ВПетеринарная атология - Ветеринарная патология

ISSN 1682-5616
№ 2 (25)
2008
Международный научно-практический журнал
по фундаментальным и прикладным вопросам ветеринарии
етеринарная
атология
ВП
Проблемы прикладной науки
Проблемы сохранения
генетических ресурсов
етеринарная
атология
ВП
№ 2 (25) 2008
Международный научно-практический журнал
по фундаментальным и прикладным вопросам ветеринарии
Главный редактор Гойденко С.К.
Редакционный совет:
Редакция:
Поздняков А.В. — научный редактор
Лебзак А.А. — редактор
Лебзак А.В. — компьютерный дизайн
Макаров В.В. — председатель совета, доктор
биологических наук, профессор, действительный член РАЕН и РАМТН, заслуженный деятель науки РФ, заведующий кафедрой ветеринарной патологии Российского университета
дружбы народов
Дьяконов Л.П., доктор биологических наук,
профессор, академик РАЕ, действительный
член Нью-Йоркской академии наук, заслуженный деятель науки РФ, заведующий лабораторией ВИЭВ
Гулюкин М.И., академик РАСХН, доктор ветеринарных наук, профессор, директор ВИЭВ
Жаров А.В., профессор, доктор ветеринарных
наук, президент Всероссийской ассоциации
патологоанатомов ветеринарной медицины,
заслуженный деятель науки Российской Федерации
Атамась В.А., доктор ветеринарных наук, профессор, заведующий кафедрой эпизоотологии
и паразитологии Одесского государственного
аграрного университета
Бучацкий Л.П., доктор биологических наук,
профессор, иностранный член РАЕН, заведующий лабораторией Киевского государственного университета
Бондаренко В.М., доктор медицинских наук,
профессор, действительный член (академик)
РАЕН и РАМТН, заведующий лабораторией НИИ эпидемиологии и микробиологии им.
Н.Ф. Гамалеи
Сочнев В.В., доктор ветеринарных наук, профессор, член-корреспондент РАСХН, заведующий кафедрой эпизоотолгии и инфекционных
болезней Нижегородской ГСХА
Стекольников А.А., доктор ветеринарных
наук, профессор, ректор Санкт-Петербургской
государственной академии ветеринарной медицины
Ятусевич А.И., доктор ветеринарных наук, заслуженный деятель науки Республики Беларусь
Алиев А.А., доктор ветеринарных наук, заместитель начальника управления ветеринарии г.
Санкт-Петербурга
Журнал зарегистрирован
в Министерстве Российской
Федерации по делам печати,
телерадиовещания и средств
массовых коммуникаций.
Свидетельство о регистрации
средства массовой информации
ПИ № 77-11332
от 10 декабря 2001 г.
Выходит ежеквартально
Распространяется
в Российской Федерации,
странах СНГ и Балтии
Учредитель и издатель
ООО «Ветеринарный консультант»
Индекс в каталоге
агентства «Роспечать»
«Газеты. Журналы.» — 81265
Адрес редакции:
111625, г. Москва,
ул. Поселковая, д. 2, корп 5.
Тел.: (495) 970-03-68, (903) 133–31–25
(906) 788-75-12
E-mail: vetcons@gmx.net
Журнал входит в Перечень ведущих
рецензируемых научных журналов и
изданий, выпускаемых в Российской
Федерации, в которых должны быть
опубликованы основные научные результаты диссертаций на соискание
ученой степени доктора наук.
При перепечатке ссылка на журнал
«Ветеринарная патология» обязательна.
© «Ветеринарная патология»
СОДЕРЖАНИЕ
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Р.И. Аксенов, В.А. Черванев
Гистогенез клоакальной сумки кур в постнатальный период онтогенеза
при применении соединений селена ............................................................................................... 7
С.А. Алексеева, Д.П. Глебов
Влияние «Лигногумата КД» калиевого и натриевого
на защитные свойства организма кур-несушек ......................................................................... 10
Н.И. Антонов, О.С. Новикова, К.П. Кирсанов
Рентгенологическая характеристика сращения поперечных переломов тела
и ветви седалищной кости у собак при внешнем чрескостном остеосинтезе
(экспериментальное исследование).............................................................................................. 13
БАН-БО Б.А.
Особенности эпизоотологии болезни Ньюкасла кур в республике Чад ............................. 16
В.И. Беляев, А.Л. Индюков
Эффективность цидисепта-о при колибактериозе поросят и влияние его
на репродуктивные функции свиноматок ................................................................................... 19
Н.А. Кочуева, В.Н. Бочкарёв
Клинико-лабораторная оценка применения гомеопатической терапии
при гепатозе норок ........................................................................................................................... 21
М.А. Волкова, Г.В. Батченко, М.И. Шульпин, Н.С. Мудрак, Л.О. Щербакова,
В.В. Дрыгин, Ш.К. Куляшбекова
Получение препаратов специфических антигенов и сывороток против вируса болезни
марека и их использование в иммуноферментном анализе .................................................... 25
З.Г. Воробьева, М.А. Кульчицкая, К.Н. Слинина, А.Л. Лазовская
Антагонистическая активность пробиотиков по отношению
к микобактериям туберкулеза ....................................................................................................... 32
Е.Н. Воронина
Влияние экологических факторов на физиологические функции организма
и деятельность функциональных систем у телят в биогеохимической
провинции Южного Урала .............................................................................................................. 35
К.В. Гаврилин, Г.А. Мамыкина
Бактериальные осложнения при эктопротозойных инвазиях рыб ....................................... 37
Х Георгиу., Р.М., Хамурзов Е.М. Горбунова, В.Г. Орел
К вопросу о диагностике анаплазмоза крупного и мелкого рогатого скота ...................... 41
Х. Георгиу, В.В. Белименко, П.И. Христиановский, Р.М. Хамурзов
К вопросу об иммунизации против иксодовых клещей ........................................................... 45
Х. Георгиу, В.В. Белименко, П.И. Христиановский
К вопросу об иммунизации против бабезиоза собак ................................................................ 50
Х. Георгиу, В.В. Белименко, П.И. Христиановский
Бабезиоз собак в оренбургской области ..................................................................................... 56
Т.И. Глотова, Н.Р. Будулов, Ю.Г. Юшков, А.Г. Глотов
Применение изатизона и сероизатизона для профилактики
вирусных респираторных болезней телят................................................................................... 59
И.Ю. Ездакова, О.М. Чуйко, Е.О. Чадина
Динамика розеткообразующих клеток кур в онтогенезе ....................................................... 62
В.В. Исаев, З.Я. Косорлукова, О.А. Бурова, О.В. Коробова, Т.Д. Хрисанфова
Способ профилактики желудочно-кишечных болезней телят
с применением биологически активных веществ...................................................................... 65
С.Ш. Кабардиев, Н.Р. Будулов, Х.М. Гайдарбекова, Т.Т. Рагимова
Эпизоотическая ситуация по лейкозу крупного рогатого скота
в племенных хозяйствах Дагестана .............................................................................................. 67
Н.А. Казаков
Минимальная заражающая доза возбудителей (a. Marginale, a. Ovis)
при анаплазмозе КРС и овец – критерий объективной оценки иммуногенных свойств
противоанаплазмозных адьювантных инактивированных эмульгированных вакцин ........... 68
О.И. Кальницкая
Подбор микробных тест-культур к антибиотикам ................................................................... 70
О.И. Кальницкая
Влияние параметров термической обработки мяса на уменьшение в нем
остатков антибиотиков .................................................................................................................. 73
А.Ю. Кирсанова, И.Б. Самошкин, В.В. Краснов, К.П. Кирсанов,
Г.Н. Прокофьева, В.Н. Клюева, Д.В. Пчельников, В.А. Бабич
Гемовит – плюс как источник микроэлементов для супоросных свиноматок и поросят........ 78
Н.А. Кочуева, В.Н. Бочкарев, Н.В. Гарнцева
Адаптационные процессы в организме плотоядных при остром
послеродовом эндометрите ............................................................................................................ 84
М.Н. Лапина, Г.П. Ковалева, В.А. Витол, Т.П. Ковалева
Гинекологические заболевания молочного скота различных генотипов ............................ 88
И.М. Луппова, В.Н. Грушин
Гистохимические показатели внутренних органов цыплят,
аэрозольно вакцинированных против болезни ньюкасла ....................................................... 91
И.Дж. Мурзалиев
Выявление респираторных вирусных инфекций в племенных
овцеводческих заводах Кыргызской республики...................................................................... 93
П.А. Паршин, С.В. Шабунин, М.З. Магомедов, С.М. Сулейманов
Определение фармакодинамики и лечебной эффективности левоксида
при патологии легких у телят ........................................................................................................ 95
Н.В. Сахно
Реактивность организма в зависимости от площади перелома трубчатых костей ........... 97
М.П. Семененко
Токсикологическая оценка препарата моренит....................................................................... 101
Д.В. Тарнуев, И.О. Убашеев, К.С. Лоншакова, И.О. Убашеев
Гастропротективное действие «полипланта-К» при хронической ацетатной
язве желудка по Оkabe at al. у белых крыс ............................................................................... 104
Н.С. Трошева, В.В. Палунина
Лечение мелких домашних животных при дерматитах ........................................................ 108
Ю.В. Чернигов, В.Д. Конвай
Посттравматическое воспаление тазобедренного сустава у собак:
механизмы развития, пути коррекции ....................................................................................... 109
С.В. Шабунин, Е.Э. Кириллова, П.А. Паршин, С.М. Сулейманов
К фармакотоксикологии эроксимаста и его применении при мастите у коров............... 114
А.В. Шатилов
Терапевтическая эффективность эмицидина при лечении лошадей
с хроническими заболеваниями лёгких ......................................................................................117
С.В. Енгашев, М.В. Арисов
Изучение токсического воздействия на организм животных
нового инсектоакарицидного препарата дельцид ................................................................... 119
М.В. Арисов
Распространение псороптоза крупного рогатого скота в хозяйствах
Республики Калмыкия................................................................................................................... 128
О.Ф. Гробов, Л.П. Дьяконов
Развитие микроспоридий насекомых в культурах клеток млекопитающих ..................... 131
Л.К. Герунова, С.В. Чернигова, В.Д. Конвай
Метаболические нарушения у собак, подвергшихся интоксикации неостомозаном,
и их коррекция энтеросорбентом зоокарбом .......................................................................... 135
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ
О.Н. Денисова, Г.Ф. Жегунов
Криоконсервирование эритроцитов домашних животных ................................................... 139
С.И. Дрокин, Б.Б. Дзюба, Т.М. Гурина, Е.А. Гордиенко, П. Тодоров
Особенности кристаллизации высококонцентрированных суспензий клеток,
содержащих осмотически неактивные внутриклеточные структуры ................................ 141
Г.В. Ескин, А.Г. Нарижный
Показатели замороженно-оттаянной спермы при использовании
различных антиоксидантов .......................................................................................................... 144
Г.В. Ескин
Влияние способа разбавления спермы на ее качество и оплодотворяющую
способность после замораживания-оттаивания....................................................................... 147
Д.Н. Калгин
Эффективность активации подвижности спермиев рыб с помощью
физико-химических стимуляторов в дефростированной семенной жидкости ................. 149
К.В. Метальникова
Получение и криоконсервация спермы реверсантов – перспективный
способ сохранения геномов самок .............................................................................................. 150
В.А. Багиров, Л.К. Эрнст, Ш.Н. Насибов
Технология криоконсервации семени – метод сохранения и рационального
использования разных видов животных .................................................................................... 152
В.Т. Заблоцкий
Криогенное консервирование возбудителей протозойных болезней животных
и противотейлериозной вакцины................................................................................................ 155
А.С. Попов
Криосохранение растений и их клеток ...................................................................................... 158
СONTENTS
R.I. Aksenov, V.A. Chervanev
Hystogenesis of bursa cloacalis of hens in the postnatal period of ontogenesis
by application of selenium containing compounds........................................................................... 7
S.A. Alekseeva, D.P. Glebov
The influence of potassium and natrium «Lignogumate KD» on the defence properties
of laying hens’ organism..................................................................................................................... 10
N.I. Antonov, O.S. Novikova, K.P. Kirsanov.
Radiographic features of union of transverse fractures of the ischial body and branch
in dogs treated with the method of transosseous osteosynthsis .................................................... 13
V.I. Beljaev, A.L. Indukov
Efficiency cidisept-o at colibacterioz pigs and his influence on reproductive
functions of sows. ................................................................................................................................ 19
N.A. Kochueva, V.N. Bochkarev
Clinic-laboratory estimation of the using homeopathic terapii under hepatose minks ............. 21
M.A. Volkova, G.V. Batchenko, M.I. Shulpin, N.S. Mudrak, L.O. Scherbakova,
V.V. Drygin, Sh.K. Kulyashbekova
Development of the specific marek’s disease antigens and sera for using in indirect elisa ....... 25
E.N. Voronina
Influence of the ecological factors on physiological functions of organism and activity
of functional systems at animals in biogeochemical Provinces of southern ural ........................ 35
K.V. Gavrilin, T.A. Mamykina
Bacterial complication of fish affected by ectoprotozoo infection ............................................... 37
Chr. Georgiu, R.M. Khamurzov, E.M. Gorbunova
Detection of anaplasmosis in cattle, sheep and goats. .................................................................... 41
Chr. Georgiu, W.V. Belimenko, P.I. Christianovsky, R.M. Khamurzov
A review on vaccination against Ixodidae ticks. ............................................................................. 45
Chr. Georgiu, W.V. Belimenko
A review on vaccination against canine babesiosis......................................................................... 50
Chr. Georgiu, W.V. Belimenko, P.I. Christianovsky
Canine babesiosis in Orenburg region. ............................................................................................ 56
T.I. Glotova, N.R. Budulov, Yu.G. Yushkov, A.G. Glotov
Application isatison and seroisatison for preventive maintenance
and treatment respiratory of diseases at calves ............................................................................... 59
O.I. Kalnitskaja
The selection of the sensitive microorganisms to the antibiotics .................................................. 70
O.I. Kalnitskaya
The influence of the thermal parameters on the reduction of the antibiotics in meat. .............. 73
N.A. Kochueva, V.N. Bochkarev, N.V. Garnceva
Adaptation processes in organisms of predators with sharp postnatal endometrit .................... 84
M. Lapina, G.P. Kovaleva, V. A.Vitol, T.P. Kovaleva
Gynecological diseases of different genotypes dairy stock........................................................... 88
N.V. Sachno
The reaction of the organism depending on the area the fracture of tubular bones .................. 97
M.P. Semenenko
Toxsicological estimation preparation morenit ............................................................................. 101
D.V. Tarnuev, I.O. Ubasheev, K.S. Lonshakova, I.O. Ubasheev
The «polyplant-K» gastroprotective action on Okabe’s at the white rats
chronic acetated ulcer stomach. ...................................................................................................... 104
N.S. Trosheva, V.V. Palunina
Dermatitis treatment of small domestic animals .......................................................................... 108
M.V. Arisov, S.V. Engaschev
Studying of toxic influence on an organism of animals new insectoacaricid delcid ................ 119
M.V. Arisov
Distribution of cattle Psoroptosis in facilities of Republics Kalmykias ..................................... 128
O.F. Grobov, L.P. Dyakonov
The development of the insect microsporidium into the cells culture of the mammalia ......... 131
L.K. Gerunova, V.D. Konvaj, S.V. Chernigova
Metabolic disorders in dogs under intoxication with neostomozan
and correction of disorders with enterosorbent «Zoocarb» ........................................................ 135
V.A. Bagirov, L.К. Ernst, SH.N. Nasibov
Technology of cryoconservation of sperm as a method of securing
and rational use of rare and disappearing kinds of animals......................................................... 152
A.S.Popov.
Cryopreservation of plants and their cells ..................................................................................... 158
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
ПРОБЛЕМЫ
ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
УДК 636:611+636.52/58+546.23
Р.И. Аксенов, В.А. Черванев
ФГОУ ВПО «Пензенская государственная сельскохозяйственная академия»,
ФГОУ ВПО «Воронежский государственный аграрный университет
им. К.Д. Глинки»
ГИСТОГЕНЕЗ КЛОАКАЛЬНОЙ СУМКИ КУР
В ПОСТНАТАЛЬНЫЙ ПЕРИОД ОНТОГЕНЕЗА
ПРИ ПРИМЕНЕНИИ СОЕДИНЕНИЙ СЕЛЕНА
В настоящее время все более очевидной становится важная и многообразная
роль иммунологических факторов, участвующих в регуляции и интеграции процессов развития и жизнедеятельности организма. В свою очередь, иммунологические факторы подвержены значительным
изменениям в результате действия на организм условий его существования. В условиях современного производства сельскохозяйственной продукции организм животных и птиц становится все более зависимым от факторов искусственно созданной
среды обитания (кормление, микроклимат
и др.), нарушение которых оказывает действие на состояние иммунной системы. В
связи с этим, изучение возрастной морфологии органов иммунологической защиты
приобретает важное значение.
Одними из средств, способных влиять
на развитие иммунных реакций организма
животных и птицы, являются соединения
селена (Невитов М.Н., 2000; Боряев Г.И.,
2000; Мельникова Т.Е., 2004 и др.).
Микроэлемент селен применяется в
практике животноводства и птицеводства
в основном в виде селенита натрия, коВетеринарная патология. № 2. 2008
торый обладает высокой токсичностью
(Трифонов Г.А.,1998). Поэтому, предпринимались попытки синтезировать менее
токсичные соединения селена. Органические формы селена такие, как селенометионин, селеноцистеин и др. по токсичности не намного отличаются от неорганических. В Саратовском НИИ химии В.И.
Древко и Р.И. Древко синтезировано селеноорганическое соединение – диацетофенонилселенид, которое обладает меньшей
токсичностью. В связи с этим нами проведен опыт с целью выяснения влияния селенсодержащих соединений (селенита натрия и диацетофенонилселенида) на гистогенез клоакальной сумки кур 1–180-суточного возраста.
Для решения поставленной задачи нами на базе вивария ФГОУ ВПО «Пензенская ГСХА» методом аналогов было подобрано 3 группы цыплят яичного кросса «Ломанн коричневый» по 150 голов в каждой.
Первая группа – контрольная, получала основной рацион. Остальные группы – опытные, получали дополнительно к основному
рациону: вторая – ДАФС-25 в дозе 0,3 мг/
кг корма, третья группа получала допол7
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
нительно к основному рациону селенит натрия в дозе 0,3 мг/кг корма. Дозировки селенсодержащих препаратов указаны в пересчете на элементарный селен. Препараты вводили ежедневно в виде сухой мешанки с комбикормом. Убой птицы, по 5 голов
с каждой группы, проводили в 1-, 7-, 14-, 21-,
28-, 35-, 42-, 56-, 70-, 90-, 120-, 150-, 180-суточном возрасте. Вскрытие трупов кур проводили согласно методике К.И. Вертинского, А.П. Стрельникова (1974). Достоверными считались различия при Р<0,05; Р<0,01;
Р<0,001.
Для гистологических исследований образцы материала, отобранные из клоакальной сумки, фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина, заливали в парафин по общепринятой методике.
С каждого полученного образца при помощи санного микротома готовили необходимое количество гистологических срезов толщиной 5–10 мкм, готовые препараты окрашивали гематоксилин-эозином, заключали под покровные стекла в канадский бальзам по общепринятой методике.
При помощи методики точечного счета с применением окулярной сетки (Автандилов Г.Г., 1990) на полученных гистологических препаратах определяли следующие показатели: количество фолликулов
на единицу площади, площадь фолликула,
процентное соотношение мозговой и корковой зон, толщину основной перегородки,
делящей фолликулы на ряды и межфолликулярной прослойки.
Анализируя гистологическое строение
клоакальной сумки, можно отметить, что
у суточных цыплят нет еще дифференцировки лимфоидной ткани фолликулов на
корковую и мозговую зоны. Она наступает только к 14-суточному возрасту цыплят. Относительно других исследуемых
показателей следует сказать, что между группами в суточном возрасте цыплят
нет достоверных различий по количеству фолликулов на единицу площади, площади фолликула, толщине основной перегородки, делящей фолликулы на ряды
и межфолликулярной прослойки и эти
показатели находились на уровне: количество фолликулов – 32,86±0,80 шт. в первой группе, 31,42±1,17 шт. во второй группе, 32,96±1,10 в третьей группе; площадь
фолликула – 78,94±2,80 мкм2, 83,34±2,86
мкм2, 80,54±3,84 мкм2 соответственно; толщина основной перегородки – 1,35±0,10
мкм, 1,30±0,09 мкм, 1,40±0,06 мкм соответственно; толщина межфолликулярной
прослойки – 0,50±0,00 мкм, 0,50±0,00 мкм,
8
0,50±0,00 мкм соответственно.
Соотношение корковой и мозговой зон
с возрастом изменяется: происходит уменьшение мозговой зоны и увеличение корковой. К концу эксперимента эти показатели имели следующие значения: корковая
зона – 83,22±0,70 % в контроле, 82,25±0,77
% во второй группе, 82,37±0,79 % в третьей группе; мозговая зона – 16,78±0,70 % в
контроле, 17,75±0,77 % во второй группе,
17,63±0,79 % в третьей группе.
Следует отметить, что площадь, занимаемая корковой зоной в опытных группах достоверно больше, чем в контроле в
возрасте 56- и 70-суток. Кроме того, достоверно превышает по данному показателю
третью группу в возрасте 90-суток вторая
группа, а в возрасте 120-суток контрольная
и вторая группы.
Площадь, занимаемая мозговой зоной
в контрольной группе в 56- и 70-суточном
возрасте кур достоверно больше, чем в
опытных группах, а в третьей группе в 90суточном возрасте больше чем во второй
группе и в 120-суточном возрасте больше
чем в контрольной и второй группах.
Количество фолликулов на единицу
площади с возрастом уменьшается и достигает минимальных значений к 120-суточному возрасту кур. В этом возрасте данный
показатель находился на уровне: 2,73±0,1
шт. в контрольной группе, 2,19±0,10 шт.
во второй группе, 2,78±0,14 шт. в третьей группе. К 180-суточному возрасту этот
показатель несколько увеличивается, достигая следующих показателей: 3,86±0,19
шт. в контроле, 3,78±0,19 шт. во второй и
4,16±0,19 шт. в третьей группе. Следует отметить, что количество фолликулов в контрольной группе было достоверно больше,
чем в опытных группах в 21- и 28-суточном
возрасте кур, больше, чем во второй группе в 70- и 120-суточном возрасте и больше,
чем в третьей группе в 42-суточном возрасте. В третьей группе этот показатель был
больше, чем во второй группе в 70- и 120суточном возрасте.
Площадь фолликулов с возрастом постепенно увеличивается, достигая максимума к 120-суточному возрасту кур. В этом
возрасте данный показатель находился на
уровне: 1215,09±42,25 мкм2, 1317,44±49,72
мкм2, 1248,30±32,83 мкм2 соответственно. К 180-суточному возрасту этот показатель снижается и составляет по группам: 720,43±26,05 мкм2, 820,01±22,22 мкм2,
702,37±24,35 мкм2 соответственно. Показатель второй группы достоверно превышал
показатель контрольной и третьей группы.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Кроме того, площадь фолликулов в опытных группах была достоверно больше, чем
в контроле в возрасте 28-, 35- и 42-суток.
Толщина основной перегородки, делящей фолликулы на ряды, с возрастом увеличивается и достигает максимальных значений к концу эксперимента и имеет следующие показатели: 13,00±0,79 мкм в контрольной группе, 10,20±0,60 мкм во второй
группе, 11,30±0,75 мкм в третьей группе.
Также можно отметить, что толщина перегородки в контрольной группе была достоверно больше, чем в опытных группах в
возрасте 21-, 28- и 120-суток и больше, чем
во второй группе в возрасте 35- и 42-суток.
Толщина перегородки в третьей группе
была больше, чем во второй группе в возрасте 28- и 35-суток.
Толщина межфолликулярной прослойки также с возрастом увеличивается и достигает максимальных значений к концу
эксперимента и имеет следующие показатели: 2,85±0,22 мкм в контрольной группе,
2,65±0,19 мкм во второй группе, 3,05±0,17
мкм в третьей группе. Достоверных различий по данному показателю в исследуемые
периоды нами не отмечено.
Следует отметить, что инволюция
клоакальной сумки наступает раньше у
птиц контрольной группы. Это проявляется увеличением количества соединительной ткани, изменением соотношения коркового и мозгового вещества и
уменьшением фолликулов, замещением
фолликулов на кисты.
Таким образом, применение селенсодержащих соединений в рационе кур оказывает положительное действие на гистогенез клоакальной сумки, что, по-видимому, можно объяснить стимулирующим
действием селена на организм кур. Это выражается в том, исходя из полученных нами результатов, что в опытных группах более выражены эволюционные процессы и
менее – инволюционные.
Полученные нами данные подтверждаются некоторыми исследованиями, в частности в опытах на цыплятах-бройлерах и
курах-несушках установлено, что добавка
препаратов селена, улучшает продуктивность, стимулирует развитие клоакальной
сумки и тимуса и увеличивает клеточный
иммунитет (Mazurkiewicz M. еt al., 1992; Родионова Т.Н., 2004).
Следует также отметить, что диацетофенонилселенид оказал более выраженное действие на исследуемые показатели,
по сравнению с селенитом натрия.
SUMMARY
Inclusion of compounds containing selenium to the ration of hens influences positively the hystogenesis of
bursa cloacalis of hens that is manifesting in the extension of surfaces and cortical substance of follicles. Besides that the control group had the most striking involutional processes that becomes apparent due to the
extension of conjunctive tissue, thanks to the alteration of correlation of cortical and brain substance and
due to the reducing of follicles, substitution of follicles through the cystes.
Литература
1. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. М.:
Медицина, 1990. 384 с.
2. Боряев Г.И. Биохимический и иммунологический статус молодняка сельскохозяйственных
животных и птицы и его коррекция препаратами селена // Автореф. на соиск. уч. степени доктора. биол. наук. М., 2000. 41 с.
3. Вертинский К.И., Стрельников А.П. Методические указания по технике патологоанатомического вскрытия птиц. М: МВА, 1974. 39 с.
4. Мельникова Т.Е. Фармако-токсикологическая
оценка селекора и его влияние на иммунный
статус свиней при вакцинации // Автореф. дисс.
на соиск. уч. степени канд. ветеринар. наук. Воронеж, 2004. 24 с.
5. Невитов М.Н. Изменение иммунологических
параметров крови ягнят в послеотъемный пери-
Ветеринарная патология. № 2. 2008
од под воздействием разных форм соединений
селена // Автореф. на соиск. уч. степени канд.
биол. наук. Ульяновск, 2000. 26 с.
6. Родионова Т.Н. Фармакодинамика селеноорганических препаратов и их применение в животноводстве // Автореферат диссерт. на соиск. уч. степени доктора биол. наук. Краснодар, 2004. 34 с.
7. Трифонов Г.А. Токсикологическая характеристика новых селенсодержащих соединений. // Матер. Междунар. науч. конфер., посвящ. 125-ти летию Казанской ГАВ медицины им. Н.Э.Баумана,
ч.2. Казань. 1998. С. 164–166.
8. Mazurkiewicz Micat, Ramicz A., Harenza T. еt al.
Aktywnosc biologiczna organicznego potaczenia
selenu (Bioselen) oraz selenianu sodu u kurczat
// Zesz. nauk. AR Wroclawin. Wet. 1992. № 52. P.
231–241.
9
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
УДК 636.5:612.017+619:615
С.А. Алексеева, Д.П. Глебов
Федеральное государственное образовательное учреждение высшего
профессионального образования «Ивановская государственная
сельскохозяйственная академия» (ФГОУ ВПО «Ивановская ГСХА»)
ВЛИЯНИЕ «ЛИГНОГУМАТА КД» КАЛИЕВОГО
И НАТРИЕВОГО НА ЗАЩИТНЫЕ СВОЙСТВА
ОРГАНИЗМА КУР-НЕСУШЕК
В настоящее время в промышленном
птицеводстве активно начинают использовать кормовые добавки на основе гуминовых соединений, в том числе лигногуматы.
Установлено, что они способны стимулировать процессы интенсивного роста и развития (Бессарабов Б.Ф. и др., 2004), однако
их влияние на систему иммунитета раскрыто не полностью. В условиях современного промышленного птицеводства с большой концентрацией поголовья в помещениях существенно увеличилась антигенная
нагрузка на организм птицы, особенно на
респираторные органы. В значительной
степени от состояния их защитных свойств
зависит устойчивость организма к инфекционным и незаразным болезням (Алексеева С.А., 1992; Скопичев В.Г. и др., 2004).
Недостаточная адсорбционная и слизеобразовательная активность эпителиальных
клеток верхних дыхательных путей, снижение содержания лизоцима, уменьшение
миграции лейкоцитов на поверхность слизистой оболочки при нарушении технологии содержания и кормления способствуют проникновению в организм патогенных и условнопатогенных микроорганизмов и вирусов, вызывая массовую заболеваемость, снижение продуктивности и повышение падежа птицы. Поэтому, изучение действия лигногуматов на местные иммунные механизмы слизистой оболочки
трахеи и, весь организм в целом, является
актуальным и интересным в научно-производственном отношении.
Материал и методы
Нами проведены исследования на курах-несушках кросса Иса-браун, возраст
38 недель, в течение 2 месяцев. По принципу аналогов было сформировано три группы по 200 голов: 1 группа – дополнительно
к основному рациону получала «Лигногумат КД» калиевый в дозе 60 мг на кг живой массы 5-дневными курсами с интервалом 12 дней; 2 группа – «Лигногумат КД»
натриевый в дозе 20 мг на кг живой массы,
двукратно 5-дневными курсами 1 раз в месяц; 3 группа (контрольная) – препарат не
10
давали. Для оценки общего состояния организма определяли количество лейкоцитов в счетной камере, лизосомально-катионный тест гранулоцитов (по Л.С. Колабской и др., 1983, в модификации С.А. Алексеевой, 1992), лизоцимную активность сыворотки крови (по И.Ф. Храбустовскому и
Ю.М. Маркову, 1974; цит. по С.И. Плященко и В.Т. Сидорову, 1979) и бактерицидную активность (по Мишелю и Трефферс,
1956, в модификации И.М. Маркова и др.,
1974). Защитные свойства слизистой оболочки трахеи оценивали по цитограмме
(О.Г.Алексеева, 1986), которую определяли
до применения препаратов, на 30 и 60 сутки использования лигногуматов. При этом
подсчитывали 100 клеточных элементов и
выводили процент: эпителиальных клеток
адсорбирующих микрофлору; эпителиальных клеток неадсорбирующих микрофлору; разрушенных лейкоцитов; целых лейкоцитов, участвующих в фагоцитозе; целых нефагоцитирующих лейкоцитов. Среди эпителиальных клеток, адсорбирующих микрофлору, вычисляли адсорбционное число (среднее количество бактерий,
адсорбированных одной клеткой). У фагоцитирующих лейкоцитов – фагоцитарное
число (среднее количество фагоцитированных микроорганизмов одним полиморфноядерным лейкоцитом).
В течение всего эксперимента учитывали и анализировали температурно-влажностный режим в помещении и рационы
кормления птицы.
Результаты исследований
Ежедневный учет температурно-влажностного режима микроклимата показал,
что в течение эксперимента птица находилась в условиях повышенной температуры и низкой относительной влажности при
высокой запыленности воздуха в птичнике. В рационе кур-несушек отмечали увеличение содержания сырого жира и клетчатки и недостаток усвояемого фосфора и
натрия.
В этих условиях содержания, изучаемые иммунологические показатели у кур
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица 1
Показатели иммунной защиты кур-несушек при использовании
препаратов «Лигногумат КД» калиевый и натриевый
Сроки исследования
До
опыта
На 60
сутки
Группы
Лейкоциты,
тыс./мкл.
Лизоцимная
активность, %
Бактерицидная
активность, %
Лизосомально-катионный тест, ед.
1
24,8 ± 0,53
19,7 ± 0,46
40,1 ± 1,8
1,20 ± 0,02
2
25,2 ± 0,37
19,5 ± 0,56
41,2 ± 1,9
1,20 ± 0,03
3
25,7 ± 0,61
19,7 ± 0,56
41,0 ± 2,0
1,20 ± 0,03
1
28,6 ± 0,51
42,3 ± 1,20
72,4 ± 1,8
1,37 ± 0,03
2
27,3 ± 0,33
36,5 ± 1,00
68,8 ± 2,4
1,33 ± 0,03
3
24,6 ± 0,60
20,2 ± 0,60
41,0 ± 1,6
1,22 ± 0,03
подопытных групп имели низкие значения
и существенно не различались между собой. Применение лигногуматов привело к
активизации всех процессов в организме, в
том числе и защитных, так как основным
действующим веществом в обоих препаратах являются гуминовые кислоты, биологическая активность которых связана с влиянием на окислительно-восстановительные
процессы благодаря наличию в составе
таких химических группировок как полифенолы, оксихиноны, хиноны, которые
выполняют роль переносчиков водорода
и активаторов кислорода, что стабилизирует в живом организме внутриклеточное
дыхание. Кроме того, гуминовые кислоты
являются не только источником энергии,
но и биологически активным субстратом,
катализирующим обменные процессы.
Вследствие этого, после курса применения биологически активных добавок в организме кур первых двух групп произошли существенные изменения. Относительно контрольной группы увеличилось количество лейкоцитов на 9,9 - 14% (р < 0,001),
лизосомально-катионный тест гранулоцитов на 8,3 - 11% (р < 0,001). При этом более
выраженный подъем изучаемых показателей отмечен в первой опытной группе, что
подтверждают данные таблицы 1. Существенно выросла бактерицидная активность
сыворотки крови в 1 и 2 группах соответственно на 45 и 39% (р < 0,001).
Проведенные исследования лизоцимной активности сыворотки крови кур-несушек также показали зависимость ее от
применения лигногуматов. В эксперименте лизоцимная активность возрастала во
все опытные периоды, но наибольшие изменения отмечены на 60 день исследований. При этом увеличение в 1 группе было
на 51,1% (р < 0,001), во 2 группе на 42,6%
(р < 0,001). Полученные изменения позволяют судить о повышении естественных
защитных сил организма кур-несушек.
При сравнительном изучении результатов
Ветеринарная патология. № 2. 2008
применения солей калия и натрия установлено, что «Лигногумат КД» калиевый в организме способствовал увеличению количества лейкоцитов на 32,5%, уровня насыщения катионными белками гранулоцитов крови на 26,7%, лизоцимной активности сыворотки крови на 29,3%, бактерицидной активности сыворотки крови на 20,6%
больше чем «Лигногумат КД» натриевый.
В защите организма от внедрения болезнетворных микроорганизмов и вирусов
важная роль отводится местным иммунным механизмам дыхательных путей. Применение лигногуматов также повлияло и
на эти процессы. Если до начала эксперимента в цитограмме слизистой оболочки
трахеи кур всех трех групп было отмечено незначительное количество фагоцитирующих и нефагоцитирующих лейкоцитов
при повышении числа разрушенных клеток, а также низкая адсорбирующая способность эпителия и фагоцитарная активность лейкоцитов по сравнению с физиологической нормой, то через 30 дней после
применения препаратов в цитограмме произошли значительные изменения (таблица 2). В группе, получавшей «Лигногумат
КД» калиевый, относительно контрольной, уменьшилось содержание неадсорбирующих эпителиальных клеток на 9,1% (p
< 0,05), а увеличилось количество адсорбирующих эпителиальных клеток на 11,7%
(p < 0,05) и фагоцитирующих лейкоцитов
на 34,5% (p < 0,05). Возросла адсорбирующая способность эпителия и фагоцитарная
активность лейкоцитов соответственно на
8,1 и 17,2% (p < 0,05).
В группе, получавшей «Лигногумат
КД» натриевый, количество неадсорбирующих эпителиальных клеток уменьшилось на 7,2% (p < 0,05), а адсорбирующих
эпителиальных клеток увеличилось на
11,3% (p < 0,02). Возросло количество фагоцитирующих лейкоцитов на 32,2% (p <
0,05) и фагоцитарное число на 14,7% (p <
0,05). Существенных изменений в адсорб11
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица 2
Иммунная защита слизистой оболочки трахеи у кур-несушек под влиянием
препаратов «Лигногумат КД» калиевый и натриевый
Эпителиальные клетки
Лейкоциты
Адсорб- ФагоциСроки ис- Групционное тарное
следования пы адсорбиру- неадсор- разрушен- фагоцити- нефаго- число,
ед. число, ед.
бируюющие, %
ные, % рующие, % цитирующие, %
щие, %
До опыта
На 30 сутки
На 60 сутки
1
17,3 ± 0,7
36,1 ± 0,5
23,8±0,9
3,9 ± 0,5
18,8±0,6
6,6 ± 0,2
2,9 ± 0,2
2
17,0 ± 0,6
36,9 ± 0,8
22,8±0,5
4,0 ± 0,4
19,3±1,0
6,4 ± 0,3
2,9 ± 0,1
3
17,1 ± 0,7
36,6 ± 1,0
24,2±1,2
3,8 ± 0,5
18,3±0,8
6,8 ± 0,7
3,0 ± 0,4
1
19,6 ± 0,7
33,0 ± 0,5
23,6±1,6
5,8 ± 0,5
17,8±0,6
7,4 ± 0,3
3,5 ± 0,2
2
19,5 ± 0,6
33,7 ± 0,9
23,5±1,2
5,6 ± 0,5
17,7±1,2
6,8 ± 0,3
3,4 ± 0,2
3
17,3 ± 0,6
36,3 ± 0,8
23,7±1,2
3,8 ± 0,5
18,9±1,2
6,8 ± 0,5
2,9 ± 0,4
1
21,8 ± 0,5
32,2 ± 0,5
21,5±1,0
7,2 ± 0,7
17,3±0,6
7,8 ± 0,4
3,6 ± 0,2
2
21,7 ± 0,6
32,7 ± 1,0
20,1±1,0
7,0 ± 0,6
18,5±0,5
7,6 ± 0,3
3,5 ± 0,2
3
17,2 ± 0,5
37,2 ± 0,5
22,7±0,8
3,7 ± 0,5
19,2±0,6
6,4 ± 0,4
3,0 ± 0,3
ционной активности эпителия во 2 группе
не отмечено.
Сходная тенденция проявилась и при
исследовании цитограммы на 60 день эксперимента. Относительно контрольной в 1
группе количество неадсорбирующих эпителиальных клеток уменьшилось на 13,5%
(p < 0,01). При этом возросло содержание
адсорбирующих эпителиальных клеток на
21,1% (p < 0,001) до 21,8 ± 0,5, а также фагоцитирующих лейкоцитов - на 48,6% (p <
0,01) до 7,2 ± 0,7. Адсорбционная активность
эпителия и фагоцитарная активность лейкоцитов увеличились на 18% (p < 0,05) и
16,7% (p < 0,02) соответственно и составили 7,8 ± 0,4 и 3,6 ± 0,2.
Во 2 группе количество неадсорбирующих эпителиальных клеток уменьшилось с
начала эксперимента на 12,4% (p < 0,02).
При этом возросло содержание адсорбирующих эпителиальных клеток на 20,7% (p <
0,001) до 21,7 ± 0,6, а также фагоцитирующих лейкоцитов - на 47,2% (p < 0,01) до 7,0
± 0,6. Адсорбционная активность эпителия
слизистой оболочки трахеи увеличилась
на 15,8% (p < 0,05) и составила 7,6 ± 0,3, а
фагоцитарная активность лейкоцитов с 30
дня эксперимента существенно не изменилась, остановившись на уровне 3,5 ± 0,2.
Таким образом, результаты исследований показали, что «Лигногумат КД» калиевый стимулировал защитные функции органов дыхания кур-несушек в большей степени, чем «Лигногумат КД» натриевый.
Данное обстоятельство, вероятно, обусловлено тем, что калий сосредоточен главным образом в клетках, и, следовательно,
способствует более активному проникновению гуминовых соединений через цитоплазматическую мембрану, а значит и более
полному их вовлечению в биохимические
процессы клетки.
Значительно повысилась поедаемость
кормов. Количество клевательных движений одной курицы за 3 минуты в 3 группе
(контрольной) в среднем за весь эксперимент составляло 127, тогда как в 1 и 2 группах этот показатель был 200.
Повышение защитных сил организма, усиление обменных процессов, улучшение перевариваемости и всасываемости кормов вследствие повышения кислотности и изменения морфологии желудочно-кишечного тракта при применении гуминовых кислот, несомненно, способствовали повышению продуктивности птицы. В наших исследованиях после
применения лигногуматов яйценоскость
кур 1 группы увеличилась на 14,5%, 2
группы – на 4,5% по сравнению с контрольной.
Заключение
Использование в кормлении кур-несушек «Лигногумата КД» калиевого и натриевого способствует активизации местных механизмов защиты слизистой оболочки трахеи и повышению общего иммунитета в целом, что благоприятствует усилению устойчивости птицы к инфекционным и незаразным заболеваниям и повышению продуктивности даже при неблагоприятных факторах внешней среды. При
этом лигногумат калия оказался более результативным.
РЕЗЮМЕ
Статья посвящена аспектам общего и местного иммунитета кур-несушек при использовании иммуномодуляторов «Лигногумат КД» калиевый и натриевый. Установлено, что под влиянием лигногу-
12
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
матов усиливаются местные и общие механизмы защиты организма и повышается продуктивность
птицы.
SUMMARY
The article is devoted to sane aspects of general and local immunity of laying hens under immunomodulators «Lignogumat KD», potassium one and natrium one. The increase of both local and general defence
mechanisms of laying hens organism and the growth of fud productivity of poultry under lignogumats was
stated.
Литература
1. Алексеева С.А. Методические рекомендации
по диагностике и стимуляции резистентности
дыхательных путей у кур в промышленном птицеводстве Иваново, 1992.
2. Бессарабов Б.Ф., Мельникова И.И., Гонцова
Л.П., Перчиков И.В., Калинин П.И., Дугин А.В.
Применение лигногуматов в птицеводстве. Методические рекомендации Москва. 2004.
3. Скопичев В.Г., Эйсымонт Т.А., Алексеев Н.П.,
Боголюбова И.О. Физиология животных и этология М: Колос, 2004.
УДК 616-073.75: 616.718.2-001.5-089.84-092.9
Н.И. Антонов, О.С. Новикова, К.П. Кирсанов
ФГУ «РНЦ «ВТО» им. акад. Г.А. Илизарова Росмедтехнологий», г. Курган
РЕНТГЕНОЛОГИЧЕСКАЯ ХАРАКТЕРИСТИКА
СРАЩЕНИЯ ПОПЕРЕЧНЫХ ПЕРЕЛОМОВ ТЕЛА
И ВЕТВИ СЕДАЛИЩНОЙ КОСТИ У СОБАК
ПРИ ВНЕШНЕМ ЧРЕСКОСТНОМ ОСТЕОСИНТЕЗЕ
(ЭКСПЕРИМЕНТАЛЬНОЕ ИССЛЕДОВАНИЕ)
Введение
Переломы седалищной кости у собак,
по данным различных авторов, составляют от 61,5 до 82% от всех повреждений при
множественной травме таза [6, 8]. Изолированные переломы седалищных костей
составляют 3,2% от всех его повреждений [7]. На сегодняшний день в ветеринарной хирургии имеются экспериментальноклинические и морфологические работы,
в которых приводятся сведения о реконструктивно-востановительных операциях
при переломах костей таза методом чрескостного остеосинтеза. Однако особенности рентгенологической динамики репаративного остеогенеза при поперечных переломах седалищной кости у собак в условиях применения метода чрескостного остеосинтеза на сегодняшний день остаются
не изученными [1-5].
В рамках экспериментального исследования лечения переломов седалищной кости методом чрескостного остеосинтеза нами были изучены рентгенограммы, полученные при проведении опытов.
В связи с этим нами была разработана
модель данного типа повреждения. Остеотомию тела и ветви седалищной кости проводили долотом в дорсо-вентральном направлении. Затем был осуществлен чресВетеринарная патология. № 2. 2008
костный остеосинтез аппаратом внешней
фиксации.
Материалы и методы
Эксперименты проведены на 14-и животных обоего пола. Возраст собак составлял 1-5 лет, вес 9-25 кг.
Рентгенологические исследования проводили в день операции, а затем через
7, 14, 21, 28, 35, 42 и 65 суток после операции. Снимки делали аппаратом АРД-2-125К4, используя рентгенологическую пленку CURIX RP1 MEDICAL X-RAY FILM
(Бельгия) в режиме напряжения 48-57 kV,
сила тока 60 mA, выдержка 0,6 секунд. За
10-15 минут до рентгенографии животным
внутримышечно вводили 2% р-р Рометар –
0,1 мл/кг и проводили эпидуральную анестезию, применяя 2% раствор новокаина в
дозе 1-2 мг/кг.
Результаты исследования
На рентгенограммах таза, выполненных в прямой и боковой проекциях, четко
определяли поперечные переломы тела, и
ветви седалищной кости (рис. 1). Величина диастаза между смещенными костными
фрагментами тела седалищной кости составляла в сагиттальной плоскости у четырех собак 0,6-1,3 см, у 6 и собак 0,2-0,3 см, у
8-и собак 0,4-0,5 см. Во фронтальной плоскости диастаз между фрагментами ветви
13
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Рис. 1. Диастаз тела и ветви
седалищной кости после остеотомии.
Рис. 2. Репозиция отломков
Рис. 3. Едва заметная размытость контуров кости.
Рис. 4. Увеличение диастаза.
Рис 5. Выраженная периостальная реакция.
Рис. 6. Демонтаж аппарата
седалищной кости составлял у трех собак
0,7-1,0 см, у четырех собак 0,4-0,5 см, у 11-и
животных 0,1-0,3 см, а угол смещения только у 6-и собак составил 5°. Смещение отломка в сегментальной плоскости определялось у трех собак на Ѕ диаметра кости под углом 40-60°, у остальных собак смещение незначительное.
После фиксации и репозиции фрагментов седалищной кости аппаратом смещение костных фрагментов во всех плоскостях было устранено (рис. 2). На протяжении всего периода фиксации (35 суток) положение фрагментов седалищной кости,
достигнутое на момент сопоставления, стабильно удерживалось аппаратом.
В процессе изучения динамики репаративного остеогенеза наблюдали характерные изменения рентгенологической картины.
При полном первоначальном сопоставлении отломков диастаз либо отсутство14
вал, либо был в пределах от 0,05 до 0,1 см.
Через 7 суток видимые изменения отсутствовали и лишь у двух собак проявлялись в виде нежных единичных облаковидных теней в проекции кортикальных пластинок (рис. 3).
На 14-е сутки после операции у всех
животных наблюдали сглаживание краев отломков костных фрагментов. Размер
диастаза составлял от 0,1 до 0,2 см. Количество облаковидных теней значительно
увеличилось. Они определялись не только
в проекции кортикальной пластинки, но и
по всей площади регенерата (рис. 4). У одной собаки рентгенологическая картина
осталась без изменения.
На 21-е сутки после операции у всей
группы животных края отломков были
сглажены, плотность теней диастаза увеличилась, появлялись просветления. Линия
диастаза была прерывистая и неоднородная. В зоне регенерата наблюдались облаВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Рис. 7. Регенерат заполнен плотной
тенью.
ковидные тени и плотные включения. Периостальные тени приобретали более ограниченные формы и уплотнялись – определялось формирование кортикальной
пластинки.
Через 28 суток расстояние между отломками у 6-и собак оставалось прежнее,
а у остальных 8-и уменьшилось. Контуры костей были размытыми. Периостальная реакция в прямой проекции была хорошо выражена в виде плотных тяжей, замыкающихся над зоной перелома. В зоне
регенерата отмечались множественные
глыбчатые включения. В области перелома ветви седалищной кости у всей группы
собак края отломков были сглажены, линия диастаза - осветленная, периостальная реакция была слабо выражена (рис. 5).
У одного животного имелась слабо выраженная периостальная реакция в области
перелома тела седалищной кости.
На 35-е сутки у 8 собак кортикальная
пластинка была значительно выражена.
Периостальные тени на рентгенограммах
всех животных уплотнялись и приобретали четкие контуры, образовывая над зоной
перелома веретенообразную муфту (периостальную мозоль). По всей высоте регенерата определялись костные балки средней интенсивности в сочетании с плотными вкраплениями. В одном случае регенерат по структуре приближался к материнской кости. После клинической пробы (ротационные движения отломком при ослабленных шарнирных узлах) аппарат демонтировали у животных всей группы (рис. 6).
На 42-е сутки у 8 собак линия диастаВетеринарная патология. № 2. 2008
Рис. 8. Выражена корти-кальная
пластинка и затухающая периостальная реакция.
за была едва заметна, контуры кости - четкие (рис. 7). Определялась хорошо сформированная кортикальная пластинка. Регенерат по структуре приближался к плотности материнской кости. Костные балки
средней интенсивности выполняли регенерат по ширине и высоте. Регенерат ветви
седалищной кости по структуре не отличался от материнской и был заполнен рентгенологически плотной тенью. У 6 собак
линия диастаза была еще заметна, контуры кости – не четкие, кортикальная пластинка несформированная. Периостальная
реакция была интенсивной.
На 65-е сутки после операции у 8-и животных периостальная муфта истончалась,
зона сращения рентгенологически не отличалась от контрлатеральной области.
Структура и плотность регенерата максимально приближались к материнской кости. Кортикальная пластинка была хорошо
выражена (рис. 8). У 6-и животных линия
диастаза была едва заметна, кортикальная
пластинка – более выражена, чем в предыдущий срок исследования, а периостальная
реакция в том же состоянии.
Заключение
Таким образом, сращение переломов
тела и ветви седалищной кости рентгенологически характеризуется: разряжением
концов отломков и началом периостальной реакции через 14 суток, а эндостальной реакции – через 21-и сутки фиксации.
Через 35 суток после операции определялась хорошо выраженная периостальная
мозоль, а линия перелома была затененная
и прерывистая. У 8 собак из 14 на 42 сутки
15
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
периостальные тени уплотнялись и уменьшались в объеме, корковая пластинка была хорошо выражена. Полное обызвествление мозоли происходило на 62 сутки. У
остальных 6 собак с 42 суток периостальные тени сохраняли свои размеры и интенсивность, на 65-е сутки корковая пластинка
еще была слабо выражена.
Проведенные нами рентгенологические
исследования показали, что процесс регенерации при применяемом нами способе лечения переломов тела и ветви седалищной
кости у собак укладывается в общебиологические сроки формирования регенерата.
У 6 животных возраст, пол и вес не являлись
причиной замедления сроков регенерации.
Возможно, значение имели биохимические
факторы, что является предметом наших
дальнейших исследований.
Аппарат, применяемый для лечения
данной патологии, позволяет сохранять
двигательную функцию тазовой конечности во время всего периода фиксации. Это
способствует естественному протеканию
процессов регенерации и восстановлению
утраченных функций конечности. Поэтому, мы рекомендуем проводить снятие аппарата в сроки от 35 до 42 суток после определения рентгенологических признаков
костного сращения.
SUMMARY
The radiographic findings that were obtained by the authors that studied 14 dogs demonstrate that the regeneration process by using the applied technique for treating the fractures in the dog’s ischial body and
branch continues within the general biological terms that the regular bone regeneration requires. The fixator that is used for this pathology enables to preserve the motor function of the hip limb during the entire
period of fixation. It favours the natural course of the regeneration process as well as the restoration of the
lost limb functions. The authors recommend remove the fixator by the period of 32 – 45 days after the radiographic signs of bone union have been revealed.
Литература
1. Борисов, И. В. Рентгенологические аспекты
сращения поперечного перелома вертлужной
впадины у собак аппаратом внешней фиксации
/ И. В. Борисов, В. В. Краснов, С. В. Тимофеев //
Актуальные вопросы ветеринарной медицины
мелких домашних животных: сб. статей. Екатеринбург, 2004. Вып. 6. С. 30-32.
2. Репаративная регенерация при нестабильных
повреждениях таза у собак при использовании
аппарата внешней фиксации / Н. М. Мельников,
И. А. Подмогин, К. П. Кирсанов, И. А. Меньщикова // Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных: Материалы международной научно-практической конференции Троицк, 2000. С. 128-129.
3. Силантьева Т.А., Кубрак С.А. Рентгено-морфологическая характеристика сращения перелома
тела подвздошной кости в условиях внешней
аппаратной фиксации в эксперименте / Т.А. Силантьева, С.А. Кубрак // Актуальные проблемы
ветеринарной хирургии Материалы международной научно-практической конференции,
посвященной 70-летию кафедры хирургии. Воронеж, 1999. С. 63-65.
4. Шевалаев Г. А. Динамика сращения переломов
5.
6.
7.
8.
вертлужной впадины и тазового кольца в эксперименте / Г. А Шевалаев, Г. Л Акаемов, К. К.
Стэльмах, К. П. Минеев // Клиника и эксперимент в травматологии и ортопедии: Тез. докл.
юбил. Науч. Конф. НИЦТ «ВТО», 26-28 января
1994 г. Казань 1994. С. 204-206.
Шерстнев, С.В. Чтение рентгеновских снимков.
Рентгенодиагностика травматических повреждений, заболеваний, инородных тел у кошки и
собаки / С.В. Шерстнев Екатеринбург, Филантроп, 2002. 118с.
Braden T.D. Fracture Game 2000. Dr. Terri Braden
College of Veterinary Medicine Michigan State University, 2000 1 электорн. опт. диск (CD-ROM).
Messmer M., Montavon P.M. Pelvic fractures in the
dog and cat: a classification system and review of
556 cases. Clinic of Small Animal Surgery, University of Zьrich, Zьrich, Switzerland Vet. Comp. Orthop.Traumatol. 2004. 17. P. 167-183.
Soissons E.R.M. Etude therapeutique des fractures
du bassin et des luxations sacro-iliaques chez les
carnivores domestiques: Synthese bibliographique:
These Pour le doctorat veterinaire, prйsentй et
soutenue publiquement en 1988 devant l’universitй
Paul-Sabatier De Toulouse. Toulouse, 1988. 104 p.
БАН-БО Б.А.
Кафедра ветеринарной патологи РУДН, Москва
ОСОБЕННОСТИ ЭПИЗООТОЛОГИИ БОЛЕЗНИ
НЬЮКАСЛА КУР В РЕСПУБЛИКЕ ЧАД
Период развития многих африканских стран после освобождения от колониальной зависимости характеризуется большим дефицитом продуктов питания, и, прежде всего, продуктов животного происхож16
дения. Проблему в значительной степени
могло бы решить развитие промышленного птицеводства, как это сделали во многих
странах Европы и Америки. Но на пути такого развития оказалась недооценка этой
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Картограмма
Сахельская и Суданская зоны республики Чад,
в которых проведено эпизоотологическое обследование хозяйств.
отрасли народного хозяйства и незнание
экономической, питательной и социальнокультурной значимости продукции птицеводства (2). Одной из основных причин препятствующих развитию этой отросли оказалось распространение болезни Ньюкасла
кур. Многие авторы отмечают, что в странах Африканского континента смертность
от нее колебяется от 60 до 100%.
Для уточнения эпизоотической ситуации мы провели обследование 372 приусадебных хозяйств в Сахельской и Суданской зонах республики Чад. При этом уделяли внимание на выяснение целей разве-
дения птиц, условий их содержания и кормления, учитывали количество птиц в стаде,
их возраст, число заболевших и показатель
заболеваемости, число павших и показатель смертности, выясняли из каких мест
и в какие сроки поступала птица. При обследованиях оценивали санитарное состояние мест содержании кур, условия утилизации трупов и возможности контактов с дикой птицей.
На картограмме показано расположение зон, в которых проведено эпизоотологическое обследование птицеводческих
хозяйств на предмет установления распространения болезни Ньюкасла кур.
Результаты эпизоотологического обследования птицеводческих хозяйств в Сахельской и Суданской зонах представлены
в таблице.
Установлено, что в настоящее время в
республике каждая семья содержит в течение года в среднем 28 кур, а число имеющих птиц более 42 млн. Многие сельские семьи содержат кур только для своих нужд. Некоторые выращивают их для
рынка. Но расширению производства куриного мяса и яиц препятствуют большие потери по причине вспышек болезни
Ньюкасла. Следует отметить, что смертность молодых кур от этой болезни в обследованных хозяйств несколько выше,
чем старых кур.
Диагноз на болезнь Ньюкасла ежегодно подтверждали в ветеринарной и зоотехнической лаборатории Фарша, расположенной в г. Нджамене, столице республики
Чада. В этой лаборатории из каждого неблагополучного пункта проводили единичные исследования патматериала. В остальТаблица
Результаты эпизоотологического обследования птицеводческих
хозяйств в Сахельской и Суданской зонах республики Чад
Обследовано
хозяйств
В них имелось кур с апреля по июль 2007 года
Смертность
от болезни Ньюкасла %
Фианга
40
1475
62
Лере
31
1321
36
Мунду
42
1122
90
Байбокум
35
1164
60
Бонгор
47
950
33
Пала
62
2432
36
Геленденг
50
1275
73
Суданская зона
307
9739
55,7
Нджамена
39
377
58
Карал
26
710
71
Сахельская зона
65
1087
64,5
Итого
372
10826
55
Провенции
Ветеринарная патология. № 2. 2008
17
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Диаграмма 1
Удельный вес гибели кур от болезни Ньюкасла в Суданской зане республики Чад
Диаграмма 2
Удельный вес гибели кур от болезни Ньюкасла в Сахельской зане республики Чад
ных случаях диагноз на болезнь Ньюкасла
ставили по клиническому проявлению болезни, патологоанатомическим изменениям и эпизоотологическим показаниям. Основным критерием болезни местные ветеринарные работники считают геморагический поясок на границе железистой и
мышечной части желудка
Болезнь Ньюкасла ежегодно регистрируют во всех провинциях Суданской и Сахельской зон республики Чад, смертность
колеблется от 50 до 100% (3). Но как показано на диаграммах, удельный вес погибших кур в Суданской зоне колеблется от 26
до 99%, а в Сахельской от 49 до 77%.
Таким образом проведенное эпизоотологическое обследование позволяет делать вывод, что болезнь Ньюкасла в республике Чад распространена повсеместно.
Уровень заболеваемости кур тесно связан с концентрацией птиц на определенных площадях. Но это же обследование
18
показывает, что наиболее благоприятна
для развития птицеводства промышленного типа в республике Чад, Сахельская
зона. Уже в настоящее время в этой зоне несколько ниже смертность кур от болезни Ньюкасла (77% смертности против
99%). Она охватывает 43% территории
республики против 10% Суданской зоны. 47% территории республики занимает пустыня Сахара, непригодная для развития сельского хозяйства. В Сахельской
зоне сконцентрировано всего 8,7% сельского населения против 27,3% в Суданской зоне. Это особенность благоприятна
для предупреждения появления болезней
птиц и, особенно, болезни Ньюкасла. Выгодна она и для предпринимателей, заинтересованных в развитии промышленного птицеводства.
Для развития промышленного птицеводства потребуется правительственное
решение, регламентирующее режим соВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
держания кур в приусадебных хозяйствах
и государственный ветеринарный надзор
над благополучием и оборотом птиц в республике. Это решение должно определить
для промышленного птицеводства регионы, диаметром не менее 100 км, в которых
должно быть запрещено содержание птиц
в приусадебных и других хозяйствах.
Для обеспечения благополучия птицеводства и, особенно, крупных птицеводческих промышленных хозяйств потребуются и другие профилактические санитарные
и гигиенические меры в том числе и меры
направленные на отпугивание диких птиц.
УДК 619/06:615.3-053-636.082
В.И. Беляев, А.Л. Индюков
Всероссийский научно-исследовательский ветеринарный институт
патологии, фармакологии и терапии (ВНИВИПФиТ)
ЭФФЕКТИВНОСТЬ ЦИДИСЕПТА-О
ПРИ КОЛИБАКТЕРИОЗЕ ПОРОСЯТ
И ВЛИЯНИЕ ЕГО НА РЕПРОДУКТИВНЫЕ
ФУНКЦИИ СВИНОМАТОК
По данным А.Г. Шахова (2002г.) в 2000
году только незаразными болезнями заболело 7562,4 тыс. поросят, что составило к
приплоду 55,48%, а пало 14,0%. Из общего количества павших свиней на долю поросят приходится 89,9%, в том числе падёж
поросят от желудочно – кишечных болезней составил 57,5% [1].
Увеличение производства свинины непосредственно связано с сохранностью молодняка, особенно в условиях промышленной технологии ведения отрасли. Однако
концентрация молодняка в крупных промышленных свиноводческих комплексах
сопряжена с высокой заболеваемостью
желудочно-кишечными болезнями бактериальной этиологии [2,3]. При этом наибольший удельный вес среди желудочнокишечных заболеваний поросят приходится на долю колибактериоза, сальмонеллеза и дизентерии.
В связи с этим в борьбе с подобными
кишечными инфекциями поросят в комплексе ветеринарных мероприятий необходимо использование новых антибактериальных средств, обладающих широким
спектром антимикробного действия в отношении основных возбудителей – энтеробактерий.
Особого внимания заслуживает разработка новых препаратов для лечения и
профилактики желудочно-кишечных заболеваний, в частности антибактериального препарата, действующим веществом которого является пара-нитро-α-хлоркоричВетеринарная патология. № 2. 2008
ный альдегид (циминаль).
По данным литературы [4] пара-нитроα-хлоркоричный альдегид циминаль применяется в медицине в составе препарата
цимезоль и цидипол в 0,3-0,4% концентрации. Циминаль используется в виде аэрозоля для лечения и профилактики гнойных
осложнений при повреждении мягких тканей, а цидипол для профилактики и лечения болезней мочеполовых путей, вызванных трепонемами, гонококками, трихомонадами. Циминаль подавляет грамположительную и грамотрицательную микрофлору, способствует эпителизации и заживлению ран. Исходя из данных свойств препарата на его основе разработан новый композиционный препарат цидисепт – о. Однако данных о его профилактических и лечебных свойствах и влиянии на репродуктивные функции в литературе нет.
Поэтому целью наших исследований
было изучение лечебных и профилактических свойств цидисепта-о и влияние его
на репродуктивные функции свиноматок и
поросят от них.
Для опыта было подобрано 10 супоросных свиноматок, аналогов по возрасту,
массе тела, количеству опоросов. Свиноматкам опытной группы (n-5) за 8-10 дней
до опороса с кормом 5 дней подряд давали
цидисепт-о в дозе 1 мл/кг массы тела, животным контрольной группы (n-5) препарат не давали. За свиноматками вели ежедневное наблюдение, учитывали поведение, прием корма и воды, общее состояние,
19
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица
Влияние цидисепта-о на репродуктивные функции свиноматок и поросят от них
Группа
Показатели
Контрольная
Опытная
Продолжительность супоросности, дней
113,6±1,7
115,6±1,1
Продолжительность родов, мин.
181,2±83,0
125,8±23,8
Количество родившихся поросят на 1 св/матку
9,8±1,1
10,0±0,5
Количество выживших поросят на 1 св/матку
9,0±1,3
10,2±0,8
Время наступления половой охоты после опороса, дней.
49,2±1,6
35,4±1,0
Вес поросят при рождении, кг.
1,04±0,03
1,09±0,4
Вес поросят на 20-й день, кг.
5,46±0,20
6,01±0,10
Вес поросят на 30-й день, кг.
9,49±0,25
9,74±0,06
продолжительность супоросности, родов,
количество родившихся поросят, время наступления половой охоты после опороса,
заболеваемость. Все свиноматки и поросята опытной и контрольной групп находились в одном помещении.
Сводные данные о влиянии цидисепта-о
на свиноматок и поросят приведены в таблице, анализ которой показал, что применение цидисепта-о свиноматкам положительно влияет на репродуктивные функции свиноматок и привесы поросят от них.
Так у свиноматок из опытной группы продолжительность супоросности была более оптимальна и составила 115,6±1,1 дней,
продолжительность родов на 55,4 минут
короче, а половая охота наступала раньше на 14 дней, чем у контрольных. Количество выживших поросят к отъему было
больше чем в контроле на 13,3%. При этом
привесы у поросят от подопытных свиноматок были выше, чем у контрольных на
20-й день на 10,2%, а на 30-й – на 2,6%.
Свиноматки опытной группы и поросята от них за период эксперимента не болели. В контрольной группе у одной свиноматки (№5) в первые сутки после родов
температура тела была равна 40,5° С, общее состояние угнетенное, дыхание и пульс
учащенные. Она плохо принимала корм и
воду, больше лежала и неохотно подпускала поросят к отдельным долям вымени, при
исследовании секрета которых установлен
субклинический мастит. Из половых путей
свиноматки выделялся слизисто-гнойный
экссудат жидкой и полужидкой консистенции с буроватым оттенком в количестве
20-50 мл., наружные половые органы были
отечны, слизистая влагалища гиперемирована, ее поросята беспокоились, сбивались
в кучу, были вялыми, истощенными и три
из них на 3-й день после опороса пали.
При вскрытии павших поросят установлено, что содержимое их кишечника жидкое, слизистая набухшая, с крово20
излияниями, покрыта слизью, мезентериальные лимфатические узлы гиперимированы, в отдельных из них кровоизлияния,
трупы истощены. При бактериологическом исследовании патологического материала (тонкий отдел кишечника) выделена культура E.coli . На основании клинических признаков и результатов лабораторного исследования установлен диагноз
– колибактериоз (энтеритная форма).
В контрольной группе у 3 поросят из 9
от свиноматки №1 и у 5 из 14 от свиноматки №4 на 16 день после опороса появился
понос, область хвоста запачкана жидкими
фекалиями светло-бурого цвета. Поросята
были малоподвижны, щетина взъерошена,
температура тела 39,1-39,8° С.
При появлении первых признаков заболевания всем больным поросятам задавали 5 дней подряд цидисепт-о в дозе 1 мл/
кг массы тела. Из 8 больных поросят один
поросенок пал на 2-й день после заболевания, остальные 7 (87,5%) – выздоровели.
Продолжительность болезни поросят составила 4,36±0,28 дней.
С целью оценки профилактических
свойств цидисепта-о поросятам от свиноматок опытной группы, через две недели после опороса с подкормкой вводили 5 дней
подряд цидисепт-о в дозе 1 мл/кг массы тела, в контрольной группе поросятам давали
только подкормку. В течение 30 дней после применения препарата поросята опытной группы (n-52) не болели, тогда, как из
49 животных контрольной группы переболело колибактериозом 11 голов, т.е. 22,4%
и из них пало 4 или 36,4% от заболевших.
Следовательно, применение цидисепта-о в
дозе 1 мл/кг поросятам на 14-й день после
опороса 5 дней подряд профилактирует заболевание их колибактериозом.
Заключение: Цидисепт-о, при применении его за 8-10 дней до опороса супоросным свиноматкам или поросятам в течение
5 дней в дозе 1 мл/кг массы тела:
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
- положительно влияет на репродуктивные функции свиноматок и поросят от
них;
- профилактирует колибактериоз ново-
рожденных поросят;
- терапевтическая эффективность препарата при колибактериозе поросят равна
87,5%
РЕЗЮМЕ
Применение супоросным свиноматкам за 8-10 дней до опороса цидисепта-о 5 дней подряд в дозе 1 мл/
кг массы тела положительно влияет на репродуктивные функции свиноматок и профилактирует колибактериоз у поросят от них. Использование 14-дневным поросятам с кормом в течение 5 дней цидисепта-о в дозе 1 мл/кг массы тела профилактирует у них колибактериоз, а его терапевтическая эффективность составляет 87,5%.
SUMMARY
Application to pregnant sows 8-10 days prior to sorts cidisept-o days on end in a doze of weight of a body of
1 ml / kg positively influences reproductive functions of sows and prevents colibacterioz at pigs from them.
Use to 14-day’s pigs with a forage within 5 days cidisept-o in a doze of weight of a body of 1 ml / kg prevents
at them colibacterioz, and his(its) therapeutic efficiency makes 87,5%.
Литература
1. Шахов А.Г. Этиология и профилактика желудочно-кишечных и респираторных болезней
телят и поросят / А.Г. Шахов // Актуальные
проблемы болезней молодняка в современных
условиях. Международная научно-практическая
конференция, Воронеж, 23-25.09.02. Мат. конф.
Воронеж, ВГУ, 2002, с. 3-8.
2. Гаффаров Х.З., Романов Е.А. Инфекционные
болезни свиней и современные средства борьбы
с ними / Х.З.Гаффаров, Е.А.Романов // Казань:
Школа, 2003, с. 2.
3. Шабунин С.В. Антимикробное действие фармакологических композиций / C.В. Шабунин //
Ветеринария. 1999. № 9, с. 47-48.
4. Машковский М.Д. Лекарственные средства /
М.Д. Машковский // М.: Медицина, 1994. 736 с.
УДК 636.93:616.36:615-015.31
Н.А. Кочуева, В.Н. Бочкарёв
ФГОУ ВПО Костромская государственная сельскохозяйственная академия,
Кострома, Российская Федерация
КЛИНИКО-ЛАБОРАТОРНАЯ ОЦЕНКА
ПРИМЕНЕНИЯ ГОМЕОПАТИЧЕСКОЙ ТЕРАПИИ
ПРИ ГЕПАТОЗЕ НОРОК
Развитие агропромышленного комплекса предусматривает увеличение сельскохозяйственного производства, поэтому современное состояние пушного звероводства требует новых подходов к ведению отрасли. Эффективность эксплуатации сельскохозяйственных животных
во многом определяется устойчивостью
маточного поголовья и получаемого приплода к воздействию агрессивных факторов окружающей среды в так называемые критические периоды онтогенеза (беременность, новорожденность). Создание
в этот период адекватных условий для существования организмов матери и плода
– обязательное условие, определяющее их
дальнейшую реактивную способность. На
многие различные по силе и действию антропогенные стрессовые факторы, сопровождающие интенсификацию животноводства, организм отвечает неспецифическими адаптационными реакциями, котоВетеринарная патология. № 2. 2008
рые характеризуются изменением интенсивности и направленности всех метаболических процессов [1, 3].
В звероводческой практике для повышения воспроизводительной способности
и плодовитости пушных зверей применяют большое количество биологически активных веществ, оказывающих прямое и
опосредованное действие на метаболизм
и функции печени [5]. Однако, использование биологических добавок, содержащих
гормоны, антиоксиданты, минеральные
компоненты и другие вещества, часто бывают дорогостоящими и не всегда безопасными для организма матери и плода.
В настоящее время наиболее прогрессивны и перспективны препараты, сочетающие экологическую безопасность, высокую эффективность, низкую себестоимость и относительную простоту применения [2]. К таким средствам относятся гомеопатические препараты, вызывающие
21
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Рисунок 1 – Динамика содержания эритроцитов (1012/л), лейкоцитов (106/л) и гемоглобина (г/л) в
крови больных гепатозом самок норок при применении Лиарсина
большой интерес в современной клинической ветеринарии. В ветеринарной практике при массовости проявления какого-либо синдрома заболевания начинают широко применяться готовые комплексные гомеопатические средства, состоящие из нескольких монопрепаратов. Одним из препаратов этого направления гомеопатии является Лиарсин (ООО «Хелвет», Москва).
При анализе заболеваемости пушных
зверей в ЗАО «Судиславль» было установлено, что у норок на протяжении ряда лет до 37,2% случаев регистрировались
клинические признаки гепатоза, наиболее
выраженные в период беременности. По
данным патологоанатомического вскрытия зверей признаки разных форм гепатоза регистрировались чаще, чем при клиническом обследовании, и обнаруживались
до 59,9% случаев у норок. С целью выяснения влияния на состояние организма при
гепатозе гомеопатической терапии нами
был использован препарат «Лиарсин», обладающий гепатотропным, регулирующим и восстанавливающим действием на
равновесие в организме, активизирует дезинтоксикационную функцию печени, дренажную систему и др. В состав препарата
«Лиарсин», первого отечественного гомеопатического препарата для ветеринарии,
входят три компонента, каждый из которых имеет широкое применение в гомеопатической практике: Lycopodium (D12),
Arsenicum аlbum (D8), Phosphorus (D12)
[4]. Этот препарат был нами использован
для улучшения обменных процессов и восстановления функции печени, так как при22
чина низкой плодовитости, эмбриональной
смертности и низкой сохранности новорожденных щенков часто связана именно
с патологией печени. При лечении заболеваний печени целью терапии является поддержка функции органа и стимуляция процесса оздоровления. Должна быть ускорена ауторегенерация паренхимы печени
и уменьшены тканевые изменения путём
устранения отложений токсинов в соединительной ткани. Терапия также должна
быть направлена в пользу увеличения синтеза гликогена и создания положительного энергетического баланса, равно как и
регенерации обменной и дезинтоксикационной функций печени [6].
Опыт проводился в условиях ЗАО «Судиславль» Костромской области на 4 группах самок норок окраса пастель с клиническими признаками гепатоза:
1-2 – подопытные группы (возраста один год (молодые норки) и два года
(взрослые норки);
3-4 – контрольные группы (возраста один год (молодые норки) и два года
(взрослые норки).
Самкам подопытных групп вводили
Лиарсин дважды внутримышечно в дозе
0,5 мл на голову в период первой половины
беременности. Самок зверей контрольной
группы с клиническими признаками гепатоза лечили по схеме хозяйства (витамины гр.В, тривитамин). Для изучения статуса обменных процессов кровь брали от 6ти животных из каждой группы до и после
применения препарата. В крови определяли содержание основных гематологичесВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Рисунок 2 – Динамика содержания глюкозы (ммоль/л), общего белка (г/л), холестерина (ммоль/л),
билирубина (мкмоль/л) и мочевины (ммоль/л) в крови больных гепатозом самок норок при введении Лиарсина
ких и биохимических показателей крови
по общепринятым методикам.
В хозяйстве у норок на протяжении ряда лет регистрировались клинические признаки гепатоза: угнетение, вялость, умеренное увеличение и болезненность печени,
симптомы гастроэнтерита (отказ от корма, частая рвота с желчью, каловые массы серо-зелёного цвета или обесцвечены,
иногда поносы), поражения нервной системы (запрокидывание головы, судороги
и эпилептические припадки), видимые слизистые оболочки анемичны, редко имели
желтушный оттенок. Наиболее выраженное клиническое проявление заболевания
отмечалось у самок в период гона и беременности, а также у молодняка в раннем
неонатальном периоде и сразу после отъёма. Установлено, что при использовании
Лиарсина клинические признаки наблюдались в течение 1-3-х дней, и в дальнейшем
рецидивов не регистрировали, тогда как у
самок контрольных групп симптомы болезни проявлялись в течение 5-6 дней и в
последующем у них неоднократно фиксировали повторные проявления гепатоза.
На протяжении опыта количество
эритроцитов и лейкоцитов (рис.1) у самок норок всех групп находилось в пределах физиологической нормы для данного вида животных. Содержание эритроцитов после введения препарата имело тенденцию к увеличению, тогда как в контрольных группах однонаправленной динамики в изменении этого показателя выявлено не было. Применения препарата приВетеринарная патология. № 2. 2008
водило к снижению количества лейкоцитов соответственно на 20,12% (Р<0,001),
23,14% (Р<0,001), в то время как в контрольных группах этот показатель оставался на прежнем уровне и составлял в среднем 6,91±0,11 – 7,41±1,01Ч10 12/л.
В начале исследования содержание гемоглобина (рис.1) было ниже нормативных показателей, характерных для норок в
среднем на 34,73% в опытных и на 33,94%
в контрольных группах. К концу исследования уровень гемоглобина в опытных
группах увеличивался на 8,18% (Р<0,001) у
молодых и 9,97% (Р<0,001) у взрослых самок, тогда как у контрольных животных
этот показатель снижался и составлял в
среднем 97,30 г/л.
СОЭ в крови норок достоверно (Р<0,01)
снижалось в опытных группах самок на
24,92% у взрослых и на 29,24% у молодых.
Однонаправленной динамики в изменении
СОЭ у контрольных зверей выявлено не
было.
В лейкограмме крови самок всех групп
в начале исследования обнаруживались
плазматические клетки. Количество нейтрофилов, лимфоцитов и моноцитов находилось в пределах физиологической нормы для данного вида животных, за исключение контрольной группы взрослых самок, у которых отмечалось увеличение
числа сегментоядерных нейтрофилов до
68,33±2,50% и низкий уровень лимфоцитов
19,67±2,07 %.
Обращает на себя внимание более выраженная динамика сегментоядерных ней23
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
трофилов и лимфоцитов у животных контрольных групп, тогда как под влиянием
Лиарсина у самок опытных групп количество этих клеток было более стабильным, в пределах средних нормативных показателей для данного вида. Также следует отметить изменения в составе молодых
форм нейтрофилов: исчезновение метамиелоцитов, снижение количества юных после введения препарата.
Биохимические исследования крови
позволили установить определенную динамику показателей (рис.2). Так, после введения препарата содержание глюкозы и общего белка увеличилось в опытных группах, причём в большей степени у молодых самок. В начале опыта показатели углеводно-белкового обмена во всех группах животных находились ниже границы
физиологической нормы для данного вида (норма: глюкоза 6,5-9,2 ммоль/л, белок
50,0-64,0 г/л).
На фоне применения Лиарсина уровень глюкозы возрос на 61,66% (Р<0,001)
у молодых зверей против 51,20% (Р<0,001)
у взрослых. В контрольных группах этот
показатель оставался практически неизменным у взрослых самок и составлял
2,48±0,14 ммоль/л против 2,47±0,04 ммоль/
л в начале опыта, тогда как у молодых животных снижался на 16,87% (Р<0,001).
Содержание общего белка в сыворотке крови достоверно (Р<0,001) увеличивалось к концу исследования во всех группах
животных на 34,5%, 47,7% в опытных и на
17,6% и 19,6% контрольных группах соответственно.
До применения препарата концентрация холестерина в сыворотке крови зверей превышала нормативные показатели на 49,2%-52,7%. Под влиянием Лиарсина у норок опытных групп содержание
холестерина достоверно (Р<0,001) снизилось до 6,89-7,30 ммоль/л, в то время как
у контрольных зверей этот показатель
находился примерно на уровне исходных
данных.
В начале исследования у всех животных отмечали выраженную билирубинемию. Под действием Лиарсина уровень билирубина в опытных группах снижался в
1,6–1,7 раза соответственно у взрослых и
молодых особей, тогда как в контрольных
группах этот показатель имел тенденцию
к увеличению и составлял в среднем 63,664,0 мкмоль/л.
Содержание мочевины в крови опытных самок норок также имело тенденцию
к снижению, причём в большей степени у
24
молодых зверей до 5,8±0,2 (Р<0,001) против 6,6±0,1 (Р<0,01) ммоль/л у взрослых.
В контрольных группах концентрация мочевины также достоверно (Р<0,01) снижалась и при повторном взятии крови составляла в среднем 7,9–8,2 ммоль/л.
В ходе опыта установлено изменение
каталитической концентрации ферментов
крови. Активность щелочной фосфатазы
(ЩФ) в начале опыта у норок была выше верхней нормативной границы в среднем на 9,07-16,68%. Применение Лиарсина
приводило к уменьшению каталитической
концентрации ЩФ. Так, у взрослых самок
активность этого фермента снижалась на
27,26% (Р<0,001), а у молодых на 32,86%
(Р<0,001), при незначительной его динамике в контрольных группах.
До применения Лиарсина активность
лактатдегидрогеназы (ЛДГ) была ниже
минимальной нормативной границы для
данного вида в среднем на 21,79-27,73%
и находилась в пределах 2009,16±108,12–
2174,23±98,34 нмоль/(сЧл). Под влиянием Лиарсина отмечалась тенденция к увеличению активности лактатдегидрогеназы на 26,98% (Р<0,001) у взрослых и на
25,65% (Р<0,001) у молодых, однако, этот
показатель так и не достиг минимальной
границы физиологической нормы. В контрольных группах однонаправленной динамики в изменении данного показателя
не выявлено.
В начале исследования у всех норок отмечали высокую активность аланинаминотрансферазы (АлАТ) и низкую активность аспартатаминотрансферазы (АсАТ).
Коэффициент де Ритиса находился в пределах 1,32-1,58. В ходе опыта каталитическая
концентрация АлАТ снижалась в опытных
группах норок на 23,53% (Р<0,05) у взрослых и 33,33% (Р<0,01) у молодых, тогда как у самок контрольных групп активность этого фермента имела лишь тенденцию к увеличению до 0,63±0,02–0,66±0,03
против 0,50±0,03–0,53±0,03 мккат/л в начале опыта.
Активность АсАТ достоверно возрастала во всех группах животных соответственно на 28,75% (Р<0,001) и 22,89%
(Р<0,01) в опытных и на 23,75% (Р<0,01) и
16,45% (Р<0,05) в контрольных.
Коэффициент де Ритиса в опытных
группах увеличивался и по окончанию
опыта находился в пределах 2,43-2,64. У
контрольных взрослых самок коэффициент де Ритиса также увеличивался и составлял 1,57 против 1,51 в начале исследования, тогда как у молодых животных
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
этот показатель снижался по сравнению с
начальными данными и к концу опыта составлял 1,39.
Тимоловая проба в начале эксперимента выявляла превышение нормативных показателей, и на протяжении всего исследования у самок опытных групп показатели
уменьшились, войдя в нормативные границы, а у зверей контрольной группы выраженных изменений не отмечено.
Таким образом, применение гомеопатического препарата Лиарсин норкам в период первой половины беременности увеличивало уровень гемоглобина, содержание
глюкозы и общего белка, а также снижало
концентрацию билирубина, холестерина,
мочевины, активность ЩФ и АлАТ, причём в большей степени у молодых самок.
Следовательно, введение Лиарсина больным гепатозом самкам норок в период беременности оказало положительное регулирующее влияние на морфологические и
биохимические показатели крови зверей
в этот напряженный этап эмбриогенеза
и оказало существенное влияние на метаболические процессы в организме, содействовало нормализации гемопоэза, снятию
гепатодепрессивного и цитолитического
синдромов.
РЕЗЮМЕ
Введение Лиарсина больным гепатозом самкам норок в период первой половины беременности оказало положительное регулирующее влияние на клиническое состояние, морфологические и биохимические показатели крови зверей в этот напряженный этап эмбриогенеза и оказало существенное
влияние на метаболические процессы в организме, содействовало нормализации гемопоэза, снятию
гепатодепрессивного и цитолитического синдромов.
SUMMARY
Introduction Liarsin being ill hepatose female minks at the period of the first half to pregnancy have rendered positive adjusting influence upon clinical condition, morphological and biochemical factors shelters
beasts on this tense embryonic stage and has rendered the essential influence upon metabolic processes in
the organism, assisted the normalization hemopoes, removing hepatodepressted and citolitie syndrome.
Литература
1. Адаптация сельскохозяйственных животных и
птицы Под ред. Б.П. Мохова. Ульяновск. ГСХА,
2004. 160 с.
2. Багаева О.С., Беспалов И.М., Иваница В.А. Модернизация рационального производства препаратов// Защита и карантин растений. 2000. № 8.
3. Владимиров Ю.А., Арчаков А.И. Перекисное
окисление липидов в биологических мембранах.
М.: Наука, 1972.
4. Воейкова А.В. Ветеринарная гомеопатия для
мелких домашних животных. М.: Изд-во ООО
«Хелвет», 2005. 81 с.
5. Дашукаева К.Г. Применение дипромония и дипроанемина для коррекции обмена веществ
и воспроизводительной способности норок //
Матер. междунар. науч.-практ. конф. «Проблемы акушерско-гинекологической патологии и
воспроизводства сельскохозяйственных животных» посвящённая 100-летию А.П. Студенцова:
Ч. 1. Казань, 2003. С. 114-117.
Koch H. Leberschutz Therapeutica // Pharmazie in
unserer Zeit, 9 Jahrg., 1980, № 3. P. 45-48.
УДК 619:578.825.1:573.6.086.83:57.083.3
М.А. Волкова, Г.В. Батченко, М.И. Шульпин, Н.С. Мудрак, Л.О. Щербакова,
В.В. Дрыгин, Ш.К. Куляшбекова
ФГУ «Федеральный центр охраны здоровья животных», г. Владимир
ПОЛУЧЕНИЕ ПРЕПАРАТОВ СПЕЦИФИЧЕСКИХ
АНТИГЕНОВ И СЫВОРОТОК ПРОТИВ ВИРУСА
БОЛЕЗНИ МАРЕКА И ИХ ИСПОЛЬЗОВАНИЕ
В ИММУНОФЕРМЕНТНОМ АНАЛИЗЕ
Вирус болезни Марека – высоко патогенный клеточно-ассоциированный альфа герпесвирус, который является этиологическим агентом болезни Марека (БМ) –
высоко контагиозного заболевания цыплят, сопровождающегося образованием Тлимфом, изменением периферических неВетеринарная патология. № 2. 2008
рвов и иммуносупрессией (5). Основным
способом борьбы с этим заболеванием является вакцинопрофилактика. Для этой
цели используются вакцины, приготовленные из трёх серотипов вирусов: аттенуированного ВБМ серотипа 1, естественно непатогенного ВБМ серотипа 2 и ВБМ серо25
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
типа 3, или вируса герпеса индеек, также
естественно непатогенного штамма. Вакцинация против БМ сопровождается выработкой как клеточного, так и гуморального иммунитета, который сохраняется в течение всей жизни птицы (9, 10, 13). Заболевание, вызываемое патогенным вирусом болезни Марека, также сопровождается выработкой антител, которые обнаруживаются через 1-2 недели после начала
инфекции. Для выявления антител к ВБМ
используют реакцию диффузионной преципитации, непрямой иммунофлуоресцентный метод и иммуноферментный анализ
(3, 9, 14, 15). Целью наших исследований
было получить активные специфические
препараты антигенов вирусов болезни Марека 1, 2 и 3 серотипов и вирусспецифических поликлональных сывороток против
этих антигенов и изучить возможность их
использования в непрямом варианте иммуноферментного анализа для выявления антител к вирусам болезни Марека.
Материалы и методы
Культивирование вируса болезни Марека.
В работе были использованы три серотипа вируса: штамм «3004» ВБМ, штамм
SB-1 ВГК и штамм FC-126 ВГИ .
Для культивирования вирусов использовали
первично-трипсинизированные
клетки куриных фибробластов 10-12 суточных СПФ эмбрионов кур фирмы «Ломан Тирцухт ГмбХ» (Германия). Трипсинизацию тканей эмбрионов и приготовление
клеточных культур проводили по методикам, разработанным в ФГУ «ВНИИЗЖ».
Лабораторное культивирование клеток и
вируса проводили в роллерных бутылях
объёмом 3 дм3, диаметром 100 см. Для вращения использовали аппарат стеллажноярусного типа на 12 бутылей. Использовался принцип плавного вращения ростовой поверхности сосудов со скоростью вращения 8-12 об/час. Посевная концентрация
клеток составляла от 0,7 до 1,5 млн./см3 в
зависимости от цели исследования. Основной средой для культивирования вирусов
БМ и клеток куриных фибробластов (КФ)
была смесь равных объемов сред: 199, Игла и 0,5% гидролизата лактальбумина на
солевом растворе Эрла (ГЛАЭ).
Питательные ростовые среды содержали 10%-ную инактивированную сыворотку крупного рогатого скота (КРС). К поддерживающей питательной среде добавляли 2-5% сыворотки крови КРС. Величина
рН ростовой и поддерживающей сред была соответственно 6,9 и 7,2.
26
Температуру инкубации нормальных
и зараженных клеточных культур поддерживали от 37,5°С до 38,5°С. Сроки культивирования зависели от целей работ и посевной концентрации и составляли от 24 до
120 часов.
Антигены. Для получения антигенов
ВБМ инфицированную первичную культуру клеток куриных фибробластов подвергали 3-х кратному замораживанию-оттаиванию. Осаждение клеток проводили
центрифугированием при 17000g в течение 25 минут. Полученный осадок клеток
подвергали дополнительному замораживанию-оттаиванию для обеспечения максимального выхода вируса из клеток. Очистку и концентрирование вируссодержащей
культуральной жидкости проводили путём
двукратного
ультрацентрифугирования
через слой 30% сахарозы при 70000g в течение 90 минут. Кратность концентрирования составляла 25-30 раз. Наличие вируса
подтверждали в ПЦР, электрофорезом в
12,5% ДСН-ПААГ и иммуноблоттингом
с вирусспецифической сывороткой. Полученные очищенные концентрированные
препараты антигенов ВБМ были использованы для иммунизации цыплят и сенсибилизации планшетов для ИФА.
ПЦР. В работе использован мультиплексный вариант полимеразной цепной
реакции (ПЦР), позволяющий выявлять
одновременно все три серотипа ВБМ по
методу, описанному ранее (1). Выделение суммарной ДНК проводили с помощью коммерческого набора «GENEPAK»
(Биоком, Москва), согласно прилагаемой
инструкции. Для амплификации использовали праймеры, комплементарные последовательности гликопротеина D. В реакции применяли как праймеры универсальные для всех серотипов (MGD2 и
MGD2a), так и специфичные к определённому серотипу.
Реакционная смесь для амплификации включала в себя буфер для ПЦР, 5nM
MgCl2, 0,8mM dNTP, праймеры 10 nM
MGD2 (5›-ttg-gat-ggg-acg-tag-ata-tga-tg-3›),
5 nM MGD2a (5›-ggg-aag-gcg-caa-ata-tgatgc-3›), 10 nM MGD3 (5›-cgc-gag-aaa-tgaaac-tgg-ttg-aga-3›), 5 nM MGD4 (5›-gtc-gtcgat-tgg-gcc-ttt-gag-3›)и 2,5 nM MGD5 (5›aga-tgt-ttc-gac-gac-gat-tgg-tag-at-3›), 5 ед.
акт. Taq-ДНК-полимеразы и 5 мкл раствора суммарной ДНК. Температурный режим
цикла составляет 94° С – 30 с, 60° С – 30 с
и 72° С – 40 с. Останавливали реакцию после 40 цикла. Результат реакции оценивали
с помощью электрофореза в 2% агарозВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
ном геле с добавлением бромистого этидия. Если на электрофореграмме наблюдается полоса величиной в 200 п. н., то в исследуемой пробе присутствует ВБМ серотипа 3, если полоса величиной 300 п.н., то в
пробе присутствует ВБМ серотипа 2 и если
450 п.н., то ВБМ серотипа 1.
Электрофорез в полиакриламидном геле и иммуноблоттинг. Электрофорез белков проводили в 12,5% ПААГе в течение
1 часа, как описано (8), при постоянном
напряжении 200 в. Вирусные белки, разделённые в 12,5% ПААГе, переносили на
нитроцеллюлозную мембрану 0.45 мкм в
течение 1 часа при напряжении 100 в с использованием аппарата для иммуноблоттинга (Mini Trans-Blot Electrophoretic
transfer cell, BioRad, США), согласно руководству. Мембрану инкубировали в 1% растворе бычьего сывороточного альбумина
в буферном растворе ТБР с рН 7.4 (0.02М
трис-HCl, 0.15М NaCl, 0.1% твин-20) (БСАТБР)) 1 час, затем обрабатывали в течение
часа сывороткой крови кур против ВБМ,
разведённой 1:50 в буфере ТБР. После инкубирования с раствором антикуриного
иммуно-пероксидазного конъюгата (KPL,
США) в течение 1 часа мембрану окрашивали субстратной смесью, включающей 4cloro-1-naphtol и 0.04% перекиси водорода.
Каждый этап заканчивался отмыванием
мембраны 3-4 раза в буфере ТБР.
Эксперимент на цыплятах. Для получения вирусспецифических сывороток против ВБМ были использованы безлейкозные цыплята, полученные из инкубационного яйца Щелковской биофабрики. Цыплята были разделены на 4 группы: 3 группы по 18 голов (опытные) и одна -5 голов
(контрольная). Опытные цыплята были
иммунизированы в 7 суточном возрасте 1, 2
и 3 серотипами ВБМ, контрольные - культуральной жидкостью не инфицированной
первичной культуры клеток куриных фибробластов. Иммунизацию цыплят проводили внутримышечно, в дозе 0,2 мл/гол.,
с интервалом в 14 дней. В качестве адьюванта использовали неполный адьювант
Фрейнда (первая иммунизация) и ИЗА-70,
в соотношении 1:1 (объём/ объём).
Непрямой вариант ИФА. ИФА проводили по общепринятой схеме с небольшими модификациями. 0,5-1,0 мкг на лунку вирусного антигена в карбонатно-бикарбонатном буфере (рН 9,6) вносили в
лунки 96-луночного пластикового планшета (Nunc, Immunoplate, Дания), инкубировали в течение ночи при 4° С, блокировали 10% раствором лошадиной сыворотки в трис-НСl буферном растворе с 0.1%
твин-20 (ТБР-Т) рН 7,4 в течение 1 часа при
комнатной температуре и затем отмывали
трёхкратно ТБР-Т. Исследуемые и контрольные сыворотки разводили в ТБР-Т,
Рис.1 . Электрофореграмма продуктов реакции амплификации фрагмента гена,
кодирующего gD ВБМ.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
27
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Рисунок 2. Электрофореграмма 1, 2 и 3 серотипов ВБМ в 12,5% ДСН-ПААГ,
окрашенном Coomassie Brilliant Blue R-250.
Таблица 1
Результаты определения в ИФА
титров антител к ВБМ (IgG) в сыворотках крови иммунизированных цыплят
Антиген
Титр антител в ИФА*
Средний
1 серотип
Минимальный
Максимальный
Средний
2 серотип
Минимальный
Максимальный
Средний
Время после иммунизации (сутки)
14
28
825
(88%)**
200
1600
15570 (100%)
400
51200
50
(0%)
50
50
418
(64%)
100
800
10763
(100%)
1600
25600
700
(50%)
100
1600
1308
(92%)
200
3200
560
100
1600
3 серотип
Минимальный
Максимальный
50
(0%)
50
50
Культура
клеток
Средний
Минимальный
Максимальный
125
100
200
42
56
5000
(100%)
800
12800
Примечание: * – титр-величина, обратная разведению,
** – процент положительных проб, положительным считали титр антител 400 и выше
вносили в лунки планшета с антигеном и
инкубировали 30 минут при 37° С, для всех
реагентов и сывороток использовали объём 100 мкл на лунку. Связавшиеся антитела определяли добавлением иммунопероксидазных препаратов анти-куриных антител против IgG (НИИЭМ им. Н.Ф. Гамалеи
(Москва)), или против IgA и IgM (фирма
Serotec Ltd, Англия) в рабочем разведении
и планшеты инкубировали при 37° С 30
28
минут. После удаления не связавшегося конъюгата добавляли субстрат АБТС (40 мМ
2,2 - азино- ди(3этил)бензтиазолинсульфо
новая кислота) с 4 мМ перекиси водорода в
100 мМ цитратном буфере (рН 4,5). Через
10 минут реакцию останавливали добавлением 1% додецилсульфата натрия и измеряли значение оптической плотности при
405 нм на спектрофотометре-ридере (SLTSpectra, Австрия).
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Титр антител в пробах сывороток определяли по конечной точке методом двукратных серийных разведений, начиная с
разведения 1:25 для IgA и 1:50 для IgM и
IgG (отношение оптической плотности
пробы к среднему значению отрицательного контроля больше или равное 2 считали положительным).
Результаты и обсуждение
Антигены вируса болезни Марека.
Очищенные и концентрированные препараты культуральной жидкости тестировали методом мультиплексной ПЦР для
выявления ВБМ. В результате исследований было показано, что в пробах присутствуют соответствующие серотипы ВБМ
(рис.1). Однако в первой и второй пробах
реакция показало присутствие двух серотипов ВБМ. Слабые полосы специфической длины указывают на то, что в пробе
1 (культуральная жидкость, содержащая
первый серотип ВБМ) наряду со штаммом
«3004» присутствует вирус герпеса индеек
(серотип 3 ВБМ), а в пробе 2 (культуральная жидкость, содержащая второй серотип
ВБМ) вместе со штаммом SB1 присутствует ВБМ серотипа 1. Возможно, это результат контаминации препаратов, произошедший в процессе культивирования, очистки
или концентрирования. Слабая интенсивность полос в пробе 1 и 2 указывает на то,
что контаминант находится в пробе в низкой концентрации и при инактивации не
окажет влияния на чистоту эксперимента. Также появление слабых полос может
быть связано с тем, что высокая концентрация вируса в пробе приводит к перекрёстному связыванию специфических праймеров, и в результате происходит амплификация с низким уровнем эффективности.
Наличие вируса в полученных препаратах подтверждали также электрофорезом вирусных белков в 12,5% ДСН-ПААГ
(рис.2). Расположение полипептидов после
электрофореза в 12,5% ДСН-ПААГ соответствовало данным, полученным другими
авторами (6, 7, 10, 14).
Специфичность полученных препаратов антигенов ВБМ была проверена в
ИФА с гетерологичными сыворотками
(специфические сыворотки к вирусам инфекционного бронхита кур, инфекционной бурсальной болезни, инфекционного ларинготрахеита, инфекционного энцефаломиелита, гриппа птиц, ньюкаслской болезни, инфекционной анемии цыплят, реовируса, микоплазмам птиц и пастереллёза птиц). Активность антигенов
всех трёх серотипов ВБМ не превышала
Ветеринарная патология. № 2. 2008
фоновый уровень (реакция с неиммунной
сывороткой).
Получение вирусспецифических сывороток против ВБМ. Для получения гипериммунных сывороток против ВБМ была
проведена двукратная иммунизации 1 серотипом, трёхкратная иммунизации 2 серотипом и четырёхкратная иммунизации 3
серотипом ВБМ, контрольная группа была иммунизирована двукратно культуральной жидкостью не инфицированной культуры клеток куриных фибробластов. Пробы крови отбирали после каждой иммунизации и исследовали в ИФА с гомологичным антигеном. Полученные результаты
представлены в таблице 1. Выборочное исследование сывороток крови перед иммунизацией на наличие антител к ВБМ показало отрицательный результат. Как видно
из таблицы 1, наиболее быстрый и сильный иммунный ответ был получен на введение антигена ВБМ 1, а самый слабый – на
ВБМ 3. При исследовании сыворотки крови против штамма «Конкур», полученной
из ВГНКИ, титр антител составил 1:800 на
антигене 1 серотипа и 1:400, при использовании антигенов 2 и 3 серотипов.
Было проведено также исследование
всех сывороток крови на наличие специфических к вирусу болезни Марека IgM и
IgA. В сыворотке крови цыплят после последней иммунизации были выявлены специфические IgA: в 70% проб от цыплят,
иммунизированных 1 серотипом ВБМ (ср.
титр 1:100), в 60% проб при иммунизации
вторым серотипом – (ср. титр – 1:150) и при
иммунизации 3 серотипом – в 20% проб
(ср. титр –1:65). В сыворотке крови цыплят, иммунизированных нормальной культурой клеток, титр антител составлял 1:251:50 на всех антигенах. Наличие IgM после
последней иммунизации было обнаружено
в 80% проб сывороток крови цыплят, иммунизированных ВБМ 2 (ср. титр – 1:920), в
15% проб сывороток цыплят, иммунизированных ВБМ 1 (ср. титр 1:304) и 27% - иммунизированных ВБМ 3 (ср. титр – 1:287).
Титр антител в сыворотке крови цыплят,
иммунизированных нормальной культурой клеток, составлял 1:50-1:100.
Таким образом, если после последней
иммунизации IgG были обнаружены в сыворотках крови всех иммунизированных
цыплят, то наличие IgA и IgM установлено
не во всех пробах крови, причём IgA больше выявили у цыплят, иммунизированных
1 и 2 серотипом ВБМ, а IgM - 2 серотипом.
Исследование антигенного перекрёста
между тремя серотипами ВБМ. Исследо29
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Рисунок 3. Титр антител к ВБМ в специфических сыворотках, полученных на три серотипа ВБМ
и неинфицированную культуру клеток куриных фибробластов, в ИФА с антигенами ВБМ 1, 2 и
3 серотипов.
Рисунок 4. Иммуноблоттинг белков ВБМ 1, 2 и 3 серотипов и неинфицированной культуры клеток куриных фибробластов со специфической к ВБМ серотипа 1 сывороткой крови кур.
вания, проведённые рядом авторов, показали, что три серотипа ВБМ имеют много
общих антигенных детерминант. Сыворотки, полученные на один серотип, реагировали с антигенами других серотипов, хотя
и не так сильно, как с гомологичным, поэтому для определения серотипа вируса, как
правило, используют типоспецифические
моноклональные антитела (2, 3, 9, 11, 12).
С целью выявления антигенного перекрёста между тремя серотипами ВБМ, сы30
воротки, полученные на каждый серотип
ВБМ и неинфицрованную культуру клеток куриных фибробластов, были тестированы в ИФА со всеми тремя серотипами ВБМ (рис.3). При этом сыворотка крови, полученная на антиген ВБМ 3, показала одинаковое значение титра антител на
всех антигенах. Сыворотки, полученные
при иммунизации цыплят 1 и 2 серотипами
ВБМ, имели одинаковый титр антител при
исследовании на обоих этих антигенах, но в
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
4 и 2 раза ниже, соответственно, при тестировании с антигеном 3 серотипа.
Данные ряда исследователей показали, что в гуморальном иммунном ответе против вируса болезни Марека участвуют антигены А, В и рр38. Основной интерес представляет структурный антиген
В, который состоит из комплекса трёх гликопротеинов с молекулярном весом 100,
60 и 49 кД (gp100, gp60, gp49). Этот антиген присутствует на поверхности клеток и
в цитоплазме инфицированных клеток, он
может вызывать нейтрализацию специфических антител. Антитела к этому антигену нейтрализуют как клеточно-свободный, так и клеточно-связанный вирус. Была отмечена разница в структуре антигена В трёх серотипов ВБМ (4, 10). Антиген
А (gp57/65) был идентифицирован в надосадочной жидкости инфицированных клеточных культур, он присутствует на поверхности клеток и в цитоплазме инфицированных клеток (14). Антиген pp38 – это
комплекс вирусспецифического фосфорилированного белка, который содержит полипептиды с молекулярной массой 36-39
кД и 24 кД, он идентифицирован в клетках
лимфомы при болезни Марека, и его гомологи обнаружены также для ВБМ 2 и вируса герпеса индеек (6,7).
При иммуноблоттинге белков ВБМ 1, 2
и 3 серотипов и неинфицированной культуры клеток куриных фибробластов со
специфической к ВБМ серотипа 1 сывороткой крови кур (рис.4) идентифицировали гомологичные вирусные белки и олигомеры всех трёх серотипов. Специфическая сыворотка не связывалась с неинфицированной культурой клеток. Мы не могли
точно идентифицировать положение вирусных белков, соответствующих определённым антигенам, так как для этого необходимо использовать моноклональные
антитела. Иммуноблоттинг подтвердил
данные ИФА о слабом взаимодействии антител к ВБМ 1 с вирусными белками 3 серотипа вируса БМ.
Полученные нами результаты подтверждают наличие антигенного перекрёста между тремя серотипами вируса болезни Марека в серологических и иммунологических реакциях и свидетельствуют о
том, что в ИФА для максимального выявления антител к ВБМ целесообразнее использовать антигены 1 и 2 серотипа.
Выводы
Были получены активные специфичные препараты антигенов трёх серотипов вируса болезни Марека, поликлональные гипериммунные сыворотки против трёх серотипов ВБМ, которые могут
быть использованы при постановке ИФА
с целью выявления антител к вирусу болезни Марека.
Работа выполнена в рамках проекта
№ 3014.
РЕЗЮМЕ
Получены очищенные концентрированные препараты антигенов вируса болезни Марека (ВБМ) 1,
2 и 3 серотипов. Наличие вируса подтверждено в ПЦР, электрофорезом в 12,5% ПААГЭе и иммуноблоттингом с вирусспецифической сывороткой. Получены вирусспецифические сыворотки крови кур к трём серотипам ВБМ. Изучена возможность использования антигенов и сывороток в ИФА
для исследования гуморальных антител.
SUMMARY
Purify concentrated MDV antigens of 1, 2 and 3 subtypes were obtained. The presence of virus was confirmed by PSR, SDS-PAGE and Western immunoblot analysis. Specific sera against 3 MDV subtypes were
obtained. Using of the antigens and sera in indirect ELISA for research of humoral antibodies was analyzed.
Литература
1. Шульпин, М.И. Выявление вируса болезни
Марека трёх серотипов с помощью мультиплексной полимеразной цепной реакции/М.И.
Шульпин, Е.Н. Чернышова, И.А. Чвала, В.П.
Мельников и др.// 1-й Междунар. вет. конгр. по
птицеводству. М., 2005. С.161-163.
2. Ярыгина, Е.И. Получение антигенов вируса болезни Марека, различающихся по перекрёстной
серотипической активности/Е.И. Ярыгина, В.А.
Лукина, Б.В. Соловьёв и др.//Вестник Российской академии с/х наук. 2001. №5. С.67-70.
3. Ярыгина, Е.И. Разнообразие поликлональных
антител к серотипам вируса болезни Марека
– один из критериев поствакцинального ответа/
Е.И. Ярыгина// Доклады Российской Академии
с/х наук. 2005. №5. С. 57-59.
4. Barrow, D.A. Infection of macrophages by a lymphotropic herpesvirus: a new tropism for Marek’s
disease virus/A.D. Barrow, S.C. Burgess, S.J. Baigent
Ветеринарная патология. № 2. 2008
5.
6.
7.
8.
at all.// Journal of General Virology. 2003. V.84.
P.2635-2645.
Calnek, B.W. Pathogenesis of Marek’s disease virus
infection. Current Topiks in Microbiology and Immunology. 2001. V.255. P.25-55.
Chen, X. Identification of a unique Marek’s disease
virus gene wich encodes a 38-kilodalton phosphoprotein and is expressed in both lytically infected
cells and latently infected lymphoblastoid tumor
cells/X. Chen, P.J.A. Sondermeijer, L.F. Velicer//
Journal of Virology. 1992. V.66. P.85-94.
Gimeno, I.M. The pp38 gene of Marek’s disease
virus (MDV) is necessary for cytolytic infection of
B cells and maintenance of the transformed state
but not for cytolytic infection of the feather follicle
epithelium and horizontal spread of MDV/ I.M.
Gimeno, R.L. Witter, H.D. Hunt at all// Journal of
Virology. 2005. V.79. P. 4545-4549.
Laemmli U.K. Cleavage of structural proteins dur-
31
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
ing the assembly of the head of the bacteriophage
T4 // Nature. 1970. V. 227. P. 680-685.
9. Lee, L.F. Humoral immune responses to inactivated
oil-emulsified Marek’s disease vaccine/ L.F. Lee,
R.L. Witter// Avian diseases. 1991. V.35. P.452-459.
10. Nazerian, K. Protection against Marek’s disease by
a fowlpox virus recombinant expressing the glycoprotein B of Marek’s disease virus/ K.Nazerian, L.F.
Lee, N. Yanagida, R Ogava// Journal of Virology.
1992. V.66. P.1409-1413.
11.Schat, K.A. Immune responses to Marek’s disease
virus infection/K.A. Schat, C.J. Markowski-Grimsrud// Curr Top Microbiol. Immunol.. 2001. V.255. P.
91-120.
12. Silva, R.F. Monoclonal antibody-mediated immunoprecipitation of proteins from cells infected with
Marek’s disease virus and turkey herpesvirus. R.F.
Silva, L.F. Lee //Virology. 1984. V.136. P.307-320.
13. Tischer, B.K. DNA vaccine containing an infectious
Marek’s disease virus genome can confer protection
against tumorigenic Marek’s disease in chickens/
B.K. Tischer, D. Schumacher, M. Beer at al.//Journal
of General Virology. 2002. V.22. P.2367-2376.
14. Tischer, B.K.High-level expression of Marek’s disease virus glycoprotein C is detrimental to virus
growth in vitro/ B.K. Tischer, D. Schumacher, D.
Chabanne-Vautherot at all.// Journal of Virology.
2005. V. 79. P.5889-5899.
15. Zelnik, V. An Enzyme-linked immunosorbent assay
(ELISA) for detection of Marek’s disease virusspecific antibodies and its application in an experimental vaccine trial/ V.Zelnik, O. Harlin, F.Fehler at
al.//Journal of Veterinary Medicine Series B. 2004.
V.51. P.61-67.
УДК 576.8:616-002.5
З.Г. Воробьева, М.А. Кульчицкая, К.Н. Слинина, А.Л. Лазовская
ГНУ Научно-исследовательский ветеринарный институт – НИВИ,
г. Нижний Новгород
АНТАГОНИСТИЧЕСКАЯ АКТИВНОСТЬ
ПРОБИОТИКОВ ПО ОТНОШЕНИЮ
К МИКОБАКТЕРИЯМ ТУБЕРКУЛЕЗА
Широко известна эффективность применения различных пробиотиков для профилактики и коррекции дисбиозов у людей и животных, вызванных многими патогенными и условно-патогенными микроорганизмами. В процессе жизнедеятельности
бактерии-пробионты вырабатывают комплекс биологически активных соединений,
избирательно воздействующих на болезнетворные бактерии. Например, лизоцим
резко снижает способность грамотрицательных бактерий к делению и размножению, молочная кислота замедляет их рост,
перекись водорода разрушает их клеточную стенку. Бактериоцины обладают бактериостатистическим действием на грамотрицательную и грамположительную
флору. По силе воздействия на негативную
кишечную микрофлору, а также на микрофлору влагалища препараты из живых
бактерий могут быть альтернативой антибиотикам. Дополнительным механизмом,
усиливающим защитные свойства пробиотиков, является обмен сигнальными молекулами с иммунокомпетентными клетками слизистых оболочек, стимулирующий
продукцию секреторного иммуноглобулина А, комплемента, лизоцима и блокирующий прикрепление патогенных бактерий к
поверхности слизистой (1,3,4).
32
В ветеринарии назрела необходимость
применения пробиотиков с антагонистическими свойствами против микобактерий
туберкулеза в связи с тем, что молодняк
скота обычно заражается туберкулезом
алиментарным путем в первые дни жизни.
В литературе хорошо освещены различные методы изучения антагонистического
действия пробиотиков на различные бактриальные патогены. Чаще всего культуры засевают на чашки Петри с питательным агаром перпендикулярными штрихами или перекрещивающимися каплями. Существенно
отличаются и критерии оценки полученных
результатов, но чаще всего о степени антагонистической активности бактерий судят
по величине зоны задержки роста индикаторных микробов. Значительно реже оценивается количество индикаторных бактерий
(КОЕ), на которое представители пробиотиков оказывают ингибирующее действие.
Поэтому данные, получаемые различными
авторами при изучении микробного антагонизма не всегда однозначны (2).
Трудность изучения антагонизма пробиотиков и патогенных микобактерий заключается в особенностях биологии этих
видов: очень медленный рост и особые
требования к средам затрудняют их одновременное выращивание.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Целью данного исследования явилась
разработка различных способов изучения
антагонистической активности пробиотика «Окарин» по отношению к микобактериям различных видов.
Материалы и методы. В работе использованы штаммы микроорганизмов,
полученные из ГИСК им.Л.А.Тарасевича
(г.Москва): M.tuberculosis (шт.Академия),
M.bovis (шт. Vallee, Ravenal, BCG), M.avium
(шт.ГИСК), M.phlei (1). Пробиотик «Окарин» выпускает фирма ИмБио (г.Нижний
Новгород) филиал фирмы «Микроген»
(г.Москва) в лиофилизированной форме.
В состав пробиотика «Окарин» входят три
штамма Escherichia coli (Г-35-1/59, Г-352/60, Г-35-3/61) и один штамм Enterococcus
faecalis (Г – 35- 4/62).
Лиофилизированный пробиотик для
работы разводят в изотоническом растворе хлорида натрия так, чтобы в 1мл содержалось 5±2 х 107КОЕ.
Микобактерии культивировали на
плотных яичных средах ЛевенштейнаИенсена и Финн-2. Инкубирование пробиотика, микобактерий и смеси пробиотика
с микобактериями проводили на среде Сотона. Разведение культур микобактерий в
изотоническом растворе хлорида натрия
проводили так, чтобы в контроле при посеве 10мкл суспензии микроорганизмов на
плотную среду вырастало от 20 до 40 колоний. Эти разведения отрабтывали для каждого штамма отдельно.
Фильтраты культуральных жидкостей готовили с помощью стерилизующих
фильтров type GSO 0,22мкм для шприцов
с предварителным центрифугированием
при 4000 об\мин. Гретые фильтраты и гретую суспензию пробиотика «Окарин» получали прогреванием пробирок с культуральными жидкостями на водяной бане
при 100° С в течение 5-10 минут.
Опыты по изучению бактерицидной
активности фильтратов проводили следующим образом:
1 серия – засевали суспензию микобактерий в объеме 10мкл, содержащую взвесь
с концентрацией приблизительно 500 млрд. клеток в 1 мл с последующим фильтрованием через 6 суток выращивания
2 серия – засевали суспензию пробиотика в объеме 10 мкл, содержащую
5-10х107 КОЕ в 1мл с последующим
фильтрованием через 6 суток выращивания (серия 2а – негретый фильтрат, серия
2б – гретый фильтрат )
3 серия – засевали суспензию пробиотика в объеме 10 мкл, содержащую
Ветеринарная патология. № 2. 2008
5-10х107 КОЕ в 1мл и через 6 суток выращивания при 37°С прогревали при 100°С
на водяной бане в течение 5-10 минут.
4 серия – засевали суспензию пробиотиков и микобактерий ( отдельно для 4 видов:
а, б, в, г) в тех же объемах соответственно
с последующим фильтрованием через 6 суток выращивания.
Измеряли рН культуральных фильтратов. Наслаивали фильтраты и гретую суспензию пробиотика на плотные питательные яичные среды в количестве 1мл и выдерживали в термостате при 37°С до полного всасывания в среду. После всасывания
фильтратов и суспензии проводили посевы микобактерий пяти видов на 3 пробирки с плотной средой и культивировали до
40 дней при 37°С.
Во всех опытах проводили контрольные посевы для сравнительного подсчета колоний на средах с культуральными фильтратами и без них. Опыты считали правильно поставленными, если количество микроорганизмов в контрольных
посевах колебалось от 20 до 40 колоний
и было легко считаемым. После подсчета колоний в контроле и в опыте вычисляли индекс блокирования роста (ИБР):
ИБР = К1/К2 , где К1 – количество колоний в контроле, К2 – количество колоний
в опыте.
Все опыты проводили в трехкратной
повторности._
Результаты и обсуждение. Посевы микобактерий в среду Сотона не выявили их
роста в течение 10 суток инкубации. Посевы пробиотика «Окарин» на среду Сотона дали через 2 суток достаточно хороший
рост, сопоставимый по плотности с посевом на мясо-пептонный бульон.
Измерение рН фильтратов показало
незначительные колебания от 6,9 до 7,2,
что не могло отразиться на росте микобактерий. В опытах по изучению воздействия
культуральных фильтратов (четырех серий) на рост микобактерий (табл.) были
получены следующие результаты: культуральные фильтраты серии 1 не оказывали
действия на скорость роста и количество
колоний микобактерий при выращивании
их на двух питательных средах.
Фильтраты серии 2 ( гретые и негретые) снижали число колоний микобактерий
в 2,4 – 3,6 раза. Гретая суспензия пробиотика «Окарин» (серия 3) оказывала такое же
действие на микобактерии как и его фильтраты, снижая число колоний микобактерий в 2,4 раза . Фильтраты серии 4 (совместное инкубирование пробиотика и микобак33
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица
Индекс блокирования роста (ИБР) препарата «Окарин»
по отношению к штаммам патогенных микобактерий
Штаммы
№ серии
опытов
Варианты опыта
1
Фильтрат суспензии микобактерий
Фильтрат пробиотика негретый
Фильтрат пробиотика гретый
Суспензия пробиотика гретая
Фильтрат пробиотика с M.bovis(BCG)
Фильтрат пробиотика с Mtuberc/(Acad.)
Фильтрат пробиотика с M/avium (ГИСК)
Фильтрат робиотика с M.phlei (№1)
2а
2б
3
4а
4б
4в
4г
M.avium M.tuberc. M.bovis M.bovis
(ГИСК) (Академия) (Vallee) (Ravenal)
M.bovis
(BCG)
Среднее
значение
ИБР
1,0
1,0
1,0
1,0
1,0
1,0
3,2
2,0
1,3
4,6
1,0
2,42
5,0
1,0
4,0
1,48
6,0
3,67
1,4
2,6
1,0
1,0
6,0
2,4
15,8
5,5
5,1
5,5
7,1
7,8
10,0
3,1
5,1
6,5
5,36
6,07
8,5
5,2
1,7
12,75
10,0
7,62
14,0
5,3
9,6
-
-
9,6
Примечание: - – исследование не проводили
терий четырех видов) существенно влияли
на количество выросших колоний микобактерий, снижая их число в 6-9 раз.
Отмечено также бактериостатическое действие фильтратов (серия 4) : появление колоний в присутствии таких препаратов отставало на 2-10 дней по сравнению
с контролем. Исследование влияния срока
хранения культуральных фильтратов при
4°С выявило их активность в течение 1 года хранения ( срок наблюдения).
Таким образом, в результате проведения опытов разработаны два способа изучения антагонистической активности пробиотика «Окарин» по отношению к четырем видам микобактерий. Наиболее перспективным оказался способ, основанный
на совместном инкубировании пробиотика и микобактерий с последующим получением стерильного фильтрата и изучения
его действия на рост колоний микобактерий. Повидимому совместное инкубирование пробиотика «Окарин» и микобактерий
стимулирует выработку пробиотиком бактериоцинов, угнетающе влияющих на рост
культур микобактерий.
Особый интерес представляют собой
фильтраты, полученные при совместном
инкубировании пробиотика и M.phlei. Это
сапрофитный вид микобактерий, достаточно далекий по таксономии от туберкулезных микобактерий, однако фильтрат,
полученный после совместного инкубирования с пробиотиком так же активен, как и
фильтраты, полученные после инкубирования пробиотика с туберкулезными микобктериями.
Выводы.
1. Разработаны способы изучения антагонистического воздействия пробиотика «Окарин» на патогенные микобактерии
с использованием стерильных культуральных фильтратов, полученных в результате
выращивания пробиотика и пробиотика с
микобактериями разных видов.
2. Фильтраты, полученные после выращивания пробиотика «Окарин» на среде Сотона (гретые и негретые) оказывают
умеренное влияние на рост микобактерий,
снижая КОЕ в 2-3 раза.
3. Пробиотик «Окарин» в жидкой синтетической среде Сотона в присутствии
микобактерий вырабатывает бактерицидные вещества, оказывающие бактериостатическое и бактерицидное действие на
рост патогенных микобактерий и снижающее КОЕ микобактерий при выращивании
на плотных питательных средах в 6-9 раз.
РЕЗЮМЕ
Разработаны способы изучения антагонистической активности пробиотика «Окарин» на патогенные микобактерии с использованием стерильных культуральных фильтратов, полученных в результате выращивания пробиотика или пробиотика с микобактериями в жидкой среде Сотона. В присутствии микобактерий пробиотик вырабатывает активные бактериоцины, снижающие КОЕ микобактерий при выращивании на плотных средах в 6-9 раз.
34
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Литература
1. Данилевская Н.В. Фармакологические аспекты
применения пробиотиков.// Ветеринария, 2005,
№11, с. 6-10
2. Ермоленко Е.И., Исаков В.А., Ждан-Пушкина С.Х., Гец В.В. Количественная оценка антагонистической активности лактобацилл.//
ж.Микробиология,2004, №5, с.94-98
3. Панин А.Н., Малик Н.И. Пробиотики – неотъемлемый компонент рационального кормления
животных.// Ветеринария, 2006, №7, с. 3-6.
4. Тюрин М.В., Шендеров Б.А., Рахимова Н.Г. К
механизму антагонистической активности лактобацилл // ж.Микробиология, 1989, №2, с. 3-8.
УДК: 636.22/.28:612/:574 (470.55)
Е.Н. Воронина
ФГОУ ВПО Уральская государственная академия ветеринарной медицины
ВЛИЯНИЕ ЭКОЛОГИЧЕСКИХ ФАКТОРОВ
НА ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ ФУНКЦИИ ОРГАНИЗМА
И ДЕЯТЕЛЬНОСТЬ ФУНКЦИОНАЛЬНЫХ
СИСТЕМ У ТЕЛЯТ В БИОГЕОХИМИЧЕСКОЙ
ПРОВИНЦИИ ЮЖНОГО УРАЛА
Зона Южного Урала относится к числу
неблагополучных регионов, так как на ее
территории имеется большое количество
биогеохимических провинций. (А.А. Кабыш, 1967, 2006, Г.П. Грибовский, 1996, Т.А.
Шепелева, 1998 и др).
На территории Челябинской области
химический состав питьевой воды, почв
и произрастающих на ней растений чрезвычайно разнообразен. Здесь обнаруживаются районы с повышенным или пониженным содержанием тех или иных химических элементов. Например, Октябрьский район характеризуется недостатком
Co, Mn, Cu и избытком B, Ni, Fe, Красноармейский район – недостатком Co, Mn, S
и избытком Fe, F, Cu, B, Si, Ti, Брединский,
Карталинский и Варненский районы – недостатком Co, Mn, I и избытком Mg, Ni, Sr,
Ba и другие.
Данное обстоятельство вызывает различную биологическую реакцию организма, особенно растущего (приспособление,
эндемические заболевания, уродства и гибель). Так, в ГУ ОПСП «Троицкое» Челябинской области, являющееся, на сегодняшний день, самым крупным сельскохозяйственным предприятием, занимающимся разведением и выращиванием крупного рогатого скота, наблюдали различные
отклонения в развитии животных: телята часто рождались слабыми, при хорошем содержании и кормлении у животных снижалась продуктивность. Кроме того, у телят наблюдалась низкая сопротивВетеринарная патология. № 2. 2008
ляемость к различным негативным факторам внешней среды (перепады температуры, высокая влажность), в результате чего
у животных возникали простудные заболевания, которые часто проходили с рецидивами и гибелью.
Поэтому одной из задач нашей работы
было выяснение влияния экологических
факторов на физиологические функции
организма, деятельность функциональных
систем клинически здоровых (условно) телят в условиях ГУ ОПСП «Троицкое» Челябинской области - геохимической провинции Южного Урала. Для этого, нами
были проведены клинические обследования телят, лабораторные исследования
кормов, воды, молока, используемого для
выпаивания телятам, и крови.
При общем обследовании телят в возрасте до 4 месяцев было установлено, что
примерно у 25-30% животных наблюдалась задержка формирования скелета и
мышечной ткани, ригидность мышц, повышенная возбудимость, анемичность,
сухость и складчатость кожи, бледность
слизистых оболочек, нарушения в развитии шерстного покрова (огрубение, плохое удержание волоса в волосяных луковицах, его тусклость, ломкость, взъерошенность, алопеции, утолщение эпидермиса (рис. 1, 2).
При клиническом осмотре молодняка были выявлены различные нарушения
функций желудочно-кишечного тракта
почти у всех обследуемых животных (ги35
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Рис. 1. Клинически здоровые телята (условно).
Истощение, взъерошенность, алопеции.
Рис. 2. Клинически здоровые телята (условно).
В области ушной раковины - плохое удержание
волоса, его тусклость, ломкость.
потонии преджелудков, вялая жвачка и отрыжка). В некоторых случаях перкуссией
в области печени устанавливали болезненность. У всех обследуемых животных наблюдали учащение дыхания (от 23 до 27
дыхательных движений в минуту) и пульса
(от 85 до 106 ударов в минуту).
Исследование костной ткани показало,
что почти у 50% телят наблюдалась болевая реакция, а у 20-25% - рассасывание 13го ребра на 1/3-1/2.
В ГУ ОПСП «Троицкое» (данные 2001
- 2003 гг.) выявили, что почти во всех исследуемых кормах прослеживался дефицит кальция, фосфора, магния, меди и избыток калия, марганца, железа, кобальта
и цинка. В сене кобальт превышал МДУ
на 7,4%, в силосе железо и кобальт – на 59
и 27,5%, в концентратах – железо на 10%.
Уровень свинца и никеля не выходил за
границы МДУ.
Содержание марганца, свинца и никеля
в воде превышало ПДК на 23, 40 и 17% соответственно.
Молоко, используемое для выпаивания телятам содержало избыточное коли36
чество фосфора, цинка, кобальта на фоне
дефицита кальция, магния, железа, меди и
марганца.
Суточное поступление свинца и никеля
с кормом и водой составляло 4,62 и 3, 72 мг.
При клиническом обследовании было
установлено, что телята чаще всего рождались слабыми. У них наблюдалась задержка
формирования скелета и мышечной ткани,
анемичность, сухость и складчатость кожи,
бледность слизистых оболочек.
В морфологическом составе крови выявили низкое содержание эритроцитов
(на 5%), СГЭ (на 39%), сегментоядерных
нейтрофилов (на 60%) на фоне высокого уровня эозинофилов (на 33%), лимфоцитов (на 24%). Содержание гемоглобина
при этом было ниже нормы на 23%.
Нарушение белкового обмена выражалось в изменении соотношения белковых фракций (уровень альбуминов и гамма-глобулинов ниже нормативных данных
на 31 и 50% соответственно, а альфа-глобулинов – выше на 60%), низком содержании мочевины (на 16%), ферментов - аминотрансфераз (АлАТ, АсАТ на 84 и 26%
соответственно) на фоне высокого содержания общего белка (на 10%) и креатинина (на 16%).
Низкий уровень общих липидов (на
50%) и холестерина (на 42%) указывал на
нарушения жирового обмена, протекавшего на фоне низкого содержания глюкозы
(на 59%) и резервной щелочности (34%).
В минеральном обмене было установлено нарушение соотношения Ca:P (1:1
при норме 1,5-2:1) и Ca:Mg (4,4:1 при норме 3:1).
Низкое содержание кальция (на 15%),
магния (на 44%), хлора (на 37%), меди
(на 60%), марганца (на 62%), кобальта
(на 64%) наблюдалось на фоне высокого содержания калия (на 34%) и железа
(на 53%).
При исследовании кормов, воды, молока и крови была выявлена абсолютная недостаточность Ca, Mg, Cu, относительная
или инертная формы недостаточности Co,
Mn и избыток K, Fe, Zn, Pb, Ni.
Выводы:
1. Неблагоприятная экологическая обстановка (наличие в кормах, воде и молоке токсичных металлов – свинца и никеля),
особенности геохимической обстановки
хозяйства (дисбаланс минеральных и питательных веществ) приводят к угнетению
функции кроветворных органов, снижению резистентности, скрытому токсикозу
в организме животных, нарушению белкоВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
вого, углеводного, жирового и минеральфункций организма, деятельность функциного обменов.
ональных систем).
2. Изменения, протекающие в организ3. Такая картина свидетельствует о
ме клинически здоровых (условно) телят
физиологической незрелости телят и о
является отражением клинического статом, что они находятся в состоянии предтуса телят (нарушение физиологических
болезни.
Литература
1. Грибовский Г.П. Научное обоснование комплекса мероприятий по снижению аномального содержания микроэлементов на организм животных и качество продуктов животноводства на
Южном Урале: Автореферат дис. д-ра вет. наук.
16.00.06. М., 1996.
2. Кабыш А.А. Эндемическая остеодистрофия
крупного рогатого скота на почве недостатка
микроэлементов. Челябинск: Южно-Уральское
кн. изд-во. 1967, с.59.
3. Кабыш А.А. Нарушение фосфорно-кальциевого обмена у животных на почве недостатка и избытка микроэлементов в зоне Южного Урала.
– Челябинск, 2006. 408 с.
4. Шепелева Т.А. Применение макро- и микроэлементов при диспепсии телят в экологически
неблагополучной зоне Южного Урала. Дисс. на
соискание уч. степ. канд. ветнаук. Троицк, 1998.
УДК 619:615.28
К.В. Гаврилин, Г.А. Мамыкина
ООО «НВЦ Агроветзащита», ООО «Аргус»
БАКТЕРИАЛЬНЫЕ ОСЛОЖНЕНИЯ
ПРИ ЭКТОПРОТОЗОЙНЫХ ИНВАЗИЯХ РЫБ
Введение
Среди пресноводных рыб широко распространены заболевания, вызванные паразитическими представителями подцарства Protozoa. На поверхности и в открытых полостях тела пресноводных рыб наиболее часто паразитируют жгутиконосцы отрядов Kinetoplastida и Dinoflagellida,
ресничные инфузории отрядов Cyrtophorida, Hymenostomatida, Peritrihida, Suctorida
и некоторые других.
Патогенез этих заболеваний связан с
повреждением целостности покровных
тканей рыб при питании и прикреплении
простейших. Раздражение тканей приводит
к выделению повышенных количеств слизи, что является защитной реакцией макроорганизма. Клиническая картина при
этих заболеваниях характеризуется появлением на поверхности тела серых пятен,
разрушением плавников, явлениями дыхательной недостаточности. При дальнейшем развитии заболеваний, как правило,
развиваются симптомы характерные для
бактериальных поражений: геморрагии и
петехии на теле, кровоизлияния в плавники, образуются язвы. Исследователями ихтиопатологами неоднократно высказывалось предположение, что эктопротозойные инвазии достаточно часто сопровождаются вторичной бактериальной инфекцией [1, 2, 3].
Ветеринарная патология. № 2. 2008
Взаимосвязь между частотой бактериальных осложнений с видом паразита и с
основными параметрами инвазии, такими
как экстенсивность инвазии (ЭИ), интенсивность инвазии (ИИ), индексом обилия
паразитов (ИО) остается не установленной. Так как наличие этих данных позволит своевременно корректировать методы лечения рыб, пораженных эктопротозойными инвазиями, мы провели ряд исследований.
Целью нашей работы было: исследовать частоту бактериальных осложнений
при различных эктопротозойных болезнях
рыб, установить взаимосвязь между обсемененностью поверхности тела рыб бактериями и основными параметрами количественно характеризующими инвазию.
Материалы и методы
Работу провели в 2004-2007 г.г. в аквариальном закупочно-карантинном цеху ООО
«Аргус». Объектом исследования служили
группы рыб меченосцев (Hiphophorus helleri) и пецилий (Poecilia velifera) спонтанно инвазированные костиозом (Costia sp.),
триходинозом (Trichodina sp.) и апиозомозом (Apiosoma sp.).
Из каждой группы рыб случайным образом отбирали 10 экз. и подвергали паразитологическим и микробиологическим
исследованиям.
С поверхности тела и жабр каждой ис37
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
следуемой рыбы брали соскоб слизи и изготовляли компрессионный препарат, который микроскопировали при увеличении
в 154 раза. Подсчитывали количества простейших в одном поле зрения (шт. в п. з.) и
брали среднюю величину из результатов
просмотра 10–15 полей. Эктопаразитических простейших идентифицировали до рода при помощи определителей паразитов
пресноводных рыб [4]. Изучали следующие характеризующие инвазию величины: ЭИ – процент особей в группе, у которых обнаружены паразиты, ИИ – среднее
количество паразитов обнаруженных на
пораженных особях, ИО – количество паразитов приходящихся на каждую особь в
выборке.
Пробы для микробиологических исследований брали от тех же особей, сразу после паразитологического обследования.
Первоначально с 0,5 см2 поверхности
тела рыбы, после ее ополаскивания стерильным физиологическим раствором стерильным тампоном брали соскоб, который
помещали в 5 мл стерильного физиологического раствора и после его взбалтывания делали высев 0,05 мл на плотную питательную среду – мясопептонный агар
(МПА).
Затем рыбу асептически вскрывали и
иссекали 0,2 г материала печени, который
помещали в 2 мл стерильного физиологического раствора и многократным пипетированием суспензировали. Из полученной суспензии стерильной пипеткой делали высев по 0,05 мл на плотную питательную среду МПА.
Количество колоний выросших на чашке Петри подсчитывали. Результат представляли в виде КОЕ/см2 (колониеобразующие единицы на 1 см2 поверхности тела)
или КОЕ/г (в 1 г печени).
Образование индола учитывали мо методу Синева [5], а наличие цитохромоксидазы по Эрлиху [6]. Отношение к окраске
по Граму определяли тестом с 3% КОН.
Идентификацию выделенных бактериальных штаммов проводили при помощи Определителя бактерий Бержи [7] и
руководства по изучению энтеробактерий
Ф. Кауфмана [8].
Способность бактериальных штаммов
продуцировать гемолизины изучали на
кровяном агаре, с эритроцитами барана.
Статистическую и математическую обработку полученных данных проводили
при помощи пакета прикладных программ
для ПК Microsoft office excel 2003. Корреляционный анализ проводили методом
38
квадратов [9].
Результаты и обсуждения
В ходе работ были исследованы 36 партий рыб (по 18 каждого вида), завезенных
в РФ из стран юго-восточной Азии. Из обследованных групп рыб 30 в различной
степени были поражены костиозом (Costia
sp.), триходинозом (Trichodina sp.) или апиозомозом (Apiosoma sp.), а 6 были свободны от паразитов.
У меченосцев и пецилий пораженных
костиозом или триходинозом на 4 – 7 день
после размещения на карантин развивалась характерная для эктопротозойных заболеваний клиническая картина. Еще через 3–6 дней появлялись симптомы характерные для бактериальных заболеваний.
В случае апиозомоза симптомы эктопротозойной инвазии, как правило, были менее выраженными и появлялись позднее, а
клиническая картина, характерная для секундарной инфекции, не развивалась.
Рыбы, у которых паразиты не были обнаружены, оставались здоровыми и не демонстрировали никаких отклонений от
нормального поведения.
После проведения комплекса паразитологических и микробиологических исследований и обработки экспериментального материала получены следующие данные.
У меченосцев свободных от эктопаразитов обсемененность поверхности тела
колебалась от 0 до 9,3 КОЕ/см2. Но уже при
обнаружении у 10% рыб 10 костий в поле
зрения микроскопа среднее по группе количество микроорганизмов возрастало до
20 КОЕ/см2. Аналогичная картина наблюдалась и в случае их поражения триходинами. При ЭИ – 20 и ИИ – 15 количество
бактерий на поверхности тела составляло 31,2 КОЕ/см2. В группах рыб с большим
количеством паразита обсемененность поверхности тела была выше. При ЭИ от 50
до 100% и ИИ от 24 до 54 паразитов в поле зрения она составляла 60–98,6 КОЕ/см2.
Причем большему количеству паразитов,
как правило, соответствовала более массивная контаминация поверхности тела. В
случае апиозомоза, так же отмечено нарастание численности микроорганизмов в зависимости от пораженности рыб сидячими
инфузориями. Но количество микроорганизмов даже при высоком уровне инвазии
(ЭИ-100%, ИИ – 10 паразитов в поле зрения) мало отличалось от нормы и составляло в среднем 16,4 КОЕ/см2. Это объясняет отсутствие клинических признаков бактериоза в пораженных апиозомами группах рыб. Сидячие инфузории рода ApiosoВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица 1
Корреляционная связь основных параметров характеризующих инвазию с обсемененностью поверхности тела рыб
Коэффициенты корреляции
Вид рыб
Диагноз
Hiphophorus helleri
Костиоз
Poecilia velifera
Костиоз
Hiphophorus helleri
Триходиноз
Poecilia velifera
Триходиноз
Hiphophorus helleri
Poecilia velifera
ЭИ/КОЕ на см2
ИИ/КОЕ на см2
ИО/КОЕ на см2
0,78±0,23
0,31±0,11
0,93±0,13*
0,86±0,19*
0,98±0,07*
0,75±0,25
0,99±0,05*
0,74±0,16
0,80±0,22**
0,97±0,09*
0,89±0,16*
0,99±0,05*
Апиозомоз
0,83±0,20**
0,77±0,24
0,92±0,14*
Апиозомоз
0,84±0,20**
0,84±0,20**
0,71±0,26
Примечание: *- данные статистически достоверны (Р<0,01), **- данные статистически достоверны
(Р<0,05).
Таблица 2
Сравнительная характеристика микробиоценозов поверхности тела и печени рыб
Hiphophorus
helleri
Poecilia
velifera
Микробиоценоз поверхности тела
Состав
Acinetobacter
calcoaceticus
9,3±3,0
Staphilococcus epidermidis
Acinetobacter calcoaceticus
11,3±3,4
Staphilococcus epidermidis
Poecilia
velifera
31,6±3,2
Poecilia
velifera
Вид рыб
КОЕ/см2
Микробиоценоз печени
КОЕ/г
Состав
0,0
-
0,0
-
Aeromonas sp.
Acinet. calcoaceticus
Staph. epidermidis
0,0
-
48,6±6,8
Aeromonas sp.
Acinet. calcoaceticus
Flavobacterium
4,6±1,3
Aeromonas sp.
Hiphophorus
helleri
54,0±7,3
Aeromonas sp. Flavobacterium
Bacillus sp.
3,8±1,9
Aeromonas sp.
Flavobacterium
Hiphophorus
helleri
60,0±7,7
Moraxella sp.
Acinet. calcoaceticus
Staph. epidermidis
100,0±10,0
Moraxella sp.
Hiphophorus
helleri
98,6±9,9
Moraxella sp.
Acinet. calcoaceticus
120,0±10,6
Moraxella sp.
ma по типу питания являются сапрофитами и используют рыбу только как субстрат
для прикрепления, что до недавнего времени давало основание считать их безвредными комменсалами [10]. Скорее всего,
они в меньшей степени, чем триходины и
кости повреждают покровные ткани рыб,
что и объясняет меньшую обсемененность
поверхности тела.
При исследовании групп пецилий получены сходные результаты. Уже при незначительной пораженности рыб костиями и триходинами ЭИ от 10 до 20% и ИИ
от 26,0 до 30,2 паразитов в поле зрения обсемененность поверхности тела составляет 28,4–54,0 КОЕ/см2, в то время как у здоровых рыб аналогичный показатель 0 до
6,8 КОЕ/см2. В случае апизоомоза, у рыбы
максимально пораженной из исследованных групп (ЭИ-100%, ИИ – 8,2 паразита в
поле зрения) среднее количество бактерий
составляло 10,4 КОЕ/см2.
Наибольший удельный вес в исследованных микробиоценозах имели грамнеВетеринарная патология. № 2. 2008
гативные условно-патогенные микроорганизмы: 35% – представители рода Aeromonas, 15% – Moraxella, 13% – Acinetobacter,
14% – Escherichia coli, 6% – Flavobacterium,
4% – Proteus и 13% приходится на грамположительную микрофлору. Все выделенные грамотрицательные микроорганизмы
неоднократно описаны в качестве патогенов рыб [11, 12, 13, 14].
Результаты исследования корреляционной связи между различными параметрами, характеризующими инвазию и обсемененность поверхности тела рыб, представлены в таблице 1.
Как видно из таблицы в подавляющем большинстве случаев существует прямая сильная связь между инвазированностью рыб различными простейшими эктопаразитами и количеством микроорганизмов на поверхности тела. Причем все три
исследованных нами параметра, характеризующих инвазию, могут являться достаточно информативными, в большей степени ЭИ и в меньшей ИИ и ИО.
39
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Рядом исследователей показана взаимосвязь между бактериальной обсемененностью воды условно-патогенными микроорганизмами, и наличием микрофлоры во
внутренних органах рыб [15, 16]. Это свидетельствует о том, что находящаяся на
поверхности микрофлора способна проникать в органы и ткани рыб, в результате чего начинает развиваться эндогенный
септический бактериоз, приводящий к развитию геморрагий, язв и т.д.
При этом возникает ряд вопросов. Какие микроорганизмы и в какой степени
способны вызывать сепсис? Какую обсемененность поверхности тела можно считать «критической», когда развитие системной инфекции становиться неизбежным? Для решения этих вопросов нами
проведено сопоставление количественных
и качественных характеристик микробиоценозов поверхности тела и печени некоторых исследованных групп рыб (табл. 2).
При анализе данных представленных в
таблице видно, что единичная микрофлора
во внутренних органах появляется при нахождении на поверхности тела рыбы 48,6 –
54,0 КОЕ/см2. Между количеством микрофлоры на поверхности тела и в печени обнаружена прямая сильная корреляционная
связь (0,91±0,16).
Обратил на себя внимание тот факт,
что не вся представленная на поверхности микрофлора (зачастую в значительных количествах) обнаруживается в печени. Скорее всего, это связано со способностью микроорганизмов продуцировать
различные биохимические факторы агрессии. Это предположение подтверждает результаты исследования гемолитической активности выделенной микрофлоры.
Среди микрофлоры выделенной из печени
рыб количество гемолитических штаммов
было почти в два раза больше чем среди
бактерий обнаруженных на поверхности
тела (46,6 и 28,3% соответственно). Причем среди штаммов, обладающих гемолизом чаше всего встречались представители
родов Moraxella – 30% от исследованных,
Aeromonas – 28% и Acinetobacter - 28%.
Наряду с этим ряд авторов указывает,
что в случае сильного снижения иммунитета и нарушения барьерных функций кожи
и слизистых оболочек из внутренних органов рыб в значительном количестве удается выделить грампозитивных сапрофитных бактерий, являющихся представителями нормофлоры воды [17]. Поэтому возможно, что при крайне высоком уровне
отрицательного воздействия на рыбу преимущества получит не более вирулентная
(активно продуцирующая факторы агрессии), а многочисленная или быстроразмножающаяся микрофлора.
Заключение
Полученные в ходе исследований результаты позволяют сделать следующие
выводы. При поражении рыб эктопаразитическими простейшими начинает возрастать обсемененность поверхности тела, которая напрямую зависит от количества паразитов. При достижении некоторой «критической» массы бактерий на поверхности тела начинается развитие септического
бактериоза. При поражении рыб костиями
и триходинами даже при сравнительно низком уровне инвазии (ЭИ 10-20%, ИИ 10-30
паразитов в поле зрения) складываются
благоприятные условия для развития секундарной инфекции. В случае поражения
сидячими инфузориями вероятность развития бактериальных осложнений существенно ниже, что объясняется особенностями их образа жизни.
Инфекционными агентами, поражающими рыб чаще всего являются находящиеся в воде условно-патогенные грамнегативные микроорганизмы. Пусковым механизмом заболевания в данном случае служит снижение под действием инвазии иммунного статуса рыб, а входными воротами инфекции поврежденные паразитами
покровные ткани.
При лечении эктопротозойных заболеваний рыб антипаразитарную терапию необходимо сочетать с антибактериальной.
В противном случае даже избавленная от
паразитов рыба погибнет в результате развивающегося септического процесса.
РЕЗЮМЕ
Установлена прямая корреляционная связь между уровнем пораженности рыб простейшими эктопаразитами и частотой бактериальных осложнений. Развитие бактериоза наиболее вероятно при
поражении рыб представителями родов Costia и Trichodina. Инфекционные агенты, представленные
условно-патогенными микроорганизмами первоначально накапливаются на поверхности тела, а затем через поврежденные покровные ткани проникают в организм рыбы. При лечении эктопротозойных инвазий рыб необходимо сочетать антипаразитарную и антимикробную терапию.
SUMMARY
Direct correlation between of infection of fish by ectoprotozoo and bacterial complication was established.
Most frequently bacterial infection are developed at infection of fish by Costia spp. and Trichodina spp. Facultative pathogen bacteria primary accumulate on surface of body of fish and than through damaged tegu-
40
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
ment penetrate into the organism of fish. At the treatment of fish, necessary combine antiparasitic and antibacterial therapy.
Литература
1. Dr. Chris Andrews, Adrian Exell & Dr. Neville
Carington. The interpet manual of fich health.Interpet Ltd., 2005. 208 p.
2. Bassleer G. The new illustrated guide to fish
diseases in ornamental tropical and pond fish.
Westmeerbeec: Responsible publisher, 2005. 232. p.
3. Гаврилин К.В. Использование «Антибака ПРО»
для лечения эндопаразитарных инвазий декоративных рыб осложненных бактериальной
инфекцией // Труды ГНУ «ВИГИС» т. 43. М.:
Россельхозакадемия, 2006. С. 26–36.
4. Определитель паразитов пресноводных рыб
СССР. Л.: Изд-во академии наук СССР, 1962.
776 с.
5. Лабинская А.С. Микробиология с техникой микробиологических исследований. М.: Медицина,
1978. 394 с.
6. Покровский В.И. Энтеробактерии (Руководство
для врачей). М.: Медицина, 1985. 321 с.
7. Определитель бактерий Берджи. под ред. Дж.
Хоулта., 1995 г. 600 с.
8. Кауфман Ф. Семейство кишечных бактерий
(пер. с английского Доссер Е.М., Голубевой
И.В.).- М.: Медгиз, 1959. 354 с.
9. Гланц С. Медико-биологическая статистика:
Пер. с англ. М.: Практика, 1998. С. 250-269.
10. Головина Н.А., Стрелков Ю.А., Воронин В.Н.,
Головин П.П., Евдокимова Е.Б., Юхименко
Л.Н. Ихтиопатология. Под ред. Н.А.Головиной,
О.Н.Бауэра. М.: Мир, 2003. 448 с.
11. Юхименко Л.Н., Койдан Г.С., Бычкова Л.И.,
Смирнов Л.П. Биологические свойства аэромонад и их роль в патологии рыб // Рыбн. хоз.во. Сер. Болезни гидробионтов в аквакультуре:
Аналит. и реф. Инф. М.: ВНИЭРХ, 2001. Вып.1.
С. 1-10.
12. Гаврилин К.В. Опыт борьбы с бактериальной
геморрагической септицемией (БГС) в условиях
декоративной аквариумистики // Мат-лы Междунар. научн.-практ. конф. Молодых ученых
Киев. 2002. С. 147-149
13. Юхименко Л.Н., Бычкова Л.И., Гаврилин К.В.,
Трифонова Е.С. Проблема экологической безопасности лечебных и профилактических мероприятий в рыбоводстве // Мат–лы Междунар.
научн.-практ. конф. «Аквакультура и интегрированные технологии: проблемы и возможности» М.: Россельхозакадемия, 2005. С. 344–347.
14. Гаврилин К.В., Юхименко Л.Н., Бычкова Л.И.
Влияние факторов окружающей среды на
микробиоценоз рыбоводных прудов // Мат-лы
Межд. науч.-практ. конф. «Аквакультура начала
XXI века: истоки, состояние, стратегия развития». М.: ВНИРО, 2002. C. 282-285.
15. Каховский А.Е., Михайловская А.В., Кузьмина
Л.В. Взаимосвязь интенсификации рыбоводства,
условий обитания аэромонад и клинического
состояния рыб // Сб. научн. тр. Молд. НИРХС /
Интенсификация выращивания товарной рыбы
в Молдавии. Кишинев, 1989. С. 68-79.
16. Каховский А.Е., Тромбицкий И.Д. Метод профилактики аэромонозов прудовых рыб и повышения продуктивности рыбоводных прудов.
// Рыбн. хоз.-во / Сер. Аквакультура. Информ.
пакет. М.: ЦНИИТЭИРХ, 1991. Вып. 1. C. 7-10.
17. Ларцева Л.В., Катунин Д.Н. Микрофлора рыб
– биоиндикатор загрязнения дельты Волги / Сб.
научн. тр. / Водные биоресурсы, воспр-во и экология гидробионтов. М.: ВНИИПРХ, 1993. Вып.
69. C. 155-163.
Х Георгиу., Р.М., Хамурзов Е.М. Горбунова, В.Г. Орел
Всероссийский НИИ экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко
К ВОПРОСУ О ДИАГНОСТИКЕ АНАПЛАЗМОЗА
КРУПНОГО И МЕЛКОГО РОГАТОГО СКОТА
Анаплазмоз – трансмиссивная, природноочаговая, инфекционная болезнь крупного и мелкого рогатого скота, зебу, буйволов и филогенетически родственных им
диких жвачных (парнокопытных) – лось,
олень, косуля, сайгак, козерог, архар, муфлон, и др. животных, вызываемая возбудителями порядка Rhickettsiales, семейства
Anaplasmatacea, рода Anaplasma. Возбудители анаплазмоза обладают видовой специфичностью.
Анаплазмоз вызывают: у крупного рогатого скота и родственных ему диких животных – A. marginale и A. centrale; у овец,
коз и родственных им диких животных –
A. ovis.
Заболевание животных анаплазмозом
наблюдают в любое время года. Болезнь
Ветеринарная патология. № 2. 2008
регистрируется во всех странах мира.
Заболевание протекает остро, подостро, хронически с переходом в длительное
(практически пожизненное) анаплазмоносительство и сопровождается глубокой
анемией аутоиммунной природы, лихорадкой постоянного или перемежающегося
типа, рецидивами, расстройством работы
сердца, органов дыхания и желудочно-кишечного тракта с последующим истощением и гибелью животного.
К сожалению, эти болезни наносят
значительный вред животным. В странах
СНГ гибель крупного рогатого скота от
анаплазмоза колеблется от 25% и выше.
За рубежом – достигает 50-80% (Н.Seifert,
1960), а иногда и 96-100% (А.Lubrini, 1969).
К настоящему времени анаплазмоз за41
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
регистрирован во многих странах Европы
и Азии, во всех государствах Африки, Америки и в Австралии. В странах СНГ эту болезнь регистрируют в Армении, Азербайджане, Грузии, Молдавии, Таджикистане,
Узбекистане, Казахстане, Туркмении, Украине, Белоруссии и Российской Федерации. В нашей стране болезнь регистрируют практически повсеместно, где встречаются клещи-переносчики и кровососущие
насекомые, но чаще всего, в заболоченных,
заращенных мелколесьем и кустарником
местностях. Многочисленность переносчиков, включающих клещей надсемейства
Ixodoidea и кровососущих насекомых, широко распространенных на земном шаре,
обусловливает широкий ареал возбудителей (И.В.Абрамов, 1965). Однако ведущим
фактором поддержания эпизоотических
очагов является длительное носительство
возбудителей даже в организме однократно переболевших животных (у крупного
рогатого скота анаплазмы сохраняются до
13-15 лет - срок наблюдения во время которого возможны рецидивы - от 3-х до 5 раз)
(М.П.Конюхов, 1957; В.М.Петешев, 1964;
И.В.Абрамов, 1965; В.В. Калягин, 1966).
Эпизоотическое состояние Российской Федерации по данной болезни является серьезным сдерживающим фактором развития одной из важнейших и наиболее выгодных в экономическом отношении отраслей животноводства – скотоводства. Анаплазмоз и бабезиоз крупного
рогатого скота, часто протекающие в виде
смешанной инвазии (Дьяконов Л.П., 1978;
Агаев А.М., 1975), наносят значительный
ущерб этой отрасли. В СССР общие потери от анаплазмоза и бабезиоза рогатого скота не подсчитывались, хотя имеются некоторые данные по отдельным областям. Так, Артеменко Л.П. (1977) установила, что прямые убытки от анаплазмоза, нанесенные за четыре года в хозяйствах Ровенской и Житомирской областей Украины (1960-1972), выразились в сумме 141913
руб., или в среднем за год они составляли
35478 руб. Специальных исследований по
определению экономического ущерба от
рассматриваемых болезней в нашей стране проведено очень мало. В связи с этим
представляют интерес данные, полученные зарубежными исследователями. Например в странах Центральной Америки
потери от анаплазмоза составляют ежегодно 850 млн. долларов (R.A.Lombardо,
1976), а в Южной Америке – 1365-1638 млн.
(Anon, 1987). Только США ежегодно теряет от этого заболевания 100 млн. долларов
42
(B.R.McCallon, 1973). Экономические потери в период энзоотии складываются из высокой смертности больных животных, вынужденного убоя из-за глубокого исхудания, вплоть до истощения заболевших (при
анаплазмозе), резкого снижения мясной и
молочной продуктивности (потеря продуктивности за лактационный период составляет 400-1000 л.), бесплодия и абортов. У
больных анаплазмозом быков-производителей наблюдается импотенция и полный
стерилитет. Все это препятствует улучшению породных качеств животных и, в целом, развитию племенного и продуктивного скотоводства.
Диагноз на анаплазмоз ставят на основании эпизоотологических, клинических,
патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований.
Лабораторные исследования на анаплазмоз включают: микроскопию мазков
крови, постановку и учет реакции (РДСК,
РНГА и ИФА) с анаплазменным антигеном, биопробу (заражение восприимчивого животного от подозреваемого в заболевании), спленэктомию животного, подозреваемого в заражении анаплазмами.
Отбор и пересылка материала для исследований. В лабораторию для исследований направляют от подозреваемых в заболевании или больных животных: тонкие мазки крови из сосудов уха, хвоста
или венчика; пробы крови для получения
сыворотки.
Мазки крови и кровь для получения сыворотки берут в период развития симптомов болезни, при повышенной температуре тела, до применения специфического
(этиотропного) лечения.
Перед отбором материала у животного шерсть на месте взятия крови выстригают, кожу тщательно протирают вначале
ватным тампоном, смоченным этиловым
спиртом, а затем сухим. Стерильной иглой делают прокол вены ушной раковины
или ножницами надрезают край верхушки
уха или хвоста. К свободно выступившей
капле крови легко прикасаются поверхностью сухого обезжиренного предметного стекла. Затем стекло быстро поворачивают вверх каплей и удерживают пальцами левой руки в горизонтальном положении. Шлифованным краем другого стекла (предметного или покровного) прикасаются к капле крови. Как только кровь
равномерно распределится по ребру этого
стекла, им быстро проводят по поверхности предметного стекла справа налево под
углом 450. Ширина мазка должна быть уже
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
предметного стекла. Для каждого нового
мазка берут свежую каплю крови. От каждого животного готовят по 2 мазка.
При исследовании большого поголовья животных, содержащихся в приспособленных (нетиповых) помещениях при беспривязном содержании проще и надежнее
брать кровь из шейной вены (V. jugularis)
одновременно для приготовления мазков и
получения сыворотки.
Кровь для приготовления мазков берут
в пробирки Флоринского, закрытые резиновыми пробками, содержащими жидкий
(или в порошке) гепарин (из расчета 3-5
МЕ/мл крови) или трилон Б (из расчета 0,5
мл 8-10% раствора на 5 мл крови; в другие
(лабораторные) пробирки берут кровь для
получения сыворотки.
Мазки крови готовят в лабораторных условиях в день взятия. Готовые мазки крови высушивают на воздухе, подсушивать их над пламенем или на солнце нельзя. В холодное время года мазки делают в теплом помещении или на стеклах,
подогретых на крышке стерилизатора.
Правильно приготовленные мазки крови должны быть тонкими, равномерными, достаточной длины и заканчиваться за
0,5-1 см от края стекла.
Кровь для получения сыворотки ставят на 1 час в термостат (Т +37° С) или другое теплое место, после полной ретракции
сгустка его отделяют от стенок пробирки, обводя вокруг тонкой стерильной металлической спицей, и ставят в темное (холодное) место для отстаивания сыворотки.
Используют для исследования сыворотку
без следов гемолиза эритроцитов.
На высушенных мазках крови простым
карандашом пишут номер, вид животного
и дату приготовления мазка.
Аналогичную запись делают на пробирке с сывороткой крови.
Материал от павших или вынужденно
убитых животных отбирают до наступления трупного окоченения.
Мазки упаковывают в чистую пергаментную или другую непористую бумагу,
складывая их попарно так, чтобы мазки
располагались на противоположных (наружных) сторонах предметных стекол.
Сыворотки сливают после их полного
отстоя в пробирки Флоринского или в другие лабораторные пробирки, плотно закрывают резиновыми пробками.
Упакованные материалы – мазки и сыворотку крови доставляют в лабораторию
в день приготовления.
Микроскопические исследования. МазВетеринарная патология. № 2. 2008
ки крови фиксируют одним из способов:
метиловым спиртом в течение 3-5 минут,
960 этиловым спиртом (ректификованным) – 20-25 мин., или смесью этилового
спирта и серного эфира в равных количествах – 15-20 мин. После высушивания мазки окрашивают азур-эозином по Романовскому-Гимзе (краску разводят дистиллированной водой рН 7,0-7,2 в соотношении
1:10) – 30-45 мин (в зависимости от качества краски и температуры помещения), промывают дистиллированной водой рН 7,0-7,2
до исчезновения следов краски на фильтровальной бумаге, высушивают и исследуют под иммерсионной системой микроскопа (х90). Качество окрашивания мазка
определяют под микроскопом по окрашиванию лейкоцитов. Если лейкоциты бледно окрасились или не окрасились – исследовать препарат бесполезно, необходимо
применить другую серию краски.
Анаплазмы окрашиваются в темнокрасный цвет, имеют округлую, овальную
формы (похожи на точки), расположены преимущественно по периферии эритроцита. Размеры паразитов – от 0,2 до 1,2
микрона.
Степень пораженности эритроцитов
бывает различной – от незначительной
(единичных анаплазм) до 50% и более пораженных эритроцитов (последнее у спленэктомированных животных).
Дифференциальная диагностика анаплазм и оценка результатов.
В отличие от телец Жолли, расположенных чаще эксцентрично, анаплазмы
обычно мельче и менее интенсивно окрашены. Не следует смешивать анаплазмы с
базофильной зернистостью эритроцитов,
которая в большинстве случаев проявляется множественностью разнообразных
форм включений в одном эритроците.
В местностях, неблагополучных по
тейлериозу, пироплазмозу, бабезиозу и
лептоспирозу, анаплазмоз необходимо
дифференцировать от них. Нередко анаплазмоз проявляется вслед за этими болезнями и осложняет их. При дифференциации необходимо учитывать морфологию
возбудителя.
При анаплазмозе, в отличие от других
кровопаразитарных болезней, отсутствуют кровавая моча и желтушность видимых слизистых оболочек, несмотря на
очень значительное уменьшение количества эритроцитов (до 1,5 млн в 1 мм3);
подъем температуры тела у животных
проявляется в виде лихорадки постоянного или перемежающегося типа; аппе43
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
тит обычно сохраняется до конца болезни, но животное сильно худеет, часто до
полного истощения.
Результат исследования считают положительным при обнаружении в мазке крови анаплазм.
Ограниченные возможности световой
микроскопии сдерживают своевременное
проведение лечебных и других мер борьбы с болезнью. Трудности в идентификации анаплазм и бабезий и особенно при
паразитоносительстве, вызвали необходимость изыскивать специфические и более
эффективные средства диагностики, такие
как серологические.
Все вышеизложенное свидетельствует
об актуальности исследований по серологической диагностике анаплазмоза рогатого скота.
Сыворотку крови на наличие анаплазменных антител исследуют в серологических реакциях: РДСК, РНГА и ИФА.
РДСК ставят согласно Временному наставлению по применению набора компонентов для диагностики анаплазмоза рогатого скота в реакции длительного связывания комплемента, утвержденному ГУВ Госагропрома СССР 6 мая 1988г.
Реакцию ставят в объеме 0,5 мл (по 0,1
мл каждого компонента) в пробирках 1012х120 мм или в полистироловых плашках
отечественного производства.
Результаты реакции оценивают по степени гемолиза и выражают в крестах:
++++ – гемолиз отсутствует – реакция
положительная;
+++ – 25% гемолиза – реакция положительная;
++ – 50% гемолиза – реакция положительная;
+ – 75% гемолиза – реакция сомнительная;
- – 100% гемолиза – реакция отрицательная.
Сыворотки, давшие положительную
реакцию, исследуют до предельного титра.
Выявление при этом антител в титрах 1:20
и выше указывает на острое течение анаплазмоза, а титры от 1:5 до 1:10 – на анаплазмоносительство.
Животных с сомнительными результатами исследуют повторно через 30 дней.
Дважды сомнительные результаты считают положительными.
Диагноз считают окончательно установленным при обнаружении возбудителя анаплазмоза при микроскопическом
исследовании мазков крови и одновременном получении положительного ре44
зультата в РДСК.
РНГА ставят по отработанной в лаборатории методике. Реакцию проводят в
объёме 0,125 мл в полистироловых плашках отечественного производства. Для получения нужных разведений испытуемых
и контрольных сывороток (одна положительная и одна отрицательная), не инактивируя, их разводят 1:5, 1:10, 1:20, 1:40, 1:80,
1:160, 1:320, 1:640 в физиологическом растворе с 1% кроличьей сыворотки. Затем
по 0,1 мл каждого разведения сыворотки
вносят в лунки.
После этого в те же лунки вносят специально откалиброванной капельницей по
1 капле (0,025 мл) эритроцитарного диагностикума.
Сыворотки и эритроцитарный диагностикум тщательно перемешивают путём осторожного встряхивания пластин и оставляют их при комнатной температуре на 23 часа. Затем проводят учёт реакции по четырёхбальной системе:
++++ – агглютинированные эритроциты ровным слоем покрывают всю поверхность лунки; иногда края загибаются
внутрь
+++ – агглютинированные эритроциты
ровным слоем покрывают всю поверхность
лунки; заметны границы агглютината
++ – по краю агглютинированных эритроцитов образуется кольцо из несклеенных эритроцитов
+ – агглютинированные эритроциты
оседают на дно лунки в виде небольшого
кольца с ровными краями
– – эритроциты оседают на дно в виде
«пуговки» или компактного колечка с ровными краями.
Реакцию считают положительной при
агглютинации сенсибилизированных эритроцитов испытуемыми сыворотками в разведении 1:50 и выше с оценкой не ниже 3+.
За сомнительную реакцию принимают агглютинацию сенсибилизированных
эритроцитов испытуемыми сыворотками
в разведении 1:50 с оценкой не ниже 2+ и
1:100 с оценкой 1+.
ИФА ставят по разработанному Наставлению, утвержденному ГУВ Госкомиссии Совмина СССР по продовольствию и
закупкам 1 декабря 1989 г.
При визуальной оценке результатов экспертизы окраска продукта пероксидазной
реакции, полученная при анализе исследуемого материала сравнивается с окраской,
полученной с положительными и отрицательными контролями в тех же разведениях. Результаты реакции оценивают в кресВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
тах по следующей схеме:
++++ – интенсивное коричневое окрашивание – результат положительный
+++ – коричневое окрашивание – результат положительный
++ – светло-коричневое окрашивание –
результат сомнительный
- – окрашивание отсутствует или находится на уровне отрицательного контроля
– результат отрицательный
Биопробу и спленэктомию животного, подозреваемого в заражении анаплазмами, из-за дороговизны не всегда удается
использовать.
Животных с сомнительными результатами исследуют повторно через 30 дней.
Дважды сомнительные результаты считают положительными.
Заключение. Таким образом, диагноз
на анаплазмоз ставят на основании эпизоотологических, клинических, патологоанатомических данных и результатов лабораторных исследований и считают окончательно установленным при обнаружении
возбудителя анаплазмоза при микроскопическом исследовании мазков крови и одновременном получении положительного результата в РДСК, РНГА И ИФА..
SUMMARY
The conclusion.The base jf the diagnosis anaplasmosis includes epizootologycal, clinical, pathologoanatomical data and results of laboratory tests and suggests microscopy blood smear and simultaneous in IHAT
ICFT DCFT.
Литература
1. Абрамов И.В., Степанова Н.И., Дьяконов Л.П.,
Гробов О.Ф. Анаплазмозы животных, Москва,
1965, 244 с.
2. Агаев А.М. Пироплазмидозы и анаплазмоз
крупного рогатого скота в Ленкоранской субтропической зоне Азербайджанской ССР и
меры борьбы с ними. Aвтореф. дисс. Канд. вет.
наук, Баку, 1975.
3. Дьяконов Л.П. Кровепаразитарные болезни,
вызываемые прокариотами (анаплазмоз, эперитрозооноз, гемобартенеллез). Животноводство и ветеринария, 1978, т. 10 с. 6-68.
4. Артеменко Л.П. Экономические потери в хозяйствах, стационарно неблагополучных по
анаплазмозу крупного рогатого скота Бюлл.
ВИЭВ выпуск ХХХI, Москва, 1977.
5. Калягин В.В. Материалы по изучению анаплазмоза овец. Автореф. дисс., кан. вет. наук, М., 1966 19с.
6. Конюхов М.П. К изучению патогенеза анаплаз-
моза овец. Труды ВИЭВ, вып.21, 1957, с.155-173.
7. Петешев В.М. Anaplasma ovis - возбудитель
анаплазмоза овец в Казахстане. Дисс., канд. вет.
наук, Алма-Ата, 1964.
8. Anon. 1987. Consulta de expertos sobre eradication
de la garrapata con referencia especial a las
Americas y el Caribe. FAO, Mexico, 22-26 de junio
de 1987.
9. Lubrini А. L’anap1asmosi bovina ne1 Кasa1.
Vetira1iana Anno XII, 1969.
10. McCa11on В.R. 1973. Preva1ence and economic
aspects оf anap1asmosis. In: Proceedings оf the th
Nationa1 Anap1asmosis Conference. Las Vegas,
Nevada. рр. 1-3.
11. Seifert H. Control of cattle losses in the moutons of
north Peru – ZBI, vet. Med., 7, 1960.
12. Lombardo R.A. 1976. Socioeconomic importance of
the tick problem in the American. РАНО Scientific
Publication,326:79-89
УДК 619.616
Х. Георгиу, В.В. Белименко, П.И. Христиановский, Р.М. Хамурзов
ВИЭВ, ОГАУ
К ВОПРОСУ ОБ ИММУНИЗАЦИИ
ПРОТИВ ИКСОДОВЫХ КЛЕЩЕЙ
Иксодовые клещи принадлежат к классу паукообразных (Arachnoidea), к отряду Acarina, семейству Ixodidae (А.В. Белицер, 1929). Паразитирование иксодид на домашних животных наносит колоссальный
ущерб животноводству во всех странах
мира. По индивидуальным расчетам Norval R.A.I. et al. (1997) питание одной самки
клеща на крупном рогатом скоте вызывало среднесуточные потери 6-10 г молока и
2,6-4,8 г массы тела.
При питании на животном-хозяине иксодовые клещи оказывают на него мехаВетеринарная патология. № 2. 2008
ническое, иммуногенное, аллергическое и
инокулятивное воздействие. Происходит
непосредственное физическое повреждение кожи паразитом или в результате иммунных реакций хозяина, связанных с жизнедеятельностью клеща (раздражение,
воспаление, кератинизация, образование
рубцов с потерей шерсти). Питаясь кровью
млекопитающих, иксодовые клещи оказывают патогенное воздействие на кожные покровы. При их постоянном нападении у животных нарастает беспокойство и
интоксикация, так как каждая особь вво45
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
дит в организм хозяина токсины. При значительной заклещеванности потеря крови при кровососании вызывает нарушение
нормального состояния организма и ведет
к анемии и истощению животного. Ю.В.
Кузякин (1968), проведя макроскопические и гистологические исследования кожи
в местах присасывания иксодовых клещей,
отмечает, что под влиянием механического повреждения тканей клещом, ферментативного воздействия его слюны и, наконец, проникновения микрофлоры, развивается острый патологический воспалительный процесс, который охватывает весь
слой дермы и протекает с выраженной сосудистой реакцией. На месте укуса клеща
отмечается сильный зуд и развивается дерматит. При сильной заклещеванности болезненные, плотные узлы в области поражения макроскопически напоминают фурункулы и, при наличии значительного количества паразитов, охватывают большую
площадь кожи. Полученные им результаты микроскопических исследований свидетельствуют о значительных структурных нарушениях в коже в области внедрения паразита. Под влиянием механического повреждения тканей клещом, ферментативного воздействия его слюны и, наконец, проникновения микрофлоры развивается острый воспалительный процесс.
В очаге воспаления наблюдаются преимущественно альтеративные изменения, проявляющиеся в разрушении эпителия и подлежащих тканей. Наряду с этим отчетливо
выражена мелкоклеточная лейкоцитарная
инфильтрация в виде островков, расположенных по ходу кровеносных сосудов. Зона распространения инфильтрата охватывает всю толщу дермы. Среди клеточных
элементов инфильтрата преобладают нейтрофильные и эозинофильные лейкоциты. Кроме лейкоцитов встречаются в небольшом количестве клетки пролиферата.
В соединительной ткани кожи отмечается
гиперемия сосудов с одновременной экссудацией, вследствие этого сильно набухают
коллагеновые волокна.
Аналогичные данные получены Е.Н.
Павловским, С.П. Алфеевой (1941, 1949),
В.А. Мусатовым (1966), Л.Б. Берлиным
(1957), Г.М. Кузнецовой (1957).
Вторичный вред, наносимым иксодовыми клещами, обусловлен созданием «ворот», через которые происходит проникновение возбудителей заболеваний различной этиологии. Кроме того, они сами являются переносчиками большого числа протозойных и инфекционных болезней.
46
Клещи при укусе вызывают иммуногенную реакцию. Наибольшие успехи в исследовании иммунитета к укусу иксодовых
клещей были достигнуты W. Trager (1939),
который обнаружил, что у морских свинок
после повторного заражения их личинками Dermacentor variabilis проявляется типичная реакция Артуса. Она препятствует личинкам повторно питаться на иммунном хозяине. Сенсибилизация животного,
по его данным, может быть вызвана также
искуственно, посредством вакцинации веществом клеща. При этом вырабатывается настоящие антитела, так как сыворотка
кроликов, вакцинированных антигенами
клеща, дает специфическую реакцию связывания комплемента. Иммунитет хозяина
может быть эффективным лишь по отношению к таким клещам, которые питаются медленно (J.T. Culbertson, 1948).
Слюна клеща оказывает иммуносупрессивное воздействие. Fivaz Bruce H.
(1989) отмечает подавление иммунитета, вызываемое иксодовым клещом Rhipicephalus appendiculatus. Предполагают, что
питающиеся клещи этого вида подавляют
гуморальные защитные реакции хозяина,
но этот эффект временный и не зависит от
предшествующих контактов хозяев с клещами. Иммуносупрессия, по мнению авторов, видоспецифична, т.к. в аналогичных
опытах она не обнаружена для клеща Rh.
zambesiensis.
Mulenga A. et al. (2002) указывает на
тот факт, что кровососущие членистоногие, включая иксодовых клещей, для успешного питания кровью выработали
способность подавления механизма гомеостаза хозяина. Это подавление осуществляется рядом биоактивных ферментов, препятствующих свертыванию крови
и сокращению стенок кровеносных сосудов, что позволяет им питаться до полного насыщения.
Willadsen P., Williams P.G. (1976) выделили тканевые антигены из клеща Boophilus microplus и дали их молекулярную характеристику. В связи с этим рассматривается вопрос использования этих протеинов как антигенов для создания вакцин
против клещей.
В последние годы широко проводятся опыты по контролю зараженности животных иксодовыми клещами путем выработки у них приобретенного иммунитета.
Иммунизация различных животных тканями клещей или экстрактами из них была успешно проведена во многих исследованиях (R.F. Riek, 1958,1959,1962; M. BrosВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
sard, 1977; A.F. Goezy et al., 1977; J.R. Allen
and S.J. Humphreys, 1979; S. Ackerman et al.,
1980; K. Fujisaki et al., 1980; M.J. McGowan
et al., 1979, 1980, 1981; C.M. Rubaire-Akiki
and M.J. Mutinga, 1980; S.K. Wikel, 1981; S. R.
Sinha et al., 1982; Brown et al., 1984).
Barriga O. (1994) отмечает, что рекомбинантные антигены из кишечника иксодовых клещей Boophilus обусловливают снижение интенсивности размножения клещей. Однако, больше надежд
связано с антигенами из слюны клещей,
которые могут одновременно ингибировать питание клещей и передачу возбудителей болезни.
Srivastava P.S. et. Al. (1987) выявили, что
при инъекции экстрактов из тканей частично или полностью напитавшихся клещей отмечается выработка ярко выраженной резистентности к заражению личинками, выражающейся в снижении числа прикрепляющихся к хозяевам клещей, уменьшении периода кровососания и массы тела
напитавшихся клещей.
В опытах Rechav Y. (1990) с 8 видами
африканских иксодовых клещей, относящихся к 4 родам, установлено развитие устойчивости у лабораторных и домашних
животных к повторному паразитированию
этих клещей, что выражается в снижении
массы насасываемой крови. Выявлено наличие отрицательной корреляции между
степенью развития устойчивости и уровнем гамма-глобулинов в крови хозяев.
Мишаева Н.П., Вотяков В.Й. (1980)
предлагают иммунизировать животных
путем многократного введения антигена из слюнных желез незараженных клещей или естественным кормлением клещей. Антиген получают из слюнных желез полунапитавщихся клещей. Отпрепарированные железы сначала промывают
в 0,61% растворе поваренной соли, затем
тщательно растирают в ступке с небольшим количеством физраствора и стерильного кварцевого песка. Концентрацию соли доводят до 1,5%, добавляют раствор к
гомогенату из расчета 0,05 мл на одну железу клеща и оставляют при +4° С на ночь
для экстракции. Затем гомогенат центрифугируют 2-3 минуты при 1000 об/мин, надосадочную жидкость используют как антиген. Антиген можно хранить замороженным при минус 4-5° С.
Willidsen P., Kemp. D.H. (1989) указывают на возможность вакцинации в борьбе с
переносчиком Babesia клещом Boophilus
microplus. Из клеток кишки полунапитавшихся самок Boophilus microplus изолироВетеринарная патология. № 2. 2008
ван антиген, иммунизирующий КРС против этих клещей. Антиген представляет собой гликопротеин клеточных мембран и в
1 кг массы клещей содержится в количестве 0,1 мг. При питании клещей на животных, иммунизированных этим антигеном,
в их кишечнике обнаружены разрушения
стенок, которым предшествовали нарушения эндоцитоза в кишечных клетках.
Sahibi H. et al. (1990) отмечает влияние
возраста и породы на устойчивость КРС
к естественному заражению иксодовыми
клещами в 3 разных областях Марокко.
Обследование 178 голов КРС в полувлажной, полузасушливой и засушливой зонах
Марокко показало, что наибольшая степень устойчивости животных к заражению иксодовыми клещами выявляется у
крупного рогатого скота местной породы,
по сравнению с импортированными породами и гибридами. Анализ устойчивости гибридов между местной и импортированными породами показал генетическую природу естественной устойчивости.
Установлено также, что устойчивость выражена в значительно большей степени у
молодых животных, по сравнению с более
старыми. С помощью иммуноблотинга в
слюнных железах клещей выявлены иммуногенные антигены.
Jittapalopong S. et al. (2000) описывают
характер паразитирования самок иксодовых клещей Rhipicephalus sanguineus на собаках после множественного заражения
или иммунизации слюнными железами или
тканями средней кишки клещей. Собак, никогда не заражавшихся клещами, иммунизировали слюнными железами или тканями средней кишки, а затем на них двукратно с интервалом в 21 день подсаживали
по 80 самок и 40 самцов клещей. В другом
опыте на собак, никогда не встречавшихся с клещами, 5 раз с перерывом в 21 день
подсаживали по такому же количеству клещей. Во всех опытах определяли характер
насыщения клещей кровью и их плодовитость. После третьего заражения наблюдалось снижение плодовитости клещей, резко снизилось число прикрепляющихся к
хозяевам клещей, уменьшился период кровососания и масса тела напитавшихся клещей, снизились параметры плодовитости, включая число откладывающихся яиц,
их выживаемость и увеличение периода их
развития. Полученные результаты показывают, что у собак при паразитировании на
них клещей развивается иммунитет против этих клещей, и что иммунизация слюнными железами и тканями средней киш47
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
ки клещей оказывают разное влияние на
клещей, изменяя особенности их питания и
плодовитости соответственно.
Dhadialla T.S. et al. (1990) изучали индукцию у кроликов устойчивости к клещам Rhipicephalus appendiculatus, а также влияние иммунизации растворимыми в
детергентах белками тканей клещей. Для
этого частично напитавшихся самок клещей Rhipicephalus appendiculatus гомогенизировали и протеины из гомогената экстрагировали с помощью детергента Тритон Х-100. Полученными антигенами кроликов иммунизировали 3 раза (с перерывами в 3 и 5 недель) и через 2 недели после
последней иммунизации на них подсаживали по 20 самок и 30 самцов клещей. Затем определяли число погибших клещей,
количество выпитой крови напитавшимися клещами и массу яйцекладки у напитавшихся самок в сравнении с контрольными
клещами, питавшимися на неиммунизированных кроликах. При питании на иммунизированных кроликах наблюдалось снижение числа прикреплявшихся клещей (73
и 87% в опыте и контроле соответственно), полностью напитавшихся клещей (63
и 85%), числа самок, откладывающих яйца
(54 и 83%), массы клещей(361,1 и 230,9 мг)
и массы яйцекладок (179,4 и 90,2 мг). С помощью иммуноблотинга установили, что
наиболее активными в иммунных реакциях были протеины с молекулярной массой
40 и 94 кД. Отмечается, что влияние иммунных реакций хозяина на разных особей клещей существенно отличалось (невозможность прикрепления, насасывание
меньшего количества крови, гибель до откладки яиц при полном насыщении и т.д.).
Таким образом, проблема паразитирования иксодовых клещей на домашних животных остается на сегодняшний день нерешенной, а наносимый ими ущерб значительным. Применение различных акарицидных препаратов с целью профилактики нападения паразитов до сих пор остается единственным средством борьбы с
клещами, а, следовательно, и с возбудителями различной этиологии, переносчиками которых они являются. Специфическая
профилактика, способная стать одним из
путей решения данного вопроса, несмотря на многочисленные успехи ученых различных стран в данной области, широкого
применения в сельском хозяйстве и ветеринарии, к сожалению, не находит.
SUMMARY
Attacks of the Ixodidae ticks on home animals puts enormous damage to animal industries worldwide. At a
feed on the animal - owner ticks render mechanical, immune, allergic and inoculative influence. There is an
immediate physical damage of a skin by a parasite as a result of immune reactions of the owners connected
to vital activity of ticks by. One of methods of prevention Ixodidae ticks attacks is the use of drugs from their
tissues. In this review the basic references devoted about immunization against ticks has described.
Литература
1. Берлин Л.В. Изменения эндотелия кожных сосудов под воздействием питания пастбищных
(иксодовых) клещей Доклады АН СССР, т. 109,
№4, 1956
2. Берлин Л.В. Об изменениях поперечнополосатых мышечных волокон кожи под воздействием питания на ней клещей Hyalomma asiaticum
P. Sch. еt E. Schl. (сем. Ixodidae) Доклады АН
СССР, т. 111, №6, 1956
3. Берлин Л.В. Гистологические изменения кожи
кроликов и морских свинок, вызываемые питанием на них клещей Hyalomma asiaticum P. Sch.
еt E. Schl. (сем. Ixodidae) Доклады АН СССР, т.
112, № 2, 1957
4. Крылов
В.М. Краснохвостая
песчанка
(Meriones erythrourus), как экспериментальная модель для изучения пироплазмозов //
Материалы научной конференции, посвященной 50-летию экспедиции проф. В.Л. Якимова в Среднюю Азию, Самарканд-Тайляк, 1963
с. 61-62
5. Кузнецова Г.М. Морфологические изменения
кожи крупного рогатого скота при паразитировании пастбищного клеща Hyalomma scupense
Труды московской ветакадемии, т. 19, вып. 1,
1957
6. Кузнецова Г.М. Морфологические изменения
кожи крупного рогатого скота и кожевенного
сырья при паразитировании пастбищного клеща Hyalomma scupense P. Sch., 1918 Авторефе-
48
рат канд. дисс., Москва, 1957
7. Кузякин Ю. В. Фауна иксодовых клещей Оренбургской области: Дисс. … канд. вет. наук,
Оренбург, 1968 279 с.
8. Кульбертсон Дж.Т. Иммунитет к паразитарным
заболеваниям М.: Изд. Иностранной литературы, 1948 327 с.
9. Мишаева Н.П., Вотяков В.Й. Использование
иксодовых клещей в вирусологических и иммунологических исследованиях и техника безопасности при работе с ними (Методические
рекомендации) Минск, 1980 28 с.
10. Мусатов В.А. Изменения в морфологии и физиологии иксодовых клещей при различных
условиях питания на животных Первое акарологическое совещание, Тезисы докладов, 1966
11. Павловский Е.Н., Алфеева С.П. Патологогистологические изменения кожи крупного
рогатого скота при укусе клеща Ixodes ricinus
Труды Военно-медицинской академии им. С.М.
Кирова, т. 25, 1941
12. Павловский Е.Н., Алфеева С.П. Сравнительная патология кожи млекопитающих при укусе
клещами. Действие укуса клещей Hyalomma на
кожу быка, коровы, козы и собаки Известия
АН СССР, серия биол., № 6, 1949
13. Павловский Е.Н., Штейн А.К. Экспериментальные исследования над действием клещей
на кожу человека Русский журнал тропич. Медицины, №8, 1926
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
14. Павловский Е.Н., Штейн А.К. Экспериментальные исследования над действием клещей
на кожу человека Труды Военно-медицинской
академии им. С.М. Кирова, т. 25, 1941
15. Ackerman S., Floyd M., Sonenshine D.E. Artificial
immunity to Dermacentor variabilis (Acari: Ixodidae): vaccination using tick antigens // J. Med. Entomol., 17, 1980 p. 391-397
16. Allen J.R., Humphreys S.J. Immunization of guinea pigs and cattle against ticks // Nature, 280, 1979
p.491-493
17. Barriga O. A review on vaccination against protozoa and arthropods of veterinary importance Vet.
Parasitol., 55 (1-2), 1994: 29-55
18. Brosard M. Rabbit infested with the adults of Ixodes ricinus L.: Passive transfer of resistance with
immune serum // Bull. Soc. Path. Exot., 70, 1977
p. 289-294
19. Brown S.J., Barker R.W., Askenase P.W. Bovine
resistance to Amblyomma americanum ticks, an
acquired immune response characterized by cutaneous basophil infiltrates // Vet. Parasitol., 16, 1984
p.147-165
20. Dhadialla T.S., Rutti B., Brossard M. Induction of
host resistance to Rhipicephalus appendiculatus in
rabbits: effect of immunizing with detergent-solubilized tick tissue proteins // Parasitol. Res. 1990
76, №6 p.536-539
21. Fivaz Bruce H. Immune suppression induced by
the brown tick Rhipicephalus appendiculatus
Neumann, 1901 // J. parasitol. 1989-75-№ 6-p.946952
22. Fudjisaki K., Takeuchi S., Kitaoka S. Development
of acquired resistance and production of precipitating and fixing antibodies in rabbits repeatedly
infested with females of Haemaphysalis longicornis ( Ixodoidea; Ixodoidea) // Japanese J. Vet. Sci.,
42, 1980 p. 587-592
23. Goezy A.F., Naughton M.A., Clegg J.B., Heweston
Q.W. Esterase and a carbohydrate splitting enzyme
in the saliva of the cattle tick Boophilus microplus
// J. parasitol., 57,1977 p.437-438
24. Hoogstraal H. African Ixodoidea I: Ticks in Sudan
with special reference to equatoria province and
with preliminary reviews of the genera Boophilus
margaropus and Hyalomma // U.S. Naval. Med.
Res. Unit. № 3, Cairo, UAAR, 1956 pp. 1101
25. Jittapalopong S., Stich R.W., Gordon J.C., Wittum
T.E., Barriga O.O. Performanse of female Rhipicephalus sanguineus (Acaris, Ixodidae) fed on
dogs exposed to multiple infestations or immunization with tick salivary gland or midgut tissues //
J. med. Entomol. 2000, 37, №4 p.601-611.
26. McGowan M.J., Camin H., McNew R.W. Field
study of the relationship between skin sensitizing antibody production in cotton tail, Sylvilagus
floridanus and infestations by the rabbit tick Haemaphysalis leporispalustris (Acari: Ixodidae) // J.
parasitol., 65,1979 p. 692-699
27. McGowan M.J., Homer J.T., O`Dell G.V., McNew
R.W., Barker R.W. Performance of ticks fed on
rabbits inoculated with extract derived from homogenized ticks Amblyomma maculatus (Acari:
Ixodidae) // J. parasitol., 66, 1980 p.42-45
28. McGowan M.J., Barker R.W., Homer J.T., McNew
R.W., Holscher K.H. Success of tick feeding on
Ветеринарная патология. № 2. 2008
calves immunized with Amblyomma americanum
(Acari: Ixodidae) extract // J. med. Entomol., 18,
1981 p. 328-332
29. McTier T.L., George J.E., Bennett S.N. Resistance
and cross-resistance of guinea pigs to Dermacentor andersoni Stiles, Dermacentor variabilis (Say),
Amblyomma americanum (Linnaeus) and Ixodes
scapularis // J. parasitol., 67,1981 p.813-822
30. Mulenga A., Tsuda A., Sugimoto Ch., Onuma A.
Blood meal acquisition by ticks: molecular advances and implications for vaccine development
// Jap. J. vet. Res. 2002 49, №4 p.261-272.
31. Norval R.A.I., Sutherst R.W., Jorgensen O.G., Kerr
J.D. The effect of the bont tick Amblyomma hebraeum on milk production of sanga and sanga X
brahman cattle. Med. and vet. Entomol., vol. 11,
№2, 1997 р.143-147
32. Rechav Y. Acquired immunity to African ticks
with special reference to gamma-globulins // Bull.
Soc. Fr. Parasitol. 8, 1990, Suppl. №1 p. 649
33. Riek R.F. Studies on the reactions of animals to
infestations with ticks III: The reactions of laboratory animals to repeated sub lethal doses of eggs
extracts of Haemaphysalis bispinosa Neumann //
Aust. J. Agric. Res., 9, 1958 p. 830-841
34. Riek R.F. Studies on the reactions of animals to
infestations with ticks IV: The protein components
of tick extracts // Aust. J. Agric. Res., 19, 1959 p.
604-613
35. Riek R.F. Studies on the reactions of animals to infestations with ticks VI: Resistance to infestations
with the tick Boophilus microplus (Canestrini) //
Aust. J. Agric. Res., 13,1962 p. 532-550
36. Rubaire-Akiki C.M., Mutinga M.J. Immunological reactions associated with rabbits resistance to
Rhipicephalus appendiculatus (Neumann) infestations // Bull. Anim. Hlth. Prod. Afr., 28, 1980 p.
49-59
37. Sahibi H., Rhalem A., Barriga O.O. Effet de l`age,
la pace, sur la resistance des bovines a l`infestation
naturelle par les tiques dans trios regions differentes au Maroc // Bull. Soc. Fr. Parasitol. 1990 8,
suppl. №2 p. 717.
38. Sinha S.R.P., Sinha B.N., Ansari M.Z. Note of the
biology of one-host Boophilus microplus // Indian
J. Anim. Sci., 52, 1982 p.966-967
39. Srivastava P.S., Sharma N.N. A simple, economical
and improved plastic collar for restraining rabbits
during tick feeding // Lab. Anim., 11,1976 p.59
40. Srivastava P.S., Kanak L., Sinha S.R.P., Jayachandran C. Induction of acquired immunity against
Boophilus microplus ticks in rabbits with tick tissue // Journal of veterinary parasitology, 1, 1987 p.
23-30
41. Trager W. J. Parasitol., 24, 1938: 20
42. Wikel S.K. The induction of host resistance to ticks
infestations with a salivary glands antigens // Am.
J. Trop. Med. Hyg., 30, 1981 p. 284-288
43. Willadsen P., Williams P.G. Isolation and partial
characterization of an antigens from the cattle tick
Boophilus microplus // Immunochemistry, 13, 1976
p. 591-597
44. Willidsen P., Kemp. D.H. Novel vaccination for
control of the Babesia vector Boophilus microplus
// Trans. Roy. Soc. Trop. Med. Und Hyg. 1989 83,
suppl. p.107
49
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
УДК 619.616
Х. Георгиу, В.В. Белименко, П.И. Христиановский
ВИЭВ, Оренбургский государственный аграрный университет
К ВОПРОСУ ОБ ИММУНИЗАЦИИ
ПРОТИВ БАБЕЗИОЗА СОБАК
Для иммунизации собак против бабезиоза можно использовать как корпускулярные, так и растворимые антигены (K.H.
Sibinovic et al., 1967; Th.P.M. Schetters et al.,
1995, 1997, 2001) С момента открытия возбудителя данного заболевания в 1895 году Piana и Galli-Walerio вопрос о создании
коммерческой высокоэффективной вакцины для профилактики остается открытым.
Это можно объяснить следующим: иммунитет при бабезиозах нестерильный, так
называемая премуниция, благодаря чему
резистентность к заболеванию сохраняется только при наличии возбудителя в организме животного (Theiler (1904, 1905) цит.
по Henning M.W., 1956); значительная антигенная вариабельность различных подвидов и штаммов Babesia canis (Велю Г. 1930;
G. Uilenberg et al., 1989; Schetters Th.P.M.
et al., 1995, 1997); различная вирулентность и иммуногенность разных подвидов
(S.Hauschild et al., 1995), cложности в получении антигенов, значительные затруднения в получении достаточного количества антигенного материала, затруднения
в культивировании паразита на питательных средах (M.A.N. Rao, 1926; T. Murase et
al. 1991; Schetters Th.P.M. et al., 1992, 2001) и
сохранении полученных препаратов.
Для получения высокоэффективной
вакцины против бабезиоза собак необходимо соблюдать следующие условия: необходимо выделить соматический или плазменный антиген, который должен обладать высокими иммуногенными свойствами при низкой вирулентности и реактогенности; подобрать оптимальные способы ослабления патогенности возбудителя;
подобрать аъдюванты, способствующие
депонирования ангигена в месте введения;
получить достаточное для промышленного производства количество биологического препарата. Получение препарата из
крови больных или иммунизированных
животных не может удовлетворить потребности коммерческого производства.
Кроме того, нельзя гарантировать отсутствие возбудителей других инфекционных
заболеваний у животных-продуцентов.
Одним из основных направлений в этих
исследованиях является культивирование
бабезий на питательных средах. (Schetters
50
Th.P.M. et al., 1992; E. Zweygarth et al., 1995;
S.D. Rodriguez et al., 1983).
Е. Nocard и Motas (1902) доказали, что
все собаки, выздоровевшие от естественного или экспериментального заболевания бабезиозом, становятся невосприимчивыми. Они без последствий переносят
прививки значительно более высоких доз
вирулентной крови по сравнению с такими же, обусловливающими у контрольных
животных заболевание, всегда оканчивающееся летальным исходом. Помимо этого, авторы установили наличие особых защитных тел. Сыворотка обладает ярко выраженным профилактическим действием,
которое может быть усилено повторными
инъекциями вирулентной крови. В результате этого получается сыворотка, 5 и даже
3 см3 которой достаточны для предохранения от заболевания. Однако, вызываемый
иммунитет непродолжителен. Опыты иммунизации прививками согретой крови не
дали достаточно хороших результатов.
М. Theiler (1905) установил, что кровь
животных, иммунизированных после первого естественно или экспериментально
полученного заболевания, остается вирулентной и способна вызывать болезнь у
восприимчивых молодых собак. Кровь сохраняет свою вирулентность в течение года после переболевания, то есть паразиты могут в течение года оставаться в организме здорового животного, невосприимчивого к повторному заражению. Такое
переживание паразитов в организме собак может длиться и два года (Nuttall et
Graham-Smith, 1902).
Пользуясь этим М. Theiler, приступил
к получению специфической сыворотки,
иммунизируя крупную собаку постепенно возрастающими дозами крови больных
щенков. За двухнедельный период собака получила в общей сложности 1115 см3
дефибринированной вирулентной крови. Большинство опытов М. Theiler и было поставлено с сывороткой этой собаки.
Вначале М. Theiler заметил, что сыворотка
обладает предохранительными свойствами. Тем не менее, дефибринированная и недефебринированная кровь того же животного оказалась патогенной для молодых
собак, а сыворотка иммунизированной соВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
баки имела предохранительные свойства
против пироплазм, содержавшихся в ее
собственной крови.
G.H. Nuttall и Graham-Smith (1910) пытались иммунизировать собак путем прививки крови, содержащей убитых бабезий.
В результате три собаки пали от острой
формы бабезиоза, одна от хронической,
еще одна собака пала до появления паразитов в крови.
Schilling и Friedrich сделали попытку
выяснить вопрос о наличии иммунитета
после полного исчезновения паразитов,
требующего для своего завершения иногда один – два года. Исследуя кровь давно
зараженной собаки, потерявшей свою вирулентность, они установили, что сыворотка этой собаки более не обладала защитным действием, а сама собака не имела иммунитета к бабезиозу. Таким образом, эти авторы пришли к заключению,
что иммунитет не сохраняется после исчезновения паразитов.
M. Ciuca привил собаку, переболевшую
один раз пироплазмозом, спустя двадцать
месяцев после исчезновения у нее паразитов (тонкийский штамм, Mathis) пироплазмами южно-африканского происхождения. Собака заболела и пала. Laveran
указал, что собаки, иммунизированные
против паразита, полученного из одного
источника, не всегда невосприимчивы к
другому штамму.
Kleine наблюдал, что беременные
больные собаки передают некоторый иммунитет своим щенкам. Этот иммунитет
может быть усилен при кормлении молоком матери и преобразован в длительный
иммунитет путем подсаживания к щенкам
молодых клещей.
Во время своих опытов по идентификации африканского и европейского штаммов Babesia canis Laveran и Nattan-Larrier
наблюдали дважды переболевшую собаку, которая принесла щенков. Один из них
был привит сразу после рождения штаммом французского происхождения и не
заразился, в то время как другой, привитый тринадцать дней спустя африканским
штаммом, заболел пироплазмозом. Авторы пришли к заключению, что у новорожденных щенков существует скоропроходящий иммунитет. (по H. Velu, 1930).
Первая попытка культивировать одного из возбудителей бабезиоза собак
Babesia gibsoni была предпринята M.A.N.
Rao (1926), который использовал 14 вариантов питательных сред при трёх температурных режимах, но безуспешно. In vitro
Ветеринарная патология. № 2. 2008
культивирование Babesia gibsoni было также проведено T. Murase et al. (1991, 1993),
которые в течение 15 дней смогли поддерживать жизнедеятельность паразита, полученного от инвазированной собаки с паразитемией более 1%, на питательной среде при атмосфере с содержанием 5% СО2.
Ziemann, руководствуясь основными
чертами метода Bass’a, с успехом культивировал пироплазмы у собаки. Вместо 0,1 см3 50%-ного раствора глюкозы
(декстрозы) и 10 см3 крови он помещал в
пробирки 0,2 см3, добавляя к глюкозе лимоннокислый натрий (0,2%) и хлористый
натрий (0,85%). Для питательной среды
Ziemann предпочитал брать центрифугированную кровь с удалением из нее слоя
лейкоцитов, а сыворотку – инактивированную при 45° С в течение часа. Гемолизированная кровь для культивирования
непригодна. Необходимо избегать соприкосновения крови со свободным воздухом
и иметь слой дефибринированной крови
не менее 5 см. Для культивирования, по
мнению Ziemann, лучше всего использовать паразитов, выделенных из периферической крови в первые дни после заражения до момента наступления даже слабо выраженных изменений крови, и особенно до начала гемолиза. Четырех-шестидневные и даже 20-дневные культуры,
инъецированные в яремную вену, оказываются вирулентными для собак.
Knuth и Richters, руководствуясь методом Bass’a и результатами Ziemann, получили in vitro культуры Piroplasma canis.
Первые пробирки приготовлялись из смеси раствора сахара и крови – слабо инвазированной, дефибринированной, центрифугированой, отделенной от лейкоцитов. Пробирки ставились в термостат при
40° С. В пробирках для культур приготовлялась среда из дефибринированной крови и 2% раствора глюкозы, к которой добавлялясь 0,25-0,5 см3 из начальных пробирок. В культурах после 18-20-часового пребывания их в термостате наблюдалось ясное размножение паразитов. Впоследствии
Knuth и Richters внесли некоторое изменение в свой метод: сыворотка не отделялась, применялся 2-3% раствор глюкозы и
к 5 см3 крови прибавлялось 0,1 см3 2% раствора лимоннокислого натрия. Размножение бабезий становилось заметно на 68 день культивирования. Прививка культур здоровой собаке вызвала заболевание.
Toyoda, пользуясь методом Bass’a, также
получил культуры Piroplasma canis. (по H.
Velu, 1930).
51
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Н.А. Колабский и др. (1961) применяли
для консервирования крови больных пироплазмозом собак сахарный сироп и хинозол в различных вариантах. Опыты показали, что оба препарата не пригодны для
консервирования, так как они быстро вызывали гемолиз крови и гибель паразитов.
Они также применяли консерванты 31-Е
и 21-Е, приготовленные в Ленинградском
институте переливания крови. Согласно их
данным, кровь больных собак сохраняется
в консерванте 31-Е при температуре 1-8° С
до двух месяцев, не теряя цвета свежей крови, а сам возбудитель сохраняет свои вирулентные свойства до 45 дней.
Т. Onishi et al. (1993) изучили несколько питательных сред для культивирования
и особенности жизнедеятельности бабезий
in vitro. Им удалось продлить срок культивации до 28 дней за счет еженедельной замены части эритроцитов в среде.
E. Zweygarth, L.M. Lopes-Rebollar
(2000) провели размножение двух штаммов Babesia gibsoni в собачьих эритроцитах в микроаэрофильной стационарно-фазной среде по методике M.G. Levy
и M. Ristic (1980). Культивирование обоих штаммов проводилось при температуре
37° С во влажной атмосфере, состоящей из
5% СО2, 2% О2 и 93% N2 в момент, когда в
мазке крове обнаруживалось незначительное количество паразитов (<0,01%). Кроме того, один из штаммов был также культивирован при температуре 37° С во влажной атмосфере с содержанием 5% СО2 при
паразитемии 2,6%. В качестве питательной среды была использована модифицированная среда HL-1 с добавлением сыворотки крови собаки, L-глютамина и антибиотиков. Полученные культуральные
штаммы сохранялись в течение 102 и 51
дней соответственно.
Подобные данные получил Ewing S.A.
(1965), которому удалось непродолжительное время проводить репродукцию Babesia
canis в эритроцитах собак на питательной
среде. Однако, срок культивации ограничивается сроком жизни самих эритроцитов, которые, являясь безядерными клетками, не способны к размножению.
Н.А. Колабский и др. (1961) готовили
живую ослабленную вакцину по следующей методике: от остро больной пироплазмозом собаки была взята кровь и введена подкожно другой. Затем с появлением
в крови последней единичных кольцевидных форм возбудителя, пассажировали через организм еще пяти собак с целью ослабить его вирулентные свойства. От послед52
ней собаки взяли 50 мл крови в соотношении 1:1 с консервантом 31-Е. Эта консервированная кровь с ослабленным в ней возбудителем и представляла собой живую консервированную вакцину. Иммуногенность
вакцины была проверена путем введения
ее нескольким интактным собакам подкожно в дозе 4 мл. Ежедневное измерение
температуры тела и исследование мазков
в течение месяца показали, что собаки на
введение вакцины не реагировали и пироплазмозом не заболевали. Температура тела
оставалась в пределах нормы, аппетит сохранялся, в крови паразитов не обнаруживали. Через месяц после иммунизации, части собак была введена кровь от больной
пироплазмозом собаки. На седьмой день
после заражения в крови обнаруживались
единичные кольцевидные и грушевидные
формы Piroplasma canis. Слабая паразитарная реакция наблюдалась в течение четырех дней, а потом исчезла. В ходе месячного наблюдения клинических признаков
пироплазмоза выявлено не было. Остальным собакам вирулентная кровь была введена через два месяца после иммунизации.
Собаки пироплазмозом не заболели, паразиты в крови не обнаруживались. Кроме того, проведенные авторами опыты показали, что применяемая ими живая консервированная вакцина против пироплазмоза собак сохраняет свои иммуногенные
свойства в консерванте 31-Е в течение двух
месяцев при хранении в холодильнике при
температуре 1° С, а при подкожном введении ее восприимчивым животным предохраняет их от заболевания.
Shetters Th. P. M. et al. (1997), исследуя два изолята, B.canis canis европейский
штамм, выделенный от больной собаки во
Франции, и B.canis rossi южноафриканский, обнаружил различные пути патогенеза. Он, исходя из полученных данных, предполагает, что для заражения европейским
изолятом характерны: молниеносная паразитемия (обычно ниже 1%), сильная анемия, переполнение кровью внутренних органов, аутоагглютинация. Shetters Th. P. M.
(1995) считает, что пораженные паразитом
эритроциты активируют коагуляционную
систему. В сыворотке крови собак, зараженных европейским штаммом, обнаружено резкое повышение концентрации фибриногена (пик концентрации фибриногена
приходится на 4 день, затем она резко падает), что запускает механизм агглютинации
(пик свертывания отмечен на 7 день).
С другой стороны, гиперкоагуляция может быть проявлением защитных сил саВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
мого организма животного, так как вследствие аутоагглютинации пораженных эритроцитов, паразиты удерживаются в тканях,
депонирующих кровь, что предотвращает
генерализацию процесса. Поэтому в начале заболевания в периферической крови
их сложно обнаружить.
Исследования K.H. Sibinovic et al. (1967)
показали, что растворимые паразитарные
антигены из плазмы крови инвазированных бабезиями животных могут быть использованы как вакцина. По мнению M.
Ristic (1981) источником экзоантигенов
являются поверхностные слои мерозоита.
Такие антигены выделяются в среду обитания (плазма крови, либо культуральная
среда), в основном, при внедрении паразита в эритроцит, хотя часть их может освобождаться и при выходе мерозоита из
клетки. Выделение бабезийных антигенов
позволило определить их белковую природу и некоторое различие в составе белков,
чем и объясняется отсутствие перекрестного иммунитета между возбудителями
(B.canis и Babesia gibsoni). Так, было выяснено, что они имеют молекулярный вес 3740 кД, разрушаются под действием папаина и трипсина, сохраняют стабильность
при температуре 60° С и электрофоретически мобильны. Кроме того, экзоантигены Babesia canis разрушаются под действием альфа-амилазы.
Schetters P.M. (1995) предлагает использовать растворимые антигены, полученные
при культивировании Babesia canis in vitro.
Он также отмечает тот факт, что растворимые антигены паразита, иммунизирующие
против гомологичной экспериментальной
инвазии, не продуцируют защиту от гетерологичных штаммов (Schetters Th.P.M. et
al., 1995). Этот тип иммунитета показан независимо от значения периферической паразитемии и не вызывается при иммунизации соматическими антигенами паразита (Schetters Th.P.M., 1992, 1996). Вакцинация, защищающая собак от развития критического патологического процесса, характеризуется чрезмерным уменьшением
гематокрита и задерживанием инвазированных эритроцитов в капиллярах, что типично для европейского штамма, но не характерно для южно-африканского подвида Babesia canis rossi. Более того, использование для иммунизации собак растворимых антигенов Babesia canis rossi не защищает от заражения как гетерологичными,
так и гомологичными штаммами.
Для создания эффективной защиты
при вакцинации собак Th.P.M. Schetters et
Ветеринарная патология. № 2. 2008
al. (2001) была проведена иммунизация
смесью растворимых антигенов от европейского штамма Babesia canis и южноафриканского Babesia rossi. В эксперименте были использованы три группы собак породы бигль по пять особей в каждой. Подопытным животным двукратно с
интервалом три недели вводили подкожно
в возрастающей дозе растворимые паразитарные антигены, полученные при культивировании in vitro обоих штаммов. В качестве адъюванта был использован сапонин. Он отмечает, что у собак вырабатываются иммунитет не только против антигенов, но и против пораженных бабезиями эритроцитов. Исследования показали,
что антиген снижает клинические проявления заболевания после экспериментального гомологичного заражения. Вакцинация приводила к образованию нодулы в
месте инъекции, что, вероятно, было вызвано используемым адъювантом. У некоторых животных наблюдался анафилактический шок после внутривенного введения
возбудителя при экспериментальном заражении. Наиболее вероятным представляется, что инокулят при повторном заражении содержал паразитарный антиген, который и вызвал анафилактическую реакцию. Антигенные препараты защищали
животных от клинических проявлений заболевания. Это может быть аргументировано тем, что эффект был обусловлен снижением паразитарной нагрузки посредством активации антител. Вакцинные препараты действуют на снижение клиники
заболевания, но не влияют на количество
паразитов в крови.
Таким образом, приготовленная вакцина с антигенами из надосадочной жидкости не защищает собак от заражения паразитом. Хотя и не даёт снижения гематокрита, как в контрольных группах животных (Schetters Th.P.M, et al., 1994; 1995;
1997; 2001).
В качестве одного из способов иммунизации собак против бабезиоза предлагается также экспериментальное заражение слабопатогенными штаммами Babesia
canis с одновременным введением антипаразитарных препаратов. L.P. Brandao et al.
(2003) сообщают о том, что введение имидокарба дипропионата одновременно с экспериментальным заражением способствует сглаженному течению заболевания и
обеспечивает резистентность к повторному заражению в течение шести месяцев. У
подопытных животных отмечается более
высокий титр антител к Babesia canis без
53
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
ярко выраженных клинических признаков.
Кроме того, имидокарб стимулирует гуморальный иммунитет.
Для ослабления вирулентности Babesia
canis И.В. Абрамов и В. С. Дуранов (1966,
1969) предлагают использовать рентгеновское излучение. В качестве источника облучения использовали рентгеновский терапевтический аппарат РУМ-ll. Кровь от
остро больных бабезиозом собак облучали
в чашках Петри в дозах 7000, 10000, 15000
р. Заражение кровью инвазированной
Piroplasma canis, облученной в дозе 5000
р, вызывало заболевание и гибель щенят
от пироплазмоза, но инкубационный период увеличивался на 18 дней, по сравнению
с контрольными. При заражении инвазированной кровью, облученной в дозе 7500
р, щенки не заболевали пироплазмозом.
Контрольный щенок пал от пироплазмоза.
Повторное заражение 2 щенят, инвазированной необлученной кровью, вызывало заболевание их пироплазмозом. Но
они болели легче и остались живы. Контрольный щенок пал от пироплазмоза. Заражение щенят кровью, облученной в дозах 10000, 15000 р не вызывало у них заболевания. Повторное заражение 7 подопытных. щенят, инвазированной необлученной
кровью, вызвало заболевание всех щенят
пироплазмозом, из которых 4 остались живы. Оба контрольные щенка пали от пироплазмоза.
Корпускулярный антиген получают путем лизиса пораженных эритроцитов. Для
приготовления корпускулярного антигена
из бабезий необходимо получить кровь с
высокой паразитемией, для чего применяется спленэктомия животных. У спленэктомированных собак паразитемия может
достигать 40% (Lewis R.M., 1963; Camacho
A.T. et al., 2001).
Для приготовления антигена из возбудителя бабезиоза собак все исследователи отмывали эритроциты из полученной венозной крови. Отмывание проводилось трижды либо в фосфатном буфере (рН 7,4), либо в буфере TRIS-HCl
(10mM TRIS-HCL, 150 mM NaCl, рН 7,4)
при 500 об/мин в течение 10 минут при
+4° С. Некоторые авторы собранную
кровь подвергли осаждению декстраном
(Adachi K. et al., 1993; Lewis R.M., 1963;
Camacho A.T. et al., 2001).
T.Morita et al., (1995), применяли наиболее простую схему согласно методу Spira
и Zuckerman (1962) в своей модификации.
Они лизировали эритроциты 0,1% раствором сапонина в фосфатном буфере. После
54
этого, чтобы получить чистый раствор паразитарного антигена, лизированный осадок несколько раз промывали фосфатным
буфером и центрифугировали.
K.Adachi et al., (1993), считают, что наиболее чистый антигенный материал можно
получить, разрушая эритроциты кавитацией газообразного азота. Метод основан на
осмотической хрупкости эритроцитов. Для
концентрации осмотическим воздействием
паразитов осаждают ультрацентрифугированием в растворе Percoll, сахарозном градиенте плотности. Из полученного осадка
эритроцитов фильтровальным аппаратом
(Terumo, Japan), были удалены лейкоциты.
Эритроциты вновь центрифугировали при
700 об/мин в течение 10 мин. 30%-ую суспензию эритроцитов, в холодном фосфатном буфере (рН 7,4), подвергли разрушению для освобождения паразитов из эритроцитов. Для этого использовали кавитацию азотом при 70 кг/см2 в течение 1 мин.
Полученный гемолизированный раствор,
после отстаивания 20 мин при комнатной
температуре, был центрифугирован на 350
об/мин в течение 15 мин, при +4° С. Надосадочную жидкость, содержащую множество свободных паразитов, отцентрифугировали на 6000 об/мин в течение 30 мин,
при +4° С. Осадок развели равным объёмом в фосфатном буфере. Суспензия паразитов занимала верхний слой в градиенте плотности 20%; 30%; 40% Percoll, её
центрифугировали на 2500 об/мин, в течение 30 мин. Приготовленный паразитарный препарат был видим как кольцо между 40% и 30% Percoll. Затем дважды отмыли в фосфатном буфере и центрифугировали на 4000 об/мин в течение 10 мин. Но,
несмотря на эти попытки улучшить технику, слабое загрязнение взвеси паразита осколками эритроцитарных мембран всё же
остается.
S.Hauschild et al., (1995), применяли
другой метод получения антигенного материала. Полученный осадок эритроцитов развели в пропорции 1:5 буфером
TRIS-HCl. Разделение пораженных возбудителем паразитов от интактных провели в растворе Percoll (градиент плотности 1,09g/ml). Собранную фракцию пораженных возбудителем эритроцитов трижды отмыли в TRIS-HCl (500 об/мин, 10 минут, при +4° С) и развели в пропорции 1:1
буфером TRIS-HCl. Гемолизин добавили
в концентрации 400 ЕД на 1 мл эритроцитарной суспензии и инкубировали при
37° С 30 мин в водяной бане. Реакцию остановили добавлением 10 мл 0,5М раствоВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
ра EDTA. Освобожденных из разрушенных эритроцитов паразитов отделили в
растворе Percoll. Собранных паразитов
отмыли трижды в буфере TRIS-HCl (5000
об/мин, 10 мин, +4° С), и сохраняли в буфере TRIS-HCl при температуре 70° С.
В 1972 году во Франции фармацевтической компанией Merial была разработана вакцина Pirodog, которую применяют
в Европейских странах (Moreau Y., 1983;
Barriga O., 1994). В России данная вакцина
не сертифицирована (Бондаренко Т., 1998:
Балагула Т.В., 2000). Препарат представляет собой таблетки и растворитель для
суспензии для инъекции. Каждый миллилитр настоящей дозы вакцины содержит
растворимую таблетку, содержащую растворимые концентрированные антигены
Babesia canis и наполнитель. Растворителем служит водный раствор сапонина.
Вакцина применяется для активной иммунизации против пироплазмоза, вызываемого Babesia canis. Вакцина вводится
клинически здоровым собакам подкожно в дозе 1 мл дозы по следующей схеме.
Первичная вакцинация: первая инъекция – собакам старше 5-ти месяцев, вторая инъекция – 3-4 недели спустя. Поддерживающие вакцинации проводятся ежегодно или раз в квартал в зависимости от
эпизоотологической обстановки. Противопоказаниям к применению является беременность. Также не рекомендуется делать инъекции одновременно с вак-
циной от лепоспироза. Другие вакцины
могут быть назначены при необходимости за 2-3 недели или по прошествию 2-3
недель курса Pirodog. Вакцинация может
вызвать кратковременный отек на месте
инъекции и легкую гипертермию, аллергическую реакцию.
Таким образом, проблема специфической профилактики бабезиоза собак остается на сегодняшний день нерешенной.
Разработанная во Франции вакцина не является окончательным решением данного
вопроса и широкого применения в России,
к сожалению, не находит. Это связано со
многими факторами. Для получения высокоэффективной вакцины против бабезиоза собак необходимо соблюдать следующие условия: необходимо выделить соматический или плазменный антиген, который должен обладать высокими иммуногенными свойствами при низкой вирулентности и реактогенности; подобрать оптимальные способы ослабления патогенности возбудителя; подобрать адъюванты, способствующие депонации антигена в
месте введения; получить достаточное для
промышленного производства количество
биологического препарата. При этом получение препарата из крови больных или
иммунизированных животных не способно
удовлетворить потребности коммерческого производства. Кроме того, нельзя гарантировать отсутствие других инфекционных
заболеваний у животных-продуцентов.
SUMMARY
Canine babesiosis is protozoal transmissible, not contagious bloodparasite disease, caused by the elementary
parasite Babesia canis. This disease puts enormous damage to animal industries worldwide. One of methods
of prevention babesiosis is immunisation. In this review the basic references devoted about immunization
against ticks has described.
Литература
1. Абрамов И.В., Дуранов В. С. Изменение вирулентности возбудителей бабезиоза овец и пироплазмоза собак лучами Рентгена (in vitro). Природно очаговые болезни и вопросы паразитологии в республиках средней Азии и Казахстана,
Душанбе, 1969 с. 89-90
2. Белицер А.В. Пироплазмозы в кн.: «Инфекционные и инвазионные болезни домашних животных», 1929 с.66-152
3. Дуранов В. С. Изучение действия ионизирующих излучений на возбудителей бабезиоза овец,
пироплазмоза собак и клещей-переносчиков
Дисс. … канд. вет. наук, Москва, 1966 266 с.
4. Колабский Н.А., Гайдуков А.Х., Тарвердян Т.Н.,
Песков Н.М. Испытание консервированной
вакцины при бабезиеллезе крупного рогатого
скота и пироплазмозе собак // Сб. работ научной конференции по протозоологическим проблемам, посв. 90-летию со дня рождения проф.
В.Л. Якимова Л.: 1961 с. 202-207
5. Adachi K., Watanabe T., Yamane S., Makimura
S. Isolation of Babesia gibsoni piroplasms from
infected erythrocytes of dogs. J. Vet. Med. Sci. 55(3),
1993: 487-490
6. Brandao L.P., Hagiwara M.K., Myiashiro S.I. Hu-
Ветеринарная патология. № 2. 2008
moral immunity and reinfection resistance in dogs
experimentally inoculated with Babesia canis and
either treated or untreated with imidocarb-dipropinate. Vet. Parasitol., vol. 114(4), 2003: 253-365
7. Ewing S.A. Method of reproduction of Babesia canis in erythrocytes, Am. J. Vet. Res., 26, 112, 1965:
727-733
8. Hauschild S., Shayan P., Stein E. Characterization and
comparison of merozoite antigens of different Babesia canis isolates by serological and immunological
investigations. Parasitol Res. (1995) 81:638-642.
9. Henning M.W. Animal diseases in South Africa.
South Africa: central news agency LTD., 1956.
10. Laurent N., Moreau Y., Levy M., Ristic M. A vaccine
against canine babesiosis using a soluble antigen derived from cell culture of Babesia canis . Proc. 2nd Conf.
Malaria and Babesiosis, Sept. 1983, Annecy p. 106
11. Levy. M.G., Ristic M. Babesia bovis: Continuous
cultivation in a microaerophilous stationary phase
culture. Science, 207, 1980: 1218-1220
12. Martinod S., Brossard M., Moreau Y. Immunity of
dogs against Babesia canis, its vector tick Dermacentor reticulates and Ixodes ricinus in an endemic
area. J. Parasitol., 71, 1985: 269-273
13. Martinod S., Laurent N., Moreau Y. Resistance and
55
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
immunity of dogs against Babesia canis in an endemic area. Vet. Parasitol., 19(1986): 245-254.
14. Murase T., Hashimoto T., Ueda T., Maede Y. Multiplication of Babesia gibsoni in vitro culture and its
relation to hemolisis of infected erythrocytes. J. vet.
Med. sci., 53, 1991: 759-760.
15. Murase T., Iwai M., Maede Y. Direct evidence for
preferential multiplication of Babesia gibsoni in
young erythrocytes. Parasitol. Res., 79, 1993: 269271
16. Morita T., Saeki H., Imai S., Ishii T. Reactivity of
anti-erythrocyte antibody induced by Babesia gibsoni infection against aged erythrocytes. Veterinary
Parasitology 58 (1995) 291-299.
17. Onishi T., Morita M., Anda T. In vitro cultivation
and infectivity of Babesia gibsoni. Japan J. Parasitol., 42, 1993: 340-344
18. Rao M.A.N. Piroplasma gibsoni Patton, 1910. Ind. J.
med. res., 14, 1926: 785-800
19. Rodriguez S.D., Buening G.M., Green T.J., Carson
C.A. Cloning of Babesia bovis by in vitro cultivation . Infect. Immune., 42, 1983: 15-18.
20. Schetters Th.P.M., Kleuskens J.A.G.M., Scholtes
N.C., Bos H.J. Vaccination of dogs against Babesia
canis infection using parasite antigens from in vitro
culture. Parasite immunol., 14, 1992: 295-305
21. Schetters Th.P.M., Kleuskens J.A.G.M., Scholtes
N.C., Pasman J.W., Bos H.J. Vaccination of dogs
against Babesia canis infection using antigens from
culture supernatants with emphasis on clinical babesiosis. Veterinary Parasitology (1994), 52:219-233.
22. Schetters Th.P.M., Scholtes N.C., Kleuskens
J.A.G.M., Bos H.J. Strain variation limits protective
activity of vaccines based on soluble Babesia canis
antigens. Parasite immunology, 1995, 17: 215-218.
23. Schetters Th.P.M., Scholtes N.C., Kleuskens
J.A.G.M., Bos H.J. Not peripheral parasitaemia but
the level of soluble antigen in plasma correlates
with vaccine efficacy against Babesia canis. Parasite
immunology 18, 1-6, 1996.
24. Schetters Th.P.M., M.Kleuskens J.A.G., Scholtes
N.C., Pasman J.W., Goovaerts D. Vaccination of
dogs against Babesia canis. Veterinary Parasitology
(1997), 73:35-41.
25. Schetters Th. P. M., Moubri K., Precigout E., Kleuskens J.A.G.M., Scholtes N.C., Gorenflot A. Different Вabesia canis isolates, different diseases.
Parasitology. (1997), 115, 485–493.
26. Schetters Th.P.M., Kleuskens J.A.G.M., Schlotes
N.C., Gorenflot A., Moubri K., Vermeulen A.N. Vaccination of dogs against heterologous Babesia canis
infection using antigens from culture supernatants.
Veterinary Parasitology 100 (2001), 75-86.
27. Sibinovic K.H., Sibinovic S., Ristic M., Cox H.G. Immunogenic properties of babesial serum antigens. J.
Parasitol. 53, 1967: 1121-1129.
28. Zweygarth E., Lopes-Rebollar L.M. Continuous in
vitro cultivation of Babesia gibsoni. Parasitol. Res.,
86, 2000: 905-907
29. Zweygarth E., Just M.C., De Waal D.T. Continuous
in vitro cultivation of erythrocytic stages of Babesia
equi. Parasitol. Res., 81, 1995: 355-358.
УДК 619:616
Х. Георгиу, В.В. Белименко, П.И. Христиановский
Всероссийский институт экспериментальной ветеринарии им. Я.Р.Коваленко,
Оренбургский государственный аграрный университет
БАБЕЗИОЗ СОБАК В ОРЕНБУРГСКОЙ ОБЛАСТИ
Бабезиоз собак – природно-очаговое
трансмиссивное заболевание. Возбудителем является одноклеточный паразит Babesia canis, переносчиками которого являются клещи Dermacentor pictus и D. marginatus (Белицер А.В., Марков А.А., 1930).
Бабезиоз собак постоянно регистрируется в городе Оренбурге, причем эпизоотологические характеристики данного заболевания за последние десятилетия изменились. Раньше бабезиоз собак назывался
«лесной болезнью», так как животные подвергались нападению инвазированных клещей исключительно во время прогулок за
городом. В последние годы ситуация резко
изменилась. Действительно, если в 1960-70
годы собаки заражались бабезиозом на дачах, в лесу, на охоте и пр., то в конце 1980начале 1990 годов большая часть случаев
заболевания собак была зарегистрирована
непосредственно в городской черте. Собаки чаще всего заболевают бабезиозом после нападения клещей в городских парках
56
и скверах, и даже во дворах. Этому способствовало формирование в тот же период биотопов иксодовых клещей на территории г. Оренбурга, а также резкое увеличение численности собак у городского населения в конце 1980. Кроме того, следует
отметить тот факт, что в прошлые годы заболевали преимущественно собаки культурных пород, отмечалось два ярко выраженных подъема заболевания (весенний и
осенний), и в целом оно имело спорадический характер. В настоящее время регистрируется значительное количество случаев заболевания беспородных и помесных
собак, и заболевание все чаще приобретает массовый характер.
В связи с изменением эпизоотической
ситуации по бабезиозу собак по России
в целом в последние годы в литературных источниках стали появляться работы, посвященные данной проблеме (Балагула Т.В. и др., 1999; Карташева И.В. и
др., 2002; Кошелева М.И. и др., 2002; ЛуВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
цук С.Н. и др., 2002; Шайкин В.И., Никитина Е.А., 2002 и т.д.).
Изучению данной проблемы на территории Оренбургской области в разные годы посвящены работы М.А. Палимпсестова и М.Е. Шевченко (1940), Ю.В. Кузякина
(1968), П.И. Христиановского (1997, 2003,
2005). Однако, следует отметить тот факт,
что до настоящего времени подобные исследования на территории г. Оренбурга не
проводились. В связи с этим целью данного
исследования является исследование эпизоотической обстановки по бабезиозу собак в Оренбургской области, а также изучение распространения и видового состава
иксодовых клещей г. Оренбурга.
Материалы и методы. Экспериментально-клинические исследования болезни проводили с апреля по ноябрь в 20022007 гг. в ветеринарных клиниках Оренбургской области. Распространение бабезиоза собак изучали путём сбора анамнеза
и клинических данных. Диагноз подтверждали путём обнаружения паразитов в мазках крови больных собак, окрашенных по
Романовскому-Гимза, а также серологическими исследованиями сывороток крови
(РДСК и РНГА).
Реакцию длительного связывания комплемента ставили согласно временному
наставлению по применению набора компонентов для диагностики анаплазмоза рогатого скота в реакции длительного связывания комплемента, утвержденного ГУВ
Госагропрома СССР 6 мая 1988 года. Реакцию непрямой аггллютинации ставили по
методике Х. Георгиу (2005).
Кроме того, в 2002-2007 гг. была обследована территория г. Оренбурга на
предмет обнаружения иксодовых клещей. Сборы клещей проводили на местности с применением флажков и волокуш, а также непосредственно с собак
при участии владельцев.
Результаты исследований. В результате
исследований было выявлено, что во мно-
гих зелёных насаждениях города Оренбурга встречаются клещи следующих видов:
Dermacentor pictus, D. marginatus, Rhipicephalus rossicus, Ixodes ricinus. Всего собрано 945 клещей, из них: D. pictus – 487 экз.,
D. marginatus – 443 экз, Rh. rossicus – 14 экз,
I. ricinus – 1 экз. (рис.).
Местом сбора клещей служили: пойма реки Урал (в черте города), Зауральная Роща, лесополосы по объездной дороге, скверы и парки, а также другие зеленые насаждения города. Более высокая плотность клещей была в пойме реки
Урал (в черте города), Зауральной Роще
и пригородах (до 18 экз. с одного места).
Отмечено, что плотность клещей уменьшается от окраин к центру. Кроме того,
наблюдается две волны паразитирования
клещей: весенняя (со второй половины
апреля до конца июня) и осенняя (со второй декады августа до первой декады ноября). Пики численности клещей приходятся на май и сентябрь.
Соответственно, были зарегистрированы две волны бабезиоза: весенне-летняя и
летне-осенняя. Всего нами была обследована 481 больная бабезиозом собака различных пород и возрастных групп.
Для выяснения закономерностей все
статистические данные были разделены
по нескольким признакам. По полу животные разделились следующим образом: суки – 185 животных (26%), кобели – 356 особей (74%). Исходя из полученных результатов, можно сделать вывод, что суки болеют пироплазмозом в несколько раз реже, чем кобели, причем, как правило, в более легкой форме.
Как видно из рис. 1, собаки декоративных пород составляют 24%, бойцовых –
33%, пастушьих и охотничьих – 20%. На
долю беспородных собак и помесей приходится 23%. По-видимому, собаки пастушьих, охотничьих и служебных пород болеют бабезиозом реже собак бойцовых и
декоративных пород. Вероятно, что пред-
Рис. Породная динамика бабезиоза собак в г. Оренбурге за 2004-2005 гг.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
57
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица
Возрастная динамика заболеваемости собак бабезиозом в г. Оренбурге в 2004-2006 гг.
Возраст
Количество особей
% от общего числа
Щенки (до 12 мес)
29
6
Взрослые
404
84
Пожилые (старше 7 лет)
48
10
Всего
481
100
ки собак этих пород более часто сталкивались с возбудителем данного заболевания,
так как проводили большую часть жизни
на природе, и у них исторически сложилась
более высокая устойчивость к бабезиозу.
Возрастная динамика бабезиоза собак
Оренбургской области показана в табл. Из
полученных результатов видно, что число
заболевших пироплазмозом собак в возрасте до 1 года составило 29 особей (6%),
с 1 года до 7 лет – 404 (84%), а старше 7
лет – 48 (10%). Более низкий процент заболеваемости молодых собак объясняется
их вакцинацией против ряда инфекционных болезней, что требует карантинирования и изоляции собак от биотопов клещей. Кроме того, следует учитывать возрастную структуру популяции собак, в которой основную массу составляют именно
животные в возрасте от 1 до 6 лет.
Аналогичная ситуация отмечалась в
1996-2003 гг. в г. Новотроицке. По данным
местной ветеринарной лечебницы, ежегодно регистрируется две волны заболевания –
весенняя и осенняя. В 2002 году бабезиоз собак был зарегистрирован в г. Соль-Илецке.
Заключение.
Все вышеизложенное говорит о том,
что в городах и райцентрах Оренбургской
области происходят процессы, аналогичные тем, что произошли в г. Оренбурге:
формирование природных очагов бабезиоза собак в черте населенных пунктов различного масштаба. Это связано с появлением большего числа породистых собак в
райцентрах и сельской местности в 1990х годах, а также с увеличением количества иксодовых клещей в этот период и формированием их биотопов непосредственно
в населенных пунктах.
Абсолютное большинство в иксодофауне г. Оренбурга составляют клещи
рода Dermacentor (98,4%), причем вид D.
pictus незначительно превалирует над видом D. marginatus (51,5 и 48,9% от общего числа собранных клещей соответственно). Клещи Rhipicephalus rossicus обнаруживались в виде единичных экземпляров
в лесопосадках вдоль поймы р. Сакмара в
районе Степного поселка и г. Маяк. Обнаружение одной самки Ixodes ricinus, снятой с собаки в районе Машзавода в мае
2004 года, вероятнее всего является случайностью. Она скорее всего была занесена извне и не является эндемичной для
данного района.
РЕЗЮМЕ
Количество случаев заболевания бабезиозом напрямую коррелирует с количеством клещей на данной территории.
Отмечается зависимость заболеваемости от пола, возраста, породы собак, а также месяца года.
На территории г. Оренбурга собаки в основном заражаются в лесопосадках, где ранее не велось
строительство. В урбанизированных же частях города заболевание практически не встречается, так
как урбанизация разрушает биотопы переносчиков болезни – иксодовых клещей.
На территории г. Оренбурга и райцентров Оренбургской области сформировались устойчивые очаги бабезиоза собак.
SUMMARY
This study is about canine babesiosis and ticks in Orenburg region. There are stable babesiosis and ticks
seats in this area. The sexual, age and seasonal predictable has been described.
Литература
1. Балагула Т.В., Заблоцкий В.Т., Акбаев М.Ш.
Эпизоотология бабезиоза собак в условиях г.
Москвы и Московской области // Сборник научных трудов МГУПБ, 1999 с. 29-31.
2. Кошелева М.И., Кудимова О.В., Прокопьева Е.В.,
Молчанов И.А., Сошенко Л.П. К эпизоотологии
бабезиоза собак в Москве и Московской области
// Вестник ветеринарии 3/2002 с. 32-33.
3. Кузякин Ю.В. Фауна иксодовых клещей Оренбургской области Дис. канд. вет. наук Оренбург,
1968 279 c.
4. Луцук С.Н., Дьяченко Ю.В., Казарина Е.В. Пи-
58
роплазмидозы собак в г. Ставрополе // Вестник
ветеринарии, № 3, 2002 с.34-37.
5. Палимпсестов М.А., Шевченко М.Е. Пироплазмозы и их переносчики в Чкаловской области //
Труды Чкаловской ООВС, 1940 т. 1 с. 28-30.
6. Христиановский П.И. Клещи - переносчики
пироплазмоза в г. Оренбурге // Сборник: Животный мир Южного Урала и Северного Прикаспия, Оренбург: Издательство ОГПУ, 2000
с 143-144
7. Шайкин В.И., Никитина Е.А. Бабезиоз собак в
Сибири // Вестник ветеринарии 3/2002 с.31-32.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
УДК 615/619:616
Т.И. Глотова, Н.Р. Будулов, Ю.Г. Юшков, А.Г. Глотов
Государственное научное учреждение институт экспериментальной
ветеринарии Сибири и Дальнего Востока Сибирского отделения
Россельхозакадемии (г. Новосибирск), Прикаспийский зональный научноисследовательский ветеринарный институт (г. Махачкала)
ПРИМЕНЕНИЕ ИЗАТИЗОНА И СЕРОИЗАТИЗОНА
ДЛЯ ПРОФИЛАКТИКИ ВИРУСНЫХ
РЕСПИРАТОРНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ТЕЛЯТ
Введение
Одной из актуальных проблем современного животноводства являются массовые респираторные болезни телят, причиняющие значительный экономический
ущерб. По мнению многих авторов [2-6],
первопричиной возникновения пневмоний
у 90% телят являются вирусы, которые,
вызывая инфекционный процесс в макроорганизме, создают оптимальные условия
для жизнедеятельности в нем бактерий,
что приводит к осложнению вирусного заболевания.
К числу вирусов, имеющих наибольшее значение в патологии органов дыхания у телят, относят: вирус инфекционного ринотрахеита (ИРТ), вирусной диареи-болезни слизистых (ВД-БС), парагриппа-3 (ПГ-3) крупного рогатого скота (КРС) и респираторно-синцитиальной инфекции. В инфекционном процессе могут участвовать также адено- и коронавирусы КРС. Вовлечение возбудителей этих болезней в полиэтиологический
комплекс респираторных болезней приводит к значительному усилению тяжести их течения, поскольку вирусы, обладая иммуносупрессивным свойством, могут потенциировать течение многих респираторных болезней телят.
В связи с этим поиск эффективных
противовирусных препаратов является актуальным в настоящее время.
В ветеринарии известен препарат метисазон (тиосемикарбазон N-метилизатина), обладающий выраженным противовирусным действием в отношении 40 вирусов, основанном на подавлении синтеза белков, идущих на построение вирусной
оболочки. Метизсазон не оказывает угнетающего действия на продукцию специфических антител [1].
Целью исследований являлось изучение профилактической активности двух
форм изатизона в отношении некоторых
вирусов, участвующих в этиологии смешанных респираторных болезней телят, в
Ветеринарная патология. № 2. 2008
условиях in vitro и in vivo.
Материалы и методы исследований
Вирусы и культуры клеток. В опытах
in vitro использовали вирусы: ИРТ (штамм
ТК-А) и ВД-БС КРС (штамм ВК-1), полученные из ВИЭВ им. Я.Р. Коваленко. Их
инфекционную активность определяли
в чувствительных перевиваемых линиях
культур клеток почки теленка (MDBK) и
коронарных сосудов плода коровы (КСТ).
В качестве ростовой среды использовали
питательную среду Игла МЕМ с однократным и двойным набором аминокислот и
витаминов с добавлением 5–10% сыворотки плодов коровы «HyClone», тестированной на наличие вирусов ИРТ и ВД-БС КРС
и антител к ним, 0,06% L-глутамина, 100
мкг/мл канамицина. Клетки культивировали при 37° С и 5% СО2. В качестве поддерживающей среды использовали ту же
среду без сыворотки.
Препараты. Применяли изатизон и сероизатизон, состоящий из изатизона и поливалентной гипериммунной сыворотки
против вирусов: инфекционного ринотрахеита, вирусной диареи-болезни слизистых, парагриппа-3, аденовирусной инфекции крупного рогатого скота, полученной
путем гипериммунизации быков-продуцентов в возрасте 1,6-2 лет.
Определение цитотоксичности препарата. Цитотоксичность изатизона оценивали путем добавления его разведений в
среде ИГЛА МЕМ к монослою клеточной
культуры МДВК, выращенной микрометодом в 96-луночном планшете (Costar), до
конечных концентраций 5-2000 мкг/мл (по
три лунки на каждую дозу) с последующим
культивированием при 37° С в СО2-инкубаторе в течение 5 суток.
Контролем служили клетки без добавления исследуемого препарата. Жизнеспособность клеток оценивали после окрашивания 1% раствором трипанового синего,
приготовленного на фосфатном буфере
рН 7,2-7,3. Через 5 минут внесения краски
подсчитывали количество живых (неок59
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
рашенных) и мертвых (окрашенных в голубой цвет) клеток в камере Горяева и по
формуле определяли количество клеток в
1 мл, учитывая кратность разведения клеточной суспензии раствором краски. Токсичность различных доз соединений определяли по жизнеспособности клеток относительно контроля.
Определение противовирусной активности. Монослой культуры клеток заражали вирусами ИРТ и ВД-БС КРС в дозе не
менее 1 ТЦД/кл, через 1,5 часа после этого их отмывали питательной средой без
сыворотки и вносили препарат в эффективной дозе или разводящую среду (контроль). Через 72 часа культивирования вируса в таких биосистемах культуральную
жидкость титровали. Противовирусный
эффект препаратов рассчитывали по соотношениям инфекционных активностей вирусов в опытных и контрольных образцах.
В каждом опыте проводили дополнительный контроль на токсичность испытуемой
дозы препаратов.
Титрование вирусов. Определение инфекционной активности вирусов проводили микрометодом в 96-луночных культуральных планшетах (Costar) с культурами клеток с использованием не менее 4 параллельных рядов и выражали в
ТЦД50/мл (50%-я тканевая цитопатическая
доза). Все опыты проводили в трехкратной повторности. Статистическую обработку проводили общепринятыми методами, оценивая доверительный интервал
для 95%-й вероятности.
Определение вирулицидного действия
препаратов. К 1 мл вирусной суспензии с
известной инфекционной активностью добавляли препарат в 50%-ной ингибирующей дозе, инкубировали 30, 60 и 90 минут
при температуре 37° С, затем титровали.
Контролем служил вирус без препарата.
Вирулицидный эффект у препаратов оценивали по соотношениям инфекционных
активностей вирусов в опытных и контрольных образцах.
Определение профилактической эффективности изатизона in vivo. Использовали телят с клиническими симптомами
острых вирусных респираторных заболеваний, этиология которых подтверждалась
результатами вирусологических исследований носовых выделений и парных проб
сыворотки крови. Всего использовали 50
телят 1-3-месячного возраста, 30 (контроль), 20 (опыт).
Телят опытной группы обрабатывали изатизоном в аэрозольных камерах
60
при помощи генератора САГ-1 во время комплектования групп двукратно с интервалом 24 часа. Дозу препарата рассчитывали по формуле: Д = Т×С×V, где
Д – доза препарата в мг; С – концентрация
препарата в мг/л.; Т – время пребывания
животных в аэрозоле, мин.; V – дыхательная емкость легких (л/мин.).
Определение лечебной эффективности. С этой целью проводили аэрозольную
обработку 25 телят в период развития у
них клинических признаков вирусных респираторных заболеваний: повышение температуры тела, кашель, хрипы, истечения
из носа серозно-гнойного характера. Обработку проводили по схеме: двукратно в течение двух суток. Дозу препарата рассчитывали по той же формуле. 25 больных телят служили контролем. Наблюдение за
животными проводили в течение 17 суток с
ежедневным клиническим осмотром и измерением температуры тела.
Для определения эффективной концентрации изатизона комплексный препарат с различным содержанием его (10, 15,
20 и 25%) распыляли трехкратно с интервалом 12-14 суток, в дозе 5 мл/м3, при экспозиции 50 мин, аэрозольным методом.
Контрольных животных обрабатывали таким же способом гипериммунной сывороткой без препарата.
Профилактическую
эффективность
комплексного препарата сероизатизон изучали с использованием экспериментального заражения серонегативных к вирусам телят 2-3-месячного возраста. Телят опытной
группы, в количестве 9 голов, по истечении
24 часов после подкожного и интраназального введения сероизатизона заражали вирулентными штаммами вирусов: ПГ-3, ИРТ
и аденовирусной инфекции КРС.
Производственные испытания профилактической эффективности сероизатизона проводили в условиях молочного
животноводческого комплекса, неблагополучного по респираторным заболеваниям телят. Использовали опытных животных 1,5-2-месячного возраста в количестве 45 голов перед переводом в группу доращивания, затем на 14, 28 и 42 сутки после этого обрабатывали комплексным препаратом. Контрольным телятам
(45 голов) вводили по той же схеме гипериммунную сыворотку. За животными вели клинические наблюдения на протяжении трех месяцев.
Статистическую обработку полученных данных проводили общепринятыми
методами.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Результаты исследований
В исследованиях «in vitro» установили,
что изатизон в дозе 50 мкг/мл оказался нетоксичным для культур клеток и обладал
профилактическим действием при заражении их вирусами ИРТ и ВД-БС КРС. Внесение препарата за 16 и 24 часов до заражения культуры клеток приводило к статистически достоверному снижению инфекционной активности вирусов (до 2 и более
lg ТЦД50/мл.), однако вирулицидная активность препарата не установлена.
При оценке вирусостатического действия препарата определили, что он в значительной степени подавлял инфекционную активность тестируемых вирусов. Во
всех случаях снижение их титра было достоверным (более 2 lg ТЦД50/мл.), однако
активность изатизона была значительно
выше при внесении через 1,5 и 3 часа после
заражения культуры клеток.
Профилактическая обработка телят
аэрозолем изатизона в период формирования групп позволила снизить заболеваемость на 28% в сравнении с контролем. Однако лечебной эффективности препарат
при данной схеме применения не проявил.
В дальнейшем провели исследования с
целью выявления эффективной концентрации изатизона в комплексном препарате сероизатизон, которая составила 15%.
Профилактическая эффективность сероизатизона с такой концентрацией в нем
изатизона у опытных телят была выше на
14,8% по сравнению с контрольными животными. Включение гипериммунной сыворотки в состав комплексного препарата сероизатизон увеличило его профилактическую эффективность при респираторных заболеваниях у телят на 2,7% в сравнении с изатизоном.
В результате исследований, проведенных на телятах, экспериментально инфицированных вирулентными штаммами вирусов, установили, что введение сероизатизона за 24 часа до инфицирования вирусов
ИРТ, ПГ-3 и аденовирусной инфекции КРС
предотвращало развитие клинических признаков респираторных заболеваний у всех
животных. У контрольных телят на 2 сутки
после заражения регистрировали повышение температуры тела до 39,9-40,5° и угнетение; на 3-4 сутки – отказ от корма, конъюнктивиты и риниты. На 7 сутки – хрипы в
легких. Продолжительность заболевания у
животных составила 10-12 суток.
Профилактическая обработка телят
сероизатизоном в условиях животноводческого комплекса, неблагополучного по
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПГ-3 и ИРТ КРС, проведенная в течение
трех месяцев на телятах 1,5-2-месячного
возраста привела к снижению заболеваемости опытных животных в 3 раза в сравнении с контрольными. В опытной группе
заболеваемость составила 4,4%, а в контрольной – 13,3%.
Применение комплексного препарата
в условиях молочного животноводческого комплекса в день перевода телят в группу доращивания и на 14, 28 и 42 сутки после него, снизило заболеваемость телят респираторными инфекциями на 28%, вынужденный убой – в 5,8 раза в сравнении с контрольными животными. Применение препарата снижало остроту и сокращало сроки проявления клинических признаков респираторных заболеваний у телят.
Производственные испытания препарата, проведенные в условиях откормочного животноводческого комплекса, неблагополучного по респираторным болезням телят, с использованием аэрозольного способа введения препарата при помощи генератора САГ-1, подключенного
к компрессору СО-7А, подтвердили высокую его профилактическую эффективность при респираторных заболеваниях у
телят. В результате этих исследований установили, что аэрозольная обработка телят в течение 50-60 минут, проведенная в
первый день после комплектования групп
доращивания и повторно через 14 и 28
дней, снижает заболеваемость опытных
животных на 40,6% в сравнении с контрольными телятами. В опытной группе
заболело 11,4%, а в контрольной 52% животных. Применение препарата по данной
схеме предотвращало падеж опытных телят, в то время как в контрольной группе
животных он составил 9,3%.
Таким образом, применение препарата сероизатизон позволяет снизить заболеваемость и предотвратить гибель телят от
респираторных заболеваний.
Выводы
Проведенные исследования показали,
что изатизон обладает выраженной профилактической и противовирусной активностью в опытах in vitro в культурах клеток, а
также высокой профилактической эффективностью при аэрозольной обработке телят в животноводческих помещениях.
Применение данного препарата для
профилактики респираторных заболеваний у телят позволяет повысить экономическую эффективность лечебно-профилактических мероприятий за счет предотвращения развития заболевания в 1,7 раз
61
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
и сохранность молодняка на 15-32,9%.
Включение гипериммунной сыворотки в состав комплексного препарата сероизатизон увеличивает его профилактическую эффективность при респираторных
заболеваниях у телят на 2,7% в сравнении
с изатизоном.
Препараты изатизон и сероизатизон
можно применять в крупных животноводческих хозяйствах для профилактики респираторных заболеваний телят во время
комплектования поголовья.
РЕЗЮМЕ
В статье приведены результаты изучения профилактической активности изатизона in vitro в культуре
клеток и изатизона и сероизатизона in vivo на телятах в условиях животноводческих комплексов.
SUMMARY
The results of study of antiviral activity of izatison in vitro in cell culture and both definition of preventive and thaeropeutical efficiency of izatison and seroizatison in experiences in vivo with use calves on big
farms.
Литература
1. Бессарабов Б.Ф. Влияние изатизона на естественную резистентность организма животных
/Б.Ф. Бессарабов и др.// Ветеринария. 1994. №5.
С. 50-51.
2. Гулюкин М.И. Система ветеринарно-санитарных, профилактических и лечебных мероприятий против инфекционных болезней крупного
рогатого скота в хозяйствах российской Федерации/ М.И. Гулюкин, К.П. Юров, Ю.Д. Караваев
и др. М., 2007. 14 с.
3. Крюков Н.Н. Инфекционный ринотрахеит
пустулёзный вульвовагинит крупного рогатого
скота // Итоги науки и техники/ Животноводство и ветеринария. М., 1980. С. 32-113.
4. Юров К.П. Распространение инфекционного
ринотрахеита и вирусной диареи-болезни слизистых оболочек крупного рогатого скота в
различных регионах России /К.П. Юров, А.Ф.
Шуляк, О.Г. Петрова, О.В. Майджи// Тр. ВИЭВ.
М. 2003. Т.73. С. 15-22.
5. Babiuk L.A. Immunology of bovine herpesvirus 1
infection / L.A. Babiuk, S. Van Drunen Littel-van
den Hurk, S.K. Tikoo // Vet. Microbiol. 1996. Vol. 53,
№ 1-2. Р. 31-42.
6. Jericho K.W. Experimental infectious respiratory
disease in groups of calves: lobar distribution,
variance, and sample-size requirements for vaccine
evaluation / K.W. Jericho, G.C. Kozub // Can. J. Vet.
Res. 2004. Vol.68, №2. P. 118-127.
УДК 612.017.1:576.3
И.Ю. Ездакова, О.М. Чуйко, Е.О. Чадина
Всероссийский институт экспериментальной ветеринарии РАСХН
им. Я.Р.Коваленко
ДИНАМИКА РОЗЕТКООБРАЗУЮЩИХ КЛЕТОК
КУР В ОНТОГЕНЕЗЕ
Интенсификация промышленного птицеводства и неблагоприятная экологическая обстановка приводят к нарушению иммунной реактивности организма, снижению эффективности вакцинопрофилактики. В связи с этим, исследования, направленные на понимание механизмов формирования иммунной системы птиц и прогнозирование устойчивости к инфекционным
заболеваниям, имеют большое значение
для повышения рентабельности отрасли.
Как известно, иммунная система птиц
состоит из центральных и периферических
лимфоидных органов. К центральным относятся тимус и бурса Фабрициуса. На раннем этапе эмбриогенеза фабрициева сумка играет первостепенную роль в антителогенезе. Для больших лимфоцитов бурсы характерен достаточно развитый аппа62
рат Гольджи и эндоплазматический ретикулум. Тимус отличается от этого первичного
лимфоидного органа млекопитающих многодольчатой структурой. Размеры тимоцитов кур меньше лимфоцитов фабрициевой
сумки. Селезенка и костный мозг относятся
к периферическим лимфоидным органам у
птиц. В филогенезе впервые у птиц появляются зародышевые центры в селезенке,
где происходит дифференцировка лимфоцитов из стволовых клеток (Э.Купер,1980).
Костный мозг, аналогично млекопитающим, служит местом формирования клеток крови. Таким образом, количественная
динамика клеток лимфоидных органов является важной характеристикой иммунной
реактивности организма птиц.
Цель наших исследований - количественная характеристика розеткообразуВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
ющих клеток в процессе становления иммунной системы птиц.
Материалы и методы. В эксперименте использовали SPF-цыплят 3-, 9- и 21суточного возраста по 10 голов в группе;
изучали показатели клеточного звена иммунитета в процессе онтогенеза методами
розеткообразования. Источниками иммунокомпетентных клеток служили периферическая кровь, тимус, бурса, костный
мозг, селезенка.
Выделение мононуклеарных клеток.
Мононуклеарные клетки (МНК) выделяли из свежевзятой или хранившейся при
температуре 4° С не более 10-12 час. крови животных. Для предотвращения свертывания кровь смешивали с антикоагулянтом (раствор гепарина), разводили
фосфатным буфером рН 7,2 или физиологическим раствором 1:1.
В пробирку вносили раствор гистопака
(Histopaque-1077, Sigma), наслаивали разбавленную кровь и центрифугировали в
горизонтальном положении при 3000 об/
мин. в течение 30 мин. На границе раздела фаз отбирали взвесь МНК, разбавляли
клеточную суспензию питательной средой
199 или RPMI-1640, двукратно центрифугировали при 1000 об/мин. по 10 мин. Мононуклеары переносили в пробирку и разводили четырехкратным избытком среды
с 5% фетальной сыворотки (ФС). Взвесь
МНК смешивали с равным объемом 0,4%
раствора трипанового синего. В камере Горяева подсчитывали количество и жизнеспособность неокрашенных клеток. В реакциях использовали суспензию с жизнеспособностью клеток не менее 90%.
Из лимфоидных органов птиц получали суспензию иммунокомпетентных клеток путем измельчения и гомогенизации.
Центрифугирование в градиенте плотности, как показано выше, способствовало выделению значительного количества жизнеспособных мононуклеарных клеток, используемых в различных иммунологических реакциях.
Метод розеткообразования основан
на том, что на поверхности Т-лимфоцитов птиц расположены CD2-рецепторы, на
мембране В-клеток - рецепторы к С3-компоненту комплемента. При взаимодействии индикаторных частиц с гомологичными молекулами образуются структуры,
имеющие форму розеток. В качестве индикаторных частиц используются эритроциты барана и комплекс зимозана с С3-компонентом комплемента.
Для определения розеткообразующих
Ветеринарная патология. № 2. 2008
рецепторов применяли:
- суспензию МНК (2-1х106 кл/мл) в 1 мл
среды RPMI-1640 с 5% ФС;
- 0,5% суспензию эритроцитов барана
(ЭБ) в RPMI-1640 с 5% ФС;
- 0,1% раствор зимозана А с комплементом (ЗС3-комплекс).
Равные объемы суспензии МНК, ЭБ
или ЗС3-комплекса смешивали и инкубировали 20 мин при t 20°-22° С. Полученную
смесь центрифугировали при 1200 об/мин.
в течение 5 мин., инкубировали 18 час. при
10°-12° С. Клетки фиксировали 0,6% раствором глютарового альдегида (20 мин.),
трехкратно отмывали дистиллированной
водой, центрифугировали при 1200 об/мин.
по 5 мин. Суспензию клеток наносили на
предметное стекло; препарат фиксировали
метиловым или этиловым спиртом 10 мин.,
окрашивали азур В-эозином в течение 20
мин. Под микроскопом (х400) подсчитывали не менее 200 лимфоцитов, на поверхности которых обнаруживали от 3 и более эритроцитов барана или частиц зимозана, определяли процент розеткообразующих клеток.
Теофиллиновый
тест
(Караулов
А.В.,2002). Раствор теофиллина, рН 7,2.
1,8 мг теофиллина растворяли в 1 мл теплой среды для культивирования клеток,
при изменении рН добавляли 0,1 N раствор NaOH. Предварительно в суспензию
клеток вносили 0,2 мл раствора теофиллина в среде RPMI-1640 (готовится ex tempore) и инкубировали в течение часа при
370С. Последующий ход реакции аналогичен методу розеткообразования. Тфр-РОК
- количество розеткообразующих клеток в
пробе с теофиллином.
Результаты исследований и обсуждение.
В результате проведенных исследований установлено изменение экспрессии Ерозеткообразующего рецептора и мембранного антигена, взаимодействующего с
С3-компонентом комплемента в зависимости от возраста SPF-цыплят.
В период от 3 до 21 суточного возраста изменяется количество основных популяций лимфоцитов в периферической крови птиц. (рис.1).
При определении относительного содержания Т- и В-лимфоцитов методом
спонтанного розеткообразования установлено, что в крови SPF –цыплят (возраст –
3 суток) содержится 26,1% Т-лимфоцитов
(Е-РОК), 16,5% В-лимфоцитов (ЗС-РОК),
теофиллин-резистентных клеток (ТфрРОК) – 23,0%. В возрасте 9 суток в крови
было обнаружено 9,0% Е-розеткообразу63
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Рис. 1. Модуляция поверхностных рецепторов
лимфоцитов в крови SPF-цыплят в процессе онтогенеза
Рис. 2. Теофиллинрезистентные клетки костного мозга SPF-цыплят (х900)
ющих клеток, 17,0% - В-лимфоцитов (ЗСРОК) и 37,0% – Тфр-РОК. В костном мозге – 40,0% Е-розеткообразующих клеток и
10,0% Тфр-РОК, тимусе – 40,3% , бурсе –
35,0% Е-РОК.
У птицы 21-дневного возраста зарегистрировано 28,3% Е-РОК, 7,0% ЗС-РОК,
47,0% Тфр-РОК в периферической крови,
бурсе 22,3% Е-РОК и 34,5% ЗС-РОК, селезенке 28,3% Е-РОК и 40,1% ЗС-РОК, костном мозге 32,5% Е-РОК и 10,5% ЗС-РОК.
В результате проведенных исследований установлено, что в фабрициевой сумке SPF-цыплят присутствуют Т-лимфоциты, количество которых снижается с 9-ти
до 21-дневного возраста. Число В-клеток с
рецепторами к комплементу в бурсе составляет 34,5%. В костном мозге птиц в возрасте 9 суток 30,0% составляют теофиллинчувствительные клетки, являющиеся аналогом цитотоксических клеток, и 10% – теофиллинрезистентные (Т-хелперы). У цыплят 21-дневного возраста в костном мозге Тклеток в три раза больше, чем В-клеток.
Как видно из диаграммы (рис. 1), в течение 19 суток увеличивается количество
теофиллин-резистентных клеток в крови
птиц. Как известно, теофиллин воздействует на мембрану лимфоцитов, провоцируя образование розеткообразующих рецепторов, в основном, на незрелых Т-лимфоцитах (Хаитов Р.М. и соавт., 1995)
Следует отметить, что подопытные
цыплята были свободны от патогенных
агентов и присутствие в крови значительного количества незрелых Т-лимфоцитов
никогда не встречавших антигена вполне
объяснимо (рис. 2).
На примере SPF-птиц показано, что розеткообразующая активность клеток изменяется в процессе онтогенеза. Мы полагаем что, рецепторная модуляция поверхности лимфоцитов характерна для периода
иммунного созревания организма. Поэтому
иммунная система птиц раннего возраста
не способна адекватно реагировать на вакцинацию, что следует учитывать при разработке схем специфической профилактики.
РЕЗЮМЕ
Была изучена количественная динамика Т- и В-лимфоцитов методами розеткообразования. Показано, что количество розеткообразующих клеток изменяется у цыплят от 3 до 21-суточного возраста. Мы полагаем, что рецепторная модуляция поверхности лимфоцитов характерна для периода иммунного созревания организма.
SUMMARY
The quantitative dynamics of the Т- and B-lymphocytes has been studied by the methods of the E-, ZC- and
Tr- rosette-formation. It has been demonstrated that the quantity of rosette-forming cell changed from 3 to
21 days aged. We think that receptor’s modulation on a surface of the lymphocytes is characteristically for
the period of the immune maturation.
Литература
1. Купер Э. Сравнительная иммунология. 1980, М.:
Мир, 422 с.
2. Караулов А.В. Под ред. Клиническая иммунология и аллергология. М: МИА, 2002, 651 с.
64
3. Хаитов Р.М., Пинегин Б.В., Истамов Х.И. Экологическая иммунология. 1995, М: ВНИРО,
с. 122-124
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
УДК 612.017.1:576.3
В.В. Исаев, З.Я. Косорлукова, О.А. Бурова, О.В. Коробова, Т.Д. Хрисанфова
Научно-исследовательский ветеринарный институт Нечерноземной зоны
РФ РАСХН
СПОСОБ ПРОФИЛАКТИКИ ЖЕЛУДОЧНОКИШЕЧНЫХ БОЛЕЗНЕЙ ТЕЛЯТ
С ПРИМЕНЕНИЕМ БИОЛОГИЧЕСКИ
АКТИВНЫХ ВЕЩЕСТВ
Желудочно-кишечные болезни новорожденных телят распространены повсеместно и наносят хозяйствам большой
экономический ущерб. Наши исследования и наблюдения свидетельствуют, что
уровень заболеваемости телят желудочно-кишечными болезнями в условиях хозяйств Нижегородской области варьирует
от 70,0 до 85,0%.
В настоящее время проблема получения и сохранения здоровых телят рассматривается как комплексная, в которой, наряду с факторами окружающей среды и
возбудителем, решающая роль отводится иммунологической реактивности новорожденного и его зависимости от состояния материнского организма.
Нормально развитые новорожденные телята имеют ряд физиологических
особенностей (физиологический иммунодефицит, стерильность кишечника при
рождении и развитие физиологического
дисбактериоза в первые дни жизни), которые делают их особо уязвимыми к желудочно-кишечным заболеваниям. Учет
их при выращивании телят с первых часов жизни - непременное условие сохранения их здоровья, залог высокой будущей продуктивности.
Для компенсации физиологического
дисбактериоза и возможно более раннего
становления колонизационной резистентности кишечника после первой же дачи
молозива новорожденным телятам рекомендуется назначать пробиотики — препараты, содержащие живую нормальную
микрофлору кишечника или метаболиты
и вещества, стимулирующие развитие в
кишечнике собственной нормальной микрофлоры. Раннее назначение новорожденным телятам пробиотических препаратов
важно еще и потому, что нормальная микрофлора кишечника выступает у новорожденных животных в качестве первого
и безопасного стимулятора иммунной сисВетеринарная патология. № 2. 2008
темы. Однако следует отметить, что лечебно-профилактическая эффективность
пробиотиков при желудочно-кишечных
болезнях телят не всегда и не везде достаточно высока.
Для профилактики и лечения желудочно-кишечных болезней сельскохозяйственных животных к настоящему времени предложено немало средств и способов, тем не менее, это не снимает остроты
проблемы, а перед ветеринарной наукой
и практикой ставятся задачи изыскания
и внедрения высокоэффективных способов профилактики и терапии, воздействующих на специфические и неспецифические механизмы защиты организма. В настоящее время повышенный интерес проявляется к биологически активным веществам (БАВ), представляющим многочисленную и разнообразную по своему происхождению, свойствам и влиянию на организм группу препаратов. К ним относятся
витамины, аминокислоты, соли дефицитных микроэлементов, ферментные, гормональные, антиоксидантные, тканевые и
пробиотические препараты.
Для большинства БАВ характерно активное влияние на состояние обмена веществ в организме, повышение резистентности, активизацию иммунной системы.
Целью нашей работы являлась разработка способов профилактики желудочнокишечных заболеваний новорожденных
телят с применением биологически активных веществ, включающих фитосредства
и микробиологический препарат «Байкал
ЭМ1».
В результате скрининговых исследований нами сконструировано композиционное средство — фитосбор из трав зверобоя, таволги (лобазника), тысячелистника,
крапивы двудомной, корневища бадана и
сабельника болотного.
Растительные компоненты предложенного фитосбора включают пробиоти65
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
ческие соединения (полисахариды, аминокислоты, сапонины, витамин С, каротин,
антиоксиданты флавоноиды, органические кислоты), а также различные вещества, обладающие фармакологическим действием,. в частности, эфирные масла с широким противомикробным спектром действия, гликозиды, повышающие неспецифическую резистентность к широкому кругу
неблагоприятных воздействий. Флавоноиды, обладают антиоксидантной и мембраностабилизирующей активностью, полисахариды, органические кислоты, поддерживают кислотно-щелочное равновесие.
Особый интерес с точки зрения влияния
на иммунитет и естественную резистентность имеют микроэлементы, в частности,
медь (содержание в листьях крапивы двудомной, корнях и корневищах сабельника
болотного - 43,3 мкг/г), хром ( содержание
в корнях и корневищах сабельника болотного - 30,4 мкг/г), марганец (содержание
в листьях крапивы двудомной - 62,5 мкг/г,
корнях и корневищах сабельника болотного - 50,3 мкг/г), цинк ( содержание в корнях и корневищах сабельника болотного
- 48,7 мкг/г), селен (содержание в листьях
крапивы двудомной - 22,9 мкг/г), а также
витамины A,E,F,C (тысячелистник обыкновенный, крапива двудомная, сабельник
болотный).
«Байкал ЭМ1» - микробиологический
препарат, включающий симбиотический
комплекс из 86 штаммов микроорганизмов, обозначенных как ЭМ - эффективные
микроорганизмы, основу которого составляют молочнокислые бактерии в совокупности с азотфиксирующими, . фотосинтезирующими бактериями, дрожжами и буферными системами из других полезных
микробов. «Байкал ЭМ1» сертифицирован
в России в качестве бактериального удобрения. Биопрепарат представляет собой
жидкость буро-зеленого цвета с приятным
кисловатым вкусом и запахом. Входящие
в его состав компоненты обладают антагонистическим действием против гнилостной микрофлоры, обеспечивают защиту
желудочно-кишечного тракта животных
от патогенных микроорганизмов и восстановление нормофлоры кишечника
Готовится навеска фитосбора из расчета суточной дозы на одного теленка: травы зверобоя продырявленного - 1,0 г, лабазника вязолистного - 1,0 г, тысячелист-
66
ника обыкновенного - 0,6 г, листьев крапивы двудомной - 0,6 г, корневища бадана толстолистного - 0,4 г, корневища сабельника болотного – 0,4 г. Готовая навеска из лекарственных трав заливается одним стаканом ( 250,0 мл ) кипятка (100°С),
настаивается 15-20 минут и остужается до 26-30°С. В теплый настой добавляется 20,0 мл рабочего раствора препарата «Байкал ЭМ1» для ферментации. Ферментация продолжается одни сутки при
комнатной температуре в темном месте.
После этого жидкость сливают, не отжимая остатка, процеживают, доводя до 200
мл кипяченой водой комнатной температуры и препарат выпаивают теленку один
раз в сутки перед кормлением в течение
10-12 дней, начиная со второго кормления
молозивом.
При изучении эффективности разработанного способа профилактики на основе
фитосредств и препарата «Байкал ЭМ1» в
сравнении с известными фитосредствами и
пробиотическими препаратами установлено, что новый способ значительно превосходил их по своей эффективности, проявляющейся в снижении заболеваемости на
30-35%, повышении среднесуточного прироста массы тела на 17,5-37% и сохранности телят до 100%.
Проведенные гематологические, биохимические и иммунологические исследования свидетельствовали об активизации
физиологических функций крови, что выражалось в повышении уровня гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов, общего
белка, иммуноглобулинов и других количественных показателей гуморального и
клеточного иммунитета. Особенно важное практическое значение имеет увеличение количества иммуноглобулинов в
крови подопытных телят, что свидетельствует о лучшей усвояемости новорожденными молозивных и большем синтезе собственных иммуноглобулинов. После курса профилактики у опытных телят отмечали улучшение общего состояния, повышение аппетита и активности,
шерстный покров становился более блестящим, увеличивался прирост живой массы, причем, тенденция к повышению клинико-физиологических и иммунобиохимических показателей сохранялась и после прекращения применения препарата и
длилась до месячного возраста.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
УДК 619:616-006.446-636.2 (470.62)
С.Ш. Кабардиев, Н.Р. Будулов, Х.М. Гайдарбекова, Т.Т. Рагимова
ГУ Прикаспийский зональный НИВИ
ЭПИЗООТИЧЕСКАЯ СИТУАЦИЯ ПО ЛЕЙКОЗУ
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА В ПЛЕМЕННЫХ
ХОЗЯЙСТВАХ ДАГЕСТАНА
Эпизоотическая ситуация по лейкозу
крупного рогатого скота в Дагестане до
наших исследований оставалась малоизученной, поскольку плановые диагностические исследования животных на эту инфекцию не проводятся.
Нами изучены эпизоотическая ситуация и степень распространения лейкоза крупного рогатого скота в племенных
хозяйствах республики. По официальной
статистической информации в республике
числится 18 племенных хозяйств с общим
поголовьем 13411 голов крупного рогатого
скота, в том числе коров - 4955 голов.
В 15-ти племенных хозяйствах исследовано 4700 проб сыворотки крови крупного рогатого скота, из которых 1395 (29,7%)
были сероположительны в РИД, инфицированность ВЛКРС коров в среднем составила 35,3% (с колебаниями от 0,7% до
83,5%), а молодняка разного возраста 7,2% (с колебаниями от 1,3% до 34,3%, Там,
где наблюдается высокая инфицированность взрослых животных, отмечается высокая серопозитивность молодняка.
Определение особенностей распространения ВЛКРС вскрыло неравномерность эпизоотической напряженности
лейкозной инфекции. Так, при обследовании племенных хозяйств нами было установлено, что только племхозяйство «Кулинское», расположенное в горной зоне республики, благополучно по лейкозу крупного рогатого скота. В МУП «Кирова» Тарумовского и племхозе «Б. Аминова», расположенных в горной зоне Кулинского района, установлен относительно невысокий уровень инфицированности животных - до 10% от числа исследованных, тогда как в МТФ 2 (участок «Тугай» агрофирмы «Чох» Гунибского, МТФ
2 СПК «Дружба», ГУП «Дылымское»
Казбековского, учхоз ДГСХА Кировского, «Кулинское» и «Б. Аминова» равнинной зоны Кулинского района) сложилась
тревожная обстановка, где инфицированность скота составила до 30%.
Наиболее напряженная эпизоотическая ситуация по лейкозу отмечена в племхозяйствах им. Карабудагова, И. НасрутдиВетеринарная патология. № 2. 2008
нова Карабудахкентского, МТФ 1 и 3 агрофирмы «Чох» Гунибского, МТФ 1 СПК
«Дружба» Казбековского,«У.Буйнакского»,
СПК «Новочиркейский» Кизилюртовского, МУП «8 –Марта» Кировского и СПК
«Хизроева» Хунзахского районов, где количество серопозитивных животных составляет 39,5 и более процентов.
Гематологически исследовано 363 сероположительных в РИД животных, из
которых выделено 114 (31,4%) больных
и 69 (19%) подозрительных в заболевании скота.
Из 120 гематологически исследованных сероположительных коров, принадлежащих СПК «Новочиркейский» Кизилюртовского района, где инфицированность
маточного поголовья высокая (83,5%), выделено 50 (41,7%) гематологически больных и 28 (23,3%) подозрительных в заболевании животных. Из 18 РИД положительных, принадлежащих учхозу ДГСХА,
при гематологическом исследовании выявлено (22,2%) - больных и 5 (27,8%) – подозрительных в заболевании животных, а остальные – без изменений в крови.
В колхозе «У.Буйнакского» Кизилюртовского, МТФ 1 и 2 агрофирмы «Чох» Гунибского районов гематологически больных лейкозом животных выявлено, соответственно, 23,6; 16,6 и 36,9%.
При клиническом исследовании животных, имеющих положительную на лейкоз
картину крови, у большинства из них каких-либо специфических признаков болезни, установить не удалось. Температура тела у больных животных была нормальной.
Из 76 гематологически больных животных
только у 5-ти обнаружено увеличение отдельных лимфоузлов.
При вскрытии чаще обнаруживали изменения в подчелюстных, заглоточных,
бронхиальных, брыжеечных, поверхностных и глубоких паховых лимфоузлах, селезенке, печени, почках, реже - в сердечной мышце.
Основными причинами такого широкого распространения лейкоза крупного рогатого скота в племенных хозяйствах Республики Дагестан, по нашим наблюдениям,
67
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
являются: нерегулярные диагностические
исследования, несвоевременное удаление
из неблагополучного стада больных и реагирующих на лейкоз животных, наличие
в хозяйствах неблагоприятных стрессовых
факторов, провоцирующих данную инфекцию, использование для осеменения коров
быков-производителей, не обследованных
на наличие ВЛКРС, нарушения ветеринарно-санитарных правил при осуществлении
оздоровительных и профилактических мероприятий и, наконец, отсутствие научнообоснованной программы борьбы с лейкозом крупного рогатого скота.
Таким образом, результаты наших ис-
следований свидетельствуют о широком
распространении в животноводческих хозяйствах Дагестана лейкоза крупного рогатого скота и о тенденции к росту этой
опасной инфекции. Высокая степень распространенности лейкоза установлена и в
племенных хозяйствах. Вместе с тем, истинная эпизоотическая ситуация по лейкозу крупного рогатого скота в республике остается невыясненной, несмотря на
разработку проекта Республиканской целевой программы «Оздоровление племенных ферм от лейкоза крупного рогатого
скота на 2005-2010 гг.» и подлежащей подтверждению Правительством республики.
Н.А. Казаков
Всероссийский институт экспериментальной ветеринарии РАСХН
им. Я.Р.Коваленко
МИНИМАЛЬНАЯ ЗАРАЖАЮЩАЯ ДОЗА
ВОЗБУДИТЕЛЕЙ (A. MARGINALE, A. OVIS)
ПРИ АНАПЛАЗМОЗЕ КРС И ОВЕЦ – КРИТЕРИЙ
ОБЪЕКТИВНОЙ ОЦЕНКИ ИММУНОГЕННЫХ
СВОЙСТВ ПРОТИВОАНАПЛАЗМОЗНЫХ
АДЬЮВАНТНЫХ ИНАКТИВИРОВАННЫХ
ЭМУЛЬГИРОВАННЫХ ВАКЦИН
Анаплазмоз распространен весьма широко среди домашнего рогатого скота и
диких животных, филогенетически родственных домашним и представляет большой интерес для науки и практики, так как
характеризуется своеобразием паразитохозяинных взаимотношений, иммуно-биохимического и клинического проявления и
причиняет значительный ущерб животноводству и дикой фауне.
Открытие и описание в первой четверти XX столетия возбудителей анаплазмоза крупного рогатого скота - Anaplasma
marginale, Theiler, 1910 и A. centrale, Theiler,
1911; овец - A. ovis, Zestoquard, 1924 положило начало многочисленным исследованиям по выяснению видового состава, ареала,
круга хозяев, морфологических и биологических особенностей возбудителей, определению их природы, систематического положения и патогенного воздействия на организм животных. Однако до настоящего времени анаплазмоз остается все еще недостаточно изученной болезнью животных.
Анаплазмы – типичные прокариоты, не
68
имеющие «истинного» ядра и других органоидов, свойственных простейшим. От вирусов они отличаются клеточной организацией и наличием в своем составе обеих
нуклеиновых кислот - ДНК и РНК (Абрамов И.В., Степанова Н.И., Дьяконов Л.П.,
Гробов О.Ф., 1965).
По структуре анаплазмы близки к группе возбудителей пситтакоза - лимфогранулемы - трахомы (хламидии) и риккетсиям.
Анаплазмоз – трансмиссивное заболевание, характеризующееся лихорадкой непостоянного типа, анемией, истощением.
Довольно часто анаплазмоз крупного
рогатого скота и овец диагностируется в
виде смешанной инвазии с бабезиедозами,
тейлериозом, эперитрозоонозом (Дьяконов
Л.П., 1969; Агаев А.А., 1971; Ганиев И.М.,
1973; Чарыев О.Ч., 1975 и другие). При этом
отмечается более тяжелое течение болезни. Кроме того, иное, более тяжелое клиническое проявление анаплазмоза отмечают
в празитоценозах с гельминтными, инфекционными, вирусными болезнями.
К тому же, анаплазмоз может служить
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
фоновым заболеванием, т.е. анаплазмоносители болеют, как правило, тяжелее при
внедрении возбудителей инфекционных,
вирусных, гельминтных болезней.
В сложном симптомокомплексе анаплазмоза анемия - ведущий признак клинического проявления болезни. Она бывает
очень глубокой; количество эритроцитов
может снижаться до 2-1,5 млн/мм3 крови,
гемоглобина до 4-2 г%.
Патогенез заболевания осложняется
аутоантителами, вырабатываемыми селезенкой и РМС против пораженных и антигенно измененных эритроцитов, воспринимаемых в организме больного животного
иммунокомпетентными клетками как «чужеродные».
В предохранении от анаплазмоза ведущую роль, вероятнее всего, выполняют
клеточно-зависимые факторы иммунитета. Иммунный ответ развивается по схеме:
Т-клетки - В-лимфоцит - плазмоцит.
Постоянное присутствие антигена в организме стимулирует иммунокомпетентные клетки и выработку антител, которые,
видимо, не играют роли в предохранении
от анаплазм; антитела в большей степени
влияют на развитие анемии (Carson C.C.,
Seles D.W., Ristic M., 1976).
Профилактика анаплазмоза основывается на недопущении распространения болезни животными - анаплазмоносителями,
борьбе с переносчиками - клещами и кровососущими насекомыми, проведение лечебных мероприятий, соблюдений правил
асептики и антисептики при проведении ветеринарно-зоотехнических мероприятий,
связанных с нарушением целостности кожного покрова (спиливание рогов, кастрация,
взятие крови, мечение, обрезание хвостов и
другие хирургические мероприятия). Особые трудности возникают в зонах, где анаплазмоз проявляется как природноочаговое
заболевание, при пользовании одними и теми же пастбищными угодиями как домашними животными, так и дикими парнокопытными - анаплазмоносителями.
Поэтому протозоологи мира стремились разработать способы специфической
профилактики - иммунизации.
Исследования проводились в двух направлениях:
1. Использование живых возбудителей:
а) иммунизация животных минимальной заражающей дозой - 0,01 мл крови с A.
marginale (Franclin F.E., Haff J.W., 1967);
б) введение животным стабилята крови с A. marginale, разведенного до 10-3
(2,6x10-9-8-7 паразитов в 1 мл крови с паразиВетеринарная патология. № 2. 2008
темией 18-30%).
Иммунизацию в том и другом случае проводили в холодное время года. Все животные
выздоровели и приобрели иммунитет;
в), аттенуирование A. marginale пассажами через организм облученых овец с
последующей иммунизацией крупного рогатого скота зараженными эритроцитами
овец со стабилятом. Иммунитет формировался в течение трех недель, паразитемия
у вакцинированных, однако, достигала 225% (в зависимости от дозы вакцины). Животные были полностью устойчивы к повторному заражению A. marginale;
г) иммунизация крупного рогатого скота малопатогенным A. centrale;
д) введение инфицированной A. marginale крови с последующей иньекцией лечебных препаратов.
Следует отметить, однако, что это направление исследований в конечном счете
способствовало более широкому распространению возбудителя в природе. Так, было установлено позднее (зарубежные данные), что аттенуированные возбудители
реверсировали, восстановив свои исходные
биологические свойства.
Адьювантные вакцины:
а) за рубежом (США) исследования
проведены с A. marginale (антигеном). В
качестве адьювантов использованы легкое минеральное масло, неполный адьювант Фрейнда;
б) в нашей стране - с A. ovis, A. marginale
(антигены). В качестве адьювантов использованы: неполный адьювант Фрейнда; легкое минеральное масло в сочетании с безводным ланолином; универсальный адьювант ВНИИ ЗЖ; маркол-52
(Франция)+эмульгатор-139. Адьювантные
препараты обладали выраженными иммуногенными свойствами, предохраняя животных от заболевания при последующем
введении им инфицированной крови, а также от нападения инфицированных клещей
-переносчиков возбудителя анаплазмоза.
Создание адьювантных инактивированных эмульгированных вакцин против
анаплазмоза крупного рогатого скота и
овец потребовало объективной оценки реактогенных и иммуногенных свойств этих
препаратов.
В своих исследованиях мы исходим
из оценочных категорий, применяемых к
бактериальным и вирусным инфекциям
– ИД50 (ID50) - 50% инфицирующая доза минимальное количество микробных клеток или вируссодержащего материала, вызывающее поражение 50% взятых в опыт
69
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
чувствительных объектов (культуры клеток, куриные эмбрионы, восприимчивые
животные) или ЦПД50 (CD50) - 50% цитопатогенная доза - минимальное количество
микробных клеток или вируссодержащего
материала, вызывающее цитопатогенное
действие в половине взятых в опыт пробирок с культурой ткани.
Мы в своих исследованиях учитывали,
однако, особенности клинического проявления анаплазмоза и, главное, процентное соотношение между числом заболевших и павших животных, т.е. процент летальности.
По нашим, и ряду других авторов, данным, летальность при анаплазмозе рогатого скота находится в пределах 10-30% и более, но она растянута во времени и часто
очень длительном. Поэтому ориентиром
для нас при выведении минимальной заражающей дозы возбудителя служило абортивное течение болезни, т.е. кратковременное проявление болезни в легкой форме без проявления некоторых (нередко основных симптомов): при анаплазмозе - отсутствие глубокой анемии - основного и
ведущего признака болезни.
Минимальная заражающая доза возбудителя, при которой мы отмечали заболевание животных с проявлением полного
симптомокомплекса, присущего анаплазмозу, - выраженной паразитемией, глубокой анемией, с последующим исхуданием
заболевшего животного составила:
а) для овец - 2,5х104 А. ovis/животное,
б) для крс - 1,5х105 А. marginale/животное.
Последующее двукратное снижение
дозы возбудителей от указанных выше
(п.п. а., б.) приводило, как правило, к абортивному течению анаплазмоза:
а) 1,25х104 А. ovis/животное,
б) 0,75х 105 А. marginale/животное.
Поэтому в последующей работе при
оценке иммуногенных свойств вакцины
применяли, как правило, дозы возбудителей, соответствующие, по нашим данным,
трем минимальным заражающим:
а) для овец - 7,5˝ 104 A. ovis /животное
б) для кр.рог.скота - 4,5´ 105 А. marginale/
животное
Последовательность расчета заражающей дозы – 7,5х10 A. ovis /животное при
оценке иммуногенных свойств вакцины
против анаплазмоза овец.
Пример: количество эритроцитов в
1 мм3 - 6 786 000;
Количество эритроцитов в 100 п.з. микроскопа - 300x100 = 30 000;
Количество анаплазм в 100 п.з. микроскопа - 3;
Определим количество анаплазм в
1 мм3, составив пропорцию:
30 000 - 3 Х=6 786 000x3/30 000=678,6;
6 786 000 - х
Количество анаплазм в 1 см3 (мл) крови
- 678,6x1000=678, 600.
Доза крови для заражения животных
(опытных и контрольных):
75000:678,600 = 0,12 см3(мл) инфицированной крови.
Вакцины из антигенов соответственно:
A.ovis - для овец, A. marginale - для
крупного рогатого скота вводили двукратно, с интервалами - 30 и 45 дней (в зависимости от применяемого адьюванта).
Напряженный иммунитет в 85% случаев формировался, в основном, к 60 дню
после ревакцинации, предохранявший животных от заболевания как при контрольном введении инвазированной крови с возбудителями в указанных дозах, так и при
нападении инвазированных клещей на животных при их пастбищном содержании.
УДК: 619:614.9-07
О.И. Кальницкая
Московский государственный университет прикладной биотехнологии
ПОДБОР МИКРОБНЫХ ТЕСТ-КУЛЬТУР
К АНТИБИОТИКАМ
Согласно СанПиН 2.3.2.1078-01, для
продовольственного сырья животного происхождения обязательна информация об
использовании (или отсутствии такового)
пестицидов (гексахлорциклогексана, ДДТ
и его метаболитов), антибиотиков, как до70
пущенных к применению в сельском хозяйстве (гризин, бацитрацин), так и лечебных, наиболее часто используемых в ветеринарии (тетерациклиновая группа, левомицетин, пенициллин, стрептомицин).
Все перечисленные вещества используВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
ются во всем мире, в том числе и у нас, для
коррекции (исправления) различных негативных факторов, присутствующих при
выращивании животных и их переработке. Однако остаточные количества антибиотиков недопустимы в сырье и продуктах животного происхождения.
Чтобы принять обоснованное решение, ветеринарному врачу необходимы глубокие знания фармакокинетики антибиотиков в организме животных различных
видов, а также методики выявления их остаточных количеств в мясе, молоке и других продуктах и способы их обезвреживания с целью предотвращения вредного
действия на организм людей.
В настоящее время наиболее доступными диагностическими методами обнаружения антибиотиков являются микробиологические. Мы поставили перед собой задачу подобрать к антибиотикам, содержание которых в продуктах убоя нормируется СанПиН 2.3.2.1078-01 и рекомендациями
ФАО ВОЗ, наиболее чувствительные тесткультуры.
Материалы и методы. Постановка теста на чувствительность проводилась с чистой культурой методом диффузии в агар и
методом серийных разведений.
Для исследования были использованы
эталонные штаммы микроорганизмов, полученные в ФГУ «ВГНКИ». Подбор микроорганизмов осуществлялся согласно литературных данных (1). Чувствительность
определяли по отношению к следующим
антибиотикам: бензилпенициллину, тетрациклину, неомицину, гентамицину, спектиномицину, левомицетину, линкомицину,
гризину и бацитрацину.
Чашки с дисками инкубировали в течение 18 часов при температуре 35–37° С
в перевернутом положении, чтобы предотвратить размывание газона конденсационной жидкостью.
Показателем чувствительности микроорганизма к антибиотику служил размер
зоны задержки микробного роста вокруг
бумажного диска.
Из всех исследуемых штаммов были
отобраны те, у которых наблюдалась наибольшая зона задержки роста вокруг диска, пропитанного антибиотиком. К таковым относятся: B.subtilis L2, B.mycoides
537, B.pumilus NCTC 8241, S.aureus 209-P и
ATCC 6538, M.luteus ATCC 9341, Str.thermophilus и Str.faecium.
Следующим этапом нашей работы было тестирование степени чувствительности отобранных штаммов к изучаемым анВетеринарная патология. № 2. 2008
тибиотикам. Степень чувствительности
микроорганизмов определяли методом серийных разведений в жидкой питательной
среде. В качестве питательной среды использовали бульон на переваре Хоттингера, содержащий 110 мг% аминного азота, с
добавлением 1% глюкозы, рН 7,2.
Степень чувствительности определяли по минимальному количеству антибиотика, дающему полную видимую задержку
роста культуры (прозрачный бульон).
Результаты исследования. Нами установлено, что к бензилпенициллину чувствительны стафилококки, микрококки,
термофильный стрептококк. Эти микроорганизмы не способны развиваться при
концентрации антибиотика в среде 0,001
ед/мл. B.subtilis L2 перестает размножаться при концентрации бензилпенициллина
0,01 ед в 1 мл среды. Менее чувствительны B.mycoides 537, B.pumilus NCTC 8241 и
Str.faecium. Их чувствительность составила 0,1 и 0,5 ед/мл соответственно.
К тетрациклину высокочувствителен
штамм B.subtilis L2. Он прекращает регенерировать при концентрации тетерациклина в среде 0,01 мкг/мл. B.pumilus NCTC
8241, S.aureus 209-P и M.luteusATCC 9341
чувствительны к концентрации 0,1 мкг тетерациклина в мл среды. У остальных микроорганизмов чувствительность ниже.
B.subtilis L2 и B.mycoides 537 чувствительны только к 0,1 мкг антибиотика в
мл среды. B.pumilus NCTC 8241 и S.aureus
209-P имеют еще более низкую чувствительность, они прекращают размножаться при концентрации 0,5мкг неомицина
в мл среды. Остальные микроорганизмы не размножаются при концентрации
1 мкг/мл и выше. Однако, поскольку допустимое содержание неомицина, согласно рекомендаций ФАО ВОЗ, составляет
от 0,5 мг/кг в мясе до 20 мг/кг в субпродуктах, то можно считать, что все исследуемые культуры микробов чувствительны к этой концентрации.
Чувствительными к гентамицину можно считать штаммы B.subtilis L2 и B.pumilus
NCTC 8241. Они прекращают размножение
при концентрации антибиотика в растворе
0,01 мкг/мл. Умеренной чувствительностью также обладают штаммы B.mycoides
537 и M.luteus ATCC 9341, прекращающие
размножение при концентрации 0,5 мкг/мл
гентамицина. Остальные культуры можно
отнести к малочувствительным.
Предельно допустимый уровень спектиномицина в продуктах убоя (согласно
рекомендаций ФАО-ВОЗ) - 0,5 мг/кг. Та71
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица
Нижний предел чувствительности микробных культур к антибиотикам
Концентрация антибиотика в питательной среде, ед/мл, мкг/мл
Антибиотик B.subtilis B. micoi- B.pumilus S.aureus S.aureus
M.luteus
Str.ter- Str.faeL2
des 537 NCTC8241 209-P ATCC6538 ATCC9341 mophilus cium
Пенициллин
0,01
1
0,5
0,001
0,001
100
0,001
1
(не допуск)∗
Тетрациклин
(не допуск)
0,01
5
0,1
0,1
0,5
0,1
5
100
0,1
0,1
0,5
0,5
1
1
100
5
0,01
1
0,01
5
5
0,5
1
100
Спектиномицин
(0,5 мг/кг)
0,01
1
0,001
0,1
0,5
1
5
10
Левомицетин
(не допуск)
0,1
0,1
0,1
10
10
0,001
0,001
0,01
0,1
5
100
10
100
1
100
100
0,1
1
0,5
10
10
100
10
100
0,5
1
0,5
5
10
0,01
100
100
Неомицин
(0,5 мг/кг)
Гентамицин
(0,1мг/кг)
Линкомицин
(0,1мг/кг)
Гризин
(не допуск)
Бацитрацин
(не допуск)
∗ В скобках указаны максимальные уровни остатков антибиотиков, допускаемые в продуктах убоя согласно СанПиН 2.3.2.1078 – 01 и рекомендаций ФАО ВОЗ.
кой чувствительностью обладают штаммы B.subtilis L2, B.mycoides 537, B.pumilus
NCTC 8241, S.aureus штаммы 209-P и
ATCC 6538. У остальных микроорганизмов чувствительность лежит за пределами требуемой.
Левомицетин – синтетический аналог
хлорамфеникола – в продуктах убоя не допускается. Высокой чувствительностью
к этому антибиотику обладают M.luteus
ATCC 9341 и Str.thermophilus. Они чувствительны к содержанию в растворе 0,001
мкг/мл левомицетина. При концентрации
0,01мкг/мл не растет также S.faecium.
При содержании в растворе от 0,001 до
5 мкг/мл линкомицина способны размножаться практически все исследуемые культуры, за исключением M.luteus ATCC 9341
(он чувствителен к концентрации 0,1 мкг/
мл) и B.subtilis L2 (предел чувствительности 1 мкг/мл).
B.subtilis L2 и B.pumilus NCTC 8241
чувствительны к концентрации гризина в
растворе 0,5 мкг/мл.
M.luteus ATCC 9341 прекращает размножение при содержании в растворе 0,01
мкг/мл бацитрацина. Остальные аппробированные культуры можно считать недостаточно чувствительными к бацитрацину.
В результате исследований были установлены пределы чувствительности восьми штаммов микроорганизмов к девяти антибиотическим препаратам, наиболее часто применяемым в ветеринарии и животноводстве. Пределы чувствительности изучаемых микробных культур представлены
в таблице.
Заключение
Штамм B.subtilis L2 является одновременно чувствительным к наличию в среде бензилпенициллина, тетрациклина, неомицина, гентамицина, спектиномицина,
линкомицина и гризина, охватывая, таким
образом, достаточно широкий спектр антибиотиков. Для определения наличия в
субстрате левомицетина и бацитрацина
может быть использован штамм M.luteus
ATCC 9341, как наиболее чувствительный.
У остальных изучаемых микроорганизмов
интервал антибиотикочувствительности
уже или же степень чувствительности ниже требуемой.
РЕЗЮМЕ
В статье приведены результаты изучения чувствительности восьми штаммов микроорганизмов к
антибиотикам, применяемым в ветеринарии и животноводстве.
SUMMARY
This article is about the microorganizm’s sensation to the main veterinarian antibiotics. B.subtilis L2 and
M.luteus ATCC 9341 may be used for the identification of the antibiotics in meat.
72
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Литература
1. Аксенов В.И., Ковалев В.Ф. Антибиотики в продуктах животноводства. М.:Колос, 1977. 160 с.
2. Гигиенические требования безопасности и пи-
щевой ценности пищевых продуктов. СанПиН
2.3.2.1078-01. М., 2002. 164 с.
УДК 619:614.9-07
О.И. Кальницкая
Московский государственный университет прикладной биотехнологии
ВЛИЯНИЕ ПАРАМЕТРОВ ТЕРМИЧЕСКОЙ
ОБРАБОТКИ МЯСА НА УМЕНЬШЕНИЕ В НЕМ
ОСТАТКОВ АНТИБИОТИКОВ
В Российской Федерации действуют санитарно-эпидемиологические правила и
нормативы «Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых
продуктов» (СанПиН 2.3.2.1078-01), где
четко регламентируется содержание ряда
антибиотиков в сырье и продуктах животного происхождения.
Лабораториям для практической работы на сегодняшний день требуются легко доступные экспресс-методы с высокой
чувствительностью и удовлетворительными метрологическими характеристиками,
которые позволили бы обнаруживать остаточные количества антибиотиков в сырье
и продуктах животного происхождения.
Разработка и применение различных
современных методов анализа антибиотиков гарантируют выпуск продуктов, свободных от присутствия лекарственных препаратов и отвечающих требованиям стандартов по качеству и безопасности [1,2,3].
В задачи ветеринарных специалистов
входит ветеринарно-санитарный контроль
продукции животноводства при обнаружении остаточных количеств антибиотиков, а
также разработка способов технологической обработки продуктов убоя для уменьшения содержания в них наиболее часто
встречающихся антибиотиков [4].
Материалы и методы. Для изучения
влияния температурной обработки на разрушение антибиотиков в мышечной ткани нами исследованы 140 образцов мышечной ткани различных видов животных и птицы. Тушки птицы получены из
АО «Леггорн» г. Тараклия.
Убой опытных животных и птицы проводили в различные сроки после введения
препарата. Отбор образцов тканей проводили по ГОСТ 26668-85. Содержание антиВетеринарная патология. № 2. 2008
биотиков определяли по МУ 3049-84 «Методические указания по определению остаточных количеств антибиотиков в продуктах животноводства», экспресс-методом определения антибиотиков в пищевых продуктах (МУК 4.2.026-95), методом
иммуноферментного анализа и высокоэффективной жидкостной хроматографии
(МУК 4.1.1912-04).
Для термической обработки применяли режимы и параметры, утвержденные
«Правилами ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной
экспертизы мяса и мясных продуктов». Мясо убойных животных проваривали кусками массой не более 2 кг в течение 3 ч. при
достижении температуры внутри куска не
менее 80°С. Тушки птицы разрубали вдоль
позвоночника на две половины и проваривали при 100°С в течение 1 ч.
После проварки образцы повторно исследовали на содержание остаточных количеств антибиотиков. Исследованию
также подвергали бульон, полученный
после варки.
Результаты исследований. «Правила
ветеринарного осмотра убойных животных и ветеринарно-санитарной экспертизы мяса и мясных продуктов» (1983 г.) не
содержат рекомендаций по ветсанэкспертизе продуктов убоя, содержащих остаточные количества антибиотиков. Даны лишь
следующие указания: «В случае вынужденного убоя животных, подвергшихся отравлению ядовитыми веществами химического происхождения, решение о возможности использования в пищу мяса от таких животных принимается в каждом отдельном
случае, с учетом степени и клинических
признаков отравления животных, токсичности и остаточного количества яда, вы73
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица 1
Содержание антибиотиков в мышечной ткани животных и птицы до и после проварки
Вид животного
Крупный рогатый скот
Свиньи
Птица
Антибиотик
Тетрациклин, n=8
Левомицетин, n=6
Тетрациклин, n=10
Левомицетин, n=6
Тетрациклин, n=30
Левомицетин, n=30
Гризин, n=30
Бацитрацин, n=20
Содержа- Содержание в мышечв бу- Разрушение в сырой ной ткани после варки Содержание
льоне (М±m)
но (М±m)
мыш. ткани
(М±m)
мг/кг
мг/кг
%
мг/кг
%
%
0,4±
0,28±
0,04±0,01
9,2±3,1
70,0±2,9 20,8±4,0
0,12
0,05
0,3±
11,3±
0,21±
0,03±0,01
67,5±3,0 21,2±3,9
0,05
2,9
0,03
0,98±
0,01±
0,72±
8,9±2,6
71,3±4,0 19,8±3,3
0,05
0,001
0,07
0,65±
0,08±
12,0±
0,45±
70,0±1,1 18,0±5,8
0,04
0,005
3,0
0,04
0,5±
0,045±
0,36±
9,0±2,6
71,2±2,9 19,8±4,1
0,01
0,008
0,04
0,5±
0,055±
11,7±
0,34±
69,0±1,5 19,3±2,0
0,02
0,01
1,9
0,03
0,25±
0,01±
0,17±
5,9±1,6
76,0±3,4 18,1±2,8
0,05
0,001
0,03
0,2±
0,15±
0,015±0,0
7,3±3,0
78,2±2,2 14,5±2,1
0,04
0,03
звавшего отравление» (п. 9.1.).
В таких случаях бактериологические и
физико-химические исследования не способны решить вопрос о дальнейшей реализации продуктов убоя. Необходимо определять остаточные количества антибиотиков (их МДУ нормируются СанПиН
2.3.2.1078-01), а также принимать решение
об использовании продуктов убоя, полученных от таких животных.
Образцы мышечной ткани различных
видов животных и птицы нами исследовались по следующей схеме:
Введение антибиотиков опытным животным, птице согласно наставлениям по применению препаратов
↓
Убой опытных животных, птицы в различные сроки после введения препарата,
отбор образцов по ГОСТ 26668-85
↓
Исследование образцов на содержание антибиотиков по МУ 3049-84
↓
Термическая обработка образцов
↓
Повторное исследование образцов на содержание антибиотиков
Результаты исследований представлены в таблице 1.
В результате термической обработки в
мышечной ткани животных и птицы значительно сокращается содержание антибиотиков. В основном из мышечных волокон лекарственный препарат вместе с мы74
шечным соком переходит в бульон, часть
препарата разрушается под действием высоких температур.
После варки в мышечной ткани животных и птицы остается приблизительно десятая часть исходного количества антибиотиков. В бульон переходит около 70 % антибиотиков. Следовательно, можно предположить, что около 20 % антибиотиков
разрушается в результате проварки, либо
переходит в метаболиты, которые микробиологическим методом не определяются.
Таким образом, если в продуктах убоя
обнаружено превышение предельно допустимого количества перечисленных антибиотиков, для дальнейшей реализации
туш может быть рекомендована промышленная переработка в виде проварки кусков мышечной ткани массой не более 2 кг
в течение 3 ч. при достижении температуры внутри куска не менее 80°С. Тушки птицы необходимо проваривать при 100°С в
течение 1 ч.
Бульон после варки должен быть утилизирован, так как содержит около 70% первоначального содержания антибиотика.
Для изучения возможности использования сырья, содержащего остаточные количества антибиотиков, при изготовлении
вареных колбас в условиях АО «ТАМП»
был изготовлен опытный образец колбасы «Закусочной» согласно технологической инструкции по производству изделий
колбасных вареных (ГОСТ Р 52196-2003).
Говядину получили от животного, которому при жизни был введен препарат «Тиакат-и». Препарат разработан ВИЭВ и изгоВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица 2
Влияние технологических параметров (варки)
на содержание антибиотиков в готовом изделии (n=6)
Объект исследования
Содержание антибиотиков, мкг/г, (М±m)
Левомицетин
Бензилпенициллин
Стрептомицин
Тетрациклин
В сыром фарше
1,00±0,02
0,65±0,01
0,70±0,05
1,50±0,01
В готовом изделии
0,92±0,07
0,58±0,02
0,64±0,08
1,32±0,04
93%
89%
90%
89%
В % к начальному содержанию
товлен на основе окситетрациклина. Препарат вводили животному в виде внутримышечной инъекции из расчета 0,5 мл на
10 кг живого веса.
В 1 г говядины, полученной после убоя,
содержался 1 мкг окситетрациклина, что
в 100 раз превышает требования СанПиН
2.3.2.1078-01.
В сыром фарше содержание окситетрациклина составило 0,73 мкг/г. Уменьшение количества объясняется разбавлением мышечной ткани шпиком, крахмалом и
другими ингредиентами, добавляемыми по
рецептуре. В готовом продукте содержание окситетрациклина после варки составило 0,65 мкг/г, то есть, снижение содержания антибиотика в готовом изделии оказалось незначительным.
Для выяснения влияния термической
обработки на содержание остаточных количеств антибиотиков в фарше, из которого изготовлены колбасные изделия, нами
были приготовлены несколько образцов
продукта в искусственной оболочке диаметром от 32 до 120 мм.
Для изготовления образцов использо-
вали говядину жилованную, которую предварительно инъецировали растворами
следующих антибиотиков: левомицетина,
бензилпенициллина, стрептомицина, тетрациклина.
Образцы продуктов были подвержены
всем технологическим операциям, которые используются для изготовления колбас вареных. В таблице 2 отражено содержание антибиотиков в опытных образцах
и говядине, которая использовалась для их
изготовления.
Полученные данные позволяют предположить, что варка колбасных изделий
с использованием горячего пара в термических камерах не приводит к значительному разрушению антибиотиков и не может быть рекомендована для использования мышечного сырья с содержанием антибиотиков в концентрациях, превышающих предельно допустимые. В отличие
от проварки мышечного сырья кусками в
ваннах или автоклавах, при изготовлении
вареных колбас не образуется бульон, в
который могла бы уходить большая часть
антибиотика.
РЕЗЮМЕ
В результате термической обработки в мышечной ткани животных и птицы значительно сокращается содержание антибиотиков. Из мышечных волокон антибиотик переходит в бульон вместе с мышечным соком, часть препарата разрушается под действием высоких температур. Изготовление вареных колбас из сырья, содержащего антибиотики, не позволяет добиться значительного снижения
их исходного количества.
SUMMARY
As a result of thermal processing a muscular fabric of animals and poultry the quantity of antibiotics decreases. The part passes in a broth, and the part collapses. The making of the sausages slightly reduce the
maintenance of antibiotics too.
Литература
1. Даниленко, В.Н. Перспективы создания на пространстве CНГ конкурентноспособного производства субстанций антибиотиков / В.Н. Даниленко // Матриалы 3-го съеза общества биотехнологов России. М., 2005. С. 170.
2. Демидова, Л.Д. Ветеринарно-санитарные аспекты борьбы с маститом коров и повышение санитарного качества молока: автореф. дис. д-ра вет.
наук. М., 1997. 330 с.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
3. Донченко, Л.В. Безопасность пищевого сырья и
продуктов питания / Л.В. Донченко, В.Д. Надыкта М., 1999.
4. Пономарев, А.Б. Совершенствование лабораторно-диагностической сети и повышение
эффективности работы ветеринарных лабораторий: Автореф. дис. канд. вет. наук. Щелково,
2002.
75
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
УДК 619:616.728.2-001.5-089.84
А.Ю. Кирсанова, И.Б. Самошкин, В.В. Краснов, К.П. Кирсанов
ФГУ Российский научный центр «Восстановительная травматология и
ортопедия» имени академика Г.А. Илизарова Росмедтехнологий»,
Государственный лечебно-диагностический центр травматологии
животных на базе СББЖ САО г. Москвы
АППАРАТ ДЛЯ ЛЕЧЕНИЯ ПАТОЛОГИИ
ТАЗОБЕДРЕННОГО СУСТАВА
У МЕЛКИХ ДОМАШНИХ ЖИВОТНЫХ
Лечение повреждений и заболеваний
тазобедренного сустава является одной из
актуальных и сложных задач в ветеринарной хирургии. Используемые методы лечения данной патологии весьма разнообразны и предусматривают использование
различных консервативных и оперативных методов лечения. В последние годы
для реконструкции и восстановления функции тазобедренного сустава используются внутренние металлоконструкции и эндопротезы [1-5].
В Российском научном центре «Восстановительная травматология и ортопедия»
имени академика Г.А. Илизарова (г. Курган) и в государственном лечебно-диагностическом центре травматологии животных на базе СББЖ САО (г. Москва) разработаны технические средства для внешней
управляемой фиксации таза и тазобедренного сустава при лечении их повреждений
и заболеваний [6-9].
Вместе с тем, применяемые конструкции аппарата не обеспечивают дозированной коррекции положения головки бедренной кости относительно суставной впадины и стабильного удержания ее с сохранением полной амплитуды движений в тазобедренном суставе.
Для профилактики развития контрактур тазобедренного сустава и сокращения
срока реабилитационного периода при лечении данной патологии нами предлагается
аппарат, который содержит тазовую опору,
выполненную в виде жестко соединенных
между собой планок 1 и 2, а также бедренную опору в виде планки 3 (рис. 1) [10].
Планка 3 соединена с планками 1 и 2
подвижно закрепленными на последних
с помощью фиксаторов 4 опорными балками 5 с отверстиями 6 и установленными в них с возможностью смещения резьбовыми направляющими 7, соединенными
с шарнирным узлом. Шарнирный узел выполнен в виде подвижно соединенных между собой планок 8 и 9 с отверстиями 10, одна из которых (9) снабжена резьбовыми
76
хвостовиками 11, и установленного между
планками 8 и 9 шара 12 с резьбовым хвостовиком 13, закрепленным на планке 3.
На планках 1, 2 и 3 посредством болтов-фиксаторов 14 закреплены фиксаторы кости в виде спиц 15 и стержней 16.
Детали аппарата соединены между собой с помощью кронштейнов 17, крепежных болтов 18 и гаек 19.
Аппарат использую следующим образом.
После анестезии и обработки операционного поля известными приемами выполняют остеосинтез тазовой и бедренной костей на стороне пораженного тазобедренного сустава. В ходе его выполнения в тазовые и бедренные кости консольно вводят спицы 15 и стержни 16, которые
посредством болтов-фиксаторов 14 крепят
непосредственно на планках 1, 2 и 3 или на
установленных на этих планках кронштейнах 17. При этом центр шара 12 шарнирного узла устанавливают в проекции центра
головки бедренной кости.
При репозиции бедренной кости и центрации ее головки относительно суставной
впадины для перемещения во фронтальной плоскости производят одновременное
смещение в латеральном или медиальном
направлении опорных балок 5. Для этого предварительно ослабляют затяжение
крепежных гаек 19 фиксаторов 4 стабилизирующих положение опорных балок 5 на
планке 2, а затем вращают крепежные гайки 19 фиксирующие их резьбовые хвостовики на планке 1. Для ротационного разворота бедренной кости в этой же плоскости
осуществляют разнонаправленное перемещение опорных балок 5.
Для смещения бедренной кости в сегментальной плоскости осуществляют одновременное перемещение в дорсальном
или вентральном направлениях резьбовых
направляющих 7, установленных в отверстиях 6 опорных балок 5. Для этого производят вращение крепежных гаек 19, фиксирующих эти направляющие.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Рис. 1. – Схема аппарата для лечения патологии тазобедренного сустава
у мелких домашних животных
Смещение бедренной кости в сагиттальной плоскости в краниальном или каудальном направлении осуществляют путем перемещения шарнирного узла. Для
чего производят вращение крепежных гаек 19 фиксирующих положение резьбовых хвостовиков 11 планки 9 на резьбовых
направляющих 7. Для углового смещения
бедренной кости в этой же плоскости осуществляют разнонаправленное перемещение резьбовых направляющих 7.
Указанные манипуляции могут быть
выполнены одномоментно, дозированно в
послеоперационном периоде, последовательно или одновременно в нескольких сочетаниях.
Осуществив репозицию бедренной
кости и придав ей необходимое положение с центрацией головки относительно
суставной впадины, системы аппарата стабилизируют путем затяжения крепежных
болтов 18 и гаек 19.
В послеоперационном периоде ослабляют затяжение фиксирующих гаек 19
болтовых соединений планок 8 и 9 шарнирного узла до создания возможности
вращения размещенного между ними шара 12. Это обеспечивает полную амплитуду
движений в тазобедренном суставе.
По достижении признаков анатомофункционального восстановления сустава
аппарат демонтируют.
Использование предложенного аппарата показало, что он обеспечивает возможность дозированной коррекции положения головки бедренной кости и стабильного удержания ее в суставной впадине с сохранением полной амплитуды движений в
тазобедренном суставе в процессе лечения.
Это позволяет получить положительные
клинические и анатомо-функциональные
результаты в предельно короткие сроки.
РЕЗЮМЕ
Предложенный аппарат обеспечивает возможность дозированной коррекции положения головки
бедренной кости и стабильного её удержания в суставной впадине с сохранением полной амплитуды движений в тазобедренном суставе в процессе лечения. Это позволяет получить положительные
клинические и анатомо-функциональные результаты в предельно короткие сроки.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
77
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
SUMMARY
The proposed apparatus provides the possibility with gradual correction and stable containment of the femoral head with the complete range of motion in the hip joint maintained during treatment. It allows us to
obtain positive clinical and anatomical and functional results at a short term.
Литература
1. Митин, В. Н. Отдаленные результаты тотального эндопротезирования тазобедренного сустава
у собак при его дисплазии / В. Н. Митин, С. А.
Ягников // Российский ветеринарный журнал.
2005. № 1. С. 2-5.
2. Самошкин, И. Б. Реконструктивно-восстановительные операции при врожденной и посттравматической патологии тазобедренного сустава
у собак : автореф. дис. докт. вет. наук / И. Б. Самошкин ; МГАВМиБ им. акад. К.И. Скрябина.
Москва, 1999. 32 с.
3. Самошкин, И. Б. Тотальное эндопротезирование
при диспластическом коксартрозе у собак / И. Б.
Самошкин // Актуальные проблемы ветеринарной хирургии : Материалы международной научно-практической конференции, посвященной 75летию УГАВМ. Троицк : УГАВМ, 2004. С. 142-148.
4. Сравнение различных методов лечения вывихов
головки бедренной кости у собак / В. Н. Митин
[и др.] // Материалы VII международной конференции по проблемам ветеринарной медицины
мелких домашних животных. М., 1999. С. 232-233.
5. Чужакин, Н. Л. Опыт лечения собак при вывихе
тазобедренного сустава / Н. Л. Чужакин // Ветеринария. 2000. № 9. С. 53-54.
6. Свидетельство № 11699, Российская Федерация,
МКИ6 А 61 D 1/00. Аппарат для лечения пере-
ломов костей таза животных / Кирсанов К. П.,
Мельников Н. М., Меньщикова И. А. № 98120020;
заявл. 02.11.1998; опубл. 16.11.1999, Бюл. № 11. 2 с.
7. Пат. № 2164104 Российская Федерация, МПК7 A
61 D 9/00. Устройство для остеосинтеза тазобедренного сустава у животных / Шрейнер А. А. №
96116647/13; заявл. 16.08.1996; опубл. 20.03.2001,
Бюл. № 6. 2 с.
8. Пат. № 38107 Российская Федерация, МКИ7 А
61 D 1/00 Устройство для остеосинтеза тазового шва мелких домашних животных / Кирсанов К. П., Краснов В. В., Тимофеев В. Н. №
2004100381/20; заявл. 08.01.2004; опубл. 27.05.2004,
Бюл. 15. 2 с.
9. Пат. № 43452 Российская Федерация, МКИ7 А
61 D 1/00 Аппарат для лечения повреждений тазового кольца у мелких домашних животных /
Кирсанов К. П., Краснов В. В., Тимофеев В. Н. №
2004129451/22; заявл. 08.10.2004; опубл. 27.01.2005,
Бюл. 3. 2 с.
10. Пат. № 67437. Российская Федерация, МКИ7 А61D
1/00; А61В 17/56. Аппарат для лечения патологии
тазобедренного сустава у мелких домашних животных / Краснов В.В., Самошкин И.Б., Кирсанова А.Ю., Кирсанов К.П. № 2007 123640/22; заявл.
22.06.07, опубл. 27.10.2007, Бюл. № 30.
УДК 619:615:,636.22/.28
Г.Н. Прокофьева, В.Н. Клюева, Д.В. Пчельников, В.А. Бабич
ГЕМОВИТ – ПЛЮС КАК ИСТОЧНИК
МИКРОЭЛЕМЕНТОВ ДЛЯ СУПОРОСНЫХ
СВИНОМАТОК И ПОРОСЯТ
В настоящее время в большинстве свиноводческих хозяйств остро стоит вопрос
воспроизводства свиней и сохранности
приплода. Главной причиной данной проблемы является несбалансированность рационов и дефицит макро- и микроэлементов, что приводит к нарушению обмена веществ, а также к различным заболеваниям,
наиболее распространенным среди которых является алиментарная анемия [3].
Для восполнения недостатка в организме микроэлементов существует ряд препаратов и добавок, содержащих в своем составе микроэлементы. Особый интерес
среди них представляют внутрикомплексные соединения, содержащие циклические
группировки органических молекул, так
называемые клешневидные или хелатные
соединения, структура которых напоминает клешни, которыми лиганды охватывают ион металла [2].
78
Одним из наиболее перспективных соединений является этилендиаминдиянтарная кислота – ЭДДЯК. Это природное соединение, выделенное из фильтрата культур микробов актиномицетов, экологически безвредно. ЭДДЯК обладает очень низкой комплексообразующей способностью
по отношению к кальцию – основе костных тканей. Комплексы ЭДДЯК с рядом
эссенциальных микроэлементов выпускаются под названием гемовит. Последней разработкой «ООО Гемовит» является
препарат гемовит-плюс, в состав которого
входят Fe, Mn, Zn, Cu, Co, Se, I.
Возможность совместного содержания
в препарате Cu2+ и I- обусловлено тем, что
ионы меди, связанные с ЭДДЯК, не взаимодействуют с I-. Действие комплекса микроэлементов усиливается и воздействием
янтарной кислоты, которая известна как
адаптоген, регулятор обменных процессов.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Янтарная кислота укрепляет иммунную
систему, снимает стрессы, нервное возбуждение. Достоинством препарата гемовитплюс является широкий набор микроэлементов и оральный метод введения.
Материалы и методы
Изучение влияния препарата гемовит–плюс на воспроизводительные качества свиноматок, сохранность и жизнеспособность поросят–сосунов и поросят–
отъемышей, больных алиментарной анемией, проводили на базе свинофермы учхоза «Сахарово» Калининского района
Тверской области. Для проведения опыта было отобрано 20 свиноматок крупной
белой породы на второй – третьей неделе супоросности, которые были разделены на две группы, по 10 животных в каждой. Свиней в группы подбирали по принципу пар аналогов и делили на опытную
и контрольную. Животных содержали в
индивидуальных станках. Первые 10 дней
после постановки на опыт животные обеих групп получали общехозяйственный
рацион и находились под наблюдением.
После окончания подготовительного периода маткам опытной группы в рацион
дополнительно вводили препарат гемовит–плюс в дозе 10 мл на животное в сутки, в течение 30 дней. Влияние препарата
на воспроизводительные качества свиноматок оценивали по многоплодию, крупноплодию, молочности и массе гнезда при
рождении, учитывали прирост массы тела поросят и их сохранность в подсосный
период. У шести свиноматок из каждой
группы по окончании подготовительного периода и после курса гемовита – плюс
брали кровь для биохимических и морфологических исследований. Кровь также
брали у поросят сразу после рождения и в
30-дневном возрасте.
В период опыта проводили наблюдения
за состоянием здоровья животных: за
матками в течение 60 дней после опороса,
за поросятами 60 дней. В начале и в конце
эксперимента проводили контрольные
взвешивания и определяли абсолютный,
среднесуточный и относительный прирост
массы тела животных.
Для испытания влияния гемовитаплюс на животных, больных алиментарной анемией, было подобрано две группы
поросят крупной белой породы, в возрасте три месяца по 10 животных в группе.
Животных для постановки на опыт отбирали с одной массой тела и одинакового
возраста. Кроме того, все животные имели клинические признаки алиментарной
Ветеринарная патология. № 2. 2008
анемии. Для подтверждения анемии, а
также для исследования лечебного действия препарата в каждой группе у 6 животных брали кровь на анализ.Содержание животных боксовое, по 5 поросят в
боксе. Поение и кормление осуществлялось из кормушки. После отбора животных в группы в течение 15 дней наблюдали за их состоянием. Животные опытной
группы, кроме обычного рациона, получали препарат гемовит-плюс в количестве 5 мл на поросенка. Нужное количество
препарата смешивали с кормом и скармливали каждому поросенку индивидуально, один раз в сутки, в течение 30 дней.
Животные контрольной группы получали обычный рацион.
Исследования крови проводили по общепринятым методикам: количество эритроцитов и лейкоцитов определяли в камере Горяева, гемоглобин в крови – с помощью гемометра Сали, определение общего белка проводили рефрактометрическим методом, количественное определение соотношений белковых фракций проводили методом электрофореза, уровень
гематокрита определяли центрифугированием. Средний объем эритроцитов вычислялся по формуле 1:
Средний диаметр эритроцитов вычислили по формуле 2:
Цветной показатель крови вычисляли
по формуле 3:
Среднее содержание гемоглобина в одном эритроците вычисляли делением количества гемоглобина на количество эритроцитов.
Удельное сопротивление крови вычисляли по формуле 4:
Удельное сопротивление крови, Ом/см
= (кол-во эритроцитов)3 × 0,65+81,5 (4)
Для определения сывороточного железа в работе использовался набор реактивов фирмы «Биокон», Германия JRON –
FZ. Ferrozine method.
Общую железосвязывающую способность сыворотки крови ( ОЖСС ) определяли с помощью набора реактивов фирмы «Биокон», Германия TOTAL JRON –
BJNDNG CAPACJTY, Precipitation with
magnesium carbonate.
79
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица 1
Влияние гемовита на воспроизводительные функции свиноматок
Группа животных
Опытная
Контрольная
Среднее кол-во
поросят в гнезде
Масса гнезда
при рождении, кг
Масса поросят
при рождении, кг
Молочность
свиноматок, кг
11,20 ±0,30*
13,21±1,20*
1,18±0,22*
56,47±1,70*
10,44±0,30
11,48±1,39
1,10±0,34
50,00±1,15
* ρ < 0,05
Таблица 2
Влияние гемовита – плюс на прирост массы тела поросят
Масса тела, кг/ Среднесуточный прирост, г
Группа
При рождении
21 день
60 дней
Опытная
1,18±0,22
5,24±0,15*/186±0,10*
19,43±0,31*/301±0,15*
Контрольная
1,10±0,34
5,10±0,12/180±0,12
18,88±0,30/288±0,09
* ρ < 0,05
Нежелезосвязывающую способность
сыворотки крови вычисляли по формуле 5:
НЖСС ( мкмоль/л ) =
= ОЖСС – Fe сывороточное
(5)
Насыщенность трансферином вычисляли по формуле 6:
Количество трансферина вычисляли по
формуле 7:
Трансферин ( мг/дл ) = ОЖСС × 4,656 (7)
Для определения эффективности лечения алиментарной анемии, в конце опыта
у животных проводили повторные анализы крови. Исследования и расчеты проводились по тем же методикам и формулам,
что и ранее.
Статистическую обработку результатов исследований проводили по Н.А. Плохинскому (1970) с использованием компьютерной техники.
Результаты исследований
Результаты наших исследований показали, что многоплодие свиноматок опытной группы было выше на 0,76 поросенка по сравнению со свиньями контрольной группы и составило 11,20±0,30 поросят (табл. 1). Повышение многоплодия
свиноматок опытной группы можно объяснить лучшей выживаемостью поросят в
эмбриональный период в результате профилактики микроэлементозов у этих свиноматок.
Крупноплодность отражает эмбриональную скороспелость и влияет на дальнейший рост и развитие поросят. Многочисленными исследованиями (1, 4, 5) установлено; чем больше масса поросят
при рождении, тем лучше они растут и
развиваются при выращивании, доращи80
вании и откорме. Для определения крупноплодности поросят взвешивали до первого сосания. Как видно из таблицы 1 вес
поросят при рождении в опытной группе был выше, чем у поросят контрольной
группы на 80 г.
Молочность свиноматок имеет большое значение для интенсивности роста и развития поросят–сосунов, а также
их последующего выращивания. Молочность свиноматок учитывали путем взвешивания поросят, до и после кормления.
Установлено, что молочность в опытной
группе составила 56,47±1,7 кг, в контрольной группе 50,00±1,15 кг. Разница между
группами составила 6,47 кг. Статистическая обработка подтверждает достоверное
отличие.
Итоговым показателем воспроизводительных качеств свиноматок является масса гнезда при рождении. Этот показатель у свиней опытной группы составил
13,21±1,20 кг, контрольной – 11,48±1,39 кг,
что на 1,73 кг больше в опытной группе,
чем в контрольной.
Поросята, родившиеся от свиноматок
опытной группы, имели плотную конституцию, упругую мускулатуру, цвет кожного покрова был розовый. Поросята,
полученные от свиноматок контрольной
группы – рыхлую конституцию и дряблую мускулатуру, цвет кожного покрова
был белый.
Результаты исследований показали, что
поросята обеих групп росли и развивались
нормально. Однако поросята полученные
от опытной группы свиноматок имели более высокую массу тела и среднесуточные
приросты в подсосный период. Они превосходили контрольных животных к 60Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица 3
Влияние гемовита – плюс на сохранность поросят в подсосный период
Количество поросят, голов
Группа
при рождении
на 21 день
на 60 день
Опытная
11,20±0,30*
11,00±0,29*
10,76±0,30*
Контрольная
10,44±0,30
10,30±0,26
10,00±0,30
* ρ < 0,05
Таблица 4
Влияние гемовита – плюс на показатели крови свиноматок
Показатели
Начало опыта
фоновые
Сывороточное железо, мкмоль/л
8,5 ± 2,2
11,5 ± 1,3*
7,9 ± 3,5
Гемоглобин, г /л
91,0 ± 0,9
109,5 ± 1,7*
89,3 ± 0,8
7,7 ± 0,7
6,1 ± 0,8*
4,8 ± 0,4
Лейкоциты, 10 л
3,4 ± 1,9
7,2 ± 0,78*
4,2 ± 0,7
Общий белок, г / л
6,7 ± 1,3
8,5 ± 2,5*
6,3 ± 0,8
Альбумины, %
59,8 ± 7,2
40,4 ± 4,2*
64,8 ± 9,8
Глобулины, %
α
β
γ
11,0 ± 2,1
10,2 ± 3,4
19,0 ± 0,8
16,2 ± 1,7*
15,4 ± 1,2
28,0 ± 2,0*
8,0 ± 1,5*
9,8 ± 3,5*
17,4 ± 2,9*
1,4
0,7*
1,8
Эритроциты, 10 12 л
9
Коэффициент А / Г
Окончание опыта
опытная группа
контрольная группа
* ρ < 0,05
Таблица 5
Влияние гемовита – плюс на показатели крови поросят
В возрасте 5 дней
группа
опытная
контрольная
В возрасте 35 дней
группа
опытная
контрольная
Сывороточное железо,
мкмоль/л
11,8 ± 3,7
9,5 ± 3,6
8,7 ± 1,1*
8,0 ± 1,9
Гемоглобин, г/л
115,9 ± 1,8
81,5 ± 1,7
97,5 ± 2,1*
82,7 ± 1,5
Эритроциты, 10 12 л
10,7 ± 1,2
8,3 ± 1,9
8,9 ± 1,8*
6,9 ± 1,7
Показатели
9
Лейкоциты, 10 /л
10,8 ± 2,2
7,2 ± 1,3
7,3 ± 1,7*
6,7 ± 1,0
Общий белок, г/л
7,5 ± 1,6
5,7 ± 1,9
5,8 ± 0,4*
5,7 ± 1,5
Альбумины, %
45,9 ± 1,3
54,3 ± 2,7
41,6 ± 2,5*
58,0 ± 3,2
Глобулины, %
α
β
γ
10,1 ± 1,3
14,0 ± 2,8
30,0 ± 1,6
9,5 ± 2,2
17,0 ± 1,3
19,2 ± 2,7
15,2 ± 2,4*
15,2 ± 1,9*
28,0 ± 3,4*
10,5 ± 2,4*
8,3 ± 1,3*
23,2 ± 3,7*
0,8
1,2
0,7
1,4
Коэффициент А\Г
* ρ < 0,05
му дню жизни по массе тела на 0,55 кг. По
среднесуточным приростам эта разница
составила 13 г (табл. 2).
Как видно из результатов, представленных в таблице 3, сохранность поросят
в подсосный период в обеих группах была высокой. Однако в опытной группе этот
показатель был выше на 1,7%, чем в контрольной.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
Добавление испытуемого препарата
определенным образом отражалось на результатах изменения состава крови свиноматок (таблица 4). Полученные данные показывают, что у животных обеих
групп на начало опыта все показатели были ниже нижней границы нормы, что свидетельствует о нарушении общего обмена веществ. Низкое содержание общего
81
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица 6
Прирост массы тела поросят-отъемышей
Масса тела, кг
Группы
животных
Абсолютный
прирост, кг
Среднесуточный прирост, г
Относительный прирост, %
39,0 ± 5,7
21,0 ± 1,25*
700 ± 58*
48,8 ± 1,3*
30,0± 4,9
12,0 ± 1,49
400 ± 44
27,9 ± 1,1
начало
опыта
конец
опыта
Опытная
18,0 ± 3,2
Контрольная
18,0 ± 3,2
* ρ < 0,05.
Таблица 7
Показатели состава крови поросят
Показатели
Эритроциты, 10 12 л
Гемоглобин, г/л
Гематокрит, л/л
Цветной показатель
Эритроциты, средний объем, фл
Эритроциты, средний диаметр,мкм
Среднее содержание гемоглобина
в эритроците, пг
Удельное сопротивление крови, ом/см
Железо сывороточное, мкмоль/л
Общая железосвязывающая
способность сыворотки, мкмоль/л
Нежелезосвязывающая способность сыворотки, мкмоль/л
Насыщенность трансферина
железом, %
Трансферин, мг/дл
Начало опыта
Окончание опыта
фоновые
опытная
контрольная
4,14 ± 0,19
89,75 ± 0,96
0,26 ± 0,02
0,65 ± 0,.04
62,80 ± 1,05
7,42 ± 1,00
21,67 ± 0,75
5,03 ± 0,35*
115,19 ± 0,53*
0,48 ± 0,09*
0,68 ± 0,07
95,42 ± 0,98
8,68 ± 0,97
22,90 ± 1,52
4,12 ± 0,21
84,49 ± 1,89
0,28 ± 0,07
0,61 ± 0,02
67,96 ± 0,68
7,58 ± 1,27
20,50 ± 0,24
127,62 ± 0,75
15,21 ± 0,35
61,30 ± 1,74
164,22 ± 2,29
23,15 ± 0,51*
97,54 ± 2,21*
126,95 ± 0,83
15,25 ± 0,62
61,00 ± 1,51
46,09 ± 0,71
74,39 ± 0,12
45,75 ± 1,29
24,81 ± 0,62
23,73 ± 1,57
25,00 ± 0,24
285,41 ± 1,49
454,14 ± 2,15
284,01 ± 1,53
* ρ < 0,05.
белка указывает на нарушение белкового обмена. Высокое содержание альбуминов – на гиперальбунемию и диспротеинемию. Чувствительным критерием обеднения запасного фонда и развития латентного дефицита железа является снижение его
концентрации в сыворотке крови, что свидетельствует о нарушении обмена железа
в организме животных и о развитии у них
алиментарной анемии.
В конце опыта у животных опытной группы показатели крови восстановились до физиологической нормы, о чем
свидетельствует стабилизация гемопоэза,
эритропоэза и лейкопоэза, в результате
повышения количества гемоглобина, эритроцитов, сывороточного железа. О стабилизации обмена белков свидетельствует
повышение содержания общего белка и
нормальное значение альбумино-глобулинового отношения. При этом у животных
контрольной группы изучаемые показатели были ниже, что свидетельствует об усилении описанных нарушений.
Данные по исследованию крови поросят представлены в таблице 5, из которой
видно, что у новорожденных поросят от
опытной группы свиноматок, все показате82
ли были в пределах физиологической нормы, что свидетельствует об отсутствии каких-либо нарушений, связанных с обменом
веществ в организме животных. При рождении у поросят не было отмечено признаков алиментарной анемии. Однако к концу
подсосного периода показатели крови постепенно снижались.
У поросят, рожденных от свиноматок
контрольной группы, практически все показатели были ниже нижней отметки физиологической нормы, что свидетельствует о врожденном нарушении обмена веществ. К концу опыта все показатели крови были еще ниже.
Следующим этапом наших исследований было испытание гемовита-плюс
на поросят–отъемышей, больных алиментарной анемией. Картина заболевания у отобранных для проведения опыта животных имела достаточно выраженный характер и заключалась в значительном сниженнии содержания эритроцитов в крови и концентрации гемоглобина
в них. У животных наблюдали бледность
слизистой оболочки ротовой полости и
половых органов. Результаты исследования лечебных свойств препарата гемовитВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
плюс представлены в таблице 6, из которой видно, что животные опытной группы имели более высокий прирост массы
тела, чем животные контрольной группы.
Абсолютный прирост у животных опытной группы был больше на 8 кг, чем у контрольных, среднесуточные приросты – на
267 г и относительный прирост – на 12,9%.
Увеличение приростов массы тела свидетельствует о более стабильном состоянии
организма опытных животных по сравнению с контрольными и лучшем усвоении
питательных веществ корма.
Результаты исследований крови представлены в таблице 7, из которой видно, что к окончанию опыта у животных
опытной группы достоверно повышается
количество эритроцитов на 24,2%, а также увеличивается концентрация гемоглобина в крови на 28,0%, что соответственно увеличивает гематокрит на 84,6%
и цветной показатель на 4,9%. Также наблюдалось увеличение насыщенности
эритроцитов гемоглобином на 3,6%, увеличение среднего объема эритроцитов на
45,8%, диаметра эритроцитов на 16,9%,
что свидетельствует о повышении защитных и адаптационных функций организма.
Удельное сопротивление крови возрастает на 65,3% и приходит к нормальному
или физиологическому значению, улучшая функциональные свойства крови. Одновременно с этим у животных наблюдается снижение трансферина на 52,0%, что
свидетельствует о насыщенности организма железом.
Полученные нами результаты совпадают с данными Fizard I. R., который утверждает, что использование высокобиоактивных форм микроэлементов в виде
комплексов с аминокислотами более эффективно, чем использование сульфатных
форм. Им установлено, что скармливание
комплексов металл-аминокислота новорожденным и подсосным поросятам улучшало потребление и оплату корма, увеличивало энергию роста, снижало воздействие стресса и повышало иммунитет [4].
Наши результаты сходны с данными
Knaus W. и др. которые определили, что
комплекс железа с фумаровой кислотой
положительно влияет на гематологические показатели – уровень гемоглобина,
концентрацию железа в крови, повышает прирост поросят-сосунов. Фумаровая
кислота является одним из фрагментов
этилендиаминдиянтарной кислоты, лиганда, который используется в препаратах гемовит [5].
Таким образом, исследованиями установлено, что поросята, полученные от
опытной группы свиней, имеют более высокие приросты массы тела, они были более жизнеспособны, чем животные контрольной группы. Полученные результаты
указывают на то, что препарат гемовитплюс стимулирует обменные процессы в
организме свиноматок
Введение в рацион супоросных свиноматок препарата гемовит–плюс положительно влияет на воспроизводительные
функции свиноматок, сохранность приплода, энергию роста и развития молодняка,
устойчивость поросят к различным заболеваниям.
Следовательно, препарат гемовитплюс оказывает положительное действие
на поросят больных железодефицитной
анемией, полностью вылечивая её, возникающую в результате нарушения обмена
железа и других микроэлементов, обмен
которых связан с обменом железа. Под
действием препарата увеличивается скорость роста животных, улучшается их общее развитие.
Литература
1. Гражевская С.Б., Ли Э.Д. и др. Действие йода и
кобальта на организм подсосных свиноматок и
рост поросят-сосунов в условиях комплекса //
Использование кормовых добавок в животноводстве. Пермь, 1983. С. 60-65.
2. Сергатенко А.С. Комплексное влияние хелатных соединений цинка и меди и йодистого калия
на гематологические показатели и рост поросят-сосунов при алиментарной анемии //Тематич. Сб. / Биохимические аспекты использования хелатных структур переходных металлов в
животноводстве. Ульяновск. УГСХА.1997.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
3. Тен Э.В. Биологические эффекты хелаткомплексонов биогенных металлов и технологии их
использования в животноводстве. М.: Химия,
1991.
4. Fizard I. R., An Introduction to Veterinary Immunology. Philadel phia London Toronto, 1977. 311.
5. Khaus W., Zollitsch W., Letter F., Schlerka G., Effects of iron supplementation on the performance,
bloоd hemoglоbin, iron concentration and carcass
color of ycal calucs. // Bodenchkultur, 1997. 48. № 1,
S. 431.
83
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
УДК 636.93:591.46:615-015.31
Н.А. Кочуева, В.Н. Бочкарев, Н.В. Гарнцева
ФГОУП ВПО Костромская ГСХА
АДАПТАЦИОННЫЕ ПРОЦЕССЫ
В ОРГАНИЗМЕ ПЛОТОЯДНЫХ
ПРИ ОСТРОМ ПОСЛЕРОДОВОМ ЭНДОМЕТРИТЕ
В последнее время в сферу практической ветеринарии поступает большой объем препаратов для терапии и профилактики послеродового эндометрита, однако заболеваемость животных остается на высоком уровне, что приводит к большим экономическим потерям (5).
Одной из основных причин, тормозящих развитие звероводства и собаководства, являются акушерско-гинекологические заболевания, которые могут возникать
во все периоды онтогенеза.
Известно, что после родов организм
животного ослаблен действием многих
факторов, в этот период могут появляться
различные осложнения и доминирующее
место среди них занимает гнойно-катаральный эндометрит (2, 4). Наиболее часто острые гнойные воспаления слизистой
оболочки матки, возникают как по продолжению, при гнойном воспалении влагалища, так и в результате внедрения различных микроорганизмов в полость шейки, тела и рогов матки, например при задержании последа, патологическом щенении, субинволюции матки (3).
В настоящее время для решения подобных проблем требуется новый подход, так
как многие антибактериальные препараты являются сильными иммунодепрессантами, что ухудшает течение заболевания
и удлиняет период выздоровления животного. Трудно назвать патологию, при которой бы не применялись или не испытывались в настоящее время гомеопатические
средства. Причем круг гомеопатических
препаратов постоянно расширяется (6, 7).
Одним из гомеопатических средств,
применяемых при воспалительных акушерско-гинекологических заболеваниях,
является Мастометрин (ООО «Хелвет»).
Мастометрин оказывает противовоспалительное действие на слизистую оболочку
матки, восстанавливает тканевой иммунитет и повышает сократительную способность миометрия, способствуя эвакуации воспалительного экссудата. В состав
препарата входят пять компонентов, которые широко применяются в гомеопатии. Lachesis mutus - используется для ле84
чения септических процессов, особенно со
склонностью к генерализации и хронизации. Pulsatilla- обладает антибактериальной активностью по отношению к кишечной палочке, протею, золотистому стафилококку. Применяется при лечении воспалительных заболеваний органов половой
системы, регулирует различные нарушения полового цикла (6, 8). Sabina - широко
используется в акушерской практике при
маточных кровотечениях, регулирует тонус матки, а также способствует инволюции матки и выделению задержавшихся
частичек плаценты и оболочек (1). Sepia основное средство при лечении хронических воспалительных процессов в матке и
яичниках со слизисто-гнойными зловонными выделениями. АСД-2 (гомеопатизированный) – препарат оказывает противовоспалительное действие, положительно влияет на репаративные процессы, активизирует тканевой иммунитет, повышает резистентность организма (6).
Целью наших исследований явилось
определение терапевтической эффективности гомеопатического препарата «Мастометрин» при остром послеродовом эндометрите у псовых.
Были сформированы группы собак
разных пород массой 37,9-45 кг в возрасте от 5 до 9 лет и взрослых самок песцов с
клиническими признаками острого послеродового эндометрита. Период наблюдения за собаками составлял 15 дней, за песцами 7 дней.
Собаки: опытная группа (n=6) – Мастометрин вводили подкожно в дозе 3 мл на
животное дважды с интервалом 3 дня; контрольная группа (n=7) – традиционная схема лечения (окситоцин, цефазолин, метронидазол, внутривенные инъекции 5% раствора глюкозы и 10% раствора хлорида
кальция в терапевтических дозах).
Песцы: опытная группа (n=6) – Мастометрин вводили дважды внутримышечно по 0,7 мл на голову с интервалом 3 дня;
контрольная группа (n=6) – схема хозяйства (бициллин, синестрол, окситоцин, сыворотка, тривит, витамины B1, B12).
Кровь для исследований у собак брали
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
до лечения и на 5-й, 10-й и 15-й день, а у песцов – до лечения и на 7-й день. Исследования основных гематологических показателей (эритроциты, лейкоциты, гемоглобин,
СОЭ) проводили по общепринятым методикам. У всех подопытных животных были проведены бактериологические исследования мазков выделений, взятых из половых органов самок, на содержание условно патогенной микрофлоры и определение чувствительности к антибиотикам с
применением стандартных дисков. Мазки у
самок брали до лечения и на 7-й день.
У всех исследуемых самок наблюдались
анорексия, полиурия, полидипсия, гипогалактия, отек и гиперемия вульвы. Из половой щели отмечалось выделение серознослизистого, слизисто-гнойного, гнойно-геморрагического экссудата серо-желтого,
зеленоватого, буроватого цвета с резким
неприятным запахом. Экссудат, как правило, мутный водянистой или слизистой консистенции. На шерсти хвоста, около половых губ и на тазовых конечностях виден
засохший экссудат. У самок песцов воспаление матки чаще проходило по типу катарального, гнойно-катарального и фибринозного воспаления. Выделяемый экссудат
слизисто-гнойный, иногда с примесью крови или слегка зеленоватого цвета с хлопьями фибрина.
При пальпации матки через брюшную стенку диагностировалось: болезненность органа, увеличение в размерах,
снижение тонуса.
При лечении собак Мастометрином
на вторые сутки отмечалось усиление истечений из вульвы, на 3-4 сутки снижение
температуры тела до пределов физиологической нормы, появлялся аппетит, животные становились более активными. На 4ый день терапии выделения у собак этой
группы были скудные, без запаха, мутные.
Исчезновение клинических признаков заболевания отмечалось на 5-6 день наблюдения. Курс лечения для животных опытной группы в среднем составлял 7 дней. У
песцов выделения из влагалища прекращались на 2-3 день после первого введения
Мастометрина, самки были активны, отек
и гиперемия вульвы не отмечались. Курс
лечения составлял 5-7 дней
В контрольной группе собак снижение
температуры тела, а так же улучшение общего состояния и нормализация аппетита
отмечались на 4-5 сутки. Клинические признаки заболевания проявлялись в течение
10-13 дней, и в целом курс лечения составлял до 14 дней.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
Дальнейшее наблюдение за собаками показало, что восстановление половых
функций произошло у всех животных подопытных групп. После окончания курса лечения через 4-6 месяцев у сук данных
групп наблюдалась нормальная течка. У
собак контрольной группы, где применялись средства только традиционной терапии при лечении эндометрита, в двух случаях после очередной течки было отмечено повторное возникновение эндометрита.
При лечении песцов по схеме хозяйства
выделения прекращались в более поздние
сроки – на 5-9 день. Курс лечения у самок
этой группы длился до 10-11 дней и в дальнейшем были зарегистрированы повторные клинические признаки заболевания.
При изучении действия Мастометрина
на органы размножения псовых, были отмечены некоторые изменения микробного фона.
До лечения у всех собак в выделениях был отмечен рост условно патогенной
микрофлоры. Так, у 58,3% животных были
выделены монокультуры микроорганизмов и у 41,7% ассоциации (S. aureus - E. coli,
S. aureus - S. faecalis, S. aureus - S. viridaus, S.
aureus - S. epidermidis, E. coli - S. epidermidis,
Acinetobacter - S. faecalis). Более половины
исследуемых животных (58,3%) были поражены стафилококком с различной степенью интенсивности роста. У собак опытной группы был обнаружен значительный
рост Acinetobacter.
На 7-й день при использовании аллопатической схемы лечения в выделениях собак контрольной группы было отмечено небольшое снижение роста S.
epidermidis и S. aureus, незначительный
рост S. viridaus и S. faecalis. В некоторых
случаях зарегистрировано отсутствие
роста S. faecalis и E. coli.
В опытной группе в выделениях микробный фон в 66,7% представлен стафилококками и в 50,0% ассоциациями бактерий. В основном отмечался рост микрофлоры от «значительного» до «обильного». После применения Мастометрина
у животных этой группы снизился рост S.
epidermidis, S. viridaus. У двух животных в
мазках отсутствовал рост S. aureus, не зарегистрировали так же рост Acinetobacter
и E. coli. После лечения Мастометрином
при поражении собак ассоциациями бактерий отмечался незначительный рост
только одного вида, а у 33,3% роста микрофлоры не было обнаружено.
При определении антибиотикоустойчивости низкую бактерицидную эффек85
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Рисунок 1 – Показатели устойчивости к антибиотикам микрофлоры половых органов
самок собак
Рисунок 2 – Показатели устойчивости к антибиотикам микрофлоры половых органов самок песца
тивность показали гентамицин (17,7%), ампициллин (23,5%), пенициллин (23,5%).
Немного лучше показатели имеют цефазолин (47,1%), цефалексин (52,9%), ципрофлоксацин 64,7%, цефатаксим (94,1%). Из
перечисленных препаратов высокий бактериостатический эффект показал только
цефатаксим (94,1%) (рис.1).
Микробный фон половых органов исследованных самок песцов, в отличие от
собак, характеризуется наличием P.vulgaris
86
и отсутствием S.viridaus и Acinetobacter.
При бактериологическом исследовании
выделений у всех песцов отмечался обильный рост S. epidermidis, S.aureus, а также
рост E.coli, P.vulgaris и S.faecalis с различной степенью интенсивности роста. Из исследованных животных 33,3% были поражены ассоциациями микроорганизмов
(S.aureus-E.coli, S. aureus-S.faecalis, S.aureusS.epidermidis).
После лечения у 50% самок опытВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
S.aureus
S.faecalis
S.epidermidis
P.vulgaris
E.coli
–
–
–
–
–
+/–
–
–
–
+
–
+
–
–
+
левомицетин
+
–
–
–
+
+
цефатаксим
–
+/–
+/–
–
+/–
–
ампициллин
цефазолин
–
+/–
+
–
–
–
ципрофлоксацин
гентамицин
S.aureus
S.viridaus
S.faecalis
S.epidermidis
E.coli
Acinetobacter
Микрофлора
цефалексин
пенициллин
Таблица 1
+
–
+/–
–
+/–
–
+
+/–
+
–
+
–
+/–
–
+
–
–
–
+/–
+
+
+
+
+
–
–
–
–
–
+
–
–
–
+/–
–
+/–
–
+
+
+
–
–
–
–
–
+
+/–
+/–
+
+
–
–
–
+/–
–
Собаки
Песцы
Примечание: «–» устойчивы; «+/–» среднечувствительны; «+»высокочувствительны.
ной группы в выделениях микрофлора
не обнаружена. У остальных животных
этой группы полностью исчезли E.coli,
P.vulgaris и отмечался незначительный
рост S.epidermidis, S.aureus и S.faecalis.
У всех самок контрольной группы в
выделениях отмечалось наличие условно
патогенной микрофлоры, но полностью
исчезла E.coli. Исследованиями обнаружен значительный рост S.aureus, обильный рост S.epidermidis, и в меньшей степени P.vulgaris, а также S.faecalis.
При определении бактерицидности
различных антибиотиков к биологическим агентам обнаружена устойчивость выделенной микрофлоры к пенициллину и
ампициллину (100%) (рис. 2).
Низкие показатели бактериостатической эффективности были отмечены у таких широко применяемых препаратов, как
цефалексин (6,3%), гентамицин (12,5%),
цефазолин (31,3%). Лучшие показатели имел ципрофлоксацин (43,8%) и более
полно антибиотические свойства проявил
цефатаксим (87,5%).
Большой интерес представляет разница восприимчивости микрофлоры к антибиотикам у разных видов псовых. Как
видно из таблици почти у всей микрофлоры, найденной в половых путях самок, отсутствует восприимчивость к пенициллину, гентамицину, ампициллину и левомицетину. Например, S.epidermidis, обнаруженный у собак, восприимчив только к цефатаксиму, у песцов к ципрофлоксацину, а к
Ветеринарная патология. № 2. 2008
остальным использованным для исследования препаратам устойчив. Из приведенных в таблице данных следует, что не многие из перечисленных препаратов обладают высокой бактерицидной активностью
и способны воздействовать на микроорганизмы, вызвавшие патологию половых органов у самок.
При гематологическом исследовании в
крови больных собак отмечался высокий
уровень лейкоцитов, превышающий нормативные показатели в опытной группе на
41,1%, в контрольной на 19,0%. К концу лечения уровень клеток белой крови снизился у собак опытной группы в 2,8 раз, в контрольной – 1,4 раза, что составляет 63,9%
и 30,2% от первоначального. У песцов на
протяжении опыта прослеживалась тенденция в сторону увеличения данного показателя в пределах физиологической нормы для этого вида животного.
Количество эритроцитов в начале исследования у всех подопытных собак находилось на уровне нижней границы нормальных показателей, а под действием
препарата к завершению лечения достоверно повысилось в опытной группе на
32,75%, в контрольной группе на 26,2%.
У песцов отмечалась разнонаправленная
динамика – в опытной группе к увеличению на 9,45%, в контрольной группе – к
уменьшению на 15,42%.
У всех подопытных животных в начале эксперимента содержание гемоглобина было низким. Следует отметить, что
87
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
применение гомеопатических препаратов приводило к увеличению данного показателя у собак опытной и контрольной
группы на 20,27% и 10,8%. У самок песцов, которых лечили по схеме хозяйства,
к концу исследования количество гемоглобина снизилось на 16,3% и оказалось
ниже границ физиологической нормы. У
животных, которым вводили Мастометрин, наоборот, данный показатель увеличился на 8,6%.
До лечения уровень СОЭ в крови всех
животных была выше физиологической
нормы в несколько раз. Под действием
Мастометрина СОЭ у собак повысилась в
5,6 раза, у песцов в 4,2 раза. В группах плотоядных, которым применяли аллопатические схемы лечения, данный показатель
снизился в 2,2 (собаки) и в 1,9 (песцы) раза
оставаясь на верхней границе физиологической нормы.
Проведенные исследования показали,
что применение комплексного гомеопатического препарата «Мастометрин» (ООО
«Хелвет») оказывает позитивное стимулирующее влияние на метаболические процессы в организме больных животных,
снижает рост условно патогенной микрофлоры и способствует сокращению сроков лечения.
РЕЗЮМЕ
Изучение влияния гомеопатического препарата Мастометрин (ООО «Хелвет») на течение острого послеродового эндометрита у плотоядных выявило позитивное стимулирующее действие на гомеостаз больных животных, снижение роста условно патогенной микрофлоры и сокращение сроков лечения.
SUMMARY
The Study of the influence of the homeopathic preparation Mastometrin (OOO “Helvet”) on current sharp
postnatal endometrit among predators has revealled positive stimulating action on homeostasis of the sick
animals, reduction of the growing conditionally pathogenic microflora and reduction of the periods of the
treatment.
Литература
1. Вавилова, Н.М. Гомеопатическая фармакодинамика /Н.М. Вавилова// ч. 1. Смоленск.: «Гомеопатический центр», М.: «Эверест», 1994. 507 с.
2. Владимиров, А. В. Профилактика и лечение песцов при послеродовом эндометрите // Ветеринария. 2005. №4. С. 36-37.
3. Любашенко, С.Я. Болезни пушных зверей /С.Я.
Любашенко М.: «Колос», 1973. 358с.
4. Михайлов, Н.Н., Чистяков И.Я. Акушерская помощь животным / Н.Н. Михайлов, И.Я. Чистяков М. Агропромиздат, 1987. 112 с.
5. Михалев В.И. Эффективность применения энрофура для лечения и профилактики острого послеродового эндометрита у коров /В.И. Михалев,
В.Д. Мисайлов, С.М. Сулейманов, И.С. Толкачев//
Ветеринарная патология. 2007. №3. С. 228.
6. Славецкая, М.Б. Ветеринарная гомеопатия. Лечение мелких домашних животных / М.Б. Славецкая, А.Г. Кухарская, О.В. Панферова Москва,
«КоЛЕВ», 2006. С. 58.
7. Соколов, В.Д. Оптимизация условий развития
ветеринарной гомеопатии /В.Д. Соколов// Современные вопросы ветеринарной гомеопатии:
Вторая междунар. конф. (22-23 октября 2003).
СПб., 2004. С. 11.
8. Федюк, В.И. Справочник по болезням собак
и кошек /В.И. Федюк, И.Д. Александров, Т.Н.
Дерезина и др./ Серия «Ветеринарное животноводство». Ростов-на-Дону: «Феникс», 2000. 352 с.
С. 334-336.
УДК: 636.22/.28:619:618.1
М.Н. Лапина, Г.П. Ковалева, В.А. Витол, Т.П. Ковалева
ГНУ СНИИЖК
ГИНЕКОЛОГИЧЕСКИЕ ЗАБОЛЕВАНИЯ
МОЛОЧНОГО СКОТА РАЗЛИЧНЫХ ГЕНОТИПОВ
В Ставропольском крае для улучшения морфо-функциональных свойств вымени, повышения обильно- и жирномолочности коров красной степной породы скрещивают с быками-производителями англерской и голштинской пород.
Данные о воспроизводительной способности и гинекологических заболеваниях
коров в других регионах РФ, разводящих
скот аналогичных генотипов, противоре88
чивы. По заключению одних авторов, при
увеличении крови по улучшающей породе, воспроизводительные качества улучшаются, по данным других авторов у помесного поголовья наблюдается рост гинекологических заболеваний, ухудшается
воспроизводительная способность, снижается продолжительность жизни.
На основании вышеизложенного, возникла необходимость изучить распростраВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица 1
Гинекологические болезни коров-первотелок
Показатели
Всего гинекологически больных
в том числе:
Субинволюция матки
Острый послеродовой эндометрит
Персистентное желтое тело
Гипофункция яичников
Фолликулярная
киста яичников
Атрофия яичников
Прочие
Генотипы
1
2
3
4
5
6
(n =106) (n =162) (n =116) (n =284) (n =248) (n =184)
гол. % гол. % гол. % гол. % гол. % гол. %
40 37,7
98 60,4
86 74,1
136 47,8 148 59,6 103
2
10
10
5
1,8
6,2
8,6
1,7
14
31 10,9 28
5,6 6
7
(n =93)
гол. %
55,9 58 62,3
3,3 4
4,3
11 10,4
18 11,1
16 13,8
11,3 18
9,8 13 13,9
3
9
2,8
8,4
6
3,7
52 32,0
6
5,2 4
36 31,0 64
1,4 12 4,8 7
22,5 58 23,4 43
3,8 1
1,1
23,3 23 24,7
3
2,8
6
3,7
8
6,8 7
2,4 14
5,6 6
3,3 5
5,4
4
8
3,7
7,5
6
3,7
6
4
5,2 16
3,4 9
5,6 18
3,2 4
7,3 16
1,6 7
8,7 7
3,8 5
7,5
5,4
Примечание:
1 – красная степная чистопородная
2 – англерская чистопородная
3 – голштинская красно-пестрая
4 – Ѕ красная степная х Ѕ англерская
5 – Ѕ красная степная х Ѕ голштинская красно-пестрая
6 – ј красная степная х ѕ англерская
7 - ј красная степная х ѕ голштинская красно-пестрая
ненность гинекологических заболеваний у
животных различных генотипов.
Цель исследований – установить взаимосвязь между генотипом животных и
уровнем гинекологической патологии.
Исследования проводили в 1996-2006 г.г.
в ГПЗ «Пролетарская воля» Предгорного
и СПК «Родина» Новоалександровского
районов Ставропольского края на коровах
красной степной, англерской, красно-пестрой голштинской пород и их помесях. Учитывали наиболее распространенные гинекологические заболевания: субинволюция
матки, острый послеродовой эндометрит,
персистентное желтое тело, гипофункция,
фолликулярная киста, атрофия яичников.
Остальные гинекологические заболевания, представленные единичными случаями, объединили в группу «прочие». Диагноз
ставили на основании клинического осмотра, вагинального и ректального исследований. Под наблюдением животные находились в течении первых трех лактаций.
На основании результатов, представленных в таблице 1 можно сделать вывод,
что наиболее часто гинекологические болезни диагностируются у коров-первотелок англерской и голштинской пород –
60,4 и 74,1%, наименьшее распространение
гинекологические болезни имеют у красного степного чистопородного скота. Помесные животные по данному показателю
занимают положение между материнской
и отцовской породами.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
У изучаемых животных патология матки в большинстве случаев протекала в
форме острого послеродового эндометрита, а функциональные нарушения яичников в абсолютном большинстве представлены гипофункцией.
Острый послеродовой эндометрит диагностировали у животных в 9,8-13,9% случаев бесплодия, разница между генотипами недостоверна.
Гипофункция яичников установлена
у 8,4% чистопородного красного степного поголовья, что на 23,6 и 22,6% меньше,
чем у чистопородного англерского и голштинского. Разница с помесями первого и
второго поколений составила 14,1 и 15,0%;
15,3 и 16,3%, соответственно.
Установленная в ходе исследований коров-первотелок взаимосвязь между генотипом и заболеваемостью органов воспроизводства подтверждается и для полновозрастных животных (табл. 2).
Как и у первотелок, среди полновозрастных чистопородных красных степных коров, по сравнению с другими генотипами,
установлен наименьший процент гинекологически больных животных – 41,4.
Кроме того, с увеличением возраста
животных в лактациях увеличивается общая заболеваемость органов воспроизводства по всем изученным генотипам.
Заболеваемость коров острым послеродовым эндометритом была близка к показателям у первотелок.
89
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица 2
Гинекологические болезни полновозрастных коров
1
(n =82)
гол. %
2
(n =130)
гол. %
3
(n =92)
гол. %
Генотипы
4
5
6
(n =166) (n =170) (n =125)
гол. % гол. % гол. %
7
(n =61)
гол. %
34 41,4
82 63,0
72 78,2 101 60,8 110 64,7 73 58,4
41 67,2
Субинволюция матки
3
3,7
3
14 15,2
Острый послеродовой эндометрит
6
7,3
13 10,0
Персистентное желтое тело 3
3,7
7
Показатели
Всего гинекологически больных
в том числе:
2,3
9
12 13,0 18
5,4
-
-
9
5,4 9
5,3
6
4,8
2
3,3
10,8 17
10,0
10
8,0
8
13,1
5,6
1
1,6
5,4 6
Гипофункция яичников
11 13,4
31 23,8
30 32,6 36
21,4 38
Фолликулярная
киста яичников
4
4,9
14 10,8
12 13,0 13
7,8 17
-
11
8,5
2
2,2 7
8,5
3
2,3
2
2,2 9
Атрофия яичников
Прочие
7
Рост числа животных с гипофункцией яичников установлен у чистопородного
красного степного, голштинского и ѕ-кровного по голштинской породе скота.
У этого же поголовья отмечен и рост
заболеваемости фолликулярными кистами яичников.
По другим генотипам на фоне снижения заболеваемости гипофункцией яичников диагностировали увеличение числа
животных с фолликулярными кистами.
Таким образом, на основании вышеизложенного, можно сделать выводы о том,
90
3,5 7
22,4 26 20,8
19 31,1
10,0 10
8,0
6
4,2 9
5,3 7
5,6
2
3,3
5,4 14
8,2 7
5,6
3
4,9
9,8
что общая заболеваемость органов воспроизводства молочного скота, а также
распространенность отдельных гинекологических заболеваний имеют межпородные различия. Причем, наименьшими эти
различия были при патологии матки, а наибольшими при функциональных нарушениях яичников.
С возрастом по всем генотипам установлено увеличение общей заболеваемости и изменение соотношения животных с
гипофункцией и фолликулярными кистами яичников.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
РЕЗЮМЕ
Чистопородный красный степной скот характеризуется меньшим уровнем гинекологических заболеваний по сравнению с чистопородным англерским и голштинским. Помеси I и II поколений по этим показателям занимают промежуточное положение между материнской и отцовскими породами.
SUMMARY
Breeder red range stock is characterized by smaller level of
gynecological diseases compared with purebred Angler or Holstein. F1 - and F2 – hybrids take up an intermediate position between maternal and paternal breeds.
Литература
1. Добровольский Б. Влияние типов подбора на
воспроизводительную способность // Молочное
и мясное скотоводство. 1997 №7 С. 13-16.
2. Дунин И., Прохоренко Д. Проблемные вопросы
сохранения и использования генофонда крупного рогатого скота // Молочное и мясное скотоводство. 1995 №4 С. 9-11.
3. Журавок И.С., Мокеев А.С. Что дает скрещивание англерских быков с животными красной
степной породы // Молочное и мясное скотоводство. 1979 №3 С. 38-39.
4. Завертяев Б.П. Селекция коров на плодовитость / Б.П. Завертяев // Ленинград. «Колос»
1979, С. 135.
УДК 619:616.98:578.831.1-093.2-097.3
И.М. Луппова, В.Н. Грушин
УО «Витебская государственная академия ветеринарной медицины»
ГИСТОХИМИЧЕСКИЕ ПОКАЗАТЕЛИ
ВНУТРЕННИХ ОРГАНОВ ЦЫПЛЯТ,
АЭРОЗОЛЬНО ВАКЦИНИРОВАННЫХ
ПРОТИВ БОЛЕЗНИ НЬЮКАСЛА
Болезнь Ньюкасла – высоко контагиозная вирусная болезнь, поражающая
представителей разных видов сельскохозяйственных птиц всех возрастов.
Ведение птицеводства на промышленной основе и создание крупномасштабных хозяйств сопровождается ослаблением иммунной защиты, а вследствие этого
снижением эффективности всех проводимых ветеринарно-профилактических мероприятий и обострением эпизоотической ситуации по указанной болезни. Поэтому в последние годы все более настоятельной становится проблема создания и
введения в клиническую практику препаратов-иммуностимуляторов.
Настоящие исследования представляют раздел комплексной программы по
изучению иммуноморфогенеза у цыплят,
аэрозольно вакцинированных против болезни Ньюкасла сухой вирус-вакциной
из штамма « Бор-74 ВГНКИ». Существенной частью этой программы стало
испытание нового синтетического иммуностимулятора триметазона с целью повышения поствакцинального иммунитета у цыплят против болезни Ньюкасла.
В опыте использовано 30 цыплят
кросса « Беларусь-9» в возрасте 20 дней,
Ветеринарная патология. № 2. 2008
которые были разделены на две группы
по 15 цыплят в каждой.
Первая группа цыплят являлась контрольной, в ней животных в возрасте 21го дня аэрозольно вакцинировали сухой вирус-вакциной из штамма «Бор-74
ВГНКИ». Цыплята 2-й группы получали
перорально иммуностимулятор триметазон в дозе 10 мг/кг живой массы на 20-21е сутки после вывода, а затем также подвергались аэрозольной вакцинации в 21дневном возрасте.
Перед началом опыта, а также на 3-и,
7-е, 14-е, 21-е и 28-е сутки после иммунизации проводили убой цыплят по 3 птицы в каждый иммунологический срок
для гистохимических исследований. Аскорбиновую кислоту выявляли в сердечной мышце, надпочечниках и почке по
Жиру и Леблону, гликоген - в сердечной
мышце и печени по методу Шабадаша.
В результате наших исследований было обнаружено, что в процессе формирования иммунитета против болезни Ньюкасла в кардиомиоцитах цыплят отмечается значительное увеличение содержания аскорбиновой кислоты в течение
первой недели после вакцинации с последующим снижением этого показателя.
91
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Применение синтетического иммуностимулятора обеспечивало повышенное содержание аскорбиновой кислоты
в кардиомиоцитах подопытных цыплят в
течение всего опыта по сравнению с животными контрольной группы.
В отличие от сердечной мышцы в
клетках надпочечников исследуемых
цыплят отмечается довольно высокое
содержание аскорбиновой кислоты еще
до аэрозольной вакцинации. При этом
эпителиоциты главных тяжей надпочечника содержат крупные гранулы темнокоричневого цвета, а гранулы хромофиноцитов медуллярных тяжей, цитоплазма которых базофильна – очень мелкие,
пылевидные.
Процесс иммуногенеза сопровождается увеличением обсуждаемого показателя уже через трое суток после введения вируса в организм цыплят с последующим незначительным снижением на 7-е
и 14-е сутки. В период наибольшего антителообразования резко падает содержание аскорбиновой кислоты в надпочечниках, причем этот процесс в большей
степени затрагивает железистые клетки
главных тяжей паренхимы органа.
Предварительное введение препарата способствовало увеличению содержания аскорбиновой кислоты в тканях надпочечника.
До вакцинации в эпителиоцитах почечных канальцев наблюдается небольшое количество очень мелких темно-коричневых гранул аскорбиновой кислоты, располагающихся чаще всего вокруг
клеточных ядер.
В течение 3-х недель после аэрозольной вакцинации цыплят повышается содержание аскорбиновой кислоты в тканях почки с последующим резким снижением этого показателя на 28-е сутки после иммунизации.
В процессе формирования иммунитета против болезни Ньюкасла заметно
не только увеличение количества и размеров гранул аскорбиновой кислоты, но
и перераспределение их в тканях почки.
92
Применение иммуностимулятора увеличивало концентрацию гранул аскорбиновой кислоты в тканях почки через две
недели после иммунизации цыплят.
При исследовании гликогена в клетках печени цыплят было установлено, что
до их вакцинации цитоплазма гепатоцитов была равномерно заполнена большим
количеством довольно крупных краснофиолетовых зерен гликогена. Введение
вакцинного вируса в организм сопровождалось резким опустошением клеток печени от включений гликогена на 3-и и 7е сутки опыта, после чего обнаружились
обратные процессы постепенного накопления полисахарида в гепатоцитах.
Использование синтетического иммуностимулятора позволяет поддержать
более высокий уровень содержания гликогена в клетках печени во все сроки
проведения опыта.
Анализируя показатели, характеризующие наличие полисахарида в кардиомиоцитах сердца необходимо отметить,
что после вакцинации цыплят в волокнах сердечной мышцы происходит постепенное увеличение количества мелких, красно-фиолетовых зерен гликогена, равномерно распыленных в саркоплазме составляющих их клеток. Это свидетельствует о том, что гликоген сердечной мышцы не является общим энергетическим резервом организма. Влияние
иммуностимулятора особенно заметно
на 3-и сутки после аэрозольной вакцинации цыплят, по сравнению с животными
контрольной группы.
Таким образом, гликоген и аскорбиновая кислота – весьма лабильные соединения, чутко реагирующие на разнообразные сдвиги обменных процессов в
организме. А поэтому они могут выступать в качестве достаточно объективных и доказательных критериев иммунной реактивности и адаптивной перестройки разных систем организма животного под влиянием таких сильнодействующих факторов, как вакцина и иммуностимуляторы.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
И.Дж. Мурзалиев
Кыргызский Аграрный Университет
ВЫЯВЛЕНИЕ РЕСПИРАТОРНЫХ ВИРУСНЫХ
ИНФЕКЦИЙ В ПЛЕМЕННЫХ ОВЦЕВОДЧЕСКИХ
ЗАВОДАХ КЫРГЫЗСКОЙ РЕСПУБЛИКИ
В настоящее время в республике имеется шесть государственных племенных
заводов по овцеводству, которые находятся в различных зонах и климатических условиях республики.
В западной зоне республики находится ГПЗ им. Лущихина Кара-Буринского
района Талласской области; в южной зоне – ГПЗ «Катта – Талдык» Кара- Суйского района и ГПЗ «Кашка-Суу» Чац- Алайского района Ошской области; в восточной
зоне – ГПЗ «Оргочор» Неты – Огузского
района Иссык – Кульской области и в юго
– восточной зоне – ГПЗ «Сон-Куль» и ГПЗ
«Кочкорка» Кочкорского района Нарынской области.
В этих государственных заводах содержится основной генофонд кыргызской тонкорунной, тянь-шаньской полутонкорунной и алайской полугрубошерстной пород овец заводы являются непосредственными поставщиками племенного
поголовья овцематок, баранов – производителей, племенных ярочек и баранчиков
фермерским, крестьянским, подсобным
хозяйствам и сельхозкооперативам всех
зон республики.
В этих госплемзаводах до настоящего
времени наблюдается высокой процент
отхода и вынужденного убоя молодняка
и овец. При анализе причин гибели скота
установлено, что большой процент отхода ягнят приходится на болезни органов
дыхания и пищеварения. По литературным данным известно, что пневмовирусные инфекции являются одной из основных причин заболеваемости и падежа до
9 месячного возраста (М.Н. Соколов, Н.И.
Писаренко, Б.У. Рахмедов, И.Дж. Мурзалиев, 1987,1988гг.). Далее, после открытия
ворот инфекции к вирусным, наслаиваются инфекции бактериального характера,
гельминтозы (М.Н. Соколов, Н.И. Писаренко, Г. А. Башкатов и др., 1990,1993гг.) и
вызывают острую бронхопневмонию животных.
Цель и задачи нашей работы – изучить
этиологическую роль заболеваний органов дыхания и пищеварения овец вирусной
природы. Выявить пневмовирусные инфекции: парагрипп – 3 (ПГ-3), аденовирусВетеринарная патология. № 2. 2008
ную (АДВ) и респираторно – синцитиальную (РСВ) инфекции путем серологического исследования сывороток крови овцепоголовья в госплемзаводах республики
по овцеводству.
При исследовании нами использованы
данные статистического комитета, дирекции по метеорологии, ветеринарной отчетности департамента ветеринарии МСВХ
и ПП КР, а также изучены эпизоотические данные госплемзаводов, районных, областных ветеринарных управлений за последние пять лет и лабораторные данные
районных, межрайонных ветеринарных
диагностических лабораторий. Исследования проводили в пяти госплемзаводах, на
60 отарах овец или на 23200 головах овцепоголовья, в возрасте от 1,5 месяцев до 6
лет. Для серологического исследования овцепоголовья на пневмовирусные инфекции, ПГ-3, АДВ, РСВ были взяты 2300 проб
сывороток крови от овец и ягнят. Кроме
того, непосредственному клиническому
исследованию подвергались 28 овец и ягнят разных возрастов и патологоанатомическому вскрытию 5 трупов овцематок и 5
ягнят текущего года рождения. Патоморфологические исследования проводились
на кафедре патанатомии, гистологии и ветеринарно-санитарной экспертизы института ветеринарной медицины и биотехнологии Кыргызского Аграрного Университета под руководством профессора, д.в.н.
К.С. Арбаева.
Серологические исследования сывороток крови овец и ягнят проводили к вирусу ПГ-3 в реакции торможения гемаглютинации (РТГА), к АДВ и РСВ инфекциям в
реакции непрямой гемагглютинации (РНГА). Все реакции ставили по общепринятой методике микрометодом с использованием прибора «Титртек». В работе использовали диагностикумы ПГ-3 Приволжской
биофабрики и диагностикум аденовирусной инфекции КРС, а также эритроцитарный диагностикум для диагностики РСВ
– инфекции, изготовленный совместно с
сотрудниками лаборатории вирусологии
Московской государственной академии
ветеринарной медицины и биотехнологии
им. К.И. Скрябина.
93
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица№1
№
п/п
Наименование ГПЗ
по овцеводству
Кол-во
проб 1:16
1
ГПЗ им. Лущихина Кара-Буринского района Талласской области
320
2
ГПЗ «Оргочор» Неты
– Огузского района Иссык – Кульской области
3
ПГ-3
АДВ
1:32
1:64 1:128 1:16
170
170
170
620
305
305
ГПЗ «Сон-Куль» и
ГПЗ «Кочкорка» Кочкорского района Нарынской области
550
286
4
ГПЗ «Катта – Талдык»
Кара- Суйского района
600
5
ГПЗ «Кашка-Суу»
Чац- Алайского района Ошской области
всего
1:32
1:64
1:8
1:16
1:32
66
66
46
84
84
50
190
167
167
20
148
56
286
30
149
118
115
5
343
343
343
165
165
42
62
62
10
210
210
158
158
28
18
8
24
24
14
2300
1262 1154
891
605
564
116
433
231
74
Результаты исследований. По нашим
эпизоологическим исследованиям госплемзаводы по овцеводству находятся на
различных зоонах и на разных высотах от
500 м до 4000 м над уровнем моря и отличаются местностях друг от друга по состоянию пастбищ. В этих хозяйствах важную
роль в возникновении и течении заболеваний органов дыхания сыграло свободное
перемещение крупного, мелкого рогатого
скота, смешивание и перезаражение здорового поголовья овец и коз от больного,
снижение общей резистентности организма, нарушение зоогигиенических и ветеринарно-санитарных правил и влияние на организм животного стрессовых факторов.
В госплемзаводах по овцеводству респираторные заболевания ягнят проявлялись в 2-3х месячном возрасте и характеризовались угнетением, незначительным
подъемом температуры тела, серозным
истечением из носовой полости, слезотечением. Далее, в 4–6-месячном возрасте,
болезнь осложнялось бронхопневмонией
различной степени тяжести. Кроме того,
с мая по июль проявлялись в ассоциации
диктикаулез и другие гельминтозы.
По данным серологических исследований выявлено, что высокий процент
заболеваемости, падежа и вынужденного убоя овец и коз наблюдается в ГПЗ
«Катта – Талдык» Кара–Суйского района
Ошской области, где количество серопозитивных овец и ягнят на ПГ-3 составило 343 голов или же 57,2% от исследованных проб с титрами антител 1:16 – 1:1:128,
на АДВ инфекцию соотвественно соста94
РСВ
88
205
293
вило 195 голов или 32,5% с титрами антител 1:16 – 1:32 и на РСВ инфекцию реагировали 62 головы или 10,3% с титрами
антител 1:16 – 1 :64.
Аналогичное положение сложилось в
ГПЗ им Лущихина Кара-Буринского района Талласской области, где количество серопозитивных животных на ПГ-3 составило 170 голов или 53,1% от исследованных
проб сывороток крови с титрами антител
1:16 – 1:128 соответственно на АДВ – 66 голов, 20,6%, с титрами антител 1:16 – 1:64
и на РСВ инфекцию – 84 головы, 26,3% с
титрами антител 1:16 – 1:64.
Всего по госплемзаводам по овцеводству республики количество серопозитивных животных на ПГ-3 составило 1262 головы или 54,8% с титрами антител 1:16 –
1:128 соответственно, на АДВ – 605 голов, 26,3%, 1:16 – 1:64, на РСВ – 433 голов,
18,9%, 1:16 - 1:64.
Как видно по таблице №2 основным источником и переносчиком пневмовирусных инфекций является взрослое поголовье животных. В ГПЗ «Катта – Талдык»
Кара-Суйского района в основном болеют овцематки: 360 голов серопозитивных
овец и ягнят на ПГ-3 реагировали 160 голов с титром антител 1:18 и сотавило 47,0%,
на АДВ – 106 голов с титром антител 1:64, и
на РСВ – 34 головы с титром антител 1:16.
В целом в госплемзаводах по овцеводству количество серопозитивных овец и ягнят составило: на ПГ-3 54,8% или 11262
головы, из них положительно реагировали 585 голов овцематок или 46,4% 217 голов, баранов–производителей 17,2%, 203
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица №2
Процент заболеваемости по полувозрастным группам
ПГ-3
Наименовние ГПЗ по овцеводству
Кол-во
реаг. ж/х
гол
ГПЗ им.
Лущихина
ГПЗ
«Оргочор»
ГПЗ
«Сон-Куль»
ГПЗ «Катта-Талдык»
ГПЗ
«Кашка-Суу»
Всего
%
АДВ
Кол-во
реаг. ж/х
Половоз. гр
РСВ
Половоз. гр
Кол-во
реаг. ж/х
Половоз. гр
о
б
в
я
гол %
о
б
в
я
гол %
о
б
в
170 53,1 86
7
35
40
66 20,6 28
8
20
10
84 26,3 34
5
15 30
305 49,2 115 115
0
0
167 26, 80
33
34
20 148 23,9 85
0
0
0
286 52,0 120 30
64
72 149 27,1 95
0
31
33 115 20,9 105 0
5
5
343 57,2 160 45
63
75 195 32,5 106 10
47
32
62 10,3 34
5
10 13
158 75,2 102 20
20
16
10
10
24 21,5 10
0
10
28
3,3
8
0
я
4
1262 54,8 585 217 182 203 605 26,3 317 51 142 95 433 18,9 268 10 40 52
головы ярочек или 16,0%, 182 головы ваменных заводах по овцеводству мы прилушков или 15,0%, на АДВ инфекцию сошли к выводу, что заболевания органов
ответственно: 605 голов – 26,3%, 317 голов
дыхания и пищеварения вирусной этио– 53,0%, 51 голов – 8,4%, 95 голов – 15,7%,
логии имеет повсеместное распростра142 голов – 23,5%, и на РСВ инфекцию сонение, болеют и гибнут ягнята независиответственно: 433 голов – 18,9%, 268 голов
мо от породы овец и носит сезонный ха– 61,9%, 10 голов – 2,3%, 52 голов – 12,0%,
рактер. Племенные овцематки и бараны
40 голов – 9,2%.
– производители, баранчики и ярочки явЗаключение. По результатам исслеляются носителями пневмовирусных индования пневмовирусных инфекций овец
фекций независимо от зоны и климати(ПГ-3, АДВ, РСВ) в государственных плеческих условий.
Литература
1. Соколов М.Н., Рахмелов Б.У., Мурзалиев И.Дж.
«Испытание средств специфической профилактики парагриппозной и аденовирусной инфекции овец, / Гр. ВНИИЭВ/ Москва, 1987 г.
2. Писаренко Н.И., Базаней Ф.К., Соколов М.Н.
«Профилактика заболеваний органов дыхания
ягнят», /Бюлл. ВНИИЭВ им. Я.Р. Коваленко/
Вып./, Москва, 1988г.
3. Карпуть И.М. «Ветеринарная наука производству. Межведомственный сборник. Минск, «Урожай», 1988 г.
УДК: 619.616.24-002.153-053.2:636.22/.28
П.А. Паршин, С.В. Шабунин, М.З. Магомедов, С.М. Сулейманов
Российский университет дружбы народов, Всероссийский НИВИ патологии,
фармакологии и терапии, Дагестанская ветеринарная лаборатория
ОПРЕДЕЛЕНИЕ ФАРМАКОДИНАМИКИ И
ЛЕЧЕБНОЙ ЭФФЕКТИВНОСТИ ЛЕВОКСИДА
ПРИ ПАТОЛОГИИ ЛЕГКИХ У ТЕЛЯТ
Патология легких у телят в виде неспецифической бронхопневмонии нередко
причиняет значительный экономический
ущерб животноводческим хозяйствам, что
вызывает необходимость поиска путей и
методов совершенствования и изыскания
новых эффективных средств в её профилактике и лечении.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
В борьбе с патологией легких широкое
применение нашли такие лечебные препараты, как сульфаниламиды, антибиотики
и др. Одним из таких препаратов является левоксид, содержащий левомицетин, диоксидин, 1,2 пропиленгликоль, ПЭГ – 400 и
воду, который недостаточно изучен при патологии легких у телят.
95
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица 1
Содержание левомицетина в органах у телят при введении левоксида в дозе 0,3 мл/кг
Биосубстрат
Содержание окситетрациклина гидрохлорида (мкг/мл) через, часов
3
3,63
2,58
2,73
1.33
1,65
1,50
2,49
2,37
1,95
0,09
0,09
0,21
0,90
1,35
1,80
0,54
0,33
0,99
Кровь
Печень
Почки
Мышцы
Моча
Содержимое
толстого
кишечника
6
2,94
2,60
3,45
2,70
2,10
2,61
4,65
4.83
4,11
0,33
0.24
0,12
4,89
5,13
4.74
1.65
1,08
1.20
12
2,97
3,63
3,45
3,24
3,00
3,45
4,80
4,56
5,37
0,63
0,57
0,93
4,50
5,04
5.19
2,37
2,49
1,95
24
3,0
2,20
4,02
2,97
2,85
3,21
5,10
5,25
5,82
1,05
1,35
0,78
4,47
5,07
5,22
2,25
1,95
2,88
48
1,47
1,89
1,62
2,25
1,92
1,83
2,01
2,94
2,55
0,00
0,00
0,00
2,91
2,58
2,70
1,89
2,61
2,10
Таблица 2
Содержание окситетрациклина гидрохлорида в органах у телят
при введении левоксида в дозе 0,3 мл/кг
Биосубстрат
Кровь
Печень
Почки
Мышцы
Моча
Содержимое
толстого
кишечника
Содержание окситетрациклина гидрохлорида (мкг/мл) через, часов
3
4,48
4,32
4,36
3,44
2,88
3,76
3,16
2,48
2,92
0,36
0,68
0,52
2,40
2,24
1,64
2,72
2,08
1,98
6
4,04
4,28
3,64
4,44
4,28
3,84
3,92
3,48
3,56
0,52
0,68
0,36
5,12
4,52
4,00
3,50
3,64
3,16
В связи с этим для определения фармакодинамики левоксида были подобраны 17
телят с массой тела 60-80 кг, которым препарат вводили внутримышечно однократно в дозе 0,3 мл/кг. Через 3, 6,12, 24, 48 часов после введения препарата убивали по 3
подопытных и по 1 контрольному теленку
через 3 и 48 часов. Содержание левомицетина и диоксидина определялось в крови,
моче, печени, почках, бедренной мышце и
содержимом кишечника.
В результате установлено, что через 3
часа содержание левомицетина обнаруживается в органах и тканях в разной степе96
12
3,44
4,32
5,56
5,00
4,68
4,12
3,92
4,04
3.90
1,12
0,80
0,76
4,52
5,04
4,80
4,04
4,60
4,28
24
5,04
4,72
4,08
3,68
4,16
4,68
4,08
4,00
3,56
0,64
0,40
0,92
4,48
4,72
4,00
3,50
4,06
4,28
48
1,96
2,12
1,68
2,76
2,52
2,36
2,88
3,24
3,12
0,32
0,16
0,48
3,36
3,60
3,16
2,68
3,20
3,00
ни (табл.1). Бактериостатическая концентрация антибиотика в крови сохранялась в
течение 48 часов, достигая максимума через 3 часа после инъекции. Максимальная
концентрация левомицетина наблюдалась
в почках и печени через 6 часов.
В целом, лечебная концентрация левомицетина сохранялась на протяжении 48
часов после однократного введения.
Определение содержания диоксидина в
органах и тканях телят после введения левоксида в дозе 0,3 мл/кг массы тела показало, что бактериостатическая концентрация его так же сохранялась на протяжении
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица 3
Эффективность применения левоксида для лечения патологии легких у телят
Показатели
Количество животных, голов
Сроки выздоровления, дней
Выздоровело, голов
%
Осталось больными, голов
%
Пало, голов
%
Группа животных
Левоксид
119
4,5±0,7
112
94,1
5
4,2
2
1,7
48 часов, достигая максимума через 3 часа
после инъекции.
Наивысшая концентрация диоксидина
в почках и печени была выявлена через 12
часов после инъекции. Следовательно, основной путь выведения его из организма
происходит с желчью и мочой.
Лечебная концентрация левоксида при
применении его в дозе 0,3 мл/кг массы тела
однократно сохранялась до 48 часов.
Изучение эффективности применения
левоксида для лечения патологии легких
было проведено на телятах 2,0-2,5 месячного возраста. Патологию легких устанавливали комплексно на основании данных
клинического обследования телят, лабораторных исследований и вскрытия павших.
Телята по принципу парных аналогов
были разделены с учетом общего состояния и тяжести патологии в легких на две
группы.
Для лечения телят первой группы (99
голов) использовали тетрахлорид внутримышечно в дозе 10 мг/кг массы тела
один раз в день до и в течение 2-3 дней
после исчезновения клинических признаков патологии.
Тетрахлорид
99
7,5±0,5
89
89,9
6
6,1
4
4,0
Для лечения телят второй группы (119
голов) применяли левоксид внутримышечно в дозе 0,3-0,4 мг/кг живой массы один
раз в сутки с интервалом 48 часов.
При тяжелом течении патологии в легких препарат вводили трехкратно с интервалом между введениями 48 часов.
За телятами контрольной и опытной
групп вели ежедневное клиническое наблюдение, при этом учитывали общее состояние, поведение, аппетит, течение болезни, сроки выздоровления.
Результаты исследований показали,
что применение левоксида для лечения патологии легких у телят является эффективным. Количество выздоровевших животных в опытной группе повышается на
4,2% по сравнению с контролем, снижался
падеж животных на 2,3% (табл.3).
Результаты проведенных исследований свидетельствуют, что левоксид обладает широким спектром антимикробного действия, выраженным лечебным
действием при патологии легких у телят
бактериальной этиологии. Применение
препарата технологично и экономически выгодно.
УДК 616. 71-001.5-089. 84 :636.7/.8
Н.В. Сахно
ФГОУ ВПО «Орловский государственный аграрный университет» (Орел)
РЕАКТИВНОСТЬ ОРГАНИЗМА В ЗАВИСИМОСТИ
ОТ ПЛОЩАДИ ПЕРЕЛОМА ТРУБЧАТЫХ КОСТЕЙ
Введение
Репаративная регенерация, как следствие нарушения целостности костей, направлена на образование костного регенерата со всеми специфическими составляющими гистологического строения костной
ткани, в восстановление которой вовлечеВетеринарная патология. № 2. 2008
ны практически все структурные элементы зоны повреждения. Известно, что восстановление кости происходит за счет формообразовательной активности, пролиферации клеток камбиального слоя надкостницы, эндоста, клеточных элементов костных и прободающих каналов, малодиф97
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Рис. 1. Определение площади повреждения
большеберцовой кости собаки при косом переломе (угол перелома 12°)
ференцированных клеток стромы костного мозга и мезенхимальных клеток врастающих кровеносных сосудов [9]. Исходя из
этого характер перелома, сопряженный
с различной степенью повреждения костной ткани, обусловливает не только выбор
способа фиксации отломков, но и оказывает влияние на течение послеоперационного периода, интенсивность восстановительных процессов и, в конечном итоге, на
сроки консолидации фрагментов кости.
Цель исследования
Определить площадь перелома при
различных повреждениях трубчатых костей и выяснить оптимальную технику иммобилизации отломков.
Материалы и методы
Степень повреждения трубчатой кости
определяли площадью поверхности ее перелома, которую в свою очередь устанавливали путем расчета площади оттиска на
миллиметровой бумаге распила трупной
кости (рис. 1). Материал для этой части исследования был взят от 5 собак как беспородных так и разных пород обоего пола
массой 14-28 кг, погибших по разным причинам или в результате старости. Остеотомию проводили в средней трети диафиза костей под разным углом к их длинной
оси, учитывая частоту переломов костей
у мелких домашних животных и характер
их повреждения. В частности целостность
большеберцовых и бедренных костей, по 5
образцов в каждой группе, была нарушена
под прямым углом к их длинной оси (90° поперечный перелом). Косой перелом парных большеберцовых костей (n=5) воспроизвели под углом 12° к их длинной оси.
Для выяснения реактивности организма на переломы трубчатых костей с различной площадью повреждения были
сформированы три группы собак (n=5 в
каждой), подобранных методом случайной
выборки и по принципу парных аналогов.
Под общей анестезией у животных первых
двух групп провели остеотомию диафиза в
средней трети большеберцовой кости под
98
углом 12° к ее длинной оси, то есть угол линии перелома и перпендикуляра к длинной
оси кости был равен 78° (косой перелом);
у собак третьей группы - остеотомию диафиза в средней трети бедренной кости под
прямым углом (поперечный перелом).
Иммобилизацию отломков большеберцовых костей у собак первой группы
выполнили при помощи интрамедуллярного стержня типа Богданова в сочетании
с проволокой с ограниченным контактом,
циркулярно наложенной на диафиз кости в
двух местах, а второй группы – только проволокой с ограниченным контактом (патент на изобретение № 2252722 от 02.12.03).
Для иммобилизации отломков бедренной
кости у животных третьей группы применили интрамедуллярный фиксатор с антимиграционными свойствами (патент на
изобретение № 2252731 от 05.02.04). После операции всем собакам была назначена одинаковая терапия, включающая официнальные растворы димедрола, анальгина, линкомицина, аскорбиновой кислоты,
кальция глюканата и тетравита.
В послеоперационный период исследовали активность ряда ферментов и в частности щелочной фосфатазы (по научной
номенклатуре К.Ф.3.1.3.1), содержание которой в сыворотке крови собак определяли по гидролизу Я–глицерофосфата (где
из оборудования использовали аналитические весы Sartorius, фотоэлектроколориметр КФК-3) [8].
Для выяснения степени травматического воздействия интрамедуллярных фиксаторов определили их контактную способность с тканями. Исследование проводили
после удаления фиксаторов из кости по завершении консолидации отломков. В связи с особенностью конструкции антимиграционных стержней определение площади их поверхности было затруднительным.
Поэтому контактную способность интрамедуллярных фиксаторов у собак разных групп установили путем определения
их объема. Для этого фиксаторы помещали в бюретку на 25 мл ГОСТ 1770-64 2 кл с
ценой деления шкалы 0,1 мл, заполненную
дистиллированной водой при одинаковой
температуре в помещении (19 °С).
Результаты
Площадь повреждения в средней трети
большеберцовой кости, целостность которой была нарушена под углом 12° к длинной ее оси, составила у собак в среднем по
группе 2,63 ± 0,07 см2. Это было в 6,92 раза больше площади поперечного перелома в средней трети диафиза этой же кости
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Рис. 2. Активность щелочной фосфатазы после остеосинтеза в зависимости от площади повреждения трубчатых костей
(всего 0,38 ± 0,04 см2) и в 4,54 раза площади поперечного перелома бедренной кости, которая составила в среднем по группе
0,58 ± 0,03 см2.
Проанализируем интенсивность восстановительных процессов в организме, построив кривую активности щелочной фосфатазы в послеоперационный период, и
выявим зависимость (если таковая имеется) ее содержания в периферической крови от площади повреждения костной ткани (рис. 2).
В целом активность щелочной фосфатазы у собак всех групп постепенно нарастала в течение первой недели после операции и к 14 суткам достигла за все время наблюдения максимальной величины. При
этом у собак первой группы ее содержание
было достоверно выше относительно данных второй группы (на 81 нмоль/с·л). Так, у
собак первой группы ее активность составила 733,10 ± 27,22 нмоль/с·л, а у животных
лишь с накостной фиксацией отломков –
652,10 ± 20,26 нмоль/с·л.
В дальнейшем у собак этих групп высокая активность щелочной фосфатазы
наблюдалась до 35 суток после остеосинтеза, при этом исследуемый показатель у
животных первой группы был достоверно выше относительно результатов второй группы. Значительное межгрупповое
отличие в этот период обусловлено способом фиксации отломков, а именно у собак первой группы травма кости возросла
за счет зоны перфорации проксимального
эпифиза большеберцовой кости для введения интрамедуллярного фиксатора, а также площади контакта последнего с эндостом и тканями медуллярной полости.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
Какова же активность щелочной фосфатазы у собак третьей группы при поперечном переломе бедренной кости, относительно небольшая площадь повреждения которой была дополнена интрамедуллярной иммобилизацией отломков массивным фиксатором с антимиграционными
свойствами? При этом его объем составил
3,22±0,12 см3, а стержня типа Богданова,
фиксировавшего отломки большеберцовой кости, – 1,56±0,16 см3. Однако выявленное преимущество контактной способности с тканями интрамедуллярного фиксатора бедренной кости (2,06 раза) не увеличило степень ее травмы до уровня повреждения большеберцовой кости при косом переломе. Максимальная активность щелочной фосфатазы у животных третьей группы наблюдалась также на 14 сутки после
оперативного вмешательства и составила
всего 584,11±19,91 нмоль/с·л, что было достоверно ниже относительно анализируемого показателя собак первых двух групп.
Исследования показали, что активность
щелочной фосфатазы может служить маркером обширности повреждения костной
ткани, однако до определенной степени
травматизации. Так, при анализе имеющихся литературных данных, где описан послеоперационный период больных с политравмой, при которой площадь перелома
однозначно значительно превышает анализируемую нами, заметного увеличения
активности щелочной фосфатазы не выявлено. По нашему мнению при увеличении травмы костной ткани, а также при осложненных переломах, удлиняется период
повышения активности данного фермента, и сроки консолидации отломков увели99
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
чиваются. В течение этого времени активность щелочной фосфатазы может иметь
несколько пиков подъема и периодов спада, и не исключено, что не без весомой роли воздействия внешних факторов.
В настоящее время для повышения активности репаративных процессов применяется стимулирующая терапия, основанная на применении средств, активизирующих развитие остеоидной ткани и ее
обызвествление (введение в зону перелома крови, костных опилок, измельченной
надкостницы, лизатов, и экстрактов из эмбриональных тканей) [1, 3, 5]. Значительные успехи достигнуты в функциональной,
тканевой и физиотерапии, рефлексотерапии, а также диатермии, электрофорезе
кальция, применении ультразвука, грязелечении, торфолечении и парафинолечении [2, 4, 7].
На фоне этих исследований, в большинстве ставших основой традиционной
терапии, существует нестандартный подход к стимуляции остеорегенерации, а
именно в ракурсе анализируемой нами ситуации - площадь травмы и реактивность
организма. Так, по данным ряда авторов
двукратное выполнение остеоперфораций
с интервалом 10 суток в костях оперированной тазовой конечности собак посредством электродрели со спицей для чрескостного остеосинтеза приводило к более выраженному и продолжительному увеличению кровоснабжения этой конечности
[6]. Однако общим недостатком этих вмешательств является кратковременный эффект (продолжительность их стимулирующего воздействия ограничена длительностью биологического цикла репаративной
регенерации тканей) и возобновление эндостального болевого синдрома.
По нашему мнению к искусственному
увеличению площади повреждения костной ткани следует прибегать при замедленной консолидации отломков. Среди существующих способов оперативного лечения такого осложнения после остеосинтеза ярким примером увеличения площади
повреждения является операция туннелизации по Беку (ее можно рассматривать и
как возобновление повреждения), при которой после оперативного доступа произ-
водят сверление кости в разных направлениях. При этом образуются каналы, проходящие через линию перелома от одного
отломка в другой, по которым прорастают
сосуды, что способствует сращению перелома [9]. Однако операция применима при
правильном положении и хорошем состоянии отломков.
В нашем случае несращения отломков
или замедленной их консолидации не выявлено. При клиническом наблюдении за
животными установлено, что равноценная нагрузка у животных из первой группы как интактной так и травмированной
конечностей отмечена в среднем лишь на
26-27 сутки после операции, хотя у некоторых животных этой группы достигнут такой результат на 24-25 сутки. Восстановление функции опоры и движения травмированной конечности с поперечным переломом бедренной кости наступило в среднем
на 29-30, а у отдельных животных на 31-33
сутки после остеосинтеза.
Заключение
Суммируя изложенное, можно сделать
вывод, что усугубление степени травмы
большеберцовой кости (косой перелом)
введением интрамедуллярного фиксатора
в костномозговой канал не удалило реабилитацию травмированной конечности на
более поздние сроки относительно бедренной кости с поперечным переломом. Очевидно, что на сроки восстановления функции опоры и движения травмированной
конечности влияет не только степень травмы, способ иммобилизации отломков, но и
место локализации перелома в периферическом скелете и самой кости.
Следует отдельно отметить то, что, несмотря на значительную степень повреждения большеберцовой кости при косом
переломе, фиксация ее отломков лишь
проволокой с ограниченным контактом
способствовала восстановлению функции
опоры и движения травмированной конечности с отсутствием хромоты на 21-22 сутки после остеосинтеза, у отдельных особей
- на 18-19 сутки. Это подчеркивает малоинвазивность техники накостной фиксации
отломков трубчатых костей при косых переломах, а также адекватность послеоперационной терапии.
РЕЗЮМЕ
Установлена кратность вариабельности площади переломов трубчатых костей, целостность которых нарушена под разным углом к их длинной оси. С увеличением площади повреждения костей
увеличивалась активность щелочной фосфатазы, значительного повышения которой при анализе
существующих данных о послеоперационном периоде больных с политравмой не выявлено. Повышению активности щелочной фосфатазы также способствовала иммобилизация отломков интрамедуллярными фиксаторами, травмирующая способность которых возрастала с увеличением их пара-
100
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
метров. Апробирован один из оптимальных способов фиксации отломков при косых переломах, заключающийся в накостном применении проволочного серкляжа, обладающего ограниченным контактом с надкостницей.
SUMMARY
The multipteness of the area variety of the fracture of tubular bones is discovered, and the integrity of which
is broken above the different angle towards its long pin. The increasing of the area of the hurt bones increases the activity of the alkaling phosphotasa, and its considerable increasing when analyzing the existing datas about postoperation period of the patients with multiple hurt was not discovered. The immobilization
of the fragments by the intermodulated fixator, which hurting ability is increasing together with its parameters causes the increasing of the activity of the alkaling phosphotasa. One of the best ways of the fragments
fixing in the case of stanting fracture was tried, that means the use of the overbone wire device, which can
have limited contact with overbone.
Литература
1. Аргунов М.Н., Черванев В.А., Грищенко М.А.
Влияние препарата комбидаф на скорость заживления переломов костей у собак // Актуал.
пробл. вет. хирургии. – Воронеж: 1997. С. 122.
2. Боголюбов В.М., Пономаренко Г.Н. Общая физиотерапия. Изд. 3-е, перераб. и доп. М.: Медицина, 1999. С. 20-28.
3. Болезни собак: Справочник /Сост. проф. А.И.
Майоров. 3-е изд., перераб. и доп. М.: Колос,
2001. С. 237.
4. Дуринян Р.А. Итоги науки и техники, том 29 /
Нейрофизиологические основы рефлексотерапии. М.: ВИНИТИ, 1985. С. 21.
6. Краснов А.Ф., Аршин В.М., Цейтлин М.Д. Справочник по травматологии. М.: «Медицина», 1984.
С. 62-71.
7. Ларионов А.А., Ренкин М.Ю., Щурова Е.Н. и
др. Стимуляция кровообращения в тканях конечностей методом повторных остеоперфораций / Вестник травматологии и ортопедии им.
Н.Н. Приорова. № 1, М.: «МЕДИЦИНА», 2004.
С. 53-56.
8. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики: Справочник /Под ред. проф.
И.П. Кондрахина. М.: КолосС, 2004. С. 226-228.
9. Ткаченко С.С. Остеосинтез. Ленинград «МЕДИЦИНА» /Ленинградское отделение, 1987.
С. 159, 179.
10. Травматология и ортопедия /Г.С. Юмашев, С.3.
Горшков, Л.Л. Силин и др.; Под ред. Г.С. Юмашева. 3-е изд., перераб. и доп. М.: Медицина, 1990. С.
90, 94-95.
УДК 619:616-099-085.553.6.
М.П. Семененко
ГНУ Краснодарский научно-исследовательский ветеринарный институт
ТОКСИКОЛОГИЧЕСКАЯ ОЦЕНКА
ПРЕПАРАТА МОРЕНИТ
В генетически разнообразных геологических породах и осадках сегодня установлена обширная группа минералов, обладающая биостимулирующими свойствами – сорбционными, ионообменными, связующими, тиксотропными. К таким минералам относятся и бентонитовые (монтмориллонитовые) глины (И.И. Гинзбург, И.А.
Рукавишникова,1951; Р.Е. Грим, 1959) .
С середины 60-х годов XX века накоплен большой опыт применения бентонитов
в сельском хозяйстве. Бентониты и препараты из них используют в земледелии, в
ирригационном строительстве, в производстве комбикормов, а также для повышения продуктивности животных и птиц
(В. Великанов, Ю. Пчелкин, С. Смагулов,
1983; Т.Н. Коков 1998; В.Г. Мамателашвили,
П.Д. Болквадзе, М.С. Мерабишвили, 1971;
Л. Оустеркоут, 1970). Кроме того, уникальные свойства бентонитовых глин можно с
успехом использовать и в ветеринарии для
Ветеринарная патология. № 2. 2008
профилактики и лечения различных заболеваний, связанных с нарушениями обменных процессов, при желудочно-кишечных
заболеваниях, отравлениях (В.П. Иноземцев, 1993; R.A. Britton, D.P. Colling, T.I. Klopfenstein,1977).
Однако природные бентониты разных
месторождений различаются по химическому составу и биологическому действию.
Многое зависит от типа, минерала, содержания монтмориллонита в породе, глубины залегания и наличия в нем неглинистых примесей (S. Feldhofer, E. Tkalcec, V.
Mitin,1988). Поэтому возникает необходимость в изучении сырья известных месторождений для определения возможности
их использования в животноводстве и ветеринарии.
На основе проведенных исследований
физико-химических свойств бентонитовых глин различных месторождений, поступающих на ОАО «Ильский завод Утя101
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица
Определение острой токсичности моренита для крыс
№ Масса тела, г
Доза, г/кг массы тела
Доза, г/животное
1
205
1,4
0,29
2
208
2,1
0,44
3
203
3,2
0,65
4
207
4,7
0,97
5
205
7,1
1,46
6
210
10,7
2,25
7
204
16,0
3,26
8
208
24,0
4,99
желитель» Краснодарского края, а также
учитывая, что завод, в основном, использует сырье Тарасовского месторождения, исходя из экономических соображений, мы,
при проведении экспериментов, пользовались бентонитом именно этого месторождения, получившим в наших исследованиях
название моренит.
Минеральный и физико-химический
состав изученного нами препарата свидетельствует о перспективности его применения для различных видов сельскохозяйственных животных и птиц.
Однако все новые лекарственные средства, кормовые добавки должны быть не
только эффективны, но и безвредны для
животных и человека. Поэтому целью нашей работы было изучение токсикологических свойств препарата моренит.
Материалы и методы.
Токсикометрическую оценку препарата проводили в остром опыте на лабораторных животных (белые крысы) по методике Deishmann и Le Blanc (1943). Моренит
вводился внутрижелудочно в виде вводной
взвеси с помощью полиэтиленового зонда
и шприца типа «Рекорд» в дозах от 1,4 г/
кг до 24 г/кг, пользуясь шкалой интервалов,
составленной авторами метода. Контрольным животным в тех же объемах вводили
дистиллированную воду.
О токсическом действии препарата судили по количеству погибших животных
после его применения, картине интоксикации и результатам патологоанатомического вскрытия павших животных. Кроме
этого, регистрировали характер токсического действия, обращая внимание на поведение, двигательную и тактильную активность крыс, отправление физиологических
функций.
Эксперименты по определению хронической токсичности проводили на белых
крысах в течении 3-х месяцев по непре102
Эффект
Все животные
выжили
рывной схеме, задавая моренит однократно ежедневно с кормом в дозе 1 г/кг массы
тела (терапевтическая), а также в дозах,
превышающих терапевтическую в три и
пять раз. Взвешивание и исследование крови животных осуществляли в начале опыта, через 45 и 90 дней.
Кровь для морфологических исследований отбиралась от 5 животных каждой
группы на 1, 45 и 90 сутки, в которой определяли содержание эритроцитов, лейкоцитов, гемоглобин, гематокритную величину.
Убой проводили после последнего взвешивания, отбирая образцы органов и тканей
для гистологического и морфологического исследований
Результаты исследований.
За время эксперимента не было зарегистрировано ни одного случая гибели
опытных животных (таблица).
Клинических признаков интоксикации не наблюдалось, лишь введение максимальной дозы моренита (24,0 г/кг массы
тела) вызвало кратковременное угнетение лабораторных животных, обусловленное большим объемом вводимых веществ,
которое прошло через 2,0-2,5 часа. Аналогичная картина наблюдалась и у крыс контрольной группы, только введение большого количества воды вызвало у них усиленное мочеиспускание, проявившееся через 30 минут после начала эксперимента.
Использование меньших доз моренита не вызвало никаких отклонений в клиническом статусе животных. За весь период наблюдений (14 дней) не было выявлено различий в поведении крыс опытной и
контрольной групп. Наблюдения за аппетитом, двигательной активностью не выявили нарушений в общем состоянии животных, Функции пищеварения и мочеотделения у них оставались на уровне физиологической нормы.
Результаты проведенных опытов не
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
позволили нам установить среднесмертельную дозу (LD50), и дозу, вызывающую
появление клинической картины токсикоза. В течение периода наблюдений моренит не вызвал гибели и острой интоксикации животных.
Так как при всех испытуемых дозах гибель подопытных животных не наступила, это позволило нам классифицировать
препарат как малотоксичный и по ГОСТ
12.1.007-76 «Вредные вещества» отнести
к 4-му классу опасности (незначительно
опасные вещества).
Эксперименты по определению хронической токсичности препарата показали,
что его длительное применение в различных дозах (в 3 и 5 раз превышающих рекомендуемую терапевтическую дозу) не оказывает вредного влияния на организм белых крыс. Предлагаемый корм они поедали охотно. Состояние животных в группах
на протяжении всего периода опыта оставалось удовлетворительным. Аппетит, дыхание, поведенческие реакции, рефлексы
не претерпели изменений. Расстройств пищеварения от применения моренита не зарегистрировано.
При анализе динамики массы тела крыс
обнаружили увеличение веса животных
всех опытных групп, причем, наибольший
эффект наблюдали при введении моренита
в дозе 3 г/кг массы тела. Так, прирост массы
тела на 1 животное в первой группе составил 114,8%, во второй – 133,3% и в третьей
– 118,8% по отношению к контролю, а дополнительный прирост опытных групп за
весь период кормления составил 120, 270 и
153 г к контролю соответственно.
Морфологические исследования крови
не выявили токсического влияния моренита, показатели мало отличались от контроля и оставались в пределах физиологической нормы.
В крови крыс опытных групп наблюдалось недостоверное незначительное увеличение гемоглобина, что, вероятно, можно отнести за счет активизации обменных процессов, протекающих в организ-
ме. Кроме того, в лейкоформуле животных третьей опытной группы на 45-е сутки эксперимента наблюдали незначительный лимфоцитоз, который, однако, в сочетании с обычным содержанием эритроцитов в крови животных можно рассматривать как благоприятный фактор, указывающий на повышение деятельности органов гемопоэза.
По окончанию эксперимента белых
крыс убивали методом декапитации, проводили патолого-анатомическое вскрытие
и взвешивание внутренних органов.
При проведении патоморфологических исследований у крыс, как опытных,
так и контрольной групп макроскопически не было выявлено отклонений и каких-либо особенностей в строении, соотношение масс внутренних органов к массе тела как в опытных, так и в контрольных группах достоверно не отличается.
Это свидетельствует об отсутствии дополнительной нагрузки на органы, а также токсического воздействия изучаемого
препарата и о его хорошей переносимости организмом крыс.
Изучение местно-раздражающего действия препарата не выявило его токсического действия на кожные покровы подопытных животных.
Заключение. Проведенными исследованиями острой и хронической токсичности моренита на лабораторных животных
установлено, что препарат, как при кратковременном, так и при длительном применении не оказывает отрицательного
токсического действия на организм, не нарушает функции систем, органов и тканей,
не влияет отрицательно на физиологическое и клиническое состояние животных.
Введение моренита способствует увеличению массы тела опытных животных на 8,218%. Основные морфологические и биохимические показатели крови опытных животных не претерпевают существенных
изменений и не отличаются от контрольных. Препарат не оказывает местного раздражающего действия.
РЕЗЮМЕ
Приводятся результаты токсикологических исследований препарата моренит. Установлено, что по
ГОСТ 12.1.007-76 «Вредные вещества», он классифицируется как малотоксичный и относится к 4-му
классу опасности (незначительно опасные вещества).
Данные экспериментов не выявили противопоказаний к применению препарата моренит в животноводстве и ветеринарии.
SUMMARY
Happen to the results of the toxicological studies of the preparation morenit. It is installed that on «Bad material», he it is classified as little toxins and pertains to 4-mu class to dangers (the small hazmats). The Given experiment have not revealed the contraindication to using the preparation morenit in stock-breeding
and veterinary medicines.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
103
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Литература
1. Великанов В. Эффективная добавка / В. Великанов, Ю. Пчелкин, С. Смагулов // Птицеводство. М. 1983. № 4. С.23.
2. Гинзбург И.И. Минералы древней коры выветривания Урала / И.И. Гинзбург, И.А. Рукавишникова. М.: 1951. 86 с.
3. Грим Р.Е. Минералогия глин / Р.Е. Грим. Перевод с англ. Изд-во иностр. литературы. Москва.:
1959.
4. Иноземцев В.П. Нетрадиционные методы лечения животных с незаразной патологией / В.П.
Иноземцев // Ветеринария. М. 1993. № 9.
5. Коков Т.Н. Научные основы использования бентонитовых глин Северного Кавказа для оптимизации минерального питания крупного рогатого
скота, свиней и птиц: Дис. д-ра с.-х. наук / Т.Н.
Коков; Горск. гос. аграрн. Университет. Владикавказ. 1998.
6. Мамателашвили В.Г. Влияние бентонита (асканглины) на организм сельскохозяйственных
животных / В.Г. Мамателашвили, П.Д. Болквадзе, М.С. Мерабишвили // Мат. докл. Закавказской научн. конф. по вопросам животноводства
и ветеринарии, 1971. Тбилиси. ЗооВет. ин-т. 1971.
С. 528-560.
7. Оустеркоут Л. Глина как кормовая добавка / Л.
Оустеркоут // Сельское хозяйство за рубежом.
1970. № 11. С. 15.
8. Britton R.A. Protein-bentonite complexes / R.A.
Britton, D.P. Colling, T.I. Klopfenstein // Feed management. 1977. V.28. Р.26-27.
9. Feldhofer S. Fizikalno-kemijska svojstva bentonina
i «bentala» znacajna za hranidbu stoke, sposebni osvrtom na resorpciju i fostora kod pilica. (Физикохимические свойства бентонита и производного
сырья бентонитных глин «бентала» и возможность их использования в кормлении цыплят
(СФРЮ) / S. Feldhofer, E. Tkalcec, V. Mitin // Veterinaria (Sarajevo). 1988. T.37. № 1. S.51-63.
УДК: 633.883:578.082
Д.В. Тарнуев, И.О. Убашеев, К.С. Лоншакова, И.О. Убашеев
ФГОУ ВПО «Бурятская государственная сельскохозяйственная
академия им. В.Р. Филиппова», Институт общей и
экспериментальной биологии СО РАН, г. Улан-Удэ
ГАСТРОПРОТЕКТИВНОЕ ДЕЙСТВИЕ
«ПОЛИПЛАНТА-К» ПРИ ХРОНИЧЕСКОЙ
АЦЕТАТНОЙ ЯЗВЕ ЖЕЛУДКА ПО OKABE AT AL.
У БЕЛЫХ КРЫС
В структуре гастроинтестинальной
патологии и животных, и человека язвенная болезнь занимает ведущее место и отнесена к разряду часто встречающихся заболеваний.
Проблема этиологии и патогенеза, профилактики и лечения язвенной болезни
желудка, как и всякая другая нерешенная
проблема, продолжает привлекать пристальное внимание исследователей.
Интерес к препаратам растительного и минерального происхождения активизируется во всем мире в связи с токсикологическим кризисом, наметившимся в области применения синтетических
средств [5,6].
В настоящей работе дана оценка антиульцерогенного действия фитосредства
«полипланта-К» (коланхоэ, подорожник и
водяной перец).
Материал и методы исследований.
Эксперименты проводили на белых крысах-самцах с исходной массой
200,0±10,0 г. В каждой группе использовалось по 10 животных. Ацетатную (хрони104
ческую) язву желудка по Okabe at al. [12]
вызывали у белых крыс под барбамиловым наркозом (60,0 мг/кг, внутрибрюшинно). Формирование язвенного дефекта
проводили на серозной оболочке желудка
в области между пищеводом и луковицей
12-перстной кишки, стеклянной пипеткой
с концевым диаметром 2 мм, содержащей
0,5 мл ледяной уксусной кислоты. В течение 24 часов до воздействия ульцерогенного агента, крысы голодали при свободном
их доступе к воде. Исследуемые препараты («полиплант-К», и препарат сравнения
плантаглюцид) вводили перорально, ежедневно, начиная через 1 сутки после альтерации и на протяжении всего эксперимента, в оптимальной терапевтической дозе:
плантаглюцид – смесь полисахаридов подорожника большого, который оказывает
спазмолитическое и противовоспалительное действие, вызывает увеличение слизистых резервов желудка (2,8,9,10) - 300,0 мг/
кг. Животным контрольной группы по аналогичной схеме вводили дистиллированную
воду в эквиобъемном количестве. По истеВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица
Влияние «полипланта-К» на течение ацетатной (хронической) язвы желудка
по Okabe at al. у белых крыс
№
п/п
Показатели
желудочной сек1. Темп
реции, мл/100г/час
кислотность,
2. Общая
ед. Михаэлиса
соляная кис3. Свободная
лота, ед. Михаэлиса
соляной кис4. Дебит-час
лоты, кг/100г/час
5. Содержание пепсина, г/л
язвенно6. Площадь
го дефекта, мм2
7. SH-группы, мг/г
в сыворотке кро8. МДА
ви, кМ/мл.мин
в гомогенате же9. МДА
лудка, нМ/г ткани
синий, связан10. Альциановый
ный в желудочном соке, Е/мл
Сроки исследований, сутки
14
21
14
21
14
21
14
21
14
21
14
21
14
21
14
21
14
21
14
21
Группы животных
Контрольная
Полиплант-К
Плантаглюцид
0,28+0,02
0,51+0,03
72,30+2,40
81,70+6,10
11,31+1,31
41,21+3,71
6,73±0,52
42,00±3,00
2,10±0,20
4,10±0,10
192,60+9,90
22,20±2,04
4,21±0,22
5,12+0,34
4,71+0,33
11,62±0,45
4,21 ±0,09
2,81+0,21
0,52+0,01
0,40±0,03
0,43+0,03*
0,72±0,01
66,40+3,21
76,91+5,89*
12,62+1,11
39,12+3,62
7,52+0,74
39,90+3,15
4,30+0,30*
6,70+0,30*
28,81+2,20*
0,34+0,03*
6,34±0,65
7,32±0,44*
2,14+0,15*
5,70±0,40*
0,71+0,04*
0,24+0,01*
0,55±0,01
1,19±0,11*
0,48+0,03
0,65±0,06
67,60+3,45
84,30±4,87*
15,60±1,47
50,10±3,54
9,30±0,85
51,10+4,12
2,70+0,10
4,40±0,40
4,80+0,38*
1,31+0,04*
5,28±0,27
7,04+0,21
2,13+0,20*
4,53±0,40*
2,41±0,20*
0,68+0,04*
0,40+0,01*
0,38±0,03
Примечание: * - достоверность в сравнении с контролем при Р<0,05; n – количество животных
чении 14 и 21 суток после операции животных умерщвляли мгновенной декапитацией под легким эфирным наркозом, проводили наложение лигатуры на пилорический отдел желудка. Как известно, именно
в эти сроки согласно данным Аруина и соавт. [1] происходят наиболее значимые перестройки в функциональном и структурном состоянии органа. Желудки извлекали,
содержимое анализировали, а язвенные дефекты подвергались морфометрической
оценке. Кроме того, исследовался уровень малонового диальдегида (МДА) в
сыворотке крови и гомогенате стенки желудка [11]. Кроме того, определяли содержание сульфгидрильных групп в гомогенате желудка и количество гастромукополисахаридов в желудочном соке. Патоморфологические исследования проводили по общепринятым методикам [7]. Полученные
в исследованиях данные обрабатывали с
использованием критерия Стьюдента по
Гланцу [3] применяя компьютерную программу «BIOSTAT 3.03» для IBM PC [4].
Результаты исследований.
Полученные результаты отражены в
таблице.
На фоне курсового введения «полипланта-К» в указанной дозе наблюдается
Ветеринарная патология. № 2. 2008
выраженное его фармакотерапевтическое
влияние, которое выражается в сохранении ферментообразующей функции желудка, а также в уменьшении площади
язвенного дефекта и улучшении показателей перекисного окисления липидов в
крови и гомогенате желудка. Плантаглюцид по своему действию незначительно уступает «полипланту-К».
При микроскопическом исследовании
желудка с экспериментальным повреждением по Okabe at al. картина и форма язв
представляется различными. Преобладают язвы круглой формы, образующие кратерообразное углубление.
Края большинства язв ровные, белесоватого цвета, возвышаются над слизистой оболочкой. Вследствие выраженного периульцерозного воспаления
вблизи язвы слизистая оболочка отечна
и гиперемирована, имеет вид приподнятого валика, который четко отграничен
от окружающей слизистой оболочки и
возвышается над ней.
Деформация стенок органа вокруг язвы проявляется в виде гастростаза и в перерастяжении его стенок. Выявляется спаечный процесс, дно язвы гладкое, покрыто толстым слоем некротического налета.
105
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Слизистая оболочка вокруг язвы разрыхлена и кровоточива. По мере удаления от
язвенного дефекта слизистая оболочка
имеет вид, характерный для соответствующего отдела желудка. Слизистая оболочка, окружающая изъязвления, без видимых изменений.
При введении животным «полипланта-К» в дозе 300 мг/кг массы дно язвенного дефекта очищается значительно быстрее от деструктивных остатков, чем у контрольных животных.
Микроскопически на 14-е сутки на дне
язвы контрольных животных обнаруживается экссудат, широкий и глубокий слой
фибриноидного некроза, островки грануляционной ткани, зоны склероза. Четкого
отграничения некротической зоны от нижележащих тканей часто не обнаруживается. Отмечается выраженная клеточная
инфильтрация.
На границе между зоной фибриноида и
зоной начавшейся грануляции ткани происходят два противоположно направленных процесса: развитие грануляционной
ткани и распространение фибриноида на
зоны грануляционной ткани. Широкая полоса фибриноидного некроза способствует
сужению зоны роста грануляционной ткани, тем самым замедляется процесс заживления раны и отягощается ее течение.
На дне язвенного дефекта отмечалось
разрушение мышечного слоя. По краям
язвенного поражения наблюдается зона
склероза вплоть до серозной оболочки
с образованием плотных спаек. Все это
свидетельствует о неблагоприятном течении репаративных процессов. Репаративной регенерации препятствуют циркуляторные расстройства паралитического расширения кровеносных сосудов,
стазов, кровоизлияний. Стенки кровеносных сосудов были резко утолщены за
счет интимы, просветы сосудов сужены,
часто облитерированы.
На дне язвы наблюдаются отек и фрагментация мышечных волокон с разрастанием грубой соединительной ткани между
мышечными пучками.
В близлежащем от язвы слое слизистой
оболочки наблюдаются выраженные деструктивные изменения в покровно-ямочном эпителии и железистом аппарате: покровный эпителий часто разрыхлен, уплощен, разрушен. Просветы желез расширены, есть случаи кистозного расширения
просвета желез. В теле железы часть обкладочных (париетальных) и главных (зимогенных) клеток деформированы. Вали106
ки расширены, ямки глубокие, выстланы
высоким эпителием. Часть ямочного эпителия подвержена деструктивным и дистрофическим изменениям. В подслизистом
слое, особенно вокруг язвенного поражения, обнаруживается грубоволокнистая соединительная ткань.
У животных, получавших «полиплантК», к 14-м суткам наблюдения дно язвенного дефекта по сравнению с контролем
часто совсем очищено от некротических
масс или сохраняется лишь узкая полоска
массы, клетки обрывков ткани, пропитанных фибриноидным содержимым. Дно язвы покрыто тонким слоем детрита в виде скопления слизи с примесью распадающихся лейкоцитов, эритроцитов и слущенных клеток. Язва характеризуется уменьшением периульцерозного воспалительного вала. Вокруг язвы уменьшена зона
гиперемии и отека. В связи с этим воспалительный вал выглядит уплощенным. В
отличие от контроля наблюдается отторжение со дна язвы полоски фибринозного налета, под которыми обнаруживается нежная, рыхлая грануляционная ткань
с большим количеством вновь образованных сосудов. Между ними видно значительное количество лейкоцитов, лимфоидных и плазматических клеток. У краев
язвы в ряде случаев обнаруживается пролиферация эпителиальных структур. Отмечается значительное уменьшение воспалительной инфильтрации, идет активный процесс эпителизации язвенного дефекта (эпителий «наползает» с краев его).
Менее выражены атрофические изменения слизистой оболочки желудка: умеренно расширен просвет желез, сохраняется
большая часть железистых клеток.
На 21-е сутки эксперимента у контрольных животных деструктивные изменения в
стенке желудка более выражены. В краях
язв отмечаются: внутрисосудистый лейкоцитоз, периваскулярная лейкоцитарная инфильтрация. В полях поражения слизистой
оболочки при резких дистрофических изменениях клеточная инфильтрация выглядит довольно интенсивной, распространяясь вплоть до серозного слоя. Резко выражены циркуляторные расстройства: паралитическое расширение кровеносных сосудов, стазы, некроз стенок мелких артерий. В соединительной ткани по краям язвы и дна ее обнаруживаются при окраске
толуидиновым синим признаки мукоидного набухания. В подслизистом слое наблюдается разрастание соединительной ткани
различной степени зрелости. Иногда она
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
представляется нежноволокнистой с большим количеством фибробластов и тонкостенных сосудов. В других наблюдениях обнаруживается разрастание грубоволокнистой соединительной ткани, состоящей из
толстых волокон и фиброцитов. В такой
фиброзированной ткани кровеносные сосуды малочисленны, часто с утолщенной
склерозированной стенкой.
В целом, у контрольных животных
в эти сроки репаративные процессы в
стенке желудка слабо выражены. Преобладание деструкции в стенке желудка
крыс не способствует росту грануляционной ткани, а скорее наоборот, приводит; к ее истончению.
У животных, получавших «полиплантК», к 28-м суткам наблюдения обнаруживается толстый пласт грануляционной ткани,
богатый капиллярами, расположенными
преимущественно перпендикулярно к поверхности язвы.
У краев регенераторная реакция проявляется в виде разрастания эпителиально-соединительнотканных
разрастаний,
наползающих на язвенную поверхность. В
некоторых случаях обнаруживается полиморфизм покровного эпителия, выражающийся различной величиной клеток с неправильной формой, нарушением базального однорядного расположения. Часто измененный железистый слой, сохранивший-
ся по краям язвы, уплощаясь, наползает на
язвенный дефект.
В покровно-ямочном эпителии по краям язв обнаруживаются единичные фигуры митоза. Полная эпителизация дна язвы наблюдается лишь в единичных случаях. Небольшие рассеянные группки мелких клеток свидетельствуют об образовании желез.
Таким образом, проведенные патоморфологические исследования свидетельствуют о выраженном фармакотерапевтическом влиянии лекарственного средства «полиплант-К» при хронической ацетатной
язве желудка по Okabe at al. у белых крыс.
При курсовом введении его наблюдается более активная регенерация морфологических структур, свидетельствующая о
противовоспалительных и стимулирующих регенерацию свойствах этого фармакологического средства и проявляющихся
уже на ранней стадии развития патологического процесса, данное средство благоприятно влияет на структуру и функцию
желудка, оказывает стимулирующее влияние на заживление язвенного дефекта.
Выявленное антиульцерогенное действие у комплексного растительного препарата «полипланта-К» обусловлено антиоксидантной и мембраностабилизирующей
активностью, благодаря наличию соединений полифенольной природы.
Литература
1. Аруин Л.И., Капуллер Л.Л., Исаков В.А. Морфологическая диагностика болезней желудка и
кишечника. Москва. 1998. 496 с.
2. Барнаулов О.Д. К механизму гастропротективного действия полисахаридов из стеблей шток-розы
розовой Alcea rosea // Новые лекарственные препараты из растений Сибири и Дальнего Востока /
Тез. док. Всесоюз. конф. Томск, 1986. С. 17.
3. Гланц С. Медико-биологическая статистика. Пер
с англ. М., Практика, 1998. 459 с.
4. Гланц С. Программа BIOSTAT 3.03 (для IBM
PC). 1998.
5. Кудрин А.Н., Николаев С.М., Лоншакова К.С.
и др. мембраностабилизирующее действие растительных фенолов // IV съезд фармацевтов
УССР: Тез. докл. Запорожье, 1984. С. 86-87.
6. Кузьмин В.И. О биологическом методе стимуляции заживления ран и язв // Казан. мед. журнал
1969. N.6. С.163.
7. Меркулов Г.А. Курс патогистологической техники М., 1969. 423 с.
8. Оболенцева Г.В. Растительные полисахариды – перспективный источник лекарственных
Ветеринарная патология. № 2. 2008
средств // Актуальные проблемы оценки фармакологической активности химических соединений / Тез. докл. Всесоюз. конф. М., 1981. Ч.2.
С. 108-109.
9. Оболенцева Г.В., Хаджай Я.И. Влияние некоторых флавоноидных соединений на образование
экспериментальных язв желудка у крыс // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. 1974. N.9. С. 39-41.
10. Оболенцева Г.В., Хаджай Я.И., Видюкова А.И., Ларьяновская Ю.В. Влияние некоторых природных
веществ на язвенное поражение желудка крыс,
вызванное ацетилсалициловой кислотой // Бюл.
эксп. биологии и медицины. 1984. №3. с. 39-40.
11. Стальная И. Д., Гаришвили Т. Г. Метод определения малонового диальдегида с помощью тиобарбитуровой кислоты / / Современные методы
биохимии (под ред. В. Н. Ореховича). М 1977.
С. 66-68 .
12. Okabe S., Pfeiffer C.J. The acetic ulcer model - a
procedure for chronic duodenal or gastric ulcer //
Peptic ulcer / C. J. Ed. Preiffer. Copenhagen, 1971.
P. 13-20.
107
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Н.С. Трошева, В.В. Палунина
ФГОУ ВПО Красноярский государственный аграрный университет
ЛЕЧЕНИЕ МЕЛКИХ ДОМАШНИХ ЖИВОТНЫХ
ПРИ ДЕРМАТИТАХ
Между аутофлорой открытых полостей и функционированием других органов
и систем макроорганизма существует тесная связь.
Стойкие дисбиотические изменения в
кишечнике приводят к снижению иммунологической реактивности организма и как
результат – к развитию воспалительных
заболеваний в различных органах, в том
числе кожи (Коршунова О.В. с соавт., 2000;
Солнцева В.К., 2000; Николаева И.В. с соавт., 2001).
Целью наших исследований являлось
отработать схему лечения животных с
дерматитами и экземами, включающую
пробиотики (нормальную микрофлору
кишечника).
Испытания проведены на больных собаках с затяжным течением дерматитов (3
группы). Для испытания в каждую группу
подбирали животных одной породы и одинакового возраста. Животные 1-й группы
(n=7) служили контролем. В схему лечения у них включали:
1. Антибактериальные препараты (антибиотики, к которым была чувствительна патогенная микрофлора, выделенная с
места поражения);
2. Витамины А, Е, С и группы В;
3. Места поражения обрабатывали раствором йода один раз в день;
4. Димедрол (супрастин).
Животных второй (n=7) и третьей
(n=7) опытных групп лечили согласно выше приведенной схемы. Кроме того собакам второй группы назначали пробиотики
для нормализации микрофлоры кишечника (бифидумбактерин, М-Курунга, линекс)
через 10-15 дней после начала лечения. Собакам третьей группы пробиотики назначали с начала курса лечения.
За животными вели наблюдение в течение 50 дней. Учитывали длительность
болезни, количество выздоровевших. Через 30 дней после начала дачи бифидумбактерина у животных проводили бактериологические исследования влагалищной слизи и соскобы с бывших мест поражения кожи.
При клиническом исследовании у подопытных собак перед проведением курса лечения выявляли расчесы, зуд, мокнущие, часто гноящиеся очаги в области под108
бородка, лап, головы, себорею. При бактериологическом исследовании соскобов
с мест поражения кожи (также влагалищной слизи и из препуциального мешка) от
больных собак были выделены золотистые стафилококки, гемолитические стрептококки, у 3-х животных – клебсиеллы. У
28,5% из них бактерии выделены в ассоциации с грибами.
За период наблюдения в первой группе
(контрольной) из 7 выздоровело 4 животных (57,1%). Продолжительность болезни
у выздоровевших собак была от 19 до 45
дней (в среднем 43,3 дня). У трех собак через 50 дней от начала лечения оставались
признаки дерматитов (у одной из них – возник рецидив через 5 дней после ремиссии).
Животных второй группы (опытной)
начинали лечить как собак контрольной
группы. При повторных приемах (через
10-15 дней) у них отмечали улучшение:
некоторое уменьшение зуда, кровоточивости, мокнущие язвы подсыхали. Им дополнительно назначали пробиотики. За
период наблюдения из 7 животных выздоровело 6 (85,7%), что на 28,6% больше, чем в контрольной группе. Продолжительность болезни была в среднем на
4,4 дня (колебания от 17 до 39 дней) короче, чем в контроле.
У 85,7% животных третьей группы, в
схеме лечения которых пробиотики применяли с первого дня, через 7-31 день после
начала лечения отмечали заживление язв,
зуд прекращался. Продолжительность болезни была в среднем на 9,7 дней короче,
чем у животных контрольной группы (колебания от 19 до 45 дней – в среднем 33,6
дней). У одного животного наблюдали исчезновение признаков дерматита на 17
день, а через 8 дней – рецидив болезни.
При бактериологическом исследовании соскобов кожи с бывших мест поражения, а также смывов из половых органов у выздоровевших животных второй и
третьей групп патогенной микрофлоры
и дрожжеподобных грибов не выделено.
В то же время у двух животных из контрольной группы изолированы золотистые стафилококки.
Таким образом, применение пробиотиков (нормальной микрофлоры кишечника) в схеме лечения дерматитов у соВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
бак оказывает положительное влияние
на течение болезни. Это, вероятно, связано с тем, что пробиотики нормализуют
микробиоценоз пищеварительного тракта. Это приводит к снижению риска за-
болеваемости животных желудочно-кишечными болезнями и профилактирует
возможность распространения патогенной микрофлоры из кишечника в другие
органы, в том числе на кожу.
РЕЗЮМЕ
Для терапии собак при дерматитах предложено в схему лечения вводить пробиотики
SUMMARY
It is offered to include probiotics into the treatment regimen of dog,s dermatitis.
Литература
1. Коршунова О.В. с соавт., 2000; Применение
биотерапевтических препаратов для коррекции
микробного статуса у беременных женщин /
Коршунова О.В., Кафарская Л.И., Ефимов Б.А.
и др. // Журн. микробиол. 2000. №5. С.69-72.
2. Николаева И.В. с соавт., 2001 Лекарственная
устойчивость штаммов S.aureus, выделенных у
детей с дисбактериозом кишечника / Николаева И.В., Анохин В.А., Бондаренко В.М., Галеева
О.П. // Журнал микробиологии, эпидемиологии,
иммунологии. 2001. №1. С. 9-13.
3. Николаева И.В. Частота колонизации стафилококками кишечника у детей с явлениями дисбактериоза / Николаева И.В., Бондаренко В.М.,
Анохин В.А., Галеева О.П. // Журн. микробиол.2000. №1. С.17-21.
4. Солнцева, В.К. Микробиоценоз кожи больных
хроническими дерматозами / Солнцева В.К.,
Быков А.С., Воробьев А.А. и др. // Журн. микробиол. 2000. №6. С. 51-55.
УДК 619:616.728.2:636.7+619:617.581
Ю.В. Чернигов, В.Д. Конвай
Ветеринарная клиника «Кранк», г. Омск, Омская государственная
медицинская академия, Омский государственный аграрный университет
ПОСТТРАВМАТИЧЕСКОЕ ВОСПАЛЕНИЕ
ТАЗОБЕДРЕННОГО СУСТАВА У СОБАК:
МЕХАНИЗМЫ РАЗВИТИЯ, ПУТИ КОРРЕКЦИИ
Травматические повреждения тазобедренного сустава у собак нередко встречаются в практике ветеринарного хирурга.
Наиболее эффективным методом лечения, на наш взгляд, является чрескостный
остеосинтез по Г.А. Илизарову [6]. Несмотря на достаточно надежную и стабильную
фиксацию костных фрагментов, в зоне повреждения сустава развивается воспалительный процесс, что удлинняет время выздоровления животного и зачастую влечет
за собой развитие деструктивно-дегенеративных изменений в тазобедренном суставе [7]. Это диктует необходимость регулирования этого процесса путем применения
новых консервативных методов лечения.
Разработка их лимитируется недостаточной изученностью механизмов посттравматического воспаления опорно-двигательного аппарата.
Целью настоящей работы явилось изучение роли чрезмерного катаболизма пуриновых мононуклеотидов, сопряженных с
ним усиленной пероксидации мембранных
структур и нарушения функции антиоксиВетеринарная патология. № 2. 2008
дантной системы в развитии посттравматического воспаления тазобедренного сустава и выяснения путей коррекции обнаруженных метаболических нарушений.
Материал и методы
Эксперимент проводили на 10 здоровых беспородных собаках обоих полов
массой ±18,4 кг в возрасте от 9 месяцев до
4-х лет. У 10 животных опытной группы,
находящихся под нейролептанальгезией,
в условиях операционной выполняли кранио-латеральный доступ к тазобедренному суставу, моделировали кранио-дорсальные (Y-образные) переломы костей вертлужной впадины. Затем осуществляли репозицию костных фрагментов открытым
способом и фиксировали аппаратом внешней конструкции спице-стержневого типа. Срок фиксации тазобедренного сустава
составлял 40-42 суток. Критериями демонтажа аппарата явились рентгенологические признаки костного сращения в области повреждения.
До операции (фон), через 14 и 21 сутки после ее проведения у собак утром на109
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
тощак из лучевой вены забирали кровь, в
которой определяли СОЭ, количество лейкоцитов, нейтрофилов, моноцитов и лимфоцитов. В плазме крови определяли концентрацию гликозамингликанов, глюкуроновой, сиаловых и мочевой кислот, активность щелочной фосфатазы, а в эритроцитах – содержание малонового диальдегида, глутатиона, активности супероксиддисмутазы, каталазы, глутатионреедуктазы и глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы методами, описанными в работе. Результаты
исследования обработаны статистически с
использованием критерия Стьюдента для
непараметрических методов анализа.
Полученные данные и их обсуждение
Из представленных в таблице 1 данных
видно, что концентрация мочевой кислоты
в плазме крови собак группы Т через 14 суток после операции превышает фоновый
показатель на 44,3% (Р<0,02). Данное явление можно связать с усиленным разрушением в очаге воспаления поврежденных
и фагоцитирующих клеток, сопряженным
с деструкцией входящих в их состав нуклеиновых кислот до пуриновых нуклеотидов:
аденозимонофосфата (АМФ) и гуанозинмонофосфата (ГМФ). Последние в дальнейшем катаболизируются до гипоксантина, который, в свою очередь, окисляется
ксантиноксидазой до мочевой кислоты [2].
Определенный вклад в интенсификацию этого процесса вносят, по-видимому, и
сопутствующие воспалительному процессу явления гипоксии, приводящие не только к увеличению уровня АМФ и ГМФ, но
и локальному закислению тканей накапливающимся лактатом. Известно, что при
снижении рН увеличивается активность
аденилатдезаминазы и аденозиндезаминазы, участвующих в катаболизме пурино-
вых мононуклеотидов [3, 8].
Окисление гипоксантина до ксантина
и мочевой кислоты в результате реакции,
катализируемой ксантиноксидазой, сопряжено с продукцией данным ферментом супероксидных радикалов и перекиси водорода. При взаимодействии последних между собой образуется гидроксильный радикал, один из наиболее сильных в природе
окислителей [1]. Он способен окислять ненасыщенные жирные кислоты фосфолипидов мембранных структур клеток с последующим повреждением их.
Образующиеся гидроперекиси этих
кислот в дальнейшем разрываются на
фрагменты, способные реагировать с тиобарбитуровой кислотой с образованием
окрашенных соединений. Одним из таких
фрагментов является малоновый диальдегид. Содержание последнего в эритроцитах собак группы Т через 14 суток после
операции увеличено по сравнению фоном
на 64,3% (P<0,001). Данное явление можно
связать с воздействием на эритроцитарную
мембрану активных кислородных метаболитов, продуцируемых ксантиноксидазой в
плазме крови и в очаге воспаления.
Свидетельством усиленной продукции
данным ферментом перекиси водорода, наряду с увеличением в плазме крови концентрации мочевой кислоты, а в эритроцитах
– уровня малонового диальдегида, является также тенденция к увеличению в этих
клетках активности каталазы. Она превышает аналогичный показатель до операции на 18,2% (t=1,6).
Данное явление можно рассматривать
как компенсаторную меру организма, направленную на разрушение перекиси водорода в условиях повышенной ее продукции. Поскольку параллельно усиливается
Таблица1.
Показатели перекисного окисления липидов в крови собак до операции
(фон) и через 14 суток после травмы тазобедренного сустава, M±m
Показатели
Фон, n=10
Т, n=10
В плазме крови
Мочевая кислота, мкмоль/л
653±56
942±20ф
Супероксиддисмутаза, ед/мл
291±28
271±18
Каталаза, МЕ/л
67,2±5,0
79,4±6,1
Малоновый диальдегид, мкмоль/л
261±25
429±39ф
В эритроцитах
Глутатион, моль/л
Глутатионредуктаза, МЕ/л
Глюкозо-6-фосфатдегидрогеназа, МЕ/л
1,02±0,10
1,36±0,05ф
0,199±0,040
0,098±0,02ф
1,61±0,07
1,91±0,12ф
Примечание: ф - различие достоверно по сравнению с фоном
110
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица 2.
Показатели метаболизма тканей тазобедренного сустава в плазме крови
собак до операции (фон) и через 14 суток после травмы его (Т), М±m
Показатели
С-реактивный белок, мг/л
Фон, n=10
Т, n=10
4,80 ±0,14
10,30 ±0,33ф
Щелочная фосфатаза, МЕ/л
241 ±20
362 ±32ф
Гликозамингликаны, моль/л
1,24 ±0,02
1,41 ±0,02ф
Глюкуроноваякислота, мкмоль/л
242 ±30п
396 ±20ф п
Сиаловые кислоты, ммоль/л
2,90 ±0,31
2,80 ±0,25
Фосфор, моль/л
1,65 ±0,05
0,93 ±0,31ф
Кальций, моль/л
2,86 0,05
2,20 ±0,32ф
Примечание: ф - различие достоверно по сравнению с фоном
Таблица 3.
Данные клинического анализа крови у собак до операции (фон)
и через 14 суток после травмы тазобедренного сустава (Т), М±m
Фон, n=10
Т, n=10
Скорость оседания эритроцитов, мм/ч
Показатели
5,1 ±0,3
22,5±0,1ф
Лейкоциты
8,4±0,5
14,3±0,2ф
Нейтрофилы
5,8±0,2
10,3±0,3ф
Эозинофилы
0,10±0,03
0,10±0,01
Базофилы
0,10±0,05
0,10±0,05
Моноциты
0,60±0,01
2,35±0,11ф
Лимфоциты
2,01±0,11
2,31±0,04ф
Примечание: ф - различие достоверно по сравнению с фоном
продукция ксантиноксидазой и супероксидных радикалов, можно было ожидать
увеличения активности и супероксиддисмутазы. Тем не менее, уровень этого показателя в эритроцитах через 14 суток после
операции не только не увеличен, но даже
отмечается тенденция к его снижению (на
6,8% по сравнению с фоном; t=0,6). Можно полагать, что это связано с прямым воздействием на этот энзим активных кислородных метаболитов
Несмотря на то, супероксиддисмутаза,
являющаяся самым активным в природе
ферментом, относительно мало чувствительна к повреждающим воздействиям, в
ее составе имеется сульфгидрильная группа, способная окисляться [3]. Определенный вклад в торможение активности этого
энзима может внести и недостаточно эффективный ее биосинтез вследствие развившегося дефицита в организме цинка и
меди, необходимых для формирования активного центра супероксиддисмутазы.
Отсутствие активации последней в условиях усиленной продукции АКМ может
иметь неблагоприятные последствия для
клеток. Известно, что даже в физиологиВетеринарная патология. № 2. 2008
ческих условиях из каждых четырех миллиардов супероксидных радикалов, инактивируемых супероксиддисмутазой, один
«проскальзывает» и остается не инактивированным [5]. В условиях усиленной продукции супероксидных радикалов количество таких «сбоев» может увеличиться,
создавая дополнительную угрозу повреждения мембранных структур клеток.
Свидетельстом усиленной пероксидации мембранных структур эритроцитов,
наряду с повышенным содержанием в них
малонового диальдегида, является увеличение в них содержания глутатиона. Через
14 суток после операции оно превышает
аналогичный показатель до операции на
33,7% (P<0,02). Это явление также можно
расценивать как компенсаторную меру организма, направленную на увеличение эффективности инактивации уже образовавшихся перекисей липидов в результате реакций, катализируемых глутатионпероксидазой и глутатион-S-трансферазой.
Можно полагать, что, несмотря на увеличение уровня глутатиона в эритроцитах, ткани обеспечены им не в достаточной
степени. Они нуждаются в еще большем
111
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
количестве его. Введение оперированным
собакам дополнительного количества этого вещества в виде препарата глутоксима,
о чем пойдет речь ниже, способствует более благоприятному протеканию воспалительного процесса в травмированном тазобедренном суставе.
Недостаточная обеспеченность тканей
глутатионом может быть связана с торможением реакции восстановления глутатиондисульфида, образующегося в процессе
инактивации перекисных соединений. Для
нее необходим НАДФ-Н2, генерируемый
из глюкозы в реакциях пентозного цикла.
Активность глюкозо-6-фосфатдегидрогеназы, ключевого энзима этого метаболического пути, в эритроцитах собак группы
Т через 14 суток после операции увеличена
на 18,2% по сравнению с фоном (P<0,02).
Это свидетельствует об интенсификации
выработки НАДФ-Н2 в условиях повышенной потребности в нем тканей.
Тем не менее, непосредственное использование ионов водорода, переносимых
этим коферментом, в восстановлении глутатиондисульфида в эритроцитах тормозится вследствие уменьшения активности
глутатионредуктазы. Через 14 суток после операции она снижена по сравнению с
аналогичным показателем до операции на
50,8% (Р<0,05). Это, по-видимому, является
одним из факторов, лимитирующих обеспеченность глутатионом тканей в очаге
воспаления.
Метаболические нарушения в поврежденных тканях, описанные выше, протекают на фоне выраженных явлений воспаления. Из представленных в таблице 2 данных видно, что через 14 суток после травмы тазобедренного сустава в плазме крови собак, подвергшихся традиционной терапии (группа Т), на 114,6% по сравнению
с фоном увеличена концентрация С-реактивного белка (Р<0,001), одного из белков
острой фазы воспаления. Известно, что интенсивность биосинтеза его, индуктором
которого является интерлейкин-1, зависит
от распространенности тканевого поражения – чем оно обширнее, тем выше уровень
этого показателя [4].
Свидетельством выраженности воспалительной реакции в тазобедренном суставе через 14 суток после операции является изменение уровня и других показателей
крови, в частности СОЭ (таблица 3). Она
на 241,2% превышает аналогичный фоновый параметр (Р<0,001). Поврежденные
ткани усиленно фагоцитируют лейкоциты,
что выражается в возрастании их количес112
тва в крови (на 70,5%; P<0,001). Это увеличение происходит за счет нейтрофилов и
особенно моноцитов.
Количество этих клеток в крови собак
группы Т превышает аналогичные показатели до операции соответственно на 78,1 и
291,7% (Р<0,001 в обоих случаях). Отмечается также умеренное увеличение количества лимфоцитов (на 14,9% по сравнению с фоном; P<0,02), что свидетельствует
о развившейся иммунной реакции организма. Вместе с тем, в условиях нашего опыта не изменяется количества клеток, обладающих слабой фагоцитарной активностью и не принимающих активного участия
в развитии иммунной реакции организма,
эозинофилов и базофилов.
Метаболические нарушения в поврежденных тканях тазобедренного сустава приводят к развитию явлений гипоксии с последующим увеличением в крови количества эритроцитов (на 25,0% по сравнению
с фоном; P<0,05). Вследствие этого отмечается тенденция к росту гематокрита (на
15,2%; t=1,4) на фоне уменьшения содержания гемоглобина в крови (на 11,6%; t=1,4).
В воспалительный процесс вовлечены
не только хрящ, синовиальная оболочка и
связки тазобедренного сустава, но и костная ткань. Об этом свидетельствует повышенная активность в сыворотке крови к концу второй недели исследования
щелочной фосфатазы, маркера повреждения этой ткани. Она превышает аналогичный показатель до операции на 50,2%
(Р<0,001).
Воспалительный процесс сопровождается умеренным усилением деструкции
межклеточного вещества соединительной
ткани, особенно хряща. Это выражается
в увеличении в плазме крови собак группы Т содержания гликозамингликанов, основного компонента этого вещества (на
13,5% по сравнению с фоном; t=0,6). При
более выраженном расщеплении полимерных молекул гетерополисахаридов до входящих в их состав мономеров – моносахаридов. Об этом свидетельствует повышенная концентрация в крови животных через
14 суток после операции глюкуроновой
кислоты (на 63,6% по сравнению с фоновым показателем; Р<0,01). При этом операционная травма не оказывает влияния
на уровень другого компонента гликозамингликанов – сиаловых кислот.
Описанные выше метаболические нарушения приводят и к перестройке костной ткани, в процессе которой происходит разрушение остеокластами гетеропоВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
лисахаридов межклеточного вещества ее
с последующим откладыванием в освободившемся микропространстве пластинок
гидроксиапатитов. Усиленный биосинтез
последних приводит к развитию в организме дефицита кальция и фосфора. Концентрация их в плазме крови собак через 14
суток после операции снижена соответственно на 23,1 (t=1,9) и 43,6% (P<0,05) по
сравнению с фоном. Определенный вклад
в уменьшение этих показателей вносит, повидимому, и недостаточно эффективная
инкреция клетками паращитовидных желез паратгормона и тиреокальцитонина,
связанная с истощением их.
Таким образом, через 14 суток после операции в повреждённых тканях тазобедренного сустава выражены явления воспаления, особенно в соединительнотканных его структурах. Способствуют
этому усиленный катаболизм пуриновых
мононуклеотидов до мочевой кислоты,
сопряженная с ним чрезмерная продукция
активных кислородных метаболитов и
обезвреживание образующихся при этом
перекисных соединений, приводящее к
развитию дефицита глутатиона. Это диктует необходимость коррекции этих нарушений при помощи экзогенного препарата этого трипептида.
Выводы
1. Через 14 суток после операции у со-
бак выражены явления воспаления в тканях поврежденного сустава, связанные с
последовательно развивающимися процессами: чрезмерным катаболизмом пуриновых мононуклеотидов, интенсификацией
образования перекисных соединений, приводящей к развитию дефицита глутатиона
на фоне недостаточно эффективного восстановления глутатиондисульфида.
2. Явления воспаления выражаются в
увеличении в плазме крови уровня С-реактивного белка и активности щелочной
фосфатазы, а также усиленной деструкции
хрящевой и костной ткани до гликозамингликанов, глюкуроновой и сиаловых кислот, сочетающейся с дефицитом кальция и
фосфора на фоне развившейся повышенной потребности в глутатионе.
3. При оценке тяжести посттравматического воспалительного процесса в тазобедренном суставе следует учитывать
результаты определения в плазме крови
уровня мочевой кислоты, гликозамингликанов, гиалуроновой кислоты, а в эритроцитах – содержания малонового диальдегида, глутатиона и активности глутатионредуктазы.
4. Развившаяся у собак с посттравматическим воспалением тазобедренного сустава повышенная потребность в глутатионе диктует необходимость восполнения ее
при помощи фармакологических средств.
РЕЗЮМЕ
Через 14 суток после операции в повреждённых тканях тазобедренного сустава выражены явления
воспаления, приводящие к развитию дефицита глутатиона на фоне недостаточно эффективного восстановления глутатиондисульфида, что диктует необходимость восполнения его при помощи фармакологических средств.
SUMMARY
Phenomenas inflammations denominated through 14 day after operation in damaged fabrics coxofemoral
joint, bring the development of the deficit glutoxim on background of the shortage of efficient reconstruction glutationdisulfida that dictates the need of the filling him with the help of pharmacological facilities.
Литература
1. Зенков, Н.К. Окислительный стресс: диагностика,
терапия, профилактика / Н.К. Зенков, Е.Б. Меньшикова, С.М. Шергин. Новосибирск, 1993. 182 с.
2. Конвай, В.Д. Острое нарушение пуринового обмена в печени в постреанимационном периоде и
его профилактика / В.Д. Конвай. Дисс. докт. мед.
наук. Омск, 1988. 428 с.
3. Конвай, В.Д. Роль острого нарушения метаболизма пуринов в развитии постреанимационной патологии печени / В.Д. Конвай, П.П. Золин // Омский
научный вестник. 2003. №3 (24). С. 168-174.
4. Кольтовер, В.К. Надёжность ферментативной
защиты клетки от супероксидных радикалов
и старение/ В.К. Кольтовер // Докл. АН СССР.
1981. Т.96, №1. С. 199-202.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
5. Стефании, Д.В. Клиническая иммунология и иммунопатология детского возраста/ Д.В. Стефании. М.: Медицина. 1996. 384 с.
6. Чернигов, Ю.В. Чрескостный остеосинтез при
лечении повреждений тазобедренного сустава у
собак / Ю.В. Чернигов // Ветеринарная патология. 2007. № 2. С. 133–137.
7. Чернигов, Ю.В. Влияние переломов вертлужной
впадины в условиях остеосинтеза по Г.А. Илизарову на состав крови собак / Ю.В. Чернигов, В.Д.
Конвай // Ветеринарная патология. 2007. № 3.
С. 98-101.
8. Buhl, M.R. Purine metabolism in ischemic kidney
tissue / M.R. Buhl // Dan. Med. Bul. 1982. V. 29, № 1.
P. 497-515.
113
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
УДК: 619:618.19-002-08-084: 636.22/.28
С.В. Шабунин, Е.Э. Кириллова, П.А. Паршин, С.М. Сулейманов
Всероссийский НИВИ патологии, фармакологии и терапии,
Российский университет дружбы народов
К ФАРМАКОТОКСИКОЛОГИИ ЭРОКСИМАСТА
И ЕГО ПРИМЕНЕНИИ ПРИ МАСТИТЕ У КОРОВ
На фоне нарушения технологии доения
(травматическое воздействие на ткани вымени) активизируются возбудители мастита, которыми являются, как правило, банальная кокковая микрофлора (стрепто, стафиллококки) и энтеробактерии (кишечная палочка) (2, 3 и др.). Поэтому общая заболеваемость коров маститами по
отношению к общему поголовью достигает до 40-60%. Огромный экономический
ущерб, причиняемый животноводческим
хозяйствам вследствие развития заболеваний молочной железы у продуктивных коров вызывает необходимость поиска путей
и методов совершенствования и изыскания
новых эффективных средств в борьбе с
маститами у коров. При этом для подавления условно-патогенной и патогенной микрофлоры используются преимущественно
противомикробные химиотерапевтические средства, позволяющие значительно
снизить заболеваемость. Однако длительное и бессистемное их применение в практике развивает у микроорганизмов колонизационную устойчивость, что значительно снижает терапевтический эффект
применяемого препарата (1 и др.).
Поэтому одним из путей преодоления
формирования устойчивости к лекарственным препаратам является чередование лекарственных средств с разными механизмами противомикробного действия (ротационные препараты) или создание комплексных препаратов путем комбинирования нескольких лекарственных веществ.
Одним из перспективных лекарственных средств этой группы является новый
противомикробный комбинированный препарат эроксимаст, в состав которого входит
эритромицин и окситетрациклин.
Изучение антимикробной активности
эроксимаста методом серийных разведений в жидкой питательной среде показало,
что его минимальная бактериостатическая
концентрация составляет 9,75 мкг/мл, а минимальная бактерицидная концентрация
- 19,5 мкг/мл. Следовательно, эроксимаст
обладает высокой антимикробной активностью. Наиболее выраженное действие
он проявлял в отношении кокковой микрофлоры: стрептококков и стафилококков.
114
Изучение токсичности эроксимаста проводилось на белых крысах и белых мышах.
При испытании токсических доз препарата
изучались симптомокомплекс острого экспериментального отравления эроксимастом и патолого-анатомические изменения
в органах и тканях животных. Опыты выполняли в двух повторностях для каждого
вида животных. В основу подбора доз и определения параметров токсичности эроксимаста был положен принцип нахождения
скользящих величин, вызывающих необходимый эффект: появление симптомов токсикоза или гибели особей в группах.
На первом этапе испытаний определяли недействующую и абсолютно смертельную дозы. На втором этапе токсические
дозы испытывали с интервалами в возрастающем по силе действия порядке, начиная
от недействующей дозы и доводили величину до 100 %-ной гибели особей.
Учитывая, что о силе действия на организм лабораторных животных препарата
можно судить по среднему результату, среднюю дозу эффекта - LD50 - определяли аналитическим способом Спирмена-Кербера
(Лакин Г.Ф., 1990), величины LD16 и LD84 находили графически на основании пробитов
и доз в мг/кг массы тела животных, показатель ошибки средней дозы эффекта - SLD50
- аналитически и графически.
В опыте использовались белые мыши
и белые крысы обоего пола с массой тела
у мышей - 19-23 г., у крыс - 180-200 г. Перед началом опытов животных выдерживали на карантине в течение 14 дней, а перед введением препарата не кормили в течение 8 часов.
Для определения острой токсичности
эроксимаста были сформированы по восемь опытных групп белых мышей и белых крыс и по одной контрольной группе (по 6 животных в каждой). Животным
опытных групп вводили эроксимаст в дозах 5,0; 6,0; 7,0; 8,0; 9,0; 10,0; 11,0 и 12,0 мл/кг
массы тела, что соответствовало 200; 240;
280; 320; 360; 400; 440 и 480 мг/кг массы тела по АДВ. Перед введением препарат подогревали до 36 0С. За животными проводили ежедневное клиническое наблюдение в течение 14 дней, учитывая внешний
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
вид, поведение, поедаемость корма и прием воды, ритма и частоты сердцебиения,
количества дыхательных движений и глубины дыхания. Особое внимание уделяли
развитию признаков токсикоза, оценивали
их тяжесть, продолжительность, время выздоровления или гибели животных.
Клинические симптомы острого отравления белых мышей и белых крыс сопровождались непродолжительным периодом
возбуждения с усилением двигательной активности у большинства особей, мыши издавали при этом писк. Белые крысы были настолько возбуждены в этот период,
что у них отмечалась агрессивность. За непродолжительным периодом возбуждения
развивалось резко выраженное угнетение,
состояние глубокого сна, переходящее затем в кому. Животные не реагировали на
световой и тактильный раздражители, не
принимали корм. Больные крысы и мыши пили воду, и наблюдалась резко выраженная жажда. К моменту гибели животных отмечалось учащенное дыхание и сердцебиение. Дыхание часто становилось поверхностным прерывистым. Развивалась
синюшность кожи и слизистых оболочек.
Смерть, как правило, наступала в состоянии глубокого угнетения.
Патолого-анатомические
изменения
острого отравления лабораторных животных (крыс и мышей) характеризовались
гемодинамическими расстройствами, повсеместным застоем венозной крови в подкожной клетчатке и внутренних органах.
Желудок при вскрытии пуст, слизистая гиперемирована, в подслизистой дна его мелкоточечные едва заметные кровоизлияния. Слизистая оболочка тонкого отдела
кишечника гиперемирована, с наличием в
ней мелкоточечных кровоизлияний. В просвете тонкого отдела кишечника у отдельных крыс и мышей отмечалось скопление значительного количества слизи. Печень, почки полнокровны, незначительно
увеличены, окраска неравномерная с фиолетовым оттенком. У большинства трупов
легкие гиперемированы с наличием отечной жидкости. Сердце растянуто, предсердия заполнены темно-вишневого цвета
кровью. Под эпикардом, особенно в области ушек множественные кровоизлияния.
Расчет LD50 эроксимаста провели биометрически по формуле:
LD50 = Е (а + б) х (м - п), где:
200
Е - знак суммирования стоящих после него величин;
Ветеринарная патология. № 2. 2008
а и б - величины смежных величин испытуемых доз препарата;
м и п - частоты смертельных исходов в %;
200 - постоянный коэффициент.
На основании результатов первичных
токсикометрических исследований были
получены величины LD50 эроксимаста при
подкожном введении белым мышам и белым крысам . Затем вычисляли величины
LD16 и LD84 эроксимаста для белых мышей
и белых крыс графически на основании
соответствующих пробитов и доз в мл/кг
массы тела показатель ошибки средней дозы эффекта - SLD50 - аналитически и графически (табл. 1).
Влияние эроксимаста на организм и
молочную железу клинически здоровых
коров симментальской породы выявлялось при интрацистернальном введении
препарата, подогретого до 38 0С в количестве 10 мл в левую переднюю четверть
вымени после предварительного выдаивания молока и обработки сосков 70 %
этиловым спиртом. Препарат не вызвал
в течение опыта изменений со стороны
общего состояния организма животных
(температура тела, частота пульса, количество дыхательных движений, сердечных толчков, сокращений рубца). Реакция секретов вымени опытных четвертей с 2 % раствором мастидина в течение
6-48 часов была сомнительной + или слабо положительной ++ (табл. 2).
Установлено, что количество соматических клеток увеличилось к 24 часу как в
секрете опытных ( с 0,318 до 1,317 млн./мл),
так и контрольных четвертей вымени (с
0,324 до 0,730 млн./мл) и снизилось до физиологической нормы в опытных долях к
72 часу, а в контрольных к 48 часу.
Следовательно эроксимаст при интрацистернальном введении в молочную железу клинически здоровых лактирующих
коров вызывал лишь незначительное, быстро проходящее раздражение тканей вымени, а согласно данным В.В.Гацуры (1974)
вещества, вызывающие слабую ответную
реакцию организма, относятся к группе
средств, переносимых животными и могут
быть рекомендованы в качестве лекарственных препаратов.
Определение остаточных количеств
эритромицина и окситетрациклина гидрохлорида в молоке, крови и моче проводилось на четырех коровах симментальской
породы в лактационный период. Трем коровам опытной группы внутрицистернально вводили эроксимаст по 10 мл на одно
115
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица 1.
Параметры острой токсичности эроксимаста для лабораторных
животных при подкожном введении, мл/кг (мг/кг АДВ)
Вид животных
Белые мыши
Белые крысы
Параметры токсичности
LD16
LD50
LD84
LD100
Показатель
ошибки SLD50
6,75
(270,0)
6,95
(278,0)
8,97
(358,8)
8,80
(352,0)
10,84
(433,6)
10,76
(430,4)
12.00
(480.0)
12,00
(480,0)
0,71
(28,4)
0,69
(27,6)
Таблица 2.
Показатели количества соматических клеток и рН в молоке
Время исследования
До введения
Через 6 часов
Через 24 часа
Через 48 часов
Через 72 часа
Через 96 часов
Через 120 часов
Четверть вымени
опытная
контрольная
опытная
контрольная
опытная
контрольная
опытная
контрольная
опытная
контрольная
опытная
контрольная
опытная
контрольная
введение один раз в сутки с интервалом 24
часа в течение 5 дней. Одна корова служила контролем, ей препарат не вводился. У
коров опытной и контрольной групп брали
молоко, кровь и мочу для определения остаточных количеств эритромицина и окситетрациклина гидрохлорида через 1; 3; 5; 7
и 9 суток после последнего введения эроксимаста. Определение содержания эритромицина и окситетрациклина гидрохлорида
проводили микробиологическим методом
диффузии в соответствии «Методических
указаний по определению остаточных количеств антибиотиков в продуктах животноводства» № 3049-84 от 29.06.84. (Ковалев
В.Ф. с соавт.,1988).
Определено, что через 7 суток после
длительного внутрицистернального введения эроксимаста в исследуемых биологических жидкостях (молоке, крови и моче)
активнодействующие вещества эритромицин и окситетрациклина гидрохлорид не
обнаруживаются.
Терапевтическая эффективность эроксимаста была изучена на 412 коровах,
больных субклинической, серозной, катаральной и гнойно-катаральной формами мастита. Препарат эроксимаст применяли интрацистернально, предваритель-
Количество соматических
клеток, млн./мл
0,318+0,070
0,324+0,054
0,873+0,175
0,672+0,147
1,317+0,207
0,730+0,174
0,627+0,085
0,423+0,068
0,402+0,077
0,321+0,061
0,312+0,068
0,318+0,071
0,302+0,038
0,297+0,031
рН
6,65+0,05
6,64+0,04
6,67+0,04
6,67+0,03
6,66+0,05
6,65+0,03
6,64+0,03
6,65+0,04
6,65+0,04
6,64+0,03
6,66+0,03
6,65+0,02
6,63+0,03
6,64+0,04
но подогрев до 36-39° С в дозе 5–10 мл.
Перед введением препарата из больной
четверти выдаивали секрет, а сосок дезинфицировали 70 % этиловым спиртом.
Лечение проводили 1 раз в сутки в течение 3-4 дней. Эроксимаст вводили 38 коровам, больным субклиническим маститом в 50 долей, 30 коровам при серозном
мастите в 41 доли, 26 коровам при катаральном мастите в 36 долей и 23 коровам
больным гнойно-катаральным маститом
в 29 долей. В качестве препарата сравнения использовали мастисан Б, который
вводили 26 коровам (37 долей), больным
субклиническим маститом, 24 коровам
(31 доля) – при серозном мастите, 21 корове (26 долей) – при катаральном мастите и 23 коровам (27 долей) – при гнойно-катаральном мастите.
Применение эроксимаста коровам при
субклиническом мастите способствовало
выздоровелению 94,7% больных, при серозном - 85,7%, при катаральном - 76,9% и
гнойно-катаральном мастите - 69,5%, тогда как при лечении мастисаном Б - 80,8;
66,6; 66,7 и 52,2 % соответственно. Эти данные свидетельствуют о высоком терапевтическом эффекте эроксимаста при мастите у коров.
Литература
1. Немченко М.И. Предупреждение желудочно-кишечных болезней новорожденных телят / М.И.
Немченко // Ветеринария. 1986. № 10. С. 10.
116
2. Мамедов А.Т. Субклинический мастит коров и
профилактика / А.Т. Мамедов, М.К. Абдуллаев
// Актуальные проблемы болезней органов раз-
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
множения и молочной железы у животных: мат.
междунар. конф. посвящ. 35-летию ВНИВИПФиТ Воронеж. 2005. С. 120-126.
3. Париков В.А. Эффективные отечественные
препараты для профилактики и терапии мас-
тита у коров / В.А. Париков, Н.Т. Климов, Н.В.
Притыкин и др. // Актуальные проблемы болезней органов размножения и молочной железы у
животных: мат. междунар. конф. посвящ. 35-летию ВНИВИПФиТ Воронеж. 2005. С. 375-378.
А.В. Шатилов
Московская Государственная Академия Ветеринарной Медицины
и Биотехнологии им. К.И. Скрябина, г.Москва
ТЕРАПЕВТИЧЕСКАЯ ЭФФЕКТИВНОСТЬ
ЭМИЦИДИНА ПРИ ЛЕЧЕНИИ ЛОШАДЕЙ
С ХРОНИЧЕСКИМИ ЗАБОЛЕВАНИЯМИ ЛЁГКИХ
В данном случае рассматривается хроническая эмфизема легких у лошадей. Как
известно, это заболевание и сердечно-сосудистой и респираторной систем.
У лошадей это очень распространенное заболевание и сопровождается изменениями многих биохимических и гематологических показателей крови, однако это
не всегда отражает жизненный статус животного. Определение в крови животных
таких ферментов как супероксиддисмутаза (СОД), каталаза, пероксидаза, глутатионредуктаза и субстрата – глутатиона восстановленного дает более полную картину физиологического состояния животных. Учитывая тот фактор, что при компенсировании системой антиоксидантной
защиты разрушающего действия свободнорадикальных соединений (образующихся в большом количестве практически при
всех заболеваниях) в крови повышается
количество антиоксидантных ферментов,
можно прогнозировать благоприятный исход заболевания. Наоборот, при достижении той концентрации свободнорадикальных соединений в организме, когда антиоксидантная система не справляется с ними,
можно говорить о процессах декомпенсации (аналогией в этом случае является старость, как замедленное разрушение клеток), и, следовательно, о неблагоприятном
исходе. Однако, эти процессы можно остановить, вводя животному синтетические
антиоксиданты. Тогда организм справляется с заболеванием, и затем, собственная антиоксидантная система приходит в норму.
Нашей задачей было происследовать
кровь лошадей клинически здоровых и
клинически больных хронической эмфиземой легких до лечения и после внутрихозяйственного и комплексного лечения. Для
Ветеринарная патология. № 2. 2008
этого мы провели исследование антиоксидантного статуса 41 лошади (32 клинически
здоровых, 9 больных, из которых 3 лошади лечили по внутрихозяйственной схеме,
и 6 комплексным методом с применением
эмицидина) из различных хозяйств Москвы и Подмосковья. Исследования проводились в лаборатории «Шанс Био» на биохимическом анализаторе сlima MC-15. Были
определены несколько групп животных:
- клинически здоровые;
- больные эмфиземой легких хронической формы;
- больные эмфиземой легких хронической формы после внутрихозяйственного
лечения;
- больные эмфиземой легких хронической формы после комплексного лечения с
применением эмицидина.
Эмицидин – водорастворимый ветеринарный антиоксидант с выраженным антигипоксическим эффектом, производное 3оксипиридина и янтарной кислоты. Применяется при всех видах заболеваний, сопровождающихся усиленной продукцией свободнорадикальных соединений.
У каждого животного брали кровь для
определения биохимических показателей
(билирубин общий и прямой, АСТ, АЛТ,
мочевина, креатинин, общий белок, альбумин, щелочная фосфатаза, альфа-амилаза,
глюкоза, ЛДГ, ГГТ, холестерин, триглицериды, КФК, а также К, Na, Fe, Са, Р, Мg) и
общего анализа крови, определение вышеперечисленных показателей антиоксидантной активности крови. Больных животных лечили по внутрихозяйственной схеме
лечения с курсом эмицидина по 500 мг утром и вечером в течение 10 дней, что является комплексным лечением. После этого
также проводили биохимическое исследо117
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица 1
Показатели антиоксидантной активности крови у клинически здоровых лошадей
и при хронической эмфиземе легких:
– до комплексного лечения;
– после комплексного лечения.
Значения у Значения у клиническлинически ки больных лошадей
здоровых
до лечения с курлошадей
сом эмицидина
Показатели
Значения у клинически больных лошадей
после лечения с курсом эмицидина
Уровень достоверности для
уровня вероятности Р=99
СОД, ед.акт/мг
гемоглобина
1,251(±0,091)
3,067 (±0,205)
1,33 (±0,071)
≥0,0001
Каталаза,
мкмоль пероксида водорода/ л×мин×103
40,25 (±3,71)
34,85 (±2,432)
52,92 (±4,872)
≥0,008
Пероксидаза,
ед.опт.пл/л×с
7,077 (±0,423)
7,617 (±0,531)
11,47 (±0,800)
≥0,002
Глутатионредуктаза,ммоль
окисленного глу- 315,3 (±7,59)
татиона/л×5 мин
217,2 (±12,71)
308,3 (±12,89)
≥0,0001
Глутатион восстановленный,
ммоль/л
0,358 (±0,047)
0,995 (±0,024)
≥0,0001
1,16 (±0,083)
Таблица 2
Показатели антиоксидантной активности крови
при хронической эмфиземе легких у лошадей:
– после комплексного лечения;
– после внутрихозяйственного лечения.
Значения после комплексного лечения
Значения после внутрихозяйственного лечения
Уровень достоверности для уровня вероятности Р=99
1,33(±0,07)
1,65 (±0,107)
≥0,039
Каталаза, мкмоль пероксида водорода/
л×мин×103
52,92 (±4,872)
47,1 (±1,101)
≥0,445
Пероксидаза, ед.опт.пл/л×с
11,52 (±0,776)
8,29 (±0,531)
≥0,03
Глутатионредуктаза,
ммоль окисленного
глутатиона/л×5 мин
308,3 (±12,89)
264,7 (±5,162)
≥0,02
Глутатион восстановленный,
ммоль/л
0,995 (±0,024)
0,567 (±0,032)
≥0,006
Показатели
СОД,
ед.акт/мг
гемоглобина
вание крови, клинический анализ и определение антиоксидантного статуса. При этом
специфическое лечение не отменялось.
По данным различных авторов активность СОД у животных в норме – 1–
7,5 ед.акт/мг гемоглобина, пероксидазы
– 30 – 65 ед.опт.пл/л·с, каталазы – 20-60
мкмоль пероксида водорода/л·мин, глютатионредуктазы – 150–450 мкмоль окисленного глютатиона/л·5 мин, содержание
118
восстановленного глютатиона в крови –
0,4–0,7 ммоль/л.
Исходя из проведенных исследований
можно вывести средние показатели антиоксидантной активности крови лошадей в
норме, при хронической эмфиземе легких
и при хронической эмфиземе легких после внутрихозяйственного лечения и после
комплексного лечения этой патологии.
Полученные нами результаты были
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
обработаны с помощью программы Biostatistic Primer for Windows Компании McGraw-Hill.
Как видно из приведенных данных уровень активности СОД по сравнению с нормой после комплексного лечения приходит в норму, активность каталазы повышается в среднем на 18 ед.акт/мг гемоглобина, активность пероксидазы повышается в среднем на 4 мкмоль пероксида водорода/л×мин×103, глутатионредуктазы – на
91 ммоль окисленного глутатиона/л×5 мин,
концентрация глутатиона восстановленного – на 0,6 ммоль/л, что соответствует динамике восстановления антиоксидантного
статуса организма в целом.
Из таблицы 2 можно заключить, что
разница значений показателей антиоксидантной активности крови после комп-
лексного лечения и после внутрихозяйственного лечения соответственно составляет: уровень активности СОД меньше на
0,32 ед. акт/мг гемоглобина, уровень активности каталазы больше на 5,82 мкмоль
пероксида водорода/л×мин×103, уровень
активности пероксидазы больше на 3,23
ед.опт.пл/л×с, глутатионредуктазы больше
на 43,6 ммоль окисленного глутатиона/л×5
мин, концентрация глутатиона восстановленного больше на 0,383 ммоль/л, следовательно, комплексное лечение более эффективно по сравнению с внутрихозяйственным.
Применение синтетических антиоксидантов позволяет восстановить антиоксидантную активность крови животного, при
этом увеличивается эффективность терапии хронических заболеваний легких.
SUMMARY
On reciving information by the help modern equipment one can narrow the borders of standart indicators
of the antioxidative system of horses`blood, to cleus the fact, that existing some “crucial moment” in the
disease pathogenesis – when antioxidative system of an organism doesn`t manage with metabolits appearing during the disease – and indicators of the antioxidative activity are sharply reducing. The value of those
increasing indicators of the antioxidative blood system such as: catalase, peroxidase,glutathione reductase
and glutation redused after the course of emicidine for animals.
УДК 619:615.9
С.В. Енгашев, М.В. Арисов
«НВЦ Агроветзащита», Нижегородская ГСХА
ИЗУЧЕНИЕ ТОКСИЧЕСКОГО ВОЗДЕЙСТВИЯ
НА ОРГАНИЗМ ЖИВОТНЫХ НОВОГО
ИНСЕКТОАКАРИЦИДНОГО ПРЕПАРАТА
ДЕЛЬЦИД
Введение
Дельцид, содержащий в качестве действующего вещества 4% синтетического
пиретроида дельтаметрина: { 1R- ( 1 - альфа (S), 3-альфа}-циан (3-феноксифенил)метил-3-(2,2-дибром-этинил)-2,2-диметилциклопропанкарбоксилат)}, а также неонол, нефрас и другие вспомогательные
компоненты.
По внешнему виду препарат представляет собой маслянистую прозрачную жидкость желтовато-коричневого цвета, со
слабым специфическим запахом; хорошо
эмульгирует с водой, образуя стойкую белую эмульсию.
Дельцид является инсектоакарицидным средством кишечно-контактного
действия, активен в отношении саркоптоВетеринарная патология. № 2. 2008
идных, иксодовых, куриных клещей, постельных клопов, пухопероедов, вшей, блох,
мух, слепней, комаров и других эктопаразитов животных.
При разработке и изучении ветеринарного препарата необходимо в первую очередь исследовать реакции, возникающие в
организме животных под влиянием изучаемого лекарственного средства. Целесообразность передачи нового препарата в
практику, а также возможные области его
применения могут быть полностью выяснены только в результате количественной
и качественной оценки разных сторон его
фармакотоксикологичесих эффектов. Одним из основных вопросов, возникающих
при изучении фармакотоксикологических
характеристик любого препарата – это па119
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
раметры острой токсичности, его потенциальная опасность. Параметры острой токсичности необходимы для установления
степени опасности лекарственного средства, а также для дальнейших исследований, где требуются значения максимально
переносимых доз.
Материалы и методы исследований
Изучение фармакотоксикологических
свойств препарата дельцид проводилось в
условиях однократных и повторных экспериментов с привлечением ряда токсикологических показателей. Использовались 3
вида лабораторных животных: белые крысы-самцы, белые мыши и кролики. Исходный вес животных колебался в пределах: для мышей 19-23 г, крыс – 210 – 230 г, кроликов 2,0 – 2,3 кг. В опыт брали клинически здоровых животных, которые предварительно находились на 15- дневном карантине. На протяжении всего опыта животные содержались в виварии института.
Статистические группы состояли из 6-10
животных.
Изучение острой токсичности при введении в желудок проводилось на белых
беспородных крысах-самцах и на мышахсамцах методом Кербера в модификации
Прозоровского. Препарат вводился в желудок с помощью металлического зонда с
оливой на конце. Действующие дозы рассчитывали на 1 кг массы тела (Беленький
М.Л., 1963).
Исследование кумулятивных свойств
дельцида проводилось по методу Лима (Lim
et all, 1961) на крысах и мышах. Первоначально вводимая доза составляла 0,1 от однократной ЛД50. Через каждые 4 дня эта
доза увеличивалась в 1,5 раза. Коэффициент кумуляции вычислялся по отношению
средних летальных доз острого и подострого экспериментов, т.е. ЛД50 n / ЛД50i. Оценка
указанного эффекта проводилась с учетом
общепринятого представления о том, что
коэффициент меньше 1, свидетельствует о
наличии кумулятивных свойств, а больше 1
– о развитии повышенной резистентности
к изучаемым соединениям.
Исследования по острой ингаляционной токсичности дельцида выполнены на
30 белых крысах-самцах (160-180 г) и 20
белых мышах-самцах (20-22 г) (Van des
Waerden, 1940, 1950).
В исследованиях использовали 4% концентрат эмульсии дельцида, который разводили из расчета: 10000, 8000 и 6000 мг/м3.
Концентрация 10000 мг/м3 в данных условиях эксперимента являлась максимально
достижимой.
120
Ингаляционному динамическому воздействию животные подвергались в аэрозольно-паровых камерах. Каждое животное помещалось в специальный дюральалюминевый домик для предотвращения
попадания препарата на шерстный покров.
Для обеспечения стабильности концентрации аэрозоля в ингаляционных камерах использовали дозирующее устройство, которое обеспечивало плавную подачу вещества на форсунку в строго заданных количествах. Основными функциональными узлами устройства являлись перистальтический насос НП-01, а также два совмещенных сосуда, один из которых заполнялся
водой, выполняя роль барьера между сосудом с изучаемым веществом и перистальтической трубкой насоса. Величину аэрозольных частиц препарата определяли путем отбора их на предметное стекло, покрытое вазелиновым маслом, с последующим анализом с помощью окуляр микрометра. Контроль за содержанием вещества в воздухе камеры осуществлялся путем отбора проб с помощью аспиратора на
поглощающие фильтры АФА-ВП-10. Скорость аспирации воздуха 5 мл/мин, объем
– 20-25 л. Концентрацию препарата в отобранных пробах определяли фотоколориметрическим методом с орциновым реактивом. Метод основан на изменении оптической плотности в ультрафиолетовой области спектра. Чувствительность метода
0,0001 мг в 1 мл.
При исследовании острой ингаляционной токсичности дельцида для крыс и
мышей экспозиция составляла 4 часа. В
камере осуществлялся 6-ти кратный обмен воздуха при температуре воздуха камеры 18-20 0С, относительной влажности
– 78-82%. Дисперсный состав аэрозольных частиц в камере – от 5 до 10 микрон
составлял от 76 до 80% в зависимости от
концентрации вещества.
Изучение местного и кожно-резорбтивного действия дельцида проводилось в
2-х сериях опыта. 1-ая серия предусматривала острое однократное воздействие препарата на крысах, а 2-ая серия – экспозиция воздействия препарата 5 раз с интервалом 5 суток.
В 1 серии определение параметров острой кожной токсичности дельцида проводили на 42 белых беспородных крысах
массой 200 г. За сутки до постановки эксперимента выстригали участок кожи площадью 5х6 см2 в области спины.
Дельцид наносили в форме эмульсии
в диапазоне доз от 1800 до 8400 мг/кг. На
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
каждую дозу препарата использовали по 6
крыс. Препарат наносили на выстриженный участок кожи однократно в соответствующих дозах. После нанесения препарата, животных помещали в индивидуальные
камеры на 4 часа во избежание потерь дельцида. В дальнейшем животные содержались в обычных клетках.
В течение 7 суток после начала опыта
вели наблюдение за внешним видом, состоянием и поведением крыс. Отмечали время, степень проявления признаков токсикоза, а также падеж животных.
Параметры острой кожной токсичности определяли по Керберу. Вычисляли кожно-оральный коэффициент (Кк/о) по формуле: ЛД50cut/ЛД50caster, характеризующий
опасность кожно-резорбтивного действия
препарата. Принято, что чем меньше величина Кк/о, тем выше опасность проникновения препарата через кожу и наоборот.
Во 2 серии опыта на кроликах проводились исследования по подострой накожной
токсичности дельцида.
За сутки до начала опыта на участках
кожи в боковой области (справа), предназначенной для аппликации и составляющей около 5% от общей поверхности кожи (6х6 см2), ножницами выстригали волосяной покров. Дельцид наносили в виде 4%
эмульсии. Препарат применяли в дозе 600
мг/кг 5 раз с интервалом 5 суток.
В течение всего опыта (более 1 месяца) вели наблюдение за общим состоянием, поведением животных, приростом
массы тела, проявлением аллергических
реакций.
Оценку состояния кожи после однократного и повторных нанесений эмульсии дельцида проводили визуально по выраженности эритемы и отека по балльной
системе.
Кожно-резорбтивное действие дельцида оценивали по ряду специфических и интегральных показателей на стадии первичных реакций (1-3 суток после применения)
и в более дальние сроки.
Кровь для исследований брали из ушной вены, мочу собирали в метаболитных
камерах после водной нагрузки. Для определения гематологических показателей
использовали цельную кровь (с гепарином), для биохимических - готовили сыворотку крови.
Влияние эмульсии дельцида на периферическую кровь кроликов исследовали
по определению количества эритроцитов,
лейкоцитов, лейкограмме, уровню гемоглобина, цветного показателя через сутки
после первого и последнего нанесения по
общепринятым методам.
Функцию печени и состояние белкового, жирового и углеводного обмена оценивали по ряду биохимических показателей
в сыворотке крови. Определение проводили спустя сутки после первой обработки и
после окончания опыта.
Для изучения влияния дельцида на слизистые оболочки глаза препарат в дозе
50 мг вносили в конъюнктивальный мешок глаза кроликам. Было исследовано 6
животных. Наблюдение за их состоянием
проводилось в течение 2-х недель.
Результаты исследований
Острая токсичность препарата
дельцид при введении в желудок
В опыте использовались белые беспородные крысы самцы (42 гол.) и белые мыши (42 гол.). Крысам препарат вводился в
чистом виде в дозах от 600 до 1800 мг/кг,
мышам – в виде рабочего раствора в диапазоне доз 50 – 1000 мг/кг.
Обозначения:
Z – среднее арифметическое из числа животных, у которых отмечен учитываемый
эффект под влиянием 2-х смежных доз; d –
интервал между двумя смежными дозами.
Определение ЛД50= ЛД100 – Σ Zd : n = =1800
– 3600 : 6 = 1200,0 мг/кг.
Методом пробит-анализа определяли ЛД16
и ЛД84:
ЛД16 = 1050 мг/кг; ЛД84 = 1600 мг/кг.
Стандартную ошибку устанавливали по
формуле:
S=√ КхSхd,
n
где К = 0,564; d – средний интервал между дозами;
S=(ЛД84 – ЛД16) : 2 = (1600 – 1050) : 2 = 275
S = √ 0,564х275х200= 71,9
6
Таблица 1
Параметры острого токсического действия дельцида для крыс при введении в желудок
Доза, мг/кг
гибель
Z
d
Zd
600
0/6
1,0
200
200
800
2/6
1000
2/6
2,0
200
400
Ветеринарная патология. № 2. 2008
1200
3/6
2,5
200
500
1400
3/6
3,0
200
600
1600
5/6
4,0
200
800
1800
6/6
5,5
200
1100
121
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица 2
Параметры острого токсического действия дельцида для мышей при введении в желудок
Доза, мг/кг
Гибель
Z
d
Zd
50
0/6
0,5
250
125
300
1/6
550
2/6
1,5
250
375
800
3/6
2,5
250
625
900
4/6
3,5
100
350
950
4/6
4
50
200
1000
6/6
5,0
50
250
Таблица 3
Вид животных
крысы
мыши
ЛД16, мг/кг
1050
350
ЛД50, мг/кг
1200±72
679±79
Таким образом, ЛД50 дельцида для крыс
с учетом стандартной ошибки составила
1200±71,9 мг/кг, что дает основание отнести
данный препарат к III классу токсичности –
умеренно опасные по ГОСТ 12.1.007-76.
Расчет параметров острой токсичности
для мышей проводился аналогично. В связи с чем, среднесмертельная доза препарата составила:
ЛД50 = 1000 – 1925 : 6 = 679,2 мг/кг
ЛД16 и ЛД84, определенные методом
пробит-анализа составили 350 и 1200 мг/кг,
соответственно.
ЛД50 дельцида с учетом стандартной
ошибки – 679,2 ± 79,9 мг/кг, что относит
данный препарат к III классу умереннотоксичных соединений.
Для оценки опасности развития смертельного отравления дельцида помимо
величины ЛД50, указывающей на степень
токсичности, были использованы различные показатели вариабельности смертельных доз: ЛД84 / ЛД16; величина S – функция
угла наклона прямой смертельных доз к
оси абсцесс:
S = (ЛД84 : ЛД50) + (ЛД50 : ЛД16)
2
Коэффициент:
1
К=
ЛД50 х S ,
Которые являются наиболее объективными критериями опасности препарата
(И.П. Уланова и соавт., 1967). Полученные
результаты представлены в таблице 3.
Таким образом, как следует из сводной
таблицы дельцид при введении в желудок
относится к умеренно токсичным соединениям как для крыс, так и для мышей. Малая величина коэффициента «К» и функция угла наклона «S» свидетельствуют о
незначительной опасности острого смертельного отравления дельцида при введении в желудок (И.П. Уланов, 1970).
Кумулятивные свойства дельцида
Опыт проводили на 60 белых мышахсамках живой массой 19-20 г, которые по
122
ЛД84, мг/кг
1600
1200
S
1,22
1,85
K
0,001
0,001
принципу аналогов были разделены на
2 группы по 30 мышей в каждой. Животные первой группы получали испытуемый
препарат, животные второй группы служили контролем. Препарат вводили животным ежедневно, индивидуально, при помощи шприца с оливой, алиментарным путем
в виде водной эмульсии. Все животные содержались на стандартном корме, одинаковом для обеих групп. В течение 25 дней
за всеми животными вели наблюдения. В
течение первых четырех дней животные
опытной группы получали препарат в дозе
равной 0,1 ЛД50. Через каждые четыре дня,
на пятый дозу увеличивали в 1,5 раза.
В течение опыта вели наблюдение за
животными, отмечали их смертность. Результаты опыта приведены в таблице 4.
Расчет параметров токсического действия при многократном введении в желудок представлен в таблице 5.
Определение ЛД50= ЛД100 – Σ Zd : n
ЛД50 = 4644 – 71408,4 : 30 = 2263,7 мг/кг
Методом пробит-анализа определяли ЛД16
и ЛД84:
ЛД16 = 780 мг/кг; ЛД84 = 3200 мг/кг.
ЛД50 дельцида с учетом стандартной ошибки – 2263,7 ± 119,2 мг/кг
Используя формулу Кагана-Станкевича определили коэффициент кумуляции:
К=
ЛД50 многократно 2263,7
=
= 3,33
ЛД50 однократно
679,2
Суммарная доза (ЛД50 – многократная),
вызвавшая 50% гибель мышей равнялась
2263,7 мг/кг. Разделив эту величину на ЛД50
при однократном введении, получили, что
коэффициент кумуляции равен 3,33. По
классификации веществ по кумулятивным
свойствам эмульсия дельцида относится к
группе веществ со слабо выраженной кумуляцией.
Острая токсичность дельцида при
ингаляционном воздействии
Учитывая то, что животные обрабатываются дельцидом методом купания и опВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица 4
Изучение кумулятивных свойств препарата дельцид
Периоды
введения (сут)
1-4
5-8
9-12
13-16
17-20
21-24
25-28
29-32
Ежедневно вводимая доза мг/кг
67,9
102
153
229,5
344
516
774
1161
Суммарная доза
препарата мг/кг
271,6
408
612
918
1376
2064
3096
4644
Было/
пало
30/0
30/2
30/5
30/9
30/10
30/15
30/19
30/30
%
0
6,1
16,6
30
33,33
50
63,33
100
Таблица 5
Суммарная
доза, мг/кг
Гибель
Z
d
Zd
271,6
408
612
920
1376
2064
3096
4644
30/0
1
136,4
136,4
30/2
3,5
204
714
30/5
30/9
30/10
9,5
456
4332
30/15
12,5
688
8600
30/19
17
1032
17544
30/30
24,5
1548
37926
7
308
2156
Таблица 6
Концентрация
по ДВ, мг/ м3
10000
8000
6000
Летальность, %
Крысы
80
20
0
Мыши
100
*0
*-не испытывали
Таблица 7
Параметры токсического действия дельцида для крыс при ингаляционном воздействии
Концентраци, мг/м3
Гибель
6000
10/0
Z
d
Zd
8000
10/2
1,0
2000
2000
рыскивания, мы посчитали необходимым
провести данный эксперимент.
В условиях ингаляционного пути поступления в опытах на белых крысах и мышах испытывали 3 концентрации: 6000,
8000 и 10000 мг/м3, где последняя концентрация является максимальной в данных условиях опыта.
Данные по летальности крыс и мышей
при остром ингаляционном воздействии
дельцида представлены в таблице 6.
Из представленных данных следует,
что концентрация 10000 мг/м3 являлась
высокотоксичной для крыс и мышей, и летальность в данном случае составила 80 и
100%, соответственно. Клиническая картина интоксикации была однотипной для
обоих видов животных и характеризовалась следующими симптомами: заторможенность, адинамия, слабое реагирование
на внешние раздражители, боковое полоВетеринарная патология. № 2. 2008
10000
10/8
5,0
2000
10000
жение, учащенное дыхание. Отмечали незначительные серозные выделения из носа и глаз, что свидетельствует о раздражающем действии препарата. Гибель животных наступала в течение суток. При воздействии дельцида на организм крыс в
концентрации 8000 мг/м3 гибель составила 20%. Аналогичные клинические признаки интоксикации были выражены в
меньшей степени.
Для крыс параметры острой токсичности были определены методом Кербера в модификации Прозоровского (метод
пробит-анализа) (таблица 7). Для мышей
использовался метод «одной точки» (Van
des Waerden, 1940), который предусматривает графическое определение ориентировочного уровня на прямой, параллельной графику, полученному на крысах, при
этом ЛК50 для мышей составила 6800 мг/
м3 (таблица 8).
123
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица 8
Острая ингаляционная токсичность дельцида
Вид животных
Параметры острой токсичности в мг/м3
ЛК50
ЛК84
8070
10020
6800
7300
ЛК16
7800
5800
Крысы
Мыши
Таблица 9
Параметры острого токсического действия
дельцида для крыс при накожном применении
Доза, мг/кг
пало/было
1800
0/6
0,5
200
100
Z
d
Zd
2000
1/6
2800
2/6
1,5
800
1200
4200
3/6
2,5
1400
3500
5600
3/6
3,0
1400
4200
7000
4/6
3,5
1400
4900
8400
6/6
5,0
1400
7000
Таблица 10
Гематологические показатели периферической крови кроликов
при накожном пятикратном нанесении дельцида
Гематологические
показатели
Эритроциты, 10 12/л
Лейкоциты, 109/л
Нейтрофилы палочкоядерные
Нейтрофилы сегментоядерные
Эозинофилы
Лимфоциты
Моноциты
Гемоглобин, г/л
СОЭ, мм/г
Цветовой показатель
После первого нанесения
опыт
контроль
3,60±0,50
3,80±0,30
4,00±0,60
3,80±0,40
Гемограмма, %
0
0
9,00±2,00
10,50±0,50
1 ,00±0,00
1 ,00±0,00
85,50±5,50
86,50±1,50
4,5±2,50
4,0±0,76
118,0±2,38
99,5±11,50
1 ,50±0,50
1,50±0,50
0,95±0,05
0,80±0,10
Определение ЛК50= ЛК100 – Σ Zd : n
ЛК50 = 10070 – 20000 : 10 = 8070 мг/м3.
Методом пробит-анализа определяли
ЛК16 и ЛК84:
ЛК16 = 7800 мг/м3; ЛК84 = 10020 мг/м3.
Стандартная
ошибка
составила
353,8 мг/м3
Таким образом, согласно классификации ГОСТ 12.1.007-76 дельцид по острой
ингаляционной токсичности для крыс и
мышей относится к 3 классу опасности.
Местное и кожно-резорбтивное действие дельцида
Настоящее исследование проводилось
в опытах на крысах в условиях однократного воздействия и на кроликах при нанесении препарата 5 раз с интервалом 5 суток, что в 2,5 раза превышает дозу практического применения. Кроме того, в опытах на кроликах проводилось изучение
действия дельцида на слизистые оболочки глаз.
Определение параметров острой токсичности дельцида при однократном нанесении на кожу белых крыс
В однократном опыте дельцид наносился на выстриженный участок кожи белых крыс в диапазоне доз от 1800 до 8400
124
После последнего нанесения
опыт
контроль
4,10±0,40
3,65±0,21
7,55±0,45
7,36±1 ,43
0
12,50±5,51
1 ,00±0,00
71,50±6,51
3,0±1 ,00
113,0±8,05
1,50±0,50
0,84±0,04
0
12,50±6,06
1,25±2,48
78,75±8,28
5,0±1 ,22
94,0±4,98
1 ,75±0,47
0,77±0,08
мг/кг. На протяжении 2-х недель после введения за животными вели наблюдение. Отмечали время, степень проявления интоксикации, а также гибель животных. В результате получены следующие данные.
Через 4 часа после нанесения эмульсии
дельцида препарат практически отсутствовал на коже. Отмечали незначительное
покраснение кожи, которое проходило в
течение первых суток после нанесения.
При аппликации токсических доз дельцида в первые 2 суток после воздействия
у опытных животных не отмечали изменений внешнего вида и видимых нарушений
физиологических функций. Однако в последующие сроки появились признаки интоксикации, характерные для острого отравления препаратом: взьерошенность
шерстного покрова, тремор, судороги, кровянистые истечения из носа и гибель животных в течение 7 суток, что позволило
определить среднесмертельную дозу препарата при накожном нанесении. Результаты представлены в таблице 9.
ЛД50= 8400 - 20900 / 6 = 4916,7 ± 293 мг/кг
ЛД0 = 1800 мг/кг; ЛД16 = 2000 мг/кг; ЛД84 =
= 7000 мг/кг; ЛД100= 8400 мг/кг
По данным изучения острой токсичВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица 11
Показатели функциональной активности печени и состояния
белкового, жирового и углеводного обменов кроликов
при накожном пятикратном нанесении дельцида
Биохимические показатели
Билирубин общий, мкмоль/л
Альбумин, г/дл
Холестерин, мг/дл
Креатин, мг/дл
Глюкоза, мг/дл
АЛТ, ед/л
ACT, ед/л
Триглицериды, мг/дл
После первого нанесения
опыт
контроль
11,66±0,80
12,13±0,85
3,36±0,08
3,70±0,20
90,33±4,26
106,30±10,4
1,33±0,35
1,13±0,07
152,33±7,84
165,33±8,97
46,00±1,16
49,00±1,08
12,33±1,88
22,50±1,50
126,33±3,18
101,00±3,87
После последнего нанесения
опыт
контроль
9,95±0,01
9,10±0,67
3,90±0,00
3,50±0,10
125,50±4,51
135,50±21,3
1.32±0.27
1,90±0,00
164,00±10,1
147,26±9,6
48,00±2,00
54,00±1,7
15,50±1,52
16,50±1,42
122,00±2,2
109,75±12,0
Таблица 12
Влияние дельцида на функциональное состояние почек
Показатели
Суточный диурез, мл/сут.
Общий белок, г/л
Мочевина, мг/дл
Мочевая кислота, мг/дл
После первого нанесения
опыт
контроль
85±1,2
87,5±1,7
64,66±2,14
62,70±3,26
30,33±4,84
33,66±2,01
2,10±0,25
2,68±0,20
ности при введении в желудок (ЛД50gastr) и
при нанесении на кожу (ЛД50сut) расчитавыли кожно-оральный коэффициент.
Кк/о =
ЛД50сut 4916,7
= 4,1
ЛД50gastr 1200
Таким образом, дельцид по величине ЛД50сut (4916,7±293 мг/кг) и по значению кожно-орального коэффициента (Кк/
о= 4,1) относится в соответствии с ГОСТ
12.1.007 к 3 классу опасности – веществам
малоопасные при контакте с кожей.
Местное и кожно-резорбтивное
действие дельцида в подостром
эксперименте на кроликах
Опыт с многократным нанесением дельцида на кожу проводился на 3-х кроликах, массой 2,0–2,3 кг, 3 кролика служили
контролем. Дельцид наносился в виде 4%
эмульсии в дозе 600 мг/кг, составляющей
1/8 от однократной ЛД50 при накожном нанесении 5 раз с интервалом 5 суток.
В течение всего опытного периода внешних признаков токсикоза и гибели кроликов не отмечали. Опытные кролики по
своему поведению, внешнему виду ничем
не отличались от контрольных животных.
Различий в динамике прироста массы
тела у опытных и контрольных кроликов
не отмечали (опыт 2,5 ± 0,3 кг; контроль
2,43 ± 0,25 кг Р > 0,05).
Результаты оценки влияния препарата
на показатели периферической крови кроликов представлены в таблице 10.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
После последнего нанесения
опыт
контроль
82,5±1,4
86,4±1,25
62,20±5,71
64,85±1,76
46,00±2,1
43,50±2,88
2,10±0,16
2,95±0,23
Анализ полученных данных по уровню
гемоглобина, скорости оседания эритроцитов, количеству эритроцитов, лейкоцитов
в лейкограмме показал, что достоверных
различих между опытными и контрольными кроликами не было.
Результаты влияния дельцида на функциональную активность печени и некоторых показателей белкового, жирового и углеводного обмена представлены в
таблице 11.
Как следует из таблицы, все показатели, характеризующие функциональное
состояние печени у животных опытной и
контрольной групп находятся примерно
на одном уровне и статистически не достоверны (Р > 0,05).
Изменения показателей белкового, жирового и углеводного обменов у кроликов
опытной группы также недостоверны по
сравнению с контролем (Р > 0,05).
Функциональное состояние почек после продолжительного введения дельцида
оценивали по показателям суточного диуреза, содержанию белка, мочевины и мочевой кислоты. Мочу собирали в течение
24 часов в метаболические камеры при
нормальной водной нагрузке. Определение мочевины и белка проводили общепринятыми методами.
Дельцид не оказывал отрицательного
влияния на функциональное состояние почек (таблица 12).
При убое у кроликов взвешивали внут125
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица 13
Массовые коэффициенты внутренних органов кроликов после пятикратного нанесения дельцида
Вариант опыта
Дельцид
Контроль
мозг
0,47±0,06*
0,44±0,05
почки
0,63±0,04
0,57±0,07
Органы
легкие
селезенка
0,46±0,05
0,053±0,005
0,49±0,08
0,057±0,03
сердце
0,28±0,03
0,31±0,035
печень
4,65±0,56
4,89±0,39
* - во всех случаях различие между опытной и контрольной группой недостоверно (Р > 0,05).
Таблица 14
Результаты изучения местного раздражающего
действия препарата дельцид на кроликах
№ животного
Кратность
обработки
1
2
3
5
5
5
1
1,5
0
0
Оценка местно-раздражающего действия
в баллах по размеру эритемы, через (в часах)
12
24
48
1
0
0
0
0
0
0
0
0
Таблица 15
10-балльная система оценки раздражающего действия на слизистые оболочки глаз
Интенсивность реакции
Общая оценка в баллах
Раздражающий эффект
Отсутствие реакции
0
отсутствует
Слабая гиперемия
2
слабый
Выраженная гиперемия
4
слабовыраженный
Наличие лакримации
6
умеренный
Наличие выделений
8
выраженный
Длительная, ярко выраженная
гиперемия, лакримация, отек век
10
сильно выраженный
ренние органы и определяли массовые коэффициенты. Результаты представлены в
таблице 13.
Как следует из таблицы, пятикратное
накожное применение дельцида не привело к достоверному изменению массовых
коэффициентов мозга, почек, легких, селезенки, сердца и печени по сравнению с
контрольными животными (Р > 0,05). Имелась тенденция к увеличению относительной массы почек, но изменения носили недостоверный характер.
При анализе местно-раздражающего
действия эмульсии дельцида в настоящем
опыте получены следующие результаты.
При нанесении эмульсии дельцида у одного (более светлой масти) из трех кроликов регистрировали наличие функциональных изменений кожи в виде гиперемии розового тона (1-2 балла, средний балл - 1,5)
и незначительного быстро проходящего
отека кожи (1 балл). Общая сумма баллов
составила 2,5, что позволяет классифицировать местно-раздражающее действие
препарата как слабое (4 класс опасности)
(таблица 14).
Восстановление функционального состояния кожи протекало без постороннего вмешательства в течение 2 суток после
126
прекращения нанесения препарата.
Таким образом, при пятикратном нанесении дельцида в виде 4%-ой эмульсии
в дозе 600 мг/кг гибели, видимых нарушений физиологических функций, проявления клинических признаков интоксикации,
изменений гематологических, биохимических показателей в сыворотке крови и в моче не установлено.
Вышесказанное позволяет сделать
вывод о том, что при данной схеме и форме применения дельцид в опытах на кроликах не обладает кожно-резорбтивным
действием.
Действие дельцида на слизистые
оболочки глаз в опытах на кроликах
С целью изучения влияния дельцида на
слизистые оболочки глаза препарат вводили в коньюктивальный мешок правого
глаза кроликов в виде 0,125% эмульсии полученной путем разведения водой исходного 4%-го концентрата эмульсии. Слизистая оболочка левого глаза служила контролем. В опыте использовали 10 кроликов
массой 2-3 кг.
В опыт брали клинически здоровых
животных, содержащихся на стандартном
рационе и прошедших до начала эксперимента 7-ми дневный карантин. Кроликов
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица 16
Оценка раздражающего действия дельцида
при воздействии на конъюнктиву глаза кролика
Препарат
№ гр.
0,125% эмульсия дельцида
1
2
3
Оценка в баллах через (в часах)
2
3
4
24
4
2
0
0
6
4
2
0
6
4
4
2
разделили на 3 группы, по 3 головы в каждой. Кроликам первой группы в конъюнктивальный мешок вносили по одной капле дельцида, второй по две капли, третьей
– по три капли. Визуальную оценку раздражающего действия проводили через 1, 2, 3,
4 и 24 часа по изменению кровенаполнения
конъюнктивы, наличию лакримаций и состояние роговицы глаза по 10-ти балльной
системе согласно таблице 15.
При нанесении препарата у кроликов
всех групп отмечали гиперемию и слезотечение. У кроликов, которым наносили одну каплю препарата, реакция была слабой,
и исчезла через 3 часа. У кроликов 2 и 3
групп эти явления исчезли через 24 часа.
Таким образом, дельцид обладает слабовыраженным действием на слизистую
оболочку глаза с восстановлением слизистой оболочки до нормы в течение суток.
Выводы
1. ЛД50 дельцида для крыс с учетом
стандартной ошибки составила 1200 ± 71,9
мг/кг, для мышей - 679,2 ± 79,9 мг/кг, что дает основание отнести данный препарат к
III классу токсичности – умеренно опасные по ГОСТ 12.1.007-76. Препарат относится к группе веществ со слабо выражен-
Раздражающий эффект
слабый
слабовыраженный
слабовыраженный
ной кумуляцией. Коэффициент кумуляции
равен 3,33.
2. Для крыс параметры острой токсичности при ингаляционном воздействии (ЛК
3
50) составили 8070 мг/м , ЛК50 для мышей 6800 мг/м3, что позволяет отнести дельцид
к 3 классу опасности.
3. При изучении местного и кожно-резорбтивного действия дельцида получены
следующие результаты: - при однократной
апликации препарата на кожу в диапазоне
доз 1800 – 8400 мг/кг, дельцид по величине
ЛД50cut = 4916,7 мг/кг и по значению кожноорального коэффициента (Кк/о=4,1) относится к 3 классу умеренно-опасных соединений при контакте с кожей.
При многократном нанесении (5 раз)
дельцид оказывал как слабое раздражающее действие (4 класс), так и слабое кожно-резорбтивное, т.к. судя по ряду показателей он способен проникать через неповрежденную кожу в количествах, не представляющих большой опасности для жизнедеятельности организма животных.
4. Дельцид обладает слабовыраженным
действием на слизистую оболочку глаза с
восстановлением слизистой до нормы в течение суток.
РЕЗЮМЕ
Изучены фармакотоксикологические свойства нового инсектоакарицидного препарата дельцид.
Установлено, что по степени токсического действия на организм животных препарат относится к
малоопасным веществам.
SUMMARY
Pharmaco-toxicological properties new insectoacaricid delcid. It is shown that on a degree of toxic action on
an organism of animals the drug concerns to small dangerous substances.
Литература
1. Беленький М.Л. Элементы количественной
оценки фармакологического эффекта // Л.,
Госмедиздат. 1963. с.152.
2. Клиническая лабораторная диагностика в ветеринарии // М., 1985. с. 134-136.
3. ГОСТ 12.1.007-76. Система стандартов безопасности труда: Вредные вещества: Классификация
Ветеринарная патология. № 2. 2008
и общие требования безопасности. М, 1984.
4. Кост Е.А. Справочник по клиническим лабораторным методам исследования // Ред. М. 1975.
5. Lim R.K., Rink K.G., Glass H.G. Arch. Jnternat.
Pharmacodyn, 1961, V. 130, 3-4, 336-353.
6. Van des Waerden. Arch. Exp., Path. U Pharmak.,
1940, 1950, 389-412.
127
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
УДК 619:616.995.122:1-085
М.В. Арисов
Нижегородская ГСХА
РАСПРОСТРАНЕНИЕ ПСОРОПТОЗА
КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
В ХОЗЯЙСТВАХ РЕСПУБЛИКИ КАЛМЫКИЯ
Введение
В настоящее время огромные потери
животноводству наносят инвазии, что объясняется массовым их распространением.
Общеизвестна значительная смертность
различных видов сельскохозяйственных
животных от паразитарных заболеваний.
Поэтому одним из важных условий повышения продуктивности сельскохозяйственных животных и сохранения их здоровья является предотвращение патогенного действия паразитов и экономического
ущерба, причиняемого ими.
Большую опасность представляет поражение животных эктопаразитами – чесоточными клещами, которые причиняют
животноводству огромный экономический
ущерб, складывающийся не только из-за
снижения мясной и молочной продуктивности, ухудшения качества шкур, шерсти
и т.д., но и падежа животных (Демьянович
М.П., 1947; Орлов Н.П., 1951; Дубинин В.Б.,
1954; Никольский С.Н., Суворов П.С., 1971;
Водянов А.А., 1970, 1971, 1974, 1986; Алексеев Е.А., 1988; Стринадкин П.С., 1989 и др.).
Материалы и методы исследований
В период с 2001 по 2006 годы было изучено распространение псороптоза крупного рогатого скота в 10 хозяйствах республики Калмыкия. Во время стойлового содержания было обследовано 1251 корова,
1244 нетелей и 971 голов молодняка крупного рогатого скота.
Для постановки диагноза на псороптоз учитывали эпизоотологические данные, клиническую картину болезни с обязательным микроскопическим исследованием соскобов кожи животных. Соскобы
брались со свежих, не уплотнившихся очагов на границе пораженных и здоровых
участков кожи (не менее чем с 2-3 мест).
Соскобы собирались на матерчатые салфетки или помещались в стеклянную пробирку, открытый конец которой прикрывался плотной матерчатой салфеткой и завязывался ниткой. Затем собранный матеТаблица 1
Зараженность крупного рогатого скота псороптозом
в хозяйствах республики Калмыкия
Наименование района и хозяйства, месяц исследования
коровы
обследовано
всего
«Октябрьский» декабрь
«Кирово» февраль
45
56
«Эксперим. хоз-во» декабрь
«Прудовый» февраль
87
39
«Сухотинский» январь
52
«Чкалово» март
«40 лет ВЛКСМ» январь
48
64
«Цаган-Усн» март
«Кировский» декабрь
«Улан-Хееч» февраль
Всего
39
65
53
548
128
из них
больных
Возрастная группа животных
нетели
молодняк
обследовано
обследовано
ЭИ,
ЭИ,
из них ЭИ,
% всего боль% всего из них
%
больных
ных
Яшалтинский р-он
9
20,0
37
17
30,3
42
Целинный р-он
13
14,9
72
12
30,7
41
Приозерный р-он
15
28,8
64
Приютенский р-он
11
22,9
41
16
25,0
58
Яшкульский р-он
8
20,5
26
9
13,8
49
17
32,1
57
127
23,2
487
8
14
21,6
33,3
36
64
9
27
25,0
42,2
12
18
16,7
43,9
70
26
18
17
25,7
65,4
19
29,7
48
19
39,5
10
18
24,4
31,0
52
47
16
19
30,7
40,4
7
11
19
136
26,9
22,4
33,3
27,9
42
53
46
484
11
13
19
168
26,2
24,5
41,3
34,7
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Рис. 1 Сезонная зараженность крупного рогатого скота псороптозом в хозяйствах республики
Калмыкия
риал этикетировался с указанием наименования хозяйства, номера животного, даты взятия материала. Такие соскобы исследовались в течение 1-2 суток одним или
двумя методами:
1. Свежесобранные соскобы помещались в пробирку, закрывались ватной пробкой и ставились вблизи источника тепла
(при температуре 25 – 30 0C). При наличии
Psoroptes bovis под действием тепла уже
через 5-10 минут клещи начинали перемещаться по стенке пробирки. Видовая принадлежность таких клещей определялась с
помощью микроскопа МБС 2.
2. По методу К.И. Абуладзе (1978) свежесобранные соскобы кожи помещались
в бактериологическую чашку, которая затем ставилась на источник тепла (стакан
или банка, наполненные горячей водой).
Через 15 минут клещи активизировались.
Диагноз на псороптоз считался подтверждённым в случае обнаружении
яиц, личинок, нимф или имаго клещей
Psoroptes bovis, соответственно рекомендаций (Н.П. Орлов, Н.И. Аргинский, С.Н.
Никольский, 1962).
Результаты исследований
При обследовании животных учитывали источники, способы передачи и пути распространения псороптозной инвазии, восприимчивость по половозрастным
группам, условия кормления и содержания
Ветеринарная патология. № 2. 2008
животных. У многих животных наблюдали
интенсивный зуд, имелись очаги поражения на различных участках тела. При обследовании соскобов кожи обнаруживали
клещей Psoroptes bovis всех стадий развития. В результате проведенных исследований, было выявлено, что псороптоз крупного рогатого скота имеет широкое распространение в обследуемых хозяйствах
со значительным поражением скота.
Результаты обследований крупного рогатого скота на наличие клещей-накожников в республики Калмыкия представлены
в таблице 1, рисунок 1.
Из анализа данных таблицы 1, следует, что экстенсивность псороптозной инвазии (ЭИ) в хозяйствах республики Калмыкия составили у коров 13,8 – 32,1%, у
нетелей 16,7 – 43,9% и у молодняка 24,5
– 65,4%. В целом было обследовано 1519
голов крупного рогатого скота, 426 голов
(28,04%) из которых были заражены клещами P. bovis. Степень пораженности возбудителями псороптоза зависит от возраста животных. Так, ЭИ коров в среднем
составляет 23,2%.
Нетели, в среднем по региону поражены на 27,9% с колебаниями от 16,7 до 43,9%
в отдельных хозяйствах республики.
Процент поражения молодняка крупного рогатого скота клещом Р. bovis на
протяжении всего времени исследования
129
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
оставался также достаточно высоким, на
уровне 34,7%.
Исходя из полученных данных, была
выявлена зависимость частоты заражения
крупного рогатого скота в хозяйствах республики Калмыкия от времени года и возрастной группы животных. Так, в среднем,
зараженность коров в декабре отмечалась
на уровне 16,2%, нетелей – 20,2%, молодняка - 25%; в январе: коров – 26,9%, нетелей – 30,3%, молодняка – 39,9%; в феврале: коров – 31%, нетелей – 36,8%, молодняка – 49,6%; в марте: коров – 21,7%, нетелей
– 25,6%, молодняка – 28,4%, рис. 1.
Заключение
С наступлением стабильного похолодания и постановкой скота на стойловое со-
держание выявляются первые случаи заболевания. Это отмечается в первую очередь
в гуртах, где животных содержали скучено, в сырых и тесных помещениях, при несоблюдении режимов и сроков противопсороптозных обработок. В начале зимы
заражение крупного рогатого скота клещами Psoroptes bovis постепенно увеличивается и в январе-феврале экстенсивность
инвазии достигает максимума. Среди молодых животных заболевание распространялось быстрее. Это обусловлено большой
подвижностью и контактами больных животных со здоровыми при беспривязном
содержании. С марта отмечали спад псороптозной инвазии, вновь заболевших животных не отмечали.
РЕЗЮМЕ
Псороптоз крупного рогатого скота в хозяйствах республики Калмыкия имеет широкое распространение со значительным количеством поражения скота (50%). Заражение крупного рогатого
скота клещами Psoroptes bovis в обследованных хозяйствах зависит от времени года и возрастной
группы животных.
SUMMARY
Of cattle psoroptosis in facilities of Republic Kalmykia has a wide circulation with a significant amount of
defeat of cattle (50 %). Infection of large horned livestock with ticks Psoroptes bovis in the surveyed facilities depends on a season and age group of animals.
Литература
1. Абуладзе К.И. Практикум по диагностике инвазионных болезней сельскохозяйственных
животных: монография / К.И. Абуладзе. - М.:
Колос. 1978. 227 с.
2. Алексеев Е.А., Фролов Б.А. Борьба с псороптозом крупного рогатого // Ветеринария. 1988. №
15. С. 36 38.
3. Аюпов Х.В. Гельминтозы сельскохозяйственных животных в Башкирской АССР и опыт оздоровления животных одного района от основных гельминтозов // Автореф. дис… канд. вет.
наук. М., 1954. 25 с.
4. Аюпов Х.В. Дикроцелиоз сельскохозяйственных животных (изучение биологии возбудителя,
эпизоотологии, патогенеза, диагностики, терапии и профилактики): Автореф. дис. … д-ра вет.
наук. М., 1968. 36 с.
5. Аюпов Х.В. Опыт оздоровления мелкого и
крупного рогатого скота от фасциолеза применением суспензии гексахлорэтана // Бюлл. Научно-технических информ. Казанского НИВИ.
1957, Т.2. С.23.
6. Беденкова В.Н. Динамика инвазированности
крупного рогатого скота стронгилоидами и
стронгилятами в хозяйствах по производству
говядины // Бюл. Всес. ин-та гельминтол. 1985.
Вып. 39. С. 48-49.
7. Беденкова В.Н. О причинах формирования очагов гельминтозов в хозяйствах, специализированных по производству говядины //Тез. докл. XI
Всес. конф. по природной очаговости болезней.
Тюмень, 1984. С. 74-75.
8. Водянов А.А. Псороптоз крупного рогатого
скота.// Эктопаразиты животных и борьба с
ними./ Ставроп. книж. изд., 1971. с. 53-93.
9. Водянов А.А. Псороптоз// Болезни овец/ Новочеркасск, 1974. с. 134-143.
10. Водянов А.А., Чаблин О.В. Применение коллоидной серы в борьбе с псороптозом крупного рогатого скота.// Тр. / ВНИИВС. 1971. Т. 40.
с. 344-350.
11. Демьянович М.П. Чесотка. М.: Медгиз, 1947. 56 с.
130
12. Дубинин В.Б. Чесоточные клещи, их биология,
вред в сельском хозяйстве, меры профилактики
и борьбы с ними. М.: Сов. наука, 1954. 172с.
13. Дурдусов С. Д. Эколого-эпизоотологическая характеристика основных гельминтозов и кокцидиозов крупного рогатого скота и меры борьбы
с ними в аридной зоне юга России. // Автореф.
докт. вет. наук, 1999, М., 56 с.
14. Дурдусов С.Д., Лазарев Г.М., Пономарев И.А.
Гельминтозы и их профилактика в хоз-вах местного скотовод. Калмыкии // Тез. докл. обл. сес.
Центр. Сов. ВОГ. М., 1992. С. 20-21.
15. Кузнецов М.И. Аноплоцефалятозы жвачных
животных //М.: Колос, 1972.
16. Кузнецов М.И. Выявление промежуточных хозяев мониезий в условиях степей Нижнего Поволжья //Тр. Всес. ин-та гельминтол. 1959. Т. VI.
С. 20-23.
17. Кузнецов М.И., Шульгин О.Н. Профилактика
гельминтозов овец, свиней и уток при системах
ведения животноводства в колхозе «Россия»
Ставропольского края //Бюл. Н.-техн. инф. Всес.
ин-та гельминтол. 1958. № 4. С. 42-46.
18. Никитин В.Ф. Парамфистоматозы крупного
рогатого скота на Нижнем Поволжье и в Центральном районе Нечерноземной зоны РСФСР //
Автореф. дис. … докт. вет. наук. 1978. 45с.
19. Никитин В.Ф. Пораженность животных гельминтами в хозяйствах мясного направления //
Ветеринария. 1982. Вып. 5. С. 38-40.
20. Никитин В.Ф., Павласек И. Гельминтологическая ситуация в хозяйствах с различной технологией содержания крупного рогатого скота
и роль ассоциации гельминтов и простейших в
заболевании животных //Тр. всес. ин-та гельминтол. 1988. Т. 19. С. 102-110.
21. Никольский С.Н., Водянов А.А. Методы оздоровления овцепоголовья от возбудителя псороптоза.// Тр. / ВНИИВС. 1971. Т. 40. с. 359-360.
22. Орлов Н.Н. , Аргинский Н.И., Никольский С.Н.
Практикум по ветеринарной паразитологии /
М.: Колос, 1962. 319 с.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
23. Орлов Н.П. Чесотка сельскохозяйственных животных и современные методы борьбы с ней.
Алма-Ата. 1951. Т. 3. 240 с.
24. Сайфуллов И.С. Гельминтологическая оценка
методов выращивания молодняка крупного рогатого скота// Дис. ... канд. вет. наук., М., 1969.
25. Сайфуллов И.С. Гельминтологическая оценка
различных способов содержания телят // Ветеринария. 1969. №9. С. 53-55.
26. Сайфуллов И.С. Динамика гельминтозов телят
в специализированных откормочных хозяйствах //Матер. Всес. научн. конф. по проблемам
ветеринарии в животноводческих комплексах и
хозяйствах промышленного типа. Казань, 1972.
С. 132-134.
27. Сайфуллов И.С. Распространение основных
гельминтозов крупного рогатого скота в Московской области// Бюл. Всес. ин-та гельминтол.,
вып. 4, 1970. с. 111-116.
28. Сайфуллов И.С. Распространение основных
гельминтозов крупного рогатого скота в Московской области //Бюл. Всес. ин-та гельминтол.
1970. Вып. 4. С. 111-116.
29. Сайфуллов И.С. Экономический ущерб при
диктиокаулезе и стронгилятозах //Ветеринария.
1985. №2. С. 52-55.
30. Сафронов М.Г. Гельминтофауна сельскохозяйственных животных в Якутской АССР// Сб. тр.
Якутск. НИВС, вып. 1, 1958. с. 78-83.
31. Сафронов М.Г. Гельминты и гельминтозы сельскохозяйственных животных в Якутской области //Автореф. дис. … канд. вет. наук. 1955. 27 с.
32. Скрябин К.И., Шульц Р.С. Гельминты крупного
рогатого скота и его молодняка //М.: Сельхозгиз, 1937.
33. Степанов А.И. Гельминтофауна крупного рогатого скота в Мордовской АССР //Тр. Всес. ин-та
гельминтол. 1962. Т. 9. С. 120-125.
34. Степанов И.А. Гельминты и гельминтозы крупного рогатого скота в Мордовской АССР// Дис.
… канд. вет. наук. ВИГИС, 1962.
35. Степанов И.А. Сезонная и возрастная динамика
главнейших гельминтозов крупного рогатого
скота. Учен. зап. (Мордовск. Гос. ун-т), 1962, №22,
с. 117-134.
36. Стринадкин П.С. Саркоптоидозы животных и
меры борьбы // Проблемы энтомологии и арахнологии / Научн.-техн. бюлл. ВПИИВЭА. Тюмень, 1989. Вып. 34. С. 86-93.
О.Ф. Гробов, Л.П. Дьяконов
Всероссийский НИИ экспериментальной ветеринарии им. ЯР. Коваленко
РАЗВИТИЕ МИКРОСПОРИДИЙ НАСЕКОМЫХ
В КУЛЬТУРАХ КЛЕТОК МЛЕКОПИТАЮЩИХ
Микроспоридии широко распространенные облигатные внутриклеточные паразиты, известны у различных представителей животного мира от простейших
до человека. Из установленных в настоящем более 1200 видов этих патогенов около 70% выявлены у членистоногих, преимущественно у насекомых (59%), включая такие хозяйственно полезные и широко используемые населением виды, как медоносная пчела (Nosema apis, N.ceranae),
шмели (Nosema bombi), тутовый шелкопряд (N.bombycis), китайский дубовый шелкопряд (Vairimorpha antheraeae). Вместе с тем специфичность хозяев для большинства этих паразитических организмов
остается неясной (4).
В ветеринарной практике помимо микроспоридиозов полезных насекомых наибольшее значение имеет Encephalitozoon cuniculi, установленный у различных
видов животных: грызунов (мыши, крысы,
хомячки, морские свинки, кролики), хищников (собаки, песцы, лисы, норки, кошки), жвачных (крупный рогатый скот, козы), приматов. Из мышей также выделены
N.muris и Thelohania apodemi. Сходные паразиты установлены у североамерикансВетеринарная патология. № 2. 2008
кой землеройки, жесткошерстного кролика, лесной и желтогорлой мышей, рыжей
полевки, многососковых мышей, суррикат,
дымчатого леопарда, рыси, хорьков, в головном мозге лошадей совместно с тельцами Негри. Е. cuniculi передается интраутеринно, споры выделяются с мочой пораженных животных. Энзоотические вспышки энцефалитозооноза с признаками поражения центральной нервной системы,
почек, печени, глаз, абортами, неонатальной смертностью известны на фермах кроликов, пушных зверей, у зоопарковых животных, в пометах собак и кошек. У лабораторных животных заболевание преимущественно протекает латентно, паразитов
чаще устанавливают при гистологическом
исследовании ткани (1). В городских условиях заражено 40% грызунов, но случаи их
гибели редки (10).
Encephalitozoon sp - обнаружен в клетках почек, печени, тонкой кишке при гибели птиц (попугаи Agapornis spp) (19,24,25).
Представители этого рода микроспоридий также выделены у медоносной пчелы, у клещей и трематод (4).
Однако наибольшую озабоченность
вызывают случаи поражения микроспори131
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
диями человека. Если сравнительно недавно регистрировали лишь отдельные случаи гибели, чаще детей при врожденном
иммунодефиците, то проблема поражения
оппортунистической инфекцией этими патогенами на всех континентах земного шара при СПИДе стала приобретать массовый характер. К настоящему времени у человека зафиксировано 14 видов микроспоридий, относящихся к 8 родам. Помимо Е.
cuniculi и других представителей этого рода Е. helleni, E. intestinalis, у больных СПИДом пациентов в различных странах мира наиболее обычен возбудитель хронической диареи Enterocytozoon bieneusi. Реже встречаются при различной патологии
- от поражения глаз до общего поражения
различных органов с летальным исходом
- Brachiola algerae, В. vesicularum, В. connori, Nosema ocularum, Vittaforma corneae,
Pleistophora ronneafiei, Trachipleistophora
hominis, T. anthropophthera и представители сборного рода Microsporidium (M. afhcanum, M. ceylonensis (30).
Из перечисленных видов микроспоридий В. algerae была установлена впервые
у личинок комара Anopheles stephensi как
N. algerae (Varva et Unduh, 1970) и в последующем отнесена к роду Brachiola (22).
Уже первоначальные исследования показали, что этот паразит может поражать
не только различные виды комаров рода Anopheles (18), но также различные виды полужесткокрылых, чешуекрылых и
жесткокрылых насекомых (28), развивается при инъекции в клетках подушечек
лап и на поверхности роговицы глаза мышей (28, 30), проходит полный цикл развития в культурах клеток почек кролика при
29°С (26), при 26°, 35°, 37°, 38°С – почек
свиней. Максимальный процент спор с выброшенной полярной трубкой отмечен через 15-30 мин. после их внесения при 35°С,
чуть меньше при 26°С. Образование спор
в клетках культур происходило через 48 и
60 часов соответственно (27), он также развивается в культурах почек обезьян (ЕС),
фибробластах легких человека (HLF) при
30, 36 и 37°С (13, 23, 30). Исследования сыворотки крови многих пациентов с неклассифицированными глазными микроспоридиозами показали у них высокие титры антител к В.algerae (15). Эта микроспоридия
была выделена из роговицы глаз, глубокой
мышечной ткани, абсцессов кожи у 3 больных лиц с подобным поражением. Показано морфологическое, биологическое, серологическое и генетическое подобие выделенных штаммов В.algerae с исходным
132
штаммом от комаров (генетические различия некоторых изолятов составляли около
1%). Предполагается возможность заражения человека спорами этой микроспоридии при укусе комара или с водой (30).
В. algerae и В.vesicularum принадлежат к семейству Tubulinosematidae, к этому же семейству относится патоген дрозофил (Drosophila melanogaster) Tubulinosema ratisbonensis. Выделенные из фруктовых мух споры этой микроспоридии были
инокулированы в культуры клеток млекопитающих и насекомых, культивирование
проводили при 31°С и 37°С. Развитие паразита в виде отдельных небольших очагов
отмечено при 37°С в фибробластах легких
человека. Роста патогена в клетках Vero,
культуре клеток насекомых и при 31°С не
наблюдали. Электронно-микроскопические и генетические исследования показали
идентичность выросших микроспоридий с
вносимым инокулятом (16).
Безусловный интерес представляют отношения широко распространенных в природе микроспоридий тутового шелкопряда и медоносных пчел к клеткам млекопитающих, поскольку человек имеет непосредственный контакт при работе с инфицированными хозяевами и их продуктами.
К N.bombycis - возбудителю пебрины
тутового шелкопряда восприимчивы более 15 видов различных чешуекрылых различных семейств (11, 9). N.apis более специфичен для медоносной пчелы, не способен развиваться в муравьях, личинках мух,
шелковичных червях, но экспериментально к нему восприимчива восковая пчела,
Apis cerana, шмели, возможно, гигантская
пчела, A.dorsata.
R.Ishihara, 1968, сообщает об успешном
культивировании N.bombycis в первично
трипсинизированных клетках эмбрионов
крыс при 28°С. Паразит проходил полный
цикл развития; результаты опытов были
отрицательными при 37°С, а также при использовании клеток эмбрионов кроликов,
мышей и кур при 28°С и 37°С (17). В опытах
лаборатории ВИЭВ А.А.Мещеряковым,
1978-1983, проведено изучение возможности
культивирования Nosema apis, N.bombycis и
известной у более 20 видов личинок комаров Thelohania opacita на первично трипсинизированной культуре почек эмбрионов
крупного рогатого скота (ПЭК) и перевиваемой линии эпителия трахеи этих животных (TR) на питательной среде с 0,5% гидролизата лактоальбумина при температуре 28-29°С для N.apis и N.bombycis и 24-26°С
для Т. opacita (3,5-8).
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Предварительно адаптированные к
росту при низких температурах культуры заражали очищенными спорами N.apis
и N.bombycis в дозах 400-600 тыс. спор/мл
среды и Т. opacita - 10-20 тыс. спор/мл среды. Перевиваемая линия клеток TR была
невосприимчива к заражению N.bombycis,
в отличие от ПЭК. Внесенные в культуры ПЭК споры N.apis и N.bombycis вблизи монослоя выбрасывали полярные трубки, по которым в цитоплазму клеток инъецировалась спороплазма. Прохождение
двуядерных споропазм было зафиксировано в полярной трубке N.apis и на конце
этой органеллы N.bombycis внутри протоплазмы клетки хозяина. На 2-е сутки в
клетках с N.apis можно было выявить одно-, двух- и многоядерные шизонты, на 3-е
сутки - многоядерные шизонты и споробласты, на 4-е и последующие сутки - споры. Число пораженных клеток достигало
10-12%, при этом наблюдали деформацию
ядер шизонтами паразита, атипичное деление ядер, на 6-е сутки наступала вакуолизация цитоплазмы, появление в ней эозинофильных включений, клетки деформировались и распадались.
При N.bombycis процессы шизогонии проходили в течение первых 5 суток,
спорогонии на 6-9 сутки после заражения
культур, на 13 сутки в клетках встречали
только споры, поражалось около 10% клеток. У Т. opacita спорогония отмечена на
8-11 сутки в 20-22% клеток ПЭК. При заражении микроспоридиями чаще поражались эпителиоподобные клетки, чем фиробластоподобные. Изменения в клеткаххозяевах были аналогичны как при N.apis.
Продолжительность полных жизненных циклов развития N.apis и N.bombycis
в клетках ПЭК увеличивалась, практически удваивалась, очевидно, засчет замедленного процесса спорогонии соответственно
до 4 и 9-13 дней по сравнению с развитием
этих паразитов в организмах специфических хозяев: медоносной пчелы - 48 часов
(12) и шелковичного червя - 96 часов (11).
В последние годы значительную озабоченность пчеловодов Европы вызвало распространение новой микроспоридии у медоносной пчелы, выявленной ранее у восковой пчелы в Азии, N.ceranae
Fries et al., 1996. В отличие от N.apis, поражающих пчел весной и лишь изредка осенью, N.ceranae вызывает гибель пчел в течение всего активного сезона насекомых
(2). Этот вид микроспоридий был успешно
прокультивирован на клетках млекопитающих Vero E-6 при 37°С, что приводит авВетеринарная патология. № 2. 2008
торов к заключению об опасности паразита для человека (14).
Анализ приведенных данных показывает, что чаще всего успешное развитие
микроспоридий насекомых происходит на
первично- трипсинизированных культурах
клеток млекопитающих, за исключением
развития N.ceranae в линии клеток Vero E6; преимущественной тканью исследователям служили почки животных и лишь в отдельных случаях фибробласты человека.
Если считать критерием опасности для
человека при нарушенном иммунитете
микроспоридий насекомых возможность
их развития в культурах клеток млекопитающих с учетом температур как фактора
защиты теплокровных от паразитов беспозвоночных (20), то перечисленные выше патогены могут быть распределены на
ряд групп.
Проходящая развитие в клетках различных животных при большом диапазоне температур (26-39°С) и выделенная у
больных людей B.algerae является наиболее изученным опасным паразитом человека и, вероятно, других млекопитающих.
Следует отметить, что развитие рассматриваемой в настоящем как специфическая
микроспоридия человека N.corneae также
происходит при 30, 35 и 37 С (21). У беспозвоночных и других теплокровных не обнаружен этот агент.
Культивированные
при
37°С
T.ratisbonensis от дрозофил в фибробластах легкого человека и N.ceranae от пчел
в Vero E-6, очевидно, имеют большую возможность паразитировать у млекопитающих, хотя о развитии их в организме теплокровных данных нет. Попадание этих микроспоридий в организм возможно соответственно с перезрелыми фруктами (овощами) и с продуктами пчеловодства (медом, пыльцой, пергой) из неблагополучных семей пчел. Возникает необходимость
предварительных исследований этих продуктов, проведения дифференциации микроспоридий при их выявлениях, ограничения их к применению у лиц при СПИДе;
Развитие N.ceranae при 37°С объясняет
факт поражения пчел в активный период
их жизнедеятельности и дифференцирует
этого патогена от N.apis.
Отдельную группу, вероятно, представляют N.bombycis, N.apis и Т. opacita, развитие которых в клетках млекопитающих
происходит при сниженных температурах.
N.bombycis развивается при 28 С, но развитие отсутствовало при 37°С; подобным образом, вероятно, ведет себя N.apis, у кото133
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
рого в пчеле при температуре 10°С образования спор не происходит, при 20°С они появляются через 88 часов, при ЗО°С через
44-48 часов, а более высокие температуры подавляют спорообразование. Т. opacita
развивалась в культуре ткани при 24-26°С.
Развитие N.bombycis и N.apis в клетках почек эмбрионов крупного рогатого скота
вдвое продолжительнее, чем в организме
основных хозяев насекомых, кроме того
поражение 10% клеток в культурах сопровождается атипичным образованием многих связанных тонкими тяжами ядер, которые, по мнению некоторых исследователей (21), представляют защиту паразитам,
подобную ксеному, может указывать на
недостаточно благоприятные условия для
развития этих микроспоридий насекомых
у теплокровных и в силу этого возможно
N.apis и N.bombycis могут представлять наименьшую угрозу для организма млекопитающих. Для этой группы микроспоридий
температура тела теплокровных может
быть защитным барьером, предупреждающим их поражение.
Значение и роль большинства микроспоридий беспозвоночных в патологии
млекопитающих остается открытой. По
аналогии с ВИЧ инфекцией у людей, можно предполагать опасность этих агентов
для крупного рогатого скота, кошек, обезьян, инфицированных вирусами иммунодефицитов, входящих вместе с ВИЧ в род
лентивирусов и других вирусов, вызывающих иммуно дефициты. Требуются дальнейшие исследования в этом направлении.
РЕЗЮМЕ
Проведен анализ результатов собственных исследований и обзор работ по культивированию микроспоридий насекомых: Brachiola algerae, Tubulinosema ratisbonensis, Nosema bombycis, N.apis, N.ceranae,
Thelohania opacita в культурах клеток млекопитающих и оценка возможности их развития в организме теплокровных.
SUMMARY
We’ve reviewed the results of analysis of our investigation and survey on cultivation the insect microsporidium: Brachiola algerae, Tubulinosema ratisbonesis, Nosema bombycis, N.apis, N.ceranae, Thelohania opacita into the cells culture of the mammalian and the possibility of their development in the warmblooded
animals.
Литература
1. Гробов О.Ф., Дроздова Э.И. Энцефалитозооноз
(нозематоз) животных. Обзорная информация.
М. 1979
2. Гробов О.Ф., Сотников А.Н. Возбудители нозематоза. Пчеловодство 2007, 1, 26-27
3. Дубицкий A.M., Левченко Н.Г., Мещеряков А.А.,
Гробов О.Ф. Способ получения спор Thelohania
opacita Kudo, 1922. Авт. свидетельство СССР
№809883 от 3 ноября 1980 г. Приоритет по заявке
№2834718 от 29.10.1979 г
4. Исси И.В. Микроспоридии как тип паразитических простейших. В кн. «Микроспоридии», Наука,
Л, 1986, 6-136
5. Мещеряков А. А. Культивирование микроспоридий в культурах клеток. Дисс. на соиск. уч. ст.
канд. биол. наук, М, 1981
6. Мещеряков А.А. Микроспоридии в культурах
клеток. Пчеловодство, 1983, 11, 13
7. Мещеряков А.А., Дьяконов Л.П., Гробов О.Ф.
Способ получения спор Nosema apis. Авт. свидетельство СССР №836092 от 6 февраля 1981 г.
Приоритет по заявке №2784412 от 19.06.1979 г
8. Мещеряков А.А., Дьяконов Л.П., Панкова Г.Е.,
Данишевский Д.А. Способ получения микроспоридий беспозвоночных. Авт. свидетельство
СССР №980432 от 9 августа 1982 г. Приоритет по
заявке №2754413 от 19.06.1979 г
9. Михайлов Е.Н. Инфекционные болезни тутового шелкопряда. Уктувги, Ташкент, 1984
10. Соколова Ю.Я., Исси И.В. Энтомопатогенные
простейшие и особенности патогенеза протозойных заболеваний насекомых. В кн.: Патогены насекомых: структурные и функциональные
аспекты, под ред. В.В.Глупова. Изд. «Круглый
год», М, 2001, 76-188
11. Штейнхауз Э. Патология насекомых. Изд. Ин.
лит., М., 1952
12. Borchert А. Schadigungen der Bienenzucht durch
Krankheiten, Vergiftungen und Schadlinge der Honigbiene. S.Hirzel Verlag, Leipzig, 1974
134
13. Chioralia G., Maier W.A., Seitz H.M. In vitro replication of Nosema algerae (Microsporidia), a parasite of anopheline mosquitoes in human cells above
36°C. Journ. Eukaryot. Microbiol. 1999, 46, 464-468
14. Delaguila C, Izquerdo F., Palencia P.G., Martin R.,
Higes M., Fenoy S. First steps toward the in vitro
cultivation of Nosema ceranae. Proceeding of the
second European Conference of Apidology. Prague
10-14 Sept 2006, 32
15. Didier E.S., Bessinger T.D. Host-parasite relationships in microsporidiosis animals and immunology.
In.: M.Wittner and L.M.Weiss (Eds). Microsporidia
and Microsporidiosis. ASM Press, Washington D.C.
1999, 225-257
16. Franzen C, Fischer S., Schroeder J., Bleiss W., Schneuwey S., Scholmerich J., Salzberger B. In vitro
cultivation of an Insect Microsporidian Tubulinosema ratisbonensis in mammalian cell. Journ. Eukaryot. Microbiol., 2005, 52(4), 349-355
17. Ishihara R. Growth of Nosema bombycis in primary cell cultures of mammalian and chicken embryos.
Journ. Invertebr. Pathol., 1968, 11,328-329
18. Kelley J.F., Antony D.W. Susceptibility of spores
of the microsporidian Nosema algerae to sunlight
and germicidae ultraviolet radiation. Journ. Invert.
Pathol., 1979, 34, 164-169
19. Kemp R.L., Kluge J.P. Encephalitozoon sp. in
the blue-masked lovebird Agapornis personata
(Reichenow): first confirmed report of the microsporidian infection in birds. Journ. of Protozoology
1975, 22(4), 489-491
20. Kucerova Z., Mouba H., Visvesvara G.S., Leitch G.J.
Differences between Brachiola (Nosema) algerae
isolates of human and insect origin when tested using an in vitro spore germination assay and a cultured cell infection assay. Journ. Eukaryot. Microbiol. 2004, 51, 339-343
21. Leitch G.L., Shaw A.P., Colden-Stanfield M., Scanlon M., Visvesvara G.S. Multinucleate host cells
induced by Vittaforma corneae (Microsporidia)
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Folia parasitol. 2005, 52 (1-2), 103-110
22. Lowman P., Takvorian P.M., Cali A. The effects of
elevated temperature and various time-temperature combinations on the development of Brachiola
(Nosema) algerae n.comb., in mammalian cell culture. Journ. Eukaryot. Microbiol. 2000, 47, 221-224
23. Moura H., Da Silva A.J., Moura J.N.S., Schwartz
D.A., Leitch G.J., Wallace S., Pieniazek N.J., Wirtz
R.A., Visvesvara G.S. -Characterization of Nosema
algerae isolates after continuous cultivation in
mammalian cells at 37°C. Journ. Eukaryot. Microbiol. 1999,46, 149-165
24. Novilla M.N., Kwapien R.P. - Microsporidian infection in the pied-peach-faced lovebird (Agapornis
roseicollis). Avian Diseases 1978, 22(1), 198-204
25. Randall C.J., Lees S., Higgins R.J., HarcourtBrown N.H. Microsporidian infection in lovebirds
(Agapornis spp.) Avian Pathol. 1986,15,223-231
26. Takvorian P.M., Weiss L.M., Cali A. The early
events of Brachiola algerae (Microsporidia) infection, spore germination, sporoplasm structure and
development within host cells. Folia parasitol. 2005,
52(1-2), 118-129
27. Undeen A.H. Growth of Nosema algerae in pig kidney cell cultures. Journ. Protozol. 1975, 22, 107-110
28. Undeen A.H., Alger N.E. Nosema algerae: infection
of the white mouse by a mosquito parasite. Exp.
Parasitol. 1976, 40, 86-88
29. Undeen A.H., Maddox V. The infection of nonmosquito hosts by injection with spores of the microsporidian Nosema algerae. Journ. Invertebr. Pathol.
1973, 22(2), 258-265
30. Visvesvara G.S., Moura H., Leitch G.J., Schwartz
D.A., Xiao L.X. Public health importance of Brachiola algerae (Microsporidia) - an emerging pathogen of humans. Folia parasitol. 2005, 52(1-2), 83-94
УДК 619:615.9:636.7
Л.К. Герунова, С.В. Чернигова, В.Д. Конвай
ФГОУ ВПО Омский государственный аграрный университет,
Омская государственная медицинская академия
МЕТАБОЛИЧЕСКИЕ НАРУШЕНИЯ
У СОБАК, ПОДВЕРГШИХСЯ ИНТОКСИКАЦИИ
НЕОСТОМОЗАНОМ, И ИХ КОРРЕКЦИЯ
ЭНТЕРОСОРБЕНТОМ ЗООКАРБОМ
Особую актуальность проблема острых и хронических отравлений животных
приобрела в последние десятилетия вследствие накопления в окружающей среде огромного количества различных химических соединений – около 10 млн. наименований ксенобиотиков [3].
Постоянным спутником острых отравлений является эндотоксикоз, развивающийся вследствие накопления в организме
эндогенных токсических веществ в результате поражения центральной нервной системы, печени, почек, желудочно-кишечного тракта [4]. Эти поражения требуют проведения лечебных мероприятий.
Детоксикация как один из важнейших
механизмов химической резистентности
направлена на сохранение химического гомеостаза, который обеспечивается кооперативной функцией систем естественной
детоксикации.
В настоящей работе изучали механизмы развития метаболических нарушений
при интоксикации неостомозаном и перспективу использования для их коррекции
энтеросорбции зоокарбом.
Материалы и методы.
Опыты проводили на 15 беспородных
Ветеринарная патология. № 2. 2008
собаках массой 4,5 – 6 кг, подобранных по
принципу аналогов. Их произвольно разделили на 3 группы по 5 животных в каждой. Первую группу «И» составляли интактные животные, вторую «Н» – собаки, которым однократно был введен подкожно
неостомозан в дозе 250 мг/кг массы. Животным третьей группы «Н+З» после инъекции неостомозана вводили энтеросорбент зоокарб в дозе 0,5 г/кг массы 1 раз в
день в течение 7 суток. Состояние животных оценивали по данным клинических наблюдений и изменениям биохимических
показателей через 1, 7 и 14 суток после введения неостомозана. У собак натощак утром из лучевой вены брали кровь, в которой на биохимическом анализаторе-полуавтомате «Микролаб – 300» определяли
концентрацию глюкозы, молочной кислоты, мочевины, креатинина, фракции «средних молекул» (ФСМ), активность аланинаминотрансферазы (АлАТ) и аспартатаминотрансферазы (АсАТ). С плазмой крови
проводили тимоловую пробу. Результаты
исследования подвергали статистической
обработке с использованием программы
STATISTICA. Содержание, питание, уход
за животными и выведение их из экспери135
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
Таблица 1
Биохимические показатели крови интактных собак (И), интоксицированных
неостомозаном (Н) и получавших после затравки Н зоокарб (Н+З), М ± m, n = 5
Показатели
Глюкоза, ммоль/л
Молочная кислота, ммоль/л
Мочевина, ммоль/л
Креатинин, ммоль/л
Аланинаминотрансфераза, МЕ/л
Аспартатаминотрансфераза, МЕ/л
Тимоловая проба, ед.
Фракция средних
молекул, усл. ед
И
3,30±0,09
1,22±0,04
2,99±0,09
80,8±1,6
После интоксикации Н через:
1 сут.
7 сут.
Н
Н+З
Н+З
6,80±0,09*
5,80±0,08*
4,50±0,37*
5,29±0,04*
4,48±0,03*
4,56±0,19
11,61±0,02*
12,61±0,19*
5,47±0,31*
118,0±0,7*
108,0±1,6*
108,0±2,0*
14 сут.
Н+З
3,80±0,17*
3,82±0,06*
4,58±0,01*
96,0±1,5*
21,6±1,03
62,0±1,0*
48,0±0,9*
46,0±1,6*
29,0±1,5*
25,2±0,8
78,0±0,6*
64,0±0,7*
62,0±1,3*
48,0±1,5*
0,36±0,04
0,90±0,03*
0,80±0,07
0,80±0,04
0,60±0,06*
0,25±0,01
0,48±0,01*
0,42±0,02*
0,42±0,02*
0,36±0,01*
* – различия достоверны
мента осуществляли в соответствии с требованиями «Правил проведения работ с использованием экспериментальных животных» (Приложение к приказу МЗ СССР от
12.08.1977 г. № 755).
Результаты исследования и их обсуждение.
Через 3 – 5 часов после введения неостомозана у животных опытных групп «Н»
и «Н+З» отчетливо проявлялись неврологические расстройства: беспричинный лай,
неосознанные движения в пределах вольера, нарушения координации движений.
Кроме того, отмечали повышение саливации, жажду, рвоту и отказ от корма. Через
24 часа животные не вставали, отказывались от приема воды и пищи, были угнетены, апатичны, при заборе крови для биохимических исследований отмечали повышение её вязкости. При этом была выражена сухость видимых слизистых оболочек. В
вольере появился резкий запах препарата.
Результаты исследования крови представлены в таблице 1.
В течение первой недели произошла гибель всех животных группы «Н». У одной
собаки группы «Н+З» в области введения
препарата наблюдали воспаление подкожной клетчатки. Животные этой группы находились в заторможенном состоянии, самостоятельно пили воду лишь в небольшом количестве, отказывались от корма.
Появились признаки кахексии.
В течение второй недели у животных
группы «Н+З» наметилась тенденция к
улучшению общего состояния, а именно:
они стали принимать пищу в небольшом количестве, больше передвигаться по вольеру,
стали реагировать на появление людей вилянием хвоста. У собаки с воспалением под136
кожной клетчатки в этот период вскрылся
гнойно-некротический очаг, вследствие чего была неоднократно проведена обработка линиментом по Вишневскому.
Из представленных в таблице 1 данных
следует, что интоксикация неостомозаном
приводит к повышенной потребности организма в энергетических ресурсах. Концентрация глюкозы в крови через 1 сутки после обработки собак Н превышает
этот показатель у интактных животных
на 106,1% (p<0,001), что, очевидно, связано с усиленным распадом гликогена в печени. Не исключена возможность развития гипергликемии вследствие усиленного образования углеводов из аминокислот
(глюконеогенез). Этот процесс, усиливающийся под действием глюкокортикоидов и
протекающий преимущественно в клетках
печени, почек и слизистой оболочки тонкого кишечника, сопряжен с отщеплением от аминокислот аммиака. Превращение
последнего в мочевину в реакциях орнитинового цикла также протекает в почках и
печени. Увеличение концентрации мочевины в крови собак группы «Н» на 286,6%
по сравнению с аналоговым показателем
у интактных животных (p < 0,001), на первый взгляд, свидетельствует об усилении
глюконеогенеза. Тем не менее, изменение
уровня других исследуемых показателей
дает основание для сомнений в этом. Более
вероятно, что в условиях интоксикации неостомозаном глюкогенез не только не усиливается, но даже тормозится вследствие
повреждения клеток печени.
Свидетельством повреждения последних является повышение активности аланинаминотрансферазы и аспартатаминотрансферазы в плазме крови собак групВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
пы «Н» (соответственно 187,0 и 209,5% по
сравнению с аналогичными параметрами
у интактных животных; p < 0,001 в обоих
случаях) и показателя тимоловой пробы
(на 150,0%; p < 0,001).
Воздействие на организм Н приводит и
к повреждению клеток почек с последующим снижением их способности экскретировать из крови в мочу креатинин. Концентрация последнего в крови собак группы
«Н» превышает аналогичный показатель у
интактных животных на 46,0% (p < 0,001).
Вероятно, по такому же механизму происходит и увеличение содержания мочевины
в крови.
Биологический смысл развившейся в
условиях интоксикации Н гипергликемии
заключается в удовлетворении повышенной потребности организма в углеводах,
вызванной торможением генерации в митохондриях АТФ. Это может быть обусловлено как прямым воздействием на митохондрии Н, так и опосредованным влиянием за счет увеличения в тканях уровня некоторых компонентов ФСМ, способных разобщать процессы тканевого дыхания и окислительного фосфорилирования. Общее количество ФСМ в крови собак, затравленных Н, на 92,0% превышает этот показатель у интактных животных
(p<0,001). Это связано с усиленным поступлением их из поджелудочной железы,
кишечника или других органов, поврежденных активными формами кислорода,
генерируемыми различными ферментными системами [1].
Прямым свидетельством торможения
функции митохондрий под действием Н
является усиление выработки АТФ в реакциях анаэробного гликолиза. Поскольку этот процесс энергетически мало эффективен (при окислении одной молекулы глюкозы генерируется только 2 молекулы АТФ), его интенсификация приводит
к повышенной потребности в углеводах. В
условиях нашего опыта это выражается в
развитии гипергликемии. Окисление большего количества глюкозы в условиях торможения функции митохондрий сопровождается накоплением в тканях молочной
кислоты. Концентрация ее в крови собак
группы «Н» через 24 часа после затравки
на 333,6% превышает аналогичный показатель у интактных животных. Как правило, это может приводить к усиленной выработке активных форм кислорода. Известно, что при закислении тканей усиливается расщепление АТФ до гипоксантина. Интенсивное окисление последнего ксантиВетеринарная патология. № 2. 2008
ноксидазой сопряжено с генерацией этим
энзимом супероксидных радикалов и перекиси водорода, повреждающих фосфолипидные структуры мембран клеток и её
органоидов [2]. Это может привести к повреждению клеток различных органов, особенно печени и почек, где ксантиноксидаза
весьма активна [5].
Опасность повреждения почек и печени усугубляется тем, что в них интенсивно
протекают реакции инактивации различных экзогенных ядов, в том числе Н. Участником этого процесса является НАДФ-Нцитохром Р450- зависимая система гидроксилирования ксенобиотиков, локализованная на мембранах эндоплазматического ретикулума и способная генерировать активные формы кислорода [1]. Источником последнего могут быть и митохондрии, функционирующие в условиях гипоксии [1].
Несмотря на поступление Н в организм собак через кожные покровы, пероральное введение зоокарба предотвращает гибель пяти животных. Защитный эффект его отчасти связан с адсорбцией некоторых токсических веществ, накапливающихся в кишечнике интоксицированных собак и поступающих в дальнейшем в
кровь в виде некоторых фракций средних
молекул (ФСМ). Однако, уровень последних в крови собак группы «Н+З» снижен
лишь в незначительной степени по сравнению с аналогичным показателем у животных, не получавших зоокарб. Он продолжает оставаться более высоким, чем
у интактных собак, к концу первых, седьмых (на 68,0%; р < 0,05 в обоих случаях) и
четырнадцатых суток (на 44,0%; р < 0,001)
исследования.
Более вероятно, что часть попавшего в
организм Н экскретируется в просвет желудка и кишечника, откуда повторно поступает в кровь. Введенный зоокарб прерывает этот процесс, адсорбируя данное вещество. Количество Н в организме снижается,
что уменьшает степень метаболических нарушений. Содержание глюкозы и молочной
кислоты у собак группы «Н+З» через 24 часа после обработки Н на 14,7% (р < 0,01)
и 15,3% (р < 0,01) соответственно меньше,
чем у животных, подвергнутых затравке
без применения зоокарба. В течение последующих недель наблюдения эти показатели
постепенно снижаются, но остаются более
высокими, чем у интактных животных, даже на 14-е сутки исследования.
Снижение под действием введенного
зоокарба явлений гипоксии способствует более эффективной экскреции почка137
ПРОБЛЕМЫ ПРИКЛАДНОЙ НАУКИ
ми продуктов метаболизма. Этот эффект
зоокарба умеренно выражен через 24 часа после затравки Н, когда в крови собак
группы «Н+З» концентрация креатинина ниже на 8,5% (р < 0,05), а содержание
мочевины не уменьшено по сравнению с
аналогичными показателями у животных
группы «Н». На дальнейших этапах исследования снижаются оба показателя. Концентрация мочевины и креатинина в крови
животных группы «Н+З» на седьмые сутки исследования уменьшена соответственно на 52,8% (р < 0,001) и 8,5% (р < 0,02),
а на четырнадцатые сутки – на 60,5% (р <
0,001) и 18,6% (р < 0,01). Тем не менее, эти
показатели превышают аналогичные параметры у интактных собак даже к концу
второй недели исследования.
Уменьшение у животных группы
«Н+З» тяжести гипоксии и, по-видимому,
сопряженной с нею интенсификации свободнорадикальных процессов снижает степень повреждения клеток печени. Активность АсАТ в крови данных собак к концу
первых, седьмых и четырнадцатых суток
наблюдения снижена соответственно на
22,6% (р < 0,001), 25,8% (р < 0,001) и 53,2%
(р < 0,001), а активность АлАТ – на 19,9%
(р < 0,01), 20,5% (р < 0,01) и 38,5% (р <
0,001) по сравнению с аналогичными показателями у животных, обработанных Н без
использования зоокарба. Гепатопротекторный эффект зоокарба в условиях опыта
подтверждается и снижением показателя
тимоловой пробы. К концу первых, седьмых и четырнадцатых суток после начала исследования он снижен соответственно на 11,1%, 11,1% и 33,3% по отношению
к уровню этого показателя у собак группы
«Н», хотя статистически достоверными являются изменения, отмеченные лишь через 2 недели после начала опыта. Вместе
с тем, указанные выше параметры, характеризующие степень повреждения гепатоцитов превышают аналогичные показатели у интактных животных. Поступивший в
организм через кожные покровы Н вызывает стойкие метаболические нарушения,
которые лишь частично поддаются коррекции введенным энтеросорбентом.
Выводы.
1. Отравление собак неостомозаном в
дозе 250 мг/кг массы приводит к нарушению энергетического обмена, что выражается в увеличении уровня гликемии и лакцидемии, а также к повреждению клеток
почек и печени с последующей гибелью
животных.
2. Пероральное введение собакам зоокарба в дозе 0,5 г/кг массы в течение 7 суток не только уменьшает степень нарушения углеводно-энергетического обмена, функции печени и почек при отравлении неостомозаном, но и предотвращает
гибель животных.
3. Зоокарб может быть использован
как средство детоксикационной терапии
при передозировке неостомозана.
РЕЗЮМЕ
Ведение собакам неостомозаном в дозе 250 мг/кг массы приводит к нарушению энергетического обмена, а также к повреждению клеток почек и печени. Лечение собак зоокарбом в дозе 0,5 г/кг массы
в течение 7 суток уменьшает степень нарушения углеводно-энергетического обмена, функции печени и почек при отравлении неостомозаном.
SUMMARY
Injection of neostomozan to dogs at a dosage of 250 mg/kg results in disturbance of energy exchange as well
as breaking down kenal and hepatic cells. Treatment of dogs with “Zoocarb” at a dosage of 0,5 g per 1 kg of
mass weight during seven days reduces, rate of severity in carbohydrate – energetic exchange and dysfunction of a liver and kidneys undergone intoxication with neostomozan.
Литература
1. Алехина, С.П. Озонотерапия: клинические и экспериментальные аспекты / С. П. Алехина, Т. Г.
Щербатюк. Н. Новгород: Литера, 2003. 240 с.
2. Конвай, В.Д. Роль острого нарушения метаболизма пуринов в развитии посреанимационной
патологии печени / В. Д. Конвай, П. П. Золин
// Омский научный вестник. 2003. № 3 (24), сентябрь. с. 168–171.
3. Лужников, Е.А. Физиогемотерапия острых от-
138
равлений /Е. А. Лужников, Ю.С. Гольдфарб. М.:
Медпрактика-М, 2002, 200 с.
4. Пульняшенко, П.Р. Анестезиология и реаниматология собак и кошек / П. Р. Пульняшенко. М.:
Аквариум, 2000. 192 с.
5. Wajner M. Distribution of xanthine dehydrgenase
and oxidase activities in human and rabbit tissues
/ M. Wajner, R. D. Harcness // Biochim. Et biophys.
Acta. Gen. Subj. 1989. V. 991, №1. Р. 7984
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ
ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ
УДК: 57.043:612.111:599
О.Н. Денисова, Г.Ф. Жегунов
Харьковская государственная зооветеринарная академия
КРИОКОНСЕРВИРОВАНИЕ ЭРИТРОЦИТОВ
ДОМАШНИХ ЖИВОТНЫХ
В ветеринарной практике в последние
годы для лечения животных широко используют метод переливания крови. Гемотрансфузия у собак в зарубежной практике используется с 50-х годов и имеет широкие показания к применению, в частности при острой кровопотере, острой гемолитической анемии, хронической анемии,
тромбоцитопении и др. Многие ветеринарные врачи используют кровь, заготовленную на цитратном буфере или “Глюгицире”. Однако такая кровь при положительных температурах может сохраняться в
течение ограниченного периода времени
[3]. При гипотермическом хранении ухудшаются морфофункциональные свойства
клеток. Поэтому создание запасов донорской крови животных возможно лишь при
долгосрочном хранении клеток в замороженном состоянии.
Целью настоящего исследования было
изучение влияния криоконсервирования
на эритроциты домашних животных. Объектом исследования служили эритроциты
быка, лошади и собаки.
Материалы и методы
Для криоконсервирования эритроцитов животных были использованы следующие криопротекторы: глицерин 15% [1];
диметилсульфоксид 10% (ДМСО) [4]; полиэтиленоксида м.м. 1500 15% (ПЭО-1500)
Ветеринарная патология. № 2. 2008
[2]. Замораживание осуществляли путем
погружения контейнера в жидкий азот.
Отогрев после низкотемпературного хранения производили на водяной бане 42-45°
С. Проникающий криопротектор удаляли
серийным центрифугированием. Моделирование трансфузии осуществляли путем
перенесения эритроцитов в среду с физиологической тоничностью при 37° С.
Результаты исследования
Показано, что глицерин в концентрации 15%, в отличие от ДМСО в концентрации 20%, неэффективный для защиты
эритроцитов лошади, быка и собаки при
быстром замораживании в жидком азоте (рис. 1). После криоконсервирования
с ПЭО-1500 в концентрации 15% наблюдается минимальный уровень гемолиза
для всех клеток.
Перенесение эритроцитов после криоконсервирования под защитой ПЭО-1500
и ДМСО в изотонический раствор NaCl
при 37° С дает представление о стабильности клеток в физиологических условиях (модель трансфузии). Как видно из данных, представленных на рис. 2, при перенесении эритроцитов животных, криоконсервированных под защитой ДМСО, в изоосмотические условия при 37° С не выявлено
достоверно значимых отличий в уровне гемолиза вплоть до 24 часов нормотермиче139
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ
Рисунок 1. Уровень гемолиза эритроцитов млекопитающих после замораживания-отогрева под
защитой криопротекторов. Результаты представлены из 8 независимых экспериментов ± средняя
ошибка (М±м)
Рисунок 2. Уровень гемолиза деконсервированных эритроцитов после моделирования трансфузии:
■ – контрольные клетки, □ – клетки, криоконсервированные с ДМСО, – клетки, криоконсервированные с ПЭО -1500. Результаты представлены в виде среднего значения ± средняя ошибка (М±м)
из 8 независимых экспериментов; * - достоверно относительно контроля; р< 0,05
кой инкубации по сравнению с контролем.
Перенесение эритроцитов лошади, быка,
собаки после их криоконсервирования под
защитой ПЭО-1500 в изотонический раствор NaCl при 37° С сразу ведет к резкому возрастанию гемолиза в клеточной суспензии, что свидетельствует о повреждении клеток. Отличия в стабильности эритроцитов животных, криоконсервированных
с ПЭО-1500 от контрольных и замороженных в присутствии ДМСО клеток отмечаются уже в течение первого часа. С течением времени стабильность таких клеток продолжает падать у всех животных. При этом
интенсивность гемолиза продолжает нарастать в течение 24 часов, увеличиваясь с 32–
140
36% в первый час инкубации до 50% по истечении времени контролирования.
Разная стабильность эритроцитов
после низкотемпературного хранения
под защитой ПЭО-1500 в отличие от
ДМСО, возможно, связана с разным механизмом действия криопротекторов,
использованных для защиты клеток при
криоконсервировании, что проявляется
после 24 часов инкубации.
Таким образом, показано, что глицерин
не способен обеспечить защиту эритроцитов исследованных животных при низкотемпературном консервировании. Высокая сохранность клеток достигается использованием ДМСО и ПЭО-1500. ЭритВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ
роциты, криоконсервированные с ДМСО,
в сравнении с ПЭО-1500, проявляют высо-
кую устойчивость (на уровне контроля) в
модели трансфузии.
SUMMARY
The viability of horse`s, bull`s, dog`s erythrocytes after cryopreservation with cryoprotectants have been
sdudied. The results obtained in the work testify to the fact, that DMSO is the most efficient cryoprotectant
during cryopreservation for horse, bull and dog erythrocytes. PEO-1500 is capable to preserve cells during
cryopreservation, but after transferring such frozen-thawed cells under physiological conditions they
undergo damages.
Литература
1. Аграненко В.А., Федорова Л.И. Замороженная
кровь и ее клиническое применение. М.: Медицина, 1983. 96 с.
2. Бабійчук Л.О., Землянських Н.Г., Кузьміна Л.М.
Новий метод кріоконсервування еритроцитів
для клінічної практики // Трансплантологія.
2000, Т. 1, № 1. С. 296–298.
3. Мокеев И. Н. Инфузионно-трансфузионная терапия: Справочник. М. 1998. 232 с.
4. Пушкарь Н.С., Шраго М.И., Белоус А.М., Калугин Ю.В. Криопротекторы. Киев: Наукова думка, 1978. 204 с.
С.И. Дрокин, Б.Б. Дзюба, Т.М. Гурина, Е.А. Гордиенко, П. Тодоров
Институт проблем криобиологии и криомедицины НАН Украины
ОСОБЕННОСТИ КРИСТАЛЛИЗАЦИИ
ВЫСОКОКОНЦЕНТРИРОВАННЫХ СУСПЕНЗИЙ
КЛЕТОК, СОДЕРЖАЩИХ ОСМОТИЧЕСКИ
НЕАКТИВНЫЕ ВНУТРИКЛЕТОЧНЫЕ
СТРУКТУРЫ
При разработке методов криоконсервации спермы рыб разные авторы использовали различную степень ее разбавления
криозащитной средой. Обычно используется разведение 1:1, однако имеются публикации в которых сперму разводили 1:3
[4], 1:5 [3] или даже 1:9 [5]. Степень разведения вероятно подбиралась эмпирически
и до настоящего времени нам не известны
аргументированные объяснения зависимости выживания клеток после криоконсервации от их концентрации в суспензии.
Известно, что при добавлении проникающего криопротектора к клеточной
суспензии по истечении некоторого промежутка времени его концентрация вне
и внутри клеток становиться одинаковой
[1]. Однако, при этом не учитывается, что
клетки могут содержать осмотически неактивные внутриклеточные структуры,
которые недоступны для криопротектора
в качестве растворителя, и, если концентрация этих клеток достаточно высока, то
наличие осмотически неактивных внутриклеточных структур может существенно повлиять на осмотическое давление окружающей клетки среды и температуру ее
кристаллизации.
Процесс перераспределения проникаВетеринарная патология. № 2. 2008
ющего через клеточную мембрану криопротектора между клеткой и окружающей
ее криозащитной средой описывается модифицированным уравнением [2]:
d nin=- 1 [γk(nin-nout)+σnindV ],
(1)
dt
dt
y-α
in
out
где n , n – молярная концентрация криопротектора в клетке и во внеклеточной
среде соответственно, t – время, y – относительный объем клетки (отношение текущего объема клетки V к его начальному
значению), α - объемная доля осмотически
неактивных внутриклеточных компонентов, γ - поверхностно-объемное отношение
клетки, k – коэффициент проницаемости
клеточной мембраны для криопротектора, σ - коэффициент отражения клеточной
мембраны для молекул криопротектора.
Если в криозащитный раствор с концентрацией криопротектора
N
n s= s
Vs
(Ns – количество молей криопротектора в
этом растворе, Vs – объем криозащитного
раствора) внести N клеток с изотоническим объемом V0, то по истечении промежутка времени порядка (γk)-1 концентрации криопротектора вне и внутри клеток
становятся одинаковыми и равными:
141
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ
Ns
ns
=,(2)
NV0(1-σ)+Vs 1+NV0 (1-σ)
Vs
Обычно в криобиологии используется
понятие так называемой конечной концентрации криопротектора в клеточной суспензии:
Ns
ns
Nk=
=
,
NV0+Vs 1+ NV0
Vs
то есть считается, что при смешении раствора с концентрацией Ns с клетками в отношении
Ns
1
=
NV0 m
n∞in=n∞out=n∞=
конечная концентрация раствора в суспензии составляет ns .
1+m
С учетом определения (2) получаем
n (1+m)
n∞= k
1+m(1-γ)
Т.е., реальная концентрация криопротектора в клеточной суспензии при одной
и той же конечной концентрации увеличивается с ростом объемной доли осмотически неактивных внутриклеточных структур
α и с увеличением объемной доли клеток
m в суспензии.
Температура кристаллизации клеточной суспензии при ее замораживании определяется, реальной концентрацией N∞ и,
кроме того, зависит от двух параметров: α
и m. Поскольку на диаграмме плавления
dTкр
Tкр=Tкр(nout) out >0,
dn
то при заданных nk и m температура кристаллизации будет уменьшаться с увеличением объемной доли клеток в суспензии
m и с увеличением объемной доли осмотически неактивных внутриклеточных отсеков α, причем этот эффект будет более
выраженным в области больших конечных концентраций криопротектора, так
как производная dTкр
dnout
при этом будет принимать большее по абсолютной величине значение. Поскольку значение m и ns контролируется экспериментатором и концентрация n∞out, соответствующая измеренной температуре
кристаллизации, определяется по известной диаграмме плавления криозащитного
раствора, то по формуле (2) можно определить объемную долю осмотически неактивных внутриклеточных отсеков, измеряя
температуру кристаллизации клеточной
суспензии. Если диаграмма плавления кри142
озащитного раствора n = n(Tкр) известна,
то, экспериментально измеряя Tкр, находим
nкр(1+n)
n(Tкр)=
,
1+m(1-α)
откуда определяется α.
Таким образом, суммируя теоретические выкладки, можно утверждать, что реальная концентрация криопротектора в
клеточной суспензии увеличивается при
увеличении объемной доли клеток, содержащих осмотически неактивные внутриклеточные структуры. И т.к. температура
кристаллизации клеточной суспензии при
ее замораживании определяется реальной
концентрацией криопротектора, температура кристаллизации будет уменьшаться
с увеличением объемной доли клеток, содержащих осмотически неактивные внутриклеточные структуры, за счет увеличения реальной концентрации криопротектора в окружающей клетки среде.
В связи с тем, что спермии имеют
очень большую осмотически неактивную
составляющую (ядро), для проверки вышеизложенной гипотезы была выбрана
суспензия спермиев карпа. Сперма была
разбавлена собственной плазмой, содержащей криопротектор – этиленгликоль
(ЭГ). При этом варьировалась концентрация клеток в суспензии, а количество вносимого ЭГ и конечный объем замораживаемой суспензии оставались постоянными. Рассчитанная на объем суспензии концентрация ЭГ составляла 1.6 М. Разбавленную сперму охлаждали парами жидкого азота в программном замораживателе.
Скорость охлаждения от комнатной температуры до -40° С была постоянной и составляла 2° С/мин. В качестве упаковки
для образцов выбрали криоампулы фирмы Nunk объемом 1 мл. Объем замораживаемого образца составлял 0,5 мл.
В результате проведенных экспериментов было установлено, что температура кристаллизации замораживаемой
суспензии спермиев существенно снижается при увеличении объемной доли клеток (рис.).
Результаты, приведенные в таблице,
показывают, насколько сильно может изменяться температура кристаллизации
суспензии клеток в зависимости от их концентрации. Очевидно, что для оптимизации технологии криоконсервации высококонцентрированных клеточных суспензий необходимо учитывать концентрацию
клеток в суспензии, если они содержат значимые объемы осмотически неактивных
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ
Рисунок. Термограмма низкотемпературного замораживания суспензии спермы карпа, содержащей
различную концентрацию клеток
Таблица
Зависимость температуры кристаллизации суспензии спермы карпа от концентрации клеток
Конц. млрд/мл
Семенная плазма с ЭГ
0,58±0,11
0,89±0,15
6,35±0,46
16,63±0,56
Т кр. -°С
4,8±0,2
4,8±0,4
5,1±0,1
5,7±0,6
6,58±0,65
(P<0,05)
внутриклеточных структур. То есть, если концентрация таких клеток выше того
значения, для которого был раньше оптимизирован метод криоконсервации, то соответственно концентрацию веществ, составляющих криозащитный раствор и влияющий на температуру кристаллизации, необходимо понизить и наоборот. Это в частности важно учитывать для спермы карпа,
у которой мы часто наблюдаем большие
колебания концентрации спермиев
Мы также предполагаем, что, измеряя
температуру кристаллизации клеточной
суспензии, можно оценить объемную долю осмотически неактивных внутриклеточных структур. Это может послужить
основанием для разработки нового криоскопического метода определения объемной доли осмотически неактивных внутриклеточных структур.
Литература
1. Gordienko EA, Пушкарь НС (1994). Физиологические
основы низкотемпературного консервирования клеточных суспензий, Наукова думка, Киев. С. 103-104.
2. Gordienko EA, Gordienko YuE, Gordienko OI
(2003) Cryoletters 24, 229-224.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
3. Harvey B (1983) Aquaculture 32, 313-320.
4. Legendre M, Billard R. (1980) Reprod. Nutr.
Develop 20, 1859-1868.
5. Magyary I, Urbanyi B, Horvath L (1996). J. Appl.
Ichthyol 12, 113-115.
143
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ
Г.В. Ескин, А.Г. Нарижный
ЦСИО с.-х. животных, ВИЖ
ПОКАЗАТЕЛИ ЗАМОРОЖЕННО-ОТТАЯННОЙ
СПЕРМЫ ПРИ ИСПОЛЬЗОВАНИИ РАЗЛИЧНЫХ
АНТИОКСИДАНТОВ
Учитывая то, что криоконсервация
спермы хряков стимулирует пероксидацию липидов, необходимо как можно в
большей степени предотвращать этот процесс, т.е. защитить мембраны микросом,
митохондрий, особенно чувствительных к
переокислению.
Известно, что оплодотворяющая способность криоконсервированной спермы
снижается по сравнению с использованием свежеполученной спермы (Ерохин А.С.,
1994, Наук В.А., 1996). Поэтому изучение
веществ, оказывающих криопротективное
воздействие на спермии хряков, является
очень актуальным.
К таким веществам могут относиться
природные и синтетические антиоксиданты (Ерохин А.С., и др., 1996, Foote R. H..
Brockett C.C. .Kaproth M.T. 2002).
Ранее для этих целей использовались
такие антиоксиданты как бутилокситолуол, бутилоксианизол, витамин Е.
В данных исследованиях мы использовали такие антиоксиданты как хитозан (натриевая cоль сукцината хитозана) и
эмоксиум.
Хитозан обладает антибактериальными антиоксидантными и сорбционными
свойствами, вследствие чего происходит
замедление процессов перекисного окисления липидов. Кроме того введение хитозана увеличивает вязкость среды, что приводит к снижению повреждений сперматозоидов в процессе замораживания-оттаивания. Что касается антимикробной активности хитозана, то наиболее активное
действие (81,7-85,0%) проявляет хитозан с
молекулярной массой 320 и 350 кДа и степенью деацетилирования 75-85% (Абдулов А.И. и др., 2002).
Низкомолекулярный хитозан с молекулярной массой 20-25 кДа позволяет снизить повреждения мембранных структур
сперматозоидов в процессе глубокого замораживания-оттаивания спермы быковпроизводителей (Фомичев Ю.П., Ерохин
А.С., Стрекозов Н.И., 1995).
Второй антиоксидант – эмоксиум является антиоксидантом, обладающим антигипоксической, ангиопротекторной и антиагрегационной активностью (Смирнов
144
Л.Д., Дюмаев К.М., 1982). В медицине препарат применяется для лечения заболеваний, сопровождающихся усилением перекисного окисления липидов.
Учитывая вышеизложенное, в наших
экспериментах мы исследовали оба препарата, а также их сочетание при криоконсервировании спермы хряков.
Материал
и методика исследований
Для замораживания использовали сперму хряков крупной белой породы в возрасте 2-3 лет линий Сталактит, Сват, Терек,
Кинг, Драчун, ДельфинЗАО «Константиново» Московской области.
Замораживание проводили на ЦСИО
с.-х. животных, а осеменение свиноматок
заморожено-оттаянной спермой в ООО
«Стройпластмасс – Агропродукт» Ульяновской области.
Для замораживания использовали сперму неконцентрированную разбавленную в
соотношении 1:1 со средой.
Свиноматки, которых использовали в
опыте, были основными крупной белой породы после отъема поросят.
Эякуляты, взятые от хряков (по 25 эякулятов в каждом опыте) замораживались
следующим образом:
1 группа - контрольная (замораживание без антиоксидантов);
2 группа - замораживание спермы с антиоксидантом хитозаном (30 мг%);
3 группа - замораживание спермы с антиоксидантом эмоксиумом (30 мг%);
4 группа - замораживание спермы с
комплексом антиоксидантов (по 15 мг%).
После
замораживания-оттаивания
спермы определяли утечку АСТ из сперматозоидов и процент пригодных к осеменению эякулятов.
Осеменение проводилось двухкратно в
одну охоту, объемом спермы 100 мл с подвижностью 30 и более процентов.
Далее изучались показатели воспроизводства свиноматок при осеменении
их спермой с атиоксидантами, а также
оплодотворяющая способность спермы
при хранении ее в замороженном виде 48
месяцев.
Состав среды для замораживания сперВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ
Таблица 1
Влияние введения антиоксидантов в состав среды на устойчивость
спермы хряков к замораживанию (n=25)
Показатели оттаянной спермы
Группа
Контроль (без
антиоксидантов)
Хитозан
(30 мг %)
Подвижность, %
37±0,2
40±2,5
39±1,4
43±3,5
Сохранность акросом, %
48±6,0
57±3,2
56±5,5*
60±4,0*
Выживаемость при 39° С,ч
3,5±0,1
3,9±0,2
3,9±0,2
4,3±0,2*
6±0,2
3±0,4
3±0,4
2±0,05
ТБЧ (усл.ед.)
Эмоксиум
(30 мг %)
Хитозан + эмоксиум (15+15 мг%)
*Р<0,05
Таблица 2
Действие введения антиоксидантов в синтетическую среду на
устойчивость сперматозоидов при замораживании
Группа
Контроль (без антиоксидантов)
Утечка АСТ из сперматозоидов при замораживании и оттаивании
максимальная
Из них после оттаивания с
Заморожено подвижностью 30 и более %
эякулятов
число
%
44
25
57
Хитозан
средняя
44
37
84
Эмоксиум
средняя
44
37
84
минимальная
50
43
86
Хитозан+эмоксиум
мы хряков был следующим: сахароза – 50 г,
глюкоза – 8 г, фруктоза – 8 г, динатрий этилендиаминтетраацетат (ЭДТА) – 4 г, натрий лимоннокислый трехзамещенный пятиводный – 3 г, сульфат аммония – 2 г, трис
– (оксиметил) – аминометан – 0,6 г, вода
дистиллированная – 1000 мл, глицерин – 40
мл, желток куриного яйца свежий – 50 мл.
При введении в среду определенных
доз антиоксидантов хитозана и эмоксиума сперму замораживали на фторопластовых пластинах гранулами 0,5 мл и хранили
в жидком азоте.
Степень перекисного окисления липидов после замораживания-оттаивания
определяли по тиобарбитуровому числу
(ТБЧ), являющемуся показателем степени
перекисного окисления липидов. Анализ
содержания перекисей проводили по методу, описанному A.L. Tappel, H. Zalkin , 1959.
Замороженную сперму перед осеменением или определением качественных показателей размораживали в специальном
устройстве, которое позволяет отделять
жидкую фракцию от твердой с добавлением 3%-ного р-ра цитрата натрия.
Результаты исследований
В первом опыте исследовали устойчивость спермы к замораживанию при использовании антиоксидантов хитозана и эмоксиума, а также их сочетаний (таблица 1).
Ветеринарная патология. № 2. 2008
Как видно из таблицы 1, качественные
показатели спермы после ее замораживания-оттаивания различаются по группам.
При замораживании спермы без антиоксидантов подвижность спермиев позволяет использовать сперму для осеменения,
однако показатели по сохранности акросом ниже, чем у эякулятов, замороженных
с антиоксидантами и особенно с их комплексом на 20,0%, выживаемость при 39° С
– на 0,8 часа, а показатель тиобарбитурового числа в контроле в 3 раза превышает
его в опыте, где использовался комплекс
антиоксидантов. Подвижность спермиев
при этом была выше на 6,0%.
Таким образом, введение антиоксидантов в состав сред перед замораживанием
позволяет значительно повысить качество
заморожено-оттаянной спермы, о чем свидетельствует и показатель утечки АСТ
(таблица 2).
Данные таблицы 2 указывают на то,
что из незащищенных мембран сперматозоидов в контрольной группе наблюдается наибольшая утечка АСТ и наименьшее количество пригодных к осеменению эякулятов. Введение антиоксидантов в состав среды перед замораживанием позволяет снизить до максимума процесс утечки АСТ из спермиев и повысить
на 27-29%, количество пригодных к осе145
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ
Таблица 3
Результативность осеменения свиноматок спермой, замороженной с антиоксидантами
Опоросилось
Осеменено
свиноматок
Группы опыта
число
%
Родилось поросят
всего
на матку
Контроль (без антиоксидантов)
50
28
58,0
258
9,2±0,3
Хитозан (30 мг%)
52
32
61,5
301
9,4±0,3
Эмоксиум (30 мг%)
51
31
60,8
289
9,3±0,2
Хитозан (15 мг%) + Эмоксиум (15 мг%)
55
37
67,3
352
9,5±0,3
Таблица 4
Влияние разных сроков хранения криоконсервированной спермы с
антиоксидантами на результативность осеменения свиноматок
Сроки хранения замороженной спермы, мес.
Осеменено маток
0
Опоросилось
Многоплодие, гол.
Масса поросенка
при рождении, кг
67,7
9,28±0,3
1,26
20
66,7
9,30±0,4
1,28
32
22
68,7
9,27±0,3
1,25
36
29
20
68,9
9,30±0,4
1,27
48
28
19
67,8
9,26±0,3
1,26
число
%
31
21
12
30
24
менению эякулятов. Особенно это заметно при применении комплекса антиоксидантов.
При искусственном осеменении свиноматок заморожено-оттаянной спермой показатели по различным группам приведены в таблице 3.
Прежде всего, введение антиоксидантов, особенно в комплексе, сказалось на
оплодотворяемости свиноматок. Этот показатель выше на 9,3% по сравнению с
контролем. Введение антиоксидантов по
одному дало превышение по опоросам при
введение хитозана – на 3,5%, а при введении эмоксиума – 2,8%.
Что касается многоплодия, то оно изменялось незначительно и по группам составило от 0,1% до 0,3% поросенка.
Поскольку самые лучшие результаты
были получены при замораживание спермы с комплексом антиоксидантов, нами в
течение нескольких лет проводился опыт
по определению оплодотворяющей способности спермы, хранящейся в течение
длительного времени (таблица 4).
Из таблицы 4 следует, что даже через
146
48 месяцев сперма, замороженная с комплексом антиоксидантов практически не теряет своей оплодотворяющей способности. Также это негативно не отражается на
показателях многоплодия и массе поросенка при рождении.
Выводы
Следовательно, при введении в состав среды для замораживания спермы
хряков антиоксидантов хитозана и эмоксиума, а особенно их сочетания значительно повышаются качественные показатели спермы за счет значительного (в
3 раза) сокращения окислительных процессов, происходящих при криоконсервировании.
Оплодотворяющая способность спермы за счет улучшения ее качества увеличивается от 2,8 до 9,3%, что позволяет
уменьшить количество прохолостов и увеличить вход поросят.
Таким образом, наилучшие показатели воспроизводства наблюдаются при введении в состав среды комплекса антиоксидантов (15±15 мг%) хитозана и эмоксиума
перед замораживанием спермы.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ
Г.В. Ескин
ЦСИО c.-х. животных
ВЛИЯНИЕ СПОСОБА РАЗБАВЛЕНИЯ СПЕРМЫ
НА ЕЕ КАЧЕСТВО И ОПЛОДОТВОРЯЮЩУЮ
СПОСОБНОСТЬ ПОСЛЕ ЗАМОРАЖИВАНИЯОТТАИВАНИЯ
Метод криоконсервации спермы позволяет широко использовать искусственное
осеменение в практике свиноводства. Однако при замораживании-оттаивании спермы часть спермиев погибает. Качество заморожено-оттаянной спермы зависит от
многих факторов.
В данных исследованиях мы изучали
влияние способа разбавления спермы перед замораживанием на ее качество и оплодотворяющую способность после замораживания-оттаивания.
Одной из причин гибели спермиев в
процессе замораживания – это замораживание одномоментно больших доз спермы
хряков. Это косвенным образом сказывается и на расходе жидкого азота, при хранении больших объемов спермы, а также
на ее транспортировке.
Поэтому снижение объема замораживаемой спермы имеет очень большое
значение. Для снижения объема спермы ранее применялись способы центрифугирования с последующим удалением части плазмы. Однако результаты не
удовлетворяли исследователей и в даль-
нейшем для замораживания спермы хряков без увеличения объема спермы был
использован метод диализа.
Данная криопротекторная обработка спермы диализом позволяет воздействовать на сперму без увеличения ее объема с одновременным введением защитных
веществ в плазму. Доказано, что разбавление спермы перед замораживанием неблагоприятно действует на сперматозоиды
(Robertson L. Watson P., 1986), к тому же увеличивается ее объем. Метод диализа позволяет исключить разбавление спермы перед
замораживанием, что значительно снижает
объемы замораживаемой спермы.
Диализная обработка спермы производится в специальной диализной камере, внутрь которой помещается сперма. Во
внешние камеры заливается среда, которая насыщает сперму через полупроницаемые мембраны.
Состав среды для использования в диализной камере следующий: лактоза или сахароза – 50 г, глюкоза – 16 г, ЭДТА – 8 г, оксид калия – 0,6 г, оксид магния – 0,4 г гидроксид натрия – 0,3 г, гидроксид калия – 0,1
Таблица 1
Влияние способа обработки спермы на ее качество при замораживании-оттаивании
Способ обработки спермы
Показатели
Обычное разбавление
Обычное разбавление
концентрированной
Разбавление спермы
с помощью диализа
Подвижность, %
37
41
44
Выживаемость при
39° С, усл. ед.
3,3
3,5
3,9
Сохранность акросом, %
45
49
53
Таблица 2
Влияние обработки спермы перед замораживанием на результативность осеменения свиноматок
Способ обработки спермы
Осеменено
свиноматок
Опоросилось
Многоплодие
число
%
Обычное разбавление спермы
45
22
48,9
9,13
Разбавление концентрированной спермы
43
23
54,5
9,21
Разбавление спермы с помощью диализа
49
29
59,2
9,27
Ветеринарная патология. № 2. 2008
147
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ
Таблица 3
Влияние способа обработки спермы на выживаемость
сперматозоидов при замораживании-оттаивании
Из них с подвижностью 30 и более %
Способ обработки спермы
Заморожено эякулятов
число
%
Обычное разбавление спермы
45
23
51,1
Разбавление концентрированной спермы
45
33
73,3
Разбавление спермы диализом
46
38
82,6
г, цитрат аммония трехзамещенный – 3 г,
глицерин – 40 мл, желток куриного яйца –
50 мл, вода дистиллированная - 1000 мл.
В данных исследованиях использовалось обычное разбавление спермы (после
получения спермы отфильтровывались
секреты куперовых желез и сперма разбавлялась 1:1 средой), - обычное разбавление концентрированной спермы (для
разбавления использовалась только густая флакция спермы) и разбавление спермы диализом.
В опытах использовалась сперма основных хряков ЗАО «Константиново» Московской области, замораживание проводилось на ЦСИО c.-х. животных Московской
области. От хряков крупной белой породы
в возрасте 1,5 - 2,5 лет получали сперму и
замораживали ее, разбавляя тремя способами, описанными выше.
Показатели качества спермы в зависимости от способа разбавления приведены
в таблице 1
Из данных таблицы 1 следует, что наилучшим способом обработки спермы перед замораживанием является диализ, т.к.
по сравнению с обычным разбавлением
после оттаивания подвижность после диализа была выше на 7,0% выживаемость на
0,4 часа, а сохранность акросом – на 8,0%.
Спермой, замороженной при различных способах разбавления были осеменены свиноматки подсобного хозяйства. Для
осеменения использовались основные свиноматки после отъема поросят. Доза спермы 100 мл с содержанием 3 млрд. подвижных сперматозоидов в дозе. Осеменение
двухкратное в одну охоту. Данные приведены в таблице 2.
148
Наибольшее количество свиноматок
опоросилось в группе, где производилась
диализная обработка спермы. Этот показатель выше на 10,3% по сравнению с обычным разбавлением спермы и на 5,6% при
разбавлении концентрированной среды.
Многоплодие отличалось незначительно,
превалируя во второй и третьей группах.
При исследовании эякулятов, пригодных для осеменения свиноматок, наилучшее результаты получены при обработке
спермы диализным методом. Данные приведены в таблице 3.
Разбавление спермы методом диализа позволяет значительно увеличить число эякулятов, пригодных для осеменения
свиноматок. По сравнению с обычным
разбавлением при разбавлении концентрированной спермы этот показатель выше на 22,2% а при диализе – на 31,5%. Это
дает значительную экономию при выбраковке спермы после замораживания,
а учитывая, что оплодотворяемость этой
спермы выше, чем при обычном разбавлении, можно сделать вывод о более эффективном использовании спермы, используя
даже один из приемов – способ разбавления спермы.
Но если учесть, что при разбавлении спермы диализом в 2 раза сокращается объем замораживаемой спермы более высокой сохранности акросом сперматозоидов, можно рекомендовать перед
замораживанием-оттаиванием обрабатывать сперму хряков данным способом. Такое преимущество позволит более широко внедрить использование замороженной спермы хряков в селекционно-племенной работе.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ
Д.Н. Калгин
Астраханский государственный университет
ЭФФЕКТИВНОСТЬ АКТИВАЦИИ
ПОДВИЖНОСТИ СПЕРМИЕВ РЫБ С ПОМОЩЬЮ
ФИЗИКО-ХИМИЧЕСКИХ СТИМУЛЯТОРОВ В
ДЕФРОСТИРОВАННОЙ СЕМЕННОЙ ЖИДКОСТИ
Криоконсервация семенной жидкости в итоге приводит к резкому снижению
подвижности спермиев как основного
показателя качества семенной жидкости рыб. По нашим наблюдениям процент
подвижных клеток после дефростации
семенной жидкости не превышает 10%,
считая от общего числа клеток в поле
зрения микроскопа. Как правило, при
этом преобладает колебательное движение, но в некоторых случаях отдельные спермии совершают и поступательное движение. Обращает на себя внимание тот факт, что количество подвижных
клеток после активации водой увеличивается со временем, примерно от единичных спермиев до 4 и более процентов.
Время подвижности спермиев осетра
обычно не превышает 2-х минут. Результаты морфологического анализа на клеточном уровне микроскопирования (мазок спермы) показали, что после замораживания семенной жидкости признаков
деструкции клеток не обнаружено. По
данным опубликованных работ известно снижение количества некоторых метаболитов в семенной жидкости при ее
замораживании. В более ранних работах,
посвященных вопросам замораживания
органов и тканей для гистохимического анализа, было выявлено, что ряд ферментов диффундируют из клетки в межклеточное пространство. Возможно, по
этим причинам спермии теряют подвижную активность при криоконсервации.
На основании собственных и опубликованных данных нами были проведены
исследования с целью активации подвижности спермиев при добавлении растворов неорганических солей обеспечивающих механизм ионного транспорта через
цитоплазматическую мембрану, биологически-активных веществ (эпин и циркон)
используемых как стимуляторы метабо-
лизма клетки, а также электрического
разряда от источника постоянного тока.
В качестве электролитов использовали
растворы карбоната натрия - 0,7%,
С этой целью мы использовали семенную жидкость русского осетра, которую хранили при температуре -196°.
После дефростации каплю спермы наносили на чистое предметное стекло, рядом с этой каплей наносили каплю электролита или биологически активного вещества, быстро смешивали каплю воды
с каплей спермы и, микроскопируя, оценивали процент подвижных клеток, длительность и характер движений. Кроме
того, в качестве дополнительного активатора использовался электроимпульс
от источника постоянного тока. При
этом каплю дефростированной спермы
помещали в межэлектродное пространство, после чего наносили одиночный импульс и также оценивали процент подвижных клеток.
В результате проведённых нами исследований наибольший стимулирующий
подвижность спермиев эффект проявили следующие вещества: раствор Na2CO3
в концентрации 0,7% - число подвижных
клеток возросло на 10%, раствор Эпин
Экстра в концентрации 10-4 мг/мл позволил увеличить число подвижных клеток на 5%, при использовании электроимпульса напряжением 1,5 В количество
подвижных клеток возросло на 7%.
В нашей лаборатории впервые использовали активатор подвижности
спермиев физической природы – одиночный кратковременный импульс. Проведенные нами эксперименты – начальный
этап на пути комплексного всестороннего исследования химических и, в особенности, физических активаторов подвижности и оплодотворяющей способности
дефростированных спермиев.
SUMMARY
In work the fact sheet of experimental researches on activation
of mobility cells the Russian sturgeon after defreezings are presented to a seed liquid. The optimum pressure
of the electric category, concentration of inorganic salts and biologically active substances promoting
increase of quantity mobile cells are shown.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
149
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ
УДК: 639.3.03:597.553.2
К.В. Метальникова
Всероссийский научно-исследовательский институт рыбного хозяйства и
океанографии (ФГУП ВНИРО)
ПОЛУЧЕНИЕ И КРИОКОНСЕРВАЦИЯ СПЕРМЫ
РЕВЕРСАНТОВ – ПЕРСПЕКТИВНЫЙ СПОСОБ
СОХРАНЕНИЯ ГЕНОМОВ САМОК
В 1939 г. Bridges (1939) предложил теорию о влиянии на формирование пола животных помимо количественного соотношения половых хромосом также и «генного баланса всего кариотипа». Впоследствии эта теория получила научное развитие и на рыбах
(Yamamoto, 1969 – Kitano et al., 2004). В 1969
г. Г.М. Персов высказал предположение, что
первичной функцией стероидных гормонов
является контроль мейоза при спермиогенезе и оогенезе, и подтвердил это на лососевых
видах рыб. Впоследствии эта теория была
обоснована экспериментально и на других
костистых рыбах (Colombo et al., 1979). Суть
теории заключается в том, что при формировании половых желез у рыб: в гипоталамусе вырабатываются гонадолиберины (рилизинг-факторы), которые, поступая в гипофиз, регулируют синтез гонадотропных гормонов (ГТГ) гипофизом, ГТГ через кровеносную систему поступают к гонадам, в стероидпродуцирующие клетки, которые есть
у самок и самцов лососевых рыб (Mosyagina
et al., 2004). В этих клетках вырабатываются андрогены, стимулирующие развитие вторичных половых признаков у рыб. Исследования проводились на горбуше, кижуче, молинезии, стальноголовом лососе, атлантическом лососе, трехиглой колюшке и других видах рыб. Все авторы отмечают зависимость андрогенеза у рыб от внешних факторов: от температуры воды (известен температурный оптимум активности ферментов,
вовлеченных в стероидогенез у разных видов рыб), стресса, введения андрогенов через
корм и других внешних факторов. Получившиеся, в результате обработки андрогенами,
реверсанты имеют нормальное поведение,
что обусловливается соответствующими
биохимическими процессами в их организмах (Bhandari, Higa, Nagahama, Nakamura,
2004). Впоследствии исследования были
продолжены и на морских рыбах (Kitano et
al., 2004): японский паралихт или ложный
палтус (Paralichthys olivaceus Temminck et
Schlegel, 1846) - костистая рыба с детерминированным механизмом определения пола, у
которой самки ХХ, а самцы ХУ. ХХ личинки
могут быть переопределены в фенотипических самцов путем выращивания их при вы150
сокой температуре воды или обработкой андрогенами в период дифференцировки пола. Однако механизм влияния высокой температуры воды и механизм влияния андрогенов на переопределение пола не были изучены у ложного палтуса Paralichthys olivaceus
Temminck et Schlegel, 1846, в связи, с чем и
было проведено данное исследование. В результате выяснили, что 11КТ стимулирует
половую реверсию регулированием активности мРНК статистически определяемыми
фенотипическими признаками: активностью
стероидогенетических энзимов (ферментов) и ингибирующим веществом Мюллера
(MIS). Морфологическая дифференцировка
гонад у ложного палтуса наблюдается в 60
дней после вылупления. С этого времени семенные ампулы формировались в видоизмененные семенники спустя 80 дней при действии 11КТ и при повышенной температуре
воды. Через 100 дней ХХ гонады у ложных
палтусов, обработанных 11КТ, имели более
зрелые семенные ампулы, чем у тех рыб, которых выращивали при высокой температуре воды. В результате исследований пришли
к выводу, что 11КТ вовлекался в формирование семенных ампул в период тестикулярной
дифференциации у ложного палтуса. (Kitano
et al., 2004). У пресноводных рыб (Hurk van
Den et al. 1982), как и у исследованных морских рыб, механизм фенотипического определения пола при воздействии андрогенами,
при определенных внешних условиях, носит
общий характер. На основании этой теории
были разработаны методы регуляции формирования вторичных половых признаков у
рыб с использованием андрогенов. К настоящему времени практическое использование
влияния стероидных гормонов на формирование вторичных половых признаков известно более чем у 120 видов рыб. Но наибольшее распространение применение этой методики нашло для лососевых видов рыб.
Лишь некоторые авторы исследовали методику формирования вторичных половых
признаков под внешним воздействием андрогенов у рыб на осетровых гибридах, например бестере (Метальникова, 1989; Omoto
et al.,2002).
В России на форели и стальноголовом
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ
лососе использовали эту методику в период 1978-1996 гг. Для получения половых реверсантов у рыб использовали разные способы: кормили комбикормом с добавками
метилтестостерона (МТ) и тестостеронпропионата (ТП) (на спиртовой и масляной основах) с перехода личинок на внешнее питание, дополнительно купали в
растворе метилтестостерона на стадии выклева (в арктических условиях), использовали форель, полученную с использованием гиногенетической методики (Gorshkov
et al.,1990). При сравнении этих способов
выяснили, что лучшие результаты наблюдали при предварительном купании икры лососей перед вылуплением личинок
в растворе метилтестостерона и дальнейшем кормлении молоди кормами с добавлением андрогенов в конкретных дозировках (таблица 1).
Принципиальное отличие нашей методики от применяемой за рубежом и другими российскими исследователями заключается в отборе реверсантов по фенотипическим показателям, сформированным
не только под воздействием генотипа, но и
внешней среды. Андрогены, проникая через
пищеварительный тракт в кровь рыб, воздействовали на мозг, гипоталамо-гипофизарную систему и гонады, вызывая серьезные соматические перестройки всего организма, стимулируя анаболические процессы на клеточном уровне и переориентируя
формирование вторичных половых призна-
ков у генетических самок (Thorgaard, 1983;
Choy et al., 1996, Метальникова, 1989, 1991,
1995, 2000, 2002; Metalnikova, 2002). После созревания реверсантов, их использовали в скрещиваниях с прижизненным взятием половых продуктов, что позволяло получать половые продукты от одних и тех же
реверсантов ежегодно. Процессы реверсии
пола у обработанных аналогами тестостерона рыб продолжаются после окончания
обработки рыб гормонами и завершаются
формированием у самок вторичных половых признаков полноценных самцов, продуцирующих сперму. При оплодотворении
обычных яйцеклеток такой спермой в потомстве получали преимущественно самок.
У самок, потомства реверсантов в F1, нашли высокодостоверные корреляционные
связи между массой и длиной тела с родительским поколением в одном возрасте: у
форели из НВХ в Калининградской области и у стальноголового лосося в субтропиках (r=(-0,88)-(+0,71) и r=(-0,78)-(+0,75), соответственно при p<0,05). По-видимому,
длина рыбы и масса тела у лососевых передаются по наследству индивидуально, по
линии самок. Внедрение, разработанной во
ВНИРО методики по половой реверсии у
лососей, провели в Заполярье - до взрослых
половых реверсантов и в Калининградской
области с 1990 по 1997 годы с получением
от потомства половых реверсантов молоди в следующем поколении (Метальникова,
1995; Метальникова, Голубев, 2000; МетальТаблица 1
Схема экспериментов и результаты влияния андрогенов на гонады форели
Oncorhynchus mykiss
(Walbaum), место работы,
год, местное название рыбы
Дозы МТ, мг/кг корма
Дозы ТП,
мг/кг корма
Выход рыбы с реверсией гонад, %
не проводили
1
88,2
не проводили
6
83,3
не проводили
16
100,0
3
3
81,8/66,8*
оз. Селигер, 1980, форель
Краснодарский край, 1985
г., стальноголовый лосось
Калининградская
обл., 1990, форель
6
6
77,8/77,8*
3 (после гиногенеза и купания икры в р-ре МТ)
нет**
100,0
6
нет
92,8
не проводили
6
83,3
Калининградская
обл., 1996, форель
Заполярье, 1991, форель
5
75,0
3 (после купания в р-ре
в 437,1 мкг МТ/л Н2О)
нет
83,0
6
нет
85,7
Примечание: *– в числителе выход самок с половой реверсией при обработке молоди метилтестостероном, в знаменателе – при обработке молоди стальноголового лосося тестостерон-пропионатом, ** – не
проводили
Ветеринарная патология. № 2. 2008
151
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ
никова, 2002). Для восстановления деградировавших популяций, с утраченным геномом самок, у рыб с использованием методов
криоконсервации спермы половых реверсантов, предлагаем две схемы, созданные в
соавторстве с Ананьевым В.И. (2002):
Схема 1
Криоконсервация спермы реверсантов
(сохранение в криобанке)
↓
оплодотворение икры
↓
диплоидные зиготы (до100% самок)
↓
последовательные скрещивания 100%
самок с нормальными самцами своего вида
↓
восстановление популяции
Схема 2
Криоконсервация спермы реверсантов
(сохранение в криобанке)
↓
оплодотворение икры утраченных
видов с инактивированным ядром
↓
диплоидные гибридные
зиготы (до 100% самок)
↓
поглотительное скрещивание путем
оплодотворения икры гибридных
самок спермой нормальных самцов
восстанавливаемых видов
↓
восстановление популяции
Литература
1. Метальникова К.В. 1989. Современные проблемы
рыбохозяйственных исследований. М.: ВНИРО.
С. 89-99. 1991. Рыбное хозяйство. 1991, №12. С.
59-61. 1995. Матер. Совещ. по товарному форелеводству. Мурманск. С. 48-51. 2000. Рыбное хоз.
Сер. «Пресноводная аквакультура» ВНИЭРХ.
Вып. 4. 19-24. 2002. Экологическая физиология
и биохимия рыб в аспекте продуктивности водоемов. М.: Изд.-во ВНИРО. Т. 141. С. 129-137. 2002.
2. In tes. 21th Conference of European Comparative Endocrinologists (ESCE) 26-31 August, 2002.
Bonn.с.1. 2004. Ananiev V. In: 5th International Symposium on Fish Endocrinology from September 5 to
September 9, 2004 at the University Jaume I (UJI)
of Castellan, Spain. www.5isfe.uji.es. P. 32.
3. Персов Г.М., 1969.Автореферат на соискание ученой
степени доктора биологических наук. 24 с.
4. Choy L. Hew et al., 1996. Determination of genomic
sex in salmonids. Patent: №5,480,774 Date Patent:
Jan. 2.
5. Colombo L.R. et al., 1979. In: Bull.Zool. 15 (11). P.
89-101.
6. Gorshkov S.A. et al. 1992. In: The Rainbow Trout. //
Proc.1st Aquacult. Symp. / Inst. Aquacult. University Stirling.-Scotland 4-7 Sept. 1990. Ed. G.A. Gall.
USA. Amsterdam-London-New York-Tokyo. P. 99100.
7. Hurk van Den, 1982. In: Reprod. Nutr. Develop. 22
(2). P. 413-425.
8. Kitano T., Yoshinaga N., Adachi R., Abe S. In: 5th International Symposium on Fish Endocrinology from
September 5 to September 9, 2004 at the University
Jaume I (UJI) of Castellan, Spain.- www.5isfe.uji.es. P.
20-21.
9. Mosyagina M.V., Zelennikov O.V. 2004. In: 5th International Symposium on Fish Endocrinology from
September 5 to September 9, 2004 at the University
Jaume I (UJI) of Castellan, Spain. www.5isfe.uji.es.
P. 20-21.
10. Omoto N., Maebayashi M., Mitsuhashi E., Yoshitomi K., Adachi S., Yamauchi K. 2002. In: Fisheries
Science, 68. P. 1047-1054.
11. Thorgaard G.H. 1983. In: Fish physiology. Part 9B.
Acad. Press. P. 405-434.
12. Yamamoto T., 1969. In: Fish physiology New York.
3. P. 117-175.
УДК 636. 619.2.32/.38
В.А. Багиров, Л.К. Эрнст, Ш.Н. Насибов
ВИЖ
ТЕХНОЛОГИЯ КРИОКОНСЕРВАЦИИ СЕМЕНИ
– МЕТОД СОХРАНЕНИЯ И РАЦИОНАЛЬНОГО
ИСПОЛЬЗОВАНИЯ РАЗНЫХ ВИДОВ ЖИВОТНЫХ
Возможность использования эпидидимального семени разных видов животных с
целью получения потомства была доказана еще Ивановым И.И. (1910). Эрнст Л.К. и
др. (1986), Шайдуллин.И.Н. (1988), Абилов
А.И. и др. (1994), Багиров В.А. (2005) подтвердили перспективность использования
152
этого метода, получив потомство на основе гибридизации различных видов животных. Криоконсервация эпидидимального
семени на сегодня осуществлена у снежного барана (Шайдуллин И.Н., 2004) и зубра
(Абилов А.И. и др., 1994).
Целью наших исследований явилась
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ
разработка технологии получения и криоконсервации эпидидимального семени для
сохранения и рационального использования генетических ресурсов разных видов
животных.
Разработанная технология получения
и замораживания эпидидимального семени животных включает в себя несколько
этапов: 1) отбор семенников; 2) препарирование эпидидимиса; 3) получение содержимого эпидидимиса; 4) выделение сперматозоидов по фракциям; 5).разбавление
сперматозоидов средой; 6) эквилибрация
семени; 7).криоконсервация эпидидимального семени.
Предложенная нами технология включает отделение хвоста придатка от семенника и его освобождение от оболочек и кровеносных сосудов, оставляя чистый клубок извитого
канала эпидидимиса, заполненного сперматозоидами. Через надрезы канальцев эпидидимиса получали первую фракцию спермы. После
выделения первой фракции семени извитой канал измельчали, получившуюся массу смешивали с криопротективной средой
и пропускали через фильтр. Затем проводили
эквилибрацию и замораживание в фторопластовых пластинах на парах жидкого азота.
Данная технология включает в себя, криоконсервацию сперматозоидов не
только из хвоста эпидидимиса, но и из головки и тела эпидидимиса, а также семенников. После замораживания и оттаивания
сперматозоидов, полученных из этих частей, они сохраняли свою биологическую
полноценность.
Разработанная технология криоконсервации эпидидимальных и тестикулярных
сперматозоидов открывает новые перспективы в направлении сохранения и рационального использования генетических ресурсов. С этой целью нами впервые в мире
создан криобанк семени от редких и исчезающих видов животных: архара из памирской популяции, овцебыка из Таймыра, яка
из Кабардино-Балкарии и Памира, сайгака
из республики Калмыкия. Кроме того, нами создан банк семени от 20 пород крупного рогатого скота, 3 пород свиней, 5 пород овец и 4 пород кроликов. Получен гибрид от яка памирской популяции и домашней коровы.
Создание банка семени овцебыков
(Ovibos moschatus). Создание криобанка
семени овцебыков является одним из актуальных вопросов в сохранении генетических ресурсов и в дальнейшем использовании в селекционно-племенной работе с овцебыками. Попытки получения спермы у
Ветеринарная патология. № 2. 2008
овцебыков с помощью электроэякуляции
проведены Williams (2000, личное сообщение). Им было получено два эякулята, однако они были сильно загрязнены мочой и
оказались непригодными для дальнейшего
использования.
Отсутствовали сведения относительно нормальных показателей объективной
оценки семени овцебыков. Впервые нам
удалось получить и заморозить эпидидимальную сперму овцебыка и создать криобанк семени. Изучить морфометрические параметры спермиев овцебыка, влияние различных сред при криоконсервации, а также криорезистентность сперматозоидов. Создание банка семени овцебыков важно не только как метод для сохранения генетических ресурсов, он также открывает новые возможности для селекционно-племенной работы в процессе реакклиматизации, одомашнивания и расширения ареала его разведения.
Создание банка семени яка (Bos mutus).
Як относится к категории животных, исчезающих с нашей планеты. Их осталось немного, численность яков все время уменьшается. Поэтому як внесен в Красную книгу, это поможет лучше организовать его
охрану. Изучение воспроизводительных
функций яков разного возраста и получение спермы, криоконсервация и создание
банка семени один из надежных вариантов
сохранения генетических ресурсов этого
вида. Разработанная нами технология позволяет заявить, что ее использование может эффективно улучшить племенные качества одомашненных яков и их гибридов.
Создание банка семени сайгака (Saiga
tatarica). В настоящее время сайгак находится на грани исчезновения, в силу уничтожения самцов, в результате чего до 80%
самок остаются не покрытыми. Создание
банка семени, позволяет сохранить и рационально использовать генофонд этого уникального вида животных, хорошо приспособленного к условиям обитания в аридной зоне.
В литературе отсутствуют данные о получении, оценке и криоконсервации спермы сайгака. В связи с этим, нами были выполнены работы по получению и сравнительной оценке электроэякулированного
и эпидидимального семени сайгака. После замораживания и оттаивания сперматозоиды сайгаков сохранили свою биологическую полноценность. Сохранение сайгака в значительной степени определяющего нормальное существование и развитие
степных экосистем - вопрос не простой.
153
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ
В 1994-95 гг. в рамках проекта WWF была
разработана Концепция сохранения сайгака и его местообитаний в Нижнем Поволжье. В республике Калмыкия создан Центр
охраны дикой природы, где выращиваются
в вольерах сайгаки и разработанный нами
метод можно успешно использовать.
Создание банка семени архара (Ovis
ammon). Архар является также тем видом,
который относится к исчезающим животным. Живут они высоко в горах Памира.
Их численность незначительна, и он также внесен в Красную книгу, охраняется под
эгидой различных международных организаций. Получение, криоконсервация и создание банка семени один из надежных вариантов сохранения генетических ресурсов этого вида. Предложенная нами технология позволила продолжить исследования, начатые нашими предшественниками
по отдаленной гибридизации.
Интрацитоплазматическая инъекция
(ICSI) сперматозоида и сперматид в ооциты. Наступила новая эпоха сохранения и рационального использования генетических
ресурсов. Один из новых методов в этом направлении - интрацитоплазматическая инъекция эякулированного, эпидидимального,
тестикулярного сперматозоида и сперматид
в яйцеклетку (Ogura A. et al., 1994; Tournaye
H. et al., 1996; Palermo G.D. et al., 1996). В
ближайшей перспективе появится возможность эффективного использования каждого сперматозоида. Такие методы уже успешно используются в медицине.
Проведенные в последнее время экспериментальные исследования в области биотехнологии показали возможность использования интрацитоплазматической инъекции даже сперматид, что позволяет полу-
чать высокий уровень оплодотворяемости
яйцеклеток (Ogura A. et al., 1994). Было показано, что на ооцитах кролика можно использовать ICSI и получить жизнеспособное потомство. После интрацитоплазматической инъекции сперматозоидов кролика
в ооциты in vitro, оплодотворяемость составила 78%. Полученные эмбрионы были пересажены шести реципиентам, из них
две окролились и дали по семь крольчат
(Deng M. and Yang X.J., 2001).
Antinori S. et al. (1997) изучили влияние
криоконсервации на целостность и оплодотворяющие способности сперматид. После оттаивания более 70% сперматид были пригодны для инъекции. Хромосомный
анализ, выявил нормальный кариотип всех
плодов. Представленные данные говорят о
том, что замороженные-оттаянные сперматиды сохраняют свою оплодотворяющую
способность и могут быть использованы в
последующих циклах для проведения ICSI.
В отличие от оплодотворения in vitro, для
успеха которого требуется большое количество сперматозоидов, при ICSI в цитоплазму ооцита вводится лишь один сперматозоид, поэтому качество спермы, как правило, не оказывает влияния на частоту оплодотворения и последующего дробления.
Применение данного метода позволит осуществить мультитиражирование ценных
генотипов.
Таким образом, разработанная нами
технология криоконсервации эпидидимального семени из хвоста эпидидимиса,
а также из головки и тела эпидидимиса и
тестикулярных сперматозоидов открывают новые возможности для сохранения и
рационального использования генетических ресурсов животных.
SUMMARY
This article is devoted to the development of technology of animal sperm cryoconservation as a method of
securing and rational use of rare and disappearing kinds of domestic and wild animals. For the first time in
the world the cryobank of sperm of wild rams (Ovis ammon), musk oxes (Ovibos moschatus), saygas (Saiga
tatarica) and yaks (Bos mutus) is created.
Литература
1. Абилов А.И. Эрнст Л.К., Стрекозов Н.И. Получение гибридов путем осеменения домашних
коров эпидидимальным семенем диких зубров. //
Метод. рекомендации. ВИЖ, Дубровицы, 1994.
2. Багиров В.А. Биотехнологические аспекты
сохранения генетических ресурсов животных.
автореферат диссертация на соискание ученой
степени доктора биологических наук ВИЖ.
Дубровицы, Моск. обл., 2004 г.
3. Шайдуллин И.Н. усовершенствованный метод
получения и использования эпидидимального
семени диких баранов. Материалы международной научно-практической конференции «Роль и
значение метода искусственного осеменения с.х.
в прогрессе животноводства ХХ и ХХI веков»
ВИЖ, Дубровицы, 2004г.
4. Эрнст Л.К. Проблемы селекции и биотехно-
154
5.
6.
7.
8.
9.
логии сельскохозяйственных животных. М.:
РАСХН, 1995.
Antinori S. Successful fertilization and pregnancy
after injection of frozen-thawed round spermatids
into human oocytes. Hum Reprod 1997.
Deng M, Yang XJ. Full term development of rabbit
oocytes fertilized by intracytoplasmic sperm injection. Mol Reprod Dev. 2001.
Ogura A., Matsuda J., Yanagimachi R. Birth of normal young after electrofusion of mouse oocytes
with round spermatid. Proc Natl Acad USA.1994.
Palermo G.D., Cohen J., Rosenwaks Z. Intracytoplasmic sperm injection: a powerful tool to overcome fertilization failure. Fertil. Steril. 1996.
Tournaye H. et al. Correlation between testicular histology and outcome after intracytoplasmic sperm injection using testicular spermatozoa. Hum Reprod 1996.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ
УДК 619:576.893.192.6.095.15
В.Т. Заблоцкий
ГНУ Всероссийский НИИ экспериментальной ветеринарии им. Я. Р. Коваленко
(ВИЭВ)
КРИОГЕННОЕ КОНСЕРВИРОВАНИЕ
ВОЗБУДИТЕЛЕЙ ПРОТОЗОЙНЫХ БОЛЕЗНЕЙ
ЖИВОТНЫХ И ПРОТИВОТЕЙЛЕРИОЗНОЙ
ВАКЦИНЫ
В последние годы в практике различных исследований, проводимых с паразитическими простейшими, широкое применение находят стабиляты, то есть те или
иные паразиты, замороженные до температуры ниже минус 70° С и сохраняющиеся в этом состоянии необходимое для экспериментатора время.
Преимущество этого метода очевидно.
Во-первых, отпадает необходимость в трудоемкой и кропотливой работе по поддержанию штаммов возбудителей на лабораторных или дорогостоящих сельскохозяйственных животных (лошади, крупный
рогатый скот, овцы и др.). Во-вторых, следует учитывать и тот факт, что в процессе
такого пассирования у паразитов происходят изменения в биологических свойствах
и антигенной структуре, а это подчас затрудняет получение сопоставимых результатов при проведении длительных экспериментов или их повторении. И в-третьих,
при изучении изменчивости антигенных и
иммуногенных свойств конкретной группы простейших необходимо использовать
паразитов, находящихся на определенных
стадиях развития и порой не отличимых
морфологически. Эту работу без использования стабилятов фактически выполнить невозможно. Кроме того, в настоящее
время в России, Иране, Израиле, Великобритании, Индии, Германии, Турции, Марокко и других странах проводятся исследования по получению живых вакцин против
тейлериоза крупного рогатого скота. Эффективное сохранение их без применения
метода глубокого замораживания еще не
разработано.
В некоторых лабораториях нашей страны, в частности в лаборатории протозоологии ВИЭВ, создается банк возбудителей
кровопаразитарных заболеваний сельскохозяйственных животных. Часть из этих
возбудителей находится в глубокой заморозке при температуре минус 196° С (в жидком азоте) уже не менее 15-28 лет.
Исследований, посвященных этой проВетеринарная патология. № 2. 2008
блеме при протозойных заболеваниях,
сравнительно мало.
D. Pellegrini, B. Baldelli, T. Frescura (1963)
установили, что Trypanosoma brucei сохраняла свою подвижность и патогенность
после 5-месячного хранения при –79° С на
среде, состоящей из раствора Хенкса и глицерина в 10%-ной концентрации.
D.S. Allain (1964) изучал влияние замораживания на 8-дневные культуральные формы 11 штаммов Trypanosoma
cruzi и одного штамма T. duttoni, Leishmania donovani, L. tropica и L. brasiliensis. Ампулы с материалом хранили при –
64° С в течение 6-18 месяцев. Через 6 месяцев все штаммы лейшманий оказались
жизнеспособными (выделены в культурах). Через 12 месяцев 6 штаммов Trypanosoma cruzi и штамм T. duttoni были
патогенными для своих хозяев.
Через 12 месяцев проверены тканевые
формы Т. cruzi, T. lewisi и L. donovani – все
штаммы оказались высокопатогенными
для своих хозяев.
J.H. Vincke, M. Scheepers-Biva, J. Bafort
(1965) хранили кровь с Plasmodium berghei
в 5%-ной глюкозе и 1%-ном гепарине при
температуре от –73° до –75° С. Эту кровь через различные промежутки времени вводили молодым грызунам тамномисам и хомякам и исследовали на эксфлагеляцию
мужских гаметоцитов.
Была осуществлена передача этих паразитов через Anopheles atroparvus. P. berghei, по данным авторов, может сохраняться при низких температурах в течение длительного времени, не теряя жизнеспособности и инвазионности.
Ch. Thongnutapot, R. Wigand (1965) изучали инвазионность мышиной крови с Haemobartonella muris для спленэктомированных мышей. Кровь в присутствии 15% глицерина сохраняла инвазионость до 2-4 недель при –20° С и свыше 6 месяцев при -70° С.
Влияние скорости замораживания и оттаивания на инвазионность крови, по мнению
авторов, оказалось несущественным.
155
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ
W. Muller (1966) изучал возможность консервации трихомонад штаммов
T.vaginalis, T. tenax, T. gallinae, T. hominis, T.
foetus, T. augusta и изолированного из слепой кишки свиньи Tritrihomonas Sp., которые культивировали в среде САСН. Все
виды, исключая T. tenax, культивировали
аксенически. Автором установлена лучшая сохраняемость культур, замораживаемых в фазе максимального роста до достижения ими фазы логарифмического роста.
Успех глубокого замораживания, по мнению автора, зависит в большей мере от отсутствия колебаний температуры в течение замораживания.
Материалы и методы.
В опытах использовали возбудителей
некоторых протозойных болезней животных: Th. annulata, Toxoplasma gondii, Tr.
evansi, Аnaplasma ovis, A. marginale, а также 12 бычков черно-пестрой породы в возрасте 8-10 месяцев, 2 овцы, 20 белых мышей. Готовили, фиксировали и окрашивали
мазки крови по общепринятым в гематологии методам.
При замораживании суспензии клеток,
инвазированных гранатными телами тейлерий и инвазированной крови, в качестве криозащитного вещества использовали
глицерин или DMSO в таком объеме, чтобы конечная концентрация его в материале составила 10%. После эквилибрации в
течение 1 ч при 220 С суспензию инвазированных клеток расфасовывали в стеклянные ампулы объемом 8-10 мл. Затем ампулы помещали в термос с этиловым спиртом. Для контроля скорости снижения
температуры в спирт опускали термометр,
а затем подбрасывали маленькие кусочки
сухого льда с такой частотой, чтобы температура спирта равномерно понижалась с
заданной скоростью. Охлажденные до минус 70 0С ампулы с материалом помещали
на хранение в сосуд Дьюара с жидким азотом в специальных кассетах. Использовали трехступенчатый режим замораживания, при котором скорость охлаждения материала от плюс 20 0 С до минус 20 0С составляла один градус в минуту, в диапазоне
температур от минус 20 до минус 40 0 – полтора градуса в минуту и четыре градуса в
минуту при дальнейшем охлаждении материала до минус 70 0С.
Оттаивание замороженного материала
проводили быстро. Для этого ампулы прямо
из сосуда Дьюара помещали в водяную баню, где поддерживали температуру 38-390 С.
Жизнеспособность клеток определяли методом субвитального окрашивания
156
0,5%-ным раствором трипановой сини.
Изучение влияния низкой температуры (-70 0С) на жизнеспособность и инвазионность Theileria annulata нами проведено
в 1968 г. в двух опытах на шести животных.
От бычка №84, больного тейлериозом
при паразитемии 60% Th. annulata, взяли
100 мл крови в гепарин и заморозили до
-70 0С. Спустя 72 и 80 часов кровь быстро
разморозили и ввели четырем здоровым
бычкам подкожно в дозе 20 мл. Двум телкам для контроля ввели свежую гепаринизированную кровь от того же бычка № 84.
На 18-22 день у подопытных и контрольных животных отметили повышение
температуры тела, продолжавшееся в течение 5-9 дней с максимумом до 41,80 С.
У опытных бычков паразитемия достигла
уровня – 1,6-30%, а у контрольных телок –
0,6-11%.
Следующее определение жизнеспособности и патогенности тейлерий провели
после 495 и 1010 дней нахождения их в жидком азоте. С этой целью разморозили 4 ампулы, содержащие суспензию инвазированных тейлериями лимфоидных клеток.
При определении жизнеспособности
размороженного материала было установлено, что 83% лимфоидных клеток оказались живыми. Для проверки патогенных
свойств тейлерий двум бычкам ввели по
7 мл материала, хранившегося в азоте 495
дней, а двум другим – аналогичное количество суспензии, хранившейся в течение
1010 дней.
Через 16-17 дней у всех животных повысилась температура тела. В пунктатах
из увеличенных регионарных лимфатических узлов были обнаружены гранатные
тела тейлерий. Лихорадка продолжалась в
течение 6-8 дней. Паразитемия у бычков
была в пределах 20-68%. Два животных пали от тейлериоза.
Влияние низкой температуры на жизнеспособность и патогенность Trypanosoma. evansi иToxoplasma gondii при длительном хранении в жидком азоте изучили в
двух опытах.
В первом опыте использовали кровь
белых мышей с массой трипаносом, которую заморозили до –1960С.
Результаты опыта показали, что трипаносомы полностью сохраняют свою жизнеспособность и вирулентность после 425
дней хранения в замороженном состоянии.
В процессе размораживания эритроциты
белых мышей в отдельных случаях частично лизировались. При микроскопическом
исследовании обнаружено, что трипаноВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ
сомы, обладали активной подвижностью.
В дальнейшем ими заразили шесть белых
мышей. Материал вводили подкожно в дозе 0,1 мл размороженной крови. Одновременно контрольных мышей заразили кровью от больной трипаносомозом мыши. За
мышами вели ежедневное наблюдение и
исследовали кровь на наличие трипаносом.
Первых паразитов обнаружили как у подопытных, так и у контрольных мышей на 45-е сутки после заражения. В последующие
дни паразитемия нарастала. Все подопытные и контрольные мыши пали одновременно на 7-8-9-й день после заражения.
Анализируя полученные данные, мы
не нашли различий в вирулентности замороженного и незамороженного штаммов
трипаносом.
Во втором опыте 1,5 мл экссудата, полученного из брюшной полости больных
токсоплазмозом белых мышей, также заморозили до –1960С.
Через 10 месяцев разморозили одну ампулу для проверки жизнеспособности и инвазионности возбудителя и ввели материал 10 белым мышам внутрибрюшинно в
дозе по 0,1 мл.
На четвертый день три белые мыши
были убиты и в мазках-отпечатках из селезенки, печени, окрашенных по Романовскому-Гимза, обнаружили массу токсоплазм. Остальные семь мышей пали на 7-й
день после заражения. Из органов приготовили мазки-отпечатки и клеточную суспензию, которую ввели в дозе 0,25-0,3 мл
здоровым белым мышам. На 4-й день после заражения в экссудате из брюшной полости подопытных мышей обнаружено
много токсоплазм.
Нами проведены исследования по изучению влияния глубокого замораживания на инфекционные свойства Anaplasma
marginale и A. оvis – возбудителей анаплазмоза рогатого скота.
Эритроциты, инфицированные A. оvis,
хранили в замороженном состоянии при
температуре жидкого азота в течение 126
дней; кровь, инфицированную A. marginale,
- в течение 38 и 95 дней.
Биопроба поставлена на 4 животных, в
том числе: на 2 овцах и двух телятах с соответствующими возбудителями.
Одной овце ввели подкожно 6 мл инфицированных A. оvis эритроцитов, подвергнутых замораживанию; контрольной овце
также подкожно ввели 6 мл эритроцитов
из той же крови, но не подвергавшейся замораживанию.
Кровь, инфицированную A. marginale,
ввели: бычку №141 – через 38, бычку №143
– через 95 дней хранения в замороженном
состоянии в дозах 8 и 6 мл соответственно.
На 15-20-й дни в крови подопытных животных обнаружены анаплазмы. Паразитемия у овец, как у подопытных, так и у контрольной, была в пределах 5-10%; преобладали анаплазмы крупных размеров. Значительно (в два раза) снижался уровень гемоглобина и эритроцитов, анаплазмы длительное время обнаруживались в крови.
Не отмечено разницы в клинико-гематологическом состоянии подопытных и контрольной овец в период переболевания.
Телята, зараженные инфицированной
кровью, подвергнутой замораживанию в
течение различных сроков (38-95 дней)
хранения переболели анаплазмозом сравнительно (с овцами) легко. В крови обнаруживали до 20-30 анаплазм при просмотре 100 полей зрения микроскопа; уровень
гемоглобина снижался на 2-3 г%.
Заключение.
Разработан и внедрен метод криогенного консервирования возбудителей протозойных болезней животных, а также
культуральной противотейлериозной вакцины. Паразитические простейшие и анаплазмы сохраняли исходную вирулентность
после хранения в жидком азоте при температуре –1960С в течение:
Th. аnnulata – 1010 дней; T. gondii – 300
дней; Tr. evansi – 425 дней; A. оvis – 126 дней;
A. marginale – 95 дней (во всех случаях указан срок наблюдения).
SUMMARY
Parasitic protozoa and anaplasma were of virulence after freezing (T –1960C) in period:
Th. аnnulata – 1010 days; T. gondii – 300 days; Tr. evansi – 425 days; A. оvis – 126 days; A. marginale – 95 days
(the times of observation is recording in all cases).
Литература
1. Allain D.S. Evaluation of the viability and pathogenicity of hemoflagellates after freezing and storage.
J. Parasitol., 1964, 50, №5.
2. Muller W. Zur Frage der Konservierung von Laborstammen verschiedener Trichomonas und Tritrichomonasarten durch tiefe Temperaturen. Z. Tropenmed. Und Parasitol., 1966, 17, №1.
3. Pellegrini D., Baldelli B., Frescura T.Conservazione
di un ceppo di Trypanosoma brucei con le basse
Ветеринарная патология. № 2. 2008
temperature. «Atti Soc. Ital. Sci, veterin., 1963, 17.
4. Thongnutapot Ch. Wigand R. Stabilitat und Konservierung von Haemobartonella muris. Z. Tropenmed. und Parasitol. 1965. 16. №1.
5. Vincke J.H., Scheepers – Biva M., Bafort J. Concervation de gametocytes de Plasmodium berghei
viables et transmissibles a basse temperature.
Ann. Soc. belge med. trop. 1965, 45, №2.
6. И.В. Абрамов и др. Изучение влияния низкой
157
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ
температуры (-70° С) на биологические свойства Theileria annulata. Труды ВИЭВ, 1970 г.
том 38, стр. 64.
7. И.В. Абрамов и др. Изучение влияния глубокого
замораживания при температуре жидкого азота
(-196° С) на инфекционность анаплазм рогатого
скота (A. оvis, A. marginale). Труды ВИЭВ, 1970 г,
т. 38, стр. 321.
8. Н.И. Степанова и др. Влияние низкой температуры на жизнеспособность и вирулентность Tr.
evansi и Toxoplasma gondii при длительном хранении в жидком азоте. Бюллетень ВИЭВ, 1974,
выпуск 18, стр. 53.
9. В.Т. Заблоцкий. Стабильность биологических
свойств тейлерий в процессе длительного хранения при температуре минус 196° С. Бюллетень
ВИЭВ, 1977, выпуск 31, стр. 10.
10. Методические рекомендации по изучению и
разработке мер борьбы с протозойными болезнями животных., М. 1984, стр. 3
11. В.Т. Заблоцкий. Специфическая профилактика
тейлериоза крупного рогатого скота. Автореферат докторской диссертации, М. 1985. стр.22.
А.С. Попов
Институт физиологии растений им. К.А.Тимирязева
КРИОСОХРАНЕНИЕ РАСТЕНИЙ И ИХ КЛЕТОК
Криосохранение растений и их культивируемых клеток позволяет сохранять не
только клеточные штаммы in vitro, но и виды, и сорта сельскохозяйственных растений с помощью хранения в жидком азоте
семян. Криохранение культивируемых клеток растений намного труднее, чем клеток
животных из-за специфики первых: наличия вакуолей, прежде всего центральной,
занимающей в зрелой клетке 90 – 95 % и
имеющей огромный объем, который в несколько тысяч раз больше, чем объем соматических клеток животных [1]. Для успешного замораживания, чтобы возобновился
рост клеток после оттаивания, эту воду необходимо удалить тем или иным способом,
дабы предотвратить губительное образование внутриклеточного льда. Но при удалении столь большого количества воды неизбежно происходит чрезмерное сжатие протопласта и (помимо других повреждений)
фазовые переходы липидов и деструкции в
клеточной мембране вплоть до нарушения
ее непрерывности и гибели клетки.
Названные процессы отсутствуют (или
очень ослаблены) при замораживаниия достаточно сухих объектов с влажностью
менее 12-13 %, т.е. почти не содержащих
свободной воды (в некоторых случаях допустима влажность 18-19 %). Такое низкое
(и даже меньшее) содержание воды имеют
семена (называемые ортодоксальными)
большинства растений, чей генофонд надо
сохранять, конечно, прежде всего семенами. Замораживание в этом случае не требует криозащитных веществ, специальной
подготовки (кроме, может быть, поверхностного подсушивания) и программного охлаждения. Хранение ортодоксальных
158
семян в жидком азоте гарантирует отсутствие процессов их старения и порчи.
Однако, имеются многие важные сельскохозяйственные и лесные виды (орехи,
каштаны, дубы и др.), многие плодовые,
особенно тропические (кофе, какао и др.),
которые имеют рекальцитрантные семена, неподдающиеся высушиванию без потери жизнеспособности и не хранящиеся
даже в специальных условиях дольше нескольких недель или месяцев. В таких случаях для сохранения генофонда приходится вырезать зародыши и разрабатывать
методики их культивирования in vitro и
криосохранения для каждого вида. Работа
эта столь же трудная и длительная и требующая отработки всех тех же этапов со
всеми их условиями, как и глубокое замораживание и оттаивание меристем растений, размножаемых только вегетативно.
Это обширная группа как сельскохозяйственных (картофель, плодовые и др.), так и
дикорастущих растений, размножение которых обычными ботаническими семенами не воспроизводит всех их характеристик, или у которых получение полноценных семян затруднено.
В настоящее время процедуры криосохранения разработаны для более чем
100 видов растений. Существует обширная
литература, доказавшая идентичность изученных признаков у клеточных штаммов
или растений, восстановленных после криосохранения, и у исходных, контрольных.
В рамках настоящей статьи можно привести лишь некоторые примеры. Как известно, число хромосом является одним из наиболее стабильных признаков вида. И в первой же работе на клетках моркови, замоВетеринарная патология. № 2. 2008
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ
Таблица 1.
Всхожесть (% проросших) семян бореальных видов орхидей на 60 сутки на среде
Мурасиге-Скуга в контроле и после криосохранения (средние из 2-3 повторностей).
Название вида
Neottianthe cucullata
Dactylorhiza triphilla
D. preatermissa junialis
Контроль
< 2 (проросли единичные)
< 1 (проросли единичные)
2,3
D. urvilleana
36
Криосохранение
18
7
12
40
Таблица 2.
Регенерация апексов земляники садовой после криосохранения по модифицированному методу дегидратации.
Сорт
Пандора
Покахонтас
Зенга-Тигайга
Гренада
Профьюжен
Вола
Алая зорька
Количество замороженных апексов
11
33
23
29
28
16
71
Количество посткриогенных регенерантов
9
26
18
19
24
13
69
роженных медленно в программном устройстве, было показано сохранение числа хромосом после оттаивания [2] . К настоящему времени это наблюдали в более,
чем 13 публикациях на 11 видах, некоторые
их которых были представлены 12 генотипами. В частности в нашей лаборатории
Л.А.Волковой было показано сохранение
уровней плоидности у клеточных штаммов
диоскореи дельтовидной, восстановленных
после хранения их в жидком азоте [3]. Она
же и соавторы обнаружили качественное
и количественное сохранение спектра стероидных соединений в этих криосохраненных штаммах, что очень важно для биотехнологов. А ведь сохранение синтезов – это
работа обширных массивов генов, обеспечивающих образование и функционирование цепей соответствующих ферментов и
кофакторов. Подобных сообщений о сохранности биохимических синтезов (всего
14 веществ) уже более 16. Эти работы выполнены на 17 видах растений.
Особо следует упомянуть о стабильности спектров белков растений, регенерированных из криосохраненных меристем. Впервые такие данные были опубликованы нами совместно с Н.В.Донцом
и С.М.Мусиным еще 15 лет назад на двух
сортах картофеля: белки разделяли изоэлектрофокусированием в трех диапазонах
рН в 0,5 мм пластинах полиакриламидного геля, на лазерных денситограммах было
получено до 28 пиков белков (у одного из
сортов), спектры белков из контрольных и
криосохраненных растений не отличались
Ветеринарная патология. № 2. 2008
% регенерации после оттаивания и рекультивирования
81
79
78
66
84
81
97
ни качественно, ни количественно) [4]. В
дальнейшем аналогичные результаты были получены рядом авторов на некоторых
энзиматических системах растений сахарного тростника, апельсина и киви.
Различным методам молекулярно-генетического анализа восстановленных
после криосохранения растений в последние годы посвящено более 35 работ, проведенных с 25 генотипами. Ни в одном случае
не было обнаружено нестабильности последовательностей в ДНК или каких-либо
изменений в соотношениях внутри ядернохлоропластного геномного комплекса. Но
у земляники и Citrus оценка чувствительного к метилированию амплифицированного полиморфизма (MSAP) показала несколько различную чувствительность некоторых рестриктаз к метилированным
последовательностям ДНК [5].
Имеется также более 50 работ, в которых изучали морфологические, биометрические и фенотипические признаки растений, регенерированных после криосохранения, в сравнении с контрольными растениями. В некоторых публикациях проанализированы тысячи образцов и сотни генотипов. Никаких существенных отличий не
найдено, сомаклональные вариации после
замораживания-оттаивания отсутствовали.
Работа нашей группы в последние годы была посвящена спасению орхидей, которые являются ценными, но чрезвычайно
уязвимыми растениями. Большинство их
видов (в России 66 из 123) занесено в Красную Книгу. Т.В.Никишиной удалось зало159
ПРОБЛЕМЫ СОХРАНЕНИЯ ГЕНЕТИЧЕСКИХ РЕСУРСОВ
жить в криобанк в жидкий азот семена ряда орхидей умеренного климата. Часть этих
результатов уже опубликована [6]. Здесь
мы приводим данные по 4 видам, полученные недавно (Табл.1). Высокая всхожесть
после криосохранения по сравнению с контролем объясняется скорей всего повреждением оболочки семян, что облегчает доступ к зародышу питательных веществ.
Поскольку сохранение гибридов семенами возможно только в F1, мы пытались
разработать криосохранение вегетативных органов (протокормов) на примере
гибридной орхидеи Bratonia. Е.В.Попова
замораживала протокормы по методу вит-
рификации. Было получено 10% выживших после глубокого замораживания лишь
при снижении температуры рекультивирования в темноте с 27 до 21° С в первые 2
нед после оттаивания. Увеличение концентрации БАП в среде до 10 мг/л повысило
выживаемость до 20%.
О.Н.Высоцкой разработан метод криосохранения земляники садовой, основанный на глубокой дегидратации закаленного материала (Табл.2), который оказался
применим с успехом к лилейным и к купене лекарственной. Этот метод обеспечивает прямую регенерацию без образования
каллусов.
Литература
1. Сидоров В.А., Глеба Ю.Ю., Кривохатская Л.Д.,
Сытник К.М. Доклады Акад.Наук СССР, 1978,
т.240, № 1, сс.211-212.
2. Nag К.К., Street Н.Е. Nature, 1973, v.245, № 5423,
pp.270-272.
3. Волкова Л.А., Горская Н.В., Попов А.С., Пауков
В.Н., Урманцева В.В. Физиология растений ,
1986, т.33, № 4, сс.779-787.
160
4. Донец Н.В., Мусин С.М., Попов А.С. Сельскохозяйственная биология, 1991, № 3, сс.76-83.
5. Harding K. CryoLetters, 2004, v.25, № 1, рр.3-22.
6. Никишина Т.В., Вахрамеева М.Г., Варлыгина
Т.И., член-корреспондент РАН Павлов В.Н.,
Широков А.И., Буров А.В., Попович Е.А., Попов А.С. Доклады Академии Наук, 2006, т.408, №
1, сс.136-138.
Ветеринарная патология. № 2. 2008
Вниманию авторов
1. Редакция принимает статьи, не опубликованные и не переданные в редакции других периодических изданий.
2. С целью ускорения публикации статей редакция принимает статьи и рисунки на любых электронных носителях и в любом
формате. Принимаются и статьи в отпечатанном виде.
3. В начале статьи, над ее названием, просим проставлять индекс Универсальной десятичной классификации (УДК). Под заголовком необходимо указывать инициалы, фамилию автора
(авторов), полное название института (организации), в котором
работают авторы, должность, ученую степень и ученое звание.
Статья должна заканчиваться конкретными выводами, содержать краткое резюме на русском и английском языках и список
литературы.
4. К статье необходимо приложить:
- точный домашний адрес или адрес для переписки, номер
служебного и/или домашнего телефона, факса, адрес электронной почты (если есть);
- название статьи, Ф.И.О. автора (авторов) на английском
языке.
5. С целью ускорения публикации статей желательно переписку осуществлять по электронной почте.
6. Материалы не возвращаются.
7. Авторский гонорар не выплачивается.
Редакция
Учредитель и издатель
ООО «Ветеринарный консультант»
Лицензия на издательскую деятельность:
ИД № 06140 от 26 октября 2001 г.
Свидетельство о регистрации средства массовой информации
ПИ № 77-11332 от 10 декабря 2001 г.
Адрес редакции:
109428, г. Москва, Рязанский проспект, д. 24, кор. 1
(ГНУ ВИЭВ), оф. 917
Тел.: (495) 970-03-68, (903) 133–31–25
(906) 788-75-12
E-mail: vetcons@gmx.net
http://www.vetcons.ru
Бумага офсетная. Формат 70×108/16.
Гарнитура Таймс. Печать офсетная. Усл. печ. л. 18. Уч.-изд. л. 20,8.
Тираж 350 экз. Заказ №
Отпечатано в типографии
ООО «ТИССО-Полиграф»