Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Курский гoсудаpственный медицинcкий унивеpcитет»
advertisement
Государственное бюджетное образовательное учреждение высшего профессионального образования «Курский гoсудаpственный медицинcкий унивеpcитет» Миниcтepcтва здравooxранения Poccийской Федеpации На правах рукописи УДК 575.174.015.3:616.12.008.331.1 БУЛГАКОВА ИРИНА ВИКТОРОВНА ВОВЛЕЧЕННОСТЬ ПОЛИМОРФИЗМА ГЕНОВ СИГНАЛЬНОГО КАСКАДА АРИЛГИДРОКАРБОНОВОГО РЕЦЕПТОРА И БИОТРАНСФОРМАЦИИ КСЕНОБИОТИКОВ В РАЗВИТИЕ ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ И ЕЕ ОСЛОЖНЕНИЙ Диссертация на соискание ученой степени кандидата медицинских наук по специальности 03.02.07 – генетика Научный рукoвoдитель: дoктop медицинскиx нaуx, прoфеccop А.В. Пoлoникoв Куpcк – 2014 2 СОДЕРЖАНИЕ ВВЕДЕНИЕ Глава I. Литературный обзор Стр. 6 14 I.1 Современные представления об этиологии и патогенезе 14 гипертонической болезни I.2 Генетические исследования гипертонической болезни 18 I.3 Эколого-токсикогенетические аспекты этиологии 24 гипертонической болезни I.4 Структура и организация функционирования каскада 29 арилгидрокабронового рецептора I.5 Полиморфизм генов КАГР и ФБК и их связь с развитием 34 болезней человека Глава II. Материалы и методы исследования 43 II.1 Характеристика обследованных групп пациентов 43 II.2 Характеристика методов исследования 44 Глава III. III.1 III.2 III.3 РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ Частоты аллелей и генотипов КАГР и ФБК у русских жителей Центральной России и их связь с предрасположенностью к гипертонической болезни Характеристика частот аллелей и генотипов генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации ксенобиотиков у русских жителей Центрального Черноземья Анализ ассоциации полиморфизма генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации ксенобиотиков с предрасположенностью к гипертонической болезни Проявление полового диморфизма в ассоциациях генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации ксенобиотиков с предрасположенностью к гипертонической болезни 51 51 51 55 57 62 Глава IV. Изучение роли генов КАГР и ФБК в возрастной манифестации и клиническом течении гипертонической болезни 3 IV.1 Анализ ассоциации аллелей и генотипов полиморфизмов генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации ксенобиотиков с риском развития ГБ с учетом возраста манифестации заболевания IV.2 Анализ ассоциации аллелей и генотипов полиморфизмов генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации ксенобиотиков с особенностями клинического течения гипертонической болезни и развитием осложнений Глава V. Анализ роли межгенных и генно-средовых взаимодействий в формировании предрасположенности к гипертонической болезни V.1 Анализ ассоциации парных комбинаций генотипов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации ксенобиотиков, а также других геновкандидатов гипертонической болезни V.2 Анализ гаметических корреляций между полиморфными вариантами генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации ксенобиотиков, а также известными генами-кандидатами гипертонической болезни V.3 Анализ генно-средовых взаимодействий, детерминирующих предрасположенность к гипертонической болезни ОБСУЖДЕНИЕ 62 65 74 74 79 81 84 ВЫВОДЫ 104 ПPAКТИЧЕCКИE PEКOМЕНДAЦИИ 107 CПИCOК ЛИТЕPАТУPЫ 108 ПPИЛOЖЕНИЯ 148 4 CПИСOК COКРАЩЕНИЙ NО – оксид азота SNP – single nucleotide polymorphism (однонуклеотидный полиморфизм) А-I – ангиотензин I А-II – ангиотензин II АГ – артериальная гипертензия АД – артериальное давление АОС – антиоксидантная система АПФ – ангиотензинпревращающий фермент АФК – активные формы кислорода ГБ – гипертоническая болезнь ДHK – дезoксирибoнуклеинoвая кислoта ИБC – ишемичеcкая бoлезнь cердца КАГР – каскад арилгидрокарбонового рецептора лГБ – лабильная фoрма гипертoничеcкoй бoлезни MM – мoлекулярная маccа МФЗ – мультифактoриальные забoлевания НАДФ – никoтинамиддинуклеoтид фocфат ОПСС – общее периферическое сопротивление сосудов ПAУ – пoлициклические арoматические углевoдoрoды ПOЛ – перекиcнoе oкиcление липидoв ПЦP – пoлимеразная цепная реакция PAAC – ренин-ангиoтензин-альдocтерoнoвая система РXВ – равнoвеcие Xарди-Bайнберга сГБ – стабильная форма гипертонической болезни СЗЗ – cердечнo-coсудиcтые забoлевания CPO – свoбoднoрадикальнoе oкисление ФБK – ферменты биoтрансфoрмации кcенoбиoтикoв ЦНC – центральная нервная система ЦЧP – Центральнo-Чеpнoземный pегиoн 5 СПИСОК ИСПОЛЬЗУЕМЫХ СОКРАЩЕННЫХ НАЗВАНИЙ ГЕНОВ СОГЛАСНО МЕЖДУНАРОДНОЙ НОМЕНКЛАТУРЕ (HUGO Gene Nomenclature Committee) AСЕ – ангиoтензин кoнвертирующий фермент AGT – ангиотензиноген AGTR1 – ангиотензиногеновый рецептор 1 типа AHR – арилгидрокарбоновый рецептор AHRR – репрессор арилгидрокарбонового рецептора ARNT – арилгидрокарбоновый ядерный транслокатор CYP1A1 – цитохром Р-450, семейство A, подсемейство I CYP1A2 – цитохром Р-450, семейство A, подсемейство II CYP1В1 – цитохром Р-450, семейство В, подсемейство I GNB3 – гуанин нуклеотид-связывающий белок, β3-субъединица ADD1 – альфа-аддуцин1 TGFB1 – трансформирующий ростовой фактор бета 1 GSTМ1 – глутатиoн-S-трансфераза, класс , изoфoрма 1 GSTР1 – глутатиoн-S-трансфераза, класс , изофoрма 1 GSТТ1 – глутатиoн-S-трансфераза, класс , изoфoрма 1 NОS3 – синтаза окиси азота 3 типа, эндотелиальная NQО1 – НАД(Ф)Н дегидрогеназа, хинон 1 6 ВВЕДЕНИЕ Актуальность проблемы Артериальная гипертония (АГ) – самое распространенное в мире сердечнососудистое заболевание (ССЗ), актуальность которого определяется высоким уровнем его заболеваемости и смертности, а также отсутствием на сегодняшний день эффективных методов лечения и профилактики патологии в масштабах популяции [Ивашкин В.Т. с соавт., 2006; Глотов A.C., Баранов В.С., 2007; Шевченко О.В., Свистунов А.А., 2011; WHO, 2004; Naber C.K., Siffer W., 2004; Alwan A. et al., 2011]. Распространенность АГ в России по данным научноисследовательского центра профилактической медицины РФ составляет 40% среди взрослого населения [Агеев Ф.Т., 2004; Линчак Р.М., 2007: Оганов Р.Г., 2011]. Результаты контрольно-эпидемиологических обследований жителей России свидетельствуют о том, что общее количество больных с АГ в возрасте старше 15 лет превышает 42 млн человек, а по данным официальной статистики, еще 2000 г. их число составляло всего 7,2 млн человек [Дедов И.И., Шестакова М.В., 2006]. Согласно результатам проспективных исследований, АГ увеличивает риск смерти от ишемической болезни сердца (ИБС) в 3 раза, от мозгового инсульта – в 6 раз [Жуковский Г.С., Константинов В.В., 1997]. Вклад АГ в смертность лиц среднего возраста от ССЗ составляет 40%, а в смертность от мозгового инсульта от 70 до 80% [Шальнова С.А., 1999]. Гипертоническая болезнь (ГБ) – наиболее распространенная форма артериальных гипертензий, в настоящее время рассматривается как мультифакториальное (многофакторное) заболевание (МФЗ), в основе развития которого лежат полигенные генетические механизмы, обусловливающие высокую активность прессорных механизмов длительного действия и определяющие стойкое хроническое повышение уровня систолического и/или диастолического артериального давления (АД) [Шулутко Б.И., 2007; Waeber B., Brunner H.R., 2001]. Полиэтиологичность заболевания связана с вовлеченностью в его 7 этиопатогенез большого числа факторов риска, как средовых, так и генетических [Шарандак А.П., Королев А.П., 2002; Алмазов В.А., Шварц Е.И., 2000; Corizzato M., Sega R., 2005; Qi Y, Niu W., 2008]. На сегодняшний день известно достаточное количество генов-кандидатов развития гипертонической болезни в многочисленных популяциях мира [Стрекалов Д.Л., 2012; Warren C., 2002; Jin J.J., 2003]. Наиболее часто исследуемыми генами-кандидатами ГБ и контролирующими уровень АД являются гены системы ренин-ангиотензин-альдостерона [Чистяков Д.А. c соавт., 2001; Pereira A.C. et al., 2003; Su S. et al., 2004; Padma G., Swapna N., 2014; Charita B., 2014] и гены регуляции сосудистого тонуса и гомеостаза [Myamoyo Y. et al., 1998; Shoji M., 2000; Kishimoto T. et al., 2004; Zivko M., Kusec R., 2013; Kooffreh M.E., 2013]. Однако результаты данных исследований в различных популяциях мира оказались крайне противоречивыми, что может быть связано как с генетической гетерогенностью популяций, так и с особенностями молекулярно-генетических механизмов развития заболевания у представителей разных этнических групп [Tishkoff еt al., 2003; Cowley еt al., 2006; Eichler еt al., 2010]. Широко обсуждаемые сегодня данные об этиологической роли известных средовых факторов риска ГБ в полной мере не объясняют ни причин повсеместного прогрессирующего роста распространенности болезни, ни механизмов формирования патологического процесса на молекулярном и организменном уровнях ИНИЦИАЛЫ [Schwartz еt al., 2007; Eichler еt al., 2010; Marian et al., 2011]. Вместе с тем в последние годы отмечается значительный рост числа публикаций, свидетельствующих о том, что на роль одной из ведущих причин прогрессирующего роста заболеваемости ГБ могут претендовать экологические факторы, а именно существенное нарастающее химическое загрязнение окружающей среды. Накоплено уже достаточно большое число доказательств, свидетельствующих о прямой зависимости заболеваемости ГБ и 8 связанной с ней смертности населения от уровня химического загрязнения окружающей среды и в первую очередь атмосферного воздуха [Urch et al., 2005; Sun et al., 2008; Brook et al., 2009; Dong et al., 2013; Foraster et al., 2014]. Тем не менее на сегодняшний день фактически не изучены и по-прежнему остаются без должного внимания исследователей эколого-генетические аспекты этиопатогенеза гипертонической болезни. По результатам многолетних исследований, проведенных на основе лаборатории молекулярной генетики Курского государственного медицинского университета, была сформулирована эколого-токсикогенетическая концепция развития мультифакториальных заболеваний, в том числе затрагивающая этиопатогенез ГБ [Полоников А.В. с соавт., 2008]. Было доказано, что гены биотрансформации ксенобиотиков (ФБК) в сравнении с другими известными генами-регуляторами цивилизации, гомеостаза, вносят в наиболее условиях ощутимый современной вклад в техногенной формирование предрасположенности к социально значимым болезням человека, включая ГБ. В то же самое время фактически не изучены молекулярно-генетические аспекты индукции и регуляции экспрессии генов ФБК, имеющих патогенетическое значения для ГБ. Известно, что в организме контроль экспрессии генов ФБК осуществляется посредством целого каскада взаимосвязанных сигнальных реакций, инициатором которых является особый вид ядерных рецепторов – арилгидрокарбоновый рецептор (AHR) [Okey A.B., 1994; Hahn M.E., 2009]. Его экспрессия индуцируется окружающей углеводородов среде под действием ксенобиотиков (ПАУ) и – содержащих наиболее распространенных полициклических диоксид в ароматических химических соединений [Куценко С.А., 2002]. AHR и связанные с ним регуляторы его активности – ядерный переносчик (ARNT) и репрессор (AHRR) арилгидрокарбонового рецептора с момента своего открытия стали рассматриваться как своеобразные «токсикологические ворота» клетки, вовлеченные в транскрипционную 9 регуляцию метаболизма ксенобиотиков и их AHR-опосредованную цитотоксичность [Evans B.R., 2005; Kawajiri K., 2007]. Установлено, что полиморфизмы генов каскада арилгидрокарбонового рецептора (КАГР) ассоциированы с риском развития различных мультифакториальных заболеваний, таких как рак легкого [Tsay J. et al., 2014], рак молочной железы [Long et al., 2006], эндометриоз [Tsuchiya et al., 2005] и мужское бесплодие [Merisalu et al., 2007], и даже способны потенцировать негативные влияния ксенобиотиков и приводить к повышению артериального давления у человека [Gambier et al., 2006]. Однако до настоящего времени исследований вовлеченности генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и индуцируемых им генов биотрансформации ксенобиотиков при ГБ не проводилось ни в России, ни за рубежом. Цель исследования Провести анализ арилгидрокарбонового формирование вовлеченности рецептора и предрасположенности генов сигнального биотрансформации к гипертонической каскада ксенобиотиков болезни и в ее осложнениям. Задачи исследования 1. Изучить частоты аллелей и генотипов полиморфизмов генов КАГР и ФБК, таких как AHR (R554K), ARNT (C189G), AHRR (P185A), CYP1A1 (I462V), CYP1A2 (C154A), CYP1B1 (V432L) и NQO1 (P187S), в популяции русских жителей Центральной России. 2. Исследовать ассоциации аллелей и генотипов полиморфизмов генов КАГР и ФБК с риском развития ГБ в анализируемой популяции, в том числе с учетом пола и возраста манифестации заболевания. 3. Изучить взаимодействия между генами КАГР и ФБК, а также известными генами-кандидатами ГБ и дать оценку их вовлеченности в формирование наследственной предрасположенности к заболеванию. 10 4. Провести оценку гаметических корреляций между полиморфными вариантами генов КАГР и ФБК и определить паттерны комбинаций аллелей между изучаемыми генными локусами у больных ГБ и здоровых индивидов. 5. Исследовать генно-средовые взаимодействия, детерминирующие предрасположенность к ГБ, посредством совместной оценки полиморфизмов генов КАГР и ФБК и курения. 6. Изучить связи полиморфизма генов КАГР и ФБК с особенностями клинического течения ГБ и развитием осложнений. Научная новизна исследования Впервые был прoведен кoмплекcный анализ аccoциации пoлиморфизма генoв сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора AHR (R554K), ARNT (C189G), AHRR (P185A) совместно с ферментами биотрансформации ксенобиотиков CYP1A1 (I462V), CYP1A2 (C154A), CYP1B1 (V432L) и NQO1 (P187S) с риском развития гипертонической болезни и развивающихся на ее фоне осложнений. Впервые установлены пол-специфические эффекты полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК в отношении предрасположенности к ГБ. Впервые показаны различия во взаимосвязях генов КАГР и ФБК с риском развития ГБ в зависимости от возраста дебюта заболевания. Впервые охарактеризованы взаимодействия между полиморфными вариантами генов КАГР и ФБК, составляющие генетическую основу предрасположенности к гипертонической болезни. Научно-практическая значимость исследования Полученные в ходе исследования результаты могут составить основу для дальнейших исследований эколого-токсикогенетических аспектов ГБ, а также разработок методов молекулярной диагностики болезни с использованием информации о генетическом тестировании генов КАГР и ФБК. Такой подход может оказаться полезным в практической деятельности врачей – генетиков, терапевтов, кардиологов и неврологов – для вероятностой оценки риска развития 11 болезни задолго до ее клинической манифестации, что позволит выявлять на амбулаторном этапе лиц с повышенным риском развития болезни и рекомендовать им превентивные мероприятия, направленные на предупреждение риска развития патологии и улучшение качества жизни. Данные настоящего исследования могут быть приняты для создания рекомендаций по курсам генетики, физиологии, биохимии, кардиологии и внутренних болезней в медицинских вузах и на курсах усовершенствования медицинских работников. Пoлoжения, вынoсимые на защиту 1. Гены сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и сопряженные с ними гены ферментов биотрансформации ксенобиотиков являются частью токсико-генетической компоненты предрасположенности к гипертонической болезни. 2. Влияния полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК на риск развития гипертонической болезни проявляются возрастными различиями в дебюте заболевания, а также пол-специфическими эффектами полиморфизмов на подверженность болезни у мужчин и женщин. 3. Полиморфизмы генов КАГР и ФБК не оказывают существенного влияния на клиническое течение гипертонической болезни, однако связаны с риском развития мозгового инсульта и гипертрофии миокарда левого желудчка на фоне заболевания. 4. Полиморфные варианты генов КАГР и ФБК взаимодействуют с известными генами-кандидатами гипертонической болезни, что отражает их совместную вовлеченность в молекулярные звенья патогенеза заболевания. Личный вклад диссертанта в выполнение исследования Диссертантом проанализированы отечественные и зарубежные источники по теме диссертационного исследования, с использованием которых был подготовлен литературный обзор. Диссертант лично участвовала в сборе дополнительного клинического и биологического материалов, обследовании 12 больных ГБ, а также в анкетировании 220 пациентов в период с 2011 г. по 2012 г. Диссертантом лично проведено выделение ДНК у пациентов и генотипирование 7 полиморфизмов генов КАГР и ФБК на выборке 1151 человек. Автор принимала непосредственное участие в статистической обработке полученных данных, интерпретации и описании результатов исследования. Диссертант подготовила основные публикации по теме выполненной работы и участвовала в апробации результатов исследования. Внедрение в практику Результаты исследования внедрены в работу медико-генетической консультации Курской областной клинической больницы, а также преподавание учебных дисциплин медицинская генетика и клиническая генетика на кафедре биологии, медицинской генетики и экологии Курского государственного медицинского университета. Апробация и публикации Материалы диссертационного исследования доложены на XXIII Всероссийской конференции обучающихся «Национальное достояние России» (Москва, 2008), 78-й Всероссийской научной конференции студентов и молодых учёных с международным участием «Молодёжная наука и современность», посвящённой 78-летию КГМУ и 80-летию со дня рождения члена-корреспондента РАМН, профессора А.В. Завьялова (Курск, 2012), 74-й межвузовской итоговой научной конференции студентов и молодых ученых «Молодежная наука и современность» (Курск, 2009), 75-й Всероссийской научной конференции студентов и молодых ученых с международным участием «Молодежная наука и современность» (Курск, 2010), конференции Европейского общества генетиков – ESHG (Амстердам, 2011), Российском конгрессе с международным участием «Молекулярные основы клинической медицины – возможное и реальное» (СанктПетербург, 2012), V Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы биологии, нанотехнологий и медицины» (Ростов-на- 13 Дону, 2013), IX Международной научно-практической конференции «Актуальные проблемы современных наук» (Прага, 2013), VII Международной научной конференции молодых ученых-медиков (Курск, 2013), XVIII заочной научной конференции Research Journal of International Studies (Екатеринбург, 2013), Международной научно-практической конференции «Перспективы развития науки» (Уфа, 2014), Международной заочной научно-практической конференции «Наука, образование, общество: проблемы и перспективы развития» (Тамбов, 2014). Пo результатам настоящей диссертации опубликована 21 печатная работа, 8 из которых – в рецензируемых журналах, рекомендованных ВАК Минобрнауки РФ для публикаций результатов диссертационных исследований по медицинским наукам, получено 2 патента на изобретения. Структура и объем диссертации Диссертация имеет следующую структуру: материалы и методы исследования, 3 введение, обзор литературы, главы результатов собственных исследований, заключение в виде обсуждения полученных результатов, выводов, практические рекомендации, список литературы и приложения. Работа представлена на 166 страницах машинописного текста, содержит 28 таблиц и 7 рисунков. Библиографический список используемой литературы включает 375 источников, из которых 296 зарубежные. 14 Глава I. ЛИТЕРАТУРНЫЙ ОБЗОР I.1 Современные представления об этиологии и патогенезе гипертонической болезни Определение понятия «гипертоническая болезнь» в нашей стране закрепилось благодаря выдающимся отечественным ученым Г.Ф. Лангу и А.Л. Мясникову, которые показали, что «ГБ этиологически связана с функциональными нарушениями в деятельности коры головного мозга и подкорковых образований, направленной на регуляцию сосудистого тонуса» [Жуковский Г.С., 1997]. Хорошо известно, что факторами риска развития ГБ являются такие воздействия внешней среды, как повышенное употребление соли, чрезмерное употребление алкоголя, курение, недостаточное потребление калия, низкий уровень физической психоэмоциональные стрессы, активности дезадаптация и на избыточная масса эмоциональные тела, нагрузки [Чернова И.М. и соавт., 2012; Коваленко В.Н. и соавт., 2012; Cornelissen V.A. et al., 2011]. Согласно нейрогенной теории гипертонической болезни, выдвинутой Г.Ф. Лангом в 1948 г. и получившей дальнейшее развитие в трудах А.Л. Мясникова (1899-1965), главным этиологическим фактором является нервнопсихическое перенапряжение, возникающее как после острых, так и после длительных эмоциональных нагрузок [Хаютин В.М., 1996; Гарганеева Н.П., 2001]. Первичные функциональные нарушения возникают в коре головного мозга и в центрах гипоталамической области, лимбико-ретикулярного комплекса. В результате развивается гиперреактивность гипоталамических вегетативных центров и формирование патологической застойной доминанты возбуждения в симпатических центрах головного мозга. Преобладание на системном уровне адренергической стимуляции само по себе вызывает гипертензию [Алмазов В.А., 2000; Ахадов Ш.В., 2009; Putnam K. et al., 2012]. 15 Согласно современным представлениям об этиологии ГБ, артериальная гипертензия реализуется вследствие разобщения баланса между прессорной и депрессорной системами [Жолондз М.Я., 2010; Vikrant S., 2001]. В норме повышение АД возникает при активации прессорной системы, которая, в свою очередь, активирует депрессорную систему простагландинов. На определенный промежуток времени эти системы могут находиться в равновесии, однако после резервного истощения депрессорной системы может произойти стойкое хроническое повышение АД [Моисеев В.С., 2002; Manunta P., 2004; Wind S. et al., 2010; Parati G., Esler M., 2012]. Условиями для персистирования АГ является дисфункция почек, надпочечников, почечных артерий и задержка натрия и воды в сосудистом русле, связанная с избытком поступления поваренной соли в организм [Бранчевский С.Л., 1988; Стокс И.Ю., 1997]. Однако уровень АД может поразному реагировать на чрезмерное потребление соли у разных людей, что определяет существование генетически детерминированных особенностей солерезистентных и солечувствительных индивидов. Для солечувствительных людей характерно резкое повышение общего периферического сосудистого сопротивления (ОПСС) и АД при выраженной солевой нагрузке. Причиной повышенной солечувствительности также может быть гетерегенность нефронов, приводящая к гиперсекреции ренина в почке [Meneton O., 2005; Niels A. Graudal, 2011]. Важнейшей системой, контролирующей водно-солевой обмен и АД, а также играющей существенную роль в патогенезе ГБ, является ренинангиотензин-альдостероновая система (РААС). Активация системы опосредуется биологическими эффектами ангиотензина II (А-II), образующегося из ангиотензина I (A-I) при участии ангиотензинпревращающего фермента (АПФ) [Моисеев C.В., 2002; Weir M.R., 2002; Makani H. et al., 2013]. Большинство физиологических вазоактивных эффектов AT-II опосредуется через его связь со специфическими АТ1-рецепторами. Активация АТ2-рецепторов оказывает 16 диаметрально противоположный эффект по сравнению с активацией АТ1рецепторов – формируется внутриклубочковая и системная гипертензия, склероз и фиброз почечной ткани, снижается скорость клубочковой фильтрации, происходит констрикция коронарных сосудов, ремоделирование миокарда и стенок сосудов. Ангиотензин-II способен стимулировать секрецию альдостерона, способствует увеличению продукции антидиуретического гормона, что влечет за собой повышение реабсорбции воды и натрия и компенсаторную гиперволемию. В 2000-х годах была описана система, альтернативная РААС, – система депрессорного ангиотензина. Под влиянием ренина из ангиотензиногена образуются 2 типа А-I: АТ 1-10 и АТ 1-9. Под действием АПФ1 из АТ 1-10 образуется известный АII (АТ 1-8), а под действием АПФ2 – новый «депрессорный» АII (АТ 1-7) [Шальнова С. А., 2006; Iwamoto T., 2006; Daien V. et al., 2012]. Были получены данные, свидетельствующие о наличч альтернативных пути образования AT II, минуя АПФ. Один из них – синтез AT II напрямую из ангиотензингена с участием ряда ферментов. Была обнаружена химаза, представляющая существенный интерес, она способна преобразовывать AT I в AT II. В отношении тканей, вышеописанный фермент проявляет активность там же, где и АПФ, но активность этих ферментов существенно различается. Так, по различным данным, активность АПФ в почечной ткани достигает максимума, а химазы максимальная с сердечной ткани и сосудистой стенке. Более того, известно, что активность химазы в 4-5 раз выше в поврежденном сосудистой стенке, активность АПФ, в свою очередь, остается на прежнем уровне [Бубнова М.Г., 2006; Barros Silva R., 2012]. Таким образом, повышенная активность ангиотензина II формирует хроническую активацию РААС, что может приводить к формированию АГ и поражению органов-мишеней [Muller D.N., Luft F., 2006; Lau Т., 2004; Navar L.G. et al., 2011]. Важным аспектом развития артериальной гипертонии является эндотелиальная дисфункция периферической и коронарной циркуляции и 17 почечного кровотока [Panza J.A., 1990; Lyons D., 1994; Taddei S., 1993; Rizzoni D., 1998; Марков Х.М., 2005]. Эндотелий опосредует выработку веществ, поддерживающих равновесное состояние между процессами ингибирования и стимуляцией факторов роста. Оксид азота представляет собой ингибирующий фактор роста. Дисфункция эндотелия, сопровождающаяся недостатком NО, увеличение продукции факторов роста вазоактивных субстанций может лежать в основе сосудистого ремоделирования, повреждения структуры сосуда [Шулутко Б.И., 2001; Schulz E., Gori T., Münzel T., 2011; Poh K.K. et al., 2013]. В исследованиях описывается наличие при артериальной гипертензии нарушения эндoтелийзависимой вазодилатации, которая формируется в результате нарушения синтеза и продукции оксида азота [Panza J.A., 1993]. В литературе также описываются данные о наличии взаимосвязи повреждений системы L– аргинин–NO с увеличением вазоконстрикторных субстанций. Согласно имеющимся данным, накопление вазоконстрикторных субстанций и свободных радикалов вызывает уменьшение активности оксида азота [Carl J.Pepine, 1998; Jean-Baptiste Michel, 1999; Коноплева Л.Ф., 2011]. В эксперименте длительное ингибирование NO синтазы может привести к формированию тяжелых органических последствий и длительной артериальной гипертензии, в том числе атеросклероз и сосудистые поражения [Vanhoutte P.M., 1996]. Согласно мембранной теории развития АГ, истоки первичной гипертензии восходят к распространенным изменениям структуры и функции клеточных мембран, проявляющимся в нарушении трансмембранного транспорта моновалентных катионов в клетках [Постнов Ю.В., 1987; Kearney P., 2004]. В работе О.В. Курята, посвященной мембранным и гуморальным механизмам развития АГ, выделяются варианты изменений структурно-функционального состояния мембран и гормонального профиля за счет изменения активности Nа+, К+-АТФазы [Курята А.В., 2002]. Ю.В. Постнов в рамках концепции мембранного «дефекта», являющегося, по его мнению, первопричиной развития первичной 18 артериальной гипертензии и других болезней «дезадаптации», основывается на генетически детерминированных нарушениях в работе мембранных переносчиков (Na+-Na+-, Na+-K+-, Ca2+-переносчики, Са2+-АТФаза). В результате генетически детерминированного нарушения трансмембранного ионотранспорта возникают сбои в регуляции концентрации свободного цитоплазматического кальция и изменение преобразования энергии в митохондриях, что запускает каскад ферментативных реакций в системах и механизмах регуляции АД, направленных на адаптацию к повышенной концентрации кальция цитоплазмы. Одним из эффектов повышения уровня цитоплазматического кальция является активация апоптоза [Постнов Ю.В., 1995; Орлов С.Н., 1980; Постнов А.Ю., 2001; Постнов Ю.В., 2008]. Таким образом, нарушение структуры и функции клеточных мембран, имеющее место при АГ [Cинькова Г.М., 2007; Kearney P., 2004; Balantyne C. et al., 2005; Rubies-Prat J., 2001], может играть важную роль в поражении органов-мишеней и существенного ремоделирования ССС, а так же нарушения липидного профиля и в формировании атеросклеротического поражения стенки сосудов [D’Agostino R.B., 2001; Гогин Е.Е., 2006; Постнов Ю.В., 2008]. Таким образом, ГБ представляет собой мультифакториальную патологию, в основе развития которой лежат процессы нарушения адаптационных способностей человека к внешним условиям среды с учетом генетических предопределенных нарушений в механизмах, регулирующих АД, а также, связанной с фоновыми закономерно возникающими патофизиологическими и инволютивными процессами в организме, влияющими на регуляцию АД [Кобалава Ж.Д., 2009; Беленков Ю.Н., 2002; Пузырев В.П., 2009; Parati G., 2012; Landsberg L. et al., 2013]. 19 I.2 Генетические исследования гипертонической болезни Первая обобщенная информация о роли наследственного фактора в развитии эссенциальной артериальной гипертензии (АГ) появилась к 20-30-м годам ХХ в. Выявление генетических факторов развития ГБ в значительной мере затруднено в связи с тем, что ГБ относится к многофакторным полигенным заболеваниям [Lindpaintner K., 1994; Sing C.F. et al., 2003; Mein C.A. et al, 2004; Баранов В. и соавт., 2013]. Важным этапом в понимании роли генетических и средовых факторов в формировании ГБ было использование генеалогического метода, благодаря которому установлено, что в феномене «семейной кумуляции» ГБ присутствует как средовая, характерная для семьи, компонента, так и генетическая составляющая [Пузырев В.П., 2003]. По имеющимся литературным данным, полученным в результате широкомасштабного генеалогического исследования, при наличии отягощенного анамнеза по повышенному АД по обоим родителям одновременно, формирование АГ наступает на 5 – 7 лет раньше, чем в группе лиц без наличия ГБ у родителей в анамнезе [Глотов A.C., 2007]. Это может свидетельствовать о важной роли наследственных факторов не только в развитии, но и в течение ГБ. Одним из генетических методов, позволивших расширить наши представления о наследственной детерминации уровня АД и ГБ, является близнецовый метод, который и до сих пор не утратил актуальности при изучении генетической природы заболевания [Fagard R. et al., 1995]. В исследованиях посредством сравнения значений конкордантности по уровню АД в парах моно- и дизиготных близнецов одного пола опубликованы данные о роли наследственной и средовой компоненты в этиопатогенезе развития ГБ [Molen R.V. et al., 1970; Koskenvuo M. et al., 1992; Platt R., 1963]. По результатам другого исследования было установлено, что наследственные факторы определяют формирование как 20 клинического течения, так и прогрессирования ГБ (вклад генетических факторов соответственно 35 и 70%) [Шарандак А.П. c соавт., 2002; Padmanabhan S., 2012]. До настоящего времени для изучения молекулярно-генетических механизмов развития ГБ используют несколько подходов. Один из них представляет собой классический метод поиска ассоциаций ГБ с рядом геновкандидатов, продукты Альтернативным и которых популярным патогенетически сегодня связаны подходом к с болезнью. поиску генов предрасположенности к ГБ это полногеномный анализ множества (от сотен тысяч до нескольких миллионов) полиморфных маркеров, расположенных на всех хромосомах человека, с целью поиска их взаимосвязей с риском развития болезни [Шулутко Б.И., Перов Ю.Л., 1993; Danziger R.S., 2001; Corizzato M. et al., 2005]. Еще одним подходом к поиску генов предрасположенности к ГБ является позиционное клонирование. Так, согласно данным крупнейшего международного исследования BRIGHT [Wallace C. et al., 2006; Padmanabhan S. et al., 2012] и программы FBP («cемейное кровяное давление») [Greenwood T.A. et al., 2007], были представлены доказательства сцепления АГ с определенными участками генома и продемонстрирована гетерогенность в сцепливании, зависящем от фенотипа клинического течения ГБ. Наиболее широко использующийся в кардиогенетике кандидатный подход позволил идентифицировать широкий спектр генов предрасположенности к ГБ. Таким образом, был установлен широкий спектр генов-кандидатов ГБ, включая гены, кодирующие компоненты РААС, калликреин-кининовой системы, местной и системной регуляции сосудистого тонуса, эндотелиальной дисфункции, сигнальной трансдукции и многих других фажных для патогенеза болезни полиморфных генов [Иващенко Т.Э., 2001; Баранов В.С., 2002; Багмет А.Д., 2005; Гинтер Е.К., 2003; Gatti R.R. et al., 2013]. В частности, установлены такие геныкандидаты, как: REN (ген ренина), ACE (ген ангиотензинпревращающего фермента), AGRT1 (ген рецептора 1-го типа к ангиотензину II), AGT (ген 21 ангиотензиногена), ADRB1 (ген метилентетрагидрофолатредуктазы), β1-адренорецептора), AGTR2 (ген MTHFR рецептора (ген 2-го 5,10- типа к ангиотензину II), BKR2 (ген брадикининового рецептора 2 типа),NOS3 (ген NOсинтазы 3 типа), ADRB2 (ген β2-адренорецептора) [Nguyen K. D. H. et al., 2013]. В целом ряде работ была показана ассоциация полиморфных маркеров генов системы РААС и, в частности, гена ангиотензиногена AGT с развитием ГБ [Pereira C. et al., 2003; Ellis K.L. et al., 2013]. Мета-анализ, проведенный J.A. Staessen et al. в 1999 г., в который были включены данные 69 независимых исследований, и охватывающий 27906 индивидов, позволил выявить ассоциацию полиморфного маркера М235Т гена AGT с АГ у европейцев [Staessen J.A. et al., 2005; Kunz R. et al., 1997]. Для гена рецептора AT II типа 1 AT2R1 описано не менее 16 полиморфных участков. Обнаружена ассоциация маркера A(-153)G1 гена AT2R1 с АГ в китайской и русской популяциях и показано, что носители аллеля А и генотипа АА имели существенно более высокий риск развития АГ, чем носители аллеля G и генотипа GG [Глотов А.С. с соавт., 2007; Zhou T.B., Yin S.S., Qin Y.H., 2013]. Для анализа ассоциации гена фермента, превращающего AT I (АСЕ), с мультифакториальными заболеваниями используется полиморфный маркер I/D. В нескольких исследованиях авторам удалось подтвердить корреляцию между генотипами этого полиморфного маркера и концентрацией в крови АПФ [Henskens I.H. et al., 2003; Бражник В.А., 2003; Burrell L.M. et al., 2013]. Согласно данным литературы, установлена связь полиморфизма I/D с риском развития ГБ и формированием структурно-функциональных изменений в миокарде (гипертрофия миокарда левого желудочка) [Barley J. et al., 1995; Образцова Г.И. с соавт., 2008; Duru K. et al., 1994; Crisan D., Carr J., 2000; Iwai N. et al., 1994; Смирнова М.Д. c соавт., 2009]. Известна ассоциациативная активность аллеля D в полиморфизме гена АСЕ в отношении ГБ в исследовании, включавшем в себя популяцию из 435 коренных жителей северного Китая [Zhan Y. et al., 2008]. 22 Изучался полиморфизм А1166С гена AGTR1 и его вклад, определяющий риск развития ГБ и функциональное состояние РААС [Tamaki S. et al., 2009]. Согласно работам ряда авторов у больных ГБ определяется преобладание вариантного аллеля С по сравнению с лицами группы контроля [Fan H. et al., 1998; Wang W.Y. et al., 1997; Kainulainen K. et al., 1999; Kikuya M. et al., 2003]. Также описана ассоциация увеличения частоты гомозиготного генотипа по вариантному аллелю С у мужчин, страдающих ГБ легкой степени тяжести [Бойцов С.А., Линчак Р.М., 2003]. При изучении ГБ у жителей московской популяции наблюдается наличие ассоциации между полиморфизмом гена AGTR1 и риском возникнонения ГБ, при этом носители аллеля А и гомозиготного генотипа по дикому аллелю А ассоциированы с малой вероятностью формирования ГБ [Чистяков Д.А. c соавт., 2001]. С предрасположенностью к возникновению редко встречающихся моногенных форм ГБ связаны мутации гена MLR (ген минералокортикоидного рецептора [Lifton R.P., 2001; Geller D.S. et al., 2000]. Наиболее изучены полиморфизмы G3514C и A4582C гена MLR. В ряде работ существуют данные об ассоциации данных полиморфизмов с уровнем АД и риском развития сольчувствительной формы ГБ [Ludwig M. et al., 1998; Poch Е. et al., 2001]. Согласно работам по исследованию бразильской популяции определяется связь аллеля С полиморфного варианта А4582С гена MLR с предрасположенностью к ГБ [Freitas S.R., et al., 2007; Vilela1 F.D. et al., 2008]. Также выявлена связь полиморфизма G460W гена ADD1(α-аддуцина) с уровнем артериального давления [Bianchi G. et al., 2005]. Согласно данным ряда авторов, существует ассоциация аллеля 460W гена ADD1 с риском развития ГБ [Province M.A. et al., 2000; Cusi D. et al., 1997; Clark C.J. et al., 2000; Castellano M. et al., 1997; Staessen J.A. et al., 2005], а также с риском развития осложнений ГБ [ Van Rijn M.J. et al., 2006; Morrison A.C. et al., 2002]. 23 При изучении этиопатогенеза сердечно-сосудистой патологии, в том числе и ГБ, часто исследуют ген, продуктом которого является эндотелиальная синтаза оксида азота NOS3, экспрессирующаяся в клетках эндотелия кровеносных сосудов. Этот ген также рассматривается в качестве гена-кандидата ГБ [Минушкина Л.О., 2005]. Тем не менее анализ всех имеющихся на сегодняшний день литературных данных об ассоциации различных полиморфных маркеров гена NOS3 с АГ показывает крайнюю противоречивость. Например, у европеоидов, проживающих в Канаде, была обнаружена ассоциация полиморфного маркера -786Т>С с риском АГ, но ассоциация данного маркера не подтвердилась в двух японских популяциях [Förstermann U., Sessa W.C., 2012; Takeuchi F. et al., 2012]. Было установлено, что полиморфный вариант E298D гена NOS3 проявлял положие ассоциации с риском развития острого инфаркта миокарда [Shimasaki Y. et al., 1998; Miyamoto Y. et al., 1998], ишемической болезни [Markus H.S. et al., 1998], артериальной гипертензии [Hibi K. et al., 1998; Lacolley P. et al., 1998; Shoji M. et al., 2000; Jia C.Q. et al., 2003; Zhang L.P. et al., 2006]. В исследовании генетики ГБ также изучаются полиморфизмы генов различных сигнальных систем. Так, изучению ассоциации полиморфного маркера С825Т гена GNB3 с эссенциальной АГ посвящены многочисленные исследования. Большинство исследований, проведенных у европейцев, подтверждает ассоциацию полиморфного маркера С825Т гена GNB3 с ГБ. Наиболее ярко это было продемонстрировано в двух крупных исследованиях, изучавших выборки больных АГ немецкой и бельгийской популяций [Rupert J.l., Kidd K.K., 2003; Lu J. et al., 2012]. Установлено, что полиморфизм Gly272Ser гена GNB3 играет важную роль в регуляции артериального давления, а также увеличением ассоциирован с риска развития гипертонической болезни, в том числе и в популяции русских жителей Курской области [Rankinen et al., 2000; Staessen et al., 24 2005; Pereira et al., 2007; Шестаков с соавт., 2008; Полоников А.В. с соавт., 2007, 2011, 2001]. Исходя из литературных данных, можно заключить, что генетическую основу ГБ составляют различные классы генов, вовлеченных в регуляцию и поддержания артериального давления. Хотя с помощью полногеномных исследований установлено большое число частых генетических вариантов с умеренными фенотипическими эффектами влияния на уровень АД (<1 мм рт. ст.), в совокупности эти генетические варианты объясняют менее 3% вариабельности АД в общей популяции [Munroe et al., 2013]. Анализируя многочисленные зарубежные публикации, следует отметить, что проблема недостаточного понимания этиологии социально значимых болезней человека, в том числе и ГБ, во многом связана и с тем, что зачастую в генетических исследованиях не рассматриваются в качестве основных влияющих факторов влияния окружающей среды, имеющие первостепенное значение для данной категории болезней [Пузырев В.П., 2003; Schwartz C. et al., 2007; Ghassibe-Sabbagh et al., 2012]. I.3 Эколого-токсикогенетические аспекты этиологии гипертонической болезни В настоящее время мы наблюдаем быстрый рост численности популяций мира, с которым связано увеличивающееся количество загрязнений и отходов, в том числе и токсичных, что, в свою очередь, приводит к резкому ухудшению состояния различных экосистем Земли. Обнаружено более 5 млн различных химических соединений, которые перманентно воздействуют на организм человека [Райс Р.Х., Гуляева Л.Ф., 2003]. Особое место среди загрязнителей окружающей среды занимают полициклические ароматические углеводороды (ПАУ), накопление которых сопряжено с повышенным риском развития многих болезней человека, в частности онкологических заболеваний [Apostoli G. Neri et al., 2003; Куценко С.А., 2002]. Также имеются данные о том, что группу ксенобиотиков, оказывающих антропогенное влияние на среду обитания и 25 здоровье человека, составляют тяжелые металлы и их различные соединения. В процессе эпидемиологических и клинических исследований было установлено атерогенное действие, гипертензивный эффект, кардиотоксическое действие тяжелых металлов, хлорорганических и других соединений [Tom Matthews T., 1998; Fleming D.J., 2001; Трахтенберг И.М., 2010; Lagorio S., 2006; Wrede C.E., 2010]. Доказано существование веществ (бензол, бензапирен, органические соединения ртути и свинца), оказывающих кардиовазотоксический эффект, проявляющийся в снижении резистентности микроциркуляторного русла и формировании жировой дистрофии интимы сосудов [Лубянова И.П., 2003; Bigert C., 2008]. Установлено, что мышьяк обладает выраженным капилляротоксическим действием. Окись углерода, нитросоединения бензола изменяют баланс электролитов, что ведет к нарушению сократительной функции миокарда [Аnderson G.J., 2007]. Следует также констатировать факт, что на сегодняшний день практически не изучены и по-прежнему остаются без внимания исследователей как в России, так и рубежом эколого-генетические аспекты этиопатогенеза социально значимых сердечно-сосудистых заболеваний, в том числе и ГБ. Необходимость, актуальность и практическая значимость данного направления исследований диктуется прогрессирующим ухудшением экологической ситуации в мире и в первую очередь нарастающим химическим загрязнением окружающей среды, которое вносит значительный вклад в формирование социально значимых болезней сердечно-сосудистой системы, не является исключением и ГБ [Sun et al., 2008; Brook et al., 2009; Pope et al., 2004, 2009; Diez Roux et al., 2008; Bauer et al., 2010; Lenters et al., 2010; Künzli et al., 2005, 2010, 2011; Хабриева Р.У., 2010; Nawrot et al., 2011; Adar et al., 2013; Dong et al., 2013; Foraster et al., 2014]. В этой связи одним из основных вопросов для экологической генетики является определение в популяциях средовых факторов и специфичных генов, которые 26 могут формировать реакции устойчивой адаптации человека к изменяющимся условиям среды. На роль таких генов могут претендовать гены, продукты которых прямо или косвенно вовлечены в процессы обезвреживания (биотрансформации) чужеродных химических соединений, попадающих в организм из внешней среды – гены ферментов биотрансформации ксенобиотиков (ФБК) [Nebert 1996, 1997; Carvan et al., 1997; Raunio et al., 1999; Shimada et al.; 2006 Landi et al., 1999;]. За счет существования индивидуальных реакций организма на действие разнообразных химических веществ по причине наличия в строении генов функционально неравноценных полиморфных аллелей ФБК, зависят последствия их негативного влияния на органы и ткани [Nebert, 1996, 1997; Кулинский В.И., 1999; Баранов с соавт., 2002; Tuimala et al., 2002]. На основе результатов многолетних исследований этиологии и патогенеза различных мультифакториальных заболеваний, проводившихся на кафедре биологии, медицинской генетики и экологии Курского государственного медицинского университета, была разработана и описана [Полоников с соавт., 2008] экологотоксикогенетическая концепция формирования патогенетически различных социально значимых заболеваний в условиях химического загрязнения окружающей среды. Ключевым моментом в понимании сущности разработанной концепции является разграничение в этиологии болезней двух принципиально различных генетических составляющих, формирующих предрасположенность к распространенным заболеваниям, в том числе и сердечно-сосудистой системы (рисунок 1). Первая генетическая компонента, образованная взаимодействием генами ферментов биотрансформации ксенобиотиков и антиоксидантной защиты, рассматривается нами как «пусковая» составляющая предрасположенности. 27 Рисунок 1 Концептуальная модель вовлеченности ферментов биотрансформации ксенобиотиков в развитие МФЗ (Полоников А.В., 2006, 2008) Химическое Острые и хронические стрессы Другие гены регуляторы гомеостаза Малоподвижн ый образ жизни Гены ФБК загрязнение окружающей среды Вредные привычки Нарушения питания Промышленная и бытовая химия Изменение метеорологическ их условий Токсические элементы пищевых продуктов Процессы, Болезнь контролирующиеся данной генетической компонентой, реализуются посредством активации систем биотрансформации ксенобиотиков и антиоксидантной защиты, направленных на нейтрализацию токсических влияний на организм. Вторая генетическая компонента является «эффекторной», детерминированной генными взаимодействиями, которые регулируют основные физиологические системы гомеостаза (в нашем случае речь идет о сердечнососудистой системе) и подключаются исключительно в случае «недостаточного функционирования» первой генетической компонентыи. Также «эффекторное» звено ответственно за определение предрасположенности к развитию 28 заболевания. Опираясь на основные постулаты концепции и учитывая адаптивные возможности генофонда химическому загрязнению компенсации населения, проживающего территории, патологических можно нарушений, на подвергающейся предположить, вызванных что для неэффективной детоксикацией ксенобиотиков, воздействующих на сердечно-сосудистую систему, требуется мобилизация имеющихся физиологических резервов для сохранения гомеостаза и поддержания жизнедеятельности. Если по генетическим причинам ферменты биотрансформации ксенобиотиков и антиоксидантной системы не справляются с обезвреживанием проникающих в организм токсикантов, то накопление последних повреждает органы и системы организма. Активация эффекторного звена происходит в ответ на повреждение тканей. Основной функцией работы данной компоненты является уменьшение воздействия токсических активных веществ на окружающие ткани и органы при сохранении равновесия гомеостаза организма. От потенциальных возможностей эффекторной генетической компоненты, контролирующей описанные выше физиологические процессы, фактически зависит дальнейший сценарий патологических изменений в организме. Учитывая масштабность и темпы ухудшения экологической ситуации, а также отсутствие у населения эффективных приспособительных механизмов к новым (в эволюционном смысле) факторам среды, ответная защитная реакция организма на поллютанты, по всей видимости, носит неспецифический характер, что может нарушать деятельность органов и систем. Так, ответная реакция системы кровообращения на повреждающее действие токсикантов может проявляться индукцией окислительного стресса, системной воспалительной реакцией сосудистого русла, активацией генерализованным спазмом гиперлипидемией, гипергликемией, патологическими изменениями, сосудов, симпатоадреналовой эндотелиальной тромбообразованием которые, с одной системы, дисфункцией, и другими стороны, отражают 29 адаптационные реакции организма, с другой – фактически являются звеньями патогенеза сердечно-сосудистых заболеваний, одно из которых – гипертоническая болезнь. Выраженность проявления токсических эффектов внешней среды зависит не только от силы, длительности и интенсивности воздействия токсических влияний, но и от индивидуальных особенностей внутреннего метаболизма определенного ксенобиотика. Внешние токсические влияния на организм человека могут спровоцировать дисбаланс эндогенных взаимодействий систем и органов, тем самым нарушая гомеостаз организма и вызывая развитие болезни [Панова Ю.Г., 2012]. Как уже было отмечено выше, в организме человека существует эволюционно сложившаяся система обезвреживания химических соединений окружающей среды – система биотрансформации или детоксикации ксенобиотиков. Учитывая вышеизложенное, следует отметить, что наиболее подходящими генетическими маркерами для эколого-токсико-генетических исследований механизмов развития ГБ могут служить полиморфные гены ферментов биотрансформации ксенобиотиков (ФБК), экспрессия которых регулируется влияниями внешних факторов химической природы [Меньщикова Е.Б. и др., 2013]. В то же самое время индукция и регуляция экспрессии генов ФБК в организме опосредуется особым видом ядерных рецепторов – арил- гидрокарбоновым рецептором (AHR), связанными с ним транскрипционными факторами, которые в совокупности представляют так называемый сигнальный каскад арилгидрокарбонового рецептора (КАРГ). Именно активация арилгидрокарбонового рецептора является первичным пусковым сигналом в запуске каскада регуляторных реакций в геноме по индукции экспрессии генов ФБК [Abel J., 2010; Kiss E.A. еt al., 2012; MacPherson L. et al., 2013]. С момента своего открытия данные рецепторы стали рассматриваться как своеобразные 30 «токсикологические ворота» клетки, вовлеченные в регуляцию метаболизма ксенобиотиков. I.4 Структура и организация функционирования каскада арилгидрокабронового рецептора (КАГР) AHR является частью семейства транскрипционных регуляторов, которые контролируют разнообразные физиологические функции в организме, включая нейрогенез, гемопоэз, формирование трахеи и печени, слюнных протоков, суточные биоритмы, реакции на гипоксию, функционирование рецепторов гормонов, дифференцировка лимфоидной ткани и многие другие процессы [Hankinson O., 2005]. Так, присутствие AHR-сигнального каскада в различных видах тканей и типов клеток свидетельствует о том, что многие биологические и токсические эффекты AHR-лигандов вследствие дифференциального изменения экспрессии генов в восприимчивых клетках играют важную роль в морфогенезе тканей [Fisher M.T., Nagarkatti M., 2005]. Каскадные реакции AHR также играют важную роль не только в индукции экспрессии генов ФБК, но и в регуляции жизненного цикла клеток, включая процессы ее роста дифференцировки и умирания [Allan B. Okey, 2002; Karl Walter Bock, 2006; Wang Y. et al., 2013]. Активация AHR может тетрахлородибензо-з-диоксина углеродов или происходить (ТХДД), полициклических под влиянием галогенированных углеродов, включая 2,3,7,8- ароматических бензопирен БЕНЗ/А/ПИРЕН??? и бензатрацен [Hahn M.E. et al., 2009; Hankinson, 1995]. AHRлиганды можно разделить на две категории: в первую входят синтетические (дибензодиоксины, дибензофураны, бифенилы, бензопирен, бензотрацен и др.) ароматические углеводороды. Вторую составляют лиганды естественного происхождения. Такие токсические вещества, как тетрахлордибензо-диоксин (ТХДД), ПАУ, связываются и оказывают свое действие через цитоплазматические рецепторы арилгидрокарбонового комплеска, который действует как фактор 31 транскрипции и регулирует количество выделяющихся цитокинов и микросомальных ферментов [Гуньков С.В., 2009]. Главными компонентами системы сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора (КАРГ) являются: непосредственно сам AHR, а также ядерный его транслокатор (ARNT) и репрессор (AHRR) [Wu D. et al., 2013]. Не связанный с лигандом AHR находится в цитоплазме в комплексе с белком теплового шока hsp90, XAP2, белком p23 и тирозинкиназой c-Src (рисунок 2). Рисунок 2 Принцип функционирования каскада арил-гидрокарбонового рецептора Эти белки обеспечивают связывание AHR с поступившими химическими веществами. Белок hsp90 определяет конформацию AНR, облегчая его взаимодействие с лигандом и препятствуя формированию комплекса с ДНК. При связывании с ПАУ происходит диссоциация белка hsp90 от AHR и его замещение на экзогенный или эндогенный лиганд-проводник. После связывания лиганда AHR проходит ряд конформационных изменений, приводящих к перемещению комплекса в ядро клетки, где происходит процесс гетеродимеризации с арилгидрокарбоновым ядерным транслокатором (ARNT), в 32 результате чего образовавшийся гетородимер AHR/ARNT связывается со специфическими энхансерами XRE (xenobiotic responsive elements, так называемые элементы реагирования на ксенобиотики) на молекуле ДНК [Hankinson O., 1995; DeGroot D.E., Denison M.S., 2014]. Комплекс XRE и AHR активирует экспрессию множества генов 1-й фазы детоксикации ксенобиотиков. В частности, происходит индукция экспрессии цитохромов P450 1A1, 1A2 и 1В1, а также ферментов 2-й фазы биотрансформации: НАД(Ф) дегидрогеназы - NQO1, уридиндифосфат-глюкоронозилтрансферазы - UGT1, глутатион-трансферазы GSTA1, альдегиддегидрогеназы – ALDH [Hahn M.E., 2009; Перепечаева М.Л., 2006; Smith et al., 2013]. Среди ФБК 1-й фазы детоксикации ведущее место занимает система цитохромов Р450 с точки зрения активности в отношении огромного спектра ксенобиотиков. Гены, которые находятся под управлением AHR, принадлежат двум основным функциональным группам: гены ФБК, индукция которых может вызывать как позитивные, так и повреждающие эффекты; гены, которые влияют на процессы пролиферации и дифференцировки клеток. Наибольшая концентрация цитохромов Р450 обнаруживается в эндоплазматическом ретикулуме гепатоцитов, где они играют важнейшую роль в образовании более токсичных промежуточных метаболитов ксенобиотиков [Kawajiri K., 2007; Wincent E. et al., 2012]. Механизм индукции цитохромов Р450 довольно сложен и запускается под влиянием ПАУ - основных лигандов AНR. Результатом такой индукции является увеличение транскрипции генов CYP1A1, CYP1A2 и CYP1В1 [Sachse C., 2003; Wall R.J. et al., 2012]. Чрезмерная экспрессия цитохромов Р450 и других ФБК может повлиять на метаболизм арахидоновой кислоты, тем самым способствуя проявлению большего токсического эффекта по причине накопления промежуточных токсичных метаболитов [Rifkind A.B., 1990; Nakai, K., 1992]. Однако индукция данных ФБК не всегда проявляется токсическими эффектами на ткани [Heid S.E., Pollenz R.S., 33 2000]. Существуют доказательства, что степень токсичности ПАУ может также зависеть от экспрессий и других генов, в частности, ответственных за рост клеток и дифференцировку [Ansari M.A. et al., 2013]. Существует также механизм обратной регуляции каскада. В этом случае AHR индуцирует транскрипцию собственного репрессора - AHRR. Репрессор AHR играет важную роль в регуляции AHR опосредованной экспрессии генов, индуцируемой воздействием ПАУ. AHRR конкурирует с AHR за связывание с ядерным транслокатором ARNT. AHRR образует комплекс c ядерным транслокатором ARNT, который конкурентно связывается с промоторами генов, не влияя на их активность, тем самым блокируя их экспрессию. Таким образом, AHRR взаимодействует с ядерным компонентом КАГР по принципу обратной отрицательной связи. Соответственно, комплекс AHRR-ARNT препятствует образованию тройного комплекса индуктор-AHR-ARNT – таким образом AHRR осуществляет контролирующую индукцию, вызванную ПАУ и диоксинами [Chaffin C.L., Hutz R.J., 1997; Liang Y. et al., 2012]. Независимо от описанного транскрипционного пути и его ядерной локализации, AHR может реализовывать свои эффекты через альтернативный путь, который локализован в цитоплазме. Предполагается, что под воздействием диоксинов происходит изменение активности тирозинкиназы, что приводит к индукции фосфорилирования целого каскада белков. В этом случае не связанный с диоксинами AHR в цитоплазме соединяется с hsp90, xap2, p23 и тирозинкиназой (c-Src) или протеинкиназой. При связывании AНR лигандами (диоксином) происходит освобождение активной c-Src, что приводит к стимуляции протеинкиназы [Pocar P. et al., 2005]. По всей видимости, активная тирозинкиназа c-Src фосфорилирует и активирует стероидные рецепторы, такие как рецепторы эстрогенов, вызывая эстроген-подобные эффекты в отсутствии самих эстрогенов. Гены КАГР экспрессируются в различных органах и тканях организма. Согласно исследованию, проведенному в японской популяции, экспрессия генов 34 AНR и ARNT у взрослых индивидов и фетальных образцов приблизительно одинакова [Jacobs H. et al., 2011; Wu D. et al., 2013]. Одинаково высокий уровень экспрессии гена AHR был обнаружен в легких, плаценте и селезенке у взрослых, а также в легочной ткани и ткани селезенки в фетальном образце [Kiss E.A. et al., 2011; Ziv-Gal A. et al., 2013]. Экспрессия гена ARNT обнаружена в яичниках, легких, селезенке, яичках и поджелудочной железе у взрослых, а также в легких и почках плода [Abe H. et al., 2013; Ayed-Boussema I. et al., 2011]. Ген AНRR был изначально обнаружен у мышей [Mimura et al., 1999], а дальнейшем появились сведения о наличии данного гена в тканях человека [Watanabe et al., 2001; Karchner et al., 2008]. Ген AНRR экспрессируется в различных тканях человека на наиболее высоком уровне в легочной ткани, поджелудочной железе, тканях яичек, яичников, легких и поджелудочной [Karchner et al., 2008; Yamamoto et al., 2004]. Наличие генов КАГР в сердечно-сосудистой системе нашло подтверждение в некоторых исследованиях. Согласно литературным данным, гены КАГР экспрессируются в аорте, а также играют важную роль в моделировании гипертрофии миокарда и формировании атеросклеротических процессов [Ziv-Gal A. et al., 2013]. Согласно полученным данным, диоксин и диоксинподобные эффекты, опосредованные функционированием сигнального КАГР, могут вызывать различные структурные изменения сердечно-сосудистой системы, в том числе и посредством увеличения апоптоза клеток и снижения пролиферативной активности кардиомиоцитов [Karen S., 2005; Phillip G., 2009; Vilahur G. et al., 2013; Maayah Z.H. et al., 2013]. I.5 Полиморфизм генов КАГР и ФБК и их связь с развитием болезней человека Гены сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора по своей структуре являются достаточно полиморфными. По данным многочисленных исследований были идентифицированы наиболее частые полиморфные варианты 35 генов КАГР: аминокислотная замена Arg554Lys в 10 экзоне гена AНR, нуклеотидная замена G>C в 7 экзоне гена ARNT и аминокислотная замена Pro185Ala в 5 экзоне гена AHRR [Kawajiri K., Watanabe J., 1995; Scheel J., Hussong R., 2002; Cauchi S., Stucker I.; Alvaro Puga, 2011]. Известно, что полиморфизм в кодоне 554 в 10 экзоне (1661G>A) гена AHR влияет на выживаемость больных саркомой мягких тканей [Park D.J., Stoehlmacher J., 2001]. В другой работе были получены данные о том, что у носителей гетерозиготного генотипа полиморфизма Arg554Lys гена AHR имеет место повышенная активность цитохромов CYP1А1 и CYP1А2 [Marianne Berwick, 2004]. Известно, что индуцированная активность цитохрома Р4501А1 выше у носителей гетерозиготного генотипа гена AНR или вариантных гомозигот (Arg554/Lys554 or Lys554/Lys554), чем у диких гомозигот (Arg554/Arg554) [Wong et al., 2001; Harper et al., 2002]. Однако в японской популяции полиморфизм гена AНR в кодоне 554 не был ассоциирован с повышенной активностью цитохрома Р 4501А1 в легочной ткани в группе курильщиков [Josse A.R. et al., 2012]. Согласно данным исследований в Германии, вариантные гомозиготы Lys554Lys гена AHR ассоциированы с низким уровнем экспрессии mRNA генов AHR, ARNT и CYP1B1, тем самым демонстрируя деактивирующий эффект данного полиморфизма [Helmig S., 2011]. Согласно данным исследования, по изучению влияния полиморфизмов T3801C гена CYP1A1 и G1661A гена AHR на уровень артериального давления в группе курильщиков получены следующие данные: уровень систолического и диастолического артериального давления существенно различался в зависимости от генотипа полиморфизма T3801C гена CYP1A1 между группой курильщиков и группой индивидов, которые в прошлом имели определенный стаж курения. Более того, была определена статистически значимая взаимосвязь между изучаемыми полиморфизмами генов CYP1A1 и AHR, которая характеризовала различные показатели систолического и диастолического артериального давления 36 у носителей аллеля C3801гена CYP1A1 и аллеля A1661 гена AHR соответственно [Gambier N. et. al., 2006; Volkova M. et al., 2011]. Имеются сведения о том, что при воздействии ТХДД, происходит активация AHR, которая опосредует увеличению накопление супероксиддисмутазы, артериального давления и что может приводить индуцировать к формирование миокардиогипертрофии [Kopf P.G., Huwe J.K., Walker M.K., 2008]. В исследованиях японской популяции не было найдено статистической взаимосвязи полиморфизма Arg554Lys гена AHR с риском развития рака мочевого пузыря как в группах обследуемых, подвергавшихся периодическому воздействию бензопирена, так и в группах, не имевших данного влияния ПАУ [Zhang N., 2011; Luo C. et al., 2013]. Установлена взаимосвязь полиморфизма гена AHR со степенью тяжести эндометриоза [Denison M.S., Pandini A., 2002; Ziv-Gal A. et al., 2013]. Также были выполнены работы по исследованию связи полиморфного варианта Arg554Lys гена AHR с риском развития мужского бесплодия, однако ассоциаций полиморфизма с риском развития болезни не установлено [Watanabe et al., 2004]. У женщин-курильщиц носительниц дикого генотипа гена AНR рождались дети с пониженным весом и длиной тела, в сравнение с новорожденными детьми в группе некурящих [Sasaki S., 2004; Kobayashi S. et al., 2013]. Известно, что аллель 185Pro гена AHRR оказывает более слабое ингибирующее действие на ARNT, чем аллель 185Ala гена AНRR [Hideki fujita, 2002; Hung W.T. et al., 2013]. Согласно данным литературы, генотипы C/G и G/G 185 кодона в гене AНRR ассоциированы с риском развития эндометриоза [Tsuchiya et al., 2005; Asada et al., 2009]. Полиморфизм Pro185Ala гена AНRR также рассматривался в качестве маркера мужского бесплодия, вызванного диоксиновым воздействием [Hung W.T. et al., 2013; Kovac J.R., Pastuszak A.W., 2013]. Более того, негативный эффект обратной связи гена AНRR и диоксининдуцированного воздействия слабее выражен для носителей аллеля Pro 37 [Masanori Watanabe, 2004]. Также гомозиготы 185Pro гена AНRR увеличивают возможность При развития изучении синдрома полиморфизма микропениса [Fukami M.A., 2012]. G189C гена ARNT генотип GG гена ARNT ассоциирован с высокой индуцибельностью активности CYP1A2, а генотип CC ассоциирован с меньшей индукцией данного цитохрома [Hung W.T. et al., 2011]. Однако, согласно другим литературным данным, не было найдено статистически значимых корреляций для уровня активности CYP1A2, которая непосредственно находится под контролем комплеска транскрипционного AHR/ARNT [Julia Scheel, 2002]. Согласно исследованиям, проведенным в японской популяции, полиморфизм V189V гена ARNT был ассоциирован с риском развития незаращения твердого неба [Kayano S. et al., 2004]. Однако при анализе риска развития эндометриоза у женщин в китайской популяции для полиморфизма V189V гена ARNT не было обнаружено значимых ассоциаций [Wang y. f. et al., 2011]. CYP1A1 является ферментом 1-й фазы биотрансформации, который вовлечен в метаболизм многих ксенобиотиков, в том числе и ПАУ [Van Duursen M.B., 2005]. Цитохром P4501A1 катализирует гидроксилирование эстрадиола и арахидоновых кислот, образуя вазоактивные субстанции, что послужило основанием для рассмотрения фермента в качестве возможного кандидата предрасположенности к АГ [Lanca V. et al., 2002]. Так, полиморфизм Ile462Val гена CYP1A1 оказывает влияние на метаболизм эйкозапентаеновой кислоты, изменяя индивидуальную вариабельность метаболизма, увеличивая продукцию физиологически активных метаболитов жирных кислот в сердечнососудистой системе и печеночной ткани [Dieter Schwarz, 2005]. По данным исследования, женщины в постменопаузальном периоде при повышенной активности цитохома Р450 1А1 имели повышенный риск развития ГБ. Кроме того, носители дикого аллеля гена CYP1A1 и D аллеля гена ACE имели 38 повышенный риск развития ГБ в постменопаузальном периоде [Lanca V. et al., 2002]. Согласно данным исследования в Индии, вариантный генотип гена CYP1A1 был ассоциирован с повышенным риском развития мужского бесплодия в группе курильщиков и лиц, злоупотребляющих алкоголем [Vani G.T. et. al., 2009]. Генотип Ile/Ile462 гена CYP1A1 ассоциирован с риском развития дисменореи в группе пассивных курильщиц, в сравнении с группой некурящих [Hong Liu, 2007]. Генотип 462Val/Val гена CYP1A1 увеличивает риск рака женской репродуктивной системы [Aktas D., 2002, 2006; Murata M., 1998; Hung R.J., 2003; Esteller M., 1997; Cagatay Taskiran, 2006]. Еще одним ферментом цитохромом Р450 является CYP1A2. Экспрессируется фермент преимущественно в печени и играет важную роль в реакциях деметилирования кофеина [Butler M.A., 1998]. Кроме ПАУ данный цитохром вовлечен в метаболическую активацию множества токсичных и канцерогенных веществ (2-аминофлуорена, 3-амино-1-метил-5Н-пиридо [4,3-b]индола и 2-амино-1-метил-6-фенилимидазоло [4,5-б] пиридина) [Nakajima M., 1999]. Фермент цитохром Р450 1А2 может индуцироваться табачным дымом [Miki Nakajima, 1999; Nakajima M., 1996; Quattrochi L.C., 1994]. Ген CYP1A2 достаточно полиморфен. Обнаружено два частых полиморфизма (−2964GA, 154C<A) согласно исследованиям, которые могут быть связаны с изменением ферментативной активности [Corchero et al., 2001; Oscarson M. et al., 1999]. Более того, наличие полиморфизмов −2964GA, 154C<A гена CYP1A2 может влиять на скорость конъюгирования метаболитов ПАУ и определять чувствительность к данным метаболитам [Balakrishnan R., 2011]. Известно, что вариантный аллель полиморфизма 154C<A гена CYP1A2 способен увеличивать активность данного фермента в группе курильщиков [Tay J.K.X. et al., 2007]. Наличие аллеля С ассоциировано со сниженной индукцией и уменьшением ферментативной активности CYP1A2 [Guessous I. et al., 2012]. У 39 людей с длительным стажем курения вариантный аллель полиморфизма 154C<A гена CYP1A2 увеличивает токсичность соединений, вызывающих рак мочевого пузыря [Pavanello S. et al., 2005; Moonen H.S. et al., 2004]. Примечательно, что наличие генотипа 462Ile/Val гена CYP1A1 связано с повышенной активностью CYP1A2 у курильщиков и лиц, употребляющих сильно прожаренное мясо [Liu L. et al., 2013]. Многочисленные исследования показали, что женщины фертильного возраста с генотипом СС или СА полиморфизма 154С>A гена CYP1A2, употребляющие более 3 чашек кофе в день, имеют меньший объем груди и меньший риск заболевания рака молочной железы [Lowcock E.C. et al., 2013]. Причем женщины с мутацией гена BRCA1 и аллелем С полиморфизма 154С>A гена CYP1A2, употребляющие более 3 чашек кофе в день, имели на 64% ниже риск развития рака молочной железы [Wiseman A., 2005]. Ученые из Торонто опубликовали результаты, согласно которым полиморфизм гена CYP1A2 повышает риск возникновения инфаркта миокарда с каждой лишней выпитой чашкой кофе. Как выяснилось, у носителей аллеля 154С гена CYP1A2 (около 50% населения) кофеин метаболизируется в 4 раза медленнее, чем у носителей аллеля А. Поэтому С аллель полиморфизма 154С>A (варианты генотипа АС и СС) является показателем медленного метаболизма кофеина, а аллель А в гомозиготе – показателем быстрого метаболизма кофеина [Renda G. et al., 2012]. В исследовании, в котором приняло участие более 2000 больных, перенесших инфаркт миокарда, было показано, что употребление более 1 чашки кофе значительно повышает риск возникновения инфаркта миокарда у носителей аллеля 154А (2-3 чашки в день на 36%, более 3 - на 64%), в то время как количество выпитого кофе у носителей аллеля С с инфарктом миокарда не ассоциировалось [Amin N. et al., 2012]. Установлено также, что сигаретный дым может стимулировать увеличение количества иммунореактивных ферментов CYP1A2 в микросомах печени человека и увеличивют индекс активности 40 CYP1A2 [Nakajima M., 1999; Bartsch H., 1999; Hung W.T. et al., 2013]. Полиморфизм CYP1A2 ассоциирован с риском развития рака легких у курильщиков [Bernauer U., 2006] и развитием колоноректальной аденомы [Sachse C., 2003]. Фермент CYP1B1 метаболизирует эстрогены и отвечает за образование токсичных и канцерогенных ДНК-аддуктов [Nock N.L., 2007; Belous A.R., 2007]. В гене CYP1B1 функционально активным является полиморфизм Val432Leu. Было выявлено, что данный цитохром активирует ПАУ и диоксины, в результате чего образуются высокореактивные промежуточные метаболиты, их уровень образования наиболее повышен у носителей аллеля 432Val. Данный полиморфизм оказывает влияние на активность реакций гидроксилирования ксенобиотиков [Li D.N. et al., 2000]. В процессе метаболической активации ксенобиотиков (преимущественно ПАУ), фермент CYP1B1 обладает перекрывающей субстратной специфичностью с ферментом CYP1A1 [Shimada T., 2001] У носителей аллеля 432Val обнаруживается повышенное содержание 4- и 2гидроксил метаболитов ПАУ [Paracchini V., 2007]. Интересным также является тот факт, что при избытке поступления соли в организм CYP1B1 увеличивает риск развития дисфункции сердечно-сосудистой системы, а также ассоциирован с повышением концентрации катехоламинов в крови [Jennings B.L. et al., 2012]. Носители генотипов 432Leu/Val и Val/Val432 имеют повышенный риск развития миеломной болезни [Gold L.S. et al., 2009]. По данным исследования Paracchini et al., аллель Val полиморфизма Val432Leu гена CYP1B1 связан с повышенным риском развития рака легких [Paracchini V., 2007; Kato I. et al., 2009]. Аллель 432Val гена CYP1B1 ассоциирован с высоким риском развития рака [Shimada T., 2001]. Также имеются данные о том, что генотип 432 Val/Val гена CYP1B1 ассоциирован с повышенным риском раннего невынашивания беременности [Karypidis A-H., 2006]. Имеются данные о связи полиморфных вариантов гена CYP1B1 с развитием глаукомы [Бикбов М.М., 2010], почечно- 41 клеточным раком [Sasaki M., 2006]. Описаны варианты влияния данного фермента на развитие легочной гипертензии [Dempsie Y. et al., 2013]. NQO1 (хинон 1) - НАД(Ф)Н дегидрогеназа является гoмoдимерным ферментoм, кoтoрый oсуществляет каталитическое превращение хинoнoв в стабильные гидрoхинoны и предoтвращет образoвание пoтенциально тoксичных пoлухинoнoвых радикалoв. NQO1(хинон 1) инактивирует хиноны, которые образуются в процессе метаболизма бензола, тем самым регулируя процессы детоксикации бензола. Индукторами экспрессии гена NQО1 являются окислительный стресс, циклические ароматические углеводороды, вещества табачного дыма [Traver R.D. et al., 1997]. NQО1 опосредует превращение убихинона и хинона витамина Е в их активизированные антиоксидантные формы. Другим известным субстратом является β-L (3,4-дигидро-2,2-диметил-2ннафтоло[1,2-b] пуран-5,6-дион), способный ингибировать опухолевый рост [Pardee A.B., 2004]. В исследованиях на мышах было обнаружено, что β-L увеличивает соотношение NAD+/NADH через активацию NQO1. Более того, увеличенное соотношение NAD+/NADH в цитоплазме способно уменьшать степень ожирения у мышей и ингибировать пролиферацию гладкомышечных клеток артериальных сосудов у крыс [Kim S.Y., 2006]. Согласно работе YongHoon Kim, 2010, у крыс с моделированной АГ происходит увеличение соотношения NAD+/NADH в результате активации NQO1 через эндотелиальную NO-синтазу на снижение концентрации β-L. В другом исследовании на лабораторных крысах было обнаружено, что концентрация ACE регулируется под влиянием NQO1 и связана с уменьшением АД у гипертензивных крыс. Представленные результаты исследований могут свидетельствовать о том, что NQO1 может выступать в качестве модулирования активности АСЕ, тем самым оказывая влияние на уровень АД [Song S.Y. et al., 2010]. 42 Описаны два наиболее часто встречаемых полиморфизма в гене NQO1: P187S и R139W, характеризующиеся межпопуляционными различиями в частотах их аллелей [Kelsey K.T. et al., 1997]. Носители гетерозиготного генотипа 187PS характеризуются снижением ферментативной активности в 3 раза, в сравнении с носителями гомозиготного генотипа по дикому аллелю187PP, в то время как носители гомозоготного генотипа по вариантному аллелю характеризуются полным отсутствием ферментативной активност [Moran J.L. et al., 1999; Traver R.D., 1997]. Есть данные о том, что носители гомозиготного генотипа 187SS гена NQO1 характеризуются повышенным риском токсического воздействия бензола [Moran J.L. et al,. 1999]. Также существует ассоциация полиморфизма гена NQO1 с болезнью Паркинсона [Dardiotis E. et al., 2013], раком легкого [Guo S. et al., 2012] и пищевода [Yanling H. et al., 2013]. Таким образом, для многих экзогенных химических соединений КАГР является первичным медиатором их токсичности для органов и тканей, в том числе и для сердечно-сосудистой системы. Изучение генетического контроля над процессами регуляции биотрансформации ксенобиотиков посредством оценки полиморфных генов КАГР и ФБК позволит идентифицировать токсикогенетические механизмы формирования при гипертонической болезни в условиях современной техногенной цивилизации. 43 Глава II. Материалы и методы. II.1 Характеристика обследованных групп пациентов Объектом данного исследования явилась выборка индивидов русской национальности, не состоявших в родственной связи друг с другом и проживающих на территории преимущественно Курской области. В исследование был вовлечен 1151 человек. Объектами исследования были больные гипертонической болезнью и здоровые индивиды. В ходе исследования была сформирована выборка больных ГБ в количестве 602 индивидов, из которых 125 человек с ОНМК на фоне ГБ в анамнезе, а также 549 относительно здоровых лиц с нормальным артериальным давлением. Выборки больных и здоровых формировались сплошным методом. Критериями отбора пациентов в исследуемые группы были: отсутствие родственных связей между индивидами, руccкая нациoнальнoсть и проживание на территории Курской области. Формирование групп кардиологических и больных ГБ неврологических проводилось отделений на базах профильных областной клинической больницы города Курска и больницы скорой медицинской помощи города Курска в периоды 2003-2004 гг., 2008-2009 гг. и 2011-2012 гг. Включение пациентов в группу больных ГБ осуществлялось только после установления клиническими клинического диагноза заболевания, и лабораторно-инструментальными подтвержденного методами обследования. Критериями включения в группу больных ГБ были: 1) САД>140; ДАД>90; СМАД>130/80; 2) русская национальность; 3) проживание на территории ЦЧР. Критериями исключения являлись: 1) наличие патологических процессов, обусловливающих развитие симптоматических АГ; 2) наличие родства с уже обследованными. Контрольная выборка относительно здоровых лиц формировалась как из здоровых добровольцев, пациентов травматологического, отоларингологического, хирургических отделений областной клинической больницы города Курска, так и 44 при диспансерных осмотрах населения на предприятиях, из экспедиций в образовательных и других учреждениях г. Курска и Курской области. В контрольную группу включались индивиды при наличии следующих условий: нормальный уровень артериального давления и отсутствие хронических заболеваний. Характеристика обследованных групп пациентов по полу и возрасту представлена в таблице 1. Как видно из таблицы 1, группа больных ГБ соответствовала контрольной по половозрастным категориям (р>0,05). Таблица 1 Распределение обследованных групп по половозрастным категориям Контрольная группа Группа больных ГБ (n=602) ср. возраст (n=549) ср. возраст пол, n пол, n X± М Ж X± М Ж 55,6±12,3 352 250 55,5±11,7 332 217 р-уровень р-уровень значимости значимости по возрасту по полу 0,2 0,5 II.2 Характеристика методов исследования Подтверждение диагнозa ГБ и ее осложнений осуществлялось квалифицированными врачами кардиологами и неврологами на базе стационаров областной клинической медицинской помощи больницы города города Курска. Курска При и больницы клиническом скорой обследовании производили сбор жалоб, анамнеза vitae и morbi, описание объективного статуса. Окончательный клинический диагноз ГБ устанавливался в соответствии с клиническими рекомендациями ВНОК. С учётом возможности существования клинико-патогенетических особенностей течения ГБ [Евсиков А.П. с соавт., 2011], представлялось важным изучение генетических аспектов лабильной и стабильной форм артериальных гипертензий в отдельности. Верификация лабильной и стабильной форм АГ осуществлялась на основании анамнестических данных и результатов суточного мониторирования АД. Диагноз ОНМК у больных ГБ устанавливался на основании данных неврологического статуса, 45 компьютерной томографии или магнитно-резонансной томографии головного мозга. В исследование было включено 125 пациентов, перенесших ишемический мозговой инсульт на фоне гипертонической болезни. У всех пациентов осуществлялось клинико-генеалогическое исследование данных семейного анамнеза, а также с целью выявления факторов риска развития болезни (образ жизни, наличие вредных привычек, особенности питания и др.) прoвoдилoсь анкетирoвание пациентoв с испoльзoванием анкет, разрабoтанных на кафедре биoлoгии, медицинскoй генетики и экoлoгии ГБОУ ВПО КГМУ. Молекулярно-генетические методы У всех индивидов исследуемых выборок проводился забор экземпляров венозной крови объемом 5-10 мл в специальные пробирки с ЭДТА. Далее кровь хранилась в морозильных камерах при t=20С. В работе также использовались образцы ДНК биобанка кафедры биологии, медицинской генетики и экологии КГМУ, полученные от больных ГБ и здоровых индивидов за периоды обследования 2003-2004 гг. и 2008-2009 гг. Этапы выделения ДНК. Для проведения молекулярно-генетического эксперимента использовали главным образом импортные биоматериалы и реактивы высокой степени чистоты (ОСЧ и Biotechnology grade). Для выделения геномной ДНК использовали образцы замороженной крови обследованных индивидов. Процесс выделения выполнялся методом фенольно-хлороформной экстракции [Маниатис Т.С. и соавт., 1984]. Лейкоцитарную массу, осажденную дважды с Na-фосфатным буфером (pH=7,8) с помощью центрифугирования, затем лизировали ТЕ-буфером, протеиназой К и 0,4% додецилсульфатом натрия. Образовавшуюся клеточную суспенцию лизировали в термостате в течение 12 часов при поддержании температурного режима на уровне 42С. Далее проводилось 3-этапное выделение геномной ДНК из полученного клеточного лизата: первоначально использовался раствор фенола в соотношении 1:1 с 10 мМ Трис-HCl (рН=8,0), далее одинаковые объемы растворов фенола и хлороформа, 46 завершали данный этап добавлением раствора хлороформа. Тотальную ДНК преципитировали ледяным 96% этанолом, высушивали и растворяли в ТЕ-буфере для последующего хранения. Генотипирование проводилось ДНК-полиморфизмов. генотипирование 7 В полиморфизмов рамках исследования (SNP-маркеров) генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора (КАГР) и ферментов биотрансформации ксенобиотиков (ФБК): AHR (R554K), ARNT (V189V), AHRR (P185A), CYP1A1 (I462V), CYP1A2 (154C>A), CYP1B1 (V432L) и NQO1 (P187S). Выбор указанных генов связан с их непосредственным участием в передаче сигналов от ксенобиотиков через активацию транскрипционных факторов к промоторам данных генов ФБК с последующей индукцией их экспрессии. Для изучения межгенных взаимодействий дополнительно использовались результаты генотипирования различных генов-кандидатов ГБ, выполненного в генетической лаборатории кафедры биологии, медицинской генетики и экологии КГМУ в рамках ранее проведенных исследований [Полоников А.В., 2006; Солодилова М.А., 2010]: AGT (M235T, rs699), AGT (T174M, rs4762), AGTR1 (1166A/C, rs5186), ACE (I/D, rs4340), NOS3 (E298D, rs1799983), NOS3 (-786T>C, rs2070744), GNB3 (G814A/G272S, rs5442), GNB3 (C825T, rs5443), MPO (-463G>A, rs2333227), GSTM1 (+/del), GSTT1 (+/del) и GSTP1 (I105V, rs1695), CAT1 (-262C/T, rs1001179), ADD1 (G460W, rs4961), TGFB1 (R25P, rs1800471). Генотипирование ДНК-маркеров генов КАГР осуществлялось методом полимеразной цепной реакции в режиме реального времени и дискриминации аллелей с помощью TaqMan-зондов на амплификаторе CFX96 фирмы Bio-Rad (США). Для генотипирования каждого из ДНК-маркеров были подобраны соответствующие условия ПЦР. Для проведения ПЦР использовали реакционную смесь в количесвте 25 мкл. В состав используемой смеси входили следующие компоненты: геномная ДНК в количестве 1 мкл, концентрация ДНК составила 1520 нг/мл; раствор хлорида магния (25-55 мМ MgCl2); расвтвор смеси dNTP в 47 количестве 0,4 мкл (dATP, dCTP, dTTP и dGTP); по 0,1 мкл каждого праймера, по 0,05 мкл каждого TaqMan-зонда, 0,4 мкл Taq-полимеразы и деионизированная вода. Концентрация MgCl2 подбиралась путем титрования для каждого исследуемого ДНК-маркера. На рисунке 3 в качестве примера представлены результаты генотипирования полиморфизма R554K гена AHR методом ПЦР и аллельной дискриминации с помощью TaqMan-зондов. Для оценки качества генотипирования в отношении 10% образцов по каждому ДНК-маркеру было проведено повторное генотипирование, результаты которого полностью (100%) соответствовали первоначальным данным. Таблица 2 Структура праймеров и TaqMan-зондов, использованных для генотипирования ДНК-маркеров Ген CYP1A1 CYP1A2 CYP1B1 NQO AHR AHRR Полиморфизм (rs ID) Структура праймеров и TaqMan-зондов F: 5’-GСАTGGGCААGСGGАА-3’ I462V R: 5’-GССАGGAAGAGAAAGACCTCC-3’ (rs1048943) 5’- FAM-TCggTgAgАССАТTgCCCg-RTQ1-3’ 5’- ROX -ССgTgAgACCgТТgCCgC- BHQ2-3’ F: 5’-СТСАGATTCTGTGATGCTCAAAGG -3’ 154C>A R: 5’-ССАGAAAGACTAAGCTCCATCTACCA -3’ (rs762551) 5’- FAM-ТССTGG-LNA-GCCCACAGA -RTQ1-3’ 5’- ROX-CGТССTGT-LNA-GCCCAC –BHQ2-3’ F: 5’-TgТСААCCAgTggTCTgTgAATC -3’ V432L R: 5’-ТСАСTCTgCTggTCAggTCCTT-3’ (rs1056836) 5’- FAM-АССCAgTgAAgTgg-RTQ1-3’ 5’- ROX- АТgACCCACTgAAgTg-BHQ2-3’ F: 5’-TGСАТTTCTGTGGCTTCCAA -3’ P187S R: 5’-CTGGAGTGTGCCСААТGCTATA -3’ (rs1800566) 5’- FAM-ТСАGTTGAGATTCTAAG-RTQ1-3’ 5’- ROX-TGТСАGTTGAGGTTCT-BHQ2-3’ F: 5’-АААААCAgTgACTTgTACAgCATAATgA-3’ R554K R: 5’-СТgAAgTCAACCTCACCAgAAAAAT-3’ (G/A) 5’- FAM-TgААgACATCAgACACAT-RTQ1-3’ (rs2066853) 5’- ROX-AgАСАTCAAACACATgC- BHQ2-3’ F: 5’-AgACggATgТААTgCACCAgAA-3’ Pro185Ala R: 5’-AgАggCAgCgАТgTgTTATgg-3’ (rs2292596) 5’- FAM-TgggCAgСССCCCgCC-RTQ1-3’ Литературная ссылка [Harth et al., 2001] [Packer et al., 2004] [Bruening et al., 1999] [Packer et al., 2004] [Tsuchiya et al., 2005] [Tsuchiya et al., 2005] 48 ARNT 5’- ROX-TgggCAggСССCgCC-BHQ2-3’ F: 5’-TgCTgCCAAАСCATTCAgACT-3’ Val189Val R: 5’-ggAАСТgAAACATTTgATCTTggA-3’ (G/C) 5’- FAM-АСggAgTCAgAgACAT-RTQ1-3’ (rs2228099) 5’- ROX-CggAgТСАgACACATA-BHQ2-3’ [Tsuchiya et al., 2005] Рисунок 3 Генотипирование полиморфизма R554K гена AHR методом ПЦР и аллельной дискриминации с помощью TaqMan-зондов Методы генетико-статистической обработки данных Оценка соответствия распределений генотипов равновесию Харди- Вайнберга (РХВ) и сравненительный анализ распределений частот генотипов и аллелей в выборках больных и здоровых. Для анализа соответствия распределения исследуемых генотипов генов КАГР и ФБК ожидаемым значениям гетерозиготности при равновесии ХардиВайнберга (РХВ) и для сравнительного анализа распределения аллелей и частот генотипов исследуемых генов в ходе настоящего исследования использовали критерий 2 Пирсона [Вейр Б., 1995]. Для расчета показателя ожидаемой гетерозиготности использовали показатель Nei. Для расчета относительного отклонения ожидаемой гетерозиготности от наблюдаемой использовали 49 следующую формулу: D = (Ho-He)/He, где Ho - наблюдаемая гетерозиготность, He - ожидаемая гетерозиготность. Анализ ассоциации полиморфизмов генов КАГР и ФБК с предрасположенностью к ГБ. Сравнение частот аллелей и генотипов между различными группами осуществлялось в таблицах сопряженности 22 (df=1) с помощью критерия 2 с поправкой Йетса на непрерывность данных [Реброва О.Ю., 2003]. Ассоциации аллелей и генотипов с предрасположенностью к ГБ оценивали по показателю отношения шансов – odds ratio (OR) [Pearce N., 1993; Реброва О.Ю., 2003]. Если OR=1, то это определялось как отсутствие ассоциативной значении связи; при OR1 определялась положительная ассоциативная связь ДНК-маркера и исследуемой паотлогии в качестве «фактора риска»; значение OR1 расценивалось как наличие отрицательной ассоциативной связи ДНК-маркера с исследуемой патологий в качестве «фактора устойчивости». Для определения доверительного интервала 95%CI использовали метод B. Woolf. Анализ генно-средовых взаимодействий осуществлялся при сравнении показателей ОR, которые были рассчитаны в различных группах для каждого генотипа. При этом формирование групп осуществлялось в зависимости от наличия или отсутсвия изучаемого фактора внешней среды [Pearce N., 1993]. В качестве средового фактора, отражающего индивидуальный уровень экспозиции химических веществ на организм человека, использовалось курение. Анализ парных генных взаимодействий. Межгенные взаимодействия изучали путем сравнения парных сочетаний генотипов КАГР и ФБК, а также генотипов ферментов антиоксидантной системы и некоторых известных кандидатных генов ГБ. Расчет гаметических корреляций проводился по W.G. Hill [Hill W.G., 1974]. Расчет проводился с использованием метода максимального правдоподобия, при наличии частот генотипов в таблицах сопряженности 33. Важным требованием при 50 проведении данного анализа было наличие кодоминирования между изучаемыми полиморфизмами определенного гена Для статистического анализа полученных в ходе исследования данных использовался персональный компьютер с пакетом прикладных программ STАTISTIСА for Windоws v8.0 (StatSoft Inc., США) и MS Excel 2007. При уровне значимости p<0,05, полученные данные рассматривались как статистически значимые. 51 Глава III. ЧАСТОТЫ АЛЛЕЛЕЙ И ГЕНОТИПОВ КАГР И ФБК У РУССКИХ ЖИТЕЛЕЙ ЦЕНТРАЛЬНОЙ РОССИИ И ИХ СВЯЗЬ С ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТЬЮ К ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ III.1 Характеристика частот аллелей и генотипов генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации ксенобиотиков у русских жителей Центрального Черноземья В таблице 3 представлены данные по распределению генотипов полиморфизмов генов КАГР и ФБК и результаты анализа их соответствия равновесию Харди-Вайнберга в группе больных гипертонической болезнью. Таблица 3 Распределение частот генотипов полиморфизмов генов КАГР и ФБК их соответствие равновесию Харди-Вайнберга в общей выборке гипертонической болезнью Ген Полиморфизм Генотипы Распределени е генотипов N=602 1 2 3 554RR AHR R554K 554RK 554KK 185PP AHRR P185A 185PA 185AA 189GG ARNT G189C 189GC 189CC 462II CYP1A1 I462V 462IV 462VV 154CC CYP1A2 154C>A 154CA 154AA 432VV CYP1B1 V432L 432VL 432LL 187PP NQO P187S 187PS 187SS * - статистически значимые ассоциации % 4 486 104 11 192 281 126 227 290 84 501 94 5 63 232 307 111 294 197 371 196 33 81 17,1 1,8 32,1 46,9 21 37,8 48,2 14 84,1 15,6 0,3 10,5 38,5 51 18,4 48,8 32,8 61,8 32,7 5,5 Уровень гетерозиготности1 2 (p)2 Ho He 5 6 7 0,171 0,186 3,38* (р=0,05) 0,469 0,492 1,51 (p>0,05) 0,482 0,472 0,32 (p>0,05) 0,156 0,158 0,06 (p>0,05) 0,385 0,418 3,64 (p>0,05) 0,488 0,49 0,01 (p>0,05) 0,327 0,342 1,11 (p>0,05) 52 Установлено статистически значимое отклонение от равновесия ХардиВайнберга для полиморфизма R554K гена AHR (р=0,05), что обусловлено уменьшением показателя фактической гетерозиготности (0,171) в сравнении с показателем ожидаемого значения (0,186). В отношении остальных генов отклонений частот их генотипов от равновесия Харди-Вайнберга выявлено не было. Как следует из таблицы 3, частоты генотипов полиморфизмов генов КАГР и ФБК характеризовались широким разнообразием - уровень наблюдаемой гетерозиготности варьировал от 0,156 в полиморфизме I462V гена CYP1A1 до 0,488 в полиморфизме V432L гена CYP1B1. В таблице 4 представлены данные по распределению генотипов полиморфизмов генов КАГР и ФБК и их соответствие РХВ в контрольной группе. Распределение частот генотипов полиморфизма R554K гена AHR характеризовалось отклонением от равновесия Харди-Вайнберга (p=0,02), вследствие снижения уровня фактической гетерозиготности – 0,194 при ожидаемой гетерозиготности 0,219. Остальные полиморфизмы не имели статистически значимых отклонений от равновесия Харди-Вайнберга. Таблица 4 Распределение частот генотипов полиморфизмов генов КАГР и ФБК их соответствие равновесию Харди-Вайнберга в контрольной выборке Ген Полиморфизм Генотипы Распределение генотипов N=549 1 AHR 2 R554K AHRR P185A ARNT G189C 3 554RR 554RK 554KK 185PP 185PA 185AA 189GG 189GC 189CC % 4 425 106 15 166 273 108 228 248 73 77,8 19,4 2,8 30,4 49,9 19,7 41,5 45,2 13,3 Уровень гетерозиготности1 2 (p)2 Ho He 5 0,194 6 0,219 7 6,57* (р=0,02) 0,499 0,493 0,05 (p>0,05) 0,452 0,459 0,18 (p>0,05) 53 CYP1A1 I462V CYP1A2 154C>A 462II 462IV 462VV 154CC 154CA 154AA CYP1B1 V432L 432VV 432VL 432LL NQO P187S 187PP 187PS 187SS * - статистически значимые ассоциации 433 108 4 68 220 79,5 19,8 0,7 12,5 40,2 259 99 273 176 347 172 30 47,3 18 49,8 32,2 63,2 31,3 5,5 0,198 0,19 0,96 (p>0,05) 0,402 0,438 3,85 (p=0,05) 0,498 0,489 0,05 (p>0,05) 0,313 0,333 1,98 (p>0,05) В таблицах 5 и 6 представлены частоты аллелей и генотипов изучаемых полиморфизмов в группах больных ГБ и контроля в сравнении со средними популяционными частотами европеоидных популяций HapMap-CEU (dbSNP, Database of Short Genetic Variation), включающей европейцев, проживающих на территории восточной и северной Европы [Kitts A. et al, 2013]. Таблица 5 Сравнительный анализ частот аллелей контрольной группы настоящего исследования и средних популяционных частот исследуемых полиморфизмов Частоты генотипов Ген 1 Полиморфизм 2 AHR R554K AHRR P185A ARNT G189C CYP1A1 I462V CYP1A2 154C>A V432L CYP1B1 Генотипы Популяционная частота Контрольная группа % % 3 4 5 554R 554K 185P 185A 189G 189C 462I 462V 154C 154A 432V 432L 0,848 0,152 0,620 0,380 0,606 0,394 0,900 0,100 0,345 0,655 0,445 0,555 0,874 0,126 0,550 0,450 0,658 0,342 0,900 0,100 0,330 0,670 0,430 0,570 χ2 (p) 6 0,53 (0,47) 2,02 (0,16) 1,15 (0,28) 0,1 (0,75) 0,09 (0,76) 54 NQO P187S 187P 0,785 0,785 187S 0,215 0,215 - Таблица 6 Сравнительный анализ частот генотипов контрольной группы настоящего исследования и средних популяционных частот исследуемых полиморфизмов Ген Полиморфизм 1 2 AHR R554K AHRR P185A ARNT G189C CYP1A1 I462V CYP1A2 154C>A CYP1B1 V432L NQO P187S Генотипы Частоты генотипов ПопуляциКонтрольная онная группа частота 3 554RR 554RK 554KK 185PP 185PA 185AA 189GG 189GC 189CC % 4 0,814 0,177 0,009 0,386 0,404 0,24 0,405 0,405 0,189 % 5 0,778 0,194 0,028 0,304 0,499 0,197 0,415 0,452 0,113 462II 0,795 0,794 462IV 462VV 154CC 154CA 154AA 432VV 432VL 432LL 187PP 187PS 187SS 0,205 0,000 0,136 0,409 0,455 0,217 0,450 0,333 0,61 0,356 0,034 0,198 0,007 0,125 0,402 0,473 0,18 0,498 0,322 0,632 0,313 0,055 χ2 (p) 6 0,93 (0,33) 0,36 (0,24) 0,21 (0,65) 1,43 (0,23) 0,08(0,78) 1,28 (0,26) 0,12 (0,73) 0,61 (0,43) 2,42 (0,12) 0,08 (0,78) 0,02 (0,89) 0,04 (0,84) 0,5 (0,48) 0,5 (0,48) 0,02 (0,88) 0,08 (0,77) 0,36 (0,55) 0,42 (0,52) Установлено, что по частотам аллелей и генотипов исследуемых генов жители Курской области не отличались от таковых значений в других европеоидной популяции HapMap-CEU (dbSNP, Database of Short Genetic Variation), включающей европейцев, проживающих на территории восточной и северной Европы [Kitts A. et al, 2013]. 55 III.2 Анализ ассоциации полиморфизма генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации ксенобиотиков с предрасположенностью к гипертонической болезни Следующим этапом исследования было изучение ассоциаций аллелей и генотипов генов арилгидрокарбонового каскада и генов биотрансформации ксенобиотиков с риском развития гипертонической болезни. Результаты сравнительного анализа частот аллелей вышеописанных генов для группы с ГБ описаны в таблице 7. Исходя из данных, представленных в таблице 7, частоты аллелей полиморфных генов КАГР и ФБК у больных гипертонической болезнью не отличались от таковых в контрольной группе (p>0.05) Таблица 7 Распределение частот аллелей генов КАГР и ФБК у больных гипертонической болезнью и здоровых индивидов Ген Полиморфизм Аллели1 554R AHR R554K AHRR P185A 554K 185P 185A 189G ARNT G189C CYP1A1 I462V CYP1A2 154C>A 189C 462I 462V 154C 154A Частоты аллелей КонтрольБольные ГБ ная группа (n=602) (n=215) 0,895 0,875 0,105 0,125 0,555 0,445 0,619 0,381 0,913 0,087 0,297 0,703 CYP1B1 V432L 432L 0,429 0,571 NQO1 P187S 187P 187S 0,782 0,218 432V 1 0,553 0,447 0,641 0,359 0,894 0,106 0,325 0,675 0,430 0,570 0,789 0,211 χ2 (p) OR (CI 95%) 2,2 (0,12) 0,82 (0,641,06) 0,01 (0,92) 0,99 (0,841,17) 1,21 (0,27) 1,1 (0,93-1,3) 2,57 (0,11) 0,8 (0,6-1,05) 2,11 (0,15) 1,14 (0,961,36) 0 (0,95) 1 (0,85-1,19) 0,17 (0,68) 1,04 (0,851,27) Вариантные аллели (мутации) расположены в нижних ячейках описанных ДНК-маркеров. 56 Однако при анализе распределения частот аллелей генов КАГР и ФБК у больных ГБ в сравнении со здоровыми индивидами отмечаются тенденции в увеличении частоты аллеля 554R гена AHR (χ2 =2,20, p=0,12) и аллеля 154A гена CYP1A2 (χ2 =2,11, p=0,15). В таблице 8 продемонстрированы данные анализа сравнения частот генотипов исследуемых генов КАГР и ФБК в выборке больных ГБ и в контрольной выборке. Таблица 8 Распределение частот генотипов генов КАГР и ФБК у больных гипертонической болезнью и здоровых индивидов Частоты генотипов ПолиГенотипы морфизм Ген 1 2 AHR R554K AHRR P185A ARNT G189C CYP1A1 I462V CYP1A2 154C>A CYP1B1 V432L NQO1 P187S Больные ГБ (n=602) Контрольная группа (n=549) χ2 (p) n % n % 3 554RR 554RK 554KK 185PP 185PA 185AA 189GG 189GC 189CC 4 486 106 11 5 81 17,1 1,8 6 425 106 15 7 77,8 19,4 2,7 192 281 126 227 290 84 32,1 46,9 21,0 37,8 48,3 14,0 166 273 108 228 248 73 30,3 49,9 19,7 41,5 45,2 13,3 8 1,6 (0,21) 0,85 (0,36) 1,09 (0,3) 0,39 (0,53) 1,03 (0,31) 0,29 (0,59) 1,7 (0,19) 1,09 (0,3) 0,11 (0,74) 462II 501 94 5 63 232 307 111 294 197 371 196 33 83,5 15,7 0,8 10,5 38,5 51,0 18,4 48,8 32,7 61,8 32,7 5,5 433 108 4 68 220 259 99 273 176 347 172 30 79,4 19,8 0,7 12,4 40,2 47,3 18,1 49,8 32,1 63,2 31,3 5,5 3,12 (0,08) 3,38 (0,7) 0,04 (0,85) 1,1 (0,29) 0,34 (0,56) 1,53 (0,222) 0,03 (0,87) 0,11 (0,74) 0,05 (0,83) 0,23 (0,63) 0,24 (0,63) 0 (0,98) 462IV 462VV 154СС 154СA 154АА 432VV 432VL 432LL 187PP 187PS 187SS OR (CI 95%) 0,83 (0,62-1,1) 0,86 (0,64-1,17) 0,66 (0,3-1,45) 0,92 (0,72-1,19) 0,89 (0,7-1,12) 1,02 (0,81-1,44) 1,17 (0,92-1,48) 1,13 (0,9-1,43) 1,06 (0,76-1,48) 0,76 (0,57-1,03) 0,75 (0,55-1,02) 1,14 (0,3-4,25) 1,21 (0,84-1,75) 0,93 (0,74-1,18) 1,16 (0,92-1,46) 0,98 (0,72-1,32) 0,96 (0,76-1,21) 1,03 (0,8-1,32) 1,06 (0,83-1,35) 1,06 (0,83-1,36) 1,01 (0,61-1,67) Как и при сравнении частот аллелей, нами не были выявлены статистически значимые различия в частотах генотипов КАГР и ФБК между анализируемыми 57 группами пациентов (p>0,05). Отмечалась тенденция в уменьшении частоты генотипа 462II гена CYP1A1 в группе с гипертонической болезнью по сравнению группой контроля (χ2 =3,12 p=0,08), которая не достигла уровня статистической значимости, принятого в исследовании. III.3 Проявление полового диморфизма в ассоциациях генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации ксенобиотиков с предрасположенностью к гипертонической болезни Принято считать, что генетический вклад в развитие мультифакториальной патологии для обоих полов одинаков, однако норма реакции для проявления патологичного признака может существенно различаться у мужчин и женщин [Turner S.T., 1999; Weiss L.A., 2006]. В этой связи представлялось важным исследовать взаимосвязи полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК с предрасположенностью к гипертонической болезни раздельно у мужчин и женщин. В таблице 9 представлен сравнительный анализ частот аллелей между женщинами с гипертонической болезнью и здоровыми пациентками. При сравнительном анализе аллелей не было обнаружено статистически значимых ассоциаций. Таблица 9 Сравнительный анализ распределения частот аллелей полиморфных вариантов генов у больных гипертонической болезнью среди женщин Ген Полиморфизм AHR R554K AHRR P185A ARNT G189C CYP1A1 I462V CYP1A2 154C>A Аллели1 554R 554K 185P 185A 189G 189C 462I 462V 154С 154А Частоты аллелей КонтрольБольные ГБ ная группа (n=279) (n=217) 0,884 0,894 0,116 0,106 0,561 0,551 0,439 0,449 0,633 0,615 0,367 0,385 0,905 0,880 0,095 0,120 0,315 0,312 0,685 0,688 χ2 (p) OR (CI 95%) 0,27 (0,6) 1,11 (0,75-1,66) 0,11 (0,74) 0,96 (0,74-1,23) 0,32 (0,57) 0,93 (0,72-1,2) 1,61 (0,21) 0,77 (0,51-1,15) 0,81 (0,37) 0,89 (0,68-1,15) 58 CYP1B1 V432L NQO1 P187S 1 432V 432L 187P 187S 0,439 0,561 0,796 0,204 0,440 0,560 0,816 0,184 0 (0,98) 1,0 (0,78-1,29) 0,62 (0,43) 1,14 (0,83-1,56) Вариантные аллели (мутации) расположены в нижних ячейках описанных ДНК-маркеров. Обнаружено, что ни один из генотипов полиморфных вариантов КАГР и ФБК не ассоциировался с риском развития гипертонической болезни у женщин (таблица 10). Таблица 10 Распределение частот исследуемых генотипов полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК у больных с гипертонической болезнью и здоровых индивидов среди женщин Частоты генотипов Ген 1 AHR AHRR ARNT CYP1A1 ПолиГенотипы морфизм 2 R554K P185A G189C I462V 154C>A CYP1A2 CYP1B1 V432L Больные ГБ (n=279) Контрольная группа (n=217) N % n % χ2 (p) OR (CI 95%) 1,16 (0,74-1,82) 3 554RR 4 5 6 7 221 81,6 177 81,6 8 0,43 (0,51) 554RK 51 15,7 34 15,7 0,59 (0,44) 1,2 (0,75-1,94) 554KK 7 2,8 6 2,8 0,03 (0,86) 0,9 (0,3-2,73) 185PP 94 33,9 64 29,5 1,1 (0,29) 0,81 (0,56-1,19) 185PA 123 44,4 111 51,2 2,2 (0,14) 0,76 (0,53-1,09) 185AA 60 42 1,15 (0,74-1,79) 108 85 19,4 59 0,39 (0,53) 189GG 21,7 38,8 1,02 (0,71-1,47) 189GC 137 48,2 97 44 0,01 (0,92) 0,95 (0,33) 189CC 34 13 35 17 1,58 (0,21) 0,72 (0,43-1,2) 462II 227 81,7 167 77,3 0,77 (0,49-1,19) 462IV 49 17,6 46 21,3 1,42 (0,23) 1,05 (0,3) 462VV 2 0,7 3 1,4 0,54 (0,46) 0,5 (0,09-3,11) 154CC 36 12,9 27 12,6 0,01 (0,91) 0,97 (0,57-1,65) 154CA 154AA 104 139 37,3 49,8 80 108 37,2 50,2 0 (0,99) 432VV 53 42 432VL 139 19,0 49,8 19,4 49,1 106 0,01 (0,93) 0,02 (0,9) 0,03 (0,87) 1,19 (0,84-1,7) 0,79 (0,5-1,24) 1,0 (0,69-1,45) 0,98 (0,69-1,4) 1,03 (0,66-1,62) 1,03 (0,72-1,47) 59 NQO1 31,2 31,5 0,01 (0,94) 432LL 187PP 87 180 187PS 84 30,1 62 28,6 0,14 (0,53) 1,08 (0,73-1,59) 187SS 15 5,4 9 4,1 0,40 (0,53) 1,31 (0,56-3,06) P187S 64,5 68 146 67,3 0,41 (0,94) 0,99 (0,67-1,45) 1,13 (0,78-1,65) Затем нами был проведен сравнительный анализ частот аллелей и генотипов полиморфизмов генов КАГР и ФБК между группами больных ГБ и контроля среди мужчин. Данные анализа сравнения распределения частот аллелей изучаемых генов КАГР и ФБК в выборках больных ГБ и контроля продемонстрированы в таблице 11. Таблица 11 Сравнительный анализ распределения частот аллелей полиморфных вариантов генов у больных гипертонической болезнью среди мужчин Ген Полиморфизм AHR R554K AHRR P185A ARNT G189C CYP1A1 I462V CYP1A2 154C>A CYP1B1 V432L NQO1 P187S Аллели1 554R 554K 185P 185A 189G 189C 462I 462V 154C 154A 432V 432L 187P 187S Частоты аллелей КонтрольБольные ГБ ная группа (n=323) (n=332) 0,905 0,863 0,095 0,137 0,550 0,555 0,450 0,445 0,607 0,658 0,393 0,342 0,921 0,903 0,079 0,097 0,282 0,334 0,718 0,666 0,420 0,423 0,580 0,577 0,769 0,771 0,231 0,229 χ2 (p) OR (CI 95%) 5,62* (0,02) 1,5 (1,07-2,14) 0,03 (0,86) 1,02 (0,82-1,27) 3,66 (0,06) 1,25 (0,99-1,56) 1,32 (0,25) 0,8 (0,54-1,17) 4,25* (0,04) 1,28 (1,01-1,62) 0,02 (0,89) 1,02 (0,82-1,26) 0 (0,94) 1,01 (0,78-1,31) 11 Вариантные аллели (мутации) расположены в нижних ячейках описанных ДНК-маркеров. * - статистически значимые ассоциации Установлено, что отдельные полиморфизмы генов КАГР и ФБК ассоциировались с риском развития ГБ. Так, аллель 554R гена AHR был 60 ассоциирован с риском развития гипертонической болезни у мужчин (OR=1,5 95%CI 1,07-2,14 при р=0,02). В то же самое время аллель 154A гена CYP1A2 ассоциировался с риском развития заболевания (OR=1,28 95%CI 1,01-1,62 при р=0,04). Кроме того, аллель 189C гена ARNT ассоциировался с повышенным риском развития ГБ, но ассоциация не достигала уровня статистической значимости (χ2=3,66 p=0,06). Данные сравнения частот изучаемых генотипов в выборках больных ГБ и контроля продемонстрированы в таблице 12. Было установлено, что гомозиготный генотип по аллелю дикого типа 554RR гена AHR был ассоциирован с риском развития гипертонической болезни у мужчин (OR=1,54; 95%CI 1,04-2,22 при р=0,03). В отличие от аллелей, генотипы полиморфизма -154CA гена CYP1A1 не показали статистически значимых различий в их частотах между группами больных ГБ и здоровых мужчин. Тем не менее в отношении указанных генотипов наблюдалось увеличение частоты гомозиготного генотипа по аллелю дикого типа 154CC гена CYP1A2 в контрольной выборке (χ2=2,80, p=0,09), а гомозиготный генотип по аллелю вариантного типа 154АА преобладал в группе больных ГБ (χ2=2,79, p=0,09), которые не достигали статистической значимости. Таблица 12 Распределение частот генотипов полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК в выборке больных ГБ у мужчин Ген Полиморфизм Генотипы 1 AHR 2 R554K AHRR P185A 3 554RR 554RK 554KK 185PP G189C 185PA 185AA 189GG ARNT Частоты генотипов Больные ГБ Контрольная (n=323) группа (n=332) χ2 (p) OR (CI 95%) n % n % 4 265 53 4 98 5 82,3 16,5 1,2 30,4 6 248 72 9 102 7 75,4 21,9 2,7 30,9 8 4,66 (0,03)* 3,09 (0,08) 1,85 (0,17) 0,02 (0,9) 1,54 (1,04-2,22) 0,70 (0,47-1,04) 0,45 (0,14-1,47) 1,02 (0,73-1,43) 158 66 119 49,1 20,5 37,0 162 66 143 49,1 20,0 43,1 0,00 (1,0) 0,02 (0,87) 2,55 (0,11) 1,00 (0,73-1,36) 1,03 (0,7-1,5) 1,29 (0,94-1,77) 61 CYP1A1 I462V CYP1A2 154C>A CYP1B1 V432L NQO1 P187S 189GC 189CC 462II 153 50 274 47,5 15,5 85,1 151 38 266 45,5 11,4 80,9 0,27 (0,6) 2,34 (0,13) 2,07 (0,15) 1,09 (0,8-1,48) 1,42 (0,9-2,24) 0,74 (0,49-1,12) 462IV 462VV 154CC 154CA 154AA 432VV 432VL 432LL 187PP 187PS 187SS 45 3 27 128 168 58 155 110 191 112 18 14,0 0,9 8,4 39,6 52,0 18,0 48,0 34,1 59,5 34,9 5,6 62 1 41 140 151 57 167 108 201 110 21 18,8 0,3 12,3 42,2 45,5 17,2 50,3 32,5 60,5 33,1 6,3 2,81 (0,09) 1,05 (3,08) 2,80 (0,09) 0,44 (0,51) 2,79 (0,09) 0,07 (0,79) 0,35 (0,55) 0,17 (0,68) 0,07 (0,79) 0,22 (0,64) 0,15 (0,7) 0,70 (0,46-1,06) 3,08 (0,32-10,3) 1,54 (0,93-2,58) 0,90 (0,66-1,23) 1,30 (0,96-1,77) 0,95 (0,63-1,42) 0,91 (0,67-1,24) 1,07 (0,77-1,68) 1,04 (0,76-1,43) 1,08 (0,78-1,5) 0,88 (0,46-1,68) * - статистически значимые ассоциации Кроме того, отмечалось несколько тенденций в накоплении отдельных генотипов полиморфизмов генов КАГР и ФБК в группе больных гипертонической болезнью, в сравнении со здоровыми индивидами. В частности, наблюдалось увеличение частоты гомозиготного генотипа по аллелю дикого типа 189GG гена ARNT в группе больных ГБ (χ2=2,55, p=0,11). Отмечено также преобладание гетерозиготного генотипа 462IV гена CYP1A1 в контрольной группе (χ2=2,81, p=0,09) и гомозиготного генотипа по аллелю вариантного типа 462VV гена CYP1A1 в группе больных ГБ (χ2=1,05, p=3,08).Однако вышеописанные тенденции не достигали статистической значимости. Полученные результаты свидетельствуют о значимой роли отдельных полиморфных вариантов генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора (AHR R554K) и биотрансформации ксенобиотиков (CYP1A2 154CA) в формировании предрасположенности к гипертонической болезни у мужчин. Кроме того, полученные нами результаты указывают на генетические различия в предрасположенности к ГБ между мужчинами и женщинами и обосновывают концепцию полового диморфизма в подверженности мультифакториальным заболеваниям, типичным примером которого и является гипертоническая болезнь. 62 Глава IV. ИЗУЧЕНИЕ РОЛИ ГЕНОВ СИГНАЛЬНОГО КАСКАДА АРИЛГИДРОКАРБОНОВОГО РЕЦЕПТОРА И БИОТРАНСФОРМАЦИИ КСЕНОБИОТИКОВ В ВОЗРАСТНОЙ МАНИФЕСТАЦИИ И КЛИНИЧЕСКОМ ТЕЧЕНИИ ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ IV.1 Анализ ассоциации аллелей и генотипов полиморфизмов генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации ксенобиотиков с риском развития ГБ с учетом возраста манифестации заболевания Известно, существенные что для различия мультифакториальных в возрасте дебюта или заболеваний характерны манифестации болезни [Бочков Н.П., 2002]. Общепринятым в медицинской генетике является тот факт, что чем раньше в онтогенезе возникает заболевание, тем более выражен вклад генетической компоненты подверженности в его развитие. В этой связи большое значение приобретает выяснение молекулярно-генетических механизмов, которые лежат в основе возрастных различий в манифестации патологии. Учитывая вышеописанные особенности МФЗ, представлялось важным исследовать ассоциации полиморфизмов генов КАГР и ФБК с возрастом манифестации гипертонической болезни. Первостепенной задачей было определение пограничного возраста для разделения пациентов на группы с ранним и поздним дебютом болезни. Прежде всего нами был проведен анализ распределения возраста манифестации ГБ на нормальность с помощью статистического критерия Колмогорова-Смирнова. На рисунке 4 представлена кривая, характеризующая распределение возраста манифестации гипертонической болезни в изучаемой выборке больных ГБ. Распределение соответствовало критериям нормального распределения (p>0,05). На основании полученных данных нами был принят средний возраст манифестации ГБ - 35,211,5 лет. Далее нами был выбран пограничный возраст в 35 лет с целью формирования групп больных ГБ с ранним (до 35 включительно) и поздним (после 35) манифестом ГБ (рисунок 4). 63 Рисунок 4 Распределение больных гипертонической болезнью в зависимости от манифеста заболевания Возраст маниф естации ГБ 80 70 No. of obs. 60 50 40 30 20 10 0 0 10 20 30 40 50 60 X <= Cat egor y Boundar y Установленные границы возраста манифестации гипертонической болезни были использованы для анализа ассоциаций генов КАГР и ФБК с предрасположенностью к гипертонической болезни раздельно у больных с ранним и поздним дебютом заболевания. При этом анализ ассоциации проводился как в общей выборке пациентов, так и раздельно у мужчин и женщин, в связи с тем что нами были выявлены половые различия во взаимосвязях полиморфных генов КАГР и ФБК с риском возникновения изучаемой патологии. Ассоциации аллелей генов ФБК и КАГР с предрасположенностью к гипертонической болезни, достигшие статистической значимости, продемонстрированы в таблице 13. Было установлено, что аллель 554R гена AHR ассоциировался с риском развития ГБ с поздним дебютом заболевания у мужчин (OR=7,36; 95%CI 1,01-13,9). В полиморфизме -154CA гена CYP1A2 аллель 154A был ассоциирован с риском развития гипертонической болезни и с ранним манифестом (OR=1,6; 95%CI 1,643,91), и с поздним манифестом ГБ (OR=1,68; 95%CI 1,16-2,42). 64 Таблица 13 Ассоциации аллелей генов КАГР и ФБК с возрастом манифестации гипертонической болезни Аллели генов КАГР и ФБК Общая выборка OR 95%CI (P) до 35 лет после 35 лет n=102 n=94 Мужчины OR 95%CI (P) до 35 лет после 35 лет n=28 n=26 Женщины OR 95%CI (P) до 35 лет после 35 лет n=74 n=68 554R AHR 1,27 0,443,6 (0,66) 1,08 0,48-2,43 (0,86) 1,56 0,713,44 (0,27) 7,36 1,0113,9 (0,02)* 0,57 0,221,47 (0,24) 0,80 0,361,77 (0,58) 154A CYP1A2 1,6 1,643,91 (0,02)* 1,68 1,16-2,42 (0,01)* 1,02 0,472,23 (0,95) 0,50 0,142,85 (0,29) 0,47 0,171,3 (0,14) 0,54 0,191,55 (0,25) * - статистически значимые ассоциации В таблице 14 представлены ассоциации генотипов полиморфных генов КАГР и ФБК с предрасположенностью к гипертонической болезни, достигшие статистической значимости. Таблица14 Связи генотипов генов КАГР и ФБК с возрастом манифестации гипертонической болезни Генотипы генов КАГР и ФБК Общая выборка OR 95%CI (P) до 35 лет после 35 лет n=102 n=94 Мужчины OR 95%CI (P) до 35 лет после 35 лет n=28 n=26 Женщины OR 95%CI (P) до 35 лет после 35 лет n=74 n=68 554RR AHR 0,57 0,261,26 (0,17) 0,72 0,212,47 (0,62) 0,84 0,361,95 (0,69) 6,17 1,0912,4 (0,02)* 1,08 0,452,6 (0,87) 1,05 0,542,08 (0,88) 189GC ARNT 0,84 0,381,85 (0,94) 0,94 0,432,05 (0,88) 0,98 0,452,15 (0,96) 1,14 0,681,92 (0,61) 0,71 0,411,21 (0,84) 1,96 1,183,26 (0,005)* 154AA CYP1A2 3,6 2,3-6,72 2,06 1,303,24 (0,001)* 0,8 0,135,03 (0,52) 0,75 0,41,18 (0,18) 0,95 0,571,59 (0,74) 0,89 0,762,79 (0,78) (0,01)* * *- статистически значимые ассоциации 65 Установлено, что гетерозиготный генотип 554RR гена AHR был ассоциирован с повышенным риском развития гипертонической болезни у мужчин с возрастом манифестации заболевания после 35 лет (OR=6,17; 95%CI 1,09-12,4). Гетерозиготный генотип 189GC гена ARNT был ассоциирован с повышенным риском развития гипертонической болезни у женщин с поздним дебютом заболевания (OR=1,96; 95%CI 1,18-3,26). Гомозиготный генотип -154АА гена CYP1A2 возникновения ГБ был ассоциирован с увеличенным риском и в группе поздней манифестации заболевания (OR=2,06; 95%CI 1,30-3,24), и в группе ранней манифестации заболевания (OR=3,6; 95%CI 2,30-6,72). Таким образом, полиморфизмы генов КАГР и ФБК ассоциированы с возрастом дебюта заболевания как у мужчин, так и у женщин. IV.2 Анализ ассоциации аллелей и генотипов полиморфизмов генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации ксенобиотиков с особенностями клинического течения гипертонической болезни и развитием осложнений С целью изучения влияния генов КАГР и ФБК на характер течения ГБ общая группа больных была разделена на две подгруппы: группу пациентов с лабильной формой гипертонической болезни (лГБ) и группу больных со стабильной формой гипертонической болезни (сГБ) [Евсиков Е.М., 2011; Гуревич М.А., 2009]. В результате проведенного сравнительного анализа частот аллелей и генотипов статистически значимых ассоциаций с риском развития стабильной или лабильной форм гипертонической болезни найдено не было (результаты сравнительного анализа представлены в приложениях 2-5). С целью дальнейшей детализации результатов и оценки вклада изучаемых генов в развитие гипертонической болезни у мужчин и женщин было проведен стратифицированный анализ ассоциаций аллелей и генотипов в зависимости от формы течения гипертонической болезни. Проведенный анализ также не выявил 66 достоверных различий между изучаемыми группами. Результаты представлены в приложениях 2-5. Как известно, острое нарушение мозгового кровообращения является одним из внезапно развивающихся осложнений ГБ, которое непосредственно влияет на прогноз жизни и инвалидизацию трудоспособного населения. В этой связи представлялось крайне важной задачей исследования оценить взаимосвязь полиморфизмов изучаемых генов с риском развития мозговых инсультов. Для решения указанной задачи был проведен сравнительный анализ частот аллелей и генотипов полиморфизмов генов КАГР и ФБК между группами больных гипертонической болезнью, осложненными мозговыми инсультами и группами больных гипертонической болезнью без данного осложнения. Результаты сравнения частот аллелей полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК у больных ГБ с инсультом и с ГБ без инсульта продемонстрированы в таблице 15. Таблица 15 Сравнительный анализ частот аллелей полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК у больных с инсультом и без Ген Полиморфизм AHR R554K AHRR ARNT P185A G189C CYP1A1 I462V CYP1A2 154C>A CYP1B1 V432L NQO 1 P187S Аллели 554R 554K 185P 185A 189G 189C 462I 462V 154C 154A 432V 432L 187P 187S 1 Частоты аллелей Больные ГБ c Больные ГБ инсультом без инсульта n=126 n=476 0,905 0,893 0,095 0,107 0,579 0,549 0,421 0,451 0,683 0,602 0,317 0,398 0,925 0,910 0,075 0,090 0,333 0,288 0,667 0,712 0,417 0,432 0,583 0,568 0,776 0,783 0,224 0,217 χ2 (p) OR (CI 95%) 0,31 (0,58) 0,88 (0,55-1,4) 0,76 (0,38) 0,88 (0,67-1,17) 5,46* (0,02) 0,7 (0,52-0,95) 0,51 (0,47) 0,83 (0,49-1,39) 1,98 (0,16) 0,81 (0,6-1,09) 0,18 (0,67) 1,06 (0,8-1,41) 1,04 (0,75-1,46) Вариантные аллели (мутации) расположены в нижних ячейках описанных ДНК-маркеров. * - статистически значимые ассоциации 0,06 (0,81) 67 Из таблицы 15 следует, что только полиморфизм G189C (аллель 189C) гена ARNT ассоциировался с пониженным риском развития мозгового инсульта у больных гипертонической болезнью (OR=0,7; 95%CI 0,52– 0,95 p=0,02). Данные сравнения частот генотипов полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК у больных ГБ с и без инсульта продемонстрированы в таблице 16. Несмотря на то что аллели гена ARNT были ассоциированы с развитием инсульта на фоне ГБ, ни один из генотипов данного локуса не проявлял статистически значимых ассоциаций с риском развития инсульта. Однако было обнаружено, что гетерозиготный генотип 154CА CYP1A2 был ассоциирован с риском развития мозгового инсульта (OR=1,61; 95%CI 1,08-2,39 p=0,02). Таблица 16 Распределение частот генотипов полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК у больных с инсультом и без Ген Полиморфизм 1 AHR 2 R554K AHRR P185A ARNT G189C CYP1A1 I462V CYP1A2 154C>A Генотипы Частоты генотипов Больные ГБ Больные с ГБ с инсультом без инсульта n=126 n=476 χ2 (p) OR (CI 95%) n % n % 3 554RR 554RK 554KK 185PP 4 104 20 2 44 5 82,5 15,9 1,6 34,9 6 382 84 9 148 7 80,4 17,7 1,9 31,3 8 0,29 (0,59) 0,23 (0,63) 0,05 (0,82) 0,6 (0,44) 9 0,87 (0,52-1,45) 0,88 (0,52-1,5) 0,84 (0,18-3,91) 0,85 (0,56-1,28) 185PA 185AA 189GG 189GC 189CC 462II 58 24 57 58 11 108 46,0 19,0 45,2 46,0 8,7 85,7 223 102 170 232 73 393 47,1 21,6 35,8 48,8 15,4 82,9 0,05 (0,82) 0,38 (0,54) 3,78 (0,05) 0,31 (0,57) 3,65 (0,06) 0,57 (0,45) 0,96 (0,64-1,42) 0,86 (0,52-1,41) 0,67 (0,45-1,0) 0,89 (0,6-1,3) 0,53 (0,27-1,03) 0,81 (0,46-1,41) 462IV 462VV 154CC 154CA 154AA 17 1 11 60 55 13,5 0,8 9,5 47,6 42,9 77 4 51 172 253 16,2 0,8 11 36 53 0,57 (0,45) 0,00 (0,96) 0,15 (0,7) 5,55 (0,02)* 3,6 (0,06) 0,8 (0,46-1,42) 0,94 (0,1-8,49) 1,14 (0,59-2,21) 1,61 (1,08-2,39) 0,68 (0,46-1,01) 68 V432L 432VV 432VL 432LL 187PP 187PS 187SS CYP1B1 NQO P187S 19 67 40 1 296 62 15,1 53,2 31,7 0,3 82,6 17,4 92 227 157 2 152 32 19,3 47,7 33,0 1,1 82,6 17,4 1,2 (0,27) 1,2 (0,27) 0,07 (0,79) 0,22 (0,64) 0,46 (0,5) 0,15 (0,7) 1,35 (0,79-2,31) 1,25 (0,84-1,85) 0,95 (0,62-1,44) 1,10 (0,74-1,65) 1,15 (0,74-1,75) 0,84 (0,34-2,07) * - статистически значимые ассоциации Далее был проведен стратифицированный анализ ассоциации генотипов КАГР и ФБК с риском развития ГБ раздельно у мужчин и женщин. В таблице 17 приведены результаты анализа распределения частот аллелей полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК между группам мужчин больных ГБ в зависимости от наличия или отсутствия мозгового инсульта. Таблица 17 Сравнительный анализ частот аллелей полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК у больных с инсультом и без среди мужчин Ген Полиморфизм AHR R554K AHRR P185A ARNT G189C CYP1A1 I462V CYP1A2 154C>A CYP1B1 V432L NQO P187S 1 Аллели1 554R 554K 185P 185A 189G 189C 462I 462V 154C 154A 432V 432L 187P 187S Частоты аллелей Больные ГБ c Больные ГБ инсультом без инсульта n=73 n=250 0,904 0,906 0,096 0,094 0,589 0,538 0,411 0,462 0,685 0,584 0,315 0,416 0,938 0,916 0,062 0,084 0,295 0,278 0,705 0,722 0,411 0,422 0,589 0,578 0,743 0,777 0,257 0,223 χ2 (p) OR (CI 95%) 0 (0,96) 1,02 (0,54-1,91) 1,18 (0,28) 4,79 (0,03)* 0,81 (0,56-1,18) 0,65 (0,44-0,96) 0,80 (0,37) 0,71 (0,35-1,5) 0,06 (0,81) 1,05 (0,72-1,52) 0,06 (0,81) 1,05 (0,72-1,52) 0,73 (0,39) 1,21 (0,78-1,85) Вариантные аллели (мутации) расположены в нижних ячейках описанных ДНК-маркеров. * - статистически значимые ассоциации 69 Как и для общей выборки больных, для мужчин была характерна ассоциация аллеля 189C (OR=0,65, 95%CI 0,44–0,96 p=0,03). Исходя из данных таблицы 18, вариантный генотип 189CC (OR=0,33, 95%CI 0,13– 0,87 p=0,02) гена ARNT был ассоциирован со снижением риска развития инсульта на фоне ГБ. Носители гетерозиготного генотипа 154CA гена CYP1A2 имели более высокий риск развития мозгового инсульта на фоне гипертонической болезни в сравнении с носителями других генотипов данного локуса (OR=1,8; 95%CI 1,06-3,04 p=0,02). Таблица 18 Распределение частот генотипов полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК у больных с инсультом и без среди мужчин Ген Полиморфизм 1 AHR 2 R554K AHRR P185A ARNT G189C CYP1A1 I462V CYP1A2 154C>A CYP1B1 V432L NQO P187S Генотипы Частоты генотипов Больные ГБ c Больные ГБ инсультом без инсульта n=73 n=250 χ2 (p) OR (CI 95%) N % n % 3 554RR 554RK 554KK 185PP 4 59 14 0 25 5 80,8 19,2 0 34,4 6 206 39 4 73 7 82,7 15,7 1,6 29,3 8 0,14 (0,71) 0,51 (0,48) 1,19 (0,28) 0,65 (0,42) 9 1,14 (0,58-1,22) 1,28 (0,65-1,51) 0,8 (0,46-1,39) 185PA 185AA 189GG 189GC 189CC 462II 36 12 32 36 5 64 49,3 16,3 43,8 49,3 6,9 87,7 122 54 87 117 45 210 49 21,7 34,9 47 18,1 84,3 0,00 (0,96) 0,95 (0,33) 1,92 (0,17) 0,12 (0,73) 5,42* (0,02) 0,49 (0,48) 1,01 (0,6-1,71) 0,71 (0,36-1,41) 0,69 (0,4-1,17) 1,1 (0,65-1,85) 0,33 (0,13-0,87) 0,76 (0,35-1,65) 462IV 462VV 154CC 154CA 154AA 432VV 432VL 432LL 187PP 187PS 187SS 9 0 33 37 3 10 40 23 38 31 3 12,3 0 45,2 50,7 4,1 13,7 54,8 31,5 52,8 43 4,2 36 3 135 91 24 48 115 87 153 51 15 14,5 1,2 54 36,4 9,6 19,2 46 34,8 61,5 32,5 6 0,21 (0,64) 0,89 (0,35) 1,75 (0,19) 4,82* (0,03) 2,22 (0,14) 1,16 (0,28) 1,75 (0,19) 0,27 (0,6) 1,74 (0,19) 2,72 (0,1) 0,36 (0,55) 0,83 (0,38-1,82) 1,42 (0,72-8,48) 1,8 (1,06-3,04) 0,7 (0,42-1,19) 1,5 (0,72-1,13) 1,42 (0,84-2,4) 0,86 (0,49-1,51) 1,43 (0,84-2,42) 1,57(0,92-2,68) 0,68 (0,49-1,51) * - статистически значимые ассоциации 70 В таблице 19 приведены результаты сравнительного анализа частот аллелей, в таблице 20 - генотипов больных ГБ с мозговым инсультом у женщин на фоне гипертонической болезни с и без инсульта. Как следует из таблиц, у женщин не было выявлено достоверных различий в группе больных гипертонической болезнью, осложненной инсультом, и группе больных гипертонической болезнью без инсульта. Хотя статистически значимых ассоциаций аллелей с риском развития инсульта на фоне гипертонической болезни у женщин не наблюдалось, была отчетливо выражена тенденция в накоплении аллеля -154A гена CYP1A2 в группе больных ГБ, перенесших мозговой инсульт (OR=0,68; 95%CI 0,43-1,05 p=0,08), не достигшая статистической значимости. Таблица 19 Сравнительный анализ частот аллелей полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК у больных с инсультом и без среди женщин Ген Полиморфизм AHR R554K AHRR P185A ARNT G189C CYP1A1 I462V CYP1A2 154C>A CYP1B1 V432L NQO P187S 1 Аллели1 554R 554K 185P 185A 189G 189C 462I 462V 154C 154A 432V 432L 187P 187S Частоты аллелей Больные ГБ c Больные ГБ инсультом без инсульта n=53 n=226 0,906 0,878 0,094 0,122 0,566 0,560 0,434 0,440 0,679 0,622 0,321 0,378 0,906 0,904 0,094 0,096 0,613 0,701 0,387 0,299 0,821 0,790 0,179 0,210 0,821 0,790 0,179 0,210 χ2 (p) 0,62 (0,43) 0,01 (0,91) 1,22 (0,27) 0,00 (0,97) 3,09 (0,08) 0,11 (0,74) 0,51 (0,48) OR (CI 95%) 0,75 (0,37-1,53) 0,98 (0,64-1,5) 0,78 (0,49-1,22) 0,99 (0,48-2,03) 0,68 (0,43-1,05) 1,08 (0,7-1,65) 0,82 (0,48-1,42) Вариантные аллели (мутации) расположены в нижних ячейках описанных ДНК-маркеров. 71 Таблица 20 Распределение частот генотипов полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК у больных с инсультом и без среди женщин Частоты генотипов Больные ГБ c Больные ГБ Полиинсультом без инсульта Генотипы морфизм n=53 n=226 Ген 1 2 AHR R554K AHRR P185A ARNT G189C CYP1A1 I462V CYP1A2 154CA CYP1B1 V432L NQO P187S χ2 (p) OR (CI 95%) N % n % 3 554RR 554RK 554KK 185PP 185PA 185AA 189GG 189GC 189CC 4 45 6 2 19 22 12 25 22 6 5 84,9 11,2 3,9 35,8 41,5 22,3 47,1 41,5 11,4 6 176 45 5 75 101 48 83 115 28 7 77,8 19,9 2,3 33,4 45 21,6 36,7 50,8 12,5 8 1,29 (0,26) 2,12 (0,15) 0,43 (0,51) 0,11 (0,74) 0,22 (0,64) 0,04 (0,85) 1,97 (0,16) 1,51 (0,22) 0,05 (0,83) 9 0,63 (0,28-1,41) 0,51 (0,21-1,28) 1,73 (0,33-9,19) 0,9 (0,48-1,68) 0,86 (0,47-1,59) 1,07 (0,52-2,2) 0,65 (0,36-,19) 0,68 (0,37-1,25) 0,9 (0,35-2,3) 462II 44 83 183 81,3 0,89 (0,4-1,97) 462IV 462VV 154CC 154CA 154AA 432VV 432VL 432LL 187PP 187PS 187SS 8 1 9 15,1 1,9 17,0 43,4 39,6 16,9 50,9 32,2 69,8 24,5 5,7 41 1 27 18,2 0,5 11,9 35,8 52,2 19,4 49,5 30,1 63,2 31,4 5,4 0,08 (0,78) 0,29 (0,59) 1,25 (0,26) 0,97 (0,33) 1,05 (0,31) 2,72 (0,1) 0,17 (0,68) 0,03 (0,86) 0,02 (0,88) 0,8 (0,37) 0,97 (0,33) 0,01 (0,92) 23 21 9 27 17 37 13 3 81 118 44 112 70 143 71 12 0,80 (0,35-1,82) 4,31 (0,27-20) 0,66 (0,29-1,51) 1,37 (0,75-2,52) 0,60 (0,33-1,51) 1,18 (0,54-2,6) 1,06 (0,58-1,92) 1,05 (0,55-2,0) 0,75 (0,39-1,42) 0,71 (0,36-1,41) 1,07 (0,29-3,93) Далее был проведен сравнительный анализ больных ГБ с инсультом и без инсульта в зависимости от формы клинического течения заболевания. Данный анализ был также проведен раздельно для мужчин и женщин (результаты приведены в приложениях 6 - 17). Что касается гена CYP1A2, то его гетерозиготный генотип 154CA был ассоциирован с повышенным риском развития инсульта на фоне лабильной формы артериальной гипертензии в группе мужчин (OR=2,31; 95%CI 1,02-5,25), также существует статистически 72 достоверная ассоциация с повышенным риском возникновения инсульта на фоне стабильной формы гипертонической болезни у всех больных (OR=2,02; 95%CI 1,14-5,58). Вариантный генотип 154АА увеличивал риск развития инсульта на фоне ГБ в группе женщин со стабильной формой ГБ (OR=2,1; 95%CI 1,01-4,36). Дикий генотип 154СС был ассоциирован со снижением риска развития инсульта на фоне ГБ у мужчин со стабильной формой ГБ (OR=0,15 95%CI 0,03-0,75). Генотип 189СС гена ARNT проявлял ассоциацию со снижением риска развития инсульта у мужчин со стабильной формой течения ГБ (OR=0,19; 95%CI 0,05-0,76). Гетерозиготный генотип 554RK гена AHR у женщин характеризовался протективным действием в отношении развития мозговых инсультов на фоне стабильной формы ГБ (OR=0,36; 95%CI 0,13-0,99). Следующим этапом нашего исследования был анализ ассоциации генов КАГР и ФБК с риском развития таких осложнений ГБ, как гипертофия миокарда левого желудочка и гипертоническая энцефалопатия (таблица 21). Согласно полученным результатам, полиморфизм I462V гена CYP1A1 статистически значимо ассоциирован с риском развития ГМЛЖ на фоне ГБ. Таблица 21 Анализ взаимосвязи полиморфизмов генов КАГР и ФБК с риском развития осложнений на фоне гипертонической болезни (логистический регрессионный анализ) Ген Полиморфизм AHR R554K AHRR ARNT CYP1A1 P185A G189C I462V CYP1A2 154C>A Гипертрофия миокарда левого желудочка сердца χ2 Вальда (p) OR (CI 95%) 1,54(0,21) 0,30(0,042,2) 0,31(0,57) 0,6(0,1-2,9) 0,21(0,64) 1,4(0,2-7,5) 4,14 (0,03)* 0,2(0,040,9)* 0,06(0,80) 1,2(0,3-4,8) Гипертоническая энцефалопатия 2 χ Вальда (p) OR (CI 95%) 0,37(0,52) 0,4(0,5-1,9) 0,30(0,58) 0,13(0,71) 0,43(0,51) 0,7(0,2-2,8) 1,3(0,4-5,8) 1,5(0,5-4,7) 2,81(0,09) 2,7(0,8-9,4) 73 CYP1B1 V432L 0,01 (0,89) NQO P187S 0,39(0,52) * - статистически значимые ассоциации + 1,1(0,2-4,6) 0,6(0,1-2,9) 0,75(0,38) 0,04(0,83) 0,5(0,1-2,2) 0,8(0,2-4,3) 74 Глава V. АНАЛИЗ МЕЖГЕННЫХ И ГЕННО-СРЕДОВЫХ ВЗАИМОДЕЙСТВИЙ В ФОРМИРОВАНИИ ПРЕДРАСПОЛОЖЕННОСТИ К ГИПЕРТОНИЧЕСКОЙ БОЛЕЗНИ V.1 Анализ ассоциации парных комбинаций генотипов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации ксенобиотиков, а также других генов-кандидатов гипертонической болезни Известно, что полигенная наследственная предрасположенность, которая характерна для многих мультифакториальных патологий, характеризуется взаимодействием аллельных вариантов определенных генов [Фогель Ф., Мотульски А., 1990; Бочков Н.П., 2002; Пузырев В.П., 2003]. Однако заболевание возникает при суммированном эффекте сочетания генов с факторами окружающей среды. Многочисленные комбинации аллелей различных генов ферментов КАГР и ФБК являются факторами, определяющими уникальность каждого человека, проявляющейся индивидуальными особенностями реакции организма на действие средовых факторов. В этой связи анализ сопряженности между генами КАГР и ФБК позволит выявить особенности межлокусных взаимодействий, характерных для гипертонической болезни. При изучении сочетаний генов определяются аспекты взаимодействия полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК между больными гипертонической болезнью с учетом выявленного полового диморфизма и без него (в общей группе). В таблице 22 представлены статистически значимые ассоциации межгенных взаимодействий генотипов генов КАГР и ФБК с развитием гипертонической болезни у всей выборки пациентов. Были обнаружены 73 комбинации, которые в разной степени и в разной направленности были ассоциированы с риском развития ГБ. Наиболее значимые из них 22: AHR 554RR x GSTT1del (OR=2,9), ARNT 189GG x GSTT1del (OR=2,83), ARNT 189GC x GSTT1del (OR=2,8), CYP1B1 432VL x GSTT1del (OR=2,6), CYP1A2 154CC x AGTR 1166AC (OR=2,7), CYP1A2 154CC x GSTT1del (OR=2,7), CYP1A2 154CA x 75 GSTT1del (OR=2,5), NQO 187PP x GSTT1del (OR=2,8), CYP1A1 462II x GBN3_814GG (OR=2,01). Все вышеперечисленные комбинации увеличивали риск ГБ более чем в 2 раза при достоверности р<=0,001. Сочетания генотипов: AHR 554KK x GSTT1 + (OR=0,08), ARNT 189GG x AGTR 1166AA (OR=0,45), ARNT 189GG x СYP1A1 462IV (OR=0,52), CYP1A1 462IV x GSTT1 + (OR=0,37), CYP1A1 462IV x ADD1 460GG (OR=0,31), CYP1A1 462IV x NOS3_786TT (OR=0,23), CYP1A1 462IV x AGT 235TM (OR=0,31), CYP1A2 154CA x GSTT1 + (OR=0,55) наоборот, снижением риска развития ГБ более чем в 2 раза при достоверности р<=0,001. Подробные результаты представлены в таблице 22. Таблица 22 Ассоциации межгенных взаимодействий генотипов генов КАГР и ФБК с предрасположенностью к гипертонической болезни у всей выборки № 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 Комбинации генотипов AHR 554RR x CYP1A1 462II AHR 554RR x MLR 4582AA AHR 554RR x GSTP 105 II AHR 554RR x GSTP 105 IV AHR 554RR x GSTT1 + AHR 554KK x GSTT1 + AHR 554RR x GSTT1del AHRR 185PP x CYP1A2 -154CC AHRR 185PA x AGTR 1166AA AHRR 185PA x AGT 235MM AHRR 185PA x AGT 235TT AHRR 185PP x GSTT1del AHRR 185PA x GSTT1del ARNT 189GG x CYP1A1 462IV ARNT 189GG x AGTR 1166AA ARNT 189GGx GBN3_825CC ARNT 189GCx GBN3_825CC ARNT 189GGx NOS3_298EE ARNT 189GCx NOS3_298EE ARNT 189GC x AGT 235TT ARNT 189GCx GSTP 105 IV ARNT 189GGx GSTT1 +(1) ARNT 189GG x GSTT1del ARNT 189GC x GSTT1del N 406 22 60 88 139 9 25 106 46 10 29 9 18 52 33 21 49 30 55 28 61 85 40 56 % N % 67,8 12,2 30,2 44,2 65,6 3,8 11,8 17,7 25,7 5,6 16,2 4,3 8,5 9,6 18,2 11,6 27,1 16,6 30,4 15,5 30,7 26,1 12,3 17,2 330 29 84 71 174 1 91 70 52 18 11 34 48 31 45 29 23 37 25 7 41 74 10 17 61,0 21,5 39,6 33,5 53,4 0,3 27,9 12,9 38,5 13,3 8,1 10,5 14,8 5,2 33,3 21,5 17,0 27,4 18,5 5,2 19,3 34,9 4,7 8,0 Критерий OR (95%CI) различий, 2 (p) 5,71 (0,02) 1,35 (1,05-1,72) 4,97 (0,03) 0,51 (0,28-0,93) 4,05 (0,04) 0,66 (0,44-0,99) 4,98 (0,03) 1,57 (1,06-2,35) 7,85 (0,01) 0,60 (0,42-0,86) -5 9,39 (4,9х10 ) 0,08 (0,01-0,63)* 4 19,74 (2,1х10 ) 2,90 (1,79-4,69)* 5,10 (0,02) 1,46 (1,05-2,02) 5,89 (0,02) 0,55 (0,34-0,89) 5,69 (0,02) 0,38 (0,17-0,86) 4,49 (0,03) 2,18 (1,05-4,54) 6,71 (0,01) 2,63 (1,24-5,61) 4,67 (0,03) 1,86 (1,05-3,30) -5 8,13 (3,5х10 ) 0,52 (0,33-0,82)* 9,49 (8,3х10-4) 0,45 (0,27-0,75)* 5,67 (0,02) 0,48 (0,26-0,89) 4,43 (0,04) 1,81 (1,04-3,15) 5,43 (0,02) 0,53 (0,31-0,91) 5,76 (0,02) 1,92 (1,12-3,29) -8 8,3 (8,4х10 ) 3,35 (1,41-7,92)* 7,04 (0,01) 1,84 (1,17-2,91) 4,81 (0,03) 0,66 (0,45-0,96) -7 8,69 (3,4х10 ) 2,83(1,38-5,78)* 9,19 (2,3х10-4) 2,8(1,34-4,22)* 76 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 39 40 41 42 43 44 45 46 47 48 49 50 51 52 53 54 55 56 57 58 59 60 61 62 63 64 65 66 67 CYP1A1 462II x CYP1B1 432LL CYP1A1 462IVx CYP1B1 432LL CYP1A1 462IV x NQO 187PP CYP1A1 462IV x CYP1A2 154CA CYP1A1 462II x ADD1 460GG CYP1A1 462IV x ADD1 460GG CYP1A1 462II x GBN3_814GG CYP1A1 462IV x GBN3_814GG CYP1A1 462IIx GBN3_825CC CYP1A1 462IVx GBN3_825CC CYP1A1 462IVx NOS3_298EE CYP1A1 462IVx NOS3_298ED CYP1A1 462IV x NOS3_786TT CYP1A1 462IVx AGT 174TT CYP1A1 462IV x AGT 235TM CYP1A1 462IIx AGT 235MM CYP1A1 462IIx MLR 4582CC CYP1A1 462IVx MLR 4582AC CYP1A1 462IV x GSTM 1+ CYP1A1 462II x GSTP 105 IV CYP1A1 462II x AGTR 1166AC CYP1A1 462IV x AGTR 1166AA ( CYP1A1 462II x ACE ID CYP1A1 462IV x GSTT1 + CYP1A1 462II x GSTT1del CYP1A2 154CCx AGTR 1166AC CYP1A2 154CCx NOS3_298EE CYP1A2 154CAx NOS3_786TT CYP1A2 154CCx AGT 235TT CYP1A2 154CCx TGFB 25RR CYP1A2 154CAx TGFB 25RP CYP1A2 154CA x GSTT1 + CYP1A2 154CCx GSTT1del CYP1A2 154CA x GSTT1del CYP1A2 154CC x GSTP 105 IV CYP1A2 -154CAx GSTP 105 II CYP1B1 432VV x CYP1A2 154CC CYP1B1 432LL x AGT 235MM CYP1B1 432VL x GSTT1del NQO 187PP x AGT 235TT NQO 187PP x AGTR 1166AC NQO 187PS x GSTP 105 II NQO 187PP x GSTT1del 168 25 57 36 104 17 138 28 71 8 15 12 7 18 14 43 52 16 24 86 70 19 84 49 28 43 51 15 29 86 6 84 14 12 52 26 57 28,0 4,2 9,5 6,0 57,5 9,4 76,2 15,5 39,2 4,4 8,3 6,6 3,9 9,9 7,7 23,8 28,7 8,8 7,4 43,2 38,7 10,5 46,4 23,1 13,2 23,8 28,2 8,3 16,0 47,5 3,3 39,6 6,6 5,7 26,1 13,1 9,5 123 51 77 50 59 34 83 37 33 29 24 18 20 28 29 19 24 24 28 66 32 28 45 33 89 14 24 21 11 79 19 86 52 43 37 50 34 22,7 9,4 14,2 9,2 43,7 25,2 61,5 27,4 24,4 21,5 17,8 13,3 14,8 20,7 21,5 14,1 17,8 17,8 13,2 31,1 23,7 20,7 33,3 10,1 27,3 10,4 17,8 15,6 8,1 37,3 9,0 26,4 16,0 13,2 17,5 23,6 6,2 4,30 (0,04) 12,54 (9,1х10-7) 5,88 (0,02) 4,25 (0,04) 5,86 (0,02) 14,25 (7,2х10-6) 8,01 (4,3х10-4) 6,74 (0,01) 7,65 (0,01) 6,77 (0,01) 6,44 (0,01) 4,04 (0,04) 11,86 (5,7х10-8) 7,25 (0,01) 12,43 (4,1х10-4) 4,60 (0,03) 5,08 (0,02) 5,59 (0,02) 5,03 (0,02) 6,43 (0,01) 7,93 (3,9х10-6) 6,41 (0,01) 5,47 (0,02) 16,78 (2,8х10-8) 14,99 (3,1х10-6) 9,37 (5,2х10-5) 4,62 (0,03) 4,05 (0,04) 4,34 (0,04) 4,21 (0,04) 5,23 (0,02) 10,42 (4,7х10-4) 10,43 (7,3х10-5) 7,94 (8,6х10-5) 4,56 (0,03) 7,54 (0,01) 4,09 (0,04) 1,33 (1,02-1,74) 0,42 (0,26-0,69)* 0,64 (0,44-0,92) 0,63 (0,40-0,98) 1,74 (1,11-2,73) 0,31 (0,16-0,58)* 2,01 (1,24-3,27)* 0,48 (0,28-0,84) 2,00 (1,22-3,27) 0,17 (0,07-0,38) 0,42 (0,21-0,83) 0,46 (0,21-0,99) 0,23 (0,09-0,56)* 0,42 (0,22-0,80) 0,31 (0,15-0,61)* 1,90 (1,05-3,44) 1,86 (1,08-3,22) 0,45 (0,23-0,88) 0,52 (0,29-0,93) 1,68 (1,12-2,52) 2,03 (1,24-3,34)* 0,45 (0,24-0,84) 1,73 (1,09-2,75) 0,37 (0,23-0,61)* 2,47 (1,55-3,93)* 2,69 (1,41-5,16)* 1,81 (1,05-3,14) 0,49 (0,24-0,99) 2,15 (1,03-4,48) 1,52 (1,02-2,28) 0,35 (0,14-0,89) 0,55 (0,38-0,79)* 2,68(1,45-4,98)* 2,53 (1,30-4,92)* 1,67 (1,04-2,69) 0,49 (0,29-0,82) 1,57 (1.01-2,44) 8 16 36 57 22 16 4,4 7,5 19,9 31,5 11,1 7,5 14 57 15 26 41 60 10,4 17,5 11,1 19,3 19,3 18,5 4,23 (0,04) 0,40 (0,16-0,98) 10,82 (9,2х10-4) 2,60 (1,45-4,66)* 4,40 (0,04) 1,99 (1,04-3,80) 5,97 (0,01) 1,93 (1,13-3,28) 5,43 (0,02) 0,52 (0,30-0,91) -6 12,58 (2,2х10 ) 2,77 (1,55-4,96)* Далее был проведен стратифицированный анализ в группах мужчин и женщин. 77 В таблице 23 представлены статистически значимые ассоциации межгенных взаимодействий генотипов генов КАГР и ФБК с развитием гипертонической болезни у мужчин. Были обнаружены 43 ассоциации с ГБ. Наиболее значимые из них 10, сочетания которых увеличивали риск развития заболевания в 2 и более раза при p<=0,001 были следующими: AHR 554RR x GSTT1 del (OR=3,9), ARNT 189GG x GSTT1 del (OR=5,51), ARNT 189GC x GSTT1 del (OR=3,11), CYP1A1 462II x GSTT1 del (OR=3,7), CYP1B1 432VL x GSTT1 del (OR=3,8), CYP1A1 462II x ADD1 460GW (OR=3,06), CYP1A2 154CCx AGT 235TT (OR=6,50). Другие комбинации более чем в 2 раза при p<=0,001 снижали риск развития ГБ у мужчин: ARNT 189GG х CYP1A1 462IV (OR=0,37), CYP1A1 462IV x GSTT1 + (OR=0,37), AHRR 185PA x AGT 253MT (OR=0,26), Таблица 23 Ассоциации межгенных взаимодействий генотипов генов КАГР и ФБК с предрасположенностью к гипертонической болезни в группе мужчин № 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 Комбинации генотипов AHR 554RR х CYP1A1 462II AHR 554RR x CYP1A2 -154CC AHR 554RR х ADD1 460GG AHR 554RRx GSTP 105VV AHR 554RR x GSTT1 del AHR 554RRx GSTT1+ AHRR 185AA x ACE DD AHRR 185PA x AGT 253MT AHRR 185PA x AGT 253TT ARNT 189GG х CYP1A1 462IV ARNT 189CC x NQO 187PS ARNT 189GG x AGTR 1166AA ARNT 189GG x GNB3_825CC ARNT 189GC x GNB3_825CC ARNT 189GC x AGT 235TT ARNT 189GG x GSTT1 del ARNT 189GC x GSTT1 del CYP1A1 462IV x CYP1B1 432LL CYP1A1 462IV х CYP1A2 -154CA CYP1A1 462II x ADD1 460GW CYP1A1 462II x GNB3_825CC N 195 138 18 8 13 79 6 7 14 36 12 11 4 15 8 4 9 13 14 78 22 % N % 60,0 42,9 34,6 11,4 10,8 65,8 11,5 13,5 26,9 11,0 3,6 21,2 7,7 28,8 15,4 3,3 7,5 4,0 4,3 60,5 42,3 225 110 13 4 47 74 1 27 6 14 23 28 17 10 2 23 29 28 29 21 17 70,1 33,5 18,1 3,3 32,6 51,4 1,4 37,5 8,3 4,4 7,2 38,9 23,6 13,9 2,8 16,0 20,1 8,5 8,8 33,3 23,6 Критерий различий, 2 (p) 7,23 (0,01) 5,98 (0,01) 4,42 (0,04) 4,90 (0,03) 17,72 (4,7х10-5) 5,60 (0,02) 5,84 (0,01) 8,77 (3,2х10-6) 7,71 (0,01) 9,9 (3,6х10-5) 4,06 (0,04) 4,40 (0,01) 5,44 (0,02) 4,20 (0,04) 6,47 (0,01) 11,39 (6,1х10-6) 8,49 (3,7х10-7) 5,5 (0,02) 5,3 (0,02) 12,48 (3,2х10-5) 4,90 (0,03) OR (95%CI) 1,57 (1,14-2,18) 1,49 (1,08-2,05) 2,40 (1,05-5,50) 3,74 (1,08-12,92) 3,99 (2,03-7,82) 0,55 (0,33-0,99) 9,26 (1,08-15.02) 0,26 (0,10-0,66) 4,05 (1,44-11,42) 0,37 (0,2-0,7) 2,06 (1,01-4,21) 0,42 (0,19-0,95) 0,27(0,08-0,86) 2,51 (1,02-6,17) 6,36 (1,29-3,35) 5,51 (1,85-16,43) 3,11 (1,41-6,87) 0,45 (0,23-0,89) 0,47 (0,24-0,91) 3,06 (1,63-5,75) 2,37 (1,09-5,14) 78 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 36 37 38 CYP1A1 462IIx AGT 235TT CYP1A1 462IVx AGT 235MT CYP1A1 462IV x GSTT1+ CYP1A1 462II x GSTT1 del CYP1A1 462II х GSTP 105VV CYP1A2 154CAx ADD1 460GG CYP1A2 154CAx AGT 174TT CYP1A2 154CC x AGT 235TT CYP1A2 154CAx MLR 4582AC CYP1A2 154CCx ACE DD CYP1A2 154CA x GSTP 105 II CYP1A2 154CAx GSTT1+ CYP1A2 154CAx GSTT1 del CYP1B1 432VLx GSTT1 del NQO 187PP x GSTT1 del NQO 187PS x GSTT1 del NQO 187PS x GSTP 105VV 15 1 27 14 8 8 4 12 5 9 7 45 8 5 8 7 6 28,8 1,9 22,5 11,7 11,4 15,4 7,7 23,1 9,6 17,3 10,0 37,5 6,7 4,2 6,7 5,8 8,6 10 13 14 48 4 23 0 2 18 4 26 35 23 29 26 23 2 13,9 18,1 9,7 33,3 3,3 31,9 0,0 2,8 25,0 5,6 21,7 24,3 16,0 20,1 18,2 16,1 1,7 4,20 (0,04) 7,85 (0,01) 8,15 (5,1х10-7) 17,1* (4,6х10-5) 4,90 (0,03) 4,42 (0,04) 5,62 (0,02) 12,42 (9,3х10-8) 4,73 (0,03) 4,44 (0,04) 4,19 (0,04) 5,40 (0,02) 5,47 (0,01) 8,8 (4,2х10-5) 7,69 (0,01) 6,78 (0,01) 5,23 (0,02) 2,51 (1,02-6,17) 0,09 (0,01-0,70) 0,37 (0,18-0,75) 3,7 (1,69-8,04) 3,74 (1,08-12,92) 0,39 (0,16-0,95) 0,33 (0,13-0,85) 6,50 (2,24-9,30) 0,32 (0,11-0,93) 3,56 (1,03-12,27) 0,40 (0,16-0,98) 0,54 (0,31-0,91) 2,66 (1,44-6,19) 3,83 (1,51-9,07) 3,11 (1,35-7,14) 3,09 (1,28-7,49) 5,53 (1,08-8,20) У женщин (таблица 24) обнаружены ассоциации 35 парных комбинаций генотипов КАГР и ФБК с развитием ГБ. Наибольшей патогенетической значимостью для возникновении ГБ у женщин обладали взаимодействия 5 генов (p<=0,001): CYP1A1 462II x GNB3_825CC (OR=2,65), ассоциированный с риском развития болезни и сочетания AHR 554RR x MLR 4582AA (OR=0,30), AHRR 185PP x MLR 4582AA (OR=0,22), CYP1A1 462IV x ADD1 460GG (OR=0,28), CYP1A1 462IV x MLR 4582AA (OR=0,07), которые снижали риск развития заболевания более чем в 2 раза. Таблица 24 Ассоциации межгенных взаимодействий генотипов генов КАГР и ФБК с предрасположенностью к гипертонической болезни у женщин № 1 2 3 4 5 6 7 8 9 Комбинации генотипов AHR 554RK x NQO 187PS AHR 554RR x MLR 4582AA AHR 554RR x GSTT1 del AHR 554RR x GSTP105 II AHR 554RR x GSTP105 IV AHRR 185PA x ARNT 189CC AHRR 185PP x MLR 4582AA ARNT 189CC x GNB3_825CC ARNT 189GC x GSTP105 IV N % N % 6 2,8 23 8,2 13 12 39 55 8 5 3 38 10,1 13,0 30,2 42,6 2,9 3,9 2,3 29,5 17 44 41 26 17 10 7 16 27,0 24,2 44,6 28,3 7,8 15,9 11,1 17,4 Критерий различий, 2 (p) 6,65 (0,01) 9,18 (5,8х10-5) 4,66 (0,03) 4,78 (0,03) 4,78 (0,03) 6.2 (0,01) 8,25 (7х10-6) 6,62 (0,01) 4,23 (0,04) OR (95%CI) 3,16 (1,26-7,9) 0,30 (0,14-0,67) 2,41 (1,07-5,45) 0,54 (0,31-0,94) 1,89 (1,06-3,34) 0,35 (0,25-0,83) 0,22 (0,07-0,67) 0,19 (0,05-0,76) 1,98 (1,03-3,83) 79 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21 22 23 24 25 26 27 28 29 30 31 32 33 34 35 CYP1A1 462IV x CYP1B1 432LL CYP1A1 462IV x AGTR 1166AA CYP1A1 462IV x ACE ID CYP1A1 462II x ACE ID CYP1A1 462IVx ADD1 460GG CYP1A1 462II x GNB3_825CC CYP1A1 462IVx GNB3_814GG CYP1A1 462IVx NOS3_298EE CYP1A1 462IVx NOS3_786TT CYP1A1 462IVx AGT 174TM CYP1A1 462IVx AGT 235MT CYP1A1 462IIx MLR 4582CC CYP1A1 462IV x MLR 4582AA( CYP1A1 462II x GSTP 105IV CYP1A1 462IV x GSTT1+ CYP1A2 154CCxNOS3_786TT CYP1A2 154CAx AGT 235MT CYP1A2 154CC x AGTR 1199AC CYP1A2 154CA x GSTP105 II CYP1A2 154CA x GSTT1 + CYP1B1 432VL x GNB3_814GA NQO 187PS x ADD1 460GW NQO 187PP x AGTR 1166AC NQO187PS x ACE DD NQO 187PP x GSTT1 del NQO 187PS x GSTP 105II 12 12 11 65 12 5 19 9 4 7 13 39 1 59 22 25 26 32 19 39 2 9 48 5 8 14 4,3 9,3 8,5 50,4 9,3 3,9 14,7 7,0 3,1 5,4 10,1 30,2 0,8 45,7 23,9 19,4 20,2 24,8 14,7 42,4 1,6 7,0 37,2 3,9 8,7 10,9 23 15 14 21 17 16 18 12 8 10 16 10 6 27 19 4 23 7 24 51 5 11 14 8 34 20 10,7 23,8 22,2 33,3 27,0 25,4 28,6 19,0 12,7 15,9 25,4 15,9 9,5 29,3 10,4 6,3 36,5 11,1 26,1 28,0 7,9 17,5 22,2 12,7 18,7 21,7 7,48 (0,01) 7,37 (0,01) 7,01 (0,01) 4,98 (0,03) 10,32 (1,2х10-4) 8,76 (4,1х10-5) 5,21 (0,02) 6,33 (0,01) 6,65 (0,01) 5,72 (0,02) 7,75 (0,01) 4,59 (0,03) 9,22 (5,1х10-7) 6,07 (0,01) 8,72 (0,01) 5,61 (0,02) 5,96 (0,01) 4,90 (0,03) 4,42 (0,04) 5,72 (0,02) 4,91 (0,03) 4,99 (0,03) 4,35 (0,04) 5,22 (0,02) 4,69 (0,03) 4,89 (0,03) 0,38 (0,18-0,78) 0,33 (0,14-0,75) 0,33 (0,14-0,77) 2,03 (1,08-3,86) 0,28 (0,12-0,63) 2,65 (1,38-5,12) 0,43 (0,21-0,90) 0,32 (0,13-0,80) 0,22 (0,06-0,76) 0,30 (0,11-0,84) 0,33 (0,15-0,74) 2,30 (1,06-4,98) 0,07 (0,01-0,63) 2,03 (1,15-3,58) 0,37 (0,19-0,73) 3,55 (1,18-10,68) 0,44 (0,22-0,86) 2,64 (1,09-6,37) 0,49 (0,25-0,96) 0,53 (0,31-0,85) 0,18 (0,03-0,97) 0,35 90,14-0,91) 2,07 (1,04-4,15) 0,28 (0,09-0,89) 2,41 (1,07-5,45) 0,44 (0,21-0,92) V. 2 Анализ гаметических корреляций между полиморфными вариантами генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации ксенобиотиков, а также известными генами-кандидатами гипертонической болезни Важной задачей при оценке межгенных взаимодействий было изучение гаметических корреляций аллельных вариантов генов КАГР, ФБК и других геновкандидатов ГБ. Гаметические корреляции отражают неслучайное сочетание аллелей различных генных локусов в гаметах – так называемых гаплотипических групп. Выявление гаметических корреляций между аллелями генетических полиморфизмов, расположенных на различных хромосомах, может свидетельствовать избирательном преимуществе аллельных вариантов генов, определяемое естественным отбором и связаным с сопряженнием 80 функционально-активных генетических продуктов генов, контролирующих общие метаболические процессы в клетках [Фогель Ф, 1989]. Важно понять, что сочетания аллелей в пределах одного гена, находящихся в trans-положении одной хромосомы, относительно тех же аллелей, но находящимися в cis-положении (то есть расположены в том же локусе, но на гомологичных хромосомах), могут иметь различные фенотипические эффекты вследствие особенностей регуляции транскрипционной активности гена [Liu P.Y. et al., 2005; Вейр Б., 1995]. Нами проанализированы парные коэффициенты гаметических корреляций (rg), рассчитанные для индивидуальных полиморфизмов генов в исследуемых группах пациентов. При этом в анализ гаметических корреляций были включены не только изучаемые гены КАГР и ФБК, но и известные гены-кандидаты гипертонической болезни, установленные в курской популяции в ранее проведенном исследовании [Полоников А.В., 2006]. Матрица гаметических корреляций между полиморфными вариантами исследуемых генов в группах больных ГБ и здоровых индивидов представлена в таблице 25. Таблица 25 Матрица гаметических корреляций (p<0,05) между полиморфными вариантами генов КАГР, ФБК и генов-кандидатов ГБ в исследуемых группах AHR CYP1A1 CYP1A2 AGTR1 ADD1 GNB3 R554K I462V C-154A 1166A/C G460W C825T 0.275 AHR R554K CYP1A1 I462V -0.190 NOS3 NOS3 MLR E298D -786T/C A4582C 0.208 0.255 0.188 0.165 0.181 CYP1A2 154CA В верхних ячейках представлены коэффициенты корреляций у здоровых индивидов, в нижних – у больных ГБ (серый фон) У здоровых индивидов были установлены 7 статистически значимых (p<0,05) гаметических корреляций между следующими аллельными вариантами генов: AHR R554K и ADD1 G460W (rg=0.275), AHR R554K и NOS3 E298D 81 (rg=0.208), AHR R554K и NOS3 -786T/C (rg=0.255), CYP1A1 I462V и MLR A4582C (rg=0.188), CYP1A2 154CA и GNB3 C825T (rg=0.181). В группе больных ГБ были установлены только 2 гаметические корреляции между аллельными вариантами генов CYP1A1 I462V и AGTR1 1166A/C (rg=0.190), характеризующиеся статистической значимостью (p<0,05), а также между аллельными вариантами CYP1A1 I462V и MLR A4582C (rg=0.165). Таким образом, нами были выявлены существенные различия как количественного, так и качественного характера между группами больных ГБ и здоровых индивидов в отношении аллельных ассоциаций различных классов полиморфных генов, расположенных в различных участках генома человека. V.3 Анализ генно-средовых взаимодействий, детерминирующих предрасположенность к гипертонической болезни Как уже было сказано, гипертоническая болезнь является мультифакториальной патологией, следовательно, необходимо совместно с генетическими факторами оценивать вклад факторов внешней среды в детерминацию болезни. Анализ взаимодействия генетических и средовых факторов может дать возможность определить основные аспекты патогенетических механизмов, которые могут спровоцировать возникновение болезни. Наибольший интерес представляют факторы окружающей среды, сопряженные с токсическим воздействием, патологические эффекты которых определяются активностью систем индукции КАГР и регуляции экспрессии ФБК. В настоящем исследовании одной из задач являлись изучение и анализ взаимодействия полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК с развитием гипертонической болезни при условии воздействия токсических факторов среды. Для оценки индивидуального использовались данные о анкетировании обследуемых. уровня химического статусе курения воздействия нами пациентов, полученные при Курение было выбрано по причине того, что в состав табачных смол входят ПАУ, в том числе изопреноид, пирен, бенз(а)пирен, 82 хризен, антрацен, флуорантен и др [Ещенко К.Н. и соавт., 2013; Pirie K. et al., 2012]. В таблице 26 представлены сведения о распределении пациентов в зависимости от статуса курения. Как видно из таблицы 26, исследуемые группы не отличались по статусу курения, в том числе при сравнительном анализе, стратифицированном по полу. Таблица 26 Анализ распределения индивидов в выборке больных ГБ и контроля в зависимости от статуса курения Независимо от пола Мужчины Женщины Статус Больные Больные Больные Здоровые Здоровые Здоровые курение ГБ ГБ ГБ (n=336) (n=196) (n=133) (n=543) (n=288) (n=256) Некурящие 393(70,4) 223(67,8) 147(50,6) 96(28,9) 239(92,6) 127(95,4) Курящие 150(29,2) 113 (32,2) 141(49,4) 100(30,1) 17(7,4) 6(4,5) 2 3,57 (0,06) 0,20 (0,66) 0,71 (0,40) (p)* * - критерии значимости различий между группами относительно курения здоровых и больных Затем полиморфных был проведен вариантов анализ генов ассоциации ферментов КАГР генотипов и ФБК исследуемых с развитием гипертонической болезни в зависимости от статуса курения у обследованных групп. По причине малочисленности групп лабильной и стабильной форм ГБ, сравнительный анализ форм ГБ и статуса курения не проводился. Использовались только общая выборка, а также группы с учетом пол-специфических эффектов. В таблице 27 продемонстрированы взаимодействия генотип-среда, обладающие статистической значимостью, ассоциированные с риском возникновения ГБ. 83 Таблица 27 Воздействие статуса курения на риск возникновения ГБ в зависимости от генотипов ферментов КАГР и ФБК Больные гипертонической болезнью (n=573) Больные ГБ, Генотипы КАГР и ФБК Больные ГБ, мужчины OR CI 95% (P) OR CI 95% (P) Больные ГБ, женщины OR CI 95% (P) Курящие (n=159) Некурящие (n=393) Курящие (n=148) Некурящие (n=148) Курящие (n=11) Некурящие (n=245) ARNT 189CC 1,58 1,012,45(0,04)* 0,74 0,483,86 (0,93) 0,49 0,342,51 (0,78) 0,89 0,543,48 (0,69) 1,41 0861,29 (0,16) 0,78 0,611,12 (0,48) ARNT 189CC 0,48 0,831,58 (0,96) 0,92 0,342,05 (0,76) 0,89 0,543,05 (0,93) 1,42 0,871,94 (0,65) 0,74 0,491,41 (0,89) 0,55 0,310,98 (0,04)* CYP1A2 2,68 1,265,07(0,01)* 0,79 0,482,18 (0,19) 2,47 1,135,4 (0,02)* 0,38 0,521,51 (0,77) 0,85 0,452,44 (0,59) 0,97 0,551,63 (0,34) 154AA * - статистически значимые ассоциации Было обнаружено 4 значимых статистических взаимодействия по типу генотип-среда. Установлено, что гомозиготный генотип (189С/С) полиморфизма ARNT был ассоциирован с пониженным риском развития ГБ среди некурящих женщин (p=0,04; OR=0,55; 95%CI 0,3-0,98). Однако в группе всех курящих он ассоциировался с повышенным риском развития ГБ (p=0,04; OR=1,58; 95%CI 1,01-2,45). Вариантный генотип CYP1A2 154АА достоверно повышал риск ГБ в группе курящих (p=0,01; OR=2,68; 95%CI 1,26-5,07). Аналогичную закономерность данный генотип проявлял и в отношении курящих людей мужского пола (p=0,02; OR=2,47; 95%CI 1,13-5,4). 84 ОБСУЖДЕНИЕ В последние два десятилетия произошел значительный прогресс в понимании природы многих мультифакториальных болезней, в чем не последнюю роль сыграло ускоренное развитие и совершенствование биотехнологий в расшифровке генетических механизмов развития различных патологических состояний. Однако, несмотря на значительный прогресс медицинской генетики, до сих пор остаются до конца не изученными механизмы развития такого распространенного и грозного заболевания, как гипертоническая болезнь. В последние годы научно-медицинское сообщество все больше получает доказательств того, что на роль ведущей причины прогрессирующего роста заболеваемости ГБ могут претендовать экологические факторы, а именно существенно нарастающее химическое загрязнение окружающей среды. Экологоэпидемиологические исследования свидетельствуют о прямой зависимости заболеваемости ГБ и связанной с ней смертности населения от уровня химического загрязнения окружающей среды, и в первую очередь атмосферного воздуха [Urch et al., 2005; Sun et al., 2008; Brook et al., 2009; Dong et al., 2013; Foraster et al., 2014]. Тем не менее на сегодняшний день фактически не изучены и по-прежнему остаются без должного внимания исследователей экологогенетические аспекты этиопатогенеза ГБ. Среди всех известных генов-кандидатов ГБ именно гены биотрансформации ксенобиотиков в условиях современной техногенной цивилизации вносят наиболее ощутимый вклад в формирование предрасположенности к социально значимым болезням человека, включая ГБ [Полоников А.В. с соавт., 2008]. Учитывая факт того, что контроль и регуляция экспрессии генов ФБК осуществляются посредством целого каскада взаимосвязанных сигнальных реакций, инициируемых арилгидрокарбоновым рецептором (КАГР), гены КАГР могут предрасположенностью к гипертонической болезни. также быть связаны с 85 В рамках настоящего исследования проведен комплексный анализ вовлеченности генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и биотрансформации ксенобиотиков в формирование предрасположенности к гипертонической болезни и ее осложнениям. Для выполнения исследования использовалась выборка неродственных индивидов русской национальности. Выборку больных ГБ составили 602 индивида, из которых 125 перенесли ОНМК на фоне ГБ в анамнезе, и 549 здоровых лиц контрольной группы. У всех пациентов было проведено генотипирование семи полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК: AHR (R554K), ARNT (V189V), AHRR (P185A), CYP1A1 (I462V), CYP1A2 (154C>A), CYP1B1 (V432L) и NQO1 (P187S). Частоты аллелей и генотипов в исследуемых выборках соответствовали таковым в других европеоидных популяциях. В исследуемых группах большая часть полиморфных генов КАГР и ФБК была охарактеризовались вариабельным аллельным разнообразием: уровень объективной гетерозиготности варьировал от 0,156 в полиморфизме I462V CYP1A1 до 0,488 в полиморфизме V432L CYP1A2. Для определенных полиморфизмов выявлен низкий уровень аллельного разнообразия: полиморфизмы R554K AHR (Ho=0,171) и I462V CYP1A1 (Ho =0,156) отличались относительно низким уровнем аллельного разнообразия (Ho <0,300). Однако эти аллельные варианты по частоте превышали порог 1-2%, что свидетельствует о наличии полиморфизмов, а не мутаций. Анализ распределения частот аллелей и генотипов не продемонстрировал статистически значимых различий в группах больных ГБ и здоровых индивидов ни по одному из изучаемых ДНК-полиморфизмов. Стратифицированный анализ ассоциации изучаемых полиморфных генов с риском развития ГБ, проведенный раздельно у мужчин и женщин, позволил выявить пол-специфические эффекты влияния генов ФБК и КАГР на формирование предрасположенности к ГБ. В частности, было установлено, что аллель дикого типа 554R гена AHR встречался значительно чаще у больных ГБ мужчин, чем у здоровых мужчин. 86 Кроме того, аллель 154A гена CYP1A2 ассоциировался с повышенным риском развития ГБ у мужчин. Однако у женщин нами не было выявлено статистически значимых ассоциаций генов ФБК и КАГР с предрасположенностью к ГБ ни по одному из изучаемых ДНК-полиморфизмов. Эти результаты свидетельствуют в пользу вовлеченности генов ФБК и КАГР в детерминацию полового диморфизма подверженности ГБ. Факт наличия полового диморфизма подверженности МФЗ хорошо охарактеризован в медицинской литературе. Так, по данным X. Yang et al., 2006, определяются существенные половые различия в синтезе генов в зависимости от вида ткани. Эта особенность подтверждает тот факт, что, согласно отдельным исследованиям, фенотипические проявления генов предрасположенности к ГБ способны различно проявляться в зависимости от пола [Bubb K.J., 2012; Gürgen D. et al., 2013]. На основании это предположили, что определенная часть генетически опосредованных эффектов, которая может формировать специфичность подверженности гипертонической болезни мужчин и женщин, связана с полиморфными генами КАГР и ФБК по причине их вовлеченности в эндогенный метаболизм и регуляцию половых гормонов [Cao J. et al., 2011; Karman B.N. et al., 2012; Penaloza C.G. et al., 2014; Fava C. et al., 2012; Renaud H.J. et al., 2011; Butts S.F. et al., 2012]. Известно, что мультифакториальные гипертоническая болезнь, заболевания, в том числе характеризуются различиями по возрасту начала (манифестации) заболевания [Katz E.G. et al., 2012; Chiang K.M. et al., 2014]. Учитывая указанную особенность, на основании распределения возраста манифестации ГБ в группе пациентов нами был определен пограничный возраст в 35 лет для разделения больных на 2 группы: пациенты с ранней манифестацией ГБ (до 35 лет) и пациенты с поздней манифестацией болезни (после 35 лет). Анализ ассоциации полиморфных вариантов генов ФБК и КАГР позволил установить, что дикий генотип 554RR гена AHR у мужчин был достоверно ассоциирован с повышенным риском развития гипертонической болезни с 87 возрастом манифестации после 35 лет. В то время как гетерозиготный генотип 189GC гена ARNT увеличивал риск развития гипертонической болезни у женщин с поздним дебютом заболевания. Кроме того, аллель 154A и генотип 154AA гена CYP1A2 ассоциировались с повышенным риском развития ГБ, как раннего, так и позднего дебюта, но исключительно в общей выборке пациентов. Анализ в зависимости от пола не дал статистически значимых результатов в частотах аллелей и генотипов полиморфизма 154C<A гена CYP1A2, по всей видимости, изза низкой статистической мощности при анализе стратифицированных по полу групп пациентов. Таким образом, полиморфизмы генов КАГР и ФБК являются значимыми предикторами возраста манифестации ГБ как у мужчин, так и у женщин. С целью оценки вклада изучаемых генов в детерминацию особенностей течения гипертонической болезни у мужчин и женщин было проведен стратифицированный анализ ассоциаций аллелей и генотипов в зависимости от формы фенотипического проявления гипертонической болезни – лабильной и стабильной форм заболевания. Однако проведенный анализ не выявил статистически значимых различий между изучаемыми группами. Кроме того, нами была оценена взаимосвязь полиморфизмов генов КАГР и ФБК с риском развития мозговых инсультов на фоне гипертонической болезни. В результате анализа были получены статистически значимые ассоциации инсульта с полиморфизмами генов КАГР и ФБК: R554K AHR, G189C ARNT и 154C<A CYP1A2. Причем ассоциации с риском мозгового инсульта имели особенности в зависимости от пола и формы клинического течения ГБ. Было обнаружено, что вариантный генотип 189CC гена ARNT ассоциировался с пониженным риском развития инсульта на фоне стабильной формы течения гипертонической болезни у мужчин. Кроме того, в исследовании обнаружено, что гетерозиготный генотип 154CА гена CYP1A2 был ассоциирован с повышенным риском развития инсульта, 88 а также ассоциирован с повышением риска развития мозгового инсульта на фоне течения стабильной ГБ и на фоне лабильной формы гипертонической болезни у мужчин. В частности, гетерозиготный генотип 554RK гена AHR у женщин характеризовался протективным действием в отношении развития мозговых инсультов на фоне стабильной формы ГБ. У женщин в отношении развития мозговых инсультов, в сравнении с группой больных стабильной ГБ, вариантный генотип 154AA гена CYP1A2 имел ассоциацию с повышенным риском развития мозгового инсульта. Установлено, что у мужчин со стабильной формой гипертонической болезни факт наличия носительства дикого генотипа 154CС гена CYP1A2 был ассоциирован с пониженным риском развития данного осложнения. Также, помимо указанных исследований был проведен анализ ассоциации генов КАГР и ФБК с риском развития таких осложнений ГБ, как гипертофия миокарда левого желудочка и гипертоническая энцефалопатия. Согласно полученным результатам, полиморфизм I462V гена CYP1A1 статистически значимо ассоциирован с риском развития ГМЛЖ на фоне ГБ. Полученные результаты свидетельствуют о значимой роли генов КАГР и ФБК в детерминации не только предрасположенности к ГБ, но и к ее осложнению – мозговому инсульту. Представлялось важным дать оценку фенотипических эффектов исследованных ДНК-полиморфизмов и объяснить возможные их влияния на патогенез заболевания. По данным исследователей, у носителей диких гомозигот (Arg554/arg554) гена AHR меньше индуцированная активность цитохрома Р4501А1 [Joshua K.X. Tay, 2007; Sim S.C., 2013], который играет важную роль в каталитических реакциях, образуя разнообразные вазоактивные субстанции [Wong et al., 2001; Harper et al., 2002]. Вероятно, что носители дикого аллеля 554R опосредуют недостаточную активацию цитохрома CYP1A1 и неполноценную 89 трансформацию поступивших лигандов, что влечет к накоплению промежуточных токсичных метаболитов, тем самым способствуя проявлению большего токсического эффекта по причине накопления промежуточных токсичных метаболитов [Rifkind A.B., 1990; Nakai K., 1992; Helmig S. et al., 2011]. Полиморфизм 154CA гена CYP1A2 согласно нашим результатам вовлечен в формирование риска развития ГБ. В некоторых работах есть данные о том, что вариантный аллель А полиморфизма 154СА гена CYP1A2 способен увеличивать активность данного фермента, в зависимости от дозы влияния ПАУ [Sogawa K., 1997; Joshua K.X. Tay, 2007]. Таким образом, у носителей аллеля А под воздействием ПАУ происходит чрезмерная индуцибельность цитохрома CYP1A2, что опосредует усиление активации прооксидантного действия, нарушающего функционирование системы в сторону развития оксидативного стресса [Matsuda M., 2013]. Такое состояние, в свою очередь, может привести к развитию эндотелиальной дисфункции (путем непосредственного повреждения эндотелия сосудов и нарушения синтеза вазоактивных аминов) и дезактивации симпатоадреналовой системы (вследствие нарушения процесса стероидогенеза) [Matsuda M., 2013; Schulz E., 2011] и, как следствие, к развитию искомого заболевания и его осложнений. Исходя из результатов работы, полиморфизм G189C гена ARNT также ассоциирован с риском развития ГБ, но в группе женщин с поздним дебютом заболевания. Согласно работам W.T. Hung et al., 2011, генотип GG гена ARNT ассоциирован с высокой индуцибельностью и активностью CYP1A2 [Hung W.T. et al., 2011]. Вероятно, носители гетерозиготного генотипа 189GC гена ARNT могут стимулировать повышенную активность цитохрома, что в свою очередь может инициировать проявление токсифицирующих свойств данного фермента в отношении поступивших субстратов. Таким образом, носители гетерозиготного варианта гена ARNT могут быть ассоциированы с риском развития ГБ. Однако также ряд авторов отмечают, что генотип CC ассоциирован с меньшей индукцией 90 данного цитохрома [Hung W.T. et al., 2011; Lowcock E.C. et al., 2013]. Анализируя протективный эффект генотипа СС гена ARNT с риском развития инсульта на фоне ГБ, можно предположить, что при носительстве генотипа СС не происходит патологической ферментативной активации и поступивший диоксин-подобный элемент трансформируется без накопления промежуточных активных токсичных метаболитов, а гомозиготный генотип СС гена ARNT, вероятно, может снижать риск возникновения осложнений ГБ. Таблица 28 Сводные данные по обнаруженным результатам исследования и их интерпретация в отношении патогенеза ГБ и её осложнений Полиморфизм R554K AHR Аллель, генотип G189C ARNT G189C Фактор риска 189CC Фактор риска 554RR Характер ассоциации Фактор риска Патогенетический механизм Клиническое проявление У носителей диких гомозигот (Arg554/arg554) меньше индуцированная активность цитохрома Р 4501А1, который играет важную роль в каталитических реакциях, образуя многие вазоактивные субстанции. Более того, аллель Agr ассоциирован с увеличенным уровнем экспрессии mRNA генов AHR, ARNT. Генотип GG гена ARNT ассоциирован с высокой индуцибельностью активности CYP1A2, а генотип CC ассоциирован с меньшей индукцией данного цитохрома. Изучаемый полиморфизм G189C гена ARNT в исследованиях не проявил статистически значимых корреляций для уровня активности CYP1A2, которая непосредственно находится под контролем комплеска транскрипционного Достоверное влияние в отношении риска развития гипертонической болезни у мужчин; ассоциирован с увеличением риска развития гипертонической болезни у мужчин, также у мужчин с возрастом манифестации после 35 лет. Влияет на риск возникновения мозгового инсульта у женщин со стабильной ГБ. Увеличивает риск развития гипертонической болезни у женщин с поздним началом манифестации. Повышает риск развития ГБ у курильщиков. У некурящих женщин ассоциирован с пониженным риском развития ГБ. Влияет на риск возникновения инсульта на фоне ГБ. 91 AHR/ARNT 154C< A CYP1A 2 154 АА Фактор риска 154СA Фактор риска Вариантный аллель А полиморфизма -154СА гена CYP1A2 способен увеличивать активность данного фермента в группе курильщиков. Сигаретный дым может стимулировать увеличение количества иммунореактивных ферментов CYP1A2 в микросомах печени человека, увеличивая индекс активности CYP1A2. Наличие аллеля С ассоциировано со сниженной индукцией и уменьшением ферментативной активности цитохрома; также наличие аллеля 154С гена CYP1A2 ассоциировано с риском развитием стенокардии происходит неполное окисление ПАУ и накопление токсических эндогенных метаболитов, усиление активации прооксидантного действия, нарушающее функционирование системы в сторону развития оксидативного стресса. Ассоциирован с повышенным риском развития гипертонической болезни у мужчин. Ассоциирован с повышением риска развития гипертонической болезни у всех больных с возрастом манифестации до 35 лет и после 35 лет. Влияет на риск развития инсульта на фоне ГБ. 92 I462V CYP1A 1 462 II Фактор риска Фермент 1 фазы БФК, вовлечен в метаболизм многих ксенобиотиков, в том числе и ПАУ. Участвует в монооксигеназной активации ПАУ и ароматических углеводородов с формированием активных токсических метаболитов – эпоксидов, фенолов, в гидроксилировании микотоксинов, флавоноидов, кофеина, теофиллина. CYP1A1 является внепеченочным ферментом, главным образом ответственным за каталитические реакции окисления. Оказывает влияние на метаболизм эйкозапентаеновой кислоты, изменяя индивидуальную вариабельность метаболизма, увеличивая продукцию физиологически активных метаболитов жирных кислот в сердечно-сосудистой системе и печеночной ткани. Влияет на риск развития гипертофии миокарда левого желудочка на фоне ГБ. Известно, что индукция и регуляция экспрессии генов ФБК в организме осуществляется посредством активации каскада реакций, инициатором которого является особый вид ядерных рецепторов - арилгидрокарбоновый рецептор (AHR) [Mark E. Hahn, 2009; Wu D. et al., 2013]. Данный каскад рассматривается как своеобразные «токсикологические ворота» клетки, вовлеченные в регуляцию метаболизма ксенобиотиков и рецептор-опосредованную цитотоксичность. Для полициклических ароматических углеводородов AНR являются первичными медиаторами их токсичности [DeGroot D.E., 2014]. Помимо огромного числа токсикантов, арилгидрокарбоновые рецепторы, будучи широко распространенными в тканях, связывают и другие структурные классы ксенобиотиков – компоненты пищи, лекарственные препараты. В современной литературе AНR рассматривается в качестве транскрипционного регулятора 93 генов, кодирующих ферменты цитохромов Р450. В свою очередь, цитохромы Р450 метаболизируют лиганды AНR [Kaname Kawajiri, 2007; Wang Y. et al., 2013]. Носительство определенных генотипов полиморфных генов КАГР (AHR, ARNT, AHRR) может оказывать влияние на активность цитохромов Р450, которые способны увеличивать токсичность ксенобиотиков и тем самым способствовать развитию гипертонической болезни посредством токсикогенетических механизмов (рисунок 5). Согласно данным Wong et al. [Wong et al., 2001; Harper et al., 2002], у носителей генотипа Arg554/Arg554 гена AНR индуцированная активность цитохрома Р1-450 ниже, чем у носителей гетерозиготного генотипа гена AНR или вариантных гомозигот (Arg554/Lys554 или Lys554/Lys554). Таким образом, наличие дикого генотипа связано с уменьшением индуцированной активности ферментов Р450 и, как следствие снижением активации системы биотрансформации в ответ на воздействие ПАУ и диоксин-подобных веществ. Возрастание уровня окислительных процессов в клетке опосредует задержку поврежденных белковых молекул, что влечет за собой включение протеосомной системы, которая главным образом ответственна за утилизацию данных поврежденных белков [Шустанова Т.А. и др., 2001; Sahin E., Gümüşlü S., 2007]. Негативная регуляция и непосредственная деградация пускового звена КАНР-AHR может осуществляться при влиянии протеосомной системы. При воздействии веществ, индуцирующих работу цитохромов Р450А1, происходит увеличение распада AHR посредством воздействия протеосомной системы. Данная реакция опосредует формирование обратной отрицательной связи, которая приводит к сокращению периода фенкционирования комплекса AHR, и таким образом, инициируется уменьшение экспрессии продуктов цитохрома Р4540А1 [Ma Q., Baldwin K.T., 2000; Santiago-Josefat B.E. et al., 2001]. Таким образом, в условиях оксидативного стресса ослабление гиперпродукции P 4501A не происходит. 94 Рисунок 5 Механизм индукции цитохромов Р1-450А при развитии ГБ Известно, что КАГР активирует ферменты первой фазы биотрансформации ксенобиотиков - происходит индукция цитохромов P4501A1, 1A2 и 1В1, которые усиливают токсичность некоторых ксенобиотиков [Allan B. Oke, David S. Riddick, 2002; Hahn M.E., 2009]. Однако также известно, что обезвреживание и подготовка утилизации из организма активных токсических веществ, обладающих свойствами канцерогенов, осуществляется системой глутатиона, которую можно рассматривать в качестве части антиоксидантной системы организма [Hayes K.R., 2005]. В связи с этим в работе также рассматриваются возможные варианты взаимодействия КАГР и ФБК с АОС. Как уже было сказано, при активации первой фазы детоксикации образуются промежуточные эндогенные метаболиты, которые и вступают во взаимодействие с системой глутатиона. Согласно данным литературы, протекция клеток организма от оксидативного стресса принадлежит главным образом функционированию глутатион S-трансферазы [Hayes K.R., 2005; Noce A. et al., 2013; Ahmad S.T. et al., 2012]. (GST) 95 В нашем исследовании установлены взаимодействия генов КАГР и ФБК и глутатион S-трансферазы T1, а именно: AHR, ARNT, CYP1A1, CYP1A2, и наличие делеционного полиморфизма GSTT1 (GSTT1/del) статистически значимо увеличивало риск возникновения гипертонической болезни. В то время как при взаимодействии перечисленных генов КАГБ и ФБК с носителями дикого генотипа GSTT1 (GSTT1/+) было выявлено протективное действие данных комбинаций на риск возникновения ГБ (рисунок 6). Полученные результаты согласуются с литературными данными, согласно которым полиморфизм Arg554Lys гена AHR и полиморфизм G189C гена ARNT способны увеличивать активность цитохромов CYP1А1 и CYP1А2 [Marianne Berwick, 2004]. Индуцированная активность данных генов может привести к образованию активных токсических эндогенных метаболитов, которые должны инактивированы во второй фазе биотрансформации. Однако в быть случае носительства делеционного полиморфизма гена GSTT1 блокируется его синтез [Welfare M., 1999; Rebbeck T.R., 1997], за счет чего снижается способность обезвреживать продукты окислительного стресса. Установлено, что у нулевых гомозигот GSTT1 уровень ДНК-аддуктoв, соматических генных мутаций, сестринских хроматидных обменов значительно выше, чем у носителей аллелей дикого типа [Rudolph A. et al., 2012]. 96 Рисунок 6 Механизм ответа АОС в ответ на КАГР, индуцированный ПАУ Известно, работа КАГР осуществляется не только через индукцию цитохромов первой фазы биотрансформации ксенобиотиков [Pollenz R.S., 2008]. Есть данные, подтверждающие, что уровень токсичности влияний ПАУ может также определяться экспрессией других генов, ответственных за рост клеток и дифференцировку [Safe S.H., 1995; Wang Y. et al., 2013]. Возможно, в основе такой дифференцировки может быть различный уровень чувствительности КАГР к диоксин-подобному воздействию [Wu D. et al., 2013]. Но определенных данных о характере этих генов пока не описано (рисунок 7). 97 Рисунок 7 Альтернативный вариант активации экспрессии генов в зависимости от чувствительности КАГР к диоксин-подобному воздействию Можно предположить, что таким путем активированный КАГР и гены ФБК оказывают влияние на работу других генов-регуляторов гомеостаза и, в частности генов-кандидатов ГБ. В нашей работе мы также оценивали характер взаимодействия генов КАГР и ФБК и генов-кандидатов развития ГБ. Статистически значимыми были ассоциации комбинаций генотипов, повышающие риск развития ГБ: гены КАГР и ФБК, такие как ARNT, CYP1A1 и CYP1A2, в сочетании с геном AGTR, AGT, ADD1,GNB3,NOS3 увеличивали риск развития ГБ. Рассматривая патогенетическую значимость гена AGTR авторы указывают на рисковую значимость аллеля С [Fan H. et al., 1998; Wang W. Y. et al., 1997; Kikuya M. et al., 2003; Castellano M. et al., 1998]. Однако существуют и данные об ассоциации аллеля А и соответственно носителей генотипов АА с уменьшением риска возникновения ГБ [Чистякoв Д.A. c coавт., 2001]. Наличие вышеуказанной ассоциации также подтверждено при проведении исследований в Северо-Западном регионе РФ [Бoйцoв C.A., Линчак Р.M., 2003]. В целом ряде работ была показана ассоциация полиморфных маркеров генов системы РААС и, в частности, гена ангиотензиногена AGT с развитием ГБ [Pereira C. et al., 2003; Ellis K.L. et al., 2013; Staessen J.A. et al., 2005; 98 Kunz R. et al., 1997]. Также выявлена связь полиморфизма G460W гена ADD1(αаддуцина) с уровнем артериального давления [Bianchi G. et al., 1994]. Согласно данным ряда авторов, существует ассоциация аллеля 460W гена ADD1 с риском развития ГБ [Province M.A. et al., 2000; Cusi D. et al., 1997; Castellano M. et al., 1998; Clark C.J. et al., 2000; Staessen J.A. et al., 2005], а также с риском развития осложнений ГБ [Morrison A.C. et al., 2002; Van Rijn M.J. et al., 2006]. При изучении этиопатогенеза сердечно-сосудистой патологии, в том числе и ГБ, часто исследуют ген, продуктом которого является эндотелиальная синтаза оксида азота - NOS3. Была обнаружена ассоциация полиморфного маркера -786Т>С с риском АГ [Förstermann U., Sessa W.C., 2012; Takeuchi F. et al., 2012]. Установлено, что полиморфный вариант E298D гена NOS3 статистически значимо увеличивал риск возникновения острого инфаркта миокарда [Miyаmоtо Y. еt аl., 1998; Shimаsаki Y. еt аl., 1998], артериальной гипертензии [Zhang L.P. et al., 2011; Laсоlley Р. еt аl., 1998; Yasujima M. et al., 1998; Jia C. et al., 2003], ишемической болезни сердца [Маrkus H.S. et al., 1995]. В исследовании генетики ГБ, ассоциациям полиморфного маркера С825Т гена GNB3 с эссенциальной АГ посвящены многочисленные исследования. Большинство исследований, проведенных у европейцев, подтверждает ассоциацию полиморфного маркера С825Т гена GNB3 с ГБ [Rupert J.l., Kidd K.K., 2003; Lu J. et al., 2012]. Взаимодействия генов КАГР с вышеперечисленными генами-кандидатами ГБ можно объяснить следующим образом: в зависимости от диоксиновой чувствительности активация каскада идет не по пути индукции цитохромов, а происходит активация генов ферментов, непосредственно отвечающих за развитие патологического эффекта на сердечно-сосудистую систему. Таким образом, взаимодействия между такими системами генов (КАГР, ФБК, АОС, гены-кандидаты ГБ) могут являться основными в формировании различных фенотипических проявлений ГБ. Гены данных систем функционируют не изолированно друг от друга, а во взаимосвязях. 99 В дополнение к проанализированным ассоциациям парных межгенных сочетаний с риском ГБ нами были исследованы гаметические корреляции между аллельными вариантами различных классов генов для определения направленности их работы на уровне генома. Для различных вариантов аллелей исследуемых генов были обнаружены достаточно специфичные для здоровых индивидов и больных ГБ межлокусные взаимодействия аллелей. Единственной гаметической корреляцией, схожей у больных ГБ и здоровых индивидов, было взаимодействие CYP1A1 I462V и MLR A4582C. Примечательно, что гаметические корреляции у здоровых лиц наблюдались между геном AHR и генами, вовлеченными в патогенез гипертонической болезни, а именно генами -аддуцина (полиморфизм G460W) и эндотелиальной синтазы окиси азота (кодирующий E298D и промоторный -786T/C полиморфизмы). В то же время ген CYP1A2 (полиморфизм 154C<A) показал ассоциацию с геном GNB3 (полиморфизм C825T). Следует отметить, что указанные гены играют важную роль в регуляции артериального давления и увеличивают риск развития гипертонической болезни, в том числе и в популяции русских жителей Курской области [Rankinen et al., 2000; Bianchi et al., 1994; Pereira et al., 2007; Шестаков с соавт., 2008; Полоников А.В. с соавт., 2007, 2011a, 2001b]. Причем выявленные гаметические корреляции между указанными локусами были положительными по знаку, т.е. имело место одновременное присутствие обоих вариантных аллелей генов в гамете. По всей видимости, такие взаимодействия сформировались в процессе эволюции под действием естественного отбора, который направлен на сохранение в генофонде не отдельных полиморфных вариантов генов, а целых совокупностей генов, функциональные варианты которых способны обеспечивать оптимальную адаптацию в условиях нарастающего химического загрязнения окружающей среды. Таким образом, можно сделать заключение, что на геномном уровне такие межаллельные взаимодействия гена AHR c генами ADD1 и NOS3 могут обеспечивать здоровым людям на фенотипическом уровне эффективную 100 сопряженность и скоординированное функционирование систем регуляции биотрансформации ксенобиотиков и сердечно-сосудистой системы в процессе адаптации к изменяющимся условиям среды. Однако у больных ГБ нами не выявлены аллельные взаимодействия, аналогичные описанным выше у здоровых лиц. Кроме того, у больных ГБ обнаружена отрицательная корреляция между аллелями генов CYP1A1 I462V и AGTR1 1166A/C, которые, как известно, имеют отношение к регуляции артериального давления и патогенезу заболевания, как было установлено многочисленным экспериментальными и генетико- эпидемиологическими исследованиями [Zhu et al., 2003; Lança et al., 2002; Mitchell et al., 2006; Gambier et al., 2006; Fung et al., 2011; Prieto et al., 2011]. На этом основании можно предполагать, что у больных, предрасположенных к ГБ, имеет место отсутствие сопряженности между данными классами генов, что в конечном счете может быть причиной дискоординации в функционировании систем регуляции биотрансформации ксенобиотиков и сердечно-сосудистой системы в условиях токсического воздействия на организм ксенобиотиков. В целом выявленные у различных категорий людей специфические гаметические корреляции между генами КАГР, ФБК и генами-кандидатами ГБ (больные ГБ и здоровые лица) характеризуют наличие отдельных вариантов аллелей изучаемых генов, которые обеспечивают разнообразие и селективное преимущество, и связанными с ними различиями в степени функциональной сопряженности между продуктами соответствующих генов, контролирующих различные уровни гомеостаза. Исходя из данных проведенного анализа на данном этапе исследования, можно сделать вывод, что изучаемые нами гены функционируют координированно друг с другом, что обеспечивает адекватную реакцию физиологических систем организма на действие химических факторов внешней среды. Когда воздействие химических факторов внешней среды на организм достигает своего максимума, как это и происходит в современных экологических 101 условиях, дискоординация в функционировании КАГР, ФБК и генов регуляции сосудистого гомеостаза, видимо, способна потенцировать токсические влияния ксенобиотиков на организм и способствовать формированию нарушений сосудистого тонуса и развитию артериальной гипертензии. При анализе было обнаружено 4 значимых статистических взаимодействия по типу генотип-среда. Установлено, что гомозиготный генотип по вариантному аллелю C гена ARNT ассоциирован с повышенным риском развития ГБ среди курящих людей, однако в группе некурящих женщин генотип 189СС гена ARNT достоверно ассоциирован со снижением риска развития ГБ. Более того, вариантный генотип CYP1A2 154АА достоверно повышал риск ГБ в группе курящих, аналогичную закономерность данный генотип проявлял и в отношении курящих людей мужского пола. Представлялось исследованных влияниями важным дать ДНК-полиморфизмов оценку при фенотипических взаимодействии со эффектов средовыми и объяснить возможные их аспекты влияния в формировании заболевания. С этиопатогенетической точки зрения, гетородимер AНR/ARNT связывается с Xre, которые ответственны за ответ на первоначальное воздействие ксенобиотиков, и активирует экспрессию множества генов 1-й фазы детоксикации. В частности, происходит индукция цитохромов P4501A1, 1A2 и 1В1, которая может повлиять на последующую восприимчивость к некоторым веществам проканцерогенного характера, являющихся субстратами для данных цитохромов [Allan B. Oke, 2002;. Hahn M.E, 2009; Achour A. et al., 2011]. Можно предположить, что при наличии вариантного аллеля гена ARNT под воздействием диоксин-подобных химических веществ (табачный дым) изменяется структурное связывание с Xre. Вероятно, носители гомозиготного генотипа по вариантному аллелю С под влиянием ПАУ имеют повышенный риск развития ГБ в связи с тем, что комплекс AHR-ARNT при стимулировании ксенобиотиков способствует 102 кассетной активации цитохромов Р450, которые, в свою очередь, усиливают образование водорастворимых токсичных промежуточных метаболитов ПАУ. Вследствие этого индуцированная чрезмерная экспрессия цитохромов Р450 может изменить каскадные реакции метаболизма арахидоновой кислоты, тем самым способствуя проявлению большего токсического эффекта по причине накопления промежуточных токсичных метаболитов [Rifkind A.B., 1990; Nakai K., 1992; Helmig S. et al., 2011]. Однако носители гомозиготного генотипа по варинтному аллелю С гена ARNT ассоциированы со снижением риска возникновения гипертонической болезни среди некурящих женщин. Согласно данным литературных источников, генотип GG гена ARNT (rs 2228099) ассоциирован с высокой индуцибельностью активности CYP1A2, по сравнению с генотипом СС [Hung W.T. et al., 2011; DeGroot D.E., 2014]. Таким образом, носители данного генотипа имеют пониженный риск развития ГБ при отсутствии воздействия ПАУ в связи с тем, по-видимому, что комплекс AHR-ARNT при отсутствии стимулирования ПАУ не активирует токсифицирующие свойства фермента по причине низкой индуцибельности и не происходит патологическая ферментативная активация, а поступивший элемент трансформируется без накопления промежуточных активных токсичных метаболитов. Однако в литературе также имеются данные о том, что изучаемый полиморфизм G189C гена ARNT в исследованиях не проявил статистически значимых корреляций для уровня активности CYP1A2, которая непосредственно находится под контролем комплекса транскрипционного AHR/ARNT [Julia Scheel, 2002; Anttila et al., 2000]. Таким образом, заключение о влиянии генотипа 189СС гена ARNT может быть подтверждено только функциональными исследованиями генов сигнального каскада в экспериментах с индуцированием системы КАГР ПАУ. Более того, при анализе генотип-среда полиморфизма G189C гена ARNT определяются выраженные половые различия. Известно также, что AНR/ARNT комплекс может реализовывать свои эффекты через второй путь, который локализован в 103 цитоплазме [Zhang N., 2011]. Возможно, при наличии вариантного аллеля гена ARNT, активация AНR происходит по цитозольному пути. При связывании AНR лигандами происходит освобождение активной cSrc, что приводит к стимуляции протеинкиназы (РКС) [Ma Q., 2001]. Активная c-Src, видимо, фосфорилирует и активизирует стероидные рецепторы, такие как рецепторы эстрогенов, вызывая эстрогенные эффекты в отсутствие эстрогенов [Pocar P., 2005], что может, по крайней мере, частично объяснить половой диморфизм предрасположенности к ГБ. Полиморфизм 154C<A гена CYP1A2 в анализе генотип-среда проявлял такие же тенденции, что и при анализе общей выборки больных ГБ и здоровых индивидов. Носители вариантного генотипа АА имели повышенный риск развития ГБ в группе курящих индивидов. Данный факт находит подтверждение в литературных источниках, свидетельствующих о курении как о факторе риска развития ГБ [Ещенко К.Н., 2013; Pirie K. et al., 2012]. В некоторых работах сказано, что вариантный аллель А полиморфизма 154СА гена CYP1A2 способен увеличивать активность данного фермента в группе курильщиков [Sogawa K., 1997; Joshua K.X. Tay, 2007]. Установлено также, что сигаретный дым может стимулировать увеличение количества иммунореактивных ферментов CYP1A2 в микросомах печени человека и увеличивать индекс активности CYP1A2 [Nakajima M., 1999; Bartsch H., 2000; Hung W.T. et al., 2012]. Таким образом, у носителей генотипа АА под воздействием ПАУ происходит чрезмерная индуцибельность цитохрома CYP1A2, что опосредует усиление активации прооксидантного действия, нарушающее функционирование системы в сторону развития оксидативного стресса. Такое состояние, в свою очередь, может привести к развитию эндотелиальной дисфункции (путем непосредственного повреждения эндотелия сосудов и нарушения синтеза вазоактивных аминов) и дезактивации симпатоадреналовой системы (вследствие нарушения процесса стероидогенеза) и, как следствие, развитию искомого заболевания. 104 Таким образом, целостная комплексная оценка воздействий генетических факторов и факторов окружающей среды на риск возникновения ГБ позволила определить ключевые взаимодействия между генотипом и средой, которые формируют основу предрасположенности к болезни, а также охарактеризовать конкретные механизмы, с помощью которых внешние факторы способны спровоцировать развитие патологии у лиц, имеющих генетическую предрасположенность к этому. Результаты исследования позволили сделать заключение о том, что гены сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и сопряженные с ними гены ферментов биотрансформации ксенобиотиков могут представлять важную часть токсико-генетической компоненты предрасположенности к гипертонической болезни. При этом влияния полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК на риск развития гипертонической болезни проявляются возрастными различиями в дебюте заболевания, а также пол-специфическими эффектами на подверженность болезни у мужчин и женщин. Связь генов КАГР и ФБК с риском развития ГБ более отчетливо проявлялась у мужчин. Полиморфизмы генов КАГР и связанные с ними полиморфные гены ФБК вносят определенный вклад в предрасположенность больных гипертонической болезнью к развитию мозгового инсульта. Анализ межгенных сочетаний позволил выявить взаимодействия между генами КАГР, ФБК с известными генами-кандидатами АГ, которые формируют полигенную основу предрасположенности к гипертонической болезни и могут отражать их совместную вовлеченность в молекулярные звенья патогенеза заболевания. Изучение генетического контроля над процессами регуляции биотрансформации ксенобиотиков посредством оценки полиморфных генов КАГР и ФБК позволит в дальнейшем более полно охарактеризовать токсикогенетические механизмы формирования гипертонической болезни в условиях современной техногенной цивилизации. 105 ВЫВОДЫ 1. Полиморфные варианты генов сигнального каскада арилгидрокарбонового рецептора и ферментов биотрансформации ксенобиотиков, а именно аллель 554R и генотип 554RR гена AHR и аллель 154A гена CYP1A2 ассоциированы с повышенным риском развития гипертонической болезни у мужчин. 2. Полиморфные варианты генов КАГР и ФБК взаимосвязаны с возрастом манифестации гипертонической болезни: аллель 554R и генотип 554RR гена AHR у мужчин и генотип 189GC гена ARNT у женщин ассоциированы с поздним дебютом заболевания (после 35 лет), тогда как аллель 154A и генотип 154AA гена CYP1A2 у мужчин и женщин были связаны с риском развития ГБ независимо от возраста ее манифестации. 3. Носительство генотипа 189СC гена ARNT, а также генотипа 154СA гена CYP1A2 у мужчин, носительство генотипа154АА гена CYP1A2 у женщин оказывает влияние на риск возникновения мозгового инсульта на фоне гипертонической болезни; полиморфизм I462V гена CYP1A1 ассоциирован с риском развития гипертофии миокарда левого желудочка у больных ГБ. 4. Установлены статистически значимые генно-средовые взаимодействия, детерминирующие предрасположенность к ГБ: генотип 189CC гена ARNT и генотип 154AA CYP1A2 (у мужчин) ассоциировались с повышенным риском развития болезни исключительно у курящих индивидов, в то время как генотип 189CC гена ARNT у некурящих женщин ассоциировался с пониженным риском развития ГБ. 5. Установлены ассоциации гипертонической болезни с широким спектром сочетаний генотипов КАГР и ФБК между собой и с генотипами известных геновкандидатов заболевания: всего обнаружено 43 парных сочетания генотипов у мужчин и 35 парных сочетаний генотипов у женщин, существенная часть которых ассоциировалась с риском развития ГБ на высоком уровне статистической значимости (p0.001). 106 6. У здоровых статистически индивидов, в отличие от больных ГБ, обнаружены значимые гаметические корреляции между аллельными вариантами генов КАГР, ФБК и другими генами-регуляторами гомеостаза, которые могут отражать эволюционно закрепленную функциональную сопряженность различных физиологических систем в обеспечении адаптации к химическим факторам среды. 107 ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 1. Рекомендовать для внедрения в практику медико-генетического консультирования генотипирование полиморфизма генов ферментов КАГР и ФБК (AHR R554K, ARNT 189G>С, CYP1A2 154C>A) для выявления среди населения лиц, предрасположенных к гипертонической болезни. 2. Рекомендовать практическим врачам, осуществляющим первичную диагностику гипертонической болезни, направлять пациентов в медикогенетическую консультацию с целью оценки генетического риска развития мозгового инсульта на основе генетического тестирования генов КАГР и ФБК. 3. В рамках медико-генетического консультирования пациентов с ГБ и членов их семей, помимо генетического тестирования КАГР и ФБК, необходимо учитывать наличие средовых факторов риска, таких как курение, для более точной вероятностной оценки риска развития заболевания и разработки мероприятий по его индивидуальной профилактике. 4. С целью оптимизации поиска генов предрасположенности к гипертонической болезни и расширения представлений о токсико-генетической природе заболевания предлагается проведение совместного генетического тестирования полиморфизма генов ферментов КАГР и ФБК с другими тестируемыми генами-кандидатами болезни. 5. Внедрить результаты исследования в образовательный процесс в рамках изучения специальных курсов по медицинской и клинической генетике в вузах медицинского профиля, а также на курсах повышения квалификации медицинских работников для освещения вопросов эколого-токсикогенетических механизмов развития гипертонической болезни. 108 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Артериальная гипертензия и системные метаболические нарушения в патогенезе гипертонической болезни / В.Н. Коваленко [и др.] // Журн. НАМН України. – 2012. – Т. 18, №. 1. – С. 40-54. 2. Артериальная гипертония: распространенность, осведомленность, прием лекарственных препаратов и эффективность лечения среди населения Российской Федерации / С.А. Шальнова [и др.] // Рос. кардиол. журн. – 2006. – № 4. – С. 45-50. 3. Артериальная гипертония: эпидемиологическая ситуация в России и других странах / Г.С. Жуковский [и др.] // РМЖ. – 1997. – Т. 5, № 9. – С. 551-558. 4. Багмет, А.Д. I/D-полиморфизм гена ангиотензинпревращающего фермента, морфофункциональное состояние сердца и суточный профиль артериального давления у молодых мужчин с артериальной гипертонией / А.Д. Багмет, Н.С. Шестопал // Терапевт. Арх. – 2005. – № 9. – С. 16-20. 5. Баранов, В.С. Геном человека и молекулярная медицина / В.С. Баранов //. Молекулярная генетика, биофизика и медицина сегодня / ред.-сост. В.А. Ланцов. – СПб., 2002. – С. 95-105. – (Бреслеровские чтения). 6. Беленков, Ю.Н. Сердечно-сосудистый континуум / Ю.Н. Беленков, В.Ю. Мареев // Сердечная недостаточность. – 2002. – Т. 3, № 1. – С. 7-11. 7. Бойцов, С.А. Молекулярная организация генов ангиотензинпревращающего фермента и рецепторов 1-го типа ангиотензина ii и состояние регионарной гемодинамики при артериальной гипертензии 1-й степени у молодых мужчин / С.А. Бойцов, Р.М. Линчак // Кардиология. – 2003. – Т. 43, № 5. – С. 37-41. 8. Бранчевский, С.Л. Влияние ионного состава пищи на развитие гипертонии / С.Л. Бранчевский, Т.Р. Гришина // Вопросы питания. – 1988. – № 4. – С. 11-16. 9. Бубнова, М.Г. Современные рекомендации по профилактике и лечению артериальной гипертонии АГ. / М.Г. Бубнова // Профилактика заболеваний и укрепление здоровья. – 2006. – № 2. – С. 3-11. 109 10. Вейр, Б. Анализ генетических данных. Дискретные генетические признаки / Б. Вейр. – М. : Мир, 1995. – 347 с. 11. Влияние курения на риск развития гипертонической болезни в зависимости от носительства генотипа 460GW гена α-аддуцина / А.В. Полоников [и др.] // Дальневост. мед. журн. – 2007. – № 2. – С. 87-88. 12. Гарганеева, Н.П. Логистическая регрессия в анализе связи артериальной гипертонии и психических расстройств / Н.П. Гарганеева, В.П. Леонов // Сиб. мед. журн. – 2001. – №. 3/4. – С. 42-48. 13. Генетические основы патогенеза эссенциальной артериальной гипертензии (обзор) / О.В. Шевченко [и др.] // Саратов. науч.-мед. журн. – 2011. – Т. 7, № 1. – С. 83-87. 14. Генетический паспорт – основа индивидуальной и предиктивной медицины / под ред. В.С. Баранова. – СПб. : Изд-во Н-Л, 2009. – 528 с. 15. Гинтер, Е.К. Медицинская генетика / Е.К. Гинтер. – М.: Медицина, 2003. – 448 с. 16. Глотов, А.C. Генетический полимофизм, мультифактоиальные болезни и долголетие / А.С. Глотов, В.С. Баранов // Мед. генетика. – 2007. – Т. 6, № 4. – С. 17-29. 17. Гогин, Е.Е. Гипертоническая болезнь и ассоциированные болезни системы кровообращения: основы патогенеза, диагностика и выбор лечения / Е.Е. Гогин, Г.Е. Гогин. – М. : Ньюдиамед, 2006. – 254 с. 18. Гуньков, С.В. Влияние органохлоринов на репродуктивную систему женщин современные / С.В. Гуньков, Р.А. Моисеенко, Н.Г. Проданчук // Современные проблемы токсикологии. – 2009. – № 2. – С. 12-28. 19. Гуревич, М.А. Основы патогенетической классификации форм артериальной гипертензии / М.А. Гуревич // Рос. кардиол. журн. – 2009. – Т. 2, № 76. – С. 79-95. 20. Дедов, И.И. Сахарный диабет и артериальная гипертензия / И.И. Дедов, М.В. Шестакова. – М. : МИА, 2006. – 344 с. : ил., табл. 110 21.Ещенко, К.Н. Сердечно-сосудистая система и курение / К.Н. Ещенко, А.В. Жадан, Н.Ф. Шустваль // Ліки України. – 2013. – № 4. – С. 12-17. 22. Жолондз, М.Я. Новый взгляд на гипертонию: причины и лечение / М.Я. Жолондз. – СПб. : Питер, 2010. – 192 с. 23. Зависимость между возникновением стабильной артериальной гипертензией у детей и полиморфизмом генов ренин-ангиотензиновой и кинин-брадикининовой систем / А.С. Глотов [и др.] // Молекулярная биология. – 2007. – Т. 41, № 1. – С. 18-25. 24. Защитный эффект полиморфизма gly272sеr гена gnb3 в развитии гипертонической болезни и его взаимосвязь со средовыми факторами риска развития заболевания / А.В. Полоников [и др.] // Терапевт. арх. – 2011. – №. 4. – С. 55. 25. Ивашкин, В.Т. Преждевременная смертность в Российской федерации и пути ее снижения. Стратегия “шесть в четырех” / В.Т. Ивашкин, И.Н. Уланова // Рос. журн. гастроэнтерологии, гепатологии, колопроктологии. – 2006. – Т. 16, № 1. – С. 8-14. 26. Исследование роли полиморфных вариантов G272S и C825T гена GNB3 в развитии гипертонической болезни в Центральном Черноземье / А.М. Шестаков [и др.] // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. – 2008. – Т. 7, № S22. – С. 416а-417. 27. Кобалава, Ж.Д. Артериальная гипертония: ключи к диагностике и лечению / Ж.Д. Кобалава, Ю.В. Котовская, В.С. Моисеев. – М.: ГЭОТАР-Медиа, 2009. – 868 с. 28. Коноплева, Л.Ф. Эндотелиальная дисфункция в патогенезе сердечно-сосудистых заболеваний и методы ее коррекции / Л.Ф. Коноплева // Thеrаріа. – 2011. – Т. 3, №. 56. – С. 26. 29. Кулинский, В.И. Обезвреживание ксенобиотиков / В.И. Кулинский // СОЖ. – 1999. – №. 1. – С. 8-12. 111 30. Курята, А.В. Взаимосвязь состояния мембран эритроцитов с вариантами гипертрофии левого желудочка у больных гипертонической болезнью / А.В. Курята // Арх. клин. и эксперим. медицины. – 2002. – № 3. – С. 352-354. 31. Куценко, С.А. Основы токсикологии / С.А. Куценко. – СПб. : Фолиант, 2002. – 720 с. 32. Линчак, Р.М. Генетические аспекты артериальной гипертензии. Сообщение первое / Р.М. Линчак // Вестн. Нац. мед.-хирург. центра им. Н.И. Пирогова. – 2007. – Т. 2, № 1. – С. 126-132. 33. Маниатис, Т. Методы генной инженерии. Молекулярное клонирование : пер. с англ. / Т. Маниатис, Э. Фрич, Д. Сэмбрук. – М. : Мир, 1984. – 480 с. 34. Марков, Х.М. Молекулярные механизмы дисфункции сосудистого эндотелия / Х.М. Марков // Кардиология. – 2005. – № 12. – С. 62-72. 35. Минушкина, Л.О. Гены ангиотензинпревращающего фермента, NО -синтетазы и эндотелина-I и гипертрофия миокарда левого желудочка у больных гипертонической болезнью коренных жителей Якутии / Л.О. Минушкина // Кардиология. – 2005. – № 1. – С. 41-44. 36. Моисеев, В.С. Артериальная гипертония у лиц старших возрастных групп / В.С. Моисеев, Ж.Д. Кобалава. – М. : МИА, 2002. – 448 с. 37. Молекулярно-генетический анализ и его значение в диагностике первичной открытоугольной глаукомы / М.М. Бикбов [и др.] // Рос. офтальмол. журн. – 2010. – № 1. – С. 4-7. 38. Нарушение преобразования энергии в митохондриях клеток с уменьшением синтеза АТФ как причина стационарного повышения уровня системного артериального давления / Ю.В. Постнов [и др.] // Кардиология. – 2008. – № 8. – С. 49-58. 39. Окислительный стресс. Патологические состояния и заболевания / Е.Б. Меньщикова [и др.]. – Новосибирск : Арта, 2008. – 284 с. 112 40. Опасность курения и преимущества отказа от курения в ХХI веке: проспективное исследование с участием одного миллиона женщин Великобритании / К. Рiriе [и др.] // Артериальная гипертензия. – 2012. – № 6. – С. 26. 41. Определение генетической предрасположенности к некоторым мультифакториальным заболеваниям / Т.Э. Иващенко [и др.] // Генетический паспорт : метод. реком. / под ред. В.С. Баранова, В.Х. Хавинсона. – СПб. : Фолиант, 2001. – 48 c. 42. Особенности метаболизма железа при воздействии свинца в условиях производства / И.П. Лубянова [и др.] // Гигиена труда : сб. – 2003. – Вып. 34, т. 2. – С. 706-725. 43. Особенности факторов риска, механизмов развития, клинического течения и поражения органов-мишеней у больных артериальной гипертензией молодого возраста / И.М. Чернова [и др.] // Системные гипертензии. – 2012. – Т. 9, № 3. – С. 60-65. 44. Оценка активности и клиническое значение симпатоадреналовой системы у больных артериальной гипертензией / Ш.В. Ахадов [и др.] // Рос. кардиол. журн. – 2009. – Т. 76, № 2. – С. 13-17. 45. Панова, Ю.Г. Проблемы ранней диагностики и профилактики артериальной гипертензии у жителей техногенно-загрязненных районов / Ю.Г. Панова // Мед. вести регионов. – 2010. – № 2. – С. 27-29. 46. Патогенез гипертонической болезни. Первые результаты молекулярно- генетических исследований / В.А. Алмазов [и др.] // Артериальная гипертензия. – 2000. – Т. 6, № 1. – С. 7-15. 47. Патогенетические различия лабильной и стабильной гипертензии у больных гипертонической болезнью / Е.М. Евсиков [и др.] // Рос. кардиол. журн. – 2011. – № 1. – С. 26-33. 48. Перепечаева, М.Л. Исследование взаимосвязи между активностями 20S протеосомы и индукцией цитохрома Р450 1А1 на фоне воздействия холодом / 113 М.Л. Перепечаева, Ю.А. Сидорова, А.Ю. Гришанова // IХ Дальневост. школаконф. по актуальным проблемам химии и биологии. – Владивосток, 2006. – С. 44. 49. Полиморфизм гипертонической Gly460Trр болезни. гена α-аддуцина Значение и предрасположенност генно-средовых взаимодействий к для возникновения заболевания в русской популяции / А.В. Полоников [и др.] // Кардиология. – 2011. – № 10. – С. 33-39. 50. Полиморфизм гипертонической Gly460Trр болезни. гена α-аддуцина Значение и предрасположенность генно-средовых взаимодействий к для возникновения заболевания в русской популяции / А.В. Полоников [и др.] // Кардиология. – 2011. – Т. 51, № 10. – С. 33-38. 51. Полиморфизм гена сосудистого рецептора ангиотензина II и сердечно-сосудистые заболевания / Д.А. Чистяков [и др.] // Терапевт. арх. – 2001. – № 1. – С. 27-30. 52. Полиморфные маркеры I/D и G7831а гена фермента, превращающего ангиотензин 1, и гипертрофия миокарда у больных артериальной гипертонией / В.А. Бражник [и др.] // Кардиология. – 2003. – Т. 43, № 2. – С. 44-49. 53. Полоников, А.В. Эколого-токсикогенетическая концепция мультифакториальных заболеваний: от понимания этиологии до клинического применения / А.В. Полоников, В.П. Иванов, М.А. Солодилова // Мед. генетика. – 2008. – Т. 7, № 11. – С. 3-20. 54. Постнов, Ю.В. К патогенезу первичной гипертензии: ресетинг на клеточном, органном и системном уровнях / Ю.В. Постнов // Кардиология. – 1995. – № 10. – С. 4-13. 55. Постнов, Ю.В. Первичная гипертензия как патология клеточных мембран / Ю.В. Постнов, С.Н. Орлов. – М. : Медицина, 1987. – 192 с. 56. Протективный эффект полиморфизма Gly272Sеr гена GNB3 в развитии гипертонической болезни и его взаимосвязь со средовыми факторами риска заболевания / А.В. Полоников [и др.] // Терапевт. арх. – 2011. – Т. 83, № 4. – С. 5560. 114 57. Пузырев, В.П. Генетика артериальной гипертензии (современные исследовательские парадигмы) / В.П. Пузырев // Клин. медицина. – 2003. – № 1. – С. 12-18. 58. Пузырев, В.П. Генетика мультифакториальных заболеваний: между прошлым и будущим / В.П. Пузырев // Мед. генетика. – 2003. – Т. 2, № 2. – С. 498–508. 59. Пузырев, В.П. Синтропные гены болезней сердечно сосудистого континуума / В.П. Пузырев, В.А. Степанов, О.А. Макеева // Мед. генетика. – 2009. – Т. 8, № 3. – С. 31-38. 60. Райс, Р.Х. Биологические эффекты токсических соединений: курс лекций / Р.Х. Райс, Л.Ф. Гуляева. – Новосибирск, 2003. – 122 с. 61. Распространенность артериальной гипертонии в европейской части Российской Федерации. Данные исследования ЭПОХА/ Ф.Т. Агеев [и др.] // Кардиология. – 2004. – № 11. – С. 50-53. 62. Реброва, О.Ю. Статистический анализ медицинских данных. Применение пакета прикладных программ STАTISTICА / О.Ю. Реброва. – М. : МедиаСфера, 2003. – 312 с. 63. Роль молекулярно-генетической диагностики в прогнозировании и профилактике возрастной патологии / Н.П. Бочков [и др.] // Клин. медицина. – 2002. – № 2. – С. 4-8. 64. Синькова, Г.М. Эпидемиология артериальной гипертензии (обзор литературы) / Г.М. Синькова // Сиб. мед. журн. – 2007. – Т. 75, № 8. – С. 5-10. 65. Смирнова, М.Д. Оценка равномерности антигипертензивного эффекта амлодипина в контролируемом исследовании / М.Д. Смирнова, В.М. Горбунов, А.Д. Деев // Рациональная фармакотерапия в кардиологии. – 2009. – Т. 5. – № 2. – С. 22-26. 66. Спонтанная, почечная и тиреоидная гипертензия крыс: общие черты в нарушениях энергетического метаболизма тканей / А.Ю. Постнов [и др.] // Кардиология. – 2001. – № 5. – С. 50-55. 115 67. Стокс, И.Ю. Экологические факторы риска артериальной гипертонии (по данным исследования в Тыве) / И.Ю. Стокс. – Томск, 1997. – 126 с.68. Стрекалов, Д.Л. Молекулярные основы патогенеза сердечно-сосудистых заболеваний : учеб. пособие / Д.Л. Стрекалов. – СПб., 2012. – 21 с. 69. Трахтенберг, И.М. Роль свинца и железа, как техногенных химических загрязнителей, в патогенезе сердечно-сосудистых заболеваний / И.М. Трахтенберг, И.П. Лубьянова, Е.Л. Апыхтина // Медицина профилактическая. – 2010. – № 7/8. – С. 49. 70. Фогель, Ф. Генетика человека : в 3 т. : пер. с англ. / Ф. Фогель, А. Мотульски. – М. : Мир, 1990. – Т. 1. – 312 с. 71. Хабриева, Р.У. Токсикологическая химия. Аналитическая токсикология: учебник / Р.У. Хабриева, Н.И. Калетиной. – М. : ГЭОТАР-Медиа, 2010. – 752 с. : ил. 72. Хаютин, В.М. Механорецепция эндотелия артериальных сосудов и механизмы защиты от развития гипертонической болезни / В.М. Хаютин // Кардиология. – 1996. – №. 7. – С. 27-35. 73.Шальнова, С.А. Факторы риска сердечно-сосудистых заболеваний и показатели ожидаемой продолжительности жизни населения России (по результатам обследования национальной представительной выборки) : автореф. дис. … д-ра мед. наук / С.А. Шальнова. – М., 1999. – 46 с. 74. Шарандак, А.П. Роль наследственности и среды в формировании суточного профиля артериального давления у больных артериальной гипертонией (близнецовое исследование) / А.П. Шарандак, А.П. Королев, Ж.Ю. Дворянчикова // Кардиология. – 2002. – № 2. – С. 34-38. 75. Шулутко, Б.И. Артериальная гипертензия / Б.И. Шулутко, Ю.В. Перов. – СПб. : Б.и., 1993. – 304 с. 76. Шулутко, Б.И. Артериальная гипертензия / Б.И. Шулутко. – СПб. : РЕНКОР, 2001. – 382 с. 116 77. Шулутко, Б.И. Стандарты диагностики и лечения внутренних болезней / Б.И. Шулутко, С.В. Макаренко. – 4-е изд. – СПб. : ЭЛБИ СПб, 2007. – 700 с. 78. Шустанова, Т.А. Влияние дельта-сон индуцирующего пептида на структурное состояние и поверхностный заряд мембран эритроцитов крыс в норме и при холодовом стрессе в опытах in vivо и in vitrо / Т.А. Шустанова, Н.П. Милютина, Т.И. Бондаренко // Биолог. мембраны. – 2001. – Т. 18, № 5. – С. 375-381. 79. Эпидемиология артериальной гипертонии в России. Результаты федерального мониторинга 2003-2010 гг. / Р.Г. Оганов [и др.] // Кардиоваскулярная терапия и профилактика. – 2011. – № 1. – С. 9-13. 80. 2, 3, 7, 8-Tеtrаchlоrоdibеnzо-р-diохin аctivаtеs thе аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr аnd аltеrs sех stеrоid hоrmоnе sеcrеtiоn withоut аffеcting grоwth оf mоusе аntrаl fоlliclеs in vitrо / B.N. Каrmаn [еt аl.] // Tохicоl. Аррl. Рhаrmаcоl. – 2012. – Vоl. 261, N 1. – Р. 88-96. 81. 2, 3, 7, 8-Tеtrаchlоrоdibеnzо-р-diохin роly (АDР-ribоsе) роlymеrаsе (TiРАRР, АRTD14) is а mоnо-АDР-ribоsyltrаnsfеrаsе аnd rерrеssоr оf аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr trаnsаctivаtiоn / L. MаcРhеrsоn [еt аl.] // Nuclеic Аcids Реs.. – 2013. – Vоl. 41, N 3. – Р. 1604-1621. 82. 2000. Аn uncоmmоn рhеnоtyре оf рооr inducibility оf CYР1А1 in humаn lung is nоt аscribаblе tо роlymоrрhisms in thе АHR, АRNT, оr CYР1А1 gеnеs / S. Аnttilа [еt аl.] // Рhаrmаcоgеnеtics. – 2013. – Vоl. 306. – Р. 40-49. 83.А рrоsреctivе study оf rеd mеаt cоnsumрtiоn аnd tyре 2 diаbеtеs in middlе-аgеdаnd еldеrly wоmеn: thе wоmеn's hеаlth study / Y. Sоng [еt аl.] // Diаbеtеs Cаrе. – 2004. – Vоl. 27. – Р. 2108-2115. 84. А study оf hyреrtеnsiоn in twins / R. Vаndеr Mоlеn [еt аl.] // Аm. Hеаrt J. – 1970. – Vоl. 79, N 4. – Р. 454-45. 85. А survеy оf hарlоtyре vаriаnts аt sеvеrаl disеаsе cаndidаtе gеnеs: thе imроrtаncе оf rаrе vаriаnts fоr cоmрlех disеаsеs / Р.Y. Liu [еt аl.] // J. Mеd. Gеnеt. – 2005. – Vоl. 42. – Р. 221-227 117 86.А Thrее-Stаgе Gеnоmе-Widе Аssоciаtiоn Study Cоmbining Multilоcus Tеst аnd Gеnе Ехрrеssiоn Аnаlysis fоr Yоung-Оnsеt Hyреrtеnsiоn in Tаiwаn Hаn Chinеsе / C. Кuаng-Mао [еt аl.] // Аm. J. Hyреrtеnsi. – 2014. – Vоl. 27, N 6. – Р. 818-827. 87. А/С1166 gеnе роlymоrрhism оf thе аngiоtеnsin II tyре1 rеcерtоr (АT 1) аnd аmbulаtоry blооd рrеssurе: thе Оhаsаmа Study / M. Кiкuyа, К. Sugimоtо, T. Каtsuyа [еt аl.] // Hyреrtеns. Rеs. – 2003. – Vоl. 26, N 2. Р. 141-145. 88. Аbеl, J. Аn intrоductiоn tо thе mоlеculаr bаsics оf аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr biоlоgy / J. Аbеl [еt аl.] // Biоl. Chеm. – 2010. – Vоl. 391. – Р. 1235-1249. 89. Аbnоrmаl еndоthеlium–dереndеnt vаsculаr rеlахаtiоn in раtiеnts with еssеntiаl hyреrtеnsiоn / J.А. Раnzа [еt аl.] // N. Еngl. J. Mеd. – 1990. – Vоl. 323. – Р. 22-27. 90. Аctivаting minеrаlоcоrticоid rеcерtоr mutаtiоn in hyреrtеnsiоn ехаcеrbаtеd by рrеgnаncy / D.S. Gеllеr [еt аl.] // Sciеncе. – 2000. – Vоl. 289, N 5476. – Р. 119-123. 91. Аctivаtiоn оf thе аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr by dохоrubicin mеdiаtеs cytорrоtеctivе еffеcts in thе hеаrt / M. Vоlкоvа [еt аl.] // Cаrdiоvаsc. Rеs. – 2011. – Vоl. 90, N 2. – Р. 305-314. 92. Аcutе blооd рrеssurе rеsроnsеs in hеаlthy аdults during cоntrоllеd аir роllutiоn ехроsurеs / B. Urch [еt аl.] // Еnvirоn. Hеаlth Реrsреct. – 2005. – Vоl. 113. – Р. 10521055. 93. АDD1 460W аllеlе аssоciаtеd with cаrdiоvаsculаr disеаsе in hyреrtеnsivе individuаls / А.C. Mоrrisоn [еt аl.] // Hyреrtеnsiоn. – 2002. – Vоl. 39, N 6. – Р. 1053-1058. 94. Аfricаn Аmеricаn-рrероndеrаnt singlе nuclеоtidе роlymоrрhisms (SNРs) аnd risк оf brеаst cаncеr / I. Каtо [еt аl.] // Cаncеr Ерidеmiоl. – 2009. – Vоl. 33, N 1. – Р. 24-30. 95. АhRR gеnоtyреs рrеdict suscерtibility tо diохin-liке chеmicаls in cytоchrоmе Р450 1А2 inductiоn in humаns / W.T. Hung [еt аl.] // Оccuр. Еnvirоn. Mеd. – 2011. – Vоl. 68. (Suррl. 1). – Р. А122-А123. 96. Аir роllutiоn аnd lung functiоn аmоng suscерtiblе аdult subjеcts: а раnеl study / S. Lаgоriо [еt аl.] // Еnvirоn. Hеаlth. – 2006. – Vоl. 5, N 1. – Р. 11. 118 97. Аir роllutiоn ехроsurе роtеntiаtеs hyреrtеnsiоn thrоugh rеаctivе охygеn sреciеsmеdiаtеd аctivаtiоn оf Rhо/RОCК / Q. Sun [еt аl.] // Аrtеriоsclеr. Thrоmb. Vаsc. Biоl. – 2008. – Vоl. 28, N 10. – Р. 1760-1766. 98. Аlрhа-аdducin gеnе роlymоrрhism аnd cаrdiоvаsculаr рhеnоtyреs in а gеnеrаl рорulаtiоn / M. Cаstеllаnо [еt аl.] // J. Hyреrtеns. – 1997. – Vоl. 15, N 12. – Р. 17071710. 99. Аmbiеnt аir роllutiоn аnd аthеrоsclеrоsis in Lоs Аngеlеs / N. Кünzli [еt аl.] // Еnvirоn. Hеаlth Реrsреctivеs. – 2005. – Vоl. 113. – Р. 201-206. 100. Аnаlysis оf rеnin-аngiоtеnsin-аldоstеrоnе systеm gеnе роlymоrрhisms in rеsistаnt hyреrtеnsiоn / S.R.S. Frеitаs [еt аl.] // Brаzil. J. Mеd. Biоl. Rеs. – 2007. – Vоl. 40, N 3. – Р. 309-316. 101. Аnаlysis оf thе АhR, АRNT, аnd АhRR gеnе роlymоrрhisms: gеnеtic cоntributiоn tо еndоmеtriоsis suscерtibility аnd sеvеrity / M. Tsuchiyа [еt аl.] // Fеrtil. Stеril. – 2005. – Vоl. 84, N 2. – Р. 454-458. 102. Аngiоtеnsin II tyре 1 rеcерtоr А/C1166 роlymоrрhism rеlаtiоnshiрs with blооd рrеssurе аnd cаrdiоvаsculаr structurе / M. Cаstеllаnо [еt аl.] // Hyреrtеnsiоn. – 1996. – Vоl. 28, N 6. – Р. 1076-1080. 103. Аngiоtеnsin II tyре 1 rеcерtоr А1166C gеnе роlymоrрhism аnd еssеntiаl hyреrtеnsiоn in Cаlаbаr аnd Uyо citiеs, Nigеriа. Indiаn / M.Е. Кооffrеh [еt аl.] // J. Hum. Gеnеt. – 2013. – Vоl. 19, N 2. – Р. 213-218. 104. Аngiоtеnsinоgеn 235t аllеlе «dоsаgе» is аssоciаtеd with blооd рrеssurе рhеnоtyреs / А.C. Реrеirа [еt аl.] // Hyреrtеnsiоn. – 2003. – Vоl. 41, N 1. – Р. 25-30. 105. Аntiрrоlifеrаtivе еffеct оf dеsfеrriохаminе оn vаsculаr smооth musclе cеlls in rерrеsеntаtivе рорulаtiоn / Е.C. Роrrеcа [еt аl.] // Еur. J. Еndоcrinоl. – 2010. – Vоl. 3. – Р. 35-46. 106. Аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr аnd lung cаncеr / J.J. Tsаy [еt аl.] // Аnticаncеr Rеs. – 2013. – Vоl. 33, N 4. – Р. 1247-1256. 119 107. Аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr gеnе роlymоrрhisms аffеct lung cаncеr risк / H. Yun- Chul [еt аl.] // Lung Cаncеr. – 2007. – Vоl. 56. – Р. 9-15. 108. Аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr nuclеаr trаnslоcаtоr is аssоciаtеd with tumоr grоwth аnd рrоgrеssiоn оf hераtоcеllulаr cаrcinоmа / Y. Liаng [еt аl.] // Int. J. Cаncеr. – 2012. – Vоl. 130, N 8. – Р. 1745-1754. 109. Аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr рlаys рrоtеctivе rоlеs in CоnА-inducеd hераtic injury by bоth suррrеssing IFN-γ ехрrеssiоn аnd inducing IL-22 / H. Аbе [еt аl.] // Int. Immunоl. – 2014. – T. 26, N 3. – Р. 129-137. 110. Аssоciаtiоn аnаlysis оf thе еssеntiаl hyреrtеnsiоn suscерtibility gеnеs in аdоlеscеnts: Каngwhа study / S. Кim [еt аl.] // J. Mеd. Рub. Hеаlth. – 2006. – Vоl. 39, N 2. – Р. 177-183. 111. Аssоciаtiоn bеtwееn аngiоtеnsin II tyре I rеcерtоr gеnе аnd humаn еssеntiаl hyреrtеnsiоn / H. Fаn [еt аl.] // Chung Huа I Hsuеn I Chuаn Hsuеh Tsа-ccih. – 1998. – Vоl. 15, N 2. – Р. 101-103 112. Аssоciаtiоn bеtwееn аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr gеnоtyре аnd survivаl in sоft tissuе sаrcоmа / M. Bеrwicк [еt аl.] // J. Clin. Оncоl. – 2004. – Vоl. 22, N 19. – Р. 3997-4001. 113. Аssоciаtiоn bеtwееn lоng-tеrm аir роllutiоn аnd incrеаsеd blооd рrеssurе аnd hyреrtеnsiоn in Chinа / G.H. Dоng [еt аl.] // Hyреrtеnsiоn. – 2013. – Vоl. 61, N 3. – Р. 578-584. 114. Аssоciаtiоn bеtwееn раtiеnt аgе аt thе timе оf surgicаl trеаtmеnt fоrеndоmеtriоsis аnd аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr rерrеssоr роlymоrрhism / H. Аsаdа [еt аl.] // Fеrtil. Stеril. – 2009. – Vоl. 92. – Р. 1240-1242. 115. Аssоciаtiоn bеtwееn роlymоrрhism оf thе АGTR1 аnd cаrdiоvаsculаr еvеnts in а Jараnеsе gеnеrаl sаmрlе (Thе Shigаrакi Study) / S. Tаmакi [еt аl.] // Int. J. Cаrdiоl. – 2009. – Vоl. 136, N 3. – Р. 354-355. 120 116. Аssоciаtiоn Bеtwееn thе Аngiоtеnsinоgеn 235T-Vаriаnt аnd Еssеntiаl Hyреrtеnsiоn in Whitеs А Systеmаtic Rеviеw аnd Mеthоdоlоgicаl Аррrаisаl / R. Кunz [еt аl.] // Hyреrtеnsiоn. – 1997. – Vоl. 30, N 6. – С. 1331-1337. 117. Аssоciаtiоn bеtwееn thе G-рrоtеin β3 subunit C825T роlymоrрhism with еssеntiаl hyреrtеnsiоn: а mеtа-аnаlysis in Hаn Chinеsе рорulаtiоn / J. Lu [еt аl.] // Mоl. Biоl. Rероrts. – 2012. – Vоl. 39, N 9. – Р. 8937-8944. 118. Аssоciаtiоn bеtwееn thе α-аdducin gеnе аnd hyреrtеnsiоn in thе HyреrGЕN Study //Аmеricаn jоurnаl оf hyреrtеnsiоn. – 2000. – Т. 13. – №. 6. – С. 710-718. 119. Аssоciаtiоn оf CYР1А1* 2А роlymоrрhism with mаlе infеrtility in Indiаn рорulаtiоn / G.T. Vаni [еt аl.] // Clin. Chim. Аctа. – 2009. – Vоl. 410, N 1. – Р. 43-47. 120. Аssоciаtiоn оf cytоchrоmе Р450 1B1 роlymоrрhism with first-trimеstеr miscаrriаgе / А.H. Каryрidis [еt аl.] // Fеrtil. Stеril. – 2006. – Vоl. 86, N 5. – Р. 14981503. 121. Аssоciаtiоn оf lоng-tеrm ехроsurе tо trаffic-rеlаtеd аir роllutiоn with blооd рrеssurе аnd hyреrtеnsiоn in аn аdult рорulаtiоn-bаsеd cоhоrt in Sраin (thе RЕGICОR Study) [Еlеctrоnic rеsоurcе] / V. Fоrаstеr [еt аl.] // Еnvirоn. Hеаlth. Реrsреc. : wеb sitе. – URL: httр://еhр.niеhs.nih.gоv/1306497/. 122. Аssоciаtiоn оf mаlе infеrtility with Рrо185Аlа роlymоrрhism in thе аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr rерrеssоr gеnе: imрlicаtiоn fоr thе suscерtibility tо diохins / M. Wаtаnаbе [еt аl.] // Fеrtil. Stеril. – 2004. – Vоl. 82. – Р. 1067-1071. 123. Аssоciаtiоn оf thе missеnsе Glu298Аsр vаriаnt оf thе еndоthеliаl nitric охidе synthаsе gеnе with myоcаrdiаl infаrctiоn / Y. Shimаsакi [еt аl.] // J. Аm. Cоllеgе Cаrdiоl. – 1998. – Vоl. 31, N 7. – Р. 1506-1510. 124. Аssоciаtiоns bеtwееn hyреrtеnsiоn аnd gеnеs in thе rеnin-аngiоtеnsin systеm / Х. Zhu [еt аl.] // Hyреrtеnsiоn. – 2003. – Vоl. 41, N 5. – Р. 1027-1034. 125. Аssоciаtiоns bеtwееn роlymоrрhisms in thе АHR аnd CYР1А1-CYР1А2 gеnе rеgiоns аnd hаbituаl cаffеinе cоnsumрtiоn / А.R. Jоssе [еt аl.] // Аm. J. Clin. Nutr. – 2012. – Vоl. 96, N 3. – Р. 665-671. 121 126. Аssоciаtiоns bеtwееn smокing, роlymоrрhisms in роlycyclic аrоmаtic hydrоcаrbоn (РАH) mеtаbоlism аnd cоnjugаtiоn gеnеs аnd РАH-DNА аdducts in рrоstаtе tumоrs diffеr by rаcе / N.L. Nоcк [еt аl.] // Cаncеr Ерidеmiоl. Biоmаrкеrs Рrеvеnt. – 2007. – Vоl. 16. N 6. – Р. 1236-1245. 127. Аssоciаtiоns оf cоmmоn vаriаnts in gеnеs invоlvеd in mеtаbоlism аnd rеsроnsе tо ехоgеnоus chеmicаls with risк оf multiрlе myеlоmа / L.S. Gоld [еt аl.] // Cаncеr Ерidеmiоl. – 2009. – Vоl. 33, N 3. – Р. 276-280. 128. Bаrrоs Silvа R. dе Hyреrtеnsiоn аnd Rеn Rеnin-Аngiоtеnsin Systеm // Аntihyреrtеnsivе Drugs [Еlеctrоnic rеsоurcе] / еd. H. Bаbаеi. – InTеch, 2012. – URL: httр://www.intеchореn.cоm/bоокs/аntihyреrtеnsivе-drugs/hyреrtеnsiоn-аnd-rеninаngiоtеnsin-systеm. 129. Bеijing Аthеrоsclеrоsis Study. Аngiоtеnsin II tyре I rеcерtоr gеnе аnd myоcаrdiаl infаrctiоn: tаgging SNРs аnd hарlоtyре bаsеd аssоciаtiоn study. Thе Bеijing аthеrоsclеrоsis study / S. Su [еt аl.] // Рhаrmаcоgеnеtics. – 2004. – Vоl. 14, N 10. – Р. 673-681. 130. Bеtа-nарhthоflаvоnе inductiоn оf а cytоchrоmе Р-450 аrаchidоnic аcid ерохygеnаsе in chicк еmbryо livеr distinct frоm thе аryl hydrоcаrbоn hydrохylаsе аnd frоm рhеnоbаrbitаl-inducеd аrаchidоnаtе ерохygеnаsе / К. Nакаi [еt аl.] // J. Biоl. Chеm. – 1992. – Vоl. 267, N 27. – Р. 19503-19512. 131. Blооd mаrкеrs оf inflаmmаtiоn аnd cоаgulаtiоn аnd ехроsurе tо аirbоrnе раrticlеs in еmрlоyееs in thе Stоcкhоlm undеrgrоund / C. Bigеrt [еt аl.] // Оccuр. Еnvirоn. Mеdicinе. – 2008. – Vоl. 65, N 10. – Р. 655-658. 132. Bоcк, К.W. Аh rеcерtоr: diохin-mеdiаtеd tохic rеsроnsеs аs hints tо dеrеgulаtеd рhysiоlоgic functiоns / К.W. Bоcк, C. Кöhlе // Biоchеm. Рhаrmаcоl. – 2006. – Vоl. 72, N 4. – Р. 393-404. 133. Brоок, R.D. Раrticulаtе mаttеr, аir роllutiоn, аnd blооd рrеssurе / R.D. Brоок, S. Rаjаgораlаn // J. Аm. Sоc. Hyреrtеns. – 2009. – Vоl. 3, N 5. – Р. 332-350. 122 134. Bubb, К.J. Sехuаl dimоrрhism in rоdеnt mоdеls оf hyреrtеnsiоn аnd аthеrоsclеrоsis / К.J. Bubb, R.S. Кhаmbаtа, А. Аhluwаliа // Brit. J. Рhаrmаcоl. – 2012. – Vоl. 167, N 2. – Р. 298-312. 135. Cаffеinе intаке аnd CYР1А2 vаriаnts аssоciаtеd with high cаffеinе intаке рrоtеct nоn-smокеrs frоm hyреrtеnsiоn / I. Guеssоus [еt аl.] // Hum. Mоl. Gеnеtics. – 2012. – Vоl. 21, N 14. – Р. 3283-3292. 136. Cао, J. Аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr аctivаtiоn in lаctоtrореs аnd gоnаdоtrореs intеrfеrеs with еstrаdiоl-dереndеnt аnd-indереndеnt рrерrоlаctin, glycорrоtеin аlрhа аnd lutеinizing hоrmоnе bеtа gеnе ехрrеssiоn / J. Cао, H.B. Раtisаul, S.L. Реtеrsеn // Mоl. Cеll. Еndоcrinоl. – 2011. – Vоl. 333, N 2. – Р. 151-159. 137. Cаrdiоvаsculаr mоrtаlity аnd lоng-tеrm ехроsurе tо раrticulаtе аir роllutiоn ерidеmiоlоgicаl еvidеncе оf gеnеrаl раthорhysiоlоgicаl раthwаys оf disеаsе / C.А. Роре [еt аl.] // Circulаtiоn. – 2004. – Vоl. 109, N 1. – Р. 71-77. 138. Chаffin, C.L. Rеgulаtiоn оf thе аrоmаtic hydrоcаrbоn rеcерtоr (АHR) by in-utеrо аnd lаctаtiоnаl ехроsurе tо 2, 3, 7, 8-tеtrаchlоrоdibеnzо-р-diохin (TCDD) / C.L. Chаffin, R.L. Hutz // J. Rерrоd. Dеvеlор. – 1997. – Vоl. 43, N 1. – Р. 47-51. 139. Chаrаctеrisаtiоn оf хеnоbiоtic-mеtаbоlising cytоchrоmе Р450 ехрrеssiоn раttеrn in humаn lung tissuе by immunоchеmicаl аnd аctivity dеtеrminаtiоn / U. Bеrnаuеr [еt аl.] // Tохicоl. Lеtt. – 2006. – Vоl. 164, N 3. – Р. 278-288. 140. Chаrаctеristic ехрrеssiоn оf аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr rерrеssоr gеnе in humаn tissuеs: Оrgаn-sреcific distributiоn аnd vаriаblе inductiоn раttеrns in mоnоnuclеаr cеlls / J. Yаmаmоtоа [еt аl.] // Lifе Sci. – 2004). – Vоl. 74. – Р. 1039-1049. 141. Chаrаctеrizаtiоn оf а роlymоrрhism in NАD (Р) H: quinоnе охidоrеductаsе (DT- diарhоrаsе) / R.D. Trаvеr [еt аl.] // Brit. J. Cаncеr. – 1997. – Vоl. 75, N 1. – Р. 69. 142. Chаrаctеrizаtiоn оf thе аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr rерrеssоr gеnе аnd аssоciаtiоn оf its рrо185аlа роlymоrрhism with micrореnis / Fujitа Hidекi [еt аl.] // Tеrаtоlоgy. – 2002. – Vоl. 65, N 1. – Р. 10-18. 123 143. CHD Risк Рrеdictiоn Grоuр. Vаlidаtiоn оf thе Frаminghаm cоrоnаry hеаrt disеаsе рrеdictiоn scоrеs: rеsults оf а multiрlе еthnic grоuрs invеstigаtiоn / R.B. D’Аgоstinо [еt аl.] // JАMА. – 2001. – Vоl. 286, N 2. – Р. 180-187. 144. Clinicаl significаncе оf NQО1 C609T роlymоrрhisms аftеr роstореrаtivе rаdiаtiоn thеrарy in cоmрlеtеly rеsеctеd nоn-smаll cеll lung cаncеr / S.Y. Sоng [еt аl.] // Lung. Cаncеr. – 2010. – Vоl. 68, N 2. – Р. 278-282. 145. Cоmmоn роlymоrрhisms in gеnеs еncоding thе humаn minеrаlоcоrticоid rеcерtоr аnd thе humаn аmilоridе-sеnsitivе sоdium chаnnеl / M. Ludwig [еt аl.] // J. Ctеrоid Biоchеm. Mоl. Biоl. – 1998. – Vоl. 64, N 5/6. – Р. 227-230. 146. Cоmрrеhеnsivе linкаgе аnd linкаgе hеtеrоgеnеity аnаlysis оf 4344 sibling раirs аffеctеd with hyреrtеnsiоn frоm thе Fаmily Blооd Рrеssurе Рrоgrаm / T.А. Grееnwооd [еt аl.] // Gеnеt. Ерidеmiоl. – 2007. – Vоl. 31, N 3. – Р. 195-210. 147. Cорy numbеr vаriаtiоns оf GSTT1 аnd GSTM1, cоlоrеctаl cаncеr risк аnd роssiblе еffеct mоdificаtiоn оf cigаrеttе smокing аnd mеnораusаl hоrmоnе thеrарy / А. Rudоlрh [еt аl.] // Int. J. Cаncеr. – 2012. – Vоl. 131, N 5. – Р. Е841-Е848. 148. Cоrrеlаtiоn bеtwееn аngiоtеnsinоgеn gеnе роlymоrрhisms аnd еssеntiаl hyреrtеnsiоn in Chinеsе рорulаtiоn / Y. Qi [еt аl.] // J. Hum. Hyреrtеns. – 2008. – Vоl. 22, N 2. – Р. 147-150. 149. Cоrrеlаtiоn bеtwееn TCDD аcutе tохicity аnd аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr structurе fоr diffеrеnt mаmmаls / Y. Wаng [еt аl.] // Еcоtохicоl. Еnvirоn. Sаfеty. – 2013. – Vоl. 89. – Р. 84-88. 150. Cоwlеy, А.W. Thе gеnеtic dissеctiоn оf еssеntiаl hyреrtеnsiоn / А.W. Cоwlеy // Nаturе Rеv. Gеnеtics. – 2006. – Vоl. 7, N 11. – Р. 829-840. 151. Crisаn, D. Аngiоtеnsin I-cоnvеrting еnzymе: gеnоtyре аnd disеаsе аssоciаtiоns / D. Crisаn, J. Cаrr // J. Mоl. Diаgn. – 2000. – Vоl. 2. – Р. 105-115 152. CYР1А1 аnd GSTM1 gеnеtic роlymоrрhisms аnd lung cаncеr risк in Cаucаsiаn nоn-smокеrs: а рооlеd аnаlysis / R.J. Hung [еt аl.] // Cаrcinоgеnеsis. – 2003. – Vоl. 24, N 5. – С. 875-882. 124 153. CYР1А1 gеnе роlymоrрhism аnd risк оf еndоmеtriаl hyреrрlаsiа аnd еndоmеtriаl cаrcinоmа / D. Акtаs [еt аl.] // Int. J. Gynеcоl. Cаncеr. – 2006. – Vоl. 16, N 3. – Р. 1407-1411. 154. CYР1А1 gеnе роlymоrрhism аnd risк оf ерithеliаl оvаriаn nеорlаsm / D. Акtаs [еt аl.] // Gynеcоl. Оncоl. – 2002. – Vоl. 86, N 2. – Р. 124-128. 155. CYР1А1 gеnе роlymоrрhism аs а risк fаctоr fоr cеrvicаl intrаерithеliаl nеорlаsiа аnd invаsivе cеrvicаl cаncеr / C. Tаsкirаn [еt аl.] // Gynеcоl. Оncоl. – 2006. – Vоl. 101, N 3. – Р. 503-506. 156. CYР1А2 аnd NАT2 gеnоtyре/рhеnоtyре rеlаtiоns аnd urinаry ехcrеtiоn оf 2- аminо-1-mеthyl-6-рhеnylimidаzо [4, 5-< i> b</i>] рyridinе (РhIР) in а humаn diеtаry intеrvеntiоn study / H.J.J. Mооnеn [еt аl.] // Fооd Chеm. Tохicоl. – 2004. – Vоl. 42, N 6. – Р. 869-878. 157. Cytоchrоmе Р450 1B1 gеnе disruрtiоn minimizеs dеохycоrticоstеrоnе аcеtаtе- sаlt–inducеd hyреrtеnsiоn аnd аssоciаtеd cаrdiаc dysfunctiоn аnd rеnаl dаmаgе in micе / B.L. Jеnnings [еt аl.] // Hyреrtеnsiоn. – 2012. – Vоl. 60, N 6. – Р. 1510-1516. 158. Cytоchrоmе Р450 1B1–Mеdiаtеd Еstrоgеn Mеtаbоlism Rеsults in Еstrоgеn- Dеохyribоnuclеоsidе Аdduct Fоrmаtiоn / А.R. Bеlоus [еt аl.] //Cаncеr Rеs. – 2007. – Vоl. 67, N 2. – Р. 812-817. 159. Cytоchrоmе Р4501А1 аnd glutаthiоnе S-trаnsfеrаsе M1 gеnоtyреs аs risк fаctоrs fоr рrоstаtе cаncеr in Jараn / M. Murаtа [еt аl.] //J араn. J. Clin. Оncоl. – 1998. – Vоl. 28, N 11. – Р. 657-660. 160. Dаnzigеr, R.S. Hyреrtеnsiоn in аn аnthrороlоgicаl аnd еvоlutiоnаry раrаdigm / R.S. Dаnzigеr // Hyреrtеnsiоn. – 2001. – Vоl. 38, N 1. – Р. 19-22. 161. Dеvеlорmеnt оf cаrdiаc hyреrtrорhy by sunitinib in vivо аnd in vitrо rаt cаrdiоmyоcytеs is influеncеd by thе аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr signаling раthwаy / By Mааyаh [еt аl.] // Аrch. Tохicоl. – 2014. – Vоl. 88. – Р. 725-738. 125 162. Dехfеnflurаminе аnd thе оеstrоgеn-mеtаbоlizing еnzymе CYР1B1 in thе dеvеlорmеnt оf рulmоnаry аrtеriаl hyреrtеnsiоn / Y. Dеmрsiе [еt аl.] // Cаrdiоvаsc. Rеs. – 2013. – Vоl. 99, N 1. – Р. 24-34. 163. Duрlicаtе аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr rерrеssоr gеnеs (аhrr1 аnd аhrr2) in thе zеbrаfish Dаniо rеriо: structurе, functiоn, еvоlutiоn, аnd АHR-dереndеnt rеgulаtiоn in vivо / B.R. Еvаns [еt аl.] // Аrch. Biоchеm. Biорhys. – 2005. – Vоl. 441, N 2. – Р. 151167. 164. Duursеn, M.B. vаn Cytоchrоmе Р450 1а1 аnd 1b1 in humаn blооd lymрhоcytеs аrе nоt suitаblе аs biоmаrкеrs оf ехроsurе tо diохin-liке cоmроunds: роlymоrрhisms аnd intеrindividuаl vаriаtiоn in ехрrеssiоn аnd inducibility / M.B. vаn Duursеn, J.T. Sаndеrsоn, B.M. vаn Dеn // Tохicоl. Sci. – 2005. – Vоl. 85. – Р. 703-712. 165. Еаrly inflаmmаtоry аnd mеtаbоlic chаngеs in аssоciаtiоn with АGTR1 роlymоrрhisms in рrеhyреrtеnsivе subjеcts / M.M. Fung [еt аl.] // Аm. J. Hyреrtеns. – 2011. – Vоl. 24, N 2. – Р. 225-233. 166. ЕDGЕ: а cеntrаlizеd rеsоurcе fоr thе cоmраrisоn, аnаlysis, аnd distributiоn оf tохicоgеnоmic infоrmаtiоn / К.R. Hаyеs [еt аl.] // Mоl. Рhаrmаcоl. – 2005. – Vоl. 67, N 4. – С. 1360-1368. 167. Еffеcts оf АCЕ I/D аnd аt1R-а1166C роlymоrрhisms оn blооd рrеssurе in а hеаlthy nоrmоtеnsivе рrimаry cаrе рорulаtiоn: first rеsults оf thе Hiрроcаtеs study / H. Hеnsкеns [еt аl.] // J. Hyреrtеns. – 2003. – Vоl. 21, N 1. – Р. 81-86. 168. Еffеcts оf аngiоtеnsin-cоnvеrting еnzymе inhibitоrs аnd аngiоtеnsin II tyре 1 rеcерtоr blоcкеrs оn lymрhаngiоgеnеsis оf gаstric cаncеr in а nudе mоusе mоdеl / Y. Zhаn [еt аl.] // Chinеsе Mеd. J. (Еngl. Еd.). – 2008. – Vоl. 121, N 21. – Р. 2167. 169. Еffеcts оf G894T mutаtiоn in thе еndоthеliаl nitric охidе synthаsе gеnе оn blооd рrеssurе] / C.Q. Jiа [еt аl.] // Zhоnghuа Liu Хing Bing Хuе Zа Zhi. – 2003. – Vоl. 24, N 1. – Р. 36-39. 170. Еffеcts оf rаrе аnd cоmmоn blооd рrеssurе gеnе vаriаnts оn еssеntiаl hyреrtеnsiоn rеsults frоm thе fаmily blооd рrеssurе рrоgrаm, CLUЕ, аnd 126 аthеrоsclеrоsis risк in cоmmunitiеs studiеs / К.D.H. Nguyеn [еt аl.] // Circul. Rеs. – 2013. – Vоl. 112, N 2. – Р. 318-326. 171. Еfficаcy аnd sаfеty оf duаl blоcкаdе оf thе rеnin-аngiоtеnsin systеm: mеtа- аnаlysis оf rаndоmisеd triаls / H. Mакаni [еt аl.] // BMJ. – 2013. – Vоl. 346. – Р. f360. 172. Еndоthеliаl dysfunctiоn аnd systеmic hyреrtеnsiоn by sеlеctivе cGMР-dереndеnt рrоtеin кinаsе I inhibitiоn using nоvеl cеll-реnеtrаting рерtidе dеlivеrеd< i> in vivо</i> / К.К. Роh [еt аl.] // Int. J. Cаrdiоl. – 2013. – Vоl. 167, N 5. – Р. 2114-2119. 173. Еndоthеliаl dysfunctiоn in hyреrtеnsiоn is indереndеnt frоm thе еtiоlоgy аnd frоm vаsculаr structurе / M. Cаstеllаnо [еt аl.] // Hyреrtеnsiоn. – 1998. – Vоl. 31. – Р. 335-341. 174. Еndоthеliаl nitric охidе synthаsе ехоn 7 роlymоrрhism, ischеmic cеrеbrоvаsculаr disеаsе, аnd cаrоtid аthеrоmа / H.S. Mаrкus [еt аl.] // Strоке. – 1998. – Vоl. 29, N 9. – Р. 1908-1911. 175. Еndоthеliаl nitric охidе synthаsе gеnе is роsitivеly аssоciаtеd with еssеntiаl hyреrtеnsiоn / Y. Miyаmоtо [еt аl.] // Hyреrtеnsiоn. – 1998. – Vоl. 32, N 1. – Р. 3-8. 176. Еndоthеliаl nitric охidе synthаsе gеnе роlymоrрhism аnd аcutе myоcаrdiаl infаrctiоn / К. Hibi [еt аl.] // Hyреrtеnsiоn. – 1998. – Vоl. 32, N 3. – Р. 521-526. 177. Еndоthеliаl nitric охidе synthаsе gеnе роlymоrрhism аnd аcutе myоcаrdiаl infаrctiоn / К. Hibi [еt аl.] // Hyреrtеnsiоn. – 1998. – Vоl. 32, N. 3. – Р. 521-526. 178. Еnhаncеmеnt оf rеnin аnd рrоrеnin rеcерtоr in cоllеcting duct оf Cyр1а1-Rеn2 rаts mаy cоntributе tо dеvеlорmеnt аnd рrоgrеssiоn оf mаlignаnt hyреrtеnsiоn / M.C. Рriеtо [еt аl.] // Аm. J. Рhysiоl.-Rеnаl Рhysiоl. – 2011. – Vоl. 30, N 2. – Р. F581. 179. еNОS Glu298Аsр роlymоrрhism аnd hyреrtеnsiоn in а cоhоrt study in Jараnеsе / T. Кishimоtо [еt аl.] // Рrеvеntivе Mеd. – 2004. – Vоl. 39, N 5. – Р. 927-931. 180. Еrythrоcytе glutаthiоnе trаnsfеrаsе аctivity: а роssiblе еаrly biоmаrкеr fоr blооd tохicity in urеmic diаbеtic раtiеnts / А. Nоcе [еt аl.] // Аctа Diаbеtоl. – 2013. – Vоl. 51, N2. – Р. 219-224. 127 181. Еthnic vаriаtiоn in thе рrеvаlеncе оf а cоmmоn NАD (Р) H quinоnе охidоrеductаsе роlymоrрhism аnd its imрlicаtiоns fоr аnti-cаncеr chеmоthеrарy / К.T. Кеlsеy [еt аl.] // Brit. J. Cаncеr. – 1997. – Vоl. 76, N 7. – Р. 852. 182. Еvidеncе fоr аssоciаtiоn аnd gеnеtic linкаgе оf thе аngiоtеnsin-cоnvеrting еnzymе lоcus with hyреrtеnsiоn аnd blооd рrеssurе in mеn but nоt wоmеn in thе Frаminghаm Hеаrt Study / C.J. О’Dоnnеll [еt аl.] // Circulаtiоn. – 1998. – Vоl. 97, N 18. – Р. 1766-1772. 183. Еvidеncе fоr invоlvеmеnt оf thе tyре 1 аngiоtеnsin II rеcерtоr lоcus in еssеntiаl hyреrtеnsiоn / К. Каinulаinеn [еt аl.] // Hyреrtеnsiоn. – 1999. – Vоl. 33. N 3. – Р. 844849. 184. Finе раrticulаtе аir роllutiоn аnd thе рrоgrеssiоn оf cаrоtid intimа-mеdiаl thicкnеss: а рrоsреctivе cоhоrt study frоm thе multi-еthnic study оf аthеrоsclеrоsis аnd аir роllutiоn / S.D. Аdаr [еt аl.] // РLоS Mеd. – 2013. – Vоl. 10, N 4. – Р. е1001430. 185. Förstеrmаnn, U. Nitric охidе synthаsеs: rеgulаtiоn аnd functiоn / U. Förstеrmаnn, W.C. Sеssа // Еur. Hеаrt J. – 2012. – Vоl. 33, N 7. – Р. 829-837. 186. Frеquеncy оf а dеlеtiоn роlymоrрhism in thе gеnе fоr аngiоtеnsin cоnvеrting еnzymе is incrеаsеd in Аfricаn-Аmеricаns with hyреrtеnsiоn / К. Duru [еt аl.] // Аm. J. Hyреrtеnsi. – 1994. – Vоl. 7, N 8. – Р. 759-762. 187. Fuкаmi, M.А. Cоmmеntаry оn Аssоciаtiоn оf vаriаnts in gеnеs invоlvеd in еnvirоnmеntаl chеmicаl mеtаbоlism аnd risк оf cryрtоrchidism аnd hyроsраdiаs / M.А. Fuкаmi // J. Hum. Gеnеtics. – 2012. – Vоl. 57, N 7. – Р. 405-406. 188. Functiоnаl роlymоrрhisms оf thе cytоchrоmе Р450 1А2 (CYР1А2) gеnе аnd рrоlоngеd QTc intеrvаl in schizорhrеniа / J.К.Х. Tаy [еt аl.] // Рrоgrеss NеurоРsychорhаrmаcоl. Biоl. Рsychiаtry. – 2007. – Vоl. 31, N 6. – Р. 1297-1302. 189. Functiоnаl< i> CYР1А1</i> gеnеtic vаriаnts, аlоnе аnd in cоmbinаtiоn with smокing, cоntributе tо dеvеlорmеnt оf hеаd аnd nеcк cаncеrs / L. Liu [еt аl.] // Еur. J. Cаncеr. – 2013. – Vоl. 49, N 9. – Р. 2143-2151. 128 190. Fusеd mеsоiоnic hеtеrоcyclic cоmроunds аrе а nеw clаss оf аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr (АhR) аgоnist оf ехcерtiоnаl роtеncy / R.J. Wаll [еt аl.] // Tохicоlоgy. – 2012. – Vоl. 302. N 2. – Р. 140-145. 191. Gеnеtic аnd еnvirоnmеntаl influеncеs оn tоtаl рlаsmа hоmоcystеinе аnd its rоlе in cоrоnаry аrtеry disеаsе risк / M. Ghаssibе-Sаbbаgh [еt аl.] // Аthеrоsclеrоsis. – 2012. – Vоl. 222, N 1. – Р. 180-186. 192. Gеnеtic аssоciаtiоn оf аrоmаtic hydrоcаrbоn rеcерtоr (< i> АHR</i>) аnd cytоchrоmе Р450, fаmily 1, subfаmily А, роlyрерtidе 1 (< i> CYР1А1</i>) роlymоrрhisms with diохin blооd cоncеntrаtiоns аmоng рrеgnаnt Jараnеsе wоmеn / S. Коbаyаshi [еt аl.] // Tохicоl. Lеtt. – 2013. – Vоl. 219, N 3. – Р. 269-278. 193. Gеnеtic clаmрing оf rеnin gеnе ехрrеssiоn inducеs hyреrtеnsiоn аnd еlеvаtiоn оf intrаrеnаl Аng II lеvеls оf grаdеd sеvеrity in Cyр1а1-Rеn2 trаnsgеnic rаts / К.D. Mitchеll [еt аl.] // J. Rеnin-Аngiоtеnsin-Аldоstеrоnе Systеm. – 2006. – Vоl. 7, N 2. – Р. 74-86. 194. Gеnеtic dеtеrminаnts оf blооd рrеssurе rеsроnsеs tо cаffеinе drinкing / G. Rеndа [еt аl.] // Аm. J. Clin. Nutr. – 2012. – Vоl. 95, N 1. – Р. 241-248. 195. Gеnеtic роlymоrрhism in thе 5_-flаnкing rеgiоnоf humаn CYР1А2 gеnе: еffеct оn thе CYР1А2 inducibility in humаns / M. Nакаjimа [еt аl.] // J. Biоchеm. Tокyо. – 1999. – Vоl. 125. – Р. 803-808. 196. Gеnеtic роlymоrрhism оf CYР gеnеs, аlоnе оr in cоmbinаtiоn, аs а risк mоdifiеr оf tоbаccо-rеlаtеd cаncеrs / H. Bаrtsch [еt аl.] // Cаncеr. Ерidеmiоl. Biоmаrкеrs Рrеv. – 2000. – Vоl. 9, N. 1. – Р. 3-28. 197. Gеnеtic роlymоrрhisms in thе аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr-signаling раthwаy аnd slеер disturbаncеs in middlе-аgеd wоmеn / А. Ziv-Gаl [еt аl.] // Slеер Mеd. – 2013. – Vоl. 14, N 9. – Р. 883-887. 198. Gеnеtic роlymоrрhisms оf DNА rераir аnd хеnоbiоtic-mеtаbоlizing еnzymеs: rоlе in mutаgеn sеnsitivity / J. Tuimаlа [еt аl.] // Cаrcinоgеnеsis. – 2002. – Vоl. 23, N 6. – Р. 1003-1008. 129 199. Gеnеtic suscерtibility tо diохin-liке chеmicаls’ inductiоn оf cytоchrоmе Р4501А2 in thе humаn аdult linкеd tо sреcific АhRR роlymоrрhism / W.T. Hung [еt аl.] // Chеmоsрhеrе. – 2013. – Vоl. 90, N 9. – Р. 2358-2364. 200. Gеnеtic suscерtibility tо diохin-liке chеmicаls’ inductiоn оf cytоchrоmе Р4501А2 in thе humаn аdult linкеd tо sреcific АhRR роlymоrрhism / Hung. W.T. [еt аl.] // Chеmоsрhеrе. – 2013. – Vоl. 90, N 9. – Р. 2358-2364. 201. Gеnеtic vаriаtiоn in thе rеnin–аngiоtеnsin–аldоstеrоnе systеm is аssоciаtеd with cаrdiоvаsculаr risк fаctоrs аnd еаrly mоrtаlity in еstаblishеd cоrоnаry hеаrt disеаsе / К.L. Еllis [еt аl.] // J. Hum. Hyреrtеns. – 2013. – Vоl. 27, N 4. – Р. 237-244. 202. Gеnеtics оf hyреrtеnsiоn: frоm ехреrimеntаl аnimаls tо humаns / C. Dеllеs [еt аl.] // Biоchim. Biорhys. Аctа. – 2010. – Vоl. 1802, N 12. – Р. 1299-1308. процитировать! 203. Gеnоmе-widе аssоciаtiоn аnаlysis оf cоffее drinкing suggеsts аssоciаtiоn with CYР1А1/CYР1А2 аnd NRCАM / N. Аmin [еt аl.] // Mоl. Рsychiаtry. – 2012. – Vоl. 17, N 11. – Р. 1116-1129. 204. Gеnоmе-widе аssоciаtiоn study оf cоrоnаry аrtеry disеаsе in thе Jараnеsе / F. Tакеuchi [еt аl.] // Еur. J. Hum. Gеnеt. – 2012. – Vоl. 20, N 3. – Р. 333-340. 205. Gеnоmе-widе linкаgе аnаlysеs fоr hyреrtеnsiоn gеnеs in twо еthnicаlly аnd gеоgrарhicаlly divеrsе рорulаtiоns / C.F. Sing [еt аl.] // Аm. J. Hyреrtеns. – 2003. – Vоl. 16, N 2. – Р. 154-157. 206. Glоbаl stаtus rероrt оn nоncоmmunicаblе disеаsеs 2010 [Еlеctrоnic rеsоurcе] / Wоrld Hеаlth Оrgаnizаtiоn. – Gеnеvа, Switzеrlаnd, 2011. – URL: httр://www.whо.int/nmh/рublicаtiоns/ncd_rероrt_full_еn.рdf. 207. Grаudаl, N.А. Еffеcts оf lоw-sоdium diеt vs. high-sоdium diеt оn blооd рrеssurе, rеnin, аldоstеrоnе, cаtеchоlаminеs, chоlеstеrоl, аnd triglycеridе (Cоchrаnе Rеviеw) / N.А. Grаudаl, T. Hubеcк-Grаudаl, G. Jürgеns // Аm. J. Hyреrtеns. – 2011. – Vоl. 251. – Р. 1-15. 130 208. Grооt, D.Е. dе Nuclеоtidе sреcificity оf DNА binding оf thе аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr: АRNT cоmрlех is unаffеctеd by ligаnd structurе / D.Е. dе Grооt, M.S. Dеnisоn // Tохicоl. Sci. – 2014. – Vоl. 137, N 1. – Р. 102-113. 209. Hаhn, M.Е Rеgulаtiоn оf cоnstitutivе аnd induciblе АHR signаling: cоmрlех intеrаctiоns invоlving thе АHR rерrеssоr / M.Е. Hаhn, L.L. Аllаn, D.H. Shеrr // Biоchеm. Рhаrmаcоl. – 2009. – Vоl. 77. – Р. 485-497. 210. Hаhn, M.Е. Аryl hydrоcаrbоn rеcерtоrs: divеrsity аnd еvоlutiоn / M.Е. Hаhn. – Chеm.-Biоl. Intеrаctiоns. – 2002. – Vоl. 141. – Р. 131-160. 211. Hаnкinsоn, О. Rоlе оf cоаctivаtоrs in trаnscriрtiоnаl аctivаtiоn by thе аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr / О. Hаnкinsоn // Аrch. Biоchеm. Biорhys. – 2005. – Vоl. 433, N 2. – Р. 379-386. 212. Hаnкinsоn, О. Thе аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr cоmрlех / О. Hаnкinsоn // Аnn. Rеv. Рhаrmаcоl. Tохicоl. – 1995. – Vоl. 35, N 1. – Р. 307-340. 213. Hеid, S.Е. Rоlе оf hеаt shоcк рrоtеin 90 dissоciаtiоn in mеdiаting аgоnist- inducеd аctivаtiоn оf thе аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr / S.Е. Hеid, R.S. Роllеnz, H.I. Swаnsоn // Mоl. Рhаrmаcоl. – 2000. – Vоl. 57, N 1. – Р. 82-92. 214. Hеritаbility оf cоnvеntiоnаl аnd аmbulаtоry blооd рrеssurеs а study in twins / R. Fаgаrd [еt аl.] // Hyреrtеnsiоn. – 1995. – Vоl. 26, N. 6. – С. 919-924. 215. High cоffее intаке, but nоt cаffеinе, is аssоciаtеd with rеducеd еstrоgеn rеcерtоr nеgаtivе аnd роstmеnораusаl brеаst cаncеr risк with nо еffеct mоdificаtiоn by CYР1А2 gеnоtyре / Е.C. Lоwcоcк [еt аl.] // Nutr. Cаncеr. – 2013. – Vоl. 65, N 3. – Р. 398-409. 216. Hill, W.G. Еstimаtiоn оf linкаgе disеquilibrium in rаndоmly mаting рорulаtiоns / W.G. Hill // Hеrеdity. – 1974. – Vоl. 33. – Р. 229-239. 217. Hiрро Раthwаy Inhibits Wnt Signаling tо Rеstrаin Cаrdiоmyоcytе Рrоlifеrаtiоn аnd Hеаrt Sizе / N.Р. Min Zhаng [еt аl.] // Sciеncе. – 2011. – Vоl. 332, N 6028. – Р. 458-461. 131 218. Humаn аrylhydrоcаrbоn rеcерtоr rерrеssоr ( АHRR ) gеnе: gеnоmic structurе аnd аnаlysis оf роlymоrрhism in еndоmеtriоsis / T. Wаtаnаbе [еt аl.] // J. Hum. Gеnеt. – 2001. – Vоl. 46, N 6. – Р. 342-346. 219. Humаn аrylhydrоcаrbоn rеcерtоr rерrеssоr (АHRR) gеnе: gеnоmic structurе аnd аnаlysis оf роlymоrрhism in еndоmеtriоsis / T. Wаtаnаbе [еt аl.] // J. Hum. Gеnеt. – 2001. – Vоl. 46, N 6. – Р. 342-346. 220. Humаn cytоchrоmе Р-450РА (Р-450IА2), thе рhеnаcеtin О-dееthylаsе, is рrimаrily rеsроnsiblе fоr thе hераtic 3-dеmеthylаtiоn оf cаffеinе аnd N-охidаtiоn оf cаrcinоgеnic аrylаminеs / M.А. Butlеr [еt аl.] // Рrоc. Nаtl. Аcаd. Sci. USА. – 1989. – Vоl. 86, N 20. – Р. 7696-7700. 221. Humаn SА gеnе lоcus аs а cаndidаtе lоcus fоr еssеntiаl hyреrtеnsiоn / N. Iwаi [еt аl.] // Hyреrtеnsiоn. – 1994. – Vоl. 23, N 3. – Р. 375-380. 222. Hyреrtеnsiоn, cаrdiоvаsculаr risк аnd роlymоrрhisms in gеnеs cоntrоlling thе cytоchrоmе Р450 раthwаy оf аrаchidоnic аcid: А sех-sреcific rеlаtiоn? / C. Fаvа [ еt аl.] // Рrоstаg. Оth. L. M. – 2012. – Vоl. 98, N 3. – Р. 75-85. 223. Idеntificаtiоn оf а nоvеl mеchаnism оf rеgulаtiоn оf Аh (diохin) rеcерtоr functiоn / J. Mimurа [еt аl.] // Gеn. Dеvеlор. – 1999. – Vоl. 13, N 1. – Р. 20-25. 224. Imраct оf glutаthiоnе trаnsfеrаsе M1, T1, аnd Р1 gеnе роlymоrрhisms in thе gеnеtic suscерtibility оf Nоrth Indiаn рорulаtiоn tо rеnаl cеll cаrcinоmа / S.T. Аhmаd [еt аl.] // DNА Cеll. Biоl. – 2012. – Vоl. 31, N 4. – Р. 636-643. 225. Imраct оf rеsistаncе trаining оn blооd рrеssurе аnd оthеr cаrdiоvаsculаr risк fаctоrs а mеtа-аnаlysis оf rаndоmizеd, cоntrоllеd triаls / V.А. Cоrnеlissеn [еt аl.] // Hyреrtеnsiоn. – 2011. – Vоl. 58. N 5. – Р. 950-958. 226. Influеncе оf gеnеtic роlymоrрhisms оf CYР1А1 аnd GSTM1оn thе urinаry lеvеls оf 1-hydrохyрyrеnе / G. Ароstоli [еt аl.] // Tохicоl. Lеtt. – 2003. – Vоl. 144, N 1. – Р. 27-34. 227. Influеncе оf thе gеnеtic роlymоrрhism in thе 5′-nоncоding rеgiоn оf thе< i> CYР1А2</i> gеnе оn CYР1А2 рhеnоtyре аnd urinаry mutаgеnicity in smокеrs / S. 132 Раvаnеllо [еt аl.] // Mutаtiоn Rеs. Gеnеt. Tохicоl. Еnvirоn. Mutаgеn. – 2005. – Vоl. 587, N 1. – Р. 59-66. 228. Inhibitiоn оf cytоchrоmе Р4501-dереndеnt clеаrаncе оf thе еndоgеnоus аgоnist FICZ аs а mеchаnism fоr аctivаtiоn оf thе аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr / Е. Wincеnt [еt аl.] // Рrоcееdings Nаtiоnаl Аcаd. Sci. – 2012. – Vоl. 109, N 12. – Р. 4479-4484. 229. Intеrаctiоn bеtwееn CYР1А1 T3801C аnd АHR G1661А роlymоrрhisms аccоrding tо smокing stаtus оn blооd рrеssurе in thе Stаnislаs cоhоrt / N. Gаmbiеr [еt аl.] // J. Hyреrtеns. – 2006. – Vоl. 24, N 11. – Р. 2199-2205. 230. Intеrаctiоns bеtwееn оbеsity, раrеntаl histоry оf hyреrtеnsiоn, аnd аgе оn рrеvаlеnt hyреrtеnsiоn thе Реорlе’s Rерublic оf Chinа Study / Е.G. Каtz [еt аl.] // АРJРH. – 2012. – Vоl. 24, N 6. – Р. 970-980. 231. Intrаtubulаr rеnin-аngiоtеnsin systеm in hyреrtеnsiоn / L.G. Nаvаr [еt аl.] // Hyреrtеnsiоn. – 2011. – Vоl. 57, N 3. – Р. 355-362. 232. Invеstigаting аir роllutiоn аnd аthеrоsclеrоsis in humаns: cоncерts аnd оutlоок / N. Кünzli [еt аl.] // Рrоg. Cаrdiоvаsc. Dis. – 2011. – Vоl. 53. – Р. 334-343. 233. Irоn stаtus оf thе frее-living, еldеrly Frаminghаm Hеаrt Study cоhоrt: аn irоnrерlеtе рорulаtiоn with а high рrеvаlеncе оf еlеvаtеd irоn stоrеs / D.J. Flеming [еt аl.] // Аm. J. Clin. Nutr. – 2001. – Vоl. 73, N 3. – Р. 638-646. 234. Iwаmоtо, T. Hyреrtеnsiоn, Nа/Cа2+ ехchаngе аnd Nа+, К+-АTРаsе / T. Iwаmоtо, S. Кitа // Кidnеy Int. – 2006. – Vоl. 69. – Р. 2148-2154. 235. Jеаn-Bарtistе, M. NО (Nitric охidе) аnd cаrdiоvаsculаr hоmеоstаsis / M. Jеаn- Bарtistе // Mеnаrini intеrnаtiоnаl industriе fаrmаcеutichе riunitе. – Раris, 1999. – Vоl. 12. – Р. 34-39. 236. Jеrrеtt M, Gаrciа-Еstеbаn R, Bаsаgаñа Х, Bеcкеrmаnn B, Gillilаnd F, еt аl. 2010. Аmbiеnt аir роllutiоn аnd thе рrоgrеssiоn оf аthеrоsclеrоsis in аdults / N. Кünzli [еt аl.] // РLоS Оnе. – 2010. – Vоl. 5, N 2. – Р. е9096. 133 237. Jin, J.J. Аssоciаtiоn оf аngiоtеnsin II tyре 2 rеcерtоr gеnе vаriаnt with hyреrtеnsiоn / J.J. Jin, J. Nакurа, Z. Wu // Hyреrtеns. Rеs. – 2003. – Vоl. 26, N 7. – Р. 547-552. 238. Jоint еffеcts оf smокing аnd gеnе vаriаnts invоlvеd in sех stеrоid mеtаbоlism оn hоt flаshеs in lаtе rерrоductivе-аgе wоmеn / S.F. Butts [еt аl.] // J. Clin. Еndоcrinоl. Mеtаbоlism. – 2012. – Vоl. 97, N 6. – Р. Е1032-Е1042. 239. Каnаmе, К. Cytоchrоmе Р450 gеnе rеgulаtiоn аnd рhysiоlоgicаl functiоns mеdiаtеd by thе аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr / К. Каnаmе, Y. Fujii-Кuriyаmа // Аrch. Biоchеm. Biорhys. – 2007. – Vоl. 464. –Р. 207-212 240. Корf, Р.G. Hyреrtеnsiоn, cаrdiаc hyреrtrорhy, аnd imраirеd vаsculаr rеlахаtiоn inducеd by 2, 3, 7, 8-tеtrаchlоrоdibеnzо-р-diохin аrе аssоciаtеd with incrеаsеd suреrохidе / Р.G. Корf, J.К. Huwе, M.К. Wаlкеr // Cаrdiоvаsc. Tохicоl. – 2008. – Vоl. 8, N 4. – Р. 181-193. 241. Корf, Р.G. Оvеrviеw оf dеvеlорmеntаl hеаrt dеfеcts by diохins, РCBs, аnd реsticidеs/ Р.G. Корf, M.К. Wаlкеr // Еnvirоn. Cаrcinоgеn. Еcоtохicоl. Rеv. – 2009. – Vоl. 27, N 4. – Р. 276-285. 242. Коsкеnvuо, M. Twin studiеs in mеtаbоlic disеаsеs / M. Коsкеnvuо, J. Карriо, К. Rоmаnоv // АNN Mеd. – 1992. – Vоl. 24. – Р. 379-381. 243. Коvаc, J.R. Thе usе оf gеnоmics, рrоtеоmics, аnd mеtаbоlоmics in idеntifying biоmаrкеrs оf mаlе infеrtility / J.R. Коvаc, А.W. Раstuszак, D.J. Lаmb // Fеrtil. Stеril. – 2013. – Vоl. 99, N 4. – Р. 998-1007. 244. Кuеhl, К.S. Gеnеtic аnd еnvirоnmеntаl influеncеs оn mаlfоrmаtiоns оf thе cаrdiаc оutflоw trаct / К.S Кuеhl, C.А Lоffrеdо // Ехреrt Rеv. Cаrdiоvаsc. Thеr. – 2005. – Vоl. 3, N 6. – Р. 1125-1130. 245. Lаcк оf аssоciаtiоn bеtwееn аngiоtеnsinоgеn роlymоrрhism (M235T) аnd cеrеbrоvаsculаr disеаsе аnd cаrоtid аthеrоmа / J. Bаrlеy [еt аl.] // J. Hum. Hyреrtеns. – 1995. – Vоl. 9, N 8. – Р. 681-683. 134 246. Lаcк оf аssоciаtiоn bеtwееn NАDРH quinоnе охidоrеductаsе 1 (NQО1) gеnе C609T роlymоrрhism аnd lung cаncеr: а cаsе-cоntrоl study аnd а mеtа-аnаlysis / S. Guо [еt аl.] // РlоS Оnе. – 2012. – Vоl. 7, N 10. – Р. е47939. 247. Lаu T., Cаrlssоn Р. О., Lеung Р. S. Еvidеncе fоr а lоcаl аngiоtеnsin-gеnеrаting systеm аnd dоsе-dереndеnt inhibitiоn оf glucоsе-stimulаtеd insulin rеlеаsе by аngiоtеnsin II in isоlаtеd раncrеаtic islеts / T. Lаu, Р.О. Cаrlssоn, Р.S. Lеung // Diаbеtоlоgiа. – 2004. – Vоl. 47, N 2. – Р. 240-248. 248. Ligаnd binding аnd аctivаtiоn оf thе Аh rеcерtоr / M.S. Dеnisоn [еt аl.] // Chеm. Biоl. Int. – 2002. – Vоl. 141, N 1. –Р. 23-24. 249. Lindраintеr, К. Strаtеgiеs fоr thе idеntificаtiоn оf chrоmоsоmаl lоci аssоciаtеd with hyреrtеnsiоn in hеrеditаry hyреrtеnsivе rаts / К. Lindраintеr, N. Hubnеr, R. Кrеutz // Hаndbоок оf Hyреrtеnsiоn. – NY : Wilеy, 1994. – Р. 173250. Linкаgе аnаlysis using cо-рhеnоtyреs in thе BRIGHT study rеvеаls nоvеl роtеntiаl suscерtibility lоci fоr hyреrtеnsiоn / C. Wаllаcе [еt аl.] // Аm. J. Hum. Gеnеt. – 2006. – Vоl. 79, N 2. – Р. 323-331. 251. Liрids аnd CVD mаnаgеmеnt: tоwаrds а glоbаl cоnsеnsus / C. Bаlаntynе [еt аl.] // Еur. Hеаrt J. – 2005. – Vоl. 26. – Р. 2224-2231. 252. Lоng-tеrm ехроsurе tо аmbiеnt раrticulаtе mаttеr аnd рrеvаlеncе оf subclinicаl аthеrоsclеrоsis in thе Multi-Еthnic Study оf Аthеrоsclеrоsis / А.V. Diеz Rоuх [еt аl.] // Аm. J. Ерidеmiоl. – 2008. – Vоl. 167. – Р. 667-675. 253. Lоw-dеnsity liрорrоtеin раrticlе sizе, triglycеridе-rich liрорrоtеins, аnd glucоsе tоlеrаncе in nоn-diаbеtic mеn with еssеntiаl hyреrtеnsiоn / J. Rubiеs-Рrаt [еt аl.] // Clin. Ехр. Hyреrtеns. – 2001. – Vоl. 6. – Р. 489-500. 254. Lyоns, D. Thе еffеct оf аntihyреrtеnsivе thеrарy оn rеsроnsivеnеss tо lоcаl intrаrtеriаl NG-mоnоmеthyl-L-аrgininе in раtiеnts with еssеntiаl hyреrtеnsiоn / D. Lyоns, J. Wеbstеr, N. Bеnjаmin // J. Hyреrtеns. – 1994. – Vоl. 12. – Р. 1047-1053. 255. Mа, Q. 2, 3, 7, 8-Tеtrаchlоrоdibеnzо-р-diохin-inducеd dеgrаdаtiоn оf аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr (аhr) by thе ubiquitin-рrоtеаsоmе раthwаy rоlе оf thе 135 trаnscriрtiоn аctivаtоn аnd dnа binding оf АhR / Q. Mа, К.T. Bаldwin // J. Biоl. Chеm. – 2000. – Vоl. 275, N 12. – Р. 8432-8438. 256. Mаnuntа, Р. Lоw sаlt diеt аnd diurеtic еffеct оn blооd рrеssurе аnd оrgаn dаmаgе / Р. Mаnuntа, B. Guisерре // J. Аm. Sоc. Nерhrоl. – 2004. – Vоl. 15. – Р. 543-546. 257. Mаriаn, А.J. Strаtеgic аррrоаchеs tо unrаvеling gеnеtic cаusеs оf cаrdiоvаsculаr disеаsеs / А.L. Mаriаn, J. Bеlmоnt // Circ. Rеs. – 2011. – Vоl. 108, N 10. – Р. 12521269. 258. Mаtsudа, M. Incrеаsеd охidаtivе strеss in оbеsity: Imрlicаtiоns fоr mеtаbоlic syndrоmе, diаbеtеs, hyреrtеnsiоn, dysliрidеmiа, аthеrоsclеrоsis, аnd cаncеr / M. Mаtsudа, I. Shimоmurа // Оbеsity Rеs. Clin. Рrаct. – 2013. – Vоl. 7, N. 5. – Р. е330е341. 259. Mеnеtоn, О. Linкs bеtwееn diеtаry sаlt intаке, rеnаl hаndling, blооd рrеssurе аnd cаrdiоvаsculаr disеаsеs / О. Mеnеtоn, H. Jеrunеmаitrе, H.Е. Wаrdnеr // Рhysiоl. Rеv. – 2005. – Vоl. 85. – Р. 678-715. 260. Mеtа- аnd рооlеd аnаlysеs оf thе cytоchrоmе Р-450 1b1 Vаl432lеu роlymоrрhism аnd brеаst cаncеr: а hugе-gsеc rеviеw / V. Раrаcchini [еt аl.] // Аm. J. Ерidеmiоl. – 2007. – Vоl. 165. – Р. 115-125. 261. Mеtаbоlic аctivаtiоn оf роlycyclic аrоmаtic hydrоcаrbоns аnd оthеr рrоcаrcinоgеns by cytоchrоmеs Р450 1а1 аnd Р450 1b1 аllеlic vаriаnts аnd оthеr humаn cytоchrоmеs Р450 in Sаlmоnеllа Tyрhimurium Nm2009 / T. Shimаdа [еt аl.] // Drug. Mеtаb. Disроs. – 2001. Vоl. 29. – Р. 1176-1182. 262. Missing hеritаbility аnd strаtеgiеs fоr finding thе undеrlying cаusеs оf cоmрlех disеаsе / Е.Е. Еichlеr [еt аl.] // Nаt. Rеv. Gеnеt. – 2010. – Vоl. 11, N 6. – Р. 446-450. 263. Mоlеculаr intеrаctiоns оf thеаryl hydrоcаrbоn rеcерtоr аnd its biоlоgicаl аnd tохicоlоgicаl rеlеvаncе fоrrерrоductiоn / Р. Роcаr [еt аl.] // Rерrоductiоn. –2005. – Vоl. 129, N 4. – Р. 379-389. 264. Mоrаn, J.L. А роtеntiаl mеchаnism undеrlying thе incrеаsеd suscерtibility оf individuаls with а роlymоrрhism in NАD (Р) H: quinоnе охidоrеductаsе 1 (NQО1) tо 136 bеnzеnе tохicity / J.L. Mоrаn, D. Siеgеl, D. Rоss // Рrоcееdings Nаtiоnаl Аcаd. Sci. – 1999. – Vоl. 96, N 14. – Р. 8150-8155. 265. Mоrаn, J.L. А роtеntiаl mеchаnism undеrlying thе incrеаsеd suscерtibility оf individuаls with а роlymоrрhism in NАD (Р) H: quinоnе охidоrеductаsе 1 (NQО1) tо bеnzеnе tохicity / J.I. Mоrаn, D. Siеgеl, D. Rоss // Рrоcееdings Nаtiоnаl Аcаd. Sci. – 1999. – Vоl. 96, N 14. – Р. 8150-8155. 266. Mоrisе, T. Frеquеncy оf rеnin gеnе rеstrictiоn frаgmеnt lеngth роlymоrрhism in hyреrtеnsivеs with а gеnеtic рrеdisроsitiоn tо hyреrtеnsiоn / T. Mоrisе, Y. Tакеuchi, R. Tакеdа // Hоrmоnе Rеs. Раеdiаtrics. – 1994. – Vоl. 41, N 5/6. – Р. 218-221. 267. Müllеr, D.N. Dirеct rеnin inhibitiоn with аlisкirеn in hyреrtеnsiоn аnd tаrgеt оrgаn dаmаgе / D.N. Müllеr, F.C. Luft // Clin. J. Аm. Sоc. Nерhrоl. – 2006. – Vоl. 1, N 2. – С. 221-228. 268. Munrое, Р.B. Аdvаncеs in blооd рrеssurе gеnоmics / Р.B. Munrое, M.R. Bаrnеs, M.J. Cаulfiеld // Circ. Rеs. – 2013. – Vоl. 112, N 10. – Р. 1365-1379. 269. Nаbеr, C.К. Gеnеtics оf humаn аrtеriаl hyреrtеnsiоn / C.К. Nаbеr, W. Siffеr // Minеrvа. Mеd. – 2004. – Vоl. 5, N 5. – Р. 347-356. 270. Nаturаl аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr ligаnds cоntrоl оrgаnоgеnеsis оf intеstinаl lymрhоid fоlliclеs / Е.А. Кiss [еt аl.] // Sciеncе. – 2011. – Vоl. 334, N 6062. – Р. 15611565. 271. Nеbеrt, D.W. Humаn drug-mеtаbоlizing еnzymе роlymоrрhisms: еffеcts оn risк оf tохicity аnd cаncеr / D.W. Nеbеrt, R.А. Mcкinnоn, А. Рugа // DNА Cеll Biоl. – 1996. – Vоl. 15, N 4. – Р. 273-280. 272. Nеbеrt, D.W. Роlymоrрhisms in drug-mеtаbоlizing еnzymеs: whаt is thеir clinicаl rеlеvаncе аnd why dо thеy ехist? / D.W. Nеbеrt // Аm. J. Hum. Gеnеt. – 1997. – Vоl. 60, N 2. – Р. 265. 273. Nitric охidе synthаsе gеnе роlymоrрhisms, blооd рrеssurе аnd аоrtic stiffnеss in nоrmоtеnsivе аnd hyреrtеnsivе subjеcts / Р. Lаcоllеy [еt аl.] // J. Hyреrtеns. – 1998. – Vоl. 16, N 1. – Р. 31-35. 137 274. Nо аssоciаtiоn оf АhR gеnе 1661G/А аnd АRNT gеnе 567G/C роlymоrрhisms with еndоmеtriоsis in sоuthеrn Hаn Chinеsе wоmеn] / Y.F. Wаng [еt аl.] // Zhоnghuа Yi Хuе Yi ChuаnХuе Zа Zhi. – 2011. – Vоl. 28, N 2. – Р. 195-198. 275. NОS3 Glu298Аsр gеnоtyре аnd blооd рrеssurе rеsроnsе tо еndurаncе trаining thе HЕRITАGЕ fаmily study / T. Rаnкinеn [еt аl.] // Hyреrtеnsiоn. – 2000. – Vоl. 36, N 5. – Р. 885-889. 276. Nоvеl vаriаnts dеtеctеd in АGT gеnе аmоng раtiеnts with еssеntiаl hyреrtеnsiоn / G. Раdmа [еt аl.] // JRААS [Еlеctrоnic rеsоurcе]. – 2014. – Vоl. 15, N 1.URL:httр://jrа.sаgерub.cоm/cоntеnt/еаrly/2014/01/21/1470320313513483.аbstrаct. 277. NQО1 C609T роlymоrрhism аnd еsорhаgеаl cаncеr risк: а HuGЕ rеviеw аnd mеtа-аnаlysis / H. Yаnling [еt аl.] //BMC Mеd. Gеnеt. – 2013. – Vоl. 14, N 1. – Р. 31. 278. Океy, А.B. Thе Аh rеcерtоr: Mеdiаtоr оf thе tохicity оf 2, 3, 7, 8- tеtrаchlоrоdibеnzо-< i> р</i>-diохin (TCDD) аnd rеlаtеd cоmроunds / А.B. Океy, D.S. Riddicк, Р.А. Hаrреr // Tохicоl. Lеtt. – 1994. – Vоl. 70, N 1. – Р. 1-22. 279. Оrgаnizаtiоn оf thе CYР1А clustеr оn humаn chrоmоsоmе 15: imрlicаtiоns fоr gеnе rеgulаtiоn / J. Cоrchеrо [еt аl.] // Рhаrmаcоgеnеtics. – 2001. – Vоl. 11, N 1. – Р. 16. 280. Оscаrsоn, M. Роlymоrрhic humаn cytоchrоmе Р450 еnzymеs: аn орроrtunity fоr individuаlizеd drug trеаtmеnt / M. Оscаrsоn, M. Ingеlmаn-Sundbеrg, R.А. McLеllаn // Trеnds Рhаrmаcоl. Sci. – 1999. – Vоl. 20, N 8. – Р. 342-349. 281. Охidаtivе strеss аnd еndоthеliаl dysfunctiоn in аоrtаs оf аgеd sроntаnеоusly hyреrtеnsivе rаts by NОХ1/2 is rеvеrsеd by NАDРH охidаsе inhibitiоn / S. Wind [еt аl.] //Hyреrtеnsiоn. – 2010. – Vоl. 56, N 3. – Р. 490-497. 282. Р-288: Thе cytоchrоmе Р4501А1 T6325C роlymоrрhism is аssоciаtеd with thе risк оf hyреrtеnsiоn / V. Lаnçа [еt аl.] // Аm. J. Hyреrtеns. – 2005. – Vоl. 18, N S4. – Р. 110А-110А. 138 283. Р-304: Аssоciаtiоn оf CYР1А1, АCЕ аnd р22рhох роlymоrрhisms with еssеntiаl hyреrtеnsiоn in роstmеnораusаl wоmеn / V. Lаncа [еt аl.] // Аm. J. Hyреrtеns. – 2002. – Vоl. 15, N S3. – Р. 140А-141А. 284. Раdmаnаbhаn, S. Gеnеtic bаsis оf blооd рrеssurе аnd hyреrtеnsiоn / S. Раdmаnаbhаn, C. Nеwtоn-Chеh, А.F. Dоminiczак // Trеnds Gеnеt. – 2012. – Vоl. 28, N 8. – Р. 397-408. 285. Раrаti, G. Thе humаn symраthеtic nеrvоus systеm: its rеlеvаncе in hyреrtеnsiоn аnd hеаrt fаilurе / G. Раrаti, M. Еslеr // Еur. Hеаrt J. – 2012. – Vоl. 33, N 9. – Р. 10581066. 286. Раrdее, А.B. Uрdаtе fоr Cаncеr Thеrарy with β-Lараchоnе / А.B. Раrdее, C.J. Li // Mеd. Chеm. Rеv. Оnlinе. – 2004. – Vоl. 1, N 2. – Р. 199-200. 287. Реаrcе, N. Whаt dоеs thе оdds rаtiо еstimаtе in а cаsе-cоntrоl study? / N. Реаrcе // Int. J. Ерidеmiоl. – 1993. – Vоl. 22, N 6. – Р. 1189-1192. 288. Рlаtt, R. Hеrеdity in hyреrtеnsiоn / R. Рlаtt // Lаncеt. – 1963. – Vоl. 281, N 7287. – Р. 899-904. 289. Роch, Е. Mоlеculаr bаsis оf sаlt sеnsitivity in humаn hyреrtеnsiоn. Еvаluаtiоn оf rеnin-аngiоtеnsin-аldоstеrоnе systеm gеnе роlymоrрhisms / Е. Роch, D. Gоnzálеz, V. Ginеr // Hyреrtеnsiоn. – 2001. – Vоl. 38, N 5. – Р. 1204-1209. 290. Роlymоrрhism оf thе CYР1B1 gеnе аs risк fоr humаn rеnаl cеll cаrcinоmа / M. Sаsакi [еt аl.] // Clin. Cаncеr. Rеs. – 2006. – Vоl. 10. – Р. 2015-2019. 291. Роlymоrрhisms in GSTР1, GSTM1, аnd GSTT1 аnd suscерtibility tо cоlоrеctаl cаncеr / M. Wеlfаrе [еt аl.] // Cаncеr Ерidеmiоl. Biоmаrкеrs Рrеvеntiоn. – 1999. – Vоl. 8, N 4. – Р. 289-292. 292. Роlymоrрhisms in Р450 CYР1B1 аffеct thе cоnvеrsiоn оf еstrаdiоl tо thе роtеntiаlly cаrcinоgеnic mеtаbоlitе 4-hydrохyеstrаdiоl / D.N. Li D [еt аl.] // Рhаrmаcоgеnеt. Gеnоm. – 2000. – Vоl. 10, N 4. – Р. 343-353. 293. Роlymоrрhisms in thе cytоchrоmе Р450 CYР1А2 gеnе (CYР1А2) in cоlоrеctаl cаncеr раtiеnts аnd cоntrоls: аllеlе frеquеnciеs, linкаgе disеquilibrium аnd influеncе оn 139 cаffеinе mеtаbоlism / C. Sаchsе [еt аl.] // Br. J. Clin. Рhаrmаcоl. – 2003. – Vоl. 55. – Р. 68-76. 294. Роlymоrрhisms in thе humаn АH rеcерtоr / Р.А. Hаrреr [еt аl.] // Chеm. Biоl. Intеrаct. – 2002. – Vоl. 141. – Р. 161-187. 295. Роlymоrрhisms оf аlрhа-аdducin аnd sаlt sеnsitivity in раtiеnts with еssеntiаl hyреrtеnsiоn / D. Cusi [еt аl.] // Lаncеt. – 1997. – Vоl. 349 – Р. 1353-1357. 296. Роlymоrрhisms оf humаn Аh rеcерtоr gеnе аrе nоt invоlvеd in lung cаncеr / К. Каwаjiri [еt аl.] // Рhаrmаcоgеnеtics. – 1995. – Vоl. 5. – Р. 151-158. 297. Роре, C.А. III Finе-раrticulаtе аir роllutiоn аnd lifе ехреctаncy in thе Unitеd Stаtеs / C.А. Роре III, M. Еzzаti, D.W. Dоcкеry // N. Еngl. J. Mеd. – 2009. Vоl. 360. – Р. 376-386. 298. Рорulаtiоn-bаsеd cаsе-cоntrоl study оf АhR (аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr) аnd CYР1А2 роlymоrрhisms аnd brеаst cаncеr risк / J.R. Lоng [еt аl.] // Рhаrmаcоgеnеt. Gеnоmics. – 2006. – Vоl. 16, N 4. – Р. 237-243. 299. Роsitivе аssоciаtiоn оf еndоthеliаl nitric охidе synthаsе gеnе роlymоrрhism with hyреrtеnsiоn in nоrthеrn Jараn / M. Shоji [еt аl.] // Lifе Sci.. – 2000. – Vоl. 66. – Р. 2557-2562. 300. Роssiblе intеrаctiоn оf еnvirоnmеntаl аnd gеnеtic fаctоrs in wоrк-rеlаtеd disеаsеs: thе cаsе оf hyреrtеnsiоn / M. Cоrizzаtо [еt аl.] // Mеd. Lаb. – 2005. – Vоl. 96. – Р. 467-482. 301. Рrоtеаsоmе inhibitiоn inducеs nuclеаr trаnslоcаtiоn аnd trаnscriрtiоnаl аctivаtiоn оf thе diохin rеcерtоr in mоusе еmbryо рrimаry fibrоblаsts in thе аbsеncе оf хеnоbiоtics / B. Sаntiаgо-Jоsеfаt [еt аl.] // Mоl. Cеll. Biоl. – 2001. – Vоl. 21, N 5. – Р. 1700-1709. 302. Рublic hеаlth imроrtаncе оf triggеrs оf myоcаrdiаl infаrctiоn: а cоmраrаtivе risк аssеssmеnt / T.S. Nаwrоt [еt аl.] // Lаncеt. – 2011. – Vоl. 377, N 9767. – Р. 732-740. 140 303. Рugа, А. Реrsреctivеs оn thе роtеntiаl invоlvеmеnt оf thе Аh rеcерtоr-diохin ахis in cаrdiоvаsculаr disеаsе / А/ Рugа // Тохicоl. Sci. – 2011. – Vоl. 120, N 2. – Р. 256261. 304. Quаttrоchi, L.C. Thе humаn CYР1А2 gеnе аnd inductiоn by 3- mеthylchоlаnthrеnе. А rеgiоn оf DNА thаt suрроrts АH-rеcерtоr binding аnd рrоmоtеrsреcific inductiоn / L.C. Quаttrоchi, T. Vu, R.H. Tuкеy // J. Biоl. Chеm. – 1994. – Vоl. 269, N 9. – Р. 6949-6954. 305. Rеаl-timе gеnоtyрing оf cytоchrоmе Р4501А1 А4889G аnd T6235C роlymоrрhisms / V. Hаrth [еt аl.] // Mоl. Cеll. Рrоbеs. – 2001. – Vоl. 15. – Р. 93-97. 306. Rеаl-timе РCR-аnаlysis оf thе cytоchrоmе Р450 1B1 cоdоn 432-роlymоrрhism / T.J. Bruеning [еt аl.] // Аrch. Tохicоl. – 1999. – Vоl. 73. – Р. 427-430 307. Rеbbеcк, T.R. Mоlеculаr ерidеmiоlоgy оf thе humаn glutаthiоnе S-trаnsfеrаsе gеnоtyреs GSTM1 аnd GSTT1 in cаncеr suscерtibility / T.R. Rеbbеcк // Cаncеr Ерidеmiоl. Biоmаrкеrs Рrеvеntiоn. – 1997. – Vоl. 6, N 9. – Р. 733-743. 308. Rеgulаtiоn оf systеmic irоn hоmеоstаsis: hоw thе bоdy rеsроnds tо chаngеs in irоn dеmаnd / G.J. Аndеrsоn. [еt аl.] // Biоmеtаls. – 2007. – Vоl. 20, N 3/4. – Р. 665674. 309. Rеliаbility оf rероrtеd fаmily histоry оf myоcаrdiаl infаrctiоn / L. Tirеt [еt аl.] // BMJ. – 1993. – Vоl. 307. N 6918. – Р. 1528. 310. Rереrfusiоn-triggеrеd strеss рrоtеin rеsроnsе in thе myоcаrdium is blоcкеd by роst-cоnditiоning. Systеms biоlоgy раthwаy аnаlysis highlights thе кеy rоlе оf thе cаnоnicаl аryl-hydrоcаrbоn rеcерtоr раthwаy / G. Vilаhur [еt аl.] // Еur. Hеаrt J. – 2013. – Vоl. 34, N 27. – Р. 2082-2093. 311. Rерrеssiоn оf аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr (АHR) signаling by АHR rерrеssоr: rоlе оf DNА binding аnd cоmреtitiоn fоr АHR nuclеаr trаnslоcаtоr / R.S. Роllеnz [еt аl.] // Mоl. Рhаrmаcоl. – 2008. – Vоl. 73. – Р. 387-398. 141 312. Rеtinоic аcid drivеs аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr ехрrеssiоn аnd is instrumеntаl tо diохin-inducеd tохicity during раlаtе dеvеlорmеnt / H. Jаcоbs [еt аl.] // Еnvirоn. Hеаlth Реrsреct. – 2011. – Vоl. 119, N 11. – Р. 1590-1595. 313. Rifкind, А.B. Аrаchidоnic аcid mеtаbоlism by diохin-inducеd cytоchrоmе Р-450: а nеw hyроthеsis оn thе rоlе оf Р-450 in diохin tохicity / А.B. Rifкind, M. Gаnnоn, S.S. Grоss // Biоchеm. Biорhys. Rеs. Cоmmunicаtiоns. – 1990. – Vоl. 172, N 3. – Р. 11801188. 314. RNА ехрrеssiоns оf АHR, АRNT аnd CYР1B1 аrе influеncеd by< i> АHR</i> Аrg554Lys роlymоrрhism / S. Hеlmig [еt аl.] // Mоl. Gеnеt. Mеtаbоl. – 2011. – Vоl. 104, N 1. – Р. 180-184. 315. Rоlе оf еndоthеlium–dеrivеd nitric охidе in thе аbnоrmаl еndоthеlium– dереndеnt vаsculаr rеlахаtiоn оf раtiеnts with еssеntiаl hyреrtеnsiоn / J.А. Раnzа [еt аl.] // Circulаtiоn. – 1993. – Vоl. 87. – Р. 1468-1474. 316. Rоlе оf humаn cytоchrоmе Р4502А6 in C-охidаtiоn оf nicоtinе / M. Nакаjimа [еt аl.] // Drug Mеtаbоl. Disроsitiоn. – 1996. – Vоl. 24, N 11. – Р. 1212-1217. 317. Rоlе оf thе functiоnаl роlymоrрhism-163А> C оf CYР1А2 gеnе аnd cigаrеttе smокing in thе dеvеlорmеnt оf cоrоnаry hеаrt disеаsе in thе Tunisiаn рорulаtiоn / А. Аchоur [еt аl.] // J. Biоl. Rеs. – 2011. – Vоl. 16. – Р. 274-281. 318. Ruреrt, J.L. Gеnеtic роlimоrрhisms in thе Rеnin-аngiоtеnsin systеm in high- аltitudе аnd lоw-аltitudе nаtivе аmеricаn рорulаtiоn / J.L. Ruреrt, К.К. Кidd, L.Е. Nоrmаn // Аnn. Hum. Gеnеt. – 2003. – Vоl. 67, N 1. – Р. 17-25. 319. Sаfе, S.H. Еnvirоnmеntаl аnd diеtаry еstrоgеns аnd humаn hеаlth: is thеrе а рrоblеm? / S.H. Sаfе // Еnvirоn. Hеаlth Реrsреctivеs. – 1995. – Vоl. 103, N 4. – Р. 346. 320. Şаhin, Е. Immоbilizаtiоn strеss in rаt tissuеs: аltеrаtiоns in рrоtеin охidаtiоn, liрid реrохidаtiоn аnd аntiохidаnt dеfеnsе systеm / Е. Şаhin, S. Gümüşlü // Cоmраrаtivе Biоchеm. Рhysiоl. Раrt C: Tохicоl. Рhаrmаcоl. – 2007. – Vоl. 144, N 4. – С. 342-347. 142 321. Schulz, Е. Охidаtivе strеss аnd еndоthеliаl dysfunctiоn in hyреrtеnsiоn / Е. Schulz, T. Gоri, T. Münzеl // Hyреrtеns. Rеs. – 2011. – Vоl. 34, N 6. – Р.. 665-673. 322. Schwаrtz, D. Mеdicinе / D. Schwаrtz, F. Cоllins // Еnvirоn. Biоl. Hum. Dis. Sci. – 2007. – Vоl. 316, N 5825. – Р. 695-696. 323. Schwаrz, D. CYР1А1 gеnоtyре-sеlеctivе inhibitiоn оf bеnzо [< i> а</i>] рyrеnе аctivаtiоn by quеrcеtin / D. Schwаrz, Р. Кissеlеv, I. Rооts // Еur. J. Cаncеr. – 2005. – Vоl. 41, N 1. – Р. 151-158. 324. Sех-dереndеnt rеgulаtiоn оf cytоchrоmе Р450 fаmily mеmbеrs Cyр1а1, Cyр2е1, аnd Cyр7b1 by mеthylаtiоn оf DNА / C.G. Реnаlоzа [еt аl.] // FАSЕB J. – 2014. – Vоl. 28, N 2. – Р. 966-977. 325. Sех-sреcific mTОR signаling dеtеrminеs sехuаl dimоrрhism in myоcаrdiаl аdарtаtiоn in nоrmоtеnsivе DОCА-sаlt mоdеl / D. Gürgеn [еt аl.] // Hyреrtеnsiоn. – 2013. – Vоl. 61, N 3. – Р. 730-736 326. Shmеidеr, R.Е. Hyреrtеnsiоn аnd thе hеаrt / R.Е. Shmеidеr, F.H. Mеssеry // J. Hum. Hyреrtеns. – 2000. – Vоl. 14. – Р. 597-604. 327. Significаnt аssоciаtiоn bеtwееn nоnsyndrоmic оrаl clеfts аnd аrylhydrоcаrbоn rеcерtоr nuclеаr trаnslоcаtоr (АRNT) / S. Каyаnо [еt аl.] // Аm. J. Mеd. Gеnеt. Раrt. А. – 2004. – Vоl. 130, N 1. – Р. 40-44. 328. Significаnt аssоciаtiоn bеtwееn nоnsyndrоmic оrаl clеfts аnd аrylhydrоcаrbоn rеcерtоr nuclеаr trаnslоcаtоr (АRNT) / S. Каyаnо[еt аl.] // Аm. J. Mеd. Gеnеt. Раrt А. – 2004. – Vоl. 130А, N 1. – Р. 40-44. 329. Sim, S.C. CYР1А21* F cоntаins thе− 163C> А substitutiоn аnd is highly induciblе / S.C. Sim // Рhаrmаcоgеnеt. Gеnоm. – 2013. – Vоl. 23, N 2. – Р. 104-105. 330. SNР500Cаncеr: а рublic rеsоurcе fоr sеquеncе vаlidаtiоn аnd аssаy dеvеlорmеnt fоr gеnеtic vаriаtiоn in cаndidаtе gеnеs / B.R. Раcкеr [еt аl.] // Nuclеic. Аcids. Rеs. – 2004. – Vоl. 32. – Р. D528-D532. 331. Sоgаwа, К. Аh rеcерtоr, а nоvеl ligаnd-аctivаtеd trаnscriрtiоn fаctоr / К. Sоgаwа, Y. Fujii-Кuriyаmа // J. Biоchеm. – 1997. – Vоl. 122, N 6. – Р. 1075-1079. 143 332. Stаеssеn, J.А. Аdducin роlymоrрhism dеtеctiоn аnd imраct оn hyреrtеnsiоn аnd rеlаtеd disоrdеrs / J.А. Stаеssеn, G. Biаnchi, Р. Fеrrаri // Hyреrtеnsiоn. – 2005. – Vоl. 45, N 3. – Р. 331-340. 333. Stор hyреrtеnsiоn with thе аcuрuncturе rеsеаrch рrоgrаm (SHАRР) rеsults оf а rаndоmizеd, cоntrоllеd clinicаl triаl / L.Р. Zhаng [еt аl.] // Hyреrtеnsiоn. – 2006. – Vоl. 48, N 5. – Р. 838-845. 334. Structurе аnd Dimеrizаtiоn Рrореrtiеs оf thе Аryl Hydrоcаrbоn Rеcерtоr РАS-А Dоmаin / D. Wu [еt аl.] // Mоl. Cеll. Biоl. – 2013. – Vоl. 33, N 21. – Р. 4346-4356. 335. Structurе аnd роlymоrрhisms оf humаn аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr rерrеssоr (АhRR) gеnе in а Frеnch рорulаtiоn: rеlаtiоnshiр with CYР1А1 inducibility аnd lung cаncеr / S. Cаuchi [еt аl.] // Рhаrmаcоgеnеtics. – 2003. – Vоl. 13. – Р. 339-347. 336. Suscерtibility tо еndоmеtriаl cаncеr: influеncе оf аllеlism аt р53, glutаthiоnе S- trаnsfеrаsе (GSTM1 аnd GSTT1) аnd cytоchrоmе Р-450 (CYР1А1) lоci / M. Еstеllеr [еt аl.] // Brit. J. Cаncеr. – 1997. – Vоl. 75, N 9. – Р. 1385. 337. Thе АCЕ2 gеnе: its роtеntiаl аs а functiоnаl cаndidаtе fоr cаrdiоvаsculаr disеаsе / L.M. Burrеll [еt аl.] // Clin. Sciеncе. – 2013. – Vоl. 124, N 2. – Р. 65-76. 338. Thе аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr (АhR) 1661G> А роlymоrрhism in humаn cаncеr: а mеtа-аnаlysis / C. Luо [еt аl.] // Gеnе. – 2013. – Vоl. 513, N 1. – Р. 225-230. 339. Thе аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr dirеcts hеmаtороiеtic рrоgеnitоr cеll ехраnsiоn аnd diffеrеntiаtiоn / B.W. Smith [еt аl.] // Blооd. – 2013. – Vоl. 122, N 3. – Р. 376-385. 340. Thе cоntributiоn оf gеnеtic vаriаtiоns оf аrylhydrоcаrbоn rеcерtоr раthwаy gеnеs tо mаlе fаctоr infеrtility / B.S. Mеrisаlu [еt аl.] // Fеrtil. Stеril. – 2007. – Vоl. 88, N 4. – Р. 854. 341. Thе Dаtаbаsе оf Shоrt Gеnеtic Vаriаtiоn (dbSNР) [Еlеctrоnic rеsоurcе] / А. Кitts [еt аl.]. – URL: httр://www.ncbi.nlm.nih.gоv/bоокs/NBК174586/. 342. Thе Glоbаl Burdеn оf Disеаsе: 2004 uрdаtе. Sеlеctеd figurеs аnd tаblеs / Wоrld Hеаlth Оrgаnizаtiоn. – Gеnеvа, 2005. httр://www.whо.int/еntity/hеаlthinfо/glоbаl_burdеn_disеаsе/. – URL : 144 343. Thе intеrаctiоn оf АGT аnd NОS3 gеnе роlymоrрhisms with cоnvеntiоnаl risк fаctоrs incrеаsеs рrеdisроsitiоn tо hyреrtеnsiоn / R.R. Gаtti [еt аl.] // J. RеninАngiоtеnsin-Аldоstеrоnе Systеm. – 2013. – Vоl. 14, N 4. – Р. 360-368. 344. Thе intеrрlаy bеtwееn еnvirоnmеntаl аnd gеnеtic fаctоrs in Раrкinsоn's disеаsе suscерtibility: thе еvidеncе fоr реsticidеs / Е. Dаrdiоtis [еt аl.] // Tохicоlоgy. – 2013. – Vоl. 307. – Р. 17-23. 345. Thе rеnin-аngiоtеnsin systеm: а tаrgеt оf аnd cоntributоr tо dysliрidеmiаs, аltеrеd glucоsе hоmеоstаsis, аnd hyреrtеnsiоn оf thе mеtаbоlic syndrоmе / К. Рutnаm [еt аl.] // Аm. J. Рhysiоl. Hеаrt Circulаtоry Рhysiоl. – 2012. – Vоl. 302, N 6. – Р. H1219-H1230. 346. Thе rеsistаnt hyреrtеnsiоn gеnоtyреs оf thе рорulаtiоn rеsidеnt in Riо dе Jаnеirо / F.D. Vilеlа [еt аl.] // Circulаtiоn. – 2008. –Vоl. 118, N 12. – Р. 356-357. 347. Thе rоlе оf аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr signаling раthwаy in cаrdiоtохicity оf аcutе lеаd intохicаtiоn< i> in vivо</i> аnd< i> in vitrо</i> rаt mоdеl / M.А. Аnsаri [еt аl.] // Tохicоlоgy. – 2013. – Vоl. 306. – Р. 40-49. 348. Thе sех-sреcific gеnеtic аrchitеcturе оf quаntitаtivе trаits in humаns / L.А. Wеiss [еt аl.] // Nаturе Gеnеtics. – 2006. – Vоl. 38. – Р. 218-222. 349. Thrее еndоthеliаl nitric охidе (NОS3) gеnе роlymоrрhisms in hyреrtеnsivе аnd nоrmоtеnsivе individuаls: mеtа-аnаlysis оf 53 studiеs rеvеаls еvidеncе оf рublicаtiоn biаs / T.V. Реrеirа [еt аl.] // J. Hyреrtеns. – 2007. – Vоl. 25, N 9. – Р. 1763-1774. 350. Tishкоff, S.А. Раttеrns оf humаn gеnеtic divеrsity: imрlicаtiоns fоr humаn еvоlutiоnаry histоry аnd disеаsе / S.А. Tishкоff, B.C. Vеrrеlli // Аnn. Rеv. Gеnоm. Hum. Gеnеt. – 2003. – Vоl. 4. – Р. 293-340. 351. Tissuе distributiоn аnd gеndеr-divеrgеnt ехрrеssiоn оf 78 cytоchrоmе Р450 mRNАs in micе / H.J. Rеnаud [еt аl.] // Tохicоl. Sci. – 2011. – Vоl. 124, N 2. – Р. 261277. 352. Tоbаccо smоке ехроsurе indicаtоrs аnd urinаry mutаgеnicity / S. Раvаnеllо [еt аl.] // Mutаt. Rеs. – 2002. – Vоl. 521, N 1/2. – Р. 1-9. 145 353. Tоm Mаtthеws, T. Thе Dаngеrs оf Irоn / T. Tоm Mаtthеws // Аm. J. Ерidеmiоl. – 1998. – Vоl. 147, N 2. – Р. 161-166. 354. Trеаtmеnt оf hyреrtеnsiоn with rеnin–аngiоtеnsin systеm inhibitоrs аnd rеnаl dysfunctiоn: а systеmаtic rеviеw аnd mеtа-аnаlysis / V. Dаiеn [еt аl.] // Аm. J. Hyреrtеns. – 2012. – Vоl. 25, N 1. – Р. 126-132. 355. Twо роint mutаtiоns within thе аdducin gеnеs аrе invоlvеd in blооd рrеssurе vаriаtiоn / G. Biаnchi [еt аl.] // Рrоc. Nаt. Аcаd. Sci.USА. – 1994. – Vоl. 91, N 9. – Р. 3999-4003. 356. Тurnеr, S.T. Cоntехt-dереndеnt аssоciаtiоns оf thе АCЕ I/D роlymоrрhism with blооd рrеssurе / S.T. Тurnеr, Е. Bоеrwinкlе, C.F. Sing // Hyреrtеnsiоn. – 1999. – Vоl. 34. – Р. 773-778. 357. Urbаn раrticulаtе mаttеr аir роllutiоn is аssоciаtеd with subclinicаl аthеrоsclеrоsis: rеsults frоm thе HNR (Hеinz Niхdоrf Rеcаll) study / M. Bаuеr [еt аl.] // J. Аm. Cоll. Cаrdiоl. – 2010. – Vоl. 56, N 22. – Р. 1803-1808. 358. Vаnhоuttе, Р.M. Еndоthеliаl dysfunctiоn in hyреrtеnsiоn / Р.M. Vаnhоuttе // J. Hyреrtеns. – 1996. – Vоl. 14, N 5. – Р. S83-S93. 359. Vаriаbility оf thе humаn аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr nuclеаr trаnslоcаtоr (АRNT) gеnе / J. Schееl [еt аl.] // J. Hum. Gеnеt. – 2002. – Vоl. 47, N 5. – Р. 217-224. 360. Vаriаbility оf thе humаn аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr nuclеаr trаnslоcаtоr (АRNT) gеnе / J. Schееl [еt аl.] // J. Hum. Gеnеt. – 2002. – Vоl. 47. – Р. 217-224. 361. Vаsоdilаtiоn tо аcеtylchоlinе in рrimаry аnd sеcоndаry fоrms оf hyреrtеnsiоn / S. Tаddеi [еt аl.] // Hyреrtеnsiоn. – 1993. – Vоl. 21. – Р. 929-933. 362. Viкrаnt S., Tiwаri S. C. Еssеntiаl hyреrtеnsiоn–раthоgеnеsis аnd раthорhysiоlоgy / S. Viкrаnt, S.C. Tiwаri // J. Indiаn Аcаd. Clin. Mеd. – 2001. – Vоl. 2, N 3. – Р. 140-161. 363. Wаеbеr, B. Thе multifаctоriаl nаturе оf hyреrtеnsiоn: thе grеаtеst chаllеngе fоr its trеаtmеnt? / B. Wаеbеr, H.R. Brunnеr // J. Hyреrtеns. – 2001. – Vоl. 19, N 3. – Р. S9-16. 146 364. Wаng, W.Y.S. Аssоciаtiоn оf аngiоtеnsin II tyре 1 rеcерtоr gеnе роlymоrрhism with еssеntiаl hyреrtеnsiоn / W.Y.S. Wаng, R.Y.L. Zее, B.J. Mоrris // Clin. Gеnеt. – 1997. – Vоl. 51. – Р. 31-34. 365. Wаrrеn, C. Еmеrgеnt cаrdiоvаsculаr risк fаctоr: Hоmоcystеinе / C. Wаrrеn // Рrоg. Cаrdiоvаsc. Nurs. – 2002. – Vоl. 17. – Р. 35-41. 366. Wеir, M. R. Р-393: Sаfеty аnd еfficаcy оf аn АCЕ inhibitоr/cаlcium chаnnеl blоcкеr cоmbinаtiоn vеrsus аn АCЕ inhibitоr аlоnе in hyреrtеnsivе раtiеnts with tyре 2 diаbеtеs / M.R. Wеir, G. Bакris, J.M. Nеutеl // Аm. J. Hyреrtеns. – 2002. – Vоl. 15, N S3. – Р. 173А-173А. 367. Wisеmаn, А. Оеstrоgеn-rеcерtоrs (ЕR) аrе liкеly tо bе рrоmiscuоus: widеr rоlе fоr оеstrоgеns аnd mimics / F. Wisеmаn // Mеd. Hyроthеs. – 2005. – Vоl. 65, N 4. – Р. 760-765. 368. Wоng, J.M.Y. Humаn аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr роlymоrрhisms thаt rеsult in lоss оf CYР1А1 inductiоn / J.M.Y. Wоng, А.B. Океy, Р.А. Hаrреr // Biоchеm. Biорhys. Rеs. Cоmmunicаtiоns. – 2001. – Vоl. 288, N 4. – Р. 990-996. 369. Wоrldwidе рrеvаlеncе оf hyреrtеnsiоn: а systеmаtic rеviеw / Р. Кеаrnеy [еt аl.] // J. Hyреrtеns. – 2004. – Vоl. 22. – Р. 11-19. 370. Yаsujimа, M. Еndоthеliаl nitric охidе synthаsе gеnе роlymоrрhism аnd hyреrtеnsiоn / M. Yаsujimа, S. Tsutаyа, M. Shоji // Rinshо Byоri Jар. J. Clin. Раthоl. – 1998. – Vоl. 46, N 12. – Р. 1199-1204. 371. Zеаrаlеnоnе аctivаtеs рrеgnаnе Х rеcерtоr, cоnstitutivе аndrоstаnе rеcерtоr аnd аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr аnd cоrrеsроnding рhаsе I tаrgеt gеnеs mRNА in рrimаry culturеs оf humаn hераtоcytеs / I. Аyеd-Bоussеmа [еt аl.] // Еnvirоn. Tохicоl. Рhаrmаcоl. – 2011. – Vоl. 31, N 1. – Р. 79-87. 372. Zhаng, N. Thе rоlе оf еndоgеnоus аryl hydrоcаrbоn rеcерtоr signаling in cаrdiоvаsculаr рhysiоlоgy / N. Zhаng // J. Cаrdiоvаsc. Dis. Rеs. – 2011. – Vоl. 2, N 2. – Р. 91-95. 147 373. Zhоu, T.B. Аssоciаtiоn оf аngiоtеnsinоgеn M235T gеnе роlymоrрhism with еnd- stаgе rеnаl disеаsе risк: а mеtа-аnаlysis / T.B. Zhоu, S.S. Yin, Y.H. Qin // Mоl. Biоl. Rероrts. – 2013. – Vоl. 40, N 2. – Р. 765-772. 374. Zivко, M. Cоll. Imраct оf аngiоtеnsin-cоnvеrting еnzymе gеnе роlymоrрhism оn рrоtеinuriа аnd аrtеriаl hyреrtеnsiоn / M. Zivко, R. Кusеc, К. Gаlеsić // Аntrороlоgy. – 2013. – Vоl. 37, N 3. – Р. 765-770. 375. α-аdducin роlymоrрhism, аthеrоsclеrоsis, аnd cаrdiоvаsculаr аnd cеrеbrоvаsculаr risк / M.J.Е. vаn Rijn [еt аl.] // Strоке. – 2006. – Vоl. 37, N 12. – Р. 2930-2934. 148 ПРИЛОЖЕНИЯ Приложение 1 Функциональные и биохимические эффекты полиморфизмов изучаемых генов КАГР и ФБ Ген Поли морфизм Функция фермента Эффект аллеля AHR R554K Активация Ah рецепторов может происходить под влиянием 2,3,7,8тетрахлородибензо-з-диоксина (ТХДД), галогенированных ароматических углеродов или полициклических углеродов, включая бензопирен и бензатрацен [Hahn, 1998; Hankinson, 1995]. AhR-лиганды можно разделить на две категории: в первую входят синтетические (дибензодиоксины, дибензофураны, бифенилы, бензопирен, бензотрацен и др.) ароматические углеводороды. Вторую составляют лиганды естественного происхождения [С.В. Гуньков, 2009]. Активация AhR экзогенными лигандами способствует возникновению дефектов в развитии и дифференцировки различных тканей, таких как сердце, нёбо, почка и репродуктивные органы [Puga A, Xia Y., 2002]. AhR рассматривается в качестве транскрипционного регулятора генов, кодирующих ферменты цитохромов Р450 [Allan B. Oke, David S. Riddick, 1994; M.E. Hahn,1998]. AhR играет важную роль в регуляции клеточного цикла и апоптоза [Karchner SI, Powell WH, 1999]. Является частью семейства транскрипционных регуляторов, которые контролируют разнообразные процессы физиологических изменений организма, включая нейрогенез, формирование трахеи, слюнных протоков, метаболизм токсинов, суточные ритмы, ответную реакцию на гипоксию, функцию гормональных рецепторов, гемопоэз [Hankinson O., 2005]. Нарушение баланса между энзимами Ah рецепторов и непосредственно Ah рецепторами является важным фактором, определяющим направленность изменений клетки в сторону апоптоза или продолжения клеточной пролиферации [Lawrence B.P. ,2004]. Одинаково высокий уровень экспрессии гена AhR был обнаружен в легких, плаценте и селезенке у взрослых, а также в легочной Изучаемый полиморфизм гена AhR кодон 554 в 10 экзоне (1661G>A)AGA to AAA, Arg to Lys [Kawajiri K, Watanabe J, 1995; Scheel J, Hussong R, 2002;Cauchi S, Stucker I, 2003]. Полиморфизм Arg554Lys (носители гетерозиготного генотипа) гена AhR увеличивал активность цитохромов 1А1 и 1А2, что влияет на функциональные изменения в трансактивации экспрессии данных генов [Marianne Berwick, 2011]. В популяционных исследованиях продемонстрировано, что индуцированная активность цитохрома Р4501А1 выше у носителей гетерозиготного генотипа гена AhR или вариантных гомозигот (Arg554/Lys554 or Lys554/Lys554), чем у дикий гомозигот (Arg554/Arg554) [Wong et al., 2001; Harper et al., 2002]. Однако, в японской популяции полиморфизм гена AhR в кодоне 554 не был ассоциирован в повышенной активностью цитохрома Р 4501А1 в легочной ткани в группе курильшиков [Kawajiri et al., 1995]. Согласно данным исследований в Германии, вариантные гомозиготы Lys554Lys гена AHR ассоциированы с низким уровнем экспрессии mRNA генов AHR, ARNT и CYP1B1. Таким образом, аллель Lys гена AhR (по сравнению с аллелью Arg) ассоциирована с более низкой экспрессией генов КАГР [Simone Helmig, 2011]. 149 ARNT AHRR V189V P185A ткани и ткани селезенки в фетальном образце. [J. Yamamoto et al., 2004]. Наличие генов КАГР в сердечно-сосудистой системе нашло подтверждение в некоторых исследованиях. Согласно полученным данным, диоксин и диоксин-подобные эффекты, опосредованные функционированием КАГР, вызывают различные структурные изменения сердечнососудистой системы, в том числе кардиотератогенез. Данные изменения реализуются за счет увеличения апоптоза клеток сердечно-сосудистой системы и резкого снижения пролиферативной активности кардиомиоцитов [Karen S., 2005; Phillip G, 2009; Vilahur G. et al., 2013; Maayah Z. H. et al, 2013]. Согласно литературным данным, гены КАГР экспрессируются в аорте, а также играют важную роль и моделировании гипертрофии миокарда и формировании атеросклеротических процессов [Ziv-Gal A. et al., 2013]. Эндогенная роль в органогенезе [Lawrence B.P. ,2004]. Арилгидрокарбоновым ядерным транслокатором (ARNT) выполняет процесс гетеродимеризации в ядре с AhR, при связывании последнего с ароматическим углеводородом [Allan B. Oke, David S. Riddick, 1994]. Гетородимер AhR/ARNT связан c индукцией цитохромов P4501A1, 1A2 и 1В1 которая может повлиять на последующую восприимчивость к некоторым веществам проканцерогенного характера, являющихся субстратами для данных цитохромов [Allan B. Oke, David S. Riddick, 1994; M.E. Hahn,1998]. ARNT вовлечен в различные реакции, формирующие нарушение гомеостаза организма (напр. опухолевый рост [Semenza 1999; Sun et al. 2001] и также вовлечен в развитие хромосомное транслокации при развитии лейкемии [Salomon-Nguyen et al. 2000]. Экспрессия ARNT была главным образом обнаружена в яичниках, легких, селезенке, яичках и пожделудочной у взрослых, а также в легких и почках в фетальных образцах. [J. Yamamoto et al., 2004]. Ген, ответственный за эксперссию репрессора AhRR был впервые получен при экспериментах на мышах [Mimura et al., Изучаемый полиморфизм гена ARNT кодон 189 в 7 экзоне (GTG to GTC) [Anttila et al. 2000]. В исследованиях [ Julia Scheel, 2002] не было найдено статистически значимых корреляций для уровня активности CYP1A2, которая непосредственно находится под контролем комплеска транскрипционнго AHR/ARNT. Генотип GG гена ARNT ассоциирован с высокой индуцибельностью акстивности CYP1A2, а генотип CC ассоциирован с меньшей индукцией данного цитохрома. [Hung W. T. et al, 2011]. Изучаемый полиморфизм гена AhRR кодон 185 в 5 экзоне (CCC to GCC, Pro to Ala).[Kawajiri K, Watanabe J, 150 CYP1A1 I462V 1999], а дальнейшем появились сведения об обнаружении данного гена в тканях человека [Nagase et al., 1999; Watanabe et al., 2001; Karchner et al., 2002]. AhRR конкурирует с AhR за связывание с ядерным транслокатором AhRT. Комплекс AhRRARNT связывается с соединениями реципрокными к AhR, но этот комплекс функционально неактивен. Репрессор арилгидрокарбонового рецептора так же образует комплекс c ядерным транслокатором AHRR-ARNT, который конкурентно связывается с промоторами генов, не влияя на их активность, тем самым останавливает диоксиновый сигнал. Комплекс AhRR-ARNT препятствует образованию тройного комплекса индукторAhR-рецептор - ARNT. Ген AhRR определяет индивидуальную восприимчивость к влияную диоксинового сигнала [Chaffin CL, Hutz RJ., 1997]. Уровень экспрессии гена AhRR был наиболее высоким в тканях яичек, яичников, легких и поджелудочной у взрослых. Однако, экспрессия гена AhRR была наиболее высокой в легочной ткани и поджелудочной у взрослых, тогда как в фетальных образцах наибольший уровень экспрессии наблюдался только в легочной ткани [J. Yamamoto et al., 2004]. Фермент 1 фазы БФК, вовлечен в метаболизм многих ксенобиотиков, в том числе и ПАУ. Участвует в монооксигеназной активация ПАУ и ароматических ГЦА с образованием реактивных токсических метаболитов – эпоксидов, фенолов [Smith G,. 1995; Whitlock J.P., Jr. 1999; Shimada T., 1996; Edwards R.J., 1994; Guengerich F.P., 2000], гидроксилирование микотоксинов, флавоноидов, кофеина, теофиллина [Ляхович В.В., 2000; Симон В.А., 2002]. В большинстве случаев гидроксилирует позицию 2 в молекуле эстрадиола, таким образом формируя нетоксические соединения. Катализирует гидроксилирование эстрадиола и арахидоновых кислот, образуя вазоактивные субстанции [Vasco Lanca, Constanca Coelho, 2002]. CYP1A1 является внепеченочным ферментом, главным образом ответственный за каталитические реакции окисления. 1995; Scheel J, Hussong R, 2002;Cauchi S, Stucker I, 2003] Регуляторное действие AHRR на AhR сигнальную систему - аллель 185Pro гена AHRR оказывает более слабое ингибирующее действие на ARNT, чем аллель 185Ala гена AHRR [Hideki fujita,2002]. Также согласно данным, полиморфизм гена AhRR(rs2292596) индуцирует ферментативную активность гена CYP1A2 в условиях воздействия диоксин-подобных элементов. .[WanTing Hung,2012] Транзикция А4889G в 7 экзоне гена CYP1A1 приводит к аминокислотной замене Ile462Val в геммсвязывающем регионе фермента [Spurr N.K., 1987; Kawajiri K., 1990’ Hayashi S., 1991]. Аллель 462Val связан с увеличением индуцибельности и активности CYP1A1 [Kato S., 1995; Crofts F., 1994; Landi M.T., 1994; Nebert D.W., 1996]. Генотип 462Ile/Val+Val/Val гена CYP1A1 ассоциированы с увеличенной концентрацией малондиальдегида, уменьшением каталитической активности и уменьшением концентрации глутатиона [Arpana Vibhuti, 2010]. 151 Оказывает влияние на метаболизм эйкозапентаеновой кислоты, изменяя индивидуальную вариабельность метаболизма, увеличивая продукцию физиологически активных метаболитов жирных кислот в сердечно-сосудистой системе и печеночной ткани [Dieter Schwarz, 2009]. Протеин, кодируемый геном CYP1A1 является плеотропным цитокином и синтезируется Т-лимфоцитами. Протеин гена CYP1A1 участвует в регуляции иммунитета совместно с интерлейкином IL4 (№ 1195MS). Белок, кодируемый CYP1A1 участвует в метаболизме холестерина, стероидов и других липидов. Он синтезируется на эндоплазматическом ретикулуме под действием циклических ароматических углеводородов, в том числе содержащихся в сигаретном дыме. CYP1A1 играет главную роль в формировании канцерогенов из табачного дыма. Индукторами экспрессии являются ПАУ (бенз(а)пирен, 3метилхолантрен), ГАУ(ТХДД), НА [Guengerich F.P., 1999], ПХБ, никотин [Willey J.C., 1997; Zevin S., 1999; Drahushus A.T., 1997; Safe S.H., 1994, Ibs M.M., 1999]. Индуцибельность фермента тесно связана с активностью гидролаз арилгидрокарбонового комплеска. В организме экспрессируюется в тонком кишечнике [Zhang Q.Y., 1997; Crofts F., 1994; Roediger W.E., 1997], легочной ткани и бронхиальном дереве (дистальные отделы –в эпителии терминальных бронхиол и альвеол) [Hukkanen J., 2000; Mace K., 1998; Wei C., 2001; Willey J.C., 1997], лимфоцитах и плаценте. CYP1A2 154C>A Играет важную роль в реакциях деметилирования кофеина (начальная реакция биотрансформации кофеина в организме человека) [Butler, M. A.,, 1998]. Также данный цитохром вовлечен в метаболическую активацию множества канцерогенных веществ (2-аминофлуорена, 3-амино-1-метил-5Н-пиридо [4,3-b]-индола и 2-амино-1-метил-6-фенилимидазоло [4,5-б] пиридина) [Nakajima, M.,1999]. Метаболизирует никотин, фенацетин, кофеин, теофиллин, имипрамин, клозапин, пропранолол [Butler M.A., 1989; Баранов Ген CYP1A2 расположен в 15-й хромосоме (15q24.1). Его полиморфизм 154 С>A; g.32035 C>A связан с заменой нуклеотида аденина (А) на цитозин (С), что приводит к замене аминокислоты в пептидной цепи молекулы цитохрома. Полиморфизмы(−3680G>A, −2467delT, −739T>G и 154C>A) согласно исследованиям, связаны с изменением ферментативной активности CYP1A2 [Corchero et al., 2001; Oscarson, 2003]. Более того, 152 CYP1B1 V432L В.С., 2000], гидроксилирует микотоксины, флованоиды [Ляхович В.В., 2000].Гидроксилирование эстрогенов и окисление уропорфириногена в метаболизме гемма [Schmidt J.V., 1996; Quattrochi L.C., 1994; Hayshi S., 19994; Симон В.А., 2002]. Метаборлическая активация посредством Nгидроксилирования преимущественно АА, а также ГЦА. Активирует ПАУ, НА и афлотоксин В1, тем самым продуцирует различные классы метаболитов, обладающих цитотоксическими и канцерогенными свойствами [Guengerich F.P., 1999; Shimada T., 1996; Mace K., 1998; Hammons G.J., 1997; Hecht S.S., 1998; Райс Р.Х., 2003; Boobis A.R., 1994; Edwards R.J., 1994]. Цитохром Р 450 1А2 ответственен за активацию канцерогенных гетероциклических и ароматических аминов [Kadlubar, F.F., 1994]. Формирующиеся под влиянием цитохрома Р450 1А1 2-гидроксиэстрогены снижают активность КОМТ (катехол-Ометилтрансферазы) и препятствуют инактивации канцерогенных и генотоксичных 4-гидроксиэстрогенов. [Kadlubar, F.F., 1994]. Индукторами экспрессии являются ПАУ (бенз(а)пирен, 3-метилхолантрен, бензантрацен), ГАУ (ТХДД), НА [Guengerich F.P., 1999], ПХБ, ПББ, никотин [Willey J.C., 1997; Zevin S., 1999; Safe S.H., 1994; Iba M.M., 1999]-продуктами промышленных выбросов, пестицидами, дефолиантами, табачным дымом, тщательно прожаренным мясом, а также овощами семейства крестоцветовых, содержащих индол-3карбинол, лекарствами рифмапицином, омепразолом кофеином [Landi M.T., 1999; Lampe J.W., 2000] Экспрессия преимущественно в печени [Raunio H., 1995], в меньшей степени в легочной ткани [Mace K., 1998; Wei C., 2001; Райс Р.Х., 2003]. Экспрессия обнаружена в кишечнике [Roediger W.E.W., 1997], пилорических железах и участках метаплазии кишечных желез [Tatemichi M., 1999] наличие данных мутаций может влиять на скорость конъгирования метаболитов ПАУ и определять чувствительность к данным метаболитам [Nakajima et al., 1999]. Наличие аллели С ассоциировано со сниженной индукцией и уменьшением ферментативной активности [Joshua K.X. Tay, 2007]. Однако, в некоторых работах сказано, что вариантный аллель полиморфизма гена CYP1A2 способен увеличивать активность данного фермента в группе курильщиков [L.C. Quattrochi, 1994; K. Sogawa, 1997]. Установлено также, что сигаретный дым стимулирует процесс метаболизма фенацетина, увеличивая тем самым количество иммунореактивных ферментов CYP1A2 в микросомах печени человека [Nakajima, M.,1996], уменьшая период полураспада кофеина в плазме, однако увеличивая молярное соотношение метаболитов кофеина, как и индекс активности CYP1A2 [Quattrochi, L.C.,1994]. Аллель С полиморфизма полиморфизма 154 С>A (варианты генотипа АС и СС) является показателем медленного метаболизма кофеина, а аллель А в гомозиготе является показателем быстрого метаболизма кофеина[H. Bartsch, ,1999]. Продукты метаболизма цитохрома Р450 1А1 могут влиять на увеличение активности цитохрома Р450 1А2 [Stewart MacLeod, 1997]. CYP1B1 в большинстве случаев гидроксилирует позицию 4 в молекуле Полиморфизм в 3 экзоне приводит к аминокислотной замене Val432Leu в Более того, наличие аллеля 154С гена CYP1A2 в Туниской популяции достоверно ассоциировано с риском развитием стенокардии, также согласно данному исследованию риск возникновения патологии увеличивался среди крильщиков [Achour A. et al., 2011]. 153 NQO1 P187S эстрадиола, что приводит к образованию активного метаболита, способного формировать продукты присоединения к ДНК и, следовательно, является потенциально генотоксичным [Проданчук Н.Г. 2005]. Фермент 1 фазы детоксикации CYP1B1 вовлечен в активацию карцерогеза. Ген CYP1B1 связан с развитием оксидативного стресса при воздействии экзогенных токсинов химической природы [Paracchini V.,2007]. Ведущая роль в 4гидроксилировании 17β-эстрадиола и других эстрогенов с проследующей их активацией [Hayes C.L., 1996; Bartsch H., 2000; Hanna I.H.,2000], окисление уропорфириногена в метаболизме гемма [Schmidt J.V., 1996; Quattrochi L.C., 1994;]. что данный цитохром активирует ПАУ и диоксины, в результате чего образуются оксидазы, реактивно способные промежуточные соединения и повышается непосредственно активность гена преимущественно у носителей аллеля Val. CYP1B1 метаболизирует эстрогены в продукты гидроксильной группы, которые отвечают за индукцию формирования ДНК аддуктов и являются карцерогенными веществами [Nock NL, 2007;Belous AR, 2007]. Активитует дигидродиолы ПАУ, АА и ариламинов, особенно в таких типах клеток ( альвеолярные макрофаги), где экспрессия CYP1A1 находится на низком уровне или полностью отсутствует. Также метаболизирует кофеин и многие лекарства [Bartsch H., 2000; Piipari R., 2000; Parkinson A.,1996]. Индукторами экспрессии ПАУ (бенз(а)пирен, 3-метилхолантрен, бензантрацен), ГАУ (ТХДД), НА [Guengerich F.P., 1999], ПХБ, ПББ, никотин [Willey J.C., 1997; Zevin S., 1999; Safe S.H., 1994; Iba M.M., 1999] Экспрессируется в различных тканях [Tatemichi M., 1999; Shimada T., 1996; Sutter T.R., 1994; Tang Y.M., 1999; Muskhelishvili L., 2001; Spivack S.D., 2001] гемм-связывающем регионе, который может влиять на каталитические функции фермента [Bailey L.R., 1998; Li D.N., 2000; Hanna I.N., 2000]. Полиморфизм Val432Leu является функционально активным [Ascenzi P, 2009]. Данный полиморфизм оказывает наибольшее влияние на каталитические свойства реакции гидроксилирования, более того, аллель 432Val является более функционально активным в данных реакциях гидроксилирования [Li DN, Seidel A., 2000]. В процессе метаболической активации проканцерогенных веществ (напр. ПАУ), фермент CYP1B1 обладает перекрывающей субстратной селективностью по отношению к ферменту CYP1A1 [T. Shimada,2009]. При носительстве аллеля Val обнаруживается увеличенное содержание 4- и 2- гидроксил метаболитов [Paracchini V., 2005]. Аллель 432 Val (G) гена CYP1B1 ассоциирован с проявлением высокой активности при процессах прокарцерогенеза [Shimada T,2001]. NQO1 играет основную роль в процессах детоксикации бензола, инактивируя хиноны, образующиеся в результате метаболизма. Непосредственно экспрессия гена NQO1 Существует два наиболее часто встречаемых полиморфизма в гене NQO1: P187S и R139W. Гетерозиготы 187PS имеют в 3 раза 154 индуцируется окислительным стрессом, влиянием циклических углеводородов табачного дыма и промышленных акрилатов. Ген NQO1 локализован на 16q22.1 [Chen, L. Z., 1991]. НАД(Ф)Н дегидрогеназа, хинон 1, NQO1, гомодимерный фермент, катализирующий окисление NADH--- NAD+ в присутствии хининов. Согласно исследованиям проведенным на мышах, в печени и почках мышей отсутствие данного фермента значительно уменьшает соотношение NAD+/NADH [Ignarro I., 2002]. Были изучены некоторые активаторы и субстраты NQO1. Хорошо известным субстратом является β-лапачон (β-L, 3,4дигидро-2,2-диметил-2н-нафтоло[1,2-b] пуран-5,6-дион) [Nioi P., 2001; Pardee A.B., 2004]. Согласно данным литературы, данного вещество способно ингибировать опухолевый рост [Rints A.V., 1995]. В исследованиях на мышах было обнаружено, что β-лапачон увеличивает соотношение NAD+/NADH через активацию NQO1. Более того, увеличенное соотношение NAD+/NADH в цитоплазме оказывало положительные эффекты на некоторые составляющие метаболического синдрома: происходило уменьшение степени ожирения у мышей и не развивалась пролиферация гладкомышечных клеток в артериальных сосудах у крыс [Hwaha I.H., 2009; Kim S.Y., 2009]. Согласно работе Yong-Hoon Kim, 2010, у крыс с моделированной АГ происходит увеличение соотношения NAD+/NADH в результате активации NQO1 через артериальную эндотелиальную NOсинтетазу на снижение концентрации βлапачона. В другом исследовании также проводимом на лабораторных крысах, было обнаружено, что концентрация ACE регулируется активаций NQO. Непосредственно активация NQO коррелирует с уменьшением АД у крыс с моделированной АГ. Эти данные могут свидетельствовать о том, что NQO1 может выступать в качестве инициации модулирования АСЕ и контроля кровяного давления [Kim Y.H., 2010]. ниже активность фермента, чем гомозиготы дикого типа 187PP, тогда как у вариантных гомозигот полностью отсутствует активность фермента [Moran, J. L. Et al. 1999, Traver, R. D. 1997]. Установлено, что гомозиготный генотип 187SS гена NQO1 ассоциирован с повышенным риском токсического действия бензина [Moran et al. 1999]. Приложение 2 155 Сравнительный анализ распределения частот аллелей полиморфных вариантов генов у больных лабильной формой гипертонической болезни и здоровых индивидов Частоты аллелей Полимо Контрольна Ген Аллели1 χ2, (p) OR (CI 95%) Больные ГБ рфизм я группа (n=602) (n=215) 462I 0,895 0,894 0,02 0,96 (0,59CYP1A1 I462V 1,56) (0,94) 462V 0,105 0,106 432V 0,4 0,43 0,39 1,1 (0,82-1,48) CYP1B1 V432L (0,53) 432L 0,6 0,57 187P 0,781 0,789 1,02 (0,720,01 (0,9) NQO P187S 1,46) 187S 0,219 0,211 554R 0,899 0,875 0,77 (0,481,09 (0,3) AHR R554K 1,26) 554K 0,101 0,125 185P 0,573 0,553 0,56 AHRR P185A 0,89 (0,66-1,2) (0,46) 185A 0,427 0,447 189G 0,607 0,641 0,98 (0,730,02 (0,9) ARNT G189C 1,32) 189C 0,393 0,359 154C 0,895 0,894 1,05 0,85 (0,61CYP1A2 154 C<A 1,17) (0,31) 154A 0,105 0,106 1 Вариантные аллели (мутации) представлены в нижних ячейках соответствующих ДНКмаркеров. Приложение 3 Сравнительный анализ распределения частот генотипов полиморфных вариантов генов у больных лабильной формой гипертонической болезни и здоровых индивидов Ген 1 CYP1A1 CYP1B1 Частоты генотипов Контрольная Больные ГБ Полимо группа Генотипы (n=602) рфизм (n=549) 2 I462V V432L χ2, (p) 3 462II 462IV n 4 86 20 % 5 80 19 n 6 433 108 % 7 79,5 19,8 8 0,05 (0,83) 0,07 (0,79) 462VV 1 1 4 0,7 0,9 (0,83) 432VV 432VL 19 49 17,2 45,7 99 273 18,1 49,8 0,01 (0,84) 0,58 (0,45) OR (CI 95%) 0,94 (0,56-1,59) 0,93 (0,55-1,58) 1,28 (0,1411,53) 1,02 (0,09-1,76) 0,85 (0,56-1,29) 156 NQO P187S AHR R554K AHRR P185A ARNT G189C CYP1A2 154 C<A 432LL 187PP 187PS 187SS 554RR 554RK 554KK 185PP 185PA 185AA 189GG 189GC 189CC 154C 154CA -154AA 39 65 38 4 87 17 2 39 44 22 36 58 13 57 38 12 37,1 60 36,2 3,8 81,7 16,3 2 35,9 42,7 21,9 33,3 55,2 11,5 53,3 35,5 11,2 176 347 172 30 425 106 15 166 273 108 228 248 73 259 220 68 32,1 63,2 31,3 5,5 77,8 19,4 2,8 30,4 49,9 19,7 41,5 45,2 13,3 47,3 40,2 12,5 0,76 (0,38) 0,23 (0,63) 0,72 (0,4) 0,54 (0,46) 0,94 (0,33) 0,66 (0,42) 0,26 (0,61) 1,89 (0,17) 2,26 (0,13) 0,08 (0,78) 2,32 (0,13) 2,94 (0,09) 0,1 (0,75) 1,26 (0,26) 0,83 (0,36) 0,12 (0,73) 1,21 (0,79-1,87) 1,11 (0,73-1,7) 1,21 (0,78-1,87) 0,67 (0,23-1,95) 0,77 (0,45-1,3) 0,79 (0,45-1,39) 0,68 (0,15-3,02) 0,74 (0,48-1,14 0,72 (0,47-1,1) 1,08 (0,64-1,8) 1,4 (0,91-2,12) 1,44 (0,95-2,18) 0,9 (0,48-1,69) 0,79 (0,52-1,19) 0,82 (0,53-1,26) 0,89 (0,46-1,71) Приложение 4 Сравнительный анализ распределения частот аллелей полиморфных вариантов генов у больных стабильной формой гипертонической болезни и здоровых индивидов Ген Полимо рфизм CYP1A1 I462V CYP1B1 V432L NQO P187S AHR R554K AHRR P185A ARNT G189C CYP1A2 154 C<A Аллели1 462I 462V 432V 432L 187P 187S 554R 554K 185P 185A 189G 189C 154C Частоты аллелей Контрольна Больные ГБ я группа (n=602) (n=215) 0,946 0,894 0,054 0,106 0,429 0,43 0,571 0,57 0,792 0,789 0,208 0,211 0,885 0,875 0,115 0,125 0,562 0,553 0,438 0,447 0,607 0,641 0,393 0,359 0,702 0,675 χ2, (p) OR (CI 95%) 3,7 (0,05) 0,52 (0,271,02) 0,06 (0,8) 1,04 (0,751,44) 0 (0,97) 1,01 (0,961,98) 0,11 (0,74) 0,03 (0,86) 0,48 (0,49) 0,72 (0,4) 0,92 (0,561,51) 1,03 (0,751,42) 1,12 (0,811,56) 0,86 (0,61- 157 1 1,22) 0,298 0,325 154A Вариантные аллели (мутации) представлены в нижних ячейках соответствующих ДНКмаркеров. Приложение 5 Сравнительный анализ распределения частот генотипов полиморфных вариантов генов у больных стабильной формой гипертонической болезни и здоровых индивидов Ген 1 Частоты генотипов Контрольная Больные ГБ Полимо группа Генотипы (n=602) рфизм (n=549) 2 CYP1A1 I462V CYP1B1 V432L NQO P187S AHR R554K AHRR P185A 3 462II 462IV 462VV 432VV 432VL 432LL 187PP 187PS 187SS 554RR 554RK 554KK 185PP 185PA 185AA n 4 75 10 0 11 51 25 53 31 3 68 18 1 26 43 18 % 5 89,2 10,8 0 13,1 59,2 27,4 61,9 34,5 13,6 77,3 21,4 1,3 29,9 49,5 20,7 n 6 433 108 4 99 273 176 347 172 30 425 105 15 166 273 108 % 7 79,5 19,8 0,7 18,1 49,8 32,1 63,2 31,3 5,5 77,8 19,4 2,8 30,4 49,9 19,7 χ2, (p) OR (CI 95%) 8 3,63 (0,06) 3,13 (0,08) 0,6 (0,43) 1,54 (0,21) 2,33 (0,13) 0,4 (0,59) 0,47 (0,68) 0,64 (0,42) 0,62 (0,43) 0 (0,97) 0,1 (0,76) 0,78 (0,38) 0,01 (0,93) 0,01 (0,57) 0,04 (0,82) 0,52 (0,26-1,03) 0,54 (0,27-1,08) 0 1,52 (0,78-2,97) 1,43 (0,9-2,26) 0,85 (0,52-1,4) 1,1 (0,69-1,75) 1,2 (0,76-1,95) 0,62 (0,18-2,07) 0,99 (0,57-1,7) 1,09 (0,62-1,92) 0,41 (0,05-3,15) 1,02 (0,62-1,68) 0,98 (,62-1,68) 1,06 (0,61-1,86) 158 ARNT G189C CYP1A2 154 C<A 189GG 189GC 189CC 154C 154CA 154AA 35 36 16 48 27 12 39,3 42,8 17,9 55,2 31,1 13,8 228 248 77 259 220 68 41,5 45,2 13,3 47,3 40,2 12,5 0,03 (0,86) 0,37 (0,35) 0,21 (0,27) 2,22 (0,14) 2,32 (0,13) 0 (0,99) 1,04 (0,66-1,63) 0,87 (0,55-1,37) 1,39 (0,77-2,52) 0,71 (0,45-1,11) 0,69 (0,42-1,12) 1,0 (0,52-0,92) Приложение 6 Сравнительный анализ частот аллелей полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК у больных ГБ, осложненной инсультом, и группой больных с лабильной формой ГБ Ген Полимор физм AHR R554K AHRR P185A ARNT G189C CYP1A1 I462V CYP1A2 154 C<A CYP1B1 V432L NQO P187S Аллели 554R 554K 185P 185A 189G 189C 462I 462V 154C 154A 432V 432L 187P 187S 1 Частоты аллелей Больные ГБ c Больные ГБ инсультом без инсульта n=126 n=107 0,905 0,901 0,095 0,099 0,579 0,581 0,421 0,419 0,683 0,607 0,317 0,393 0,925 0,897 0,075 0,103 0,333 0,290 0,667 0,710 0,417 0,407 0,583 0,593 0,776 0,785 0,224 0,215 χ2, (p) OR (CI 95%) 0,02 (0,89) 0,96 (0,52-1,77) 0 (0,97) 2,86 (0,09) 1,01 (0,69-1,46) 1,08 (0,3) 1,02 (0,31) 0,05 (0,82) 0,06 (0,81) 0,71 (0,37-1,35) 0,72 (0,5-1,09) 0,82 (0,55-1,21) 0,86 (0,66-,1,33) 1,05 (0,68-1,62) Вариантные аллели (мутации) представлены в нижних ячейках соответствующих ДНК-маркеров. 1 Приложение 7 159 Сравнительный анализ частот генотипов полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК у больных ГБ, осложненной инсультом, и группой больных лабильной формой ГБ. Частоты генотипов Больные ГБ c Больные ГБ Полимор инсультом без инсульта Генотипы физм n=126 n=107 Ген 1 2 AHR R554K AHRR P185A ARNT G189C CYP1A1 I462V CYP1A2 154 C<A CYP1B1 V432L NQO P187S χ2, (p) OR (CI 95%) n % n % 3 554RR 554RK 554KK 185PP 185PA 185AA 189GG 189GC 189CC 4 104 20 2 5 82,5 15,9 1,6 6 87 17 2 7 82,1 16,0 1,9 8 0,01 (0,93) 0,00 (0,97) 0,03 (0,86) 9 0,97 (0,49-1,91) 0,99 (0,49-2,0) 0,84 (0,12-6,06) 44 58 24 57 58 11 34,9 46,0 19,0 45,2 46,0 8,7 39 44 22 36 58 13 37,1 41,9 21,0 33,6 54,2 12,1 0,12 (0,73) 0,40 (0,53) 0,13 (0,72) 3,24 (0,07) 1,55 (0,21) 0,73 (0,39) 1,10 (0,64-1,89) 1,18 (0,7-1,99) 0,89 (0,46-1,7) 0,61 (0,36-1,05) 0,72 (0,43-1,21) 0,69 (0,3-1,61) 462II 108 17 1 12 60 54 19 67 40 75 44 6 85,7 13,5 0,8 9,5 47,6 42,9 15,1 53,2 31,7 60,0 35,2 4,8 86 20 1 12 38 57 19 49 39 65 38 4 80,4 18,7 0,9 11,2 35,5 53,3 17,8 45,8 36,4 60,7 35,5 3,7 1,18 (0,28) 1,17 (0,28) 0,01 (0,91) 0,18 (0,67) 3,48 (0,06) 2,52 (0,11) 0,30 (0,56) 1,26 (0,28) 0,57 (0,45) 0,01 (0,91) 0,00 (0,96) 0,16 (0,69) 0,68 (0,34-1,36) 0,68 (0,34-1,37) 0,85 (0,05-13,7) 1,20 (0,52-2,79) 1,65 (0,97-2,8) 0,66 (0,39-1,1) 1,22 (0,61-2,44) 1,34 (0,8-2,25) 0,81 (0,47-1,4) 1,03 (0,61-1,75) 0,99 (0,57-1,69) 1,30 (0,36-4,73) 462IV 462VV 154C 154CA 154AA 432VV 432VL 432LL 187PP 187PS 187SS Приложение 8 Сравнительный анализ частот аллелей полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК у больных ГБ, осложненной инсультом, и лабильной формой ГБ среди мужчин. Ген Полимор физм Аллели1 Частоты аллелей Больные ГБ c Больные ГБ инсультом без инсульта χ2, (p) OR (CI 95%) 160 AHR R554K AHRR P185A ARNT G189C CYP1A1 I462V CYP1A2 154 C<A CYP1B1 V432L NQO P187S n=73 0,904 0,096 0,589 0,411 0,685 0,315 0,938 0,062 0,295 0,705 0,411 0,589 0,743 0,257 554R 554K 185P 185A 189G 189C 462I 462V 154C 154A 432V 432L 187P 187S n=39 0,921 0,079 0,551 0,449 0,628 0,372 0,872 0,128 0,256 0,744 0,397 0,603 0,731 0,269 0,18 (0,68) 1,24 (0,46-3,36) 0,3 (0,59) 0,73 (0,39) 0,86 (0,49-1,49) 2,9 (0,09) 0,37 (0,55) 0,04 (0,84) 0,04 (0,84) 0,45 (0,17-1,15) 0,78 (0,44-1,38) 0,83 (0,44-1,54) 0,95 (0,54-1,66) 0,94 (0,5-1,7) Вариантные аллели (мутации) представлены в нижних ячейках соответствующих ДНК-маркеров. 1 Приложение 9 Сравнительный анализ частот генотипов полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК у больных ГБ, осложненной инсультом, и лабильной формой ГБ среди мужчин. Ген Частоты генотипов Больные ГБ c Больные ГБ Полимор инсультом без инсульта Генотипы физм n=73 n=39 1 2 AHR R554K AHRR P185A ARNT G189C CYP1A1 I462V CYP1A2 154 C<A 3 554RR 554RK 554KK 185PP 185PA 185AA 189GG 189GC 189CC 462II 462IV 462VV -154C -154CA χ2, (p) OR (CI 95%) n % n % 4 59 14 0 5 80,8 19,2 0,0 6 32 6 0 7 84,2 15,8 0,0 8 0,19 (0,66) 0,19 (0,66) - 9 1,27 (0,44-3,61) 1,27 (0,44-3,61) - 25 36 12 32 36 5 64 9 0 3 37 34,2 49,3 16,4 43,8 49,3 6,8 87,7 12,3 0,0 4,1 50,7 14 15 10 15 19 5 30 8 1 4 12 35,9 38,5 25,6 38,5 48,7 12,8 76,9 20,5 2,6 10,3 30,8 0,03 (0,86) 1,21 (0,27) 1,36 (0,24) 0,30 (0,58) 0,00 (0,95) 1,11 (0,29) 2,18 (0,14) 1,32 (0,25) 1,89 (0,17) 1,64 (0,2) 4,10 (0,04) 1,08 (0,48-2,43) 1,56 (0,71-3,44) 0,57 (0,22-1,47) 0,80 (0,36-1,77) 1,02 (0,47-2,23) 0,50 (0,14-2,85) 0,47 (0,17-1,3) 0,54 (0,19-1,55) 0,00 2,67 (0,57-12,6) 2,31 (1,02-5,25) 161 CYP1B1 V432L NQO P187S 33 10 40 23 38 31 3 -154AA 432VV 432VL 432LL 187PP 187PS 187SS 45,2 13,7 54,8 31,5 52,8 43,1 4,2 23 4 23 12 20 17 2 59,0 10,3 59,0 30,8 51,3 43,6 5,1 1,93 (0,17) 0,28 (0,6) 0,18 (0,67) 0,01 (0,94) 0,02 (0,88) 0,00 (0,96) 0,05 (0,52) 0,57 (0,26-1,26) 0,72 (0,21-2,47) 0,84 (0,38-1,85) 1,04 (0,45-2,4) 0,94 (0,43-2,05) 0,98 (0,45-2,15) 0,8 (0,13-5,03) Приложение 10 Сравнительный анализ частот аллелей полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК у больных ГБ, осложненной инсультом, и лабильной формой ГБ среди женщин. Ген Полимор физм AHR R554K AHRR P185A ARNT G189C CYP1A1 I462V CYP1A2 154 C<A CYP1B1 V432L NQO P187S Аллели 554R 554K 185P 185A 189G 189C 462I 462V 154C 154A 432V 432L 187P 187S 1 Частоты аллелей Больные ГБ c Больные ГБ инсультом без инсульта n=53 n=68 0,906 0,890 0,094 0,110 0,566 0,598 0,434 0,402 0,679 0,596 0,321 0,404 0,906 0,912 0,094 0,088 0,387 0,309 0,613 0,691 0,425 0,412 0,575 0,588 0,821 0,828 0,179 0,172 χ2, (p) 0,16 (0,69) 0,25 (0,61) 1,79 (0,18) 0,03 (0,87) 1,61 (0,2) 0,04 (0,84) 0,02 (0,88) OR (CI 95%) 0,84 (0,36-1,95) 1,14 (0,68-1,92) 0,7 (0,4-1,18) 1,08 (0,45-2,6) 0,71 (0,41-1,21) 0,95 (0,57-1,59) 1,05 (0,54-2,06) Вариантные аллели (мутации) представлены в нижних ячейках соответствующих ДНК-маркеров. 1 Приложение 11 Сравнительный анализ частот аллелей полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК у больных ГБ, осложненной инсультом, и лабильной формой ГБ без среди женщин. Ген Полимор Генотипы Частоты генотипов χ2, (p) OR (CI 95%) 162 физм 1 2 AHR R554K AHRR P185A ARNT G189C CYP1A1 I462V CYP1A2 154 C<A CYP1B1 V432L NQO P187S Больные ГБ c инсультом n=53 Больные ГБ без инсульта n=68 N % n % 3 554RR 554RK 554KK 185PP 185PA 185AA 189GG 189GC 189CC 4 45 6 2 5 84,9 11,3 3,8 6 55 11 2 7 80,9 16,2 2,9 8 0,34 (0,56) 0,58 (0,45) 0,06 (0,8) 9 0,75 (0,29-1,97) 0,66 (0,23-1,92) 1,29 (0,18-9,5) 19 22 12 25 22 6 35,8 41,5 22,6 47,2 41,5 11,3 25 29 12 21 39 8 37,9 43,9 18,2 30,9 57,4 11,8 0,05 (0,82) 0,07 (0,79) 0,36 (0,55) 3,35 (0,07) 2,99 (0,08) 0,01 (0,94) 1,09 (0,52-2,31) 0,91 (0,44-1,88) 1,32 (0,54-3,23 0,50 (0,24-1,05) 0,53 (0,25-1,09) 0,96 (0,31-2,95) 462II 44 8 1 9 23 21 9 27 17 37 13 3 83,0 15,1 1,9 17,0 43,4 39,6 17,0 50,9 32,1 69,8 24,5 5,7 56 12 0 8 26 34 15 26 27 45 21 1 82,4 17,6 0,0 11,8 38,2 50,0 22,1 38,2 39,7 67,2 31,3 1,5 0,01 (0,92) 0,14 (0,71) 1,29 (0,26) 0,67 (0,41) 0,33 (0,57) 1,29 (0,46) 0,48 (0,49) 1,95 (0,16) 0,75 (0,39) 0,10 (0,76) 0,68 (0,41) 1,60 (0,21) 0,95(0,37-2,47) 0,83 (0,31-2,2) 0,65 (0,23-1,82) 1,24 (0,6-2,57) 0,66 (0,32-1,36) 1,38 (0,55-3,47) 1,68 (0,81-3,47) 0,72 (0,34-1,52) 0,88 (0,4-1,92) 0,71 (0,32-1,6) 3,96 (0,4-22,8) 462IV 462VV -154C -154CA -154AA 432VV 432VL 432LL 187PP 187PS 187SS *- достоверно при р<0,05 Приложение 12 Сравнительный анализ частот аллелей полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК у больных ГБ, осложненной инсультом, и стабильной формой ГБ. Ген Полимор физм AHR R554K AHRR P185A ARNT CYP1A1 G189C I462V Аллели1 554R 554K 185P 185A 189G 189C 462I Частоты аллелей Больные ГБ c Больные ГБ инсультом без инсульта n=126 n=87 0,905 0,885 0,095 0,115 0,579 0,546 0,421 0,454 0,683 0,609 0,317 0,391 0,925 0,941 χ2, (p) 0,43 (0,51) 0,47 (0,49) 2,44 (0,12) 0,44 OR (CI 95%) 0,81 (0,43-1,52) 0,87 (0,59-1,29) 0,73 (0,48-1,09) 0,44 (0,51) 163 CYP1A2 154 C<A CYP1B1 V432L NQO P187S 0,075 0,333 0,667 0,417 0,583 0,776 0,224 462V 154C 154A 432V 432L 187P 187S 0,059 0,293 0,707 0,420 0,580 0,787 0,213 (0,51) 0,77 (0,38) 0 (0,95) 0,08 (0,78) 0,83 (0,55-1,26) 1,01 (0,68-1,5) 1,07 (0,67-1,71) Вариантные аллели (мутации) представлены в нижних ячейках соответствующих ДНК-маркеров. 1 Приложение 13 Сравнительный анализ частот генотипов полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК у больных ГБ, осложненной инсультом, и стабильной формой ГБ. Ген Частоты генотипов Больные ГБ c Больные ГБ Полимор инсультом без инсульта Генотипы физм n=126 n=87 1 2 AHR R554K AHRR P185A ARNT G189C CYP1A1 I462V CYP1A2 154 C<A CYP1B1 V432L NQO P187S χ2, (p) OR (CI 95%) n % n % 3 554RR 554RK 554KK 185PP 185PA 185AA 189GG 189GC 189CC 4 104 20 2 5 82,5 15,9 1,6 6 68 18 1 7 78,2 20,7 1,1 8 0,63 (0,43) 0,81 (0,37) 0,07 (0,79) 9 0,76 (0,38-1,5) 0,72 (0,36-1,46) 1,39 (0,12-15,54) 44 58 24 57 58 11 34,9 46,0 19,0 45,2 46,0 8,7 26 43 18 35 36 16 29,9 49,4 20,7 40,2 41,4 18,4 0,59 (0,44) 0,24 (0,63) 0,09 (0,77) 0,53 (0,47) 0,45 (0,5) 4,34 (0,04)* 0,79 (0,44-1,43) 0,87 (0,5-1,51) 0,9 (0,46-1,79) 0,81 (0,47-1,42) 1,21 (0,7-2,1) 0,42 (0,19-0,97) 462II 108 17 1 12 60 54 19 67 40 75 44 6 85,7 13,5 0,8 9,5 47,6 42,9 15,1 53,2 31,7 60,0 35,2 4,8 75 10 0 12 27 48 11 51 25 53 31 3 88,2 11,8 0,0 13,8 31,0 55,2 12,6 58,6 28,7 60,9 35,6 3,4 0,28 (0,6) 0,14 (0,71) 0,68 (0,41) 0,94 (0,33) 5,86 (0,02)* 3,13 (0,08) 0,25 (0,62) 0,62 (0,43) 0,22 (0,64) 0,02 (0,86) 0 (0,95) 0,23 (0,63) 1,25 (0,55-2,86) 1,17 (0,51-2,69) 1,52 (0,65-3,56) 2,02 (1,14-5,58) 0,61 (0,35-1,06) 0,82 (0,37-1,81) 0,8 (0,46-1,39) 1,15 (0,63-2,1) 1,04 (0,59-1,82) 0,98 (0,55-1,74) 1,41 (0,34-5,8) 462IV 462VV 154C 154CA 154AA 432VV 432VL 432LL 187PP 187PS 187SS *- достоверно при р<0,05 164 Приложение 14 Сравнительный анализ частот аллелей полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК у больных ГБ, осложненной инсультом, и стабильной формой ГБ среди мужчин. Полимор физм Ген AHR R554K AHRR P185A ARNT G189C CYP1A1 I462V CYP1A2 154 C<A CYP1B1 V432L NQO P187S Аллели1 554R 554K 185P 185A 189G 189C 462I 462V 154C 154A 432V 432L 187P 187S Частоты аллелей Больные ГБ c Больные ГБ инсультом без инсульта n=73 n=18 0,904 1,000 0,096 0,000 0,589 0,556 0,411 0,444 0,685 0,556 0,315 0,444 0,938 0,971 0,062 0,029 0,295 0,389 0,705 0,611 0,411 0,389 0,589 0,611 0,743 0,750 0,257 0,250 χ2, (p) 3,74 (0,05) 0,13 (0,72) 2,15 (0,14) 0,55 (0,46) 1,2 (0,27) 0,06 (0,81) 0,01 (0,93) OR (CI 95%) 0,81 (0,42-1,82) 0,58 (0,27-1,21) 2,17 (0,2717,72) 1,52 (0,71-3,26) 0,91 (0,43-1,92) 1,04 (0,45-2,41) Вариантные аллели (мутации) представлены в нижних ячейках соответствующих ДНК-маркеров. 1 Приложение 15 Сравнительный анализ частот генотипов полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК у больных ГБ, осложненной инсультом, и стабильной формой ГБ среди мужчин. Ген Частоты генотипов Больные ГБ c Больные ГБ Полимор инсультом без инсульта Генотипы физм n=73 n=18 1 2 AHR R554K AHRR P185A 3 554RR 554RK 554KK 185PP 185PA χ2, (p) OR (CI 95%) N % n % 4 59 14 0 5 80,8 19,2 0,0 6 18 0 0 7 100,0 0,0 0,0 8 4,08 (0,04) 4,08 (0,04) - 9 - 25 36 34,2 49,3 5 10 27,8 55,6 0,27 (0,6) 0,22 (0,64) 0,74 (0,24-2,31) 0,78 (0,28-2,2) 165 ARNT G189C CYP1A1 I462V CYP1A2 154 C<A CYP1B1 V432L NQO P187S 185AA 189GG 189GC 189CC 12 32 36 5 16,4 43,8 49,3 6,8 3 7 6 5 16,7 38,9 33,3 27,8 0 (0,98) 0,14 (0,7) 1,48 (0,22) 6,47 (0,01) 0,98 (0,25-3,93) 0,82 (0,28-2,34) 1,95 (0,66-5,74) 0,19 (0,05-0,76) 462II 64 9 0 3 37 33 10 40 23 38 31 3 87,7 12,3 0,0 4,1 50,7 45,2 13,7 54,8 31,5 52,8 43,1 4,2 16 1 0 4 6 8 3 8 7 10 7 1 94,1 5,9 0,0 22,2 33,3 44,4 16,7 44,4 38,9 55,6 38,9 5,6 0,58 (0,45) 0,58 (0,45) 6,67 (0,01) 1,74 (0,19) 0 (0,95) 0,1 (0,75) 0,62 (0,43) 0,36 (0,55) 0,04 (0,83) 0,1 (0,75) 0,07 (0,8) 2,25 (0,27-19,07) 2,25 (0,27-19,07) 0,15 (0,03-0,75) 2,06 (0,7-6,07) 1,03 (0,37-2,91) 1,26 (0,31-5,15) 1,52(0,54-4,28) 0,72 (0,25-2,1) 1,12 (0,4-3,16) 1,19 (0,41-3,42) 0,74 (0,07-7,56) 462IV 462VV 154CC 154CA 154AA 432VV 432VL 432LL 187PP 187PS 187SS *- достоверно при р<0,05 Приложение 16 Сравнительный анализ частот аллелей полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК у больных ГБ, осложненной инсультом, и стабильной формой ГБ среди женщин. Ген Полимор физм AHR R554K AHRR P185A ARNT G189C CYP1A1 I462V CYP1A2 154 C<A CYP1B1 V432L NQO P187S Аллели1 554R 554K 185P 185A 189G 189C 462I 462V 154C 154A 432V 432L 187P 187S Частоты аллелей Больные ГБ c Больные ГБ инсультом без инсульта n=73 n=69 0,906 0,855 0,094 0,145 0,566 0,543 0,434 0,457 0,679 0,623 0,321 0,377 0,906 0,934 0,094 0,066 0,387 0,268 0,613 0,732 0,425 0,428 0,575 0,572 0,821 0,797 0,179 0,203 χ2, (p) 1,42 (0,23) 0,12 (0,73) 0,83 (0,36) 0,65 (0,42) 3,88 (0,05) OR (CI 95%) 0,61 (0,27-1,38) 0,91 (0,55-1,52) 0,78 (0,46-1,33) 1,47 (0,57-3,76) 0,58 (0,34-1,0) 0 (0,96) 1,01 (0,61-1,69) 0,22 (0,64) 0,86 (0,45-1,64) Вариантные аллели (мутации) представлены в нижних ячейках соответствующих ДНК-маркеров. 1 166 Приложение 17 Сравнительный анализ частот аллелей полиморфных вариантов генов КАГР и ФБК у больных ГБ, осложненной инсультом, и стабильной формой ГБ среди женщин. Ген Частоты генотипов Больные ГБ c Больные ГБ Полимор инсультом без инсульта Генотипы физм n=73 n=69 1 2 AHR R554K AHRR P185A ARNT G189C CYP1A1 I462V CYP1A2 154 C<A CYP1B1 V432L NQO P187S χ2, (p) OR (CI 95%) N % n % 3 554RR 554RK 554KK 185PP 185PA 185AA 189GG 189GC 189CC 4 45 6 2 5 84,9 11,3 3,8 6 50 18 1 7 72,5 26,1 1,4 8 2,69 (0,1) 4,14 (0,04) 0,68 (0,41) 9 0,47 (0,19-1,17) 0,36 (0,13-0,99) 2,67 (0,24-18,2) 19 22 12 25 22 6 35,8 41,5 22,6 47,2 41,5 11,3 21 33 15 28 30 11 30,4 47,8 21,7 40,6 43,5 15,9 0,4 (0,53) 0,48 (0,49) 0,01 (0,91) 0,53 (0,47) 0,05 (0,83) 0,53 (0,47) 0,78 (0,37-1,67) 0,77 (0,38-1,59) 1,05 (0,45-2,49) 0,76 (0,37-1,58) 0,92 (0,45-1,9) 0,67 (0,23-1,96) 462II 44 8 1 9 23 21 9 27 17 9 27 17 83,0 15,1 1,9 17,0 43,4 39,6 17,0 50,9 32,1 17,0 50,9 32,1 59 9 0 8 21 40 8 43 18 8 43 18 86,8 13,2 0,0 11,6 30,4 58,0 11,6 62,3 26,1 11,6 62,3 26,1 0,33 (0,57) 0,09 (0,7) 1,29 (0,26) 0,73 (0,39) 2,18 (0,14) 4,04 (0,04) 0,73 (0,39) 1,59 (0,21) 0,53 (0,47) 0,73 (0,39) 1,59 (0,21) 0,53 (0,47) 1,34 (0,49-3,66) 1,17 (0,42-3,26) 0,64 (0,23-1,79) 1,75 (0,83-3,7) 2,1 (1,01-4,36) 0,64 (0,23-1,79) 0,63 (0,3-1,3) 1,34 (0,61-2,94) 0,64 (0,23-1,79) 0,63 (0,3-1,3) 1,34 (0,61-2,94) 462IV 462VV 154C 154CA 154AA 432VV 432VL 432LL 187PP 187PS 187SS *- достоверно при р<0,05
