влияние in vitro химиопрепаратов на опухолевые клетки

Ж Е Н С К О Й
Р Е П Р О Д У К Т И В Н О Й
С И С Т Е М Ы
4 2008
В Л И Я Н И Е I N V I T R O Х И М И О П Р Е П А РАТ О В
НА ОПУХОЛЕВЫЕ КЛЕТКИ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ
В УСЛОВИЯХ 24-ЧАСОВОГО ИНКУБИРОВАНИЯ
С.Н. Наврузов, Л.Т. Алимходжаева
Республиканский онкологический научный центр МЗ Республики Узбекистан, Ташкент
IN VITRO EFFECTS OF CHEMICAL AGENTS ON BREAST TUMOR CELLS UNDER 24-HOUR INCUBATION
S.N. Navruzov, L.T. Alimkhodzhayeva
Republican Cancer Research Center, Ministry of Health of the Republic of Uzbekistan, Tashkent, Uzbekistan
В настоящее время постоянно расширяется
тов более чем у 300 онкологических больных с заспектр медикаментозных средств (интерферон
пущенными опухолями различной локализации.
и другие цитокины) для лечения онкологических
Непосредственные и отдаленные наблюдения за
больных, но не существует единого мнения о терабольными доказали абсолютную безопасность мепевтических преимуществах этих средств и практода, поскольку фактор стимуляции выделяется из
тически отсутствуют стандартизированные схемы
аутологичной лейкомассы и его повторное введеих использования в сочетании с традиционной тение не вызывает антигенной реакции, что, как прарапией [1—3]. В то же время достаточно убедивило, всегда позволяет применять рекомбинанттельно теоретически обосновано применение для
ные цитокины. В то же время вопрос об использолечения злокачественных новообразований ЛАКвании этой методики в схеме противоопухолевой
терапии (терапия лимфоцин-активированными
терапии остается открытым. Поэтому основной закиллерами), позволяющей достоверно повысить
дачей исследования стало изучение возможности
противоопухолевую активность лимфоцитов, осуприменения метода экстракорпорального лечения
ществляющих киллерную функцию. Тем не менее
крови с вариантом модифицированной ЛАК-тераметодика получения ЛАК-клеток сложна и гропии в схеме неоадъювантной терапии местно-расмоздка, поскольку заключается в необходимости
пространенного рака молочной железы (РМЖ).
длительного (2—6 сут) культивирования мононукИзучение морфологической структуры опулеидов с высокими дозами интерлейкина-2
холи 28 больных РМЖ показало, что избранные
(ИЛ-2), при этом важно, чтобы интерферон не
воздействия существенно различаются по характевлиял на индукцию ЛАК. Получить подобные усру и выраженности изменений (см. таблицу).
ловия можно только in vitro, так как длительное
В 1-й серии эксперимента после обработки in
системное введение ИЛ-2 вызывает большое чисvitro опухоли циклофероном отмечены повышение
ло побочных эффектов у пациентов и часто не
числа митозов — МИ — 2,5±0,4% и незначительприводит к желаемому результату [4, 5].
ная индукция апоптоза — АИ — 2,1±0,38% (рис. 1).
Другим, более перспективВлияние in vitro химиопрепаратов
ным методом, на наш взгляд, явна опухолевые клетки молочной железы
ляется восстановление функции
в условиях 24-часового инкубирования
лимфоцитов с использованием
Группа/воздействие (n=1400 клеток)
МИ, %
АИ, %
ультразвукового и гравитационного воздействий. Методика вы1. Опухоль + циклоферон
2,5±0,41*
2,1±0,38*
деления фактора стимуляции
2. Опухоль + доксорубицин
0,6±0,20*
1,5±0,32*
лимфоцитов,
разработанная
в нашем центре, показала высо3. Опухоль + доксорубицин + циклоферон
1,4±0,31*
3,6±0,49*
кую эффективность восстанов4. Опухоль + доксорубицин + аутосыворотка УЗО
0,2±0,11
2,8±0,44*
ления утраченной или ослабленной функции иммунных клеток
5. Опухоль + аутосыворотка УЗО
0
8,1±0,72
как in vitro, так и в клинических
Примечание. *p<0,05, сравнение с V серией. УЗО — ультразвуковая обработка;
условиях лечения лекарственМИ — митотический, АИ — апоптический индексы.
ных и лучевых иммунодефици-
Новые технологии
The use of cytostatics is frequently limited due to their high toxicity and inadequate selectivity. This makes one search for adjuvant treatments to limit tumor growth and extent, to eliminate traditional chemotherapy sequels, and to ensure stable and prolonged remission.
This investigation has revealed the specific features of using natural and recombinant cytokines in combination with chemical agents
in therapy for malignancies. The findings open up new vistas for the treatment of malignancies with natural cytokines.
29
Новые технологии
Ж Е Н С К О Й
30
Р Е П Р О Д У К Т И В Н О Й
С И С Т Е М Ы
4 2008
Рис. 1. Участок опухоли молочной железы после
24-часового инкубирования в питательной среде
RPMI-1640 с добавлением циклоферона. Видны нормальные
и патологические метафазы (в центре и справа),
внизу апоптоз в опухолевых клетках. Окраска
гематоксилин-эозином. Увеличение около 10, общее — 40
Рис. 2. Участок опухоли молочной железы после
24-часового инкубирования в питательной среде
RPMI-1640 с добавлением доксорубицина.
Видны некротические и апоптотические погибшие
клетки (в центре, вверху и справа). Окраска
гематоксилин-эозином. Увеличение около 10, общее — 40
Рис. 3. Участок опухоли молочной железы после
24-часового инкубирования в питательной среде
RPMI-1640 с доксорубицином и циклофероном.
Видны единичные митозы (справа), гиперхромия и пикноз
ядер, отек и разрушение стромы опухоли. Окраска
гематоксилин-эозином. Увеличение около 10, общее — 40
Рис. 4. Участок опухоли молочной железы после 24-часового
инкубирования в питательной среде RPMI-1640 с доксорубицином и аутосывороткой после УЗО. Дезорганизация
и отек стромы опухоли, некротическая и апоптотическая
гибель клеток (апоптозные тела справа вверху). Окраска
гематоксилин-эозином. Увеличение около 10, общее — 40
Во 2-й серии эксперимента под действием
доксорубицина количество делящихся клеток значительно снизилось (МИ 0,6%), а выраженность
апоптоза нарастала (АИ 1,5±0,32%). Одновременно определялось токсическое повреждение клеток
при относительном сохранении стромы опухоли
(рис. 2).
В 3-й серии эксперимента совместное действие
на опухоль доксорубицина и циклоферона сопровождалось повышением числа митозов (1,4±0,3%)
и увеличением выраженности апоптоза (3,6±0,5%).
При этом выявлялись множественные токсические
повреждения клеток, гиперхромия ядер, пикноз
и признаки разрушения стромы (рис. 3).
В 4-й серии при воздействии на опухоль доксорубицина и сыворотки из аутокрови после УЗО
наблюдалось резкое снижение деления клеток
(МИ 0,2%) относительно всех предшествующих
вариантов. При этом отмечалось возрастание АИ
(2,8%) и одновременно обнаруживались множест-
венные некротические участки клеток и дезорганизация стромы опухоли (рис. 4).
Наиболее интересны результаты, полученные
в 5-й серии эксперимента, где на опухоль воздействовали только сывороткой из аутокрови, обработанной по специальной методике. При этом процесс
деления клеток (МИ 0) практически прекращался,
а апоптоз возрастал до 114/1400 (АИ 8,1±0,7%), что
достоверно превышает наиболее оптимальный результат, полученный в 4-й серии эксперимента
(p<0,05). Все это происходило на фоне появления
множественных деструктивных изменений и почти
тотальной гибели клеток по типу некроза и апоптоза при сохранении стромы опухоли (рис. 5).
Таким образом, в результате полученных данных выявлен целый ряд особенностей использования естественных и рекомбинантных цитокинов
в сочетании с химиопрепаратами в лечении злокачественных опухолей. Обнаружение отчетливого
снижения противоопухолевого эффекта при совме-
Ж Е Н С К О Й
Р Е П Р О Д У К Т И В Н О Й
стном использовании циклоферона и доксорубицина, на наш взгляд, требует более осторожного использования этого иммуномодулятора одновременно с полихимиотерапией в клинических условиях. В то же время достоверное и своеобразное
противоопухолевое совместное действие доксорубицина и цитокинов, выделенных из аутокрови,
указывает на реальную возможность и целесообразность применения этой методики в лечении РМЖ.
Результаты, полученные в 5-й серии эксперимента, где сыворотка из аутокрови вызывает практически полную остановку деления клеток и сопровождается индукцией апоптоза (АИ 8,1%,
p<0,05) и некроза в опухоли (по-видимому, за счет
высвобождения из лимфоцитов фактора некроза
опухоли), открывают совершенно новые перспективы в лечении злокачественных опухолей с использованием естественных цитокинов.
С И С Т Е М Ы
4 2008
Рис. 5. Участок опухоли молочной железы после
24-часового инкубирования в питательной среде
RPMI-1640 с аутосывороткой после УЗО.
В центре некротическая гибель клеток, справа
и слева апоптотическая гибель клеток. Окраска
гематоксилин-эозином. Увеличение около 10, общее — 40
3. Воронцова А.Л., Гаврина Г.Б., Кудрявец Ю.И., Захарычев В.Д. Сывороточный тест для определения риска появления метастазов у онкологических больных. Экспер онкол 1991;(13):25—7.
4. Воронцова А.Л., Кудрявец Ю.И., Фадеев В.А. Влияние интерферона на токсический эффект и противоопухолевую
активность винбластина при комбини-
рованной терапии метастазирующей
карциномы Льюис. Экспер онкол
1984;(6):54—7.
5. Воронцова А.Л., Кудрявец Ю.И., Фадеев В.А., Балицкий К.П. Антиметастатическое действие интерферона при хирургическом удалении экспериментальных опухолей. Экспер онкол
1983;(5):45—9.
А Н А Л И З Р Е З УЛ ЬТАТ О В Н Е О А Д Ъ Ю В А Н Т Н О Г О Л Е Ч Е Н И Я
БОЛЬНЫХ С УЧЕТОМ ИММУНОФЕНОТИПИЧЕСКИХ
О С О Б Е Н Н О С Т Е Й РА К А М О Л О Ч Н О Й Ж Е Л Е З Ы
А.А. Субботина, В.П. Летягин, Н.Н. Тупицын, И.В. Высоцкая, В.Д. Ермилова
Новые технологии
Л И Т Е Р А Т У Р А
1. Воронцова А.Л. Исследование возможной роли интерферона в сопротивляемости клетки процессу злокачественной трансформации. В кн.: Канцерогенез, методы диагностики и лечения опухолей. Киев, 1971. с. 37—8.
2. Воронцова А.Л. Роль интерферона
в противоопухолевой резистентности.
Экспер онкол 1989;6(11):49—54.
НИИ клинической онкологии ГУ РОНЦ им. Н.Н. Блохина РАМН, Москва;
кафедра онкологии ММА им. И.М. Сеченова
ANALYSIS OF THE RESULTS OF NEODJUVANT TREATMENT IN PATIENTS WITH CONSIDERATION
FOR THE IMMUNOPHENOTYPICAL FEATURES OF BREAST CANCER
A.A. Subbotina, V.P. Letyagin, N.N. Tupitsyn, I.V. Vysotskaya, V.D. Yermilova
Research Institute of Clinical Oncology, N.N. Blokhin Russian Cancer Research Center, Russian Academy
of Medical Sciences, Moscow; Department of Oncology, I.M. Sechenov Moscow Medical Academy
The efficiency of neoadjuvant chemotherapy is directly related to the expression of CD95 (FAS/APO-1) apoptosis receptor on cancer
cells, which is confirmed with the pathomorphism and changes of CD95-positive cells during neoadjuvant chemotherapy (the most
effective CAF regimen is cyclophosphan, doxorubicin, and 5- fluorouracil).
Рак молочной железы (РМЖ) занимает первое место в структуре заболеваемости и смертности от злокачественных заболеваний среди женщин. В странах СНГ в 2005 г. его доля составила
17—20%, в России — 30—35% [1]. Ежегодно в мире выявляют около 1 млн новых случаев РМЖ,
а к 2010 г. ученые прогнозируют рост заболеваемости до 1,45 млн [2]. Именно поэтому лечение
РМЖ — одна из наиболее актуальных проблем
в современной клинической онкологии.
В исследованиях РМЖ в настоящее время
широкое распространение получили молекулярно-биологические характеристики клеток первичной опухоли: экспрессия различных онкогенов,
факторов роста и их рецепторов, молекул, регулирующих апоптоз, рецепторов эстрогенов и прогестерона. Многие из этих показателей являются
важными при выборе тактики ведения больных,
так как тесно связаны с результатами лечения
и прогнозом заболевания. Уровень дифференци-
31