012429 Родственные заявки

012429
Родственные заявки
Заявка на данный патент претендует на приоритет патентной заявки США № 10/871514, поданной
18 июня 2004 г., патентной заявки США № 10/871365, поданной 18 июня 2004 г., предварительной патентной заявки США № 60/512047, поданной 17 октября 2003 г., предварительной патентной заявки
США № 60/480906, поданной 23 июня 2003 г., все озаглавлены «Способы и композиции для лечения
амилоидных заболеваний».
Заявка на данный патент также родственна предварительной патентной заявке США № 60/512017,
поданной 17 октября 2003 г., предварительной патентной заявке США № 60/480918, поданной 23 июня
2003 г., и патентной заявке США № 10/874805, поданной 18 июня 2004 г., все озаглавлены «Способы
лечения нарушений, вызванных агрегацией белков».
Заявка на данный патент родственна предварительной патентной заявке США № 60/512116, поданной 17 октября 2003 г., предварительной патентной заявке США № 60/480984, поданной 23 июня 2003 г.,
и патентной заявке США № 10/871549, поданной 18 июня 2004 г., все озаглавлены «Фармацевтические
препараты соединений, ингибирующих амилоиды».
Заявка на данный патент родственна предварительной патентной заявке США № 60/436379, поданной 24 декабря 2002 г., предварительной патентной заявке США № 60/482214, поданной 23 июня 2003 г.,
озаглавленным «Комбинированная терапия для лечения болезни Альцгеймера», патентной заявке США
№ 10/746138, поданной 24 декабря 2003 г., международной патентной заявке РСТ/СА2003/002011, и патентной заявке США № 10/871537, поданной 18 июня 2004 г., все озаглавлены «Терапевтические препараты для лечения заболеваний, связанных с β-амилоидными пептидами».
Заявка на данный патент родственна предварительной патентной заявке США № 60/512135, поданной 17 октября 2003 г., предварительной патентной заявке США № 60/482058, поданной 23 июня 2003 г.,
обе озаглавлены «Синтетический способ получения соединений для лечения амилоидоза», и патентной
заявке США № 10/871543, поданной 18 июня 2004 г., озаглавленной «Улучшенные фармацевтические
препараты-кандидаты и способ их получения».
Заявка на данный патент родственна предварительной патентной заявке США № 60/512018, поданной 17 октября 2003 г., предварительной патентной заявке США № 60/482928, поданной 23 июня 2003 г.,
и патентной заявке США № 10/871512, поданной 18 июня 2004 г., все озаглавлены «Способы и композиции для лечения заболеваний, связанных с амилоидами и эпилептогенезом».
Заявка на данный патент родственна патентной заявке США № 08/463548, в настоящее время патент США № 5972328 под названием «Способ лечения амилоидоза».
Полное содержание каждой из этих патентных заявок и патента тем самым вводятся специально в
данное описание ссылкой, включая, без ограничения, описание, формулу изобретения и реферат, а также
любые фигуры, таблицы или рисунки в них.
Предпосылки создания изобретения
Амилоидоз относится к патологическому состоянию, характеризующемуся наличием амилоидных
фибрилл. Амилоид является родовым названием, относящимся к группе разнообразных, но специфичных
белковых отложений (внутриклеточных или внеклеточных), которые наблюдаются при различных заболеваниях. Будучи различными по местонахождению, все амилоидные отложения имеют общие морфологические свойства, окрашиваются специфичными красителями (например, конго красным) и после окрашивания имеют характерное красно-зеленое двойное лучепреломление в поляризованном свете. Они
также имеют общие обычные ультраструктурные признаки и обычные рентгеновские и ИК-спектры.
Заболевания, связанные с амилоидами, могут либо ограничиваться одним органом, либо распространяться на несколько органов. Первый пример называют "локализованным амилоидозом", тогда как
второй называют "системным амилоидозом".
Некоторые амилоидные заболевания могут быть идиопатическими, но большинство этих заболеваний проявляются как осложнения предыдущего заболевания. Например, первичный амилоидоз (AL амилоид) может появиться без какой-либо другой патологии или может быть последствием дискразии плазматических клеток или множественной миеломы.
Обычно вторичный амилоидоз наблюдается как ассоциированный с хронической инфекцией (такой
как туберкулез) или хроническим воспалением (таким как ревматоидный артрит). Семейная форма вторичного амилоидоза также наблюдается в других типах семейного амилоидоза, например семейная средиземноморская лихорадка (FMF). Этот семейный тип амилоидоза является генетически наследственным
и обнаруживается в специфичных популяционных группах. Как при первичном, так и при вторичном
амилоидозе отложения обнаруживают в некоторых органах и, следовательно, оба амилоидоза рассматриваются как системные амилоидные заболевания.
"Локализованные амилоидозы" представляют собой такие заболевания, которые включают систему
единичного органа. Различные амилоиды также характеризуются типом белка, присутствующего в отложении. Например, нейродегенеративные заболевания, такие как скрепи, бычий губчатый энцефалит (болезнь коровьего бешенства), болезнь Крейтцфельда-Якоба и т.п., характеризуются появлением и аккумуляцией, устойчивой к протеазам формы прионного белка (называемого AScr или PrP-27). Аналогично,
болезнь Альцгеймера, другое нейродегенеративное заболевание, характеризуется нейритными бляшками
-1-
012429
и нейрофибриллярными клубками. В данном случае амилоидные бляшки, обнаруживаемые в паренхиме
и кровеносном сосуде, образуются отложением фибриллярного Аβ-амилоидного белка. Другие заболевания, такие как диабет взрослых (диабет типа II), характеризуются локализованной аккумуляцией амилоидных фибрилл в поджелудочной железе.
В случае образования амилоидов отсутствует известная, общепринятая терапия, или лечение, в результате которой происходило бы заметное растворение амилоидных отложений in situ, которая предупреждала
бы дальнейшие амилоидные отложения или предупреждала инициирование амилоидного отложения.
Каждый амилоидогенный белок способен претерпевать конформационное изменение и создавать βскладки и образовывать нерастворимые фибриллы, которые могут отлагаться вне или внутри клетки. Все
амилоидогенные белки имеют различную аминокислотную последовательность, но одинаковое свойство
образовывать фибриллы и связываться с другими элементами, такими как протеогликан, амилоид Р и компонент комплемента. Кроме того, все амилоидогенные белки имеют аминокислотные последовательности,
которые будучи различными имеют сходство, такое как области, способные связываться с гликозаминогликановым (GAC) участком протеогликана (называемым сайт связывания GAC), а также другие области,
которые промотируют образование β-складок. Протеогликаны представляют собой макромолекулы различного размера и различной структуры, которые распространены почти по всему организму. Их можно
обнаружить в межклеточном компартменте, на поверхности клетки и как часть внеклеточной матрицы.
Основная структура всех протеогликанов состоит из ядерного белка и по меньшей мере одной, но часто
большего числа, полисахаридных цепей (GAC), соединенных с ядерным белком. Открыто множество различных GAC, включая хондроитин сульфат, дерматан сульфат, кератан сульфат, гепарин и гиалуронан.
В специфических случаях амилоидные фибриллы, если только они образовались, могут стать токсичными по отношению к окружающим клеткам. Например, показано, что Аβ-фибриллы, организованные в виде сенильных бляшек, ассоциируются с мертвыми нейронными клетками, дистрофическими
нейритами, астроцитозом и микроглиозом у больных болезнью Альцгеймера. При испытании in vitro
показано, что олигомерный (растворимый), а также фибриллярный Аβ-пептид способен инициировать
процесс активации микроглии (макрофагов мозга), что объясняет микроглиоз и воспаление мозга, обнаруженные в мозге больных болезнью Альцгеймера. Как олигомерный, так и фибриллярный Аβ-пептид
могут также индуцировать гибель нейронных клеток in vitro. См., например, М.Р. Lampert, et al., Proc.
Natl. Acad. Set USA 95, 6448-53 (1998).
Показано, что при другом типе амилоидоза, наблюдаемом у больных диабетом типа II, амилоидогенный белок IAPP, если организован в олигомерные формы или в фибриллы, индуцирует токсичность
островковых β-клеток in vitro. Следовательно, появление IAPP фибрилл в поджелудочной железе больных диабетом типа II способствует утрате островковых β-клеток (клеток Лангерганса) и дисфункции
органа, которая может привести к инсулинемии.
Другой тип амилоидоза связан с β2-микроглобулином и встречается у больных, проходящих длительный курс гемодиализа. У пациентов, проходящих продолжительный курс гемодиализа, появляются
фибриллы из β2-микроглобулина в запястном туннеле и в богатых коллагеном тканях в некоторых суставах. Это вызывает сильные боли, тугоподвижность и опухание суставов.
Амилоидоз также характерен для болезни Альцгеймера. Болезнь Альцгеймера является заболеванием,
разрушающим мозг, которое приводит к прогрессирующей потере памяти, ведущей к слабоумию, психической нетрудоспособности и смерти через относительно продолжительное время. В процессе старения популяций в развитых странах число больных болезнью Альцгеймера достигает размера эпидемии.
У людей, страдающих болезнью Альцгеймера, развивается прогрессирующее слабоумие в состоянии зрелости, сопровождающееся тремя основными структурными изменениями в мозге: диффузная гибель нейронов во многих участках мозга; аккумуляция внутриклеточных отложений белка, называемых
нейрофибриллярными клубками; и аккумуляция внеклеточных отложений белка, называемых амилоидными или сенильными бляшками, окруженных деформированными нервными окончаниями (дистрофические нейриты) и активированной микроглией (микроглиоз и астроцитоз). Основным составляющим
этих амилоидных бляшек является амилоидный β-пептид (Аβ), белок из 39-43 аминокислот, который
образуется расщеплением β-амилоидного белка-предшественника (АРР). Интенсивное исследование
проводилось по изучению релевантности Аβ-отложений при болезни Альцгеймера, см., например,
Selkoe, Trends in Cell Biology 8, 447-453 (1998). Аβ легко образуется при метаболическом процессировании амилоидного белка-предшественника ("АРР") в эндоплазматическом ретикулуме ("ER"), аппарате
Гольджи, или в эндосомно-лизосомном метаболическом пути (системе), и, наиболее обычно, секретируется в виде пептида, содержащего 40 ("Aβ1-40") или 42 ("Аβ-42") аминокислот (Selkoe, Annu. Rev. Cell
Biol. 10, 373-403 (1994)). Роль Аβ как основной причины болезни Альцгеймера подтверждается присутствием внеклеточных отложений Аβ в сенильных бляшках, характерных для болезни Альцгеймера, повышенным продуцированием Аβ в клетках, содержащих мутантные гены, ассоциированные с болезнью
Альцгеймера, например, амилоидного белка-предшественника, пресенилина I и пресенилина II; и токсичность растворимого (олигомерного) или фибриллярного Аβ в отношении клеток в культуре. См., на-2-
012429
пример, Gervais, Eur. Biopharm. Review, 40-42 (Autumn 2001); May, DDT, 459-62 (2001). Хотя существует
симптоматическое лечение болезни Альцгеймера, в настоящее время это заболевание нельзя предупредить или лечить.
Болезнь Альцгеймера характеризуется диффузными и нейритными бляшками, церебральной ангиопатией и нейрофибриллярными клубками. Полагают, что амилоид бляшек и кровеносных сосудов образуется за счет отложения нерастворимого Аβ-амилоидного белка, который можно описать как диффузный или фибриллярный. Полагают также, что как растворимый олигомерный Аβ, так и фибриллярный
Аβ являются нейротоксическими и воспалительными.
Другим типом амилоидоза является церебральная амилоидная ангиопатия (САА). САА представляет собой специфичное отложение амилоидных β-фибрилл на стенках липтоменингеальной и корковой
артерий, артериол и вен. Она обычно ассоциируется с болезнью Альцгеймера, синдромом Дауна и нормальным старением, а также с различными семейными состояниями, связанными с ударом или деменцией (см. Frangione et al., Amiloid: J. Protein Folding Disord. 8, Suppl. 1, 36-42 (2001)).
Общедоступные в настоящее время методы лечения β-амилоидных заболеваний, почти все, являются лишь симптоматическими, дающими лишь временное или частичное клиническое улучшение. Хотя
описаны некоторые фармацевтические агенты, которые предлагают ослабление симптомов, в настоящее
время отсутствует комплексная фармакологическая терапия для предупреждения или лечения, например,
болезни Альцгеймера.
Сущность изобретения
Настоящее изобретение относится к применению соединений формулы (I) для лечения амилоидных
заболеваний. В частности, данное изобретение относится к способу лечения или предупреждения амилоидного заболевания у субъекта, заключающемуся во введении субъекту терапевтического количества
соединения по изобретению. Изобретение также относится к каждому из новых соединений по изобретению, представленных в данном описании. Среди соединений для применения по изобретению при введении соединений нижеприведенной формулы (I) уменьшается или ингибируется образование амилоидных
фибрилл, специфичная дисфункция органов (например, нейродегенерация) или клеточная токсичность.
В одном варианте изобретение относится к применению соединения формулы (I)
где R1 обозначает замещенный или незамещенный 3-10-членный, содержащий от 1 до 4 гетероатомов,
выбранных из N, О и S, гетероциклил, 6-10-членный арил, 8-15-членный арилциклоалкил или замещенную или незамещенную C2-C10-алкильную группу; причем замещенный или незамещенный гетероциклил, арил или арилциклоалкил содержат от 1 до 3 отдельных или конденсированных колец;
R2 обозначает водород или C1-C10-алкил;
Y обозначает SO3H;
L1 обозначает замещенную или незамещенную C1-C5-алкильную группу или отсутствует;
L2 обозначает замещенную или незамещенную C2-C5-алкильную группу,
при условии, что, когда R1 обозначает алкил, L1 отсутствует; при условии, что, когда R2 обозначает
водород, L1 обозначает метилен, L2 обозначает -(СН2)3- и Y обозначает SO3-X+; R1 не обозначает фенил,
1,3-бензодиоксол-5-ил или 3,4-диметоксифенил, и при условии, что, когда R2 обозначает водород, L2 обозначает -(СН2)3-, L1 отсутствует и Y обозначает SO3-X+, R1 не обозначает н-пентил, н-гексил, н-гептил, ноктил, н-нонил, н-децил, циклогексил, 1-гидрокси-2-пропил, 1-гидрокси-2-бутил, 2-гидрокси-1-пропил,
1-гидрокси-4-пентил, 1-гидрокси-5-гексил, 2-гидрокси-1-этил, 3-гидрокси-1-пропил, 4-гидрокси-1-бутил,
5-гидрокси-1-пентил, 6-гидрокси-1-гексил, 3,5-диметил-1-адамантил, 1-гидроксиметил-1-циклопентил, 2(2-деокси-D-глюкозу), фенил, 4-гидроксифенил или 4-пиридил, 1-гидрокси-2-пентил, 3-метилмасляную
кислоту, метиловый эфир 4-метилпентановой кислоты или 2,2-дифенилэтил,
или его фармацевтически приемлемой соли, сложного эфира или пролекарства для лечения или предупреждения связанного с амилоидом заболевания или состояния, в том числе, если заболевание или состояние характеризуется отложением β-амилоида.
В соответствии с изобретением соединение формулы (I) или его фармацевтически приемлемая соль,
сложный эфир или пролекарство также применимо для лечения или предупреждения отложения амилоида или заболевания, выбранного из группы, включающей болезнь Альцгеймера, церебральную амилоидную ангиопатию, миозит телец включений, дегенерацию желтого пятна, MCI или синдром Дауна.
В другом варианте изобретения соединения формулы (I) или его фармацевтически приемлемая
соль, сложный эфир или пролекарство применяются для изготовления лекарственного средства для лечения или предупреждения связанных с амилоидом заболеваний и состояний, в том числе заболеваний
или состояний, которые характеризуется отложением β-амилоида, а также для лечения или предупреждения заболевания, выбранного из группы, включающей болезнь Альцгеймера, церебральную амилоидную ангиопатию, миозит телец включений, дегенерацию желтого пятна, MCI или синдром Дауна.
-3-
012429
В другом аспекте изобретение относится к способу лечения или предупреждения связанного с амилоидом заболевания, в том числе отложения β-амилоида, включающему введение субъекту эффективного количества соединения формулы (I)
где R1 обозначает замещенный или незамещенный 3-10-членный, содержащий от 1 до 4 гетероатомов,
выбранных из N, О и S, гетероциклил, 6-10-членный арил, 8-15-членный арилциклоалкил или замещенную или незамещенную C2-C10-алкильную группу; причем замещенный или незамещенный гетероциклил, арил или арилциклоалкил содержат от 1 до 3 отдельных колец;
R2 обозначает водород или C1-C10-алкил;
Y обозначает SO3H;
L1 обозначает замещенную или незамещенную C1-C5-алкильную группу или отсутствует;
L2 обозначает замещенную или незамещенную C2-C5-алкильную группу,
при условии, что, когда R1 обозначает алкил, L1 отсутствует; при условии, что, когда R2 обозначает
водород, L1 обозначает метилен, L2 обозначает -(СН2)3-, и Y обозначает SO3-Х+; R1 не обозначает фенил,
1,3-бензодиоксол-5-ил или 3,4-диметоксифенил, и при условии, что, когда R2 обозначает водород, L2 обозначает -(СН2)3-, L1 отсутствует и Y обозначает SO3-Х+, R1 не обозначает н-пентил, н-гексил, н-гептил, ноктил, н-нонил, н-децил, циклогексил, 1-гидрокси-2-пропил, 1-гидрокси-2-бутил, 2-гидрокси-1-пропил,
1-гидрокси-4-пентил, 1-гидрокси-5-гексил, 2-гидрокси-1-этил, 3-гидрокси-1-пропил, 4-гидрокси-1-бутил,
5-гидрокси-1-пентил, 6-гидрокси-1-гексил, 3,5-диметил-1-адамантил, 1-гидроксиметил-1-циклопентил, 2(2-деокси-D-глюкозу), фенил, 4-гидроксифенил или 4-пиридил, 1-гидрокси-2-пентил, 3-метилмасляную
кислоту, метиловый эфир 4-метилпентановой кислоты или 2,2-дифенилэтил,
или его фармацевтически приемлемой соли, сложного эфира или пролекарства.
Соединения по изобретению включают также соединение формулы (I)
ге R1 обозначает замещенный или незамещенный бицикло[2.1.2]гептил или замещенный или незамещенный адамантил;
R2 обозначает водород или C1-C10-алкил;
Y обозначает SO3H;
L1 обозначает замещенный или незамещенный C1-C5-алкил или отсутствует; и
L2 обозначает замещенный или незамещенный C2-C5-алкил или отсутствует;
при условии, что R2 обозначает водород, L2 обозначает -(СН2)3-, L1 отсутствует и что R1 не является
3,4-диметил-1-адамантилом или 3,5-диметил-1-адамантилом;
или его фармацевтически приемлемую соль, сложный эфир или пролекарство.
Еще в одном аспекте соединения по изобретению представляют собой
Данное изобретение предусматривает также фармацевтическую композицию для лечения или предупреждения амилоидного заболевания, содержащую соединение по изобретению и фармацевтически
приемлемый носитель.
Соединения по изобретению могут действовать по одному из ниже следующих механизмов.
В одном варианте изобретения соединения по данному описанию предупреждают или ингибируют
сборку амилоидного белка в нерастворимые фибриллы, которые, in vivo, отлагаются в различных органах, или они способствуют клиренсу ранее образовавшихся отложений или замедляют отложение у пациентов, уже имеющих отложения. В другом варианте изобретения соединение может также предупреждать связывание амилоидного белка, в его растворимой, олигомерной форме или в его фибриллярной
форме, с клеточной поверхностью или адгезию этого белка к клеточной поверхности. Еще в одном варианте изобретения соединение может блокировать вызванные амилоидами клеточную токсичность или
активацию макрофага. В другом варианте изобретения соединение может блокировать вызванные амилоидами нейротоксичность или микроглиальную активацию. В другом варианте изобретения соединение
защищает клетки от вызванной амилоидом цитотоксичности островковых В-клеток. В другом варианте
изобретения соединение может повышать клиренс из конкретного органа, например, мозга, или оно понижает концентрацию амилоидного белка таким образом, в нацеленном органе предупреждается образование фибрилл.
-4-
012429
Соединения по изобретению можно применять терапевтически или профилактически для лечения
заболеваний, ассоциированных с образованием, агрегацией или отложением амилоидных фибрилл. Соединения по изобретению могут действовать, облегчая течение амилоидного заболевания, по любому из
приведенных ниже механизмов (предполагается, что этот перечень является иллюстративным и не лимитирующим): замедление скорости образования или отложения амилоидных фибрилл; уменьшение степени амилоидного отложения; ингибирование, уменьшение или предупреждение образования амилоидных
фибрилл; ингибирование нейродегенерации или клеточной токсичности, вызванной амилоидом; ингибирование воспаления, индуцированного амилоидом; повышение клиренса амилоида; или содействие расщеплению (разрушению) амилоидного белка до его объединения в фибриллы.
Соединения по изобретению можно применять терапевтически или профилактически для лечения
заболеваний, ассоциированных с образованием, агрегацией или отложением фибрилл β-амилоида. Соединения по изобретению могут действовать, облегчая течение заболевания, связанного с β-амилоидом,
по любому из приведенных ниже механизмов (предполагается, что этот перечень является иллюстративным и не лимитирующим): замедление скорости образования или отложения β-амилоидных фибрилл;
уменьшение степени β-амилоидного отложения; ингибирование, уменьшение или предупреждение образования β-амилоидных фибрилл; ингибирование нейродегенерации или клеточной токсичности, вызванной β-амилоидом; ингибирование воспаления, индуцированного β-амилоидом; повышение клиренса βамилоида из мозга; или содействие расщеплению (разрушению) β-амилоидного белка до его объединения в фибриллы.
Терапевтические соединения по изобретению могут быть эффективны при контроле β-амилоидного
отложения либо после их проникновения в мозг (после прохождения через гематоэнцефалический барьер), либо с периферии. При действии с периферии соединение может изменять равновесие Аβ между
мозгом и плазмой таким образом, который содействует удалению Аβ из мозга. Оно может также повышать катаболизм нейронного Аβ и изменять скорость удаления из мозга. Увеличение выхода Аβ из мозга
приводит к понижению концентрации Аβ в мозге и в спинно-мозговой жидкости (CSF) и, следовательно,
способствует уменьшению Аβ отложения. Или же, соединения, которые проникают в мозг, могли бы
регулировать отложение, действуя непосредственно на Аβ в мозге, например, сохраняя его в нефибриллярной форме, способствуя его клиренсу из мозга или замедляя процессирование АРР. Эти соединения
могли бы также предупреждать взаимодействие Аβ в мозге с клеточной поверхностью и, следовательно,
предупреждать нейротоксичность, нейродегенерацию и воспаление. Они также могут снижать продуцирование Аβ активированной микроглией. Эти соединения могут также повышать разрушение при использовании макрофагов или нейронных клеток.
В одном варианте изобретения применяется способ лечения болезни Альцгеймера (например, спорадической формы, семейной или ранней AD). Способ также можно применять профилактически или
терапевтически для лечения других случаев β-амилоидного отложения, таких как у больных с синдромом Дауна или у больных церебральной амилоидной ангиопатией ("САА").
В другом варианте изобретения применяют способ лечения легкой когнитивной недостаточности.
Легкая когнитивная недостаточность ("MCI") представляет собой состояние, характеризующееся легкой,
но заметной утратой мыслительного навыка, квалификации, умения, которая необязательно связана с
наличием деменции. MCI часто, но не всегда, предшествует болезни Альцгеймера.
Кроме того, аномальная аккумуляция АРР и β-амилоидного белка в мышечных волокнах влечет за
собой патологию случайного миозита телец включений (IBM) (Askanas et al., Pros. Natl. Acad. Sci. USA
93, 1314-1319 (1996); Askanas et al., Current Opinion in Rheumathology 7, 486-496 (1995)). Соответственно,
соединения по изобретению можно применять профилактически или терапевтически при лечении нарушений, при которых β-амилоидный белок аномально отлагается в ненейрологических участках, например, для лечения IBM доставкой соединений к мышечным волокнам.
Кроме того, было показано, что Аβ ассоциируется с аномальными внеклеточными отложениями,
известными как друзы, которые аккумулируются вдоль базальной поверхности ретинального пигментированного эпителия у субъектов с возрастной дегенерацией желтого пятна (AMD). AMD является причиной необратимой потери зрения у людей старшего возраста. Полагают, что отложение Аβ может являться важным компонентом локальных воспалительных событий, которые способствуют атрофии ретинального пигментированного эпителия, биогенезу друз и патогенезу AMD (Johnson, et al., Pros. Natl.
Acad. Sci. USA 99(18), 11830-5 (2002)).
Следовательно, настоящее изобретение относится к применению соединений формулы (I) по данному описанию для предупреждения или лечения амилоидных заболеваний, включая, среди прочих, болезнь Альцгеймера, церебральную амилоидную ангиопатию, легкую когнитивную недостаточность, миозит телец включений, синдром Дауна, дегенерацию желтого пятна, а также другие типы амилоидоза,
обусловленного IAPP (например, диабет), первичный (AL) амилоидоз, вторичный (АА) амилоидоз и
амилоидозы, обусловленные β2-микроглобулином (диализные).
При амилоидозе, связанном с диабетом типа II (диабетическом) (IAPP), амилоидогенный белок IAPP
-5-
012429
индуцирует токсичность островковых β-клеток при объединении в олигомерные формы или в фибриллы.
Следовательно, появление IAPP фибрилл в поджелудочной железе больных диабетом типа II способствует
утрате островковых β-клеток (Лангерганса) и дисфункции органа, которая ведет к инсулинемии.
Известно, что обычно первичный амилоидоз (AL амилоид) ассоциирован с дискразией плазматических клеток и множественной миеломой. Его также можно наблюдать в качестве идиопатического заболевания.
Вторичный (АА) амилоидоз обычно наблюдается в связи с хронической инфекцией (такой как туберкулез) или хроническим воспалением (таки как ревматоидный артрит). Семейную форму вторичного
амилоидоза наблюдают также при семейной средиземноморской лихорадке (FMF).
Амилоидоз, обусловленный β2-микроглобулином (диализный), наблюдают у пациентов при продолжительном курсе гемодиализа. У больных, проходящих длительный курс гемодиализа, появляются
фибриллы из β2-микроглобулина в запястном туннеле и в тканях, обогащенных коллагеном, в некоторых
суставах. Это вызывает сильные боли, тугоподвижность и опухание суставов. Эти отложения вызваны
неспособностью сохранять низкие уровни β2М в плазме больных, подвергающихся гемодиализу. Повышенные концентрации белка β2М вызывают структурные изменения и могут привести к отложению модифицированного β2М в суставах в виде нерастворимых фибрилл.
Подробное описание изобретения
Настоящее изобретение относится к применению соединений формулы (I) по данному описанию
для лечения амилоидных заболеваний. Для удобства некоторые определения или термины, на которые
есть ссылки в данном описании, представлены ниже.
Амилоидные заболевания
АА (реактивный) амилоидоз.
Обычно АА амилоидоз представляет собой проявление ряда заболеваний, которые вызывают продолжительную реакцию в острой фазе. Такие заболевания включают хронические воспалительные нарушения, хронические местные или системные микробные инфекции и злокачественные новообразования.
Наиболее обычную форму реактивного или вторичного (АА) амилоидоза наблюдают в результате продолжительных воспалительных состояний. Например, у больных ревматоидным артритом или семейной
средиземноморской лихорадкой (которая является генетическим заболеванием) может развиться АА
амилоидоз. Термины "АА амилоидоз" и "вторичный (АА) амилоидоз" применяются поочередно (взаимозаменяемо).
АА фибриллы обычно состоят из фрагментов размером 8000 Дальтон (Да) (АА пептид или белок),
образующихся при протеолитическом расщеплении сывороточного амилоидного протеина A (ApoSAA),
циркулирующего аполипопротеина, который синтезируется, главным образом, в гепатоцитах в ответ на
такие цитокины, как IL-1, IL-6 и TNF. Секретированный ApoSAA образует комплексы с HDL. Отложение АА фибрилл может быть распространено в организме, преимущественно в паренхимных органах.
Обычно местом, где находятся отложения, являются почки, также могут быть задеты печень и селезенка.
Отложение также наблюдают в сердце, желудочно-кишечном тракте и коже.
Основные заболевания, которые могут привести к развитию АА амилоидоза, включают, но без ограничения, воспалительные заболевания, такие как ревматоидный артрит, ювенильный хронический артрит, анкилоизирующий спондилоартрит, псориаз, псориатическая артропатия, синдром Рейтера, болезнь
Стилла у взрослых, синдром Бехчета и болезнь Крона. АА отложения также могут возникать в результате хронических микробных инфекций, таких как проказа, туберкулез, бронхоэктаз, декубитальные язвы,
хронический пиелонефрит, остеомиелит и болезнь Уиппла. Некоторые злокачественные новообразования также могут вызвать отложения АА фибриллярного амилоидного белка. Эти злокачественные новообразования включают лимфому Ходжкина, рак почки, рак кишки, легкого и мочеполовой системы, базалиому и вилосистоклеточную лейкемию. Другими основными состояниями, которые могут обусловливать АА амилоидоз, являются болезнь Кастльмана и синдром Шнитцлера.
AL Амилоидоз (первичный амилоидоз).
Отложение AL амилоида обычно связано почти с любой дискразией линии В лимфоцитов, от злокачественного развития плазматических клеток (множественная миелома) до доброкачественной моноклональной гаммапатии. Иногда присутствие амилоидных отложений может быть непосредственным
показателем основной дискразии. AL амилоидоз также подробно описан в Current Drug Targets, 2004, 5
159-171.
Фибриллы AL амилоидных отложений состоят из легких цепей моноклонального иммуноглобулина
или их фрагментов. Более конкретно, фрагменты образованы из N-концевого участка легкой цепи (κ или
λ) и содержат целый вариабельный домен (VL) или его часть. Отложения встречаются, главным образом,
в мезенхимных тканях, вызывая периферическую и автономную нейропатию, туннельный запястный
синдром, макроглоссию, рестриктивную кардиомиопатию, артропатию больших суставов, иммунные
дискразии, миеломы, а также дискразии неизвестного происхождения. Однако следует отметить, что могут быть затронуты почти все ткани, в особенности внутренние органы, такие как почка, печень, селезенка и сердце.
-6-
012429
Наследственные системные амилоидозы.
Существует множество форм наследственного системного амилоидоза. Хотя они являются относительно редко встречающимися состояниями, симптомы у взрослых и характер их наследования (обычно
аутосомно-доминантный) приводят к закреплению (устойчивости) таких нарушений в целой популяции.
Синдромы вызваны, главным образом, точковыми мутациями в белке-предшественнике, которые приводят к вариантным амилоидогенным пептидам или белкам. В табл. 1 дан состав фибрилл типичных форм
таких нарушений.
Таблица 1
Состав фибрилл типичных амилоидных заболеваний
-7-
012429
Данные взяты из Tan SY, Pepys MB. Amyloidosis. Histopathology, 25(5), 403-414 (Nov 1994),
WHO/IUIS Nomenclature Subcommittee, Nomenclature of Amyloid and Amyloidosis. Bulletin of the World
Health Organization 1993; 71: 10508; и Merlini et al., Clin Chem Lab Med 2001; 39(11): 1065-75.
Данные в табл. 1 приведены в качестве примеров и не претендуют на ограничение объема изобретения. Например, описано более 40 отдельных точковых мутаций в гене транстиретина, каждая из которых дает клинически сходные формы семейной амилоидной полинейропатии.
Как правило, любое наследственное амилоидное нарушение может встречаться также в спорадической форме, и как наследственная, так и спорадическая (случайная) форма заболевания имеют одинаковые особенности в том, что касается амилоида. Например, наиболее распространенная форма вторичного
АА амилоидоза встречается случайно, например как результат постоянного воспаления, и не связана с
семейной средиземноморской лихорадкой. Таким образом, общие сведения, касающиеся наследственных
амилоидных нарушений, можно также отнести к спорадическим (случайным) амилоидозам.
Транстиретин (TTR) представляет собой белок протяженностью 14 килодальтон (кДа), который
иногда называют преальбумин. Он продуцируется печенью и сосудистым сплетением и функционирует в
процессе транспорта тироидных гормонов и витамина А. По меньшей мере 50 вариантных форм белка,
каждый из которых характеризуется единственной аминокислотной заменой, ответственны за различные
формы семейной амилоидной полинейропатии. Например, замена пролин вместо лейцина в положении
55 приводит, главным образом, к прогрессирующей форме нейропатии; замена лейцина на метионин в
положении 111 вызывает тяжелую кардиопатию у голландских пациентов.
На амилоидных отложениях, выделенных из тканей сердца пациентов с системным амилоидозом,
видно, что отложения состоят из гетерогенной смеси TTR и его фрагментов, в целом называемых ATTR,
полноразмерные последовательности которых охарактеризованы. Компоненты ATTR фибрилл можно
извлечь (экстрагировать) из таких бляшек и методами, известными в уровне техники, можно определить
их структуру и последовательность (например, Gustavson, A., et al., Laboratory Invest. 73: 703-708, 1995;
Kametani, F., et al., Biochem. Biophys. Res. Commun. 125: 22-628, 1984; Pras, M., et al., PNAS 80: 539-42,
1983).
У людей с точковыми мутациями в молекуле аполипопротеина А1 (например, Gly→Arg26;
Trp→Arg50; Leu→Arg60) наблюдается форма амилоидоза ("тип Östertag"), характеризующаяся отложениями белка аполипопротеина AI или его фрагментов (AapoAI). У этих больных наблюдаются низкие
уровни липопротеина высокой плотности (HDL) и периферическая нейропатия или почечная недостаточность.
Мутация в α-цепи фермента лизоцима (например, Ile→Thr56 или Asp→His57) лежит в основе другой формы ненейропатического наследственного амилоида типа Östertag, наблюдаемого в английских
семьях. В данном случае отлагаются фибриллы мутантного белка лизоцима (Alys) и у пациентов, как
правило, наблюдается недостаточность почечной функции. Этот белок в отличие от большинства белков,
образующих фибриллы, по данному описанию обычно присутствует в полной (нефрагментированной)
форме (Benson, M.D., et al. CIBA Fdn. Symp. 199: 104-131, 1996).
Легкие цепи иммуноглобулинов имеют тенденцию образовывать агрегаты различной морфологии,
включая фибриллярную (например, AL амилоидоз и АН амилоидоз), гранулярную (например, болезнь
легких цепей (БЛЦ, LCDD), болезнь тяжелых цепей (БТЦ, HCDD) и болезнь легких-тяжелых цепей
(БЛТЦ, LHCDD)), кристаллическую (например, приобретенный синдром Фаркони) и микротубулярную
(например, криоглобулинемия). Образование нерастворимых фибрилл легких цепей и тяжелых цепей
иммуноглобулинов и/или их фрагментов является показателем AL и АН амилоидоза, соответственно. В
AL фибриллах лямбда(λ)-цепи, такие как λVI-цепи (λ6-цепи), обнаружены в более высоких концентрациях, чем каппа(κ)-цепи. Merlini et al., Clin Chem Lab Med 39(11): 1065-75 (2001). Амилоидоз тяжелых
цепей (АН) характеризуется агрегатами амилоидных белков γ-цепи IgGl подкласса. Eulitz et al., Proc.
Natl. Acad. Sci. USA 87: 6542-46 (1990).
Сравнение амилоидогенных легких цепей с неамилоидогенными показало, что первые могут включать замены, которые, по-видимому, дестабилизируют скручивание белка или стимулируют агрегацию.
AL и LCDD были определены из других амилоидных заболеваний благодаря их относительно малой популяции моноклональных легких цепей, которые образуются за счет неопластического роста продуцирующей антитело В клетки. Как правило, AL агрегаты представляют собой хорошо организованные
фибриллы λ-цепей. Агрегаты LCDD являются относительно аморфными агрегатами как κ-, так и λцепей, в основном κ, иногда κIV. Bellotti et al., Journal of Structural Biology 13: 280-89 (2000). Сравнение
амилоидогенных и неамилоидогенных тяжелых цепей у пациентов с АН амилоидозом выявило недостающие и/или измененные компоненты. Eulitz et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 87: 6542-46 (1990) (патогенные тяжелые цепи, отличающиеся значительно более низкой молекулярной массой, чем неамилоидогенные тяжелые цепи); и Solomon et al., Am J Hemat 45(2) 171-6 (1994) (амилоидогенные тяжелые цепи,
отличающиеся тем, что состоят исключительно из VH-D участка неамилоидогенной тяжелой цепи).
Следовательно, возможные способы обнаружения и мониторинга лечения субъектов с повышенным
риском наличия AL, LCDD, АН и т.п. включают, но без ограничения, иммуноанализ плазмы или мочи на
-8-
012429
присутствие или пониженное отложение амилоидогенных легкой или тяжелой цепей, например, амилоида λ, амилоида κ, амилоида κVI, амилоида γ или амилоида γ1.
Амилоидоз мозга.
Наиболее часто встречающийся тип амилоида в мозге состоит, главным образом, из Аβ-пептидных
фибрилл, приводящих к деменции, ассоциированной со случайной (не наследственной) болезни Альцгеймера. На самом деле, частота спорадической (случайной) болезни Альцгеймера значительно превышает формы, которые, как показано, являются наследственными. Тем не менее, фибриллярные пептиды,
образующие бляшки, у обоих типов очень похожи. Амилоидоз мозга включает такие заболевания, состояния, патологии и другие аномалии структуры или функции мозга, включая его компоненты, причиной которых является амилоид. Областью мозга, пораженной амилоидным заболеванием, может быть
строма, включающая сосудистую сеть, или паренхима, включающая функциональные или анатомические области, или их нейроны. Больному необязательно поставлен точный диагноз конкретного определенного амилоидного заболевания. Термин "амилоидное заболевание (заболевание, связанное с амилоидом)" включает амилоидоз мозга.
β-амилоидный пептид ("Аβ") представляет собой пептид из 39-43 аминокислот, образующийся протеолизом большого белка, известного как β-амилоидный белок-предшественник ("βАРР"). Мутации в
βАРР вызывают семейные формы болезни Альцгеймера, синдром Дауна, церебральную амилоидную
ангиопатию и старческую деменцию, характеризующуюся церебральным отложением бляшек, состоящих из Аβ-фибрилл и других компонентов, которые более подробно описаны ниже. Известные мутации
в АРР, ассоциированные с болезнью Альцгеймера, происходят непосредственно близ сайтов расщепления β- или γ-секретазой или в Аβ. Например, положение 717 - ближайшее к сайту расщепления γсекретазой АРР при его процессировании в Аβ, а положения 670/671 - ближайшие к сайту расщепления
β-секретазой. Мутации в любом из этих остатков могут привести к болезни Альцгеймера, предположительно, за счет повышение количества формы Аβ из 42/43 аминокислот, образующейся из АРР. Семейная форма болезни Альцгеймера составляет только 10% испытуемой популяции. Большинство случаев
болезни Альцгеймера являются спорадическими, в которых АРР и Аβ не содержат никакой мутации.
Структура и последовательность Аβ-пептидов различной длины общеизвестны в уровне техники. Такие
пептиды можно получать методами, известными в технике, или можно выделить из мозга известными
методами (например, Glenner and Wong, Biochem. Biophys. Res. Comm. 129, 885-90 (1984); Glenner and
Wong, Biochem. Biophys. Res. Comm. 122, 1131-35 (1984)). Кроме того, различные формы пептидов являются продажными. АРР экспрессируется и конститутивно катаболизируется в большинстве клеток.
По-видимому, доминантный катаболитический путь представляет собой расщепление АРР внутри последовательности Аβ ферментом, предварительно названным α-секретазой, который приводит к высвобождению растворимого фрагмента эктодомаина, известного как APPsα. Это расщепление мешает образованию Аβ-пептида. В отличие от этого неамилоидогенного каскада реакций АРР может также расщепляться ферментами, известными как β- и γ-секретаза, по N- и С-концам Аβ, соответственно, с последующим выделением Аβ во внеклеточное пространство. К настоящему времени ВАСЕ идентифицирован как
β-секретаза (Vasser, et al. Science 286: 735-741, 1999), а пресенилины связаны с активностью γ-секретазы
(De Strooper et al., Nature 391, 387-90 (1998)). Аβ-пептид, содержащий 39-43 аминокислоты, продуцируется при последовательном протеолитическом расщеплении амилоидного белка-предшественника (АРР)
β- и γ-секретазами. Хотя преимущественно продуцируется Аβ40 форма, 5-7% тотального Аβ существует
в виде Аβ42 (Cappai et al., Int. J. Biochem. Cell Biol. 31. 885-89 (1999)).
По-видимому, длина Аβ-пептида решающим образом изменяет его биохимические/биофизические
свойства. Конкретно, дополнительные две аминокислоты на С-конце Аβ42, являясь сильно гидрофобными, по-видимому, повышают предрасположенность Аβ42 к агрегации. Например, Jarrett, et al. показали,
что Аβ42 агрегируется очень быстро in vitro по сравнению с Аβ40, это наводит на мысль, что более протяженные формы Аβ могут быть важными патологическими белками, которые участвуют в начальном
посеве нейритных бляшек при болезни Альцгеймера (Jairrett, et al., Biochemistry 32, 4693-97 (1993);
Jarrett, et al., Ann. N.Y. Acad. Sci. 695, 144-48 (1993)). Эта гипотеза дополнительно подтверждается недавними анализами вклада конкретных форм Аβ в генетических семейных формах болезни Альцгеймера
("FAD"). Например, мутантная форма АРР (APPV7171) "Лондон", связанная с FAD, селективно повышает продуцирование Аβ 42/43 форм по сравнению с Аβ 40 (Suzuki, et al., Science 264, 1336-40 (1994)), тогда как мутантная форма АРР "Шведский" (APPK670N/M671L) повышает уровни как Аβ40, так и
Аβ42/43 (Citron, et al., Nature 360, 672-674 (1992); Cai, et al., Science 259, 514-16, (1993)). Также наблюдали, что FAD-связанные мутации в генах пресенилин-1 ("PS1) или пресенилин-2 ("PS2") приводит к селективному повышению продуцирования АР42/43, но не Аβ40 (Borchelt, et al., Neuron 17, 1005-13
(1996)). Это открытие подтверждено на трансгенных мышиных моделях, экспрессирующих PS мутанты,
которые демонстрируют селективное увеличение в мозге Аβ42 (Borchelt, см. выше; Duff, et al., Neurodegeneration 5(4), 293-98 (1996)). Таким образом, основной гипотезой об этиологии болезни Альцгеймера
-9-
012429
является то, что увеличение концентрации Аβ42 в мозге вследствие повышенного продуцирования и выделения Аβ42, либо пониженного клиренса (расщепление или клиренс из тканей мозга) - событие, являющееся причиной патологии заболевания.
Многие сайты мутации либо в Аβ, либо в АРР гене были идентифицированы и клинически ассоциированы либо с деменцией, либо с церебральной геморрагией. Типичные САА нарушения включают,
но без ограничения, наследственную церебральную геморрагию с амилоидозом исландского типа
(HCHWA-I); голландский вариант HCHWA (HCHWA-D; мутация в Aβ); фламандскую мутацию Аβ; арктическую мутацию Аβ; итальянскую мутацию Аβ; мутацию Аβ вариант Айова; семейную британскую
деменцию; и семейную датскую деменцию. САА также может быть спорадическим (случайным).
Применяемые в данном описании термины "β-амилоид", "амилоид-β" и т.п., если не указано иначе,
относятся к белкам и пептидам β-амилоида, амилоидным-β белкам- или пептидам-предшественникам, их
интермедиатам и модификациям и фрагментам. В частности, "Аβ" относится к любому пептиду, продуцированному протеолитическим процессированием генного продукта АРР, особенно к пептидам, которые ассоциированы с амилоидными патологиями, включая Аβ1-39, Аβ1-40, Аβ1-41, Аβ1-42 и Аβ1-43.
Для удобства номенклатуры "Аβ 1-42" может в данном описании называться "Аβ1-42" или просто
"Аβ42" или "Аβ42" (и аналогично для любых других амилоидных пептидов, обсуждаемых в данном описании). Применяемые в данном описании термины "β-амилоид", "амилоид-β" и "аβ" являются синонимами.
Если не указано иначе, термин "амилоид" относится к амилоидогенным белкам, пептидам или их
фрагментам, которые могут быть растворимыми (например, мономерными или олигомерными) или нерастворимыми (например, имеющими фибриллярную структуру или находящимися в виде амилоидных
бляшек). См, например, М.Р. Lampert, et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA 95, 6448-53 (1998). "Амилоидоз"
или "амилоидное заболевание" или "заболевание, связанное с амилоидом" относится к патологическому
состоянию, отличающемуся присутствием амилоидных волокон. "Амилоид" является родовым термином, относящимся к группе различных, но специфичных белковых отложений (внутриклеточных или
внеклеточных), которые наблюдаются при многих различных заболеваниях. Встречаясь в различных
местах, все амилоидные отложения имеют общие морфологические свойства, окрашиваются специфичными красителями (например, конго красным) и после окрашивания имеют характерное красно-зеленое
двойное лучепреломление в поляризованном свете. Они также имеют общие обычные ультраструктурные признаки и обычные рентгеновские и ИК-спектры.
Гельсолин является связывающим кальций белком, который связывается с фрагментами и филаментами актина. Мутации в положении 187 (например, Asp→Asn; Asp→Tyr) белка приводят к форме
наследственного системного амилоидоза, обычно обнаруживаемого у пациентов из Финляндии, а также
у выходцев из Голландии и Японии. У пораженных болезнью людей фибриллы, образованные из фрагментов гельсолина (Agel), обычно состоят из аминокислот 173-243 (карбоксиконцевой фрагмент длиной
68 кДа) и отлагаются в кровеносных сосудах и базальных мембранах, вызывая корнеальную дистрофию
и краниальную нейропатию, которая прогрессирует в периферическую нейропатию, дистрофические
кожные изменения и отложения в других органах (Kangas, H., et al. Human Mol. Genet. 5(9): 1237-1243,
1996)).
Другие мутантные белки, такие как мутантная α-цепь фибриногена (AfibA) и мутантный цистатин
С (Acys), также образуют фибриллы и вызывают характерные наследственные нарушения. Фибриллы
AfibA образуют отложения, характерные для наследственной церебральной амилоидной ангиопатии,
обнаруженной в Исландии (Isselbacher, Harrison's Principles of Internal Medicine, McGraw-Hill, San Francisco, 1995; Benson et al.). Показано, что, по меньшей мере, в нескольких случаях у пациентов с церебральной амилоидной ангиопатией (САА) имеются амилоидные фибриллы, содержащие немутантную
форму цистатина С, связанную с β-амилоидным белком (Nagai, A., et al. Molec. Chem. Neuropathol. 33:
63-78, 1998).
В настоящее время считают, что некоторые формы прионного заболевания, которые ранее полагали
преимущественно инфекционными по своей природе, являются наследственными, насчитывающими до
15% случаев. (Baldwin, et al., в Research Advances in Alzheimer Disease and Related Disorders, John Wiley
and Sons, New York, 1995). При наследственных и случайных (спорадических) прионных заболеваниях у
больных появляются бляшки, состоящие из аномальных изоформ нормального прионного белка (PrPSc).
Преимущественная мутантная изоформа, PrPSc, также называемая AScr, отличается от нормального
клеточного белка своей резистентностью к расщеплению протеазой, нерастворимостью после экстракции
детергентом, отложением во вторичных лизосомах, посттрансляционным синтезом и высоким содержанием β-складок. Генетическая связь установлена по меньшей мере для пяти мутаций, вызывающих болезнь Крейтцфельда-Якоба (CJD), синдром Герстманна-Штреусслера-Шейнкера (GSS) и летальную семейную бессонницу (FFI). (Baldwin, см. выше). Способы извлечения фибриллярных пептидов из фибрилл скрепи, определение последовательностей и получение таких пептидов известны в технике (например, Beekes, M., et al. J. Gen. Virol. 76: 2567-76, 1995).
Например, одна форма GSS связана с PrP мутацией в кодоне 102, тогда как GSS конечного мозга
- 10 -
012429
отличается мутацией в кодоне 117. Мутации в кодонах 198 и 218 приводят к появлению формы GSS, при
которой нейритные бляшки, характерные для болезни Альцгеймера, содержат PrP вместо Aβ-пептида.
Некоторые формы семейной CJD ассоциируются с мутациями в кодонах 200 и 210; мутации в кодонах
129 и 178 обнаружены как при семейной CJD, так и при FFI (Baldwin, см. выше).
Церебральный амилоидоз (Амилоидоз мозга).
Локальное отложение амилоида обычно встречается в мозге, в частности, у людей старшего возраста. Наиболее часто встречающийся тип амилоида в мозге состоит, главным образом, из Аβ-пептидных
фибрилл, которые вызывают деменцию или спорадическую (случайную, ненаследственную) болезнь
Альцгеймера. Наиболее часто встречаются случаи спорадического, а не наследственного церебрального
амилоидоза. Например, частота случайной болезни Альцгеймера и случайной САА значительно превышает частоту семейной AD и семейной САА. Кроме того, случайные и семейные формы заболевания
нельзя отличить друг от друга (они отличаются только наличием или отсутствием наследственной генетической мутации); например, клинические симптомы и амилоидные бляшки, образующиеся как при
случайной, так и при семейной AD, очень похожи, если не идентичны.
Церебральная амилоидная ангиопатия (САА) относится к специфичному отложению амилоидных
фибрилл на стенках лептоменингеальной и кортикальной артерий, артериол и вен. Ее обычно ассоциируют с болезнью Альцгеймера, синдромом Дауна и обычным старением, а также с рядом семейных состояний, связанных с ударом или деменцией (см. Frangione et al., Amiloid: J. Protein Folding Disord. 8,
Suppl. 36-42 (2001)). САА может быть спорадической (случайной) или семейной.
Старческий (сенильный) системный амилоидоз.
Амилоидные отложения, либо системные, либо очаговые, увеличиваются с возрастом. Например,
фибриллы транстиретина (TTR) дикого типа обычно обнаруживают в тканях сердца старых людей. Они
могут быть бессимптомными, клинически скрытыми, или могут вызывать сердечную недостаточность.
Бессимптомные фибриллярные очаговые отложения могут находиться в мозге (Аβ), крахмалистом теле
простаты (β2-микроглобулин), суставах и семенных пузырьках.
Диализный амилоидоз.
Бляшки, состоящие из фибрилл β2-микроглобулина (β2М), обычно появляются у пациентов, проходящих длительный курс гемодиализа или перитонеального диализа. β2-микроглобулин представляет собой полипептид длиной 11,8 кДа и является легкой цепью антигенов класса I MHC, которые присутствуют во всех ядерных клетках. В нормальных обстоятельствах β2М обычно находится во внеклеточном
пространстве, если нет почечной недостаточности, в этом случае β2М переносится в ткани, где он полимеризуется с образованием амилоидных фибрилл. Недостаточный клиренс, как в случае почечной недостаточности, приводит к отложению в запястном туннеле и других местах (главным образом, в богатых
коллагеном тканях суставов). В отличие от других фибриллярных белков молекулы β2М не продуцируются при расщеплении более протяженного белка-предшественника и обычно присутствуют в нефрагментированной форме в фибриллах. (Benson, см. выше). Показано, что сохранение и аккумуляция этого
амилоидного белка-предшественника является основным патогенным процессом, лежащим в основе
DRA. DRA характеризуется остеоартропатией периферических суставов (например, тугоподвижностью
суставов, болью, опуханием и т.д.). Изоформы β2М, гликированный β2М или полимеры β2М в ткани являются наиболее амилоидогенной формой (в противоположность нативному β2М). В отличие от других
типов амилоидоза β2М в основном ограничивается костно-суставными тканями. Висцеральные отложения наблюдаются редко. Изредка эти отложения могут находиться в кровеносных сосудах и других важных анатомических положениях.
Несмотря на усовершенствованные с точки зрения удаления β2М методы диализа, у большинства
пациентов наблюдаются высокие концентрации β2М в плазме, которые остаются значительно выше нормы. Эти повышенные концентрации β2М обычно вызывают диабетический амилоидоз (DRA) и сопутствующее распространение заболевания, ведущее к смерти.
Островковый амилоидный полипептид и диабет.
Гиалиноз островков (амилоидное отложение) описан впервые более века назад как присутствие агрегатов фиброзного белка в поджелудочной железе больных тяжелой гипергликемией (Opie, E.L., J. Exp.
Med. 5: 397-428, 1901). В настоящее время островковый амилоид, состоящий преимущественно из островкового амилоидного полипептида (IAPP), или амилина, является характерным гистопатологическим
маркером более чем в 90% случаев диабета типа II (также известного как инсулиннезависимый диабет,
или NIDDM). Эти фибриллярные скопления возникают в результате агрегации островкового амилоидного полипептида (IAPP), или амилина, который представляет собой пептид из 37 аминокислот, образующийся из более протяженного пептида-предшественника, называемого (про)Pro-IAPP.
IAPP секретируется вместе с инсулином в ответ на стимуляторы секреции β-клетками. Этот патологический признак не ассоциирован с инсулинзависимым (типа I) диабетом и является общим (объединяющим) характерным признаком для гетерогенных клинических фенотипов, диагностированных как
NIDDM.
Продолжительные исследования на кошках и иммуноцитохимические исследования на обезьянах
- 11 -
012429
показали, что прогрессирующее увеличение островкового амилоида связано с резким уменьшением популяции секретирующих инсулин β-клеток и увеличивает тяжесть заболевания. Позднее трансгенные
исследования подтвердили связь между образованием IAPP бляшек и апоптозом β-клеток и дисфункцией, это показывает, что амилоидное отложение является главным фактором, определяющим повышение
тяжести диабета типа II.
Также было показано, что IAPP индуцирует токсичность островковых β-клеток in vitro, указывая,
что появление IAPP фибрилл в поджелудочной железе больных диабетом типа II и типа I (посттрансплантация островков) может способствовать утрате островковых β-клеток (Лангерганса) и дисфункции
органа. У больных диабетом типа II накопление IAPP в поджелудочной железе вызывает образование
олигомерного IAPP, приводя к созданию IAPP-амилоида в виде нерастворимых отложений, которые в
конечном счете разрушают продуцирующие инсулин β-клетки островков, вызывая истощение и недостаточность β-клеток. (Westermark, P., Grimelius, L., Ada Path. Microbiol. Scand., sect. A. 81: 291-300, 393; de
Koning, EJP., et al., Diabetologia 36: 378-384, 1993; и Lorenzo, A., et al., Nature 368: 756-760, 1994). Аккумуляция IAPP в виде фиброзных отложений также может оказывать влияние на обычное отношение проIAPP к IAPP в плазме, повышая это отношение за счет попадания (захвата) IAPP в отложения. Уменьшение массы β-клеток может проявляться в виде гипергликемии и инсулинемии. Эта потеря массы β-клеток
может привести к необходимости лечения инсулином.
Заболевания, вызванные гибелью или недостаточным функционированием конкретного типа или
конкретных типов клеток, можно лечить трансплантацией пациенту здоровых клеток релевантного типа.
Этот метод был использован для лечения больных диабетом типа I. Часто островковые клетки поджелудочной железы донора выращивают in vitro перед трансплантацией для того, чтобы использовать их после выделения для лечения, или для того, чтобы уменьшить их иммуногенность. Однако во многих случаях трансплантация островковых клеток не является успешной вследствие гибели трансплантированных
клеток. Одной из причин такого малой доли успешных попыток является IAPP, который объединяется в
токсические олигомеры. Токсическое действие может возникать вследствие внутриклеточной и внеклеточной аккумуляции фибриллярных олигомеров. Олигомеры IAPP могут образовывать фибриллы и становиться токсическими в отношении клеток in vitro. Кроме того, IAPP фибриллы, по-видимому, продолжают расти после трансплатации клеток и вызывают гибель или дисфункцию клеток. Это может происходить даже когда в клетках здорового донора и у получающего трансплантат пациента не наблюдается
болезнь, характеризующаяся присутствием фибрилл. Например, соединения по настоящему изобретению
можно использовать для получения тканей или клеток для трансплантации по методу, описанному в международной заявке (РСТ) WO 01/003680.
Соединения по изобретению могут также стабилизировать отношение концентраций ProIAPP/IAPP, проинсулин/инсулин и уровни С-пептида. Помимо этого, в качестве биологических маркеров
эффективности, результатов различных тестов, таких как тест секреции аргинина-инсулина, тест переносимости глюкозы и тесты чувствительности, все могут использоваться в качестве маркеров пониженной
массы β-клеток и/или аккумуляции амилоидных отложений. Такой класс лекарственных препаратов
можно использовать вместе с другими лекарственными веществами, нацеленными на резистентность к
инсулину, продуцирование печеночной глюкозы. Такие соединения могут предупреждать терапию инсулином, сохраняя функцию β-клеток, и могут применяться для сохранения трансплантантов островков.
Амилоидоз гормонального происхождения.
Эндокринные органы могут накапливать амилоидные отложения, в особенности у старых людей.
Опухоли, секретирующие гормоны, могут также содержать амилоидные бляшки гормонального происхождения, фибриллы которых состоят из полипептидных гормонов, таких как кальцитонин (медуллярный рак щитовидной железы), предсердный натриуретический пептид (выделенный амилоидоз предсердий). Последовательности и структуры этих белков хорошо известны в уровне техники.
Смешанный амилоидоз.
Существует множество других форм амилоидного заболевания, которые обычно проявляются как
локализованные отложения амилоида. Эти заболевания являются результатом, главным образом, локализованным продуцированием или отсутствием катаболизма конкретных фибриллярных предшественников
или предрасположением конкретной ткани (такой как суставная) к фибриллярному отложению. Примеры
такого идиопатического отложения включают узелковый AL амилоид, кожный амилоид, эндокринный
амилоид и амилоид, связанный с опухолью. Другие заболевания, связанные с амилоидом, включают заболевания, описанные в табл. 1, такие как семейная амилоидная полинейропатия (FAP), старческий (сенильный) системный амилоидоз, тендовагинит, семейный амилоидоз, типа Остертаг, ненейропатический
амилоидоз, краниальную нейропатию, наследственную церебральную геморрагию, семейную деменцию,
хронический диализ, семейную болезнь Крейтцфельда-Якоба; синдром Герстманна-ШтреусслераШейнкера, наследственный губчатый энцефалит, прионные заболевания, семейную средиземноморскую
лихорадку, синдром Макла-Уэльса, нефропатию, глухоту, крапивницу, боль в конечностях, кожные отложения, множественную миелому, доброкачественную моноклональную гаммапатию, макроглобулинемию, амилоидоз, обусловленный миеломой, медуллярный рак щитовидной железы, изолированный ами- 12 -
012429
лоидоз предсердий и диабет.
Соединения по изобретению можно применять терапевтически или профилактически для лечения
заболеваний, ассоциированных с образованием, агрегацией или отложением амилоидных фибрилл, вне
зависимости от клинической картины. Соединения по изобретению могут облегчать течение амилоидного заболевания по любому из приведенных ниже механизмов, но без ограничения: замедление скорости
образования или отложения амилоидных фибрилл; уменьшение степени амилоидного отложения;
уменьшение степени амилоидного образования; ингибирование, уменьшение или предупреждение образования амилоидных фибрилл; ингибирование воспаления, индуцированного амилоидом; повышение
клиренса амилоида, например, из мозга; или защита клеток от индуцированной амилоидом (олигомерным или фибриллярным) токсичности.
В одном варианте изобретения соединения по изобретению можно применять терапевтически или
профилактически для лечения заболеваний, ассоциированных с образованием, агрегацией или отложением β-амилоидных фибрилл. Соединения по изобретению могут облегчать течение заболевания, связанного с β-амилоидом, по любому из приведенных ниже механизмов (предполагается, что этот перечень является иллюстративным и не лимитирующим): замедление скорости образования или отложения βамилоидных фибрилл; уменьшение степени β-амилоидного отложения; ингибирование, уменьшение или
предупреждение образования β-амилоидных фибрилл; ингибирование нейродегенерации или клеточной
токсичности, вызванной β-амилоидом; ингибирование воспаления, индуцированного β-амилоидом; повышение клиренса β-амилоида из мозга; или содействие расщеплению (разрушению) Аβ.
Соединения по изобретению могут быть эффективны при контроле β-амилоидного отложения либо
после их проникновения в мозг (после прохождения через гематоэнцефалический барьер), либо с периферии. При действии с периферии соединение может изменять равновесие Аβ между мозгом и плазмой
таким образом, чтобы содействовать удалению Аβ из мозга. Увеличение выхода Аβ из мозга приводит к
понижению концентрации Аβ в мозге и, следовательно, способствует уменьшению Аβ отложения. Кроме
того, соединения, которые проникают в мозг, могут регулировать отложение, действуя непосредственно
на Аβ в мозге, например, сохраняя его в нефибриллярной форме или способствуя его клиренсу из мозга.
Соединения могут замедлять процессирование АРР; могут увеличивать расщепление при использовании
макрофагов или нейронных клеток; или могут снижать продуцирование Аβ активированной микроглией.
Эти соединения могли бы также предупреждать взаимодействие Аβ в мозге с клеточной поверхностью и,
следовательно, предупреждать нейротоксичность, нейродегенерацию и воспаление.
В предпочтительном варианте изобретения применяется способ лечения болезни Альцгеймера (например, спорадической или семейной AD). Способ также можно применять профилактически или терапевтически для лечения других клинических случаев β-амилоидного отложения, таких как у больных с
синдромом Дауна и у больных церебральной амилоидной ангиопатией ("САА") или у больных с наследственной церебральной геморрагией, или больных ранней болезнью Альцгеймера.
В другом варианте изобретения применяют способ лечения легкой когнитивной недостаточности.
Легкая когнитивная недостаточность ("MCI") представляет собой состояние, характеризующееся легкой,
но заметной утратой мыслительных способностей, которая необязательно связана с наличием деменции.
MCI часто, но не всегда, предшествует болезни Альцгеймера.
Кроме того, аномальная аккумуляция АРР и β-амилоидного белка в мышечных волокнах влечет за
собой патологию случайного миозита телец включений (IBM) (Askanas et al., Pros. Natl. Acad. Sci. USA
93, 1314-1319 (1996); Askanas et al., Current Opinion in Rheumathology 7, 486-496 (1995)). Соответственно,
соединения по изобретению можно применять профилактически или терапевтически при лечении нарушений, при которых β-амилоидный белок аномально отлагается в ненейрологических участках, например, для лечения IBM доставкой соединений к мышечным волокнам.
Кроме того, было показано, что Аβ ассоциируется с аномальными внеклеточными отложениями,
известными как друзы, которые аккумулируются вдоль базальной поверхности ретинального пигментированного эпителия у субъектов со старческой дегенерацией желтого пятна (ARMD). ARMD является
причиной необратимой потери зрения у людей старшего возраста. Полагают, что отложение Аβ может
являться важным компонентом локальных воспалительных событий, которые способствуют атрофии
ретинального пигментированного эпителия, биогенезу друз и патогенезу AMD (Johnson, et al., Pros. Natl.
Acad. Sci. USA 99(18), 11830-5 (2002)).
В другом варианте изобретение относится к способу лечения или предупреждения амилоидного заболевания у субъекта (предпочтительно, у человека), заключающемуся в введении субъекту терапевтического количества соединения по нижеприведенным формулам или иным образом представленного в
данном описании, так что уменьшается или ингибируется образование или отложение фибрилл, нейродегенерация или клеточная токсичность. В другом варианте изобретение относится к способу лечения или
предупреждения амилоидного заболевания у субъекта (предпочтительно, у человека), заключающемуся в
введении субъекту терапевтического количества соединения по нижеприведенным формулам или иным
образом представленного в данном описании, так что у пациентов с амилоидозом мозга, например, у
- 13 -
012429
больных болезнью Альцгеймера, синдромом Дауна или церебральной амилоидной ангиопатией, когнитивная функция повышается или стабилизируется или дальнейшее ухудшение когнитивной функции
предупреждается, замедляется или прекращается. Эти соединения могут также повысить качество повседневной жизни этих субъектов.
Терапевтические соединения по изобретению могут лечить амилоидоз, связанный с диабетом типа
II, например, стабилизируя гликемию, предупреждая или уменьшая потерю β-клеточной массы, снижая
или предупреждая гипергликемию вследствие потери β-клеточной массы, и модулируя (например, повышая или стабилизируя) продуцирование инсулина. Соединения по изобретению могут также стабилизировать отношение концентраций про-IAPP/IAPP.
Терапевтические соединения по изобретению могут лечить АА (вторичный) амилоидоз и/или AL
(первичный) амилоидоз, стабилизируя почечную функцию, снижая протеинурию, повышая клиренс
креатинина (например, по меньшей мере на 50% и более или по меньшей мере на 100% и более), способствуя ремиссии хронической диареи или прибавке в весе (например, на 10% или более) или снижая сывороточный креатинин. Можно также уменьшить висцеральное содержание амилоида, определяемое,
например, SAP сцинтиграфией.
Соединения по изобретению
Настоящее изобретение относится, по меньшей мере частично, к применению некоторых химических соединений (и их фармацевтических препаратов) для предупреждения или лечения амилоидных
заболеваний, включая, среди прочего, болезнь Альцгеймера, церебральную амилоидную ангиопатию,
миозит телец включений, синдром Дауна, амилоидоз, связанный с диабетом, амилоидоз, связанный с
гемодиализом (β2М), первичный амилоидоз (например, связанный с λ- или κ-цепью), семейную амилоидную полинейропатию (FAP), старческий (сенильный) системный амилоидоз, семейный амилоидоз,
типа Остертаг ненейропатический амилоидоз, краниальную нейропатию, наследственную церебральную
геморрагию, семейную деменцию, хронический диализ, семейную болезнь Крейтцфельда-Якоба; синдром Герстманна-Штреусслера-Шейнкера, наследственный губчатый энцефалит, прионные заболевания,
семейную средиземноморскую лихорадку, синдром Макла-Уэльса, нефропатию, глухоту, крапивницу,
боль в конечностях, кардиомиопатию, кожные отложения, множественную миелому, доброкачественную
моноклональную гаммапатию, макроглобулинемию, амилоидоз, обусловленный миеломой, медуллярный
рак щитовидной железы и изолированный амилоидоз предсердий.
Химические структуры по данному описанию изображены в соответствии с известными в технике
стандартами. Поскольку атом, такой как углеродный атом, так как он изображен, имеет недостающую
валентность, предполагается, что эта валентность связана с водородом, даже если этот атом водорода не
обязательно изображен. Структуры некоторых соединений по данному изобретению включают стереогенные атомы углерода. Следует отдавать отчет, что изомеры, возникающие вследствие такой асимметрии (например, все энантиомеры и диастереомеры), входят в объем настоящего изобретения, если не указано иначе. Т.е., если не указано иначе, любой хиральный углеродный центр может иметь либо (R)-, либо
(S)-стереохимию. Такие изомеры можно получать в практически чистом виде классическими методами
разделения или с помощью стереохимически контролируемого синтеза. Кроме того, когда это целесообразно, алкены могут иметь либо Е-, либо Z-геометрию. Помимо этого, соединения по настоящему изобретению могут существовать в несольватированной, а также в сольватированной с помощью соответствующих растворителей, таких как вода, ТГФ, этанол и т.п., форме. В целом сольвагированные формы
считаются эквивалентными несольватированным формам для целей настоящего изобретения.
Термин "малая молекула" относится к соединению, которое, само по себе, не является продуктом
генной транскрипции или трансляции (например, белком, РНК или ДНК) и предпочтительно имеет низкую молекулярную массу, например менее примерно 2500 а.е.м.
Термин "нуклеофил" является обычно общепринятым в технике термином для обозначения химической группы, содержащей реакционноспособную пару электронов, которая реагирует с соединением,
замещая уходящую группу (обычно другой нуклеофил), как это обычно происходит в химии алифатических соединений по мономолекулярному (известному как "SN1") или бимолекулярному ("SN2") механизму. Примеры нуклеофилов включают не несущие заряд соединения, такие как амины, меркаптаны и
спирты, и группы, имеющие заряд, такие как алкоксиды, тиолаты, карбанионы и ряд органических и неорганических анионов. Примеры анионных нуклеофилов включают, среди прочих, простые анионы, такие как азид, цианид, тиоцианат, формиат или хлорформиат и бисульфит. Металлоорганические реагенты, такие как медьорганические, цинкорганические, литийорганические соединения, реагенты Гриньяра,
еноляты и ацетилиды, которые в соответствующих условиях являются подходящими нуклеофилами.
Аналогично, термин "электрофил" означает атом, молекулу или ион, способные принимать электронную пару, в частности пару электронов от нуклеофила, как это обычно происходит в реакции электрофильного замещения. В реакции электрофильного замещения электрофил связывается с субстратом с
удалением другого электрофила, например, замещение протона на другой электрофил, такой как ион
нитрония, в ароматическом субстрате (например, бензоле). Электрофилы включают циклические соединения, такие как эпоксиды, азиридины, эписульфиды, циклические сульфаты, карбонаты, лактоны и лак- 14 -
012429
тамы; а нециклические электрофилы включают сульфаты, сульфонаты (например, тозилаты), хлориды,
бромиды и йодиды. Электрофил, как правило, может быть насыщенным углеродным атомом (например,
метиленовая группа), связанным с уходящей группой; однако, электрофил может также быть ненасыщенной группой, такой как альдегидная, кето-, сложноэфирная группа, или их сопряженный (α,βненасыщенный) аналог, который при реакции с нуклеофилом образует аддукт.
Термин "уходящая группа", как правило, относится к группе, которая легко вытесняется и замещается нуклеофилом (например, амином, тиолом, спиртом или цианидом). Такие уходящие группы общеизвестны и включают карбоксилаты, N-гидроксисукцинимид ("NHS"), N-гидроксибензотриазол, галоген
(фтор, хлор, бром или йод), алкоксиды и тиоалкоксиды. Обычно в химическом синтезе используют ряд
серосодержащих уходящих групп, включая алкансульфонилоксигруппы (например, C1-C4-алкан, такие
как метансульфонилокси-, этансульфонилокси-, пропансульфонилокси- и бутансульфонилоксигруппы) и
галогенированные аналоги (например, галогенов(C1-C4-алкан)сульфонилоксигруппы, такие как трифторметансульфонилокси- (т.е. трифлат), 2,2,2-трихлорэтансульфонилокси-, 3,3,3-трибромпропансульфонилокси- и 4,4,4-трифторбутансульфонилоксигруппы), а также арилсульфонилоксигруппы (например,
C6-C10-арил, необязательно замещенный 1-3 C1-C4-алкильными группами, такие как бензолсульфонилокси-, α-нафтилсульфонилокси-, β-нафтилсульфонилокси-, п-толуолсульфонилокси- (т.е. тозилаты), 4-третбутилбензолсульфонилокси-, мезитиленсульфонилокси- и 6-этил-α-нафтилсульфонилоксигруппы).
"Активированные сложные эфиры" можно представить формулой -COL, где L обозначает уходящую группу, типичные примеры которой включают N-гидроксисульфосукцинимидильная и Nгидроксисукцинимидильная группы; группы, замещенные электроноакцепторными группами (например,
п-нитро, пентафтор, пентахлор, п-циано или п-трифторметил); и карбоновые кислоты, активированные
карбодиимидом с образование ангидрида или смешанного ангидрида, например, -OCORa или OCNRaNHRb, где Ra и Rb, независимо, обозначают C1-C6-алкильная, C5-C8-алкильная (например, циклогексильная), C1-C6-перфторалкильная или C1-C6-алкоксильная группы. Активированный сложный эфир
можно получать in situ или может быть отдельным реагентом. Сульфосукцинимидиловые сложные эфиры, пентафтортиофеноловые сложные эфиры и сульфотетрафторфеноловые сложные эфиры являются
предпочтительными активированными сложными эфирами. Однако сложноэфирной уходящей группой
может быть, например, замещенная или незамещенная C1-C6-алкильная (такая как метильная, этильная,
пропильная, изопропильная, бутильная, изобутильная, втор-бутильная, трет-бутильная, пентильная или
гексильная) группа, или замещенная C6-C14-арильная или гетероциклическая группа, такая как 2фторэтильная, 2-хлорэтильная, 2-бромэтильная, 2,2-дибромэтильная, 2,2,2-трихлорэтильная, 3фторпропильная, 4-хлорбутильная, метоксиметильная, 1,1-диметил-1-метоксиметильная, этоксиметильная, N-пропоксиметильная, изопропоксиметильная, N-бутоксиметильная, трет-бутоксиметильная, 1этоксиэтильная, 1-метил-1-метоксиэтильная, 1-(изопропокси)этильная, 3-метоксипропил-4-метоксибутильная, фторметоксиметильная, 2,2,2-трихлорэтоксиметильная, бис-(2-хлорэтокси)метильная, 3фторпропоксиметильная, 4-хлорбутоксиэтильная, дибромметоксиэтильная, 2-хлорэтоксимпропильная,
фторметоксибутильная, 2-метоксиэтоксиметильная, этоксиметоксиэтильная, метоксиэтоксипропильная,
метоксиэтоксибутильная, бензильная, фенетильная, 3-фенилпропильная, 4-фенилбутильная, αнафтилметильная, β-нафтилметильная, дифенилметильная, трифенилметильная, α-нафтилдифенилметильная, 9-антранилметильная, 4-метилбензильная, 2,4,6-триметилбензильная, 3,4,5-триметилбензильная, 4-метоксибензильная, 4-метоксифенилдифенилметильная, 2-нитробензильная, 4-нитробензильная, 4-хлорбензильная, 4-бромбензильная, 4-цианобензильная, 4-цианобензилдифенилметильная
или бис-(2-нитрофенил)метильная группы.
Термин "электроноакцепторная группа" является общепринятой в уровне техники и описывает способность заместителя оттягивать на себя валентные электроны (например, π (пи) электроны) от соседних
атомов, например, заместитель является более электроотрицательным, чем соседние атомы, или он оттягивает на себя электроны сильнее, чем атом водорода в том же самом положении. Величина константы
Гаммета сигма (σ) является общепринятой мерой электронодонорной и электроноакцепторной способности группы, особенно значение сигма пара (σр). См., например, "Advanced Organic Chemistry" by J. March,
5th Ed., John Wiley & Sons, Inc., New York, pp.368-75 (2001). Значения константы Гаммета обычно отрицательны для электронодонорных групп (σр=-0,66 для NH2) и положительны для электроноакцепторных
групп (σр=0,78 для нитрогруппы), причем σр указывает на замещение в пара-положении. Примеры электроноакцепторных групп включают, среди прочих, нитро, ацильную (кетон), формильную (альдегид),
сульфонильную, трифторметильную, галогено (например, хлор или фтор) и цианогруппы. Напротив,
"электронодонорная группа" обозначает заместитель, который отдает электроны легче, чем водород, в
случае, если он занимает то же самое положение в молекуле. Примеры включают, среди прочих, амино
(включая алкиламино и диалкиламино), арильную, алкокси (включая аралкокси), арилокси, меркапто и
алкилтио и гидроксильные группы.
Применяемое в данном описании понятие "арильные" группы включает насыщенные углеводороды, содержащие один или более углеродный атом, включая линейные алкильные группы (например, метильную, этильную, пропильную, бутильную, пентильную, гексильную, гептильную, октальную, но- 15 -
012429
нильную, децильную и т.д.), циклические алкильные группы (или "циклоалкильные", или "алициклические", или "карбоциклические" группы) (например, циклопропильную, циклопентильную, циклогексильную, циклогептильную, циклооктильную и т.д.), разветвленные алкильные группы (изопропильную,
трет-бутильную, втор-бутильную, изобутильную и т.д.) и алкилзамещенные алкильные группы (например, алкилзамещенные циклоалкильные группы и циклоалкилзамещенные алкильные группы). Термин
"алифатическая группа" включает органические частицы (фрагменты), для которых характерны линейные или разветвленные цепи, содержащие, как правило, 1-22 атома углерода. В сложных структурах цепи могут быть разветвленными, мостиковыми или сшитыми.
Алифатические группы включают алкильные группы, алкенильные группы и алкинильные группы.
В некоторых вариантах изобретения линейная или разветвленная алкильная группа может содержать в основной цепи 30 или меньше углеродных атомов, например C1-C30 для линейной цепи или C3-C30
для разветвленной цепи. В некоторых вариантах изобретения линейная или разветвленная алкильная
группа может содержать 20 или менее углеродных атомов в основной цепи, например C1-C20 для линейной цепи или C3-C20 для разветвленной цепи, и более предпочтительно 18 углеродных атомов или менее.
Аналогично, предпочтительные циклоалкильные группы содержат 4-10 углеродных атомов в циклической структуре и более предпочтительно 4-7 углеродных атомов в циклической структуре. Термин "низший алкил" относится к алкильным группам, содержащим 1-6 углеродных атомов в цепи, и к циклоалкильным группам, содержащим 3-6 углеродных атомов в циклической структуре.
Если число углеродных атомов иначе не указано, "низший", как в "низший алифатический", "низший алкил", "низший алкенил" и т.д., по данному описанию означает, что группа (фрагмент) содержит
по меньшей мере один и примерно менее 8 углеродных атомов. В некоторых вариантах изобретения линейная или разветвленная низшая алкильная группа содержит 6 или менее углеродных атомов в основной цепи (например, C1-C6 для линейной цепи, C3-C6 для разветвленной цепи) и более предпочтительно 4
или менее. Аналогично, предпочтительные циклоалкильные группы содержат 3-8 углеродных атомов в
циклической структуре и более предпочтительно 5-6 углеродных атомов в циклической структуре. Термин "C1-C6", как в "C1-C6-алкил", означает алкильные группы, содержащие 1-6 углеродных атомов.
Кроме того, если не указано иначе, термин "алкил" включает как "незамещенные алкилы", так и
"замещенные алкилы", последний термин относится к алкильным группам, содержащие заместители,
замещающие один или более атомов водорода при одном или более углеродных атомов в основной цепи
углеводорода. Такие заместители могут включать, например, алкенильную, алкинильную, галогено, гидроксильную группы, алкилкарбонилокси, арилкарбонилокси, алкоксикарбонилокси, арилокси, арилоксикарбонилокси, карбоксилатную, алкилкарбонильную, арилкарбонильную, алкоксикарбонильную, аминокарбонильную, алкиламинокарбонильную, диалкиламинокарбонильную, алкилтиокарбонильную, алкоксильную, фосфатную, фосфонато, фосфинато, циано, амино (включая алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино и алкилариламино), ациламино (включая алкилкарбониламино, арилкарбониламино, карбамоил и уреидо), имино, сульфгидрильную, алкилтио, арилтио, тиокарбоксилатную, сульфатную
алкилсульфинил, сульфонато, сульфамоил, сульфонамидо, нитро, трифторметильную, циано, азидо, гетероциклическую, алкиларильную или ароматическую (включая гетероароматическую) группы.
"Арилалкильная" группа обозначает алкильную группу, замещенную арильной группой (например,
фенилметильной (т.е. бензильной)). "Алкиларильная" группа обозначает арильную группу, замещенную
алкильной группой (например, п-метилфенильной (т.е. п-толильной)). Термин "н-алкил" означает линейную (т.е. неразветвленную) незамещенную алкильную группу. "Алкиленовая" группа обозначает двухвалентный аналог соответствующей алкильной группы. Термины "алкенил" и "алкинил" относятся к ненасыщенным алифатическим группам, аналогичным алкила, но содержащим по меньшей мере одну двойную или тройную углерод-углеродную связь, соответственно. Соответствующие алкенильная и алкинильная группы включают группы, содержащие около 2-12 углеродных атомов, предпочтительно от 2
примерно до 6 углеродных атомов.
Термин "ароматическая группа" или "арильная группа" включает ненасыщенные и ароматические
циклические углеводороды, а также ненасыщенные и ароматические гетероциклы, содержащие один или
более циклов. Арильные группы могут быть также конденсированными или мостиковыми с алициклическими или гетероциклическими циклами, которые не являются ароматическими, так что образуется полициклическая система (например, тетралин). "Ариленовая" группа является двухвалентным аналогом
арильной группы. Арильные группы могут быть также конденсированными или мостиковыми с алициклическими или гетероциклическими циклами, которые не являются ароматическими, так что образуется
полициклическая система (например, тетралин).
Термин "гетероциклическая группа" включает замкнутые циклические структуры, аналогичные
карбоциклическим группам, в которых один или более углеродных атомов в цикле представляет собой
иной атом, нежели углеродный, например, атом азота, серы или кислорода. Гетероциклические группы
могут быть насыщенными или ненасыщенными. Кроме того, гетероциклические группы (такие как пирролил, пиридил, изохинолил, хинолил, пуринил и фурил) могут иметь ароматический характер, в этом
случае их можно называть "гетероарильная" или "гетероароматическая" группы.
Если не указано иначе, арильная и гетероциклическая группы (включая гетероарильную) могут
- 16 -
012429
также быть замещенными по одному или более структурных атомов. Примеры гетероароматических и
гетероалициклических групп могут содержать 1-3 раздельных или конденсированных цикла с 3-8 членами в цикле и один или более гетероатом N, О или S. Обычно термин "гетероатом" включает иные атомы,
нежели атомы углерода и водорода, предпочтительные примеры гетероатомов включают азот, кислород,
серу или фосфор. Гетероциклические группы могут быть насыщенными, или ненасыщенными, или ароматическими.
Примеры гетероциклов включают, но без ограничения, акридинил; азоцинил; бензимидазолил; бензофуранил; бензотиофуранил; бензотиофенил; бензоксазолил; бензотиазолил; бензотриазолил; бензотетразолил; бензизоксазолил; бензизотиазолил; бензимидазолинил; карбазолил; 4аН-карбазолил; карболинил; хроманил; хроменил; циннолинил; декагидрохинолинил; 2Н,6Н-1,5,2-дитиазинил; дигидрофуро[2,3b]тетрагидрофуран; фуранил; фуразанил; имидазолидинил; имидазолинил; имидазолил; 1Н-имидазолил;
индоленил; индолинил; индолизинил; индолил; 3Н-индолил; изобензофуранил; изохроманил; изоиндазолил; изоиндолинил; изоиндолил; изохинолинил; изотиазолил; изоксазолил; метилендиоксифенил; морфолинил; нафтаридинил; октагидроизохинолинил; оксадиазолил; 1,2,3-оксадиазолил; 1,2,4-оксадиазолил;
1,2,5-оксадиазолил; оксалидинил; оксазолил; оксалидинил; пиримидинил; фенантридинил; фенантролинил; феназинил; фенотиазинил; феноксатиинил; феноксазинил; фталазинил; пиперазинил; пиперидонил;
4-пиперидонил; пиперонил; птеридинил; пуринил; пиранил; пиразолидинил; пиразолинил; пиразолил;
пиридазинил; пиридоксазол; пиридоимидазол; пиридотиазол; пиридинил; пиридил; пиримидинил; пирролидинил; пирролинил; 2Н-пирролил; пирролил; хиназолинил; хинолинил; 4Н-хинолизинил; хиноксалинил; хинуклидинил; тетрагидрофуранил; тетрагидроизохинолинил; тетрагидрохинолинил; тетразолил;
6Н-1,2,5-тиадиазинил; 1,2,3-тиадиазолил; 1,2,4-тиадиазолил; 1,2,5-тиадиазолил; 1,3,4-тиадиазолил; тиантренил; тиазолил; тиенил; тиенотиазолил; тиенооксазолил; тиеноимидазолил; тиофенил; триазинил;
1,2,3-триазолил; 1,2,4-триазолил; 1,2,5-триазолил; 1,3,4-триазолил и ксантенил. Предпочтительные гетероциклы включают, но без ограничения, пиридинильную; фуранильную; тиенильную; пирролильную;
пиразолильную; пирролидинильную; имидазолильную; индолильную; бензимидазолильную; 1Ниндазолильную; оксазолидинильную; бензотриазолильную; бензизоксазолильную; оксиндолильную;
бензоксазолинильную и изатиноильную группы. Также включаются конденсированные циклические и
спиросоединения, содержащие, например, вышеприведенные гетероциклы.
Обычной углеводородной арильной группой является фенильная группа, имеющая один цикл. Бициклические углеводородные арильные группы включают нафтильную, инденильную, бензоциклооктенильную, бензоциклогептенильную, пенталенильную и азуленильную группы, а также их частично гидрированные аналоги, такие как инданил и тетрагидронафтил. Типичные трициклические углеводородные
арильные группы включают ацефтиленильную, флуоренильную, феналенильную, фенантренильную и
антраценильную группы.
Арильные группы также включают гетеромоноциклические арильные группы, т.е. одноциклические
гетероарильные группы, такие как тиенильная, фурильная, пиранильная, пирролильная, имидазолильная,
пиразолильная, пиридинильная, пиразинильная, пиримидинильная и пиридазинильная группы; и их
окисленные аналоги, такие как пиридонильная, оксазолонильная, пиразолонильная, изоксазолонильная и
тиазолонильная группы. Соответствующие гидрированные (т.е. неароматические) гетеромоноциклические группы включают пирролидинильную, пирролинильную, имидазолидинильную, имидазолинильную, пиразолидинильную, пиразолинильную, пиперидильную и пиперидино, пиперазинильную, и морфолино и морфолинильную группы.
Арильные группы также включают бициклические гетероарилы, такие как индолильная, изоиндолильная, индолизинильная, индазолинильная, хинолинильная, изохнолинильная, фталазинильная, хиноксалинильная, хиназолинильная, циннолинильная, хроменильная, изохроменильная, бензотиенильная,
бензимидазолильная, бензотиазолильная, пуринильная, хиназолинильная, изохинолонильная, хинолонильная, нафтиридинильная и птеридинильная группы, а также частично гидрированные аналоги, такие
как хроманильная, изохроманильная, индолинильная, изоиндолинильная и тетрагидроиндолинильная
группы. Арильные группы также включают конденсированные трициклические группы, такие как феноксатиинильная, карбазолильная, фенантридинильная, акридинильная, перимидинильная, фенантролинильная, феназинильная, фенотиазинильная, феноксазинильная и дибензофуранильная группы.
Некоторые типичные арильные группы включают насыщенные или ненасыщенные 5- и 6-членные
моноциклические группы. В другом аспекте каждая Ar группа может выбираться из группы, состоящей
из замещенной или незамещенной фенильной, пирролильной, фурильной, тиенильной, тиазолильной,
изотиазолильной, имидазолильной, тиазолильной, триазолильной, тетразолильной, пиразолильной, оксазолильной, изоксаозолильной, пиридинильной, пиразинильной и пиримидинильной групп. Другие примеры включают замещенные или незамещенные фенильную, 1-нафтильную, 2-нафтильную, бифенильную, 1-пирролильную, 2-пирролильную, 3-пирролильную, 3-пиразолильную, 2-имидазолильную, 4имидазолильную, пиразинильную, 2-оксазолильную, 4-оксазолильную, 5-оксазолильную, 3изоксазолильную, 4-изоксазолильную, 5-изоксазолильную, 2-тиазолильную, 4-тиазолильную, 5тиазолильную, 2-фурильную, 3-фурильную, 2-тиенильную, 3-тиенильную, 2-пиридильную, 3пиридильную, 4-пиридильную, 2-пиримидильную, 4-пиримидильную, 5-бензотиазолильную, пуриниль- 17 -
012429
ную, 2-бензимидазолильную, 5-индолильную, 1-изохинолинильную, 5-изохинолинильную, 2хиноксалинильную, 5-хиноксалинильную, 3-хинолинильную и 6-хинолинильную группы.
Термин "амин" или "амино" по данному описанию относится к незамещенной или замещенной
группе формулы -NRaRb, где Ra и Rb, каждый независимо, обозначают водород, алкил, арил или гетероциклил, или Ra и Rb вместе с атомом азота, с которым они связаны, образуют циклическую группу, содержащую 3-8 атомов в цикле. Таким образом, если не указано иначе, термин "амино" включает циклические аминогруппы, такие как пиперидинильная или пирролидинильная группы. Таким образом, термин "алкиламино" по данному описанию обозначает алкильную группу, содержащую соединенную с ней
аминогруппу. Подходящие алкиламиногруппы включают группы, содержащие от 1 примерно до 12 углеродных атомов, предпочтительно от 1 примерно до 6 углеродных атомов. Термин "амино" включает соединения или группы, в которых атом азота ковалентно связан по меньшей мере с одним углеродным
атомом или гетероатомом. Термин "диалкиламино" включает группы, в которых атом азота связан по
меньшей мере с двумя алкильными группами. Термин "ариламино" и "диариламино" включает группы, в
которых атом азота связан по меньшей мере с одной или двумя арильными группами, соответственно.
Термин "алкилариламино" относится к аминогруппе, которая связана по меньшей мере с одной алкильной группой и по меньшей мере с одной арильной группой. Термин "алкиламиноалкил" относится к алкильной, алкенильной или алкинильной группе, замещенной алкиламиногруппой. Термин "амид" или
"аминокарбонил" включает соединения или группы, которые содержат атом азота, связанный с углеродом карбонильной или тиокарбонильной группы.
Термин "алкилтио" относится к алкильной группе, содержащей соединенную с ней сульфгидрильную группу. Подходящие алкилтиогруппы включают группы, содержащие от 1 примерно до 12 углеродных атомов, предпочтительно от 1 примерно до 6 углеродных атомов.
Термин "алкилкарбоксил" по данному описанию обозначает алкильную группу, содержащую соединенную с ней карбоксильную группу.
Термин "алкокси" по данному описанию означает алкильную группу, содержащую соединенный с
ней атом кислорода. Типичные алкоксигруппы включают группы, содержащие от 1 примерно до 12 углеродных атомов, предпочтительно от 1 примерно до 6 углеродных атомов, например метокси, этокси,
пропокси, трет-бутокси и т.п. Примеры алкоксигрупп включают метокси, этокси, изопропилокси, пропокси, бутокси и пентоксигруппы. Алкоксигруппы могут быть замещены такими группами, как алкенильная, алкинильная, галоген, гидроксильная, алкилкарбонилокси, арилкарбонилокси, алкоксикарбонилокси, арилоксикарбонилокси, карбоксилатная, алкилкарбонильная, арилкарбонильная, алкоксикарбонильная, диалкиламинокарбонильная, алкилтиокарбонильная, алкоксильная, фосфатная, фосфонато,
фосфинато, циано, амино (включая алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино и алкилариламино), ациламино (включая алкилкарбониламино, арилкарбониламино, карбамоил и уреидо), имино,
сульфгидрильная, алкилтио, арилтио, тиокарбоксилат, сульфаты, алкилсульфинильная, сульфонато,
сульфамоил, сульфонамидо, нитро, трифторметильная, циано, азидо, гетероциклильная, алкиларильная
или ароматическая или гетероароматическая группы. Примеры галогензамещенных алкоксигрупп включают, но без ограничения, фторметокси, дифторметокси, трифторметокси, хлорметокси, дихлорметокси,
трихлорметокси и т.д., а также пергалогенированные алкоксигруппы.
Термин "ациламино" включает группы, в которых аминогруппа связана с ацильной группой. Например, ациламиногруппа включает алкилкарбониламино, арилкарбониламино, карбамоильную и уреидогруппы.
Термины "алкоксиалкил", "алкиламиноалкил" и "тиоалкоксиалкил" включают вышеописанные алкильные группы, которые дополнительно включают атомы кислорода, азота или серы, замещающие один
или более углеродных атомов углеводородного скелета.
Термин "карбонил" или "карбокси" включает соединения и группы, которые содержат атом углерода, соединенный двойной связью с атомом кислорода. Примеры групп, которые содержат карбонил,
включают альдегиды, кетоны, карбоновые кислоты, амиды, сложные эфиры, ангидриды и т.д.
Термин "простой эфир" или "эфирный" включает соединения или группы, которые содержат атом
кислорода, соединенный с двумя углеродными атомами. Например, простой эфир или простая эфирная
группа включает "алкоксиалкил", который относится к алкильной, алкенильной или алкинильной группе,
замещенной алкоксигруппой.
"Сульфонатная" группа обозначает группу -SO3H или -SO3-X+, связанную с углеродным атомом, где
+
Х обозначает катионную противоионную группу. Аналогично, "сульфоновая кислота" содержит группу
-SO3H или -SO3-Х+, связанную с углеродным атомом, где X+ обозначает катионную группу. Термин
"сульфат" по данному описанию обозначает группу -OSO3H или -OSO3-X+, связанную с углеродным атомом, а "сульфокислота" обозначает группу -OSO3H или -OSO3-X+, связанную с углеродным атомом, где
Х+ обозначает катионную группу. Согласно данному изобретению подходящей катионной группой может быть атом водорода. В некоторых случаях катионная группа на самом деле может быть иной группой в терапевтическом соединении, которая положительно заряжена при физиологическом pH, например, аминогруппой.
"Противоион" требуется для сохранения нейтрального общего заряда. Примеры анионных противо- 18 -
012429
ионов включают галоген, трифлат, сульфат, нитрат, гидроксид, карбонат, бикарбонат, ацетат, фосфат,
оксалат, цианид, алкилкарбоксилат, N-гидроксисукцинимид, N-гидроксибензотриазол, алкоксид, тиоалкоксид, алкансульфонилокси, галогенированный алкансульфонилокси, арилсульфонилокси, бисульфат,
оксалат, валерат, олеат, пальмитат, стеарат, лаурат, борат, бензоат, лактат, цитрат, малеат, фумарат, сукцинат, тартрат, нафтилат мезилат, глюкогептонат или лактобионат. Соединения, содержащие катионную
группу, ковалентно связанную с анионной группой, можно называть "внутренними солями".
Термин "нитро" обозначает -NO2; термин "галоген" или "галогено", или "галоид" ("гало") обозначает -F, -Cl, -Br или -I; термин "тиол", "тио" или "меркапто" обозначает SH; и термин "гидроксил" или
"гидрокси" обозначает -ОН.
Термин "ацил" относится к карбонильной группе, через свой углеродный атом соединенной с водородом (т.е. формил), алифатической группой (например, ацетил), ароматической группой (например,
бензоил) и т.п. Термин "замещенный ацил" включает группы, в которых один или более атомов водорода
при одном или более углеродных атомов замещены, например, на алкильную группу, алкинильную
группу, галоген, гидроксил, алкилкарбонилокси, арилкарбонилокси, алкоксикарбонилокси, арилоксикарбонилокси, карбоксилат, алкилкарбонил, арилкарбонил, алкоксикарбонил, аминокарбонил, алкиламинокарбонил, диалкиламинокарбонил, алкилтиокарбонил, алкоксил, фосфат, фосфонато, фосфинато, циано,
амино (включая алкиламино, диалкиламино, ариламино, диариламино и алкилариламино), ациламино
(включая алкилкарбониламино, арилкарбониламино, карбамоил и уреидо), имино, сульфгидрил, алкилтио, арилтио, тиокарбоксилат, сульфаты, алкилсульфинил, сульфонато, сульфамоил, сульфонамидо, нитро, трифторметил, циано, азидо, гетероциклил, алкиларил или ароматическую или гетероароматическую
группу.
Если не указано иначе, химические группы (фрагменты) соединений по изобретению, включая
группы, обсуждавшиеся выше, могут быть "замещенными или незамещенными". В некоторых вариантах
изобретения термин "замещенный" означает, что группа имеет заместители, отличные от водорода (т.е. в
большинстве случаев замещают водород), которые содействуют осуществлению молекулой предполагаемой функции. Примеры заместителей включают фрагменты (группы), выбранный из линейного или
разветвленного алкила (предпочтительно, C1-C5), циклоалкила (предпочтительно, C3-C8), алкокси (предпочтительно, C1-C6), тиоалкила (предпочтительно, C1-C6), алкенила (предпочтительно, C2-C6), алкинила
(предпочтительно, C2-C6), гетероцикличеческой, карбоциклической, арильной (например, фенильной)
групп, арилокси (например, фенокси), аралкила (например, бензила), арилоксиалкила (например,
фен(ил)оксиалкила)арилацетамидоила, алкиларила, гетероаралкила, алкилкарбонила и арилкарбонила
или другой подобной ацильной группы, гетероарилкарбонильной и гетероарильной групп, а также
(CR'R")0-3NR'R" (например, NH2), (CR'R")0-3CN (например, -CN), -NO2, галоген (например, -F, -Cl, -Br или
-I), (CR'R")0-3C(галоген)3 (например, -CF3), (CR'R")0-3CH(галоген)2, (CR'R")0-3СН2(галоген), (CR'R")0-3CONR'R",
(CR'R")0-3(CNH)NR'R", (CR'R")0-3S(O)1-2NR'R", (CR'R")0-3CHO, (CR'R")0-3O(CR'R")0-3H, (CR'R")0-3S(O)0-3R'
(например, -SO3H), (CR'R")0-3O(CR'R")0-3H (например, -СН2ОСН3 и -OCH3), (CR'R")0-3S(CR'R")0-3H (например, -SH и -SCH3), (CR'R")0-3OH (например, -ОН), (CR'R")0-3COR', (CR'R")0-3(замещенный или незамещенный фенил), (CR'R")0-3(C3-C8-циклоалкил), (CR'R")0-3CO2R'(например, -СО2Н) и (CR'R")0-3OR' группы, где
R' и R", каждый независимо, обозначает водород, C1-C5-алкильную, C2-C5-алкенильную, C2-C5алкинильную или арильную группу; или боковую цепь любой природной аминокислоты.
В другом варианте изобретения заместитель можно выбирать из линейного или разветвленного алкила (предпочтительно, C1-C5), циклоалкила (предпочтительно, C3-C8), алкокси (предпочтительно, C1C6), тиоалкила (предпочтительно, C1-C6), алкенила (предпочтительно, C2-C6), алкинила (предпочтительно, C2-C6), гетероциклической, карбоциклической, арильной (например, фенильной) групп, арилокси
(например, фенокси), аралкила (например, бензила), арилоксиалкила (например, фен(ил)оксиалкила),
арилацетамидоила, алкиларила, гетероаралкила, алкилкарбонила и арилкарбонила или другой подобной
ацильной группы, гетероарилкарбонильной или гетероарильной групп, а также (CR'R")0-10NR'R" (например, NH2), (CR'R")0-10CN (например, -CN), -NO2, галогена (например, -F, -Cl, -Br или -I), (CR'R")0-10C(галоген)3
(например, -CF3), (CR'R")0-10СН(галоген)2, (CR'R")0-10CH2(галоген), (CR'R")0-10CONR'R", (CR'R")0-10(CNH)NR'R",
(CR'R")0-10S(O)1-2NR'R", (CR'R")0-10CHO, (CR'R")0-10O(CR'R")0-10H, (CR'R")0-10S(O)0-3R' (например, -SO3H),
(CR'R")0-10O(CR'R")0-10H (например, -СН2ОСН3 и -ОСН3), (CR'R")0-10S(CR'R")0-3H (например, -SH и -SCH3),
(CR'R")0-10OH (например, -ОН), (CR'R")0-10COR', (CR'R")0-10(замещенный или незамещенный фенил),
(CR'R")0-10(C3-C8-циклоалкил), (CR'R")0-10CO2R' (например, -CO2H) и (CR'R")0-10OR' группы, или боковой
цепи любой природной аминокислоты; где R' и R", каждый независимо, обозначает водород, C1-C5алкильную, C2-C5-алкенильную, C2-C5-алкинильную или арильную группу, или R' и R" вместе обозначают бензилиденовую группу или -(СН2)2О(СН2)2-группу.
Следует понимать, "замещение" или "замещенный на" включает подразумеваемое условие, что такое замещение осуществляется в соответствии с валентностью замещаемого атома и заместителя и что
замещение в результате приводит к устойчивому соединению, такому, например, которое не претерпевает самопроизвольного превращения, такого как перегруппировка, циклизация, элиминирование и т.д.
Предполагается, что применяемый в данном описании термин "замещенный" включает все допустимые
заместители органического соединения. В широком аспекте допустимые заместители включают ацикли- 19 -
012429
ческие и циклические, разветвленные и неразветвленные, карбоциклические и гетероциклические, ароматические и неароматические заместители органических соединений. Допустимых заместителей может
быть один или более.
В некоторых вариантах изобретения "заместитель" может выбираться из группы, состоящей, например, из C1-C6-алкильной, C2-C6-алкенильной, C2-C6-алкинильной, C1-C6-алкилкарбонилокси, арилкарбонилокси, C1-C6-алкоксикарбонилокси, арилоксикарбонилокси, C1-C6-алкилкарбонильной, C1-C6алкоксикарбонильной, C1-C6-алкокси, C1-C6-алкилтио, арилтио, гетероциклильной, арилалкильной
(включая гетероарильную) групп.
В одном варианте изобретение относится к соединениям формулы (I)
где R1 обозначает замещенный или незамещенный циклоалкил, гетероциклил, арил, арилциклоалкил,
бициклическую или трициклическую группу, конденсированную бициклическую или трициклическую
группу или замещенную или незамещенную C2-C10-алкильную группу;
R2 выбирают из группы, состоящей из водорода, алкила, меркаптоалкила, алкенила, алкинила, циклоалкила, арила, арилалкила, тиазолила, триазолила, имидазолила, бензотиазолила и бензимидазолила;
Y обозначает SO3-X+, OSO3-Х+ или S SO3-Х+;
Х+ обозначает водород, катионную группу или группу, образующую сложный эфир; и
каждый из L1 и L2 обозначает, независимо, замещенную или незамещенную C1-C5-алкильную группу или отсутствует,
или к их фармацевтически приемлемой соли, при условии, что, когда R1 обозначает алкил, L1 отсутствует.
В другом варианте изобретение относится к соединениям формулы (II)
где R1 обозначает замещенную или незамещенную циклическую, бициклическую, трициклическую или
бензогетероциклическую группу или замещенную или незамещенную C2-C10-алкильную группу;
R2 обозначает водород, алкил, меркаптоалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, арилалкил, тиазолил, триазолил, имидазолил, бензотиазолил и бензимидазолил, или связан с R1 с образованием гетероцикла;
Y обозначает SO3-X+, OSO3-X+ или S SO3-X+;
Х+ обозначает водород, катионную группу или группу, образующую сложный эфир;
m обозначает 0 или 1;
n обозначает 1, 2, 3 или 4;
L обозначает замещенную или незамещенную C1-C5-алкильную группу или отсутствует,
или к их фармацевтически приемлемой соли, при условии, что, когда R1 обозначает алкил, L отсутствует.
В другом варианте изобретения R2 обозначает водород. Еще в одном варианте изобретения R1 обозначает линейный алкил, например, этил, н-пентил, н-гептил или н-октил. В другом варианте изобретения R1 обозначает трет-бутил. Еще в одном альтернативном варианте изобретения R1 обозначает C7-C10бициклоалкил или трициклоалкил, например, такой как трицикло[3.3.1.03,7]децил (или адамантил), бицикло[2.1.2]гептил или индолил. В другом альтернативном варианте изобретения R1 обозначает тетрагидронафтил.
В одном варианте изобретения L2 обозначает -(СН2)3-. В другом дополнительном варианте L2 обозначает -(СН2)4- или -(СН2)5-. Еще в одном дополнительном варианте изобретения L2 обозначает -(СН2)2.
Еще в одном дополнительном варианте изобретения L2 обозначает замещенный алкил, например -СН2(CHOH)-СН2-.
В другом варианте изобретения L2 обозначает СН2СН2 или отсутствует.
В другом варианте изобретения R1 обозначает разветвленный алкил, например трет-бутил. В другом варианте изобретения R1 обозначает адамантил. В другом варианте изобретения R1 обозначает циклический алкил, например, циклопропил, циклогексил, циклогептил, циклооктил и т.д. Циклоалкильные
группы могут быть далее замещенными, например, дополнительными алкильными группами или другими группами, которые содействуют осуществлению молекулой предполагаемой функции. В другом варианте изобретения R1 обозначает алкил, замещенный пропаргильным фрагментом (например -НС≡С-).
В другом варианте изобретения R1 обозначает циклогексил, замещенный одной или более метильной или
пропаргильной группами.
В других вариантах изобретения L1 обозначает C1-C2-алкильную линкерную группу (например,
-СН(СН3)- или -(СН2)2-). В другом варианте изобретения R1 обозначает фенил. В некоторых вариантах
изобретения R1 замещен метоксигруппой. В других вариантах изобретения L1 обозначает С3, например
- 20 -
012429
-(СН2)3- или С(СН3)2-. В некоторых вариантах изобретения L1 замещен, например, алкокси, карбоксилатной (-СООН), бензильной, амидо (-C=O-NH-) или сложноэфирной (С=О-С-О) группой. В некоторых вариантах изобретения сложноэфирная группа представляет собой метиловую, этиловую, пропиловую,
бутиловую, циклогексиловую сложноэфирную группу. В других вариантах изобретения сложноэфирная
группа может быть пропенильной группой. В других вариантах изобретения L1 замещен карбоксилатной
группой. В другом варианте изобретения R1 замещен замещенной амидной группой, где амидная группа
замещена алкильной, например, метильной, этильной, пропильной, бутильной, пентильной или гексильной группой. В другом варианте изобретения алкильная R1 группа замещена -C=O-NH-OH, C=O-NH2 или
амидогруппой. В некоторых вариантах изобретения амидогруппа замещена алкильной (например, метильной, этильной, пропильной, бутильной, пентильной, гексильной, циклогексильной и т.д.), бензильной или арильной группой. В другом варианте изобретения амидогруппа замещена -СН(СН2)2- группой.
Сам R' может быть замещен фенилом или может быть разветвленным или линейным алкилом. В некоторых вариантах изобретения R' может быть также замещен тиоэфирной группой. Примеры тиоэфиров
включают S-Me, S-Et и т.д. В некоторых вариантах изобретения алкильная R1 группа замещена как
арильной, так и тиоэфирной группой и амидогруппой. В других вариантах изобретения алкильная R1
группа может быть замещена как тиоэфирной, так и карбоксилатной группой. В других вариантах изобретения алкильные R1 группы замещены гидроксилом. R1 группы, например, алкильные R1 группы, могут быть также замещены как тиоэфирной, так и гидроксильной группой. В других вариантах изобретения R1 группы, например, алкильные R1 группы, замещены цианогруппой. Примеры R1 групп, содержащих -CN фрагменты, включают C(CH3)2CN, циклогексил, замещенный одной или более цианогруппой и
т.д.
В других вариантах изобретения алкильные R1 группы замещены арильными группами. Арильные
группы могут представлять собой, например, замещенный фенил. Замещенный фенил может быть замещен одним или более заместителей, таких как гидрокси, циано и алкокси. В других вариантах изобретения алкильные R1 группы замещены тетразолилом или замещенным или незамещенным бензилом.
В других вариантах изобретения L1 обозначает -С(СН3)2-СНОН. Еще в одном варианте изобретения
1
L обозначает -С(СН3)2СН(ОМе)-. В другом варианте изобретения R1 обозначает замещенный или незамещенный фенил. Еще в одном варианте изобретения R1 обозначает паразамещенный фенил. Примеры
заместителей включают, но без ограничения, фтор, хлор, бром, йод, метил, трет-бутил, алкокси, метокси
и т.д. В другом варианте изобретения R1 замещен в мета-положении. Примеры заместителей включают
метокси, хлор, метил, трет-бутил, фтор, алкил, алкокси, йод, трифторалкил, метокси, и т.д. В другом варианте изобретения R1 обозначает фенил, замещенный аналогичными заместителями в орто-положении.
В другом варианте изобретения L1 содержит циклоалкильный фрагмент, например, циклопентил. В другом варианте изобретения L1 содержит алкенильную группу и, необязательно, замещенную арильную
группу с заместителями, аналогичными вышеописанным.
В некоторых вариантах изобретения R1 обозначает циклопропил или циклогексил. В некоторых вариантах изобретения циклопропильная или циклогексильная группа замещена простой эфирной группой
или алкильной группой. В некоторых дополнительных вариантах изобретения простая эфирная группа
представляет собой группу простого бензилового эфира.
В другом варианте изобретения, в которых R1 обозначает алкил, он замещен группами, такими как
фенил или гидрокси.
В других вариантах изобретения соединение по изобретению выбирают из группы, состоящей из
- 21 -
012429
- 22 -
012429
- 23 -
012429
- 24 -
012429
- 25 -
012429
- 26 -
012429
- 27 -
012429
- 28 -
012429
- 29 -
012429
- 30 -
012429
- 31 -
012429
- 32 -
012429
- 33 -
012429
- 34 -
012429
- 35 -
012429
и их фармацевтически приемлемых солей, сложных эфиров и пролекарств.
Еще в одном варианте изобретение относится к соединениям формулы (III)
где А обозначает азот или кислород;
R11 обозначает водород, солеобразующий катион, группу, образующую сложный эфир, -(CH2)x-Q,
или, если А обозначает азот, А и R11 вместе могут являться остатком природной или неприродной аминокислоты или ее соли или сложного эфира;
Q обозначает водород, тиазолил, триазолил, имидазолил, бензотиазолил или бензимидазолил;
х обозначает 0, 1, 2, 3 или 4;
n обозначает 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10;
R3, R3a, R4, R4a, R5, R5a, R6, R6a, R7 и R7a, каждый независимо, обозначают водород, алкил, меркаптоалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, алкилкарбонил, арилкарбонил, алкоксикарбонил, циано, галоген, амино, тетразолил, или две R группы при двух соседних циклических атомах вместе с атомами в
цикле образуют двойную связь, при условии, что один из R3, R3a, R4, R4a, R5, R5a, R6, R6a, R7 и R7a обозначает фрагмент (IIIa)
где m обозначает 0, 1, 2, 3 или 4;
RA, RB, RC, RD и RE, независимо, выбирают из группы: водород, галоген, гидроксил, алкил, алкоксил, галогенированный алкил, меркаптоалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, циано, тиазолил,
триазолил, имидазолил, тетразолил, бензотиазолил и бензимидазолил;
и их фармацевтически приемлемым солям и сложным эфирам, при условии, что указанное соединение не
является 3-(4-фенил-1,2,3,6-тетрагидро-1-пиридил)-1-пропансульфоновой кислотой.
В дополнительном варианте изобретения n обозначает 2, 3 или 4.
В другом варианте изобретения R11 обозначает солеобразующий катион. Примеры солеобразующих
катионов включают фармацевтически приемлемые соли по данному описанию, а также литий, натрий,
калий, магний, кальций, барий, цинк, железо и аммоний. В другом варианте изобретения R11 обозначает
группу, образующую сложный эфир. Группа, образующая сложный эфир, включает группы, которые,
связываясь, образуют сложный эфир. Примеры таких групп включают замещенный или незамещенный
алкил, арил, алкенил, алкинил или циклоалкил. В другом варианте изобретения А обозначает кислород.
- 36 -
012429
В другом варианте изобретения R3 и R4 вместе с углеродными атомами, с которыми они связаны,
образуют двойную связь. В другом варианте изобретения RA, RB, RC, RD и RE, каждый, обозначают водород. RA, RB, RD и RE, каждый, обозначают водород, a RC обозначает галоген, такой как фтор, хлор, йод
или бром.
В другом варианте изобретения R3 или R5a обозначает фрагмент формулы (IIIa).
В другом варианте изобретения R4, R5, R6 и R7, каждый, обозначают водород. В другом дополнительном варианте изобретения R4a, R5a, R6a и R7a, каждый, обозначают водород.
В другом варианте изобретения R3a обозначает гидроксил, циано или ацил.
В другом дополнительном варианте изобретения R11 и А, вместе, представляют собой остаток природной или неприродной аминокислоты или ее фармацевтически приемлемой соли или сложного эфира.
Примеры аминокислотных остатков включают сложные эфиры и соли фенилаланина и лейцина.
В другом варианте изобретения m обозначает 0, 1 или 3.
Примеры соединений формулы (III) включают, но без ограничения
и их фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры и пролекарства.
Еще в одном варианте изобретение относится, по меньшей мере частично, к соединениям формулы
(IV)
где А обозначает азот или кислород;
R11 обозначает водород, солеобразующий катион, группу, образующую сложный эфир, -(CH2)X-Q,
или, если А обозначает азот, А и R11 вместе могут являться остатком природной или неприродной аминокислоты или ее соли или сложного эфира;
Q обозначает водород, тиазолил, триазолил, имидазолил, бензотиазолил или бензимидазолил;
х обозначает 0, 1, 2, 3 или 4;
n обозначает 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10;
R4, R4a, R5, R5a, R6, R6a, R7 и R7a, каждый независимо, обозначают водород, алкил, меркаптоалкил,
алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, алкилкарбонил, арилкарбонил, алкоксикарбонил, циано, галоген,
амино, тетразолил, или R4 и R5 вместе с атомами в цикле, с которыми они связаны, образуют двойную
связь, или R6 и R7 вместе с атомами в цикле, с которыми они связаны, образуют двойную связь;
m обозначает 0, 1, 2, 3 или 4;
R8, R9, R10, R11 и R12, независимо, выбирают из группы: водород, галоген, гидроксил, алкил, алкоксил, галогенированный алкил, меркаптоалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, циано, тиазолил,
триазолил, имидазолил, тетразолил, бензотиазолил и бензимидазолил;
и их фармацевтически приемлемым солям и сложным эфирам.
В другом варианте изобретения R11 обозначает солеобразующий катион. Примеры солеобразующих
катионов включают фармацевтически приемлемые соли по данному описанию, а также литий, натрий,
калий, магний, кальций, барий, цинк, железо и аммоний. В другом варианте изобретения R11 обозначает
группу, образующую сложный эфир. Группа, образующая сложный эфир, включает группы, которые,
связываясь, образуют сложный эфир. Примеры таких групп включают замещенный или незамещенный
алкил, арил, алкенил, алкинил или циклоалкил. В другом варианте изобретения А обозначает кислород.
В другом варианте изобретения m обозначает 0 или 1. В другом дополнительном варианте изобретения n обозначает 2, 3 или 4. В другом дополнительном варианте изобретения R4, R5, R6 и R7, каждый,
обозначают водород. R4a, R5a, R6a и R7a также могут обозначать водород. Примеры R8, R9, R10, R11 и R12
включают водород. В другом варианте изобретения R8, R9, R11 и R12, каждый, обозначают водород, a R10
обозначает галоген (например, фтор, хлор, бром или йод), нитро или алкил (например, метил, этил, бутил). В другом варианте изобретения A-R11 может быть остатком аминокислоты, например, остатком
фенилаланина. В другом варианте изобретения R9, R10, R11 и R12, каждый, обозначают водород, a R8 обо- 37 -
012429
значает не водород, например галоген, например фтор, хлор, бром или йод.
В другом варианте изобретения соединение представляет собой
и их фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры и пролекарства.
В другом варианте изобретение включает соединения формулы (V)
где А обозначает азот или кислород;
R11 обозначает водород, солеобразующий катион, группу, образующую сложный эфир, -(CH2)X-Q,
или, если А обозначает азот, А и R11 вместе могут являться остатком природной или неприродной аминокислоты или ее соли или сложного эфира;
Q обозначает водород, тиазолил, триазолил, имидазолил, бензотиазолил или бензимидазолил;
х обозначает 0, 1, 2, 3 или 4;
n обозначает 0, 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10;
аа обозначает остаток природной или неприродной аминокислоты;
m обозначает 0, 1, 2 или 3;
R14 обозначает водород или защитную группу;
R15 обозначает водород, алкил или арил,
и их фармацевтически приемлемые соли и пролекарства.
В другом варианте изобретения R11 обозначает солеобразующий катион. Примеры солеобразующих
катионов включают фармацевтически приемлемые соли по данному описанию, а также литий, натрий,
калий, магний, кальций, барий, цинк, железо и аммоний. В другом варианте изобретения R11 обозначает
группу, образующую сложный эфир. Группа, образующая сложный эфир, включает группы, которые,
связываясь, образуют сложный эфир. Примеры таких групп включают замещенный или незамещенный
алкил, арил, алкенил, алкинил или циклоалкил. В другом варианте изобретения А обозначает кислород.
В одном варианте изобретения n обозначает 2, 3 или 4. В некоторых вариантах изобретения m обозначает 0. В некоторых вариантах изобретения A-R11 обозначает остаток природной или неприродной
аминокислоты или ее соли или сложного эфира. Примеры аминокислотных остатков включают, но без
ограничения, остатки лейцина или фенилаланина и их фармацевтически приемлемые соли и сложные
эфиры. Примеры возможных сложных эфиров включают метиловый, этиловый и трет-бутиловый.
В другом варианте изобретения m обозначает 1. Примеры аа включают остатки природных и неприродных аминокислот, таких как фенилаланин, глицин и лейцин.
В другом варианте изобретения (аа)m обозначает phe-phe или ее сложный эфир.
В некоторых вариантах изобретения R15 обозначает водород или замещенный алкил, например арилалкил.
Термин "неприродная аминокислота" относится к любому производному природной аминокислоты,
включая D формы, и производным α- и β-аминокислот. Отмечают, что некоторые аминокислоты, например, гидроксипролин, которые классифицируются как неприродные аминокислоты по данному описанию, можно найти в природе в определенном организме или конкретном белке. Аминокислоты со многими различными защитными группами, пригодные для непосредственного применения в твердофазном
синтезе пептидов, выпускаются промышленностью. Помимо двадцати основных наиболее обычных природных аминокислот, следующие примеры неприродных аминокислот и аминокислотных производных
можно применять по изобретению (общепринятые сокращения даны в скобках): β-аланин (β-ALA), γаминомасляная кислота (GABA), 2-аминомасляная кислота (2-Abu), α,β-дегидро-2-аминомасляная кислота (8AU), 1-аминоциклопропан-1-карбоновая кислота (АСРС), аминоизомасляная кислота (Aib), 2аминотиазолин-4-карбоновая кислота, 5-аминовалериановая кислота (5-Ava), 6-аминогексановая кислота
(6-Ahx), 8-аминооктановая кислота (8-Аос), 11-аминоундекановая кислота (11-Aun), 12аминододекановая кислота (12-Aido), 2-аминобензойная кислота (2-Abz), 3-аминобензойная кислота (3Abz), 4-аминобензойная кислота (4-Abz), 4-амино-3-гидрокси-6-метилгептановая кислота (Статин,
Statine, Sta), аминооксиуксусная кислота (Аоа), 2-аминотетралин-2-карбоновая кислота (АТС), 4-амино5-циклогексил-3-гидроксипентановая кислота (АСНРА), парааминофенилаланин (4-NH2-Phe), бифенилаланин (Bip), парабромфенилаланин (4-Br-Phe), ортохлорфенилаланин (2-Cl-Phe), метахлорфенилаланин
- 38 -
012429
(3-Cl-Phe), парахлорфенилаланин (4-Cl-Phe), метахлортирозин (3-Cl-Tyr), парабензоилфенилаланин
(Вра), трет-бутилглицин (TLG), циклогексилаланин (Cha), циклогексилглицин (Chg), 2,3диаминопропионовая кислота (Dpr), 2,4-диаминомасляная кислота (Dbu), 3,4-дихлорфенилаланин (3,4Cl2-Phe), 3,4-дифторфенилаланин (3,4-F2-Phe), 3,5-дийодтирозин (3,5-I2-Tyr), ортофторфенилаланин (2-FPhe), метафторфенилаланин (3-F-Phe), парафторфенилаланин (4-F-Phe), метафтортирозин (3-F-Tyr), гомосерин (Hse), гомофенилаланин (Hfe), гомотирозин (Htyr), 5-гидрокситриптофан (5-OH-Trp), гидроксипролин (Hyp), парайодфенилаланин (4-I-Phe), 3-йодтирозин (3-I-Tyr), индолин-2-карбоновая кислота
(Idc), изонипекотиновая кислота (Inp), метаметилтирозин (3-Me-Tyr), 1-нафтилаланин (1-Nal), 2нафтилаланин (2-Nal), паранитрофенилаланин (4-NO2-Phe), 3-нитротирозин (3-NO2-Tyr), норлейцин
(Nle), норвалин (Nva), орнитин (Orn), ортофосфотирозин (Н2РО3-Tyr), октагидроиндол-2-карбоновая кислота (Oic), пеницилламин (Pen), пентафторфенилаланин (F5-Phe), фенилглицин (Phg), пипеколиновая
кислота (Pip), пропаргилглицин (Pra), пироглутаминовая кислота (PGLU), саркозин (Sar), тетрагидроизохинолин-3-карбоновая кислота (Tic), тиенилаланин и тиазолидин-4-карбоновая кислота (тиопролин, Th)
Кроме того, можно применять N-алкилированные аминокислоты, а также аминокислоты с аминсодержащими боковыми цепями (такие как Lys и Orn), в которых амин ацилирован или алкилирован.
Примеры соединений по изобретению включают, но без ограничения
или
и их фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры и пролекарства.
В другом варианте изобретение относится, по меньшей мере частично, к соединениям формулы
(VI)
где n обозначает 1, 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 или 10;
А обозначает кислород или азот;
R11 обозначает водород, солеобразующий катион, группу, образующую сложный эфир, -(CH2)X-Q,
или, если А обозначает азот, А и R11 вместе могут являться остатком природной или неприродной аминокислоты или ее соли или сложного эфира;
Q обозначает водород, тиазолил, триазолил, имидазолил, бензотиазолил или бензимидазолил;
х обозначает 0, 1, 2, 3 или 4;
R19 обозначает водород, алкил или арил,
Y1 обозначает кислород, серу или азот;
Y2 обозначает углерод, азот или кислород;
R20 обозначает водород, алкил, амино, меркаптоалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, арилалкил, тиазолил, триазолил, тетразолил, имидазолил, бензотиазолил и бензимидазолил;
R21 обозначает водород, алкил, меркаптоалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, арилалкил,
тиазолил, триазолил, тетразолил, имидазолил, бензотиазолил и бензимидазолил, или отсутствует, если Y2
обозначает кислород;
- 39 -
012429
R22 обозначает водород, алкил, меркатоалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, арилалкил, тиазолил, триазолил, тетразолил, имидазолил, бензотиазолил, бензимидазолил; или R22 обозначает водород,
гидроксил, алкокси или арилокси, если Y1 обозначает азот; или R22 отсутствует, если Y обозначает кислород или серу; или R22 и R21 могут быть связаны, образуя циклический фрагмент, если Y1 обозначает
азот;
R23 обозначает водород, алкил, амино, меркаптоалкил, алкенил, алкинил, циклоалкил, арил, арилалкил, тиазолил, триазолил, тетразолил, имидазолил, бензотиазолил или бензимидазолил, или отсутствует,
если Y2 обозначает азот или кислород;
или их фармацевтически приемлемым солям.
В другом варианте изобретения R11 обозначает солеобразующий катион. Примеры солеобразующих
катионов включают фармацевтически приемлемые соли по данному описанию, а также литий, натрий,
калий, магний, кальций, барий, цинк, железо и аммоний. В другом варианте изобретения соль представляет собой натриевую соль. Еще в одном варианте изобретения А обозначает кислород.
В другом варианте изобретения Y1 обозначает серу, a R22 отсутствует.
В другом варианте изобретения Y2 обозначает кислород, a R21 отсутствует. Примеры R20 включают
бензил, арил (например, фенил), алкил, циклоалкил (например, адамантил) и т.д. В другом варианте изобретения Y2 обозначает азот, a R21 обозначает водород. В другом варианте изобретения R21 обозначает
бензил. В другом дополнительном варианте изобретения R21 и R22 связаны с образованием пиридильного
кольца. В другом варианте изобретения Y1 обозначает серу.
Примеры соединений по изобретению включают
и их фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры и пролекарства.
В другом варианте изобретение относится к соединениям формулы (VII)
где n обозначает 2, 3 или 4;
А обозначает кислород или азот;
R11 обозначает водород, солеобразующий катион, группу, образующую сложный эфир, -(CH2)X-Q,
- 40 -
012429
или, если А обозначает азот, А и R11 вместе могут являться остатком природной или неприродной аминокислоты или ее соли или сложного эфира;
Q обозначает водород, тиазолил, триазолил, имидазолил, бензотиазолил или бензимидазолил;
х обозначает 0, 1, 2, 3 или 4;
G обозначает ординарную связь или кислород, азот или серу;
z обозначает 0, 1, 2, 3, 4 или 5;
m обозначает 0 или 1;
R24 выбирают из группы, состоящей из водорода, алкила, меркаптоалкила, алкенила, алкинила,
ароила, алкилкарбонила, аминоалкилкарбонила, циклоалкила, арила, арилалкила, тиазолила, триазолила,
имидазолила, бензотиазолила и бензимидазолила;
каждый R25 выбирают, независимо, из водорода, галогена, циано, гидроксила, алкокси, тиола, амино, нитро, алкила, арила, карбоциклила или гетероциклила,
и их фармацевтически приемлемым солям, сложным эфирам и пролекарствам.
В одном варианте изобретения R11 обозначает водород. В другом варианте изобретения А обозначает кислород. Например, n может обозначать 3, a m может обозначать 1. В другом варианте изобретения
R24 обозначает водород или бензил.
В некоторых вариантах изобретения z обозначает 0, 2 или 3. В других вариантах изобретения R25
обозначает гидроксил или алкокси, например, метокси, этокси и т.д. В некоторых вариантах изобретения
заместители R25 могут быть связаны с образованием конденсированных циклов (например, с образованием метилендиоксифенильного фрагмента).
Примеры соединений по изобретению включают
и их фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры и пролекарства.
Другие соединения по изобретению включают
и их фармацевтически приемлемые соли, сложные эфиры и пролекарства.
Изобретение относится как к солям, так и к кислым/основным формам соединений по изобретению.
Например, изобретение относится не только к конкретным солям соединений, изображенных в данном
описании в виде солей, но изобретение также включает другие фармацевтически приемлемые соли и
кислую и/или основную форму соединения. Изобретение относится также к солям соединений, показанных в данном описании.
Соединения по изобретению представлены также ниже в табл. 2.
- 41 -
012429
Таблица 2
- 42 -
012429
- 43 -
012429
- 44 -
012429
- 45 -
012429
- 46 -
012429
- 47 -
012429
- 48 -
012429
- 49 -
012429
- 50 -
012429
- 51 -
012429
- 52 -
012429
- 53 -
012429
- 54 -
012429
- 55 -
012429
- 56 -
012429
- 57 -
012429
- 58 -
012429
- 59 -
012429
- 60 -
012429
- 61 -
012429
- 62 -
012429
- 63 -
012429
- 64 -
012429
Следует отметить, что в вышеприведенной таблице и на протяжении всего изобретения, если при
атоме не изображены атомы водорода, но атомы водорода требуются или необходимы с химической точки зрения для образования устойчивого соединения, то подразумевается, что эти атомы водорода присутствуют в соединении.
В одном варианте данное изобретение не относится к соединениям, описанным в международных
заявках WO 00/64420 и WO 96/28187. В этом варианте изобретение не относится к способам применения
соединений, описанных в международных заявках WO 00/64420 и WO 96/28187, для лечения заболеваний или нарушений, описанных в этих заявках. В другом варианте изобретение относится к способам
применения соединений, описанных в международных заявках WO 00/64420 и WO 96/28187, для способов, описанных в данной заявке, которые не описаны в международных заявках WO 00/64420 и
WO 96/28187. Как в международная заявка WO 00/64420, так и в международная заявка WO 96/28187
вводятся ссылкой в данное описание во всей полноте.
В другом варианте данное изобретение относится к способам по изобретению, в которых применяются, и фармацевтическим композициям, в которые содержат соединения из табл. 2А. В другом варианте
соединения по изобретению не включают соединения из табл. 2А.
- 65 -
012429
Таблица 2А
- 66 -
012429
- 67 -
012429
- 68 -
012429
- 69 -
012429
- 70 -
012429
- 71 -
012429
Следует понимать, что применение любого из соединений по данному описанию или соединений,
описанных в заявках, идентифицированных в разделе "Родственные заявки", входит в объем настоящего
изобретения и, как предполагается, охватывается настоящим изобретением, и каждая из заявок специально (однозначно) вводится в данное описание, по меньшей мере, для этих целей, и, кроме того, специально (однозначно) вводятся для всех других целей.
Субъекты и популяции пациентов
Термин "субъект" включает живые организмы, в которых может встречаться амилоидоз или которые подвержены амилоидным заболеваниям, например, болезни Альцгеймера, синдрому Дауна, САА,
диализный (β2М) амилоидоз, вторичный (АА) амилоидоз, первичный (AL) амилоидоз, наследственный
амилоидоз, диабет и т.д. Примеры субъектов включают человека, цыплят, уток, пекинских уток, гусей,
обезьян, оленей, коров, кроликов, овец, коз, собак, кошек, мышей, крыс и их трангенные виды. Введение
пролечиваемому субъекту композиций по данному описанию можно осуществлять известными методами
в таких дозах и в течение такого времени, которые позволяют эффективно модулировать агрегацию вызванной амилоидом токсичности у субъекта, как далее представлено в данном описании. Эффективное
количество терапевтического соединения, необходимое для достижения терапевтического эффекта, может меняться в зависимости от таких факторов как уже имеющееся количество амилоидных отложений в
организме больного, возраст, пол, вес субъекта и способность терапевтического соединения модулиро- 72 -
012429
вать агрегацию амилоида в организме субъекта. Схему приема лекарственного вещества можно коррелировать таким образом, чтобы вызвать оптимальный терапевтический ответ. Например, можно принимать
ежедневно в виде нескольких разделенных доз или, в зависимости от показаний, дозу можно пропорционально уменьшить.
В некоторых вариантах изобретения субъект нуждается в лечении способами по данному изобретению и выбирается для лечения с учетом такой необходимости. Субъекты, нуждающиеся в таком лечении, общеизвестны в уровне техники и включают субъектов, которые определяются как имеющие заболевание или нарушение, с амилоидным отложением или амилоидозом, имеют симптом такого заболевания или нарушения или субъекты с повышенным риском такого заболевания или нарушения, и у которых, на основании диагноза, например медицинского диагноза, следует ожидать улучшения вследствие
терапии (например, излечения, заживления, предупреждения, смягчения, облегчения, лечения, ослабления, положительной динамики или воздействия на заболевание или нарушение, симптом заболевания
или нарушение или повышенный риск заболевания или нарушения).
В типичном аспекте изобретения субъектом является человек. Например, субъектом может быть
человек старше 30 лет, человек старше 40 лет, человек старше 50 лет, человек старше 60 лет, человек
старше 70 лет, человек старше 80 лет, человек старше 85 лег, человек старше 90 лет или человек старше
95 лет. Субъект может быть женщиной, в том числе женщиной в период менопаузы, которая получает
гормональную (эстрогенную) заместительную терапию. Субъектом может быть мужчина. В другом варианте изобретения субъект моложе 40 лет.
Субъект может являться человеком с повышенным риском заболевания болезнью Альцгеймера, например будучи старше 40 лет или имея предрасположенность к болезни Альцгеймера. Факторы предрасположенности к болезни Альцгеймера, идентифицированные или предположенные в научной литературе, включают, среди других, генотип, предрасполагающий субъекта к болезни Альцгеймера; экологические факторы, предрасполагающие к болезни Альцгеймера; инфекция вирусными и бактериальными
агентами, предрасполагающими к болезни Альцгеймера, в анамнезе; и сосудистые факторы, предрасполагающие субъекта к болезни Альцгеймера. У субъекта также может быть один или более факторов повышенного риска заболевания сердечно-сосудистым заболеванием (например, атеросклероз коронарных
артерий, стенокардия и инфаркт миокарда) или церебрально-васкулярным заболеванием (например, атеросклероз интракраниальной или экстракраниальной артерий, удар, обморок и преходящие нарушения
мозгового кровообращения), таким как гиперхолестеринемия, гипертензия, диабет, курение, или заболевание коронарной артерии, церебро-васкулярное заболевание и сердечно-сосудистое заболевание в
анамнезе или в семейном анамнезе. Обычно гиперхолестеринемию определяют как сывороточную концентрацию тотального холестерина выше примерно 5,2 ммоль/л (около 200 мг/дл).
Полагают, что некоторые генотипы предрасполагают к болезни Альцгеймера. Эти генотипы включают такие, как миссенс-мутации в пресенилине-1, пресенилине-2 и амилоидном белке-предшественнике
(АРР), ассоциированные с болезнью Альцгеймера, и генотипы α-2-макроглобулина и LRP-1, которые,
как полагают, повышают риск заболевания случайной (спорадической) (поздней) болезнью Альцгеймера.
Е. van Uden, et al., J. Neurosci. 22(21), 9298-304 (2002); J.J. Goto, et al., J. Mol. Neurosci. 19(1-2), 37-41
(2002). Другим генетическим фактором риска развития болезни Альцгеймера являются варианты АроЕ,
гена, который кодирует аполипопротеин Е (в особенности ароЕ4 генотип), компонент частиц липопротеинов низкой плотности. W.J. Strittmatter, et al., Annu. Rev. Neurosci. 19, 53-77 (1996). Молекулярные
механизмы, по которым различные аллели АроЕ меняют вероятность развития болезни Альцгеймера,
неизвестны, однако, роль АроЕ в метаболизме холестерина согласуется с растущим числом данных, связывающих метаболизм холестерина с болезнью Альцгеймера. Например, постоянное применение лекарственных препаратов, снижающих уровень холестерина, таких как статины, недавно было связано с более низкой частотой болезни Альцгеймера, и было показано, что лекарственные препараты, снижающие
уровень холестерина, снижают патологию у АРР трансгенных мышей. Эти и другие исследования наводят на мысль, что холестерин может влиять на процессирование АРР. Было предположено, что АроЕ4
изменяет направленную миграцию Аβ (в мозг и из мозга) и способствует удерживанию Аβ в мозге. Также предполагалось, что АроЕ4 способствует процессированию АРР с образованием Аβ. Полагают, что
экологические факторы предрасполагают субъекта к болезни Альцгеймера, включая экспозицию с алюминием, хотя эпидемиологические данные не являются четкими. Кроме того, более ранняя инфекция
некоторыми вирусными или бактериальными агентами, включая вирус герпеса и chlamydia pneurnonias,
может предрасположить субъекта к болезни Альцгеймера. Наконец, другие факторы, предрасполагающие к болезни Альцгеймера, могут включать факторы риска сердечно-сосудистого или цереброваскулярного заболевания, включая курение сигарет, гипертензию и диабет. "Риск болезни Альцгеймера"
также охватывает любые другие предрасполагающие факторы, не перечисленные выше или уже определенные, и включает повышенный риск болезни Альцгеймера, вызванный травмой головы, лекарственной
терапией, диетой или образом жизни.
Способы по настоящему изобретению можно применять для одной или более нижеприведенных
целей: для предупреждения болезни Альцгеймера, для лечения болезни Альцгеймера, для ослабления
- 73 -
012429
симптомов болезни Альцгеймера или для регуляции продуцирования или уровней амилоидных β (Аβ)
пептидов. В одном варианте изобретения человек несет одну или более мутаций в генах, которые кодируют β-амилоидный белок-предшественник, пресенилин-1 или пресенилин-2. В другом варианте изобретения человек несет ген Аполипопротеин ε4. В другом варианте у человека в семейном анамнезе имеется
болезнь Альцгеймера или деменция. В другом варианте изобретения у человека наблюдается трисомия
21 (синдром Дауна). В другом варианте изобретения у субъекта наблюдается нормальный или низкий
уровень тотального сывороточного холестерина крови. В другом варианте изобретения уровень тотального сывороточного холестерина крови ниже примерно 200 мг/дл или ниже примерно 180 мг/дл, и он
может быть в интервале примерно 150-200 мг/дл. В другом варианте изобретения уровень тотального
LDL холестерина ниже примерно 100 мг/дл или ниже примерно 90 мг/дл и может быть в примерном интервале 30-100 мг/дл. Способы измерения сывороточного тотального холестерина крови и тотального
LDL холестерина хорошо известны специалистам в данной области техники и, например, могут включать способы, описанные в международной заявке WO 99/38498 на с.11, вводимой в данное описание в
качестве ссылки. Способы определения уровней других стеринов (стеролов, стероидных спиртов) в сыворотке описаны в Н. Gylling, et al., "Serum Sterols During Stanol Ester Feeding in a Mildly Hypercholesterolemic Population", J. Lipid Res. 40: 593-600 (1999).
В другом варианте изобретения у субъекта наблюдается повышенный уровень сывороточного тотального холестерина крови. В другом варианте изобретения уровень сывороточного тотального холестерина крови составляет по меньшей мере около 200 мг/дл или по меньшей мере около 200 мг/дл и может быть в примерном интервале 200-1000 мг/дл. В другом варианте изобретения у субъекта повышенный уровень тотального LDL холестерина. В другом варианте изобретения уровень тотального LDL холестерина выше примерно 100 мг/дл или даже выше примерно 110 мг/дл и может быть в примерном интервале 100-1000 мг/дл.
В другом варианте изобретения человек находится в возрасте по меньшей мере около 40 лет. В другом варианте изобретения человек находится в возрасте по меньшей мере около 60 лет. В другом варианте изобретения человек находится в возрасте по меньшей мере около 70 лет. В другом варианте изобретения человек находится в возрасте по меньшей мере около 80 лет. В другом варианте изобретения человек находится в возрасте по меньшей мере около 85 лет. В другом варианте изобретения человек находится в возрасте примерно 60-100 лет.
Еще в одном варианте изобретения, как показано, у субъекта имеется риск по показаниям диагностического метода визуализации мозга, например, метода измерения активности мозга, отложения бляшек или атрофии мозга.
Еще в одном варианте изобретения показано, что у субъекта риск, определенный когнитивным тестом, таким как Клинический Рейтинг Деменции ("CDR"), Когнитивная Шкала Оценки Болезни Альцгеймера ("ADAS-Cog") или мини-исследование Ментального Статуса ("MMSE"). У субъекта может быть
оценка ниже средней по шкале когнитивного теста по сравнению с контрольным для аналогичного возраста и с известными данными. У субъекта также наблюдаться снижение оценки по сравнению с предыдущими оценками этого субъекта в том же самом или аналогичных тестах.
При определении CDR субъекта обычно оценивают и определяют показатель в каждой из шести
когнитивных и поведенческих категорий: память, ориентация, оценка и разрешение проблем, общественное поведение, дом и увлечения и уход за собой. Оценка может включать информацию о прошлом,
предоставленную субъектом, или, предпочтительно, свидетеля (corroborator), который хорошо знает
субъекта. Субъекта оценивают и определяют показатели в каждой из этих областей и определяют общий
балл (рейтинг) (0, 0.5, 1.0, 2.0 или 3.0). Нормальным считают рейтинг (квалификационная оценка, балл)
0. Рейтинг 1 считают соответствующим легкой деменции. Субъект с CDR 0.5 характеризуется легкой
стойкой забывчивостью, частичной памятью о событиях и "слабой, доброкачественной" забывчивостью.
В одном варианте изобретения субъекта оценивают с рейтингом по CDR выше 0, выше примерно 0.5,
выше примерно 1.0, выше примерно 1.5, выше примерно 2.0, выше примерно 2.5 или примерно 3.0,
Другим тестом является мини-исследование Ментального Статуса ("MMSE"), описанное Folstein
"Mini-mental state. A practical method for grading the cognitive state of patients for the clinician". J. Psychiatr.
Res. 12: 189-198, 1975. MMSE оценивает наличие умственной отсталости (ухудшения). См. также Folstein
"Differential diagnosis of dementia. The clinical process" Psychiatr Clin North Am. 20: 45-57, 1997. MMSE
является способом оценки начала деменции и наличия общего ухудшения умственной деятельности (общей умственной отсталости), наблюдаемых при болезни Альцгеймера и при деменции в случае множественного инфаркта. MMSE оценивается от 1 до 30. MMSE не оценивает основной когнитивный потенциал, как, например, так называемый IQ тест. Вместо этого он проверяет умственные способности. Человек
с "нормальными" умственными способностями получает "30" в MMSE объективном, беспристрастном
тесте (однако, человек с оценкой 30 в тесте MMSE может получить оценку много ниже в IQ тесте). См.,
например, Kaufer, J. Neuropsychiatry Clin. Neurosci. 10: 55-63, 1998; Alzheimer Dis Assoc Disord. 12: 54-57,
1998; Ellis, Arch. Neurol. 55:360-365, 1998; Magni, Int. Psychogeriatr. 8: 127-134, 1996: Monsh, Acta Neurol.
Scand. 92: 145-150, 1995. В одном варианте изобретения оценки субъекта ниже 30 по MMSE по меньшей
- 74 -
012429
мере один раз. В другом варианте изобретения субъект получает баллы ниже примерно 28, ниже примерно 26, ниже примерно 24, ниже примерно 22, ниже примерно 20, ниже примерно 18, ниже примерно
16, ниже примерно 14, ниже примерно 12, ниже примерно 10, ниже примерно 8, ниже примерно 6, ниже
примерно 4, ниже примерно 2 или ниже примерно 1.
Другим способом оценки познавательной способности, в частности, болезни Альцгеймера является
когнитивная шкала оценки болезни Альцгеймера (ADAS-Cog) или ее вариант, называемый стандартизованной шкалой оценки болезни Альцгеймера (SADAS). Она обычно используется как мера эффективности при клинических испытаниях лекарственных препаратов для лечения болезни Альцгеймера и родственных нарушений, характеризующихся ухудшением когнитивных способностей. SADAS и ADAS-Cog
не предназначены для диагностики болезни Альцгеймера; они применимы для характеристики симптомов деменции, являются сравнительно чувствительным индикатором прогрессирования деменции (см.,
например, Doraiswamy, Neurology 48: 1511-1517, 1997; и Standish, J. Am. Geriatr. Soc. 44: 712-716, 1996).
Ежегодное ухудшение у непролеченных пациентов с болезнью Альцгеймера составляет примерно
8 пунктов (баллов) в год (см., например, Raskind, М Prim. Care Companion J Clin Psychiatry 1000 Aug;
2(4): 134-138).
ADAS-Cog рассчитана для определения с помощью анкет прогрессирования и тяжести когнитивного ухудшения, наблюдаемого при AD, по 70-балльной шкале. Шкала ADAS-Cog количественно определяет число неправильных ответов. Соответственно, высокий балл по шкале указывает на более тяжелый
случай когнитивного ухудшения. В одном варианте изобретения у субъекта балл выше 0, выше примерно 5, выше примерно 10, выше примерно 15, выше примерно 20, выше примерно 25, выше примерно 30,
выше примерно 35, выше примерно 40, выше примерно 45, выше примерно 50, выше примерно 55, выше
примерно 60, выше примерно 65, выше примерно 68 или примерно 70.
В другом варианте изобретения у субъекта не проявляются симптомы болезни Альцгеймера. В другом варианте изобретения субъектом является человек в возрасте по меньшей мере 40 лет, у которого
наблюдаются симптомы болезни Альцгеймера. В другом варианте изобретения субъектом является человек в возрасте по меньшей мере 40 лет, у которого наблюдаются один или более симптомов болезни
Альцгеймера.
В другом варианте изобретения у субъекта наблюдается легкая когнитивная недостаточность. Еще
в одном варианте изобретения рейтинг CDR субъекта составляет 0.5. В другом варианте изобретения у
субъекта наблюдается ранняя болезнь Альцгеймера. В другом варианте изобретения у субъекта церебральная амилоидная ангиопатия.
Применяя способы по данному изобретению можно понизить уровни амилоидных β-пептидов в
плазме или спинно-мозговой жидкости (CSF) субъекта по сравнению с уровнями перед лечением примерно на 10-100% или даже примерно на 50-100%.
В альтернативном варианте изобретения у субъекта перед лечением может быть повышенный уровень амилоидного Аβ40- или Аβ42-пептида в крови и CSF, согласно способам по настоящему изобретению, выше примерно 10 пг/мл, или выше примерно 20 пг/мл, или выше примерно 35 пг/мл, или даже
выше примерно 40 пг/мл. В другом варианте изобретения повышенный уровень амилоидного Аβ2пептида может быть в примерном интервале от 30 до 200 пг/мл или даже примерно до 200 пг/мл.
Специалист в данной области техники понимает, что по мере прогрессирования болезни Альцгеймера измеряемые уровни амилоидного β-пептида в CSF могут падать по сравнению с повышенными
уровнями до начала заболевания. Этот эффект относят за счет повышенного отложения, т.е. улавливания
Аβ-пептида в мозге вместо нормального клиренса из мозга в CSF.
В альтернативном варианте изобретения субъект может иметь повышенный уровень амилоидного
Аβ40-пептида в крови и CSF перед лечением, согласно способам по настоящему изобретению, более примерно 5 пг Аβ42/мл, или больше примерно 50 пг Аβ40/мл, или более примерно 400 пг/мл. В другом варианте изобретения повышенный уровень амилоидного Аβ40-пептида может быть в интервале примерно от
200 пг/мл примерно до 800 пг/мл, даже примерно до 1000 пг/мл.
В другом варианте изобретения субъект может иметь повышенный уровень амилоидного Аβ42пептида в CSF перед лечением, согласно способам по настоящему изобретению, более примерно 5 пг/мл,
или больше примерно 10 пг/мл, или более примерно 200 пг/мл, или более примерно 500 пг/мл. В другом
варианте изобретения уровень амилоидного β-пептида может быть в интервале примерно от 10 пг/мл
примерно до 1000 пг/мл или даже примерно от 100 пг/мл примерно до 1000 пг/мл.
В другом варианте изобретения субъект может иметь повышенный уровень амилоидного Аβ40пептида в CSF перед лечением согласно способам по настоящему изобретению более примерно 10 пг/мл,
или больше примерно 50 пг/мл, или даже более примерно 100 пг/мл. В другом варианте изобретения уровень амилоидного β-пептида может быть в интервале примерно от 10 пг/мл примерно до 1000 пг/мл.
Количество амилоидного β-пептида в мозге, CSF, крови или плазме субъекта можно определить
твердофазным иммуноферментным анализом ("ELISA"), или количественными методами иммуноблоттинга, или количественным SELDI-TOF, хорошо известными специалистам в данной области техники,
такими как раскрываемые Zhang, et al., J. Biol. Chem. 274, 8966-72 (1999) и Zhang, et al., Biochemistry 40,
- 75 -
012429
5049-55 (2001). См. также А. K. Vehmas, et al., DNA Cell Biol. 20(11), 713-21 (2001); P. Lewczuk, et al.,
Rapid Commun. Mass Spectrom. 17(12), 1291-96 (2003); B.M. Austen, et al., J. Peptide Sei. 6, 459-69 (2000); и
Davis, et al., BioTechniques 27, 1258-62 (1999). Эти тесты проводят на образцах мозга или крови, которые
готовят хорошо известным специалисту в данной области техники способом. Другим примером применяемого способа определения уровней амилоидных Аβ-пептидов является иммуноанализ с меткой европием (EIA). См., например, международную заявку WO 99/38498, с. 11.
Способы по изобретению можно применять в качестве терапии субъекта с болезнью Альцгеймера
или деменцией, или способы по изобретению можно применять в качестве профилактики болезни Альцгеймера или деменции у субъекта, предрасположенного к ним, как в том случае, если субъекта, например, мутация в гене АРР, гене АроЕ или гене пресенилина. У субъекта может быть (или он может быть
предрасположен к развитию, или можно подозревать у него) сосудистая деменция, сенильная деменция
(старческое слабоумие), легкая когнитивная недостаточность или ранняя болезнь Альцгеймера (или он
может быть предрасположен к развитию этих заболеваний, или их можно у него подозревать). Помимо
болезни Альцгеймера, субъект может иметь другое амилоидное заболевание, такое как церебральная
амилоидная ангиопатия, или у субъекта могут быть амилоидные отложения, в особенности амилоидныеβ отложения в мозге.
Лечение амилоидных заболеваний
Настоящее изобретение относится к способам применения соединений и их фармацевтических
композиций для лечения и предупреждения амилоидных заболеваний. Фармацевтические композиции по
изобретению можно применять терапевтически или профилактически для лечения заболеваний, ассоциированных с образованием, агрегацией или отложением амилоидных фибрилл (например, AL амилоидного белка (λ- или κ-цепи, например, амилоида λ, амилоида κ, амилоида κIV, амилоида λVI, амилоида
γ, амилоида γ1), Аβ, IAPP, β2М, АА или АН амилоидного белка).
Фармацевтические композиции по изобретению могут действовать, облегчая течение амилоидного
заболевания, по любому из приведенных ниже механизмов (предполагается, что этот перечень является
иллюстративным, а не лимитирующим): замедление скорости образования или отложения амилоидных
фибрилл; уменьшение степени амилоидного отложения; ингибирование, уменьшение или предупреждение образования амилоидных фибрилл; ингибирование нейродегенерации или клеточной токсичности,
вызванной амилоидом; ингибирование воспаления, индуцированного амилоидом; повышение клиренса
амилоида из мозга; повышение расщепления Аβ в мозге; или содействие клиренсу амилоидного белка до
его объединения в фибриллы.
"Модуляция" амилоидного отложения включает как ингибирование, по определению выше, так и
увеличение амилоидного отложения или образования фибрилл. Таким образом, предполагается, что термин "модуляция" охватывает предупреждение или прекращение образования или аккумуляции амилоида, ингибирование или замедление дальнейшего образования или аккумуляции амилоида у субъекта,
больного амилоидозом, например, уже имеющего амилоидное отложение, и уменьшение или реверсию
образования или аккумуляции амилоида у субъекта, больного амилоидозом; и увеличение амилоидного
отложения, например, повышение скорости или количества амилоидного отложения in vivo или in vitro.
Соединения, повышающие содержание амилоида, можно применять на животных моделях амилоидоза,
например, для того, чтобы можно было создать амилоидные отложения у животных в течение более короткого периода времени, или увеличить амилоидные отложения в течение нужного периода времени.
Соединения, повышающие содержание амилоида, могут применяться при скрининге на соединения, которые ингибируют амилоидоз in vivo, например, на животных моделях, в клеточных анализах и в in vitro
анализах на амилоидоз. Такие соединения можно применять, например, для проведения более быстрых и
более точных (чувствительных) анализов на соединения. Модуляцию амилоидного отложения определяют по сравнению с непролеченным субъектом или по сравнению с пролеченным субъектом до лечения.
"Ингибирование" амилоидного отложения включает предупреждение или прекращение амилоидного образования, например, фибриллогенеза, клиренс амилоида, например, растворимого Аβ, из мозга,
ингибирование или замедление дальнейшего отложения амилоида у субъекта с амилоидозом, например,
уже имеющего амилоидные отложения, и уменьшение или реверсию амилоидного фибриллогенеза или
отложений у субъекта, уже имеющего амилоидоз. Ингибирование амилоидного отложения определяют в
сравнении с непролеченным субъектом или в сравнении с пролеченным субъектом перед лечением, или,
например, определяют клинически (измеряемым) значимым улучшением, или, например, если у субъекта
амилоидоз мозга, например, болезнь Альцгеймера или церебральная амилоидная ангиопатия, стабилизацией когнитивной функции или предупреждением дальнейшего ухудшения когнитивной функции (т.е.
предупреждение, замедление или прекращение прогрессирования заболевания) или улучшением показателей, таких как концентрация Аβ или тау в CSF.
"Лечение, терапия" субъекта по данному описанию включает применение композиции по данному
изобретению в отношении субъекта или введение ее субъекту, или применение композиции по данному
изобретению в отношении клетки или ткани субъекта или введение ее в клетку или ткань субъекта с
- 76 -
012429
амилоидным заболеванием или состоянием, с симптомом такого заболевания или состояния или с повышенным риском такого заболевания или состояния (или предрасположенным к такому заболеванию или
состоянию), с целью излечения, заживления, смягчения, облегчения, изменения, вылечивания, ослабления, положительной динамики или воздействия на заболевание или нарушение, симптом заболевания
или нарушение или повышенный риск заболевания или нарушения (или предрасположенность к заболеванию или нарушению). Термин "лечение" относится к любому признаку успеха в терапии или к уменьшению интенсивности поражения, патологии или состояния, включая любой объективный или субъективный показатель, такой как ослабление боли; ремиссия; ослабление симптомов, или то, что делает поражение, патологию или состояние более приемлемыми для субъекта (позволяет их легче переносить);
замедление скорости ухудшения или прогрессирования заболевания; то, что способствует менее изнурительному последнему мигу дистрофии; улучшение физического или умственного состояния; или, в некоторых ситуациях, предупреждение начала деменции. Лечение или облегчение симптомов можно проводить с учетом объективных или субъективных показателей; включая результаты физического обследования, психиатрической оценки или теста, определяющего познавательные способности, такого как CDR,
MMSE, ADAS-Cog или другого известного в уровне техники теста. Например, способы по изобретению
позволяют успешно лечить деменцию, замедляя скорость или уменьшая степень когнитивного ухудшения.
В одном варианте изобретения термин "лечение" включает сохранение начального CDR рейтинга
субъекта или на нулевом уровне. В другом варианте изобретения термин "лечение" включает снижение
рейтинга CDR субъекта примерно на 0,25 или более, примерно на 0,5 или более, примерно на 1,0 или
более, примерно на 1,5 или более, примерно на 2,0 или более, примерно на 2,5 или более или примерно
на 3,0 или более. В другом варианте изобретения термин "лечение" также включает уменьшение скорости повышения рейтинга CDR субъекта по сравнению с контрольными предыдущими данными. В другом варианте изобретения термин включает уменьшение скорости повышения рейтинга CDR субъекта
примерно на 5% или более, примерно на 10% или более, примерно на 20% или более, примерно на 25%
или более, примерно на 30% или более, примерно на 40% или более, примерно на 50% или более, примерно на 60% или более, примерно на 70% или более, примерно на 80% или более, примерно на 90% или
более или примерно на 100% или более по сравнению с контрольными предыдущими данными повышения или с контрольными данными повышения в отсутствие лечения.
В другом варианте изобретения термин "лечение" также включает сохранение оценки MMSE субъекта. Термин "лечение" включает увеличение числа баллов MMSE примерно на 1, примерно на 2, примерно на 3, примерно на 4, примерно на 5, примерно на 7,5, примерно на 10, примерно на 12,5, примерно
на 15, примерно на 17,5, примерно на 20 или примерно на 25 баллов. Термин также включает снижение
скорости уменьшения оценки MMSE субъекта по сравнению с предыдущими контрольными. В другом
варианте изобретения термин включает снижение скорости уменьшения оценки MMSE субъекта примерно на 5% или менее, примерно на 10% или менее, примерно на 20% или менее, примерно на 25% или
менее, примерно на 30% или менее, примерно на 40% или менее, примерно на 50% или менее, примерно
на 60% или менее, примерно на 70% или менее, примерно на 80% или менее, примерно на 90% или менее, примерно на 100% или менее по сравнению с контрольными предыдущими данными уменьшения
или с контрольными данными уменьшения в отсутствие лечения.
Еще в одном варианте изобретения термин "лечение" включает сохранение оценки ADAS-Cog
субъекта. Термин "лечение" включает снижение оценки ADAS-Cog субъекта примерно на 1 пункт или
более, примерно на 2 пункта или более, примерно на 3 пункта или более, примерно на 4 пункта или более, примерно на 5 пунктов или более, примерно на 7,5 пунктов или более, примерно на 10 пунктов или
более, примерно на 12,5 пунктов или более, примерно на 15 пунктов или более, примерно на 17,5 пунктов или более, примерно на 20 пунктов или более или примерно на 25 пунктов или более. Термин также
включает снижение скорости увеличения оценки ADAS-Cog субъекта по сравнению с предыдущими
контрольными. В другом варианте изобретения термин включает снижение скорости увеличения оценки
ADAS-Cog субъекта примерно на 5% или более, примерно на 10% или более, примерно на 20% или более, примерно на 25% или более, примерно на 30% или более, примерно на 40% или более, примерно на
50% или более, примерно на 60% или более, примерно на 70% или более, примерно на 80% или более,
примерно на 90% или более, примерно на 100% или более по сравнению с контрольными предыдущими
данными увеличения или с контрольными данными увеличения в отсутствие лечения.
В другом варианте изобретения термин "лечение", например АА или AL амилоидоза, включает повышение сывороточного креатинина, например увеличение клиренса креатинина на 10% или более, на
20% или более, на 50% или более, на 80% или более, на 90% или более, на 100% или более, на 150% или
более, на 200% или более. Термин "лечение" может также включать ремиссию нефротического синдрома
(NS). Он может также включать ремиссию хронической диареи и/или прибавку в весе, например, на 10%
или более, 15% или более или 20% или более.
Без всякой связи с теорией в некоторых аспектах фармацевтические композиции по изобретению
содержат соединение, которое предупреждает или ингибирует образование амилоидных фибрилл либо в
мозге, либо в другом важном органе (действуя локально, местно), либо в организме в целом (действуя
- 77 -
012429
системно). Фармацевтические композиции по изобретению могут эффективно регулировать амилоидное
отложение либо после попадания их (композиций) в мозг (после проникновения через гематоэнцефалический барьер), либо с периферии. При действии с периферии соединение в фармацевтической композиции может изменять равновесие амилоидогенного пептида между мозгом и плазмой таким образом, чтобы способствовать удалению (выходу) амилоидогенного пептида из мозга. Соединение может также способствовать клиренсу (или катаболизму) амилоидного белка (растворимого), а затем предупреждать образование и отложение амилоидных фибрилл вследствие уменьшения пула амилоидного белка в конкретном органе, например, печени, селезенке, поджелудочной железе, почке, суставах, мозге и т.д. Повышение выхода (удаления) амилоидогенного пептида из мозга приводит к уменьшению концентрации
амилоидогенного пептида в мозге и, следовательно, способствует уменьшению отложения амилоидогенного пептида. В частности, агент может снижать уровни амилоидных β-пептидов, например как Аβ40,
так и Аβ42, в CSF и в плазме, или агент может снижать уровни амилоидных β-пептидов, например Аβ40
и Аβ42, в CSF и повышать их в плазме. Или соединения, которые проникают в мозг, могут контролировать отложение, действуя непосредственно на амилоидогенный пептид мозга, например, сохраняя его в
нефибриллярной форме или содействуя его клиренсу из мозга, увеличивая его расщепление в мозге, или
защищая клетки мозга от вредного влияния амилоидогенного пептида. Агент может также вызывать
уменьшение концентрации амилоидогенного белка (т.е. в конкретном органе, таким образом, чтобы не
достигалась опасная (критичная) концентрация, необходимая для стимуляции образования или отложения амилоидных фибрилл). Кроме того, соединения по данному описанию могут ингибировать или
уменьшать взаимодействие между амилоидом и компонентом клеточной поверхности, например, гликозаминогликановой или протеогликановой составляющей базальной мембраны, в результате чего ингибирование или снижение этого взаимодействия вызывает наблюдаемый нейропротективный или клеточнопротективный эффект. Например, соединение может также предупреждать связывание или адгезию амилоидного пептида с клеточной поверхностью, процесс, который, как известно, вызывает поражение или
токсичность клеток. Аналогично, соединение может блокировать индуцированную амилоидом клеточную токсичность, или активацию микроглии, или индуцированную амилоидом нейротоксичность, или
ингибировать вызванное амилоидом воспаление. Соединение может также снижать скорость или количество агрегации амилоида, образования или отложения фибрилл, или соединение уменьшает степень
амилоидного отложения. Вышеприведенные механизмы действия не следует истолковывать как ограничивающие объем изобретения ввиду того, что изобретение может применяться на практике без такой
информации.
Термин "амилоидное-β заболевание" (или "заболевание, связанное с амилоидом-β", эти термины,
применяемые в данном описании, являются синонимами) можно применять в отношении легкой когнитивной недостаточности; сосудистой деменции; ранней болезни Альцгеймера; болезни Альцгеймера,
включая случайную (спорадическую, ненаследственную) болезнь Альцгеймера и семейную (наследственную) болезнь Альцгеймера; возрастного ухудшения когнитивных функций; церебральной амилоидной ангиопатии ("САА"); наследственной церебральной геморрагии; сенильной деменции (старческого
слабоумия); синдрома Дауна; миозита телец включений ("IBM"); или возрастной дегенерации желтого
пятна ("ARDM"). Согласно некоторым аспектам изобретения амилоид-β представляет собой пептид, содержащий 39-43 аминокислоты, или амилоид-β представляет собой амилоидогенный пептид, продуцируемый при использовании βАРР.
Легкая когнитивная недостаточность ("MCI") представляет собой состояние, характеризующееся
легкой, но заметной утратой мыслительного навыка, квалификации, умения, которая необязательно связана с наличием деменции. MCI часто, но не всегда, предшествует болезни Альцгеймера. Это диагноз,
который наиболее часто ассоциируется с небольшими проблемами памяти, но он может также характеризоваться легкой недостаточностью других мыслительных навыков, таких как языковые навыки или
навыки планирования. Однако, как правило, у человека с MCI гораздо более значительные проблемы с
памятью, чем можно было бы ожидать от человека в его возрасте или с его образованием. По мере прогрессирования состояния врач может изменить диагноз на "когнитивное расстройство от легкого до умеренного", что является общеизвестным в уровне техники.
Церебральная амилоидная ангиопатия ("САА") относится к специфичному отложению амилоидных
фибрилл на стенках лептомингеальной и кортикальной артерий, артериол и в капиллярах и венах. Ее
обычно ассоциируют с болезнью Альцгеймера, синдромом Дауна и нормальным старением, а также с
различными семейными состояниями, связанными с ударом или деменцией (см. Frangione, et al.,
Amyloid: J. Protein Folding Disord. 8, Suppl. 1, 36-42 (2001)). CAA может быть случайной или наследственной. Определены и клинически связаны либо с деменцией, либо с церебральной геморрагией многие
сайты мутаций либо в Аβ, либо в АРР гене. Примеры САА нарушений включают, но без ограничения,
наследственную церебральною геморрагию с амилоидозом Исландского типа (HCHWA-I); Голландский
вариант HCHWA (HCHWA-D; мутация в Аβ); Фламандскую мутацию Ар; Арктическую мутацию Аβ;
Айова мутацию Аβ; семейную Британскую деменцию. Известно, что церебральная амилоидная ангиопатия связана с церебральной геморрагией (или геморрагическим инсультом).
- 78 -
012429
Кроме того, аномальная аккумуляция АРР и амилоидного-β белка в мышечных волокнах непосредственно связана с патологией случайного миозита телец включений ("IBM") (Askanas et al., Pros. Natl.
Acad. Sci. USA 93, 1314-1319 (1996); Askanas et al., Current Opinion in Rheumathology 7, 486-496 (1995)).
Соответственно, соединения по изобретению можно применять профилактически или терапевтически
при лечении нарушений, при которых β-амилоидный белок аномально отлагается в ненейрологических
участках, например, для лечения IBM доставкой соединений к мышечным волокнам.
Кроме того, было показано, что Аβ ассоциируется с аномальными внеклеточными отложениями,
известными как друзы, которые аккумулируются вдоль базальной поверхности ретинального пигментированного эпителия у людей с возрастной дегенерацией желтого пятна (ARMD). ARMD является причиной необратимой потери зрения у людей старшего возраста. Полагают, что отложение Аβ может являться важным компонентом локальных воспалительных событий, которые способствуют атрофии ретинального пигментированного эпителия, биогенезу друз и патогенезу ARMD (Johnson, et al., Pros. Natl. Acad.
Sci. USA 99(18), 11830-5 (2002)). Следовательно, изобретение относится также к лечению или предупреждению возрастной дегенерации желтого пятна.
Данное изобретение относится также к способу предупреждения или ингибирования амилоидного
отложения у субъекта. Например, такой способ заключается во введении субъекту терапевтически эффективного количества соединения, способного снижать концентрацию амилоида (например, AL амилоидного белка (родственного λ или κ-цепям, например, амилоида λ, амилоида κ, амилоида κIV, амилоида
λVI, амилоида γ, амилоида γ1), Аβ, IAPP, β2M, AA, АН амилоидного белка или других амилоидов), так
что предупреждается или ингибируется аккумуляция или отложение амилоида.
В другом аспекте данное изобретение относится к способу предупреждения, уменьшения или ингибирования амилоидного отложения у субъекта. Например, такой способ заключается во введении субъекту терапевтически эффективного количества соединения, способного ингибировать амилоид (например, AL амилоидный белок (родственный λ или κ-цепям, например, амилоид λ, амилоид κ, амилоид κIV,
амилоид λVI, амилоид γ, амилоид γ1), Аβ, IAPP, β2М, AA, АН амилоидный белок или другие амилоиды),
так что предупреждается, уменьшается или ингибируется это амилоидное отложение.
Данное изобретение относится также к способу модуляции, например, минимизации, поражения
клеток, ассоциированного с амилоидом, содержащему стадию введения соединения, способного снижать
концентрацию амилоида (например, AL амилоидного белка (родственного λ или κ-цепям, например,
амилоида λ, амилоида к, амилоида κIV, амилоида λVI, амилоида γ, амилоида γ1), Аβ, IAPP, β2M, AA, АН
амилоидного белка или другого амилоида), так что модулируется указанное поражение клеток, обусловленное амилоидом. В некоторых аспектах изобретения способы модуляции обусловленного амилоидом
поражения клеток содержат стадию введения соединения, способного понизить концентрацию амилоида
или уменьшить взаимодействие амилоида с клеточной поверхностью.
Данное изобретение также включает способ непосредственного или опосредованного предупреждения гибели клеток в организме субъекта, причем метод заключается во введении субъекту терапевтически эффективного количества соединения, способного предупреждать опосредованные амилоидом
(например, AL амилоидным белком (родственным λ- или κ-цепям, например, амилоидом λ, амилоидом
κ, амилоидом κIV, амилоидом λVI, амилоидом γ, амилоидом γ1), Аβ, IAPP, β2M, AA, АН амилоидным
белком или другим амилоидом) события, которые приводят, непосредственно или опосредованно, к гибели клеток.
В одном варианте изобретения применяется способ лечения болезни Альцгеймера (например, случайной или семейной AD). Способ можно также применять профилактически или терапевтически для
лечения других клинических случаев амилоидного-β отложения, например, пациентов с синдромом Дауна и с церебральной амилоидной ангиопатией ("САА") или наследственной церебральной геморрагией.
Соединения по изобретению можно применять профилактически или терапевтически при лечении
нарушений, при которых амилоидный β-пептид аномально отлагается в ненейрологических участках,
например, для лечения IBM доставкой соединений к мышечным волокнам, или для лечения дегенерации
желтого пятна доставкой соединения (соединений) по изобретению к базальной поверхности ретинального пигментированного эпителия.
Настоящее соединение также охватывает способ модуляции обусловленного амилоидом поражения
клеток, содержащий стадию введения соединения, способного понизить концентрацию Аβ, или способного минимизировать взаимодействие Аβ (растворимого олигомерного или фибриллярного) с клеточной
поверхностью, так что модулируется указанное обусловленное амилоидом поражение клеток. В некоторых аспектах по изобретению способы модуляции поражения клеток, обусловленного амилоидом, содержат стадию введения соединения, способного понизить концентрацию Аβ или ослабить взаимодействие Аβ с клеточной поверхностью.
Кроме того, согласно данному изобретению охватывается способ предупреждения гибели клеток в
организме субъекта, причем указанный способ заключается во введении субъекту терапевтически эффективного количества соединения, способного предупредить опосредованные Аβ события, которые
- 79 -
012429
приводят, непосредственно или опосредованно, к гибели клеток.
Настоящее изобретение также включает способ модуляции обусловленного амилоидом поражения
клеток, содержащий стадию введения соединения, способного понизить концентрацию IAPP, или способного минимизировать взаимодействие IAPP (растворимого олигомерного или фибриллярного) с клеточной поверхностью, так что модулируется указанное обусловленное амилоидом поражение клеток. В
некоторых аспектах изобретения способы модуляции поражения клеток, обусловленного амилоидом,
содержат стадию введения соединения, способного понизить концентрацию IAPP или ослабить взаимодействие IAPP с клеточной поверхностью.
Согласно данному изобретению далее охватывается способ предупреждения гибели клеток в организме субъекта, причем указанный способ заключается во введении субъекту терапевтически эффективное количество соединения, способное предупредить события, опосредованные IAPP, которые приводят,
непосредственно или опосредованно, к гибели клеток.
Данное изобретение также включает способы и композиции, которые применимы при лечении амилоидоза. Способы по изобретению включают введение субъекту терапевтического соединения, которое
ингибирует амилоидное отложение. Соответственно, композиции и способы по изобретению применимы
для ингибирования амилоидоза при нарушениях, при которых происходит отложение амилоида. Способы по изобретению можно применять терапевтически для лечения амилоидоза или можно применять для
профилактики заболеваний у субъектов, предрасположенных к (наследственному) амилоидозу или с
идентифицированным повышенным риском развития амилоидоза, например, наследственного, или с
идентифицированным повышенным риском развития амилоидоза. В некоторых вариантах изобретение
включает способ ингибирования взаимодействия между амилоидогенным белком и компонентом (составляющим) базальной мембраны с целью ингибирования амилоидного отложения. Компонентом базальной мембраны является гликопротеин или протеогликан, предпочтительно, гепаран сульфат протеогликан. Терапевтическое соединение, применяемое в этом способе, может препятствовать связыванию
компонента базальной мембраны с нацеленным сайтом связывания на амилоидогенном белке, тем самым
ингибируя амилоидное отложение.
В некоторых аспектах способы по изобретению включают введение субъекту терапевтического соединения, которое ингибирует амилоидное отложение. "Ингибирование амилоидного отложения" включает предупреждение образования амилоида, ингибирование дальнейшего амилоидного образования у
субъекта, больного амилоидозом, и уменьшение амилоидных отложений у субъекта, больного амилоидозом. Ингибирование амилоидного отложения определяют по отношению к непролеченному субъекту или
по отношению к пролеченному субъекту до лечения. В одном варианте изобретения отложение амилоида
ингибируется за счет ингибирования взаимодействия между амилоидогенным белком и компонентом
базальной мембраны. Термин "базальная мембрана" относится к внеклеточной матрице, содержащей
гликопротеины и протеогликаны, включая ламинин, коллаген типа IV, фибронектин, перлекан, агрин,
дерматан сульфат и гепаран сульфат протеогликан (HSPG). В одном варианте изобретения отложение
амилоида ингибируется препятствием взаимодействию между амилоидогенным белком и сульфированным гликозамингликаном, таким как HSPG, дерматан сульфат, перлекан или аргин сульфат. Известно,
что сульфированные гликозаминогликаны присутствуют во всех типах амилоидов (см. Snow et al., Lab.
Invest. 56, 120-23 (1987)), а амилоидное отложение и HSPG отложение встречаются случайно на животных моделях амилоидоза (см. Snow et al., Lab. Invest. 56, 665-75 (1987) и Gervais, F. et al. Curr. Med.
Chem., 3, 361-370 (2003)). Были описаны консенсусные мотивы сайта связывания с HSPG в амилоидогенных белках (см., например, Cardin and Weintraub Arteriosclerosis 9, 21-32 (1989)).
Способность соединения предупреждать или блокировать образование или отложение амилоида
может крыться в его способности связываться с нефибриллярным, растворимым амилоидным белком и
сохранять его растворимость.
Способность терапевтического соединения по изобретению ингибировать взаимодействие между
амилоидогенным белком и гликопротеиновой или протеогликановой составляющей базальной мембраны
можно оценивать анализом связывания in vitro, таким как анализ, описанный в патенте США 5164295,
содержание которого вводится в данное описание в качестве ссылки. Или же способность соединения
связываться с амилоидогенным белком или ингибировать связывание компонента базальной мембраны
(например, HSPG) с амилоидогенным белком (например, Аβ) можно измерять методом массспектрометрии, в котором растворимый белок, например, Аβ, IAPP, β2М, инкубируют с соединением.
Соединение, которое связывается, например, с Аβ, вызывает изменение в масс-спектре белка. Типичные
протоколы масс-спектромегрического анализа с применением Аβ и IAPP можно найти в примерах, результаты приведены в табл. 3. Протокол можно легко модифицировать для корректировки точности данных, например, корректируя количество применяемого белка и/или соединения. Таким образом, например, можно детектировать связывание тестируемых соединений, связывание которых не определяется
при применении менее чувствительных протоколов тестирования.
Имеются альтернативные способы скрининга соединений, и опытный практик может легко их применять для получения показателя способности тестируемых соединений связываться, например, с фиб- 80 -
012429
риллярным Аβ. Одним из таких анализов скрининга является УФ-спектроскопия. В типичном протоколе
тестируемое соединение (20 мкМ) инкубируют с волокнами 50 мкМ Аβ(1-40) в течение 1 ч при 37°С в
физиологическом растворе, забуференном Tris (20 мМ Tris, 150 мМ NaCl, pH 7.4, содержащем 0.01 азида
натрия). После инкубации раствор центрифугируют в течение 20 мин при 21000 g для осаждения нитей
Аβ(1-40) вместе с любым связанным тестируемым соединением. Количество тестируемого соединения,
остающегося в супернатанте, можно затем определить, считывая оптическую плотность. Затем можно
рассчитать фракцию связанного тестируемого соединения, сравнивая количество, остающееся в супернатантах после инкубации с Аβ, с количеством, остающимся при контрольных инкубациях, в отсутствие
волокон Аβ. В качестве позитивного контроля в каждый анализ можно вводить тиофлавин Т и Конго
красный, каждый из которых, как известно, связывается с Аβ волокнами. Перед анализом тестируемое
соединение разводят до 40 мкМ, что вдвое больше концентрации в конечном тесте, а затем сканируют на
спектрофотометре Hewlett Packard 8453 UV/VIS для определения, достаточно ли оптической плотности
для детектирования.
В другом варианте изобретение относится к способу к повышению когнитивной функции у субъекта, страдающего амилоидным заболеванием. Способ включает введение эффективного количества терапевтического соединения по изобретению, так чтобы повышалась когнитивная функция. Когнитивную
функцию субъекта можно тестировать, используя способы, известные в уровне техники, такие как Клинический Рейтинг Деменции ("CDR"), Мини-исследование Ментального Статуса ("MMSE") или Когнитивная Шкала Оценки Болезни Альцгеймера ("ADAS-Cog").
В другом варианте изобретение относится к способу лечения субъекта от амилоидного заболевания.
Способ включает когнитивное тестирование субъекта перед введением соединения по изобретению, введение эффективного количества соединения по изобретению субъекту и когнитивное тестирование субъекта после введения соединения, так что осуществляется лечение субъекта, если оценка субъекта в указанном когнитивном тесте улучшается.
Термины "улучшение", "улучшенная" ("повышение", "повышенная") когнитивная (познавательная)
способность (функция) употребляются в контексте настоящего изобретения, если существует статистически значимая разница в нормальном состоянии между поведением субъектов, пролеченных способами
по изобретению, по сравнению с членами группы, принимавшей плацебо, предыдущими контрольными
показателями или между последовательными тестами одного и того же субъекта.
В одном варианте изобретения CDR субъекта сохраняет значение 0. В другом варианте изобретения
CDR субъекта понижается (т.е. улучшается) примерно на 0,25 или более, примерно на 0,5 или более,
примерно на 1,0 или более, примерно на 1,5 или более, примерно на 2,0 или более, примерно на 2,5 или
более, примерно на 3,0 или более. В другом варианте изобретения скорости повышения рейтинга CDR
субъекта уменьшается примерно на 5% или более, примерно на 10% или более, примерно на 20% или
более, примерно на 25% или более, примерно на 30% или более, примерно на 40% или более, примерно
на 50% или более, примерно на 60% или более, примерно на 70% или более, примерно на 80% или более,
примерно на 90% или более или примерно на 100% или более по сравнению с контрольными предыдущими данными повышения или с контрольными данными повышения в отсутствие лечения.
В одном варианте изобретения оценка MMSE субъекта сохраняется. Или же оценка MMSE может
повышаться примерно на 1, примерно на 2, примерно на 3, примерно на 4, примерно на 5, примерно на
7,5, примерно на 10, примерно на 12,5, примерно на 15, примерно на 17,5, примерно на 20 или примерно
на 25 баллов. В другом варианте изобретения скорость уменьшения оценки MMSE субъекта снижается
по сравнению с предыдущими контрольными данными. Например, скорость уменьшения оценки MMSE
субъекта снижается примерно на 5% или более, примерно на 10% или более, примерно на 20% или более,
примерно на 25% или более, примерно на 30% или более, примерно на 40% или более, примерно на 50%
или более, примерно на 60% или более, примерно на 70% или более, примерно на 80% или более, примерно на 90% или более, примерно на 100% или более по сравнению с контрольными предыдущими
данными уменьшения или с контрольными данными уменьшения в отсутствие лечения.
В одном варианте изобретение относится к способу лечения, замедления или прекращения амилоидного заболевания, ассоциированного с когнитивной недостаточностью (когнитивным расстройством),
путем введения субъекту эффективного количества терапевтического соединения, причем ежегодное
ухудшение когнитивной функции субъекта по шкале ADAS-Cog составляет менее 8 пунктов в год, менее
6 пунктов в год, менее 5 пунктов в год, менее 4 пунктов в год или менее 3 пунктов в год. Еще в одном
варианте изобретение относится к способу лечения, замедления или прекращения амилоидного заболевания, ассоциированного с когнитивной функцией, путем введения субъекту эффективного количества
терапевтического соединения, так чтобы когнитивная функция субъекта по шкале ADAS-Cog оставалась
постоянной в течение года. Термин "постоянная" включает флуктуации (отклонения) не более 2 пунктов.
"Оставаться постоянным" включает флуктуации два пункта или менее в любом направлении. Еще в одном варианте изобретения когнитивная функция субъекта улучшается на 2 пункта или более в год, на 3
пункта или более в год, на 4 пункта или более в год, на 5 пунктов или более в год, на 6 пунктов или более
в год, на 7 пунктов или более в год, на 8 пунктов или более в год, и т.д. по шкале ADAS-Cog. В другом
- 81 -
012429
альтернативном варианте скорость увеличения оценки ADAS-Cog субъекта по сравнению с предыдущими контрольными снижается. Например, скорость увеличения оценки ADAS-Cog субъекта может снижаться примерно на 5% или более, примерно на 10% или более, примерно на 20% или более, примерно
на 25% или более, примерно на 30% или более, примерно на 40% или более, примерно на 50% или более,
примерно на 60% или более, примерно на 70% или более, примерно на 80% или более, примерно на 90%
или более, примерно на 100% или более по сравнению с контрольными предыдущими данными увеличения или с контрольными данными увеличения в отсутствие лечения.
В другом варианте изобретения отношение Аβ42:Аβ40 в CSF или плазме субъекта снижается примерно на 15% или более, примерно на 20% или более, примерно на 25% или более, примерно на 30% или
более, примерно на 35% или более, примерно на 40% или более, примерно на 45% или более или примерно на 50% или более. В другом варианте изобретения уровни Аβ в спинно-мозговой жидкости субъекта снижаются примерно на 15% или более, примерно на 25% или более, примерно на 35% или более,
примерно на 45% или более, примерно на 55% или более, примерно на 75% или более или примерно на
90% или более.
Следует понимать, что повсюду, где в данном описании представлены величины и интервалы величин, например, возраст популяций субъектов, доза и уровни в крови, предполагается, что все значения и
интервалы, охватываемые этими величинами и интервалами, входят в объем настоящего изобретения.
Кроме того, все значения и интервалы могут также быть выше или ниже пределов интервала.
Кроме того, изобретение относится к любому новому химическому соединению по данному описанию. Т.е. изобретение относится к новым соединениям и новым способам их применения по данному
описанию, которые входят в объем раскрываемой в данном описании формулы изобретения и которые не
раскрываются в цитированных патентах и патентных заявках.
Синтез соединений по изобретению
Обычно соединения по настоящему изобретению можно получать способами, проиллюстрированными на общих схемах реакций, например, описанных ниже, или модификациями этих способов, применяя легко доступные исходные, реагенты и обычные методы синтеза. В этих реакциях также возможно
использовать варианты, которые известны сами по себе, но не упоминаются здесь. Также включены
функциональные и структурные эквиваленты соединений по данному описанию, которые имеют одинаковые общие свойства, при этом получены один или более простых вариантов заместителей, которые не
оказывают вредного влияния на основные свойства или полезность соединения.
Соединения по настоящему изобретению можно легко получать по схемам и протоколам синтезов
по данному описанию, проиллюстрированным представленными конкретными методиками. Однако,
специалисты в данной области техники понимают, что можно использовать другие синтетические методы получения соединений по данному изобретению и что нижеприведенные методы даны лишь в качестве примера и не являются ограничивающими данное изобретение. См., например, "Comprehensive Organic Transformations" by R. Larock, VCH Publishers (1989). Также понятно, что применяется различная
стандартная в уровне техники стратегия введения и снятия защитных групп (см., например, "Protective
Groups in Organic Synthesis" by Greene and Wuts). Специалисты в релевантной области техники знают,
что выбор любой конкретной защитной группы (например, защитной амино или карбоксильной группы)
зависит от устойчивости защитного фрагмента в условиях последующих реакций и поймут, какой выбор
надо сделать.
Ниже выборочно представлены образцы обширной химической литературы в качестве иллюстрации знаний специалистов в данной области техники: "Chemistry of the Amino Acids" by J.P. Greenstein and
M. Winitz, John Wiley & Sons, Inc., New York (1961); "Comprehensive Organic Transformations" by R. Larock, VCH Publishers (1989); T.D. Ocain, et al., J. Med. Chem. 31, 2193-99 (1988); E.M. Gordon, et al., J. Med.
Chem. 31, 2199-10 (1988); "Practice of Peptide Synthesis" by M. Bodansky and A. Bodanszky, SpringerVerlag, New York (1984); "Protective Groups in Organic Synthesis" by T. Greene and P Wuts (1991); "Asymmetric Synthesis: Construction of Chiral Molecules Using Amino Acids" by G.M. Coppola and H.F. Schuster,
John Wiley & Sons, Inc., New York (1987); "The Chemical Synthesis of Peptides" by J. Jones, Oxford University Press, New York (1991); и "Introduction of Peptide Chemistry" by P.D. Bailey, John Wiley & Sons, Inc.,
New York (1992).
Синтез соединений по изобретению проводят в растворителе. Подходящими растворителями являются вещества, жидкие при комнатной температуре и при обычном давлении или остающиеся в жидком
состоянии при температуре и давлении реакции. Подходящие растворители конкретно не ограничиваются при условии, что они не препятствуют самой реакции (т.е. предпочтительно они являются инертными
растворителями) и они растворяют определенное количество реагентов. В зависимости от обстоятельств
растворители могут быть перегнанными или дегазированными. Растворителями могут быть, например,
алифатические углеводороды (например, смесь гексанов, гептанов, лигроин, петролейный эфир, циклогексан или метилциклогексан) и галогенированные углеводороды (например, хлористый метилен, хлороформ, четыреххлористый углерод, дихлорэтан, хлорбензол, или дихлорбензол); ароматические углеводороды (например, бензол, толуол, тетрагидронафталин (тетралин), этилбензол или ксилол); простые
- 82 -
012429
эфиры (например, диглим, метил-трет-бутиловый эфир, этил-трет-бутиловый эфир, диэтиловый эфир,
диизопропиловый эфир, тетрагидрофуран или метилтетрагидрофураны, диоксан, диметоксиэтан или диметиловый эфир диэтиленгликоля); нитрилы (например, ацетонитрил); кетоны (например, ацетон);
сложные эфиры (например, метилацетат или этилацетат); и их смеси.
Как правило, после окончания реакции продукт выделяют из реакционной смеси обычными методами. Например, растворитель удаляют упариванием или фильтрованием, если продуктом является твердое вещество, необязательно в вакууме. По завершении реакции к остатку можно добавлять воду, подкислять или подщелачивать водный слой и отфильтровывать, но следует быть осторожными при работе с
неустойчивыми в воде веществами. Аналогично, к реакционной смеси можно добавлять воду с гидрофобным растворителем для экстракции нацеленного соединения. Органический слой можно промывать
водой, сушить безводным сульфатом магния или сульфатом натрия и упаривать растворитель, получая
заданное соединение. Полученное таким образом заданное соединение можно, при необходимости, очищать, например, перекристаллизацией, повторным осаждением (репреципитацией), хроматографией, или
превращая в соль добавлением кислоты или основания.
Соединения по изобретению могут поставляться в растворе в подходящем растворителе или не содержащей растворителя форме (например, в лиофилизированном виде). В другом аспекте изобретения
соединения и буферы, необходимые для осуществления способов по изобретению, могут быть упакованы в виде набора, необязательно включающего контейнер. Набор может применяться для лечения или
предупреждения амилоидного заболевания в соответствии со способами по данному описанию и может
содержать инструкции по применению в способе по изобретению. Дополнительные компоненты набора
могут включать кислоты, основания, буферизующие агенты, неорганические соли, растворители, антиоксиданты, консерванты или хелаторы металлов. Дополнительные компоненты набора присутствуют в
виде чистых композиций или в виде водных растворов или растворов в органических растворителях, которые содержат один или более дополнительных компонентов набора. Кроме того, любой компонент или
все компоненты набора, необязательно, содержат буферы.
Термин "контейнер" включает любую тару для хранения терапевтического соединения. Например,
в одном варианте изобретения контейнер представляет собой упаковку, которая содержит соединение. В
других вариантах изобретения контейнер не представляет собой упаковку, содержащую вещество, т.е.
контейнер представляет собой тару, такую как коробка или склянка (флакон), которая содержит упакованное соединение или неупакованное соединение и инструкции по применению соединения. Кроме того, методы упаковки общеизвестны в уровне техники. Следует понимать, что инструкции по применению терапевтического соединения могут быть в упаковках, содержащих терапевтическое соединение,
что помогает при работе с этим соединением.
Фармацевтические препараты
В другом варианте настоящее изобретение относится к фармацевтическим композициям, содержащим агенты любой формулы по данному описанию для лечения амилоидного заболевания, а также способы производства таких фармацевтических композиций.
Обычно агенты по настоящему изобретению можно получать способами, проиллюстрированными
на общих схемах реакций, например, в патентах и патентных заявках, указанных в данном описании, или
модификацией этих способов, с применением легкодоступных исходных, реагентов и обычных методов
синтеза. В этих реакциях можно также применять варианты, которые известны сами по себе, но не упоминаются в данном описании. Также включены функциональные и структурные эквиваленты агентов по
данному описанию, которые имеют одинаковые общие свойства, при этом получены один или более
простых вариантов заместителей, которые не оказывают вредного влияния на основные свойства или
полезность соединения.
Агенты по изобретению могут поставляться в растворе в подходящем растворителе или в не содержащей растворителя форме (например, в лиофилизированном виде). В другом аспекте изобретения агенты и буферы, необходимые для осуществления способов по изобретению, могут быть упакованы в виде
набора. Набор может применяться в соответствии со способами по данному описанию и может содержать инструкции по применению в способе по изобретению. Дополнительные компоненты набора могут
включать кислоты, основания, буферизующие агенты, неорганические соли, растворители, антиоксиданты, консерванты или хелаторы металлов. Дополнительные компоненты набора присутствуют в виде чистых композиций или в виде водных растворов или растворов в органических растворителях, которые
содержат один или более дополнительных компонентов набора. Кроме того, любой компонент или все
компоненты набора, необязательно, содержат буферы.
Терапевтический агент можно также вводить парентерально, интраперитонеально, интраспинально
или интрацеребрально. Можно приготовить дисперсии в глицерине, жидкие полиэтиленгликоли и их
смеси, и в маслах. В обычных условиях хранения эти препараты могут содержать консервант для предупреждения роста микроорганизмов.
Для введения терапевтического агента другим методом, нежели парентаральный, необходимо покрыть агент материалом для предупреждения его инактивации или ввести агент вместе с этим материалом. Например, терапевтический агент можно вводить субъекту в подходящем носителе, например, в
- 83 -
012429
липосомах, или разбавителе. Фармацевтически приемлемые разбавители включают физиологический
раствор и водные буферные растворы. Липосомы включают CGF эмульсии вода в масле в воде, а также
обычные липосомы (Stejan et al., J. Neuroimmunol. 7, 27 (1984)).
Фармацевтические композиции, пригодные для применения в виде инъекций, включают стерильные водные растворы (если они растворимы в воде) или дисперсии и стерильные порошки для немедленного приготовления инъецируемых растворов или дисперсии. Во всех случаях композиция должна
быть стерильной и должна быть жидкой до такой степени, чтобы ее можно было легко набирать шприцем. Она должна быть устойчивой в условиях производства и хранения и должна сохраняться от загрязнения микроорганизмами, такими как бактерии и грибки.
Подходящие фармацевтически приемлемые носители включают, без ограничения, любые неиммуногенные фармацевтические адъюванты, пригодные для орального, парентерального, назального, "мукозного", трансдермального, интраваскулярного (внутрисосудистого) (IV), внутриартериального (IA),
внутримышечного (IM) и подкожного (SC) применения, такие как фосфатно-солевой буферный раствор
(PBS).
Носитель может быть растворителем или средой для дисперсии, содержащей, например, воду, этанол, полиол (например, глицерин, пропиленгликоль и жидкий полиэтиленгликоль и т.п.), их подходящие
смеси и растительные масла. Соответствующую текучесть можно сохранять, применяя, например, покрытие, такое как лецитин, поддерживая нужный размер частиц в случае дисперсии и применяя поверхностно-активные вещества. Предупреждать действие микроорганизмов можно с помощью различных
антибактериальных и противогрибковых агентов, например, парабенов, хлорбутанола, фенола, аскорбиновой кислоты, тимерозала и т.п. Во многих случаях в состав композиции входят изотонические агенты,
например, сахара, хлорид натрия или многоатомные спирты, такие как маннит и сорбит. Пролонгированное всасывание инъецируемых композиций можно осуществить, вводя в композицию агент, который
замедляет всасывание, например, моностеарат алюминия или желатин.
Стерильные инъецируемые растворы можно приготовить, вводя нужное количество терапевтического агента в подходящий растворитель с одним или с комбинацией перечисленных выше ингредиентов, если требуется, с последующей стерилизацией фильтрованием. Обычно дисперсии готовят, вводя
терапевтический агент в стерильный носитель, который содержит основную дисперсионную среду и
требуемые другие вышеперечисленные ингредиенты. В случае стерильных порошков для приготовления
стерильных инъецируемых растворов способами приготовления являются вакуумная сушка и лиофилизация, при этом получают порошок активного ингредиента (т.е. терапевтический агент) плюс дополнительный нужный ингредиент из его раствора, предварительно стерилизованного фильтрацией.
Терапевтический агент можно вводить (пер)орально, например, с инертным разбавителем или усвояемым пищевым носителем. Терапевтический агент и другие ингредиенты могут быть также заключены в твердую или мягкую желатиновую капсулу, спрессованы в таблетки или вводиться непосредственно в пищу субъекта. Для орального терапевтического применения терапевтический агент можно вводить
с эксципиентами и применять в виде таблеток для проглатывания, трансбуккальных таблеток, пастилок,
капсул, эликсиров, суспензий, сиропов, облаток и т.п. Процентное содержание терапевтического агента в
композициях и препаратах, естественно, может меняться. Количество терапевтического агента в таких
композициях для применения в терапии таково, что получают нужную дозу.
Для простоты применения и однородности дозировки особенно предпочтительно готовить парентеральные композиции в виде стандартных лекарственных форм. Стандартная лекарственная форма по
данному описанию относится к физически дискретным единицам, применимым в качестве однократных
доз для проходящих лечение людей; причем каждая единица содержит заданное количество терапевтического агента, которое, вместе с требуемым терапевтическим носителем, по расчетам, вызывает нужный
терапевтический эффект. Технические требования к стандартным лекарственным формам по изобретению диктуются и непосредственно определяются (зависят от) (а) индивидуальными особенностями (характеристиками) терапевтического агента и конкретным ожидаемым терапевтическим эффектом, и (б)
ограничениями, свойственными технике приготовления смесей данного терапевтического агента для лечения амилоидного отложения у субъектов.
Следовательно, настоящее изобретение включает фармацевтические препараты, содержащие агенты по формулам в данном описании, в том числе их фармацевтически приемлемые соли, в фармацевтически приемлемых носителях для аэрозоля, орального и парентерального применения. Также настоящее
изобретение включает такие агенты, или их соли, которые лиофилизированы и которые могут быть восстановлены с образованием фармацевтически приемлемых препаратов для внутривенной, внутримышечной или подкожной инъекции. Введение может также быть интрадермальным или трансдермальным
(внутрикожным и чрескожным). Согласно настоящему изобретению агент по формулам в данном описании и его фармацевтически приемлемые соли можно вводить орально или ингаляцией в виде твердого
вещества или можно вводить внутримышечно или внутривенно в виде раствора, суспензии или эмульсии. Или же агенты или соли можно также вводить ингаляцией, внутривенно или внутримышечно в виде
липосомной суспензии.
Также охватываются фармацевтические препараты, пригодные для применения в виде аэрозоля, ин- 84 -
012429
галяцией. Эти препараты содержат раствор или суспензию нужного агента любой формулы по данному
описанию, или его соли, или множество твердых частиц агента или соли. Заданный препарат можно помещать в небольшую камеру и распылять. Распыление можно осуществлять с помощью сжатого воздуха
или ультразвука, при этом образуется множество капелек жидкости или твердых частиц, содержащих
агент или соли. Капельки жидкости или твердые частицы должны иметь размер примерно 0,5-5 мкм.
Твердые частицы можно получать, обрабатывая твердый агент по любой формуле в данном описании,
или его соль, любым подходящим способом, известным в уровне техники, например, очень тонким измельчением. Например, размер твердых частиц или капелек составляет около 1-2 мкм. Для того чтобы
достичь этого, применяют промышленные распылители (небулайзеры).
Фармацевтический препарат, пригодный для применения в аэрозоле, может быть в виде жидкости,
препарат содержит водорастворимый агент любой формулы по данному описанию, или его соль, в носителе, содержащем воду. Может присутствовать поверхностно-активное вещество, которое уменьшает
поверхностное натяжение препарата в достаточной степени, чтобы при распылении образовывались капельки нужного размера.
Композиции для перорального применения включают также жидкие растворы, эмульсии, суспензии
и т.п. Фармацевтически приемлемые носители, пригодные для приготовления таких композиций, общеизвестны в уровне техники. Типичные компоненты носителей для сиропов, эликсиров, эмульсий и суспензий включают этанол, глицерин, пропиленгликоль, полиэтиленгликоль, жидкую сахарозу, сорбит и
воду. Типичные суспендирующие агенты для приготовления суспензий включают метилцеллюлозу, натрий карбоксиметилцеллюлозу, трагакант и альгинат натрия; типичные поверхностно-активные вещества
включают лецитин и полисорбат 80; типичные консерванты включают метилпарабен и бензоат натрия.
Пероральные жидкие композиции могут также содержать один или более компонентов, таких как подсластители, агенты, придающие вкус и запах, и красители, раскрываемые выше.
Фармацевтические композиции можно также покрывать обычными способами, как правило, покрытиями, зависящими от pH или от времени, так что агент по изобретению высвобождается в желудочнокишечном тракте вблизи заданного места применения или в различное время, чтобы достичь нужного
действия. Такие лекарственные формы обычно включают, но без ограничения, один из следующих агентов: ацетат фталат целлюлозы, фталат поливинилацетата, фталат гидроксипропилметилцеллюлозы, этилцеллюлозу, воски и шеллак.
Другие композиции, применимые для системной доставки агентов по изобретению, включают
подъязычные, трансбуккальные и назальные лекарственные формы. Такие композиции, как правило, содержат один или более наполнителей, таких как сахароза, сорбит и маннит; и связующие, такие как смола акации аравийской, микрокристаллическая целлюлоза, карбоксиметилцеллюлоза и гидроксипропилметилцеллюлоза. Также в состав могут входить раскрываемые выше вещества, способствующие проглатыванию, смазки, подсластители, красители, антиоксиданты и вещества, придающие вкус и запах.
Также возможно топическое (местное) применение композиций по данному изобретению, например, путем непосредственного нанесения слоя или распределения композиции на эпидермальную или
эпителиальную ткань субъекта, или трандермальное применение с помощью "пластыря". Такие композиции включают, например, лосьоны, кремы, растворы, гели и твердые вещества. Эти топические композиции могут содержать эффективное количество, обычно по меньшей мере около 0,1% или даже около 15% агента по изобретению. Подходящие носители для топического (местного) применения обычно остаются на коже в виде сплошной пленки и нелегко удаляется под действием кожного дыхания или воды.
Обычно носитель является по природе органическим соединением и может диспергировать или растворять терапевтический агент. Носитель может содержать фармацевтически приемлемые эмольенты,
эмульгаторы, загустители, растворители и т.п.
В одном варианте изобретения активный агент применяют в терапевтически эффективной дозе,
достаточной для ингибирования амилоидного отложения в организме субъекта. Например, "терапевтически эффективная" доза ингибирует отложение по меньшей мере приблизительно на 20%, или по меньшей
мере приблизительно на 40%, или даже по меньшей мере приблизительно на 60%, или по меньшей мере
приблизительно на 80% по сравнению с непролеченными субъектами. У пациента с болезнью Альцгеймера "терапевтически эффективная" доза стабилизирует когнитивную функцию или предупреждает
дальнейшее ухудшение когнитивной функции (т.е. предупреждение, замедление или прекращение прогрессирования заболевания). Соответственно, настоящее изобретение охватывает терапевтические лекарственные вещества. Под "лекарственным средством" или "лекарственным веществом" понимают
агент, оказывающий благотворное целебное или профилактическое действие на конкретное заболевание
или состояние человека или животного.
В случае АА и AL амилоидоза агент может улучшить или стабилизировать конкретную функцию
органа. В качестве примера, почечную функцию можно стабилизовать или улучшить на 10% или выше,
на 20% или выше, на 30% или выше, на 40% или выше, на 50% или выше, на 60% или выше, на 70% или
выше, на 80% или выше либо выше чем на 90%.
В случае IAPP агент может сохранять или улучшать функцию островковых β-клеток, определяемую
концентрацией инсулина или отношением Pro-IAPP/IAPP. В другом варианте изобретения отношение
- 85 -
012429
Pro-IAPP/IAPP повышается примерно на 10% или больше, примерно на 20% или больше, примерно на
30% или больше, примерно на 40% или больше или примерно на 50%. В другом варианте изобретения
отношение повышается до 50%. Кроме того, терапевтически эффективное количество агента может эффективно улучшать уровни гликемии или инсулина.
В другом варианте изобретения активные агенты применяют в терапевтически эффективной дозе,
достаточной для лечения АА (вторичного) амилоидоза и/или AL (первичного) амилоидоза, с помощью
стабилизации почечной функции, снижения протеинурии, повышения клиренса креатинина (например,
по меньшей мере на 50% или больше либо по меньшей мере на 100% или больше), ремиссии хронической диареи или увеличения веса (например, на 10% или больше). Кроме того, агенты можно применять
в терапевтически эффективной дозе, достаточной для положительной динамики при нефротическом синдроме.
Кроме того, активные агенты можно вводить в терапевтически эффективной дозе, достаточной для
уменьшения у субъекта отложения амилоидного белка, например Аβ40 или Аβ42. Например, терапевтически эффективная доза уменьшает амилоидное отложение по меньшей мере приблизительно на 15%,
или по меньшей мере приблизительно на 40%, или даже по меньшей мере приблизительно на 60%, или
по меньшей мере приблизительно на 80% относительно непролеченных субъектов.
В другом варианте изобретения активные агенты применяют в терапевтически эффективной дозе,
достаточной для увеличения амилоидного белка, например, Аβ40 или Аβ42, в крови, CSF или плазме
субъекта. Например, терапевтически эффективная доза повышает концентрацию по меньшей мере приблизительно на 15%, или по меньшей мере приблизительно на 40%, или даже по меньшей мере приблизительно на 60%, или по меньшей мере приблизительно на 80% относительно непролеченных субъектов.
Еще в одном варианте изобретения активные агенты применяют в терапевтически эффективной дозе, достаточной для того, чтобы сохранить рейтинг CDR субъекта на уровне исходного или на уровне 0.
В другом варианте изобретения активные агенты применяют в терапевтически эффективной дозе, достаточной для того, чтобы понизить рейтинг CDR субъекта примерно на 0,25 или более, примерно на 0,5
или более, примерно на 1,0 или более, примерно на 1,5 или более, примерно на 2,0 или более, примерно
на 2,5 или более либо 3,0 или более. В другом варианте изобретения активные агенты применяют в терапевтически эффективной дозе, достаточной для того, чтобы понизить скорость увеличения рейтинга
CDR субъекта по сравнению с контрольными предыдущими данными или с контрольными данными,
полученными на непролеченных пациентах. В другом варианте изобретения терапевтически эффективной дозы достаточно для того, чтобы понизить скорость увеличения рейтинга CDR (относительно непролеченных субъектов) примерно на 5% или более, примерно на 10% или более, примерно на 20% или более, примерно на 25% или более, примерно на 30% или более, примерно на 40% или более, примерно на
50% или более, примерно на 60% или более, примерно на 70% или более, примерно на 80% или более,
примерно на 90% или более либо примерно на 100% или более.
Еще в одном варианте изобретения активные агенты применяют в терапевтически эффективной дозе, достаточной для того, чтобы сохранить оценки MMSE субъекта. В другом варианте изобретения активные агенты применяют в терапевтически эффективной дозе, достаточной для того, чтобы увеличить
число баллов MMSE примерно на 1, примерно на 2, примерно на 3, примерно на 4, примерно на 5, примерно на 7,5, примерно на 10, примерно на 12.5, примерно на 15, примерно на 17,5, примерно на 20 или
примерно на 25 баллов. В другом варианте изобретения активные агенты применяют в терапевтически
эффективной дозе, достаточной для того, чтобы снизить скорость уменьшения оценки MMSE субъекта
по сравнению с предыдущими контрольными. В другом варианте изобретения активные агенты применяют в терапевтически эффективной дозе, достаточной для того, чтобы можно было снизить скорость
уменьшения оценки MMSE субъекта примерно на 5% или менее, примерно на 10% или менее, примерно
на 20% или менее, примерно на 25% или менее, примерно на 30% или менее, примерно на 40% или менее, примерно на 50% или менее, примерно на 60% или менее, примерно на 70% или менее, примерно на
80% или менее, примерно на 90% или менее, примерно на 100% или менее по сравнению с контрольными предыдущими данными уменьшения или с контрольными данными уменьшения в отсутствие лечения.
Еще в одном варианте изобретения активные агенты применяют в терапевтически эффективной дозе, достаточной для того, чтобы сохранить оценки ADAS-Cog субъекта. В другом варианте изобретения
активные агенты применяют в терапевтически эффективной дозе, достаточной для того, чтобы снизить
оценки ADAS-Cog субъекта примерно на 2 пункта или более, примерно на 3 пункта или более, примерно
на 4 пункта или более, примерно на 5 пунктов или более, примерно на 7,5 пунктов или более, примерно
на 10 пунктов или более, примерно на 12,5 пунктов или более, примерно на 15 пунктов или более, примерно на 17,5 пунктов или более, примерно на 20 пунктов или более либо примерно на 25 пунктов или
более. В другом варианте изобретения активные агенты применяют в терапевтически эффективной дозе,
достаточной для того, чтобы снизить скорость увеличения оценки ADAS-Cog субъекта по сравнению с
предыдущими контрольными или с контрольными данными, полученными в отсутствие лечения. В другом варианте изобретения терапевтически эффективной дозы достаточно для того, чтобы снизить ско- 86 -
012429
рость увеличения оценки ADAS-Cog субъекта (относительно непролеченных субъектов) примерно на 5%
или более, примерно на 10% или более, примерно на 20% или более, примерно на 25% или более, примерно на 30% или более, примерно на 40% или более, примерно на 50% или более, примерно на 60% или
более, примерно на 70% или более, примерно на 80% или более, примерно на 90% или более, примерно
на 100% или более.
В другом варианте изобретения активные агенты применяют в терапевтически эффективной дозе,
достаточной для того, чтобы понизить отношение Аβ42:Аβ40 в CSF или плазме субъекта примерно на
15% или более, примерно на 20% или более, примерно на 25% или более, примерно на 30% или более,
примерно на 35% или более, примерно на 40% или более, примерно на 45% или более либо примерно на
50% или более.
В другом варианте изобретения активные агенты применяют в терапевтически эффективной дозе,
достаточной для того, чтобы понизить уровень Аβ в CSF или плазме субъекта примерно на 15% или более, примерно на 25% или более, примерно на 35% или более, примерно на 45% или более, примерно на
55% или более, или примерно на 75% или более либо примерно на 95% или более.
Токсичность и терапевтическую эффективность таких агентов можно определить стандартными
фармацевтическими методами на клеточных культурах или на подопытных животных, например, с целью определения LD50 (дозы, летальной для 50% популяции) и ED50 (дозы, терапевтически эффективной в 50% популяции). Отношение доз, вызывающих токсический и терапевтический эффект, есть терапевтический индекс, оно может быть также выражен в виде отношения LD50/ED50, и обычно чем больше терапевтический индекс, тем выше эффективность. Когда применяются агенты, которые обладают
побочным действием, следует с осторожностью подходить к созданию системы доставки, которая нацеливает такие агенты на пораженную ткань, чтобы свести к минимуму возможное поражение непораженных клеток и, тем самым, уменьшить побочный эффект.
Ясно, что соответствующие дозы зависят от ряда факторов, известных рядовому врачу, ветеринару
или исследователю. Дозы(а) низкомолекулярного вещества меняются, например, в зависимости от особенностей, размера (габаритов) и состояния подлежащего лечению субъекта или обрабатываемого образца, кроме того, они зависят от способа введения композиции, если он применим, и от действия, которое, по предположению практикующего врача, низкомолекулярное вещество должно оказать на субъекта. Типичные дозы включают миллиграммы или микрограммы низкомолекулярного вещества на килограмм веса субъекта или образца (например, около 1-500 мкг/кг, примерно от 100 мкг/г до 5 мг/кг или
около 1-50 мкг/кг). Понятно, кроме того, что соответствующие дозы зависят от активности вещества.
Такие подходящие дозы можно определить методами анализа по данному описанию. Если животному
(например, человеку) нужно вводить одно или более таких соединений, врач, ветеринар или исследователь предписывает сравнительно низкую дозу, последовательно ее повышая до тех пор, пока не будет
получен нужный ответ. Кроме того, понятно, что специфичный уровень дозы для любого конкретного
животного субъекта зависит от многих факторов, включая активность конкретного применяемого агента,
возраст, вес тела, общее состояние здоровья, пол и питание субъекта, время введения, способ применения, скорость экскреции и любую комбинацию лекарственных веществ.
Способность агента ингибировать амилоидное отложение можно оценивать на животной модельной системе, которая помогает прогнозировать эффективность ингибирования амилоидного отложения
при болезнях человека, например, на трансгенной мыши, экспрессирующей человеческий АРР, или на
других животных моделях, в которых наблюдается отложение Аβ, или, например, на животной модели
АА амилоидоза. Аналогично, способность агента предупреждать или уменьшать когнитивную недостаточность (когнитивное расстройство) в модельной системе может быть показателем эффективности у
людей. Или же, способность агента можно оценивать, изучая способность агента ингибировать образование амилоидных фибрилл in vitro, например, анализ фибриллогенеза, например, по данному описанию,
включая анализ ThT, CD или ЕМ. Также можно определять (измерять) связывание агента с амилоидными
фибриллами MS анализом по данному описанию. Способность агента защищать клетки от индуцированной амилоидом токсичности оценивают in vitro биохимическими анализами, определяя процент гибели
клеток, вызванной амилоидным белком. Способность агента модулировать почечную функцию можно
также оценивать на подходящей животной модельной системе.
Терапевтический агент по изобретению можно также применять in vivo для ингибирования амилоидного отложения или лечения некоторых амилоидных заболеваний, таких как β2М амилоидоз и другие
диализные амилоидозы. Ex vivo применение терапевтических агентов по изобретению можно осуществлять при контакте жидкости организма (например, крови, плазмы) с терапевтическим соединением по
данному изобретению, так что терапевтическое соединение может осуществлять свою предполагаемую
функцию, а затем вводить эту жидкость из организма субъекту. Терапевтическое соединение по изобретению может осуществлять свою функцию ex vivo (например, диализный фильтр), in vivo (например,
вводимое с жидкостью организма) или обоими способами. Например, терапевтическое соединение по
изобретению можно применять для снижения уровней β2М в плазме и/или сохранения β2М в растворимой форме ex vivo, in vivo или как ex vivo, так и in vivo.
- 87 -
012429
Гематоэнцефалический барьер
Вне зависимости от конкретного механизма, по которому соединение проявляет свое биологическое действие, это соединение предупреждает или лечит амилоидные заболевания, например, такие как
болезнь Альцгеймера, САА, обусловленный диабетом амилоидоз, AL амилоидоз, синдром Дауна или
β2М амилоидоз. Соединение может реверсировать отложение амилоида или способствовать отложению
амилоида, или соединение может способствовать клиренсу бляшек, или замедлять (затруднять) отложение. Например, соединение может уменьшать концентрацию амилоида в мозге субъекта по сравнению с
непролеченным субъектом. Соединение может проникать в мозг через гематоэнцефалический барьер
("ВВВ") для проявления своего биологического действия. Соединение может сохранять амилоид в нефибриллярной форме, или же соединение может повышать скорость клиренса растворимого амилоида из
мозга субъекта по сравнению с непролеченным субъектом. Соединение может также повышать скорость
расщепления Аβ в мозге до объединения в фибриллы. Соединение может также действовать на периферии, вызывая изменение равновесия концентрации амилоидного белка в двух компартментах (т.е. системный против (vs) центрального), в этом случае соединение не обязательно должно проникать в мозг
для того, чтобы снизить концентрацию Аβ в мозге ("синк"-эффект, эффект проникновения, просачивания).
Агенты по изобретению, которые проявляют физиологическое действие in vivo в мозге, могут быть
более применимы, если им облегчается доступ к клеткам-мишеням в мозге. Не ограничивающими примерами клеток мозга являются нейроны, глиальные клетки (астроциты, олигодендроциты, микроглия),
клетки сосудов мозга (мышечные клетки, эндотелиальные клетки) и клетки, которые содержат оболочки
мозга. Гематоэнцефалический барьер ("ВВВ") обычно ограничивает доступ к клеткам мозга, действуя
как в качестве физической, так и в качестве функциональной блокады, которая отделяет паренхиму мозга
от системного кровотока (см., например, Partridge, et al., J. Neurovirol. 5(6), 556-69 (1999); Rubin et al.,
Rev. Neurosci. 22, 11-28 (1999)). Молекулам (вещества) в кровотоке обычно облегчен доступ к клеткам
мозга по одному из двух способов: опосредованный липидами перенос (транспорт) через ВВВ с помощью свободной диффузии или активный (или катализируемый) транспорт.
Агенты по изобретению можно готовить таким образом, чтобы улучшить распределение in vivo,
например, в виде порошковых или жидких таблеток или раствора для орального применения или в виде
назального спрея, капель в нос, геля или мази, с помощью трубки или катетера, шприцем, коктейлем,
тампоном (компрессом) или в виде инфузии под слизистую оболочку. Например, гематоэнцефалический
барьер (ВВВ) исключает множество высокогидрофильных агентов. Для того чтобы гарантировать проникновение более гидрофильных терапевтических агентов по изобретению через ВВВ, их можно готовить, например, в липосомах. О способах производства липосом см., например, патенты США 4522811;
5374548 и 5399331. Липосомы могут содержать один или более частей, фрагментов, которые селективно
переносятся в конкретные (специфичные) клетки или органы ("нацеливающие (направляющие) частицы
(фрагменты)", или "наводящие группы, группы наведения", или "векторы транспорта"), тем самым обеспечивая доставку нацеленного лекарственного вещества (см., например, V.V. Ranade J. Clin. Pharmacol.
29, 685 (1989)). Аналогично, агенты могут быть связаны с нацеливающими группами, которые облегчают
проникновение через гематоэнцефалический барьер. В одном варианте в способе по настоящему изобретению применяется полиамин, связанный с агентом, который является низкомолекулярным соединением
и применим для ингибирования, например, Аβ отложения.
Для облегчения транспорта (переноса) агентов по изобретению через ВВВ их можно соединить с
вектором транспорта через ВВВ (обзор о векторах и механизмах транспорта через ВВВ см., Bickel, et al.,
Adv. Drug Delivery Reviews 46, 247-79 (2001)). Типичные векторы транспорта включают катионы альбумина или OX26 моноклональное антитело к рецептору трансферрина; эти белки претерпевают опосредованный всасыванием и рецептор-опосредованный, соответственно, трансцитоз через ВВВ. Природные
метаболиты клеток, которые можно применять в качестве нацеливающих групп, включают, среди прочих, путресцин, спермидин, спермин или DHA. Другие типичные нацеливающие группы включают фолат или биотин (см., например, патент США 5416016); маннозиды (Umezawa, et al., Biochem. Biophys.
Res. Commun. 153, 1038 (1988)); антитела (P.G. Bloeman, et al., FEBS Lett. 357, 140 (1995); M. Owais, et al.,
Antimicrob. Agents Chemother. 39, 180 (1995)); рецептор сурфактантного протеина А (Briscoe, et al., Am. J.
Physiol 1233, 134 (1995)); gp120 (Schreier, et al., J. Biol. Chem. 269, 9090 (1994); см. также K. Keinanen and
M.L. Laukkanen, FEBS Lett. 346, 123 (1994); J.J. Killon and I.J. Fidler, Immunomethods 4, 273 (1994)).
Примеры других векторов транспорта через ВВВ, которые нацеливают системы рецепторопосредованного транспорта в мозг, включают факторы, такие как инсулин, инсулиноподобный фактор
роста ("IGF-I" и "IGF-II"), ангиотензин II, предсердный и мозговой натрийуретический пептид ("ANP" и
"BNP") и трансферрин. Моноклональные антитела к рецепторам, которые связывают эти факторы, могут
также применяться в качестве векторов транспорта через ВВВ. Механизмы нацеливания векторов транспорта через ВВВ в случае обусловленного всасыванием трансцитоза включают катионные фрагменты,
такие как катионный LDL, альбумин или пероксидаза хрена, соединенная с полилизином, катионный
альбумин или катионные иммуноглобулины. Низкомолекулярные основные олигопептиды, такие как
- 88 -
012429
аналог динорфина Е-2078 и аналог АСТН эбиратид, также могут проникать в мозг с помощью опосредованного всасыванием трансцитоза и потенциальных векторов транспорта.
Другие векторы транспорта через ВВВ нацеливают системы на перенос питательных веществ в
мозг. Примеры таких ВВВ векторов транспорта включают гексозные частицы, например глюкозу, и монокарбоновые кислоты, например молочную кислоту, и нейтральные аминокислоты, например фенилаланин, и амины, например холин, и основные аминокислоты, например аргинин, нуклеозиды, например
аденозин, и пуриновые основания, например аденин, и тиреоидный гормон, например тринодтиридин.
Антитела к внеклеточному домену переносчиков питательных веществ также можно применять в качестве векторов транспорта. Другие возможные векторы включают ангиотензин II и ANP, которые могут
участвовать в регуляции проницаемости ВВВ.
В некоторых случаях связь, соединяющая терапевтический агент с вектором транспорта, можно
расщепить после переноса (транспорта) в мозг для того, чтобы освободить биологически активный агент.
Типичные линкеры включают дисульфидные связи, сложноэфирные связи, тиоэфирные связи, амидные
связи, связывание в виде слабых кислот и связывание в виде оснований Шиффа. Также можно использовать авидин/биотиновые линкеры, в которых авидин ковалентно связан с вектором транспорта лекарственного вещества через ВВВ. Авидин сам по себе может являться вектором транспорта лекарственного
вещества.
Трансцитоз, включающий рецептор-опосредованный транспорт композиций через гематоэнцефалический барьер, также может быть применим для агентов по изобретению. Доставка, опосредованная рецептором трансферрина, раскрывается в патентах США 5672683; 5383988; 5527527; 5977307 и 6015555.
Также известен трансферрин-опосредованный транспорт. P.M. Friden, et al., Pharmacol. Exp. Ther. 278,
1491-98 (1996); H.J. Lee, J. Pharmacol. Exp. Ther. 292, 1048-52 (2000). Доставка, опосредованная EGF рецептором, раскрывается в Y. Deguchi, et al., Bioconjug. Chem. 10, 32-37 (1999), a трансцитоз описан в A.
Cerletti et al., J. Drug Target. 8, 435-46 (2000). В качестве носителей для доставки через гематоэнцефалический барьер также применяли фрагменты инсулина. М. Fukuta, et al., Pharm. Res. 11, 1681-88 (1994).
Также описана доставка агентов с помощью конъюгата нейтрального авидина и катионного человеческого альбумина. Y.S. Kang, et al., Pharm. Res. 1, 1257-64 (1994).
Для повышения пенетрации агентов по изобретению через гематоэнцефалический барьер можно
осуществить другие модификации, используя методы и производные, известные в уровне техники. Например, патент США 6024977 раскрывает ковалентные полярные липидные конъюгаты для нацеливания
на мозг и центральную нервную систему. Патент США 5017566 раскрывает производные циклодекстрина, содержащие комплексы включения липоидных форм окислительно-восстановительных (редокс) нацеленных (нацеливающих) частиц дигидропиридина. Патент США 5023252 раскрывает применение
фармацевтических композиций, содержащих нейрологически активное лекарственное вещество и соединение, облегчающее транспорт лекарственного вещества через гематоэнцефалический барьер, включая
макроциклический сложный эфир, сложный диэфир, амид, диамид, амидин, диамидин, тиоэфир, дитиоэфир, тиоамид, кетон или лактон. Патент США 5024998 раскрывает растворы нерастворимых в воде лекарственных веществ с производными циклодекстрина для парентерального применения. Патент США
5039794 раскрывает применение фактора выхода метастатических опухолей для облегчения транспорта
соединений через гематоэнцефалический барьер. Патент США 5112863 раскрывает применение Nациламино производных кислот в качестве антипсихотических лекарственных веществ для доставки через гематоэнцефалический барьер. Патент США 5124146 раскрывает способ для доставки терапевтических агентов через гематоэнцефалический барьер местах повышенной проницаемости, обусловленных
поражениями мозга. Патент США 5153179 раскрывает ацилированный глицерин и производные для применения в лекарственном препарате для повышенной пенетрации через клеточные мембраны. Патент
США 5177064 раскрывает применение липоидных фосфонатных производных нуклеозидных антивирусных агентов для доставки через гематоэнцефалический барьер. Патент США 5254342 раскрывает рецептор-опосредованный трансцитоз через гематоэнцефалический барьер с применением рецептора транферрина в сочетании с фармацевтическими соединениями, которые интенсифицируют или ускоряют этот
процесс. Патент США раскрывает лечение эпилепсии имидатами противосудорожного сульфамата. Патент США 5270312 раскрывает замещенные пиперазины в качестве агентов для центральной нервной
системы. Патент США 5284876 раскрывает конъюгаты лекарственных веществ на основе допамина с
жирными кислотами. Патент США 5389623 раскрывает применение липидных дигидропиридиновых
производных противовоспалительных стероидов или стероидных половых гормонов для доставки через
гематоэнцефалический барьер. Патент США 5405834 раскрывает пролекарства - производные тиреотропин-высвобождающего гормона. Патент США 5413996 раскрывает конъюгаты ацилоксиалкилфосфонатов с нейрологически активными лекарственными веществами для анионной изоляции таких лекарственных веществ в ткани мозга. Патент США 5434137 раскрывает способы селективного открытия аномальных капилляров мозга, применяя инфузию брадикинина в каротидную артерию. Патент США
5442043 раскрывает пептидный конъюгат, а именно конъюгат пептида с биологической активностью, не
способного проникать через гематоэнцефалический барьер, и пептида, не проявляющего биологическую
активность, но способного проходить через гематоэнцефалический барьер за счет рецептор- 89 -
012429
опосредованного эндоцитоза. Патент США 5466683 раскрывает водорастворимые аналоги противосудорожного соединения для лечения эпилепсии. Патент США 5525727 раскрывает композиции для раздельного всасывания и удерживания в ткани мозга, представляющие собой конъюгат наркотических аналгетиков и их агонистов и антагонистов с липидной формой дигидропиридина, который образует редокс
соль при всасывании через гематоэнцефалический барьер, что препятствует раздельному возвращению
обратно в системный кровоток.
Оксид азота является сосудорасширяющим фактором периферической сосудистой сети в нормальной ткани организма. Увеличение образования оксида азота под действием синтазы оксида азота вызывает вазодилатацию, не уменьшая давление крови. Увеличение тока крови через мозг, независимое от
давления крови, повышает церебральную биодоступность образуемых в крови композиций. Это увеличение количества оксида азота можно стимулировать, вводя L-аргинин. По мере увеличения количества
оксида азота церебральный кровоток соответственно увеличивается и лекарственные вещества в токе
крови уносятся увеличенным током в ткани мозга. Следовательно, L-аргинин можно применять в фармацевтических композициях по изобретению для увеличения доставки агентов в ткани мозга после введения фармацевтической композиции в ток крови субъекта практически одновременно с увеличивающим
кровоток количеством L-аргинина, как описано в международной заявке WO 00/56328.
Другие примеры модификаций, которые повышают пенетрацию через гематоэнцефалический барьер, описаны в опубликованной международной (РСТ) заявке WO 85/02342, которая раскрывает композицию лекарственного вещества, содержащую глицеролипид или его производное. Опубликованная заявка
РСТ WO 089/11299 раскрывает химический конъюгат антитела с ферментом, который доставляется конкретно к месту поражения мозга для активации вводимого отдельно нейрологически активного пролекарства. Опубликованная заявка РСТ WO 91/04014 раскрывает способы доставки терапевтических и диагностических агентов через гематоэнцефалический барьер инкапсулированием лекарственных веществ
в липосомы, нацеленные на ткань мозга, с применением транспорт-специфичных рецепторных лигандовых антител. Опубликованная международная заявка РСТ WO 91/04745 раскрывает перенос (транспорт)
через гематоэнцефалический барьер с помощью молекул адгезии клеточной поверхности и их фрагментов для повышения проницаемости при тесном контакте с эндотелием сосудов. Опубликованная международная заявка РСТ WO 91/14438 раскрывает применение модифицированного химерного моноклонального антитела для облегчения транспорта веществ через гематоэнцефалический барьер. Опубликованная международная заявка РСТ WO 94/01131 раскрывает "липидоизированные" белки, включая антитела. Опубликованная международная заявка РСТ WO 94/03424 раскрывает применение производных
аминокислот в качестве конъюгатов с лекарственными веществами для облегчения транспорта через гематоэнцефалический барьер. Опубликованная международная заявка РСТ WO 94/06450 раскрывает
конъюгаты нейрологически активных лекарственных веществ с нацеленной редокс-частицей типа дигидропиридина и содержащие аминокислотную связь и алифатический остаток. Опубликованная международная заявка РСТ WO 94/02178 раскрывает нацеленные на антитела липосомы для доставки через гематоэнцефалический барьер. Опубликованная международная заявка РСТ WO 95/07092 раскрывает применение конъюгатов лекарственное вещество-фактор роста для доставки лекарственных веществ через гематоэнцефалический барьер. Опубликованная международная заявка РСТ WO 96/00537 раскрывает полимерные микросферы в качестве инъецируемых частиц лекарственное вещество-носители для доставки
с целью доставки биоактивных агентов к сайтам (местам) в центральной нервной системе. Опубликованная международная заявка РСТ WO 96/04001 раскрывает омега-3-конъюгаты жирных кислот с нейрологически активными лекарственными веществами для доставки через гематоэнцефалический барьер.
Опубликованная международная заявка РСТ WO 96/22303 раскрывает конъюгаты жирной кислоты и
глицеролипида нейрологически активными лекарственными веществами для доставки через гематоэнцефалический барьер.
Обычно рядовой специалист в данной области техники может легко получить сложный эфир, амид
или гидразид агента по изобретению, например, из соответствующей карбоновой кислоты и подходящего реагента. Например, соединение, содержащее карбоксильную группу или ее реакционноспособный
эквивалент, может реагировать с гидроксилсодержащим соединением или его реакционноспособным
эквивалентом таким образом, чтобы получился соответствующий сложный эфир. См., например, "Comprehensive Organic Transformations", 2nd Ed., by R.C. Larock, VCH Publishers John Wiley & Sons, Ltd.
(1989); "March's Advanced Organic Chemistry", 5th Ed., by M.B. Smith and J. March, John Wiley & Sons, Ltd.
(2000).
Пролекарства
Настоящее изобретение также относится к пролекарствам агентов формул, раскрываемых в данном
описании. Пролекарства представляют собой агенты, которые in vivo превращаются в активные формы
(см., например, R.B. Silverman, 1992, "The Organic Chemistry of Drug Design and Drug Action", Academic
Press, Chp. 8). Пролекарства можно применять для изменения биораспределения (например, допустить
агенты, которые обычно не входят в реактивный сайт протеазы) или фармакокинетику конкретного агента. Например, карбоксильную группу можно этерифицировать, например, метильной группой или этильной группой с образованием сложного эфира. Когда сложный эфир вводят субъекту, он расщепляется,
- 90 -
012429
ферментативно или неферментативно, восстановлением, окислением или гидролитически, высвобождая
анионную группу. Анионную группу можно этерифицировать с помощью частиц (например, ацилоксиметилового эфира), которые расщепляются, выделяя промежуточный агент, который затем разлагается с
образованием активного агента. Частицы пролекарств могут метаболизироваться in vivo эстеразами или
по другим механизмам в карбоновые кислоты.
Примеры пролекарств и их применение общеизвестны в уровне техники (см., например, Berge, et
al., "Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. 66, 1-19 (1977)). Пролекарства можно получать in situ в процессе
окончательного выделения и очистки агентов, или отдельной реакцией очищенного агента в виде свободной кислоты с подходящим дериватизирующим агентом. Карбоновые кислоты можно превращать в
сложные эфиры обработкой спиртом в присутствии катализатора.
Примеры расщепляемых пролекарств карбоновых кислот включают сложные замещенные и незамещенные, разветвленные или линейные алкиловые эфиры (например, сложные этиловые эфиры, сложные пропиловые эфиры, сложные бутиловые эфиры, сложные пентиловые эфиры, сложные гексиловые
эфиры, сложные циклогексиловые эфиры), сложные низшие алкениловые эфиры, сложные (ди(низший
алкил)амино-низший алкил)овые эфиры (например, диметиламиноэтиловый эфир), сложные (ациламинонизший алкил)овые эфиры, сложные (ацилокси-низший алкил)овые эфиры (например, пивалоидоксиметиловый эфир), сложные ариловые эфиры (фениловый эфир), сложные (арил-низший алкил)овые эфиры
(например, бензиловый эфир), сложные (замещенный (например, с заместителями метилом, галогеном,
метокси)арил и арил-низший алкил)овые эфиры, амиды, (низший алкил)амиды, ди(низший алкил)амиды
и гидроксиамиды.
Фармацевтически приемлемые соли
Некоторые варианты агентов по настоящему изобретению могут содержать основную функциональную группу, такую как амино или алкиламино, и, следовательно, они способны образовывать фармацевтически приемлемые соли с фармацевтически приемлемыми кислотами. В этом случае термин
"фармацевтически приемлемые соли" относится к относительно нетоксическим солям присоединения
неорганических и органических кислот к агентам по настоящему изобретению. Эти соли можно получать
in situ в процессе окончательного выделения и очистки агентов по изобретению или при отдельной реакции очищенного агента по изобретению в форме свободного основания с подходящей органической или
неорганической кислотой, выделяя образующуюся при этом соль.
Типичные соли включают гидрогалогениды (включая гидробромид и гидрохлорид), сульфаты, бисульфаты, фосфаты, нитраты, ацетаты, валераты, олеаты, пальмитаты, стеараты, лаураты, бензоаты, лактаты, фосфаты, тозилаты, цитраты, малеаты, фумараты, сукцинаты, тартраты, нафтилаты, мезилаты,
глюкогептонаты, 2-гидроксиэтансульфонаты и лаурилсульфонаты и т.п. См., например, Berge, et al.,
"Pharmaceutical Salts", J. Pharm. Sci. 66, 1-19 (1977).
В других случаях агенты по настоящему могут содержать одну или более кислых функциональных
групп и, следовательно, способны образовывать фармацевтически приемлемые соли с фармацевтически
приемлемыми основаниями. Термин "фармацевтически приемлемые соли" в этих примерах относится к
относительно нетоксическим солям присоединения неорганических и органических оснований к агентам
по настоящему изобретению.
Эти соли можно также получать in situ в процессе окончательного выделения и очистки агентов по
изобретению, или при отдельной реакции очищенного агента по изобретению в форме свободной кислоты с подходящим основанием, таким как гидроксид, карбонат или бикарбонат фармацевтически приемлемого катиона металла, с аммиаком, или с фармацевтически приемлемым органическим первичным,
вторичным или третичным амином. Типичные соли щелочных или щелочно-земельных металлов включают соли лития, натрия, калия, кальция, магния и алюминия. Типичные органические амины, пригодные для образования солей присоединения оснований, включают этиламин, диэтиламин, этилендиамин,
этаноламин, диэтаноламин, пиперазин и т.п.
"Фармацевтически приемлемые соли" включают также, например, производные агентов, модифицированных с помощью получения из них кислых и основных солей, как подробнее описано ниже и в
другом месте в данном изобретении. Примеры фармацевтически приемлемых солей включают соли минеральных и органических кислот с основными остатками, таким как аминогруппы; и органические соли
щелочей с кислыми остатками, такими как карбоксильные группы. Фармацевтически приемлемые соли
включают обычные нетоксические соли или соли четвертичных аммониевых оснований исходных агентов, полученные, например, при действии неорганических или органических кислот. Такие обычные нетоксические соли включают соли, полученные при действии неорганических кислот, таких как хлористоводородная, бромисто-водородная, серная, сульфаминовая, фосфорная и азотная кислота; и соли, полученные при действии органических кислот, таких как уксусная, пропионовая, янтарная, гликолевая, стеариновая, молочная, яблочная, винная, лимонная, аскорбиновая, пальмовая, малеиновая, гидроксималеиновая, фенилуксусная, глутаминовая, бензойная, салициловая, сульфанилиновая, 2-ацетоксибензойная,
фумаровая, толуолсульфоновая, метансульфоновая, этандисульфоновая, щавелевая и изетионовая кислота. Фармацевтически приемлемые соли можно синтезировать обычными химическими методами из исходного агента, который содержит основную и кислую группы. Обычно такие соли можно получать по
- 91 -
012429
реакции этих агентов в форме свободной кислоты или свободного основания со стехиометрическим количеством подходящего основания или подходящей кислоты в воде или в органическом растворителе
или в их смеси.
Все кислые, солевые, основные или другие ионные и неионные формы описанных соединений
включаются в качестве соединений по данному изобретению. Например, если соединение в данном соединении представлено в виде кислоты, солевые формы соединения также охватываются. Аналогично,
если соединение показано в виде соли, также охватываются кислая и/или основная формы.
Специалисты в данной области техники знают или смогут определить с помощью лишь обычных
экспериментов многочисленные эквиваленты конкретных методик, вариантов изобретения, пунктов
формулы изобретения и примеров по данному описанию. Считается, что такие эквиваленты входят в
объем данного изобретения и охватываются прилагаемой формулой изобретения. Содержание всех ссылок, выданных патентов и опубликованных патентных заявок, цитированных в данной публикации, тем
самым, вводятся ссылкой в данное описание. Изобретение дополнительно иллюстрируются следующими
примерами, которые не следует рассматривать как дополнительное ограничение.
Примеры
Анализ связывания и антифибриллогенный анализ
Тестируемые соединения синтезируют и подвергают скринингу масс-спектрометрией ("MS"), за исключением выбранных соединений, которые получают промышленно. MS анализом получают данные о
способности соединений связываться с белками, в данном случае с β-амилоидом и IAPP.
В MS анализе на Аβ40 образцы готовят в водных растворах (добавляя 20% этанол, если необходимо
солюбилизировать в воде), 200 мкМ тестируемого соединения и 20 мкМ солюбилизированного Аβ40,
или 400 мкМ тестируемого соединения и 40 мкМ солюбилизированного Ар40. pH каждого образца доводят до 7,4 (±0,2), добавляя 0,1% водный раствор гидроксида натрия. Затем растворы анализируют массспектрометрией с ионизацией электрораспылением на масс-спектрометре Waters ZQ 4000. Образцы непосредственно вводят (вливают) при скорости потока 25 мкл/мин в течение 2 ч после приготовления образца. Температуру в датчике поддерживают при 70°С, а напряжение конуса 20 В во всех анализах. Данные получают, используя программу Masslynx 3.5. Методом масс-спектрометрии получают данные о
способности соединений связываться с растворимым Аβ, тогда как анализы ThT, EM и CD позволяют
получают данные об ингибировании фибриллогенеза. Результаты анализа на связывание с Аβ сведены в
табл. 3. В табл. 3 пустая клетка означает, что в этом анализе значение для соединения не определялось.
Анализ на IAPP проводили в тех же условиях, за исключением того, что используют 200 мкМ тестируемого соединения и 20 мкМ солюбилизированного IAPP.
Указатель к табл. 3
- 92 -
012429
Таблица 3
Относительная аффиность связывания соединений по изобретению
- 93 -
012429
- 94 -
012429
Эффект кратковременного лечения у взрослых трансгенных CNRD 8, сверхэкспрессирующих βAPP
У трансгенных мышей, TgCRND8, экспрессирующих человеческий амилоидный белокпредшественник (hAPP), развивается патология, напоминающая болезнь Альцгеймера. В частности, высокие уровни Аβ40 и Аβ42 получены в плазме и мозгу этих 8-9-недельных животных с последующей
ранней аккумуляцией амилоидных бляшек, аналогичных сенильным бляшкам, наблюдающимся у больных AD. У этих животных также проявляется прогрессирующая когнитивная недостаточность, соответствующая проявлению дегенеративных изменений. См., например, Chishti, et al., J. Biol. Chem. 276,
21562-70 (2001).
Изучался терапевтический эффект кратковременного действия 19 соединений по изобретению. Эти
соединения вводят в течение 14- или 28-дневного периода, в конце каждого из них определяют уровни
Аβ-пептидов в плазме и мозгу TgCRND8 животных.
Способы.
В данном примере используют самок и самцов трансгенных мышей B6C3F1 3-го и 4-го поколений,
им ежедневно вводят подкожно или дают перорально одно из трех серии соединений в течение 14-28
дней. В настоящем протоколе используются следующие сокращения для обозначения этих животных
3-го и 4-го поколений обратного скрещивания: TgCRND8-2.B6C3F1(N3); TgCRND8-2.B6C3F1(N4).
Группа контрольных животных (группа 1) состоит из нативных TgCRND8-2.B6C3F1(N3) в возрасте
11±1 недель. Этих мышей используют для определения уровней Аβ в плазме и мозгу ранее не обрабаты- 95 -
012429
вавшихся животных в начале лечения.
Начиная с 11-недельного возраста (±1 неделя) животные получают ежедневно соответствующее лечение в течение 14 или 18 дней (группы 2-21) в дозе 250 мг/кг при 10 мл/кг, или только носитель (вода;
группа 2), или только 1% метилцеллюлозу (группа 21). Способ введения является подкожным для водорастворимых соединений и оральным для соединений, солюбилизированных в 1% метилцеллюлозе (МС
1%). В конце периода лечения плазму и мозг после перфузии собирают для количественного определения уровней Аβ.
Таблица 4
Тест-система
Мыши, используемые в исследовании, взяты из колонии, разводимой в Institut Armand Frappier, и
перед началом исследования они акклиматизируются в окружающей среде. Животных, в зависимости от
возраста и пола, делят на следующие экспериментальные группы.
Таблица 5
Группы мышей
Мониторинг здоровья животных.
Всех животных ежедневно проверяют на признаки болезненности, когда утром дают ежедневную
дозу, и дважды в день проверяют контроль смертности (один раз в день в течение уик-эндов и праздников). Подробное обследование проводят в начале лечения, ежедневно в течение курса исследования и
один раз перед последними процедурами. При необходимости обследование проводят чаще. Отдельно
регистрируют смерть и все индивидуальные клинические признаки. Индивидуальный вес тела регистрируют при рандомизации, один раз в неделю в течение исследования и один раз перед последними процедурами.
Отбор образцов.
В контрольной группе, возраст 11±1 недель, и в конце периода лечения (14 или 28 дней) в группах
2-21, через 24 ч после последнего введения соединения животных умерщвляют и собирают пробы. Собирают примерно 500 мкл крови из орбитального синуса и хранят на льду до момента центрифугирования,
центрифугируют при 4°С при минимальной скорости 3000 об/мин в течение 10 мин. Образцы плазмы
сразу же замораживают и вплоть до анализа хранят при -80°С. Мозг удаляют, замораживают и вплоть до
анализа хранят при -80°С.
Измерение уровней Аβ.
Мозг взвешивают в замороженном состоянии и гомогенизируют с 4 объемами ледяного буфера
50 мМ Tris-Cl pH 8.0 с протеазно-ингибиторным коктейлем (4 мл буфера на 1 г влажного мозга). Образцы центрифугируют при 15000g в течение 20 мин и супернатанты переносят в новые пробирки. Сто
пятьдесят (150) мкл каждого супернатанта смешивают с 250 мкл 8 М гуанидин-HCl/50 мМ Tris-Cl pH 8,0
(в соотношении 0,6 объемов супернатанта: 1 объем 8 М гуанидин/50 мМ Tris-Cl pH 8,0) и прибавляют
- 96 -
012429
400 мкл 5 М гуанидин/50 мМ Tris-Cl pH 8.0. Пробирки встряхивают в течение 30 с и замораживают при
-80°С. Параллельно осадок (пеллеты) обрабатывают 7 объемами 5 М гуанидин/50 мМ Tris-Cl pH 8,0
(7 мл гуанидина на 1 г влажного мозга), встряхивают 30 с и замораживают при -80°С. Образцы размораживают при комнатной температуре, разрушают ультразвуком при 80°С в течение 15 мин и снова замораживают. Этот цикл повторяют 3 раза, чтобы гарантировать гомогенность, и образцы снова охлаждают
до -80°С и хранят при этой температуре вплоть до анализа.
Уровни Аβ в образцах плазмы и мозга определяют методом ELISA, используя наборы человеческого Аβ40 и Аβ42 Fluorometric ELISA от Biosource (Cat. № 89-344 и 89-348) в соответствии с рекомендациями производителя. Коротко говоря, образцы размораживают при комнатной температуре, действуют
ультразвуком в течение 5 мин при 80°С (разрушают ультразвуком гомогенаты мозга, но не образцы
плазмы) и хранят на льду. Аβ-пептиды наносят на планшет, используя 100 мкл разведенного образца, и
инкубируют, не встряхивая, инкубируют при 4°С в течение ночи. Образцы (жидкость) отсасывают (аспирация) и лунки 4 раза отмывают водным буфером из набора Biosource ELISA. Добавляют поликлональную кроличью антисыворотку к Аβ40 или Аβ42 (специфичную в отношении Аβ40- или Аβ42пептида) (100 мкл) и планшет инкубируют при комнатной температуре в течение 2 ч при встряхивании.
Жидкость из лунок отсасывают и лунки 4 раза отмывают, добавляют 100 мкл антитела к кроличьему иммуноглобулину, меченому щелочной фосфатазой, и инкубируют при комнатной температуре в течение
2 ч при встряхивании. Затем плашки отмывают 5 раз и в плашку добавляют флуоресцентный субстрат
(100 мкл). Планшет инкубируют в течение 35 мин при комнатной температуре и планшет считывают на
фотометре для микротитровальных планшетов (ридере) при длине волны возбуждения 460 нм и излучения 560 нм.
Соединения оценивают на основании их способности модулировать уровни Аβ-пептидов в плазме и
уровни церебрального растворимого/нерастворимого Аβ в мозге. Уровни Аβ, наблюдаемые в плазме и
мозге пролеченных животных, нормализуют по значениям, полученным в контрольных группах, получавших носитель (воду) или метилцеллюлозу, и располагают в ряд в соответствии с интенсивностью
фармакологического действия (эффекта). Результаты показаны в табл. 3-11.
Повышение уровней Аβ-пептидов показано символами "+", тогда как понижение уровней Аβпептидов показано символами "-". Наиболее сильный эффект показан в виде "+++" или ''---", тогда как
наиболее слабый показан как "+" или "-".
Конкретно, повышение уровней Аβ (относительно контрольного уровня в отсутствие лечения) на
20-39% оценивается как "+"; повышение на 40-69% оценивается как "++"; а повышение на 70% и выше
оценивается как "+++". Понижение уровней Аβ на 5-19% оценивается как "-"; понижение на 20-38% оценивается как "--"; и понижение на 39% или более оценивается как "---".
Данные представлены в табл. 6-11. Лечение соединениями по данному изобретению через 14 и/или
28 дней вызывает значительное изменение в церебральных уровнях Аβ40 и/или Аβ42 (табл. 8-11). Кроме
того, лечение с применением этих соединений, например, Соединения ВХ (3-(трет-бутил)амино-1пропансульфоновой кислоты) через 14 и 28 дней приводит к значительному повышению уровней Аβпептидов в плазме (табл. 6-7). Это наводит на мысль, что некоторые из этих соединений могут действовать с помощью эффекта проникновения с периферии, изолируя Аβ в плазме и тем самым облегчая его
клиренс из CNS, как предполагалось ранее в отношении лечения пассивной иммунизацией с применением моноклонального антитела против Аβ m266 (DeMattos et al., Science 295(5563): 2264-7).
В таблицах показаны уровни Аβ-пептидов в плазме и мозге мышей TgCRND8, пролеченных в течение 14 и 28 дней соединениями по изобретению.
В табл. 6А и 6С показаны данные для плазмы на день 14 и день 28, соответственно, для группы, получавшей носитель. В табл. 6В и 7 показаны данные для плазму группы, получавшей метилцеллюлозу,
на день 14 и день 28 соответственно. В табл. 8 и 10 показаны данные для гомогената мозга на день 14 и
день 28 соответственно для группы, получавшей носитель. В табл. 9 и 11 показаны данные для гомогената мозга в группе, получавшей метилцеллюлозу, на день 14 и день 28 соответственно.
Таблица 6А
Плазма в группе, получающей носитель, день 14
- 97 -
012429
Таблица 6В
Плазма в группе, получающей метилцеллюлозу, день 14
Таблица 6С
Плазма в группе, получающей носитель, день 28
Таблица 7
Плазма в группе, получающей метилцеллюлозу, день 28
Таблица 8
Гомогенат мозга в группе, получающей носитель, день 14
**Действие этого соединения в мозге скорее проверяют только на его способность модулировать
тотальные уровни Аβ40- и Аβ42-пептидов, нежели независимо измеряют уровни растворимого и нерастворимого пептида.
Таблица 9
Гомогенат мозга в группе, получающей метилцеллюлозу, день 14
Таблица 10
Гомогенат мозга в группе, получающей носитель, день 28
**Действие этого соединения в мозге скорее проверяют только на его способность модулировать
- 98 -
012429
тотальные уровни Аβ40- и Аβ42-пептидов, нежели независимо измеряют уровни растворимого и нерастворимого пептида.
Таблица 11
Гомогенат мозга в группе, получающей метилцеллюлозу, день 28
Действие продолжительного лечения на взрослых трансгенных мышей CRND8,
сверхэкспрессирующих βAPP
Трансгенные мыши, TgCRND8, те, которых используют при кратковременном лечении, сверхэкспрессируют человеческий АРР ген со шведской мутацией или мутацией Индиана, что приводит к образованию высоких уровней амилоидных пептидов и к развитию раннего активно прогрессирующего амилоидоза мозга. Полагают, что высокие уровни Аβ-пептидов и относительный избыток Аβ42 по сравнению
с Аβ40 связаны с наблюдаемой тяжелой и ранней дегенеративной патологией. Характер амилоидного отложения, присутствие дистрофических нейритов и когнитивная недостаточность в этой линии трансгенных мышей хорошо изучены и описаны. Уровни Аβ-пептидов в мозге этих мышей с возрастом резко
увеличиваются. В ходе исследования тотальные уровни амилоидных пептидов увеличиваются от
~1,6×105 пг/г мозга до ~3,8×106 за время от 9 до 17 недель.
В то время как раннее отложение амилоида в этой модели позволяет быстро тестировать соединения в относительно коротких временных рамках, активность (агрессивность) этой модели и высокие
уровни Аβ-пептида делают терапевтическую оценку в более длительном эксперименте более трудной
задачей.
Изучалось продолжительное терапевтическое действие соединений по настоящему изобретению на
церебральное амилоидное отложение и уровни β-амилоида (Аβ) в плазме и мозге трансгенных мышей,
TgCRND8, экспрессирующих человеческий амилоидный белок-предшественник (hAPP). Эти соединения
вводят в течение 8 или 16 недельного периода, по окончании которого определяют уровни Аβ-пептидов
в плазме и мозге TgCRND8 животных. Целью этого исследования является оценка эффективности соединений при модулировании прогрессирования амилоидогенного процесса в мозге и в плазме трансгенной мышиной модели болезни Альцгеймера (AD).
Способы.
Мыши, используемые в исследовании, состоят из животных, несущих одну копию hAPP гена (+/-)
от 2-го и 3-го поколений от прародителей (N2 и N3), полученных путем обратного скрещивания от
TgCRND8.FVB(N2)AJ(N3) с B6AF/J гибридных животных.
N1 = TgCRND8.FVB(N2)AJ(N3)×B6AF/J
N2 = TgCRND8.FVB(N2)AJ(N3).B6AF/J(N1)×B6AF/J
N3 = TgCRND8.FVB(N2)AJ(N3).B6AF/J(N2)×B6AF/J
Для обозначения этих животных в настоящем исследовании применяются следующие сокращения:
TgCRND8.B6AF/J(N2); TgCRND8.B6AF/J(N3). Самцам и самкам трансгенных мышей ежедневно вводят
подкожно (соединение ВХ) или дают перорально (соединения BW и BZ) соответствующие соединения в
течение 8 или 16 недель.
Исходные (базовые) животные представляют собой 9±1-недельных не лечившихся ранее
TgCRND8.B6AF/J животных 2-го и 3-го поколений. Этих мышей используют для определения степени
(величины) церебральных амилоидных отложений и уровней Аβ в плазме и мозге не лечившихся ранее
трансгенных животных в начале лечения.
Начиная с 9-недельного возраста (±1 неделя) животные получают ежедневно соответствующее лечение в течение 8 или 16 недель в дозе 30 или 100 мг/кг при 10 мл/кг. Способ введения является подкожным для водорастворимых соединений (соединение ВХ) и оральным для соединений, солюбилизированньгх в 1% метилцеллюлозе (МС 1%) (соединения BW и BZ). В конце периода лечения плазму и мозг
после перфузии собирают для количественного определения уровней Аβ.
Состояние здоровья животных контролируют, образцы собирают и определяют уровни Аβ как описано выше при описании исследования кратковременного лечения. Соединения оценивают на основании
их способности модулировать уровни Аβ-пептидов в плазме и уровни церебрального растворимого/нерастворимого Аβ в мозге. Уровни Аβ, наблюдаемые в плазме и мозге пролеченных животных, сравнивают с уровнями, полученными в контрольных группах, получавших носитель (воду) или метилцеллюлозу, и располагают в ряд в соответствии с интенсивностью фармакологического действия (эффекта).
- 99 -
012429
Результаты показаны в табл. 12. Повышение уровней Аβ-пептидов показано символами "+", тогда как
понижение уровней Аβ-пептидов показано символами "-". Наиболее сильный эффект показан в виде
"+++" или "---", тогда как наиболее слабый показан как "+" или "-".
Конкретно, повышение уровней Аβ (относительно контрольного уровня в отсутствие лечения) на 514% оценивается как "+"; повышение на 15-29% оценивается как "++"; а повышение на 30% и выше оценивается как "+++". Понижение уровней Аβ на 5-14% оценивается как "-"; понижение на 15-29% оценивается как "--"; и понижение на 30% или более оценивается как "---". Кроме того, изменение на 4% или
менее в ту или другую сторону оценивается как "0".
В табл. 12 показаны уровни Аβ-пептидов в плазме и мозге мышей TgCRND8, пролеченных в течение 8 и 16 недель соединениями по изобретению. Лечение этими соединениями после 8 и/или 16 недель
во многих случаях вызывает изменение уровней Аβ40 и/или Аβ42 в плазме и/или в мозге. Например, введение соединения ВХ обычно вызывает резкое уменьшение количества Аβ в мозге как через 8, так и через 16 недель. Соединение BW также вызывает резкое уменьшение уровней Аβ в мозге и в плазме через
8 недель и уровней Аβ в плазме через 16 недель, кроме того, предварительные гистохимические исследования с окрашиванием срезов мозга с помощью ThioS показывают, что как число бляшек, так и площадь,
занимаемая бляшками, у мышей, получавших дозу 30 мг/кг соединения ВХ, уменьшается.
Таблица 12
Действие соединений ВХ, BW и BZ на уровни Аβ в плазме и мозге
Пример 11. Оценка связывания соединений с NAC пептидом методом масс-спектрометрии.
Последние открытия показали, что высокий процент больных болезнью Альцгеймера (AD) отличается тем, что у них образуются тельца Леви, более всего в миндалевидном теле (Hamilton. 2000. Brain
Pathol, 10: 378; Mukaetova-Ladinska, et al. 2000 J. Neuropathol Exp Neurol 59:408). Интересно отметить, что
область высокогидрофобного неамилоидного компонента (NAC) α-синуклеина позже описана как второй наиболее распространенный компонент амилоидных бляшек в мозге AD пациентов. Показано, что αсинуклеин образует фибриллы in vitro. Кроме того, от связывается с Аβ и стимулирует агрегацию (Yoshimoto, et al. 1995 Proc. Natl. Acad. Sci. USA 91:9141). В действительности его сначала идентифицировали в качестве предшественника неамилоидного β (Аβ) компонента (NAC) AD бляшек (Ueda, et al. 1993
Proc. Natl. Acad. Sci. USA 90:11282; Iwai, 2000. Biochem Biophys Acta 1502:95; Mashah, el al. 1996. Am J
Pathol 148:201). NAC представляет собой пептид длиной 35 аминокислот с высокогидрофобными участками (отрезками), которые способны к самоагрегации и к образованию фибрилл in vitro, кроме того, эти
фибриллы могут быть зародышами активно образующихся Аβ фибрилл (Han, et al. 1995. Chem Biol. 2:
163-169; Iwai, et al. 1995. Biochemistry 34: 10139). На самом деле благодаря этому домену NAC αсинуклеин сохраняет свои фибриллогенные свойства. Следовательно, модулирование свойств NAC или
нацеливание на NAC соединений по изобретению может быть эффективным средством ингибирования
образования белковых агрегатов и включений, обусловленных α-синуклеопатиями, а также как образования агрегатов между β-амилоидным пептидом и NAC α-синуклеина.
Изучалась способность соединений по настоящему изобретению связываться с NAC пептидом в
водном растворе. Связывающая способность коррелируется с интенсивностью пика комплекса пептид- 100 -
012429
соединение, наблюдаемого в масс-спектре, полученном методом электроспрей масс-спектрометрии (ионизацией электрораспылением). Для приготовления всех водных растворов применяют дистиллированную деионизированную воду, полученную с помощью системы миллипор. Для определения pH применяют pH-метр Beckman Ф36, снабженный Corning комбинированным полумикро pH электродом.
NAC (М.в. 3260.6 Да) (20 мкМ) сначала анализируют при pH 7,40 и получают обычные натриевые
кластеры при +2, +3 и +4 с m/z 1335,5, 1116,7 и 843,4, соответственно. Определяют оптимальное напряжение конуса, равное 20 В.
Масс-спектрометрическое исследование.
Анализ методом масс-спектрометрии проводят на масс-спектрометре Waters ZO 4000, снабженном
программой, управляющей отбором образцов Waters 2975. Для обработки данных и для анализа используют программу MassLinx 4.0 (ранее MassLinx 3.5). Тестируемое соединение смешивают с неагрегированными пептидами в водных средах (6.6% EtOH) в соотношении 5:1 (20 мкМ NAC:100 мкМ тестируемого соединения или 40 мкМ NAC:200 мкМ тестируемого соединения). pH смеси доводят до 7,4 (±0,2)
добавлением 0,1% NaOH (3-5 мкл). Также периодически готовят раствор NAC пептида (20 или 40 мкМ) и
используют его в качестве контрольного раствора. Спектры получают введением растворов в источник
электрораспыления непосредственной инфузией (вливанием) с помощью шприцевого насоса при скорости потока 25 мкл/мин и сканируя от 100 до 2100 Да в позитивном режиме. Время сканирования 0,9 с на
прогон (скан) с задержкой между сканированием 0,1 с, а время анализа каждого образца составляет
5 мин. Все масс-спектры представляют собой сумму 300 (прогонов) сканирований. Температура десольватации и источника составляет 70°С, а напряжение конуса и капилляров поддерживают при 20 В и
3,2 кВ соответственно.
Для каждого тестируемого соединения определяют общую площадь пиков для комплекса связанный NAC-соединение, деленную на общую площадь пиков. Результаты показаны ниже в табл. 13.
Таблица 13
Данные связывания с пептидом NAC
+ + + Сильное; когда общее связывание составляет 120% и выше;
+ + Умеренное; когда общее связывание составляет 120-70%;
+ Слабое; когда общее связывание составляет 70-30%;
- Отсутствует; когда общее связывание составляет 30-0%.
- 101 -
012429
Настоящее изобретение также относится к новым соединениям и их синтезу. Поэтому ниже представлены следующие примеры для иллюстрации получения некоторых из этих соединений.
Синтез соединений по изобретению
Получение 3-изопропиламино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение CG)
К раствору 1,3-пропансульфона (3.05 г, 25 ммоль) в смеси хлористый метилен/эфир (40 мл, 1:1)
прибавляют изопропиламин (2.5 мл, 29 ммоль). Смесь кипятят в течение 3 ч. Охлаждают до комнатной
температуры и прибавляют гексан (10 мл). Осадок отфильтровывают, промывают эфиром (10 мл) и сушат в вакууме. Получают соединение СП в виде мелкого белого порошка (выход 2.98 г, 65.6%).
Т. пл. 240-43°С.
1
Н ЯМР (500 МГц, D2O) δ 1.06 (д, J=6.3 Гц, 6Н), 1.86 (кв.т., J=7.6 Гц, 2Н), 2.76 (т, J=7.6 Гц, 2Н), 3.14
(т, J=7.8 Гц, 2Н), 3.13-3.21 (м, J=6.6 Гц, 1Н).
13
С ЯМР (125 МГц, D2O) δ 18.2, 21.5, 25.8, 43.4, 47.9, 50.8.
Получение 3-циклопропиламино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение CI)
К раствору 1,3-пропансульфона (6.9 г, 55.3 ммоль) в ТГФ (60 мл) прибавляют циклопропиламин
(3.7 мл, 52 ммоль). Смесь нагревают на масляной бане при 42°С в течение 2 ч. Перемешивание затруднено и часть твердого вещества образует корку на поверхности перемешиваемой смеси. Смесь кипятят 1 ч,
охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, сушат в вакуум-шкафу в течение 2 ч
при 60°С (4.95 г). Перекристаллизовывают из смеси метанол/вода (35 мл/5 мл, об./об.). Смесь охлаждают
в холодильнике, отфильтровывают, промывают метанолом (15 мл), сушат на воздухе 15 мин и далее в
вакуум-шкафу при 60°С в течение ночи. Соединение CI получают в виде длинных тонких белых игл (выход 3.74 g, 40%).
Т. пл. 234-236°С.
1
Н ЯМР (500 МГц, D2O) δ 0.62-0.71 (м, 4Н), 1.92 (кв.т., J=7.6 Гц, 2Н), 2.51-2.55 (м, J=3.7 Гц, 1Н),
2.78 (д, J=7.3 Гц, 2Н), 3.09 (т, J=7.8 Гц, 2Н).
13
С ЯМР (125 МГц, D2O) δ 3.0, 21.2. 30.0,46.8,47.9.
Фурье-HK(KBr) v 3051, 1570, 1465, 1039.
Получение 3-циклопентиламино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение CJ)
К раствору 1,3-пропансульфона (5.5 г, 45 ммоль) в ТГФ (80 мл) прибавляют циклопентиламин (3.95
мл, 40 ммоль). Смесь кипятят на масляной бане в течение 4 ч. Перемешивание затруднено, поэтому для
продолжения перемешивания прибавляют немного ацетона и этанола. Смесь охлаждают до комнатной
температуры. Осадок отфильтровывают, сушат в вакуум-шкафу в течение 1 ч при 60°С (5.47 г). Растворяют при кипении в смеси метанол/вода (35 мл/2.5 мл, об./об.). Смесь медленно охлаждают до комнатной температуры в течение ночи, а затем в холодильнике. Продукт отфильтровывают, промывают метанолом (15 мл), сушат на воздухе 15 мин и далее в вакуум-шкафу при 60°С в течение ночи. Продукт, соединение CJ, получают в виде длинных тонких белых игл (4.79 г). Вторую порцию получают из объединенных фильтратов после фильтрования сырого продукта и фильтрования после первой перекристаллизации (маточного раствора) (0.84 г). В обеих порциях продукт является чистым, порции объединяют, общий выход 5.63 г, 68%.
Т. пл. 280-82°С.
1
Н ЯМР (500 МГц, D2O) δ 1.34-1.43 (м, 4Н), 1.46-1.54 (м, 2Н), 1.82-1.90 (м, 4Н), 2.76 (7, J=7.6 Гц,
2Н), 2.95 (т, J=7.8 Гц, 2Н), 3.35 (кв.т., J=7.2 Гц, 1H).
13
С ЯМР (125 МГц, D2O) δ 21.5, 23.6, 29.3, 45.1, 47.9, 59.5.
Фурье-ИК (KBr) v 3558, 3501, 2972, 1647, 1587, 1466.
Получение 3-циклогептиламино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение CK)
К раствору 1,3-пропансульфона (4.1 г, 33 ммоль) в ТГФ (65 мл) прибавляют циклогептиламин
(3.9 мл, 30 ммоль). Смесь кипятят в колбонагревателе в течение 5 ч. Смесь охлаждают до комнатной
температуры, осадок отфильтровывают, сушат в вакуум-шкафу в течение 1 ч при 60°С (6.21 г). Растворяют в смеси метанол/вода (30 мл/3 мл, об./об.). Смесь медленно охлаждают до комнатной температуры
в течение ночи, а затем в бане со льдом. Продукт отфильтровывают, промывают метанолом, сушат на
воздухе 15 мин и далее в вакуум-шкафу при 60°С. Соединение CK получают в виде мелких белых хлопь- 102 -
012429
ев (выход 5.08 г, 72%).
Т. пл. 341-43°С.
1
Н ЯМР (500 МГц, D2O) δ 1.21-1.42 (м, 8Н), 1.45-1.51 (м, 2Н), 1.79-1.89 (м, 4Н), 2.76 (7, J=7.3 Гц,
2Н), 2.96 (т, J=7.8 Гц, 2Н), 3.35 (м, J=4.6 Гц, 1Н).
13
С ЯМР (125 МГц, D2O) δ 21.6, 23.3, 27.3, 30.5, 43.6, 48.0, 59.6.
Фурье-ИК (KBr) v 2924, 1615, 1464, 1243.
Получение 3-бензоилоксикарбониламино-2-гидрокси-1-пропансульфоновой кислоты (соединение
АС)
3-Амино-2-гидрокси-1-пропансульфоновую кислоту (15.51 г, 100 ммоль) растворяют в воде
(150 мл), добавляя 1 экв. NaOH (4.08 г). Прибавляют раствор CBZ-OSuc (27.4 г, 110 ммоль) в MeCN
(300 мл). Перемешивают 4 ч при комнатной температуре, растворитель упаривают в вакууме. Сырой
продукт (один весовой эквивалент воды) суспендируют в ацетоне (400 мл) и кипятят в течение 20 мин.
Смесь охлаждают до комнатной температуры и осадок отфильтровывают, промывают ацетоном и сушат
в течение ночи, а затем в вакуум-шкафу при 40°С. Соединение АС получают в виде белого мелкого твердого вещества (28.85 г, 87.6 ммоль, 88%). Спектры 1Н и 13С ЯМР соответствуют структуре.
Получение натриевой соли 4-бензоилоксикарбониламино-1-бутансульфоновой кислоты (соединение AD)
Натриевую соль 4-амино-1-бутансульфоновой кислоты (0.516 г, 2.95 ммоль) растворяют в воде до
конечной концентрации 0.5 М (светло-желтый раствор). Прибавляют раствор CBZ-OSuc в MeCN (2 М,
1.55 мл, 3.1 ммоль, 1.05 экв.). Реагент выпадает. Прибавляют смесь 1,4-диоксана и этанола до тех пор,
пока почти весь осадок не растворится. Через 3.75 ч растворитель упаривают в вакууме. Остаток сушат в
вакууме в течение субботы и воскресенья. Затем суспендируют в ацетоне и кипятят 30 мин. Охлаждают
до комнатной температуры и отфильтровывают, промывают ацетоном и сушат в вакууме в течение ночи.
Соединение AD получают в виде мелкодисперсного твердого вещества белого цвета (0.7610 г,
2.32 ммоль, 78%). Спектр 1Н ЯМР соответствует структуре.
Получение натриевой соли 3-бензоилоксикарбониламино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение АЕ)
Натриевую соль 3-амино-1-пропансульфоновой кислоты (1.09 г, 6.76 ммоль) растворяют в воде до
конечной концентрации 0.5 М. Прибавляют раствор CBZ-OSuc в MeCN (2 М, 3.55 мл, 7.1 ммоль,
1.05 экв.). Реагент выпадает. Прибавляют смесь 1,4-диоксана и этанола до тех пор, пока почти весь осадок не растворится. Через 3.75 ч растворитель упаривают в вакууме. Остаток сушат в вакууме в течение
субботы и воскресенья. Затем суспендируют в ацетоне и кипятят 30 мин. Охлаждают до комнатной температуры и отфильтровывают, промывают ацетоном и сушат в вакууме в течение ночи. Соединение АЕ
получают в виде мелкодисперсного твердого вещества белого цвета (1.58 г, 5.06 ммоль, 75%). Спектр 1Н
ЯМР соответствует структуре. Чистота 90% (10 мол.% гомотаурина).
Получение изобутилового эфира L-(N-Boc)-Phe-L-Phe-гомотаурина
- 103 -
012429
Компонент 1: L-(N-Boc)Phe-L-Phe
К охлажденному (0°С) раствору ди-L-Phe-Phe (1 г, 3.20 ммоль) в 1,4-диоксане (6 мл) и 1 N NaOH
(3.3 мл) прибавляют раствор (Вос)2О (800 мг, 3.5 ммоль) в 1,4-диоксане (5 мл). Смесь перемешивают при
0-5°С в течение 2 ч. Прибавляют новую порцию (Вос)2О (100 мг) и смесь перемешивают еще в течение
60 мин при 0-5°С, а затем в течение 30 мин при комнатной температуре. Затем смесь упаривают досуха.
Растворяют остаток в смеси вода/EtOAc и, прибавляя 2N HCl, доводят pH до 2. Водный слой 3 раза экстрагируют EtOAc. Объединенные органические вытяжки сушат рассолом и растворитель упаривают.
Часть твердого вещества, не растворяющуюся в смеси EtOAc/CHCl3, отфильтровывают. Нужный L-(NBoc)-Phe-L-Phe 1 получают в виде белой пены (выход 913.7 мг, 2.215 ммоль, 71%).
Компонент 2: изобутиловый эфир 3-амино-1-пропансулъфоновой кислоты
Стадия 1. Натриевая соль 3-азидо-1-пропансульфоновой кислоты (5).
К смеси азида натрия (3.22 г, 49.1 ммоль) в растворителе вода/ацетон (70 мл, 20 к 50) прибавляют
раствор 1,3-пропансультона 4 (6.12 г, 49.1 ммоль) в ацетоне (30 мл). Прозрачный раствор перемешивают
при комнатной температуре. Реакция заканчивается через 1 ч. Растворитель упаривают в вакууме. Твердый остаток промывают горячим эфиром (50 мл), а затем эфиром при комнатной температуре (150 мл).
Сушат в вакуум-шкафу при 40°С в течение ночи. Титульное соединение 5 получают в виде твердого вещества белого цвета (выход 8.69 г, 46.4 ммоль, 95%).
Стадия 2. 3-Азидо-1-пропансульфонилхлорид.
Натриевую соль 3-азидо-1-пропансульфоновой кислоты 5 (1.87 г, 10.0 ммоль) суспендируют в сухом бензоле (20 мл) и к суспензии прибавляют PCl5 (2.3 г, 10.5 ммоль). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 30 мин, затем в течение 1 ч нагревают при слабом кипении. Бензол и
P(O)Cl3 упаривают в вакууме. К сырой смеси прибавляют бензол и растворитель снова отгоняют в вакууме. Остаток сушат в вакууме. Высушенный остаток растворяют в хлористом метилене (безводный, 15
мл) и охлаждают до -10°C на бане лед/ацетон.
Стадия 3. 3-Азидо-1-пропансульфоновая кислота.
К охлажденному раствору сульфонилхлорида медленно прибавляют раствор изобутанола (1.00 мл,
10.8 ммоль) и 2,6-лутидина (1.3 мл, 11.2 ммоль) в хлористом метилене (10 мл). Смесь перемешивают при
-10°С в течение 5 мин, затем при комнатной температуре в течение 2 ч. К реакционной смеси прибавляют воду (для прекращения реакции), а затем хлористый метилен для экстракции продукта. Органический
слой промывают один раз водой, насыщенным водным раствором NaHCO3, рассолом, а затем сушат
сульфатом магния. Растворитель упаривают в слабом вакууме, а остаток сушат в вакууме. Оставшийся
2,6-лутидина гидрохлорид удаляют, промывая остаток эфиром. Полученное масло (1.78 г) переносят на
колонку для флеш-хроматографии (силикагель, EtOAc в смеси гексанов от 15 до 20%), получают заданный сложный эфир в виде масла (790 мг, 35%).
Стадия 4. Изобутиловый эфир 3-амино-1-пропансульфоновой кислоты.
К суспензии Pd/C (10%, 200 мг) в изобутаноле (4 мл), насыщенном Н2, в атмосфере Н2 через полую
иглу вводят раствор изобутил-3-азидопропансульфоната (1.13 г, 5.11 ммоль). Затем смесь перемешивают
в атмосфере Н2 (40 psi, 275.79 кПа) при комнатной температуре в течение ночи. Осадок отфильтровывают. Фильтрат упаривают досуха. Остаток сушат в вакууме. Титульное соединение 2, изобутиловый эфир
гомотаурина, получают в виде коричневого масла (808.7 мг, 81%).
Реакция компонента 1 с компонентом 2.
К охлажденному (0-5°С) раствору N-Вос-L-Phe-L-Phe 1 (913.7, 2.215 ммоль) и изобутилового эфира
гомотаурина 2 (423 мг, 2.21 ммоль) в хлористом метилене (безводный, 30 мл) прибавляют НОВТ (340 мг,
2.215 ммоль). Через 5 мин по каплям прибавляют раствор 1-циклогексил-3-(2-морфолиноэтил)карбодиимид мето-патолуолсульфоната (982 мг, 2.215 ммоль) в хлористом метилене (10 мл). Раствор
перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. К смеси прибавляют хлористый метилен
- 104 -
012429
(50 мл) и органический слой последовательно промывают 1 N NaHSO4, насыщенным водным раствором
NaHCO3 и рассолом и сушат сульфатом натрия. Растворитель упаривают в вакууме. ТСХ показывает
присутствие трех веществ. Так как примеси менее растворимы в метаноле, повторной обработкой метанолом с последующим фильтрованием удаляют основную часть примесей. Колоночной хроматографией
на силикагеле (2% MeOH в CHCl3) получают трипептид 3 в виде янтарного стекловидного твердого вещества (156.1 мг, 12%).
Получение изобутилового эфира L-Phe-L-Phe-гомотаурина.
К охлажденному (0°С) раствору изобутилового эфира N-Boc-L-Phe-L-Phe-гомотаурина (202 мг,
0.343 ммоль) в метаноле прибавляют концентрированную HCl (0.7 ммоль). Смесь перемешивают при
комнатной температуре в течение 2 ч, а затем оставляют на ночь в холодильнике. Растворитель упаривают в вакууме, твердый остаток сушат в вакууме, получают изобутиловый эфир L-Phe-L-Phe-гомотаурина
в виде твердого вещества белого цвета (171.8 мг, 95%).
Получение L-Phe-L-Phe-гомотаурина (соединение X).
К раствору L-Phe-гомотаурина (273 мг, 1.0 ммоль) в 1N NaOH (1.05 мл), воды (3мл) и этанола (4 мл)
прибавляют раствор N-ВОС-L-фенилаланин-N-гидроксисукцинимидоэфира (400 мг, 1.1 ммоль) в смеси
этанола (6 мл) и 1,4-диоксана (4 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи.
Растворитель отгоняют в вакууме и твердый остаток (601.9 мг) суспендируют в смеси ацетона (8 мл) и
изопропанола (0.2 мл) и перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Смесь кипятят в течение 30 мин, а затем охлаждают до комнатной температуры. Белый осадок отфильтровывают, промывают эфиром, затем сушат в вакуум-шкафу в течение 45 мин. Полученное твердое вещество (423.1 мг)
растворяют в смеси вода/трет-бутанол (7:3, 5 мл) и в течение 2 мин при комнатной температуре обрабатывают смолой Amberlite IR-120 plus (промытой, сухой вес 15 г). Смолу отфильтровывают и 3 раза промывают смесью растворителей воды и трет-бутанола (10 мл). Прибавляют концентрированную HCl (4
мл). Растворители отгоняют в вакууме, а полученный твердый остаток сушат в вакууме. Соединение
очищают перекристаллизацией из смеси растворителей ТГФ и MeOH. Полученное твердое вещество нагревают в кипящем метаноле (около 3 мл) до исчезновения желтого цвета. Твердое вещество сушат в
вакууме. Соединение X получают в виде твердого вещества белого цвета (84.4 мг, 20%).
1
Н и 13С ЯМР спектры соответствуют структуре.
Получение этилового эфира N-(3-аминопропан-1-сульфонил)фенилаланина (соединение CL)
К охлажденному (-10°С) раствору этилового эфира L-фенилаланина (10 ммоль, 2.3 г) и 4метилморфолина (20 ммоль, 2.2 мл) в хлористом метилене (30 мл) по каплям прибавляют 3-хлорпропан1-сульфонилхлорид (10 ммоль, 1.21 мл). Смесь перемешивают в течение 30 мин при -10°С и в течение
2 ч при комнатной температуре. Прибавляют хлористый метилен (40 мл) и дважды промывают водой,
один раз рассолом, сушат сульфатом натрия. После упаривания растворителя в вакууме получают почти
чистый 3-хлорпропилсульфонамид в виде желтого масла с количественным выходом. 1Н и 13С ЯМР
спектры соответствуют структуре.
Смесь 3-хлорпропилсульфонамида (10 мл), азида натрия (20 ммоль) и каталитического количества
Bu4NI в ДМФА (40 мл) нагревают при 60°С в течение 24 ч. К смеси прибавляют этилацетат, трижды
промывают водой и один раз рассолом, сушат сульфатом натрия. После упаривания получают азид в ви- 105 -
012429
де коричневого масла (3.0489 г, 8.96 ммоль, 90%). 1Н и 13С ЯМР спектры соответствуют структуре.
Азид (2.70 г, 7.94 ммоль) перемешивают в атмосфере Н2 (40 psi, 275.79 кПа) с 10% Pd/C (348 мг) в
этаноле (16 мл) при комнатной температуре в течение ночи. Фильтруют смесь через целит. К фильтрату
прибавляют TMSCl/EtOH с целью получить соль продукта-кристаллический гидрохлорид. Растворитель
упаривают, получают вязкий остаток (2.2 г, 6.27 ммоль, 79%), который не удается кристаллизовать ни в
каких условиях. Сырой гидрохлорид растворяют в хлористом метилене и один раз промывают насыщенным водным раствором бикарбоната натрия. Органический слой отделяют и сушат сульфатом натрия.
Растворитель упаривают в вакууме. Остаток растворяют в метаноле и обрабатывают активированным
углем. Фильтруют через целит и фильтрат упаривают досуха. Остаток сушат в вакууме, получают желтокоричневое масло (1.3969 г, 56% в расчете на азид).
1
Н и 13С ЯМР спектры соответствуют структуре соединения CL.
Получение этилового эфира N-Вос-L-Phe-(3-аминопропан-1-сульфонил)-L-Phe (соединение Y)
К охлажденному (0°С) раствору 3-аминопропан-1-сульфонил-L-Phe-OEt (2.66 ммоль, 839 мг) в хлористом метилене (10 мл) прибавляют раствор N-трет-BOC-L-Phe N-гидроксисукцинимидоэфира (280
ммоль, 1.01 г) в хлористом метилене (12 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Прибавляют хлористый метилен и промывают 2N HCl, насыщенным водным раствором NaHCO3 и рассолом.
Органический слой сушат сульфатом магния и растворитель удаляют в вакууме. Остаток наносят на
колонку для флеш-хроматографии с силикагелем (2% MeOH в CHCl3). Выделяют порцию чистого требуемого вещества (600 мг). Остальной продукт смешивают с 40% сукцинимида. К растворенной в хлористом метилене (8 мл) и охлажденной до 0°С смеси добавляют немного 3-аминопропанола (70 мкл).
Смесь перемешивают 1 ч при комнатной температуре. Прибавляют хлористый метилен и промывают 2N
HCl, насыщенным водным раствором NaHCO3 и рассолом. Органический слой сушат сульфатом магния
и растворитель удаляют в вакууме. Продукт очищают колоночной флеш-хроматографией на силикагеле
(2% MeOH в CHCl3). Выделяют еще одну порцию чистого требуемого вещества (432.4 мг) наряду с аддуктом сукцинимида и 3-аминопропанола (220.6 мг, 0.684 ммоль). Соединение Y получают в виде белой
кристаллической пены (1030 мг, 1.83 ммоль, 65%).
1
Н и 13С ЯМР спектры соответствуют структуре.
Получение этилового эфира L-Phe-(3-аминопропан-1-сульфонил)-L-Phe (соединение Z)
К охлажденному (0°С) раствору этилового эфира N-Вос-L-Phe-(3-аминопропан-1-сульфонил)-L-Phe
(197 мг, 0.350 ммоль) в этаноле (8 мл) прибавляют концентрированную HCl (0.8 мл). Смесь охлаждают в
бане лед/вода и перемешивают в течение 45 мин, а затем 3 ч при комнатной температуре. В течение уикэнда (сб., вскр.) смесь хранят в морозильнике (-20°С). Растворитель отгоняют в вакууме. Остаток этанола удаляют трехкратным совместным упариванием в вакууме с хлороформом. Остаток сушат в вакууме,
получают кристаллы не чисто-белого цвета (175.3 мг) с количественным выходом.
1
Н и 13С ЯМР спектры соответствуют структуре соединения Z.
Получение натриевой соли L-(N-Вос)-Phe-(3-аминопропан-1-сульфонил)-L-Phe (соединение АА)
К раствору этилового эфира L-(N-Вос)-Phe-(3-аминопропан-1-сульфонил)-L-Phe (110 мг,
0.197 ммоль) в метаноле (2 мл) прибавляют один эквивалент 1N NaOH (202 мкл). Смесь перемешивают
при комнатной температуре в течение ночи. Образуется белая суспензия. Прибавляют MeOH (1 мл), воду
(1 мл) и 1N NaOH (10 мкл). Смесь перемешивают на теплой водяной бане около 2 ч. Метанол отгоняют в
вакууме. Влажный остаток лиофилизируют, получают соединение АА в виде белого порошка с количественным выходом (110.2 г).
1
Н и 13С ЯМР спектры соответствуют структуре.
- 106 -
012429
Получение метилового эфира L-Phe-(3-аминопропан-1-сульфонил)-L-Phe (соединение АВ)
Гидролиз проводят обычным методом с применением LiOH/MeOH. Продукт очищают перекристаллизацией из EtOAc и смеси гексанов.
L-Phe-(3-аминопропан-1-сульфонил)-L-Phe-ОН (203 мг, 0.382 ммоль) растворяют в метаноле (4 мл)
и раствор охлаждают до 0°С. Прибавляют концентрированную HCl (0.35 мл) и смесь перемешивают в
течение 2 ч при 0°С и в течение 2.5 ч при комнатной температуре. Летучие отгоняют в вакууме. Водный
остаток лиофилизируют, получают продукт в виде твердого вещества белого цвета (171.4 мг). Спектры
ЯМР и MS показывают, что продукт является смесью свободной кислоты и метилового эфира. Массспектр также показывает сильную ассоциацию пептида. Пик димера в масс-спектре является основным.
Твердый продукт растворяют в метаноле и выдерживают с HCl при комнатной температуре в течение
ночи. Растворитель упаривают и остаток сушат в вакууме. Продукт получают в виде белого пенистого
твердого вещества (180.4 мг, 97%).
1
Н и 13С ЯМР спектры соответствуют структуре соединения АВ.
Получение 4-йод-N-(3-сульфопропил)-L-фенилаланинамид (соединение СО)
К охлажденному (баня лед/вода) MeOH (60 мл) прибавляют тионилхлорид (8.2 мл, 112.5 ммоль).
Баню со льдом отставляют и к смеси прибавляют 4-йод-L-фенилаланин (6.55 г, 22.4 ммоль). Раствор кипятят в течение 2 ч. Растворитель отгоняют в вакууме. Твердый остаток растворяют в MeOH (40 мл) и
раствор выливают в Et2O (300 мл). Осадок отфильтровывают, промывают Et2O (2×50 мл) и сушат в вакууме.
Твердое соединение (1.96 г, 5.8 ммоль) растворяют в минимальном количестве воды. К раствору
прибавляют водный раствор NH4OH (28-30%, 15 мл). Реакционную смесь перемешивают при комнатной
температуре в течение субботы и воскресенья. Растворитель отгоняют в вакууме и прибавляют EtOAc
(15 мл). Смесь кипятят. Горячий раствор отфильтровывают. Фильтрат охлаждают до комнатной температуры и оставляют в холодильнике. Выпавший осадок отфильтровывают, промывают EtOAc, получают 4йодфенилаланинамид.
Амид (1.3 г, 4.4 ммоль) растворяют в 15 мл 2-бутанона с несколькими каплями ДМФА и прибавляют 1,3-пропансультон (560 мг, 4.9 ммоль). Реакционную смесь кипятят 2 ч. Охлаждают до комнатной
температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×20 мл) и сушат в вакууме. Сухой остаток суспендируют в MeOH (25 мл) с небольшим количеством воды (1 мл). Суспензию кипятят. Осадок
отфильтровывают горячим. Промывают горячим MeOH (2×10 мл). Соединение СО получают в виде
твердого вещества белого цвета (320 г).
Получение 3-[4-(4-фторфенил)-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-1-пропансульфоновой кислоты
(соединение F)
К гидрохлориду 4-(4-фторфенил)-1,2,3,6-тетрагидропиридина (2.58 г, 14.5 ммоль) прибавляют 1N
NaOH (20 мл). Водную смесь экстрагируют CH2Cl2 (20 мл). Органический слой отделяют и сушат
MgSO4. Растворители упаривают в вакууме.
К раствору 4-(4-фторфенил)-1,2,3,6-тетрагидропиридина (1.96 г, 13.7 ммоль) в ацетоне (30 мл) прибавляют 1,3-пропансультон (1.74 г, 14.5 ммоль). Смесь кипятят при перемешивании в течение ночи. Выпадает лишь небольшое количество вещества. Полученную суспензию при перемешивании охлаждают
до комнатной температуры, количество осадка увеличивается. Суспензию нагревают с добавлением небольшого количества MeOH до полного растворения осадка. Полученный раствор кипятят при перемешивании несколько минут и охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают MeOH и сушат в вакууме. Таким образом выделяют соединение F, 1.33 г (32%).
Получение 3-[4-(4-бромфенил)-4-гидроксипиперидин-1-ил]-1-пропансульфоновой кислоты (соединение G)
К раствору 4-(4-бромфенил)-4-пиперидинола (2.51 г, 9.8 ммоль) в MeOH (25 мл) прибавляют 1,3пропансультон (1.28 г, 10.7 ммоль). Смесь перемешивают при кипячении в течение 2 ч. Выпадает немно- 107 -
012429
го вещества. Полученную суспензию при перемешивании охлаждают до комнатной температуры и для
осаждения максимального количества соединения прибавляют 50% раствор MeOH в ацетоне. Осадок
отфильтровывают, промывают 50% раствором MeOH в ацетоне (2×25 мл) и сушат в вакууме. Таким образом выделяют соединение G, 2.11 г (57%).
Получение 3-[4-(4-хлорфенил)-4-гидроксипиперидин-1-ил]-1-пропансульфоновой кислоты (соединение Н)
К раствору 4-(4-хлорфенил)-4-пиперидинола (2.5 г, 11.8 ммоль) в ацетоне (25 мл) прибавляют 1,3пропансультон (1.56 г, 13.0 ммоль). Смесь перемешивают при кипячении в течение 2 ч. Реакционную
смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×20 мл)
и сушат в вакууме. Таким образом выделяют соединение Н, 2.83 г (72%).
Получение 3-(4-ацетил-4-фенилпиперидин-1-ил)-1-пропансульфоновой кислоты (соединение I)
К гидрохлориду 4-ацетил-4-фенилпиперидина (3.32 г, 12.5 ммоль) прибавляют 1N NaOH (20 мл).
Водную смесь экстрагируют CH2Cl2 (20 мл). Органический слой отделяют и сушат Na2SO4, фильтруют и
растворитель упаривают в вакууме.
К раствору 4-ацетилфенилпиперидина (1.83 г, 9.0 ммоль) в ацетоне (22 мл) прибавляют 1,3пропансультон (1.20 г, 10.0 ммоль). Смесь кипятят при перемешивании в течение 2 ч. Охлаждают до
комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×20 мл) и сушат в вакууме.
Таким образом выделяют соединение I, 2.65 г (90%).
Получение 3-[4-(4-хлорфенил)-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил]-1-пропансульфоновой кислоты (соединение J)
К гидрохлориду 4-(4-хлорфенил)-1,2,3,6-тетрагидропиридина (2.52 г, 10.5 ммоль) прибавляют 1N
NaOH (10 мл) и водную смесь экстрагируют CH2Cl2 (20 мл). Органический слой отделяют и сушат
Na2SO4 и фильтруют. Растворители упаривают в вакууме.
К раствору 4-(4-хлорфенил)-1,2,3,6-тетрагидропиридина (2.07 г, 10.7 ммоль) в ацетоне (25 мл) прибавляют 1,3-пропансультон (1.41 г, 11.8 ммоль). Смесь кипятят при перемешивании в течение 2 ч. Охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×20 мл) и сушат в
вакууме. Продукт суспендируют в 50% растворе MeOH в ацетоне (75 мл). Суспензию кипятят при перемешивании в течение 5 мин, прибавляют 25 мл холодного ацетона. Осадок отфильтровывают и промывают ацетоном (2×25 мл). Таким образом выделяют соединение J, 1.48 г (44%).
Получение 3-(4-фенилпиперазин-1-ил)-1-пропансульфоновой кислоты (соединение K)
К раствору 1-фенилпиперазина (2.0 г, 1.9 мл, 12.3 ммоль) в ацетоне (20 мл) прибавляют 1,3пропансультон (1.53 г, 12.9 ммоль). Смесь кипятят при перемешивании в течение 2 ч. Охлаждают до
комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл) и сушат в вакууме.
Таким образом выделяют соединение K, 3.04 г (87%).
Получение 3-[4-(4-хлорфенил)пиперазин-1-ил]-1-пропансульфоновой кислоты (соединение L)
К дигидрохлориду 1-(4-хлорфенил)пиперазина (2.5 г, 9.3 ммоль) прибавляют 1N NaOH (40 мл); и
водную смесь экстрагируют CH2Cl2 (40 мл). Органический слой отделяют и сушат Na2SO4 и фильтруют.
Растворители упаривают в вакууме.
К раствору 1-(4-хлорфенил)пиперазина (1.62 г, 8.2 ммоль) в ацетоне (20 мл) прибавляют 1,3пропансультон (1.06 г, 8.6 ммоль). Смесь кипятят при перемешивании в течение 2 ч. Охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл) и сушат в вакууме. Таким образом выделяют соединение L, 2.11 г (81%).
Получение 3-[4-(2-фторфенил)пиперазин-1-ил]-1-пропансульфоновой кислоты (соединение М)
- 108 -
012429
К раствору 1-(2-фторфенил)пиперазина (2.5 г, 2.2 мл, 13.9 ммоль) в ацетоне (25 мл) прибавляют 1,3пропансультон (1.73 г, 14.6 ммоль). Смесь кипятят при перемешивании в течение 2 ч. Охлаждают до
комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл) и сушат в вакууме.
Таким образом выделяют соединение М, 3.56 г (85%).
Получение 3-[4-(4-нитрофенил)пиперазин-1-ил]-1-пропансульфоновой кислоты (соединение N)
К раствору 1-(4-нитрофенил)пиперазина (2.58 г, 12.1 ммоль) в ацетоне (25 мл) прибавляют 1,3пропансультон (1.06 г, 8.6 ммоль). Смесь кипятят при перемешивании в течение 2 ч. Охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл) и сушат в вакууме. Таким образом выделяют соединение N, 2.85 г (71%).
Получение 3-[4-(4-фторфенил)пиперазин-1-ил]-1-пропансульфоновой кислоты (соединение Р)
К раствору 1-(4-фторфенил)пиперазина (2.0 г, 11.1 ммоль) в ацетоне (20 мл) прибавляют 1,3пропансультон (1.46 г, 11.7 ммоль). Смесь кипятят при перемешивании в течение 2 ч. Охлаждают до
комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл) и сушат в вакууме.
Таким образом выделяют соединение Р, 2.62 г (78%).
Получение 3-(4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил)пропановой кислоты (соединение Q)
Гидрохлорид 4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридина (1.5 г, 7.8 ммоль) суспендируют в 16 мл CH2Cl2.
К этой суспензии прибавляют триэтиламин (2.1 мл, 15.3 ммоль), а затем 3-бромпропионат (1.0 мл,
9.2 ммоль). Реакционную смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 4 ч, а затем кипятят в течение 2 ч. Промывают водой, 1N HCl (2×20 мл), 1N NaOH (2×20 мл) и рассолом. Органический
слой отделяют, сушат Na2SO4, фильтруют. Растворитель упаривают в вакууме.
К сырому продукту прибавляют 2N NaOH (15 мл). Смесь кипятят при перемешивании в течение
1 ч. Промывают CH2Cl2 (3×20 мл) и нейтрализуют концентрированной HCl. Водный раствор упаривают
досуха в вакууме, получают твердый остаток. Хлорид натрия удаляют из остатка следующим образом
(процедуру повторяют трижды): растворяют остаток в минимальном количестве воды, к водному раствору прибавляют ацетон, отфильтровывают образовавшийся осадок и упаривают фильтрат досуха в вакууме. Таким образом выделяют соединение Q (159.4 мг).
Получение 3-дибензиламино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение AV)
К раствору дибензиламина (9.8 мл, 50.8 ммоль) в толуоле (50 мл) прибавляют 1,3-пропансультон
(6.50 г, 53.3 ммоль). Смесь перемешивают при кипячении в течение 3 ч. На дне колбы образуется липкая
масса (паста). Охлаждают до комнатной температуры. Верхний слой декантируют, а пасту (массу) частично растворяют при нагревании в EtOAc. Смесь выливают в 10% EtOAc/смесь гексанов (200 мл). Нагревают и паста (масса) распределяется по стенкам конической колбы. Растворитель удаляют. Процесс
повторяют дважды. Прибавляют MeOH (75 мл). Смесь нагревают до тех пор, пока не появится белый
осадок. Осадок отфильтровывают, промывают холодным MeOH и сушат в вакууме, получают соединение AV, 7.03 7 (43%).
Получение 3-(4-циано-4-фенилпиперидин-1-ил)-1-пропансульфоновой кислоты (соединение Е)
К гидрохлориду 4-циано-4-фенилпиперидина (2.0 г, 9.0 ммоль) прибавляют 1N NaOH (20 мл) и
водную смесь экстрагируют CH2Cl2 (20 мл). Органический слой отделяют, сушат MgSO4 и фильтруют.
Растворитель упаривают в вакууме.
К суспензии пиперидина (1.43 г, 7.7 ммоль) в ацетоне (20 мл) прибавляют 1,3-пропансультон
(1.02 г, 8.5 ммоль). Смесь кипятят при перемешивании в течение 2 ч. Полученную суспензию охлаждают
до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном и сушат в вакууме. Продукт
перекристаллизовывают из MeOH (со следами воды), получают соединение Е, 800 мг (34%).
- 109 -
012429
Получение гидрохлорида 3-(4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридин-1-ил)бутановой кислоты (соединение R)
К гидрохлориду 4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридина (2.01 г, 10.2 ммоль) прибавляют 1N NaOH (20
мл) и водную смесь экстрагируют CH2Cl2 (20 мл). Органический слой отделяют и сушат MgSO4, фильтруют и растворитель упаривают в вакууме.
Полученный 4-фенил-1,2,3,6-тетрагидропиридин (1.55 г, 9.7 ммоль) растворяют в 20 мл 2-бутанона.
К этому раствору прибавляют карбонат калия (2.02 г, 14.6 ммоль). Смесь перемешивают 30 мин при
комнатной температуре; прибавляют этил-4-бромбутират (1.46 мл, 10.1 ммоль). Реакционную смесь кипятят при перемешивании в течение 5 ч. По охлаждении до комнатной температуры выпавшие неорганические соли отфильтровывают. Растворитель упаривают в вакууме. Остаток растворяют в CH2Cl2
(20 мл). Органический слой промывают водой (2×30 мл), 2N HCl (2×30 мл) и рассолом. Органический
слой сушат Na2SO4, фильтруют, упаривают и сушат в вакууме. Получают 1.55 г (58%) заданного сложного эфира.
Сложный эфир (5.7 ммоль) растворяют в 6N HCl (40 мл). Реакционную смесь перемешивают при
комнатной температуре в течение 5 ч и при кипячении 1 ч, охлаждают до комнатной температуре. Реакционную смесь экстрагируют CH2Cl2 (3×30 мл). Водный слой упаривают в вакууме. Остаток растворяют
в воде (20 мл); водный раствор упаривают досуха в вакууме. Полученный продукт дополнительно сушат
в вакууме, получают соединение R, 973 мг (61%).
Получение 3-пиперониламино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение AW)
К раствору пиперониламина (2.5 мл, 19.8 ммоль) в ацетоне (30 мл) прибавляют 1,3-пропансультон
(2.52 г, 20.8 ммоль). Смесь кипятят при перемешивании в течение 2 ч. Охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл) и сушат в вакууме. Продукт суспендируют в 90% ацетон/MeOH (75 мл). Суспензию перемешивают при кипячении 30 с, осадок отфильтровывают и сушат в вакууме. Таким образом выделяют соединение AW, 2.56 г (45%).
Получение 3-(3,4,5-триметоксибензил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение AY)
К раствору 3,4,5-триметоксибензиламина (2.2 мл, 12.7 ммоль) в 2-бутаноне (20 мл) прибавляют 1,3пропансультон (1.66 г, 13.3 ммоль). Смесь кипятят при перемешивании в течение 2 ч. Охлаждают до
комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл) и сушат в вакууме.
Продукт суспендируют в 90% ацетон/MeOH (75 мл). Суспензию перемешивают при кипячении 30 с, осадок отфильтровывают и сушат в вакууме, выделяют соединение AY, 2.61 г (64%).
Получение 3-(2,3-Диметоксибензил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение AZ)
К раствору 2,3-диметоксибензиламина (2.2 мл, 15.0 ммоль) в 2-бутаноне (20 мл) прибавляют 1,3пропансультон (1.97 г, 15.8 ммоль). Смесь кипятят при перемешивании в течение 2 ч. Охлаждают до
комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл) и сушат в вакууме.
Сырой продукт суспендируют в 90% ацетон/MeOH (75 мл). Суспензию перемешивают при кипячении
30 с, осадок отфильтровывают и сушат в вакууме, выделяют соединение AZ, 1.95 г (45%).
Получение 3-(N-бензгидрилкарбамил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение AF)
3-Амино-1-пропансульфоновую кислоту (1.0 г, 7.2 ммоль) растворяют в 3N NaOH (370 мг, 9.4 ммоль в 3 мл воды). Раствор охлаждают до 0°С, прибавляют дифенилметилизоцианат (1.4 мл, 7.2 ммоль).
Реакционную смесь нагревают до комнатной температуры, перемешивают в течение 8 ч (комнатная температура) и добавляют 3N NaOH (3 мл). Реакционную смесь перемешивают в течение 18 ч. pH реакцион- 110 -
012429
ной смеси доводят до 3, добавляя 5N HCl. Растворитель упаривают в вакууме. Прибавляют 25 мл EtOH и
смесь перемешивают при кипении в течение 30 с. Горячую смесь фильтруют. Фильтрат упаривают досуха. Эту процедуру повторяют еще дважды. Конечный продукт сушат в вакууме, получают соединение
AF, 837 мг (34%).
Получение 3-(3,5-диметоксибензил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение ВА)
К раствору 3,5-диметоксибензиламина (2.5 г, 15.0 ммоль) в 2-бутаноне (22 мл) прибавляют 1,3пропансультон (1.95 г, 15.8 ммоль). Смесь кипятят при перемешивании в течение 2 ч. Охлаждают до
комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл) и сушат в вакууме.
Таким образом выделяют соединение ВА, 2.89 г (67%).
Получение 3-(2,4-диметоксибензил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение ВВ)
К гидрохлориду 2,4-диметоксибензиламина (2.51 г, 12.3 ммоль) прибавляют 1N NaOH (20 мл) и
водную смесь экстрагируют CH2Cl2 (20 мл). Органический слой отделяют и сушат MgSO4 и фильтруют.
Растворитель упаривают в вакууме получают амин (в форме свободного основания).
К раствору 2,4-диметоксибензиламина (1.71 г, 10.3 ммоль) в 2-бутаноне (15 мл) прибавляют 1,3пропансультон (1.31 г, 10.7 ммоль). Смесь кипятят при перемешивании в течение 2.5 ч. Охлаждают до
комнатной температуры. Надосадочный слой декантируют; пастообразную массу промывают ацетоном
(2×30 мл) и растворяют в MeOH при нагревании. Прибавление ацетона к метанольному раствору вызывает выпадение осадка. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл) и сушат в вакууме;
получают соединение ВВ, 1.14 г (38%).
Получение натриевой соли 3-(фенилацетамидо)-1-пропансульфоновой кислоты (соединение AG)
3-Амино-1-пропансульфоновую кислоту (1.0 г, 7.2 ммоль) растворяют в 3N NaOH (7.2 мл). Раствор
охлаждают до 0°С, прибавляют фенилацетилхлорид (1.4 мл, 10.8 ммоль). Реакционную смесь доводят до
комнатной температуры, перемешивают в течение 22 ч. Растворитель упаривают в вакууме. Остаток суспендируют в 50% EtOH/Ацетон. Смесь перемешивают при кипении в течение 30 с. Осадок отфильтровывают и сушат в вакууме. Продукт перекристаллизовывают из 95% EtOH/H2O и сушат в вакууме. Так выделяют соединение AG, 880 мг (44%).
Получение натриевой соли 3-(N-бензилкарбамил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение АН)
3-Амино-1-пропансульфоновую кислоту (1.06 г, 7.7 ммоль) растворяют в 1.5 N NaOH (5.3 мл). К
этому раствору прибавляют бензилизоцианат (927 мкл, 7.7 ммоль). Реакционную смесь нагревают при
70°С в течение 30 мин, а затем прибавляют один эквивалент бензилизоцианата (927 мкл, 7.7 ммоль). Реакционную смесь перемешивают 1 ч. Растворитель упаривают при уменьшенном давлении. Остаток суспендируют в горячем ацетоне. Осадок отфильтровывают, промывают горячим ацетоном и сушат в вакууме; получают соединение АН, 2.07 г (92%).
Получение натриевой соли 3-(N-н-додецилкарбамил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение AJ)
3-Амино-1-пропансульфоновую кислоту (1.06 г, 7.7 ммоль) растворяют в 1.5 N NaOH (5.3 мл). К
этому раствору прибавляют н-додецилизоцианат (1.7 мл, 7.7 ммоль). Реакционную смесь нагревают при
70°С в течение 30 мин, а затем прибавляют один эквивалент н-додецилизоцианата (1.7 мл, 7.7 ммоль).
Реакционную смесь перемешивают 1 ч. Растворитель упаривают при уменьшенном давлении. Остаток
суспендируют в горячем ацетоне. Осадок отфильтровывают, промывают горячим ацетоном и сушат в
вакууме; получают соединение AJ, 2.47 г (86%).
- 111 -
012429
Получение натриевой соли 3-(N-1-адамантилкарбамил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение AK)
3-Амино-1-пропансульфоновую кислоту (1.06 г, 7.7 ммоль) растворяют в 1.5 N NaOH (5.3 мл). К
этому раствору прибавляют 1-адамантилизоцианат (1.36 г, 7.7 ммоль) в горячем EtOAc (5 мл). Реакционную смесь нагревают при 70°С в течение 30 мин, а затем прибавляют один эквивалент 1адамантилизоцианата (1.37 г, 7.7 ммоль) в горячем EtOAc (5 мл). Реакционную смесь перемешивают 1 ч.
Растворитель упаривают при уменьшенном давлении. Остаток суспендируют в горячем ацетоне. Осадок
отфильтровывают, промывают горячим ацетоном и сушат в вакууме. Продукт перекристаллизовывают
из EtOH, получают соединение AK, 519.4 мг (20%).
Получение натриевой соли 3-[2-(4-изобутилфенил)пропаноил]амино-1-пропансульфоновой кислоты
(соединение AL)
К ибупрофену (1.02 г, 4.9 ммоль) прибавляют хлористый тионил (1.6 мл, 21.1. ммоль). Реакционную
смесь кипятят в течение 4 ч. Растворитель упаривают, остаток сушат в вакууме, получают хлорангидрид
соответствующей кислоты.
3-Амино-1-пропансульфоновую кислоту (308 мг, 2.2 ммоль) растворяют в 1.5 N NaOH (3 мл). К
этому раствору по каплям прибавляют полученный выше хлорангидрид кислоты (500.8 мг, 4.4 ммоль).
Реакционную смесь нагревают при 70°С в течение ночи. Растворитель упаривают при уменьшенном давлении. Остаток суспендируют в ацетоне.
Суспензию кипятят при перемешивании в течение 30 с. Осадок отфильтровывают. Фильтрат упаривают досуха в вакууме. Остаток разделяют флеш-хроматографией (80% CH2Cl2/MeOH). Получают соединение AL, 237 мг (14%).
Получение натриевой соли 3-[(бензиламино)тиокарбонил]амино-1-пропансульфоновой кислоты
(соединение AM)
3-Амино-1-пропансульфоновую кислоту (1.07 г, 7.7 ммоль) растворяют в 1.5 N NaOH (5.3 мл). К
этому раствору прибавляют бензилизотиоцианат (1.02 мл, 7.7 ммоль). Реакционную смесь перемешивают
при 70°С в течение 0.5 ч; прибавляют второй эквивалент бензилизотиоцианата (1.02 мл, 7.7 ммоль) в горячем EtOAc (5 мл). Реакционную смесь перемешивают 1 ч. Растворитель упаривают при уменьшенном
давлении. Остаток суспендируют в горячем ацетоне. Осадок отфильтровывают, промывают горячим ацетоном и сушат в вакууме. Продукт перекристаллизовывают из MeOH (со следами воды), получают соединение AM, 1.00 г (42%).
Получение 3-(3,4-дигидробензил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение S)
К раствору 3,4-диметоксибензиламина (2.2 мл, 15.0 ммоль) в 2-бутаноне (20 мл) прибавляют 1,3пропансультон (1.98 г, 15.8 ммоль). Смесь кипятят при перемешивании в течение 2 ч. Охлаждают до
комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл) и сушат в вакууме.
Сырой продукт суспендируют в 75% ацетон/MeOH (75 мл). Суспензию перемешивают при кипячении
30 с, осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл) и сушат в вакууме. Твердый продукт
(1.94 г, 6.7 ммоль) растворяют в бромисто-водородной кислоте (48%, 27 мл). Раствор перемешивают при
100°С в течение 4 ч. Растворитель отгоняют в вакууме. Остаток растворяют в воде (20 мл). Водный раствор промывают CH2Cl2 (3×20 мл) и упаривают в вакууме. Сухой остаток суспендируют в горячем MeOH
(75 мл). Суспензию кипятят 30 с; осадок отфильтровывают, промывают 50% MeOH/ацетон и сушат в
вакууме. Выделяют соединение S, 1.22 г (70%).
Получение внутренней соли гидроксида 4-(3-фенилпропил)-1-сульфопропилпиридиния (соединение
С)
- 112 -
012429
К раствору 4-(3-фенилпропил)пиридина (14.5 мл, 76 ммоль) в 2-бутаноне (150 мл) прибавляют 1,3пропансультон (10.0 г, 83.6 ммоль). Смесь кипятят при перемешивании в течение 1.5 ч. По охлаждении
смеси до комнатной температуры выпадает осадок, осадок отфильтровывают, промывают ацетоном.
Осадок перекристаллизовывают из EtOH (следы Et2O) и получают соединение С, 15.8 г (66%).
Получение 4-(3-фенилпропил)-1-сульфопропил-1,2,3,6-тетрагидропиридина (соединение D)
4-(3-Фенилпропил)-1-сульфопропилпиридин (10.7 г, 33.5 ммоль) растворяют в 60 мл MeOH. Раствор охлаждают до 0°С и порциями прибавляют натрия борогидрид (2.55 г, 67.0 ммоль). Реакционную
смесь перемешивают 0.5 ч при комнатной температуре. К смеси последовательно прибавляют воду (10
мл) и концентрированную HCl (5 мл). Неорганические вещества отфильтровывают. Фильтрат упаривают
досуха под уменьшенным давлением и сушат в вакууме. Полученный вязкий остаток растворяют в
MeOH (60 мл). Раствор перемешивают с ионообменной смолой Amberlite IR-120 (8.3 г) в течение 15 мин.
Смолу отфильтровывают и промывают MeOH. Фильтрат и промывные воды упаривают досуха в вакууме. Остаток перекристаллизовывают из воды, получают соединение D (8.05 г, 75%) в виде белых кристаллов.
Получение 3-этиламино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение CV)
В трехгорлую колбу на 2 л (снабженную обратным холодильником) помещают тетрагидрофуран
(ТГФ, 800 мл) и охлаждают до 5°С в бане со льдом. К холодному ТГФ прибавляют водный раствор этиламина (70 вес.% раствор в воде, 85 мл, 1.07 моля), а затем в течение 24 мин прибавляют холодный раствор 1,3-пропансультона (25.08 г, 201 ммоль) в ТГФ (100 мл). Смесь перемешивают в течение 1 ч, охлаждая баней со льдом. Охлаждающую баню отставляют и смесь перемешивают при комнатной температуре в течение ночи. Затем при кипячении в течение 1 ч отгоняют этиламин. Горячая смесь является
двухфазной. По охлаждении на дне колбы появляются кристаллы. Прибавляют эфир (400 мл) и смесь
охлаждают до -20°С. Жидкость декантируют. К остатку прибавляют метанол (около 120 мл). Смесь кипятят до полного растворения осадка. По охлаждении раствора до комнатной температуры образуется
осадок. Смесь охлаждают в бане со льдом; осадок отфильтровывают, промывают холодным метанолом и
сушат в вакууме (20.66 г, ЯМР спектр показывает чистое соединение). Перекристаллизовывают из метанола (100 мл). По охлаждении в бане со льдом осадок отфильтровывают, промывают холодным метанолом и сушат в вакуум-шкафу при 40°С. Соединение CV получают в виде белых длинных игл (19.12 г,
57%).
1
Н и 13С ЯМР спектры соответствуют структуре.
Получение 3-(1-адамантил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение BW)
К гидрохлориду 1-адамантиламина (80 г, 0.426 моля) прибавляют NaOH (10%, 400 мл) в воде. Экстрагируют хлористым метиленом (1×400 мл, 2×100 мл). Объединенные органические вытяжки промывают рассолом (50 мл) и сушат сульфатом натрия (10 г). Растворитель отгоняют в вакууме. Полученное
белую воскообразную массу упаривают с ацетонитрилом (50 мл). Влажный твердый остаток суспендируют в ацетонитриле (200 мл). Суспендированную смесь в течение 20 мин по каплям прибавляют к раствору 1,3-пропансультона (53 г, 0.426 моля) в ацетонитриле (300 мл) и ТГФ (200 мл). Затем суспензию
охлаждают до 13°С. Осадок отфильтровывают на вакуум-фильтре, промывают ацетонитриле (2×100 мл)
и эфиром (1×100 мл), сушат на воздухе в течение 30 мин, а затем сушат в вакууме при 60°С в течение
ночи (1 порция, 104.17 г). Вторую порцию получают из фильтрата и сушат в вакууме таким же способом
(2 порция, 3.39 г). Обе порции имеют одинаковый ЯМР спектр. Две партии объединяют для последующей очистки.
Твердое вещество суспендируют в метаноле (720 мл) и смесь кипятят. По каплям, в течение 45 мин,
при кипении прибавляют воду (490 мл). После полного растворения осадка раствор кипятят еще в течение 30 мин. Смесь оставляют на выключенном колбонагревателе для медленного охлаждения. Через
90 мин температура достигает 40°С. Колбонагреватель заменяют на термостатированную водяную баню.
Смесь охлаждают до 5°С и перемешивают в течение ночи при этой температуре. Отфильтровывают белый хлопьевидный осадок, промывают холодным (0°С) метанолом (2×125 мл), сушат на воздухе в течение 60 мин, а затем в течение ночи в вакуум-шкафу при 60°С. Соединение BW получают в виде белого
хлопьевидного вещества (белые пластины, 88.48 г, выход первой порции 76%).
1
Н и 13С ЯМР спектры соответствуют структуре.
Вторую порцию (8.62 г) соединения BW получают из маточного раствора.
- 113 -
012429
1
Н ЯМР спектр идентичен спектру первой порции. Общий выход из гидрохлорида 83%.
Получение 3-(2-норборнил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение BY)
К раствору 2-аминонорборнана (7.3 г, 65.7 ммоль) в 2-бутаноне (50 мл) по каплям прибавляют раствор 1,3-пропансультона (8.1 г, 65.7 ммоль) в 2-бутаноне (10 мл). Смесь перемешивают при 60°С в течение 1 ч. Суспензию охлаждают до комнатной температуре. Осадок отфильтровывают и промывают этанолом (2×20 мл). Сырой продукт перекристаллизовывают из 95% EtOH, получают соединение BY в виде
белых кристаллов (выход 8.2 г, 53%).
Получение 3-(2-адамантил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение BZ)
К гидрохлориду 2-аминоадамантана (2×5 г) прибавляют NaOH в воде. Экстрагируют хлористым
метиленом. Органические вытяжки сушат сульфатом магния. Растворитель отгоняют в вакууме. Твердый
белый остаток сушат 30 мин при комнатной температуре в вакууме. К раствору свободного амина (7.98 г,
52 ммоль) в ТГФ (70 мл, всего) прибавляют раствор 1,3-пропансультона (7.4 г, 60 моль). Смесь кипятят в
течение 4 ч, охлаждают в бане со льдом. Осадок отфильтровывают, сушат на воздухе в течение 15 мин и
дополнительно сушат в вакууме (11.2 г). Перекристаллизовывают из метанола/воды
(60 мл/35 мл). Фильтрат охлаждают в холодильнике, осадок отфильтровывают, сушат в вакуум-шкафу
при 60°С в течение ночи. Получают белый кристаллический осадок (небольшие пластины, выход 10.45 г,
74%).
1
Н и 13С ЯМР спектры соответствуют структуре соединения BZ.
Получение 3-(3,4-диметоксибензил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение S)
К раствору 3,4-диметоксибензиламина (2.2 мл, 15 ммоль) в ацетоне (20 мл) прибавляют 1,3пропансультон (1.97 г, 15.8 ммоль). Смесь перемешивают при кипячении в течение 2 ч. Охлаждают до
комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл) и сушат в вакууме.
Сырой продукт суспендируют в 90% ацетон/MeOH (75мл). Суспензию кипятят при перемешивании в
течение 30 с, осадок отфильтровывают и сушат в вакууме. Соединение S (1.84 г, 43%) выделяют в виде
белого твердого вещества.
1
Н ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д, 6.96 (м, 3Н), 4.06 (с, 2Н), 3.74 (с, 6Н), 3.07 (т, 1Н, J=7.8 Гц), 2.86 (т,
1Н, J=7.8 Гц), 2.01 (м, 2Н).
13
С ЯМР (D2O, 125 МГц) δ м.д. 149.23, 148.50, 123.63, 123.37, 55.90, 55.86, 50.96, 48.06, 45.62, 21.39.
ES-MS 290 (М+1).
Получение 3-(2,2-дифенилэтил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение ЕТ)
К раствору 1,2-дифенилэтиламина (2.49 мл, 12.7 ммоль) в 2-бутаноне (15 мл) прибавляют 1,3пропансультон (1.67 г, 13.3 ммоль). Смесь кипятят при перемешивании в течение 2 ч. Охлаждают до
комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл) и сушат в вакууме.
Получают соединение ЕТ: 3.02 г (74%).
1
Н ЯМР (ДМСО-d6, 500 МГц) δ м.д. 8.58 (с (уш), 1Н), 7.34 (м, 8Н), 7.23 (т, 2Н, J=7.3 Гц), 4.32 (т, 1H,
J=7.8 Гц), 3.68 (д, 2Н, J=7.3 Гц), 3.08 (т, 2Н, J=6.1 Гц), 2.57 (т, 2Н, J=7.3 Гц), 1.92 (м, 2Н).
13
С ЯМР (ДМСО, 125 МГц) δ м.д. 141.63, 129.46, 128.47. 127.76, 50.85, 49.91, 48.53, 22.07.
ES-MS 318 (М-1).
Получение 4-(трет-бутиламино)-2-бутансульфоновой кислоты (соединение ES)
- 114 -
012429
К раствору трет-бутиламина (1.0 мл, 9.5 ммоль) в тетрагидрофуране (15 мл) прибавляют 2,4бутансультон (1.33 г, 10.0 ммоль). Смесь кипятят при перемешивании в течение 2 ч. Охлаждают смесь до
комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ТГФ (2×20 мл) и сушат в вакууме: получают соединение ES.
1
Н ЯМР (ДМСО-d6, 500 МГц) δ м.д. 2.97 (т, 2Н, J=6.6 Гц), 2.62 (м, 1H), 1.95 (м, 0.5Н), 1.750 (м,
0.5Н), 1.22 (с, 9Н), 1.12 (д, 3Н, J=6.8 Гц).
13
С ЯМР (ДМСО, 125 МГц) δ м.д. 56.17,53.15, 29.87, 25.87, 17.05.
ES-MS 207 (М-1).
Получение 4-(трет-бутиламино)-1-бутансульфоновой кислоты (соединение ER)
К раствору трет-бутиламина (1.0 мл, 9.5 ммоль) в тетрагидрофуране (4 мл) прибавляют 1,4бутансультон (1.36 г, 10.0 ммоль). Смесь кипятят при перемешивании в течение 2 ч. Охлаждают смесь до
комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×20 мл) и сушат в вакууме:
получают соединение ER 690 мг, (34%).
1
Н ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д. 2.92 (т, 2Н, J=7.1 Гц), 2.82 (т, 2Н, J=7.1 Гц), 1.68 (м, 4Н), 1.22 (с, 9Н).
13
С ЯМР (D2O, 125 МГц) δ м.д. 57.07, 50.30, 40.95, 25.28, 24.96, 21.62.
ES-MS 210 (M-1).
Получение 3-(3-пентил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение DD)
К раствору 1-этилпропиламина (10.0 мл, 115 ммоль) в тетрагидрофуране (80 мл) прибавляют 1,3пропансультон (13.7 г, 110.0 ммоль) в 20 мл ТГФ. Смесь кипятят при перемешивании в течение 2 ч. Охлаждают смесь до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×50 мл) и
сушат в вакууме: получают соединение DD (18.1 г, 80%).
1
Н ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д. 3.08 (т, 2Н, J=7.3 Гц), 3.01 (м, 1Н), 2.87 (т, 2Н, J=7.3 Гц), 2.00 (м, 2Н),
1.59 (м, 4Н), 0.82 (т, 6Н, J=7.3 Гц).
13
С ЯМР (D2O, 125 МГц) δ м.д. 60.87, 48.14, 43.68, 21.81. 21.60, 8.25.
ES-MS 208 (М-1).
Получение 3-(трет-амил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение DG)
К раствору трет-амиламина (2.0 г, 23.3 ммоль) в тетрагидрофуране (15 мл) прибавляют 1,3пропансультон (2.76 г, 22.2 ммоль). Смесь кипятят при перемешивании в течение 2 ч. Охлаждают смесь
до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл) и сушат в вакууме: получают соединение DG (3.3 г, 73%).
1
Н ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д. 3.04 (т, 2Н, J=7.8 Гц), 2.89 (т, 2Н, J=7.8 Гц), 2.87 (т, 2Н, J=7.3 Гц),
1.97 (м,2Н), 1.55 (м,2Н), 1.18 (с, 6Н), 0.82 (т, 6Н, J=7.3 Гц).
13
СЯМР (D2O, 125 МГц) δ м.д. 60.42, 48.17, 39.88, 30.81, 22.23, 21.98, 7.25.
ES-MS 208 (М-1).
Получение 3-(1,1-диметил-2-гидроксиэтил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение DH)
К раствору 2-амино-2-метил-1-пропанола (2.0 г, 21.4 ммоль) в тетрагидрофуране (15 мл) прибавляют 1,3-пропансультон (2.66 г, 21.4 ммоль). Смесь кипятят при перемешивании в течение 2 ч. Охлаждают
смесь до комнатной температуры. Сырой продукт отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл).
Суспендируют в EtOH (50 мл). Суспензию кипятят при перемешивании в течение 5 мин. Осадок отфильтровывают и сушат в вакуум-шкафу (50°С), получают соединение DH (2.5 г, 58%).
1
Н ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д. 3.48 (с, 2Н), 3.04 (т, 2Н, J=7.8 Гц), 2.90 (т, 2Н, J=7.3 Гц), 2.00 (м, 2Н),
1.18 (с, 6Н).
13
С ЯМР (D2O, 125 МГц) δ м.д. 64.88, 60.27, 48.19, 40.10, 21.92, 20.02.
ES-MS 210 (М-1).
- 115 -
012429
Получение 3-(1-карбокси-1-метилэтиламино)-1-пропансульфоновой кислоты (соединение DI)
К охлажденной (5°С) смеси 2-аминоизомасляной кислоты (2.0 г, 19.4 ммоль), NaOH (776 мг, 19.4
ммоль) в 1,4-диоксане (10 мл) и воде (4 мл) прибавляют с помощью шприцевого насоса (в течение 4 ч)
раствор 1,3-пропансультона (2.02 г, 16.2 ммоль) в 1.4-диоксане (всего 4 мл). Раствор перемешивают при
этой температуре в течение 2 ч, а потом доводят до комнатной температуры. Перемешивают в этих условиях в течение ночи. Растворитель упаривают в вакууме. Твердый остаток перекристаллизовывают из 5%
вода/EtOH. Продукт растворяют в воде и водный раствор пропускают через ионообменную колонку
(Dowex 50WX 8, 100 г, растворитель вода). Растворитель упаривают в вакууме. Продукт лиофилизируют,
получают соединение DI (880 мг, 28%).
1
Н ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д. 3.00 (т, 2Н, J=7.6 Гц), 2.91 (т, 2Н, J=7.3 Гц), 2.01 (м, 2Н), 1.34 (с, 6Н).
13
С ЯМР (D2O, 125 МГц) δ м.д. 176.93, 63.89, 48.13, 42.04, 22.15, 21.86.
ES-MS 224 (M-1).
Получение 3-[(1R,2S)-2-метилциклогексил]амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение DJ)
К раствору 2-метилциклогексиламина (98% цис и транс-изомеры, 10.0 г, 88.3 ммоль) в тетрагидрофуране (60 мл) медленно прибавляют раствор 1,3-пропансультона (10.5 г, 84.1 ммоль) в ТГФ (20 мл).
Перемешивают при кипении в течение 2 ч. Охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×50 мл). Твердый продукт растворяют в смеси EtOH/вода (200 мл); и
раствор обрабатывают смолой Dowex 50WX 8 (15 г). Суспензию перемешивают при комнатной температуре 15 мин. Смолу отфильтровывают. Фильтрат упаривают на роторном испарителе до половины первоначального объема. Твердый продукт медленно кристаллизуется. Продукт отфильтровывают, промывают ацетоном (2×50 мл) и сушат в вакуум-шкафу (50°С), получают соединение DJ (10.4 г, 53%).
1
Н ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д. 3.15 (м,1H), 3.03 (м,1Н), 2.88 (т, 2Н, J=7.3 Гц), 2.76 (м, 1Н), 1.98
(м,3Н), 1.68 (м, 2Н), 1.51 (м, 2Н), 1.18 (м, 3Н), 1.01 (м, 1Н), 0.92 (м, 3Н).
13
С ЯМР (D2O, 125 МГц) δ м.д. 62.97, 48.16. 42.72, 34.77, 33.50, 27.57, 24.51, 24.23, 21.51, 17.80.
ES-MS 234 (М-1).
Получение 3-(2,3-диметилциклогексил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение DK)
К раствору 2,3-диметилциклогексиламина (10.0 г, 79.0 ммоль) в тетрагидрофуране (60 мл) медленно
прибавляют раствор 1,3-пропансультона (9.3 г, 75.0 ммоль) в ТГФ (20 мл). Раствор перемешивают при
кипении в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ТГФ (50 мл) и ацетоном (50 мл). Твердый продукт растворяют в 25% EtOH/вода (150
мл) и обрабатывают смолой Dowex 50WX 8 (15 г). Суспензию перемешивают при комнатной температуре 5 мин. Смолу отфильтровывают. Фильтрат упаривают досуха в вакууме; твердый остаток суспендируют в ацетоне (100 мл). Осадок отфильтровывают и сушат в вакууме, получают соединение DK (7.4 г,
43%).
1
Н ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д. 3.29 (м, 0.5Н), 3.09 (м, 2Н), 2.88 (т, 2Н, J=7.3 Гц), 2.80 (м, 0.5Н), 1.99
(м, 3Н), 1.40 (м, 7Н), 0.81 (м, 6Н).
13
С ЯМР (D2O, 125 МГц) δ м.д. 62.85, 61.56, 59.88, 58.22, 48.26, 48.15, 44.29, 43.84, 43.59, 42.65,
42.01, 41.03, 37.34, 36.12, 34.73, 34.45, 33.88, 33.64, 29.39, 28.00, 26.50, 24.25, 24.02, 23.64, 22.42, 21.55,
21.45, 21.35, 19.38, 19.13, 18.82, 18.40, 14.38, 13.39, 4.59.
ES-MS 248 (М-1).
Получение 3-неопентиламино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение DK)
К раствору неопентиламина (8.5 г, 98 ммоль) в тетрагидрофуране (75 мл) медленно прибавляют
раствор 1,3-пропансультона (11.5 г, 93 ммоль) в ТГФ (20 мл). Перемешивают раствор при кипении в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×50 мл). Твердый продукт суспендируют в EtOH (150 мл). Суспензию кипятят при перемешивании 15 мин. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×50 мл) и сушат в вакууме, по- 116 -
012429
лучают соединение DL (13.3 г, 69%).
1
Н ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д. 3.09 (т, 2Н, J=7.3 Гц), 2.89 (т, 2Н, J=7.3 Гц), 2.78 (с, 2Н), 2.04 (м, 2Н),
0.901 (с, 9Н).
13
С ЯМР (D2O, 125 МГц) δ м.д. 50.44, 48.31, 47.84, 29.91, 26.42, 21.06.
ES-MS 208 (М-1).
Получение 3-кумиламино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение DM)
К раствору кумиламина (10.5 г, 78 ммоль) в тетрагидрофуране (75 мл) медленно прибавляют раствор 1,3-пропансультона (9.2 г, 74 ммоль) в ТГФ (20 мл). Перемешивают раствор при кипении в течение
4 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают
ТГФ (2×35 мл). Твердый продукт суспендируют в EtOH (80 мл). Суспензию кипятят при перемешивании
15 мин. Осадок отфильтровывают, промывают EtOH (35 мл) и ацетоном (35 мл). Сушат в вакууме, получают соединение DM (5.6 г, 30%).
1
Н ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д. 7.41 (м, 5Н), 2.74 (с, 4Н), 1.88 (м, 2Н), 1.66 (с, 6Н).
13
С ЯМР (D2O, 125 МГц) δ м.д. 138.36, 129.44, 129.41, 126.52, 61.56, 48.04, 41.21, 24.80, 21.81.
ES-MS 256 (М-1).
Получение 3-[(1R)-1-(4-метилфенил)этил]амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение FN)
К раствору (R)-(+)-1-(4-метоксифенил)этиламина (5.83 г, 38.6 ммоль) в тетрагидрофуране (25 мл)
медленно прибавляют 1,3-пропансультон (4.56 г, 36.8 ммоль). Перемешивают раствор при кипении в
течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ТГФ (25 мл) и ацетоном (25 мл). Твердый продукт суспендируют в EtOH (200 мл). Суспензию
кипятят при перемешивании 15 мин. Осадок отфильтровывают, промывают холодным EtOH (50 мл) и
сушат в вакуум-шкафу (50°С), получают соединение FN (5.6 г, 56%).
1
Н ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д. 7.26 (д, 2Н, J=8.3 Гц), 6.90 (д, 2Н, J=8.3 Гц), 4.22 (м, 1Н), 3.68 (с, 3Н),
2.92 (м, 1H), 2.76 (м, 3Н), 1.90 (м, 2Н), 1.49 (д, 3Н, J=6.8 Гц).
13
С ЯМР (D2O, 125 МГц) δ м.д. 159.87, 129.34, 128.18, 114.85, 57.99, 55.58, 48.05, 44.21, 21.45, 18.21.
ES-MS 272 (М-1).
Получение 3-[(1R)-1-инданамино]-1-пропансульфоновой кислоты (соединение DO)
К раствору (R)-(-)-1-аминоиндана (1.0 г, 7.5 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл) медленно прибавляют 1,3-пропансультон (890 мг, 7.1 ммоль). Перемешивают при кипении в течение 2 ч. Реакционную
смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ТГФ (20 мл) и ацетоном (20 мл). Твердый продукт суспендируют в 80% ацетон/EtOH (40 мл). Суспензию кипятят при перемешивании 30 с. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×20 мл) и сушат в вакууме, получают соединение DO (1.1 г, 61%).
1
Н ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д. 7.41 (д, 1Н, J=7.3 Гц), 7.30 (м, 2Н), 7.24 (м, 1Н), 4.72 (м, 1Н), 3.14 (т,
2Н, J=7.8 Гц), 3.02 (м, 1Н), 2.88 (м, 3Н), 2.43 (м, 1Н), 2.12 (м, 1Н), 2.01 (м, 2Н).
13
С ЯМР (D2O, 125 МГц) δ м.д. 145.38, 136.39, 130.31, 127.20, 125.72, 125.54, 62.98, 48.10, 43.93,
29.84, 28.62, 21.64. [α]D= -1.3° (с=0.00515 в воде).
ES-MS 254 (М-1).
Получение натриевой соли 3-(N-трет-бутилкарбамил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (натриевая соль соединения DP)
3-Амино-1-пропансульфоновую кислоту (2.0 г, 14.3 ммоль) растворяют в 1.6 М NaOH (10 мл). К
этому раствору прибавляют трет-бутилизоцианат (1.1 г, 14.3 ммоль). Реакционную смесь перемешивают
при 70°С в течение 1 ч, а затем прибавляют еще один эквивалент трет-бутилизоцианата (1.1 г,
14.3 ммоль). Реакционную смесь перемешивают 1 ч. Растворитель упаривают в вакууме. Остаток сус- 117 -
012429
пендируют в EtOH (30 мл). Осадок отфильтровывают, промывают EtOH (20 мл) и ацетоном (20 мл).
Продукт сушат в вакууме, получают натриевую соль соединения DP (2.1 г, 66%).
1
Н ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д. 3.03 (т, 2Н, J=6.6 Гц), 2.76 (т, 2Н, J=7.6 Гц), 1.72 (м, 2Н), 1.12 (с, 9Н).
13
С ЯМР (D2O, 125 МГц) δ м.д. 160.35, 50.26, 48.74, 38.31, 28.86, 25.24.
ES-MS 280 (M+Na).
Получение 3-(1,2-диметил-1-пропил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение DQ)
К раствору 1,2-диметилпропиламина (10.0 г, 115 ммоль) в тетрагидрофуране (80 мл) медленно прибавляют раствор 1,3-пропансультона (13.7 г, 110 ммоль) в ТГФ (20 мл). Перемешивают раствор при кипении в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ТГФ (50 мл) и EtOH (50 мл). Осадок сушат в вакууме, получают соединение DQ
(17.5 г, 76%).
1
Н ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д. 3.07 (м, 3Н), 2.88 (т. 2Н, J=7.3 Гц), 1.97 (м, 3Н), 1.10 (д, 3Н, J=6.8 Гц),
0.85 (д, 3Н, J=6.8 Гц), 0.81 (д, 3Н, J=6.8 Гц).
13
С ЯМР (D2O, 125 МГц) δ м.д. 59.79, 48.19, 44.18, 29.72, 21.51, 18.44, 15.02, 10.71.
ES-MS 232 (M+Na).
Получение 3-(4-метилциклогексил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение DR)
К раствору 4-метилциклогексиламина (97% цис- и транс-изомеры, 11.0 г, 97.4 ммоль) в тетрагидрофуране (70 мл) медленно прибавляют раствор 1,3-пропансультона (11.5 г, 92.8 ммоль) в ТГФ (20 мл).
Перемешивают раствор при кипении в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ТГФ (50 мл) и ацетоном (50 мл). Суспендируют в EtOH.
Суспензию перемешивают при комнатной температуре в течение 5 мин. Осадок отфильтровывают, промывают EtOH (50 мл) и сушат в вакуум-шкафу (50°С), получают соединение DR (16.1 г, 75%).
1
Н ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д. 3.08 (м, 2.5Н), 2.93 (м, 0.5Н), 2.87 (м,2Н), 1.99 (м,4Н), 1.64 (м, 3Н),
1.47 (м, 1Н), 1.24 (м, 2Н), 0.88 (м, 1Н), 0.78 (м, 3Н).
13
С ЯМР (D2O, 125 МГц) δ м.д. 57.35, 56.52, 48.16, 18.05, 43.73, 43.30, 32.45, 31.13, 28.92, 28.69,
27.77, 24.55, 21.65, 21.53, 21.20, 18.38.
ES-MS 236 (М+1).
Получение 3-(2-метил-1-бутил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение DS)
К раствору (+/-)-2-метилбутиламина (10.0 г, 115 ммоль) в тетрагидрофуране (80 мл) медленно прибавляют раствор 1,3-пропансультона (13.5 г, 109 ммоль) в ТГФ (20 мл). Перемешивают раствор при кипении в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×30 мл). Суспендируют в 95% ацетон/EtOH. Суспензию перемешивают
при комнатной температуре в течение 5 мин. Осадок отфильтровывают и сушат в вакуум-шкафу (50°С),
получают соединение DS (17.6 г, 78%).
1
Н ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д. 3.07 (т, 2Н, J=7.8 Гц), 2.93 (м, 3Н), 2.76 (м, 1H), 2.01 (м, 2Н), 1.67 (м,
1Н), 1.30 (м, 1Н), 1.09 (м, 1Н), 0.81 (д, 3Н, J=6.8 Гц), 0.77 (т, 3Н, J=6.8 Гц).
13
С ЯМР (D2O, 125 МГц) δ м.д. 53.48, 48.13, 46.92, 31.96, 26.38, 21.29, 16.11, 10.19.
ES-MS 210 (М+1).
Получение 3-пивалоиламино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение DR)
3-Аминопропансульфоновую кислоту (2.0 г, 14.4 ммоль) растворяют в растворе NaOH (1.2 г,
30.2 ммоль) в смеси 1,4-диоксана (5 мл) и воды (15 мл). Смесь охлаждают до 0°С и по каплям прибавляют раствор пивалоилхлорида (2.8 мл, 21.6 ммоль) в 1,4-диоксане (5 мл). Реакционную смесь доводят до
комнатной температуры и в течение 4 ч перемешивают при 65°С. Растворитель упаривают в вакууме.
Твердый остаток растворяют в воде (30 мл) и прибавляют смолу Dowex 50WX8. Суспензию перемешивают 5 мин и смолу отфильтровывают. Фильтрат упаривают в вакууме. Остаток суспендируют в 20%
EtOH/ацетон. Смесь перемешивают при кипячении 30 с. Осадок отфильтровывают и сушат в вакууме,
получают соединение DT (1.3 г, 41%).
- 118 -
012429
1
Н ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д. 3.16 (т 2Н, J=6.8 Гц), 2.75 (т, 2Н, J=7.8 Гц), 1.78 (м, 2Н), 1.1 (с, 9Н).
С ЯМР (D2O, 125 МГц) δ м.д. 182.75, 48.70, 38.57, 38.18, 26.65, 24.27.
ES-MS 222 (М-1).
Получение 3-(3,3,5-триметилциклогексил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение ED)
13
К раствору 3,3,5-триметилциклогексиламина (5.0 г, 35.4 ммоль) в тетрагидрофуране (35 мл) медленно прибавляют раствор 1,3-пропансультона (4.17 г, 33.7 ммоль) в ТГФ. Перемешивают раствор при
кипении в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл). Суспендируют в 90% ацетон/EtOH (100 мл). Суспензию перемешивают при комнатной температуре в течение 5 мин. Осадок отфильтровывают и сушат в вакуум-шкафу
(50°С), получают соединение ED (5.9 г, 67%).
1
Н ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д. 3.20 (м, 1Н), 3.08 (м, 2Н), 2.87 (т, 2Н, J=6.8 Гц), 1.96 (м, 3Н), 1.60 (м,
2Н). 1.29 (м, 1Н), 1.01 (м, 1Н), 0.84 (с, 3Н), 0.73 (м, 8Н).
13
С ЯМР (D2O, 125 МГц) δ м.д. 54.98, 48.06, 46.51, 43.28, 40.96, 37.02, 32.07, 31.23, 26.68, 24.28,
21.67, 21.52.
ES-MS 262 (М-1).
Получение 3-(2-инданамино)-1-пропансульфоновой кислоты (соединение ЕЕ)
К раствору 2-аминоиндана (2.50 г, 18.8 ммоль) в тетрагидрофуране (25 мл) медленно прибавляют
1,3-пропансультон (2.24 г, 17.9 ммоль). Перемешивают раствор при кипении в течение 2.5 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном
(2×25 мл). Сырой продукт суспендируют в 90% ацетон/EtOH (100 мл). Суспензию перемешивают при
комнатной температуре в течение 5 мин. Осадок отфильтровывают и сушат в вакуум-шкафу (50°С), получают соединение ЕЕ (3.1 г, 67%).
1
Н ЯМР (ДМСО, 500 МГц) δ м.д. 7.25 (м, 2Н), 7.20 (м, 2Н), 4.00 (м, 1Н), 3.30 (м, 2Н), 3.13 (м 2Н),
3.02 (м, 2Н), 2.64 (м, 2Н). 1.96 (м, 2Н).
13
С ЯМР (ДМСО, 125 МГц) δ м.д. 130.98, 127.80, 125.25, 57.70, 49.24, 45.87, 36.32, 22.66.
ES-MS 254 (М-1).
Получение 3-(4-бифениламино)-1-пропансульфоновой кислоты (соединение EF)
К раствору 4-аминобифенила (3.0 г, 17.8 ммоль) в тетрагидрофуране (25 мл) медленно прибавляют
1,3-пропансультон (2.11 г, 16.9 ммоль). Перемешивают раствор при кипении в течение 3 ч. Реакционную
смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл).
Сырой продукт растворяют в горячем растворе 80% MeOH/Н2О (120 мл). К этому теплому раствору прибавляют ионообменную смолу Dowex 50WX8 (10 г). Горячую суспензию перемешивают в течение 5 мин
и смолу отфильтровывают. Фильтрат упаривают досуха в вакууме. Твердый остаток сушат в вакуумшкафу (50°С), получают соединение EF (283 мг, 6%).
1
Н ЯМР (ДМСО, 500 МГц) δ м.д. 7.77 (д, 2Н, J=7.8 Гц), 7.66 (д, 2Н, J=7.8 Гц), 7.46 (м, 3Н), 7.37 (м,
1H), 3.44 (м, 2Н), 2.68 (м, 2Н), 1.98 (м, 2Н).
13
С ЯМР (ДМСО, 125 МГц) δ м.д. 139.74, 129.69, 128.74, 128.33, 127.31, 122.23, 49.70, 22.93.
ES-MS 290 (М-1).
Получение 3-[(1R,2S)-2-гидрокси-1-(метоксиметил)-2-фенилэтил]амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение EG)
К раствору (1S,2S)-2-амино-3-метокси-1-фенил-1-пропанола (1.0 г, 5.5 ммоль) в тетрагидрофуране
(10 мл) медленно прибавляют 1,3-пропансультон (662 мг, 5.3 ммоль). Перемешивают смесь при кипении
в течение 2.5 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают,
промывают ацетоном (2×25 мл). Суспендируют в 80% ацетон/EtOH. Суспензию перемешивают при кипячении в течение 30 с. Осадок отфильтровывают и сушат в вакуум-шкафу (50°С), получают соединение
- 119 -
012429
EG (1.0 г, 63%).
1
H ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д. 7.32 (м, 5Н), 4.77 (д, 1Н, J=9.8 Гц), 3.53 (м,1Н), 3.37 (м, 1), 3.26 (м,
1Н), 3.17 (м,6Н), 2.91 (т, 2Н, J=7.3 Гц), 2.07 (м, 2Н).
13
С ЯМР (D2O, 125 МГц) δ м.д. 139.09, 129.33, 129.27, 127.11, 70.85, 66.29, 62.62, 58.76, 48.14, 44.24,
21.47. [α]D= +42.6° (с=0.00091 в воде).
ES-MS 302 (М-1).
Получение 3-[(1R,2R,3R,5S)-1,2,6,6-тетраметилбицикло[3.1.1]гепт-3-ил]амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение ЕН)
К раствору (1R,2R,3R,5S)-(-)-изопинокамфеиламина (2.0 г, 13.0 ммоль) в тетрагидрофуране (20 мл)
медленно прибавляют 1,3-пропансультон (1.56 г, 12.5 ммоль). Перемешивают смесь при кипении в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл) и сушат в вакуум-шкафу (50°С), получают соединение ЕН (2.7 г, 80%).
1
Н ЯМР (ДМСО, 500 МГц) δ м.д. 3.32 (м,2Н), 3.09 (д, 2Н), 2.67 (м, 2Н), 2.30 (м, 2Н), 1.96 (м,4Н),
1.75 (м, 2Н), 1.18 (с, 3Н), 1.11 (м,4Н), 0.90 (с, 3Н).
13
С ЯМР (ДМСО, 125 МГц) δ м.д. 55.97, 50.11, 47.55, 45.86, 41.15, 40.91, 38.94, 32.81, 31.61, 27.96,
23.85, 22.59, 21.21, [α]D= -17.2° (с= 0.00083 в воде).
ES-MS 274 (М-1).
Получение 3-(2-метокси-1-метилэтил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение EI)
К раствору 2-амино-1-метоксипропана (5.0 г, 17.8 ммоль) в тетрагидрофуране (25 мл) медленно
прибавляют 1,3-пропансультон (2.12 г, 17 ммоль). Перемешивают смесь при кипении в течение 4 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл) и сушат в вакуум-шкафу (50°С), получают соединение EI (3.1 г, 86%).
1
H ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д. 3.53 (м, 1H), 3.41 (м, 2Н), 3.27 (с, 3Н), 3.11 (м, 2Н), 2.89 (т, 2Н, J=7.3
Гц), 2.00 (м, 2Н). 1.18 (д, 3Н, J=5.9 Гц).
13
С ЯМР (D2O, 125 МГц) δ м.д. 71.73, 58.80, 53.79, 48.08, 43.55, 21.52, 12.79.
ES-MS 210 (М-1).
Получение 3-[(1R)-2-бензил-1-гидроксиэтил]амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение EJ)
К раствору (R)-(+)-2-амино-3-фенил-1-пропанола (1.0 г, 6.6 ммоль) в тетрагидрофуране (10 мл)
медленно прибавляют 1,3-пропансультон (785 мг, 6.3 ммоль). Перемешивают смесь при кипении в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл). Суспендируют в 80% ацетон/EtOH (100 мл). Суспензию перемешивают при
кипячении в течение 30 с. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл) и сушат в вакуумшкафу (50°С), получают соединение EJ (890 мг, 52%).
1
Н ЯМР (ДМСО, 500 МГц) δ м.д. 8.58 (с (уш), 1H), 7.26 (м, 5Н), 5.30 (с (уш), 1H), 3.53 (м, 1Н), 3.31
(м, 2Н), 3.14 (т, 2Н), 2.98 (м, 1H), 2.80 (м, 1Н), 2.62 (т, 2Н), 1.98 (м, 2Н).
13
С ЯМР (ДМСО, 125 МГц) δ м.д. 137.31, 130.00, 129,26, 127.49, 60.16, 57.78, 49.90, 45.34, 33.78,
22.49. [α]D= +9.7° (с=0.00118 в воде).
ES-MS 272 (М-1).
Получение 3-[(1S)-2-бензил-1-гидроксиэтил]амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение EK)
К раствору (S)-(-)-2-амино-3-фенил-1-пропанола (2.0 г, 13.2 ммоль) в тетрагидрофуране (20 мл)
медленно прибавляют 1,3-пропансультон (1.57 г, 12.6 ммоль). Перемешивают смесь при кипении в течение 2 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл). Суспендируют в 80% ацетон/EtOH. Суспензию перемешивают при кипячении
в течение 30 с. Осадок отфильтровывают и сушат в вакуум-шкафу (50°С), получают соединение EK (1.9
г, 56%).
- 120 -
012429
1
Н ЯМР (ДМСО, 500 МГц) δ м.д. 8.63 (с (уш), 1 Н), 7.27 (м, 5Н), 5.31 (с (уш), 1H), 3.53 (м, 1Н), 3.25
(м, 2Н), 3.15 (т, 2Н), 2.98 (м, 1Н), 2.80 (м, 1Н), 2.61 (т, 2Н), 1.99 (м, 2Н).
13
С ЯМР (ДМСО, 125 МГц) δ м.д. 137.31, 130.01, 129,27, 127.49, 60.18, 57.77, 49.88, 45.32, 33.78,
22.49. [α]D= -7.5° (с=0.00118, Н2О).
ES-MS 272 (М-1).
Получение 3-(N-метил-N-трет-бутиламино)-1-пропансульфоновой кислоты (соединение EN)
К раствору N-метил-трет-бутиламина (2.0 г, 22.9 ммоль) в ацетоне (25 мл) медленно прибавляют
1,3-пропансультон (2.72 г, 21.8 ммоль). Перемешивают смесь при кипении в течение 3 ч. Реакционную
смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл).
Сырой продукт суспендируют в 80% ацетон/EtOH. Суспензию перемешивают при кипячении в течение
30 с. Осадок отфильтровывают и сушат в вакуум-шкафу (50°С), получают соединение EN (2.9 г, 65%).
1
Н ЯМР (ДМСО, 500 МГц) δ м.д. 9.40 (с (уш), 1Н), 3.45 (м, 1Н), 2.85 (м, 1Н), 2.59 (м, 5Н), 1.99 (м,
2Н), 1.28 (с, 9Н).
13
С ЯМР (ДМСО, 125 МГц) δ м.д. 63.23, 51.12, 49.73, 34.79, 25.50, 21.72.
ES-MS 208 (М-1).
Получение 3-[(1R,2S)-2-гидроксииндан-1-амино]-1-пропансульфоновой кислоты (соединение ЕО)
К раствору (1R,2S)-1-амино-2-инданола (2.37 г, 15.9 ммоль) в тетрагидрофуране (25 мл) медленно
прибавляют 1,3-пропансультон (1.89 г, 15.1 ммоль). Перемешивают смесь при кипении в течение 2 ч.
Реакционную смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл). Сырой продукт суспендируют в 80% ацетон/этанол (75 мл). Суспензию перемешивают
при кипячении в течение 30 с. Осадок отфильтровывают и сушат в вакуум-шкафу (50°С), получают соединение ЕО (2.7 г, 65%).
1
Н ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д. 7.36 (д, 1H, J=7.4 Гц), 7.24 (м, 3Н), 4.70 (кв, 1Н, J=5.5 Гц ), 4.53 (д,
1Н, J=5.4 Гц), 3.23 (т, 2Н, J=7.8 Гц), 3.10 (м, 1H), 2.89 (м, 3Н), (м, 1Н), 2.08 (м, 2Н).
13
С ЯМР (D2O, 125 МГц) δ м.д. 141.60, 134.30, 130.53, 127.61, 126.10, 125.69, 70.42, 64.08, 48.25,
44.73, 38.33, 21.50. [α]D= +3.0° (с= 0.0018, вода).
ES-MS 272 (М+1).
Получение 3-[(1S)-1-(гидроксиметил)-2-метилпропил]амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение ЕР)
К раствору (S)-(-)-2-амино-3-метил-1-бутанола (2.50 г, 24.2 ммоль) в тетрагидрофуране (35 мл) медленно прибавляют 1,3-пропансультон (2.89 г, 23.0 ммоль).
Перемешивают смесь при кипении в течение 3 ч. Реакционную смесь охлаждают до комнатной
температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл). Сырой продукт суспендируют
в 80% ацетон/этанол (75 мл). Суспензию перемешивают при кипячении в течение 30 с. Осадок отфильтровывают и сушат в вакуум-шкафу (50°С), получают соединение ЕР (2.9 г, 56%).
1
Н ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д. 3.78 (дд, 1H), 3.62 (дд, 1H), 3.13 (м, 2Н), 2.90 (м, 1H), 2.88 (т, 3Н),
1.90 (м, 3Н), 0.90 (д, 3Н), 0.84 (д, 3Н).
13
С ЯМР (D2O, 125 МГц) δ м.д. 64.74, 57.24, 48.20, 44.44.26.98, 21.49, 18.53, 17.00. [α]D= + 4.1°
(с=0.0017, в воде).
ES-MS 224 (М-1).
Получение 3-[(1S)-1-карбамоил-2-метилпропил]амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение
EQ)
К гидрохлориду L-валинамида (2.50 г, 16.4 ммоль) прибавляют насыщенный раствор K2CO3 (75 мл).
Смесь экстрагируют EtOAc (3×75 мл). Объединенные органические вытяжки сушат Na2SO4. Раствор
- 121 -
012429
фильтруют и фильтрат упаривают в вакууме досуха и сушат в вакууме.
К раствору L-валинамида (1.57 г, 13.5 ммоль) в тетрагидрофуране (20 мл) медленно прибавляют
1,3-пропансультон (1.61 г. 12.9 ммоль). Перемешивают смесь при кипении в течение 2 ч. Реакционную
смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (2×25 мл).
Сырой продукт растворяют в воде (60 мл) и прибавляют ионообменную смолу Dowex Marathon С (сильная кислота, 15 г). Смесь перемешивают в течение 15 мин. Смолу отфильтровывают. Фильтрат выливают
в EtOH (250 мл). По окончании осаждения осадок отфильтровывают и сушат в вакууме, получают соединение EQ (1.6 г, 51%).
1
Н ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д. 3.63 (д, 1Н), 3.05 (м, 2Н), 2.85 (м, 2Н), 2.05 (м, 4Н), 0.93 (д, 3Н), 0.88
(д, 3Н).
13
С ЯМР (D2O, 125 МГц) δ 170.24, 65.92, 48.16, 46.31, 29.59, 21.31, 18.02, 17.07. [α]D= + 10.5° (с=
0.0027, в воде).
ES-MS 237 (М-1).
Получение 3-изобутиламино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение СЕ)
Изобутиламин (2.4 мл, 24 ммоль) прибавляют к раствору 1,3-пропансультона (3.04 г, 24.5 ммоль) в
2-бутаноне (20 мл). Смесь кипятят 10 мин, к этому времени смесь превращается в сгусток. Охлаждают до
комнатной температуры. Добавляют ацетон и сгусток (комок) разрушается. Осадок отфильтровывают и
сушат в вакууме (2.2 г). Белый осадок суспендируют в этаноле (10 мл) и смесь доводят до кипения. Значительное количество осадка растворяется. Медленно прибавляют воду до тех пор, пока не образуется
прозрачный розовый раствор. Раствор оставляют на ночь при комнатной температуре. Колбу ставят в
холодильник на 2 ч. Осадок отфильтровывают, промывают этанолом (5 мл), эфиром (10 мл) и сушат в
вакууме. Получают соединение СЕ в виде длинных тонких игл белого цвета (выход 1.87 г, 40%).
Т. пл. 255-257°С.
1
Н ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д. 0.88 (д, J=6.8 Гц, 6Н), 1.85-1.93 (м, J=6.8 Гц, 1Н), 2.03 (кв.т., J=7.6 Гц,
2Н), 2.80 (д, J=7.3 Гц, 2Н), 2.90 (т, J=7.3 Гц, 2Н), 3.08 (т, J=8.1 Гц, 2Н).
13
С ЯМР (D2O, 125 МГц) δ 19.2, 21.2, 25.8, 46.9, 48.1, 54.9.
ES-MS 196 (М+1).
Фурье-ИК (KBr) vmax 3566, 2973, 2021, 1719.
Получение 3-изоамиламино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение СН)
Изоамиламин (4 мл, 34.5 ммоль) прибавляют к раствору 1,3-пропансультона (4.7 г, 38 ммоль) в 2бутаноне (70 мл). Смесь доводят до кипения. Через 30 мин смесь становится слишком вязкой, ее трудно
перемешивать. Добавляют ацетон (15 мл). Кипячение продолжают еще в течение 4 ч. Суспензию охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (10 мл), затем эфиром
(10 мл). Получают соединение СН в виде легкого объемного белого твердого вещества (выход 4.48 г,
62%).
Т. пл. 220°С (разл.).
1
Н ЯМР (D2O, 500 МГц) δ м.д. 0.65 (д, J=6.3 Гц, 6Н), 1.29 (кв, J=7.7 Гц, 2Н), 1.35-1.42 (м, J=6.6 Гц,
1Н), 1.86 (кв.т., J=7.6 Гц, 2Н), 2.74 (т, J=7.3 Гц, 2Н), 2.81 (т, J=8.1 Гц, 2Н), 2.93 (т, J=7.8 Гц, 2Н).
13
С ЯМР (D2O, 125 МГц) δ 21.3, 21.4, 25.2, 34.2, 46.1, 46.2, 47.9.
Получение 2-(трет-бутил)амино-1-этансульфоновой кислоты (соединение DU)
Раствор натриевой соли 2-бромэтансульфоновой кислоты (4.2 г, 20 ммоль) в воде (всего 12 мл) в
течение 6 ч прибавляют к нагретому до 42°С раствору бутиламина (10 мл, 94 ммоль) в смеси воды (10
мл) и 1,4-диоксана (10 мл). Смесь перемешивают при 42°С в течение 18 ч. Затем смесь нагревают при
60°С в течение 24 ч. В спектре ЯМР наблюдается 30% продукта элиминирования (винилсульфоновой
кислоты). Смесь упаривают досуха и обрабатывают этанолом при температуре кипения. Собирают первую порцию вещества (твердый осадок). Маточный раствор упаривают досуха и твердый остаток снова
обрабатывают этанолом при температуре кипения, собирают вторую порцию твердого вещества. Обе
порции твердого вещества растворяют в воде и полученный водный раствор пропускают последовательно через ионообменную колонку Dowex 50 WX 8 (100 г смолы). Объединяют фракции, содержащие титульное соединение, и упаривают досуха. Полученный твердый остаток перекристаллизовывают из смеси этанола (20 мл) и воды (2 мл). Кристаллы отфильтровывают, сушат в вакуум-шкафу (60°С) в течение
18 ч. Соединение DU получают в виде белых тонких игл (выход 860 мг, 24%).
1
Н ЯМР (500 МГц, D2O) δ м.д. 1.16 (с, 9Н), 3.02 (т, J=6.8 Гц, 2Н), 3.19 (т, J=6.8 Гц; 2Н).
- 122 -
012429
13
С ЯМР(125МГц, D2О) δ 24.8, 37.3, 47.0, 57.8.
ES-MS 182 (М+1).
Получение 2-(циклогексанметил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение DV)
Смесь циклогексанметиламина (11.12 мл, 0.085 моля) и 1,3-пропансультона (11.00 г, 0.090 моля) в
ацетонитриле (120 мл) кипятят в течение 2 ч. Охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, сушат на воздухе в течение 20 мин (19 г). Суспендируют в метаноле (100 мл) и суспензию нагревают до кипения. По каплям при кипении прибавляют воду (4 мл) до тех пор, пока не образуется прозрачный раствор. Затем при перемешивании смесь охлаждают до 5°С. Осадок отсасывают, сушат на воздухе в течение 45 мин и дополнительно сушат в вакуум-шкафу (60°С) в течение 3 дней. Соединение DV
получают в виде белых хлопьев (выход 16.23 г, 81%).
1
Н ЯМР (500 МГц, D2O) δ м.д. 0.82 (уш. кв, J=11 Гц, 2Н), 0.91-1.09 (м, 3Н), 1.43-1.53(м, 6Н), 1.93
(кв.т., J=7.3 Гц, 2Н), 2.71 (д, J=6.3 Гц, 2Н), 2.80 (т, J=7.3 Гц, 2Н), 2.71 (т, J=7.8 Гц, 2Н).
13
С ЯМР (125 МГц, D2O) δ 21.2, 25.0, 25.5, 29.9, 34.7, 46.8, 48.1, 53.7.
ES-MS 236 (М+1).
Получение 3-(1,1-диэтилпропаргил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение DW)
Смесь 1,1-диэтилпропаргиламина (5 г, 45 ммоль) и 1,3-пропансультона (6.05 г, 49.5 ммоль) в ТГФ
(25 мл) кипятят в течение 5 ч. Охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают диизопропиловым эфиром (2×10 мл), затем сушат в вакуум-шкафу (7.16 г). Суспендируют в этаноле (30 мл) и суспензию кипятят 1 ч. Затем смесь охлаждают до комнатной температуры и осадок отсасывают, сушат на воздухе в течение 5 мин и дополнительно сушат в вакуум-шкафу при 60°С в течение ночи
(5.86 г). Вещество содержит значительное количество этанола. Его дополнительно сушат в вакуумшкафу в течение 40 ч. Соединение DW получают в виде мелкодисперсного белого твердого вещества
(выход 5.66 г, 81%).
1
Н ЯМР (500 МГц, D2O) δ 0.92 (т, J=7.6 Гц, 2Н), 1.71 (кв, J=7.3 Гц, 3Н), 1.93 (кв.т., J=7.3 Гц, 2Н),
2.81 (т, J=7.3 Гц, 2Н), 2.94 (с, 1H), 3.13 (т, J=7.6 Гц, 2Н).
13
С ЯМР (125 МГц, D2O) δ 7.2, 21.6, 27.8, 41.4, 48.1, 62.2, 78.6, 78.9.
ES-MS 234 (М+1)
Получение 3-(1-этинилциклогексил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение DX)
Смесь 1-этинилциклогексиламина (6 г, 48.7 ммоль) и 1,3-пропансультона (6.55 г, 53.6 ммоль) в ТГФ
(35 мл) кипятят в течение 2 ч (вязкая масса). Охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ТГФ (3×5 мл), сушат на воздухе 15 мин (7.3 г). Суспендируют в этаноле (30 мл) и
суспензию кипятят 1 ч. Затем смесь охлаждают до комнатной температуры, осадок отсасывают, промывают этанолом (2×5 мл), сушат на воздухе 10 мин, далее в вакуум-шкафу при 60°С в течение ночи (партия 1, 7.10 г). Объединенные маточные растворы перемешивают в течение ночи при комнатной температуре. Образуется большое количество осадка. Осадок отфильтровывают, промывают ацетоном (3×5 мл),
сушат на воздухе в течение 30 мин, а затем суспендируют в этаноле (12 мл). Суспензию кипятят 1 ч. Затем смесь охлаждают до комнатной температуры, осадок отсасывают, промывают этанолом (2×5 мл),
сушат на воздухе 2 мин, далее в вакуум-шкафу при 60°С в течение ночи (партия 2, 1.85 г). Соединение
DX получают в виде мелкодисперсного белого вещества (всего в двух партиях 8.95 г, выход 75%).
1
Н ЯМР (500 МГц, D2O) δ 0.95-1.05 (м, 1Н), 1.38-1.54 (м, 5Н), 1.60-1.64 (м, 2Н), 1.94 (кв.т., J=7.8 Гц,
2Н), 2.85 (т, J=7.3 Гц, 2Н), 3.01 (с, 1Н), 3.22 (т, J=7.8 Гц, 2Н).
13
С ЯМР (125 МГц, D2O) δ 21.8, 22.3, 24.2, 34.4, 40.9, 48.0, 59.2, 78.6, 79.3.
ES-MS 243.0 (М-1).
Получение 3-(2-гидрокси-2-фенил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение DY)
Смесь (±)-2-амино-1-фенилэтанола (9.9 г, 72 ммоль) и 1,3-пропансультона (9.3 г, 76 ммоль) в ацето- 123 -
012429
нитриле (70 мл) и этаноле (2 мл) кипятят в течение 1.5 ч (вязкая масса). Охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетонитрилом (2×25 мл), сушат на воздухе 20 мин (21.3
г). Суспендируют в метаноле (110 мл) и суспензию кипятят. Прибавляют по каплям воду (4 мл) до появления прозрачного раствора. Затем смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отсасывают,
сушат на воздухе 30 мин, далее в вакуум-шкафу при 60°С в течение 40 ч (партия 1, 4.47 г). Объединенные маточные растворы оставляют на 40 ч при -20°С. Отфильтровывают вторую порцию твердого вещества, промывают ацетоном (2×15 мл), сушат на воздухе (1 ч), далее в вакуум-шкафу при 60°С в течение
24 ч. Соединение DY получают в виде двух порций (всего 7.82 г, выход 42%).
1
Н ЯМР (500 МГц. D2O) δ, 2.03-2.06 (м, 2Н), 2.90 (т, J=7.3 Гц, 2Н), 3.16 (т, J=7.3 Гц, 2Н), 3.20-3.24
(м, 2Н), 4.92-4.95 (м, 1H), 7.30-7.37 (м, 5Н).
13
С ЯМР (125 МГц, D2O) δ 21.3, 46.6, 78.1, 53.2, 69.0, 126.1, 129.0, 129.2, 139.6.
ES-MS 260 (M+1).
Получение 3-[(S)-1-(4-метоксифенил)этил]амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение DZ)
Смесь (S)-(-)-(4-метоксифенил)этиламина (1.83 г, 12.1 ммоль) и 1,3-пропансультона (1.6 г, 13
ммоль) в ацетонитриле (25 мл) кипятят в течение 2.5 ч.
Смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетонитрилом (2×5 мл), сушат на воздухе 15 мин (3.07 г). Суспендируют в метаноле (15 мл) и суспензию кипятят в
течение 1 ч. Затем смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отсасывают, промывают этанолом (2×10 мл), сушат на воздухе 15 мин, далее в вакуум-шкафу при 60°С в течение 18 ч. Соединение DZ
получают в виде твердого вещества белого цвета (2.95 г, 10.8 ммоль, выход 89%).
1
Н ЯМР (500 МГц, D2O) δ 1.52 (д, J=6.8 Гц, 3Н), 1.88-1.98 (м, 2Н), 2.76-2.79 (м, 3Н), 2.80-2.98 (м,
1H), 3.71 (с, 3Н), 4.25 (кв.т., J=6.7 Гц, 2Н), 6.93 (д, J=8.3 Гц, 2Н), 7.29 (д, J=8.3 Гц, 2Н).
13
С ЯМР (125 МГц, D2O) δ 18.3, 21.5, 44.2, 48.1, 55.6, 58.0, 114.9, 128.2, 129.4, 159.9.
ES-MS 274. (М+1). [α]D= -28.8° (с= 0.0038, в воде).
Получение 3-(4-бромфенетил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение ЕА)
Смесь 4-бромфенетиламина (4 г, 20 ммоль) и 1,3-пропансультона (2.56 г, 21 ммоль) в ацетонитриле
(30 мл) кипятят в течение 2.5 ч. Охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетонитрилом (2×5 мл), сушат на воздухе 15 мин (9.57 г) и дополнительно сушат 15 мин в вакууме (8.02 г). Суспендируют в этаноле (40 мл) и суспензию кипятят 1 ч. Затем смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отсасывают, промывают этанолом (2×5 мл), сушат на воздухе 15 мин, далее
в вакуум-шкафу при 60°С в течение 18 ч. Соединение ЕА получают в виде твердого вещества белого
цвета (6.04 г, 18.8 ммоль, выход 94%).
1
Н ЯМР (500 МГц, ДМСО) δ, 1.95 (т, J=6.3 Гц, 3Н), 2.63 (т, J=6.1 Гц, 2Н), 2.88 (т, J=7.6 Гц, 2Н), 3.09
(т, J=6.3 Гц, 2Н), 3.15 (т, J=7.8 Гц, 2Н), 7.25 (2, J=7.8 Гц, 2Н), 7.53 (2, J=7.8 Гц, 2Н), 8.63 (уш.с, 2Н).
13
С ЯМР (125 МГц, ДМСО) δ 21.8, 31.0, 46.7, 47.2, 48.8, 119.9, 131.0, 131.4, 136.5.
ES-MS 324 (М+1).
Получение 3-[(S)-1-инданамино]-1-пропансульфоновой кислоты (соединение ЕВ)
Смесь (S)-(-)-1-аминоиндана (0.92 г, 6.9 ммоль) и 1,3-пропансультона (0.93 г, 7.6 ммоль) в ацетонитриле (15 мл) кипятят в течение 2.5 ч. Охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетонитрилом (2×4 мл), сушат на воздухе 15 мин. Суспендируют в этаноле (12 мл) и
суспензию кипятят 1 ч. Затем смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отсасывают, промывают этанолом (2×4 мл), сушат на воздухе 15 мин, далее в вакуум-шкафу при 60°С в течение субботывоскресенья (уик-энд). Соединение ЕВ получают в виде твердого вещества светло-розового цвета (1.54 г,
выход 87%).
1
Н ЯМР (500 МГц, D2O) δ 2.00 (кв.т, J=7.3 Гц, 2Н), 2.09-2.13 (м, 1Н), 2.40-2.45 (м, 1Н), 2.84-2.87 (м,
3Н), 2.98-3.04 (м, 1Н), 3.12 (т, J=7.8 Гц, 2Н), 4.67-4.70 (м, 1H), 7.22 (м, 2Н), 7.29-7.32 (м, 2Н), 7.40 (д, J=7.8
Гц, 1H).
13
С ЯМР (125 МГц, D2O) δ 21.6, 28.6, 29.8, 43.9, 48.1, 63.0, 1255, 125.7, 127.2, 130.3, 136.3, 145.4.
ES-MS 256 (М+1). [α]D=-1.0° (с= 0.003095 в воде).
- 124 -
012429
Получение 3-циклобутиламино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение ЕС)
Смесь циклобутиламина (1.11 г, 15.6 ммоль) и 1,3-пропансультона (2 г, 17 ммоль) в ацетонитриле
(18 мл) нагревают при кипении. Через 15 мин смесь образует сгусток (комок). Прибавляют ТГФ (10 мл).
Кипячение продолжают еще в течение 1 ч. Смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок отфильтровывают, промывают ацетонитрилом (2×4 мл), сушат на воздухе 60 мин (2.41 г). Суспендируют в
метаноле (20 мл) и суспензию кипятят до полного растворения осадка. Затем смесь охлаждают до комнатной температуры. Осадок, выпадающий при этом, отсасывают, промывают метанолом (2×4 мл), сушат на воздухе 20 мин, далее в вакуум-шкафу при 40°С в течение 18 ч (партия 1, 4.47 г). Соединение ЕС
получают в виде твердого вещества белого цвета (1.81 г, выход 60%).
1
Н ЯМР (500 МГц, D2O) δ 1.70-1.77 (м, 2Н), 1.94-2.03 (м, 4Н), 2.18 (уш.с, 2Н), 2.85 (т, J=6.8 Гц, 1Н),
2.95 (т, J=7.3 Гц, 1H), 3.63-3.66 (м, 1Н).
13
С ЯМР (125 МГц, D2O) δ 14.5, 21.5, 26.1, 43.6, 48.0, 51.8.
ES-MS 194 (М+1).
Получение 3-(4-мексилетино)-1-пропансульфоновой кислоты (соединение EV)
Гидрохлорид мексилетина (2.45 г, 11.3 ммоль) превращают в свободный амин, добавляя 1N NaOH
(50 мл), экстрагируют этилацетатом (2×50 мл). Объединенные вытяжки сушат сульфатом натрия. Растворитель упаривают. К свободному амину прибавляют раствор 1,3-пропансультона (1.46 г, 11.9 ммоль)
в ТГФ (35 мл). Смесь кипятят 4 ч. Охлаждают до комнатной температуры; осадок отфильтровывают,
промывают ТГФ (5 мл). Осадок сушат в течение ночи при 40°С. Фильтрат сушат в течение ночи, получают твердое вещество коричневатого цвета (1.45 г), менее чистое, чем отфильтрованная первая порция.
Соединение EV получают в виде твердого вещества белого цвета (1.19 г, выход 56% (99% сырой)).
1
Н ЯМР (500 МГц, ДМСО) δ, 1.39 (д, J=6.3 Гц, 3Н), 2.02 (т, J=5.9 Гц, 2Н), 2.26 (с, 6Н), 2.67 (т, J=5.9
Гц, 2Н). 3.21 (уш.д, J=19.5 Гц, 2Н), 3.61 (уш.с, 1H), 3.83-3.91 (м, 2Н), 6.95 (т, J=7.3 Гц, 1Н), 7.04 (м, 2Н),
8.91 (уш.с, 2Н).
13
С ЯМР (125 МГц, ДМСО) δ 13.3, 16.0, 21.8, 44.6, 49.2, 52.9, 70.8, 124.3, 128.9, 130.4, 154.2.
ES-MS 302 (М+1).
Получение 3-(1-бензил-2-метоксиэтил)амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение EW)
Гидрохлорид S-(+)-2-амино-1-метокси-3-фенилпропана (2.06 г, 10.0 ммоль) превращают в свободный амин, добавляя насыщенный раствор карбоната калия (20 мл). Водную смесь экстрагируют этилацетатом (3×15 мл) и объединенные вытяжки сушат сульфатом натрия. Растворитель упаривают. К свободному амину прибавляют раствор 1,3-пропансультона (1.29 г, 10.5 ммоль) в ТГФ (15 мл). Смесь кипятят
4 ч. Охлаждают до комнатной температуры и перемешивают 1 ч. Осадок отфильтровывают, промывают
ацетоном (5 мл). Осадок сушат в течение ночи при 40°С. Соединение EW получают в виде твердого вещества белого цвета (2.48 г, выход 83%).
1
Н ЯМР (500 МГц, ДМСО) δ 1.99 (м, 2Н), 2.65 (т, J=6.1 Гц, 2Н), 2.80 (т, J=12.0 Гц, 1Н), 3.05 (м, 2Н),
3.17 (м, 3Н), 3.22 (дд, J=3.4 Гц, 10.7 Гц, 2Н), 3.33 (м, 1H), 3.43 (д, J=10.7 Гц, 2Н), 3.50 (м, 1Н), 7.27 (м,
3Н), 7.35 (т, J=7.1 Гц, 2Н), 8.86 (уш.д, 1H).
13
С ЯМР (125 МГц, ДМСО) δ 21.8, 33.4, 45.0, 49.2, 57.8, 58.5, 68.1, 126.9, 128.7, 129.2, 136.3.
ES-MS 310 (М+1). [α]D= -0.8° (с= 0.0025 в воде).
Получение 3-[1-(N-гидроксикарбамоил)-2-фенилэтил]амино-1-пропансульфоновой кислоты (соединение FO)
К раствору этилового эфира L-N-(3-сульфопропил)фенилаланина (1.00 г, 3.17 ммоль в воде
(5 мл)) прибавляют 50% раствор гидроксиламина в воде (вес./вес., 7 мл). Смесь перемешивают при комнатной температуре в течение 24 ч. Смесь упаривают досуха. Твердый остаток растворяют в смеси горя- 125 -
012429
чего метанола (10 мл) и воды; смесь оставляют на 3 дня при 5°С. Образуется лишь небольшое количество осадка. После прибавления ацетона (3 мл) выпадает большое количество осадка. Осадок отфильтровывают в вакууме, промывают ацетоном (2×5 мл) и сушат в вакуум-шкафу при 40°С в течение ночи. Соединение FJ получают в виде твердого вещества белого цвета (700 мг, 73%).
1
Н ЯМР (500 МГц, D2O) δ 2.03-2.07 (м, 2Н), 2.88-2.90 (м, 2Н), 2.99-3.03 (м, 1H), 3.07-3.12 (м, 1H),
3.18-3.23 (м, 1Н), 3.82-3.85 (м, 1H), 7.15 (д, J=6.8 Гц, 2Н), 7.26-7.31 (м, 3Н).
13
С ЯМР (125 МГц, D2O) δ 19.3, 33.8, 43.2, 45.8, 57.9, 126.0, 127.1, 127.3, 131.4, 162.2.
ES-MS 303 (M+Na). [α]D=40° (c=0.001983 в воде).
ФОРМУЛА ИЗОБРЕТЕНИЯ
1. Применение соединения формулы (I)
где R1 обозначает замещенный или незамещенный 3-10-членный, содержащий от 1 до 4 гетероатомов,
выбранных из N, О и S, гетероциклил, 6-10-членный арил, 8-15-членный арилциклоалкил или замещенную или незамещенную C2-C10-алкильную группу; причем замещенный или незамещенный гетероциклил, арил или арилциклоалкил содержат от 1 до 3 отдельных или конденсированных колец;
R2 обозначает водород или C1-C10-алкил;
Y обозначает SO3H;
L1 обозначает замещенную или незамещенную C1-C5-алкильную группу или отсутствует;
L2 обозначает замещенную или незамещенную C2-C5-алкильную группу,
при условии, что, когда R1 обозначает алкил, L1 отсутствует; при условии, что, когда R2 обозначает
водород, L1 обозначает метилен, L2 обозначает -(СН2)3- и Y обозначает SO3-Х+; R1 не обозначает фенил,
1,3-бензодиоксол-5-ил или 3,4-диметоксифенил, и при условии, что, когда R2 обозначает водород, L2 обозначает -(СН2)3; L1 отсутствует и Y обозначает SO3-X+, R1 не обозначает н-пентил, н-гексил, н-гептил, ноктил, н-нонил, н-децил, циклогексил, 1-гидрокси-2-пропил, 1-гидрокси-2-бутил, 2-гидрокси-1-пропил,
1-гидрокси-4-пентил, 1-гидрокси-5-гексил, 2-гидрокси-1-этил, 3-гидрокси-1-пропил, 4-гидрокси-1-бутил,
5-гидрокси-1-пентил, 6-гидрокси-1-гексил, 3,5-диметил-1-адамантил, 1-гидроксиметил-1-циклопентил, 2(2-деокси-D-глюкозу), фенил, 4-гидроксифенил или 4-пиридил, 1-гидрокси-2-пентил, 3-метилмасляную
кислоту, метиловый эфир 4-метилпентановой кислоты или 2,2-дифенилэтил,
или его фармацевтически приемлемой соли, сложного эфира или пролекарства для лечения или предупреждения связанного с амилоидом заболевания или состояния.
2. Применение по п.1, отличающееся тем, что заболевание или состояние характеризуется отложением β-амилоида.
3. Применение соединения формулы (I)
где R1 обозначает замещенный или незамещенный 3-10-членный, содержащий от 1 до 4 гетероатомов,
выбранных из N, О и S, гетероциклил, 6-10-членный арил, 8-15-членный арилциклоалкил или замещенную или незамещенную C2-C10-алкильную группу; причем замещенный или незамещенный гетероциклил, арил или арилциклоалкил содержат от 1 до 3 отдельных или конденсированных колец;
R2 обозначает водород или C1-C10-алкил;
Y обозначает SO3H;
L1 обозначает замещенную или незамещенную C1-C5-алкильную группу или отсутствует;
L2 обозначает замещенную или незамещенную C2-C5-алкильную группу,
при условии, что, когда R1 обозначает алкил, L1 отсутствует; при условии, что, когда R2 обозначает
водород, L1 обозначает метилен, L2 обозначает -(СН2)3- и Y обозначает SO3-Х+; R1 не обозначает фенил,
1,3-бензодиоксол-5-ил или 3,4-диметоксифенил, и при условии, что, когда R2 обозначает водород, L2 обозначает -(СН2)3-, L1 отсутствует и Y обозначает SO3-X+, R1 не обозначает н-пентил, н-гексил, н-гептил, ноктил, н-нонил, н-децил, циклогексил, 1-гидрокси-2-пропил, 1-гидрокси-2-бутил, 2-гидрокси-1-пропил,
1-гидрокси-4-пентил, 1-гидрокси-5-гексил, 2-гидрокси-1-этил, 3-гидрокси-1-пропил, 4-гидрокси-1-бутил,
5-гидрокси-1-пентил, 6-гидрокси-1-гексил, 3,5-диметил-1-адамантил, 1-гидроксиметил-1-циклопентил, 2(2-деокси-D-глюкозу), фенил, 4-гидроксифенил или 4-пиридил, 1-гидрокси-2-пентил, 3-метилмасляную
кислоту, метиловый эфир 4-метилпентановой кислоты или 2,2-дифенилэтил,
или его фармацевтически приемлемой соли, сложного эфира или пролекарства для лечения или предупреждения отложения амилоида.
- 126 -
012429
4. Применение соединения формулы (I)
где R1 обозначает замещенный или незамещенный 3-10-членный, содержащий от 1 до 4 гетероатомов,
выбранных из N, О и S, гетероциклил, 6-10-членный арил, 8-15-членный арилциклоалкил или замещенную или незамещенную C2-C10-алкильную группу; причем замещенный или незамещенный гетероциклил, арил или арилциклоалкил содержат от 1 до 3 отдельных или конденсированных колец;
R2 обозначает водород или C1-C10-алкил;
Y обозначает SO3H;
L1 обозначает замещенную или незамещенную C1-C5-алкильную группу или отсутствует;
L2 обозначает замещенную или незамещенную C2-C5-алкильную группу,
при условии, что, когда R1 обозначает алкил, L1 отсутствует; при условии, что, когда R2 обозначает
водород, L1 обозначает метилен, L2 обозначает -(СН2)3- и Y обозначает SO3-Х+; R1 не обозначает фенил,
1,3-бензодиоксол-5-ил или 3,4-диметоксифенил, и при условии, что, когда R2 обозначает водород, L2 обозначает -(СН2)3-, L1 отсутствует и Y обозначает SO3-X+, R1 не обозначает н-пентил, н-гексил, н-гептил, ноктил, н-нонил, н-децил, циклогексил, 1-гидрокси-2-пропил, 1-гидрокси-2-бутил, 2-гидрокси-1-пропил,
1-гидрокси-4-пентил, 1-гидрокси-5-гексил, 2-гидрокси-1-этил, 3-гидрокси-1-пропил, 4-гидрокси-1-бутил,
5-гидрокси-1-пентил, 6-гидрокси-1-гексил, 3,5-диметил-1-адамантил, 1-гидроксиметил-1-циклопентил, 2(2-деокси-D-глюкозу), фенил, 4-гидроксифенил или 4-пиридил, 1-гидрокси-2-пентил, 3-метилмасляную
кислоту, метиловый эфир 4-метилпентановой кислоты или 2,2-дифенилэтил,
или его фармацевтически приемлемой соли, сложного эфира или пролекарства для лечения или предупреждения заболевания, выбранного из группы, включающей болезнь Альцгеймера, церебральную амилоидную ангиопатию, миозит телец включений, дегенерацию желтого пятна, MCI или синдром Дауна.
5. Применение по п.4, отличающееся тем, что заболевание представляет собой болезнь Альцгеймера.
6. Применение соединения формулы (I)
где R1 обозначает замещенный или незамещенный 3-10-членный, содержащий от 1 до 4 гетероатомов,
выбранных из N, О и S, гетероциклил, 6-10-членный арил, 8-15-членный арилциклоалкил или замещенную или незамещенную C2-C10-алкильную группу; причем замещенный или незамещенный гетероциклил, арил или арилциклоалкил содержат от 1 до 3 отдельных или конденсированных колец;
R2 обозначает водород или C1-C10-алкил;
Y обозначает SO3H;
L1 обозначает замещенную или незамещенную C1-C5-алкильную группу или отсутствует;
L2 обозначает замещенную или незамещенную C2-C5-алкильную группу,
при условии, что, когда R1 обозначает алкил, L1 отсутствует; при условии, что, когда R2 обозначает
водород, L1 обозначает метилен, L2 обозначает -(СН2)3- и Y обозначает SO3-Х+; R1 не обозначает фенил,
1,3-бензодиоксол-5-ил или 3,4-диметоксифенил, и при условии, что, когда R2 обозначает водород, L2 обозначает -(СН2)3-, L1 отсутствует и Y обозначает SO3-X+, R1 не обозначает н-пентил, н-гексил, н-гептил, ноктил, н-нонил, н-децил, циклогексил, 1-гидрокси-2-пропил, 1-гидрокси-2-бутил, 2-гидрокси-1-пропил,
1-гидрокси-4-пентил, 1-гидрокси-5-гексил, 2-гидрокси-1-этил, 3-гидрокси-1-пропил, 4-гидрокси-1-бутил,
5-гидрокси-1-пентил, 6-гидрокси-1-гексил, 3,5-диметил-1-адамантил, 1-гидроксиметил-1-циклопентил, 2(2-деокси-D-глюкозу), фенил, 4-гидроксифенил или 4-пиридил, 1-гидрокси-2-пентил, 3-метилмасляную
кислоту, метиловый эфир 4-метилпентановой кислоты или 2,2-дифенилэтил,
или его фармацевтически приемлемой соли, сложного эфира или пролекарства для изготовления лекарственного средства для лечения или предупреждения связанных с амилоидом заболеваний и состояний.
7. Применение по п.6, отличающееся тем, что заболевание или состояние характеризуется отложением β-амилоида.
8. Применение соединения формулы (I)
где R1 обозначает замещенный или незамещенный 3-10-членный, содержащий от 1 до 4 гетероатомов,
выбранных из N, О и S, гетероциклил, 6-10-членный арил, 8-15-членный арилциклоалкил или замещен- 127 -
012429
ную или незамещенную C2-C10-алкильную группу; причем замещенный или незамещенный гетероциклил, арил или арилциклоалкил содержат от 1 до 3 отдельных или конденсированных колец;
R2 обозначает водород или C1-C10-алкил;
Y обозначает SO3H;
L1 обозначает замещенную или незамещенную C1-C5-алкильную группу или отсутствует;
L2 обозначает замещенную или незамещенную C2-C5-алкильную группу,
при условии, что, когда R1 обозначает алкил, L1 отсутствует; при условии, что, когда R2 обозначает
водород, L1 обозначает метилен, L2 обозначает -(СН2)3- и Y обозначает SO3-Х+; R1 не обозначает фенил,
1,3-бензодиоксол-5-ил или 3,4-диметоксифенил, и при условии, что, когда R2 обозначает водород, L2 обозначает -(СН2)3-, L1 отсутствует и Y обозначает SO3-X+, R1 не обозначает н-пентил, н-гексил, н-гептил, ноктил, н-нонил, н-децил, циклогексил, 1-гидрокси-2-пропил, 1-гидрокси-2-бутил, 2-гидрокси-1-пропил,
1-гидрокси-4-пентил, 1-гидрокси-5-гексил, 2-гидрокси-1-этил, 3-гидрокси-1-пропил, 4-гидрокси-1-бутил,
5-гидрокси-1-пентил, 6-гидрокси-1-гексил, 3,5-диметил-1-адамантил, 1-гидроксиметил-1-циклопентил, 2(2-деокси-D-глюкозу), фенил, 4-гидроксифенил или 4-пиридил, 1-гидрокси-2-пентил, 3-метилмасляную
кислоту, метиловый эфир 4-метилпентановой кислоты или 2,2-дифенилэтил,
или его фармацевтически приемлемой соли, сложного эфира или пролекарства для изготовления лекарственного средства для лечения или предупреждения заболевания, выбранного из группы, включающей
болезнь Альцгеймера, церебральную амилоидную ангиопатию, миозит телец включений, дегенерацию
желтого пятна, MCI или синдром Дауна.
9. Применение по п.8, отличающееся тем, что заболевание представляет собой болезнь Альцгеймера.
10. Применение по пп.1-9, отличающееся тем, что R1 обозначает водород.
11. Применение по п.1, отличающееся тем, что R1 обозначает линейный C2-C10-алкил.
12. Применение по п.11, отличающееся тем, что R1 обозначает этил, н-пентил, н-гептил, н-октил
или н-нонил.
13. Применение по пп.1-9, отличающееся тем, что R1 обозначает трет-бутил.
14. Применение по п.13, отличающееся тем, что соединение представляет собой 3-(третбутил)амино-1-пропансульфоновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль, сложный эфир
или пролекарство.
15. Применение по пп.1-9, отличающееся тем, что R1 обозначает C4-C10-циклоалкил.
16. Применение по п.15, отличающееся тем, что R1 обозначает циклоалкил, содержащий 2 или 3
конденсированных кольца.
17. Применение по п.16, отличающееся тем, что R1 обозначает C7-C10-циклоалкил, содержащий 2
конденсированных кольца.
18. Применение по п.16, отличающееся тем, что R1 обозначает циклоалкил, содержащий 2 конденсированных кольца.
19. Применение по п.17, отличающееся тем, что R1 обозначает трицикло[3.3.1.03,7]децил или адамантил.
20. Применение по п.19, отличающееся тем, что R1 обозначает бицикло[2.1.2]гептил.
21. Применение по п.19, отличающееся тем, что соединение представляет собой 3-(1адамантил)амино-1-пропансульфоновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль, сложный
эфир или пролекарство.
22. Применение по любому из пп.1-21, отличающееся тем, что L2 обозначает (СН2)3.
23. Применение по любому из пп.1-22, отличающееся тем, что L2 обозначает замещенный C2-C5алкил.
24. Применение по п.23, отличающееся тем, что L2 выбран из -CH2CH2CH(CH3)- и -CH2CH(OH)CH2-.
25. Применение по пп.1-9, отличающееся тем, что соединение выбрано из
- 128 -
012429
- 129 -
012429
- 130 -
012429
- 131 -
012429
- 132 -
012429
- 133 -
012429
- 134 -
012429
- 135 -
012429
- 136 -
012429
- 137 -
012429
- 138 -
012429
- 139 -
012429
- 140 -
012429
- 141 -
012429
или его фармацевтически приемлемых соли, сложного эфира или пролекарства.
26. Способ лечения или предупреждения связанного с амилоидом заболевания, включающий введение субъекту эффективного количества соединения формулы (I)
где R1 обозначает замещенный или незамещенный 3-10-членный, содержащий от 1 до 4 гетероатомов,
выбранных из N, О и S, гетероциклил, 6-10-членный арил, 8-15-членный арилциклоалкил или замещенную или незамещенную C2-C10-алкильную группу; причем замещенный или незамещенный гетероциклил, арил или арилциклоалкил содержат от 1 до 3 отдельных колец;
R2 обозначает водород или C1-C10-алкил;
Y обозначает SO3H;
L1 обозначает замещенную или незамещенную C1-C5-алкильную группу или отсутствует;
L2 обозначает замещенную или незамещенную C2-C5-алкильную группу,
при условии, что, когда R1 обозначает алкил, L1 отсутствует; при условии, что, когда R2 обозначает
водород, L1 обозначает метилен, L2 обозначает -(СН2)3- и Y обозначает SO3-Х+; R1 не обозначает фенил,
1,3-бензодиоксол-5-ил или 3,4-диметоксифенил, и при условии, что, когда R2 обозначает водород, L2 обозначает -(СН2)3-, L1 отсутствует и Y обозначает SO3-X+, R1 не обозначает н-пентил, н-гексил, н-гептил, ноктил, н-нонил, н-децил, циклогексил, 1-гидрокси-2-пропил, 1-гидрокси-2-бутил, 2-гидрокси-1-пропил,
1-гидрокси-4-пентил, 1-гидрокси-5-гексил, 2-гидрокси-1-этил, 3-гидрокси-1-пропил, 4-гидрокси-1-бутил,
5-гидрокси-1-пентил, 6-гидрокси-1-гексил, 3,5-диметил-1-адамантил, 1-гидроксиметил-1-циклопентил, 2(2-деокси-D-глюкозу), фенил, 4-гидроксифенил или 4-пиридил, 1-гидрокси-2-пентил, 3-метилмасляную
кислоту, метиловый эфир 4-метилпентановой кислоты или 2,2-дифенилэтил,
или его фармацевтически приемлемой соли, сложного эфира или пролекарства.
27. Способ по п.26, отличающийся тем, что связанное с амилоидом заболевание характеризуется
отложением β-амилоида.
28. Способ по п.26 или 27, отличающийся тем, что R1 обозначает водород.
29. Способ по п.26 или 27, отличающийся тем, что R1 обозначает линейный C2-C10-алкил.
30. Способ по п.29, отличающийся тем, что R1 обозначает этил, н-пентил, н-гептил, н-октил или ннонил.
31. Способ по п.26 или 27, отличающийся тем, что R1 обозначает трет-бутил.
- 142 -
012429
32. Способ по п.31, отличающийся тем, что соединение представляет собой 3-(трет-бутил)амино-1пропансульфоновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль, сложный эфир или пролекарство.
33. Способ по п.26 или 27, отличающийся тем, что R1 обозначает C4-C10-циклоалкил.
34. Способ по п.33, отличающийся тем, что R1 обозначает циклоалкил, содержащий 2 или 3 конденсированных кольца.
35. Способ по п.34, отличающийся тем, что R1 обозначает С7-С10-циклоалкил, содержащий 2 конденсированных кольца.
36. Способ по п.34, отличающийся тем, что R1 обозначает циклоалкил, содержащий 2 конденсированных кольца.
37. Способ по п.36, отличающийся тем, что R1 обозначает трицикло[3.3.1.03,7]децил или адамантил.
38. Способ по п.35, отличающийся тем, что R1 обозначает бицикло[2.1.2]гептил.
39. Способ по п.37, отличающийся тем, что соединение представляет собой 3-(1-адамантил)амино1-пропансульфоновую кислоту или ее фармацевтически приемлемую соль, сложный эфир или пролекарство.
40. Способ по любому из пп.26-39, отличающийся тем, что L2 обозначает (СН2)3.
41. Способ по любому из пп.26-39, отличающийся тем, что L2 обозначает замещенный C2-C5-алкил.
42. Способ по п.41, отличающийся тем, что L2 выбран из -CH2CH2CH(CH3)- и CH2CH(OH)CH2-.
43. Способ по п.26 или 27, отличающийся тем, что соединение выбрано из
- 143 -
012429
- 144 -
012429
- 145 -
012429
- 146 -
012429
- 147 -
012429
- 148 -
012429
- 149 -
012429
- 150 -
012429
- 151 -
012429
- 152 -
012429
- 153 -
012429
- 154 -
012429
- 155 -
012429
- 156 -
012429
или его фармацевтически приемлемой соли, сложного эфира или пролекарства.
44. Соединение формулы (I), как определено в п.1, или его фармацевтически приемлемая соль,
сложный эфир или пролекарство, выбранное из группы, включающей
- 157 -
012429
- 158 -
012429
- 159 -
012429
- 160 -
012429
- 161 -
012429
- 162 -
012429
- 163 -
012429
- 164 -
012429
- 165 -
012429
- 166 -
012429
- 167 -
012429
- 168 -
012429
45. Соединение формулы (I)
где R1 обозначает замещенный или незамещенный бицикло[2.1.2]гептил или замещенный или незамещенный адамантил;
R2 обозначает водород или C1-C10-алкил;
Y обозначает SO3H;
L1 обозначает замещенный или незамещенный C2-C5-алкил или отсутствует;
L2 обозначает замещенный или незамещенный C2-C5-алкил или отсутствует; при условии, что R2
обозначает водород, L2 обозначает -(СН2)3-, L1 отсутствует и что R1 не является 3,4-диметил-1адамантилом или 3,5-диметил-1-адамантилом;
или его фармацевтически приемлемая соль, сложный эфир или пролекарство.
46. Соединение по п.44, выбранное из группы
- 169 -
012429
или его фармацевтически приемлемая соль, сложный эфир или пролекарство.
47. Соединение по п.46, представляющее собой
или его фармацевтически приемлемая соль, сложный эфир или пролекарство.
48. Соединение, выбранное из
или его фармацевтически приемлемая соль, сложный эфир или пролекарство.
49. Фармацевтическая композиция для лечения или предупреждения амилоидного заболевания, содержащая соединение по любому из пп.44-48 с фармацевтически приемлемым носителем.
Евразийская патентная организация, ЕАПВ
Россия, 109012, Москва, Малый Черкасский пер., 2
- 170 -