ТКП/ПР_1 Производство лекарственных средств

ТЕХНИЧЕСКИЙ КОДЕКС
УСТАНОВИВШЕЙСЯ ПРАКТИКИ
ТКП/ПР_1
Производство лекарственных средств
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА НА ОСНОВЕ
ТЕХНОЛОГИИ РЕКОМБИНАНТНОЙ ДНК
Вытворчасць лекавых сродкаў
ЛЕКАВЫЯ СРОДКI НА ПАДСТАВЕ
ТЭХНАЛОГII РЭКАМБIНАНТНАЙ ДНК
Настоящий проект технического кодекса установившейся практики
не подлежит применению до его утверждения
Департамент фармацевтической
промышленности Министерства
здравоохранения Республики Беларусь
Минск
ТКП/ПР_1
УДК
КП 01
МКС 11.120.10
Ключевые слова: лекарственное
производство, контроль качества
средство,
технология,
рекомбинантная
ДНК,
Предисловие
Цели, основные принципы, положения по государственному регулированию и управлению
в области технического нормирования и стандартизации установлены Законом Республики
Беларусь «О техническом нормировании и стандартизации».
1 РАЗРАБОТАН Научно-производственным республиканским унитарным предприятием
«ЛОТИОС»
ВНЕСЕН
Департаментом
фармацевтической
здравоохранения Республики Беларусь
промышленности
Министерства
2 УТВЕРЖДЕН И ВВЕДЕН В ДЕЙСТВИЕ Департаментом фармацевтической
промышленности Министерства здравоохранения Республики Беларусь от «___»_________
201__ г. №______
3 Настоящий технический кодекс гармонизирован с руководящим документом «Production
and Quality Control of Medicinal Products derived by recombinant DNA Technology» («Производство и
контроль качества лекарственных средств, полученных на основе технологии рекомбинантной
ДНК»), соответствующего «Directive 75/318/EEC as amended» («Директиве 75/318/ЕЕС с
поправками») Eвропейского Союза.
4 ВВЕДЕН ВПЕРВЫЕ
Настоящий проект технического
применению до утверждения
Издан на русском языке
II
кодекса
установившейся
практики
не
подлежит
ТКП/ПР_1
Введение
В настоящем техническом кодексе установившейся практики приводятся требования к
производству и контролю качества лекарственных средств, полученных с применением технологии
рекомбинантной ДНК.
Требования технического кодекса следует выполнять совместно с требованиями ТКП ХХХХ
Производство лекарственных средств. Валидация методик измерений, ТКП ХХХХ
Производство лекарственных средств. Валидация процессов производства стерильных
лекарственных средств, ТКП ХХХХ Производство лекарственных средств. Валидация
процессов очистки, ТКП ХХХХ Производство лекарственных средств. Вирусная безопасность
лекарственных средств, полученных биотехнологическим способом с использованием клеток
человеческого и животного происхождения, ТКП ХХХХ Производство лекарственных средств.
Испытания стабильности.
III
ТКП/ПР_1
ТЕХНИЧЕСКИЙ КОДЕКС УСТАНОВИВШЕЙСЯ ПРАКТИКИ
Производство лекарственных средств
ЛЕКАРСТВЕННЫЕ СРЕДСТВА НА ОСНОВЕ ТЕХНОЛОГИИ РЕКОМБИНАНТНОЙ ДНК
Вытворчасць лекавых сродкау
ЛЕКАВЫЯ СРОДКI НА ПАДСТАВЕ ТЭХНАЛОГII РЭКАМБIНАНТНАЙ ДНК
Manufacture of medicinal products
Drugs based on recombinant DNA technology
Дата введения 201х-хх-хх
1 Область применения
Настоящий технический кодекс установившейся практики (далее – технический кодекс)
распространяется на все лекарственные средства, полученные с применением технологии
рекомбинантной ДНК.
Технический кодекс устанавливает требования к проведению работ по выбору целевого
гена и проведению генно-инженерных манипуляций с ним для создания эффективного штаммапродуцента, хранению главного и рабочего банков клеток, процессам периодического и
непрерывного культивирования, очистки и контроля качества процесса производства и конечного
продукта.
Настоящий технический кодекс применим к лекарственным средствам, производимым в
Республике Беларусь, а также к импортируемым лекарственным средствам.
Требования технического кодекса не распространяются на уже зарегистрированные
лекарственные средства.
Настоящий технический кодекс может быть использован в производстве ветеринарных
препаратов.
2 Нормативные ссылки
В настоящем техническом кодексе использованы ссылки на следующие технические
нормативные правовые акты в области технического нормирования и стандартизации (далее –
ТНПА):
ТКП 030-2013 (02040) Надлежащая производственная практика
ТКП ХХХХ-ХХХХ (02041) Производство лекарственных средств. Валидация методик
измерений
ТКП ХХХХ-ХХХХ (02041) Производство лекарственных средств. Валидация процессов
производства стерильных лекарственных средств
ТКП ХХХХ-ХХХХ (02041) Производство лекарственных средств. Валидация процессов
очистки
ТКП ХХХХ-ХХХХ (02041) Производство лекарственных средств. Вирусная безопасность
лекарственных средств, полученных биотехнологическим способом с использованием клеток
человеческого и животного происхождения
ТКП ХХХХ-ХХХХ (02041) Производство лекарственных средств. Испытания стабильности
Примечание – При пользовании настоящим техническим кодексом целесообразно проверить действие ТНПА
по каталогу, составленному на 1 января текущего года, и по соответствующим информационным указателям,
опубликованным в текущем году.
Если ссылочные ТНПА заменены (изменены), то при пользовании настоящим техническим кодексом следует
руководствоваться замененными (измененными) ТНПА. Если ссылочные ТНПА отменены без замены, то
положение, в котором дана ссылка на них, применяется в части, не затрагивающей эту ссылку.
3 Термины и определения
В настоящем техническом кодексе применяют следующие термины с соответствующими
определениями, установленные в [1], ТКП 030, ТКП ХХХХ Производство лекарственных
средств. Валидация методик испытания, а также следующие термины с соответствующими
определениями:
1
ТКП/ПР_1
3.1 амплификация (amplification): Увеличение числа копий фрагмента ДНК в составе
клонирующего вектора при его репликации в клетках хозяина.
3.2 ацетилирование (acetilation): Посттрансляционная модификация белков посредством
ковалентного присоединения к ним ацетильных групп, которая отражается на их функциональной
активности.
3.3 вектор (vector): Природная (плазмида, бактериофаг, вирус и др.) или
сконструированная искусственно рекомбинантная молекула ДНК, которая содержит селективный
маркер и способна автономно реплицироваться в клетке-реципиенте.
3.4 время удвоения (doubling time): Интервал времени, в течение которого число клеток,
растущих в культуре, увеличивается вдвое.
3.5 выход биомассы: Максимальная концентрация клеток или плотность биомассы при
культивировании.
3.6 гамма-карбоксилирование (gamma-carboxylation): посттрансляционная модификация
глутаминовой кислоты (введение в нее карбоксильной группы) в молекуле белка, которая
осуществляется с участием витамина К.
3.7 ген (gene): Единица генетического материала, наследственный фактор, несущий
информацию об определенном признаке (функции или нескольких функциях) и представляющий
собой участок молекулы нуклеиновой кислоты, который кодирует функционально активный
продукт (полипептид или РНК).
3.8 гидроксилирование (hydroxylation): посттрансляционная модификация пролина и
лизина (введение в нее гидроксильной группы) в молекуле белка.
3.9 гликозилирование (glycosylation): Модификация белка, липида или ДНК,
выражающаяся в ковалентном присоединении к молекуле углеводного остатка.
3.10 N-гликозилирование (N-glycosylation): Посттрансляционная модификация белка,
выражающаяся в ковалентном присоединении к молекуле углеводного остатка по NH2-группе
аспарагина, расположенного через один аминокислотный остаток от триптофана.
3.11 О-гликозилирование (N-glycosylation): Посттрансляционная модификация белка,
выражающаяся в ковалентном присоединении к молекуле углеводного остатка преимущественно
по ОН- группе серина и треонина.
3.12 гликопептид (glycopeptide): природное соединение, состоящие из углевода,
связанного ковалентной связью с олигопептидом.
3.13 дезоксирибонуклеиновая кислота; ДНК: Одна из двух форм нуклеиновой кислоты,
представляющая собой полимерную молекулу, образованную чередованием четырех видов
нуклеотидов, каждый из которых содержит дезоксирибозу, одно из четырех азотистых оснований
— аденин, гуанин, цитозин или тимин и фосфатную группу и связан со следующим нуклеотидом в
полинуклеотидной цепи фосфодиэфирной связью. В клетках ДНК представлена в виде двух
комплементарных нуклеотидных цепей, закрученных в спираль (двойная спираль).
3.14 комплементарная ДНК, кДНК (complementary DNA, cDNA): ДНК, синтезированная на
мРНК с помощью обратной транскрипции.
3.15 рекомбинантная ДНК; рДНК: Молекула ДНК, состоящая из двух или более
фрагментов ДНК разного происхождения, созданная с помощью методов генной инженерии.
3.16 рибонуклеиновая кислота, РНК (ribonucleic acid, RNA): один из типов нуклеиновых
кислот, представляющий собой полимерную молекулу, образованную чередованием четырех
видов нуклеотидов, каждый из которых содержит рибозу, одно из 4 азотистых оснований —
аденин (А), гуанин (Г), цитозин (Ц) или урацил (У) и фосфатную группу. В полинуклеотидной цепи
нуклеотиды связаны между собой фосфодиэфирной связью.
3.17 матричная РНК, мРНК (messenger RNA, mRNA): РНК, выполняющая роль
переносчика информации от ДНК к белку. Последовательность нуклеотидов в молекуле мРНК
соответствует кодирующей нити ДНК, но вместо тимина содержится урацил.
3.18 клонирование: Один из методов выделения и идентификации фрагментов ДНК, а
также получения их в неограниченном количестве.
3.19 конформация (conformation): одна из множества возможных пространственных форм
молекулы, возникающая при изменении относительной ориентации отдельных ее частей в
результате вращения атомов или групп атомов вокруг простых связей, изгиба связей и т. п.
3.20 культивирование (cultivation): Выращивание микроорганизмов, животных или
растительных клеток, тканей или органов в искусственных условиях на искусственных средах.
2
ТКП/ПР_1
3.21 периодическое культивирование: Выращивание микроорганизмов на несменяемой
среде от посева до окончания роста клеток вследствие исчерпания питательных субстратов или
накопления вредных веществ.
3.22 непрерывное культивирование: Выращивание микроорганизмов с постоянным
обновлением среды.
3.23 лигирование (ligation): Процесс образования фосфодиэфирной связи между двумя
основаниями одной цепи ДНК, разделенными разрывом, с помощью фермента ДНК-лигазы.
3.24 лидерная последовательность пептида, лидерный пептид (leader sequence
peptide): N-концевая последовательность некоторых мембранных и секреторных белков,
состоящая обычно примерно из 15—30 аминокислот, которая отщепляется в процессе
посттрансляционного изменения предшественника пептида, в результате чего он превращается в
зрелый секретируемый пептид.
3.25 маркеры (генетические): Любые наследуемые фенотипические признаки,
различающиеся у отдельных особей.
3.26 мутагенез: Процесс возникновения в организме наследственных изменений,
появляющихся естественно (спонтанно) или вызываемых (индуцируемых) различными
физическими или химическими факторами — мутагенами.
3.27 посттрансляционная модификация (post-translational modification): ферментативные
изменения химической структуры белковых молекул после завершения их синтеза на рибосомах,
путем соединения с самыми разнообразными веществами или в результате химических
превращений аминокислот.
3.28 прокариотический организм (prokaryote, prokaryotic organism): Организм, клетки
которого не имеют ограниченного мембраной ядра; генетический материал закреплен на
клеточной мембране и соответствует примитивной хромосоме.
3.29 протеолитический процессинг: совокупность процессов, ведущих к превращению
первичных продуктов трансляции в зрелые функционирующие молекулы белков, путем
отщепления аминокислотных последовательностей.
3.30 рестрикционный анализ (restriction analysis): Установление мест расщепления одной
или несколькими рестриктазами конкретной нуклеотидной последовательности ДНК.
3.31 Саузерн-блоттинг (Southern blotting): Метод идентификации участков ДНК,
содержащих комплементарные ДНК-зонду нуклеотидные последовательности, среди смеси
рестрикционных фрагментов ДНК, электрофоретически разделенных по размерам в геле и
фиксированных на твердом носителе (обычно нитроцеллюлозные или нейлоновые фильтры).
3.32 секвенирование: Последний этап молекулярного анализа предварительно
отобранного, клонированного и протестированного более простыми методами фрагмента ДНК.
Секвенирование представляет собой определение нуклеотидной последовательности фрагмента
ДНК путем получения серии комплементарных молекул ДНК, различающихся по длине на одно
основание. Таким образом, по размеру синтезированных фрагментов может быть определена
локализация нуклеотидов и порядок соответствующих им нуклеотидов в исходной молекуле ДНК.
3.33 селекция: Отбор, производимый с применением научных методов, который
используется для создания и улучшения сортов и гибридов сельскохозяйственных растений,
пород животных и штаммов микроорганизмов.
3.34 формилметионин, N-формилметионин (formyl methionine, N-formyl methionine) :
Аминокислота, модифицированный метионин, которая является инициаторной аминокислотой
всех полипептидных цепей прокариот (кроме архебактерий) и по окончанию синтеза отщепляется
от полипептида.
3.35 экспрессионный вектор, транскрипционный вектор (expression vector, transcription
vector): Рекомбинантный вектор, содержащий все регуляторные элементы, обеспечивающие
экспрессию (транскрипцию) встроенных в него чужеродных фрагментов ДНК, Эксрессионный
вектов может также использоваться для клонирования ДНК.
3.36 экспрессия гена, выражение гена (gene expression): Проявление генетической
информации, записанной в гене, в форме синтеза РНК или мРНК и белка с последующим
действием (фенотипическим проявлением) образовавшегося продукта на клетку.
3.37 экспрессионная система (expression system): Комбинация клеток хозяина и
рекомбинантного экспрессионного вектора, обеспечивающая функционирование клонированного
гена, т. е. образование белкового продукта в хозяйских клетках.
3
ТКП/ПР_1
3.38 эукариотический организм (eukaryote, eukaryotic organism): Организм, у которого
генетический материал (ДНК) сосредоточен в хромосомах оформленного клеточного ядра,
содержащегося в цитоплазме.
4 Обозначения и сокращения
В настоящем техническом кодексе применяют следующие обозначения и сокращения:
ВЭЖХ: Высокоэффективная жидкостная хроматография
ГБК: Главный банк клеток
ДНК: Дезоксирибонуклеиновая кислота
кДНК: Комплементарная ДНК
рДНК: Рекомбинантная ДНК
ЛС: Лекарственное средство
РНК: Рибонуклеиновая кислота
мРНК: Матричная рибонуклеиновая кислота
РБК: Рабочий банк клеток
GMP: Good manufacturing practice (надлежащая производственная практика)
5 Общие положения
5.1 Получение лекарственных средств на основе рекомбинантной ДНК осуществляют
путем включения природных, преднамеренно модифицированных природных или новых
синтезированных последовательностей нуклеотидов в вектор, который вводится в подходящий
организм хозяина способом, который обеспечивает экспрессию желаемого продукта гена или
генов.
5.2 Лекарственные средства на основе технологии рДНК могут быть получены с
использованием прокариотических организмов (например, бактерий) или эукариотических
организмов (например, клеток дрожжей и млекопитающих).
5.3 Для таких производств, наряду с соответствующими испытаниями качества конечной
продукции, важное значение должно уделяться технологическому контролю в процессе получения
таких лекарственных средств.
5.4 Использование мутагенеза и селекции, либо внедрения чужеродных генов в клеткухозяин, могут вызывать увеличение генетической нестабильности биологических объектов.
Целью молекулярно-генетических исследований при создании таких объектов является
установление факта, что в ходе их проведения была синтезирована и удачно вставлена в клеткухозяин правильная нуклеотидная последовательность и что структура и количество копий
клонированной последовательности нуклеотидов сохраняются в течение всего периода
получения лекарственного средства. Такие исследования, вместе с испытаниями, проведенными
на белковом уровне, могут предоставлять ценную информацию, подтверждающую качество и
стабильность лекарственного средства.
5.5 Экспрессионные векторы, полученные на основе технологии рекомбинантной ДНК и
находящиеся в чужеродном организме, могут отличаться структурно, биологически или
иммунологически от их природных аналогов. Такие изменения могут возникать после процесса
трансляции или во время получения или очистки продуктов и могут приводить к нежелательным
клиническим эффектам. Следовательно, необходимо проверить и постоянно контролировать их
наличие.
5.6 В связи с тем, что различные производственные операции могут в значительной
степени влиять на природу и количество контаминаций лекарственного средства, процедура
очистки должна удалять такого рода контаминации.
5.7 Случайные колебания условий культивирования могут привести к изменениям,
которые повлекут за собой экспрессию других генов, либо вызовут изменения в лекарственном
средстве. Такие колебания могут приводить к различным выходам продукта, либо к различиям в
самом продукте (например, к различной степени гликозилирования), а также повлиять на
количество и качество загрязняющих веществ. Таким образом, контролю должны подвергаться не
только конечный продукт, но и условия его получения во время производственного цикла.
5.8 Масштабирование лабораторного процесса получения лекарственного средства на
стадии культивирования и (или) очистки может оказывать значительное влияния на его качество,
включая изменения конформационной структуры, выхода биомассы и (или) качественных и
количественных отличий. Следовательно, необходим достаточный контроль процесса
4
ТКП/ПР_1
производства и
качества каждой партии лекарственного средства для установления его
идентичности от серии к серии.
5.9 К производству и обеспечению качества лекарственных средств, полученных на основе
технологии рекомбинантной ДНК применимы общие требования, приведенные в ТКП 030.
6 Генно-инженерные работы
6.1 Гены, векторы и клетки-хозяева
6.1.1 При клонировании какого-либо гена необходимо давать ему полное подробное
описание, включающее детали его происхождения, идентификации и выделения, а также детали
происхождения и структуры экспрессионного вектора.
6.1.2 Необходимо иметь в наличии описание хозяйского штамма или клеточной линии,
включающее историю хозяйского штамма или клеточной линии, идентификационные
характеристики и оценку потенциальной зараженности вирусами. Особое внимание должно быть
уделено возможности перекрестной контаминации другими клетками или вирусами.
6.2 Экспрессионная конструкция
6.2.1 Описание экспрессионной конструкции должно включать:
а) полное описание нуклеотидной последовательности клонируемого гена, фланкирующих
его и регуляторных последовательностей, для того, чтобы удостовериться, что клонированный
ген идентичный желаемому;
б) детально все шаги, предшествующие экспрессии клонированной последовательности;
в) детальные карты и полное определение последовательности нуклеотидов всех
функционально-значимых областей вектора (с пометкой, какие области были секвенированы, а
какие были получены при анализе литературы).
6.2.2 Должны быть подтверждены секвенированием все экспрессионные конструкции,
полученные лигированием и несущие клонированный ген,
6.2.3 Должны быть точно идентифицированы все известные экспрессионные
последовательности.
6.3 Состояние рДНК внутри клетки-хозяина
6.3.1 Должны быть описаны в полном объеме методы внедрения вектора в клетку-хозяин и
состояние рДНК внутри хозяина (интегрированное или внехромосомное, число копий и т.п.).
6.3.2 Для внехромосомных экспрессионных систем необходимо определить процент клеток
хозяина, сохранивших вектор.
6.3.3 Для рекомбинантных продуктов
должна быть определена кодирующей
последовательность на стадии банка клеток.
6.3.4 В системах, где имеет место множественная интеграция копий чужеродного гена в
геном хозяина, которая может быть или может не быть результатом амплификации, должны быть
проведены дополнительные детальные испытания, включая рестрикционный анализ, Саузернблоттинг, секвенирование мРНК и кДНК с целью установления количества и места внедрения
чужеродных генов.
6.4 Экспрессия
Производитель должен иметь детальное описание стратегии, по которой клонированные
гены были экспрессированы и контролируются во время производства.
6.5 Стабильность экспрессионной системы
6.5.1 Должна быть исследована стабильность генетических и фенотипических
характеристик экспрессионной системы до и после периода времени удвоения или времени
генерации популяции клеток, используемого в производстве.
Экспрессионная конструкция для каждого главного банка клеток должна быть исследована
таким образом, по крайней мере, один раз.
6.5.2 Во время испытаний стабильности экспрессионной системы должны быть
установлены следующие параметры:
а) отношение количества копий гена к продуктивности культуры;
б) удаления или вставки фрагментов ДНК, произошедшие в любой части экспрессионного
вектора;
5
ТКП/ПР_1
в) продуцируемый белок.
6.5.3 Для этих целей должны быть выбраны методики измерений, позволяющие
установить, что количество отклонений ниже допустимого предела, устанавливаемого для
каждого случая отдельно, в зависимости от природы и целей использования продукта.
6.5.4 Производителем могут быть проведены испытания на уровне белка и (или) ДНК.
6.5.5 Все методики измерений должны быть валидированы с установлением предела
определения в соответствии с ТКП ХХХХ Производство лекарственных средств. Валидация
методик измерений.
7 Производство
7.1 Контроль банков клеток
7.1.1 До начала работ по производству необходимо подготовить, промаркировать и
обеспечить соответствующие условия хранения для главного банка клеток и рабочего банка
клеток:
а) ГБК – гомогенная суспензия оригинальных клеток, уже трансформированных
экспрессионным вектором, содержащим желаемый ген, помещенная в индивидуальные
контейнеры или емкости для хранения (например, в холодильнике с жидким азотом). В некоторых
случаях необходимо поддерживать раздельные ГБК для экспрессионного вектора и для клетокхозяев;
б) РБК – гомогенная суспензия клеток, полученных из ГКБ при помощи ограниченного
числа пассажей, помещенная в индивидуальные контейнеры или емкости для хранения
(например, в холодильнике с жидким азотом).
7.1.2 Во всех клеточных банках условия хранения контейнеров или емкостей с клетками и
работа с ними идентичны. Если контейнер или емкость удаляется из места хранения, обратно его
возвращать нельзя.
7.1.3 Важно, чтобы производство базировалось на хорошо определяемых ГКБ и РКБ.
Происхождение, признаки, способы хранения банков клеток должны быть детально описаны для
всех банков. Новые рабочие банки клеток должны быть полностью охарактеризованы.
7.1.4 Во время поддержания клеточной линии не допускается выращивание клеточных
линий при помощи того же оборудования либо тем же персоналом.
7.1.5 Критическим требованием к контролю качества является полная характеристика
клеток банков. При использовании в производстве клеток эукариотических организмов для их
идентификации должны использоваться генетические, фенотипические, иммунологические
маркеры, В случае использования микробиологических культур должны применяться
фенотипические признаки, составляющие основу для их идентификации.
7.1.6 Банки клеток должны быть проверены на наличие различных заражающих агентов
(вирусов, бактерий, грибов, микоплазм). Особенное внимание должно быть уделено вирусам,
которые являются обычными патогенами для тех видов животных, от клеток которых была
получена клеточная линия. Отдельные клеточные линии содержат эндогенные вирусы (например,
ретровирусы), которые, возможно, будет нелегко удалить. Должна также учитываться
возможность мутаций эндогенных вирусов во время длительного культивирования. Более того,
методы очистки должны быть в состоянии удалить или инактивировать любые вирусы, которые
присутствуют в клеточных линиях как эндогенные агенты.
7.1.7 Банки клеток должны быть периодически охарактеризованы на предмет
жизнеспособности, генетической и фенотипической стабильности и на любые другие значимые
параметры.
7.2 Культивирование клеток
7.2.1 Необходимо разработать и документально оформить информацию об условиях
культивирования клеток и технологического контроля на этой стадии производства с детальным
описанием методик испытаний и допустимых пределах изменения параметров.
7.2.2 Аналитические методики испытаний должны быть валидированы в соответствие с
ТКП ХХХХ Производство лекарственных средств. Валидация методик испытаний.
7.2.3 Культивирование клеток может осуществляться в ходе периодического или
непрерывного процесса.
7.2.4 При осуществлении периодического культивирования:
6
ТКП/ПР_1
- до и после его окончания на основании информации о стабильности экспрессионной
системы должно быть определено максимально возможное число генераций (делений) клеток или
время удвоения количества клеток;
- должны быть получены данные о постоянстве роста культуры и получении урожая
биомассы в установленных пределах;
- необходимо проводить соответствующий анализ характеристик экспрессионной системы
после окончания каждого цикла;
- должна быть собрана информация, подтверждающая, что численное значение выхода
биомассы не отклоняется от допустимых пределов и качество промежуточной продукции
удовлетворяет критериям приемлемости.
7.2.5 При осуществлении непрерывного культивирования:
- необходимо определить его продолжительность с учетом информации о стабильности
экспрессионной системы и пределах устойчивости продукта.
- должен проводиться постоянный контроль процесса в течение всего периода
выращивания клеток;
- необходимая частота и тип этого мониторинга зависит от нескольких факторов, включая
свойства экспрессионной системы, промежуточной продукции, а также продолжительности
выращивания клеток;
- периоды времени отбора образцов выращиваемых клеток должны быть тесно связаны с
графиком контроля;
- должна быть собрана информация, подтверждающая, что численное значение выхода
биомассы не отклоняется от допустимых пределов и качество промежуточной продукции
удовлетворяет критериям приемлемости.
7.2.3 Должны быть определены критерии возврата собранной промежуточной продукции,
обратно в биореактор или емкость для культивирования, а также критерии преждевременного
прекращения процесса культивирования.
7.2.4 Наличие, природа и степень микробной контаминации в биореакторе или емкости для
культивирование, должны контролироваться в течение и в конце каждого цикла выращивания
клеток.
7.2.5 Должна быть получена информация, подтверждающая адекватную чувствительность
методик определения контаминации, а также определён допустимый предел контаминации.
7.2.6 В идеале, в одном производственном помещении не должна культивироваться более
чем одна линия клеток. Если другие клеточные линии культивируются параллельно, необходимо
исключить возможную перекрестную контаминацию.
7.2.7 Должны быть получены валидированные данные, удостоверяющие что между
параллельно культивируемыми линиями клеток не произошла перекрестная контаминация.
7.2.8 В результате процесса культивирования клеток получают серию промежуточной
продукции, которая должна характеризоваться однородностью определяемых свойств.
7.3 Очистка промежуточной продукции
7.3.1 Способы очистки промежуточной продукции, полученной в результате
культивирования клеток, а также методики контроля этого процесса, включая определение
критериев приемлемости, должны быть детально описаны, испытаны и валидированы.
7.3.2 Применение всех методик не должно загрязнять конечную продукцию или влиять на
ее качество.
Пример – В процессе применения аффинной хроматографии с использованием антител должны
быть проведены все необходимые испытания и исследования для доказательства того, что ни антитела,
ни любые другие используемые реактивы никоим образом не влияют на чистоту и качество конечной
продукции.
7.3.3 Необходимо уделить внимание рекомендациям руководств [3] и [4].
7.3.4 Должны быть тщательно разработаны, валидированы и утверждены критерии для
повторного использования любой промежуточной продукции и нерасфасованной продукции
7.4 Валидация процесса очистки
7.4.1 При валидации этого процесса следует руководствоваться ТКП ХХХХ Производство
лекарственных средств. Валидация процессов очистки.
7
ТКП/ПР_1
7.4.2 Должна быть тщательно оценена способность способа очистки удалять
нежелательные белки клеток-хозяев, нуклеиновые кислоты, углеводы, вирусы и другие примеси,
включая связанные с продуктом белки,
7.4.3 Необходимо провести испытания с тщательно подобранной группой вирусов, которые
близки по физико-химическим свойствам, существенным для способа очистки, к тем, что обычно
способны загрязнять продукцию согласно [4]. Для этого, тщательно отобранные вирусы
смешивают с промежуточной продукцией, проводят процедуру ее очистки и регистрируют степень
очистки ее от вирусов. При выполнении этих испытаний необходимо принимать во внимание
требования ТКП ХХХХ Производство лекарственных средств. Вирусная безопасность
лекарственных средств, полученных биотехнологическим способом с использованием клеток
человеческого и животного происхождения.
7.4.4 Способность процесса очистки удалять другие специфические контаминирующие
агенты, такие как белки клеток-хозяев, другие потенциальные примеси, поступившие в процессе
производства, и ДНК, так же должна быть установлена, с использованием, при необходимости,
этих примесей в концентрациях, превышающих те, которые ожидаются в случае нормального
производства.
7.4.5 Должен быть установлен общий показатель уменьшения содержания примесей в
результате процесса очистки и показатели уменьшения содержания примесей на каждое его
стадии. Производитель должен логически обосновать выбор пределов содержания примесей в
полученной после очистки промежуточной продукции. Пределы должны быть обоснованными,
достижимыми и поддающимися проверке.
7.4.6 Необходимо провести валидацию оборудование, используемого для очистки и
рабочие параметры, применяемые при его использовании.
Пример – при использовании хроматографии валидации подлежат: максимальная загрузочная
ёмкость хроматографических колонок, степень регенерации колонок, объем и длина используемых колонок.
устойчивость хроматографических колонок к вымыванию лигандов (окраска, аффинные лиганды и др.) и
(или) хроматографических материалов в течение ожидаемого времени использования колонки и т.п.
8 Фармацевтическая субстанция
8.1 Характеристика фармацевтической субстанции
8.1.1 Необходима точная характеристика фармацевтической субстанции химическими и
биологическими методами. Особое внимание должно быть уделено использованию широкого
спектра аналитических методик определения различных физико-химические свойств молекулы,
например, размера, заряда, изоэлектрической точки, гидрофобности и т.п. Определение перечня
возможных аналитических методик не входит в содержание этого технического кодекса. Далее
представлены только примеры таких анализов.
8.1.2 Установление структуры, включая сравнение со стандартным образцом или с
природным продуктом
8.1.2.1 Производителю необходимо получить полную последовательность аминокислот
для характеристики полипептида, полученного после экспрессии переданной рДНК. Необходимая
степень достоверности такого определения зависит от размеров и сложности молекулы
полипептида, с учетом информации, полученной в результате других испытаний.
8.1.2.2 В большинстве случаев последовательность аминокислот в полипептиде может
быть определена после его выделения и очистки с применением ВЭЖХ и последующего анализа
аминокислот, полученных при ферментативном гидролизе очищенного белка.
8.1.2.3 Для характеристики первичной структуры полученного белка желательно
применение анализа с использованием масс-спектрометрии.
8.1.2.4 Необходимо определить возможное присутствие N-концевого метионина и Nформилметионина, сигнальной или лидерной последовательности полипептида, либо других N–
или С–концевых модификаций полученного полипептида в ходе протеолитического процессинга.
8.1.2.5 По возможности следует оценить, кроме протеолитического процессинга,
осуществление таких типов посттрансляционной модификации как N– и O–гликозилирование,
ацетилирование, гидроксилирование и гамма-карбоксилирование, а также дезаминирования и
окисления пептидных молекул, синтезированных в результате экспресии рДНК.
8.1.2.6 Некоторые продукты экспрессии рДНК представляют собой гликопротеиды.
Известно множество типов боковых цепей – олигосахаридных структур, которые могут входить в
8
ТКП/ПР_1
состав таких молекул и обуславливают значительную гетерогенность как природных аналогов, так
и пептидов, полученных посредством технологии рДНК. Характеристики такой гетерогенности
зависят от многих факторов, и тип гликозилирования может играть важную роль в определении
активности, особенно в клетках.
Количество анализов, необходимых для анализа гликопептида, зависит от роли, которую
играет его углеводородная часть. С этой целью могут быть использованы различные методики
для анализа его углеводородной части: капиллярный электрофорез, анионная обменная
хроматография для анализа моносахаридов и определения олигосахаридов, аффинная
хроматография лектинов, масс-спектрометрия и т.п.
8.1.3 Установление конформационной структуры макромолекул
8.1.3.1 Производителю необходимо разработать подходящие методики установления
конформационной структуры и пространственной организации фармацевтической субстанции.
При этом могут быть использованы: электрофорез в полиакриламидном геле, изоэлектрическое
фокусирование, эксклюзивная. обратно-фазная ионообменная, гидрофобная и аффинная
хроматография, картирование белков с последующим определением последовательности
аминокислот, поляризация, ультрафиолетовая спектроскопия, круговой дихроизм и массспектрометрия.
8.1.3.2 Важную информацию могут предоставить также дополнительные испытания с
использованием ЯМР спектрального анализа, рентгеновской кристаллографии или
иммунохимических методик.
8.1.4 Биологические, иммунологические характеристики, выражение активности
8.1.4.1 Для характеристики фармацевтической субстанции производитель должен
использовать необходимое количество биологических и иммунологических методик испытаний.
8.1.4.2 Должна быть определена специфическая активность высокоочищенной
фармацевтической субстанции и выражена в единицах активности на единицу массы.
8.1.4.3 Когда это возможно, биологическую активность фармацевтической субстанции и ее
физические характеристики, включая последовательность аминокислот, необходимо сравнить с
таковыми у высокоочищенных природных аналогов.
8.2 Чистота
8.2.1 Производителю необходимо собирать и иметь в наличии полную информацию обо
всех примесях, которые могут находиться в фармацевтической субстанции.
8.2.2 Должен быть установлен и утвержден предел контаминации фармацевтической
субстанции, который принимается за допустимый.
8.2.3 Должны быть установлены критерии приемлемости качества и выбраковки серии
фармацевтической субстанции.
8.2.4 Для оценки чистоты фармацевтической субстанции важно использовать как можно
большее число методик, включая физико-химические и иммунологические методики.
8.2.5 Нежелательные примеси, попавшие в фармацевтическую субстанцию из клетокхозяев, так же как и иные вещества, попавшие в нее во время ферментации либо очистки, а также
вирусные включения и нуклеиновые кислоты должны быть тщательно проанализированы на их
безопасность, а также на степень влияния на качество ЛС.
9
Контроль
стабильности
фармацевтической субстанции
состава
и
текущий
контроль
серий
9.1 Производителем должен быть выполнен подробный анализ начальных серий
лекарственного средства на его идентичность, чистоту и активность. После этого можно
проводить более ограниченное количество испытаний, как указано в последующих разделах При
этом необходимо чётко понимать различия между анализами, которые проводятся во время
разработки технологии для полной характеристики активной субстанции и обычными текущими
анализами, которым подвергается каждая серия или партия.
9
ТКП/ПР_1
9.2 Контроль постоянства состава
Приемлемое количество последовательных серий нерасфасованной продукции должно
быть можно полно охарактеризованы на стабильность состава с учетом требований ТКП ХХХХ
Производство лекарственных средств. Испытания стабильности.
В случае, когда для ее получения применяют ряд культивирований клеток, должны быть
изучены серии, полученные от разных циклов культивирования. Испытания должны включать
биологические, химические и иммунологические методики для характеристики и анализа
фармацевтической субстанции, включая методы, определяющие постоянство гликозилирования
для гликопептидов, а также и методики определения и идентификации примесей. Любые
различия между партиями должны регистрироваться.
9.3 Текущий контроль серий
9.3.1 Идентичность
Выбранные методики для характеристики очищенной активной субстанции (см. 8.1)
должны обеспечить подтверждение того, что лекарственные средства, полученные в каждой
серии, идентичны по составу. Выбранные методики должны обеспечивать определение физикохимических и иммунологических характеристик лекарственного средства и его предварительную
биологическую активность. В объем испытаний по идентификации состава, должны быть
включены методика определения количества аминокислот на N– и С–концах полипептида или
другие методики, такие как картирование пептида,
9.3.2 Чистота
9.3.2.1 Ожидаемая и полученная степень чистоты лекарственного средства зависит от
нескольких факторов: его природы и назначения, технологий производства и очистки, а также
степени постоянства производственного процесса. Обычно можно достичь очень высокой степени
очистки конечной продукции, если использовать современные методы и способы производства.
9.3.2.2 Производителем должна быть установлена чистота каждой серии лекарственного
средства, которая должна удовлетворять соответствующим критериям приемлемости. Если линия
клеток продуцентов получена из организмов млекопитающих, то необходимо проводить анализы
на ДНК клеток-хозяев и (или) ДНК вектора применительно к каждой партии. При этом должен
быть установлен верхний предел содержания таких ДНК в лекарственном средстве.
Аналогичные анализы и установление верхнего предела содержания ДНК рекомендуется
проводить и для лекарственные, полученных с использованием клеток других эукариотических
организмов.
9.3.2.3 Для лекарственных средств полученных с использованием клеток прокариотических
организмов необходимо провести тесты на влияние ДНК продуцента либо ДНК вектора на
качество конечной продукции. Так же необходимо провести анализ с подходящей
чувствительностью и на присутствие клеточных белков, оставшихся в лекарственном средстве
для установления верхнего предела контаминации остаточными белками. В некоторых случаях
потенциальные примеси, такие как ДНК, могут быть обнаружены в промежуточной продукции в
ходе производства на стадии процесса очистки.
9.3.3 Установление активности
9.3.3.1 Производителем должна быть установлена активность каждой серии конечной
продукции (например, в единицах активности на миллилитр). Где это возможно, желательно
использовать национальные или международные стандартные образцы, откалиброванные в
единицах активности (см. 10).
9.3.3.2 Дополнительно, должна быть получена информация об уровне специфической
активности конечной продукции (отношение единиц биологической активности к единице массы
конечной продукции). Для этого определения необходимо использовать стандарты повышенной
чистоты (см. 10).
9.3.3.3 Рекомендуется определить и документально оформить корреляцию между
измеренной активностью при помощи биологических тестов и результатами физико-химических
испытаний. Если возможно, серии конечной продукции должны быть откалиброваны с
использованием точных физико-химических методик и биологических испытаний, для того чтобы
10
ТКП/ПР_1
подтвердить, что активность соответствуем критериям приемлемости и конечная продукция
биологически активна.
10 Спецификация и стандартные образцы
10.1 Испытания, проведенные согласно разделу 8, оформляются в виде спецификации на
лекарственное средство и затем утверждаются на основе информации, полученной при
испытаниях качественных серий, как описано в разделе 9.
10.2 Подходящая серия лекарственного средства, предпочтительно одна из клинически
оцененных, должна быть полностью охарактеризована на предмет химического состава, чистоты,
активности и биологической активности, где это возможно. с полным определением
последовательности аминокислот. и сохранена для использования в качестве химического и
биологического стандартного образца.
10.3 Производителем должны быть установлены критерии сроков годности и возможных
повторных тестов и квалификаций стандартных образцов.
11 Конечная продукция и фармацевтическая разработка
Производителем должна быть детально описано и утверждено регистрационное досье на
лекарственное средство, в том числе в части присутствия и количества стабилизатора в нем,
такого как альбумин и (или) детергенты.
Продукт в конечной упаковке должен соответствовать требованиям утвержденных в
установленном порядке ТНПА и Белорусской фармакопеи.
В случаях несоответствия, когда этого невозможно избежать. отклонения должны быть
утверждены производителем в установленном порядке.
11
ТКП/ПР_1
Библиография
[1]
EU legislation (ЕudraLex),
The rules governing medicinal products in
the European Union,
Volum 3 Scientific guidelines for medicinal
products for human use
3АВ1А
(Законодательство Европейского Союза,
Правила регулирования обращения
лекарственных средств для
использования человеком,
Том 3 Научные руководства по
лекарственным средствам для
использования человеком,
3АВ1А
[2]
Государственная фармакопея Республики Беларусь, Том 1
Общие методы контроля качества лекарственных средств.
Минск: «МГПТК полиграфии», 2006
[3]
СHMP/BWP/157653/07
Committee for Medicinal Products for
Human Use, London, December 2008
(Комитет по лекарственным средствам
для человека, Лондон, декабрь 2008)
Production and quality control of monoclonal
antibodies and related substances
(Производство и контроль качества
моноклональных антител и родственных
субстанций)
Неофициальный перевод УП «ЛОТИОС»
Перевод с английского языка (en)
[4]
CPMP/BWP/268/95
3AB8A
Committee for Рroprietary Medicinal
Products, London, February 1996
(Комитет по патентованным
лекарственным средствам для человека,
Лондон, февраль 1996)
Note for guidance on virus validation studies: The
design, contribution and interpretation of studies
validating the inactivation and removal of viruses.
(Примечание к руководству по валидационным
исследованиям вирусов: Разработка,
проведение и интерпретация исследований по
валидации инактивации и удаления вирусов)
Неофициальный перевод УП «ЛОТИОС»
Перевод с английского языка (en)
12
Production and quality control of medicinal
products derived by recombinant DNA technology
(Производство и контроль качества
лекарственных средств, полученных с
использованием технологии рекомбинантной
ДНК)
Неофициальный перевод УП «ЛОТИОС»
Перевод с английского языка (en)
ТКП/ПР_1
Директор УП «ЛОТИОС»
Гапанович В.Н.
Научный руководитель разработки,
заведующий отделом промышленной биотехнологии
УП «ЛОТИОС»
Научный руководитель разработки,
зам. директора по научной работе
УП «ЛОТИОС»
Заместитель заведующего отделом промышленной
биотехнологии УП «ЛОТИОС»
Белявский К.М.
Старший научный сотрудник отдела промышленной
биотехнологии УП «ЛОТИОС»
Семашко И.В.
Научный сотрудник отдела промышленной
биотехнологии УП «ЛОТИОС»
Качанова Н.А.
Научный сотрудник отдела промышленной
биотехнологии УП «ЛОТИОС»
Квятковская Н.В.
Научный сотрудник отдела промышленной
биотехнологии УП «ЛОТИОС»
Костюк И.Н.
Инженер отдела промышленной биотехнологии
УП «ЛОТИОС»
Худобченок Л.Г.
Андреев С.В.
Карпович Н.В.
13