, ввели 1 % р-р сукцината натрия и 4% р-р АСД-2Ф, соответственно. Мышам контрольной группы внутримышечно, в той же дозе, вводился физиологический раствор. Всех мышей иммунизировали ЭБ, внутрибрюшинно, в дозе 0,5 мл 2% рра. 77 Для содержания определения АОК мышей подвергли эвтаназии на 4 сутки. Число АОК определяли методом локального гемолиза, на 106 клеток селезенки. Индекс стимуляции (ИС) определяли как отношение числа АОК в опыте к числу АОК контроле (введение только ЭБ). Результаты исследований приведены в таблице 8. Таблица 8 - Количество антителопродуцентов в селезенке мышей Группы 1 опытная 2 опытная 3 опытная 4 контрольная Содержание АОК 1,38±0,02* 1,29±0,02* 0,95±0,01 0,86±0,01 ИС 1,6 1,5 1,1 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы Судя по полученным данным, введение испытуемой смеси и ее отдельных компонентов приводит к активизации трансформации В-лимфоцитов в АОК. ИС для испытуемой композиции оказался наиболее высоким и составил 1,6, для АСД -2Ф этот показатель составил 1,5 и для сукцината натрия - 1,1. Опыт 2. В задачу данного опыта входило изучение влияния испытуемой композиции на изменение титров агглютинирующих антител в сыворотке крови мышей. Исследования были проведены на 40 белых мышах. Было сформировано три опытные и одна контрольная группа животных, по 10 особей в каждой. Мышам первой опытной группы, внутримышечно, в дозе 0,1 мл ввели испытуемую композицию. Животным второй и третьей опытных групп, в той же дозе, ввели 1 % р-р сукцината натрия и 4% р-р АСД-2Ф, соответственно. Мышам контрольной группы внутримышечно, в той же дозе, вводился физиологический раствор. Одновременно проводили внутрибрюшинную иммунизацию мышей всех групп 2 % взвесью ЭБ. Результаты представлены в таблице 9. На 7-й день после введения испытуемой композиции самые высокие титры агглютининов в сыворотке крови в первой опытной группе мышей составили 3,78±0,02 Lg2, во второй и третьей опытных группах этот показатель был соответственно - 3,18±0,04 Lg2 и 3,24±0,02 Lg2 , против 3,01±0,03 Lg2 в контроле. 78 Таблица 9- Содержание агглютинирующих антител в сыворотке крови мышей Группы Агглютинины Lg2 ИС 1 опытная 3,78±0,02* 1,26 2 опытная 3,18±0,04* 1,06 3 опытная 3,24±0,02* 1,08 4 контрольная 3,01±0,03 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы Индекс стимуляции в 1-ой опытной группе составил 1,26, во второй - 1,06 и в третьей -1, 08. Опыт 3. Влияние ЯК в сочетании с АСД-2Ф на клеточный иммунитет оценивали в опыте по определению индукции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ). Исследования были проведены на 40 белых мышах. Было сформировано три опытные и одна контрольная группа животных, по 10 особей в каждой. Мышам первой опытной группы, внутримышечно, в дозе 0,1 мл ввели испытуемую композицию. Животным второй и третьей опытных групп, в той же дозе, ввели 1 % р-р сукцината натрия и 4% р-р АСД -2Ф, соответственно. Мышам контрольной группы внутримышечно, в той же дозе, вводился физиологический раствор. Одновременно всех мышей внутрибрюшинно иммунизировали 2% взвесью ЭБ, на 5-е сутки вводили разрешающую дозу ЭБ – 10% взвесь в объеме 0,02 мл в подушечки правых (опытных) лап, в контралатеральные (контрольные) лапы вводили 0,9% раствор натрия хлорида. Через 24 ч мышей подвергали эвтаназии, результат реакции регистрировали путем определения массы «опытных» и «контрольных» лап. Процент прироста массы лапки (X), характеризующий интенсивность реакции ГЗТ, ее снижение или усиление, определяли по формуле: X = (масса опытной лапки - масса контрольной лапки)x100. Результаты экспериментального опыта представлены в таблице 10. 79 Таблица 10- Результаты учета реакции гиперчувствительности замедленного типа Группа Доза препарата ИВ(%) 1 опытная 0,1 мл 14,1±0,3* 2 опытная 0,1 мл 12,5±0,2* 3 опытная 0,1 мл 11,1±0,2* 4 контрольная разрешающая доза ЭБ 10,2±0,1 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы В результате исследований установлено, что испытуемая композиция и ее составные компоненты, в дозе 0,1 мл вызывают индукцию у мышей ГЗТ, т.е. местную воспалительную реакцию, которая обусловлена инфильтрацией клетками воспалительного очага. Введение испытуемой композиции вызывало сдвиг ИВ на 14,1±0,3 % , введение 1 % р-р сукцината натрия и 4% р-р АСД Ф -2 на 12,5±0,2 и 11,1±0,2 % соответственно, что достоверно отличалось от показателя контрольных животных – 10,2±0,1 %. На основании результатов проведенных исследований установлено, что однократное введение испытуемой композиции сопровождается стимуляцией гуморального иммунного ответа на тимусзависимый антиген (ЭБ). Индексы стимуляции образования антителобразующих клеток и агглютинирующих антител составили 1,6 и 1,26, что свидетельствует о наличии иммуностимулирующей активности. Реакция на однократное введение испытуемой композиции проявляется увеличением степени выраженности воспалительной реакции в месте введения разрешающей дозы антигена (ЭБ), что характеризует активность популяции хелперных клеток, ответственных за проявление реакции ГЗТ. Индекс воспаления для испытуемой композиции составляет 14,1±0,3 %, что достоверно выше, чем для 1 % р-р сукцината натрия и 4 % р-р АСД -2Ф.. 80 Таким образом, предлагаемая композиция выражено стимулирует гумо- ральные и клеточные звенья иммунитета, превосходя по иммунотропной активности входящие в ее состав компоненты. Полученные результаты позволии нам перейти к клиническим испытаниям иммунометаболической композиции на продуктивных животных. 3.1.3 Клинические испытания иммунометаболической композиции на основе янтарной кислоты и антисептика-стимулятора Дорогова второй фракции на продуктивных животных 3.1.3.1 Оценка влияния иммунометаболической композиции на метаболический статус глубокостельных коров и полученных от них телят Первый научно-производственный опыт по оценке влияния испытуемой композиции на обменные процессы и систему иммунитета был проведен на глубокостельных коровах учхоза Курской ГСХА «Знаменское». Молочная продуктивность коров в пределах 5300 - 5500 кг молока. При клиническом осмотре коров у большинства из них отмечены следующие характерные признаки: волосяной покров тусклый, в области шеи алопеции, слизистые оболочки бледные, жвачка редкая, у многих отсутствует, у большинства животных копыта деформированы. У многих коров регистрируется нарушение воспроизводительной функции. На основании клинического осмотра животных есть все основания предполагать, что у животных молочного стада имеют место достаточно выраженные нарушения обменных процессов. Для подтверждения этого предположения нами была предложена следующая схема научно-производственного опыта: в хозяйстве было отобрано 20 коров на последнем месяце стельности, из которых по принципу аналогов были сформированы опытная ( n=10) и контрольная ( n=10), группы. 81 Дозы и кратность применения имунометаболического состава нами были отработаны в ходе предварительных опытов. Коровам опытной группы вводили испытуемую композицию внутримышечно, в дозе 10 мл, четыре раза, за 30, 20 и 10 дней до предполагаемых родов и сразу после отела. Контрольным животным внутримышечно, в дозе 10 мл, в те же сроки вводили физиологический раствор Кровь для исследования отбиралась за месяц до отела и на 3-5 день после отела. Телятам, полученных от коров опытной группы на 2-3 день после рождения испытуемая композиция вводилась внутримышечно, в дозе 2 мл. Кровь для исследования брали в первый день введения испытуемой композиции и повторно через две недели. Для оценки состояния белкового обмена определяли содержание общего белка и его фракций в сыворотке (плазме) крови, содержание мочевины и креатинина. Данные по содержанию общего белка и его фракций в сыворотке крови коров и телят в таблице 11. При анализе фоновых данных, у коров данного хозяйства в сыворотке крови концентрация общего белка в среднем была немного выше физиологической нормы (88,20±12,62 - 87,90±14,59 г/л). Следует отметить, что у 6 коров из 20 содержание белка было ниже нормы (56,4-59,2 г/л), а у 5 - значительно выше физиологической нормы. Такие показатели свидетельствуют о нарушении белоксинтезирующей функции печени. Содержание альбуминов составило 23,50±1,73 – 27,30±2,23 % , что ниже нормы. Содержание α-глобулинов близко к верхней границе физиологической нормы (18,40±1,56 - 22,10±1,62 %), содержание β-глобулинов несколько превышало норму (26,40±2,84-30,10±2,44 %), а содержание γ-глобулинов было ниже нормы(24,30±3,28-27,90±1,73 %) Снижение альбумин-глобулинового коэффициента указывает на глубокое нарушение белкового обмена. 82 Таблица 11 – Динамика содержания общего белка и его фракций в сыворотке крови коров и телят Коровы Показатели До отела опыт контроль Телята После отела опыт контроль 3дня опыт контроль 15 дней опыт контроль Общий белок, г/л 87,90±14,59 88,20±12,62 83,30±13,45* 75,70±11,84 59,95±8,64 56,38±9,62 70,35±11,62* 62,22±10,64 Альбумины,% 27,30±2,23 23,50±1,73 34,18±2,65* 25,24±1,33 22,72±2,12 19,54±2,44 27,94±3,15 21,25±3,12 α – глобулины,% 18,40±1,56 22,10±1,62 13,32±1,31* 23,05±3,45 22,95±3,12 23,51±1,82 17,14±1,84 22,35±2,34 β –глобулины,% 26,40±2,84 30,10±2,44 16,90±2,64* 26,96±5,27 30,83±2,32 35,32±3,23 23,44±2,24 33,91±2,64 γ- глобулины,% 27,90 ±1,73 24,30±3,28 35,60±2,50* 22,75±1,52 23,50±2,12 21,63±2,48 31,48±2,42* 22,49±1,84 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы 83 На 3-5 день после отела в контрольной группе отмечалось снижение уровня общего белка на 12,5 г/л (14,1%), а так же уменьшение содержания γ – глобулинов до уровня 24,30±3,28 %, β- глобулинов фракции до уровня26,96±5,27 %. Содержание альбуминов все еще оставалось ниже физиологической нормы. У животных опытной группы на фоне применения иммунометаболической композиции, произошли выраженные изменения в состоянии белкового обмена. Снижение содержания общего белка в сыворотке крови после отела было меньше, чем в контрольной группе и составило 4,6 г/л (5,23%). При анализе индивидуальных показателей нами отмечено, что изменения в содержании общего белка наиболее выражены у животных, имеющих отклонения, как в сторону уменьшения, так и в сторону увеличения. После воздействия испытуемой композиции данный показатель у большинства животных (16 голов) не выходил за пределы физиологической нормы. Соотношение белковых фракций оптимизировалось за счет фракции альбуминов и γ-глобулинов. Содержание альбуминов достигло 34,18±2,65%, уровень γ- глобулинов повысился до 35,6 ±2,5 % . Наглядно изменения в протеинограммах опытных и контрольных животных представлены на рис. 3. Рис.3 - Изменение соотношения белковых фракций в крови коров учхоза «Знаменское» 84 В учхозе «Знаменское» содержание общего белка в сыворотке крови телят опытной и контрольной групп, до введения иммунометаболического состава, в возрасте 3 дней, было ниже, чем у коров, и составило в контрольной группе 56,38±9,62 г/л, а в опытной - 59,95±8,64 г/л. Под влиянием иммунометаболического состава в возрасте 15 дней у телят опытной группы отмечалось повышение концентрации белка на 10,4 г/л (17,3%), против 5,84 г/л (10,36%), в контрольной группе. Различия были статистически достоверны (р<0,05). Протеинограмма опытных телят характеризовалась повы- шением уровня альбуминов до 27,94±3,15 %, γ -глобулинов до 31,48±2,42 %, что достоверно выше, чем в контрольной группе (р<0,05). В сыворотке крови контрольных телят к 15-дневному возрасту содержание альбуминов все еще было низким - 21,25±3,12 %, а фракция γ -глобулинов составила 22,49±1, 84 %. Протеинограмма телят опытной группы 23,5 31,48 гамма глобулины 30,83 22,95 23,44 бетаглобулины 17,14 альфа глобулины альбумины 22,72 27,94 Рис. 4 - Изменение соотношения белковых фракций в крови телят учхоза «Знаменское» Фоновый показатель содержания мочевины в сыворотке крови коров в контрольной группе составлял 6,56±0,59 моль/л, а в опытной – 6,68±0,79 моль/л. Повышенный уровень мочевины в крови стельных и отелившихся коров так же свидетельствует о нарушении обмена веществ. 85 Введение иммунометаболического состава привело снижению содержания уровня мочевины в сыворотке крови коров опытной группы на 17,96 %. В контрольной группе содержание мочевины осталось на прежнем уровне. В сыворотке крови телят опытной группы была отмечена тенденция к уменьшению содержания мочевины, разница между опытной и контрольной группой после опыта составила 0,35 моль/л. Содержание креатинина в сыворотке крови животных подопытных групп было в пределах физиологической нормы. Достоверного изменения содержания креатинина под влиянием испытуемой композиции нами не отмечено. Таким образом, отличительной и весьма характерной особенностью применения испытуемой композиции являлась нормализация основных показателей белкового обмена. Коррекция содержания общего белка и устранение диспро- теинемии у животных опытных групп объясняется метаболическим действием ЯК, которая стабилизирует структуру и функциональную активность митохондрий, является индуктором синтеза белков. При этом весьма существенным является тот факт, что сниженные показатели увеличивались, а повышенные возвращались в нормальные пределы. Мы объясняем это особенностями действия солей ЯК, которые наибольшее влияние оказывают на патологически измененные или находящиеся в состоянии «возбуждения» клетки. Из данных таблицы 12 видно, что у большинства глубокостельных коров были снижены показатели резервной щелочности до уровня 35,7±1,61 - 36,2 ±0,61 об. % СО2. Как известно, низкие показатели резервной щелочности являются своеобразным индикатором, указывающим на нарушение всех обменных процессов. 86 Таблица 12-Содержание резервной щелочности, мочевины и креатинина в сыворотке крови коров и телят Группы Резервная щелочность, об.%СО2 Мочевина, ммоль/л Креатинин мкмоль/л До опыта После опыта До опыта После опыта До опыта После опыта Коровы, контрольная 38,21±1,59 39,42±2,29 6,56±0,59 6,54±0,92 125,45±12,69 132,57±12,38 Коровы, опытная 38,72±1,48 48,62±1,59** 6,68±0,79 5,48±0,73** 132,54±13,59 128,93±14,59 Телята, контрольная 36,43±2,53 35,61±1,79 5,34±1,09* 5,36±0,59 140,28±17,68 137,73±21,73 Телята, опытная 35,22±3,09 45,63±2,45** 5,67±0,54* 5,32±0,58 146,37±21,59 145,29±22,38 *- Р<0,05 достоверность различий с соответствующим показателем у коров; **- Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы 87 Введение иммунометаболического состава привело к повышению данного показателя в опытных группах животных. У коров опытной группы после отела показатель резервной щелочности составил 48,62±1,59 об.% СО2, против 39,42±2,29 об.% СО2 в контрольной группе, что свидетельствует о нормализации метаболических процессов. Учитывая большую роль, которую играют в организме такие минеральные элементы, как кальций, фосфор и железо, мы провели анализ их содержания в сыворотке крови подопытных животных. Результаты исследований представлены в таблице 13. Таблица 13 - Содержание основных минеральных элементов в сыворотке крови коров и телят Группы животных Коровы, контрольная Коровы, опытная Кальций, ммоль/л до после опыта опыта Фосфор, ммоль/л до после опыта опыта Железо, мкмоль/ до после опыта опыта 2,40±0,75 2,35±0,45 2,01±0,34 1,96±0,23 34,52±2,48 34,32±4,84 2,36±0,62 3,18±0,84* 1,98±0,75 1,61±0,48* 33,33±1,22 38,13±1,94* Телята, контрольная 2,46±0,35 2,53±0,38 Телята, опытная 2,37±0,16 3,28±0,25* 2,22±0,37 1,94±0,18* 38,55±2,72 41,85±6,25* 2,15±0,32 2,11±0,16 39,53±5,18 39,65±3,44 * - Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы У коров фоновый показатель содержания кальция был на уровне 2,36±0,62 -2,40±0,75 ммоль/л, что несколько ниже нормы. Следует отметить, что индивидуальные показатели сильно варьировали у разных животных. У отдельных особей существенно ниже (1,96 ммоль/л), а у других – выше нормы (до 3,5 ммоль/л). Применение иммунометаболической композиции обеспечило выраженные позитивные изменения в состоянии минерального обмена. Так, у коров уровень кальция повысился с 2,36±0,62 ммоль /л до 3,18± 0,84 (на 34,7 %), а у телят с 88 2,37±0,16 ммоль/л до 3,28±0,25 ммоль /л (на 38,4 %). В контрольных группах содержание кальция практически не претерпело изменений. При индивидуальном анализе показателей установлено, что содержание кальция особенно заметно увеличивается у животных с пониженным уровнем и остается без изменений при нормальном и повышенном содержании макроэлемента. Повышение содержания кальция может быть связано с увеличением содержания общего белка в сыворотке крови, ведю, как известно, большая часть общего кальция представлена белоксвязанной фракцией, а так же с усилением усвояемости кальция из кормов. При анализе результатов исследований по определению уровня неорганического фосфора получена следующая картина: в большинстве проб сыворотки крови коров и телят показатель содержания фосфора был выше нормы. У коров уровень фосфора колебался в пределах 1,98±0,75 - 2,01±0,34 ммоль/л. При этом, у телят содержание фосфора было выше, чем у коров - матерей и составляло 2,15±0,32 - 2,22±0,37 ммоль/л. Применение ЯК в сочетании с АСД -2Ф сопровождалось некоторым снижением уровня неорганического фосфора у животных опытных групп. Так, у коров содержание фосфора понизилось с 1,98±0,75 до 1,61±0,48 ммоль/л (на 18,6 %), а у телят – с 2,22±0,37 до 1,94±0,18 ммоль/л (на 12,6%). Кальций - фосфорное соотношение у коров опытной группы увеличилось с 1,2 до 1,97, а у телят с 1,06 до 1,7. Наглядно изменения в содержании кальция и фосфора представлены на рис. 5. 89 Рис. 5 - Изменение содержания кальция и фосфора у коров и телят Таким образом, применение испытуемой композиции оказало позитивное влияние на соотношение кальция и фосфора, что свидетельствует о нормализации минерального обмена. При фоновых исследованиях содержание железа в сыворотке крови взрослых животных и телят было в пределах нормы. После введения иммунометаболического состава в опытных группах отмечалось статистически достоверное повышение уровня железа, так у коров это повышение составило 4,8 ммоль/л (14,4 %), а у телят – 3,3 ммоль/л (8,5 %), общее содержание составило соответственно 90 38,13±1,94 и 41,85±6,25 ммоль/л (в пределах физиологической нормы). Повышение уровня железа объясняется позитивными изменениями в белковом и углеводном обмене, что в конечном итоге привело к лучшей усвояемости его из корма. Результаты исследований по изучению липидного и углеводного обмена представлены в таблице 14. Таблица14- Показатели липидного и углеводного обмена Группы животных Холестерин. ммоль/л До После опыта опыта Триглицериды, ммоль/л До После опыта опыта Глюкоза, ммоль/л До После опыта опыта Коровы, 4,18±0,06 3,36±0,08* 0,37±0,02 0,28±0,01* 1,96±0,11 3,23±0,45* опытная Коровы, контроль4,25±0,08 4,12±0,07 0,41±0,04 0,38±0,02 2,14±0,34 2,42±0,56 ная Телята, 2,38±0,06 2,31±0,05 0,19±0,02 0,18±0,01 3,01±0,68 3,09±0,54 опытная Телята, контроль3,01±0,08 2,96±0,08 0,16±0,01 0,18±0,02 3,15±0,57 3,06±0,87 ная * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы; Содержание холестерина в сыворотке крови коров было выше, чем у телят. У коров и телят опытных групп фоновое содержание холестерина в сыворотке крови составило 4,18±0,06 и 2,38±0,06 ммоль/л, соответственно. В контрольных группах коров и телят содержание холестерина было соответственно 4,25±0,08 и 3,01±0,08 ммоль/л. После введения ЯК в сочетании с АСД -2Ф наметилась тенденция к снижению содержания холестерина у коров опытной группы, содержание его составило 3,36±0,08 ммоль/л, что на 0,82 ммоль/л (19,6%) меньше , чем до начала опыта (Р < 0,05). В сыворотке крови коров контрольной группы, снижения содержания холестерина не отмечено. У телят опытной группы содержание холестерина до и после опыта оставалось практически на одном уровне (2,38±0,06 -2,31±0,05 ммоль/л), так же как и в контрольной группе телят (3,01±0,08-2,96±0,08 ммоль/л) 91 Исходный показатель содержания триглицеридов в сыворотке крови опытных коров составлял 0,37±0,02 ммоль/л. Применение испытуемой композиции привело к достоверному изменению данного показателя до уровня 0,28±0,01 ±0,01 ммоль/л (снижение на 24,3%). В сыворотке крови коров контрольной группы и телят не отмечено достоверного изменения содержания триглицеридов. Согласно исходным данным, фоновое содержание глюкозы в сыворотке крови коров было ниже нормы. Пониженное содержание глюкозы у стельных и растелившихся коров, возможно связано с нарушением функции печени. На снижение содержания уровня глюкозы в крови у коров при гепатозах указывают Байматов В.Н. с соавт. (2000) и др. авторы. В опытной группе коров применение иммунометаболического состава привело к повышению уровня содержания глюкозы до физиологической нормы – 3,23 ±0,45 ммоль/л (на 64,7 %) , что свидетельствует о благоприятном влиянии иммунометаболической композиции на углеводный обмен. Нормализация содержания глюкозы может служить косвенным доказательством гепатопротекторного действия испытуемой композиции. Таким образом, можно сделать вывод, что применение иммунометаболической композиции на основе ЯК и АСД-2Ф оказывает позитивное влияние на состояние липидного и углеводного обмена у животных только при выраженных нарушениях. Нормальные показатели под действием испытуемого состава не меняются. Нарушения функции печени сказываются на процессах пищеварения и всасывания, на метаболизме белков, углеводов и липидов. Для определения функционального состояния печени мы исследовали ряд биохимических показателей, в частности содержание общего билирубина, щелочной фосфатазы, АЛТ и АСТ, которые в большей степени подвержены изменениям при метаболических нарушениях. Результаты исследований представлены в таблице 15. 92 Таблица 15 - Содержание общего билирубина, щелочной фосфатазы и аминотрансфераз в сыворотке крови коров и телят Группы Общий билирубин, мкмоль/л после до опыта опыта Щелочная фосфатаза ед/л после до опыта опыта АЛТ МЕ/л до опыта после опыта АСТ МЕ/л до опыта после опыта Коровы, опыт 5,73±1,31 4,23±1,49* 32,38±5,28 25,36±6,83* 45,65±7,52 32,45±5,58* 109,55±10,46 Коровы, контроль 5,44±1,72 5,57±2,71 36,24±3,82 36,29±4,04 42,41±6,62 43,83±5,97 110,365±12,39 108,53±11,35 Телята, опыт 2,39±0,93 2,18±0,95* 38,44±3,95 34,59±2,59 28,54±4,46 28,23±5,01 87,67±8,94 82,68±9,45 Телята, контроль 2,48±0,84 2,38±0,43 37,27±3,96 36,39±4,26 29,74±4,03 28,85±4,46 93,26±14,75 89,81±12,41 * - Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы 93,24±14,5* 93 Фоновые показатели содержания общего билирубина в сыворотке крови опытных и контрольных коров составляли 5,73±1,31 и 5,44±1,72 мкмоль/л соответственно. После введения испытуемой композиции в сыворотке крови коров опытной группы содержание общего билирубина снизилось на 26,17% и составило 4,23±1,49 мкмоль/л. В сыворотке крови коров контрольной группы данный показатель остался практически на прежнем уровне, с небольшим увеличением. В сыворотке крови телят опытной и контрольной групп содержание общего билирубина составляло до начала опыта 2,39±0,93 мкмоль/л и 2,48±0,84 мкмоль/л, соответственно. Существенного изменения показателя под влиянием препарата не отмечено. До начала опыта активность щелочной фосфатазы у коров опытной и контрольной групп составляла 32,38±5,28 ед/л и 36,2±3,24±3,82 ед/л соответственно, что в обоих случаях выше физиологической нормы. После введения ЯК в сочетании с АСД -2Ф активность фермента у коров опытной группы понизилась до показателя 25,36±68,3 ед/л (Р < 0,05), а у коров контрольной группы осталась на прежнем уровне. У телят опытной и контрольной группы активность фермента составляла 38,44±3,95 ед/л и 37,27±3,96 ед/л, соответственно, что находится в пределах физиологической нормы для данной возрастной группы. Под влиянием испытуемой композиции у телят опытной группы содержание щелочной фосфатазы незначительно снизилось и составило 34,59±2,59 ед/л, что не выходит за границы нормы. Фоновые показатели содержания аланиновой трансаминазы (АЛТ) коров опытной и контрольной групп составляли 45,65±7,52 МЕ/л и 42,41±6,62 МЕ/л. После применения ЯК в сочетании с АСД 2-Ф произошло существенное снижение показателя у коров опытной группы. Содержание АЛТ уменьшилось на 28,38% и составило 32,45±5,58 МЕ /л. В контрольной группе отмечено незначительное повышение содержания фермента – на 1,42 МЕ/л (0,03%). Содержание АЛТ у телят было существенно ниже, чем у коров. Так в опытной группе этот показатель составлял 28,54±4,46 МЕ/л, а в контрольной - 94 29,74±4,03 МЕ/л. Существенного изменения показателя под действием иммунометаболического состава не отмечено. Фоновые показатели содержания аспартатной трансаминазы (АСТ) в опытной и контрольной группах коров составляли 109,55±10,46 МЕ/л и 110,36±12,3 ед/л соответственно. Под влиянием испытуемой композиции произошло снижение показателя в опытной группе коров на 14,87%, до величины 93,24±14,5 МЕ/л . В контрольной группе коров содержание АСТ осталось практически на прежнем уровне - 108,53±11,35 МЕ/л. У телят опытной группы этот показатель составил 87,67±8,94 ед/л, в контрольной - 93,26±14,75 МЕ/л.. Под влиянием иммунометаболической композиции снижение показателя в опытной группе телят составило 5,68%, против 3,69% в контрольной группе. Результаты наших исследований показывают, что применение иммунометаболической композиции на основе ЯК и АСД-2Ф оказывает положительное влияние на функциональное состояние печени у коров при гепатозах. 3.1.3.2 Оценка влияния иммунометаболической композиции на иммунный статус глубокостельных коров и полученных от них телят Изучение влияния композиции ЯК с АСД-2Ф на иммунные процессы изначально являлось нашей приоритетной задачей. Принимая во внимание состав испытуемого средства и результаты опытов, поставленных на лабораторных животных, были все основания рассчитывать на его более эффективное, по сравнению с исходными компонентами, иммуностимулирующее действие. Объектом для проведения опытов являлись высокопродуктивные глубокостельные коровы учхоза «Знаменское». По принципу аналогов с учетом возраста, продуктивности, массы тела, сроков стельности и результатов биохимического исследования сыворотки крови были сформировано две группы животных. Коровам опытной группы (n=10) испытуемая композиция вводилась внутримышечно, в дозе 10 мл, четырехкратно, за 30 , 20 и 10 суток до предполагаемого отела и на первый день после отела. Коровам контрольной группы (n=10) в те же сроки в аналогичной дозе вводили физиологический раствор. 95 Определение основных имммунологических показателей у коров проводили в дородовой и послеродовой периоды. Результаты представлены в таблице 16. Таблица 16- Влияние ЯК в сочетании с АСД 2-Ф на иммунологические показатели коров Дни исследований Показатели Группы 30 дней 1-2 дня 1 день 30 дней до родов до родов после родов после родов 1 54,13±5,40 79,50±6,60* 83,32±7,51* 63,41±6,60 БАСК,% 2 56,24±6,34 72,60±7,15 76,54±11,10 62,50±5,10 1 57,54±7,34 82,56±9,12*. 92,50±8,12* 64,51±8,15 ФАН, % 2 56,75±4,93 72,94±7,32 83,51±12,10 62,52±9,50 1 2,45±0,36 2,19±0,28 2,27±0,16 2,06±0,34 IgM, г/л: 2 2,27±0,18 2,01±0,15* 1,97±0,17 2,07±0,11 1 18,36±2,34 15,55±3,13 13,94±2,18 17,81±5,13 Ig G, г/л: 2 18,43±3,23 13,56±2,17 12,86±1,98 16,65±3,28 1 45,10±3,20 38,50±6,80* 36,30±4,50* 43,60±5,90* Т-лимфоциты,% 2 46,20±3,20 32,90±2,10 29,50±11,10 38,50±5,10 1 24,70±5,40 22,40±3,20 22,40±3,10 23,50±5,20 В-лимфоциты,% 2 23,30±3,90 22,30±3,30 21,50±2,20 22,50±1,50 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы Бактерицидная активность сыворотки крови (БАСК) за 30 дней до родов составляла в опытной и контрольной группах 54,13±5,14 % и 56,24±6,34 % соответственно, не имея статистически достоверных различий. Под влиянием иммунометаболической композиции в предродовый период БАСК поднималась в опытной группе коров на 46,9 % , а в контрольной группе на 29,1%, при этом разница между опытной и контрольной группой была достоверна (Р<0,05 ). В первые дни после родов БАСК была максимальной и составляла 83,3±7,54 % в опытной группе и 76,54 % в контрольной, разница была статистически достоверна (Р<0,05 ). К 30 дню после отела БАСК несколько снижалась как в опытной, так и в контрольной группах, все еще превышая фоновые показатели. Достоверных различий в показателях между опытной и контрольной группами животных в этот период не установлено. 96 В начале опыта показатели фагоцитарной активности нейтрофилов (ФАН), составили в опытной группе 57,54±7,34 % , а в контрольной – 56,75±4,93 % . Перед родами ФАН в опытной группе была на 11,6 % выше, чем в контрольной (Р<0,05 ). После отела ФАН в опытной группе составляла 92,55±8,14 % (на 9,7% выше, чем в контрольной группе Р<0,05 ). К 30 дню после отела уровень фагоцитоза несколько снизился, и данный показатель составил 64,51±8,14 % и 62,53±9,54 в опытной и контрольной группах соответственно. Статистически достоверной разницы в этот период между показателями опытной и контрольной групп не выявлено. Рис. 5 – Динамика показателей БАСК и ФАН у глубокостельных коров Анализ изменений в гуморальной системе иммунитета показал, что фоновые показатели (за 30 дней до предполагаемых родов) содержания IgG, у коров контрольной и опытной групп не имели существенных различий и составляли 18,43±3,43 г/л и 18,36±2,34 г/л соответственно. Снижение содержания иммуноглобулинов в сыворотке крови накануне родов и в ранний послеродовой период, явление закономерное, в связи с их переходом в молозиво. Тем не менее, этот показатель в опытной и контрольной группах имел вполне определенные различия. В контрольной группе коров за 1-2 дня до родов содержание IgG составляло 13,56±2,17 г/л, что на 26,4 % ниже, чем за 30 дней до отела (Р<0,05), после родов произошло еще некоторое снижение, до 97 уровня 12,86±1,98 г/л, что ниже исходного уровня на 30,2 %. Содержание IgG полностью не восстановилось даже на 30 день после родов, составляя 16,65±3,28 г/л, что ниже фонового уровня на 9,6 %. В опытной группе коров, получавших иммунометаболический комплекс, перед отелом содержание IgG составило 15,55±3,13 г/л, что на 12,8 % выше, чем в контрольной. Сразу после отела и через 30 дней, показатели опытных животных превышали контроль на 7,7 % и 6,5 % соответственно. Первоначальные значения содержания Ig М в опытной и контрольной группах не имели статистически достоверных отличий и составляли 2,45±0,36 г/л и 2,47±0,18 г/л, соответственно, перед родами количество Ig М было несколько выше в опытной группе: 2,19±0,28 г/л при 2,01±0,15 г/л в контроле. В первый день после отела, количество Ig М в опытной группе было выше, чем в контрольной на 13,2 %, практически сравнявшись к 30 дню после родов. Иммуноглобулины М Иммуноглобулины G 3 20 2,5 15 г/л 1,5 опыт г/л 1 контроль 0,5 10 г/ л 2 опыт 5 контроль 0 30 дней до родов 0 30 дней до родов 1-2 дня до родов 1-2 дня до родов 1 день после родов 30 дней после родов 1 день после родов 30 дней после родов Рис. 6 – Динамика содержания IgM и IgG у глубокостельных коров Отнсительное содержание Т-лимфоцитов в крови коров опытной группы перед отелом составляло 38,57±6,89% , что ниже исходной величины на 14,5%. В первый день после отела - 36,31±4, 53% , что ниже начального показателя на 19,5%. В крови коров контрольной группы непосредственно перед отелом содержание Т-лимфоцитов составляло 32,95±2,16 % , что на 28,7% ниже, чем первоначальное значение. В первый день после отела произошло дальнейшее снижение 98 содержания Т - лимфоцитов до уровня 29, 54±11,14 %, что на 36,1% ниже фоновых показателей. В опытной группе коров на 30 день после родов содержание Т-лимфоцитов было близко к фоновому значению, в то время как в контрольной группе – на 16,6% ниже, чем в начале опыта. Следует отметить, что индивидуальные показатели содержания Т-лимфоцитов во всех опытных группах животных на протяжении исследования имели широкую амплитуду индивидуальных колебаний. В тоже время разница в содержании Т-лимфоцитов в сравниваемых группах была статистически достоверна. Содержание В-лимфоцитов достоверно не отличалось у животных опытной и контрольной групп на протяжении периода наблюдений. Еще один аспект, который обратил на себя внимание – это клиническое состояние коров в преддверии отела. Коровы, которым вводилась иммунометаболическая композиция, были заметно спокойнее, чем животные из контрольной группы. Отелы у коров опытной группы проходили без родовспоможения. В опытной группе не было ни одного случая задержания последа, тогда как в контрольной группе эта патология регистрировалась у четырех животных. Как следствие в опытной группе отмечались низкие показатели послеродовой заболеваемости. Заболевание послеродовым эндометритом в опытной группе было диагностировано у двух животных (20 %), а в контрольной – у шести (60 %). Результаты исследований убедительно свидетельствуют о том, что применение иммунометаболической композиции глубокостельным коровам активизирует защитные системы организма: повышает БАСК, ФАН, синтез иммуноглобулинов, стимулирует Т-клеточное звено иммунитета, что является важным условием профилактики развития иммунологического криза в предродовой и ранний послеродовой периоды. Важным является то обстоятельство, что под действием предлагаемой композиции претерпевают изменения преимущественно те показатели, которые имеют существенные отклонения, как в сторону уменьшения, так и в сторону увели- 99 чения. В результате действия иммунометаболической композиции нарушенные показатели приближаются или достигают физиологической нормы. Полученные данные были нами приняты во внимание и в дальнейшем послужили основанием для постановки широкомасштабного научно- производственного опыта, результаты которого мы отразили в ходе изложения диссертационной работы. Для выяснения влияния применения иммунометаболического состава глубокостельным коровам на формирование иммунного статуса потомства, мы изучили основные иммунологические показатели телят, полученных от коров первой опытной (n=10) и второй контрольной (n=9) групп. Исследования крови проводили сразу после рождения, на 3, 14 и 30 сутки. Результаты представлены в таблице 17. Таблица 17 -Влияние ЯК в сочетании с АСД -2Ф на иммунологические показатели телят Показатели БАСК,% ФАН, % Ig М, г/л Ig G, г/л Тлимфоциты,% Влимфоциты,% Возраст животных, сутки Группы 1 1 29,31±1,34* 3 39,24±2,36 14 40,28±2,32 30 42,24±2,46 2 26,21±2,03 38,24±3,45 38,14±3,12 34,24±2,42 1 38,21±2,06 65,21±5,65* 55,21±4,62* 63,11±5,25* 2 30,03±3,41 38,28±6,10 42,28±5,12 38,24±5,10 1 0,46±0,08 1,13±0,21 1,16±0,11 1,24±0,12 2 0,36±0,02 1,72±0,16 1,72±0,16 1,72±0,16 1 0,66±0,05 16,21±1,64* 18,26±1,52 19,32±2,34 2 0,62±0,25 9,83±0,62 10,67±0,84 15,11±1,68 1 28,13±0,21* 36,31±0,31* 38,42±0,31* 36,35±0,61* 2 25,33±0,14 32,52±0,35 30,48±0,26 31,42±0,32 1 8,42±0,48 11,58±0,67 12,48±0,62 11,42±1,36 2 7,29±0,65 8,35±0,85 8,42±0,69 9,24±0,72 *Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы 100 Результаты исследований свидетельствуют о том, что применение ком- плекса ЯК в сочетании с АСД 2-Ф коровам в период глубокой стельности коров оказало стимулирующее влияние на иммунологический статус полученных от них телят. Так, БАСК в опытной группе телят при рождении составляла 29,31±1,34 % и была выше, чем в контрольной на 11,8 %. К третьему дню БАСК увеличивалась в обеих группах. Достоверных отличий по данному показателю между опытной и контрольной группой не установлено. Фагоцитарная активность нейтрофилов в крови телят опытной группы до выпойки молозива составляла 38,21±2,06 %, что на 26,1 % выше, чем в контрольной группе. После выпойки молозива ФАН в опытной группе поднялась на 70,7 % против 28,1 % в контрольной. Таким образом, введение иммунометаболического комплекса глубоко- стельным коровам способствовало повышению БАСК и ФАН у полученных от них телят. У новорожденных телят опытной и контрольной групп до выпойки молозива содержание Ig G не имело достоверных отличий и составляло 0,66±0,05 г/л и 0,62±0,25 г/л соответственно. У трехдневных телят опытной группы содержание Ig G значительно превышало показатели контрольной группы животных и составляло 16,21±1,64 г/л, против 9,83±0,62 г/л в контроле. К 14-дневному возрасту содержание Ig G в опытной группе было на 41,6% выше, чем в контрольной группе, к 30 дню разница несколько уменьшилась и составляла 21,8 % Содержание Ig М у новорожденных телят опытной группы было на 27,7% выше, чем у контрольных. В трехсуточном возрасте эта разница составляла 56,4 % , в 14 и 30-дневном возрасте – 6,8% и 9,5% соответственно. Полученные данные свидетельствуют о том, что применение иммунометаболического комплекса повышает биологическую ценность молозива и способность телят его усваивать. Введение глубокостельным коровам в преродовый период иммунометаболической композиции оказало стимулирующее влияние на клеточную систему 101 иммунитета телят. Содержание Т-лимфоцитов у новорожденных телят составляло 28,13±0,21% в опытной и 25,33±0,14 % в контрольной группе, на третий день 36,31±0,31% и 32,52±0,35%, соответственно. Во все периоды исследования количество Т-лимфоцитов в опытной группе было статистически достоверно выше, чем в контрольной (Р<0,05). Содержание В-лимфоцитов у новорожденных телят опытной группы было выше, чем в контроле на 15,5% и составляло 8,42±0,48% и 7,29±0,65 % соответственно. Такая тенденция отмечена во все периоды наблюдений. Результаты опыта свидетельствуют о том, что применение стельным коровам иммунометаболического комплекса на основе ЯК в сочетании с АСД-2Ф обеспечило нормализацию показателей естественной резистентности и иммунологической реактивности у новорожденных телят. 3.1.3.3 Оценка влияния иммунометаболической композиции на оксидантно-антиоксидантный статус глубокостельных коров и полученных от них телят Современные представления о сущности воспалительных, аллергических, дистрофических повреждений тканей и органов основываются на ведущей роли процессов перекисного окисления липидов (ПОЛ). При патологических состояниях, характеризующихся повышением образования свободных радикалов и активацией ПОЛ, могут возникнуть глубокие нарушения мембранных структур. В физиологических условиях интенсивность процессов ПОЛ строго регулируется системой антиоксидантной защиты (АОЗ). Интенсификация процессов ПОЛ в организме приводит к истощению АОЗ, инициируя целый ряд патологических состояний. Исследования по оценке состояния системы ПОЛ-АОЗ глубокостельных коров проводились в учхозе «Знаменское». Исследования провели на тех же группах коров, у которых определяли иммунологические показатели. Первая группа – опытная, вторая группа - контрольная – по 10 голов в каждой. 102 Результаты исследований по оценке состояния системы ПОЛ-АОЗ представлены в таблице 18. Таблица 18 -Содержание продуктов перекисного окисления липидов и антиоксидантных ферментов в крови коров Показатели ДК ед. опт. пл. /мг липидов МДА мкмоль/л Каталаза мкмоль Н2О2/(л X мин) ГПО мМGSH/л·мин Группы 1 2 1 2 1 2 1 2 Перед запуском 0,22±0,05 0,21±0,04 2,39±0,65 2,44±0,36 42,39±4,65 43,44±3,78 13,78±1,35 13,91±1,67 Сроки исследований За 1 месяц Перед до отела отелом 0,23±0,06 0,27±0,06* 0,24±0,07 0,38±0,08 2,35±0,83 2,78±0,28* 1,96±0,43 3,18±0,21 46,41±6,81 42,38±4,57 41,96±4,43 32,51±3,38 14,22±2,84 13,32±1,83 11,22±1,64 8,97±0,83 После отела 0,31±0,06* 0,42±0,08 2,98±0,32 3,47±0,21 39,78±5,38 23,18±4,21 13,15±3,65 7,85±1,38 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы В динамике показателей, характеризующих процессы ПОЛ в подопытных группах у стельных коров, выявлены следующие изменения. Содержание диеновых конъюгантов (ДК) в крови коров контрольной группы имело тенденцию к повышеию в течение сухостойного периода. Особенно выраженное накопление первичных продуктов ПОЛ отмечалось в предродовой и послеродовой периоды. В последний месяц стельности содержание ДК увеличилось с 0,24±0,007 до 0,38±0,008 ед. опт. пл. /мг липидов, что на 80,9 % выше первоначального значения. В крови животных опытной группы столь высокого накопления продуктов ПОЛ не отмечалось. Особенно наглядно это проявилось в преддверии отела. За 23 дня до родов содержание ДК составляло 0,27±0,006 ед. опт. пл. /мг липидов, что на 28,9% ниже, чем в тот же период у коров контрольной группы (р<0,05). Сразу после отела в контрольной группе показатель содержанияДК достиг уровня 0,42±0,08 ед. опт. пл. /мг липидов. Напротив, в опытной группе коров этот показатель составил 0,31±0,06 ед. опт. пл. /мг липидов , при р<0,05 по сравнению с контролем. 103 Содержание малонового диальдегида (МДА) также претерпевало определенные изменения в течение сухостойного периода. В сыворотке крови коров контрольной группы отмечено некоторое снижение показателя за 1 месяц до отела, однако в предродовой период содержание вторичных продуктов ПОЛ в предродовой период составило 3,18±0,021 мкмоль/л (на 23,3% выше в сравнении с начальным показателем). У животных опытной группы содержание МДА в течение первого месяца исследований не имело столь выраженой тенденции роста. В первые дни после отела содержание МДА составляло в контрольной группе 3,47±0,21в мкмоль/л, против 2,98±0,32 мкмоль/л в опытной группе ( р<0,05). Диеновые конъюгаты 0,45 0,4 Д К 232/м г л и п и д о в 0,35 0,3 0,25 Опытная группа 0,2 Контрольная группа 0,15 0,1 0,05 0 Перед запуском За месяц до Перед отелом После отела отела Рис.8- Динамика накопления первичных продуктов ПОЛ в крови коров Функциональное состояние системы АОЗ в организме характеризуется активностью основных антиоксидантных ферментов. В опытной группе содержание фермента на протяжении сухостойного периода удерживалось примерно на одном уровне, в послеродовый период активность каталазы не значительно снизилась. Активность каталазы в контрольной группе снизилась перед родами на 25,1%, а после отела имела минимальный уровень 23,18±4, 21 мкмоль Н2О2/(л х мин), что ниже исходного на 46,8%. В опытной группе активность глутатионпероксидазы (ГПО) на протяжении сухостойного периода фактически не претерпевала существенных изменений. После отела составила 7,85±1,38 мМGSH/л·мин (превосходила исходную концентрацию на 43,6%). 104 Активность фермента в сыворотке крови коров контрольной группы к концу сухостойного периода имела тенденцию к снижению. Рис.9 - Динамика ферментов АОЗ в крови коров Тенденция увеличения содержания ДК и МДА связана с тем, что период запуска и отел являются мощными стрессовыми факторами для организма стельных коров. В предродовый период у коров наступает состояние стрессовой дезадаптации, сопровождающееся гиперактивностью процессов перекисного окисления липидов. Активность ферментативного звена АОЗ отражает адаптивный характер изменений в начале сухостойного периода и постепенное истощение антиоксидантной системы по мере приближения срока отела. Применение на этом фоне иммуномтаборлического комплекса обеспечили восстановление равновесия в системе ПОЛ-АОЗ, тем самым препятствовало развитию патологических проявлений стрессовой реакции. Еще один аспект, который мы посчитали нужным изучить. Как известно, первые часы и дни жизни животного, в связи с переходом из условий антенатального периода развития к постнатальный стадии, характеризуются комплексом адаптивных реакций, важнейшими из которых являются процессы ПОЛ-АОЗ. Мы изучали состояние системы ПОЛ-АОЗ у телят, полученных от коров, которым в предродовой период вводили испытуемй иммунометаболический комплекс. Из них было сформировано две опытные группы. Телятам первой опытной группы (n = 5) после рождения ничего не вводили, телятам второй опытной группы (n = 5) 105 на 1 и 3 сутки после рождения водили ЯК в сочетании с АСД 2-Ф в объеме 2 мл. В качестве контрольной группы (n = 9) в опыт были включены телята, матери которых не подвергались обработке. Следует отметить, что телята опытных групп при рождении имели большую массу тела, они были более подвижны и не имели признаков физиологической незрелости. Результаты исследований по изучению процессов ПОЛ представлены в таблице 19. Таблица 19 - Содержание продуктов перекисного окисления липидов и антиоксидантных ферментов в крови телят Показатели Группы Возраст животных, сутки 1 опытная 1 0,25±0,01* 10 0,18±0,02* 30 0,16±0,02 2 опытная контрольная 1 опытная 0,18±0,02* 0,32±0,05 2,46±0,04 0,16±0,03* 0,29±0,03 2,17±0,05 0,15±0,01 0,17±0,01 1,98±0,04 МДА мкмоль/л 2 опытная контрольная 2,14±0,03* 3,37±0,05 1,97±0,04* 2,97±0,07 1,88±0,04 2,02±0,07 1 опытная 2 опытная контрольная 1 опытная 48,91±7,39 48,67±8,32 37,97±8,59* 38,94±5,53* 23,05±5,41 24,05±4,32 48,32±8,31 5,68±2,32 27,11±7,31 11,36±3,27 18,95±7,42 17,56±4,46 5,78±1,82 5,45±1,39 12,89±3,97 8,34±2,19 18,76±5,53 12,56±3,35 ДК ед. опт. пл. /мг липидов Каталаза мкмоль Н2О2( л×мин) ГПО 2 опытная мМGSH/л×мин контрольная * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы По результатам наших исследований установлено, что у телят первой опытной группы содержание ДК было на 21,8 % ниже, чем у их сверстников из контрольной группы. У телят второй опытной группы относительное снижение содержания ДК было еще более выражено и составило 43,75 % в сравнении с контролем. На 10 сутки показатель содержания ДК снизился в первой опытной группе на 25,0 % , во второй опытной группе - на 11,1 %, а в контрольной группе на 9,4 %. В 30 дневном возрасте содержание ДК в первой и второй опытных и кон- 106 трольной группах практически сравнялось и составило 0,16±0,02 ед. опт. пл. /мг липидов; 0,15±0,01 ед. опт. пл. /мг липидов: 0,17±0,01 ед. опт. пл. /мг липидов, соответственно. Аналогичная динамика выявлена по содержанию МДА, являющегося вторичным продуктом ПОЛ. В первые сутки после рождения показатель содержания МДА в первой опытной группе был на 27,0%, а во 2-ой опытной группе на 36,4% ниже, чем в контрольной группе. Высокий уровень пероксидации в первые сутки жизни, вполне мог быть обусловлен перестройкой метаболизма новорожденного при переходе в новую среду обитания. Более низкая интенсивность ПОЛ у телят опытных групп свидетельствует об их лучшей адаптивности к изменившимся условиям среды. В то время как у телят контрольной группы развитие компенсаторных механизмов происходило значительно менее активно. Диеновые конъюгаты ед . опт. П л /м г л ип ид ов 0,35 0,3 0,25 0,2 1 опытная 0,15 2 опытная 0,1 Контрольная 0,05 0 1 10 30 Возраст, сутки Рис. 11- Динамика содержания продуктов ПОЛ у телят. Изменение интенсивности ПОЛ в течение первого месяца жизни связано с перестройкой различных звеньев системы АОЗ. В ферментативном звене антиоксидантной защиты выявлены существенные изменения. Если у новорожденных телят активность фермента каталазы не имела достоверных различий, то спустя 10 суток отмечено более выраженное снижение активности каталазы у телят контрольной группы. 107 Глутатионпероксидаза 20 18 м М G SH /л× м ин 16 14 12 10 1 опытная 8 2 опытная 6 Контрольная 4 2 0 1 10 30 Возраст, сутки Рис. 12- Динамика активности ферментов АОЗ у телят . Постнатальная адаптация новорожденных сопровождалась динамичным нарастанием активности ГПО. На 30 сутки содержание ГПО превышало первоначальные значения, в первой опытной группе - в 3,1 раза, во второй опытной группе – в 3, 2 раза, в контрольной группе в 2,3 раза. Полученные результаты свидетельствуют о том, что переход от антенатального к постнатальному периоду развития вызывает у телят смещение оксидантноантиоксидантного равновесия в сторону усиления процессов образования активных форм кислорода и активации процессов ПОЛ. Применение иммунометаболического комплекса обеспечило ускоренное становление оксидантно-антиоксидантного равновесия у новорожденных телят, выраженное снижение содержания продуктов ПОЛ, повышение активности ферментативного звена антиоксидантной защиты. 3.1.3.4 Оценка влияния иммунометаболической композиции на рост и развитие телят Нарушения метаболизма глубокостельных коров ведет к рождению физиологически незрелых телят. В этой связи коррекция нарушений обмена веществ и дисфункции иммунной системы у стельных коров является основным условием повышения жизнеспособности приплода. 108 Опыты по изучению влияния иммунометаболической композиции, получившей рабочее название «Янтарный биостимулятор» на пренатальное развитие телят провели в условиях учхоза «Знаменское». По принципу аналогов было сформировано две группы глубокостельных коров, по 10 голов в каждой. Коровам опытной группы вводили испытуемую композицию внутримышечно, в дозе 10 мл, четыре раза, за 30, 20 и 10 дней до предполагаемых родов и сразу после отела. Контрольным животным внутримышечно, в дозе 10 мл, в те же сроки вводили физиологический раствор. О пренатальном развитии телят судили по их состоянию в период новорожденности. От коров контрольной группы было получено 9 телят (одна корова абортировала), от коров опытной группы - 10 телят. Результаты исследований представлены в таблице 20. Таблица 20 – Клинический статус новорожденных телят Показатели Контрольная группа Опытная группа Родилось живых телят Живая масса при рождении, кг Температура тела,ºС Нормотрофики Гипотрофики 9 28,2±0,67 38,2±0,23 5 4 10 30,7±0,87* 39,5±0,45 8 2 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы В контрольной группе средняя живая масса при рождении составила 28,2±0,67кг. Телята имели плохо развитую мускулатуру, слизистые оболочки бледные, кожа сухая, неэластичная. Из девяти телят пять были отнесены к нормотрофикам, четыре – к гипотрофикам. Телята, родившиеся от опытных коров, выглядели более жизнеспособными. Средняя живая масса при рождении составила 30,7±0,87 кг, телосложение крепкое. Дыхательные движения ритмичные, глубокие. Телята имели эластичную кожу, густой блестящий волосяной покров. По клиническомй состоянию опытной группе к нормотрофикам были отнесены восемь телят, к гипотрофикам - два. 109 Наблюдение за клиническим статусом телят опытной и контрольной групп в течение 30 дней. В этот период на телятах опытной группы применяли иммунометаболический комплекс на 1-2 день в дозе 2,0 мл , на 15 день в дозе 4,0 мл, и на 30 день – в дозе 5,0 мл. Влияние иммунометаболического комплекса на ростовую активность телят представлено в таблице 21. Таблица 21-Динамика роста и развития телят Показатели Контрольная группа Опытная группа Живая масса в 1 сутки, кг Живая масса на 15 сутки, кг Среднесуточный прирост массы с 1по 15 сутки, г Живая масса на 30 сутки Среднесуточный прирост массы с 16 по 30 сутки, г 28,2±0,6 33,6±2,4 З60,0±10,4 30,7±0,8 37,4±1,4 446,0±59,5** 41,6±1,3 48,7±0,9** 533,0±15,3 753,0±18,4 * - Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы Полученные данные свидетельствуют о позитивном влиянии иммунометаболического комплекса на ростовую активность и физиологический статус телят молочного периода выращивания. Полученные результаты были использованы при проведении научнопроизводственного опыта в СХПК им. Черняховского. Выбор этого хозяйства для проведения научно-производственного опыта был обусловлен тем, что 25-30 % новорожденных телят имели низкие физиологические показатели. С этой позиции стадо данного хозяйства являлось подходящим для проведения оценки влияния иммунометаболической композиции на физиологическое состояние полученного потомства. Порядок проведения опыта был следующим: объектом для исследования являлись 157 глубокостельных коров и 78 нетелей. Животных разделили на 2 опытные группы (100 коров и 40 первотелок) и две контрольные (57 коров и 38 первотелок). 110 Животным опытных групп вводили испытуемую композицию внутримышечно, в объеме 10 мл, трехкратно, с интервалом 10-15 дней. Контрольным животным с те же сроки внутримышечно вводили 5 мл тетравита. Эффективность применения испытуемой композиции оценивали по физиологическому состоянию новорожденных телят. Результаты опыта представлены в таблице 22. . Таблица 22- Физиологическое состояние новорожденных телят Состояние телят нормотрофики гипотрофики Коровы, опыт n1=100; n 2=95 92 Коровы, контроль n1=57; n 2=53 38 Новотельные, опыт n1=40; n 2=38 30 Новотельные, контроль n1=38; n 2=34 16 3 15 8 18 Примечание: n1-количество коров; n 2- количество полученных телят; От коров опытной группы получено 96,8 % физиологически развитых телят, тогда как в контрольной группе этот показатель составил 71,6 % , что совпадает с данными ежегодных многолетних наблюдений. Среди телят, полученных от коров-первотелок опытной группы, нормотрофиков было 78,9 %, против 47,0 % в контрольной группе. Таким образом, результаты научно-производственного опыта доказали, что иммунометаболическая композиция на основе ЯК и АСД- 2Ф оказало выраженное благоприятное воздействие на организм глубокостельных животных, что позволило получить физиологически развитый приплод, который в дальнейшем отличался повышенной ростовой активностью. 111 3.1.4 Результаты применения иммунометаболической композиции на основе янтарной кислоты и антисептика-стимулятора Дорогова второй фракции при клинически выраженных заболеваниях 3.1.4.1 Эффективность применения иммунометаболической композиции при нарушениях обмена веществ у глубокостельных коров В большинстве случаев нарушения в обмене веществ у коров протекают скрыто, без клинических симптомов. Такую форму патологии наблюдают обычно у первотельных коров. У более возрастных животных нарушения обмена веществ становятся очевидными и проявляются нозологически дифференцируемыми патологиями. Именно они определяют преждевременное выбытие коров, проблему с воспроизводством и рождением физиологически ослабленного приплода. Многочисленные клинические наблюдения и результаты биохимических исследований свидетельствуют о том, что практически у всех коров в условиях Курской области наблюдается сдвиг щелочного резерва в сторону ацидоза. Ацидотическое состояние является своего рода индикатором, который указывает на нарушение всех обменных процессов. Развитие ацидоза ведет к нарушению проницаемости плацентарного барьера, снижая его способность избирательно пропускать или задерживать транспортировку в плод и эмбрион циркулирующих в крови матери веществ. Вследствие этого кислые продукты из материнской крови почти беспрепятственно переходят в фетальную кровь, вызывая метаболические сдвиги в организме плода. В итоге, у последнего происходят изменения в иммунокомпетентных и других органов, снижается резистентность и уровень иммунной реактивности, что сопровождается высокой заболеваемостью и гибелью телят в первые дни жизни. Принимая во внимание тот факт, что нарушения обмена веществ неизбежно влекут за собой снижение иммунологического статуса животных, правомерной и практически значимой является одновременная коррекция метаболизма и системы иммунитета. 112 Мы сочли целесообразным изучить эффективность применения испытуемой композиции на основе ЯК и АСД 2-Ф на животных с высоким риском развития патобиохимических процессов и иммунодефицитным состоянием. Объектом для проведения опытов служили коровы третьей и четвертой лактаций учхоза «Знаменское» Курской ГСХА (средняя молочная продуктивность в пределах 5300 - 5500 кг молока). По результатам биохимических исследований крови были сформированы две группы (первая опытная и вторая контрольная) коров с выраженным ацидозным состоянием, по 10 голов в каждой. Коровам опытной группы внутримышечно, в объеме 10 мл, двукратно с интервалом 7 дней вводили испытуемый иммунометаболический комплекс (ЯК в сочетании с АСД2Ф). Коровам контрольных групп в этот период ничего не вводили. Биохимические исследования крови в течение месяца проводили раз в 7 дней. При изучении влияния испытуемой композиции на обменные процессы коров при метаболическом ацидозе получены результаты, которые представлены в таблице 23. Фоновые биохимические показатели у коров свидетельствуют об избытке белка, снижении резервной щелочности, повышении содержания кетоновых тел и фосфора, снижении содержания кальция. В ходе дальнейших исследований нами установлены следующие изменения: после первого введения испытуемой композиции показатель резервной щелочности у большинства особей пришел в норму. После повторного введения иммунометаболического состава произошла нормализация кислотно-щелочного баланса, и в таком стабильном состоянии этот показатель оставался во все периоды контрольных биохимических исследований. Нормализация показателя кислотно-щелочного баланса указывала на позитивные изменения и в других обменных процессах. Наиболее показательно это проявилось в белковом обмене. Так, если до введения испытуемой композиции фоновый показатель был выше верхнего предела физиологической нормы, то спустя 7 дней он выражено снизился до средних значений. В дальнейших исследованиях содержание белка было стабильным и в пределах средних значений. 113 Таблица 23- Влияние ЯК в сочетании с АСД -2Ф на обменные процессы при метаболическом ацидозе Сроки исследования, дни 1 7 14 21 28 Группы 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 Белок, г/л 89,51±2,74 90,23±2,13 83,60±2,56 89,40±2,96 77,82±2,48* 89,50±2,57 78,20±2,52* 89,10±1,92 79,60±0,78* 89,50±0,84 Резервная щелочность, об. % CO2 37,20±2,12 38,60±2,57 44,80±2,75* 38,40±2,46 45,60±2,14* 39,20±1,94 51,30±2,47* 39,30±2,15 51,90±2,32* 40,80±1,43 Кетоновые тела, ммоль/л Кальций, ммоль/л Фосфор, ммоль/л 0,94±0,12 0,95±0,19 0,85±0,14 0,98±0,16 0,75±0,11 1,04±0,18 0,73±0,17 0,96±0,07 0,75±0,10 0,98±0,12 2,04±0,12 2,07±0,18 2,26±0,14 2,05±0,17 2,48±0,17 2,09±0,12 2,36±0,14 2,07±0,15 2,29±0,13 2,04±0,16 1,94±0,23 1,96±0,42 1,72±0,25 1,83±0,28 1,74±0,35 1,78±0,26 1,73±0,28 1,73±0,24 1,76±0,32 1,78±0,29 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы 114 Это свидетельствовало о благоприятном влиянии иммунометаболической композиции на биосинтез белка в организме, в т.ч. об усилении роли печени в белковом обмене. Об улучшении работы печени можно было судить и по снижению показателя кетоновых тел в крови, в то время как этот показатель в контрольной группе не претерпел выраженных изменений. Применение иммунометаболической композиции положительно отразилось и на состоянии минерального обмена. Следует отметить, что при ацидозном состоянии наблюдается повышенное выведение кальция из организма. Показатель содержания кальция на 7 сутки повысился с 2,04±0,12 до 2,26±0,14 ммоль/л (на 10,8%) и оставался таким во все периоды контрольных исследований. В свою очередь в регуляции кислотно-щелочного равновесия определенную роль играет фосфор, который входит в состав фосфатного буфера крови. После повторного применения иммунометаболического комплекса у животных опытной группы соотношение кальций/фосфор было в пределах физиологической нормы. В другом опыте нами были проведены исследования по оценке влияния испытуемой композиции на метаболические процессы при более тяжелой форме нарушения обмена веществ – кетозе. По результатам клинических наблюдений и биохимических исследований сыворотки крови по принципу аналогов было сформировано две подопытные группы. Коровам опытной группы (n=10) внутримышечно, в объеме 10 мл, двукратно с интервалом 7 дней вводили иммунометаболическую композицию. Коровам контрольной группы (n=10) в этот период ничего не вводили. Результаты исследований представлены в таблице 24. После применения иммунометаболической композициии была выявлена позитивная тенденция снижения уровня гиперпротеинемии и повышения уровня резервной щелочности. Однако эти изменения не были столь существенны, чтобы достичь пределов физиологической нормы. 115 Таблица 24 - Влияние ЯК в сочетании с АСД- 2Ф на метаболические процессы при кетозе лактирующих коров Сроки исследования, дни 1 7 14 21 28 Группы 1 2 1 2 1 2 1 2 1 2 Белок, г/л 89,44±2,72 89,25±2,83 89,02±2,76 89,26±2,58 88,74±2,82 89,26±2,73 87,65±2,54 89,48±2,62 88,50±2,73 89,60±2,03 Резервная щелочность об. % CO2 33,7±2,46 34,2±2,78 39,6±2,17* 34,6±2,14 42,3±3,02* 33,8±2,72 45,8±2,76* 34,1±1,83 46,2±2,54* 35,6±1,78 Кетоновые тела, ммоль/л 2,55±0,22 2,65±0,33 2,35±0,28 2,51±0,24 2,24±0,38 2,66±0,32 1,92±0,24* 3,07±0,32 2,38±0,26 2,93±0,28 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы Кальций, ммоль/л 2,08±0,14 2,03±0,16 2,16±0,18 2,04±0,12 2,12±0,28 2,03 ±0,13 2,12±0,25 2,20±0,19 2,71±0,16 2,01±0,13 Фосфор, ммоль/л 1,93±0,13 1,89±0,17 1,95±0,18 1,84±0,19 1,98±0,24 1,89±0,23 1,98±0,15 1,95±0,18 1,92±0,16 1,92±0,15 116 Показатель содержания кетоновых тел в крови коров опытной группы, выражено снизился по отношению к фоновому значению и контрольной группе, но, тем не менее, оставался на весьма высоком уровне. По всей видимости, это обусловлено необратимыми процессами в печени, в результате которых она не в состоянии восстановить свою функциональную способность. На это же указывает недостаточный уровень нормализации показателей минерального обмена, в сравнении с результатами, которые наблюдались после применения испытуемой композиции при ацидотическом состоянии. Таким образом, применение иммунометаболической при алиментарном ацидозе и ранней стадии кетоза позволило эффективно провести коррекцию основных обменных процессов. С учетом того, что эти заболевания стали преобладать в промышленном животноводстве, применение данной композиции приобретает большую практическую значимость. Собственно этот аспект и послужил основанием для широкомасштабного внедрения разработки в систему мер по обеспечению здоровья глубокостельных коров практически во всех животноводческих хозяйствах Курской области. 3.1.4.2 Эффективность применения иммунометаболической композиции при заболеваниях телят с диарейным синдромом В настоящее время желудочно-кишечные заболевания телят, проявляющиеся синдромом диареи, приносят существенный экономический ущерб отечественному животноводству. Устойчивость телят к диареям определяется активностью колострального иммунитета. Для новорожденных телят молозиво является единственным источником защитных антител. Телята, у которых в суточном возрасте количество γ-глобулинов не превышает 10%, практически не имеют шансов выжить. Еще один аспект, который определяет устойчивость телят к заболеваниям – это состояние здоровья коров. У коров с нарушенными обменными процессами телята рождаются с аналогичным метаболическим симптомокомплексом, что яв- 117 ляется одной из причин вторичных иммунодефицитов. Именно у телят с пониженной резистентностью, как правило, в первые дни жизни регистрируют желудочно-кишечные заболевания. Как свидетельствуют многочисленные эпизоотологические данные, в этиологии желудочно-кишечных заболеваний активное участие принимают ассоциации вирусно-бактериальных патогенов. В основной своей массе эти микроорганизмы постоянно сожительствуют с макроорганизмом. Однако достигаемое биологическое равновесие время от времени нарушается. В таких случаях возникают эпизоотологические вспышки конкретных, нозологически дифференцируемых инфекционных заболеваний. Именно такая ситуация сложилась в начале 2000-х годов в СПК «Амосовский» Медвенского района. Хозяйство в течение ряда лет являлось неблагополучным по ВД-БС, рота- и коронавирусной инфекции телят. Клинически заболевание проявлялось у телят обычно в конце зимнего периода. Именно в этот период нам представилась возможность провести исследования во время очередной вспышки заболевания. Клиническое обследование телят. Заболевали телята в возрасте 2-8 дней. Начало заболевания было в одних случаях внезапным, в других начиналось с вялости и снижения аппетита. Шерстный покров у всех телят был тусклым, взъерошенным. У больных наблюдался профузный понос, часто с примесью крови. При клиническом обследовании у отдельных особей имелись симптомы обезвоживания, пониженный тургор кожи, запавшие глаза, признаки сердечнососудистой недостаточности. Видимые слизистые оболочки анемичные, с синюшным оттенком. Телята вялые, больше лежат, некоторые не поднимаются. Температура тела у 42 особей в пределах 39,5-40,1˚С, у 26 телят- 40,5-41,3˚С, пульс учащенный. По результатам клинического обследования 68 телят у 42 из них диагностировано подострое течение с умеренно выраженными симптомами, у 26 - острое течение с выраженными явлениями токсикоза и обезвоживания. 118 Больные телята явились объектом исследования для определения влияния иммунологической композиции на метаболический, иммунный и оксидантно- антиоксидантный статус телят, оценки ее терапевтической эффективности при заболеваниях с диарейным синдромом. Для проведения исследований больных телят разделили на 6 групп. Три с легким течением болезни: первая опытная (n= 14), вторая опытная (n= 14), третья контрольная (n= 14), и три стяжелым течением: четвертая опытная(n= 8) , пятая опытная (n= 9) и 6-я контрольная(n= 9). Больным телятам первой и четвертой опытных групп назначали диету и вводили иммунометаболическую композицию (внутримышечно, в дозе 5 мл, 1 раз в день, 4-8 дней) без применения антибиотиков. Во второй и пятой опытных группах лечение проводили по схеме, принятой в хозяйстве и дополнительно вводили испытуемую композицию в той же дозе. В контрольных группах телят лечили по традиционной схеме, принятой в хозяйстве (антибиотик гентамицин и регидрационная терапия). Кровь для исследований брали на первый день (до начала лечения) и на 10 сутки, после окончания курса. Определение метаболического статуса больных телят и влияние на него иммунометаболической композиции Заболевания желудочно-кишечного тракта, протекающие с диарейным синдромом, как правило, сопровождаются существенными нарушениями метаболического статуса телят. Исходя из полученных ранее результатов, мы предположили, что применение иммунометаболической композиции на основе ЯК и АСД-2Ф нормализует метаболический статус больных телят и создаст необходимый фон для эффективной терапии. В таблице 25 отражены изменения показателей белкового обмена у телят, больных желудочно-кишечными заболеваниями при применении иммунометаболического комплекса ЯК и АСД 2-Ф. 119 Таблица 25 – Динамика показателей белкового обмена у телят с диарейным синдромом под влиянием ЯК в сочетании с АСД -2Ф Группы животных Общий белок, г/л Альбумины,% Глобулины,% бета До После лечения лечения гамма До После лечения лечения До лечения После лечения альфа До После лечения лечения 1 44,8±2,7 54,2±3,6* 39,5±4,2 38,2±3,6 13,5±1,2 12,3±1,5 25,.3±2,1 22,9±3,1 21,7±2,9 26,6±3,5* 2 45,9±3,6 59,3±2,6* 39,7±3,2 40,9±2,6 12,9±1,4 10,1±1,5 25,8±3,2 20,6±2,9 21,6±2,6 28,4±3,2* 3 44,6±2,4 49,3±2,6 39,7±3,4 41,0±3,2 13,4±1,2 13,3±1,5 24,.3±2,1 23,3±3,1 22,6±2,9 22,4±3,5 4 52,3±3,4 57,6±2,8 41,1±4,2 38,3±3,4 13,2±1,2 13,7±1,3 23,9±3,1 22,8±4,1 21,8±3,2 25,2±2,3* 5 51,7±2,6 58,9±3,2 40,6±3,4 38,8±2,9 13,7±1,1 11,2±1,3 24,2±2,3 22,1±3,2 21,5±2,3 27,9±4,2* 6 51,7±3,6 52,9±3,4 40,2±3,2 38,6±2,9 13,6±1,1 13,4±1,3 24,4±2,3 25,3±3,1 21,8±2,3 22,7±4,2 До лечения После лечения * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем до начала лечения 120 Из данных, представленных в таблице 25 видно, что содержание общего белка в сыворотке крови телят с легким течением болезни, до начала лечения, было на уровне 44,6 - 45,9 г/л, что несколько ниже нормы. Пониженное содержание белка в организме больных телят связано с нарушением белоксинтезирующей функции печени и потерями белка с содержимым желудочно-кишечного тракта. После клинического выздоровления у телят первой опытной группы отмечено повышение на 20,9 % концентрации белка и достижение уровня 54,2±3,6 г/л. Во второй опытной группе показатель повысился на 29,19 % и составил 59,3±2,6 г/л и достиг значений физиологической нормы. Аналогичный показатель у телят контрольной группы в этот период повысился на 9,9 % , оставаясь все еще ниже нормы, достиг лишь уровня 49,3±2,6 г/л. Протеинограмма опытных и контрольных телят до начала опыта существенных отличий не имела. После введения ЯК в сочетании с АСД-2Ф отмечено повышение уровня γ-глобулинов у телят первой опытной группы на 22,58% у животных второй опытной группы этот показатель повысился еще существеннее, на 31,48% . У их сверстников из контрольной группы уровень γ-глобулинов имел показатель 22,4 %. У телят с клиникой тяжелой диареи фоновые показатели общего белка в сыворотке крови было выше, чем у животных первых трех групп. Это относительное увеличение, связанное с гиповолемией, имеющей место при профузном поносе, который отмечался у больных телят. У животных четвертой опытной группы фоновое содержание общего белка составляло 52,3г/л и увеличивалось после применения имунометаболического состава на 10,1%, до уровня 57,6 г/л. В пятой опытной группе содержание белка увеличилось на 13,9% и составило в конце опыта 58,9±3,2 г/л. В шестой контрольной группе уровень белка повысился лишь на 2,3 %. В четвертой и пятой опытных группах отмечено выраженное повышение уровня γ-глобулинов , на 15,5 % и 29,7% соответственно, против 4,1% в контрольной группе. Нами отмечены существенные различия в содержании продуктов межуточного обмена (таб. 26) 121 Таблица 26 – Динамика показателей белкового обмена у телят с диарейным синдромом под влиянием иммунометаболической композиции Группы животных 1 2 3 4 5 6 Мочевина, ммоль/л До лечения После лечения 2,58±0,03 2,62±0,02 2,65±0,03 3,24±0,04 3,32±0,03 3,18±0,02 1,82±0,03 1,78±0,03 2,32±0,03 2,82±0,03 2,78±0,03 3,12±0,03 Креатинин, ммоль/л До лечения После лечения 84,81±5,72 85,90±6,34 82,60±6,42 92,30±7,46 91,70±5,64 91,70±6,65 72,80±4,62 75,60±5,32 82,50±5,44 88,30±5,42 86,70±5,63* 91,60±5,62 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем до начала опыта Фоновое содержание мочевины у телят с легким течением болезни не превышало 2,65±0,03 ммоль/л, тогда как при тяжелои течении уровень мочевины находился в пределах 3,18±0,02-3,32±0,03 ммоль/л. После применения иммунометаболического комплекса в первой и второй опытных группах данный показатель снизился на 29,45 % и 32,06 % соответственно. В четвертой и пятой опытных группах снижение показателя составило 12,96 % и 16,26 % соответственно. В контрольных группах содержание мочевины достоверно не изменилось. Результаты исследований по определению основных минеральных элементов в сыворотке (плазме) крови больных телят представлены в таблице 27. Таблица 27 - Изменение содержания основных минеральных элементов в сыворотке крови телят с диарейным синдромом 1 Кальций, ммоль/л до после опыта опыта 2,42±0,31 2,73±0,26 2 2,31±0,12 2,82±0,14* 1,53±0,16 1,72±0,12* 39,25±5,14 41,95±3,44* 3 2,31±0,25 2,42±0,35 1,48±0,14 1,50±0,12 38,42±3,24 39,63±3,24 4 2,15±0,12 2,65±0,42* 1,29±0,10 1,45±0,23 33,32±1,21 38,1±1,92* 5 2,02±0,21 2,73±0,42* 1,25±0,12 1,42±0,14 34,54±2,42 37,32±4,82 6 2,14±0,15 2,34±0,22 1,31±0,14 32,34±1,34 33,46±1,48 Группы животных Фосфор, ммоль/л до после опыта опыта 1,42±0,12 1,65±0,12 1,28±0,16 Железо, мкмоль/л до после опыта опыта 38,53±2,74 41,83±6,24* * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем до начала опыта 122 Полученные результаты свидетельствуют о том, что у телят с умеренно выраженными симптомами заболевания (до введения иммунометаболического комплекса) содержание кальция было на уровне 2,3±0,1-2,4±0,3 ммоль/л, что несколько ниже нормы. При повторном исследовании на 10 сутки у телят отмечено повышение содержания кальция в первой и второй опытных группах - на 16,6 % и 21,7 % соответственно. Аналогичный показатель в контрольной группе не претерпел существенных изменений. У телят с тяжелым течением болезни, до введения иммунометаболического комплекса, отмечена выраженная гипокальциемия. Показатели содержания кальция в среднем составляли 2,0±0,2-2,1±0,1 ммоль/л. Пониженное содержание кальция в сыворотке крови связано с нарушением его всасывания слизистой, а так же с потерями с содержимым желудочно-кишечного тракта. После завершения эксперимента содержание кальция в крови телят четвертой и пятой опытных групп повысилось на 23,8% и 35%, соответственно. У телят шестой контрольной группы содержание кальция в сыворотке крови повысилось на 9,5 %. Фоновые показатели содержания неорганического фосфора у телят с легким течением болезни составляли 1,42±0,12-1,53±0,16 ммоль/л, что несколько ниже нормы. После применения иммунометаболического комплекса, отмечено повышение уровня неорганического фосфора у животных опытных групп, так у телят первойой опытной группы содержание фосфора повысилось на 16,2 %, а у телят второй опытной группы – на 12,4% . Аналогичный показатель в третьей контрольной группе остался на прежнем уровне. В сыворотке крови телят с тяжелым течением болезни фоновый показатель содержания фосфора был еще ниже (1,25±0,12-1,29±0,10 ммоль/л), что связано с плохой усвояемостью его солей и повышенным выделением с жидкими фекалиями. После окончания эксперимента отмечено повышение уровня неорганического фосфора у животных четвертой и пятой групп на 12,4%, и 13,6%, соответственно. В шестой контрольной группе показатель содержания фосфора практически не изменился. 123 Рис. 13 - Изменение содержания кальция и фосфора в сыворотке крови телят с диарейным синдромом под влиянием ЯК в сочетании с АСД 2-Ф Полученные данные свидетельствуют о тенденции к нормализации фосфорно-кальциевого соотношения и всего минерального обмена. Фоновый показатель содержания железа в сыворотке крови телят с легким течением был в пределах нижней границы нормы. Применение иммунометаболического комплекса обеспечило повышение уровня железа в первой и второй опытных группах на 6,8 - 8,6% , общее содержание достигло 41,83±6,24 и 41, 95±3,44 ммоль/л. Это находится в пределах физиологической нормы. У телят с тяжелым течением болезни содержание железа было существенно ниже нормы, за счет потерь с содержимым желудочно-кишечного тракта. Применение иммунометаболического комплекса обеспечило повышение содержания железа на 8,0 - 14,4 % , до нижней границы нормы. В контрольных группах столь выраженного повышения содержания железа не отмечено. Полученные результаты свидетельствуют о том, что при клиническом проявлении диарейного синдрома у телят развиваются выраженные нарушения в состоянии белкового и минерального обмена, находящиеся в прямой зависимости от тяжести течения заболевания. При тяжелом течении развитие эндогенной интоксикации приводит к накоплению токсичных продуктов межуточного метаболизма. Применение иммунометаболического комплекса телятам при клинически выраженной диарее позволило нормализовать основные параметры белкового и минерального обмена: при легком течении заболевания показатели достигли фи- 124 зиологической нормы, при тяжелом течении основные показатели метаболизма достоверно улучшились. Характерной особенностью действия иммунометаболической композиции является тенденция к нормализации как повышенных, так и пониженных показателей. Оценка иммунного статуса больных телят и влияние на него иммунометаболической композиции Вследствие нарушения метаболического фона, постоянного действия на животных неблагоприятных факторов внешней среды происходит снижение неспецифической резистентности и иммунобиологической реактивности организма животных. Возникновение, течение и исход желудочно-кишечных болезней у телят в значительной степени определяется иммунным статусом организма в ранний постнатальный период. Результаты исследований по оценке влияния испытуемой композиции на иммунологический статус телят с желудочно-кишечными заболеваниями представлены в таблице 28. Фоновые показатели естественной резистентности у телят с диарейным синдромом разной степени тяжести имели существенные отличия. БАСК в опытных и контрольной группах телят с легким течением болезни была примерно одинаковой и составляла 43,21±5,48 - 47,21±4,32 ед. /мл. У телят с тяжелым течением болезни БАСК была значительно ниже и находилась в пределах 24,8±2,92 - 27,8±3,42 % Показатель ФАН у больных с легким течением заболевания составлял 47,16±4,24 - 49,12±6,14%.. У тяжелобольных телят фагоцитарная активность была снижена и составляла в среднем 28,6±3,12 - 29,7±2,54%. По нашим наблюдениям, чем ниже был показатель фагоцитоза, тем тяжелее и продолжительнее болели телята. 125 Таблица 28- Влияние ЯК в сочетании с АСД- 2Ф на иммунологический статус телят с диарейным синдромом Показатели БАСК, % ФАН,% IgG, г/л IgM , г/л Т-лимфоциты,% В-лимфоциты,% Сроки исследования до лечения после лечения до лечения после лечения до лечения после лечения до лечения после лечения до лечения после лечения до лечения после лечения Группы 1 опытная 43,21±5,48 55,72±6,53* 49,12±3,14 38,78±5,42* 18,24±1,32 18,94±1,24 2,24±0,12 2,36±0,16 32,42±6,58 38,53±4, 34 8,23±0,36 10,14±0,16 2 опытная 47,21±4,32 59,14±3,28* 48,16±5,18 38,12±6,14* 18,32±1,14 19,46±1,12 2,28±0,14 2,46±0,12 36,02±2,46 36,42±7,53 8,48 ±0,46 9,98 ±0,46 3 контрольная 42,12±2,38 42,18±2,24 47,16±4,24 36,72±4,48 17,42±1,24 17,60±1,14 2,26±0,11 2,28±0,09 33,54±2, 134 33,53±3, 34 8,42 ±0,68 8,46 ±0,53 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем до начала опыта 4 опытная 24,82±2,92 24,41±3,76 28,60±3,12 29,80±2,16 6,86±0,98 9,32±1,17 2,04±0,08 2,16±0,06 18,86±2,36 19,46±1,86 4,86±0,36 5,36±0,22 5 опытная 27,81±3,42 30,95±3,42* 28,80±3,46 30,60±3,14 7,84±0,82 9,89±2,18 2,08±0,04 2,16±0,05 18,25±2,46 19,28±1,32 5,25±0,43 6,89±0,24* 6 контрольная 26,72±1,94 21,48±2,32* 29,70±2,54 29,40±1,92 6,46±0,28 6,53±0,47 2,11±0,11 2,18±0,08 19,86±3,42 19,89±2,78 4,82±0,24 4,85±0,32 126 БАСК ФАН Рис. 14 - Динамика показателей БАСК и ФАН у телят с диарейным синдромом, под влиянием проводимой терапии У больных телят с легким течением болезни было повышено фоновое содержание иммуноглобулинов, в особенности класса G, их количество находилось в пределах 18,24±1,32 - 18,32±1,14 г/л. что несколько выше уровня здоровых телят. В группах тяжело больных телят уровень Ig G был значительно понижен и составлял 6,46±0,28 -7,84±0,82 г/л. Особенно ярко выраженная гипогаммаглобулинемия отмечалась у животных, заболевших в течение первых суток после рождения. При фоновом исследовании до лечения содержание Т-лимфоцитов у телят с легким течением болезни было несколько повышено и находилось в пределах 33,54±2, 13- 34,53±4, 34 % . Уровень В-лимфоцитов составил 8, 23±0,36 -8,48±0,46 %, что существенно не отличается от уровня здоровых животных. Напротив, у животных с более тяжелым течением болезни отмечено достаточно выраженное снижение содержания Т-лимфоцитов, до уровня 18,25±2,46 19,86±3,42%. и существенное снижение количества В-лимфоцитов до уровня 4,82±0,24-5,25±0,43 %. Выраженное уменьшение количества Т- и В лимфоцитов в крови телят при тяжелой форме заболевания, может быть аппарата пищеварительного тракта, связано с поражением лимфоидного вследствие развития катарально- геморрагического гастроэнтерита с явлениями интоксикации и септицемии. 127 Таким образом, развитие диарейного синдрома сопровождается изменениями в иммунной системе телят и при легком течении заболевания приводят к активации защитных сил, а при развитии тяжелой формы ведет к состоянию выраженного иммунодефицита. После курса применения иммунометаболического комплекса на телятах опытных групп наблюдалось достоверное увеличение показателя БАСК до уровня 55,72±6,53 и 59,14±3,28 % . В третьей контрольной группе данный показатель не претерпел выраженных изменений. При тяжелом течении заболевания показатель БАСК после лечения все еще был значительно ниже, и составлял в четвертой опытной группе - 24,41±3,76 %, в пятой опытной группе - 30,95±3,42 %, а в шестой контрольной группе даже понизился по сравнению с фоновыми исследованиями (Р<0,05). Аналогичная тенденция отмечена и по показателю ФАН. После лечения показатель фагоцитоза в первой и второй опытной и третьей контрольной группах фактически не отличался от здоровых животных, составляя 38,78±5,42 %, 38,12±6,14 % и 36,72±4,48 % соответственно. ФАН у телят с тяжелым течение болезни после лечения в четвертой и пятой опытных группах не существенно повысилась, оставаясь все еще ниже нормы, а в шестой контрольной группе осталась на прежнем уровне. По уровню содержания Ig G были отмечены следующие изменения: у телят с легким течением болезни в первой опытной группе после лечения этот показатель повысился на 3,8%, во второй опытной группе - на 6,2 %, в третьей контрольной группе содержание Ig G осталось на прежнем уровне. В группах телят с тяжелым течением болезни содержание Ig G и после лечения все еще было существенно ниже нормы. Содержание Т- лимфоцитов после лечения так же было выше у телят с легким течением болезни. В первой опытной группе их относительное количество составляло 38,53±4,34 % во второй опытной группе - 36,42±7,53 % против 27,53±5, 34 % в третьей контрольной группе. Характерно, что у телят, которым не применяли антибиотики, уровень Т-лимфоцитов был существенно выше. В 128 группах телят с тяжелым течением болезни повышение уровня Т- лимфоцитов было менее выражено. Содержание В-лимфоцитов после лечения в первой и второй группах выросло на 23,2 % опытных и 17,6 % соответственно, в третьей контрольной группе этот показатель остался практически на прежнем уровне. При тяжелом течении данный показатель не пришел в границы физиологической нормы, однако наиболее выраженное увеличение, на 31,2 % отмечено в пятой опытной группе. Таким образом, включение иммунометаболического комплекса в курс ле- чения телят, с клиникой диарйного синдрома обеспечило нормализацию иммунного статуса животных, при этом достигнуто выраженное стимулирующее действие, как на гуморальное, так и на клеточное звено системы иммунитета. Оценка оксидантно-антиоксидантного статуса больных телят и влияние на него иммунометаболической композиции Результаты исследований по оценке влияния испытуемой композиции на процессы ПОЛ-АОЗ представлены в таблице 29. Фоновые показатели интенсивности ПОЛ во всех группах больных телят нарастали в зависимости от тяжести течения болезни. При легком течении (1-3 группы) интенсивность ПОЛ по показателям ДК была в пределах 0,29±0,03- 0,32±0,04 ед. опт. пл. /мг липидов При остром течении, с явлениями интоксикации (4-6 группы) уровень ДК был в пределах 0,48±0,04-0,52±0,04 ед. опт. пл. /мг липидов. 129 Таблица 28 - Влияние ЯК в сочетании с АСД -2Ф на состояние системы ПОЛ-АОЗ телят с диарейным синдромом Показатели ДК ед. опт. пл. /мг липидов МДА мкмоль/л КА мкМ Н2О2/л мин ГПО мМGSH/л·мин Сроки исследования Группы до лечения 1 опытная 0,29±0,03 2 опытная 0,32±0,04 3 4 контрольная опытная 0,30±0,04 0,48±0,04 5 опытная 0,52±0,04 6 контрольная 0,51±0,03 после лечения 0,24±0,03 0,23±0,02* 0,29±0,04 0,38±0,02* 0,40±0,06* 0,49±0,04 до лечения 2,30±0,02 2,28±0,08 2,30±0,03 3,26±0,08 3,42±0,06 3,38±0,08 после лечения 2,18±0,04* 2,10±0,04* 2,29±0,04 3,02±0,06 * 3,12±0,06* 3,36±0,08 до лечения 25,01±1,83 22,52±1,24 24,90±2,04 14,52±1,78 16,26±1,28 17,46±1,18 после лечения 34,01±1,48 38,52±1,24 25,08±1,94 24,01±1,69 22,02±1,42 17,52±1,16 до лечения 7,21±0,12 6,15±0,15 8,68±0,24 4,32±0,18 5,16±0,29 5,26±0,18 после лечения 11,02±0,10 12,18±0,18 8,72±0,32 7,28±0,12 8,15±0,25 5,28±0,14 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем до начала опыта 130 Аналогичные изменения отмечены и в содержании МДА. В группах с легким течением болезни данный показатель не превышал 2,30±0,02 мкмоль/л, тогда как при тяжелом течении содержание МДА находилось в пределах 3,26±0,08 3,42±0,06 мкмоль/л. Полученные данные свидетельствуют о прямой зависимости интенсификации ПОЛ от тяжести течения заболевания. Логичным представляется, что мобилизация активности АОЗ и ее функциональное состояние определяется тяжестью воспалительных реакций. Полученные нами данные подтверждают это представление. Показатели АОЗ отчетливо снижены уже у больных телят 1-3 групп, т.е. с умеренно выраженными симптомами и выражено ухудшены у больных животных 4-6 групп, т.е. при тяжелом течении болезни. Так, показатель КА у телят 1-3 группы находился в пределах 22,52±1,2425,01±1,83 мкМ Н2О2/л ·мин, тогда как у телят с тяжелым течением болезни не превысил 17,46±1,18 мкМ Н2О2/л ·мин. Аналогичная тенденция прослеживается и при определении величины ГПО. е д .о п т.п л ./м г л и п и д о в Диеновые конъюгаты 0,6 0,5 0,4 0,3 до лечения 0,2 0,1 после лечения 1 о п ы тн а я 2 о п ы тн а я 3 4 о п ы тн а я 5 о п ы тн а я 6 0 Рис.15 - Изменение содержания продуктов ПОЛ в крови больных телят В контрольных группах больных телят, лечившихся по схеме, принятой в хозяйстве, проведенное лечение не снизило интенсификацию ПОЛ по анализируемым параметрам. Содержание ДК по-прежнему превышало уровень физиоло- 131 гической нормы и мало отличалось от исходного. Аналогичная картина наблюдалась в содержании МДА. Параметры АОЗ (КА и ГПО) по-прежнему оставались ниже уровня физиологической нормы, незначительно повысившись под влиянием лечения. Общим выводом для контрольных групп больных телят является отсутствие существенных положительных сдвигов в системе «ПОЛ-АОЗ» после проведения курса традиционного лечения. Включение в схему лечения иммунометаболической композиции у телят с легким течением болезни привело к выраженным положительным сдвигам в системе «ПОЛ-АОЗ». В результате проведенного лечения у больных телят динамика анализируемых параметров была столь существенна, что их уровень достиг уровня здоровых телят. Показатель содержания ДК в первой и второй опытных группах снизился до уровня 0,24±0,03 и 0,23±0,02 ед.опт. пл/мг липидов, соответственно. Содержание МДА в этих группах так же понизилось до уровня 2,18±0,04 и 2,10±0,04 мкмоль/л. Показатель активности каталазы в первой и второй опытных группах повысился и достиг уровня 34,01±1,48 и 38,52±1,24 мкМ Н2О2/л ·мин. Активность ГПО так же существенно возросла. Применение иммунометаболического комплекса в группе тяжелобольных телят привело к положительным сдвигам всех анализируемых параметров. Отмечено достоверное снижение интенсивности ПОЛ по показателям ДК (Р<0,05). Так в четвертой и пятой опытных группах данный показатель снизился на 20,8% и 23,1 % соответственно. Содержание МДА в четвертой и пятой группах понизилось на 7,3 % и 8,8 % соответственно. Применение иммунометаболической композиции оказало положительное влияние на активность АОЗ. Наблюдалось нарастание уровня активности КА и ГПО плазмы крови (Р<0,05). Тем не менее, и эти параметры не достигли уровня активности АОЗ, характерной для здоровых телят. Таким образом, результаты исследований по оценке влияния иммунометаболического комплекса на состояние ПОЛ и АОЗ у телят, больных диареей вирусно-бактериальной этиологии, выявило интенсификацию процессов ПОЛ и снижение активности в системе АОЗ, находящейся в прямой зависимости от варианта клинического течения заболевания. Применение традиционного лечения в 132 условиях хозяйства привело к клиническому улучшению состояния больных телят, но существенно не повлияло на интенсивность перекисных процессов. Включение в базовую схему лечения ЯК в сочетании с АСД-2Ф существенно снизило интенсивность ПОЛ и повысило активность АОЗ. Эффективность иммунометаболической композиции при лечении желудочно-кишечных заболеваниях телят определяли по результатам ежедневного клинического осмотра животных с учетом данных лабораторных исследований. В таблице 30 приведены результаты применения иммунометаболической композиции при заболеваниях телят с синдромом диареи различной степени тяжести. Таблица 30 - Терапевтическая эффективность ЯК в сочетании с АСД -2Ф при диарейном синдроме Результаты лечения Группы животных 1 опытная 2 опытная 3 контрольная 4 опытная 5 опытная 6 контрольная Количество (гол) Выздоровело гол/% 14 14 14 8 9 9 14/100 14/100 14/100 5/62,5 9/100 6/77,7 Длительность болезни, сутки 3,5 2,7 6,5 4,7 5,5 8,5 Пало гол/% 0/0 0/0 0/0 3/37,5 0/0 3/22,3 Клиническое выздоровление телят с легкой формой заболевания на фоне применения иммунометаболического комплекса в сочетании с диетой достигнуто на 2-4 день. При сочетанном применении испытуемой композиции в комплексе с антибиотиками длительность заболевания не превышала 2-3 дней. Напротив, лечение телят по традиционной схеме обеспечивало клиническое выздоровление лишь на 5-7 сутки. В случае тяжелого течения заболевания включение ЯК в сочетании с АСД 2Ф в традиционную схему лечения сократило средний срок выздоровления до 5,5 дней, против 8,5 в контрольной группе. 133 Таким образом, применение иммунометаболической композиции при диарейном синдроме телят обеспечило эффективную коррекцию метаболического, иммунного и антиоксидантного статуса больных телят и позволило достичь клинического выздоровления без использования антибиотиков. При тяжелой форме заболевания, сопровождающейся явлениями интоксикации и обезвоживания, применение испытуемой метаболической композиции выражено усилило эффективность проводимой антибиотикотерапии, что проявилось сокращением сроков выздоровления больных животных. 3.1.4.3 Результаты применения имунометаболической композиции при респираторных заболеваниях телят В настоящее время проблемы современной инфекционной патологии связаны с неизменным снижением эффективности антибиотиков. Эта проблема активизировала исследовательскую деятельность по целому ряду направлений. В области инфекционной патологии получены принципиально новые данные о том, что выздоровление при вирусных и бактериальных инфекциях связано не только с удалением из организма возбудителя, но и с выключением иммунопатологических процессов, индуцированных патогенным агентом. В этой связи повышение эффективности антибиотикотерапии инфекционных заболеваний вполне может быть достигнуто за счет восстановления иммунологических дефектов и стимуляции метаболизма. Это обстоятельство было принято во внимание при проведении научных исследований по оценке влияния ЯК в сочетании с АСД 2-Ф на эффективность средств антибиотикотерапии и специфической профилактики. Первый целенаправленный научно-производственный экспериментальный опыт был проведен в условиях ОАО «Амосовский» Медвенского района. Серологический фон свидетельствовал о циркуляции среди животных вирусных патогенов – ПГ-3 и ВД – БС. Возбудители вирусных заболеваний оказывают иммуннодепресивное действие на иммунную систему. Такой фон благоприятствуют активации условно-патогенной микрофлоры. Следует отметить, что циркуляция вирусных патогенов респираторных заболеваний явление весьма распространенное. 134 Именно этот аспект мы приняли во внимание, оценивая возможность практической реализации нашей разработки при респираторной патологии. В данном научно-производственном экспериментальном опыте объектами для проведения исследований являлись телята 2 -3 месячного возраста с клиникой респираторного синдрома. Исходя их тяжести клинических симптомов в одну группу (легкое течение) отобрали 12 больных телят. Клинически у них наблюдали сухой кашель, серозно-слизистые истечения из носовых ходов, легкое угнетение, снижение аппетита. Температура тела 40,0-40,5°С. В другую группу (n=10) включили животных, у которых респираторный синдром проявлялся влажным кашлем, затрудненным дыханием. Температуры тела 41,5 - 42,0°С. Истечения из носовых ходов имели гнойно-катаральный характер. У них наблюдали выраженное угнетение и отсутствие аппетита. Подопытных телят разделили на 4 группы: две легким течением болезни : первая опытная (n=8), вторая контрольная(n= 4) , и две с тяжелым: третья опытная (n=6) и четвертая контрольная (n=4). В контрольных группах для лечения телят применяли курс антибиотикотерапии гентамицином. Телятам опытных групп в дополнение к антитбиотикотерапии одновременно был назначен курс иммунометаболической композиции на основе ЯК с АСД -2Ф, внутримышечно, в дозе 3 мл. Продолжительность курса лечения определялась клиническим выздоровлением телят. Оценка иммунного статуса больных телят и влияние на него иммунометаболической композиции В процессе курса лечения мы контролировали изменения в иммунном статусе подопытных телят. Исследования крови проводились до лечения (фон) и после клинического выздоровления. Результаты представлены в таблице 31. 135 Таблица 31 - Влияние ЯК в сочетании с АСД -2Ф на иммунный статус при респираторном синдроме телят Показатели БАСК % ФАН ,% IgG,г/л IgM, г/л Т-лимфоциты,% В-лимфоциты,% Сроки исследования до лечения после лечения до лечения после лечения до лечения после лечения до лечения после лечения до лечения после лечения до лечения после лечения 1 опытная 56,32±6,44* 41,36±5,13** 39,12±6,14 45,38±4,51** 15,68±1,26* 13,56±1,98 1,32±0,35 1,43±0,42 42,25±5,64 32,22±7,53 8,34±0,92 9,37±1,36 Группы 3 опытная 2 контрольная 54,42±5,32* 31,25±6,23 38,16±6,12 41,14±6,11 15,32±1,24* 10,34±1,14 1,28±0,32 1,37±0,48 41,32±4,34 30,56±3, 52 8,31±1,15 7,75±1,68 48,92±6,87 32,27±2,31 23,51±4,38* 35,34±4,67** 6,16±0,79 9,39±1,52 0,84±0,28 1, 17±0,43 21,76±3,45 29,45±3,74 7,41±1,65* 8,34±1,72** *-Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем у здоровых телят; **-Р <0,05 достоверность различий с соответствующим показателем до лечения 4 контрольная 47,62±6,48 26,85±2,57 24,02±4,28* 25,73±3,68 7,19±0,72 6,54±0,69 0,87±0,39 0,98±0,67 21,26±3,28 23,16±2,35 7,38±1,25* 5,14±1,32** 5 здоровые телята 38,24±3,45 37,28±6,10 9,83±0,62 1,13±0,21 32,35±2,34 8,35±0, 85 136 По результатам исследований установлено, что показатели БАСК в группе телят с легким течением болезни находились в пределах 54,42±5,32-56,32±6,44 %. У телят с тяжелым течением болезни показатель БАСК находился в пределах 47,62±6,48 - 48,92±6,87 %. После курса лечения показатель БАСК в первой опытной группе достиг уровня здоровых телят и составил 41,36±5,13 %. В третьей опытной группе БАСК снизилась до уровня 32,27±2,31 %. В контрольных группах показатель БАСК так же снизился. ФАН у больных с легким течением была несколько выше, чем у здоровых телят, достигая уровня 39,12±6,14%. У тяжелобольных животных фагоцитарная активность была снижена до уровня 23,51±4,38 - 24,02±4,28%. Это свидетельствует о выраженных иммунологических нарушениях. После курса лечения показатель ФАН в третьей опытной группе существенно повысился, достигнув уровня 35,34±4,67%. В остальных группах повышение показателя не было столь существенным. БАСК ,% ФАН,% Рис. 16 - Динамика показателей БАСК и ФАН у телят с респираторным синдромом, под влиянием проводимой терапии Фоновое содержание иммуноглобулинов класса G у больных телят в группе с легким течением болезни было достоверно выше уровня здоровых (Р<0,05). Напротив, у телят с тяжелым течением болезни, уровень Ig G был ниже показателей здоровых. После лечения содержание Ig G в первой опытной группе несколько снизилось. В третьей опытной группе (с тяжелым течением болезни) на- 137 против, повысилось, почти достигнув уровня здоровых животных. Аналогичная тенденция отмечалась в содержании иммуноглобулинов класса М. Фоновое количество Т-лимфоцитов у телят с легкой формой заболевания было фактически на уровне здоровых (42,25±5, 64 %). Напротив, у телят с тяжелой формой заболевания снижалось до показателей 21,26±3,28-21,76±3,45 %, что свидетельствует об истощении защитных сил. После курса лечения показатель содержания Т-лимфоцитов в первой и третьей опытных и второй контрольной группе приблизился к показателям клинически здоровых телят. В четвертой (контрольной) группе остался на уровне 23,16±2,35, что достоверно ниже уровня здоровых телят. Рис. 17 – Изменение содержания Т- лимфоцитов у телят с респираторным синдромом под влиянием проводимой терапии Фоновое количество В-лимфоцитов у телят с легким течением болезни не превышало показателя здоровых животных, а у тяжелобольных было несколько снижено (Р<0,05). После курса лечения наиболее выраженные изменения были отмечены у телят с тяжелым течением болезни. При этом в опытной группе телят показатель содержания В-лимфоцитов повысился, а в контрольной – снизился. Таким образом, применение испытуемой композиции обеспечило выраженное позитивное воздействие на систему иммунитета. Наиболее выраженные изме- 138 нения отмечены при существенном начальном отклонении иммунологических показателей от уровня здоровых, как в сторону увеличения, так и уменьшения. Результаты оценки применения испытуемой композиции для повышения эффективности средств антибиотикотерапии при лечении респираторного синдрома телят представлены в таблице 32. Таблица 32 - Терапевтическая эффективность ЯК в сочетании с АСД-2Ф при респираторных заболеваниях телят Группа 1 опытная 2 контрольная 3 опытная 4 контрольная Результаты лечения Количество, Выздоровело Длительность голов голов/% болезни, сутки 8 8/100 4-5 4 4/100 8 6 6/100 7-8 4 3/75 11-12 Пало голов/% 0/0 0/0 0/0 1/25 Клинические наблюдения. У телят первой опытной группы, которым применяли гентамицин в сочетании с испытуемой композицией, уже на следующий день наблюдали выраженное улучшение клинического состояния. На 4-5 сутки диагностировано полное клиническое выздоровление у всех восьми телят с легким течением болезни. Срок выздоровления четырех телят втрой контрольной группы, которым применяли только антибиотик, составил 8 суток. При тяжелом течении болезни в контрольной группе один теленок пал на третьи сутки. Выздоровление остальных наступило на 11-12 день. В опытной группе выздоровело 100% телят. Период лечения составил 7-8 дней. Проведенные исследования свидетельствуют о том, что применение иммунометаболического комплекса обеспечило благоприятный иммунометаболический фон, что имело решающее значение в вопросе усиления эффективности антибиотикотерапии и ускорении клинического выздоровления телят при респираторном синдроме. Во втором научно-производственном экспериментальном опыте мы провели оценку эффективности нашей разработки при вспышке респираторных заболеваний телят в ОАО «Гарант» Беловского района. В этом хозяйстве имела место 139 циркуляция вирусных патогенов ПГ-3 и ИРТ. Общее поголовье молодняка составляло 240 голов. Клинически выраженный респираторный синдром наблюдали у 98 особей. Исходя из клинического статуса, у 56 отмечалось легкое течение болезни, с умеренно выраженными симптомами. У 42 телят – более тяжелое течение, у некоторых с проявлением сердечно-сосудистой недостаточности. Для проведения исследований больных телят разделили на 6 групп: Три с легким течение болезни: первая опытная (n = 20), вторая опытная (n = 20), третья контрольная (n = 16), и три стяжелым течением: четвертая опытная (n = 15), пятая 5 опытная (n = 15), шестая контрольная (n = 12). Больным телятам первой и четвертой опытных групп назначали диету и вводили ЯК в сочетании с АСД- 2Ф (внутримышечно, в дозе 5 мл, 1 раз в день, 48 дней) без применения антибиотиков. Во второй и пятой опытных группах лечение проводили по схеме, принятой в хозяйстве (антибиотик гентамицин и витамин С) и дополнительно вводили испытуемую композицию в той же дозе. В контрольных группах телят лечили по схеме, принятой в хозяйстве (антибиотик гентамицин и витамин С). За телятами велось постоянное клиническое наблюдение. В таблице 33 приведены сводные результаты оценки эффективности применения испытуемой композиции при клинически выраженных респираторных заболеваниях различной степени тяжести на фоне антибиотикотерапии. Таблица 33 -Лечебная эффективность ЯК в сочетании с АСД -2Ф при респираторных заболеваниях телят в ОАО «Гарант» Группа 1 опытная 2 опытная 3 контрольная 4 опытная 5 опытная 6 контрольная Результаты лечения Количество, Выздоровело, Длительность гол. гол/% болезни, сутки 20 20/100 3,5 20 20/100 3,0 16 16/100 4,5 15 9/60 8,0 15 14/93,3 7,5 12 9/75 10,5 Пало гол./% 0/0 0/0 0/0 6/40 1/6,7 3/25 140 По результатам научно-производственного опыта нами установлено, что применение иммунометаболического комплекса обеспечило 100 % клиническое выздоровление телят. Коррекция иммуннобиохимического статуса позволила в короткие сроки добиться клинического выздоровления телят при легком течением болезни. При тяжелом течении заболевания сочетание антибиотиков и иммунометаболического комплекса позволило существенно повысить лечебную эффективность антибитикотерапии и ускорить клиническое выздоровление. Положительный эффект при лечении респираторных заболеваний, обусловленных ассоциацией P.multocida и S.dublin отмечен СХПК им. Черняховского. Курского района. В этом хозяйстве испытуемую композицию применяли на 36 телятах, в дозе 2 мл, с интервалом 24 часа, в сочетании с антибиотиками. В аналогичном порядке иммунометаболический состав был применен в ООО «Животновод», Фатежского района (отделения «Банино» и « Быстрец») при вспышке пастереллеза. Применение иммунометаболического комплексав дозе 2 мл с интервалом 24 часа, в сочетании с антибиотиками, обеспечило быстрое купирование респираторного синдрома и клиническое выздоровление 69 из 76 телят (97,3 %). Проведенные научно-производственные экспериментальные опыты свидетельствовали о том, что иммунометаболический комплекс на основе ЯК в сочетании с АСД-2Ф обладает высокой эффективностью при респираторных заболеваниях телят смешанной вирусно-бактериальной этиологии. Этот комплекс может применяться в качестве монотерапии при легком течении болезни и как средство профилактики при риске активации инфекционного процесса. При тяжелом течении эффективно его применение в сочетании с антибиотиками. Полученные результаты научно-производственных экспериментальных опытов послужили основанием для проведения широкомасштабных клинических испытаний нашей разработки в хозяйствах со схожей клинико - эпизоотологической характеристикой респираторных заболеваний у телят и молодняка крупного рогатого скота. В качестве наглядной иллюстрации в таблице 34 мы приводим результаты применения иммунометаболического комплекса при вспышках респираторных заболеваний. 141 Таблица 34 - Сводные результаты эффективности испытания «Янтарного биостимулятора» в системе мер профилактики и лечения при вспышках респираторных заболеваний телят (2005-2007г.г.) Район Хозяйство Уровень заболеваемости до применения ЯБС 2005 г. (%) 70 Этиология ПГ+УПМ Порядок применения ЯБС Беловский ОАО «Гарант» ЯБС+антибиотики тетрациклиноавого ряда, затем вакцинация ЯБС+антибиотики окситетрациклинового ряда, затем вакцинация ЯБС (без антибиотиков) ЯБС+20% норсульфазол Б. Солдатский ООО «Заря» ООО «Маяк» 80 30 ПГ+УПМ ИРТ+УПМ Конышевский Кореневский ПТ «Надежда» ООО «Черниченское» СПК «Большевик» 30 20 60 ПГ+УПМ УПМ ИРТ+УПМ Курский Курчатовский СПК «Ленинский призыв» КФВ «Дружба» АПК КАЭС 40 30 30 Медвенский СПК «Амосовский» 30 ИРТ+ВД+УПМ УПМ Пастерелез+ УПМ+ некробактериоз ВД+УПМ ЯБС, затем вакцинация ЯБС (без антибиотиков) ЯБС+антибиотики етрациклиноавого ряда. Затем вакцинация ЯБС Затем вакцинация «Комбовак» ООО «Медвенка-Агро» 20 УПМ ЯБС+антибиотики Кол-во телят Уровень заболеваемости после применения ЯБС 2006-2007 г.г. (%) 240 10 180 48 Единичные случаи Единичные случаи 75 70 180 Единичные случаи Единичные случаи 10 140 240 500 10 Единичные случаи Единичные случаи 1500 10 300 Единичные случаи 142 Учитывая полученные результаты, в прогнозируемые периоды вспышек желудочно-кишечных и респираторных изаболеваний в 2005 и 2006 г.г. провели обработку животных иммунометаболической композицией в 201 хозяйстве Курской области, всего профилактической обработке было подвергнуто 34601 голова. В предварительных опытах нами было установлено, что при однократном внутримышечном введении испытуемые композиции телятам – гипотрофикам и коровам при метаболическом ацидозе наблюдалась хорошо выраженная тенденция к нормализации показателей белкового обмена, кислотно- щелочного баланса и кальций – фосфорного соотношения. Этот эффект нами был отмечен на 7 -10 сутки. Это служило основанием, для определения кратности применения иммунометаболического состава раз в 10 – 14 дней, в общепринятых для животных объемах, а именно, для телят 2-3 мл, молодняку 5-7 мл, взрослым коровам -10 мл. Собственно эти дозировки мы и использовали в своих клинических опытах. Перечень хозяйств и количество телят, подвергнутых обработке иммунометаболическим комплексом с лечебной и профилактической целью, приведены в таблице 35. Таблица 35– Количество телят, подвергнутых обработке «Янтарным биостимулятором» в ходе производственного испытания в 2005-2006 г. Район Беловский Б.Солдатский Глушковский Хозяйство ОАО «Гарант» ООО «Белица» ООО «Заря» ООО «Дружба» ООО «Победа» СХПК «Новая жизнь» ООО «Бобровское» ООО «Русское поле» СХПК «Надежда» ОО АФ «Правда» ПТ «Надежда» ООО «Маяк» ЗАО «Н-Гридино» ЗАО «Рассвет» СПК «Рассвет» СПК «Красное знамя» СПК «Родина» СПК «Н-Заря» Количество телят 2005 2006 200 200 250 160 350 300 480 450 73 150 264 300 80 350 350 509 380 100 400 260 700 200 300 80 98 122 320 306 290 200 220 150 143 Горшеченский Дмитриевский Железногорский Золотухинский Касторенский Конышевский Кореневский Курский Курчатовский Льговский Мантуровский Медвенский Обоянский Октябрьский Поныровский СПК «Рассвет» ОАО «Завет Ильича» СПК «Восход» СПК им. Фрунзе СПК им. Орджоникидзе СПК «Прогресс» СПК «Рассвет» ООО «Дружба» ЗАО «Мир» ООО «АФ Горняк» ООО «Родина» СПК «Свобода» СПК «Россия» СПК «Русь» СПК «Заря» СПК «Зиборовский» СПК им. К. Маркса ОАО «12 конный завод» СПК «Искра» ООО «Агрохлеб» СКП «Победа» ООО «Черниченское» 185 40 125 65 97 47 85 250 250 100 100 75 51 117 42 40 342 520 48 60 70 СПК «Авангард» СПК «Большевик» СПК им. Кирова СПК «Заря» СПК «Коренево» СПК им. Черняховского КФХ «Дружба» ГУП АПК КАЭС МТФ №1 ОО «Прогресс» Иволга Колхоз им. 1 мая СПС «Рассвет» ООО «Венера» Селекционная станция ООО «Стела» ГУОС «Льговское» СХПК «Гигант» СХПК «Гвардеец» СХПК им. Ильича ЗАО « Куськинское» СХПК «Искра» СПК «Амосовский» ООО «Афанасьево» ООО «Долженково» Агро СХПК !Победитель» СХПК «Майский» СХПК «Родник» ОАО «Агрогрейн» 120 330 180 520 360 1335 270 508 90 200 180 50 210 111 133 30 676 90 427 737 246 50 38 - продолжение таблицы 35 933 175 741 71 100 250 396 25 140 54 81 160 120 80 343 150 59 200 150 250 750 730 276 1376 180 180 30 40 100 406 36 33 142 434 460 80 25 43 78 115 144 Пристенский Рыльский Советский Солнцевский Суджанский Тимский Фатежский Хомутовский Черемисиновский Щигровский г. Курск Итого ООО «Агростройсервис» ООО «Котово» СХПК «Восход» СПК «Ивановское» СХПК «Заря мира» ООО «Русь» ООО «Восход» ООО «Восползованное» ООО «Афанасьевское» ООО им. 1 мая СХПК «Княжеское» СХПК «Прогресс» Колхоз им. Винниченко ОАО «Альянс-юг» ОАО «Борки» СПКР «Поречное» ПСХК «Нива» ООО «Становое» ООО «Животновод» ЗАО «Престиж» ООО «Сальное» ОАООН «Дубовица» ООО «Стефания» ООО «Стрекалово» СХПК «Новосавенское» ПК «Маяк» СПК «Луч свободы» СПК им. Ленина ООО «Защитное» ООО «Щигры –главпродкт» Учхоз «Знаменское» КГСХА 201 35 291 76 86 80 560 350 140 135 25 157 50 260 111 366 171 180 142 194 12775 продолжение таблицы 35 142 270 181 652 392 200 95 15 195 155 100 288 560 350 170 165 272 40 1400 52 526 100 120 69 417 161 88 400 205 274 185 21826 Иммунометаболическая композиция применялась в прогнозируемые периоды риска развития патофизиологических состояний. Предпринятые меры позволили резко улучшить эпизоотическую ситуацию. Заболеваемость животных в 2006-2007г. составила не более 10% поголовья. В большинстве хозяйств регистрировались лишь единичные случаи заболевания. 145 3.1.5 Применение иммунометаболической композиции для создания благоприятного иммунобиохимического фона при вакцинации В последние месяцы стельности в организме коров происходят глубокие изменения в обмене веществ и иммунной системе. Такой фон является неблагоприятным для проведения вакцинации. Однако, вакцинация коров это обязательное мероприятие, которое проводится по эпизоотологическим показателям для повышения иммуногенных свойств молозива. От наличия специфических антител в молозиве зависит состояние иммунологической резистентности новорожденных телят. По мнению ряда исследователей, вакцинация животных, проводимая на фоне глубоких нарушений обмена веществ, значительно снижает эффективность вакцины (А.Г. Глотов с соавт., 2003; В.А. Мищенко с соавт., 2005). Применение вакцин на фоне нарушенных обменных процессов не обеспечивает формирование достаточно напряженного иммунитета или же вызывает состояние иммуносупрессии. Клинические наблюдения свидетельствуют о том, что проведение вакцинации зачастую провоцирует активность эндогенной инфекции. В настоящее время распространена практика применения иммуномодуляторов для коррекции иммунных процессов в прогнозируемые периоды развития иммунодефицитных состояний. Однако применение иммунокоррегирующих средств на фоне разбалансированных обменных процессов, может привести, и зачастую приводит, к отрицательному побочному эффекту. Обменные и иммунные процессы в организме тесно связаны между собой. В этой связи считаем правомерной реализацию концепции по одновременной стимуляции системы иммунитета и обменных процессов. Реализация этой концепции в практике сдерживается отсутствием эффективных метаболических средств. В свою очередь, среди достаточно большого количества препаратов, стимулирующих иммунные процессы, не все получили признание в практической ветеринарии. В основном это связано с недостаточным стимулирующим эффектом или односторонним механизмом действия. Это обстоятельство послужило основанием для проведения собственных исследований 146 по изучению эффективности применения средств иммунометаболической направленности при вакцинации животных. Повышение эффективности вакцинации против вирусных болезней крупного рогатого скота С целью создания благоприятного иммунобиохимического фона, повышения эффективности вакцинации, коррекции иммунометаболического статуса и стимулирования образования специфических антител мы изучали возможность совместного применения иммунометаболической композиции на основе ЯК и АСД 2-Ф и вакцины «Комбовак» (НПО «Нарвак», г. Москва), представляющей собой инактивированные антигены вирусов ИРТ, ВД, ПГ-3, респираторносинцитиальной инфекции, рота-коронавирусной болезни телят Научно-производственные опыты по повышению эффективности вакцинации против вирусных болезней крупного рогатого скота проводили в условиях СПК «Амосовский» Медвенского района Курской области. Для определения эффективности вакцинации в хозяйстве, было сформировано 2 группы глубокостельных коров (опытная и контрольная), по 15 голов в каждой. Все животные подверглись двукратной вакцинации вакциной «Комбовак». В опытной группе проводили одновременное введение метаболической композиции на основе ЯК и АСД 2-Ф, в объеме 10 мл, в контрольной группе вакцинацию проводили без стимулятора. Показатели обмена веществ, иммунный статус и содержание сывороточных вирусоспецифических антител определяли у животных контрольной и опытной групп перед введением вакцины и через 21 день после второй вакцинации. Коррекция иммунометаболического статуса коров при вакцинации Результаты исследований по определению состояния обмена веществ у глубокостельных коров представлены в таблице 36. При анализе полученных результатов видно, что метаболический фон для вакцинации не был оптимальным. У коров регистрировался избыток белка (87,24±2,74-89,21±2,28 г/л), дефицит резервной щелочности (34,25±2,48 37,64±2,57 об. % CO2), повышенное содержание кетоновых тел и фосфора, при 147 недостатке кальция. Все эти показатели указывают на существенные нарушения в обмене веществ. Такой фон является неблагоприятным для проведения вакцинации. Как и следовало ожидать, применение испытуемой композициии оказалось весьма эффективно для устранения метаболического ацидоза. После вакцинации с одновременным применением иммунометаболического комплекса показатель резервной щелочности у большинства животных пришел в норму. Нормализация показателя кислотно-щелочного баланса указывает на позитивные изменения в обменных процессах. Содержание белка в опытной группе после вакцинации было в пределах физиологической нормы. Это свидетельствует о благоприятном влиянии иммунометаболической композиции на биосинтез белка в организме, в т.ч. об усилении роли печени в белковом обмене. Об улучшении работы печени можно было судить и по снижению показателя кетоновых тел в крови. Показатель содержания кальция после введения иммунометаболической композиции повысился до физиологических значений - 2,51±0,14 ммоль/л. В контрольной группе показатели метаболизма не претерпели существенных изменений. Результаты определения иммунного статуса представлены в таблице 37. Фоновые исследования показывают, что у глубокостельных коров имелись признаки иммунодефицитного состояния: пониженное содержание Т-лимфоцитов 36,2±3,2- 38,1±3,2% , Ig G – 18,36-18,43 г/л; показателей БАСК и ФАН. Введение ЯК в сочетании с АСД 2-Ф при вакцинации позволило выражено повысить иммунный статус глубокостельных коров. У коров опытной группы повысился показатель БАСК. Содержание Т- лимфоцитов увеличилось до уровня 46,6±5,9% и Ig G до уровня 22,45±0,36 г/л. Данные по определению титров антител представлены в таблице 38. . 148 Таблица 36 - Основные показатели обмена веществ у коров до- и после применения вакцины «Комбовак» и иммунометаболического комплекса Сроки иссле- Группы дования, дни Белок,г/л До вакцинации После вакцинации 87,24±2,74 89,21±2,28 78,62±1,42 89,5±0,84 опыт контроль опыт контроль Кетоновые тела, Кальций, Резервная ммоль/л щелочность об. ммоль/л % CO2 34,25±2,48 0,96±0,02 2,14±0,16 37,64±2,57 0,90±0,04 2,09±0,12 52,9±2,32* 0,74±0,07 2,51±0,14 40,8±1,43 0,92±0,05 2,14±0,12 Фосфор, ммоль/л 1,98±0,26 1,94±0,32 1,78±0,32 1,96±0,29 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем до вакцинции Таблица 37- Основные иммунологические показатели у коров до- и после применения вакцины «Комбовак» и иммунометаболического комплекса Сроки иссле- Группы дования, дни До опыт вакцинации контроль БАСК,% ФАН, % IgM, г/л: Ig G, г/л: 18,36±2,34 Т-лимфоциты, % 38,1±3,2 В-лимфоциты, % 24,7±5,4 56,5±1,7 45,6±0,8 2,45±0,36 56,4±1,2 46,1±1,5 . 2,27±0,18 18,43±3,23 36,2±3,2 23,3±3,9 После вакцинации опыт 64,3±6,3 64,5±8,1 2,45±0,36 22,45±0,36 46,6±5,9* 29,5±5,2 контроль 58,3±5,5 52,5±9,5 2,27±0,18 19,27±0,18 37,5±5,1 22,5±1,5 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем до вакцинации 149 Таблица 38 -Титры вируснейтрализующих антител в сыворотке крови коров до и после применения вакцины «Комбовак» и иммунометаболического комплекса Титры вируснейтрализующих антител, lg2 до вакцинации после вакцинации контроль опыт контроль опыт ИРТ 2,72 ± 0,18 2,38 ± 0,26 5,74 ± 1,26 7,32± 2,24* ВД-БС 2,54±0,23 1,94±0,28 5,82±1,28 7,36±2,24* ПГ-3 3,82±0,28 3,12±0,26 7,62±2,24 9,10±1,28* РСИ 1,83±0,09 2,60±0,12 4,86±0,58 5,62±1,12* Рота-вирус 1,63±0,08 1,20±0,21 3,63±0,72 4,26±0,28* Корона-вирус 2,16±0,11 2,24±0,11 4,26±0,81 5,26±0,62* Антигены * Р < 0,001 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы Все прививаемые коровы до вакцинации имели низкий уровень гуморальных антител к ИРТ -2,38 ± 0,26 -2,72 ± 0,18 lg2; ВД-БС -1,94±0,28-2,54±0,23 lg2; ПГ-3-3,12±0,26-3,82±0,28 lg2; РСИ-1,83±0,09-2,60±0,12 lg2; рота-вирус-1, 20±0,211,63±0,08; корона-вирус-2,16±0,11-2,24±0,11 lg2. У иммунизированных контрольных и опытных животных отмечалась сероконверсия по всем компонентам вакцин. Однако различия в показателях были весьма выражены (Р<0,05) - Рис.18 - Изменение тиров вируснейтрализующих антител в крови коров после вакцинации 150 Среднестатистический титр антител к вирусам ИРТ, ВД-БС, ПГ-3 КРС, РСИ, рота- и корона- у коров в контрольной группы по сравнению с фоном увеличился в 2,47; 2,68; 2,25; 2,65; 2,22 и 1,97 раза соответственно. В опытной группе среднестатистический титр антител к вирусам ИРТ, ВД-БС, ПГ-3 КРС, РСИ, ротаи корона- превышал таковой по отношению к контрольной группе на 8,6; 7,9; 5,6; 15,6; 17,3 и 23,4 % , соответственно. Таким образом, коррекция метаболического и иммунного статуса создала благоприятный фон для проведения вакцинации глубокостельных коров и привела к выраженному усилению иммунного ответа и активизации выработки специфических противовирусных антител. Коррекция метаболического и иммунного статуса телят при вакцинации Для изучения влияния иммунизации коров в сочетании с изучаемой композицией на титр противовирусных колостральных антител и формирование иммунного ответа было сформировано 2 группы телят: Первая опытная группа (n=10 ) - телята, рожденные от коров, привитых в сочетании с иммуннометаболическим комплексом, вторая контрольная группа (n=10 ) - от коров, привитых обычным способом. Результаты иммунологических исследований представлены в таблице 40 У телят определяли титры гуморальных антител в возрасте 10-14 дней. В дальнейшем телятам опытной группы вводили вакцину «Комбовак» в сочетании с испытуемой композицией, а телятам контрольной группы без нее. 151 Таблица 39 - Основные показатели обмена веществ у телят до- и после применения вакцины «Комбовак» и иммунометаболического комплекса Сроки исследования, дни До вакцинации После вакцинации Группы опыт контроль опыт контроль Белок,г/л 87,24±2,74 89,21±2,28 78,62±1,42 89,5±0,84 Резервная щелочность, об. % CO2 34,25±2,48 37,64±2,57 52,9±2,32* 40,8±1,43 Кетоновые тела, Кальций, ммоль/л ммоль/л Фосфор, ммоль/л 0,96±0,15 0,90±0,14 0,74±0,12 0,92±0,15 1,98±0,26 1,94±0,32 1,78±0,32 1,98±0,29 2,14±0,16 2,09±0,12 2,31±0,14 2,14±0,12 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем до вакцинации Таблица 40- Основные иммунологические показатели у телят до- и после применения вакцины «Комбовак» и иммунометаболического комплекса Группы Сроки исследования, дни До опыт вакцинации контроль БАСК,% ФАН, % IgM, г/л Ig G, г/л Т-лимфоциты, % В-лимфоциты, % 38,5±1,4 45,6±0,8 1,45±0,06 16,32±2,32 29,1±1,1 14,5±1,4 34,4±1,2 32,1±1,2 0,57±0,08 8,43±1,25 24,2±2,2 13,4±0,9 После вакцинации опыт 44,3±1,3 44,5±2,1 2,08±0,06 21,45±0,36 32,6±1,9* 19,5±1,2 контроль 39,7±1,5 37,5±2,5 1,48±0,08 13,27±0,18 27,5±2,1 14,5±1,4 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем до вакцинации 152 После вакцинации телят в опытной группе, уровень противовирусных антител ко всем компонентам вакцины был достоверно выше, чем в контрольной группе и составляли к вирусам ИРТ, ВД-БС, ПГ-3, РСИ, рота- и корона-6,82±2,64; 7,94±1,34; 6,72±1,82; 6,27±0,46; 5,66±0,94; 5,16±0,18 lg2. Антитела к ИРТ, в опытной группе телят были выше, чем контрольной группе на 23,5%, к ВД-БС на 35,1%., к ПГ-3 на 29,7%, к РСИ – на 21,5, к рота вирусу – на 18,3% ,и к корона вирусу на 38,3% при р <0,05. Таблица 41 -Титры вируснейтрализующих антител в сыворотке крови телят до и после применения вакцины «Комбовак» и иммунометаболического комплекса Титры вируснейтрализующих антител, lg2 до вакцинации после вакцинации опыт контроль опыт контроль ИРТ 2,82 ± 0,42 1,85 ± 0,38* 6,82±2,64* 5,22±2,48 ВД-БС 2,74±0,38 1,04±0,26* 7,94±1,34* 5,15±2,35 ПГ-3 3,72±0,88 1,75±0,88* 6,72±1,82* 4,72±1,58 РСИ 1,97±0,12 1,82±0,18* 6,27±0,46* 4,92±1,42 Рота-вирус 1,64±0,14 1,23±0,14* 5,66±0,94* 4,62±0,76 Корона-вирус 2,16±0,10 1,86±0,15* 5,16±0,18* 3,18±0,32 Антигены Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы В ходе научно-производственных опытов установлено, что иммунометаболическая композиция на основе ЯК и АСД-2Ф является высокоэффективным средством, обеспечивающими благоприятный иммунобиохимический фон для проведения вакцинации глубокостельных коров. По нашему мнению ЯК или ее соли, целесообразно вводить в состав вакцинных препаратов или использовать в качестве растворителя. Во многом схожие результаты получены при вакцинации глубокостельных коров с использованием формолквасцовой вакциной против сальмонеллеза телят, производства Армавирской биофабрики. В таблице 42 мы приводим результаты серологических исследований. . 153 В опыте было 30 глубокостельных коров, 15 из которых (контрольная группа) были привиты обычным способом и 15(опытная группа) привиты с одновременным введением иммунометаболического состава. Таблица 42 -Динамика Н- и О- агглютининов у вакцинированных коров Сроки исследования До вакцинации В день отела 3 день после отела 15 день после отела 30день после отела Н-агглютинины, lg2 контроль опыт 5,24±0,86 5,36±0,45 О-агглютинины lg2 контроль опыт 4,12±0,76 4,18±0,73 6,34±1,26 6,54±1,65 7,52±1,48* 7,05±1,46* 4,87±0,86 4,58±0,94 5,64±0,92* 5,12±0,82* 2,56±0,25 4,52±1,15 2,36±0,42 3,36±0,42 3,12±0,64 5,42±0,84 3,14±0,47 3,98±0,48 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы До вакцинации О-агглютинины в сыворотке крови коров обнаруживались в титрах 4,12±0,76 - 4,18±0,73 lg2, Н-агглютинины в титрах 5,24±0,86 -5,36±0,45 lg2. Ко дню отела наблюдалось повышение титров специфических антител, более выраженное у животных опытной группы. На 3 день после отела содержание антител в контрольной группе удерживалось на том же уровне, что и в день отела, а в опытной группе несколько снизилось по сравнению с днем отела, все еще превышая показатели контрольной группы. По-видимому, это связано с более интенсивным переходом антител в молозиво, в связи с общей интенсификацией обмена веществ под влиянием иммунометаболического комплекса. На 15 день после отела содержание О- и Н- агглютининов в контрольной группе коров было минимальным и составляло 2,36±0,42 и 2,56±0,25 lg2 соответственно. На 30 день после отела содержание специфических антител несколько повысилось, оставаясь все же ниже, чем фоновые показатели (до вакцинации). В опытной группе животных на 15 день после отела содержание О- и Н- агглютининов в составляло 3,36±0,42 и 4,52±1,15lg2 соответственно, повысившись к 30 154 дню до 3,98±0,48 и 5,42±0,84 lg2, что практически совпадает с фоновыми значениями. Для изучения формирования колострального иммунитета у телят, из них были сформированы три группы, по 10 голов в каждой. У телят, рожденных от коров, привитых в сочетании с испытуемой композицией, (1 группа, n = 10), привитых обычным способом (2 группа, n =10) и не привитых (3 группа, n = 10) определяли уровень специфических антител, до приема молозива, в возрасте 1 день, 14 дней и 21 день. Полученные результаты представлены в таблице 43. Таблица 43- Титры Н- и О- агглютининов в сыворотке крови телят Возраст 1 группа 2 группа 3 группа Н-, lg2 О-, lg2 Н-, lg2 До приема 0 0 0 молозива 1день 7,68±0,73* 5,32±0,54* 6,32±0,42 0 О-, lg2 0 Н-, lg2 0 О-, lg2 4,16±0,34 1,24±0,12 0,96±0,08 14 день 3,96±0,42* 2,98±0,51* 2,34±0,29 2,04±0,14 1,36±0,10 0,92±0,09 21 день 3,14±0,56* 2,76±0,48* 1,67±0,24 1,45±0,24 1, 46±0,14 1,38±0,08 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем 2 группы; Изучение динамики показателей колострального иммунитета у телят, полученных от коров, привитых формолквасцовой вакциной в сочетании с испытуемой композицией, свидетельствует о том, что в первые сутки после приема молозива титр противосальмонеллезных антител в их крови был достоверно выше, чем у телят из второй и третьей группы. Показатели Н-агглютининов превышали таковые во второй и третьей группах в 1,2 и 6,2 раза соответственно. Показатели О- агглютининов превышали таковые во второй группе телят в 1,3 раза и в третьей группе – в 5,5 раза. Это свидетельствует о более высокой биологической ценности и лучшей усвояемости молозива. Во второй группе у телят, полученных от коров, привитых обычным способом, уровень специфических антител впервые сутки после приема молозива составлял 6,32±0,42 lg2 и был достоверно выше чем, у телят от не привитых коров, но ниже чем у телят из первой группы. 155 На 14 день содержание Н-агглютининов снизилось в первой группе с 7,68±0,73 до 3,96±0,42 lg2 и на 21 день удерживалось на уровне 3,14±0,56 lg2. Содержание О -агглютининов понизилось в этой группе с 5,32±0,54 lg2 до 2,98±0,51 lg2 на 14 день и 2,76±0,48 lg2 на 21 день. Во второй группе телят содержание Н-агглютининов снизилось с 6,32±0,42 до 2,34±0,29 lg2 на 14 день и на 21 день составило 1,67± 0,24 lg2. Содержание О агглютининов понизилось в этой группе с 4,16±0,34 lg2 до 2,04±0,14 lg2 на 14 день и 1,45±0,24lg2 на 21 день. В третьей группе телят, полученных от не привитых коров, титр антител в первые сутки был значительно ниже, чем у животных первой и второй группы, составляя по Н- агглютининам 1,24±0,12 lg2 и по О-агглютининам 0,96±0,08 lg2 На 14 и 21 день не отмечено столь выраженного снижения титра антител, как у телят опытных групп. На 21 день показатели телят второй и третьей групп не имели статистически достоверных различий как по содержанию Н- агглютининов, так и О – агглютининов. Таким образом, на примере вакцинации глубокостельных коров, изначально имеющих фоновые патобиохимические отклонения, нами показана правомерность концепции одновременной стимуляции обменных и иммунных процессов, как важной составляющей в системе мер специфической профилактике инфекционных заболеваний. Полученные результаты были в дальнейшем использованы в диссертационных исследованиях В.Ю. Тарасова (2011), И.В. Ермилова (2012). 156 3.2 Теоретическое и экспериментальное обоснование включения формалина в иммунометаболическую композицию на основе янтарной кислоты и антисептика-стимулятора Дорогова второй фракции 3.2.1 Обоснование состава и способ получения иммунометаболической композиции с включением формалина Проведенные опытно-экспериментальные исследования свидетельствуют о том, что сочетание ЯК с АСД-2Ф, обеспечивает многократное усиление их протективных свойств и позволяет получить высокоэффективный иммунометаболический состав для профилактики и лечения иммунодефицитов, нарушений обмена веществ, инфекционных заболеваний животных. Учитывая уникальные свойства ЯК, позволяющие усиливать положительные лечебные эффекты различных препаратов, мы поставили своей целью изучить возможность дальнейшего расширения сферы ее применения в сочетании с другими лекарственными препаратами при различной патологии. 3а последние десятилетия в инфекционной патологии людей и животных значительно возросла роль условно патогенной микрофлоры как 3а последние десятилетия в инфекционной патологии людей и животных значительно возросла роль условно патогенной микрофлоры как возбудителей различных инфекционных заболеваний, в том числе септических и гнойно-воспалительных осложнений при травмах и оперативных вмешательствах. Повсеместное применение антибактериальных препаратов для лечения заболеваний различной этиологии способствует селекции и диссеминации антибиотикорезистентных микроорганизмов, что приводит к увеличению случаев гнойносептических заболеваний. Лечить больных с гнойно-септической инфекцией с каждым годом становится все труднее, что связано с приобретенной резистентностью возбудителей к большинству применяемых в клинике химиотерапевтических препаратов. При лечении гнойно-септических заболеваний сложность задачи состоит в том, что одновременно необходимо добиться решения ряда вопросов, в частно- 157 сти, подавить жизнедеятельность патогенной микрофлоры, нейтрализовать токсические продукты ее жизнедеятельности, восстановить нарушенную трофику тканей в патологическом очаге.Для подавления жизнедеятельности патогенной микрофлоры наиболее широко применяется химио- антибиотикотерапия. Однако быстрое формирование устойчивости микроорганизмов к антибиотикам диктует необходимость поиска новых, альтернативных антимикробных препаратов. Кроме того, применение мощных средств химио-антибиотикотерапии вызывает угнетение иммунной системы. Большое значение имеют вопросы восстановления нарушенных метаболических процессов и механизмов иммунорегуляции в тканях патологического очага. В поврежденных тканях возникает клеточное голодание, усугубляющееся повышением катаболизма вследствие усиления выброса глюкокортикоидов. Повышение потребности в энергетических ресурсах ведёт к распаду эндогенных белков и жиров, образуется много недоокисленных продуктов, чему способствует также гипоксия тканей вследствие расстройства микроциркуляции. Нарушение периферической гемодинамики и обмена, энергетический голод, чрезмерное образование недоокисленных продуктов приводят к изменению кислотно-основного состояния, в месте повреждения развивается метаболический ацидоз. Научные исследования по преодолению лекарственной резистентности болезнетворных микроорганизмов ведутся достаточно интенсивно. Проблема современной химо-антибиотикотерапии, связанная с множественной лекарственной резистентностью микроорганизмов, активизировали исследовательскую деятельность по целому ряду научных направлений. Так, в области инфекционной патологии, получены принципиально новые данные о том, что выздоровление при вирусных и бактериальных инфекциях связано не только с удалением из организма возбудителя, но и с восстановлением возникающих в ходе болезни иммунологических дефектов, выключением иммунопатологических процессов, индуцированные патогенным агентом. Следует отметить, что развитие любого инфекционного процесса неизбежно влечет за собой изменения в метаболической системе. Если в системе метаболизма произошли выраженные сбои, то у животных это проявля- 158 ется развитием иммунодефицитного состояния. В таких случаях применение иммуностимуляторов и вакцин не дает желаемого результата, а может привести к дальнейшему угнетению иммунной системы. Совершенно очевидно, что эти обстоятельства выдвигают перед исследователями необходимость поиска новых подходов воздействия на инфекционный процесс. Исходя из вышеизложенного, мы поставили перед собой задачу провести направленный поиск по выбору препаратов, сочетание которых обеспечивает одновременно выраженный антимикробный, детоксицирующий и иммуно-трофикостимулирующий эффект. В ходе исследований мы обратили внимание на формалин. Давно извест- но, что формалин обладает исключительно высокой бактерицидной активностью. Так, концентрация 1:6000 он прекращает рост большинства микроорганизмов, его широко используют в вакцинном производстве. Еще в 1968 году, применяя низкие, 0,2-0,3% концентрации формалина при инъекциях А.Б. Терюхановым (1968) впервые был обнаружен эффект снижения активности инфекционного процесса. По данным В.Н. Ласкового (1997), внутримышечное введение 0,2 % формалина позволяет обеспечит снижение вирулентности возбудителя вирусного трансмиисвного гастроэнтерита и одновременно стимулировать специфическую иммунную защиту. Эффект дезаллергизации организма при парентераольном введении низких концентраций формалина был установлен в исследованиях А.А. Евглевского (1992) и В.Н. Ласкавого (1997). Возможность применения низких концентраций формалина при локальных гнойно-септических заболеваниях показана в исследованиях А.А. Евглевского с соавт. (2004; 2005; 2006), М.Г. Лебедевой (2004), Н.В. Воробьевой (2006). В настоящее время установлено, что формальдегид оказывает защитное действие на живые клетки органов и тканей, сдерживает повреждающие процессы ПОЛ, присутствует в нормально функционирующей ткани, т.е. является естественным субстратом живой клетки. Его концентрация в организме снижается при заболевании. Это выдвигает версию о том, что чувствительность к инфекци- 159 онным патогенам может определяться концентрацией формалина в организме. Для сохранения всех полученных эффектов и дополнительного усиления антиинфекционной активности мы решили ввести в состав иммунометаболической композиции формалин. Применительно к нашим научно-посковым исследованиям комбинация метаболика ЯК и формалина, ввиду разного механизма их действия, является вполне допустимой.Мы посчитали, что формалин обеспечит антимикробную активность, по крайней мере, при наружном или полостном применении. По нашему мнению формалин обеспечивает не только гибель возбудителей гнойно-септической инфекции в патологическом очаге, но и инактивирует токсичные продукты их жизнедеятельности, что снижает повреждающее действие на здоровые ткани. При этом инактивированные токсины не утрачивают иммуногенных свойств, что обеспечивает ускоренное формирование локального иммунитета. ЯК обеспечивает нормализацию метаболических процессов в тканях патологического очага.Окончательный вариант испытуемого состава получил рабочее название «Формол-янтарный биостимулятор». Состав иммунометаболической композиции приведен в таблице 44. Таблица 44- Состав иммунометаболической янтарный биостимулятор». Название вещества Янтарная кислота АСД Ф-2 Новокаин Вода для инъекций Формалин медицинский композиции Нормативные документы ГОСТ 6341-75 ТУ 9336-003-54935098-02 ТУ 64-3-167-84 ФС 42-2620-97 ФМН ТУ-9336-414-002033393-94 «Формол- Количество 10 г 40 мл 2,5 г до 1 л 4 мл 3.2.2 Доклинические испытания иммунометаболической композиции с включением формалина на лабораторных животных Определение стерильности. При исследовании выборочных образцов методом прямого посева на стандартные питательные среды: жидкая тиогликолевая среда, рН 7,2 (для аэробных и анаэробных бактерий) и жидкая среда Сабуро, рН 5,6 (для грибов), в течение 14 дней рост микроорганизмов отсутствовал 160 Изучение острой токсичности иммунометаболической композиции с антисептическим эффектом проводили на 30-ти нелинейных белых мышах, массой 21-22 г и 20 нелинейных белых крысах, массой 180-200 г. Для изучения острой токсичности состава мыши были разделены на 5 опытных и 1 контрольную группу по 5 животных в каждой. Мышам опытных групп испытуемую композицию вводили внутрибрюшинно, однократно, в дозах 0,1; 0,2; 0,3; 0,5 и 1мл. Мышам контрольной группы вводили внутрибрюшинно физиологический раствор в дозе 0,5 мл. Результаты эксперимента приведены в таблице 45. Таблица 45 - Токсичность композиции ЯК с АСД-2Ф и формалином при внутрибрюшинном введении белым мышам Доза 0,1 мл 0,2 мл 0,3 мл 0,5 мл 1 мл контроль Эффект норма норма норма норма угнетение норма Пало /выжило 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 0/5 Крысы были разделены на 3 опытные и 1 контрольную группу, по 5 животных в каждой. Ведение препарата проводили внутривенно (в подхвостовую вену), медленно, в дозах 0,5; 1 и 5мл. Крысам контрольной группы вводили внутривенно стерильный физиологический раствор в дозе 5 мл. Результаты эксперимента представлены в таблице 46. Таблица 46 – Токсичность композиции ЯК с АСД-2Ф и формалином при внутривенном введении белым крысам Доза Эффект Пало/выжило 0,5 мл норма 0/5 1 мл норма 0/5 5 мл угнетение 0/5 контроль норма 0/5 Наблюдение за животными проводили ежедневно в течение 14 дней. Оценивали общее клиническое состояние, особенности поведения, интенсивность и 161 характер двигательной активности, наличие признаков интоксикации, возможную смертность. Установлено, что предлагаемый состав во всех испытанных дозах не вызывал гибели мышей и крыс и не оказывала выраженного токсического действия на организм. При введении ее мышам в дозе 1 мл отмечалось кратковременное возбуждение, сменяющееся общим угнетением и снижением аппетита, проходящим через 3-6 часов. У крыс кратковременное угнетение отмечалось при введении композиции в дозе 5 мл Изучение хронической токсичности проводили на 30 самцах нелинейных белых крыс и на 15 беспородных собаках. Опыт 1. Было сформировано три группы крыс, две опытные и контрольная, по 10 животных в каждой, массой 180-200 г. Длительность эксперимента – 30 суток. Крысам первой опытной группы ежедневно вводили испытуемый состав внутримышечно, в дозе 0,5 мл, крысам второй опытной группы - внутримышечно , в дозе 1 мл. Крысам контрольной группы вводили физиологический раствор. Наблюдение за крысами вели в течение 3 месяцев. Установлено, что изучаемый состав ни в одной из используемых доз, не вызывает изменений клинического состояния, внешнего вида, поведения, аппетита животных, ни в одной из опытных групп не отмечено гибели животных. Результаты гематологических и биохимических исследований показали, что предлагаемый состав не оказывает токсического действия на организм крыс и собак при длительном применении. Изучение раздражающего действия иммунометаболической композиции с антисептическим эффектом проводили на 10 кроликах с массой тела 2,2-2,4 кг путем аппликации на кожные покровы. На основании проведенных исследований установлено, что ЯК в сочетании с АСД-2Ф и формалином не обладает выраженным раздражающим действием при наружном применении. 162 Испытание протективной активности испытуемого состава в сравнении с «Янтарным биостимулятором» провели при моделировании у мышей состояния септикопиемии культурой S. аureus. Опыты проводили на 30 нелинейных мышах. Было создано 3 группы животных (2 опытные и 1 контрольная), по 10 особей в каждой. Мышам первой опытной группы был введен испытуемый состав, в объеме 0,2 мл, внутрибрюшинно. Животным второй опытной группы вводили «Янтарный биостимулятор» в той же дозе. Мышам контрольной группы был введен физиологический раствор. Через сутки провели заражение подопытных мышей смывом суточной культуры S. аureus, в дозе 0,2 мл при концентрации 100000 тыс. микробных тел в 1 мл (по стандарту мутности) Результаты изучения защитного действия препаратов представлены в таблице 47. Таблица 47- Уровень защиты белых мышей при заражении культурой S. аureus Группы n 2 день Число погибших мышей / %, в дни наблюдений 3 день 4 день 5 день 6 день Осталось живых на 10 день 1 опытная 10 - 2/20 1/10 7/70% 2 опытная 10 - 2/20- 2/20 6/60% 3 контрольная 10 6/60 4/40 - В ходе клинических наблюдений у мышей контрольной группы отмечалось быстрое развитие септического процесса. Гибель животных наступила на 2-3 сутки после инфицирования. У животных первой опытной группы клинические симптомы септицемии были менее выражены, пало 3 мыши на 5-6 сутки после заражения, выживаемость составила 70%. Выживаемость мышей во второй опытной группе составила 60% , при этом инфекционный процесс у них протекало легче, чем в контрольной группе. 163 Данные вскрытия и макроскопического исследования внутренних органов павших мышей характерны для септикопиемии. В паренхиматозных органах обнаруживались множественные септические очажки, величиной от 1до 4 мм. У выживших мышей, подвергнутых эвтаназии на 14 день эксперимента, характерных патологоанатомических изменений не установлено. Проведенные опыты свидетельствуют о том, что испытуемый состав обладает высокой антиинфекционной активностью, что открывает перспективы для его применения в инфекционной патологии животных. 3.2.3 Клинические испытания иммунометаболической композиции с включением формалина на продуктивных животных 3.2.3.1 Оценка эффективности применения иммунометаболической композиции с включением формалина при маститах и послеродовых эндометритах у коров Применение иммунометаболической композиции при мастите Экспериментальные опыты проводили на базе учхоза Курской ГСХА «Знаменское». На первом этапе для изучения раздражающего действия ЯК в сочетании с АСД 2Ф и формалином была сформирована группа из 8 клинически здоровых коров на 3-4 месяце лактации. Коровы были разделены на две группы. Коровам первой группы вводили изучаемый состав в количестве 5мл, интрацистернально в левую переднюю долю вымени после предварительного выдаивания молока и обработки сосков дезинфицирующим раствором. Правая передняя доля служила контролем. Коровам второй группы в аналогичном порядке вводили «Янтарный биостимулятор». Перед введением препаратов и через 6, 24, 48 и 72 ч определяли состояние опытных (левых передних) и контрольных (правых передних) четвертей вымени визуально и с помощью пальпации. Также исследовали молоко, определяли внешний вид, цвет, запах, количество соматических клеток в 1 мл молока, проводили реакцию с 2% раствором мастидина и постановку пробы отстаивания. 164 В первой группе реакция секрета вымени опытных четвертей с 2% раствором мастидина в течение 6-24 часов была слабо положительной или положительной, через 48 часов во всех пробах реакция была отрицательной. Проба отстаивания была отрицательной для всех четвертей во все периоды исследования. Во вторй группе реакция секрета опытных четвертей была через 24 часа положительной у 75 % животных. Через 72 часа реакция с 2% раствором мастидина оставалась слабоположительной у двух животных и сомнительной - у одного. В те же сроки мы провели определение содержания в молоке соматических клеток. Результаты представлены в таблице 48. Таблица 48- Количество соматических клеток в молоке после внутрицистернального введения ЯК в сочетании с АСД 2Ф и формалином Количество соматических клеток (тыс/мл) Сроки исследования, час. Первая группа Опыт Вторая группа Контроль Опыт Контроль До введения 318,5±20,6 320,8±18,4 324,5±21,6 327,8±18,2 6 660,8±43,8 342,5±16,9 865,8±43,5 340,5±18,5 24 947,6±56,8 520,7±21,7 1442,6±52,8 410,7±24,2 48 330,9±38,6 322,5±18,6 930,9±32,6 328,5±16,6 72 324,8±18,4 324,8±16,5 521,8±19,4 316,8±19,5 В первой группе после интрацистернального введения испытуемого состава в дозе 5 мл через 6 часов в секрете из опытных долей происходит увеличение числа соматических клеток в 2,07 раза, через 24 ч – в 2,98 раза. Через 48 ч раздражающее действие снижается, и содержание соматических клеток приближается к исходному уровню. В молоке из контрольных долей существенного повышения содержания соматических клеток не отмечено. Во второй группе при введении «Янтарного биостимулятора» содержание соматических клеток через 24 часа превышает фоновые значения в 4,45 раза и через 72 часа все еще остается повышенным. 165 Рис.19- Изменение количества соматических клеток в молоке после введения иммунометаболических составов В течение опыта изменений со стороны общего состояния коров не отмечалось. Таким образом, введение в состав «Янтарного биостимулятора» 0,4 % формалина позволило снизить его раздражающее действие на молочную железу. ЯК в сочетании с АСД 2Ф и формалином обладает умеренным раздражающим действием на молочную железу коров, признаки которого исчезают через 48 часов. Изучение влияния ЯК в сочетании с АСД 2Ф и формалином на изменение видового состава микрофлоры молока при мастите провели на 8 коровах с клиническими признаками гнойного мастита. Подопытные животные были разделены по принципу аналогов на две группы. Коровам первой группы (n=4) внутрицистернально в объеме 5 мл ввели смесь ЯК с АСД Ф-2 и формалином. Животным второй группы (n=4) внутрицистернально был введен «Янтарный биостимулятор» в той же дозе. Изучение видового состава микрофлоры и контроль антибактериальной активности препаратов при лечении мастита провели в день их введения, через 5 и 10 дней после введения. Результаты проведенного опыта представлены в таблице 49. 166 Таблица 49 - Изменение видового состава микрофлоры при мастите под влиянием проведенной терапии Группа коров Корова №1 Корова №2 Корова №3 Корова №4 Корова №1 Корова №2 Корова №3 Корова №4 Видовой состав микрофлоры До введения На 5 день На 10 день 1 группа _ _ E. coli Str. agalactiae S. aureus S. aureus S. aureus _ Str. agalactiae S. aureus _ _ Str. agalactiae E. coli _ _ Str. agalactiae 2 группа Str.agalactiae _ E. coli S. aureus Str. agalactiae S. aureus S. aureus S. aureus Str. аgalactiae Str.agalactiae S. aureus S. aureus _ E. coli E. coli _ _ Str. agalactiae Результаты исследований свидетельствует о том, что включение в состав иммунометаболической композиции формалина обусловило ускоренный процесс обезвреживания микрофлоры в больных маститом долях молочной железы. Применение иммунометаболической композиции при послеродовом эндометрите Экспериментальные опыты проводили на базе учхоза Курской ГСХА «Знаменское». Объектом для изучения являлись коровы больные острым катарально-гнойным эндометритом. Из 15 коров было сформировано 3 опытные группы по 5 особей в каждой. Опытные группы формировались по мере выявления больных эндометритом коров с одинаковым клиническим проявлением заболевания. Как правило, заболевание эндометритом диагностировалось на третьи сутки после тяжелых родов или после ручного отделения последа. Таким обра- 167 зом, в большинстве случаев, заболевание эндометритом прогнозировалось заранее. Для лечения коров первой группы использовали ежедневное внутриматочное введение ЯК в сочетании с АСД Ф-2 и формалином, начиная с максимальной дозы 100 мл. Объем вводимого раствора по мере уменьшения размера матки, постепенно снижали до 15-10 мл. Коровам второй группы в такой же последовательности и в том же объеме внутриматочно вводили 0,6% раствор формалина. Коров третьей группы лечили фуразолидоновыми палочками, начиная с 10 палочек на одно введение. Эффективность лечения ежедневно контролировали по клиническим признакам. До начала курса лечения, а затем на 3-й и 5-й день проводили бактериологическое исследование экссудата. Параллельно изучали влияние препаратов на динамику отдельных показателей состояния клеточной и гуморальной систем иммунитета. Результаты клинических наблюдений свидетельствовали, что на 3-и сутки после начала курса лечения у всех коров проявлялись выраженные признаки затухания воспалительного процесса. Объем матки заметно уменьшался. Изменился и характер экссудата в сторону преобладания гноя, что свидетельствовало об усилении процесса фагоцитоза. Более выраженные различия в течение патологического процесса обозначились на 5 сутки. У коров первой и второй групп в выделяемом экссудате заметно уменьшилось количество гноя, в экссудате преобладала слизь. Менее выраженная динамика патологического процесса наблюдались у коров третьей группы. В выделяемом экссудате практически не было слизи. На 10-12 сутки выделения из матки у коров первой группы практически полностью прекратились. Цервикальный канал настолько сузился, что в него с трудом проходила полиэтиленовая трубка от инъектора диаметром 0,5 см, через которую вводился раствор. У коров второй и третьей групп клиническое выздоровление наступило соответственно на 2-3 и 3-4 дня позже, по сравнению с животными первой группы. 168 Весьма показательными были результаты бактериологических исследований маточного экссудата, которые отражены в таблице 50. Таблица 50 - Изменение видового состава микрофлоры маточного экссудата при эндометрите под влиянием проведенной терапии Группа коров до лечения Корова №1 Корова №2 Корова №3 Корова №4 Корова №5 Корова №1 Корова №2 Корова №3 Корова №4 Корова №5 Корова №1 Корова №2 E. coli, S. aureus Ps. aeruginosa, E. coli E. coli, S. aureus E. coli, S. aureus, Str. haemoliticus E. coli, Ps. aeruginosa E. coli, Ps. aeruginosa E. coli, S. aureus E. coli, Str. haemoliticus E. coli, S. aureus E. coli, S. aureus E. coli, S. aureus E. coli, Ps. aeruginosa Корова №3 E. coli, Str. haemoliticus Корова №4 E. coli, Str. haemoliticus E. coli, Str. haemoliticus Корова №5 Видовой состав микрофлоры на 3 сутки на 5 сутки 1 группа S. aureus, Ps. aeruginosa Ps. aeruginosa Str. haemoliticus, Ps. Ps. aeruginosa aeruginosa Ps. aeruginosa, Ps. aeruginosa S. aureus S. aureus, S. aureus Str. haemoliticus Ps. aeruginosa 2 группа Ps. aeruginosa, Str. haemoliticus Ps. aeruginosa, S. aureus S. aureus, Str. haemoliticus Ps. aeruginosa, S. aureus Ps. aeruginosa, S. aureus 3 группа S. aureus, E. coli Ps. aeruginosa, Str. haemoliticus, E. coli S. aureus, Str. haemoliticus, E. coli S. aureus, Str. haemoliticus Ps. aeruginosa, S. aureus, Str. haemoliticus Ps. aeruginosa Ps. aeruginosa Ps. aeruginosa S. aureus Ps. aeruginosa Ps. aeruginosa Ps. aeruginosa, E. coli Ps. aeruginosa, E. coli S. aureus, Str. haemoliticus Ps. aeruginosa, S. aureus Ps. aeruginosa, S. aureus 169 По данным первоначальных (фоновых) исследований этиологию эндометритов практически у всех животных обусловили ассоциации микроорганизмов при доминировании кишечной палочки. Культуры кишечной палочки были выделены от всех животных. В ассоциации с ней в этиологии заболевания участвовали в 40 % случаев золотистый стафилококк, в 26,6 % -синегнойная палочка, в 33,3 % - гемолитический стрептококк. При проведении бактериологических исследований на 3-и сутки у коров первой группы, по отношению к исходному бактериальному фону дополнительно были выделены три культуры: Ps. aeruginosa и по одной культуре S. aureus и Str. haemoliticus. У коров третьей группы количество выделяемых культур кишечной палочки осталось неизменным. Дополнительно были выделены три культуры S. aureus и одна культура гемолитического стрептококка. Выделение дополнительных культур микроорганизмов могло быть обусловлено или слабой активностью в начале инфекционного воспалительного процесса в матке или заносом в родовые пути при внутриматочном введении лекарственных средств. При проведении бактериологического исследования на 5 сутки у коров первой и второй групп выделялась в основном синегнойная палочка, реже золотистый стафилококк. Выделение в монокультуре синегнойной палочки и стафилококков свидетельствовало о снижении интенсивности течения инфекционного процесса. Напротив, у коров третьей группы количество выделенных культур практически не снизилось. Таким образом, в ходе проведенных исследований установлено, что сочетание ЯК в АСД -2Ф и 0,4 % формалина по лечебному эффекту превосходил 0,6 % раствор формалина и не уступал ему по антибактериальной активности. Это обусловлено тем, содержащиеся в лекарственной композиции компоненты оказывают нормализующие и стимулирующие воздействие на метаболические процессы в воспаленных тканях матки. ЯК в сочетании с АСД -2Ф и формалином и 0,6 % раствор формалина демонстрировали более высокую антибактериальную активность по сравнению с 170 фуразолидоновыми палочками. Более высокий клинический лечебный эффект может быть обусловлен нейтрализацией токсичных продуктов жизнедеятельности микроорганизмов, которые частично проникая в ткани матки оказывали на них иммунизирующее действие, не вызывая их перераздражения. Результаты применения иммунометаболической композиции при диарейном синдроме Антимикробное действие формалина выражено при местном лечении гнойно-некротических процессов. Однако применение сочетания ЯК, АСД-2Ф и формалина в виде инъекций так же оказало неожиданно высокий профилактический и лечебный эффект при гипотрофии животных и целом ряде инфекционных заболеваний Эффективность применения иммунометаболической композиции с формалином была изучена на телятах гипотрофиках 20-25 дневного возраста в сравнении с «Янтарным биостимулятором» и 1% раствором сукцината натрия. Для опыта были подобраны 15 телят с признаками гипотрофии, которых по принципу аналогов разделили на три группы, по 5 особей в каждой. Телятам первой группы внутримышечно, в дозе 2 мл, однократно вводили ЯК в сочетании с АСД-2Ф и формалином, животным второй группы в той же дозе вводили «Янтарный биостимулятор», телята третьей группы были контрольными. Оценку влияния препаратов на гематологические показатели и факторы неспецифической резистентности провели на 7 сутки Результаты проведенных исследований представлены в таблице 51. Под влиянием испытуемой композиции у телят-гипотрофиков наметились положительные сдвиги в состоянии гемопоэза, содержание эритроцитов повысилось на 8,82%; гемоглобина - на 17 16%, достигнув уровня физиологической нормы. Аналогичные сдвиги произошли и во второй опытной группе. В контрольной группе животных все показатели остались на прежнем уровне. Под влиянием иммунометаболического комплекса с формалином увеличились показатели БАСК на 13,34%, ЛАСК на 38,8 % и ФАН на 39,4%. Аналогичная 171 тенденция отмечена и во второй опытной группе. В контрольной группе достоверного изменения иммунологических показателей не отмечено. Таблица 51 -. Динамика гематологических показателей и факторов неспецифической резистентности телят – гипотрофиков Показатели Сроки исследования Гемоглобин, до лечения г/л после лечения Эритроциты, до лечения 1012/л после лечения Общий до лечения белок, г/л после лечения БАСК, % до лечения после лечения ЛАСК, % до лечения после лечения ФАН, % до лечения после лечения 1 группа 83,9 ±2,1 98,3±1,7* 6,8±0,4 7,4±0,6* 57,2±1,6 65,5±1,9 54,7±1,6 64,5±1,7* 1,8±0,2 2,5±0,1* 47,2±1,9 65,8±2,3* 2 группа 84,6±1,7 94,2±1,6* 6,6±0,5 7,1±0,8* 58,1±1,7 64,4±1,5 52,6±1,7 61,8±1,4* 1,7±0,1 2,6±0,3* 47,4±1,6 64,9±2,4 3 группа 84,2±1,9 85,7±1,9 6,7±0,3 6,8±0,6 56,8±2,1 58,4±1,8 54,2±1,5 56,1±1,4 1,8±0,1 1,9±0,2 47,5±2,3 51,6±1,9 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим фоновым показателем Масса тела у гипотрофичного молодняка при рождении составляла 28,45±1,56 кг против 35,52±1,56 кг у клинически здоровых телят. К месячному возрасту у телят первой опытной группы по сравнению с контролем масса тела была выше на 21,7 %, во второй группе масса тела была выше контроля на 20,5 %. Представленные данные свидетельствуют о том, что применение иммунометаболического комплекса с формалином оказывает выраженное позитивное влияние на гемопоэз, нормализует иммунный статус телят–гипотрофиков, активизирует ростовую активность телят. 172 3.2.3.2 Оценка эффективности применения иммунометаболической композиции с включением формалина при вирусных заболеваниях На базе СХПК «Амосовский» был проведен научно-производственный опыт по изучению эффективности применения иммунометаболического ком- плекса с формалином при заболевании телят с диарейным синдромом. В данном хозяйстве на протяжении 2002-2007 гг. отмечалось рождение большого количества телят-гипотрофиков. В первые сутки жизни у многих наблюдалось расстройство пищеварительного тракта, а на 2-3 сутки практически у всех проявлялась диарея. При быстром нарастании симптомов интоксикации гибель телят наступала в течение 2-5 суток жизни. Серологические исследования сыворотки крови свидетельствовали о циркуляции в стаде вирусов ВД-БС, а также рота - и коронавирусной инфекции. Из числа больных телят по принципу аналогов было сформировано две группы телят, опытная (n= 36) телят и контрольная (n= 27) . Телятам опытной группы в первые часы после рождения, а затем на 2 и 3-4 сутки внутримышечно, в дозе 2 мл вводили ЯК в сочетании с АСД- 2Ф и формалином. Телятам контрольной группы в этот период никакие биопрепараты не применяли. Клинические наблюдения показали, что в контрольной группе на 2-5 сутки после рождения признаки диареи проявились у всех животных. У 9 (30 %) из них диарея проявилась в тяжелой степени течения с летальным исходом. При патологоанатомическом вскрытии трупов павших телят установили: – недоразвитие иммунокомпетентных органов, глубокое язвено-геморрагического характера поражение сычуга, тонкого кишечного и прямой кишки. В печени ярко выраженная токсическая дистрофия с некротическими очагами. У остальных животных контрольной группы отмечались перемежающая диарея, пониженный жизненный тонус, слабый аппетит. В опытной группе диарея в легкой и средней степени отмечалась у 22 (61,1%) из 36 телят. У 14 телят этой группы расстройства пищеварения в этот период не наблюдалось. 173 На 10 сутки клиническое состояние большинства телят опытной группы было заметно лучше, чем у их сверстников их контрольной. Результаты применения ЯК в сочетании с АСД-2Ф и формалином свидетельствуют о том, что такая композиция является весьма эффективным профилактическим и терапевтическим средством при диарейном синдроме, обусловленным смешанной вирусно-бактериальной инфекцией. Применение иммунометаболической композиции с включением формалина при вирусных заболеваниях собак Учитывая данные, полученные при проведении доклинических испытаний и результаты применения состава при лечении вирусных заболеваний телят, мы решили испытать эффективность ЯК в сочетании с АСД -2Ф и формалином при парвовирусном энтерите у собак. Для этого, по принципу аналогов, сформировали две опытных и контрольную группы из собак в возрасте 3 - 5 месяцев различных пород и разного пола в количестве 8 голов в каждой. Животным первой опытной группы вводили ЯК в сочетании с АСД-2Ф и формалином в дозе 2мл внутримышечно, через 12 часов, в сочетании с традиционной схемой лечения. Животным второй опытной группы вводили ЯК в сочетании с АСД Ф-2 и формалином в дозе 2 мл внутримышечно, в сочетании с традиционной схемой лечения из которой был исключен антибиотик. Животных контрольной группы лечили по традиционной схеме, в которую входили: антибиотик широкого спектра действия, анальгетики, антигистаминные, спазмолитические и регидратационные препараты, витамины. До начала лечения у всех собак опытных и контрольной групп отмечали среднюю степень дегидратации, анорексию, многократную рвоту, диарею 5-6 раз в день. Температура тела до лечения была повышена и составляла 39,4°-40,1° С . Пульс и дыхание до лечения были учащены. Результаты гематологического и биохимического исследования представлены в таблице 52. 174 Таблица 52- Результаты гематологического и биохимического исследования крови собак при парвовирусном энтерите Показатели Эритроциты, млн/мкл Лейкоциты, 109/л Гемоглобин, г/л СОЭ, мм/ч 1 опытная До лечения После лечения 4,2± 0,1 6,7± 0,5 * 2 опытная До лечения После лечения 5,2± 0,2 6,9± 0,3* 3 контрольная До лечения После лечения 5,1± 0,2 6,5 ±0,3 3,5± 0,2 8,3± 0,3 3,3± 0,2 8,6± 0,4 * 3,1± 0,2 7,3± 0,2 64,0± 6,2 86,5± 7,3 * 68,2± 7,5 96,9± 6,7* 74,0± 7,2 84,5± 8,3 8,1± 0,2 3,3± 0,3 * 8,5± 0,2 2,3± 0,3* 8,5± 0,6 4,3± 0,4 Общий белок, 59,12± 4,26 67,36 ±2,24 59,18±4,21 67,12±3,52 58,12±4,26 64,32±5,24 г/л Мочевина, 15,42± 4,26 4,36±0,46* 15,92± 5,22 3,45± 4,54 18,42±1,26 8,48±0,86 ммоль/л Креатинин, 120,50±15,48 86,45±10,42* 128.12±18,36 70,24±11,42 132,42±23,42 120,2±15,4 мкмоль/л * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим фоновым показателем В первой опытной группе при гематологических исследованиях до лечения обнаружена сильная лейкопения (3,5±0,2×109/л). На 3-й день лечения увеличилось количество лейкоцитов до 8,3±0,3× 109/л. Количество общего белка до лечения составляло 59,12± 4,26 г/л, после клинического выздоровления 67,36 ±2,24 г/л. До лечения было резко увеличено количество мочевины и креатинина, что указывает на развитие почечной недостаточности. После выздоровления содержание мочевины и креатинина снизилось в 3,5 и 1,4 раза, соответственно. Продолжительность лечения в первой опытной группе составила 3,5 дня. Аппетит восстановился в течение 2 дней. Во второй опытной группе явления дегидратации исчезали на 2-й день лечения, рвота прекращалась на 2-й день лечения, диарея на 2-й день становились реже и полностью прекращалась - на 3-й. Снижение температуры тела и нормализация пульса и дыхания происходили на 2-3-й день лечения. При гематологическом исследовании количество лейкоцитов до лечения составило 3,3 ±0,2 109/л, при клиническом выздоровлении 8,6±0,4×109/л. До лечения количество общего белка составляло 59,1±4,2 г/л. При клиническом выздоровлении количество общего белка составило 67,1 ±3,5г/л. Количество мочевины и креатинина, повы- 175 шенное до лечения, существенно снизилось. Продолжительность лечения во второй опытной группе составила 3,5 дня. Однако, следует отметить, что в течение 3-5 дней после клинического выздоровления у животных отмечался пониженный аппетит. В контрольной группе один щенок пал на 2 день. У остальных явления дегидратации исчезали на 3-4-й день лечения, рвота прекращалась на 2-й день, диарея на 3 день становилась реже и полностью прекращалась - на 4-5-й. Снижение температуры тела произошло на 2- й день лечения. Аппетит восстановился на 3- день. При гематологическом исследовании количество лейкоцитов до лечения составило 3,1±0,2 109/л, при клиническом выздоровлении 7,3±0,2×109/л. До лечения количество общего белка составило 59,12±4,26 г/л. При клиническом выздоровлении количество общего белка составило 64,32± 5,24г/л. После выздоровления показатели содержания мочевины и креатинина снизились, но все еще оставалось выше нормы. Продолжительность лечения в контрольной группе составила 5,5 дней. Нормализация аппетита наступила через 7-8 дней. Таким образом, иммунометаболическая композиция с формалином продемонстрировала высокую терапевтическую эффективность при лечении инфекционных заболеваний вирусной этиологии. Применение предлагаемой композиции позволило добиться выздоровления животных в короткие сроки без применения антибиотиков 176 3.3 Теоретическое и экспериментальное обоснование включения микроэлементов в иммунометаболическую композицию на основе янтарной кислоты и антисептика-стимулятора Дорогова второй фракции 3.3.1 Обоснование состава и способ получения иммунометаболической композиции с включением микроэлементов Одной из самых сложных проблем современного животноводства являются микроэлементозы. С дефицитом комплекса микроэлементов - Cu, Zn, Co, Fe, Mn и др. сталкивается каждое животное с первых дней жизни. Эти микроэлементы являются коферментами ферментной системы. В связи с этим появление массовых желудочно-кишечных заболеваний у новорожденных и гнойных инфекций у взрослых животных, является своего рода индикатором дисбаланса микроэлементов. Хронический дефицит микроэлементов в организме является одной из причин нарушения обмена веществ и развития вторичных иммунодефицитов. Изучая состояние обмена веществ у коров с высоким уровнем продуктивности и полученных от них телят, мы отметили выраженный дефицит ряда жизненно важных микроэлементов – Cu, Zn, Co, Fe, Mn. Резко выраженный микроэлементоз отмечается у супоросных свиноматок и подсосных поросят. Вышеуказанные микроэлементы являются жизненно важными и входят в состав многих витаминов, ферментов, гормонов, обеспечивая их физиологическую активность и интенсивность обмена веществ. Нормализуя обмен веществ, они оказывают влияние на рост и развитие, воспроизводительную функцию, рождение жизнеспособного потомства. Основным источником незаменимых микроэлементов для животных являются корма. Минеральный состав кормов весьма вариабелен и зависит от многих факторов, таких как состав почвы, уровень внесения удобрений, вид растений и др. Нередко в кормах наблюдают недостаток одних микроэлементов и избыток других. Тем не менее, даже при наличии высокого содержания микроэлементов в кормах организм животных не всегда способен их усвоить. Минеральные вещест- 177 ва корма усваиваются организмом взрослых животных лишь на 25-30 % (Д.В. Пчельников, В.И. Дорожкин, В.А. Бабич, 2002). Еще более особая ситуация складывается для новорожденных. У них физиологическая потребность в микроэлементах удовлетворяется лишь материнским молоком только на 10-15 %. Вследствие чего у них быстро снижается уровень гемоглобина в крови и развивается анемия. Дефицит железа и др. микроэлементов приводит к развитию дегенеративных изменений в различных тканях. Особую опасность при этом представляют патоморфологические изменения в тканях иммунной системы. Недостаток микроэлементов у взрослых животных пагубно отражается на их воспроизводительной функции, ведет к рождению слабого, нежизнеспособного потомства. Попытки восполнить недостаток микроэлементов в организме с помощью добавок в корма солей меди, цинка, железа, кобальта и др. имеют ряд недостатков. Прежде всего, все соли микроэлементов, попав в желудочно-кишечный тракт быстро гидролизуются, образуя практически нерастворимые соединения, которые в большинстве своем не усваиваются, а выводятся с экскрементами. Решая данную проблему, многие исследователи проявляют особый интерес к разработке и применению хелатных соединений микроэлементов. Применение хелатных соединений обеспечивает лучшую ассимиляцию солей металлов, чем при введении их в рацион в обычной неорганической форме. Одним из наиболее перспективных хелатообразующих соединений является ЯК. Микроэлементы в комплексе с ЯК обладают целым рядом ценных свойств: они лучше усваиваются, возрастает их активность, практически исключается антагонизм элементов. Более того, ЯК оказывает корригирующее действие на микроэлементный обмен в организме, снижая риск избыточного накопления элементов. В настоящее время разработан и апробирован с положительным результатом целый ряд комплексных микроэлементных препаратов на основе ЯК. Среди последних разработок особого внимания заслуживают комплексы ЯК с микроэлементами, известными под названием гемовит и гемовит-плюс (Ю.М. Козлов, 178 2007; Д.В. Пчельников с соавт., 2002). Несомненным достоинством этих препаратов является широкий набор микроэлементов. В этой связи разработка комплексного инъекционного препарата, предназначенного для профилактики и лечения микроэлементозов, нарушений обмена веществ, повышения резистентности организма животных представлялась нам весьма актуальной и практически значимой. Нашей задачей явилась разработка инъекционной формы иммунометаболического состава с широким спектром биологического действия для профилактики и лечения микроэлементозов, нарушения обмена веществ, повышения резистентности организма животных. Поставленная задача была достигнута включением в состав комплексного препарата в качестве иммуномодулятора - АСД-2Ф, в качестве микроэлементов были использованы водорастворимые соли железа, меди, цинка, кобальта. Активатором этих солей служила ЯК. Пролонгатором активных веществ являлся полиэтиленгликоль. Соединение ЯК с микроэлементами значительно повышает их активность и усвояемость и вместе с тем, в случае «передозировки» какого-либо микроэлемента ЯК выступает в роли корректора, предохраняя клетки и ткани от его избыточного поступления. Микроэлементы, входящие в состав являются жизненно необходимыми. Следует отметить, что даже при высоком содержании данных микроэлементов в кормах их усвояемость очень низкая. К примеру, усвояемость железа из большинства кормов может составлять 5-30 %. Недостаток микроэлементов в организме приводит к сбою в работе иммунной системы, вызывает глубокие нарушения обменных процессов. На таком фоне организм животных особенно чувствителен к возбудителям факторных инфекционных болезней. Иммунометаболическая композиция получила рабочее название «Металлосукцинат». Состав иммунометаболической композиции представлен в таблице 53. 179 Таблица 53- Состав иммунометаболической композиции «Металлосукцинат» Название вещества Янтарная кислота АСД-2Ф Сульфат железа Сульфат меди Сульфат цинка Сульфат кобальта Полиэтиленгликоль 400 Вода для инъекций Нормативные документы ГОСТ 6341-75 ТУ 9336-003-54935098-02 ГОСТ 4148-78 ГОСТ 4165-78 ГОСТ 4174-77 ГОСТ 4462-78 ТУ 2483-007-71150986-2006. ФС 42-2620-97 Количество 10 г 40 мл 0,2 г 0,01 0,01 0,1 3мл до 1 л В клинических опытах использовали состав, расфасованный по флаконам емкостью 50,0 мл. Стерилизацию обеспечивали автоклавированием в режиме 1,2 атм. в течение 20 минут. В экспериментах на белых мышах установлено, что разовое, а также двух и трехкратное с интервалом 24 часа внутрибрюшинное введение «Металлосукцината», в дозе 0,25мл не вызвало у них какого-либо нарушения в поведении. Это свидетельствовало о его безвредности и возможности использования в клинических испытаниях. 3.3.2 Эффективность применения иммунометаболической композиции с включением микроэлементов для коррекции метаболического статуса животных На базе учхоза «Знаменское» были проведены две серии научнопроизводственных опытов. В первой серии опытов мы оценивали влияние влияние иммунометаболического состава в сравнении с известным препаратом «Гемовит-плюс» на состояние метаболизма лактирующих коров. В подопытные включались клинически здоровые лактирующие коровы одинаковой продуктивности, возраста и упитанности. Все коровы были разделены на 3 группы, по 5 голов в каждой. Коровам 1-ой группы двукратно, с интерва- 180 лом в 7 дней, внутримышечно, в объеме 5 мл, вводили «Металлосукцинат». Коровы 2-ой группы в эти же дни получали «Гемовит-плюс» из расчета 400 мг железа на голову. Животные третьей группы были контрольными. Биохимические исследования крови проводились до применения препаратов и спустя 10 дней после их применения. Результаты биохимических исследований представлены в таблице 54. Таблица 54. Влияние «Металлосукцината» и препарата «Гемовит-плюс» на биохимические показатели крови и продуктивность лактирующих коров Показатели Общий белок, г/л Общ. липиды, г/л Глюкоза, ммоль/л Медь, мкмоль/л Цинк, мкмоль/л Железо, ммоль/л Кальций, ммоль/л Фосфор, ммоль/л Сроки исследований До опыта После опыта До опыта После опыта До опыта После опыта До опыта После опыта До опыта После опыта До опыта После опыта До опыта После опыта До опыта После опыта 1 группа 68,5±8,2 78,8±7,2* 2,8±0,4 3,8±0,4* 2,3±0,3 2,6±0,3 7,6±1,3 12,6±1,5* 23,5±3,2 28,4±3,4 23,5±42 27,5±38 2,6±0,4 3,2±0,4 3,4±0,3 2,9±0,3 2 группа 67,5±6,2 73,8±7,2 2,8±0,3 3,6±0,4* 2,3±0,4 2,5±0,3 7,7±0,7 10,6±1,3 23,4±2,2 23,5±3,2 23,6±2,2 25,5±42 2,4±0,3 2,6±0,4 3,4±0,4 3,3±0,3 Контроль 66,8±7,2 65,9±6,1 2,7±0,2 2,8±0,4 2,3±0,2 2,3±0,3 7,8±0,9 7,6±1,3 24,8±2,2 24,5±3,2 23,4±2,2 23,5±42 2,3±0,2 2,4±0,4 3,3±0,2 3,2±0,3 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы Результаты исследований свидетельствуют о том, что у опытных животных в крови стабилизировалось содержание общего белка, его содержание в первой опытной группе увеличилось на 15,03 %., во второй опытной группе - на 9,19 %, а в контрольной группе даже незначительно понизилось. Содержание глюкозы в крови коров первой опытной группы поднялось на 13,04 %, у коров 2-ой опытной группы - на 8,69 %, при этом в контроле данный 181 показатель остался на прежнем уровне. Ожидаемо повысилось содержание кальция, в первой опытной группе на 23,07 %. Соотношение кальций/фосфор до опыта составлявшее 0,76 после применения иммунометаболической композиции увеличилось до 1,1. Во второй опытной группе и в контроле столь существенных сдвигов не произошло. Характерные изменения произошли в содержании микроэлементов. Содержание железа в первой опытной группе увеличилось на 17,02 % , во второй опытной группе этот показатель повысился на 4,66 %, а в контрольной группе практически не изменился. Содержание меди в первой и второй опытных группах поднялось на 65,7 и 37,6 % соответственно, в контрольной группе осталось на прежнем уровне. У коров первой опытной группы поднялось содержание цинка на 20,85 %. В других группах содержание этого микроэлемента не изменилось. Оптимизация биохимических показателей положительно отразилась на молочной продуктивности. Во второй серии опытов мы оценивали эффективность применения иммунометаболического комплекса в сочетании с микроэлементами в опытах на новорожденных телятах, в сравнении с препаратом «Гемовит-плюс». В опыте было задействовано 30 телят, которых разделили на три равные группы. Телятам первой опытной группы трехкратно, с интервалом в 7 дней, внутримышечно вводили «Металлосукцинат» в возрастающих дозировках 2-2,5-3мл. Телята второй группы в эти же дни получали «Гемовит-плюс» из расчета 100150-200мг железа. Телята третьей группы были контрольными. Для изучения влияния препаратов на систему гемопоэза определялись гематологические показатели, до применения и повторно, на 5 сутки после применения. Результаты исследований представлены в таблице 55. 182 Таблица 55 - Гематологические показатели телят Показатели Гемоглобин, (г/л) Эритроциты, (1012/л) Лейкоциты, (х109/л) СОЭ, мм/час Нейтрофилы, % палочкоядерные Сегментоядерные, % Эозинофилы, % Базофилы, % Моноциты, % Лимфоциты, % Сроки исследования До опыта После опыта До опыта После опыта До опыта После опыта До опыта После опыта До опыта После опыта До опыта После опыта До опыта После опыта До опыта После опыта До опыта После опыта До опыта После опыта 1 группа 2 группа 98,20±11,40 108,20±12,40* 7,30±0,14 7,90±0,15* 13,80±1,40 13,90±1,50 4,80±0,30 4,60±0,40 2,60±0,30 2,60±0,28 35,40±1,28 36,40±1,40 4,60±0,40 4,50±0,30 2,90±0,14 3,00±0,12 54,50±2,22 53,60±2,82 99,30±12,50 104,40±14,50* 7,30±0,13 7,60±0,15 13,50±1,60 13,70±1,40 4,90±0,30 4,80±0,20 2,50±0,40 2,60±0,22 35,40±1,70 35,20±1,56 4,80±0,20 4,70±0,30 0,40±0,02 0,40±0,02 2,80±0,16 3,00±0,11 53,90±2,01 54,60±3,12 Контроль 98,60±7,80 97,50±6,40 7,40±0,12 7,40±0,14 13,80±1,90 13,80±1,50 4,80±0,40 4,80±0,40 2,60±0,32 2,60±0,32 35,20±1,22 35,20±1,14 4,50±0,30 4,50±0,20 3,00±0,20 3,10±0,12 54,70±3,17 54,60±3,12 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы Под действием имунометаболической композиции с микроэлементами у телят первой опытной группы отмечено достоверное увеличение содержания эритроцитов на 8,21 % и гемоглобина 10,18%. У телят второй опытной группы, получавших «Гемовит-плюс», содержание эритроцитов увеличилось на 4,1 % и гемоглобина - на 5,13 %, в контрольной группе эти параметры не изменились. Остальные гематологические показатели во всех группах остались в пределах физиологической нормы. Наблюдения за приростом живой массы и заболеваемостью телят велись на протяжении 30 дней. Результаты исследований представлены в таблице 56. 183 Таблица 56 - Состояние новорожденных телят Показатель Контроль Группы животных 1 группа 2 группа 10 10 10 33,1 ±1,20 33,8±1,23 32,9±1,35 49,5 ±3,20 56,4±4,23 51,5±4,32 545,5±30,3 755,9 ±21,23 620,6±31,25 9/90 0/0 4/40 Родилось телят, гол Живая масса телят при рождении, кг Живая масса телят в возрасте 30 суток, кг Среднесуточный прирост живой массы, г Регистрация у телят диарейного синдрома, кол-во/% По истечении 30 дней среднесуточный прирост у телят первой группы составил 755,9 ±1,23; во 2-ой – 620,6 г; в контрольной – 545,5±30,3. Живая масса телят в возрасте 30 суток была выше у телят первой опытной группы и составляла 56,4±4,23 кг. В группе телят, которым вводили иммунометаболическую композицию, на протяжении периода наблюдения не было отмечено возникновения желудочнокишечных заболеваний, тогда как во второй опытной и контрольной группах заболеваемость с диарейным синдромом была зарегистрирована в 40 и 90 % случаев, соответственно. Таким образом, применение ЯК в сочетании с микроэлементами обеспечило эффективную коррекцию микроэлементного обмена, что благоприятно отразилось на ростовой активности новорожденных телят и молочной продуктивности лактирующих коров. 184 3.4 Теоретическое и экспериментальное обоснование применения янтарной кислоты для потенцирования биологической активности солей нуклеиновых кислот 3.4.1 Обоснование состава и способ получения иммунометаболической композиции с янтарной кислотой и солями нуклеиновых кислот Данные, представленные в предыдущих разделах, убедительно свидетельствуют о том, что иммунометаболические композиции на основе ЯК с АСД Ф-2, сочетая в себе уникальные свойства компонентов, усиленные при взаимодействии, являются весьма эффективным средством для коррекции метаболизма, повышения естественной резистентности животных, обладают антисептическим, антиоксидантным и общестимулирующим действием. Однако, при разработке этих составов мы столкнулись с рядом проблем, обусловленных именно тем, что они содержат в качестве иммуномодулятора АСД Ф-2. Химический состав органических соединений АСД Ф-2 имеет значительную вариабельность, зависящую от качества исходного сырья, используемого при его изготовлении. Кроме того, технология получения АСД Ф-2, предусматривающая высокотемпературную (500º С) возгонку мясокостной муки, в целом является весьма энергозатратной (В.Е. Абрамов с соавт., 2004).В связи с этим мы поставили своей задачей изучить возможность сочетания уникального внутриклеточного метаболита ЯК с другими лекарственными средствами, обладающими свойствами иммуномодуляторов. Мы пришли к выводу, что в качестве альтернативы АСД 2-Ф при комплектовании лекарственных композиций с заданными свойствами корректора метаболических и иммунных процессов может быть использован нуклеинат натрия, деринат или другой иммуномодулятор, сочетающийся с ЯК по химическим свойствам и механизму биологического действия. Нуклеинат натрия – натриевая соль рибонуклеиновой кислоты. Нуклеинат натрия является классическим стимулятором Т-клеточного звена иммунитета, однако эффективен и для коррекции гуморальной системы иммунитета. Начиная с 185 1980 года, нуклеинат натрия применяется в качестве средства, повышающего противоинфекционную и антитоксическую резистентность, для профилактики и лечения инфекционных заболеваний, протекающих на фоне иммунодефицитных состояний, для стимуляции лейкопоэза, а также для усиления иммуногенности вакцин. К достоинствам препарата относится хорошая совместимость с другими лекарственными средствами. Отрицательным свойством нуклеината натрия является болезненная реакция при парентеральном методе введения препарата. Нуклеинат натрия детально изучен и рекомендуется для применения перорально в количестве 0,2-1г и для инъекций в количестве 2-5 мл 2 % раствора.Данных по сочетанному использованию нуклеината натрия и ЯК в литературе нет. Деринат – натрия дезоксирибонуклеат – биологически активное вещество, представляющее собой вытяжку из молок осетровых рыб. Препарат оказывает иммуномодулирующее действие на клеточном и гуморальном уровнях, активизирует антиинфекционный иммунитет, регулирует гемопоэз, стимулирует репаративные и регенераторные процессы. Применяется как в моно-, так и комплексной терапии при различных патофизиологических состояниях, протекающих на фоне нарушений функционирования иммунной системы. Хорошо совместим с другими лекарственными средствами, что находит применение при разработке комплексных препаратов, в частности, ферровирадеринат в комплексе с поливалентным железом. Для внутримышечного применения используют 1,5 % раствор дерината. Данных по применению дерината в комплексе с ЯК в литературе нет. Для снятия болезненной реакции при инъекциях мы решили включить в состав имунометаболической композиции водный раствор новокаина в 0,25 % концентрации. Состав предлагаемых композиций представлен в таблицах 57 и 58. Таблица 57- Состав иммунометаболической композиции с нуклеинатом натрия Название вещества Янтарная кислота Новокаин Нуклеинат натрия Вода для инъекций Нормативные документы ГОСТ 6341-75 ТУ 64-3-167-84 Регистрационный номер 96/50/3 ФС 42-2620-97 Количество 10 г 2,5 г 20г до 1 л 186 Таблица 58- Состав иммунометаболической композиции с деринатом Название вещества Янтарная кислота Новокаин Деринат Вода для инъекций Нормативные документы ГОСТ 6341-75 ТУ 64-3-167-84 Регистрационный номер 94/128/1 ФС 42-2620-97 Количество 10 г 2,5 г 20г до 1 л 3.4.2 Доклинические испытания иммунометаболической композиции с янтарной кислотой и солями нуклеиновых кислот на лабораторных животных Определение стерильности. При исследовании выборочных образцов испытуемого состава методом прямого посева на стандартные питательные среды: жидкая тиогликолевая среда, рН 7,2 (для аэробных и анаэробных бактерий) и жидкая среда Сабуро, рН 5,6 (для грибов), в течение 14 дней рост микроорганизмов отсутствовал Определение острой токсичности ЯК с нуклеинатом натрия и деринатом с в каждом случае выполнено на 30 нелинейных белых мышах массой 20-22 г. При исследовании каждой смеси были сформированы 1 контрольная группа (6 особей) и 4 опытные по 6 особей. Контрольным мышам вводили внутрибрюшинно физиологический раствор в дозе 0, 5 мл ЯК с нуклеинатом натрия (деринатом) вводили однократно, внутрибрюшинно в дозе в дозах 50, 100, 200, 500 мг/кг (по ДВ). Результаты эксперимента представлены в таблице 59. Таблица 59-Острая токсичность ЯК с нуклеинатом натрия и деринатом при внутрибрюшинном введении белым мышам Доза мг/ кг Животные Выжило Погибло 50 НН с деринат ЯК с ЯК 6 6 0 0 100 НН с деринат ЯК с ЯК 6 6 0 0 200 НН с деринат ЯК с ЯК 6 6 0 0 500 НН с деринат ЯК с ЯК 6 6 0 0 187 Как видно из представленных данных ни одна мышь при введении нуклеината натрия в сочетании с ЯК не погибла, в связи с низкой токсичностью препарата установить LD50 не удалось. Поведение животных не отличалось в опытных и контрольных группах. Аналогичные данные получены при определении острой токсичности смеси дерината с ЯК. Изучение хронической токсичности провели на крысах. Было сформировано пять групп крыс, четыре опытные и контрольная, по 6 голов в каждой, массой 180-200 г. Крысам первой опытной группы ежедневно в течение 30 дней вводили подкожно ЯК с нуклеинатом натрия, в дозе 100 мг/кг, животным второй группы вводили ЯК с деринатом в той же дозе, животным третьей и четвертой опытных групп вводили подкожно ЯК с нуклеинатом натрия и деринатом соответственно, в дозе 500 мг/ кг. Крысам контрольной группы вводили физиологический раствор. Наблюдение за крысами вели в течение 3 месяцев. За весь период наблюдений признаков токсикоза не было выявлено, отличий в поведении и интенсивности роста не отмечено. Изучение протективной активности ЯК в сочетании с солями нуклеиновых кислот провели с использованием тестов антиинфекционной и антитоксической защиты. В первом тесте изучение протективной активности проведено на нелинейных белых мышах, массой 18-20 г. Моделирование острого инфекционного процесса осуществлялась введением культуры золотистого стафилококка. Смеси ЯК с нуклеинатом натрия и деринатом вводили внутрибрюшинно в объеме 0,5 мл. В аналогичном объеме внутрибрюшинно контрольной группе мышей вводили физиологический раствор. Спустя два часа провели заражение мышей культурой золотистого стафилококка в дозе 2 LD50. В каждой группе было по 10 мышей. Результаты проведенного опыта представлены в таблице 60. 188 Таблица 60 -Уровень защиты белых мышей при заражении культурой золотистого стафилококка Препарат 2 день Нуклеинат натрия с ЯК Деринат с ЯК Нуклеинат натрия Деринат Физ. р-р 1 1 2 1 8 Число погибших мышей после заражения в дни наблюдения Осталось 4 день 6 день 8 день 10 день в живых 2 7 2 2 3 1 - - - 7 6 6 1 Из результатов проведенных экспериментальных опытов следует, что композиции, содержащие в качестве метаболического компонента и стимулятора энергетического обмена ЯК и в качестве иммуностимулятора нуклеинат натрия или деринат, обеспечивают выраженный уровень протективной активности при моделировании летальной инфекции. Во втором тесте изучение протективной активности провели на белых мышах при моделировании у них острого токсикоза экзотоксином золотистого стафилококка в дозе 2 LD50. Спустя 2 часа после введения токсина всем подопытным мышам внутрибрюшинно инъецировали испытуемые составы в объеме 0,5 мл на одну мышь. В каждой группе было по 10 мышей. Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 61. Таблица 61 -Уровень защиты белых мышей при моделировании острого токсикоза токсином золотистого стафилококка Число погибших мышей после заражения в дни наблюдения Препарат Осталось 2 день 4 день 6 день 8 день 10 день в живых Нуклеинат натрия с ЯК 3 3 4 Деринат с ЯК 4 2 4 Нуклеинат натрия 3 4 3 Деринат 3 4 3 Физ. р-р 8 2 0 189 Результаты экспериментального опыта свидетельствуют о том, что испытуемые составы обеспечивают защиту 40% мышей от действия микробного экзотоксина, в то время, как отдельные компоненты обеспечивают выживаемость лишь 30% мышей. Гибель мышей в контрольной группе составила 100 %. При определении иммунотропных свойств смесей ЯК с нуклеинатом натрия и деринатом ЯК пользовались «Руководством по экспериментальному (доклиническому) изучению фармакологических веществ» (2000). Иммунотропные свойства составов изучали в 3 опытах на мышах линии CBA, массой 18 – 20 г. Было сформировано 2 опытные и одна контрольная группа, по 10 особей в каждой. Опыт 1. Было сформировано 2 опытные и одна контрольная группа мышей, по 10 особей в каждой. Мышей иммунизировали ЭБ в дозе 0,5 мл 2 % р-ра, внутрибрюшинно. Испытуемые составы вводили в дозе 0,1 мл , внутримышечно. Для содержания определения АОК мышей забивали на 4 сутки. Число АОК определяли на 106 клеток селезенки. Индекс стимуляции (ИС) определяли как отношение числа АОК в опыте к числу АОК контроле (введение только ЭБ). Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 62. Таблица 62 -Изменение количества антителопродуцентов в селезенке мышей Доза испытуемого Содержание АОК препарата Нуклеинат натрия 0,1 мл 1,28±0,02 с ЯК Деринат с ЯК 0,1 мл 1,30±0,02 Контроль ЭБ 0,84±0,01 Препарат ИС 1,52 1,54 - 190 По результатам исследований установлено, что испытуемые составы обеспечивают активизацию трансформации В-лимфоцитов в АОК. ИС составил 1,54 для нуклеината натрия с ЯК и 1, 54 для дерината с ЯК. Опыт 2. Было сформировано две опытные и одна контрольная группа мышей, по 10 особей в каждой. В данном опыте определяли изменение титров антител в сыворотке крови мышей при внутримышечном введении нуклеината натрия с ЯК и дерината с ЯК. Испытуемые составы вводили в дозе 0,1 мл одновременно с внутрибрюшинной иммунизацией 2 % взвесью ЭБ Результаты проведенного эксперимента представлены в таблице 63. Таблица 63- Изменение титров антител в сыворотке крови мышей Доза испытуемого Агглютинины Lg2 препарата Нуклеинат натрия 0,1 мл 3,74±0,02 с ЯК Деринат с ЯК 0,1 мл 3,66±0,04 Контроль ЭБ 3,04±0,05 Препарат ИС 1,23 1,20 - По результатам исследований (7-е сутки после введения препаратов) титры агглютининов в сыворотке крови в группе мышей, получавших нуклеинат натрия с ЯК составили 3,74±0,02 Lg2 в группе мышей, получавших деринат с ЯК 3,66±0,04 Lg2 , в контроле титры агглютининов составили 3,04±0,05 Lg2. Опыт 3. Влияние препаратов на клеточный иммунитет оценивали по индукции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) и по изменению количества ауторозеткообразующих клеток (ауто-РОК). Одновременно с внутримышечным введением тестируемого препарата мышей внутрибрюшинно иммунизировали 2% взвесью ЭБ, на 5-е сутки вводили разрешающую дозу ЭБ – 10% взвесь в объеме 0,02 мл в подушечки правых лап, в коллатеральную лапу вводили 0,9% раствор натрия хлорида.Через 24 часа определяли сдвиг ИВ (индекс воспаления), который вычисляли по формуле: опыт – контр. × 100% контр. 191 В результате исследований установлено, что ЯК с нуклеинатом натрия и ЯК с деринатом вызывают индукцию ГЗТ у мышей, т.е. местную воспалительную реакцию. Введение ЯК с нуклеинатом натрия вызывало сдвиг ИВ на 16,2 %, ЯК с деринатом – на 15,8% , что достоверно отличалось от показателей контрольных животных – 13,5 %. Из результатов проведенных исследований следует, нуклеинат натрия и деринат в сочетании с ЯК обеспечивает хорошо выраженную стимуляцию гуморального иммунного ответа на тимусзависимый антиген (ЭБ). Стимулирующее действие на клеточное звено иммунитета проявилось увеличением степени выраженности воспалительной реакции в месте введения разрешающей дозы антигена (ЭБ). Полученные данные свидетельствует о наличии иммуностимулирующей активности составов, превышающих активность исходных компонентов. Влияние ЯК в сочетании с солями нуклеиновых кислот на метаболические процессы у лабораторных животных Оценку влияния препаратов на метаболические процессы проводили в опытах на белых мышах. Для проведения опыта было сформировано 4 группы, по 10 особей в каждой. Испытуемые составы вводили в дозе 0,1 мл, внутримышечно с интервалом 48 часов, 3 раза. Мышам контрольных групп вводили 1,5% рр сукцината натрия и 0,25 % раствор новокаина в аналогичной дозе. Исследование крови провели до начала опыта, а затем на 14 день. Результаты исследований представлены в таблице 64. По результатам проведенных исследований установили, что фоновые биохимические показатели крови мышей имели признаки нарушения обмена веществ. В частности, отмечалась гипопротеинемия, повышенное содержание мочевины и холестерина. Содержание кальция было несколько понижено и соотношение кальций / фосфор не было физиологически оптимальным. 192 Таблица 64-Влияние испытуемых ЯК в сочетании с солями нуклеиновых кислот на обменные процессы у мышей Показатели Общий белок, г/л Мочевина, моль/л Холестерин, ммоль/л Кальций, ммоль/л Фосфор, ммоль/л Сроки исследований До опыта После опыта До опыта После опыта До опыта После опыта До опыта После опыта До опыта После опыта 1,5 % р-р сукцината натрия 54,52±0,98 54,56±0,74 2,61±0,24 2,31±0,23 2,41±0,12 2,04±0,23* 1,48±0,52 1,96±0,28 1,45±0,46 1,32±0,58 Препараты Нуклеинат Деринат с ЯК натрия с ЯК 53,91±1,46 54,27±0,84 55,46±1,76* 56,75±1,46* 2,72±0,19 2,66±0,28 2,36±0,19* 2,23±0,21* 2,75±0,16 2,56±0,24 2,18±0,23* 2,20±0,25* 1,84±0,36 1,56±0,22 2,14±0,31* 2,19±0,42* 1,56±0,75 1,64±0,69 1,44±0,26 1,37±0,28 0,25% р-р новокаина 54,24±1,30 54,21±1,46 2,73±0,12 2,71±0,38 2,63±0,15 2,68±0,32 1,37±0,12 1,32±0,17 1,42±0,58 1,44±0,32 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим фоновым показателем ; Введение нуклеината натрия и дерината в сочетании с ЯК привело увеличению содержания белка в сыворотке крови, при этом показатель остался в пределах физиологической нормы. В группе мышей, получавших 0,25 % р-р новокаина, содержание белка осталось на прежнем уровне. Введение препаратов привело к некоторому снижению содержания мочевины и холестерина в опытных группах, а так же к оптимизации кальций- фосфорного соотношения. Таким образом, можно сделать заключение, что с нуклеинаит натрия и деринат в сочетании с ЯК, оказывают нормализующее действие на метаболические процессы. Изучение стресс-корректорного действия ЯК в сочетании с солями нуклеиновых кислот Адаптогенные свойства испытуемых составов оценивали на модели острого иммобилизационного стресса. Исследования проведены на 20 самцах нелинейных белых крыс массой тела 170-200 г. Было сформировано 5 групп по 4 особи в каждой, три опытные, одна контрольная и одна группа интактных животных. Животным первой и второй опытных 193 групп вводили ЯК с нуклеинатом натрия и деринатом соответственно, однократно внутримышечно в дозе 0,5 мл. Животным третьей опытной группы вводили 1,5 % р-р сукцината натрия, в той же дозе, контрольным крысам инъецировали соответствующий объем стерильного физиологического раствора. Иммобилизация животных контрольной группы сопровождалась развитием классических симптомов острого стресса — стрессогенным снижением массы тела и развитием эрозивно-язвенных поражений слизистой оболочки желудка, гипертрофией надпочечников и инволюцией тимуса и селезенки. Результаты эксперимента представлены в таблице 65. Таблица 65- Влияние препаратов на изменение массы тела крыс при иммобилизационном стрессе Препараты Показатели До иммобилизации, масса, г После иммобилизации масса, г Снижение массы, % Разница с контролем, % Контроль 187,7±7,5 Нуклеинат натрия с ЯК 180,5±4,1 Деринат с ЯК 181,7±4,9 Сукцинат натрия 188,7±5,3 171,4±7,0 171,9±4,0 170,9±3,8 175,1±4,5 8,7±0,5 - 4,8±0,4 44,9 5,9±0,52 32,2 7,2±0,5 17,3 В результате проведенных исследований установлено, что сочетание нуклеината натрия и дерината с ЯК обеспечивает предупреждение стрессогенного снижения массы тела животных на 44,9 % и 32, 2 % соответственно, превосходя по этому показателю сукцинат натрия. Результаты по определению ульцеропротективных свойств иммуннометаболической композиции представлены в таблице 66. 194 Таблица 66-- Влияние препаратов на язвообразование при иммобилизациионном стрессе Препараты Показатели Контроль Количество пораженных 4/100 животных/ % Разница с контролем, % — Суммарная длина язв, мм 5,92±1,89 % к контролю — Нуклеинат натрия с ЯК с2/50 ЯК Деринат с ЯК 2/50 Сукцинат натрия 3/75 50 2,22±0,28* 37,5 50 2,04±0,55* 34,4 25 3,46±0,63* 58,4 * - Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы Ульцеропротективные свойства проявляются снижением количества животных со стрессогенными язвенными поражениями слизистой оболочки желудка на 25 -50 % и уменьшением суммарной длины язв. Таким образом, в результате проведенных экспериментальных исследований установлено, что нуклеинат натрия и деринат в сочетании с ЯК обладают выраженной иммуногенной, метаболической и адаптогенной активностью, превышающей показатели отдельных компонентов. 3.4.3 Оценка эффективности иммунометаболической композиции с нуклеинатом натрия при гипотрофии телят Проблемой современного молочного скотоводства является рождение функционально недостаточно зрелых телят (гипотрофиков). Морфологическая и функциональная незрелость важных систем организма являются основными причинами низкой адаптивной способности телят. В организме физиологически незрелых животных возникает комплекс иммунологических и морфологических изменений, связанных с развитием иммунологической недостаточности. Нарастающая гипоксия затрудняет репаративные процессы, способствует нарушению межклеточных отношений, возникновению патологических межклеточных связей, снижению чувствительности клеток к медиаторам иммунитета и, как следствие, к 195 персистенции возбудителей. Предупреждение заболеваний должна обеспечивать эффективная превентивная ветеринария, основывающаяся на использовании стимуляторов энергетического обмена, иммуномодуляторов и микроэлементов. В связи с этим мы провели изучение влияния иммунометаболической композиции с нуклеинатом натрия и ЯК на состояние неспецифической резистентности и иммунологической реактивности телят-гипотрофиков в условиях учхоза «Знаменское». Для проведения исследований были отобраны телята месячного возраста с клиническими признаками физиологической незрелости. По принципу аналогов было сформировано три группы, первая опытная, вторая опытная и третья контрольная, по 10 голов в каждой. Телятам первой опытной группы двукратно, внутримышечно, с интервалом 24 ч, в дозе 3,0 мл были сделаны инъекции иммунометаболической композиции с нуклеинатом натрия и ЯК. Животным второй опытной группы вводили в той же дозе нукленат натрия без ЯК. Контрольной группе по аналогичной схеме вводился физиологический раствор. Контрольные иммунологические исследования провели на 5-7 сутки. Результаты исследований представлены в таблице 67. Таблица 67 -. Динамика гематологических показателей и факторов неспецифической резистентности телят – гипотрофиков Показатели Сроки исследования до лечения БАСК, % после лечения ФАН, % до лечения до лечения до лечения Ig M, г/л после лечения до лечения Ig G, г/л после лечения Т-лимфоциты, до лечения % после лечения В-лимфоциты, до лечения % после лечения 1 опытная группа 54,70±1,60 64,90±1,50* 47,20±1,90 65,80±2,30* 1,76±0,12 2,16±0,31 10,86±0,42 15,68±0,56 24,25±1,31 37,55±1,58* 10,20±1,90 17,80±2,30* 2 опытная группа 52,60±1,70 61,80±1,40* 47,40±1,60 64,90±2,40 1,86±0,10 2,12±0,10 11,82±0,46 14,89±1,58 26,41±1,54 32,82±1,44* 11,40±1,60 14,90±2,40 Контрольная группа 54,20±1,50 56,10±1,40 47,50±2,30 51,60±1,90 1,78±0,22 1,78±0,18 10,76±0,54 10,87±0,54 24,20±1,50 24,10±1,80 10,50±2,10 10,60±1,70 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы 196 По результатам проведения иммунологических исследований установлено, что применение иммунометаболической композиции обеспечило хорошо выраженный стимулирующий эффект на клеточную и гуморальную системы иммунитета и факторы неспецифической резистентности. Содержание Т-лимфоцитов повысилось в первой опытной группе на 54,8%, во второй опытной группе на 24,27%, тогда как в контроле осталось практически на прежнем уровне. Уровень Ig G в первой группе повысился на 44,38%, составив 15,68±1,58 г/л, против 14,89±1,58 во второй группе и 10,87±0,54 г/л в контроле. Аналогичная тенденция отмечена в отношении БАСК и ФАН. Таким образом, нуклеинат натрия с ЯК, обладает выраженным иммуностимулирующим действием, превышающим активность исходного препарата, что может иметь положительное значение в комплексной сопроводительной терапии инфекционных заболеваний и антиинфекционной защите 3.5 Теоретическое и экспериментальное обоснование включения в состав иммунометаболической композиции с солями нуклеиновых кислот микроэлементов Результаты исследований, изложенные в разделе 3.3, показали, что применение ЯК в сочетании с микроэлементами, обеспечило эффективную коррекцию микроэлементного обмена, повысило уровень факторов естественной резистентности продуктивных животных, что благоприятно отразилось на профилактике желудочно-кишечных заболеваний, ростовой активности подопытных животных, молочной продуктивности лактирующих коров. По результатам лабораторных испытаний сочетанного применения ЯК с солями нуклеиновых кислот (раздел 3.4) данная иммунометаболическая композиция обладает выраженной иммуногенной, метаболической и адаптогенной активностью, превышающей показатели отдельных компонентов. Мы пришли к выводу, что сочетание ЯК с нуклеинатом натрия и микроэлементами может быть весьма эффективным для профилактики и лечения на- 197 рушений обменных процессов, микроэлементозов, усиления гепатопротекторной функции, повышения резистентности организма животных. Предлагаемая иммунометаболическая композиция позволяет получить одновременно метаболический, гепатопротекторный, иммуностимулирующий эффекты. Компоненты, входящие в его состав, являются доступными и стандартными. Полученная иммунометаболическая композиция получила название «Металлосукцинат плюс», ее состав представлен в таблице 68. Таблица 68- Состав иммунометаболической композиции «Металлосукцинат плюс» Название вещества Янтарная кислота Нуклеинат натрия Сульфат железа Сульфат меди Сульфат цинка Сульфат кобальта Вода для инъекций Нормативные документы ГОСТ 6341-75 Регистрационный номер 96/50/3 ГОСТ 4148-78 ГОСТ 4165-78 ГОСТ 4174-77 ГОСТ 4462-78 ФС 42-2620-97 Количество 10 г 20г 0,2 г 0,01г 0,01г 0,1г до 1 л Данное соотношение ЯК, солей металлов и нуклеината натрия найдено экспериментально и обеспечивает получение синергетического эффекта при парентеральном методе введения. Стерилизация автоклавированием не изменяет физико-химических свойств и биологической активности препарата. Полученный состав был стерилен. При посевах проб состава на мясопептонный бульон (МПБ) и МПБ под вазелиновое масло в пробирках и на мясопептонный агар (МПА) на чашках Петри с последующей выдержкой в термостате при 37ºС в течение 48 часов рост микрофлоры отсутствовал. При проверке острой и субхронической токсичности лекарственной композиции на белых мышах установлено, что LD50 составила 22500 мг/ кг живой массы, что позволяет отнести ее к классу малоопасных средств. 198 Полученная лекарственная композиция, названная нами «Металлосукцинат плюс» при испытании на животных индуцировала ряд жизненно важных биологических эффектов, которые мы иллюстрируем соответствующими примерами. 3.5.1 Результаты применения иммунометаболической композиции с солями нуклеиновых кислот и микроэлементами при гепатозе коров В настоящее время заболевания печени у коров в промышленном животноводстве являются одной из сложных проблем, стоящих перед ветеринарной наукой и практикой. Использование в рационах высококонцентратных кормов ведет к дисбалансу питательных веществ в них, нарушению обмена веществ и накоплению недоокисленных продуктов в организме животных. В первую очередь это оказывает отрицательное влияние на печень - центральный орган, участвующий во всех видах обмена веществ и первый барьер на пути токсинов. Повышенные функциональные нагрузки печени часто вызывают развитие гепатодистрофических процессов, которые приводят к снижению продуктивности, способности воспроизводить резистентный молодняк, преждевременной выбраковке животных. Опыт проводили в условиях животноводческого комплекса ОАО «КурскИволга» Курского района. В хозяйстве были выявлены нарушения зоогигиенических нормативов: недостаточная освещенность, повышенная влажность и низкая температура воздуха, содержание в нем вредных газов (аммиака, углекислого газа, сероводорода), отсутствие моциона в зимнее время. Погрешности в технологии кормления включали превышение нормативов по количеству обменной энергии, переваримого протеина, сырой клетчатки, кальция, магния, калия, каротина; недостаток сахара, фосфора, витамина D; низкое сахаропротеиновое отношение (0,3:1); неудовлетворительное качество сенажа, что свидетельствовало о белковом перекорме коров. 199 При формировании подопытных групп провели целенаправленный отбор животных, принимая во внимание клинические признаки: нарушение пищеварения, увеличение области печеночного притупления, рассасывание последних хвостовых позвонков и результаты биохимических исследований мочи: наличие желчных пигментов и уробилина. Все вышеуказанные признаки давали основание считать коров больными гепатозом. Для установления степени разбалансированности обменных процессов провели биохимические исследования крови. При фоновых исследованиях выявлены серьезные нарушения всех видов обмена веществ. У больных животных отмечалась гиперпротеинемия (белок в среднем на уровне 86,42-87,46г/л), нарушение кислотно-щелочного состояния организма, выразившееся в снижении резервной щелочности, повышенном содержании общего билирубина и печеночных ферментов (АСТ и АЛТ). Падение резервной щелочности по-видимому приводило к повышенному выведению щелочных элементов (кальция) через кишечную стенку. Фосфор же задерживался в организме вследствие нарушения функции печени, что приводило к нарушению кальций/фосфорного соотношения. У больных животных отмечалось повышение содержания кетоновых тел, снижение содержания общих липидов и пониженное содержание микроэлементов. На основании полученных результатов биохимических исследований провели окончательный отбор подопытных животных, которые имели сходные показатели обменных процессов, свидетельствовавшие о нарушенном функциональном состоянии печени. По принципу аналогов было сформировано две группы животных: опытная (n=9) и контрольная (n=7). Коровам опытной группы трёхкратно с интервалом в 24 часа, в дозе 10,0 мл внутримышечно вводили иммунометаболический состав ЯК, нуклеинатом натрия и микроэлементами (металлосукцинат - плюс). Коровам контрольной группы по аналогичной схеме были сделаны инъекции нуклеината натрия (без ЯК). 200 Контроль изменений в обменных процессах провели на основании биохимических исследований сыворотки крови на 14 сутки после инъекции препарата. Результаты проведённых исследований отразили в таблице 69. При клиническом наблюдении установлено, что спустя сутки после первой инъекции металлосукцината - плюс у коров активировалась жвачка и сокращения рубца. На 5 сутки у них значительно повысился аппетит, полностью восстановилась жвачка и сокращения рубца. Отмечена выраженная тенденция роста молочной продуктивности. При контрольных биохимических исследованиях крови на 14 сутки после начала опыта в крови всех коров опытной группы на 39,82% снизился уровень кетоновых тел, что указывало на выраженное улучшение функциональной активности печени. Практически у всех коров опытной группы произошла полная нормализация содержания белка (снижение на 5,75%). Содержание кальция увеличилось на 20,61% , достигнув уровня 2,34±0,13 ммоль/л. Показатель содержания неорганического фосфора снизился до уровня 2,46±0,24ммоль /л (на 22,64%) . Важным моментом является повышение резервной щёлочности до уровня фи- зиологической нормы (46,86±6,20 об.%СО2). Под действием иммунометаболичского состава произошла нормализация содержания общего билирубина и активности печеночных ферментов (АЛТ и АСТ) Полученные данные свидетельствуют о высокой метаболической активности испытуемого состава. Достоверное повышение уровня содержания в крови железа (на 8,51%), меди (на 18,07%), цинка (27,6%) , кобальта (на 39,13 %) свидетельствует об улучшении их усвояемости организмом. Аналогичных изменении в контрольной группе не отмечено. 201 Таблица 69 - - Влияние металлосукцината - плюс на обменные процессы коров при гепатозе Белок, г/л Резервная щёлочность, об.%СО2 Глюкоза, ммоль/л До опыта 1 опытная группа 2 контрольная группа 87,46±10,26 86,42±10,73 26,82±3,21 25,94±3,46 2,60±0,30 2,40±0,40 После опыта 1 опытная группа 2 контрольная группа 82,43±8,26* 85,38±11,43 46,86±6,20* 26,54±4,42 4,60±0,30* 2,60±0,40 Кетоновые тела, ммоль/л Общий билирубин, мкмоль/л Щелочная фосфатаза,ед/л АЛТ АСТ Кальций, ммоль/л Фосфор, ммоль/л Железо, мкмоль/л Медь, мкмоль/л Цинк, мкмоль/л Кобальт, мкмоль/л 2,26±0,34 6,76±1,35 36,42±3,26 46,46±3,28 109,56±13,28 1,94±0,13 3,18±0,14 22,27±1,80 8,85±0,39 12,24±0,32 0,23±0,28 2,64±0,36 6,85±1,48 35,28±4,27 45,16±5,20 108,26±12,20 1,36±0,24* 4,24±1,12 25,42±3,12 32,86±6,24 89,54±10,26 2,67±0,32 5,84±1,35 36,42±3,26 45,46±6,32 109,56±11,18 1,87±0,16 3,14±0,16 22,39±2,50 8,35±0,39 12,12±0,18 0,24±0,15 2,34±0,13* 2,46±0,24* 24,18±1,60* 10,45±0,38* 15,62±0,12* 0,32±0,16* 1,89±0,24 3,06±0,16 23,18±1,70 8,45±0,42 11,24±0,22 0,23±0,16 Показатели * - Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы 202 Активация процессов обмена веществ, выраженное улучшение функциональной деятельности печени, устранение ацидотического состояния положительно отразилось на молочной продуктивности коров. Суточный удой от каждой опытной коровы повысился на 1,0 - 1,1 л . У коров контрольной группы молочная продуктивность в этот период оставалась практически на прежнем уровне. При этом коровы опытной группы выглядели лучше, волосяной покров у них был ровным, в то время как у контрольных животных он был взъерошен и тусклым. 3.6 Теоретическое и экспериментальное обоснование применения янтарной кислоты для потенцирования биологической активности и снижения токсического действия левамизола Одна из основных проблем современной ветеринарии - разработка эффективных методов защиты животных от возбудителей гельминтозов. Задача поиска и внедрения в практику препаратов, препятствующих развитию иммуносупрессии и интоксикации, возникающей при применении ряда антгельминтиков высоко актуальна. Все гельминты вызывают иммуносупрессивный эффект, угнетая клеточную и гуморальную системы иммунитета. Это приводит к повышению чувствительности организма животных к возбудителям эндогенных инфекций. Кроме того, на фоне гельминтозов не вырабатывается адекватный естественный и искусственный иммунитет. В ветеринарной практике препараты, стимулирующие функции иммунной системы, при гельминтозах находят пока ограниченное применение. Одним из широко применяемых в ветеринарии и медицине препаратов для лечения нематодозов является левамизол. Первоначально этот препарат был предложен в качестве противоглистного средства. В дальнейшем, при изучении антигельминтного действия левамизола было обнаружен иммуномодулирующий эффект, проявляющийся в том, что он повышает устойчивость организма к инфекционным патогенам. В экспериментальных опытах на изолированных клетках и наблюдениях за здоровыми и больными людьми было установлено, что препа- 203 рат способен усиливать целый ряд функций периферических Т-лимфоцитов и фагоцитов: пролиферацию Т-клеток, способность их образовывать Е-розетки, фагоцитарную активность и направленный хемотаксис фагоцитов, выработку лимфокинов лимфоцитами, стимулированными митогенами. Левамизол с определенной степенью избирательности стимулирует супрессорные Т-лимфоциты (Тс- клетки). Левамизол, избирательно стимулируя регуляторную функцию Т- лимфоцитов, может выполнять функции иммуномодулятора, способного усилить слабую реакцию клеточного иммунитета, ослаблять сильную и не действовать на нормальную. Эти свойства левамизола открывают большие перспективы для применения его в ветеринарии. Однако препарат обладает низким химиотерапевтическим индексом. Главными симптомами неблагоприятного действия левамизола являются атаксия, возбуждение, судороги, тремор, одышка. Нередки случаи смерти животных после использования левамизола даже в терапевтических дозах. Мы предположили, что сочетанное применение левамизола с ЯК позволит снизить его неблагоприятное воздействие на организм, сохранив нематоцидную активность и повысив иммунотропные свойства. Для проведения опытов использовали состав, содержащий в качестве метаболического компонента и энергетического корректора ЯК (1 %) в качестве антигельминтика и иммуномодулятора левамизол (7,5 %). 3.6.1 Доклинические испытания левамизола в сочетании с янтарной кислотой на лабораторных животных Исследование острой токсичности левамизола в сравнении с сочетанием левамизола с ЯК в каждом случае выполнено на нелинейных белых мышах массой 20-22 г. При исследовании каждого препарата были сформировано по 4 опытные группы по 6 особей в каждой и 1 общая контрольная группа (n=5). Контрольным мышам вводили внутрибрюшинно физиологический раствор в дозе 0, 5 мл. 204 Препараты вводили однократно, внутрибрюшинно в дозе в дозах 30, 75, 150, 225 мг/кг. Результаты эксперимента представлены в таблице 70. Таблица 70 - Острая токсичность левамизола и левамизола с ЯК Доза мг/кг Выжило Погибло 30 6 0 Левамизол 75 150 2 1 4 5 225 0 6 30 6 0 Левамизол с ЯК 75 150 225 4 2 0 2 4 6 Контроль 0 0 0 У животных контрольной группы и в группе получивших левамизол в дозе 30 мг/кг двигательная активность и иные внешние признаки поведения не изменялись. В группе мышей, получивших левамизол в дозе 75 мг/ кг спустя 15-20 минут от момента введения препарата наблюдали судороги и угнетение, продолжающееся в течение 2-2,5 часов. Две мыши погибли в течение трех часов, еще две - в течение первых суток после ведения препарата. В группе мышей, получивших левамизол в дозе 150 мг/кг, отмечалось возбуждение, сменившееся угнетением, судороги, 3 мыши погибли в течение 1,5-3 часов после ведения препарата, гибель еще 2–х наступила через 6 часов. В группе мышей, получивших левамизол в дозе 225 мг/кг, гибель всех животных наступила в течение 15-20 минут после введения препарата. По результатам опыта рассчитана LD 50 = 85 мг/кг. При вскрытии мышей, погибших в первые сутки после введения левамизола, отмечено умеренное количество точечных кровоизлияний под плеврой, перикардом и по брюшине. Жидкая кровь в полостях сердца и в сосудах. Слизистая желудка, тонкого и толстого кишечника серого цвета, в просвете тонкой кишки кровянистое содержимое. Ткань печени, почек, легких, головного мозга без выраженных морфологических изменений, с неравномерным кровенаполнением. Левамизол с ЯК вводили однократно, подкожно, в тех же тех же дозах. Гибель 2-х мышей в группе, получивших лекарственную смесь в дозе 75 мг/кг на- 205 ступила в течение суток после введения препарата. Четыре мыши остались живы. В группе получивших состав в дозе 150 мг/кг, две мыши погибли через шесть часов, еще две через сутки после введения. Две мыши остались живы. В группе мышей, получивших лекарственную смесь в дозе 225 мг/кг, все мыши погибли в течение 1-3 часов. По результатам опыта LD50 = 117,5 мг/кг для левамизола с ЯК. Таким образом, сочетание левамизола с ЯК привело к существенному снижению токсичности препарата и увеличению значения LD50. Изучение хронической токсичности проводили на крысах и на собаках. Опыт 1. Было сформировано пять групп крыс, четыре опытные и контрольная, по 6 голов в каждой, массой 180-200 г. Крысам первой опытной группы ежедневно в течение 30 дней вводили подкожно левамизол в дозе 15 мг/кг, животным второй опытной группы вводили левамизол с ЯК в той же дозе, животным третьей и четвертой опытных групп вводили подкожно левамизол и левамизол с ЯК соответственно, в дозе 30 мг/ кг. Крысам контрольной группы вводили физиологический раствор. Наблюдение за крысами вели в течение 3 месяцев. За весь период наблюдений признаков токсикоза не было выявлено, крысы второй опытной группы были более активны. Опыт 2. Было сформировано 5 опытных групп собак, по 4 головы в каждой. Собаки беспородные, массой 20±4,3 кг. В течение 30 дней собакам первой опытной группы левамизол вводили подкожно, в дозе 15 мг/мл, собакам второй опытной группы – в той же дозе вводили левамизол с ЯК, животным третьей опытной группы левамизол вводили в дозе 30 мг/кг, четвертой - левамизол с ЯК в той же дозе. Собакам контрольной группы вводили физиологический раствор в дозе 10 мл, подкожно. Наблюдение за животными вели на протяжении 3 месяцев, в период введения левамизола в дозе 30 мг/кг у собак третьей опытной группы отмечали снижение аппетита и вялость, у отдельных животных судороги, после отмены препарата эти явления прекратились. 206 3.6.2 Клинические испытания левамизола в сочетании с янтарной кислотой на продуктивных животных 3.6.2.1 Оценка иммуностимулирующей и метаболической активности левамизола в сочетании с янтарной кислотой Исследования провели на поросятах 2-2,5 мес. возраста, спонтанно инвазированных аскаридами. Было сформировано две опытные и контрольная группа поросят, по 5 голов в каждой. Первой опытной группе поросят внутримышечно инъецировали комплексный состав левамизол с ЯК в дозе 2,0 мл. Поросятам второй опытной группы в той же дозе вводили стандартный раствор левамизола. Животным контрольной группы вводили физиологический раствор. Поросята первой опытной группы хорошо перенесли инъекции препарата. Побочного действия не отмечено. У всех поросят второй опытной группы спустя 10-15 минут после введения препарата были отмечены выраженные признаки нервного возбуждения, позывы на рвоту и рвота. Признаки возбуждения проявлялись в течение часа. Контрольные исследования для определения влияния препаратов на иммунобиохимический статус поросят провели на 5 и 14 сутки. Результаты иммунобиохимических исследований представлены в таблице 71. У поросят, спонтанно инвазированных аскаридами, имеются признаки иммунодефицита. Показатели содержания общего белка, кальция и резервная щелочность существенно ниже физиологических значений. Имеет место снижение содержания лимфоцитов до уровня 49,14±1,42 -. 49,55±2,54%, понижение уровня Т-лимфоцитов до уровня 24,26 ±1,32 - 26,4±1,5 % и В- лимфоцитов до уровня. 9,8±1,6 -10,54±1,089. 207 Таблица 71-. Иммунобиохимические показатели крови поросят на фоне применения левамизола с ЯК и стандартного раствора левамизола Показатели 12 Эритроциты, (х10 л) Гемоглобин, г/л Лейкоциты, г/л Лимфоциты, % Т-лимфоциты, % В-лимфоциты, % Ig М, г/л Ig G, г/л БАСК, % ФАН, % Общий белок, г/л Кальций, ммоль/ Неорганический фосфор, ммоль/л Резервная щелочность, об. % СО2 До опыта 1 опытная 3,98±0,81 48,92±3,94 8,53±0,42 49,14±1,42 24,26±1,32 10,54±1,08 2,02±0,06 7,66±0,28 77,83±1,44 60,70±0,50 51,70±1,50 2,45±0,11 1,56±0,05 34,46±4,65 2 контроль 3,94±0,78 49,60±2,50 8,54±0,44 49,55±2,54 26,40±1,50 9,80±1,60 2,11±0,05 7,84±0,42 76,70±1,30 45,90±1,50 52,90±1,90 2,63±0,03 1,69±0,07 34,44±5,11 * - Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы После опыта 1 опытная 2 контроль 4,18±0,56* 3,96±0,62 58,90±3,90 56,66±2,82 9,50±0,30 8,42±0,24 57,48±1,14 50,16±2,32 47,50±2,40* 27,20±1,80 18,60±1,10 10,20±1,10 2,73±0,06 2,45±0,03 10,78±0,35* 8,27±0,26 92,20±2,50 91,10±1,50 60,70±0,50* 45,90±1,50 60,70±0,70* 53,80±3,70 3,03±0,04 2,72±0,04 1,54±0,01 1,57±0,05 44,56±2,05 34,90±3,15 . 208 Под действием левамизола в сочетании с ЯК в опытной группе поросят содержание эритроцитов повысилось на 5,02 %, а в контрольной группе отмечено снижение этого показателя после дегельминтизациии. Аналогичная картина наблюдалась по содержанию гемоглобина. Содержание Т-лимфоцитов повысилосьдо уровня 47,5±2,4% , против 27,2±1,8% в контроле. В опытной группе нормализовались основные метаболические показатели. Содержание белка стало выше, чем в контрольной на 11, 36% (Р < 0,05). Содержание кальция выше чем в контрольной группе на 10, 23% (Р < 0,05). Показатель резервной щелочности превысил уровень контроля на 21,65% Таким образом, применение левамизола в сочетании с ЯК оказало выраженное стимулирующее влияние на гемопоэз и состояние естественной резистентности поросят 3.6.2.2 Оценка влияния левамизола в сочетании с янтарной кислотой на функциональное состояние печени у коров Исследования провели на коровах в период регистрации у них биохимических нарушений, свойственных заболеванию гепатозом. В качестве препаратов сравнения использовали стандартный раствор левамизола и опытный образец препарата, приготовленного согласно описанию в изобретении № 2200547 (препарат для лечения гепатоза животных), содержащий в своем составе аминокислоту L-аргинин, нуклеинат натрия и раствор Хенкса. По результатам биохимических и клинических исследований было отобрано 20 коров с симптомокомплексом гепатодистрофии, из которых сформировали 4 подопытных группы. Коровам первой группы (n=5) однократно в объеме 10 мл внутримышечно ввели левамизол с ЯК, животным второй группы(n=5) – в аналогичном объеме левамизол, коровам третьей группы (n=5) - препарат для лечения гепатоза (аналог), коровам четвертой контрольной группы - физиологический раствор – 10,0 мл. Полученные результаты эксперимента представлены в таблице 72. 209 Таблица 72 - Динамика биохимических показателей крови коров при гепатозе под влиянием проводимой терапии Показатели Белок, г/л 1 группа До лечения 2 группа 3 группа 4группа 1 группа После лечения 2 группа 3 группа 4 группа 87,51±5,32 87,22±8,43 86,81±8,22 87,73± 4,82 81,10±8,42* 87,45±6,42 84,92±7,5 87,75±7,50 Билирубин общий, мкмоль/л Резервная щелочность, об.% СО2 Кетоновые тела, ммоль/л 14,82±1,25 15,23±2,32 14,65±3,15 15,25±2,72 8,22±1,25* 14,54±3,62 7,85±2,62* 15,22±2,34 32,60±7,10 33,63±5,70 32,28±6,10 38,74±6,20 46,20±4,30* 31,78±5,45 36,21±4,60 37,39±5,10 2,52±0,10 2,61±0,13 2,65±0,22 2,63±0,24 1,75±0,21* 2,45±0,21 1,85±0,22* 2,64±0,23 Кальций, ммоль/л 1,95±0,35 1,98±0,32 1,92±0,54 1,87±0,22 2,74±0,28* 2,62±0,18 2,48±0,31* 1,91±0,36 Фосфор, ммоль/л 2,46±0,52 2,35±0,68 2,28±0,44 2,32±0,22 1,62±0,76 1,84±0,22 2,08±0,23 2,42±0,56 АЛТ, МЕ/л 45,65±7,52 43,12±7,32 41,35±7,52 45,65±7,52 41,68±7,52 58,58±7,54 43,67±7,52 46,68±7,52 АСТ, МЕ/л 102,55±10,46 108,55±9,42 106,51±15,42 109,55±14,42 82,34±10,46 112,24±12,12 92,38±10,46 102,34±10,46 * - Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим фоновым показателем 210 У коров до лечения регистрировалась гиперпротеинемия, показатель содержания общего белка находился в пределах 86,81±8,22-87,73± 4,82 г/л, отмечалась умеренная билирубинемия, содержание билирубина достигало 15,25±2,72 мкмоль/л, снижение резервной щелочности до уровня 32,28±6,10 об.% СО2, повышение содержания кетоновых тел, нарушение соотношения кальция и фосфора, повышение активности аминотрансфераз. Применение левамизола с ЯК вызвало выраженное повышение функциональной активности печени, что обусловило следующие биохимические изменения: снижение содержания белка до уровня 81,10±8,42 г/л , снижение содержания билирубина и уровня кетоновых тел до верхней границы физиологической нормы, повышение резервной щелочности (устранение ацидоза), данный показатель достиг уровня 46,20±4,30 об.% СО2, оптимизацию соотношения содержания кальция и фосфора (перевод антагонистического в синергетическое взаимодействие микроэлементов). Нормализация биохимических показателей оказала позитивное воздействие на клинический статус животных (исчезла болезненность при пальпации печени, значительно улучшился аппетит, повысилась молочная продуктивность). Аналогичные результаты получены при использовании препарата для лечения гепатоза. При этом введение стандартного левамизола привело к дальнейшему развитию симптомов печеночной недостаточности. Уровень печеночных аминотрансфераз повысился и составил 58,58±7,54 МЕ/л АЛТ и 112,24 МЕ/л АСТ, при показателе резервной щелочности 31,78±5,45 об.% СО2, Полученные результаты показывают, что сочетание левамизола с ЯК обладает свойствами гепатопротектора и устраняет негативное влияние левамизола на функцию печени. 211 3.6.2.3 Оценка влияния левамизола в сочетании с янтарной кислотой на оксидантно - антиоксидантный статус телят Изучение данного вопроса нами было проведено в условиях ОАО «Амосовский». Молочное стадо данного хозяйства стационарно неблагополучно по вирусной диарее. Опыт провели на телятах 2-3 недельного возраста с выраженным диарейным синдромом. Клиническое состояние телят характеризовалось при остром течении выраженным угнетением, явлениями токсикоза и обезвоживания. При подостром течении симптомы были выражены умеренно. Все больные были разделены на 3 группы: контрольную и две опытные, по 9 особей в каждой, для сравнения исследовали кровь от 8 здоровых телят. В первую опытную группу входили телята с умеренно выраженными симптомами болезни. Во вторую опытную группу включили телят с тяжелым течением болезни, с выраженными явлениями токсикоза и обезвоживания. Телята контрольной группы получали антибиотикотерапию по схеме принятой в хозяйстве. Больным первой и второй опытных групп на фоне антибиотикотерапии назначали комплекс ЯК с левамизолом, ежедневно, внутримышечно, в дозе 2 мл. Продолжительность проведения опыта составила 5 дней. Исследования крови провели дважды: в первый день опыта до начала лечения и на шестой день, после прекращения курса введения испытуемых составов. Результаты исследований представлены в таблице 73. Полученные нами данные показали, что в первой опытной группе применение ЯК в сочетании с левамизолом привело к существенным сдвигам всех анализируемых параметров. Отмечено существенное снижение интенсивности ПОЛ. По показателям ДК динамика анализируемых параметров была столь существенна, что их уровень достиг значений группы здоровых телят. 212 Таблица 73 - Влияние левамизола с ЯК на изменения в системе ПОЛ - АОЗ телят при диарейном синдроме Показатели Сроки исЗдоровые следования телята ДК ед. опт. пл. До лечения 0,24±0,05 /мг липидов После лечения МДА, До лечения 1,48±0,06 мкмоль/л После лечения КА, До лечения 45,05±4,85 мкМ Н2О2/л После лечемин ния До лечения 11,28±0,02 ГПО, После лечемМGSH/л·мин ния Контрольная группа 0,38±0,05 0,36±0,07 2,24±0,06 2,16±0,05 1-я опытная группа 0,39±0,02 0,24±0,08* 2,64±0,08 1,98±0,08* 2-я опытная группа 0,37±0,05 0,31±0,07 2,56±0,06 2,03±0,05 28,15±1,73 27,93±2,64 25,75±4,23 31,81±2,83 36,45±3,53 29,15±4,72 * * 7,32±0,15 6,43±0,52 5,85±0,22 8,25±1,72 10,32±2,72 8,42±2,62 * Р < 0,05 - достоверность различий с соответствующим показателем контрольной группы Применение ЯК в сочетании с левамизолом оказало положительное влияние на активность АОЗ. В частности, наблюдалось нарастание уровня КА и ГПО плазмы крови. Тем не менее, эти параметры не поднялись до уровня активности АОЗ у здоровых телят. Во второй опытной группе (у тяжело больных телят) так же наблюдалась положительная тенденция в динамике показателей системы ПОЛ-АОЗ, однако сдвиги были не столь существенны. Учитывая многочисленные литературные данные о сочетанном применении органических кислот, в частности янтарной и лимонной (Лукьянова И.Ю. с соавт., 2008; Тюренков И.Н. с соавт., 2007) для усиления энергезирующих и антиоксидантных свойств препарата мы решили ввести в его состав лимонную кислоту (ЛК). Как показывают специальные исследования, соотношение янтарной и лимонной кислот (4:1) позволяет наиболее рационально реализовать свойства этих естественных метаболитов. Результаты предварительных опытов показывают, что сочетание левамизола с ЯК и ЛК имеет ряд преимуществ, в частности обладает более выраженной антиоксидантной активностью. 213 3.6.2.4 Оценка антигельминтной активности левамизола в сочетании с янтарной кислотой Объектом проведения опытов являлись поросята 3-3,5 месячного возраста, спонтанно инвазированные аскаридами и трихоцефалюсами. По принципу аналогов было сформировано три опытные группы, по 20 голов в каждой. Животным первой группы внутримышечно инъецировали комплекс левамизол с ЯК, в дозе 1мл на 10 кг массы тела. Поросятам второй группы вводили стандартный раствор левамизола в аналогичной дозе. При клиническом наблюдении за подопытными животными установлено, что в ответ на введение стандартного раствора левамизола, спустя 20-30 минут у всех животных стали проявляться выраженные симптомы нервного возбуждения и рвота. У поросят первой группы признаков возбуждения не обнаружено. Это свидетельствует о том, что включение ЯК позволило выражено снизить токсическое действие левамизола на нервную систему животных. Оценку антигельминтной активности провели по результатам копрологических исследований на 18 сутки после введения препаратов, результаты которых отражены в таблице 74 . Таблица 74 - Антигельминтная активность комплекса левамизола с ЯК с сравнении с левамизолом при аскаридозе и трихоцефалезе Аскаридоз Препарат Освободилось Кол-во животных от гельминтов Левамизол 20 18 + ЯК Левамизол 20 17 Трихоцефалез ЭЭ, Кол-во Освободилось % животных от гельминтов 90 20 20 ЭЭ, % 100 85 95 20 19 По результатам наших исследований установлено, что включение ЯК в базовый 7, 5% раствор левамизола обеспечил потенцирование антигельминтной активности, обеспечив освобождение от гельминтов в 95 % случае при аскаридозе и в 100% случаев при трихоцефалезе, что на 5% выше базового стандартного раствора. 214 В связи с этим мы решили провести сравнительную оценку действия левамизола и левамизола с ЯК на спонтанно инвазированных токсокарозом собаках. Всего препарат испытывали на 18 животных. Результаты исследований представлены в таблице 75. Таблица 75 - Антигельминтная эффективность левамизола с ЯК и левамизола при токсакорозе собак Препарат Левамизол с ЯК Левамизол Кол-во животных, взрослые/щенки 4/5 4/5 Освободилось от гельминтов, взрослые/щенки 4/5 3/5 ЭЭ,% 100 88,8 По нашим наблюдениям у двух взрослых собак, получавшим стандартный левамизол подкожно, в дозе 7,5 мг/кг, отмечалась атаксия, гиперсаливация и рвота. У подсосных щенков побочного действия не отмечено. В группе животных, получавших левамизол с ЯК в дозе 7,5 мг/кг (по левамизолу) осложнений не было. Таким образом, результаты проведенных экспериментальных опытов свидетельствуют о том, что, включение ЯК в водный раствор антигельминтика - иммуномодулятора левамизола, выражено снижает токсический эффект на организм животных, обеспечивает более высокую иммунометаболическую, антиоксидантную и антигельминтную активность по сравнению со стандартным раствором левамизола. 215 ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ В условиях интенсивных технологий ведения животноводства особую остроту приняли вопросы обеспечения здоровья и увеличения срока производственной эксплуатации высокомолочных коров. ( Челноков Д.Н.,2004) Высокопродуктивные животные отличаются высокой интенсивностью обмена веществ, что приводит к снижению их иммунобиологического статуса даже при незначительных нарушениях в кормлении и содержании. (Шабурин С.В. и соавт., 2005). В этой связи практический интерес представляет концепция восстановления иммунного статуса, с одновременной коррекцией метаболизма организма и предупреждением возможности развития окислительного стресса. Одновременная коррекция обменных процессов, антиоксидантного и иммунного статуса животных предоставляет уникальную возможность предупреждения развития целого ряда заболеваний, повышения продуктивности и увеличения срока производственной эксплуатации животных. К сожалению, в настоящее время, в распоряжении ветеринарных специалистов нет препаратов в полной мере отвечающих поставленным требованиям . Исходя из потребностей практической ветеринарии, изначально своей приоритетной задачей мы считали разработку составов с иммунометаболическим действием, направленным на коррекцию универсальных патогенетических механизмов. В связи с этим мы остановили свой выбор на ЯК. ЯК – универсальный внутриклеточный метаболит, продукт пятой и субстракт шестой реакции цикла Кребса обладает удивительно широким спектром биологического действия. Многие исследователи указывают на то, что использование препаратов, содержащих ЯК, ускоряет выздоровление при многих заболеваниях, снижает терапевтические дозы базисных лекарственных средств, уменьшает частоту осложнений (Лукьянова Л.Д., 2001; Ивницкий Ю.Ю. с соавт., 1998;;). В основе биологической активности ЯКлежит модифицирующее влияние на процессы клеточного дыхания, ионный транспорт и синтез белков (Антипов В.В., 1989; Романцов М. Г. с соавт. , 2000; Балашов В.П., 1996;). 216 По данным литературы ЯК обладает свойством усиливать действие различных лекарственных веществ, при одновременном снижении токсического эффекта. Эти обстоятельства обусловили наш выбор ЯК в качестве основного метаболического компонента. Столь же широким спектром биологического действия обладает хорошо известный в ветеринарии антисептик-стимулятор Дорогова, особенно его вторая фракция. Однако АСД -2Ф, ввиду чрезвычайно высокой щелочной реакции может применяться только в низких концентрациях внутрь или наружно. Мы пришли к выводу, что нейтрализация щелочной среды АСД- 2Ф ЯК позволит получить конечный продукт, пригодный для парентерального применения и обладающий целым рядом качественно новых иммунометаболических свойств. Начальным этапом разработки лекарственной композиции, включающей в себя ЯК и АСД-2Ф и получившей рабочее название «Янтарный биостимулятор», являлось определение оптимального соотношения компонентов. С этой целью была проведена серия опытов по отработке технологии получения лекарственных комбинаций с использованием разных концентраций ЯК и АСД -2Ф. Исходя из полученных результатов, наиболее оптимальным соотношением АСД-2Ф и ЯК для применения в ветеринарии следует считать концентрации 4% АСД-2Ф и 1% ЯК. С целью снятия болевой реакции и улучшения трофики тканей в состав иммунометаболической композиции ввели 0,25 % новокаина. Новокаин при всасывании и непосредственном введении в ток крови оказывает общее действие на организм животных, уменьшает образование ацетилхолина и понижает возбудимость периферических холинреактивных систем, оказывает блокирующее влияние на вегетативные ганглии, уменьшает спазмы гладкой мускулатуры, понижает возбудимость мышцы сердца и возбудимость моторных зон коры головного мозга. В организме быстро гидролизуется, образуя парааминобензойную кислоту и диэтиламиноэтанол, которые являются фармакологически активными веществами (Лабинов В.П., 2003). Парааминобензойная кислота является составной частью молекулы фолиевой кислоты, обладает антигистаминным действием, участвует в процессах деток- 217 сикации, оказывает антисульфаниламидное действие. Диэтиламиноэтанол обладает умеренным сосудорасширяющим действием в связи с чем, по- видимому, лекарственные препараты в сочетании с раствором новокаина оказывают более быстрое действие, чем при использовании в качестве растворителя физиологического раствора. При изучении острой и хронической токсичности, установлено, что иммунометаболическая композиция на основе ЯК в сочетании с АСД 2-Ф во всех испытанных дозах не вызывала гибели мышей, крыс и собак и не оказывала выраженного токсического действия на организм. Гематологические и биохимические показатели у подопытных и контрольных животных находились в пределах нормы, отмечалось увеличение содержания общего белка в опытных группах, не выходящее за пределы физиологической нормы. Испытание протективной активности испытуемой композиции проводилось при моделировании у мышей генерализованной формы сальмонеллезной инфекции. Установлено, что иммунометаболическая композиция не обладает выраженным противоинфекционным действием, предохраняя от гибели 70 % мышей, зараженных смертельной дозой Salmonella spp. По этому показателю он превосходит отдельные компоненты : 4% АСД 2-Ф, который показал протективную активность на уровне 60 % и 1% р-р сукцината натрия, предотвративший гибель лишь 30% мышей. Полученные данные совпадают с результатами исследований, доказывающих способность ЯК усиливать положительные эффекты других лекарственных веществ (Булатников А.П., 1999; Кондрашова М.Н., 1996, Романцов М.Г.,2001) В задачу наших исследований входило определение иммунотропной активности предлагаемой композиции. В литературе имеются данные об иммуностимулирующих свойствах входящих в нее состав компонентов. Так, по данным Н.С. Тихонова (2004) применение ЯК телятам внутрь, в дозе 25 мг/кг живой массы, ежедневно в течение трех курсов с двумя трехдневными интервалами положительно влияет на клеточную резистентность (увеличивает количество Т- лимфоцитов на 11,3 % и фагоцитарный индекс на 4 %). 218 В исследованиях Кирюткина Г.В. с соавт. (2004) применение АСД 2-Ф нормализует количество В-лимфоцитов, корректирует уровень иммуноглобулинов, восстанавливает взаимоотношения субпопуляций Т-лимфоцитов. По данным Дерябиной З. И., Николаева А.В. (1968) на фоне применения препарата АСД отмечается активация неспецифического и специфического звеньев иммунной защиты. Повышается концентрация пропердина в сыворотке крови, активизируется система комплимента, фагоцитоз, нормализуется количество. В-лимфоцитов, уровень иммуноглобулинов стремится к норме, восстанавливаются взаимоотношения в субпопуляциях Т-лимфоцитов. В своих исследованиях иммунотропные свойства предлагаемой композиции мы изучали в трех опытах на белых мышах линии CBA, массой 18 – 20 г. Оценку влияния на гуморальный иммунитет проводили путем определения числа титров, чтонителообразующих клеток (АОК) и титров антител после иммунизации мышей эритроцитами барана (ЭБ). Введение белым мышам иммунометаболической композиции и ее отдельных компонентов приводит к активизации трансформации В-лимфоцитов в АОК. Индекс стимуляции составил 1,6 для предлагаемой композиции, 1,5 для АСД2Ф и 1,1 для сукцината натрия.ЯК. Установлено, что на 7-й день после введения испытуемой композиции самые высокие титры агглютининов в сыворотке крови в первой опытной группе мышей, получавших иммунометаболический комплекс, составили 3,78±0,02 Lg2, во второй ( АСД 2-Ф) и в третьей ( сукцинат натрия) опытных группах этот показатель был соответственно - 3,18±0,04 Lg2 и 3,24±0,02 Lg2 против 3,01±0,03 Lg2 в контроле. Индекс стимуляции в первой опытной группе составил 1,26, во второй - 1,06 и в третьей -1, 08. Таким образом, предлагаемая композиция стимулируют клеточное звено иммунитета, что проявляется увеличением степени выраженности воспалительной реакции в месте введения разрешающей дозы антигена (ЭБ), и характеризует активность популяции хелперных клеток, ответственных за проявление реакции ГЗТ. 219 Полученные нами данные совпадают с результатами исследований иммунотропных свойств отдельных компонентов предлагаемой композиции. ашими исследованиями установлено, что ЯК в сочетании с АСД- 2Ф оказывает выраженное благоприятное воздействие на организм коров и телят в постнатальный период, что способствует повышению жизнеспособности и увеличению массы тела молодняка. В наших исследованиях живая масса телят опытной группы в возрасте 60 суток была на 12,6 % выше, чем в контрольной. По данным Н.С. Тихонова (2004) применение ЯК телятам внутрь, в дозе 25 мг/кг живой массы, ежедневно в течение трех курсов с двумя трехдневными интервалами увеличивает прирост живой массы животных на 5,2 %, убойный выход на 1,6%. По мнению А.В. Басанкина (2007) на приросты свиноматок оптимально влияет добавка ЯК в дозе 0,1 г/кг массы тела. Добавка ЯК в дозе 0,2 г/кг массы тела не дала больших приростов. Мы изучали влияние иммунометаболической композиции на основе ЯК и АСД 2-Ф на метаболизм глубокостельных коров и полученных от них телят. Нашими исследованиями установлено, что под влиянием иммунометаболического комплекса отмечается отчетливая тенденция к нормализации содержания общего белка и коррекция диспротеинемии у животных В возрасте 15 дней у телят опытной группы отмечалось повышение концентрации белка 10,4 на г/л , а в контрольной группе – на 5,84 Различия были статистически достоверны (р<0,05). Протеинограмма опытных телят характеризовалась повышением уровня альбуминов до 27,94±3,15 %, γ -глобулинов до 31,48±2,42 %, что достоверно выше, чем в контрольной группе (р<0,05). Многие исследователи указывают на повышение содержания белка в сыворотке крови под влиянием ЯК и ее производных (Ивницкий Ю.Ю.,1998; Лузбаев К.В. 1997;Тихонов Н.С.,2004 и др.) Характерно, что наиболее значительные изменения в содержании общего белка отмечаются у животных, имеющих выраженные отклонения данного показателя от нормы, как в сторону уменьшения, так и в сторону увеличения. При этом сниженные показатели увеличиваются, а повышенные возвращаются в нормальные пределы. 220 Эти данные подтверждают выводы ряда ученых о том, что амплитуда и направленность модификаций под действием ЯК зависят от функционального исходного состояния тканей, а ее конечный результат выражается в оптимизации параметров их функционирования (Алексеева Л.С., 2001 ) При исследовании влияния испытуемой композиции на минеральный обмен установлено, что под действием препарата отмечается существенное повышение содержания кальция: и некоторое снижение уровня неорганического фосфора у животных опытных групп. До опыта в учхозе «Знаменское» соотношение кальций/фосфор у коров опытной группы составляло 1,2 , у телят опытной группы – 1,06 после опыта соответственно 1,97 и 1,7 , что свидетельствует о нормализации минерального обмена. Повышение содержания кальция связано с увеличением содержания общего белка в сыворотке крови, ведь, как известно, большая часть общего кальция представлена белоксвязанной фракцией, а так же с усилением усвояемости кальция из кормов, в связи с нормализацией всех видов обмена под действием иммунометаболической композиции. Мы считаем, что изменение содержания кальция так же объясняется влиянием входящих в состав иммунометаболической композиции ингредиентов на ионный обмен в клетке, за счет энергии АТФ происходит некоторое откачивание кальция из клеток под действием Са АТФазы, что влияет на биохимические функции клеток. Под действием ЯК в сочетании с АСД 2-Ф в опытных группах отмечалось статистически достоверное повышение уровня железа, так у коров это повышение составило 4,8 ммоль/л (14,4%), а у телят – 3,3 ммоль/л (8,5%), общее содержание составило соответственно 38,13±1,94 и 41,85±6,25 ммоль/л, что находится в пределах верхней границы физиологической нормы. Мы объясняем это влиянием входящей в состав янтарного биостимулятора ЯК, в присутствии которой отмечается повышение усвояемости железа за счет образования хорошо растворимых в воде комплексов, которые быстро всасываются в тонком кишечнике, не разрушаясь и не образовывая не усваиваемых гидратов трехвалентной окиси железа (Кондрашова М.Н.,1996) 221 После введения иммунометаболической композиции в опытной группе коров регистрировалось повышение сниженного уровня содержания глюкозы до физиологической нормы – 3,23 ±0,45 ммоль/л , что свидетельствует о нормализации углеводного обмена. Нормализация содержания глюкозы может служить доказательством гепатопротекторного действия предлагаемой композиции.Об этом же свидетельствуют результаты дальнейших биохимических исследований сыворотки крови коров и телят.После введения иммунометаболической композиции в сыворотке крови коров опытной группы содержание общего билирубина снизилось на 1,5 мкмоль/л и составило 4,23±1,49 мкмоль/л. В сыворотке крови телят существенного изменения показателя под влиянием препарата не отмечено. Под влиянием ЯК в сочетании с АСД 2-Ф произошло существенное снижение повышенной активности трансаминаз. Содержание АЛТ у коров опытной группы уменьшилось на 13,2 ед/л и составило 32,45±5,58 ед/л , а у телят опытной и контрольной групп содержание АЛТ осталось примерно на прежнем уровне. Содержание АСТ в сыворотке крови коров после введения испытуемой композиции снизилось до величины 93,24±14,5 ед/л . Гепатотропное действие композиции обусловлено стимуляцией энергетического обмена в гепатоцитах ( Топузов Э.Г. с соавт., 1999 ) ЯК стимулирует метаболическую функцию печени с одновременным повышением устойчивости мембран гепатоцитов к радикальному окислению (Зиновьев Ю.В. с соавт,1988). Препараты на основе ЯК должны оцениваться как перспективные гепатопротекторы, что является предпосылкой для их изучения и применения в ветеринарии. В своих исследованиях мы установили, что применение иммунометаболической композиции при выраженных нарушениях обмена веществ, в частности при развитии метаболического ацидоза у лактирующих коров позволяет в кратчайшие сроки привести к норме основные биохимические показатели. Многие исследователи указывают, что ЯК оказывает нормализующее действие на физиологическое состояние и показатели кислотно-щелочного равновесия при ацидозе. Механизм такого действия связан с усилением вклада в энергообеспечение окислительного фосфорилирования, при котором уменьшается количество ионов во- 222 дорода, не вовлекаемых в ресинтез АТФ. (Кондрашова М.Н.,1976; Резник Б.Я., Крайняя Ж.Б., 2002; Румянцева С.А. с соавт., 2002) Учитывая полученные в опытах на лабораторных животных данные об иммунотропной активности изучаемой композиции мы провели работу по изучению влияния иммунометаболического комплекса на иммунный статус глубокостельных коров и полученных от них телят. Полученные данные указывают на то, что применение ЯК в сочетании с АСД 2-Ф глубокостельным коровам активизирует функционирование регуляторных и защитных систем организма, повышая бактериальную активность сыворотки крови, фагоцитарную активность нейтрофилов, содержание иммуноглобулинов и Т-лимфоцитов. Таким образом, применение иммунометаболической композиции глубокостельным коровам обеспечило выраженную активацию неспецифических факторов системы иммунитета, что является важным условием профилактики развития иммунологического криза в предродовой и ранний послеродовой периоды. Исходя из современных представлений о роли в развитии разных патологических состояний процессов перекисного окисления липидов и учитывая многочисленные данные об антиоксидантных свойствах ЯК( Reilly P.M. et al, 1991; Wang S.T et al.,199 Путилина Ф.Е., 1982; Глушков С.М.,1998; Кулинский В.И., Колесниченко Л.С.,1990; Lu S.C. et al., 19946) и АСД.( Дорогов А.В., Дерябина З.И., 1968;.Абрамов В.Е и др., 2005) мы провели изучение влияния иммунометаболической композиции на состояние системы ПОЛ –АОЗ у глубокостельных коров полученных от них телят Введение иммунометаболической композиции на основе ЯК и АСД 2-Ф способствует восстановлению равновесия в системе ПОЛ-АОЗ, препятствуя развитию патологических проявлений стрессовой реакции. В крови животных опытной группы не отмечалось высокого накопления продуктов ПОЛ перед отелом. За 2-3 дня до родов содержание ДК составляло 0,27±0,006 D232/мг липидов, что на 28,9% ниже, чем в тот же период в контрольной группе, та же тенденция отмечалась в накоплении МДА. Введение иммунометаболической композиции способствовало повышению активности ферментативного звена антиоксидантной защи- 223 ты. Телята, полученные от коров, которым вводили янтарный ЯК в сочетании сАСД 2-Ф в период стельности и обработанные препаратом в первые дни после рождения в первый месяц имеют более сбалансированную систему ПОЛ-АОЗ. Ориентируясь на результаты изучения протективной активности иммунометаболической композиции при моделировании сальмонеллезной инфекции у белых мышей, мы провели ряд экспериментов и научно-производственных опытов по установлению эффективности применения иммунометаболической композиции при желудочно-кишечных и респираторных заболеваниях телят как бактериальной, так и смешанной вирусно-бактериальной этиологии. Результаты исследований показали, что при легкой форме желудочнокишечного заболевания нормализация иммунного и метаболического статуса под влиянием ЯК в сочетании с АСД 2-Ф является достаточной для быстрого купирования диарейного синдрома, без использования антибиотиков. При тяжелой форме заболевания, сопровождающейся явлениями интоксикации и обезвоживания, оптимальным является сочетание антибиотиков, регидрационной терапии и иммунометаболической композиции. Использование иммунометаболической композиции для лечения респираторных заболеваний телят так же показало преимущество комплексной иммунометаболической терапии перед традиционными методами лечения. Респираторные заболевания, так же как и желудочно-кишечные, сопровождаются изменениями в иммунной системе телят и приводят к состоянию иммунодефицита, выраженность которого зависит от тяжести течения заболевания. Введение иммунометаболической композиции больным телятам оказывает иммунокоррегирующее воздействие, приводя к норме как повышенные, так и пониженные иммунологические показатели, что особенно важно в условиях хозяйства. В системе борьбы с факторными инфекционными заболеваниями необходимо уделить внимание повышению эффективности специфической профилактики. При вакцинации в современных условиях, за счет приобретенного иммунодефицита, у 30-50 % снижен синтез антител в 2-4 раза по сравнению с нормальным иммунным статусом, а у 10-15% иммунная реакция либо отсутствует, либо титр 224 антител не достигает уровня способного защитить организм от влияния возбудителя инфекции ( Ануфриев А.И и др. 2000) На примере вакцинации глубокостельных коров, изначально имеющих фоновые патобиохимические отклонения, нами показана правомерность концепции одновременной стимуляции обменных и иммунных процессов, как важной составляющей в системе мер специфической профилактике инфекционных заболеваний. Полученные результаты были в дальнейшем использованы в диссертационных исследованиях Тарасова В.Ю.(2011), Ермилова И.В. (2012). На следующем этапе нашей исследовательской работы мы провели поисковые экспериментальные и научно-производственные опыты по включению в состав иммунометаболической композиции формалина. По нашему мнению формалин обеспечивает не только гибель возбудителей гнойно-септической инфекции в патологическом очаге, но и инактивирует токсичные продукты их жизнедеятельности, что снижает повреждающее действие на здоровые ткани. При этом инактивированные токсины не утрачивают иммуногенных свойств, что обеспечивает ускоренное формирование локального иммунитета. ЯК обеспечивает нормализацию метаболических процессов в тканях патологического очага. Испытание протективной активности иммунометаболической композиции с добавлением формалина в сравнении с первоначальным составом иммунометаболической композиции проводилось при моделировании у мышей септикопиемии с использованием культуры S. аureus. Мы пришли к выводу, что введение в состав формалина повышает антимикробную активность при развитии септикопиемических процессов. Имеются многочисленные данные об антиинфекционной активности инъекций формалина при целом ряде весьма проблемных вирусных и бактериальных инфекций (Ермилов И.В., 2011; Ласкавый В.Н., 1997; Тарасов В.Ю., 2011; Терюханов А.Б., 1968). Применение сочетания ЯК, АСДФ-2 и формалина в виде инъекций оказало неожиданно высокий профилактический и лечебный эффект при гипотрофии животных и целом ряде инфекционных заболеваний. По нашим данным сочетанное применение ЯК с АСД Ф-2 и формалином оказало выраженное позитивное влия- 225 ние на гемопоэз и стимулирующее воздействие на факторы неспецифической резистентности телят-гипотрофиков. Новый состав иммунометаболической композиции оказался весьма эффективным в лечении парвовирусного энтерита собак. В настоящее время накоплены позитивные результаты применения данного препарата в системе мер управления эпизоотическими процессами при вирусно- бактериальных болезнях молодняка сельскохозяйственных животных. Учитывая тот факт, что при парентеральном введении формалин (формальдегид) метаболизируется в течение нескольких минут и не может оказывать прямого антисептического действия, мы объясняем столь высокую эффективность сочетанного применения ЯК с АСД Ф-2 и формалином, тем что в организме млекопитающих имеется мощная система глутатионзависимой формальдегиддегидрогеназы и неспецифических альдегиддегидрогеназ печени, осуществляющая детоксикацию и регуляцию концентрации формальдегида на системном уровне. Можно предположить, что при парентеральном введении формальдегида в печени резко увеличивается количество этих ферментов, что влечет за собой активизацию антиоксидантной защиты организма. Одной из причин нарушения обмена веществ и развития вторичных иммунодефицитов является хронический дефицит микроэлементов в организме. Следует отметить, что даже при высоком содержании данных микроэлементов в кормах их усвояемость очень низкая. Недостаток микроэлементов в организме приводит к сбою в работе иммунной системы, вызывает глубокие нарушения обменных процессов. На таком фоне организм животных особенно чувствителен к возбудителям факторных инфекционных болезней. В этой связи разработка комплексного инъекционного препарата, предназначенного для профилактики и лечения микроэлементозов, нарушений обмена веществ, повышения резистентности организма животных представлялась нам весьма актуальной и практически значимой. Для решения этой задачи в состав иммунометаболической композиции в качестве микроэлементов были добавлены водорастворимые соли железа, меди, цинка, кобальта. Соединение ЯК с микроэлементами значительно повышает их активность 226 и усвояемость и вместе с тем, в случае «передозировки» какого-либо микроэлемента ЯК выступает в роли корректора, предохраняя клетки и ткани от его избыточного поступления. В этой связи, следующей нашей задачей явилась разработка инъекционной формы иммунометаболического состава с включением в него водорастворимых солей железа, меди, цинка, кобальта. Активатором этих солей служила ЯК. Пролонгатором активных веществ являлся полиэтиленгликоль. Научно-производственный опыт по оценке влияния металлосукцината на организм поросят –гипотрофиков в сравнении с известным препаратом Гемовит плюс, показал, что предлагаемый состав оказывает столь же выраженное позитивное влияние на показатели метаболизма и естественной резистентности поросят, при существенно меньшей стоимости. Характерные изменения произошли в содержании микроэлементов. Содержание железа под влиянием металлосукцината увеличилось на 17,02 % , на фоне применения препарата Гемовит-плюс этот показатель повысился на 4,66 %, а в контрольной группе практически не изменился. Под действием металлосукцинат у коров опытной группы поднялось содержание цинка на 20,85 %. В других группах содержание этого микроэлемента не изменилось. Применение ЯК в сочетании с микроэлементами обеспечило эффективную коррекцию микроэлементного обмена и повысило уровень факторов естественной резистентности коров и телят, что благоприятно отразилось на профилактике желудочно-кишечных заболеваний, ростовой активности подопытных животных, молочной продуктивности лактирующих коров. Эффективность иммунометаболического препарата с включением микроэлементов при парентеральном введении, возможно обусловлена активизацией работы ферментов, катализирующих компенсаторные и адаптационные процессы. При изучении сочетания ЯК с АСД- 2Ф мы столкнулись с рядом проблем, связанным с особенностями этого препарата. Химический состав органических соединений АСД Ф №2 имеет значительную вариабельность, зависящую от качества исходного сырья, используемого при его изготовлении. Кроме того, техноло- 227 гия получения АСД Ф №2, предусматривающая высокотемпературную (500º С) возгонку мясокостной муки, в целом является весьма энергозатратной (Абрамов В.Е. и др. 2004). Учитывая мнение многих исследователей о способности ЯК усиливать усиливающим эффективность других лекарственных средств, мы пришли к выводу, что в качестве альтернативы АСД-2Ф при комплектовании лекарственных композиций с заданными свойствами корректора метаболических и иммунных процессов может быть использован нуклеинат натрия, деринат или другой иммуномодулятор, сочетающийся с ЯК по химическим свойствам и механизму биологического действия. Изучение протективной активности ЯК в сочетании с солями нуклеиновых кислот проводили с использованием тестов антиинфекционной и антитоксической защиты. Моделирование острого инфекционного процесса осуществлялась введением белым мышам культуры золотистого стафилококка. лекарственные композиции , содержащие в качестве метаболического компонента и стимулятора энергетического обмена ЯК и в качестве иммуностимулятора нуклеинат натрия или деринат, обеспечивают высоко достоверный и одинаковый уровень протективной активности, превышающий уровень нуклеината натрия и дерината. При этом гибель мышей в контрольной группе составила 90 %. Такой результат указывает на то, что предлагаемые композиции оказывают влияние на противоинфекционный иммунитет. Полученные данные свидетельствуют о высокой метаболической активности иммунометаболического состава с включением в качестве имуномодулятора нуклеината натрия. Выраженное повышение уровня содержания в крови коров железа, меди, цинка, кобальта свидетельствует об улучшении их усвояемости организмом. Активация процессов обмена веществ, выраженное улучшение функциональной деятельности печени, устранение ацидотического состояния положительно отразилось на молочной продуктивности коров. В период с 10 по 30 день суточный удой от каждой опытной коровы повысился с 8 до 9,5 литров. 228 Одним из широко применяемых в ветеринарии и медицине препаратов для лечения нематодозов является левамизол. Первоначально этот препарат был предложен в качестве антигельминтного средства. В дальнейшем, при был обнаружен иммуномодулирующий эффект, проявляющийся в том, что он повышает устойчивость организма к инфекционным патогенам. Левамизол, избирательно стимулируя регуляторную функцию Т-лимфоцитов, может выполнять функции иммуномодулятора, способного усилить слабую реакцию клеточного иммунитета, ослаблять сильную и не действовать на нормальную. Эти свойства левамизола открывают большие перспективы для применения его в ветеринарии. Однако препарат обладает низким химиотерапевтическим индексом. Главными симптомами неблагоприятного действия левамизола являются атаксия, возбуждение, судороги, тремор, одышка. Нередки случаи смерти животных после использования левамизола даже в терапевтических дозах. В задачу наших исследований входило получение комплексного препарата, обладающего противонематодозной активностью, свойствами иммуномодулятора, метаболического корректора и обладающего высоким химиотерапевтическим индексом. Мы предположили, что сочетанное применение левамизола с ЯК позволит снизить его неблагоприятное воздействие на организм, сохранив нематоцидную активность и повысив иммунотропные свойства. Для проведения опытов использовали состав, содержащий в качестве метаболического компонента и энергетического корректора ЯК (1%,) в качестве антигельминтика и иммуномодулятора левамизол (7,5 % ) .Исследование острой токсичности левамизола в сравнении с сочетанием левамизола с ЯК выполнено на нелинейных белых мышах массой 20-22 г. Левамизол с ЯК вводили однократно, подкожно, в тех же тех же дозах. Гибель 2-х мышей в группе, получивших лекарственную смесь в дозе 75 мг/кг наступила в течение суток после введения препарата. Четыре мыши остались живы. В группе получивших состав в дозе 150 мг/кг, две мыши погибли через шесть часов, еще две через сутки после введения. Две мыши остались живы. В группе мышей, получивших лекарственную смесь в дозе 225 мг/кг, все мыши погибли в течение 229 1-3 часов. По результатам опыта LD50 = 117,5 мг/кг для левамизола с ЯК, против LD50 = 85 мг/кг для фармокопйного левамизола. Таким образом, сочетание левамизола с ЯК привело к существенному снижению токсичности препарата и увеличению значения LD50. Мы провели оценку влияния левамизола с ЯК на состояние метаболизма у поросят, спонтанно инвазированных аскаридами. У становлено, что у иназированных животных поросят, имеет место выраженный иммунодефицит. Показатели общего белка, кальция и резервная щелочность существенно ниже физиологических значений. Имеет место явное снижение содержания лимфоцитов до уровня 49,14±1,42 -. 49,55±2,54%, понижение уровня Т-лимфоцитов до уровня 24,26 ±1,32 - 26,4±1,5 % и В – лимфоцитов до уровня. 9,8±1,6 -10,54±1,089 Применение левамизола в сочетании с ЯК оказало выраженное стимулирующее влияние на гемопоэз и состояние естественной резистентности поросят. Содержание Т-лимфоцитов повысилось до уровня 37,5±2,4%, нормализовались основные метаболические показатели. В инструкции по ветеринарному применение препарата левамизол-В (фирма «ВЕТПРОМ», Россия) есть указание «запрещается применение препарата … при хронических заболеваниях печени…». В связи с этим мы решили провести изучение влияния левамизола в сочетании с ЯК на функциональное состояние печени коров при хронических заболеваниях – гепатозах. Исследования провели на коровах в период регистрации у них биохимических нарушений, свойственных заболеванию гепатозом. Применение левамизола с ЯК вызвало выраженное повышение функциональной активности печени, что обусловило следующие биохимические изменения: снижение содержания белка до уровня 81,10±8,42 г/л, снижение содержания билирубина и уровня кетоновых тел до верхней границы физиологической нормы, повышение резервной щелочности (устранение ацидоза), данный показатель достиг уровня 46,20±4,30 об.% СО2, оптимизацию соотношения содержания кальция и фосфора (перевод антагонистического в синергетическое взаимодействие микроэлементов). 230 Нормализация биохимических показателей оказала позитивное воздействие на клинический статус животных (исчезла болезненность при пальпации печени, значительно улучшился аппетит, повысилась молочная продуктивность).. При этом введение стандартного левамизола привело к дальнейшему развитию симптомов печеночной недостаточности. Объектом проведения опытов для определения антигельминтной активности левамизола в сочетании с ЯК являлись поросята 2-2,5 месячного возраста, спонтанно инвазированные аскаридами и трихоцефалюсами. По результатам наших исследований установлено, что включение ЯК в базовый 7, 5% раствор левамизола обеспечил потенцирование антигельминтной активности, обеспечив освобождение от гельминтов в 95 % случае при аскаридозе и в 100% случаев при трихоцефалезе, что на 5% выше базового стандартного раствора. В связи с этим мы решили провести сравнительную оценку действия левамизола и левамизола с ЯК на спонтанно инвазированных токсокарозом собаках. По нашим наблюдениям у двух взрослых собак, получавшим стандартный левамизол подкожно, в дозе 7,5 мг/кг, отмечалась атаксия, гиперсаливация и рвота. У подсосных щенков побочного действия не отмечено. В группе животных, получавших левамизол с ЯК в дозе 7,5 мг/кг (по левамизолу) осложнений не было. Аналогичные результаты получены В.Т. Alford et al. (1986) В его исследованиях препарат испытали в дозах 2,4; 4,8 и 7,2 мг/кг, на 144 собаках разного возраста. Первые 2 дозы были безвредными, у двух из 26 собак, получивших препарат в самой высокой дозе, отмечены гиперсаливация, атаксия, рвота и тремор, одна из них пала. Для 20 подсосных щенков препарат во всех 3 дозах оказался безвредным. Таким образом, результаты проведенных экспериментальных опытов показывают, что включение ЯК в водный раствор антигельминтика - иммуномодулятора левамизола, выражено снижает токсический эффект на организм животных, обеспечивает более высокую иммунометаболическую, антиоксидантную и антигельминтную активность по сравнению со стандартным раствором левамизола. 231 Полученные нами результаты исследований свидетельствуют о том, что применение ЯК для потенцирования биологической активности является весьма перспективным. Иммунометаболические составы на основе ЯК отличаются многогранной фармакодинамикой, которая не ограничена лишь исчезновением симптомов основного заболевания, а заключается в улучшении многих функций организма. 232 ВЫВОДЫ 1. Теоретически обосновано новое научное направление по конструированию средств иммунометаболической направленности на основе метаболиков и иммуномодуляторов. 2. В ходе клинических исследований установлено, что нарушения в иммунобиохимическом статусе продуктивных животных имеют массовый характер, что является неблагоприятным фоном при проведении превентивных и лечебных мероприятий. У значительной части животных формируется недостаточный, а нередко и неадекватный иммунный ответ на специфические антигены и лекарственные препараты, в т.ч. и иммуномодуляторы, что предопределяет необходимость одновременной коррекции обменных процессов и иммунного статуса. 3.Теоретически и экспериментально обосновано применение ЯК для потенцирования биологической активности АСД -2Ф. Соотношение 1% ЯК и 4% АСД -2Ф является наиболее оптимальным и позволяет получить иммунометаболическую композицию с концентрацией водородных ионов в пределах 6,7 -7,0. Стерилизация автоклавированием не изменяет физико-биохимических свойств состава. 4. В экспериментальных опытах на мышах установлено, что иммунометаболический комплекс на основе ЯК и АСД -2Ф оказывает выраженное иммуностимулирующее действие на показатели гуморального и клеточного иммунного ответа, превышающее эффект входящих в его состав компонентов: - индекс стимуляции синтеза антителобразующих клеток для испытуемой композиции составил 1,6, для АСД-2Ф - 1,5, сукцината натрия -.1,1; - титры агглютининов в крови мышей, иммунизированных ЭБ менения после при- испытуемой композиции составили 3,78±0,02 Lg2, для АСД-2Ф - 3,18±0,04 Lg2, для сукцината натрия - 3,24±0,02 Lg2 , против 3,01±0,03 Lg2 в контроле; - однократное внутримышечное введение иммунометаболического комплекса повышает активность иммунокомпетентных клеток, при этом индекс вос- 233 паления составил 14,1±0,3% для АСД-2 Ф – 12,5±0,2% ; для сукцината натрия 11,1±0,2%,против 4,2±0,1% в контроле. 5. При тестировании иммунометаболического комплекса на глубокостельных коровах, имеющих выраженные патобиохимические отклонения, установлено, что парентеральное введение ЯК в сочетании с АСД 2-Ф обеспечивает существенное улучшение иммунометаболического и антиоксидантного статуса. Применение иммунометаболического комплекса сопровождается : - повышением в предродовый период бактерицидной активности сыворотки крови (на 46,9%, против 29,1% в контроле), фагоцитарной активности лейкоцитов (на 11,6 % выше, чем в контроле) , уровня иммуноглобулинов G (на 12,8 % выше, чем в контроле) и М (на 8,2 % выше, чем в контроле); содержания Т- и Влимфоцитов. - устранением состояния метаболического ацидоза и повышением до физиологических значений уровня резервной щелочности (48,62±1,59 против 39,42±2,29 об.% СО2 в контрольной группе): - оптимизацией содержания в крови белка, фосфора и повышением в пределах нормы содержания общего кальция (на 27,8-34,7%), железа, глюкозы, тенденцией к снижению концентрации общих липидов и активности трансаминаз; - снижением содержания продуктов ПОЛ ( диеновых конъюгантов и малонового диальдегида), повышения активности ферментов АОЗ (каталазы и глутатионперокидазы). 6. Включение иммунометаболического комплекса в схему лечения при диарейном и респираторном синдроме телят на фоне интенсивного курса антибиотикотерапии обеспечило выраженное ускорение клинического выздоровления за счет качественного улучшения иммунометаболического и антиоксидантного статуса больных животных. 7. Теоретически и экспериментально обоснован новый подход в лечении полостных, очаговых гнойно-септических процессов и инфекционной патологии животных. 234 - включение в состав иммунометаболического комплекса в качестве антимикробного компонента 0,4-0,6 % формалина, обеспечивает эффективное обезвреживание микробных патогенов, инактивацию токсических метаболитов, стимуляцию факторов локального иммунитета и метаболизма в тканях. - в ходе широкомасштабных клинических испытаний установлено, что иммунометаболический комплекс на основе ЯК и АСД- 2Ф, с добавлением формалина при инъекционном методе введения проявляет высокую антиинфекционную активность и выраженный клинический эффект редуцирования диарейного и респираторного синдромов, что является новым подходом в интенсивной и превентивной терапии вирусно-бактериальных инфекций. 8. Теоретически и экспериментально обоснована иммунометаболическая композиция на основе ЯК с иммуномодуляторами нуклеинатом натрия и деринатом. В опытах на лабораторных животных показано: - ЯК потенцирует иммунотропные свойства иммуномодуляторов: индекс стимуляции образования антителобразующих клеток составил 1,52 для с нуклеината натрия с ЯК, 1, 54 для дерината с ЯК; 1,1 для сукцината натрия; титры агглютининов в сыворотке крови в группе мышей, получавших нуклеинат натрия с ЯК составили 3,74±0,02 Lg2 в группе мышей, получавших деринат с ЯК 3,66±0,04 Lg2 , против 3,04±0,05 Lg2 в контроле;стимулирующее действие на клеточное звено иммунитета проявилось увеличением степени выраженности воспалительной реакции в месте введения разрешающей дозы антигена (ЭБ - ЯК в сочетании с нуклеинатом натрия и деринатом, оказывает нормализующее действие на метаболические процессы; - иммунометаболическая композиция на основе ЯК с нуклеинатом натрия (деринатом) обладает адаптогенной активностью, превышающей показатели отдельных компонентов. 9. В ходе клинических испытаний установлено, что иммунометаболические композиции на основе ЯК и АСД-2Ф второй фракции, ЯК и нуклеината натрия (дерината), модифицированные включением в их состав микроэлементов Fe, Cu, 235 Zn, Co обеспечивают качественное улучшение основных иммунометаболических показателей и коррекцию минерального обмена. 10. Теоретически и экспериментально обосновано применение ЯК для потенцирования биологической активности антгельминтика -иммуномодулятора левамизола. Включение 1% ЯК в водный раствор антигельминтика - иммуномодулятора левамизола, выражено снижает токсическое воздействие на организм животных, обеспечивает более высокую иммунометаболическую и антиоксидантную активность по сравнению со стандартным 7,5% раствором левамизола. 236 РЕКОМЕНДАЦИИ ПО ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ 1.Разработанные способы получения иммунометаболических композиций на основе янтарной кислоты в сочетании с АСД второй фракции, антгельминтиком - иммуномодулятором левамизолом, солями нуклеиновых кислот рекомендуются отечественным производителям данных компонентов для выпуска в рамках реализации стратегии импортозамещения улучшенных фармакологических форм препаратов для решения экономически значимых проблемных задач современного промышленного животноводства; 2.Для коррекции иммунометаболического статуса глубокостельных коров и повышения жизнеспособности телят за 30-40 дней до предполагаемого отела коров, рекомендуем внутримышечное введение иммунометаболического состава на основе янтарной кислоты и АСД второй фракции в объеме 10,0 мл с интервалом 10 дней. В первые дни после родов курс введения составляет 2-3 инъекции с интервалом 7-10 дней; 3.Для профилактики заболевания маститом коров в сухостойный период рекомендуется внутрицистернальное применение иммунометаболического водного состава на основе 1% ЯК, 4% АСД и 0,4% формалина в объеме 7-10 мл в каждую долю вымени в начале запуска и повторно, за 15 -10 дней до отела. 4. Для лечения эндометрита у коров рекомендуется внутриматочное инстиллирование иммунометаболического водного состава на основе 1% ЯК, 4% АСД второй фракции, 0,6% - 0,8% формалина в объеме 100 мл с кратностью один раз в сутки. 5. В качестве универсального средства лечения диарейного и респираторного синдрома при вирусно-бактериальных инфекциях телят и молодняка крупного рогатого скота рекомендуется внутримышечное применение иммунометаболического комплекса на основе 1% ЯК,4% АСД второй фракции,0,4% формалина, из расчета 1 мл на 10 кг живой массы с интервалом в 12-24 часа. В качестве профилактического средства этот состав рекомендуем использовать в 237 аналогичной дозировке, в прогнозируемые периоды риска активации возбудителей эндогенных инфекций с кратностью один раз в 7-10 дней. 238 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ И ОБОЗНАЧЕНИЙ АОЗ – антиоксидантная защита АОК – антителообразующие клетки АСД- 2Ф – антисептик-стимулятор Дорогова, вторая фракция АСТ - аспартатаминотрансфераза АЛТ - аланинаминотрансфераза БАСК – бактерицидная активность сыворотки крови ГЗТ - гиперчувствительность замедленного типа ГПО - глутатионпероксидаза ДК – диеновые конъюгаты ИС – индекс стимуляции КА – каталаза ПОЛ – перекисное окисление липидов ФАН – фагоцитарная активность нейтрофилов ЭБ – эритроциты барана ЯК – янтарная кислота Ig G – иммуноглобулин G Ig М – иммуноглобулин М 239 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Абрамов В.Е. Определение показателей качества препарата АСД-2 [Текст] / В.Е. Абрамов, В.И. Абдурахманов, О.А. Дорогова // Ветеринария.-2000.- №10. - С. 13-16. 2. Аверкиева О. Особенности использования жидких компонентов [Текст] /О. Аверкиева, Д. Грайсингер, В. Дорн // Комбикорма.-2001.- №6. - С.18-19. 3. Авцын А.П. Микроэлементозы человека: этиология, классификация, органо- патология [Текст] /А.П. Авцын, А.А.Жаворонков, М.А. Риш, Л.С. Строчкова. - М.: Медицина, 1991.- 496 с. 4. Аитова М.Д. Аминокислоты в кормлении высокопродуктивных коров [Текст] / М.Д. Аитова, В.И. Горбачев // Животноводство.- 1986. - №6. - С. 48 – 49. 5. Аксененко С.А. Микрофлора телят при диареях в зависимости от состояния здоровья коров-матерей [Текст] // Новые фармакологические средства для животноводства и ветеринарии: материалы науч.-практ. конф., посвящ. 55-летию Краснодарскому НИВС.- Краснодар,2001.- Т.ΙΙ.- С.157-158. 6. Алексеева О.Г. Аллергия к промышленным химическим соединениям [Текст] / О.Г. Алексеева, Л.А. Дуева. - М.,1978.- 271 с. 7. Алексеева Л.С. Янтарная кислота - основное действующее вещество новых метаболических препаратов / Л.С. Алексеева, А.В. Петров, Т.Н. Саватеева и др. Янтарная кислота - основное действующее вещество новых метаболических препаратов.// .Врач.- 2001, № 12, С.29-31 8. Алехин Е.К. Сочетание иммуностимуляторов как метод коррекции вторичных иммунодефицитов [Текст] / Е.К. Алехин, Д.Н. Лазарева, А.Ш. Богданова // Экспериментальная и клиническая фармакология. - 1993. - Т.56, №2. -С. 39-42. 9. Алехин Ю.Н.Болезни печени высокопродуктивных коров [Текст]/Ю. Н. Алехин//.Ветеринария.-2011, №6.- С.3-8 10.Алехин Ю.Н.Отчет о работе отделения ветеринарной медицины за 2011 г. [Текст] /Ю.Н.Алехин.- Москва.-2011 г.-212 с. 11. Аликин Ю.С. Стимуляторы неспецифической резистентности на осно- 240 ве РНК для ветеринарной медицины [Текст]: автореф. дис. д-ра вет. наук / Ю.С. Аликин. - Новосибирск, 1998.- 46 с. 12. Амосова Е.Н. Метаболическая терапия повреждений миокарда, обусловленных ишемией. Новый подход к лечению ишемической болезни сердца и сердечной недостаточности [Текст] / Е.Н. Амосова // Украинский кардиологический журнал. - 2000. - № 4. - С. 86-92. 13. Анатенко С.А. Иммунодефициты у сельскохозяйственных животных [Текст] / С.А. Анатенко //Ветеринария. - 1992. -№ 5. - С. 14-16. 14. Андреев Е.В. Ассоциированное воздействие на организм вируса и условнопатогенных бактерий [Текст] / Е.В. Андреев // Ветеринария .-1984.-№7.-С.25-27. 15. Андросик Л.Д. Влияние микроэлементов на поствакцинальный иммунитет при пастереллезе свиней [Текст]: автореф. дис. … канд. вет. наук / Л.Д. Андросик.Минск, 1996. - 23 с. 16. Антипов В.В. Видовые особенности реакции сукцинатдегидрогеназы лимфоцитов животных на острую гипоксию и ее связь с радиорезистентностью организма [Текст] / В.В. Антипов, М.В. Васин, А.Н. Гайдамакин // Космическая биология и авиакосмическая медицина. -1989.-Т.23, №2.- С.63-66. 17. Антипов В.А. Использование пробиотиков в животноводстве [Текст] / В.А. Антипов // Ветеринария.- 1991.- №4.- С.55-58. 18. Антонова Н.А.Морфофункциональная характеристика органов иммуногене- за беременных коров и новорожденных телят при действии полиоксидония и левамизола [Текст]: автореф. дис.канд. вет. наук / Н.А. Антонова.- Ставрополь, 2005.- 19 с. 19. Апалькин А.В. Проблемы ветеринарной медицины на рубеже веков [Текст] / А.В. Апалькин //Актуальные вопросы ветеринарии: материалы науч.- практ. конф. - Новосибирск: НГАУ,1999.-С.16-22. 20. Арион В.Я. Т-активин и его иммунобиологические свойства [Текст] авто- реф. дис. д-ра биол. наук / В.Я. Арион. - М.,1990.- 52 с. 21. Артемов Б.Т. Содержание парагриппозных антител у крупного рогатого скота [Текст] / Б.Т. Артемов, Л.И. Ефанова // Профилактика и терапия инфекционных и 241 незаразных болезней животных в хозяйствах ЦЧЗ // Сборник научных трудов. - Воронеж, 1984. - С. 5-8. 22. Арямкина О. Л. Применение антиоксидантов в комплексной терапии диф- фузных хронических воспалительных заболеваний печени [Текст] / О. Л. Арямкина, М.А. Визе-Хрипунова // Биоантиоксидант.-Тюмень,1997.- С.184-185. 23. Асквит П. Клиническое применение левамизола: критический обзор [Текст] // Последние достижения в клинической иммунологии: пер. с англ. - М.: Медицина,1983.- 496 с. 24. Атамась В.А. Респираторные болезни крупного рогатого скота в хозяйствах юга Украины (этиология, эпизоотология, профилактика и меры борьбы) [Текст] : автореф. дис. д-ра. вет. наук / В.А. Атамась.-Л.,1989.- 35 с. 25. Атамась В.А. Проблемы эпизоотологии на современном этапе [Текст] / В.А Атамась, В.В.Макаров, С.И. Джупина, В.П.Литвин // Ветеринарный консультант-2005.- №1(92).-С.6-7. 26. Бабенко Г.А. Применение микроэлементов в медицине [Текст] / Г.А. Бабен- ко, Л.П. Решеткина.- Киев: Здоровья,1971. - С.43-45, 101. 27. Байматов В.Н. Регуляция обмена веществ у животных в норме и патологии [Текст] / В.Н. Байматов, Э.Р. Исмагилова. - Уфа,2000.-384 с. 28. Байматов В.Н. Этиология и патогенез заболеваний печени [Текст] / B.Н. Байматов // Уральские Нивы. - 1986.- № 9. - С. 50-55. 29. Балашов В.П. Противоаритмическая активность некоторых энергобеспечи- вающих и электронакцепторных соединений [Текст] / В.П. Балашов, Л.А. Балыков, В.А. Костин // Экспериментальная и клиническая фармакология.-1996.-№2.С.17-19. 30. Балым Ю.П. Экспериментальная и клиническая фармакология органических и неорганических препаратов селена и эффективность применения их в ветеринарии [Текст]: автореф. дис. д-ра. вет. наук.- Воронеж,2009.- 32 с. 31. Бакулина Л.Ф. Пробиотики на основе спорообразующих микроорганизмов рода Bacillus и их использование в ветеринарии [Текст] / Л.Ф. Бакулина, Н.Г. Перминова, И.В.Тимофеев // Биотехнология. -2001. - № 2.- С. 48-56. 242 32. Бакуридзе А.Д. Иммуномодуляторы растительного происхождения [Текст] / А.Д. Бакуридзе, М.Ш. Курципидзе, В.М. Писарев // Химико-фармацевтический журнал. - 1993. - Т.27, №8 - С.43-47. 33. Басанкин А.В. Фармако-токсикологическое обоснование применения янтар- ной кислоты в животноводстве и ветеринарии [Текст] : автореф. дис. канд. вет. наук / А.В. Басанкин. - Казань, 2007.- 18 с. 34. Баринов Н. Бутофан - эффективное средство коррекции метаболических на- рушений у коров [Текст] / Н.Баринов, О. Клищенко // Молочное и мясное скотоводство.-2013.-№8.- С.29-30. 35. Баринский И.Ф. Способность полиоксидония повышать иммуногенность гер- песвирусных вакцин [Текст] / И.Ф. Баринский, И.Г. Сидорович, А.А. Лазаренко // Иммунология. - 2000. - №2 - С.17-20. 36. Барышников П.И. Роль микоплазм в патологии крупного рогатого скота [Текст] / П.И. Барышников // Актуальные проблемы ветеринарии: материалы Междунар. конф.- Барнаул,1995.-С.116-119. 37. Басова Н.Ю. Респираторные болезни молодняка крупного рогатого скота ин- фекционной этиологии в условиях северного Кавказа [Текст]: автореф. дис. ... д-ра вет. наук / Н.Ю. Басова. - Краснодар, 2002 .- 42 с. 38. Бахирева Л.А. Влияние препарата янтарной кислоты на воспроизводитель- ную функцию свиноматок [Текст] / Л.А. Бахирева // Информационный лист №401-95.- Краснодар: Краснодарский ЦНТИ,1995. 39. Баширова Э.М. Диагностика и коррекция функционального состояния пече- ни продуктивных животных при гепатозе [Текст]: автореф. канд. дис. … канд. вет. наук / Э.М. Баширова.- Троицк,2010.-18 с. 40. Безбородова Е.А. Влияние янтарной кислоты на продуктивность свинома- ток и их потомства [Текст] / Е.А. Безбородова // Вопросы ветеринарной биологии: сборник научных трудов. - М.: Изд-во МВА им. К.И.Скрябина,1994. - С. 148-155. 41. Безбородова Е.А. Влияние янтарной кислоты на энергию роста и сохран- ность поросят сосунов [Текст] / Е.А. Безбородова // Актуальные проблемы эколо- 243 гии и зоокультуры: сборник научных трудов.- М.: Изд-во МВА им. К.И. Скрябина, 1995.- С.99-100. 42. Белопольский В.А. Иммунологические основы комплексного лечения телят при бронхопневмонии [Текст] / В.А. Белопольский, Ю.И. Головизин // Ветеринария .-1993.-№11-12.- С.35-41. 43. Бельков А.И. Клинико-прогностическое значение метаболической терапии у больных инфарктом миокарда [Текст]: автореф. дис. … канд. мед. наук / А.И. Бельков.- СПб, 2011.-24 с. 44. Беседнова Н.Н. Эпштейн Л.М. ДНК из молок лососевых рыб - перспективы клинического применения: методические рекомендации для врачей [Текст] / Н.Н. Беседнова.- Владивосток: ТИНРО-центр, 2002. -61 с. 45. Бербетова Н.Т. Из жизни свободных радикалов [Текст] / Н.Т. Бербетова // Соросовский образовательный журнал.-2000.-Т.6, №5.-С.39-44. 46. Биогенные элементы. Разделы физической химии. Лабораторные работы [Текст]: учебно-методическое пособие / сост.: В.И. Гончаров, Л.П. Андрусенко, К.С. Эльбекьян. - Ставрополь: Изд-во СГМА, 2010. - 114 c. 47. Бобков Ю.Г. Влияние сукцинатов на развитие патологических процессов [Текст] / Ю.Г. Бобков, Г.А. Кузнецов, Г.Н. Клейменова // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.-1984.- Т.99., №10.- С. 420-422. 48. Бойко Т.В. Иммунотропное действие некоторых пестицидов [Текст] / Т.В. Бойко, Ю.В. Редькин, А.Ю. Козина, Т.В. Герунов // Российский иммунологический журнал. - 2008. - Т.2 (11), №2-3.- С. 201-205. 49. Большаков В.И. Динамита кислотно-щелочного равновесия в организме ко- ров в норме и при некоторых патологических состояниях [Текст] / В.И. Большаков // Сборник научных работ.- Барнаул: Алтайский НИВС,1972. - Вып.3. - С.22-26. 50. Бокова Т.И. Использование биологически активных добавок в рационе жи- вотных [Текст] / Т.И. Бокова, Л.И. Тюлюпина, И.В. Васильцова // Кормление сельскохозяйственных животных и кормопроизводство. - 2008. -№9.- C. 61-62. 51. Борисова A.M. Изучение влияния левамизола на показатели клеточного им- мунитета у больных хроническим бронхитом и хронической пневмонией [Текст] / 244 А.М. Борисова, Т.А. Новикова, А.В. Глазко // Терапевтический архив. - 1984.- Т. 56, № 10.- С. 29-31. 52. Боряев Г.И. Биохимический и иммунологический статус молодняка сель- скохозяйственных животных и птицы и его коррекция препаратами селена [Текст]: автореф. дис. ... д-ра биол. наук / Г.И. Боряев.- М.,2000. - 43 с. 53. Бояринцев Л.Е. Разработка и прменение препаратов интерферона и биоло- гически активных добавок в в ветеринарии [Текст] : автореф. дис. … д-ра вет. наук / Л.Е .Бояринцев.- Воронеж, 2003. - 43 с. 54. Браунштейн А.Е. Процессы и ферменты клеточного метаболизма [Текст] / А.Е. Браунштейн. - М.: Наука,1987.- 548 с. 55. Будулов Р.Н. Респираторные болезни крупного рогатого скота в Дагестане [Текст]: автореф. дис. … д-ра биол. наук / Р.Н. Будулов.- Краснодар, 2009. - 43 с. 56. Бузлама С.В. Фармакология препаратов гуминовых кислот и их применения для повышения резистентности животных [Текст]: автореф. дис. ... д-ра вет. наук / С.В. Бузлама. - Воронеж, 2008. - 43 с. 57. Буланкин А.Л. Разработка и применение новых лечебных препаратов при эндометритах, маститах коров и желудочно-кишечных заболеваниях телят [Текст]: автореф. дис. ... дис. д-ра вет. наук / А.Л. Буланкин.- Краснодар, 1996.47с. 58. ские Булатников А.П. Влияние аммония сукцината на основные фармакологичесвойства кислоты ацетил салициловой [Текст]: автореф. дис. ... дис. канд.биол. наук / А.П. Булатников.- Томск, 1999.- 26с. 59. Букин Ю.В. Пиридоксин [Текст] / Ю.В. Букин // Эксперементальная вита- минология.- Минск: Наука и техника,1979.- 607 с. 60. Буянов А.А. Иммунодефициты у животных при промышленной технологии [Текст] /А.А. Буянов // Диагностика, патогенез, патоморфология и профилактика болезней сельскохозяйственных животных: материалы Всерос. науч.-метод. конф. по патанатомии сельскохозяйственных животных. - Воронеж, 1993. - С. 6-9. 245 61. Буянов А.А. О классификации иммунодефицитов [Текст] / А.А. Буянов // Ма- териалы Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины. - Омск, 2000. - С.53-54. 62. Браунштейн А.Е. Процессы и ферменты клеточного метаболизма [Текст] / А.Е. Браунштейн.-М.: Наука,1987.- 548 с. 63. Бышевский А.Ш. Биохимия для врача [Текст] / А.Ш. Бышевский., О.А. Тер- сенов. - Екатеринбург: Изд-во Уральский рабочий,1994.- 384 с. 64. Ваизов В.Х. Использование иммуномодуляторов при вирусных инфекциях [Текст] / В.Х. Ваизов, Ф.И.Ершов //Антибиотики и химиотерапия.-2003.- №48. С.27-32. 65. Ваизов В.Х. Эпизоотический процесс и особенности его проявления в про- мышленном комплексе [Текст] / В.Х. Ваизов, В.П. Литвин // Тезисы докладов ΙΙΙ Всесоюзной конференции по эпизоотологии.- Новосибирск,1991.- С.34-35. 66. Ваизов В.Х. Сукцинат аммония - эффективный корректор циркулярной ги- поксии мозга [Текст] / В.Х. Ваизов, Т.М. Плотникова, Т.В Якимова, А.С. Саратников // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.- 1994.-Т.68,№9.С.276-278. 67. Вальдман А.Р. Дилудин новый антиоксидант- стабилизатор витаминов и стимулятор роста и продуктивности сельскохозяйственных животных [Текст] / А.Р. Вальдман, Г.Я. Дубур, Я.Я. Спруж // Известия АН Латвийской ССР.-1977.№9.-С. 43-61. 68. Вернадский В.И. Биогеохимические очерки 1922 - 1932 гг. [Текст] - М.- Л.: АН СССР, 1940. - 249 с. 69. Верховская А. Е. Разработка и оценка эффективности вакцин КОМБОВАК- Р и КОМБОВАК-К [Текст]: автореф. дис. канд. вет. наук /А. Е. Верховская. - Владимир, 2008. - 25 с. 70. Виноградов А.Д. Сукцинат-убихинон редуктазный участок дыхательной цепи [Текст] /А.Д. Виноградов // Биохимия. -1986. - Т. 51.,№12.- С. 1944-1973. 246 71. Виноградова Ю.Е. Клинический эффект левамизола и возможность лабора- торного прогнозирования его действия [Текст] / Ю.Е. Виноградова, И.В. Рагозина, Е.К. Иванина, И.А. Лебедев // Терапевтический архив.- 1980. - № 9. - С. 30 - 34. 72. Виноградова И.П. Влияние кобальта на выработку эритроцитов у животных [Текст]: труды Алтайского СХИ / И.П. Виноградова, П. Ильин.- Барнаул: Изд-во Алтайский СХИ,1957.- Вып.5.- С. 322-327. 73. Владимиров Ю. А. Роль нарушения барьерной и матричной функций ли- пидного слоя биологических мембран в патологии [Текст] / Ю.А. Владимиров.М.: Наука, 1985.-17 с. 74. Вознанова Ж.И. Влияние левамизола на содержание Т- и В- лимфоцитов при вирусном гепатите В [Текст] / Ж.И. Вознанова, Н.М.Ковалева, П.А. Овчаренко // Врачебное дело.- 1986.-№ 2.- С. 112-114. 75. Воронин Е.С. Настоящее и будущее в профилактике болезней молодняка сельскохозяйственных животных [Текст] // Актуальные проблемы ветеринарной медицины в России: сб. науч. тр.-Новосибирск,1998.- С.131-138. 76. Воронин Е.С. Современная концепция этиологии, профилактики и лечения болезней молодняка сельскохозяйственных животных [Текст] / Е.С.Воронин, А.Г. Шахов //Состояние, проблемы и перспективы развития ветеринарной науки России.-М.,1999.-Т.1.-С.209-214. 77. Воронин Е.С. Влияние иммуномодуляторов на иммунологический статус телят при экспериментальном инфекционном ринотрахеите [Текст] / Е.С. Воронин, Д.А. Девришов, В.Н. Денисенко // Ветеринария.-1991.-№8.- С.25-27. 78. Воронин Е.С. Влияние Т-активина на иммунологический статус телят [Текст] / Е.С. Воронин, В.Н. Денисенко, Г.Н. Печникова // Ветеринария. -1990. № 5. -С. 51-53. 79. Востроилова Г.А. Экспериментальная и клиническая фармакология препа- ратов плаценты, полученных методом криофракционирования [Текст] : автореф. дис. … д-ра биол. наук / Г.А. Вострилова.- Воронеж, 2007.- 46 с. 247 80. Втюрин С.В. Эффективность иммуномодулирующих средств при респира- торных болезнях телят [Текст]: автореф. дис. канд. вет. наук / С.В. Втюрин.- Н. Новгород, 2006. -22 с. 81. Габрошински П. Нарушения обмена микроэлементов [Текст] / П. Габро- шински, Л.Недкова // Профилактика нарушений обмена веществ у сельскохозяйственных животных.- М.: Агропромиздат, 1986.-С.65-72. 82. Гаврилов Ю.А. Фармакологическая коррекция нарушений обмена веществ у сельскохозяйственныхживотных, вызванных действием экотоксикантов [Текст]: автореф. дис. д-ра биол. наук. / Ю.А. Гаврилов.- Воронеж, 2007.- 46 с. 83. Гамидов М.Г. Эффективность использования цеолитов Приамурья при же- лудочно-кишечных болезнях животных и птицы [Текст]: автореф. дис. … д-ра вет. наук / М.Г. Гамидов. - Улан-Удэ, 2004.- 34 с. 84. Гасанов А.С. Фармакотоксикологическая характеристика антианемического средства сукцината железа [Текст]: автореф. дис. д-ра биол. наук / А.С. Гасанов.Казань, 2006.-37 с. 85. Гаркави JI.X. Адаптационные реакции и резистентность организма [Текст] / JI.X. Гаркави, Е.З. Квакина, М.А. Уколова.- Ростов-на-Дону: Изд-во РРУ,1990. 223 с. 86. Гафаров Х.З. Влияние некоторых иммуномодуляторов на специфическую актив- ность лечебно-профилактической сыворотки против рота-, корона-вирусов и Е. coli новорожденных телят [Текст] / Х.З.Гафаров, М.А. Ефимова // Экологические проблемы патологии, фармакологии и терапии животных: координационное Международное совещание ВНИВИПФиТ. - Воронеж, 1997.- С.301-310. 87. Гацура В.В. Фармакологическая коррекция энергетического обмена ищеми- зированного сердца [Текст] / В.В. Гацура.- М.: Медицина, 1993. - 112 с. 88. Гацура В.В. Противоишемический кардиопротекторный эффект мексидола [Текст] / В.В. Гацура, В.В. Пичугин // Кардиология.-1996.-№11.-С.59-62. 89. Георгиевский В.И. Минеральное питание животных [Текст] / В.И. Георги- евский, Б.Н. Анненков, В.Т. Самохин. - М.: Колос, 1979.- 471 с. 248 90. Герасев А.Д. Анализ механизма действия цеолита Шивыртуйского место- рождения на водно-солевой обмен и функцию почек [Текст] : дис. д-ра биол. наук / А.Д. Герасев.- Новосибирск, 2005.-325 с. 91. Глотов А.Г. Распространение вирусных респираторных болезней крупного рогато- го скота [Текст] / А.Г. Глотов, О.Г. Петрова, Т.И. Глотова // Ветеринария .-2002.- №3.С.17-21. 92. Глушков С.М. Сравнительная оценка состояния системы глутатиона в раз- личных органах и тканях при острых пероральных отравлениях дихлорэтаном [Текст]: автореф. дис. ... канд. мед. наук / С.М. Глушков.-СПб, 1998.-21с. 93. Гончаренко Е.Н. Противолучевые средства природного происхождения [Текст] / Е.Н. Гончаренко, Ю.Б. Кудряшов // Успехи современной биологии. 1991. - Т. 3, №2.- С. 302-315. 94. Гоппе В. А. Этиологическое значение вирусов инфекционного ринотрахеита и вирусной диареи-болезни слизистых в возникновении респираторных болезней телят [Текст] : автореф. дис. канд. вет. наук / В.А. Гоппе.- Новосибирск, 2005.21 с. 95. Горбов Ю.К. Об этиологии диарей новорожденных и пневмоэнтеритных болезней телят в промышленном животноводстве Мордовии [Текст] / Ю.К. Горбов, А.П. Мачинский, В.Г. Денисов // Рост и болезни молодняка сельскохозяйственных животных: межвуз. сб. науч. тр. - Саранск ,1989.-С.6-12. 96. Горшков В.В. Влияние различного уровня микроэлементов на рост, разви- тие и мясную продуктивность бычков красной степной породы на откорме [Текст]: автореф. дис. канд. с.-х. наук / В.В. Горшков.- Барнаул: Алтайский ГАУ, 2003.-22 с. 97. Горьковенко Н.Е. Иммунобиологический статус животных в различных экологических условиях Приамурья и пути его коррекции [Текст]: автореф. дис. … д-ра биол. наук / Н.Е. Горьковенко.- Новосибирск, 2007.- 45 с 98. Грачева Р.В. Влияние кобальта и меди на обмен веществ и морфологиче- скую картину крови у крупного рогатого скота в условиях предгорья Алтая [Текст]: дис. канд. биол. наук / Р.В. Грачева. - Барнаул,1971.-С.1-89. 249 99. Дамбаева С.В. Влияние некоторых иммуномодуляторов на функциональную активность фагоцитарных клеток периферической крови доноров [Текст] / С.В. Дамбаева, Д.В. Мазуров, Н.М. Голубева , Б.В. Пинегин // Иммунология. 2000. - №6 - С. 15-20. 100. Дейгин В.И. Создание нового поколения пептидных лекарственных препаратов для стимуляции и супрессии иммунитета и гемопоэза [Текст] : дис….д-ра биолог. наук / В.И. Дейгин.-М.,2000.- 324 с. 101. Деминова О.В. Повышение уровня молочной продуктивности и качества молока коров при использовании бактериального препарата (пробиотика) [Текст]: автореф. дис. ... канд. вет. наук / О.В. Деминова.- Вологда,2002.-22 с. 102. Дерябина З.И. Химико-фармакологическая характеристика препарата АСД [Текст] / З.И. Дерябина.- Труды ВНИЭВ,1963.- Т.25.- С.326-329. 103. Дворецкий Л.И. Лечение железодефицитной анемии [Текст] / Л.И. Дворецкий // Русский медицинский журнал. -1998.-№20.-С.1312-1316. 104. Джупина С.И. Классические и факторные инфекционные болезни [Текст] / С.И. Джупина // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук.- 1992.-№1.-С.47-50. 105. Джупина С.И. Контроль эпизоотического процесса [Текст] / С.И Джупина .Новосибирск: Сибирское отделение ИЭВСиДВ,1994.-164 с. 106. Джупина С.И. Этиология и профилактика массовых желудочно-кишечных болезней телят [Текст] / С.И. Джупина // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: сборник материалов науч.- практ. конф., 23-25 сентября 2002. - Воронеж: Воронежский ГАУ,2002.-С. 51-53. 107. Донченко А.С. Применение биологически активных веществ в качестве иммуномодуляторов в ветеринарии и медицине [Текст] / А.С Донченко, Ю.С. Аликин, Д.И. Найманов. - Новосибирск,1989. - С. 8-29. 108. Донченко А.С. Иммуностимуляторы нуклеиновой природы как стимуляторы неспецифической резистентности и продуктивности молодняка крупного рогатого скота [Текст] / А.С. Донченко, В.А. Багрин // Рекомендации РАСХН.М.,1992.- С.8-16. 250 109. Дорофеев Б.Ф. Изучение гепатопротекторных свойств Ко А и его предшественников у экспериментальных животных [Текст] / Б.Ф. Дорофеев, С.Н. Омельянчик // Кофермент «А» и его предшественники: синтез, анализ, и экспирементальное изучение. -М.:НПО Витамины,1997.- С.88-93. 110. Дроговоз С.М. Обоснование рационального выбора гепатопротекторов [Текст] / С.М. Дроговоз Л.В., Деримедведь, Е.В., Журавель.- Человек и лекарство: ΙV Российский национальный конгресс. - М.,1997.- С. 42- 46. 111. Душкин Е. В. Гепатические расстройства излечимы [Текст] / Е. В. Душкин, И. Мундяк, С. Параноков // Животноводство России.- 2008.-№1.- С.42-43. 112. Душкин Е.В. Жировая дистрофия печени и методы ее оздоровления у крупного рогатого скота [Текст] / Е.В. Душкин // Рынок АПК.- 2008. - №1 (52). С. 92-93. 113. Евглевский А.А. Совершенствование аллергической диагностики и специфической профилактики туберкулеза крупного рогатого скота [Текст] : автореф. дис. … канд. вет. наук / А.А.Евглевский . - Воронеж, 1992 - 21с. 114. Евглевский А.А. Разработка нового комплексного иммунометаболического препаратов с выраженной антиинфекционной активностью и эффективность его применения при пневмоэнтеритах телят [Текст] / А.А. Евглевский, В.В. Семенютин, О.М. Швец, И.В. Ермилов, Е.П. Евглевская, Т.И. Михалева.// Вестник Курской ГСХА.Курск.- №4.- 2011. -С. 66-68. 115. . Евглевский А.А. Теоретическое и практическое обоснование нового подхода преодоления лекарственной резистентности микроорганизмов [Текст] /, А.А. Евглевский, В.Ю. Тарасов, И.В. Ермилов, С.Н. Кретова, Ю.В. Скибин, Н.В. Ванина, С.М. Коломийцев, О.М. Швец, Е.П. Евглевская // Вестник Курской ГСХА.Курск.-2011.- № 1. -С. 67-68. 116. Ермилов И.В.Теоретическое и практическое обоснование применения препаратов янтарной кислоты в системе мер профилактики вирусных инфекций телят [Текст] : автореф. дис. … канд. вет. наук / И.В. Ермилов. - Курск,2012. - 21с. 251 117. Ершов Ф.И. Интерферониндуцирующая и противовирусная активность левамизола [Текст] / Ф.И. Ершов, С.С. Григорян, И.Б. Кремерман // Антибиотики. 1981. - №8. - С. 617-620. 118. Иванов А. В. Кетоз коров, овец, свиней [Текст] / А. В. Иванов, К. X. Папуниди, В. А. Игнаткина . - Казань: Изд-во ТГГИ,2000. - 72 с. 119. Ивницкий Ю.Ю. Интенсивность клеточного дыхания и радиорезистент- ность организма [Текст]: автореф. дис. д-ра мед. наук / Ю.Ю. Ивницкий.СПб.,1994.- 48 с. 120. Ивницкий Ю.Ю. Янтарная кислота в системе метаболической коррекции функционального состояния и резистентности организма [Текст] / Ю.Ю. Ивницкий, А.И. Головко, Г.А.Софронов.- СПб., 1998.- 82 с. 121. Ещенко Н.Д., Вольский Г.Д. Определение количества янтарной кислоты и активности сукцинат дегидрогеназы [Текст] / Н.Д. Ещенко, Г.Д. Вольский // Методы биохимических исследований.-Л.: ЛГУ,1982. - С.207-212. 122. Жалдыбин В.В. Показатели неспецифического иммунитета у свиней, вакцинированных против классической чумы в условиях применения иммуностимулятора [Текст] / В.В. Жалдыбин, B.C. Прудников // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях. - Воронеж, 2002. - С. 116-117. 123. Жаков М.С. Применение натрия тиосульфата для стимуляции поствакцинального иммунитета у животных [Текст] / М.С. Жаков, B.C. Прудников, И.Н. Громов // Материалы Всероссийской научно-методической конференции патологоанатомов ветеринарной медицины. – Омск,2000. - С.71-73. 124. Жаров А.В. Роль иммунодефицитов в патологии животных [Текст] /А.В. Жаров // Ветеринарная патология.- 2003.- №3.- С. 7-12. 125. Жаров А.В. Патология обмена веществ у высокопродуктивных животных [Текст] /А.В. Жаров // Ветеринария.- 2012.- №9 .- С.46-50 126. Жвания М.Ш. Роль биостимулятора при формировании иммунитета у поросят, вакцинированных против инфекционной энтеротоксемии [Текст] / М.Ш. Жвания // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: материалы конф., 23-25 сентября 2002. - Воронеж: Воронежский ГУ,2002.-С.257-258. 252 127. Жданов В.М. Эволюция возбудителей инфекционных болезней [Текст] / В.М.Жданов, Д.К.Львов. - М.:Медицина,1984.- 270 с. 128. Жидков С.А. Вирусная диарея болезнь слизистых оболочек крупного рогатого скота [Текст] : дис…д-ра. биол. наук / С.А. Жидков. - М.,1994. - 299 с. 129. Жмуров Н. Использование нуклеината натрия и фосфолипидов грибка Streptomices griseus 15 для стимуляции общей и неспецифической реактивности при профилактике сальмонеллеза свиней [Текст]: автореф. дис. ... канд. вет. наук / Н.Г. Жмуров.- Воронеж,1988. - 17с. 130. Зайчик А.Ш. Основы патохимии [Текст] / А.Ш. Зайчик, Л.П. Чурилов. СПб.: Элби, 2000.-С.57-60. 131. Земсков A.M. Иммуномодулирующие, детоксицирующие и ростстимулирующие свойства нуклеината натрия [Текст]: автореф. дис. ...д-ра мед. наук /А.М. Земсков.-М.,1984.- 31 с. 132. Земсков В.М. Принципы дифференцированной иммунокоррекции [Текст] / В.М.Земсков, А.М. Земсков // Иммунология.-1996.-№3.- С.4-6. 133. Зиновьев Ю.В. Резистентнось к гипоксии [Текст] / Ю.В. Зиновьев, С.А. Козлов.- Красноярск: Изд-во Енисей,1988.-67 с. 134. Иванов А.В. Фармако-токсикологические свойства эффективность применения «Янтарос плюс» и природных минералов в животноводстве [Текст] : автореф. дис. …д-ра вет. наук / А.В.Иванов.- Казань,1999.- 36 с. 135. Иванова Т.А. Т-система иммунитета и пути ее коррекции синтетическим пептидом тимуса [Текст] / Т.А. Иванова, Э.П. Скрипник, С.В. Серый // Новые фармакологические средства в ветеринарии :тезисы докладов к 1-й межвузовской науч.практ. конф. – Ленинград,1989. - С.52-56. 136. Ивановский С.А. Лечение и профилактика при иммунных дефицитах сельскохозяйственных животных [Текст] / С.А.Ивановский. -Уфа.: БГАУ, 1993.- 14 с. 137. Ивницкий Ю.Ю. Интенсивность клеточного дыхания и радиорезистентность организма [Текст]: автореф. дис. …. д-ра мед. наук / Ю.Ю. Иваницкий.СПб.,1994.- 48 с. 253 138. Ивницкий Ю.Ю. Янтарная кислота в системе средств метаболической коррекции функционального состояния и резистентности организма [Текст] / Ю.Ю. Иваницкий.-СПб.: Лань,1998.- 82 с. 139. Игнатов П.Е. Очерки об инфекционных болезнях у собак [Текст] /П.Е. Игнатов.- М.- 1995.- 100с. 140. Иоффе Б.В. Физические методы определения строения органических соединений [Текст] / Б.В. Иоффе, Р.С. Костиков, В.В. Разин.-М.: Высшая школа, 1984.125 с. 141. Исмагилова А.Ф. Фармакологическая коррекция иммунитета с помощью новых гетероциклических соединений и гликопептидов глицирризиновой кислоты [Текст] : автореф. дис. д-ра биол. наук /А.Ф. Исмагилова. - Воронеж,1997.51с. 142. Исмагилова Э.Р. Клинико-биохимические показатели крови при нарушениях обмена веществ [Текст] / Э.Р. Исмаилова // Ветеринарно-биологические проблемы науки: межвуз.науч. сб.-Уфа,1999-С.134-136. 143. Исмагилова Э.Р. Клинико-морфологические проявления, прогнозирование и коррекция нарушений минерального обмена [Текст]: автореф. дис. … д-ра. биолог. наук / Э.Р. Исмаилова.-Уфа,2006.-37 с. 144. Кабанцев А.И. Иммунологические аспекты профилактики респираторных заболеваний телят [Текст] : автореф. дис. канд. биол. наук / А.И. Кабанцев.- Новосибирск,1989.- 18 с. 145. Калимуллин Ю. Н. Влияние солей кобальта и йода на продуктивность и некоторые физиологические показатели свиней [Текст]: дис. канд. с-х. наук / Ю.Н. Калимуллин.- Казань,1992.-27 с. 146. Калюжный И.И. Патогенез ацидоза рубца крупного рогатого скота [Текст] / И.И. Калюжный // Материалы Международной научной конференции.- Казань, 1998.- Ч. II. - С. 45-52. 147. Калюжный И.И. Ацидоз рубца [Текст] / И.И. Калюжный// Ветеринария. - 1998. - №7.-С. 42-47. 254 148. Кальницкий В.Д. Хелатные соединения микроэлементов в кормлении поросят раннего отьема [Текст] / В.Д. Кальницкий.- Микроэлементы в биологии и их применение в медицине и сельском хозяйстве.- 1986. -Т.З. - С. 160-161. 149. Камышников В. С. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике [Текст] / В.С. Камышников.- Мн.: Беларусь, 2000. - Т. 1. - 495 с. 150. Камышников В. С. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике [Текст] / В.С. Камышников.- Мн.: Беларусь, 2000. - Т. 2. - 463 с. 151. Каплина Э.Н. Деринат - природный иммуномодулятор для детей и взрослых [Текст] / Э.Н. Каплина.- М.: Научная книга, 2005.-75 с. 152. Караев А.Л. Гепатопротекторная активность дисульфидного производного Ко А [Текст] / А.Л. Караев, Т.Н. Смирнова, М.А. Ковлер // Кофермент «А» и его предшественники: синтез, анализ, и экспериментальное изучение.- М.: НПО Витамины,1997. - С.83-88. 153. Кардашов А.М. Иммунный статус коров и телят и его коррекция лигфолом при специфической профилактике колибактериоза, парагриппа-3 и инфекционного ринотрахеита [Текст]: автореф. дис. канд. вет. наук / А.М. Кардашов.- Воронеж,2005. - 25 с. 154. Карелин А.И. Применение янтарной кислоты поросятам в период отъема от свиноматок [Текст] / А.И. Карелин, Е.В. Наумкина // Вопросы ветеринарной биологии: сб. научн. трудов.- М.: Изд-во МВА им. К.И. Скрябина,1994.-С.70-72. 155. Кармолиев Р.Х. Иммуносупрессорные процессы при колостральном иммунитете у телят [Текст] / Р.Х. Кармолиев // Ветеринария.-1993.-№6.-С.27-29. 156. Кику В.Ф. Левамизол иммуностимулятор клеточного иммунитета [Текст] / В.Ф. Кику // Здравоохранение. - 1980. - №6. - С. 46-49. 157. Кирпиченок В.А. Коррекция иммунного ответа у свиней при вакцинации против лептоспироза [Текст] / В.А. Кирпиченок, Ю.О. Сергеев // Тезисы докладов 3-й Всесоюзной конференции по эпизоотологии. - Новосибирск: Изд-во ИЭВСиДВ,1991. - С. 303-305. 158. Клиническая иммунология и аллергология [Текст]: учебное пособие / под ред. А.В. Караулова. - М.: Медицинское информационное агентство, 2002.-124 с. 255 159. Кирюткин Г.В. Возрождение препарата АСД [Текст] / Г.В. Кирюткин, В.И. Абдарахманов, В. Шабанов // Животноводство России.-2004.- №10.- С.46-49. 160. Ковалев А.С. Влияние условий содержания на микробный фон и заболе- ваемость телят [Текст] / А.С. Ковалев // Ветеринария.-1989.-№2. - С.23-27. 161. .Ковалев И.Е. Левамизол как иммуностимулятор [Текст] / И.Е. Ковалев // Химико-фармацевтический журнал.-1980.-№4.-С.115-121. 162. Ковальчук Л. В. Регуляторное действие пептидов иммунной системы на функциональную активность моноцитов [Текст] / Л.В.Ковальчук, Л.В. Ганковская // Иммунология. - 1991. - №4. - С.57-61. 163. Коваленко А.Л. Янтарная кислота: фармакологическая активность и лекарственные формы [Текст] / А.Л. Коваленко, Н.В. Белякова //Фармация.-2000.-№ 5.С.40-42. 164. Коков Т.Н. Бентониты в рационах телят [Текст] / Т.Н. Коков, А.З. Утижев // Животноводство России.-2011.- № 5.- С.65-67. 165. Комплексная экологически безопасная система ветеринарной защиты здоровья животных [Текст]. - М.: ФГНУ Росинформагротех, 2000.-300 с. 166. Кондрахин И. П. Вторичная остеодистрофия коров [Текст] / И.П. Кондрахин // Ветеринария.- 1980.-№ 9.-С.52-54. 167. Кондрахин И. П. Кетоз молочных коров [Текст] / И.П. Кондрахин // Ветеринария.- 1981.- №8.- С.56-58. 168. Кондрашова М.Н Схема отклонений состояния митохондрий от нормы и вещества, обращающие эти изменения [Текст] / М.Н. Кондрашова // Реакции живых систем и состояние энергетического обмена.- Пущино,1979.- С.185-197. 169. Кондрашова М.Н. Гомеостазирование физиологических функций на уровне митохондрий. Молекулярные механизмы клеточного гомеостаза [Текст] / под ред. И.И. Гительзон.- Красноярск: Наука, 1987.- С.40-66. 170. Кондрашова М.Н. Сигнальное действие янтарной кислоты и ее лечебное применение в малых дозах [Текст] / М.Н. Кондрашова, М.В. Захарченко, В.А Самохвалов // Регуляторы энергетического обмена. Клинико-фармакологические аспекты: материалы симпозиума.- Томск, 2005. - С.8 -17. 256 171. Кондрашова М.Н. Янтарная кислота в медицине, пищевой промышленности, сельском хозяйстве [Текст] / М. Н. Кондрашова.-Пущино,1996. - 300 с. 172. Копылович М. В. Влияние аэрозолей сульфамонометоксина, тиамина бромида и левамизола на газообмен, морфо-биохимические показатели телят и их эффективность при неспецифической бронхопневмонии [Текст]: автореф. дис. … канд. вет. наук / М.В. Копылович.- Омск, 2004.-19 с. 173. Корсакова Е.Н. Использование иммуномодуляторов для повышения эффективности вакцинопрофилактики телят в экологически неблагополучных территориях [Текст] / Е.Н. Корсакова // Материалы научно-производственной конференции по актуальным проблемам ветеринарии и зоотехнии.- Казань,2001.-С. 46-47. 174. Косорлукова З.Я. Нормализация иммунобиохимического гомеостаза коров в предродовом и послеродовом периодах [Текст] / З.Я. Косорлукова, Г.В.Зоткин, В.В. Горчаков // Свободные радикалы, антиоксиданты и болезни животных: материалы Междунар. конф., 21-23 сентября 2004.- Воронеж: Изд-во Воронежского ГУ,2004.- С. 68-71. 175. Красников О.Н. Эффективность линкомицина гидрохлорида 30% при бронхопневмониях телят [Текст]: автореф. дис. … канд. вет. наук / О.Н.Красников.Воронеж, 2003.-17 с. 176. Красочко П.А. Биотехнологические основы конструирования и использования иммунобиологических препаратов для молодняка крупного рогатого скота [Текст]: автореф. дис. д-ра биол. наук / П. А. Красочко. М.:Щелково, 2009. - 46 с. 177. Кричевская А. А. Липиды биологических мембран [Текст] / А. А Кричевская, И.Я.Шерстнева, Л.В. Ломакина // Тезисы докладов 2 Всероссийского симпозиума, 14-15 сентября, Ташкент 1980г.- Ташкент, 1980.-С.189-190. 178. Крыжановская Е.В. Биологически активные вещества ветеринарии [Текст]: автореф. дис. д-ра. биол. наук / Е.В. Крыжановская.- Кащинцево,2008.-32 с. 179. Кузнецов С.Г. Биологическая доступность и метаболизм минеральных веществ у молодняка свиней [Текст] : автореф. дис. д-ра биол. наук / С.Г. Кузнецов.-М.,1989.- 37 с. 257 180. Кузнецов С.Г. Принципиальная диагностика недостаточности меди [Текст] / С.Г. Кузнецов // Ветеринария.- 1986.-№3. - С. 53-55. 181. Кулинский В.И. Обмен глутатиона [Текст] / В.И. Кулинский, Л.С. Колесниченко // Успехи биологической химии. - 1990.-Т. 31. - С.157- 179. 182. Кулинский В.И., Колесниченко Л.С. Структура, свойства, биологическая роль и регуляция глутатионпероксидазы [Текст] / В.И. Кулинский, Л.С. Колесниченко // Успехи современной биологии. - 1993.- Т. 113, вып. 1.- С. 107-122. 183. Кумар Ю. А. Профилактика и лечение при кетозе коров [Текст] / Ю. А. Кумар, М. Э. Кумар, Г.В.Чернова // Ветеринария.- 1989. - №1. - С. 48-49. 184. Кынина Е.С. Иммуномодулирующее влияние левамизола в условиях антибиотикотерапии [Текст] / Е.С. Кынина, С.Т. Дзюбак, В.М. Витвицкий // Антибиотики и химиотерапия.- 1991. - №1.- Т.36. - С. 26-28. 185. Ланкин В.З. Свободно-радикальные процессы при заболевании сердечнососудистой системы [Текст] / В.З. Ланкин, А.К. Тихадзе, Ю.М. Беляков // Кардиология.-2000.-№8. -С.48-60. 186. Ланкин В.З. Роль антиокислительных ферментов в развитии окислительно- го стресса [Текст] / В.З. Ланкин, А.К. Тихадзе, Г.Г.Коповалов: тезисы докладов 18 съезда физиологического общества имени И.П. Павлова, г. Казань, 25-28 сент. 2001г. -Казань, 2001.- С. 374-375. 187. Ласкавый В.Н. Патент № 2077882 РФ. Иммуномодулирующее средство / В.Н Ласкавый, В.В Рыбин. - 1997. 188. Лебедева М.Г. Микробиологические, иммунологические, эпизоотологические и превентивные аспекты послеродового эндометрита коров [Текст] : автореф. дис. канд. вет. наук / М.Г. Лебедева.- Курск , 2003.- 19 с. 189. Лейбова В.Б. Активность метаболических ферментов в период сухостоя в крови высокоудойных коров с разным репродуктивным потенциалом [Текст] / В.Б. Лейбова, И.Ю. Лебедева // Достижения науки и техники АПК.- 2011.- №10.С. 35-36. 258 190. Литвина Л.А. Экологическое благополучие животного и его микрофлора [Текст] / Л.А. Литвина,А.Г. Незавитин // Ветеринария Сибири.-2001.-№5.-С.7477. 191. Лишневская В.Ю. Метаболическая терапия при ИБС - из прошлого в будущее [Текст] // Consilium medicum Ukraina. - 2008. - № 1. - С. 34-39. 192. Лотош Т.Д. Экспериментальные основы и перспективы использования препаратов гуминовых кислот из торфа в медицине и сельскохозяйственном производстве [Текст] /Т.Д. Лотош // Биологические науки. -1991. -№ 10.- С. 99-103. 193. Лузбаев К.В. Использование янтарной кислоты для стимуляции роста и развития цыплят-бройлеров [Текст] / К.В. Лузбаев, М.С. Найденский // Янтарная кислота в медицине, пищевой промышленности и сельском хозяйстве: сборник научных статей.- Пущино,1997.- С.137-140. 194. Лузиков В.Н. Регуляция формирования митохондрий. Молекулярные аспекты [Текст] / В.Н. Лузиков.- М.: Наука,1980.-318 с. 195. Лукьянова Л.Д. Гипоксия при патологиях. Молекулярные механизмы и принципы коррекции [Текст] / Л.Д. Лукьянова // Перфторорганические соединения в биологии и медицине.- Пущино, 2001. - С.56-69. 196. Лукьянова Л.Д. Дизрегуляция аэробного энергетического обмена типовой патологический процесс [Текст] // Дизрегуляционная патология: руководство для врачей и биологов / Под ред. Г.Н.Крыжановского. - М.: Медицина, 2002.-С. 188-216. 197. Луцкий Д.Я. Патологии обмена веществ у высокопродуктивного крупнорогатого скота [Текст] / Д.Я. Луцкий, А.В. Жаров, В.П. Шишков.- М.: Колос,1978.384 с. 198. Маевский Е.И. Обоснование использования биологически активных добавок на основе янтарной кислоты [Текст] / Е.И.Маевский, Б.В.Гришина, А.С.Розенфельд // Эффективность применения БАД в различных областях медицины: материалы V юбилейной научно-практической конференции по биологически активным добавкам.-М.,2000.- С.145-146. 259 199. Маевский Е.И. Анаэробное образование сукцината и ресинтез АТФ в митохондриях тканей крыс [Текст] / Е.И. Маевский, Е.В. Гришина, М.С. Окоп // Фармакологическая коррекция гипоксических состояний.- М.: НИИ фармакологии АМН СССР, 1989.- С. 80-92. 200. Малошевич В.Э. Комплексная система мер борьбы с ассоциативными болезнями телят [Текст]: автореф. канд. дис… вет. наук / В.Э. Малошевич. Омск,2005.-16 с. 201. Малюк В.И. Метаболические процессы в изолированных митохондриях [Текст] / В.И. Малюк, В.И. Федоров // Физиологический журнал.- 1995.- Т.41, №12.- С. 79-86. 202. Масьянов Ю.Н. Иммунный статус крупного рогатого скота и свиней при наиболее распространенных болезнях и его коррекция [Текст] :автореф. дис. д-ра. вет. наук / Ю.Н. Масьянов.- Воронеж, 2009. - 48 с. 203. Манжурина О.А. Влияние калия нитрата на реактивность свиней при специфической профилактике сальмонеллеза [Текст] : автореф. дис. ... канд. вет. наук / О.А. Манжурина. – Воронеж,1998. - 23 с. 204. Маннапова Р.Т. Мероприятия по коррекции гуморального звена иммунитета при нарушении минерального обмена у поросят [Текст] / Р.Т. Маннапова, С.Н. Аухатова // Проблемы и пути интенсификации племенной работы в отраслях животноводства. -Уфа,2004.- С.257-262. 205. Машеро В.А. Инфекционные болезни телят [Текст] / В.А. Машеро .- Витебск: Изд-во УО ВГАВМ, 2006.-202 с. 206. Метлякова М.Ю. Применение хелатных комплексов биогенных металлов для профилактики анемии у животных [Текст] / М.Ю. Метлякова // Актуальные проблемы животноводства и ветеринарии: материалы республиканского НПК.Казань, 1999.-С. 82-84. 207. Машковский М.Д. Препараты, корригирующие процессы иммунитета (иммуномодуляторы, иммунокорректоры) [Текст] / М.Д. Машковский // Ле- карственные средства: пособие для врачей.- М.: Медицина, 1993.-Ч.II.- С.192-209. 260 208. Меерсон Ф.З. Патогенез и предупреждение стрессорных и ишемических повреждений сердца [Текст] / Ф.З. Меерсон.-М.: Медицина, 1984.-269 с. 209. Миловский В.Г. Связь нарушений окислительного фосфорилирования и изменений иммунного статуса в патогенезе эндогенной интоксикации [Текст] / В.Г. Миловский, И.Г Болдина, Б.Н Шах // Полиорганная недостаточность при шокогенных травмах и острых хирургических заболеваниях. - СПб,1992. - С.124 - 131. 210. Минушкин О.Н. Гептрал в терапии внутрипеченочного холестаза [Текст] / О.Н. Минушкин, Л.В. Масловский // Человек и лекарство: ΙV Российский национальный конгресс.- М.,1997.- С .85-87. 211. Мищенко В.А. Меры борьбы с диареями новорожденных телят [Текст] В.А. Мищенко, Н.А. Яременко, Д.К. Павлов // Ветеринария. -2002.- №4.- С.16-19. 212. Мищенко В.А. Особенности иммунодефицитов крупного рогатого скота [Текст] / В.А. Мищенко, Н.А. Яременко, А.В. Мищенко // Ветеринария. -2006.№11.- С.17-20. 213. Мищенко В.А. Анализ причин заболеваний высокопродуктивных коров [Текст] / В.А. Мищенко // Вестник Орловского государственного аграрного университета. - 2008. - Т. 11,№ 2. - С. 20-24. 214. Мищенко В.А. Анализ нарушений обмена веществ у высокомолочных коров [Текст] / В.А. Мищенко, А.В. Мищенко // Ветеринария Кубани.-2012.№6.-С. 15-17. 215. Мозгов И. Е. Фармакологические стимуляторы в животноводстве [Текст] / И.Е. Мозгов. - М.,1964.- 221 с. 216. Мухутдинова Д.М. Сравнительная терапевтическая эффективность различных методов лечения телят, больных неспецифической бронхопевмонией [Текст] : автореф. дис. ... канд. вет. наук / Д.М. Мухутдинова.- Казань, 2001.-18 с. 217. Николаев А.В. О химическом составе и новых фракциях препарата АСД [Текст] / А.В. Николаев // Труды ВНИЭВ.-М.,1958.- Т.22.- С.317-326. 218. Никулин И.А. Метаболическая функция печени крупного рогатого скота при силосно-концентратном типе кормления и ее коррекция гепатотропными препаратам[Текст]: автореф. дис.д-ра. вет. наук /И.А. Никулин.- Воронеж.-2002.- 27с. 261 219. Ноева Н.А. Применение левамизола для лечения больных хроническим приобретенным токсоплазмозом [Текст] / Н.А. Ноева, В.Н.Никифоров, Н.А.Лебедев // Современная медицина. -1981. - №3. - С.45-49. 220. Ноздрин Г.Н. Фармакологическая коррекция иммунодефицитов у телят в ранний постнатальный период жизни [Текст]: автореф. дис. д-ра. вет. наук / Г.Н. Ноздрин. - СПб, 1996. - 37 с. 221. Оболенский Н.В. Реамберин – новое средство для инфузионной терапии в практике медицины критических состояний [Текст] / С.В. Оболенский // Реамберин: реальность и перспективы: сб. науч. статей. - СПб., 2002.-168 с. 222. Олейник Л.В. Состояние окислительно-антиоксидантного гомеостаза при эксперементальной токсикоинфекции [Текст] / Л.В. Олейник, Сокирко Т.А. // Свободные радикалы, антиоксиданты и здоровье животных: материалы науч. конф., 21-23 сентября 2004.- Воронеж: Воронежский ГУ,2004.-С.3-9. 223. Олейник А..В. Защита здоровья телят в хозяйствах с высокопродуктивным скотом [Текст] / А.В. Олейник// Ветеринария.-2010.-№6.- С.6-9 224. Папуниди К.Х. Патология обмена веществ и пути его коррекции [Текст] / К.Х. Папуниди , А.В. Иванов //Ветеринарный врач.-2000. - № 1. - С. 62-65. 225. Папуниди К. А. Рекомендации по диагностике, лечению и профилактикекетозов сельскохозяйственных животных [Текст] / К. А. Папуниди.- М.: Изд-во ФТНУРосинформагротех, 2007. - 95 с. 226. Парфенов В.Е. Реактивность системы мозгового кровообращения и возможность ее коррекции в остром периоде травмы головного мозга [Текст] : дис. канд. мед. наук / В.Е. Парфенов. - Л.: ВМедА,1987. - 159 с. 227. Пашук Л.К. Препараты ДНК как потенциальные терапевтические средства [Текст] / Л.К. Пашук, Г.Н Апрышко., Е.М. Трещалина // Химико- фармацевтический журнал.-1995. - Т.29,№ 6. - С. 61-64. 228. Петров Р.В. Контроль и регуляция иммунного ответа [Текст] / Р.В. Петров, Р.М. Хаитов, В.М. Манько. - М.,1981.-108 с. 229. Петров А. Ю. Коррекция митохондриальных дисфункций препаратами на основе янтарной кислоты [Текст] / А. Ю Петров, А. Л. Коваленко, Ю. В. Казимова 262 // Человек. Природа. Общество. Актуальные проблемы: материалы 13-й международной конференции молодых ученых, г. СПб, 26-30 декабря 2002 г. - СПб,2002.С.148-149. 230. Петров A.M. Стимуляция иммунной системы у телят-трансплантантов [Текст] / A.M. Петров, Е.С. Воронин // XXV Всемирный ветеринарный конгресс, 3-9 сентября 1995. - Иякогама,1995.-Т 1,№.1.- С.102-106. 231. Петрович Ю.А. Свободнорадикальное окисление и его роль в патогензе воспаления, ишемии и стресса [Текст] / Ю.А. Петрович, Д.В. Гуткин // Патологическая физиология и экспериментальная терапия.-1986.-№ 5.- С.85-92. 232. Петрянкин Ф.П. Иммунокоррекция в системе «мать-плод-новорожденный» [Текст] / Ф.П. Петрянкин // Ветеринарный врач.-2003.-№3(15).-С.23-25. 233. Петрянкин Ф.П. Иммунологические аспекты комплекса «мать-плод- новорожденный» у животных [Текст] / Ф.П. Петрянкин // Ветеринарный консультант.-2008.- № 7.- С. 3-9. 234. Петухов В.И. Активные формы кислорода в прогрессировании хронического миелолейкоза: перспективы применения натуральных антиоксидантов [Текст] / В.И. Петухов // Терапевтический архив.- 2000.-Т.72, № 8.- С.64-67. 235. Попова О.М. Иммуноглобулины и их коррекция при минеральной недостаточности у коров [Текст] / О.М. Попова // Современные проблемы интенсификации производства в АПК.- М.,2005.- С. 249-250. 236. Придыбайло Н.Д. Иммунодефициты у сельскохозяйственных животных и птиц, профилактика и лечение их иммуномодуляторами: обзорная информация [Текст] / Н.Д. Придыбайло. - М.,1991. - 44 с. 237. Прудников B.C. Влияние натрия тиосульфата на некоторые морфологические показатели крови и титры специфических антител у поросят, вакцинированных против классической чумы свиней [Текст] B.C. Прудников, В.В. Жалдыбин, А.В. Прудников // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях. Воронеж, 2002. - С. 117-118. 238. Путилина Ф. Е. Определение активности глутатионредуктазы [Текст] / Ф.Е. Путилина // Методы биохимических исследований.- Л.: ЛГУ,1982. - С.181-182. 263 239. Племяшев К.В. Воспроизводительная функция у высокопродуктивных коров при нарушении обмена веществ и ее коррекция [Текст]: автореф. дис. …д-ра вет. наук / К.В. Племяшев.-СПб,2010.- 39 с. 240. Племяшев К.В. Обмен веществ и его коррекция в воспроизводстве крупного рогатого скота [Текст] / К.В. Племяшев, А. А. Стекольников // Современные проблемы ветеринарного обеспечения репродуктивного здоровья животных: материалы Междунар. науч.- практ. конф., посвящ. 100-летию со дня рождения проф. В.А. Акатова. - Воронеж, 2009. - С.22-28. 241. Постников B.C. Изменение липидного обмена в сыворотке крови высокопродуктивных коров при гепатозе [Текст] / B.C. Постников, Н.З. Зенухина // Вопросы ветеринарной биологии: материалы науч.-практ. конф. -М.,1988.- С. 22-23. 242. Прокофьева Г.Н. Гемовит- плюс как источник микроэлементов для супоросных свиноматок и поросят[Текст]/Г.Н. Прокофьева, В.Н. Клюева, Д.В. Пчельников, В.А.Бабич//Ветеринарная патология, 2008. №2-С.78-83. 243. Путилина Ф.Е. Орпеделение активности глутатионредуктазы [Текст] // Методы биохимических исследований. - Л.: ЛГУ, 1982.- С.181-182. 244. Распутина О.В. Разработка и применение лекарсивенных средств на основе ароксиланкарбоновой кислоты при болезнях животных, вызываемых условно патогенной микрофлорой [Текст] : дис. д-ра вет. наук // О.В. Распутина.- Новосибирск.- 2007.- 36 с. 245. Романцов М.И. Реамберин-спектр применения [Текст] / М.И. Романцов // Врач.-2002.-№12- С.16-18. 246. Резник Б.Я. Клиническое использование препаратов янтарной кислоты в лечении пневмонии у детей первого года жизни [Текст] / Б.Я Резник, Ж.Б Крайняя // Реамберин: реальность и перспективы: сб. науч. статей.- СПб.,2002.-168 с. 247. Рецкий М.И. Адаптивные изменения антиокислительной системы у животных после рождения [Текст] / М.И. Рецкий // Тезисы докладов ХVΙΙΙ съезда физиологического общества им. И.П. Павлова, г. Казань, 25-28 сент. 2001 г.- Казань,2001.- С.202-213. 264 248. Рецкий М.И. Значение антиоксидантного статуса в адаптивной гетерогенности и иммунологической резистентности животных [Текст] /М.И. Рецкий, В.С. Бузлама, А.Г. Шахов // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях. - Воронеж, 2002. - С.33-36. 249. Рецкий М.И. Система антиоксидантной защиты у животных при стрессе и его фармакологической регуляции [Текст]: дис. д-ра. биол. наук / М.И. Рецкий. Воронеж, 1997.- 396 с. 250. Рецкий М.И. Роль кислотно основного состояния в формировании колострального иммунитета у новорожденных телят [Текст] / М.И. Рецкий, А. Г. Шахов, А. И. Золотарев // Вестник Российской академии сельскохозяйственных наук.- 2005.- №3.- С.69-71. 251. Романцов М.Г. Экспериментальное изучение препаратов на основе янтарной кислоты - потенциальное применение в клинике [Текст] / М.Г. Рецкий.СПб.,2001.- С.21-24. 252. Румянцева С.А. Комплексная антиоксидантная терапия реамберином больных с критическими состояниями различного генеза [Текст] / С.А. Румянцева, А.И. Федин // Реамберин: реальность и перспективы: сборник научных статей.СПб., 2002.- С.168-170. 253. Рыкова Е.Ю. Активирующее влияние ДНК на иммунную систему [Текст] / Е.Ю. Рыкова, П.П. Лактионов, В.В. Власов // Успехи современной биологии. 2001. - № 121. - С.160-171. 254. Сайберт Л.Н. Зоогигиеническое обоснование режима выращивания ремонтных свинок в промышленных комплексах [Текст] : автореф. дис. канд. с.-х. наук.М.,1992.-22 с. 255. Сайченко В.И. Проблемы искусственной регуляции паразито-хозяинных отношений в системах управления ассоциированными эпизоотическими процессами [Текст] / В.И. Сайченко, С. К. Димов, Ю.Г. Юшков // Паразиты в природных комплексах и рисковые ситуации.- Новосибирск, 1998.- С.101-102. 265 256. Сайченко В. И. Комплексный подход к проблеме получения и выращивания здоровых телят [Текст] / В.И. Сайченко // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях. - Воронеж, 2002. - С.33-36. 257. Самохин В.Т. Профилактика нарушений обмена микроэлементов у животных [Текст] / В.Т. Самохин. - Воронеж: Воронежский государственный университет, 2003.-136 с. 258. Самохин В.Т. Оптимизация метаболического статуса коров-матерей – основа профилактики неонатальных болезней телят [Текст] / В.Т. Самохин, М. И. Рецкий, В. И. Шушлебин // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: материалы конф., 23-25 сентября 2002. - Воронеж: Воронежский государственный университет, 2002.- С.51-53. 259. Самохин В.Т. Комплексный хронический гипоикроэлементоз – иосновная причина заболевания молодняка [Текст] /В.Т. Самохин, В.И.Шулибин, И.В. Гусев и др.//Материалы межд. НПК «Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях.- Воронеж.- 2008 С.-80-83 260. Сащенко Р.В. Препарат «Сумавит» для коррекции нарушений обмена веществ у коров при контаминации экотоксикантами [Текст] : автореф. дис. … канд. вет. наук / Р.В. Сащенко.- Воронеж, 2007.- 17 с. 261. Сейланов А.С. Связь ПОЛ с дыханием и окислительным фосфорилированием [Текст] / А.С. Сейланов, Г.А. Попов, В.В. Корнев // Журнал экспериментальной и клинической медицины.-1983.-Т.23,№2.- С.108-112. 262. Семиголовский Н.Ю. Сравнительная оценка эффективности 10 антигипоксических средств в остром периоде инфаркта миокарда [Текст] / Н. Ю. Семиголовский, С. В. Оболенский, М. П. Рыбкин // Междуна-родные медицинские обзоры. - 1994. - Т 2, № 5. - С. 334-338. 263. Семко С.А. Основные паразитозы свиней Среднего Предуралья и усовершенствование мер борьбы с ними [Текст] : автореф. дис. канд. вет. наук / С.А. Семко.- М., 2002.- 19 с. 266 264. Серебряная Н.Б. ДНК как иммуностимулятор: обзор литературы [Текст] / Н. Б. Серебряная, А.А. Новак // Медицинская иммунология. - 2001. - Т. 3, № 1. - С. 27-34. 265. Сергеев П.В. Соотношение антиоксидантного и противоишемического эффектов некоторых энергообеспечивающих средств [Текст] / П.В.Сергеев, Г.В. Снегирева, В.М. Гукасов// Бюллетень экспериментальной биологической медицины.-1991. - Т. 62, № 10 - С. 381-382. 266. Сидоров М.А. Иммунный статус и инфекционные болезни новорожденных телят и поросят [Текст] / М.А. Сидоров, Ю.Н Федоров, О. М. Савич // Ветеринария .- 2006.- №11.-С.3-5. 267. Сисягин П.Н. Вирусные желудочно-кишечные болезни новорожденных телят [Текст] / П.Н. Сисягин, Г. Р. Редженова // Проблемы профилактики и лечения заболеваний сельскохозяйственных животных: сб. науч. тр. - М.: ВНИВИНЗ.1993.- С.145-148. 268. Сисягин П.Н. Сравнительная эффективность различных иммуномодулирующих средств при вторичном иммунодефицитном состоянии у телят [Текст] / П.Н. Сисягин, Т.Р. Реджепова, Е.П. Сисягина // Ветеринарная патология.- 2007. №2.- С. 116-120. 269. Сисягина Е.П. Разработка средств и способов терапии и профилактики респираторных болезней телят [Текст] / Е.П. Сисягина: автореф. дис. ... д-ра вет. наук / Е.П. Сисягина.- Н. Новгород, 2010. - 30 с. 270. Скориков А.В. Эффективность применения Полиоксидония-вет в ветеринарной медицине [Текст] /А.В Скориков, Н.Ю. Басова, М.А. Староселов, Ю.Е. Федоров // Ветеринария Кубани.- 2013.- № 6.- С.12-13. 271. Смирнов П.Н. Ветеринарная экологическая иммунология: проблемы и перспективы [Текст] / П.Н. Смирнов // Эпизоотология. Диагностика, профилактика и меры борьбы с болезнями животных.- Новосибирск,1997.- С.61-63. 272. Смирнов П.Н. Теоретические и практические аспекты проблем экологии и адаптации животных [Текст] / П.Н. Смирнов // Научное обеспечение ветеринарных проблем в животноводстве.- Новосибирск, 1999. - С.36 - 48. 267 273. Смирнова Н.Б. Экспериментальное обоснование разработки регулятора энергетического обмена с антитоксическими и актопротекторными свойствами [Текст]/ Н.Б. Смирнова, В.А Хазанов // Актуальные проблемы экспериментальной и клинической фармакологии.- Томск: Изд-во Томского ун-та, 2001.- С. 141144. 274. Смирнова О.В. Определение бактерицидной активности сыворотки крови методом фотонефелометрии [Текст]/ О.В. Смирнова, Т.А. Кузьмина // ЖМЭИ. – 1966 г.- №4. - С.8-11. 275. Смоленцев С.Ю. Коррекция иммунологического статуса и обмена веществ крупного рогатого скота и свиней [Текст]: автореф. дис. ... д-ра биол. наук / С.Ю. Смоленцев.- Казань, 2013.- 47 с. 276. Соколов А.В. Фармакологические свойства новых иммуностимуляторов [Текст]/ А.В. Соколов // Новые фармакологические средства в ветеринарии: материалы 7-й межвуз. науч.-практ. конф. - СПб.,1995. - С. 55-57. 277. Старцева Л.Я. Бактериальная микрофлора кишечника больных диареей телят и поросят [Текст] / Л.Я. Старцева, М.К. Федоров, Г.В. Павлов // Вестник сельскохозяйственной науки.-1992.-№ 5- 6.-С.149-151. 278. Степанов О.Г. Фармакология и применение имунофана в животноводстве [Текст]: автореф. дис. …. канд. биол. наук / О.Г. Степанов.- Краснодар, 2004.18 с. 279. Степанюк О.В. Профилактическая эффективность синтетических иммуномодуляторов при диарее новорожденных телят / О.В. Степанюк, Г.А. Хмельницкий [Текст] // Новые фармакологические средства в ветеринарии : тез. докл. к 1-й межвузовской науч.-практ. конф. - Л.,1989.- С.65-67. 280. Сытинский И.А. Биохимическое действие этанола на центральную нервную систему [Текст] / И. А. Сытинский. - М.:Медицина,1980.-82 с. 281. Соколов А.В. Фармакологические свойства новых иммуностимуляторов [Текст] / А.В. Соколов // Новые фармакологические средства в ветеринарии: материалы7-й межвуз. науч.-практ. конф. - СПб.,1995. - С. 55-56. 268 282. Тарасов В.Ю. Научное и практическое обоснование стимулирования иммунометаболических процессов при некробактериозе коров [Текст]: автореф. дис. …. канд. вет. наук / В.Ю.Тарасов.- Белгород, 2011.- 23 с. 283. Тармакова О.С. Модификация способа получения и оценка эффективности иммуномодулирующего средства из тимуса телят и молодняка крупного рогатого скота [Текст]: автореф. дис. канд. биол. наук / О.С. Тармакова.- Улан-Удэ,2005. 22 с. 284. Тарнцев Ю. А. Мероприятия по профилактике и терапии кетоза коров [Текст] / Ю. А. Тарнцев, Ч. М. Санданов, А. А. Цыренова //Болезни сельскохозяйственных животных в Забайкалье и на Дальнем Востоке: сб. науч. тр.- Благовещенск, 1987.- С.62-64. 285. Терапевтическое действие янтарной кислоты [Текст] / под. ред. М.Н. Кондрашевой.- Пущино: Институт биофизики АН СССР,1976.- 234 с. 286. Терехов В.И. Проблемы острых кишечных болезней молодняка сельскохозяйственных животных и пути их решения [Текст] / В.И. Терехов //Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: материалы конф., 23-25 сентября 2002.- Воронеж: Воронежский государственный университет,2002.С.51-53. 287. Топузов Э.Г. Применение реамберина у больных с механической желтухой [Текст] / Э.Г. Топузов, А.Л. Коваленко, Е.И. Дрогомирецкая // Лечащий врач.1999.- №7.- С.43-46. 288. Топурия Л.Ю. Фармакокоррекция иммунодефицитных состояний у животных [Текст]: монография / Л.Ю. Топурия, А.А. Стадников, Г.М. Топурия. - Оренбург: Издательский центр ОГАУ,2008. -176 с. 289. Топурия Г.М. Состояние естественной резистентности у телят в условиях химического загрязнения внешней среды [Текст] / Г.М. Топурия // Ветринарная патология .- 2003.-№3.- С. 222-232. 290. Тулева Н.П. Разработка и применение иммуномодулирующих препаратов для профилактики и лечения заболеваний, обусловленных вирусно-бактериальной 269 инфекцией. [Текст] : автореф. дис. . док. биол. наук/Н.П.Тулева.- СанктПетербург. 2004.-36 с. 291. Утижев А.З. Восполнение минеральной недостаточности бентонитом в рационах сельскохозяйственных животных [Текст] / А.З. Утижев.- Нальчик,2010. 175 с. 292. Урбан В.П. Болезни молодняка в промышленном животноводстве [Текст] / В.П. Урбан, И.Л. Найманов.-М.:Колос,1984.- 207 с. 293. Урбан В. П. Иммунные и стимулирующие препараты [Текст] /В.П.Урбан, А.Н. Гречухин. М.М. Грозман // Новые фармакологические средства в ветеринарии: тез. докл. к 1-й. межвузовской науч.-практ. конф.- Л.,1989.- С.68-69. 294. Фарбер H.A. Клиническое применение левамизола -перспективы и предостережения [Текст] / Н.А. Фербер // Терапевтический архив.-1980.-№ 1.-С. 95-100. 295. Федин А.И. Избранные вопросы базисной интенсивной терапии нарушений мозгового кровообращения [Текст] / А.И. Федин, С.А. Румянцева.- М.: Интермедика,2002.-256 с. 296. Федоров Ю.Н. Иммунодефициты животных: происхождение, характеристика, диагностика, коррекция [Текст] / Ю.Н. Федоров, О.А. Верховский // Ветеринарные и зоотехнические проблемы животноводства.: материалы 1-й Межд. науч.- практ. конф. -Витебск,1996.- С.12-14. 297. Федоров Ю.Н Отчет о работе отделения ветеринарной медицины за 2008 г. [Текст] / Ю.Н.Федоров.-Москва 2008 г.-199с 298. Федоров Ю.Н.Иммунодефициты крупного рогатого скота [Текст] / Ю.Н. Федоров // Ветеринария.-2006.-№1.-С. 3-6. 299. Фельдман И.И. Коровы-носители токсигенных адгезивных кишечных палочек – возбудители простой диареи новорожденных телят [Текст] / И.И. Фельдман, М.В. Шадрина, В.И. Криволапов, Г.П. Чекрыга / Эпизоотоогия, диагностика, профилактика и меры борьбы с инфекционными болезнями животных: сб. науч. тр. -Новосибирск: Изд-во ВАСХНИЛ СО ИЭВСиДВ,1992.- С.123-127. 270 300. Филиппов В.В. Задачи ветеринарной медицины в разработке средств и методов профилактики и борьбы с инфекционными болезнями молодняка [Текст] / В.В. Филиппов //Ветеринария .-1993.-№10.-С.3-7. 301. Фисенко С.П. Влияние иммунобиологического состояния организма на формирование поствакцинального иммунитета при инфекционном ларинготрахеите птиц [Текст] автореф. дис. ... канд. вет. наук / С.П. Фисенко. - Л.,1990. – 17 с. 302. Хабусов И.П. Иммуномодуляторы в коррекции иммунодефицита и профилактике туберкулеза крупного рогатого скота [Текст] : автореф. дис. … д-ра. вет. наук / И.П. Хабусов.-Персиановка,2002.- 38 с. 303. . Хабриев Р.У. Руководство по экспериментальному (доклиническому) изучению новых фармакологических веществ[Текст] / Р.У. Хабриев.-М.: Медицина,2005.- 832 с. 304. Хаитов Р.М. Иммуномодулятоы: механизм действия и клиническое применение [Текст] / Р.М. Хаитов, В.М. Пинегин // Иммунология.-2003.-№5 .-С.196201. 305. Хаитов Р.М. Иммуномодуляторы и некоторые аспекты их клинического применения [Текст] / Р.М. Хаитов, Б.В. Пинегин // Клиническая медицина. -1996.Т.74, №8.- С. 7-12. 306. Хитрова А.Е. Эффективность применения комбинированных вакцин серии комбовак [Текст] / А.Е. Хитрова, В.А. Сергеев, Т.И. Алипер // Ветеринария .2006.- №9.- С.17-20. 307. Хлопин А.А. Использование бентонитовой глины в кормлении коров чернопестрой породы [Текст] : автореф. дис. канд с.-х. наук / А.А. Хлопин.- Курган,2002.-19 с. 308. Хурум Н.Б. Эффективность биотехнологических приемов воспроизводства свиней в условиях промышленного комплекса. [Текст] : автореф. дис. .. канд. с.-х. наук / Н.Б. Хурум. -Краснодар,1992.-25 с. 309. Шабунин С.В. Нитазолсодержащие препараты в профилактике и терапии желудочно-кишечных болезней молодняка сельскохозяйственных животных 271 [Текст] / С.В. Шабунин, П.А. Паршин, С.М. Сулейманов: материалы Междунар. конф.- Витебск, 1996.- С.79-80. 310. Шабунин С.В. Отчет о работе отделения ветеритнарной медицины РАСХН[Текст] /С.В.Шабунин.- Москва 2012г.- 212 с. 311. Шайхаманов М.Х. Этиология, патогенез, лечение и профилактика диспепсии телят [Текст] / М.Х. Шайхаманов, А.Д. Клюкин // Ветеринария.-1978.- №1.С.88-92. 312. Шакалов К.И. Патогенетическая терапия заболеваний животных [Текст] / К.И Шакалов // Государственное издательство сельскохозяйственной литературы.- Л.- М.,1961.- 105 с. 313. . Шанин В.Ю. Возможности улучшение тканевого дыхания медикаментозными средствами при тяжелой сочетанной травме [Текст] / В.Ю. Шанин, А.И. Карпищенко, А.А. Будко // Клиническая медицина и патофизилогия.-1996. - №1. С.56-60. 314. Шапошникова Ю.В. Клинико-морфологическая характеристика иммунодефицита у телят и его коррекция лигфолом [Текст] / Ю.В. Шапошникова : автореф. дис. канд.вет. наук.п. Персиановский.- 2009.-24 с.… 315. Шахов А.Г. Концепция эколого-адаптационной теории возникновения и развития массовой патологии и защиты здоровья животных в сельскохозяйственном производстве [Текст] / А.Г. Шахов.- М.: Росинформагротех, 2000. - 44 с. 316. Шахов А.Г. Роль процессов свободнорадикального окисления в патогенезе инфекционных заболеваний [Текст] / А.Г. Шахов // Свободные радикалы, антиоксиданты и здоровье животных: материалы науч. конф., 21-23 сентября 2004 г.Воронеж: Воронежский государственный университет,2004.-С. 3-9. 317. Шахов А.Г. Этиология и профилактика желудочно-кишечных и респираторных болезней телят и поросят [Текст] /А.Г.Шахов // Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: материалы науч. конф., 23-25 сентября 2002., г. Воронеж.- Воронеж: Изд-во Воронежский ГУ,2002.-С. 3-8. 272 318. Шахов А.Г. Этиология и профилактика желудочно-кишечных и респираторных болезней телят и поросят [Текст] / А.Г. Шахов // Ветеринарный консультант.- 2003.-№1.- С.4-5. 319. Шахов А.Г. Применение иммуномодуляторов при вакцинации животных против сальмонеллеза [Текст] /А.Г.Шахов, Ю.Н. Масьянов, Ю.Н. Бригадиров // Ветеринария. - 2006. - №6. - С.21 -26. 320. Шахов А.Г. Повышение эффективности специфической профилактики факторных инфекций путем коррекции антиоксидантного и иммунного статуса коров и телят [Текст] / А.Г. Шахов, М.И. Рецкий, А.И. Золотарева // Ветеринарная патология. - 2005.- №3. - С.84-89. 321. Щерба М.И. Железодефицитные состояния [Текст] / М.И. Щерба, В.Н. Петров, Е.С. Рысс. - Л.: Наука,1975.-267 с. 322. Щербаков П.Н. Создание и применение биологических препаратов для профилактики и лечения массовых желудочно-кишечных и респираторных болезней телят и поросят [Текст]: автореф. дис. ... д-ра вет. наук / П.Н. Щербаков. М.,2004. – 35 с. 323. Шилов В.Б. Повышение эффективности вакцинопрофилактики телят с иммунодефицитным состоянием [Текст] / В.Б Шилов, Е.Н. Корсакова //Актуальные проблемы болезней молодняка в современных условиях: материалы науч. конф., 2325 сентября 2002. г.- Воронеж: Изд-во Воронежский ГУ, 2002.-С.641-642. 324. Шитиков В.В. Экономический ущерб, наносимый незаразными болезнями животных [Текст] / В.В. Шитиков // Новые фармакологические средства для животноводства и ветеринарии: материалы юбилейной конф. - Краснодар,2001.-Т.2.С.153-154. 325. Шкиль Н.А. Экология условно-патогенной микрофлоры, циркулирующей в популяции животных [Текст]/ Н.А. Шкиль, Н.Н. Шкиль, М.Н. Шадрина //Сибирский Вестник сельскохозяйственных науки.-2003.-№3- С.163-164. 326. Шкуратова И.А. Оптимизация обменных процессов как основа повышения продуктивного долголетия крупного рогатого скота. [Текст] / И.А. Шкуратова // 273 Проблемы повышения продуктивного долголетия животных: материалы науч.практ. конф.-Курган,2008.- С. 14-18. 327. Шпоганяч Н.Н. Влияние антиоксидантов на неспецифическую резистентность и витаминную обеспеченность сухостойных коров [Текст] : автореф. дис…. канд. биол. наук / Н.Н. Шпоганяч.- Белгород, 2009.-17с. 328. Штурм Р.И. Радиорезистентность мышей при включении в рацион янтарной кислоты и ее солей [Текст] / Р.И. Штурм, Ю.Ю. Ивницкий // Радиобиология.-1992. - Т. 32, вып . 1. - С 117-200. 329. Эмирбеков Э.3. Влияние многократного холодового стресса на интенсивность перекисного окисления липидов и антиокислительную систему тканей [Текст] / Э.З. Эмирбеков. С.П. Львов, А. Г. Гасангажиев // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины.- 1988.-Т.125,№4.- С.385-387. 330. Янтарная кислота в медицине, пищевой промышленности, сельском хозяйстве [Текст] / под ред. М.Н. Кондрашовой, Ю.Г. Каминского, Е.И. Маевского.Пущино: ОНТИ РАМН,1996.- 300с. 331. Ярован Н.И. Физиолого-биохимический статус и молочная продуктивность у коров с субклиническим кетозом при использовании в лечении хотынецких природных циолитов и лецитина [Текст] / Н.И. Ярован, И.А. Новикова // Вестник Орловского ГАУ.-2012.-№6.-С.87-89. 332. Aithal H.N. Enhancement of liver cuccinate dehydrogenase of rats to low atmospheric pressure / H.N. Aithal, T. Ramasarma // Indian J. Exp. Biol., 1968.-Vol.6, № 3.H.179-180. 333. Alikin Yu.S. Prophylactic treatment of viral diseases in fish native RNA linked to soludle and corpuscular carriers / Alikin Yu.S., Shchelkunov I.S., Shchelkunova T.I. // J. Fish. Biol. -1996.-Vol. 49. - P.195-205. 334. Analytical and spectroscopic characterization of humic acids extracted from sewage sludge, manure, and worm compost / Deiana S., Gessa C., Manunza В., Rausa R., Seeber R. // Soil-science.- 1990. - 150. - №1. - P. 419-424. 274 335. Anderson R. Ascorbic acid and immune Functions: Mechanism of immunostimulation / Anderson R // In «Vitamin C Ascorbic Acid,» ed. J.N. Counsell and D. H. Hornig,1981. - Р. 249. Applied Science. London. 336. Anderson R. Ascorbate and cysteine-mediated selective neutralisation of ex- tracellular oxidants during N-formyl peptide activation of human phagocytes / Anderson R., Lukey P.T., Theron A.J. //Agents and Actions.- 1987.- 20(1/2).- Р. 77. 337. Babu T. Prevalence of infectious bovine rinotracheitis virus (BHV-1) antibodies in bovines / T.Babu, B. Mallick, S.Das // Indian Veter. J. - 1984. - Vol.61, №3.-P. 195200. 338. Baird G.D. Enzymes envolved in acetoacetat formation in varioses bovine tissues / Baird G.D., Hibbitt K.G., See J // Biochem -1970.- 117-703. 339. Bagust T.J. Comparison of biological, biophysical and antigenic properties offer strains of infections bovine rhinotracheitis herpesvirus / T.J. Bagust // J.Сотр. Pathol. 1972. - 82, №2. - 365-374. 340. Becher B. Interferon-gamma secretion by peripheral blood T-cell subsets in multiple sclerosis: correlation with disease phase and interferon-beta therapy / B.Becher, P.S.Giacomini, D.Pelletier et al // Ann.Neurol. 1999. - Vol.45. - P. 347-250. 341. Bendich A. The atioxidant role of vitamin C. Adv. in Free Radical / Bendich A., Machlin I.J. // Biology & Medicine. - 1986. - 2. Р. 419. 342. Bergman H. Die Virusinfectionen des Respirationstraktes beim Kalb- moglichkeyten und Grenzen ihrer immunoprophylaxe / Bergman H. / Tierzucht.-1987..41.- №4. - S.181-182 343. Chance В. Respiratory enzymes in oxidative phosphorilation / Chance В., Williams G.R. // J.Biol.Chem.,1995.-Vol .217.-№ 1. - P. 383-438. 344. Choudhy Z.M. Studies on succinate degydrogenating system. Interaction of the mitochondrial succinate-ubiquinone reductase with piridoxal phosphate / Choudhy Z.M. // Biochim. Biophys. Acta, 1986. -Vol. 10.-№1 . - P. 131-138. 345. Cook N. Combined outbreak of the genital and conjunctival forms of bovine, herpesvirus 1 infection in a UK diary herd / N. Cook // Veter. Rec. - 1998.-Vol. 143, №20. -P.561-562. 275 346. Bires J. Zinok ako immunomodulator u prezuvavcov a osipahych / J. Bires,L., Vrzgula W. Veterinarstvi. - 1988. - P. 62-64. 347. Danuser J. Krankheiten und Abgangsursachen bei schweizerischen Milkhkuhen. 1 .Haufigkeiten und "Wiederholbarkeiten" von Krankheiten / J. Danuser, J. Luginbuhl, C. Gaillard // Schweiz. Arch. – Tierheilk,1988. - T. 130, №3.- P.149-163. 348. Domingo J.L. Citric, malic and succinic acids as possible alternatives to deferoxamine in а luminium toxicity / Domingo J.L., Mercedes Gomez // Clin . Toxicol., 1986 -Vol .26, №1-2 .-P. 67-79. 349. Edwards S. IBR - Infectious bovine rinotrscheitis / S. Edwards // The BritishFresian J. - 1983. - Vol. 65, № 5. - P. 392-393. 350. Egberink H. Animal immunodeficiency viruses / H. Egberink, M. Horrinek // Vet. Microbiol.-1992. - P.311-331. 351. Egli C.P. «Clinical, haematological, metabolic and endocrine traits during the first three months of life of suckling simmentaler calves held in a cow-calf operation» / C.P. Egli, J.W. Blum //Zentralbl.Veterinarmed. A, Vol. 45, No. 2.- 1998.-Р. 99-118. 352. Ernster L. The mode of action of lipid-soluble antioxidants in biological membranes: relationship between the effects of ubiquinol and vitamin E as inhibitors of lipid peroxidation in submitochondrial particles / Ernster L., Forsmark P // Biofactors. 1991. - Vol., №. 4V.- P. 241-248. 353. Fabiani J.N. Cardioprotective effect of trimetazidini during coronary graft surgery / Fabiani J.N. // J Cardivasc Surg. - 1992. - Vol 33,№ 4. - P. 486-491. 354. Flaming K. Effect of bovine immunodeficiency - like virus infection on immune function in experimentally infectend cattle / K. Flaming, M. Van der Maaten, C. Whetstone et al. // Vet. Immunol. Immunopathol. - 1993. - P. 91-105. 355. Frei B. Antioxidant defenses and lipid per oxidation in human blood plasma / Frei B., Stocker R. // Proc. Natl. Acad. Sci. USA. - 1988. - Р. 9748-9752. 356. Fukui S. Tamura K. et al. / Fukui S., Shimvama Т. // Journal of gastroenterology.1997.- V.32.- №4.- P. 464-471. 357. Hammer С J. Characterization of a colostrum replacer and a colostnim supplement containing IgG concentrate and growth factors / C.J. Hammer, J.D. Quigley,L.Ribeiro, H.D. Tyler J.Dairy Sci., Vol. 87, No. 1,2004.- РР. 106-111. 276 358. Hachenberg S. Evaluation of classification modespotentially suitable to identify metabolic stress in healthy dairy cows during theperipartal period Hachenberg S., Weinkauf C. // J. Anim. Sci. 2007.- 85. 359. Heck, H.d A. Casanova, M. (1987) Isotope effects and their implications for the covalent binding of inhaled eH)- and e4CJformaldehyde in the rat nasal mucosa. Toxicol. appl. Pharmacol., 89, 122-134. 360. Heck, H.dA. , Casanova, M. (1995) Nasal dosimetry of formaldehyde: modeling site-specificity and the effects ofpre-exposure. lnhal. Toxicol. (in press) 361. Heck, H.d A. ,Casanova-Schmitz, M. (1984) Biochemical toxicology of formaldehyde. Rev. Biochem.Toxicol.,6, 155-189 29. 362. Horvath, E.P., Jr, Anderson, H., Jr, Pierce, W.K, Hanrahan, L. & Wendlick, J.D. (1988) Effects of formaldehyde on the mucous membranes and lungs. A study of an industrial population. J. Am.rned. Assoc., 259, 701-707. 363. Hughes D. A. Numerical and fimctional alternations in circulatory lympho cytes in cigarette smokers / D.A. Hughes, P.L. Haslam, P.J.Townsend // Cin.And Exp. Immunol. -1985. - V. 61. - №2. - P. 459-467. 364. Godden, S. М. Effect of on-farm commercial batch pasteurization of colostrum on colostrum and serum immunoglobulin concentrations in dairy calves /S.M. Godden, S. Smith, J.M. Feirtag, L.R. Green, S. 365. . Gozsy B. Uber den mechanismus der Hauptatmung des Taubenbrustmuskels / B.,Gozsy , A. Szent-Gyorgyi // Physiol. Chemie, 1934 /-Bd 224.-S.1-10. 366. . Gravert H. O. Acetongehalt der Milch kennzeichnet Energielucke nach dem Kalben / H. O. Gravert, L. Diekmann // Landwirtsch.-Bl.-Weser-Ems. - 1986. -T. 133, №38.- P.14-16. 367. Jean P.A. Utilization of glutatione during 1,2-dihaloethane metabolism in rat hepatocytes / Jean P.A., Reeid D.J. //Cherri. Res. Toxicol. -1992. - Vol.5, №3, - P. 386-391. 368. Jorgensen C. B. Bovine clukocyte adhesion deficiency in Danish Holstein. Frie-sian cattle J. PSR screening and allele frequency estimation / C.B. Jorgensen, J.S.Agerholm, J. Petersen, P. D. Thomsen // Acta Vet. Scand, 1993. P. 231-236. 369. Kimm M.H. The role of nitric oxide in the regulation of macromoleculartrans- 277 port in rat jejunum / M.H. Kimm, J.A. Hardin, D.G. Gall // J. Physiol. -1996. - V. 490, R 1. - P. 243-248. 370. Korhonen H. Bovine milk antibodies for health / H. Korhonen, P. Mamila,H.S. Gill Br.J.Nutr., Vol. 84 Suppl 1, 2000.-РР. S135-S146. 371. Krahenbuhl S. Reduced antioxidative capacity in liver mitochondria from bile duct ligated rats / Krahenbuhl S., Talos C., Lauterburg B. // Hepatology.-1995.-V.22.- №2.P.607-612 372. Krebs H.A. The intermediary stages in the biologocal oxidation of carbohydrate //Adv. Enzymol., 1943.-Vol.3.-P.55. 373. Krebs H.A. The effect of cuccinate and amytal on reduction of acetoacetate in animal tissues / H.A., Krebs L.V Eggleston., A. Alessandro // Biochem.J.,1961.-Vol.79.Р.537-542. 374. Kursa J., Klein Z., Kucerova J. Hepatopatie u dojnic-aktualni problem velkochovu / Kursa J., Klein Z., Kucerova J. // Veterinarstvi.- 1988.-T.3 8.-№4.-S. 153-155. 375. Kursa J., Kroupova V., Klein Z. Metabolicke poruchy a hepatopatie u dojnic / Kursa J., Kroupova V., Klein Z. Sb. Agron.Fak. v Ceskyh Budejovicich. Zootechn.R. // Vуsoka Skola Zemed. V Praze.-1988.-T.5.-№2.-S.79-l 17. 376. Lodén, M. The in vitro permeability of human skin to benzene, ethylene glycol, formaldehyde,and n-hexane. Acta pharmacol. toxicol., 1986.- 58, 382-389. 377. Lu S.C. Specificity and directionality of thiol effects on sinusoidal glutathione transport in rat liver / S.C. Lu, J. Kuhlenkamp, W.M. Sun, N. Kapiowitz // Моl. Pharmacol.-1994.- Vol. 46, №.3.-P. 578-585. 378. Lunn D. R. Clinico-patological diagnosis of immunodeficiency / D.R.Lunn, J. T. Mc Clure // Equine Vet. Edu. 1993. - P 30-32 379. Marsh G.M. (1982) Proportional mortality patterns among chemical plant workers exposed to formaldehyde. Br. J. ind. Med., 39,313-322. 380. Mars M.H. Airborne transmission of BHV 1 ( bovine herpes 1) , BRSV (bovine respiratory virus), and BVDV (bovine virus diarrhea virus) among cattle is possible under experimental conditions / Mars M.H., Bruschke C.J.M., Dirschot J.T.-van., Oirschot J.T. // Veterinary- Microbiology, 1999, V.66 .- P 197-207. 278 381. Maur B. et al. Curculating immune cells and immune complexes ih peripheral blood of healthy and of bovine leukemia virus - infectend cows and limphosarcomatous calves // Vet. Immunopathol. -1982. -№3. - P. 475-484. 382. Meister A. Glutathione / Meister A., Anderson M.E. //Ann. Rev. Biochem. - 1983. -Vol. 52. - P.711-760. 383. Mohanty S.B. Vaccines against bovine and equine respiratory viral infections Proceeding of the Third Veterinary respiratory symposium / Mohanty S.B. - 1983 P.50-54. 384. Noack H., Kube U., Augustin W. Relations between tocopherol depletion and coenzyme Q during lipid peroxidation in rat liver mitochondria / Noack H., Kube U., Augustin W. // Free Radic. Res. -1994.- Vol. 20, №. 6. - F. 375-386. 385. Orelbold J.W. Mechanisms of action by immunologicadjuvanth / J.W. Orel-bold - J. Amer. Vet. Med. Arroc, 1982. - P. 983-987. 386. Osmond D.G. Differentiation of lymphocytes in moug bone marrow / D.G. Osmond- Cell Immunol., 1974. - Vol. 13. -177 p. 387. Panush R.S. Vitamins and immunocompetence / Panush R.S., Delafuente J.C. // World Rev. Nutr. Diet. - 1985. -№ 45. - Р. 97. 388. Ray S.D. Role of cellular energy status in tocophery hemisuccinate cytoprotection against ethyl methanesulfonate-induced toxicity / Ray S.D., Fariss M.W. //Arch. Biochem. Biophys.-1994. - Vol. 311, №.I.- P. 180-190. 389. Retsky K.L. Ascorbic acid oxidation product(s) protect human low density lipoprotein against atherogenic modification / Retsky K.L., Freeman M.W., Frei B. // J. Biol. Chem.- 1993.- 268.- Р. 1304-1309. 390. Reilly P.M. Pharmacologic approach to tissue injury mediated by free radicals and other reactive oxygen metabolites / Reilly P.M., Schiller H.J., Bulkley G.B. //Amer. Journ. Surg. - 1991.-Vol. 161, №. 4.-P. 488-503. 391. Rocha M.A. Detection of BHV-1 in a naturally infected bovine fetus by a nested PCR assay / Rocha M.A., Barbosa E.F., Guedes R.M.C., Lage A.P., Leite R.C. // Veterinary – Recearch –Communications. -1999, 23: 2, 133-141; 35 ref. 279 392. Ronai E. The inhibitory effect of succinate on radiation – enhanced mitochondrial lipid peroxidation / E. Ronai, L. Tretter, G. Szabados, I.Horvath // Int. J. Radiat. biol.,1987 .-Vol. 51, № 4 .- P.611-6173. 393. Shilotry P.G. Glycolytic, hexose monophosphate shunt and bactericidal activities of leukocytes in ascorbic acid-deficient quinea pigs / Shilotry P.G. // J. Nutr.- 1977.№107- P. 1507. 394. Theron A. Investigation of the protective effects of the antioxidatns ascorbate, cysteine, and dapsone on the phagocyte-mediated oxidative inactivation of human -1protease inhibitor in vitro / Theron A..,Anderson R. // Am. Rev. Respir. Dis - 1985132 - Р. 1049. 395. Toumizu M. Effects of Ammonium chloride acidosis on oxidative metabolism in liver mitochondria ooooof chics / Toumizu M., Yamahira S., Tanaka M., Akuba Y. // Britain Poult Science.-1999.-V.40.- № 4.-P.541-544. 396. Travnicek R. Infectious bovine rhinotracheitis and parainfluenza -3 viruses in the bovine respiratory syndrome / Travnicek R. // Veterinarstvi.- 1999, 49: 4 - 148. 397. Thrasher D.J. // Arch. Environ. Health.- 1987.- V.42, №№6.- P. 347-351. 398. Uotila L., Koivusalo, M. Purification and properties of S-formylglutathione hydrolase from human liver. J biol. Chem., 249, 7664-7672- 1988. 399. Uotila L., Koivusalo M. (1987) Multiple forms of formaldehyde dehydrogenase from human red blood cells. Hum. Hered, 37, 102-106. 400. Waltner K. Kobalt und blut / K. Waltner, K. Waltner / Waltner K. // Klin. Wschr.- 1929. - Bd. 8.-S.313. 401. Wang S.T. Vitamin E protection of cell morphology and protein thiols in rat hepatocytes treated with tert-butyl hydroperoxide / Wang S.T., Kuo J.H., Chou R.G., Lii C.K. // Toxicol. Lett. -1996.-Vol. 89, №. 2.- P. 91-98. 402. Zhou-Jian Wei. Improved detection of bovine herpesvirus 1 in artificially infected bovine semen by protein amplification / Zhou-Jian Wei, Lyaku J., Fredricson R.A., Kibenge F.S.B. // Journal -of- Virological –Methods. 1999,-79: 2, 181-189; 32 ref. 280 ПРИЛОЖЕНИЯ стр. Акты о внедрении – 7 шт……………………………………………………....... 281 Патенты – 9 шт…………………………………………………………………... 304 Программа по обеспечению здоровья продуктивных животных в молочном скотоводстве……………………………………………………………………… 313 Временное наставление по применению металлосукцинатка в ветенарной практике в порядке производственного испытания…………………………… 316 Инструкция по применению янтарного биостимулятора в ветеринарной практике в порядке производственного испытания…………………………… 317 Временное наставление по применению формол- янтарного биостимулятора в ветеринарной практике в порядке производственного испытания……………… 318 Инструкция по применению препаратов на основе янтарной кислоты и левамизола в ветеринарной практике в порядке производственного испытания………………………………………………………………………………… 319 Диплом 6-й Российской агропромышленной выставки «Золотая осень», 8-12 октября 2004 г., Москва, ВВЦ……………………………………………….….. 320 Диплом 9-й Российской агропромышленной выставки «Золотая осень», о награждении золотой медалью «За разработку лекарственных, диагностических и биологически активных препаратов для домашних животных», 12-16 октября , 2007г., Москва, ВВЦ……………………………………………….…. 321 Диплом 16 -й Российской агропромышленной выставки «Золотая осень», о награждении серебряной медалью «За научное обоснование концепции управления эпизоотическими процессами при цирковирусной болезни свиней и ее практическая реализация»», 8-11 октября , 2014 г., Москва ВВЦ……………………………………………………………….………………. 322