j`pdhnopnŠejŠhbmne deiqŠbhe opnhgbndm{u `phk`kj`mnb kuŠ 51-93 h kuŠ 52-93 b"…,

Е. Н. ПАШИН, И. А. ЛАЗАРЕВА
j`pdhnopnŠejŠhbmne deiqŠbhe
opnhgbndm{u `phk`kj`mnb kuŠ 51-93 h kuŠ 52-93
j=-!= -=!=*%%,,
j3!“*%% %“3=!“2"……%% ,,…“*%% 3…,"!“,22=
b"…,
Ранее нами получены данные о противогипоксической активности производных арилалканов ЛХТ 51-93 и
ЛХТ 52-93 на моделях гистотоксической, гемической
гипоксий и гипоксии с гиперкапнией в гермообъеме, а
также о протективном действии исследуемых соединений, выявленном по тесту сохранения биоэлектрической активности сердца в условиях острого апноэ.
Вместе с тем данные многих авторов свидетельствуют о высоком уровне корреляции противогипоксичекой активности лекарственных веществ с их кардиопротективным действием [1, 2], что и явилось основанием
для продолжения исследования указанных соединений
в плане их кардиотропной активности при гипоксических и ишемических повреждениях.
В связи с этим изучено влияние производных арилалканов ЛХТ 51-93 и ЛХТ 52-93 на размеры зоны
некроза при коронароокклюзионном инфаркте миокарда, а также на функциональный резерв сердца при
гипоксии с последующей реоксигенацией и локальной
ишемией.
l2%,*= ,““%"=…,
К1М1 + К2М2
Х = ------------------ 100,
К1(М1 + М2)
где Х – размеры зоны некроза или зоны ишемии в
процентах к массе миокарда в целом;
К1 и К2 – содержание красителей в 1 г интактного и
ишемизированного участков;
М1 и М2 – соответственно массы интактного и ишемизированного участков.
После определения зон повреждения рассчитывали процентное отношение зоны некроза к зоне ишемии
в каждом конкретном опыте.
Моделирование общей гипоксии с последующей
реоксигенацией проводили следующим образом. Наркотизированным животным производили трахеостомию
и переводили их на искусственную вентиляцию легких с
помощью аппарата искусственного дыхания для мелких
лабораторных животных «АИД». После торакотомии по
парастернальной линии для регистрации левожелудочкового давления и его первой производной (±dp/dt) в полость левого желудочка вводили канюлю, соединенную
с датчиком давления P23ID (США) и электроманометром МСК-301 (Польша). Гипоксию моделировали путем
отключения аппарата искусственной вентиляции легких.
Опыты проводили по следующей схеме: исход → 3 мин
общей гипоксии → 20 мин реоксигенации.
Синхронную запись левожелудочкового давления и
±dp/dt осуществляли на самописце Н-338-8П. Указанные параметры регистрировали в исходе, на 30-й сек.,
2-й и 3-й мин гипоксии, а также на 5, 10, 15 и 20-й мин
реоксигенации.
Для накопления повреждения проводили повторную
гипоксию с последующей реоксигенацией. При этом
схема эксперимента выглядела следующим образом:
исход → 3 мин общей гипоксии → 40 мин реоксигенации → 3 мин общей гипоксии → 20 мин реоксигенации.
О функциональном резерве миокарда судили по
максимальному приросту левожелудочкового давления и скоростных показателей сокращения в ответ на
нагрузку сопротивлением (30-секундное пережатие
аорты) [3, 4].
Действие исследуемых веществ ЛХТ 51-93 и ЛХТ
52-93 изучали в дозах, составляющих 10 и 5% от LD50.
ЛХТ 51-93 (3,2 и 1,6 мг/кг) и ЛХТ 52-93 (4,3 и 2,15 мг/кг)
вводили внутрибрюшинно за 30 минут до опыта на изотоническом растворе натрия хлорида в объемах 0,1–0,6
мл. Животным контрольной серии вводили изотонический раствор натрия хлорида в аналогичных объемах.
Статистическая обработка проведена методами вариационной статистики. При этом вычисляли среднюю
УДК 616.281:577.182.61
Эксперименты выполнены на крысах-самцах линии
Вистар массой 250–300 г. Для соблюдения норм гуманного обращения с животными они наркотизировались
этаминалом натрия (40 мг/кг внутрибрюшинно).
Инфаркт миокарда у животных, переведенных
на управляемое дыхание, моделировали перевязкой нисходящей ветви левой коронарной артерии
на уровне нижнего края ушка предсердия. Через 4
ч после коронарной окклюзии животное забивали и
определяли зону некроза левого желудочка сердца
с помощью дифференциального индикаторного метода [5].
Для определения размеров инфаркта миокарда извлеченное после забоя животных сердце перфузировали 0,025%-ным раствором синьки Эванса под давлением 135 см вод. ст. в течение 5–6 мин до темно-синего
окрашивания его интактных отделов. Отчетливо видимый непрокрасившийся ишемизированный участок вырезали и параллельно с интактным отделом миокарда
помещали в два отдельных бюкса, содержащих фосфатный буфер (рН=7,4) и 1 мг/мл трифенилтетразолия
бромида. Соотношение масс участков ткани и буфера
составляло 1:9.
Бюксы помещали в термостат, инкубировали в течение часа при 37° С для образования красного формазана. В дальнейшем после гомогенизации образцов
синьку Эванса и формазан экстрагировали хлороформом и спектрофотометрическим методами, на спектрофотометре СФ-26 определяли их концентрацию с пересчетом на 1 г ткани.
Размеры зоны ишемии и зоны некроза рассчитывали, основываясь на разнице между содержанием кра-
сителей в интактном и ишемизированном участках, по
следующей формуле:
139
Òàáëèöà 1
Влияние производных арилалканов ЛХТ 51-93 и ЛХТ 52-93 на размеры зоны
некроза миокарда через 4 часа после окклюзии коронарной артерии
у крыс (M±m)
Серия опытов
Зона ишемии
Зона некроза
в % к общей
в % к общей массе
массе миокарда
миокарда
Зона некроза
в % к зоне
ишемии
Ограничение
зоны некроза
в%
от контроля
ЛХТ 51-93 5% от LD50
29±3,5
17±3,7
55±4,2
-19,1
ЛХТ 51-93 10% от LD50
28±3,9
13±3,5
49±3,9*
-27,9
ЛХТ 52-93 5% от LD50
31±4,1
18±3,5
59±3,7
-13,2
ЛХТ 52-93 10% от LD50
28±4,1
14±2,8
50±3,8*
-26,5
Контроль
34±2,6
22±2,0
68±4,3
-
Примечание: индексом * отмечены значения при Р<0,05 в сравнении с контролем.
Òàáëèöà 2
Влияние производных арилалканов (ЛХТ 51-93 и ЛХТ 52-93) на сократимость
миокарда крыс при пережатии аорты после моделирования гипоксии
с последующей реоксигенацией (в % от исходного уровня, М±m)
Серии опытов
Развиваемое давление
+dp/dtmax
-dp/dtmax
ЛХТ 51-93 5% от LD50
+88,2±4,4*
+53,4±4,6*
+22,7±4,7*
ЛХТ 51-93 10% от LD50
+97,0±4,3*
+57,6±5,1*
+29,4±5,7*
ЛХТ 52-93 5% от LD50
+59,8±3,9
+24,9±5,2
+8,7±4,2
ЛХТ 52-93 10% от LD50
+73,1±4,5*
+38,5±4,8
+11,8±3,8
Контроль
+53,2±4,1
+23,8±4,5
+4,2±3,1
Примечание: +dp/dtmax и -dp/dtmax – максимальные скорости сокращения и расслабления левого желудочка.
Индексом * отмечены значения при Р<0,05 в сравнении с контролем.
арифметическую сдвигов исследуемых параметров
(±m) и вероятность возможной ошибки (Р) по таблицам
Стьюдента. Различия оценивали как достоверные, начиная с Р<0,05.
pƒ3,2=2/ ,““%"=…,
140
Результаты исследования противонекротической
активности производных арилалканов представлены
в таблице 1. Зона ишемии, формирующаяся при окклюзии нисходящей ветви левой коронарной артерии
(в верхней трети), в различных сериях экспериментов
находилась в пределах 26–34% и достоверно не отличалась от контроля.
В контрольной серии экспериментов зона некроза
составила 22±2,0% от общей массы некроза и 68±4,3%
от зоны ишемии.
ЛХТ 51-93 в дозе 10% от LD50 оказывал противонекротическое действие, характеризующееся достоверным уменьшением зоны некроза от зоны ишемии.
При этом данный показатель составил 49±3,7%, что
достоверно меньше, чем в контроле. Ограничение
зоны некроза составило 27,9% от контрольной серии
эксперимента. Снижение дозы вещества до 5% от LD50
приводило к уменьшению противонекротической активности при локальной ишемии миокарда (табл. 1), что
характеризовалось отсутствием достоверно значимых
отличий величины зоны некроза от контроля. При этом
ограничение зоны некроза составило 19,1%.
При профилактическом введении ЛХТ 52-93 в дозе
10% от LD50, также как и на фоне ЛХТ 51-93, наблюдалось противонекротическое действие, выразившееся
в снижении процента зоны некроза от зоны ишемии в
сравнении с контролем (50±3,8%), что соответствовало
ограничению зоны некроза на 26,5%. Снижение дозы
вещества приводило к снижению его противонекротической активности: возрастанию зоны некроза от зоны
ишемии и падению процента ограничения зоны в сравнении с контролем (табл. 1).
При моделировании однократной 3-минутной гипоксии с последующей 20-минутной реоксигенацией в конт-
Òàáëèöà 3
Влияние производных арилалканов (ЛХТ 51-93 и ЛХТ 52-93) на сократимость
миокарда крыс при пережатии аорты после моделирования повторной
гипоксии с последующей реоксигенацией (в % от исходного уровня, М±m)
Серии опытов
РД
+dp/dtmax
-dp/dtmax
ЛХТ 51-93 5% от LD50
+52,4±3,9*
+22,8±3,7
+5,4±3,1
ЛХТ 51-93 10% от LD50
+77,1±4,5*
+38,3±4,2*
+12,4±5,3
ЛХТ 52-93 5% от LD50
+55,7±3,5*
+22,9±4,6
+6,1±4,1
ЛХТ 52-93 10% от LD50
+65,5±4,7*
+29,7±4,1*
+9,1±4,0
Контроль
+33,2±4,1
+12,8±4,5
+2,3±2,9
Примечание: РД – давление, развиваемое левым желудочком; +dp/dtmax и -dp/dtmax – максимальные скорости сокращения и расслабления левого желудочка. Индексом * отмечены значения при Р<0,05 в сравнении с контролем.
рольной серии экспериментов нагрузка сопротивлением
приводила к максимальному повышению давления, развиваемого левым желудочком, (РД) и +dp/dt на 53,1±4,1
и 23,8±4,5% соответственно. При этом величина максимальной скорости расслабления левого желудочка
практически не отличалась от исхода (+4,2±3,1%), что
свидетельствует о более выраженном угнетении скоростных показателей сократимости на фоне гипоксических
повреждений и реоксигенации (табл. 2).
ЛХТ 51-93 в дозах, составляющих 10 и 5% от LD50,
способствовал повышению сократительной активности
сердца после моделирования гипоксии с последующей
реоксигенацией. Так, на фоне препарата в указанных
дозах наблюдалось достоверное увеличение прироста
РД и максимальной скорости сокращения (табл. 2) в ответ на пережатие аорты. При этом увеличение дозы
ЛХТ 51-93 приводило к умеренному усилению защитного действия на сократимость миокарда. Об этом свидетельствуют несколько более высокие значения прироста РД, +dp/dtmax и -dp/dtmax.
ЛХТ 52-93 оказывал повышение миокардиального
резерва сердца после гипоксии с последующей реоксигенацией в дозе, составляющей 10% от LD50 (табл. 2).
При этом отмечался достоверно более высокий прирост
РД по сравнению с контролем, без достоверных изменений скоростных показателей. При этом снижение дозы
вещества до 5% LD50 приводило к снижению указанного
влияния на функциональные резервы миокарда.
Повторная гипоксия с последующей реоксигенацией
обусловливала дальнейшее снижение миокардиального резерва сердца, что характеризовалось менее выраженным приростом РД, +dp/dtmax и -dp/dtmax в сравнении с
однократной гипоксией-реоксигенацией (табл. 3). В ответ
на 30-секундное пережатие аорты прирост РД составил
33,2±4,1%, а +dp/dtmax и -dp/dtmax еще меньше (табл. 3).
При накоплении повреждения миокарда (повторная гипоксия с последующей реоксигенацией в течение 20 мин) ЛХТ 51-93 и ЛХТ 52-93 во всех изученных
дозах (5 и 10% от LD50) приводили к более выраженному сохранению функционального резерва миокарда
в сравнении с контрольной серией экспериментов, что
выражалось в достоверно более высоких значениях
прироста РД и максимальной скорости сокращения
левого желудочка под влиянием веществ в дозе 10%
от LD50 (табл. 3).
При моделировании локальной ишемии миокарда в
контрольной серии экспериментов у нелеченых животных нагрузка сопротивлением приводила к максимальному повышению ЛЖД и +dp/dt на +63,2±5,1 и +27,6±4,4%
соответственно. При этом величина максимальной скорости расслабления левого желудочка практически не
отличалась от исхода (+4,2±3,4), что свидетельствует о
более выраженном угнетении скоростных показателей
сократимости на фоне ишемии миокарда.
ЛХТ 51-93 в дозах, составляющих 10 и 5% от LD50,
способствовал повышению сократительной активности сердца после 4-часовой окклюзии артерии. Так, на
фоне вещества в указанных дозах наблюдалось достоверное увеличение прироста ЛЖД и максимальной
скорости сокращения в ответ на пережатие аорты. При
этом увеличение дозы ЛХТ 51-93 приводило к умеренному усилению защитного действия на сократимость
миокарда. Об этом свидетельствуют несколько более
высокие значения прироста ЛЖД, +dp/dtmax и -dp/dtmax.
ЛХТ 52-93 оказывал повышение миокардиального
резерва сердца после 4-часовой коронароокклюзии в
дозе, составляющей 10% от LD50. При этом отмечался
достоверно более высокий прирост РД по сравнению
с контролем без достоверных изменений скоростных
показателей. При этом снижение дозы вещества до 5%
LD50 приводило к уменьшению указанного влияния на
функциональные резервы миокарда.
nK“3›…,
Таким образом, ЛХТ 51-93 и ЛХТ 52-93 в дозе 10%
от LD50 на модели коронароокклюзионного инфаркта
миокарда оказывали кардиопротективное действие,
характеризующееся ограничением зоны некроза. Причем препараты снижали не только зону инфарцирования по отношению к массе сердца, но и зону некроза по
отношению к зоне риска. Снижение дозы веществ приводило к падению противонекротической активности.
При однократной острой гипоксии с последующей
реоксигенацией производные арилалканов ЛХТ 51-93
и ЛХТ 52-93 приводили к сохранению миокардиального резерва, причем ЛХТ 51-93 превосходил ЛХТ 52-93
141
по указанной активности. При накоплении повреждения
(повторная гипоксия с последующей реоксигенацией)
ЛХТ 51-93 и ЛХТ 52-93 приводили к сохранению функционального резерва сердца практически в равной степени.
При моделировании коронароокклюзионного инфаркта миокарда производные арилалканов ЛХТ 51-93
и ЛХТ 52-93 приводили к сохранению миокардиального
резерва, причем ЛХТ 51-93 превосходил ЛХТ 52-93 по
указанной активности.
Наличие у производных арилалканов ЛХТ 51-93 и
ЛХТ 52-93 защитного действия при моделировании коронароокклюзионного инфаркта миокарда и гипоксии
с последующей реоксигенацией дает, по нашему мнению, основания для рассмотрения данных веществ в
качестве перспективных кардиопротективных средств.
Поступила 21.12.2006
ЛИТЕРАТУРА
1. Биленко М. Б. Ишемические и реперфузионные повреждения
органов. М.: Медицина, 1989. 368 с.
2. Оковитый С. В., Смирнов А. В. Антигипоксанты // Экспер. и
клин. фармакол. № 3. 2001. С. 76–80.
3. Ольбинская Л. И., Литвицкий П. Ф. Коронарная и
миокардиальная недостаточность. М.: Медицина, 1986. 272 с.
4. Литвицкий П. Ф., Сандриков В. А., Демуров Е. А. Адаптивные
и патогенные эффекты реперфузии и реоксигенации миокарда.
М.: Медицина, 1994. 320 с.
5. Сернов Л. Н., Гацура В. В. Элементы экспериментальной
фармакологии. М., 2000. С. 91–98.
E. N. PASHIN, I. A. LAZAREVA
CARDIOPROTECTIVE
ACTION
OF
DERIVATIVES ARYLALKANES LHT 51-93 AND
LHT 52-93
Experimental studies LHT 51-93 and LHT 52-93,
the derivatives of arylalkanes, in rats were performed
on the model of coronary-occluded myocardial
infarction. Findings of studies would allow to suppose
the cardioprotective action of LHT 51-93 and LHT
52-93. LHT 51-93 and LHT 52-93, the derivatives of
arylalkanes, have promoted the keeping of myocardial
functional reserves in the experimental occlusion of
coronary arteries and hypoxia-reperfusion state.
Key words: experimental myocardial infarction,
hypoxia,
functional
reserve,
derivatives
of
arylalkanes.
М. Д. ПЕРОВА, А. В. ФОМИЧЕВА, В. Б. КАРПЮК
jkhmhjn-chqŠnknch)eqjhe pegrk|Š`Š{
jkeŠn)mni Šep`ohh oph Š“feknl o`pndnmŠhŠe
УДК 616.314.14.-008.1-089.844-07
j!=“…%=!“*,L …2! C=!%%…2%%,, , …2=#…%L ,C=…2=,,,
~›…%-p%““,L“*,L …2! *%“2%%,, , C=“2,“*%L .,!3!,,
142
При хроническом генерализованном развившемся
пародонтите, когда потеря опорных тканей зуба составляет 50% и выше, наблюдается дефицит собственного
пластического материала с ограничением способности к
пролиферации и дифференцировке в клеточные линии, с
помощью которых в тканях пародонта может быть достигнут морфофункциональный исход регенерации [1, 2, 5].
Использование методов лечения, основанных на
стимуляции потенций оставшихся структур опорного
аппарата зуба со значительно редуцированным регионарным кровотоком, например с помощью локальной
доставки в зону дефекта рекомбинантных факторов
роста, имеет мало убедительных аргументов. Так,
было показано, что имплантация геля «Эмдогейн»
(США), действие которого связано с присутствием в его
составе трансформирующего фактора роста-β и костного морфогенетического белка-6, способна увеличивать прирост зубодесневого прикрепления только в 3- и
2-стеночных пародонтальных дефектах и в межкорневых зонах при легкой и средней степени повреждения
тканей пародонта [3].
Наше внимание привлекли исследования в области
клеточной биологии, направленные на изучение стволовых и прогениторных клеток, в которых заложены
неограниченные терапевтические возможности. Анализ научной литературы показал, что находящиеся в
тканях – производных мезенхимы мультипотентные
стромальные клетки взрослого организма могут трансформироваться в остеобласты, хондроциты, эндотелиальные клетки, адипоциты и другие линии in vitro и in
vivo [4, 10]. В этой связи представляется перспективной трансплантация дополнительного количества малодифференцированных клеток в зону разрушенных
тканей опорного аппарата зуба, который был сформирован в эмбриогенезе из эктомезенхимы.
Цель данного исследования – оценить ближайшие и отдаленные клинические результаты использования мультипотентных стромальных клеток при
лечении развившегося пародонтита и гистологически
верифицировать полученные данные.
l=2!,=/ , (2%/
Группа исследования (I гр.) представлена 23 пациентами (12 мужчин и 11 женщин в возрасте от 28 до 70
лет) с хроническим развившимся пародонтитом средней и тяжелой степени, которые добровольно согласились на использование в их лечении клеточных технологий на безвозмездной основе.
В целом по группе диагностировано 419 внутрикостных пародонтальных дефектов, 449 супраальвеолярных дефектов, 34 фуркационных дефекта II класса и 53
фуркационных дефекта III класса.
Пациентам I группы после хирургической санации
пародонтальных дефектов, деминерализации поверх-