Эффекторные субпопуляции Т-лимфоцитов и иммунопатогенез
advertisement
Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт иммунологии и физиологии Уральского отделения Российской академии наук На правах рукописи Лагерева Юлия Геннадьевна ЭФФЕКТОРНЫЕ СУБПОПУЛЯЦИИ Т-ЛИМФОЦИТОВ И ИММУНОПАТОГЕНЕЗ МЕНИНГИТОВ ВИРУСНОЙ ЭТИОЛОГИИ 14.03.09 – Клиническая иммунология, аллергология Диссертация на соискание ученой степени доктора биологических наук Научные консультанты: Черешнев Валерий Александрович академик РАН, доктор медицинских наук, профессор Бейкин Яков Борисович доктор медицинских наук, профессор, Заслуженный врач РФ Екатеринбург-2015 2 ОГЛАВЛЕНИЕ Стр. ОГЛАВЛЕНИЕ…………………………………………………………………… 2 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ………………………………………………………. 5 ВВЕДЕНИЕ……………………………………………………………………….. 7 Глава 1. ХАРАКТЕРИСТИКА ЭФФЕКТОРНЫХ СУБПОПУЛЯЦИЙ ТЛИМФОЦИТОВ И ИХ РОЛИ В ПРОТИВОВИРУСНОМ ИММУННОМ ОТВЕТЕ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ)………………… 18 1.1. Эффекторные субпопуляции Т-лимфоцитов: биологические функции, индукция дифференцировки, пластичность и трансформации……………………………………………………….. 18 1.2. Субпопуляции Т-лимфоцитов памяти, изменение численности Т-эффекторов/клеток памяти в зависимости от возраста и пола……………………………………………………….. 28 1.3. Участие CD4+ и CD8+Т-эффекторов в противовирусном иммунном ответе……………………………………………………... 33 1.4. Роль Т-лимфоцитарных субпопуляций и других компонентов адаптивного и врожденного иммунитета при инфицировании: 40 - неполиомиелитными энтеровирусами……………………………. 40 - флавивирусами……………………………………………………… 49 Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ…………………... 56 2.1. Дизайн исследования……………………………………………. 56 2.2. Объект исследования……………………………………………. 57 2.3. Методы исследования…………………………………………... Глава 3. ВОЗРАСТНЫЕ И АССОЦИИРОВАННЫЕ С 62 ПОЛОМ ОСОБЕННОСТИ СОДЕРЖАНИЯ Т-ЭФФЕКТОРОВ…………….. 72 3.1. Содержание Th1, Th2, Th17, Tc1, Tc2, Tnc17, Treg лимфоцитов у практически здоровых детей и взрослых………….. 72 3.2. Взаимосвязь между содержанием Т-эффекторов, клеток памяти и другими показателями врожденного и адаптивного иммунитета…………………………………………………………… 76 3.3. Ассоциированные с полом различия в содержании Т- 3 эффекторных субпопуляций и других показателей врожденного и адаптивного иммунитета…………………………………………….. 88 3.4.Абсолютная интегрированная средняя интенсивность флюоресценции как комплексный показатель, характеризующий цитокиновую экспрессию Т-эффекторов…………………………... 91 3.5. Обсуждение результатов............................................................... 94 Глава 4. КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ЭНТЕРОВИРУСНОЙ ОСОБЕННОСТИ ИНФЕКЦИИ С СЕРОЗНЫМ МЕНИНГИТОМ В РАЗНЫХ ВОЗРАСТНЫХ ГРУППАХ………... 102 4.1. Клиническая характеристика энтеровирусной инфекции с серозным менингитом в возрастных группах: 1-3 лет, 4-7 лет, 1518 лет, 19-45 лет……………………………………………………… 102 4.2. Иммунологические особенности энтеровирусной инфекции с серозным менингитом в возрастных группах: 1-3 лет, 4-7 лет, 1518 лет, 19-45 лет……………………………………………………… 4.3. Значение интенсивности абсолютной флюоресценции интегрированной цитокинов у 104 средней детей с энтеровирусными менингитами…………………………………….. 149 4.4. Ассоциированные с полом особенности иммунного ответа при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом………….. 151 4.5.Связь HLA-полиморфизма с чувствительностью к энтеровирусным менингитам……………………………………….. 158 4.6. Обсуждение результатов............................................................... 175 Глава 5. ХАРАКТЕРИСТИКА ЭФФЕКТОРНЫХ СУБПОПУЛЯЦИЙ ТЛИМФОЦИТОВ ПРИ COXSACKIE B- И ECHO- МЕНИНГИТАХ У ДЕТЕЙ…………………………………………... 196 5.1. Изменение содержания основных субпопуляций Т- эффекторов при Coxsackie B5-менингитах у детей………………... 196 5.2. Сравнительная характеристика эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов при Coxsackie В1-В5-менингитах…………………. 201 5.3. Сравнительная характеристика эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов при ECHO-менингитах, вызванных вирусами 204 4 ECHO11 и ECHO30…………………………………………………... 5.4. Эффекторные субпопуляции Т-лимфоцитов и особенности клинического течения ECHO- и Coxsackie В-менингитов………... 207 5.5. Обсуждение результатов............................................................... 213 Глава 6. ХАРАКТЕРИСТИКА ВРОЖДЕННОГО И ОТДЕЛЬНЫХ АДАПТИВНОГО ЦЕРЕБРОСПИНАЛЬНОЙ ЭНТЕРОВИРУСНОЙ КОМПОНЕНТОВ ИММУНИТЕТА ЖИДКОСТИ ИНФЕКЦИИ С В ПРИ СЕРОЗНЫМ МЕНИНГИТОМ……………………………………………………… 219 6.1. Изменение клеточного состава и характеристика Т- лимфоцитарных субпопуляций в цереброспинальной жидкости… 219 6.2. Содержание про- и противовоспалительных цитокинов в цереброспинальной жидкости………………………………………. 226 6.3. Обсуждение результатов............................................................... 227 Глава 7. КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ МЕНИНГЕАЛЬНОЙ ФОРМЫ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА…. 231 7.1. Сравнительная клинико-иммунологическая характеристика менингеальной формы клещевого энцефалита и энтеровирусной инфекции с серозным менингитом…………………………………. 7.2. Сравнительная характеристика 231 иммунологических показателей цереброспинальной жидкости при менингеальной форме клещевого энцефалита и энтеровирусной инфекции с серозным менингитом……………………………………………….. 240 7.3. Обсуждение результатов............................................................... 243 ЗАКЛЮЧЕНИЕ…………………………………………………………………... 247 ВЫВОДЫ…………………………………………………………………………. 260 ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ…………………………………………. 263 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ………………………………………………………... 264 5 СПИСОК СОКРАЩЕНИЙ БФ базофил ГЭБ гематоэнцефалический барьер ДГЭАс дегидроэпиандростерона сульфат ДНК дезоксирибонуклеиновая кислота дцРНК двуцепочечная рибонуклеиновая кислота КЭ клещевой энцефалит ЛГ лютеинизирующий гормон МКФ макрофаг МПК мононуклеары периферической крови МФ менингеальная форма НАДФ никотинамидадениндинуклеотидфосфат НПЭВ неполиомиелитные энтеровирусы НСТ нитросиний тетразолий ПЦР полимеразная цепная реакция РНК рибонуклеиновая кислота СМ серозный менингит ФСГ фолликулостимулирующий гормон ЦИК циркулирующие иммунные комплексы ЦНС центральная нервная система ЦСЖ цереброспинальная жидкость ЭВИ энтеровирусная инфекция ЭЦ эпителиоцит АРС антигенпредставляющая клетка CD кластер дифференцировки CVB Coxsackie B вирус CTL цитотоксический Т-лимфоцит DC дендритная клетка DCM дилатационная кардиомиопатия DENV вирус Денге ECHO (Enteric Cytopathic Human Orphan) вирус 6 HLA лекоцитарные антигены человека IFN интерферон Ig иммуноглобулин IL интерлейкин JEV вирус японского энцефалита LC клетка Лангерганса MDA5 ассоциированный с дифференциацией меланомы ген 5 MHC главный комплекс гистосовместимости NK естественные киллеры NS неструктурные вирусные белки PAMP патоген-ассоциированные молекулярные паттерны PRRs паттерн-распознающие рецепторы PV полиовирус RIG-I индуцибельный ретиноевой кислотой ген I T1D сахарный диабет 1 типа TBEV вирус клещевого энцефалита TCR Т-клеточный рецептор TCM центральные Т-клетки-памяти TEFF Т-эффекторы TEM эффекторные Т-клетки-памяти TFH фолликулярные Т-хелперы TEMRA терминально дифференцированные Т-клетки TGF трансформирующий фактор роста Th Т-хелпер TLR Toll-подобные рецепторы TNF фактор некроза опухолей Treg регуляторный Т-лимфоцит TSLP тимический стромальный лимфопоэтин WNV Вирус лихорадки Западного Нила 7 ВВЕДЕНИЕ Актуальность темы исследования и степень ее разработанности Острый асептический менингит представляет собой одну из самых распространенных клинических форм нейроинфекций вирусной этиологии. Как у взрослых, так и у детей он этиологически связан с вирусами различных таксономических групп [42], однако, 80-92% всех регистрируемых случаев асептических менингитов вызывается неполиомиелитными энтеровирусами (НПЭВ) [374]. В России после введения эпидемиологического надзора за энтеровирусными инфекциями (ЭВИ) ежегодно регистрируют от 4000 до 10000 случаев заболевания, доля серозных менингитов (СМ) в их структуре составляет около 60% (данные Федеральной службы по надзору в сфере защиты прав потребителей и благополучия человека, http://rospotrebnadzor.ru/). О возрастающем эпидемическом значении НПЭВ-инфекций на фоне действующей программы по ликвидации полиомиелита свидетельствуют постоянно регистрируемые в разных странах мира подъемы заболеваемости и вспышки. Не менее актуальным возбудителем менингитов на эндемичных территориях является вирус клещевого энцефалита (КЭ), несмотря на успехи вакцинации постоянно расширяющий свой географический ареал [129]. В структуре клинических форм КЭ, заболеваемость которым в Свердловской области в последние годы сохраняется на уровне 2,7 на 100 тысяч населения и стабильно превышает средний по Российской Федерации показатель, менингеальная форма (МФ) составляет 27,5 % [5]. Несмотря на относительно доброкачественное течение и благоприятный прогноз, к исходам СМ относят различные резидуальные нарушения в виде цереброастении, неврозоподобных состояний, гипертензионного синдрома, очаговой симптоматики, синдрома гипоталамической дисфункции и т.д. При этом клиническая манифестация заболевания, его течение и исход зависят не только от антигенных свойств вируса, но и определяются особенностями иммунологической реактивности хозяина, в свою очередь зависящими от его возраста, пола, HLA-полиморфизма и т.д. Механизмы адаптивного иммунитета с участием различных эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов играют решающую роль в противовирусном иммунном ответе и иммунопатологических реакциях, вносящих вклад в патогенез менингитов вирусной этиологии. Участие Т-лимфоцитов (вирус-специфическая цитотоксичность) в контроле НПЭВ было продемонстрировано in 8 vitro более 30 назад [464]. С тех пор роль CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитарных субпопуляций в основном изучалась на экспериментальных животных моделях [224, 225, 447 и др.]. Широкий спектр публикаций посвящен изучению роли Т-лимфоцитов в патогенезе аутоиммунных заболеваний, ассоциированных с ЭВИ [132, 187, 335 и др.]. Последние исследования свидетельствуют о том, что именно баланс основных Т-лимфоцитарных субпопуляций определяет развитие острых миокардитов, их прогрессию в хронические миокардиты и дилатационную кардиомиопатию на фоне ЭВИ [138]. Изучению участия Т-лимфоцитарных субпопуляций в противовирусном иммунном ответе при ЭВИ с СМ у человека посвящены отдельные исследования, не раскрывающие значения основных эффекторных субпопуляций Т-хелперов и Т-цитотоксических лимфоцитов в патогенезе энтеровирусных менингитов [2, 48]. Взаимодействие вируса КЭ с компонентами врожденного и адаптивного иммунитета хозяина при различных клинических формах КЭ также является объектом интенсивного исследования [65, 129, 217, 467 и др.]. Однако, роль в противовирусном ответе, в том числе в пределах центральной нервной системы (ЦНС), при МФ КЭ различных эффекторных субпопуляций Т-хелперов и Т-цитотоксических лимфоцитов практически не изучена, за исключением экстраполяции данных об уровне синтезируемых ими цитокинов на возможную поляризацию иммунного ответа по Th1или Th2-пути [18, 46 и др.]. Между тем, по мнению ряда исследователей, вирусные инфекции сопровождаются сложным комплексом разнообразных реакций, регулируемых Т-лимфоцитами различных линий дифференцировки, содержание которых меняется в соответствии с локальным изменением цитокинового фона, количества антигена, состояния антигенпрезентирующих клеток (APC) и т.д. [372]. Согласно современным взглядам на функциональную специализацию Т-эффекторов статус самостоятельной субпопуляции помимо Th1 и Th2 лимфоцитов имеют Th17 клетки и регуляторные Т-лимфоциты (Treg). Описаны новые субпопуляции Т-хелперов (Th9, Th22, фолликулярные T-хелперы - TFH и т.д.), а также факты, подтверждающие необычайную пластичность CD4+ Т-эффекторов [321, 365, 391 и др.]. Аналоги Т-хелперных субпопуляций обнаружены среди цитотоксических CD8+Т-лимфоцитов (Тс1, Тс2, Tnc17 и т.д.) [267, 378]. Динамика изменения содержания различных, в том числе вновь открытых, субпопуляций Тэффекторов в ходе вирусных нейроинфекций остается малоизученной и представляет 9 несомненный интерес, поскольку определяет эффективность механизмов адаптивного противовирусного иммунитета. Зависимость клинической манифестации при инфицировании НПЭВ от возраста, пола и генетически детерминированной чувствительности/резистентности хозяина [29, 91, 185 и др.] позволяет предположить, что возрастные, ассоциированные с полом и генетически обусловленные особенности дифференцировки различных субпопуляций Тэффекторов могут играть определенную роль в иммунопатогенезе ЭВИ с СМ. В то же время исследованиям, направленным на изучение цитокиновой экспрессии Тлимфоцитов в зависимости от возраста у детей и взрослых, посвящены единичные публикации [189, 458]. Количественные характеристики содержания тех или иных цитокин-положительных субпопуляций в разных возрастных группах отличаются в зависимости от используемых модификаций метода (выбор индукторов экспрессии, времени индукции и т.д.), а также границ возрастной группы. Не сформулированы до настоящего момента и ассоциированные с полом особенности дифференцировки различных субпопуляций Т-эффекторов. Наконец, несмотря на разнообразие подходов к оценке HLA-ассоциаций при ЭВИ [96, 101, 436, 463 и др.], связь полиморфизма HLA с развитием ЭВИ с СМ и иммунопатогенетические механизмы, лежащие в ее основе, также остаются не изученными. Особое значение имеют исследования локального иммунного ответа, формирующегося в пределах ЦНС и характеризующегося целым рядом особенностей, обусловленных: селективной миграцией специфических субпопуляций эффекторных Тлимфоцитов из периферического кровотока в ткани мозга; селективным удерживанием Т-клеточных субпопуляций, преодолевших гематоэнцефалический барьер (ГЭБ); локальными воздействиями на эффекторные функции Т-лимфоцитов в условиях нового микроокружения. Современные представления о том, каким образом осуществляется регуляция, в том числе локальная, иммунного ответа с участием различных Тлимфоцитарных субпопуляций при вирусных поражениях ЦНС, весьма ограничены [48, 253, 397]. Таким образом, исследование Т-клеточного ответа при естественном инфицировании человека самыми актуальными возбудителями нейроинфекций имеет фундаментальное значение для понимания роли различных эффекторных Т-клеточных субпопуляций в противовирусном иммунном ответе и механизмах иммунопатогенеза при вирусных поражениях ЦНС. 10 Цель исследования Оценить роль иммунопатогенезе различных менингитов эффекторных вирусной субпопуляций этиологии с Т-лимфоцитов учетом в возрастных, ассоциированных с полом и полиморфизмом HLA особенностей их дифференцировки. Задачи исследования 1. Оценить базовый уровень эффекторных Т-лимфоцитарных субпопуляций (Th1, Th2, Tc1, Tc2, Th17, Tnc17, Treg) у практически здоровых детей и взрослых. Исследовать возрастные и ассоциированные с полом особенности содержания основных субпопопуляций эффекторных Т-лимфоцитов, их взаимосвязь с другими показателями адаптивного и врожденного иммунитета. 2. Определить содержание эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов в динамике острого периода энтеровирусной инфекции с серозным менингитом. Охарактеризовать особенности иммунного ответа на неполиомиелитные энтеровирусы в зависимости от возраста, пола пациентов и серотипа возбудителя. 3. Провести анализ иммуногенетических ассоциаций аллельных вариантов HLA I (HLA-A, -B, -Cw) и II класса (HLA-DRB1, -DQA1, -DQB1) с развитием энтеровирусной инфекции с серозным менингитом. 4. Оценить цереброспинальной параметры жидкости врожденного при и адаптивного энтеровирусной инфекции иммунитета с в серозным менингитом. 5. Сформулировать универсальные и зависящие от типа возбудителя особенности адаптивного иммунитета с участием основных субпопуляций Тэффекторов при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом и менингеальной форме клещевого энцефалита. Методология и методы исследования Исследования проведены на базе лаборатории иммунопатофизиологии Института иммунологии и физиологии УрО РАН и МАУ "Клинико-диагностический Центр" г.Екатеринбурга с 2003 по 2014 гг. Для выполнения задач, поставленных в работе, обследовано 195 практически здоровых детей и взрослых в шести возрастных группах: 7-12 мес: 30 человек; 1-3 года: 30 человек; 4-7 лет: 30 человек; 8-14 лет: 30 человек; 1518 лет: 30 человек; 19-45 лет: 45 человек. В каждой возрастной группе анализ данных 11 лабораторного обследования проведен, в том числе, в зависимости от пола обследуемых. Проведен ретроспективный анализ результатов вирусологического и молекулярнобиологического обследования 1720 случаев заболевания ЭВИ с СМ, а также клинического и иммунологического обследования 435 пациентов с менингитами вирусной этиологии. В ходе исследования в зависимости от результатов идентификации возбудителя менингитов сформированы следующие основные группы: 1-я основная группа – 400 пациентов с ЭВИ с СМ, в рамках которой были выделены следующие возрастные подгруппы: 1-3 года (58 человек); 4-7 лет (107 человек); 8-14 лет (180 человек); 15-18 лет (30 человек); 19-15 лет (25 человек). Для исследования ассоциированных с полом особенностей иммунного ответа в группах 1-18 лет выделены соответствующие подгруппы. Для изучения серотип-специфических закономерностей в возрастных группах 4-7 и 8-14 лет выделены подгруппы с ЭВИ с СМ, вызванными Coxsackie B1-B5 (76 человек) и ECHO11, 30 (110 человек). 2-я основная группа – 35 пациентов с МФ КЭ в возрасте 19-45 лет. На первом этапе работы проведено обследование и анализ результатов иммунологических, гормональных и генетических исследований у практически здоровых детей и взрослых. Основной задачей второго этапа исследований явилось изучение возрастной, половой структуры пациентов с ЭВИ с СМ, сезонного распределения случаев заболевания, пейзажа выделенных серотипов НПЭВ. На третьем этапе проведен анализ клинико-анамнестических данных и оценка результатов иммунологических исследований периферической крови и ЦСЖ пациентов с ЭВИ с СМ, проведенных в 1-10 и 11-20 сутки от начала заболевания, в зависимости от возраста, пола пациентов, серотипа возбудителя и результатов типирования HLA. Кроме того, проведен сравнительный анализ данных клинико-иммунологического обследования пациентов возрастной группы 19-45 лет с ЭВИ с СМ и МФ КЭ. Степень достоверности, апробация результатов, личное участие автора Высокая степень достоверности результатов исследования, обоснованность выводов и рекомендаций базируется на достаточном числе наблюдений, продуманном методическом и методологическом подходе к выполнению исследования с формулировкой и проверкой рабочей гипотезы, использовании комплекса современных лабораторных методов исследования, статистической обработке полученных данных 12 адекватными методами статистического анализа с использованием пакетов прикладных компьютерных программ Statistica 6.0 (StatSoft Inc., США). Материалы диссертации доложены и обсуждены на 2 международных и 11 российских конференциях, конгрессах и симпозиумах: III конференции иммунологов Урала (Челябинск, 2003); Объединенном иммунологическом форуме. III съезде иммунологов России (Екатеринбург, 2004); Областной конференции «Актуальные проблемы лечения, диагностики и профилактики КЭ на территории Свердловской области» (Екатеринбург, 2005); IV съезде физиологов Урала с международным участием (Екатеринбург, 2009); II Национальной конференции с международным участием «Нейроинфекции. Современные аспекты клещевых инфекций» (Екатеринбург, 2010); Региональной конференции «Вирусные инфекции у детей. Достижения, проблемы, перспективы (диагностика, лечение, профилактика)» (Екатеринбург, 2010); 14th International Congress of Immunology (Kobe, Japan, 2010); cеминаре «Современные технологии и новые тесты в лабораторной диагностике» (Москва, 2011); VII Всероссийской конференции с международным участием «Иммунологические чтения в г. Челябинске», Международной школе «Проточная цитометрия в клинической лабораторной диагностике» (Челябинск, 15th International Congress of 2012); Immunology (Milan, Italy, 2013); IХ Всероссийской конференции с международным участием «Иммунологические чтения в г. Челябинске», Международной школе «Проточная цитометрия в клинической лабораторной диагностике» (Челябинск, 2014); Российском научном форуме на Урале с международным участием «Актуальные вопросы фундаментальной медицины» (Екатеринбург, 2014), Х Всероссийской конференции с международным участием «Иммунологические чтения в г. Челябинске», Международной школе «Проточная цитометрия в клинической лабораторной диагностике» (Челябинск, 2015). Личный вклад соискателя состоит в непосредственном участии во всех этапах диссертационного исследования. Планирование научной работы, включая формулировку рабочей гипотезы, определение методологии и общей концепции диссертационного исследования проводились совместно с научными консультантами: директором ФГБУН «Институт иммунологии и физиологии УрО РАН», академиком РАН, д.м.н., профессором В.А.Черешневым и главным врачом МАУ «Клиникодиагностический Центр», д.м.н., профессором, заслуженным врачом РФ Я.Б.Бейкиным. 13 Анализ литературы по теме исследования, определение иммунологических показателей периферической крови и ЦСЖ, статистическая обработка и интерпретация результатов исследования, написание и оформление рукописи диссертации осуществлялись соискателем лично. Оценка и интерпретация данных вирусологических, серологических и молекулярно-биологических методов исследования проводилась при участии к.б.н. Сбитневой Н.Н. и Оленьковой О.М., заведующих лабораториями молекулярнобиологических методов исследования и вирусологии МАУ «Клинико-диагностический Центр». Оценка уровня гормонов – при участии к.б.н. Беляевой С.В., заведующей биохимической лабораторией МАУ «Клинико-диагностический Центр», результатов генетических исследований – совместно с к.б.н. Рыбиной И.В., заведующей лабораторией клинической генетики МАУ «Клинико-диагностический Центр». Анализ и интерпретация клинико-анамнестических данных осуществлялись при участии заместителя главного врача по научной работе д.м.н., профессора Фомина В.В. Подготовка публикаций по теме диссертации осуществлялась автором совместно с научными консультантами. Положения, выносимые на защиту 1. Изменение базового уровня основных субпопуляций Т-эффекторов в онтогенезе подчинено возрастным закономерностям. Содержание эффекторных субпопуляций Т-хелперов в возрастных группах 15-45 лет характеризуется ассоциированным с полом иммунологическим диморфизмом. 2. Характер адаптивного иммунного ответа при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом зависит от возраста и пола пациентов. 3. Увеличение содержания эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов Th1, Tc1 и Th2, Tc2 типа в периферической крови в остром периоде энтеровирусной инфекции с серозным менингитом коррелирует с клиническим течением заболевания и выраженностью воспалительной реакции в центральной нервной системе. 4. Энтеровирусную инфекцию центральной нервной системы контролируют CD4+T-эффекторы/клетки-памяти Th1- и Th2-типа, а также CD8+ Т-эффекторы Тс1типа и терминально-дифференцированные CD8+ T-эффекторы памяти. 5. Энтеровирусная инфекция с серозным менингитом является HLA- ассоциированным заболеванием с высоким риском развития у носителей гаплотипа HLA-DRB1*01;DQA1*01:01;DQB1*05:01. 14 6. Энтеровирусная инфекция с серозным менингитом и менингеальная форма клещевого энцефалита характеризуются как общими закономерностями формирования Т-клеточного адаптивного иммунного ответа, так и характерными особенностями динамики и уровня дифференцировки основных эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов, а также состава мигрирующих в цереброспинальную жидкость Т-эффекторов. Научная новизна Впервые проведена оценка содержания CD4+, эффекторных CD8+ Т- лимфоцитарных субпопуляций, экспрессирующих цитокины Th1, Th2, Th17-типов в различных возрастных группах. На 7-12 месяце жизни у детей выявлена преимущественная поляризация дифференцировки Т-лимфоцитов по пути Th2 (Tc2) и Th17 (Tnc17) и максимальное содержание Treg клеток. Продемонстрировано, что для детей младших возрастных групп (до 7 лет) характерна сниженная эффективность экспрессии цитокинов Th1(Тс1)-типа. Определена зависимость содержания основных субпопуляций Т-эффекторов от уровня в периферической крови половых стероидов, взаимосвязь с другими показателями, характеризующими состояние врожденного и адаптивного иммунитета. Впервые определены возрастные, ассоциированные с полом и HLA полиморфизмом особенности дифференцировки основных эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов в остром периоде ЭВИ с СМ. Установлено, что увеличение содержания Th1 и Tc1 эффекторов характерно только для детей до 7 лет, в то время как повышение уровня эффекторов второго типа (Th2, Tc2) характеризует Т-клеточный ответ во всех возрастных группах от 1 до 45 лет и ассоциировано с формированием противовирусного гуморального иммунного ответа. Проведена оценка уровня Т-эффекторов в зависимости от серотипа НПЭВ. Установлена взаимосвязь между содержанием отдельных субпопуляций Т-эффекторов и их соотношением с клиническим течением заболевания и выраженностью воспалительных изменений в ЦНС. Впервые проведен анализ иммуногенетических ассоциаций аллельных вариантов генов HLA I (HLA-A, B, Cw) и II класса (DRB1, DQA1, DQB1) с развитием ЭВИ с СМ. Установлено, что аллели HLA-DRB1*07, HLA-А2 имеют отрицательную ассоциацию с заболеванием ЭВИ с СМ. DRB1*01;DQA1*01:01;DQB1*05:01 Выявлен и описаны гаплотип-провокатор особенности HLA- противовирусного 15 иммунного ответа у его носителей: снижение уровня дифференцировки Th2 субпопуляции лимфоцитов и синтеза противовирусных нейтрализующих антител. Впервые описаны ассоциированные с полом особенности иммунного ответа при ЭВИ с СМ и механизмы формирования иммунологического диморфизма. Впервые с помощью метода внутриклеточного окрашивания цитокинов и проточноцитометрического анализа ЦСЖ определены субпопуляции Т-эффекторов, участвующих в контроле энтеровирусной инфекции ЦНС: CD4+T-эффекторы/клеткипамяти Th1-и Th2-типа, а также CD8+ эффекторные Т-лимфоциты Тс1-типа и CD8+ TEMRA. Впервые сформулированы закономерности общие дифференцировки и зависящие основных от эффекторных типа возбудителя субпопуляций Т- лимфоцитов, а также состава мигрирующих в ЦСЖ Т-эффекторов при энтеровирусных и флавивирусных менингитах. Разработана концепция иммунопатогенеза ЭВИ с СМ, расширяющая современные представления об участии в патогенезе СМ отдельных эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов. Теоретическая и практическая значимость работы В теоретическом плане полученные новые данные расширяют современные представления об иммунологических аспектах патогенеза энтеровирусных и флавивирусных (КЭ) менингитов. Результаты исследования вносят вклад в изучение иммунологических детерминант чувствительности к нейроинфекциям с позиций возрастных, ассоциированных с полом и полиморфизмом HLA особенностей дифференцировки различных эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов. Практическая значимость работы заключается в формировании базы нормативных показателей, характеризующих содержание CD4+ и CD8+Т-лимфоцитарных субпопуляций, синтезирующих цитокины Th1, Th2, Th17-типов, Treg-лимфоцитов, наивных Т-лимфоцитов и различных субпопуляций CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов памяти. Для оценки содержания субпопуляций CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов первого типа предложены уравнения, основанные на выявленной логарифмической зависимости данных показателей от возраста. Определена группа риска (носители гаплотипа HLA- DRB1*01;DQA1*01:01;DQB1*05:01), характеризующаяся высокой чувствительностью к развитию ЭВИ с СМ. Выявлены особенности адаптивного иммунного ответа на НПЭВ у 16 носителей гаплотипа-провокатора и в отсутствии свидетельствующие DRB1*01;DQA1*01:01;DQB1*05:01, в генотипе о HLA- необходимости дифференцированного подхода к иммунопатогенетической терапии ЭВИ с СМ. Внедрение результатов исследования в практику Разработанные региональные возрастные нормы содержания CD4+ и CD8+Тлимфоцитарных субпопуляций, синтезирующих цитокины Th1, Th2, Th17-типов, Tregлимфоцитов, наивных Т-лимфоцитов и различных субпопуляций CD4+ и CD8+Тлимфоцитов памяти используются в практике лаборатории клинической иммунологии МАУ «Клинико-диагностический Центр», научного отделения иммунологии микробиологии ФГБУ «Уральский научно-исследовательский институт и охраны материнства и младенчества» Министерства здравоохранения Российской Федерации, клинико-диагностической лаборатории ГБУЗ Свердловской области «Областная детская клиническая больница №1» г. Екатеринбурга и ООО Медицинский лабораторный центр «Фамилия» г.Челябинска. Результаты диссертационной работы используются в научно-исследовательской и практической работе инфекционных отделений МАУ «Городская клиническая больница №40» г. Екатеринбурга, в преподавании клинической иммунологии на кафедре инфекционных болезней и клинической иммунологии ГБОУ ВПО «Уральский государственный медицинский университет» Министерства здравоохранения Российской Федерации, а также лекциях ежегодной Международной школы «Проточная цитометрия в клинической лабораторной диагностике» в г. Челябинске (ООО "Академический инновационный научный центр"). Публикации по теме диссертации Соискатель имеет более 100 опубликованных работ, из них по теме диссертации опубликовано 36 работ общим объемом 7,6 печатных листов, в том числе 21 публикация в научных журналах и изданиях, которые включены в перечень российских рецензируемых научных журналов и изданий для опубликования основных научных результатов диссертаций, 2 работы в зарубежных научных изданиях, 3 публикации в материалах российских и международных конференций, 3 статьи в нерецензируемых научных журналах, 5 статей в сборниках научных трудов, получен 1 патент. В монографии «Патоморфоз острого клещевого энцефалита на Среднем Урале» 17 (Екатеринбург, 2008 г.) Ю.Г. Лагерева является соавтором главы «Иммунология клещевого энцефалита». Объем и структура диссертации Диссертация изложена на 309 страницах машинописного текста, состоит из введения, обзора литературы, главы с описанием материалов и методов исследования, 5 глав с изложением результатов собственных исследований, заключения и выводов, иллюстрирована 95 таблицами и 50 рисунками. Библиография включает 482 источника. 18 Глава 1. ХАРАКТЕРИСТИКА ЭФФЕКТОРНЫХ СУБПОПУЛЯЦИЙ Т-ЛИМФОЦИТОВ И ИХ РОЛИ В ПРОТИВОВИРУСНОМ ИММУННОМ ОТВЕТЕ (ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ) 1. 1. Эффекторные субпопуляции Т-лимфоцитов: биологические функции, индукция дифференцировки, пластичность и трансформации Дифференцировка наивных Т-лимфоцитов в функционально полноценные Тэффекторы сопровождается приобретением нового профиля цитокиновой продукции, который имеет решающее значение в классификации и функционировании Тэффекторов, играющих ключевую роль в механизмах адаптивного иммунного ответа. В 1986 года исследованиями Coffman и Mossman было продемонстрировано, что цитокиновый профиль может быть использован для категоризации CD4 эффекторных Тклеток, названных соответственно Т-хелперами первого и второго типа (Th1 и Th2) и выполняющих различные иммунологические функции [106, 315]. В последние годы были описаны другие типы эффекторных Т-клеток, обладающих различными биологическими функциями. Th1, Th2, Th17, TFH, Th9, Th22 и т.д. вовлечены в различные типы воспалительных реакций, в то время как регуляторные Т-клетки (Treg), включая натуральные Т-регуляторные лимфоциты (nTreg), индуцированные Treg (iTreg) и Treg1 типа (Tr1) участвуют в иммунологической супрессии. Th1, Th2, Th17, Treg-лимфоциты: биологические функции Th1 лимфоциты отличает продукция провоспалительных цитокинов, таких как IFN-γ, TNF-α, TNF-β и т.д., стимулирующих врожденный иммунитет и Т-клеточный иммунный ответ. Th1 также индуцируют синтез IgG2a или равнозначных IgG2c антител В-лимфоцитами. Th1-иммунный ответ ассоциирован преимущественно с клеточно-опосредованными иммунологическими реакциями, связанными с клеточной цитолитической активностью. Th1 лимфоциты играют решающую роль в защите организма от облигатных внутриклеточных патогенов. Классическим примером 19 является их роль при инфицировании Leismania major. Th1 ответ и продукция IFN-γ также играет решающую роль в защите организма хозяина от внутриклеточных бактерий, таких как Mycobacterium avium, Salmonella typhimurium, Listeria monocytogenes, грибов, таких как Cryptococcus neoformans и вирусов, таких как вирус простого герпеса (HSV), вирус гриппа А и т.д. Помимо участия в элиминации патогенов Th1 лимфоциты играют важную роль в противоопухолевом иммунитете. С другой стороны, Th1 лимфоциты, благодаря тем же провоспалительным свойствам, могут приводить к повреждению тканей организма и провоцировать аутоиммунные реакции [254]. Th2 лимфоциты идентифицируют на основании их способности продуцировать IL-4, IL-5, IL-13 и т.д. Th2 клетки способствуют переключению синтеза иммуноглобулинов на антитела, принадлежащие к IgG1 и IgE классу, а также привлечению в очаг воспаления эозинофилов [106]. Th2-ответ часто ассоциируется с гуморальным иммунитетом, сопровождающимся массивным синтезом патоген- специфических антител, нейтрализующих антигены. Таким образом, Th2-ответ играет существенную роль в резистентности к экстраклеточным формам патогенов, таким как гельминты и нематоды. Th2 лимфоциты также осуществляют регуляцию местного иммунитета на слизистых оболочках. Неконтролируемая активация Th2-клеток приводит к развитию патологии. Бронхиальная астма, другие аллергические заболевания характеризуются локальной инфильтрацией аллерген-специфических CD4 Т-лимфоцитов, относящихся к Th2 типу [337]. Поскольку Th2 ответ направлен на патогены, появившиеся эволюционно позже тех, резистентность к которым обеспечивает Th1 ответ, возможно, Th2 лимфоциты возникли у позвоночных позже Th1 клеток. Th17 лимфоциты – относительно недавно открытая субпопуляция Т-эффекторов. Th17 лимфоциты продуцируют IL17A, E и F из шести членов семейства IL-17: IL-17A, B, C, D, E (IL-25) и F [235, 241]. На сегодняшний день установлено, что Th17 продуцируют также IL-21 и IL-22 [259, 332, 479]. Th17-ответ имеет общие черты с Th1и Th2-вариантами иммунного ответа. Th17 лимфоциты участвуют в формировании резистентности к Listeria, Salmonella, Toxoplasma, Cryptococcus, Leishmania и Francisella [95, 232, 262]. Несколько моделей, связанных с возбудителями различных инфекционных заболеваний, демонстрируют важную и специфическую роль Th17 20 лимфоцитов: Klebsiella [176], внутривенная инфекция Candida albicans [192]. Кроме того, преимущественная продукция IL-17 Т-лимфоцитами при инфицировании Bacteroides fragilis [104], Borrelia burgdorferi, Mycobacterium tuberculosis [199], различными видами грибов [244] подтверждает, что Th17-ответ инициируется различными видами патогенов и необходим для их клиренса. Помимо участия в контроле инфекционных заболеваний Th17 лимфоциты играют важную роль в индукции и прогрессировании аутоиммунных реакций. Экспрессия IL-17 ассоциирована с развитием рассеянного склероза, ревматоидного артрита, псориаза, а также аллергических реакций [241, 468]. Натуральные Treg (nTreg) – субпопуляция CD4+ Т-лимфоцитов, которые созревают в тимусе и конститутивно экспрессируют α-цепь рецептора IL-2 (CD25), CTLA-4 (Cytotoxic T-Lymphocyte Antigen 4) и GITR (Glucocorticoid-induced TNFR-related gene). nTreg составляют 5-10% периферических CD4+ Т-лимфоцитов. Они продуцируют IL-10 и содержат мембран-связанную форму TGF-β. nTreg продуцируют ингибиторные цитокины и активно модулируют иммунный ответ. Индуцированные регуляторные Тклетки (iTreg) дифференцируются из наивных Т-клеток в присутствии TGF-β в ответ на стимуляцию Т-клеточного рецептора (TCR). Эти клетки в больших количествах продуцируют IL-10 и TGF-β [401]. В отличие от Th1, Th2, Th17 лимфоцитов iTreg проявляют иммуносупрессивную активность с минимальной антигенной специфичностью. Tr1 – еще одна субпопуляция регуляторных Т-лимфоцитов, продуцирующих IL-10 и TGF-β, отличающаяся от iTreg экспрессией FoxP3 [435]. Основной функцией регуляторных Т-лимфоцитов является поддержание аутотолерантности и иммунологического гомеостаза. Нарушение функционирования nTreg приводит к развитию системного лимфопролиферативного аутоиммунного синдрома [383]. Регуляторные Т-лимфоциты также регулируют противоинфекционный иммунный ответ и восстанавливают иммунный гомеостаз после элиминации патогена [77, 275]. Th1, Th2, Th17, Treg-лимфоциты: индукция дифференцировки Дифференцировка эффекторных Т-лимфоцитов происходит в ходе антигенспецифической клональной экспансии наивных Т-клеточных предшественников с участием множества различных факторов. TCR-стимуляция, ко-стимуляция, киназный 21 каскад, цитокиновый сигналинг и транскрипционные сети – основные факторы, определяющие дифференцировку Т-эффекторов. Роль TCR-стимуляции и ко-стимуляции в индукции дифференцировки различных субпопуляций Т-эффекторов Взаимодействие TCR и MHC II необходимо для активации CD4+ Т-лимфоцитов. Природа антигенного стимула оказывает влияние на Th-поляризацию. Сродство между TCR и пептид-связывающими MHC II и, таким образом, сила TCR-стимуляции влияет на выбор направления дифференцировки, возможно, продолжительности и силы кальциевых потоков. в результате регуляции Дифференцированное включение специфических мембран-ассоциированных факторов в липидные мостики, известные как SupraMolecular Activation Clusters (SMAC) в Th1 и Th2 лимфоцитах также может вносить вклад в этот феномен [170]. SMAC композиция в покоящихся эффекторных Th1 и Th2 клетках не отличается. Однако, Th1 лимфоциты, в отличие от Th2 клеток чрезвычайно чувствительны к низкоаффинной стимуляции, в то время как оба типа клеток эффективно отвечают на высокоаффинные антигены. Помимо TCR-сигнала костимуляция, опосредованная CD28-B7 и другими поверхностными молекулами, чрезвычайно важна для эффективной Т-клеточной активации. По сравнению, с Th1-, Th2- ответ более Индуцибельные преимущественно значимо Т-клеточные для страдает у или CD28- ко-стимуляторы Th2-дифференцировки. и B7-дефицитных мышей. сигналинг важны OX40 Взаимодействие между LFA-1 (Lymphocyte function-associated antigen 1) и ICAM-1,-2 (Inter-Cellular Adhesion Molecule 1,2) ингибирует Th2-ответ [399]. В зависимости от типа лигандов, связывающихся с рецептором, Notch сигналинг играет важную роль в выборе направления Т-клеточной дифференцировки; лиганд Delta индуцирует дифференцировку Th1, в то время как лиганд Jagged способствует дифференцировке Th2 лимфоцитов [58]. Вслед за образованием T-клетка-АРС–синапса происходит немедленная активация нескольких сигнальных молекул: Src киназа фосфорилирует и активирует Tec тирозин-киназы, которые в свою очередь активируют PLC-γ, что является необходимым условием для образования IP3 для поддержания внутриклеточного кальциевого потока. Показано, что Txk (представитель семейства Тес) необходимы для продукции IFN-γ, а не IL-4 [414]. Таким образом, Тес киназы важны для Th1-Th2 дивергенции при интегрировании 22 антиген-стимулирующих сигналов. Роль TCR-стимуляции, ко-стимуляции и последующих событий при передаче сигнала в дифференцировке Th17 и Treg клеток в настоящее время активно изучается. Роль цитокинов в индукции дифференцировки различных субпопуляций Тэффекторов Цитокины играют решающую роль в дифференцировке эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов. Th1 дифференцировка. Для Th1 дифференцировки сигнальным цитокином является IFN-γ. Основным источником IFN-γ являются NK, CD8+ и CD4+ Th1 клетки. Наивные CD4+ и В-лимфоциты также в небольших количествах продуцируют IFN-γ. Представления о том, синтезируют ли IFN-γ макрофаги и дендритные клетки, остаются противоречивыми. Многие лимфоидные (включая Т-лимфоциты) и не-лимфоидные типы клеток экспрессируют гетеродимерные IFN-γ рецепторы-1 и -2, и, таким образом, активируются IFN-γ посредством Jak1/Jak2-STAT1 сигнального пути. Нарушение этого сигнального пути приводит к нарушению иммунного ответа на микробные патогены и некоторые вирусы. IL-12 – растворимый фактор, который способствует Th1-дифференцировке. IL-12 состоит из двух субъединиц: p35 и p40. IL-12 продуцируется клетками врожденного иммунитета в результате активации и стимуляции IFN-γ. IL-12 связывается с соответствующими рецепторами и активирует Jak2/Tyk2-STAT-1,3,4 сигнальные пути. IL-12 необходим для экспрессии IL-18 Rα [389], рецептора для IL-18, который служит кофактором для IL-12 в индукции синтеза IFN-γ CD4+ Т-клетками и Th1 дифференцировке. Поскольку на Th1 клетках поддерживается экспрессия рецепторов к IL-12 и IL-18 даже в покоящемся состоянии, стимуляция IL-12 и IL-18 приводит к синтезу IFN-γ дифференцированными Th1 клетками в отсутствии TCR-стимуляции. IL12 не является обязательным условием для инициации Th1-программы, но необходим для поддержания оптимального синтеза IFN-γ активированными Т-лимфоцитами. IL-27 имеет общие свойства с IL-12 и IL-18 [353]. Подобно IL-12 IL-27 индуцирует Th1 дифференцировку наивных CD4 Т-клеток. IL-27 связывается с цитокиновым рецептором WSX-1 или Т-клеточным цитокиновым рецептором TCCR, 23 что приводит к активации STAT1 и индукции экспрессии IL-12Rβ2 и IFN-γ [186, 415]. IL-27R играет важную роль в ранней Th1-дифференцировке. Th2 дифференцировка. IL-4 является главным цитокином, регулирующим Th2дифференцировку, связывается с рецептором IL-4Rα и активирует STAT6. В последние годы описаны также IL-4-независисмые пути дифференцировки Th2 клеток с участием IL-25, IL-33 и тимического стромального лимфопоэтина (TSLP) [337]. Th17 дифференцировка. TGF-β и IL-6 действуют согласованно, приводя к дифференцировке Th17 клеток [80, 177]. Активация наивных Т-хелперов в присутствии липополисахарид-стимулированных АРС и CD4+CD25+nTreg приводит к образованию IL17A, а не цитокинов Th1/Th2 типов. Помимо TGF-β для дифференцировки IL-17 синтезирующих Т-эффекторов необходим IL-6. Исследования показали, что TGF-β в присутствии IL-6, который сам по себе приводит к индукции синтеза IL-22 [479], индуцирует образование Th17 лимфоцитов. Добавление IL-6 приводит к супрессии TGF-β-индуцированной генерации FoxP3 Treg, реципрокно стимулируя генерацию Th17 лимфоцитов [80, 177]. Аутокринный TGF-β является доминирующим механизмом, способствующим Th17 дифференцировке. IL-23 и IL-21 – цитокины, продуцируемые клетками врожденного иммунитета и Т-лимфоцитами и играющие важную роль в Th17 дифференцировке. В отличие от TGFβ и IL-6, которые участвуют в индукции Th17 дифференцировки, IL-23 необходим для поддержания жизнеспособности и пролиферации дифференцированных Th17 клеток. IL23 связывается с IL-23R комплексом, состоящим из IL-12Rβ1 цепи и цепи IL-23R, относящейся к IL-12Rβ2 и gp130. Jak2/Tyk2-STAT1, 3, 4 и 5 вовлечены в механизмы внутриклеточной трансдукции сигнала [347]. В отличие от IL-12, IL-23 преимущественно активирует STAT3, а не STAT4. IL-21 – член семейства IL2, который продуцируется Th17 лимфоцитами. IL-2, подобно IL-6, индуцирует дифференцировку Th17 клеток наряду с TGF-β [332, 480]. IL-21-сигнальный путь, участвующий в Th17 дифференцировке, нуждается в дальнейшем изучении. Treg дифференцировка. Ранее было показано, что IL-2 необходим для образования nTreg. Однако, IL-2 сигналинг не является абсолютным условием для развития nTreg. Последние исследования продемонстрировали, что FoxP3 nTreg присутствуют в тимусе и периферических лимфоидных органах в достаточных количествах и в отсутствии генов IL-2 и CD25 [145]. IL-2 участвует в активации и 24 обеспечивает оптимальное функционирование nTreg [122, 422, 423], поддерживая их пролиферацию и гомеостаз. TGF-β – семейство плейотропных цитокинов, включающее TGF-βs, активины, факторы роста и дифференцировки и т.д. TGF-β1 – изоформа, преимущественно экспрессируемая клетками иммунной системы [257]. TGF-β1 играет решающую роль в генерации Th17 и Treg лимфоцитов с участием таких цитокинов, как IL-6 или IL-21. IL-10 изначально был описан как фактор, ингибирующий синтез цитокинов. Связывание IL-10 с рецептором приводит к активации Jak1/Tyk2-STAT1α в клетках мишенях. IL-10 – цитокин, экспрессируемый в больших количествах Tr1 клетками и необходимый для выполнения биологических функций этим типом регуляторных Тлимфоцитов. При постоянной (хронической) активации Т-хелперы в присутствии IL-10 дифференцируются в Tr1 клетки [66]. Однако вопрос о том, является ли IL-10-сигналинг решающим для генерации или функционирования Tr1 клеток, остается дискутабельным. Th1, Th2, Th17, Treg-лимфоциты: основные транскрипционные факторы Профиль цитокиновой экспрессии определяет и детерминирует дифференцировку той или иной линии Т-эффекторов. Однако, существование специфических клеточных линий коррелирует с наличием одного или более транскрипционных факторов. Th1 лимфоциты. T-bet также известный как Tbx21, принадлежащий к T-box семейству транскрипционных факторов – единственный известный T-box ген, экспрессирующийся в клетках лимфоидной системы. Индукция T-bet быстро и специфически происходит в Th1, но не Th2 клетках и контролируется сигналами от TCR и IFN-γR-STAT1. T-bet участвует не только в Th1-дифференцировке, но и подавляет оппозиционную Th2 программу. Hlx – Th1-специфический ген, который специфически взаимодействует с T-bet. Его экспрессия выявляется на третий день после Th1 дифференцировки и отличает Th1 клоны от Th2. Таким образом, Hlx как кофактор T-bet усиливает активность T-bet и Th1 дифференцировку. STAT4 – транскрипционный фактор, имеющий критическое значение для IL-12 сигналинга. Механизм, по которому STAT4 активизирует IFN-γ экспрессию, до сих пор не известен. 25 Th2-лимфоциты. GATA-3 – член GATA семейства транскрипционных факторов. GATA-3 управляет Th2-дифференцировкой, связываясь с IL-4 локусом, который охватывает IL-4, IL-5 и IL-13 гены. Повышенная экспрессия GATA-3 в Th1 лимфоцитах приводит к индукции продукции IL-4. Кроме того, даже в дифференцированных Th2 клетках нейтрализация GATA-3 приводит к блокированию продукции IL-5 и IL-13 [482], при этом продукция IL-4 нарушается лишь частично. STAT6 активируется IL-4 и является основным сигнальным трансдуктором в IL-4опосредованной Th2 дифференцировке in vitro. Однако, in vivo Th2 ответ может быть получен независимо от STAT6 [206, 305]. In vitro одним из механизмов, по которому STAT6 запускает Th2 дифференцировку, является индукция на высоком уровне транскрипционного фактора GATA-3. STAT6 необходим и достаточен для индукции GATA-3 [481]. c-Maf – транскрипционный фактор, чье содержание селективно повышается в Th2 лимфоцитах. Он необходим для продукции IL-4, но не других Th2 цитокинов. Транскрипционные факторы Gfi-1 и IRF-4 также участвуют в Th2 дифференцировке [271, 367, 482]. Th17 лимфоциты. Редкие рецепторы, родственные ретиноидным (Retinoic acidrelated orphan receptors (ROR)) – ключевые транскрипционные факторы в Th17 дифференцировке. Содержание ROR-γt mРНК повышается в ответ на IL-23, что коррелирует с экспрессией IL-17 [203]. Гены-мишени ROR-γt еще не идентифицированы, однако вероятным кандидатом является IL-17 [207]. ROR-α - также высоко экспрессируемый в Th17 клетках транскрипционный фактор, активируемый TGF-β и IL-6. Treg-лимфоциты. FoxP3 – X-связанный транскрипционный фактор, принадлежащий к Fork-head семейству протеинов. Он экспрессируется nTreg и индуцируется TGF-β в антиген-стимулированных iTreg. Постоянная экспрессия FoxP3 необходима для поддержания супрессорной активности Treg клеток [460]. Снижение FoxP3 экспрессии приводит к снижению супрессорной активности и конверсии Treg лимфоцитов в Th2-клетки [437]. Однако, FoxP3 не является абсолютным условием для развития Treg, скорее его присутствие необходимо для поддержания и стабилизации супрессорной активности этих клеток [153]. 26 Пластичность и трансформации эффекторных Т-лимфоцитов Исследования, проведенные в последние годы, показали, что Т-эффекторы демонстрируют определенную пластичность и возможность трансформации в другие типы эффекторных Т-клеток. Долгоживущие Th1-эффекторы/клетки памяти способны отключать программу синтеза IFN-γ [178]. В nTreg может подавляться экспрессия FoxP3 и инициироваться синтез Th2-цитокинов [210, 437]. Кроме того, nTreg могут трансформироваться в Th17 клетки в присутствии активированных дендритных клеток, возможно с участием IL-6 [362]. Сходным образом, дифференцированные Th17 могут трансформироваться в Th1 лимфоциты в отсутствии TGF-β [250]. Таким образом, различные субпопуляции Т-эффекторов в разной степени обладают способностью трансформироваться в другие субпопуляции и приобретать новые функциональные характеристики в ходе вторичной реактивации или хронического воспаления [154]. Tc1, Tc1, Tnс17 лимфоциты: биологические функции и индукция дифференцировки Цитокины, продуцируемые CD8+ Т-лимфоцитами, в основном относятся к Th1типу. Продуцируемые CD8+ Т-лимфоцитами IFN-γ, TNF-α, TNF-β активируют цитотоксические функции макрофагов и гранулоцитов. Однако, не все цитотоксические лимфоциты синтезируют цитокины Th1-типа. Сразу несколькими исследовательскими группами было продемонстрировано, что CD8+ Т-лимфоциты могут синтезировать цитокины Th2-типа в результате дифференцировки in vivo [94, 277] и in vitro [109, 378]. Tc1 лимфоциты были определены как субпопуляция CD8+ Т-лимфоцитов, секретирующих IFN-γ, но не секретирующих IL-4 или IL-5. В то время как Тс2 клетки – это CD8+Т-лимфоциты, синтезирующие IL-4, IL-5, но не IFN-γ. Такие Th2- специфические цитокины, как IL-6 и IL-10 синтезируются в больших количествах Тс2 клетками, но также могут в небольших количествах продуцироваться и Тс1 лимфоцитами. В отличие от CD4+ Т-лимфоцитов, цитотоксические Т-лимфоциты дифференцируются с большей степенью вероятности в Тс1 клетки. Также как и в случае дифференцировки Th1 лимфоцитов, для дифференцировки Tc1 лимфоцитов необходимы IFN-γ и IL-12. Тс2 дифференцировка требует присутствия высоких концентраций IL-4 в отсутствии IFN-γ [378]. IL-4 секретирующие CD8+ Т-клетки могут в меньшей степени проявлять свою цитотоксичность [277], чем Тс1 лимфоциты или 27 быть в той же степени цитотоксичными [378, 379], в зависимости от условий роста. И Тс1, и Тс2 осуществляют киллинг клеток-мишеней с помощью перфорина, кроме того, обе субпопуляции стимулируют апоптоз Fas-экспрессирующих мишеней [379]. Существуют доказательства того, что Тс2 лимфоциты могут осуществлять хелперные функции в отношении В-лимфоцитов, что трудно согласуется с их сохранной цитотоксической активностью. Эксперименты с Т-клетками перфорин-дефицитных мышей показали, что Тс1 и, особенно, Тс2 лимфоциты могут обеспечивать помощь в синтезе IgM, но гораздо в меньших количествах, чем Th клетки. Тс2 клетки также индуцируют синтез IgG1 у мышей, что согласуется с синтезом IL-4, фактором, переключающим синтез иммуноглобулинов на IgG1. В отличие от прямого Тклеточного распознавания В-клеток, Тс2 клетки, которые были активированы независимо, могут взаимодействовать с В-лимфоцитами посредством CD40L, который экспрессируется на низком уровне на Тс2 лимфоцитах [379]. Высокие уровни цитокинов Th2-типа, продуцируемые Тс2 лимфоцитами, также обуславливают хелперный эффект. Пролиферация В-лимфоцитов индуцируется аллоспецифическими Т-лимфоцитами согласно следующей иерархии: Th2>Th1>Tc2>Tc1. Отсутствие перфорина усиливает способность Тс клеток усиливать пролиферацию В-лимфоцитов, но не достигает уровня, обеспечиваемого Т-хелперами. И Тс1, и Тс2 лимфоциты индуцируют инфильтрацию очага воспаления клетками, экспрессирующими Gr1 антиген, в основном нейтрофилами. Mac3+ клетки также рекрутировались и Тс1, и Тс2 лимфоцитами. Эозинофилы привлекаются в основном Tс2 клетками. Тс2 лимфоциты опосредуют обе стадии реакции гиперчувствительности замедленного типа – селективную миграцию в очаг воспаления и привлечение эффекторных клеток воспаления, макрофагов и гранулоцитов [316]. Различная цитокиновая продукция CD8+ Т-лимфоцитами может быть востребована на разных стадиях иммунного ответа. Предшественники цитотоксических лимфоцитов не обладают цитотоксичностью, таким образом, они не разрушают APC, обеспечивая оптимальную стимуляцию и пролиферацию. По истечении нескольких дней CD8+ Т-клетки дифференцируются в цитотоксические эффекторы, которые обладают способностью мигрировать в очаги воспаления. Если инфицированные клетки преобладают, CD8+ Т-лимфоциты секретируют большие количества цитокинов, усиливая воспалительную реакцию и рекрутируя дополнительные специфические и неспецифические эффекторы. По мере снижения количества инфицированных клеток- 28 мишеней, цитотоксические лимфоциты по-прежнему разрушают их, но цитокиновый синтез может модифицироваться. Таким образом, Тс2 лимфоциты, сохраняющие цитотоксичность, могут сосуществовать с Th2-опосредованным гуморальным ответом, в то время как Tc1 и Th2 субпопуляции представляют собой взаимоисключающие варианты. Сходным образом, воспалительные реакции, опосредованные Tc1 и Тс2 клетками могут отличаться, отвечая требованиям иммунного ответа на определенные патогены. Цитотоксические и провоспалительные свойства цитотоксических Тлимфоцитов могут независимо регулироваться в зависимости от количества клетокмишеней. TGF-β и IL-6 способствуют дифференцировке CD8+ Т-лимфоцитов в нецитотоксические IL-17–секретирующие клетки. IL-17+CD8+ Т-лимфоциты демонстрируют уникальный гранзим В-IFN-γ-IL-10- фенотип. Уровень мРНК для Th2/Tc2 транскрипционного фактора GATA3 и Th1/Tc1 транскрипционного фактора Tbet снижен в Тс лимфоцитах, дифференцирующихся в присутствии TGF-β и IL-6. Кроме того, в этих клетках повышена экспрессия ROR-γt, ключевого транскрипционного фактора Th17 лимфоцитов. Данные результаты демонстрируют существование популяции IL-17-секретирующих CD8+ Т-лимфоцитов, которые не принадлежат ни к Тс1, ни к Тс2 субпопуляциям, а могут быть категоризированы как нецитотоксические Tnc17 лимфоциты [267]. 1.2. Субпопуляции Т- лимфоцитов памяти, изменение численности Тэффекторов/клеток памяти в зависимости от возраста и пола После разрешения иммунного ответа большинство CD4+ эффекторных Тлимфоцитов погибает путем апоптоза, остается лишь небольшая популяция клетокпамяти, которая, тем не менее, по численности превышает первоначальное количество антиген-специфических наивных лимфоцитов. По крайней мере, в некоторых ситуациях, сила эффекторного ответа коррелирует с размером результирующего пула клеток-памяти [295]. Примированные антигеном Т-клетки можно разделить на центральные Т-клетки-памяти (TCM), эффекторные Т-клетки-памяти (TEM) и эффекторные субпопуляции (TEFF), отличающиеся по основным миграционным и функциональным характеристикам, хотя реальная ситуация может быть гораздо сложнее [284]. Центральные клетки памяти сохраняют экспрессию хоминговых 29 рецепторов: L-селектина и хемокинового рецептора (ССR7) и, подобно наивным клеткам, широко представлены во вторичных лимфоидных органах. TCM также локализуются в периферических тканях и очагах воспаления [218]. По сравнению с наивными Т-клетками TCM более чувствительны к антигенной стимуляции, менее зависимы от ко-стимуляции и экспрессируют на высоком уровне CD40L, что позволяет более эффективно воспринимать стимуляционные сигналы от дендритных клеток и Влимфоцитов [386]. В ответ на TCR-активацию TCM продуцируют в основном IL-2. После пролиферации они эффективно дифференцируются в эффекторные клетки и продуцируют в больших количествах IFN-γ и IL-4. Однако, среди TCM лимфоцитов присутствует часть клеток, так называемые пре-коммитированные неэффекторные клетки, которые спонтанно могут дифференцироваться в IFN-γ и IL-4-продуцирующие клетки, даже в отсутствии поляризующих цитокинов. Эти клетки представляют собой пре-Th1 и пре-Th2 и могут быть идентифицированы на основании экспрессии CXCR3 и CCR4, соответственно [243]. В отличие от TCM TEM и TEFF являются CCR7-негативными и большинство из них также L-селектин-/low. TEM являются долгоживущими, в то время как эффекторные Тлимфоциты в основном представлены короткоживущими активированными Т-клетками. И эффекторные Т-лимфоциты, и эффекторные Т-клетки памяти теряют способность мигрировать в периферические лимфатические узлы и представлены в основном в нелимфоидных тканях. Однако, они могут мигрировать в реактивные лимфатические узлы и модулировать иммунный ответ [171, 288]. CD62L-CCR7- эффекторные клетки памяти обладают большим количеством функций по сравнению с центральными клетками памяти: они поляризованы в отношении продукции цитокинов и продуцируют не только IL-2, но и эффекторные цитокины IFN-γ, IL-4, TNF-α [82]. CD8 TEM содержат большое количество перфорина. Таким образом, пул TEM у человека включает в себя дифференцированные Th1, Th2 и CTL. Относительные пропорции TEM и TCM в периферической крови варьируют в популяции CD4+ и CD8+ лимфоцитов: TCM преобладают среди CD4+ лимфоцитов, в то время как в CD8+ субпопуляции доминируют TEM [386]. Зрелые Т-клетки с фенотипом CD45RA+CD62L-CCR7- получили название терминально-дифференцированных эффекторных клеток памяти (TEMRA). TEMRA субпопуляцию образуют зрелые цитотоксические CD8+Т-лимфоциты, содержащие перфорин и гранзим В, экспрессирующие FasL и продуцирующие IFN-γ и TNF-α, 30 подобно наивным Т-лимфоцитам они экпрессируют CD45RA и молекулы хоминга, сходные с эффекторными клетками памяти, т.е. лишены CD62L и CCR7, несут CD11a/CD18, CD11b, CD49d [44]. Зрелые цитокинпродуценты с аналогичным фенотипом CD45RA+CD62L-CCR7- обнаружены и среди CD4+ Т-лимфоцитов [318]. Изучению факторов и механизмов, влияющих на дифференцировку антиген- примированных CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов в коротко-живущие эффекторы или клетки памяти, посвящено большое количество исследований [60, 395, 403 и др.]. Исследованиям, направленным на изучение динамики цитокиновой экспрессии в Тлимфоцитах в зависимости от возраста у детей и взрослых, посвящены единичные публикации [90, 102, 151, 152, 189, 458]. Количественные характеристики содержания тех или иных цитокин-положительных субпопуляций в разных возрастных группах отличаются в зависимости от используемых модификаций метода внутриклеточного окрашивания цитокинов (выбор индукторов экспрессии, времени индукции и т.д.), а также границ возрастной группы. Большинство исследователей сходится во мнении, что у новорожденных детей Т-лимфоциты имеют преимущественно фенотип наивных клеток, уровень клеток памяти увеличивается с возрастом, и, поскольку, большинство цитокинов продуцируется клетками памяти, более высокая цитокиновая экспрессия характеризует детей старшего возраста [152, 392]. В исследованиях, проведенных Wiegering V. et al., показана позитивная, значимая корреляция содержания IFN-γ в хелперных и цитотоксических лимфоцитах в зависимости от возраста [458]. Повышение уровня Th1 лимфоцитов с возрастом описано в исследованиях Chipeta J. [102] и Hoffmann F. [189]. И у детей и у взрослых содержание Тс1 лимфоцитов выше, чем содержание Th1 клеток [90]. Данные, касающиеся изменения соотношения Th1 и Th2 лимфоцитов в разных возрастных группах, полученные разными авторами, зачастую противоречивы. Так, Wiegering V. et al. в связи с низким содержанием цитокинов Th2типа (IL-4, IL-5, IL-10) не удалось отметить какой-либо тенденции к изменению содержания Th2 лимфоцитов по мере взросления ребенка [458]. Смещение в сторону увеличения Th2 клеток с возрастом отмечено в публикации Shearer G.M. [392]. Buck R.H. et al. приводят данные, свидетельствующие о том, что к 12 месяцам абсолютное и относительное содержание Th2 лимфоцитов у детей ближе к уровню этих клеток у взрослых, чем содержание Th1 лимфоцитов, что говорит о раннем созревании Th2 лимфоцитов по действием мукозальных антигенов [90]. 31 На всех уровнях и этапах формирования и функционирования иммунной системы осуществляется гормональный контроль, чему способствует наличие стероидных рецепторов на иммунокомпетентных клетках [14]. И эстрогены, и андрогены снижают содержание незрелых Т-лимфоцитов [339, 421]. Иммуномодулирующее действие эстрогенов на экспрессию цитокинов Th1- и Th2-типов зависит от множества факторов, например, дозы гормона, времени экспозиции, а также плотности, распределения и типа рецепторов (ER) на иммунокомпетентных клетках. Низкие уровни эстрогенов коррелируют с повышением экспрессии транскрипционного фактора T-bet, который участвует в дифференцировке Th1 клеток [144]. Повышение продукции IFN-γ Th1 клетками под действием эстрадиола (E2) описано Bao M. et al. [69]. Maret A. et al. продемонстрировали, что E2 способствует дифференцировке Th1 клеток при участии ERα [285]. Помимо про-Th1 эффекта E2 влияет и на дифференцировку Th2 клеток. Увеличение уровня IL-4 в лютеиновую фазу связано также с участием E2 [135]. E2 способствует увеличению секреции IL-4 CD4+ T клетками, также как и эскпрессии GATA-3 у мышей [239]. Стимуляция эстрогенами Th2 ответа и антителообразования показана в исследованиях Giron-Gonzalez et al. [160], Fish et al. [144], Gonzalez et al. [163]. Высокие уровни эстрогенов ингибируют IRF1 (интерферон регулирующий фактор 1), благоприятствуя Th2 иммунитету и экспрессии IL-4 [144]. Модулирующее действие эстрогенов на дифференцировку Treg клеток изучено в работах Polanczyk et al. Установлено, что E2 усиливает экспрессию Foxp3 in vivo и in vitro [355, 356]. Prieto G.A. et al. и Valor L. et al. также продемонстрировали, что E2 способствует пролиферации Treg [359, 431]. Повышение содержания регуляторных клеток наблюдали при повышении уровня эстрогенов в ходе менструального цикла [63]. Что касается Th17 клеток, в течение длительного времени господствовала точка зрения, что E2 ингибирует образование Th17 клеток [75] и продукцию IL-17 [438]. Однако, Khan et al. показали, что E2 усиливает экспрессию IL-17 и RORγ в стимулированных спленоцитах мышей [228]. Несмотря на противоречивые результаты, очевидно, что E2 регулирует образование Th17, по-видимому, в зависимости от контекста. Таким образом, E2 может как способствовать дифференцировке Th1, Th2, Treg и Th17 клеток, так и оказывать ингибирующее действие на эти субпопуляции. Эстрогены также играют определенную роль в регуляции хоминга T-клеток, усиливая экспрессию хемокиновых рецепторов CCR1 и CCR5 на CD4+ клетках [310]. В основе молекулярных механизмов 32 иммуномодулирующего действия E2 лежит взаимодействие с его рецепторами и внутриклеточные сигнальные пути с участием ERK, CREB и Akt, а также антиоксидантных ферментов [360]. В 1995 году Piccinni et al. продемонстрировали, что прогестерон (P4) способствует дифференцировке Th2 клеток [354]. Про-Th2 эффект P4 ассоциирован с повышением продукции IL-4, наблюдаемым в лютеиновую фазу менструального цикла, сопровождающуюся увеличением уровня P4 и эстрогенов [135]. Кроме того, P4 ингибирует дифференцировку Th1, усиливая Th2 поляризацию [308] и снижает экспрессию IFN-γ в лютеиновую фазу [130]. Установлено также влияние P4 на Treg [445]. Lee et al. показали, что P4 способствует дифференцировке эмбриональных T клеток в Treg [248]. P4 также участвует в генерации iTreg [249]. P4 ингибирует дифференцировку Th17 и снижает экспрессию ассоциированных факторов: RORc и IL17А. Мембранные рецепторы для P4 обнаружены на человеческих T лимфоцитах [131]. Кроме того, доказано существование ядерных рецепторов [248, 249]. Таким образом, P4 благоприятствует образованию Th2 и Treg, подавляя дифференцировку Th1 и Th17. Рецепторы к андрогенам (AR) экспрессируются на CD3+, CD4+, и CD8+ тимоцитах с наибольшей плотностью на CD3lowCD8+ тимоцитах. Инволюция тимуса приводит к снижению экспорта Т-лимфоцитов на периферию и, как следствие, снижению репертуара TCR [179]. Наконец, пролиферация спленоцитов в ответ на стимуляцию TCR также повышается после кастрации самцов мышей независимо от возраста, что свидетельствует о том, что андрогены могут влиять на амплитуду Т-клеточного ответа [410]. Доминирующим на сегодняшний день является мнение об ингибирующем влиянии тестостерона на иммунный ответ на вирусные и собственные антигены [286, 425]. Показано, что обработка андрогенами in vitro приводит к подавлению дифференцировки Th1 клеток и снижению продукции IFN- и снижает IL-12индуцированное образование Th1 субпопуляции [231]. Стимуляция тестостероном приводит к увеличению содержания фосфатазы Ptpn1 AR-зависимым образом [231]. Ptpn1 инактивирует Jak2 и Tyk2 киназы, ответственные за IL-12-индуцированное фосфорилирование STAT4, необходимое для индукции дифференцировки Th1. Одновременно представлены данные, свидетельствующие о стимулирующем действии андрогенов на дифференцировку Th1 клеток и CD8+ T лимфоцитов [144, 160, 163]. Исследование дифференцировки Th2 клеток при паразитарных инфекциях 33 продемонстрировало, что андрогены ингибируют их образование. У женщин генерируется более эффективный Th2 ответ, играющий решающую роль в клиренсе паразитов [183]. Самки IL-4 дефицитных Balb/c мышей в отличие от самцов, инфицированных Trichuris muris, способны генерировать поздний IL-13- опосредованный Th2 ответ. Кастрация самцов приводит к снижению экспрессии IL-18 и повышению образования Th2 клеток [183]. Действие андрогенов на Treg изучено в основном на мышиных моделях. Получены достаточно противоречивые результаты. С одной стороны, введение тестостерона приводило к повышению образования Treg из CD4+спленоцитов [143]. С другой стороны, у Pten_/_ мышей после кастрации наблюдали экспансию Treg [420]. Действием андрогенов объясняют и увеличение синтеза IL-17A наивными CD4+ T клетками мужчин по сравнению с женщинами [476]. Опубликованы результаты исследований, описывающие действие ДГЭА на Th1/Th2 баланс. В исследованиях in vitro на мышиных спленоцитах Powell et al. [358] показали, что ДГЭА способствует дифференцировке Th2 и снижает продукцию Th1 цитокинов. Однако, Canning et al. [92], используя человеческие дендритные клетки моноцитарного происхождения, продемонстрировали, что инкубация с 1μM ДГЭА связана с увеличением маркеров Th1 фенотипа. Таким образом, у человека влияние ДГЭА приводит к повышению продукции IL-2 и способствует синтезу цитокинов Th1типа [324]. Таким образом, созревание иммунной системы параллельно с изменением концентрации половых гормонов в ходе полового созревания оказывает комплексное влияние на содержание эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов. 1.3. Участие CD4+ и CD8+Т-эффекторов в противовирусном иммунном ответе Вирус-специфический CD4+Т-клеточный ответ Т-клеточный ответ при вирусных инфекциях включает в себя несколько стадий. Реакции системы врожденного иммунитета инициируются активацией различных паттерн-распознающих рецепторов (PRRs), включая Toll-подобные (TLR) рецепторы, которые распознают вирусные антигены на клеточной поверхности и внутриклеточных компартментах, RIG-I-подобные рецепторы (Retinoic acid-inducible gene 1, RLR) и NLR (Nod-like-receptor) молекулы, распознающие вирусный материал в цитоплазме. Данные 34 сигналы индуцируют продукцию IFN I и других провоспалительных цитокинов. Под действием IFN в клетках индуцируется экспрессия белков, обладающих антивирусной активностью: ISG15 ген), (интерферон-стимулируемый РНК-аза-L, ISG20, протеинкиназа R (PKR), 2’,5’ олигоаденилатсинтетаза, Mx1, TRIM5α и др. [83, 459]. Помимо прямого антивирусного действия IFN I способствуют MHC-презентации антигена Т-лимфоцитам. IFN I стимулируют экспрессию APC костимуляторных молекул, потенциируя адаптивный Т-клеточный ответ. В это же время активированные NK синтезируют IFN-γ. Быстрое распознавание вирусного материала и синтез IFN приводят к ограничению вирусной репликации и инициируют реакции адаптивного иммунитета. В течение нескольких часов после инфицирования вирусный антиген презентируются Т-лимфоцитам и, спустя несколько дней, происходит выраженная экспансия антивирусных Т-лимфоцитов [455, 456]. Результатом сложных взаимодействий различных клеточных элементов становится появление популяции коротко-живущих вирус-реактивных Т-эффекторов и дифференцировка клеток-памяти. Антивирусные CD8+ и CD4+ Т-лимфоциты происходят из небольшой популяции наивных предшественников, которые размножаются с нелинейной прогрессией [455, 456]. Существуют некоторые отличия, характеризующие экспансию этих клеточных субпопуляций. Вирус-специфические CD8+ и CD4+ Т-лимфоциты обладают разными механизмами распознавания вирусных антигенов. CD4+ Т-лимфоциты распознают вирусный антиген, который презентируется в составе молекул MHC II комплекса на поверхности ограниченного количества типов клеток: DC, В-лимфоциты и моноциты/макрофаги. CD4+ Т-лимфоциты распознают фрагменты экстраклеточного материала, который захватывает APC. Экстраклеточный материал включает в себя вирусные частицы, вирусные белки и вирусный дебриз из некротических клеток. В отличие от CD4+ Т-клеток CD8+ Т-лимфоциты распознают MHC I молекулы, содержащие пептиды, имеющие внутриклеточное происхождение: белки, деградировавшие в составе протеасом, оказавшиеся в клетке в результате инфекции или в результате синтеза вирусных белков в клетке de novo. Поскольку индукция активации CD4+ Т-лимфоцитов может инициироваться неинфицированными клетками и нереплицирующимся вирусным материалом, Т-хелперы оказываются гораздо более чувствительны к вирусным антигенам, чем цитотоксические Т-лимфоциты. Другим ключевым отличием Т-хелперов и Т-цитотоксических лимфоцитов является 35 эффективность, с которой они поражают клетки-мишени: антиген-специфические CD8+Т-лимфоциты осуществляют киллинг очень оперативно, в то время как CD4+ Тлимфоциты – чрезвычайно медленно. Механизм киллинга также разный: CD8+ Тлимфоциты используют молекулы перфорина и гранзима, которые образуют поры в мембране клетки-мишени; CD4+ Т-лимфоциты осуществляют киллинг посредством FAS-L и TRAIL, индуцирующих каспаз-зависимый апоптоз. И CD8+ и CD4+ Тлимфоциты обладают способностью подавлять репликацию вируса благодаря синтезу IFN-γ [457]. При многих вирусных инфекциях CD4+ Т-лимфоциты необходимы для индукции экспансии вирус-специфических CD8+ Т-лимфоцитов [461]. В отсутствии Т-хелперов наблюдается минимальная экспансия и ограниченный клеточный иммунный ответ. Вирус-специфические взаимодействуют с Т-хелперные лимфоциты цитотоксическими привлекают Т-лимфоцитами; DC, CD4+ которые Т-лимфоциты стимулируют экспрессию APC костимуляторных молекул и активизируют презентацию вирусного антигена Т-цитотоксическим лимфоцитам. Кроме того, CD4+ Т-лимфоциты являются активными продуцентами IL-2, ростового фактора для CD8+ Т-лимфоцитов, стимулирующего деление клеток и их выживание. В некоторых модельных системах вирус-специфические CD4+Т-лимфоциты участвовали в рекрутировании CD8+ Т-клеток и других клеточных компонентов в периферические очаги инфицирования [240]. В результате дифференцировки антиген-специфические CD4+Т-лимфоциты приобретают специфический цитокиновый профиль, который определяет влияние этих клеток на другие элементы иммунного ответа. Они также начинают экспрессировать хемокиновые рецепторы, которые определяют миграцию клеток в периферические ткани, Т-клеточные зоны лимфоузлов и т.д. Общая кинетика CD4+Т-клеточного ответа и формирования клеток памяти активно изучалась на моделях, которые индуцируют преимущественно Th1-тип иммунного ответа. Антивирусные Th1 лимфоциты чаще всего обнаруживаются после перенесенной острой вирусной инфекции, поскольку клетки-мишени синтезируют IFN-αβ, DC и NK продуцируют IL-12, IL-18 и IFN-γ, которые стимулируют дифференцировку по Тh1-пути. Th1 лимфоциты локализуются в лимфоидных органах и мигрируют в периферические очаги. Они экспрессируют IFN-γ, который действует на клетки-мишени, подавляет репликацию вируса и стимулирует презентацию антигена DC, В-лимфоцитами и макрофагами. Th1 клетки также активно 36 продуцируют IL-2, который поддерживает экспансию пролиферирующих вирусспецифических Т-клеток. Th1 лимфоциты, оказавшиеся на периферии, благодаря продукции IFN-γ, модулируют хемокиновый градиент и привлекают макрофаги и цитотоксические Т-лимфоциты в очаги инфекции. Вирусныe инфекции ассоциированы с появлением TFH [212, 474]. TFH преимущественно локализуются на границе В-клеточных зон лимфатических узлов, а не циркулируют на периферии [293]. В соответствии с проксимальной локализацией в Вклеточных зонах лимфоузлов TFH лимфоциты участвуют в дифференцировке В-клеток, включая реакцию зародышевых центров и образование В-лимфоцитов памяти [294]. Эти CD4+ Т-лимфоциты экспрессируют CD40L и SAP (сигнальный активационный протеин), необходимые для стимуляции вирус-специфических В-лимфоцитов и их дальнейшей дифференцировки в плазматические клетки [110, 293]. Вирус- специфические TFH экспрессируют IL-4, IFN-γ и CD40L. Способность TFH к одновременному синтезу IL-4 и IFN-γ позволяет объяснить одновременное присутствие IgG1 и IgG2a антител в ходе вирусной инфекции. Дифференцировка и функционирование других субпопуляций Т-эффекторов при вирусных инфекциях остаются малоизученными и представляют несомненный интерес, так как непосредственно связаны с регуляцией иммунного ответа и механизмами иммунопатогенеза. Например, вирус-специфические Th2 лимфоциты обнаруживаются после многих вирусных инфекций. RSV (респираторно-синцитиальный вирус), в частности, индуцирует Th2-ответ, который ассоциирован с патогенезом заболевания и массивной миграцией эозинофилов в легкие [457]. Вирус-специфические Th17, Th21, Th9, Treg образуются в ходе вирусной инфекции, однако вопросы, связанные с динамикой их дифференцировки, изменения численности в ходе заболевания, функционированием, а также ролью в патогенезе, нуждаются в дальнейшем изучении. CD8+Т-лимфоциты: роль в противовирусной защите После инфицирования вирусом под действием градиента соответствующего антигена и/или структурных изменений лимфатического узла и уровня хемокинов наивные CD8+Т-лимфоциты мигрируют в периферические отделы Т-клеточных зон лимфатического узла в области субкапсулярных синусов, где располагаются инфицированные макрофаги. DC также перемещаются в эти отделы и приобретают 37 антиген от других инфицированных клеток путем прямого инфицирования или кросспрезентации. Происходят инициирующие антиген-специфические контакты между CD8+Т-лимфоцитами и DC, что приводит к активации цитотоксических Т-лимфоцитов и их экспансии [477]. На пике первичного иммунного ответа на патоген вирусной природы, популяция антиген-специфических CD8+Т-лимфоцитов представляет собой набор фенотипически и функционально гетерогенных субпопуляций. Коротко-живущие эффекторы образуют достаточно массовую субпопуляцию, но погибают после разрешения иммунного ответа, в то время как предшественники клеток памяти, которые нуждаются в гораздо меньшей стимуляции для выживания, формируют пул клетокпамяти [299, 348]. На дифференцировку различных субпопуляций оказывают влияние воспалительные сигналы, костимуляция, взаимодействие с различными APC. Однако, вопрос о роли различных сигналов в дифференцировке коротко-живущих эффекторов и клеток-памяти остается не решенным. После увеличивается стимуляции число 500,000-кратно. антиген-специфических Кроме того, в CD8+Т-лимфоцитов цитотоксических Т-лимфоцитах происходят решающие перестройки клеточного метаболизма, сопровождающиеся усиленным потреблением глюкозы, аминокислот и железа [301]. Другим важнейшим метаболическим сдвигом является переключение с оксидативного фосфорилирования на аэробный гликолиз для синтеза нуклеиновых кислот, липидов и белков, необходимых для деления клеток [301, 432]. Существуют многочисленные механизмы, регулирующие различные аспекты метаболизма активированных CD8+Т-лимфоцитов. Активация только TCR приводит к запуску множества молекулярных путей передачи сигнала, включая MAPK и mTOR, активирующие рибосомальный белок S6 и механизмы белковой трансляции [385]. Для максимальной экспансии CD8+Т-клетки интегрируют целый комплекс сигналов, включая TCR, костимуляторные сигналы, сигналы от провоспалительных цитокинов, таких как IL-12, IFN I типа [299, 348]. TLR2 сигналинг в CD8+Т-лимфоцитах индуцирует mTOR (mammalian target of rapamycin), что приводит к синтезу T-bet и транскрипцию цитолитических эффекторных генов in vitro [158]. Однако, при изучении роли TRL2 в ходе инфекции in vivo, получены противоречивые результаты [361, 478]. Таким образом, увеличение численности CD8+Т-лимфоцитов в ответ на патоген-специфические антигены зависит от сигналов множества рецепторов, обеспечивающих деление и выживание клеток. 38 Провоспалительные цитокины, такие как IL-12, играют ключевую роль в терминальной дифференцировке эффекторных CD8+Т-лимфоцитов [350]. Теоретически, IL-12 активирует дифференцировку CD8+Т-лимфоцитов посредством индукции T-bet [214, 416] по mTOR-зависимому пути [364]. IL-2 также является общепризнанным ростовым фактором для Т-клеток in vitro. Он синтезируется преимущественно активированными CD4+Т-лимфоцитами и в меньшей степени активированными CD8+Тлимфоцитами. IL-2 сигналинг уже на начальных этапах инфицирования активирует дифференцировку коротко-живущих CD8+Т-эффекторов. В отсутствии или при снижении IL-2 сигналинга, CD8+Т-клетки демонстрируют снижение эффекторных функций и преимущественно дифференцируются в CD62Lhi клетки памяти [119]. Таким образом, IL-2 в ходе ответа на патоген in vivo представляет собой скорее дифференцировочный фактор, нежели ростовой. Взаимодействие между различными внутриклеточными сигнальными путями и регуляторами транскрипции являются ключевым фактором в понимании молекулярного контроля дифференцировки CD8+Тэффекторов и клеток памяти. Сразу после распознавания антигена на DC в лимфоидных органах на активированных цитотоксических Т-лимфоцитах повышается экспрессия рецепторов провоспалительных цитокинов, CXCR3, позволяющих эффекторам мигрировать в периферические ткани [170]. Помощь CD4+Т-лимфоцитов необходима для генерации первичного CD8+Т-клеточного ответа на невоспалительные антигены или некоторые вирусы, такие как Herpes simplex virus (HSV), в то время как CD8+Т-клеточный ответ на вирус гриппа, Listeria и LCMV (вирус лимфоцитарного хориоменингита) инфекцию не зависит от Т-хелперов [81]. Эффекторные CD8+Т-лимфоциты, покинувшие лимфоидные органы и мигрирующие в периферические ткани, продолжают вступать в антиген-специфические взаимодействия, что, помимо цитолиза инфицированных клеток-мишеней, приводит к дальнейшей пролиферации и высвобождению цитокинов. Помимо киллинга инфицированных клеток и секреции IFN-γ в периферических очагах вирусного инфицирования, в последние годы активно изучается вклад CD8+Т-эффекторов в предотвращение повреждения собственных тканей организма путем секреции иммуносупрессивного цитокина IL-10 [345, 408, 426]. Первоначально относимый к цитокинам Th2-типа, IL-10 синтезируется самыми разнообразными клетками, включая 39 В-лимфоциты, естественные киллеры, NKT-клетки, макрофаги, дендритные клетки, моноциты и различные субпопуляции CD4+Т-эффекторов (Th1, Th2, Th17, Treg) [388]. Терминально дифференцированные CD8+Т-эффекторы продуцируют большие количества IL-10 в локальных очагах воспаления при различных вирусных инфекциях в легких и тканях мозга [345, 408, 426]. На пике иммунного ответа CD8+Т-лимфоциты являются основными продуцентами IL-10 в периферических тканях, в то время как во вторичных лимфоидных органах преобладает IL-10 Т-хелперного происхождения. Во время поздних стадий иммунного ответа IL-10+CD8+Т-лимфоциты быстро исчезают, в то время как сохраняется персистенция IL-10+CD4+Т-клеток. Это свидетельствует о разных механизмах регуляции продукции IL-10 СD8+ и СD4+Т-лимфоцитами. IL10+CD8+Т-лимфоциты продуцируют нормальное или повышенное количество гранзима В, IFN-γ и TNF-α. Таким образом, IL-10, продуцируемый CD8+Т-эффекторами, играет решающую роль в предупреждении повреждения тканей собственного организма, не нарушая кинетику вирусного клиренса. IL-10+CD8+Т-лимфоциты не представляют собой отдельную эффекторную линию, а являются транзиторной стадией дифференцировки CD8+Т-эффекторов. Продукция IL-10 CD8+Т-эффекторами контролируется синергичной кооперацией сигналов от IL2 (Т-хелперного происхождения) и IL-27, продуцирумого клетками врожденного иммунитета (в основном нейтрофилами) [409]. Таким образом, последние исследования позволили создать представление о динамичной роли Т-цитотоксических лимфоцитов при вирусных инфекциях. В ходе первичного иммунного ответа на вирусный патоген наивные CD8+Т-лимфоциты получают соответствующую антигенную стимуляцию в результате MHC I процессинга антигена и его презентации. Многочисленные экстраклеточные сигналы инициируют быструю пролиферацию и запускают программу дифференцировки CD8+Т-эффекторов. Множество путей внутриклеточной передачи сигналов вступает во взаимодействие для осуществления регуляции пролиферации цитотоксических Т-лимфоцитов, сохранения их жизнеспособности, миграции, метаболизма, приобретения эффекторных функций и дифференцировке в клетки памяти. После того, как CD8+Т-эффекторы достигают периферических очагов поражения взаимодействие с другими гемопоэтическими клетками приводит к их терминальной дифференцировке. В периферических тканях, CD8+Т-эффекторы помимо выполнения цитотоксической функции и синтеза провоспалительных цитокинов, для сохранения физиологического функционирования 40 тканей в очаге поражения получают дополнительные локальные сигналы (IL-2, IL-27) и транзиторно приобретают способность секретировать противовоспалительный IL-10. К сожалению, роль минорных субпопуляций цитотоксических Т-лимфоцитов (Tc2, Tnc17) при вирусных инфекциях остается малоизученной. 1.4. Роль Т-лимфоцитарных субпопуляций и других компонентов адаптивного и врожденного иммунитета при инфицировании организма человека неполиомиелитными энтеровирусами и вирусом клещевого энцефалита Энтеровирусные инфекции ЭВИ относятся к наиболее распространенным заболеваниям человека [51], в том числе в связи со значительным внутривидовым разнообразием энтеровирусов (EV). На сегодняшний день известно более 120 серотипов EV. Их первоначальная классификация включала 4 группы: полиовирусы (PVs), Coxsackie A вирусы (CVA), Coxsackie B (CVB) вирусы, и ECHO (Enteric Cytopathic Human Orphan) вирусы. Однако, значительное филогенетическое родство между этими группами стало причиной разработки новой классификационной системы, вобравшей в себя в том числе и относительно недавно изолированные вирусы, такие как Enterovirus-71, Enterovirus-72 и т.д. [333]. В соответствии с ней энтеровирусы человека в составе рода Enterovirus разделены на пять видов: 1) полиовирус; 2) энтеровирус человека А; 3) энтеровирус человека В; 4) энтеровирус человека С; 5) энтеровирус человека D. Различные серотипы вируса Coxsackie вошли в следующие виды энтеровирусов: энтеровирус человека А (Coxsackie A 2-8, 10, 12, 14, 16); энтеровирус человека В (Coxsackie A9, Coxsackie B 1-6); энтеровирус человека С (Coxsackie A 1, 11, 13, 15, 17-22, 24). Вирусы ECHO (1-7, 9, 1121, 24-27, 29-33) относятся к виду энтеровирусов человека типа В [21]. С учетом минимального эпидемиологического значения полиовирусов, контролируемого вакцинацией, центром повышенного внимания в настоящее время становятся неполиомиелитные энтеровирусы (НПЭВ). К НПЭВ принадлежат важнейшие патогены, которые являются причиной самых разнообразных по клиническому представлению заболеваний, включая лихорадочные формы без специфических клинических симптомов, герпангину, эпидемическую миалгию, энтеровирусную экзантему, увеит, 41 острый геморрагический коньюктивит и т.д. Кроме того, НПЭВ – основная причина инфекционного миокардита, приводящего к дилатационной кардиомиопатии и сердечной недостаточности [418], всесторонне изучается также связь между НПЭВинфицированием и развитием сахарного диабета 1 типа [226]. Однако, наибольшее эпидемиологическое значение представляют собой энтеровирусные нейроинфекции. Обладая тропизмом к клеткам центральной нервоной системы (ЦНС), НПЭВ являются одной из наиболее распространенных причин серозных менингитов у детей и взрослых [302]. Кроме того, НПЭВ могут персистировать в ЦНС, приводя к формированию хронической нейропатологии. Молекулярная биология энтеровирусов Для понимания патогенеза ЭВИ ЦНС важно представлять структуру и молекулярную биологию EV. EV - это лишенные оболочки вирусы в форме икосаэдра, приблизительно 30nm в диаметре. Вирусы способны выживать в кислой среде, что обеспечивает их пассаж через желудок и фекально/оральную трансмиссию с преимущественным проникновением в организм хозяина в тонком кишечнике. Вирусный капсид содержит РНК геном, варьирующий по размеру от ~7.2 до 8.5 kb. Вирусный геном включает несколько cis-действующих РНК элементов, которые играют важную роль в репликации и/или трансляции. Cis-действующие элементы включают 5′ и 3′ нетранслируемые регионы (NTRs), cis-действующий репликативный элемент (CRE) и 3′ poly(A) хвост [402]. Единственная открытая рамка считывания (ORF) в пределах NTRs кодирует длинную протеиновую цепочку, которая подвергается пост- трансляционному расщеплению в зрелые вирусные белки. Выделяют 4 структурных вирусных белка, VP1-4, которые составляют вирусный капсид и 7 неструктурных (2A–C и 3A–D), включая праймер- и РНК-зависимую РНК полимеразу (3DPol). Кроме того, один из вирусных белков 3B (также известный как VPg) ковалентно связывается с 5′ концом вирусного генома. Многие аспекты трансляции и репликации EV до сих пор не до конца изучены. Врожденный иммунный ответ на энтеровирусную инфекцию Взаимодействие энтеровирусов с паттерн-распознающими рецепторами. EV активируют определенные сенсоры, включая TLR3, TLR4, RIG-I и MDA5. TLR3 42 расположены на мембране эндосом или на плазматической мембране и распознают двух-цепочечную РНК, которая образуется в ходе репликации всех РНК вирусов. Последние исследования кардиопротекторы при показали, что TLR3 играют важную роль как EV инфекции и их участие может зависеть от процессов аутофагии [164]. Изучение распознавания EV цитоплазматическими сенсорами врожденного иммунного ответа сосредоточено на DExD/H-box-содержащих РНК хеликазах, таких как RIG-I и MDA5. Исследуя индукцию IFN I под действием вируса энцефаломиокардита (EMCV) в фибробластах мышиных эмбрионов, Kato et al. пришли к выводу, что MDA5, а не RIG-I, имеет критическое значение для распознавания пикорнавирусов [223]. Однако, это не означает, что RIG-I не участвует в их детекции [346]. После того, как произошло распознавание патогена, врожденный иммунный ответ начинает играть существенную роль в индукции вирус-опосредованной нейропатологии. Например, тяжесть ECHO-вирусной и EV-инфекции ЦНС связана с высоким уровнем системных провоспалительных цитокинов, таких как IL-6, IL-1β, и TNF-α, которые могут приводить к цитокин-индуцированному повреждению тканей [263, 266]. Также, EV активация воспалительного ответа может приводить к экстенсивной инфильтрации лейкоцитов в ЦНС, что приводит к воспалительным изменениям и вносит свой вклад в нейропатологию, ассоциированную с этими вирусами [142]. Кроме потенциально опасного воспалительного ответа в ЦНС, EV индуцируют синтез IFN I. TLR-3, RIG-1 и MDA5 способны индуцировать IFN I ответ. TLR-3 индуцируют продукцию IFN I путем активации транскрипционных факторов Interferon Regulatory Factor 3 (IRF3), NF-κB и AP-I через адаптерный белок TIR-доменсодержащий адаптер, индуцирующий IFN-β (TRIF) [292, 459]. RIG-I и MDA-5 пути передачи сигнала отличаются и не зависят от TLR-3 пути. RIG-I и MDA-5 взаимодействуют с адаптерной молекулой IPS-1 (стимулятор промотора IFN-p) через CARD (caspase recruitment domains) домены. IPS-1 передает активационный сигнал киназам, которые в свою очередь активируют IRF-3 и другие транскрипционные факторы, участвующие в индукции IFN I [223]. Malathi et al. показали, что хеликазная активность RIG-I и MDA5 может играть важную роль в саморегуляции и выступает в содружестве с эндорибонуклеазой L (RNase L) в образовании небольших продуктов расщепления РНК, которые могут взаимодействовать с RIG-I или MDA5, таки образом 43 усиливая сигнал [278]. Образовавшиеся IFN I связываются с рецепторами либо на синтезировавших их клетках, или на соседних клетках, что приводит к индукции транскрипции антивирусной микроРНК и IFN Stimulated Genes (ISGs) JAK/STAT путем. Многие из ISGs кодируют антивирусные продукты или участвуют в дальнейшей активации IFN I пути. Например, RNase L - это ISG, который участвует в амплификации IFN I ответа, а также в расщеплении вирусной РНК и подавлении ее трансляции [200]. Кроме того, ISGs кодируют продукты, которые ингибируют специфические вирусы. IFN-β модулирует экспрессию антивирусных микроРНК в ответ на РНК вирусы, включая гепатит С [351]. Резонно ожидать, что IFN I-индуцированные антивирусные микроРНК играют важную роль в защите хозяина от EV в ЦНС. Белки, синтезируемые EV и кардиовирусами (TMEV) могут контр-реагировать с механизмами врожденного иммунитета [55]. Способность избегать антивирусного иммунного ответа вносит свой вклад не только в расширение масштабов острой инфекции, но и в формирование вирусной персистенции. PV, риновирус (RV) и EV могут снижать уровень RIG-I и нарушать RIG-I опосредованный сигнальный путь. Снижение экспрессии RIG-I определятся действием PV 3C протеазы. PV и RV тип-1a также способны расщеплять MDA5 каспаз- и протеасом-зависимым путем [72]. Роль естественных киллеров при НПЭВ-инфекциях. Естественные киллеры принимают участие в клиренсе НПЭВ и патогенезе заболевания. NK клетки мигрируют в вирус-инфицированные ткани сердца, этот процесс зависит от хемокина CXCL10 [470], при чем миграция естественных киллеров опережает появление T-лимфоцитов. NK клетки – наиболее распространенный компонент воспалительного инфильтрата [182], и, по всей видимости, участвуют в подавлении CVB3 репликации и развитии вирус-индуцированного миокардита. Подобно Т-лимфоцитам, NK клетки могут ингибировать НПЭВ по крайней мере с участием двух основных механизмов: вопервых, прямым цитотоксическим действием (чаще перфорин-опосредованным); вовторых, путем секреции антивирусных цитокинов, таких как IFN-γ. Прямой литический эффект естественных киллеров ингибируется MHC I класса, таким образом, NK- чувствительные мишени обычно характеризуются сниженной экспрессией этого типа молекул. Инфекции, вызываемые различными пикорнавирусами, включая CVB3, существенно снижают экспрессию MHC I на поверхности клеток [107, 108], таким образом, снижая ингибиторную активность CVB-инфицированных клеток, что 44 объясняет важнейшую роль ествественных киллеров, по крайней мере, на мышиных моделях. Однако, это утверждение может не соответствовать ситуации, наблюдаемой в человеческом организме. Последние исследования CVB3-инфицированых человеческих клеток продемонстрировали, что, несмотря на значительное снижение экспрессии MHC I, чувствительность инфицированных клеток к NK-опосредованному лизису не повышается [198]. Активное участие в противовирусном иммунном ответе при ЭВИ с СМ у детей дошкольного возраста NK лимфоцитов отмечено Хамановой Ю.Б. [48]. Низкий уровень NK клеток описан Бацкалевич Н.А. у подростков с энтеровирусными менигитами [2]. T-клеточный ответ на энтеровирусы Роль Т-лимфоцитов в контроле НПЭВ-инфекции (вирус-специфическая цитотоксичность) была продемонстрирована in vitro более 30 назад [464], более поздние исследования показали, что у CVB3-инфицированных мышей формируется αβ и γδ цитотоксический Т-лимфоцитарный ответ, хотя во многих случаях цитотоксическая активность была направлена на неинфицированные клетки, что позволило предположить, что энтеровирусы могут выступать триггерами аутоиммунных процессов [193]. αβ CD4+ и CD8+ T лимфоциты участвуют в ограничении вирусной репликации, однако за их участие в противовирусной защите ассоциировано с развитием иммунопатологических реакций и миокардитов. У CD8-дефицитных C57BL/6 мышей (β2m−/− или CD8-дефицитные CD4−/− мыши), CVB3-ассоциированный миокардит и смертность полностью исключены, однако титр вируса в сердечной ткани гораздо более высокий [182]. CD8+ T клетки гораздо более важны в контроле CVB4: CD8−/− C57BL/6 мыши, инфицированные CVB4, демонстрируют гораздо более высокий уровень смертности по сравнению с контролем, напротив, CD8+ T-клеточный дефицит у CVB4инфицированных BALB/c мышей снижает смертность до 50% [363]. CD8+ T клетки, специфичные для эпитотов 3A, 3C и 3D протеинов, были идентифицированы в исследованиях при CVB3 инфекции у людей, но ex vivo частота этих клеток настолько мала, что их детекция возможна только в результате 2-х недельной ре-стимуляции пептидным антигеном in vitro [447]. CVB3-специфический CD8+ T-клеточный ответ был описан у H-2b мышей (Db/VP2285–293 and Kb/3D2170–217), но частота специфических лимфоцитов на 8 день инфекции была очень низкой (<1% of CD8+ лимфоцитов) [204]. У человека были идентифицированы CD8+T лимфоциты памяти, специфичные к эпитопам 45 CVB4 2C протеина, но в очень небольшом количестве ex vivo. Все эти исследования позволяют сделать общее заключение, что Coxsackie B3- инфекция индуцирует слабый CD8+ T-клеточный ответ. Подобный вывод противоречит картине, наблюдаемой при многих вирусных инфекциях и противовирусной вакцинации с преобладанием вирусспецифических CD8+ T лимфоцитов (Epstein–Barr вирус, вирус желтой лихорадки [304]). Для того, чтобы оценить эпитоп-специфический Т-клеточный ответ на НПЭВ у мышей, был синтезирован рекомбинантный CVB3 (rCVB3.6), который экспрессировал известные CD8+ и CD4+ T-клеточные эпитопы. Показано, что ни дикий тип, ни rCVB3 не вызывают заметной активации CD8+ или CD4+ T клеток in vivo. Отсутствие CD8+ Tклеточного ответа не может быть связано с низкой иммуногенностью НПЭВкодируемых протеинов, поскольку экспрессия тех же самых эпитопов из ДНК-вакцин приводит к формированию выраженного CD8+ T-клеточного ответа [224], а ДНК иммунизация при помощи CVB3 VP1 индуцирует появление CD8+ T клеток [472]. Используя эпитоп-специфические CD8+ трансгенные T клетки в качестве сенсоров для оценки in vivo антигенной презентации rCVB3.6, было продемонстрировано, что этот вирус может практически полностью ингибировать презентацию антигена посредством MHC I пути, что позволяет ему избегать CD8+ T-клеточного иммунитета [225]. Может ли CVB3 препятствовать развитию Т-клеточного ответа, нарушая активацию и/или функционирование DC, включая секрецию цитокинов и презентацию MHC- рестриктированных вирусных эпитопов? CVB3 инфекция C57BL/6 мышей приводит к повышению частоты pDC и CD11c+ DC в селезенке и двукратному увеличению соотношения CD8+:CD4+ DC на 8 день инфекции [447]. Хотя позитивные и негативные цепочки вирусной РНК обнаруживаются в DC in vivo, инфекционный вирус не образуется, что свидетельствует о том, что непродуктивная инфекция нарушает антигенную презентацию. По крайней мере, два молекулярных механизма играют роль в минимизации презентации CVB эпитопов MHC I класса. CVB белки, такие как 2B, 2BC и 3A могут приводить к нарушению функционирования аппарата Гольджи, существенно снижая выход белков на клеточную поверхность; они также могут усиливать эндоцитоз, участвуя в интернализации протеинов, которые были представлены на поверхности клетки [107, 108, 120, 121, 452, 453, 454]. Посредством этих механизмов вирусы формируют условия, в которых они оказываются «невидимыми» для CD8+ T 46 лимфоцитов и, возможно, «неприкосновенными» для цитокинов (поскольку клеточные поверхности обеднены рецепторами для этих молекул). CD4+ T-клеточный ответ против нативных эпитопов CVB4 или эпитопов рекомбинантного CVB4 описан у мышей [174]. В отличие от слабой презентации вирусных антигенов в контексте MHC I класса, MHC II-рестриктированные вирусные эпитопы презентируются на уровне, достаточном для индукции первичного вирусспецифического CD4+ T-клеточного ответа. НПЭВ-специфические CD4+ T лимфоциты у мышей имеют эффекторный фенотип Th1-профиля; формируют Т-лимфоциты памяти, активно пролиферирующие при ре-активации; и быстро созревающие во вторичные эффекторные клетки, способные синтезировать различные цитокины [225]. Тем не менее, активация CD4+ T-клеточного ответа происходит гораздо слабее, чем могла бы быть теоретически. Изучение роли Т-лимфоцитов (оценка содержания IFN-γ+, TNF-α+, IL-2+, IL-4+ Тлимфоцитов у детей и подростков с ЭВИ с СМ) при НПЭВ-инфекциях у человека проведено в работах Бацкалевич Н.А. [2] и Хамановой Ю.Б [48]. Установлено, что для детей 3-6 лет в остром периоде заболевания характерно снижение содержания Т- лимфоцитов, Т-хелперов и IFN-γ+, IL-2+ Т-лимфоцитов. У детей старше 7 лет увеличивается численность IFN-γ+, TNF-α+, IL-2+ Т-лимфоцитов [48]. У подростков наблюдали снижение общего модержания Т-лимфоцитов и их цитотоксической субпопуляции и повышение уровня TNF-α+ и IL-4+ Т-лимфоцитов [2]. В обоих случаях исследования ограничились оценкой содержания общего пула Т-лимфоцитов, синтезирующих эффекторные цитокины, не дающей представление об изменении уровня отдельных Т-хелперных и Т-цитотоксических субпопуляций эффекторных лимфоцитов. Гуморальный ответ на энтеровирусную инфекцию НПЭВ–инфекция индуцирует быстрый и мощный нейтрализующий гуморальный ответ. Первыми появляются IgM-антитела, и у человека, и у мышей. По мере того, как снижаются титры НПЭВ-специфических IgM антител, титр вирус-специфических IgG антител увеличивается и сохраняется на протяжении достаточно длительного периода [270]. У человека нейтрализующий IgM ответ (и серотип-специфический и кросс- реактивный) в основном направлен на ответа во многом зависит от VP1 протеин. Формирование гуморального CD4+ T-лимфоцитов, многие исследования 47 свидетельствуют о том, что это утверждение очевидно для CVB3-инфекции; у MHC II−/− мышей (у которых CD4+ T-клеточный ответ серьезно поврежден) развивается слабый, не обладающий нейтрализующими свойствами CVB3-специфический IgG-ответ [251]. Однако, другие исследователи пришли к противоположным выводам: Tдефицитные мыши вырабатывают нейтрализующие антитела, но в более низком титре, чем дикий тип, что говорит о том, что часть CVB-специфических антител/B клеточного ответа является T-независимой, и CD4−/− мыши могут формировать гуморальный нейтрализующий ответ [182]. На мышиных моделях также были изучены гендерспецифические особенности гуморального иммунного ответа: у BALB/c мышей женского пола преобладали Th2-лимфоциты в ответ на CVB, и в основном синтезировались антитела IgG1 изотипа, в то время как у самцов имел место в основном Th1-ответ и превалировали IgG2a антитела [194]. ЭВИ не могут эффективно контролироваться в отсутствии антител. Существует ряд примеров у детей с агаммаглобулинемией: инфекция проникает и персистирует в ЦНС, приводя к серьезным, часто смертельным менингоэнцефалитам [221]. Хронические инфекции, вызванные EV, часто диагностируются у пациентов с X-сцепленной агаммаглобулинемией [306]. Значение антител при НПЭВ-инфекции можно подтвердить следующими фактами: пассивный перенос иммуноглобулинов приводит к снижению вирусной нагрузки [155]; материнские антитела (преимущественно получаемые с грудным молоком) предотвращают инфицирование новорожденных мышат [312]. Суммируя выше сказанное, можно сказать, что гуморальный ответ играет ключевую роль при ЭВИ. HLA-ассоциации при энтеровирусных инфекциях Главный комплекс гистосовместимости (MHC) у человека (гены HLA) картирован на 6 хромосоме и играет решающую роль в формировании иммунного ответа при инфекционных заболеваниях [205]. MHC представляет собой наиболее плотный регион человеческого генома, охватывающий ~4 Mbps, или 0,1% всего генома, но содержащий в 6 раз больше генов (0,6% от общего числа генов). Большинство из этих генов кодируют белковые молекулы, участвующие в иммунном ответе. HLA комплекс делится на три основных региона: HLA I, II и III класса. Гены I и II класса – наиболее полиморфные во всем человеческом геноме. Высокий полиморфизм возник в результате селективного отбора, возникшего из-за расселения человека, взаимодействия с 48 множеством инфекционных патогенов, в том числе и вновь возникающих, что привело к разнообразию генов MHC в результате мутаций, дупликаций и конверсий [428]. HLA II класса состоят из двух полипептидных цепей (α и β). Каждая α и β цепь имеет 2 домена—высоко консервативные α2 и β2 регионы и чрезвычайно полиморфные α1 и β1 домены [205]. Так как α1 и β1 вместе формируют антиген-связывающий участок, значительный полиморфизма определяет образование разнообразных молекул II класса, способных распознать самые различные эпитопы. Молекулы HLA II класса экпрессируются на APC, таких как B-лимфоциты, макрофаги, DC, эндотелиальные клетки и другие орган-специфические APC. Кристаллическая структура демонстрирует, что молекулы II класса имеют один антиген-связывающий участок, который вмещает различные пептиды от 14 до 25 аминокислот, в зависимости от заряда, стабильности и силы связи. Во II регионе содержатся гены, кодирующие три класса молекул DP, DQ, и DR. DRβ1 гены наиболее полиморфны, для них в настоящее время известны почти 450 аллелей. HLA-DR, DP и DQ гены связаны не равновесно и наследуются как гаплотип. Поскольку Т-лимфоциты распознают отдельные эпитопы антигена в контексте специфических MHC молекул, возможность ответа на данный эпитоп и «качество» этого ответа будут зависеть от наличия MHC молекул, способных его связать. В связи с этим, изучение ассоциаций отдельных аллелей HLA I и II класса с устойчивость, восприимчивостью, а также клиническим течением различных заболеваний, представляет собой активно развиваемую и перспективную область исследования. Проведенный в 2012 году мета-анализ показал, что у лиц, являющихся носителями аллеля HLA-DR4, значительно реже развивается хронический гепатит В [466]. Активно изучается связь между определенными HLA аллелями и сниженным или повышенным риском клинической манифестации лихорадки Денге [59, 139, 272, 279, 331, 396, 404, 449]. При чем корреляция HLA-ассоциированной чувствительности к заболеванию оказалась связана со слабым Т-клеточным ответом [448]. Интерес к генетическим ассоциациям при ЭВИ обусловлен, прежде всего, неоднократно отмеченной этиологической связью с аутоиммунными заболеваниями, например, сахарным диабетом 1 типа (T1D). С одной стороны, проведенные исследования позволили установить, что гаплотипы с разным риском развития T1D (HLA-DR4;DQ8, HLA-DR3;DQ2) статистически значимо не связаны с наличием кишечной ЭВИ [463]. С другой стороны, показано, что T1D-ассоциированный 49 генетический полиморфизм может вносить вклад в развитие аутоиммунной патологии посредством модуляции цитокинового ответа. В частности, протективный гаплотип HLA-DR2;DQ6 связан с повышенной продукцией IFN- и IL-2 в ответ на полиовирус [436]. Опубликованы также результаты исследований, касающиеся HLA-ассоциаций при T1D с выраженностью гуморального иммунного ответа на энтеровирусные антигены: диабет-ассоциированные HLA-DR аллели связаны с выраженным гуморальным иммунным ответом, в то время как протективные аллели - со слабым иммунным ответом на энтеровирусные антигены [380]. Помимо генетически-обусловленных механизмов развития аутоиммунной патологии на фоне ЭВИ активно изучалась роль молекул HLA в чувствительности к различным EV. В частности, установлено, что молекулы HLA I участвуют в инфицировании EV11, действуя как ко-рецепторы [101]. Кроме того, показано, что HLA-A33 и HLA-DR17 тесно ассоциированы с чувствительностью к EV71. Мультивариантный анализ показал, что HLA-A33 отосится к генам, определяющим чувствительность к EV71. HLA-A2 ассоциирован с развитием кардиопульмонарной недостаточности при инфекции, вызванной EV 71 [96]. Несмотря на разнообразие подходов к оценке HLA-ассоциаций при ЭВИ, связь отдельных аллелей HLA I и II класса с развитием ЭВИ с СМ и механизмы, лежащие в ее основе, остаются не изученными. Флавивирусные инфекции Геном и жизненный цикл флавивирусов Род Flavivirus семейства Flaviviridae включает более 70 представителей, объединенных в несколько антигенных групп. К ним относятся флавивирусы, переносимые москитами и клещами: вирус West Nile (WNV), вирус Dengue (DENV), вирус Японского энцефалита (JEV), вирус желтой лихорадки (YFV), вирус Murray Valley энцефалита (MVEV), и энцефалита St. Louis (SLEV), а также вирусы серокомплекса КЭ [165,172]. Серокомплекс КЭ включает группу клещевых флавивирусов млекопитающих, к которой помимо вируса КЭ (TBEV) относятся генетически и антигенно родственные вирусы, такие как вирус Омской геморрагической лихорадки (Omsk hemorrhagic fever virus (OHFV)), вирус Langat (LGTV), вирус геморрагической лихорадки Alkhurma (AHFV), вирус Kyasanur Forest disease (KFDV), 50 вирус Powassan (POWV), вирус Royal Farm (RFV), вирус Karshi (KSIV), вирус Gadgets Gully (GGYV) и вирус Louping ill (LIV). Вирусы, относящиеся к серокомплексу КЭ, являются важнейшими патогенами, которые вызывают тяжелые неврологические заболевания и геморрагические лихорадки. Они представляют собой серьезную медицинскую и социальную проблему в связи с высоким уровнем заболеваемости и смертности от вызываемых ими заболеваний. Все флавивирусы – оболочечные вирусы, которые содержат одноцепочечный позитивный РНК геном длиной 10.5- 11-kb. Геном транслируется в длинный полипротеин, который расщепляется протеазами вируса и хозяина в 3 структурных и 7 неструктурных белков. К структурным белкам относится капсидный белок (C), который связывает вирусную РНК, пре-мембранный протеин (prM), который блокирует слияние незрелой вирусной частицы с клеткой и служит шапероном для оболочечного протеина (E) и белок E, который обеспечивает прикрепление вируса к клеткам-мишеням, слияние мембран и проникновение вируса в клетки хозяина [88]. Неструктурные вирусные белки (NS1, NS2A, NS2B, NS3, NS4A NS4B, and NS5) регулируют транскрипцию вирусной РНК и репликацию вируса, а также участвуют в противодействии иммунному ответу в организме хозяина [264]. Первичными клетками-мишенями для флавивирусов являются моноциты, макрофаги и DC [70, 236]. Прикрепление вируса к клеточной поверхности осуществляется с участием протеина E, проникновение в клетку – путем рецепторопосредованного эндоцитоза. Низкие значения pH в эндосомальном компартменте способствует слиянию мембран вируса и клетки хозяина, структурной реорганизации протеина E, что приводит к высвобождению нуклеокапсида и вирусной РНК в цитоплазму. Репликация вирусной РНК происходит в эндоплазматическом ретикулуме (ЭПР) и на мембранах везикул, образовавшихся в комплексе Гольджи [451]. Вновь синтезированная вирусная РНК либо формирует новое поколение вирионов, либо используется для трансляции дополнительных вирусных белков. Флавивирусы, образующиеся в ЭПР, формируют незрелые частицы, которые экспрессируют prM протеин. Транспортировка через аппарат Гольджи приводит к фурин-опосредованному расщеплению prM с образованием M белка и зрелой, инфекционной вирусной частицы, которая высвобождается из клетки путем экзоцитоза [256, 319, 469]. 51 Патогенез флавивирусных заболеваний Патогенез флавивирусных инфекций до конца не изучен. Продолжается исследование таких факторов патогенеза, как вирусная репликация, механизмы инвазии ЦНС и иммунного ответа хозяина. Вслед за инокуляцией в кожу вирус инфицирует клетки Лангерганса (LC), что приводит к повышению экспрессии молекул MHC I, MHC II, адгезионных молекул, а также ко-стимуляторных молекул, таких как CD80. LC мигрируют в дренирующие лимфатические узлы [211], где происходит дальнейшая репликация, приводящая к первичной виремии и последующего инфицирования периферических тканей. После периферической амплификации вирус попадает в циркуляцию, преодолевает ГЭБ и проникает в ЦНС. Переход через ГЭБ – ключевой фактор патогенности нейротропных флавивирусов [230]. Однако, механизмы, с помощью которых флавивирусы ускользают от иммунных механизмов в организме хозяина и проникают через ГЭБ в ЦНС, нуждаются в дальнейшем исследовании. Врожденный иммунитет при флавивирусных инфекциях Интерфероны I типа. Врожденный иммунитет действует как первая линия защиты при вирусных инфекциях. Отдельные PRRs играют жизненно-важную роль в распознавании и индукции иммунного ответа на флавивирусные инфекции, к ним относятся сенсоры РНК, такие как TLR3 и TLR7 [113, 114, 429, 439, 442], RIG-I и MDA5 [97, 146, 147, 223]. Последние результаты продемонстрировали, что TBEV инфекция приводит к образованию внутриклеточных мембранных везикул, которые укрывают вирусную дцРНК от распознавания, что приводит к задержке синтеза антивирусных IFN и беспрепятственному образованию вирионов в течение более 24 часов [341]. Активация транскрипционных факторов IRF-3, IRF-7 и NF-B через TLR или RIGI/MDA5 сигнальные пути приводит к продукции IFN-/. Однако, WNV NS1 ингибирует TLR3-индуцируемую активацию транскрипции IFN- and IL-6, препятствуя ядерной транслокации IRF3 и NF-B в HeLa и 293 клетках [462]. Исследования, проведенные с вирусом Kunjin (KUN), менее патогенным вариантом линии I WNV, показали, что NS2A является ингибитором транскрипции генов IFN- [268, 269]. Связывание IFN-/ с IFN-/ рецептором на клеточной поверхности инфицированных клеток активирует JAK/STAT сигнальный путь, приводя к экспрессии многочисленных интерферон-стимулированных генов (ISGs), которые позволяют 52 формировать антивирусное, антипролиферативное и/или иммунорегуляторное состояние в клетках организма хозяина [413]. Однако, флавивирусы эффективно подавляют проведение сигнала. Экспрессия неструктурных белков DENV, таких как NS2A, NS4A или NS4B приводит к нарушению JAK/STAT сигнального пути, за счет снижения фосфорилирование и ядерной транслокации STAT1, ключевого компонента IFN I сигнального пути. Кроме того, NS4B WNV и YFV также блокируют STAT1 активацию и индукцию ISG, что свидетельствует, что этот механизм является общим для всех москитных флавивирусов [173, 320]. Другой неструктурный протеин, NS5 является IFN антагонистом, который играет решающую роль в ускользании вирусов от иммунного ответа хозяина. В исследованиях интерферонобразующей функции лейкоцитов периферической крови при КЭ, проведенных В.В. Малиновской с соавт. [25], описаны существенные изменения при всех клинических вариантах течения КЭ. Уже в первые дни заболевания атворы наблюдали снижение IFN- -продуцирующей способности лейкоцитов. NK клеточный иммунитет. NK клетки играют важную роль во врожденной защите при вирусных инфекциях [242]. Они лизируют инфицированные клетки путем секреции цитотоксических гранул, содержащих перфорин и гранзимы или путем связывания индуцирующих апоптоз рецепторов на клетках мишенях. Многие вирусы ускользают от клеточного иммунного ответа, снижая поверхностную экспрессию MHC I молекул. Однако, отдельные исследования свидетельствуют, что при флавивирусных инфекциях происходит увеличение экспрессии этих молекул, что может рассматриваться как механизм, используемый флавивирусами для снижения цитотоксического ответа NK клеток. WNV инфекция повышает экспрессию клетками MHC I, повышая активность транспортера, ассоциированного с процессингом антигена (TAP) и путем NF-Bзависимой транскрипционной активации MHC I генов [100]. Повышение экспрессии MHC I молекул наблюдается в течение 96 часов после инфекции и связано с действием IFN или других цитокинов. Нерасщепленный C-prM белок DENV также вносит свой вклад в повышение экспрессии MHC I. MHC-I up-регуляция наблюдается в клетках, стабильно экспрессирующих DENV репликоны, которые экспрессируют только неструктурные белки [184]. Повышение экспрессии MHC экспрессирующих клетках ассоциировано с I в DENV репликон- повышением связывания со специфическими NK-ингибиторными рецепторами и снижает чувствительность к NK 53 лизису. Определение содержания NK клеток у пациентов с менингеальной и лихорадочной формами КЭ продемонстрировало достоверное снижение количества NK лимфоцитов при МФ, в то время как при лихорадочной форме их содержание изменялось незначительно [45]. Адаптивный иммунный ответ при флавивирусных инфекциях Гуморальный иммунный ответ. Гуморальный иммунный ответ при флавивирусных инфекциях играет важную роль в контроле вирусной инфекции и диссеминации. Пассивный перенос поликлональных или моноклональных антител защищает мышей от летального поражения флавивирусами [125]. Основной гуморальный контроль осуществляется нейтрализующими антителами, расположенные в основном на вирусном которые распознают эпитопы, E гликопротеине. Кроме того, анти-NS1 антитела также могут участвовать в гуморальном иммунном ответе на флавивирусы. Протективный механизм связан с Fc-рецептором и/или комплементом и может зависеть от региона NS1, на который направлены соответствующие антитела [105]. Однако, гуморальный иммунный ответ, индуцированный флавивирусами, также может наблюдаться при манифестации тяжелых флавивирусных заболеваний. Таким образом, флавивирусы обладают механизмами, позволяющими модулировать гуморальный иммунный ответ в организме хозяина. Фундаментальным свойством РНК вирусов является ошибочное функционирование РНК полимеразы во время репликации вирусного генома, способствующее адаптации и быстрой эволюции вирусов. Накапливание мутаций в вирусном геноме в связи с ошибками в работе РНК полимеразы, наряду с селективным отбором в организме хозяина приводят к изменениям кодируемых вирусами белков. Флавивирусы также содержат РНКзависимую РНК полимеразу, которая позволяет генерировать квазивиды вирусов, различающиеся отдельными антигенными эпитопами, которые теоретически могут избегать распознавания нейтрализующими или ингибиторными антителами. Мутации могут приводить к изменениям в домене III E белка, что позволяет вирусам ускользать от нейтрализующих антител при инфицировании WNV, DENV, YFV и TBEV [74]. Мутации E белка при таком варианте значительно модифицируют вирулентность WNV у мышей, нарушают кинетику репликации и снижают индукцию TNF- у инфицированных животных [387]. Некоторые вирусы используют антивирусные 54 антитела для прикрепления к клетками мишеням. Этот механизм известен как антителзависимое усиление вирусной инфекции (ADE). ADE изначально описано для таких флавивирусов, как MVEV, WNV и JEV. Исследование образцов крови пациентов с DENV инфекцией показало, что более высокий титр циркулирующих антивирусных антител коррелирует с более тяжелым течением заболевания [433]. Во-первых, прикрепление комплекса DENV-антитела к человеческим моноцитам активирует негативный регулятор дигидроксиацетон киназу (DAK), аутофагия-связанную 5– аутофагия-связанную 12 (Atg5–Atg12), TANK и SARM. DAK и Atg5–Atg12 нарушают RIG-I/MDA-5 сигнальный каскад, а TANK и SARM подавляют TLR сигнальный каскад, что нарушает синтез IFN I и приводит к супрессии интерферон-опосредованного антивирусного ответа. Во-вторых, усиление вирусной инфекции субнейтрализующими антителами ингибирует провоспалительные медиаторы, такие как IL-12 и IFN-, но активирует супрессивные медиаторы, такие как IL-10, который индуцирует экспрессию супрессоров JAK-STAT пути. Изучению различных аспектов гуморального ответа при КЭ посвящены многочисленные исследования отечественных ученых, позволившие сформулировать основные закономерности синтеза антител, свойственные этой инфекции [15, 16, 27, 32 и др.]. Клеточный иммунный ответ. DC играют важную роль во взаимодействии врожденного и толерантности адаптивного многие иммунитета. вирусы используют Для индукции специальные иммунологической стратегии, чтобы препятствовать презентации антигена DC [67, 317]. К примеру, DENV-инфицированные DC моноцитарного происхождения не способны поляризовать дифференцировку CD4+ Th1 эффекторов, что препятствует индукции эффективного адаптивного иммунного ответа [98]. JEV реплицируется в DC и макрофагах, ингибирует экспрессию маркеров зрелых клеток и MHC I и приводит к нарушению функционирования в DC TLR сигнальных путей, что приводит к дефектному CD8+ T клеточному ответу [56, 57]. JEV не только нарушает способность DC активировать CD8+ T клетки, но и приводит к увеличению численности свидетельствуют, что популяции флавивирусы CD4+Foxp3+Treg нарушают [93]. Эти функционирование результаты антиген- представляющих механизмов, ингибируют DC и снижают MHC I-рестриктированную презентацию антигенов и индукцию адекватного иммунного ответа. А образование 55 вирусных квазивидов во время инфекции позволяет вирусам не только избегать действия антител, но и препятствует распознаванию вирусов Т-лимфоцитами. Одним из ключевых иммунологических феноменов, наблюдаемых при КЭ, является снижение содержания Т-лимфоцитов, неоднократно отмеченное исследователями [8, 15, 27, 36, 37, 47 и др.]. В качестве возможных причин Тлимфопении называют: экспериментально доказанное размножение вируса в органах иммунной системы [17], изменение рецепторных структур Т-лимфоцитов, пораженных вирусом КЭ [15], перераспределение Т-клеток в результате миграции [43]. По данным Кветковой (1984) глубина Т-клеточного дефицита прямо коррелирует с тяжестью клинического течения [15]. В доступной на сегодняшний день литературе нет информации о роли в патогенезе КЭ субпопуляций Т-хелперных и Т-цитотоксических лимфоцитов за исключением экстраполяции данных об уровне синтезируемых ими цитокинов на возможную поляризацию иммунного ответа по Th1- или Th2-пути [12, 13, 18, 30, 46 и др.]. Таким образом, вирусные инфекции сопровождаются сложным комплексом разнообразных реакций, регулируемых смесью CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов различных линий дифференцировки. эффекторов при Динамика изменения содержания субпопуляций Т- естественном инфицировании человека самыми актуальными возбудителями вирусных нейроинфекций (НПЭВ, TBEV) остается малоизученной и представляет несомненный интерес, поскольку определяет эффективность механизмов адаптивного иммунитета. Уровень дифференцировки Т-эффекторов зависит не только от антигенных свойств вирусов, но и от иммунологической реактивности хозяина, которая, в свою очередь, тесно связана с возрастом, полом, HLA-полиморфизмом и т.д. В связи с этим, исследование роли различных эффекторных Т-лимфоцитарных субпопуляций в противовирусном иммунном ответе (в том числе, локальном) и механизмах патогенеза менингитов вирусной этиологии с учетом возрастных, ассоциированных с полом и фундаментальное значение. HLA особенностей их дифференцировки имеет 56 Глава 2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 2.1. Дизайн исследования Исследования проведены на базе лаборатории иммунопатофизиологии Института иммунологии и физиологии УрО РАН (директор - академик РАН, профессор Черешнев В.А.) и МАУ Клинико-диагностический Центр (главный врач - д.м.н., профессор Бейкин Я.Б.) г. Екатеринбург с 2003 по 2014 гг. Обследовано 195 практически здоровых детей и взрослых в шести возрастных группах: 7-12 мес: 30 человек; 1-3 года: 30 человек; 4-7 лет: 30 человек; 8-14 лет: 30 человек; 15-18 лет: 30 человек; 19-45 лет: 45 человек. Выполнены иммунологические, генетические методы исследования, оценка гормонального статуса. В каждой возрастной группе анализ данных лабораторного обследования проведен, в том числе, в зависимости от пола обследуемых. Проведен ретроспективный анализ результатов вирусологического и молекулярно-биологического обследования 1720 случаев заболевания ЭВИ с СМ, а также клинического и иммунологического обследования 435 пациентов с менингитами вирусной этиологии. В ходе ретроспективного исследования в зависимости от результатов идентификации возбудителя менингитов сформированы следующие основные группы: 1-я основная группа –400 пациентов с ЭВИ с СМ, в рамках которой были выделены следующие возрастные подгруппы: 1-3 года (58 человек); 4-7 лет (107 человек); 8-14 лет (180 человек); 15-18 лет (30 человек); 19-15 лет (25 человек). Для исследования ассоциированных с полом особенностей иммунного ответа в группах 1-18 лет выделены соответствующие подгруппы. Для изучения серотип-специфических клинико-иммунологических закономерностей ЭВИ с СМ в возрастных группах 4-7 и 814 лет выделены подгруппы с СМ, вызванными Coxsackievirus B1-B5 (76 человек) и ECHO11, 30 (110 человек). 2-я основная группа – 35 пациентов с МФ КЭ в возрасте 19-45 лет. Критерии включения: характерный клинический симптомокомплекс, наличие плеоцитоза в ЦСЖ и положительные результаты вирусологических, молекулярно- 57 биологических и серологических методов исследования. Критерии исключения: наличие серологических маркеров и генетического материала альтернативных возбудителей серозных менингитов (Borrelia burgdorferi, Borrelia afzelii, Borrelia garinii, Neisseria meningitides, Haemophilus infuenzae и Streptococcus pneumonia); прием иммуномодуляторов до заболевания в течение трех месяцев. На первом этапе работы проведено обследование и анализ результатов иммунологических, гормональных и генетических исследований у практически здоровых детей и взрослых. Основной задачей второго этапа исследований явилось изучение возрастной, половой структуры пациентов с ЭВИ с СМ, сезонного распределения случаев заболевания, пейзажа выделенных серотипов НПЭВ. На третьем этапе проведен анализ клинико-анамнестических данных и оценка результатов иммунологических исследований периферической крови и ЦСЖ пациентов с ЭВИ с СМ, проведенных в 1-10 и 11-20 сутки от начала заболевания, в зависимости от возраста, пола, серотипа возбудителя (Coxsackievirus B1-B5, ECHO11, 30) и результатов типирования HLA. Кроме того, проведен сравнительный анализ данных клиникоиммунологического обследования пациентов возрастной группы 19-45 лет с ЭВИ с СМ и МФ КЭ. 2.2. Объект исследования На первом этапе работы исследованы образцы периферической крови 150 практически здоровых детей в возрасте от 7 месяцев до 18 лет (1 группа-7-12 мес., 2 группа – 1-3 года, 3 группа – 4-7 лет, 4 группа 8-14 лет, 5 группа-15-18 лет, численность каждой группы – 30 человек) и 6 группа - 45 взрослых (19-45 лет). Обследование женщин и подростков с установившимся менструальным циклом проводили в фолликулярную фазу на 5-7 день менструального цикла. Обследование практически здоровых лиц проведено в соответствии с распоряжением Управления здравоохранения Администрации г.Екатеринбурга №298/35 от 29.04.2011 г. с целью определения нормативных показателей гормонального, иммунного и цитокинового статуса. Для исключения детей с хроническими воспалительными заболеваниями из группы сравнения использован запатентованный метод [4]. Выполнен комплекс 58 иммунологических методов исследования, оценка гормонального статуса и типирование генов гистосовместимости HLA II класса по локусу DRB1. На втором этапе проведен ретроспективный анализ результатов вирусологического и молекулярно-биологического обследования 1720 (1675 детей и подростков до 18 лет и 45 взрослых) случаев заболевания ЭВИ с СМ за период с 2003 по 2014 гг. У 992 (57,7%) пациентов энтеровирусная природа менингита установлена на основании обнаружения РНК энтеровирусов в ЦСЖ методом ОТ ПЦР. В 728 (42,3%) случаях НПЭВ выделены и идентифицированы с помощью классических вирусологических методов (в 89,3% случаев в образцах ЦСЖ также была обнаружена РНК НПЭВ). Максимальное число случаев заболевания ЭВИ с СМ зарегистрировано за этот период в 2007 году. Заболеваемость обусловлена различными серотипами НПЭВ. С 2003 по 2007 гг. преобладали серотипы группы Coxsackie B. Основными этиологическими агентами энтеровирусных менингитов в 2008-2009 годах были ECHO-вирусы (ECHO 30 и ECHO 7). В 2010 году доминировал Coxsackie B4 (рисунок 2.1). 45 90 число случаев заболевания 40 35 30 25 20 15 80 70 число случаев заболевания CVB1 CVB2 CVB3 CVB4 CVB5 ECHO 6 ECHO 7 ECHO 11 ECHO 14 ECHO 17 ECHO 30 60 50 40 30 10 20 5 10 0 0 2003 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 Рисунок 2.1 - Пейзаж отдельных серотипов Coxsackie B и ECHO вирусов, изолированных в период с 2003 по 2010 гг. Для 2011-2014 гг. характерен разнообразный вирусный пейзаж. Значительное количество лиц было инфицировано ЕСНО-вирусами разных серотипов (ЕСНО 6, ЕСНО 7, ЕСНО 17, ЕСНО 18). Наряду с моноинфекцией в 2011-2014 гг. возрастает роль микстинфицирования. Большинство микстов составили вирусы Коксаки В4 и ЕСНО-вирусы разных типов (рисунок 2.2). 59 Распределение по возрасту. В подавляющем большинстве случаев НПЭВ изолированы у детей (рисунок 2.3). При этом дети в возрасте от 0 до 2 лет составили 7,3% от всех случаев заболевания, от 3 до 7 лет – 47,9%, 8-14 лет – 39,7%, 15-18 лет – 2,5% и 19-45 лет – 2,6%. Таким образом, 87,6% заболевших ЭВИ с СМ составляют дети в возрасте 3-14 лет. Максимальное количество случаев заболевания ЭВИ с СМ зарегистрировано у детей 5 лет. 220 CVB1-5 ECHO CVB+ECHO mixt ECHO mixt CVB 200 число случаев заболевания 180 160 140 120 100 80 60 40 20 0 2011 2012 2013 2014 Рисунок 2.2 - Регистрация отдельных серотипов Coxsackie B и ECHO вирусов, а также случаев микст-инфицирования в период 2011-2014 гг. 220 200 число случаев заболевания 180 160 140 120 100 80 60 40 20 0 0 2 4 6 8 10 12 14 16 18 20 22 24 26 28 30 32 34 36 38 40 42 44 46 48 50 52 54 56 возраст, количество лет Рисунок 2.3 - Распределение по возрасту случаев заболевания энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом в период 2003-2014 гг. 60 Распределение по полу. В целом, ЭВИ с СМ чаще регистрировали у представителей мужского пола. Мальчики составили в среднем 61,3% (58,1-64,3%) от всех заболевших. Соотношение случаев заболевания, зафиксированных у представителей мужского и женского пола, в среднем составляющее 1,58 (1,39-1,80), варьировало от 1,2 в возрасте до 1 года до 2,6 у детей 14 лет. Тенденция к повышению соотношения в пользу лиц мужского пола наблюдалась с увеличением возраста пациентов (рисунок 2.4). 600 а 2,6 б 515 500 2,4 447 число случаев заболевания соотношение пациентов мужского и женского пола 2,8 2,2 2,0 1,8 1,6 400 327 300 200 177 1,4 101 100 1,2 0 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 0 янв. - 29 27 13 1,0 фев. 26 7 6 март возраст, количество лет апр. май июнь июль авг. сент. окт. нояб. дек. месяцы Рисунок 2.4 - Соотношение пациентов мужского и женского пола с энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом (а). Сезонное распределение случаев заболевания энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом (б) Сезонное распределение. Большинство случаев изоляции НПЭВ относилось к летне-осенним месяцам с отчетливым пиком в августе-сентябре (рисунок 2.4). На 5 месяцев с июня по октябрь приходилось 93,5% всех случаев заболевания ЭВИ с СМ. На третьем этапе проведен анализ клинико-анамнестических данных и оценка результатов иммунологических исследований периферической крови и ЦСЖ 400 пациентов с менингитами энтеровирусной этиологии в зависимости от возраста, пола, серотипа возбудителя (Coxsackievirus B1-B5, ECHO11, 30) и результатов типирования HLA. В основной группе проведение вирусологического исследования позволило выделить и идентифицировать возбудителя в среднем в 52,6% случаев. 32,2% из них составили различные серотипы Coxsackie B-вирусов; 20,4% - ECHO-вирусы. В остальных случаях (47,4%) диагноз ЭВИ установлен на основании положительных результатов выделения РНК энтеровирусов в ЦСЖ. Пейзаж изолированных НПЭВ 61 представлен различными серотипами энтеровирусов, относящихся как к Coxsackie B, так и различным ECHO-вирусам (рисунок 2.5). Рисунок 2.5 - Этиологическая структура Coxsackie В- и ECHO-менингитов в основной группе Образцы венозной крови получены в остром периоде ЭВИ с СМ (1-10 сутки от начала заболевания) и в динамике (11-20 сутки) заболевания. Все обследуемые пациенты находились на лечении в инфекционных отделениях МАУ ГКБ№40 (главный врач - Прудков А.И.). Первую группу составили 58 детей в возрасте от 1 года до 3 лет; вторую-107 детей в возрасте от 4 до 7 лет; третью - 180 детей в возрасте от 8 до 14 лет, четвертую - 30 подростков в возрасте от 15 до 18 лет и пятую - 25 взрослых пациента (19-45 лет). Соотношение пациентов мужского и женского пола в разных возрастных группах в среднем составило: 1,8:1. Для исследования ассоциированных с полом особенностей иммунного ответа в группах 1-18 лет выделены соответствующие подгруппы. Для изучения серотип-специфических закономерностей в возрастных группах 4-7 и 8-14 лет выделены подгруппы с ЭВИ с СМ, вызванной Coxsackie B1-B5 (76 человек) и ECHO11, 30 (110 человек). Образцы ЦСЖ получены при люмбальной пункции в 1-10 день от начала заболевания и в динамике болезни (11-20 день). Клеточный состав ЦСЖ исследовали у всех обследуемых пациентов с помощью стандартных цитологических методов, включающих определение цитограммы и общего содержания лейкоцитов. Комплекс иммунологических методов проведен с использованием материала ЦСЖ у 12 детей 1-3 лет; 41 ребенка 4-7 лет; 46 детей 8-14 лет; 10 подростков 15-18 лет; 11 взрослых 19-45 лет. Кроме того, проведен сравнительный анализ данных клинико-иммунологического обследования пациентов возрастной группы 19-45 лет с ЭВИ с СМ и МФ КЭ. Группу 62 пациентов с МФ КЭ на основании общепринятых клинических критериев и результатов серологического обследования составили 35 человек в возрасте 19-45 лет (мужчин - 24, женщин - 11). Все пациенты находились на лечении в Городском центре природноочаговых инфекций (МО Новая больница, гл. врач Лившиц В.Р., зав. к.м.н. Топоркова М.Г.) 2.3. Методы исследования Вирусологические методы исследования. Диагностика энтеровирусной природы менингитов базировалась на выделении из исследуемого материала (носоглоточные смывы и пробы фекалий) вирусов, их идентификации, а также определении в парных сыворотках крови титра антител к аутоштаммам и эталонным штаммам вирусов Coxsackie B. Для индикации возбудителя использовали метод заражения перевиваемых клеточных линий HEP-2 (клетки карциномы гортани человека), RD (клетки эмбриональной рабдомиосаркомы человека), L20B (клетки мышиного происхождения) в трех последовательных пассажах. Для идентификации выделенных цитопатогенных агентов использовали микрометод реакции нейтрализации (РН) в культуре ткани с использованием моновалентных диагностических сывороток (ФГУП Предприятие по производству бактерийных и вирусных препаратов Института полиомиелита и вирусных энцефалитов РАМН им. М.П.Чумакова, Москва). Определение вируснейтрализующих антител микрометодом РН в культуре ткани основывалось на подавлении цитопатического действия аутоштамма, эталонных вирусов Coxsackie В1, В3 и В5, взятых в дозе 100 ТЦД50, последовательными разведениями сыворотки обследуемого, содержащей антитела к этому вирусу (исследования выполнены в лаборатории вирусологии МАУ Клинико-диагностический Центр, зав. Оленькова О.М.). Молекулярно-биологические методы исследования. Помимо классических вирусологических методов для обнаружения РНК энтеровирусов и исключения присутствия возбудителей бактериальной природы (Neisseria meningitides, Haemophilus infuenzae и Streptococcus pneumonia) в ЦСЖ использовали метод ПЦР с гибридизационно-флуоресцентной детекцией продуктов амплификации в режиме реального времени. Исследования проводили на автоматическом термоциклере Rotor Gene Q (QIAGEN, Германия) с использованием диагностических наборов АмплиСенс 63 (Россия) на базе лаборатории молекулярно-биологических методов исследования МАУ Клинико-диагностический Центр (зав. к.б.н. Сбитнева Н.Н.) Серологические использованием тест методы систем исследования. для Диагностику КЭ определения осуществляли иммуноглобулинов класса с IgG (ВектоВКЭ-IgG) и IgM (ВектоВКЭ-IgM) к TBEV (ЗАО Вектор-Бест, Новосибирск) методом твердофазного иммуноферментного анализа. Микст-инфицирование боррелиями (Borrelia burgdorferi, Borrelia afzelii, Borrelia garinii) исключали путем определения иммуноглобулинов класса IgG (Anti-Borrelia plus VIsE ELISA (IgG)) и IgM (Anti-Borrelia ELISA (IgM) к антигенам Borrelia в сыворотке крови (Euroimmun, Германия) методом твердофазного иммуноферментного анализа и в реакции Вестернблота с использованием тест-систем Anti-Borrelia EUROLINE-WB (IgG) и Anti-Borrelia EUROLINE-WB (IgM) (Euroimmun, Германия). Исследования выполнены в лаборатории вирусологии МАУ Клинико-диагностический Центр (зав. Оленькова О.М.) Иммунологические методы исследования. Определение содержания лейкоцитов, абсолютного содержания лимфоцитов, гранулоцитов и моноцитов в периферической крови осуществляли из образца цельной крови, взятой в пробирку с К3ЭДТА (Minicollect, 0,5 ml), с использованием автоматического гематологического анализатора Cobas Micros 60 OT (ABX, Франция). Мононуклеары периферической крови (МПК) для проведения внутриклеточного окрашивания цитокинов и определения Treg лимфоцитов были получены из гепаринизированной крови путем выделения на градиенте плотности 5,64% Polysucrose 400, 9,65% Sodium Diatrizoate (1,0770 g/cm3)(Lympholyte®-H, Cedarlane Laboratories Ltd, Нидерланы). Использовали стандартную процедуру отмывки клеток (троекратно) и ресуспендировали отмытые МПК в концентрации 2*106/мл в среде RPMI-1640 с добавлением 10% инактивированной телячьей эмбриональной сыворотки. Моноклональные антитела. Для иммунофенотипирования лимфоцитов с целью определения основных лимфоцитарных субпопуляций использованы следующие моноклональные антитела: BD Multitest™ (CD3-FITC/CD16+CD56-PE/CD45- PerCP/CD19-APC; CD3-FITC/CD8-PE/CD45-PerCP/CD4-APC) (BDIS, США); CD3FITC/HLA-DR+(IO Test, Immunotech, Франция). Для определения внутриклеточных цитокинов: анти-IFN-γ-PE; анти-IL-4-PE; анти-IL-2-PE; анти-TNF-α-PE (IO Test, 64 Immunotech, France); анти-IL-17А-PE (BDIS, USA); для окрашивания поверхностных рецепторов: CD3-PC-5; CD4-FITC; CD8-FITC (IO Test, Immunotech, Франция). Для определения CD4+ и CD8+ Т-клеток памяти, наивных и терминальнодифференцированных Т-эффекторов использовали CD45RA- FITC/CD62L-PE/CD3PerCP/CD4-APC и CD45RA-FITC/CD62L-PE/CD3-PerCP/CD8-APC MultiTest (BDIS, США). Для оценки содержания Treg лимфоцитов: Human FoxP3 Stain Kit-PE (FoxP3PE/CD4-APC/CD25-FITC) (BDIS, США). Для оценки поглотительной активности моноцитов: CD14-PE (IO Test, Immunotech, Франция) и FITC-меченный St.aureus. Иммунофенотипирование основных субпопуляций лимфоцитов осуществляли согласно протоколу Direct immunofluorescence staining of whole blood. 2002, (BDIS, США). Для анализа набирали до 3000 лимфоцитов. Процент Т-лимфоцитов, Влимфоцитов, Т-хелперов, Т-цитотоксических лимфоцитов, NK-клеток и активированных Т-лимфоцитов (CD3+HLA-DR+) рассчитывали от всех лимфоцитов. Оценку внутриклеточной продукции цитокинов проводили согласно протоколу Intracellular staining procedure. 1996, (BDIS, США): активацию лимфоцитов осуществляли 25нг/мл Phorbol 12-myristate 13-acetate (PMA) с иономицином (1 мкг/мл) в присутствии брефелдина А (10 мкг/мл) в течение 4 часов при температуре 37 С в полистироловых 12х75 мм пробирках. Нестимулированный контроль инкубировали в тех же условиях в присутствии брефелдина А, без добавления активаторов. Для исключения неспецифического связывания моноклональных антител использовался флюорохром-коньюгированный изотипический контроль. Для контроля эффективности активации одну аликвоту МПК инкубировали с PMA и иономицином без добавления брефелдина А. Активированные МПК фиксировали с использованием 1х Facs Lyse Solution в течение 10 мин. Пермеабилизацию осуществляли с использованием 1хFacs Permeabilizing Solution в течение 10 минут при комнатной температуре в темноте. Окрашивание моноклональными антителами проводили одновременно для поверхностных и внутриклеточных маркеров в течение 30 минут. В активационный контроль добавляли CD69PE/CD3-PerCP (BDIS, США). Трехцветный анализ проводили с использованием проточного цитофлюориметра FacsCanto II (BDIS, США). Данные анализировали с использованием FacsDiva Version 65 6.1.3 (BDIS), набирая не менее 3000 лейкоцитов в образце. Популяцию CD3+ PC-5меченных лимфоцитов гейтировали с использованием флюоресцентного канала (FL3). Соответственно, двух-параметровые дот-плоты были созданы для оценки процентного содержания CD3+CD4+IFN-+, CD3+CD4+TNF-α+, CD3+CD4+IL-2+, CD3+CD4+IL-4+, CD3+CD4+IL-17А+ а CD3+CD8+IL-2+, также CD3+CD8+IFN-+, CD3+CD8+TNF-α+, CD3+CD8+IL-4+, CD3+CD8+IL-17А+ субпопуляций (рисунок 2.6). а б в г д е ж з и к л м Рисунок 2.6 - Гейтирование популяции CD3+ PC-5-меченных лимфоцитов (а, б) и двухпараметровые дот-плоты для оценки спонтанного и стимулированного процентного содержания: CD3+CD4+IL-17A+ (в, г); CD3+CD4+IFN- + (д, е); CD3+CD4+TNF-α+ (ж, з); CD3+CD4+IL-2+ (и, к); CD3+CD4+IL-4+ (л, м) лимфоцитов Изотипический контроль использовали для подтверждения специфичности моноклональных антител. Экспрессия CD69 более чем 90% CD3+лимфоцитов считалась удовлетворительным критерием активации. Нестимулированные окрашенные моноклональными антителами образцы использовали для установки квадрантов в двух- 66 параметровых дот-плотах. Для оценки среднего содержания цитокинов в Т-лимфоцитах использовали показатели средней геометрической интенсивности флюоресценции для (GeoMean) логарифмической шкалы. Геометрическое среднее (GeoMean) представляет собой логарифмическое среднее событий в рассматриваемой популяции и рассчитывается по формуле: GeoMean=10(ΣlogXi)/n, где n - число событий в популяции, Xi- значение отдельного i=1 показателя, i = от 1 до n. Среднюю интенсивность флюоресценции (СИФЦ) рассчитывали по формуле: СИФЦ = GeoMean 1 (цитокин-положительных клеток) – GeoMean 2 (цитокинотрицательных клеток (аутофлюоресценция)) (рисунок 2.7). а б Рисунок 2.7 - Примеры цитофлюорограмм (а, б) оценки средней интенсивности флюоресценции цитокинов (IFN-) в Т-лимфоцитах периферической крови человека Определение относительного содержания Treg лимфоцитов осуществляли согласно протоколу BD Pharmingen (Human FoxP3 Buffer Set). Для анализа набирали до 25000 CD4+ лимфоцитов. Процент Treg (CD25+FoxP3+) рассчитывали от содержания CD4+ лимфоцитов. Определение относительного содержания CD4+ и CD8+ Т-клеток памяти, наивных и терминально-дифференцированных Т-эффекторов осуществляли согласно протоколу прямого флюоресцентного окрашивания с лизированием без отмывки. набирали до 1000 CD3+ лимфоцитов. Популяцию CD3+CD4+ Для анализа лимфоцитов 67 последовательно гейтировали с использованием флюоресцентных каналов (FL3 и FL4) и параметра бокового светорассеяния (SSC) (рисунок 2.8). а в б г д е Рисунок 2.8 - Определение относительного содержания центральных и эффекторных CD4+ Т-клеток памяти. Гейтирование популяции CD3+ PerCP-(а) и CD4+APC (б) меченных лимфоцитов и двух-параметровый дот-плот для оценки спонтанного и стимулированного процентного содержания: TCM(в); Tnaive(г); TEM(д); TEMRA (е) лимфоцитов Процент CD4+ Т-клеток памяти (эффекторные клетки-памяти (CD4+TEM) CD3+CD4+CD45RA-CD62L- и CD3+CD4+CD45RA-CD62L+), а (CD3+CD4+CD45RA+CD62L+) и центральные также наивных клетки-памяти (CD4+TCM) Т-хелперов (CD4+Tnaive) CD3+CD4+CD45RA+CD62L- лимфоцитов в двух- параметровых дот-плотах рассчитывали от содержания CD4+ лимфоцитов. Аналогично процент CD8+ Т-клеток памяти (эффекторные клетки-памяти (CD8+TEM) CD3+CD8+CD45RA-CD62L- и CD3+CD8+CD45RA-CD62L+), а также наивных цитотоксических Т-лимфоцитов центральные клетки-памяти (CD8+TCM) (CD8+Tnaive) (CD3+CD8+CD45RA+CD62L+) и терминально-дифференцированных Тэффекторов (CD8+TEMRA) (CD3+CD8+CD45RA+CD62L-) рассчитывали от содержания CD8+ лимфоцитов. Для оценки внутриклеточного киллинга (бактерицидной активности лейкоцитов) использовали Института метод, разработанный в лаборатории иммунологии Минздрава РФ [23]. клинической иммунологии Лейкоциты выделяли из гепаринизированной крови в 3% растворе желатина в фосфатно-солевом буфере (PBS). В опытную лунку вносили 90 мкл живых FITC(флюоресцеина изотиоцианат)-меченных 68 бактерий (St.aureus Cowan I), 20 мкл аутосыворотки и 90 мкл лейкоцитов в концентрации 2 млн. в 1 мл. Смесь инкубировали 20 мин при 37ºС. После остановки киллинга лейкоциты разрушали в течение 5-10 мин 0,2% раствором сапонина; бактерии осаждали центрифугированием при 1000g в течение 10 минут и ресуспендировали в 200 мкл PBS с 2,5 мкг пропидиума иодида (Sigma), окрашивающего только убитые клетки. Через 30-40 мин пробы анализировали с использованием FacsDiva Version 6.1.3, набирая не менее 3000 событий в образце. Двух-параметровые дот-плоты использовались для оценки процентного содержания дубль-позитивных (окрашенных пропидиума иодидом и FITC) микробных клеток. Для оценки поглотительной активности нейтрофилов и моноцитов использовали метод, разработанный в лаборатории клинической иммунологии Института иммунологии Минздрав РФ [24] (рисунок 2.9). а б в г Рисунок 2.9 - Определение поглотительной активности нейтрофилов и моноцитов периферической крови: гейтирование гранулоцитов и моноцитов (а); дополнительное гейтирование моноцитов по экспрессии CD14 (б); процент фагоцитирующих гранулоцитов (в); процент фагоцитирующих моноцитов (г) 69 Лейкоциты выделяли в 3% растворе желатина в PBS. В опытную лунку вносили 90 мкл убитых FITC-меченных бактерий (St.aureus Cowan I), 20 мкл аутосыворотки и 90 мкл лейкоцитов в концентрации 2 млн. в 1 мл. После 30 минутной инкубации при 37 ºС, лейкоциты осаждали в течение 1 минуты при 200g, 2 раза отмывали PBS от непоглощенных бактерий, ресуспендировали в 200 мкл PBS и вносили 5 мкл CD14-PE для оценки мембранной экспрессии на моноцитах. Инкубировали 15 минут при комнатной температуре, затем вносили 200 мкл раствора PBS. Данные анализировали с использованием FacsDiva Version 6.1.3, набирая не менее 30000 лейкоцитов в образце. Популяции гранулоцитов и моноцитов гейтировали с использованием параметров прямого (FSC) и бокового светорассеяния (SSC). Для гейтирования моноцитов использовали также флюоресцентный канал CD14-PE (FL2). Процентное содержание активных гранулоцитов и моноцитов (поглотивших FITC-меченные бактерии) оценивали с использованием соответствующих гистограмм.Для оценки НАДФ-Н2оксидазной системы нейтрофилов использовали спонтанный и стимулированный НСТтест [26]. Концентрации сывороточных иммуноглобулинов IgG, IgM, IgA в сыворотке крови определяли методом радиальной иммунодиффузии в агаре по Mancini [280]. Содержание общих иммуноглобулинов класса IgE определяли методом иммунохемилюминесценции на анализаторе Immulite 2000 (Siemens, Germany). Для оценки содержания циркулирующих иммунных комплексов использовали метод иммунопреципитации в 4% ПЭГ-6000 с последующей фотометрией на спектрофотометре СФ-2000 [7]. Концентрацию цитокинов TNF-α, IFN-, IFN-α, IL-1, IL-2, IL-4, IL-6, IL-8, IL-10, IL-17 и IL-18 иммуноферментного в сыворотке анализа с крови определяли использованием методом наборов ЗАО твердофазного Вектор-Бест (Новосибирск, Россия). Измерение оптической плотности проводили с помощью ИФАридера Multiscan EX (Thermo Electron Corporation, Китай). Исследование цереброспинальной жидкости. Содержание лейкоцитов в ЦСЖ определяли визуальным подсчетом с помощью камеры Фукс-Розенталя. Цитограмму определяли в мазках, окрашенных азур-эозином (по Романовскому-Гимза). Абсолютное содержание рассчитывали с учетом общего содержания лейкоцитов и лимфоцитов и выражали в количестве клеток в мкл. Субпопуляционный состав лимфоцитов ЦСЖ, 70 внутриклеточное окрашивание цитокинов, определение содержания наивных Тлимфоцитов и различных субпопуляций Т-клеток памяти, а также концентрации цитокинов в ЦСЖ определяли методами, описанными выше для периферической крови. Гормональные исследования. фолликулостимулирующего пролактина (ПРЛ), гормона прогестерона, Определение (ФСГ), концентрации лютеинизирующего эстрадиола и тестостерона гормона (ЛГ), проводили на автоматическом хемилюминесцентном анализаторе ADVIA Centaur XP (Siemens) с использованием диагностических наборов фирмы Siemens, определение концентрации дегидроэпиандростерон-сульфата (ДГЭАс) - на анализаторе UniCell DxI 800 (Beckman Coulter, США) на базе лаборатории биохимии МАУ Клинико-диагностический Центр (зав. к.б.н. Беляева С.В.). Типирование HLA I и II класса. Типирование лимфоцитов периферической крови по антигенам главного комплекса гистосовместимости I класса (локусы HLA-A, B, -Cw) проводили производства реагентов с гистотипирующих панелей сывороток ЗАО Межрегиональный центр иммуногенетики и гистотипирующих Гисанс в лимфоцитотоксического микроскопа использованием Биолам стандартном теста П-1. лимфоцитотоксическом выполнена Выделение с ДНК использованием человека тесте. Оценка инвертированного выполняли из цельной периферической крови с использованием комплекта реагентов Проба-рапид-генетика (ООО НПО ДНК-Технология, Россия) в соответствии с прилагающейся к набору инструкцией. Генотипирование по локусу HLA-DRB1 проводили методом качественной мультиплексной ПЦР в режиме реального времени с использованием комплекта реагентов HLA-ДНК-ТЕХ DRB1 (ООО НПО ДНК-Технология, Россия), предназначенного для одновременной детекции 14 групп аллелей гена DRB1 (*01, *03, *04, *07, *08, *09, *10, *11, *12, *13, *14, *1403, *15, *16). Типирование генов HLADQA1 и DQB1 выполняли на регентах HLA-ДНК-ТЕХ DQA1 и HLA-ДНК-ТЕХ DQВ1 (ООО НПО ДНК-Технология, Россия), одновременно определяющих 8 аллелей и групп аллелей гена DQA1 (*01:01, *01:02, *01:03, *02:01, *03:01, * 04:01, *05:01, *06:01) и 12 аллелей и групп аллелей гена DQB1 (*02, *03:01, *03:02, *03:03, *03:04, *03:05, *04:01/*04:02, *05:01, *05:02/*05:04, *05:03, *06:01, *06:02-8). 71 Амплификацию и учет результатов проводили на приборе ДТ-Прайм (ООО НПО ДНКТехнология, Россия). Исследования выполнены на базе лаборатории клинической генетики МАУ Клинико-диагностический Центр (зав. к.б.н. Рыбина И.В.). Методы статистического анализа. Статистическую обработку материала проводили с использованием ППП Statistica 6.0 (StatSoft Inc.). Описательная статистика заключалась в определении медианы (Ме) и нижнего и верхнего квартилей (25-го и 75го процентилей, LQ-UQ). Для сравнения количественных признаков в независимых группах применяли U-критерий Манна-Уитни (Mann-Whitney U-test), в зависимых – критерий Уилкоксона (Wilcoxon matched pairs test, W). Для оценки связи между количественными показателями использовали коэффициент ранговой корреляции Спирмена (Spearman, r). Для сравнения частот качественных признаков использовали критерий χ2 и двусторонний вариант точного критерия Фишера (Fisher's exact test). Частоту аллелей определяли прямым подсчетом общего количества копий аллеля в изучаемой выборке (аллели / 2n) в десятичном формате. Частоту индивидуумов, имеющих данный аллель, рассчитывали по формуле: (носитель аллели / n)*100%. Частоту гаплотипа определяли прямым подсчетом общего количества копий данного гаплотипа в изучаемой выборке (галотипы / 2n) и выражали в процентах. Ассоциацию отдельных аллелей и гаплотипов с развитием заболевания оценивали как отношение шансов (odds ratio, OR) с 95% доверительным интервалом (CI), рассчитываемым по формуле Woolf’s. Для расчета моделей нелинейной зависимости между признаками использовали модуль Advanced Linear/Nonlinear Models/Fixed Nonlinear Regression ППП Statistica 6.0 (StatSoft Inc.). 72 Глава 3. ВОЗРАСТНЫЕ И АССОЦИИРОВАННЫЕ С ПОЛОМ ОСОБЕННОСТИ СОДЕРЖАНИЯ Т-ЭФФЕКТОРОВ 3.1. Относительное и абсолютное содержание Th1, Th2, Th17, Tc1, Tc2, Tnc17, Treg лимфоцитов у практически здоровых детей и взрослых Результаты проведенных исследований свидетельствуют, что относительное содержание Th1 лимфоцитов, будучи минимальным у детей 7-12 мес, повышается с возрастом, достигая максимальных значений у взрослых (рисунок 3.1). 20 12 а 16 8 CD3+CD4+ IFN % CD3+CD4+IFN- б 18 10 6 4 2 набл. значения ожид. значения UCB LCB 14 12 10 8 6 4 2 0 0 7-12 мес Рисунок 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет возрастные группы 15-18 лет 19-45 лет 7-12 мес 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 19-45 лет возрастные группы Median 25%-75% Min-Max 3.1 - Относительное содержание Th1 лимфоцитов в разных возрастных группах (а); наблюдаемые и предсказанные моделью значения (б) Динамика изменения относительного содержания Th1 субпопуляции лимфоцитов в зависимости от возраста может быть описана с помощью логарифмической функции: Th1(%)=1,36+3,94*log10(возраст, годы) (F=415,51; p=0,00000; R2=0,7308; R(adjusted)2=0,7291). Медиана процентного содержания Th1 лимфоцитов у детей старше 8 лет не отличается достоверно от показателя взрослых и значимо выше значений относительного содержания Т-хелперов первого типа у детей младшего возраста. Абсолютное содержание этой субпопуляции лимфоцитов также увеличивается, но в меньшей степени отличается у детей и взрослых, за исключением 73 детей до года и в возрасте 4-7 лет, у которых содержание Th1 лимфоцитов одно из самых низких (рисунок 3.2). 12000 350 Median 25%-75% Non-Outlier Range 300 а Median 25%-75% Non-O utlier Range 10000 б лимфоциты, 10 6/л 6 CD3 CD4 IFN- , 10 /л 250 + + + 200 150 100 8000 6000 4000 50 2000 0 7-12 мес 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 0 15-18 лет 19-45 лет 7-12 м ес 1-3 года возрастные группы 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 19-45 лет возрастные группы Рисунок 3.2 - Абсолютное содержание Th1 лимфоцитов (а) и общее содержание лимфоцитов в разных возрастных группах (б) Полученная закономерность обусловлена влиянием на абсолютное количество Th1 клеток общего содержания лимфоцитов, имеющего противоположно направленную тенденцию к снижению по мере взросления ребенка. Динамика изменения абсолютного содержания Th1 субпопуляции лимфоцитов в зависимости от возраста может быть описана Th1(106/л)=68,09+56,52*log10(возраст, с помощью годы) логарифмической (F=102,4; p=0,00000; функции: R2=0,4089; R(adjusted)2=0,4049). Однако, несмотря на общую значимость уравнения регрессии и его коэффициентов, данная модель объясняет лишь 40,8% вариации независимой переменной, т.е. в отличие от процентного содержания Th1 лимфоцитов, их абсолютное число в меньшей степени зависит только от возраста. Процентное содержание Тс1 лимфоцитов также постепенно увеличивается с возрастом, достигая максимальных значений у взрослых (рисунок 3.3) и подчиняясь логарифмической зависимости: Тс1(%)=0,63+3,71*log10(возраст, годы) (F=206,0; p=0,00000; R2=0,5614; R(adjusted)2=0,5586). Данная модель объясняет 55,8% вариации независимой переменной. 74 350 а 22 Median 25%-75% Non-Outlier Range 20 300 б Median 25%-75% Min-Max 16 CD3+CD8+IFN-y+, % 6 CD3+CD8+IFN-y+, 10 /л 18 250 200 150 100 14 12 10 8 6 4 50 2 0 0 7-12 мес 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 19-45 лет 7-12 мес 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 19-45 лет возрастные группы возрастные группы Рисунок 3.3 - Абсолютное (а) и относительное (б) содержание Tc1 лимфоцитов в разных возрастных группах Абсолютное содержание этой субпопуляции Т-лимфоцитов достоверно ниже у детей 7-12 мес по сравнению с показателями в группе подростков и взрослых и у детей 4-7 лет – по сравнению с содержанием Tc1 клеток в группе взрослых (таблица 3.1). 1,2 CD3+CD4+IL4+, % 1,0 0,8 0,6 0,4 0,2 0,0 7-12 м ес 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 19-45 лет возрастные группы Median 25%-75% Min-Max Рисунок 3.4 - Относительное содержание Th2 лимфоцитов в разных возрастных группах 75 Таблица 3.1 - Абсолютное содержание эффекторных Т-лимфоцитарных субпопуляций, Ме (LQ-UQ) Показатель Возрастные группы 1 7-12 мес n=30 Th1 Th2 Th17 Tc1 Tc2 Tnc17 Treg Th1/Th2 Tc1/Tc2 49,76 (2,4,5,6) 26,44-74,32 3,72(5) 0,00-6,84 7,75 (2,3,4,5,6) 4,19-14,47 24,66 (5,6) 15,33-64,20 5,18 (2,3,4,5,6) 2,46-7,86 5,69(3,4,6) 3,45-11,73 34,74 (4,6) 13,78-5,42 6,94(3,4,5,6) 4,09-13,66 3,97(4,5,6) 1,40-7,32 2 1-3 года n=30 3 4-7 лет n=30 4 8-14 лет n=30 5 15-18 лет n=30 Абсолютное содержание/мкл 108,08 82,16 125,50 (1) (6) (1) 65,91-153,05 53,57-143,54 98,54-169,78 3,82 2,22 2,61 1,00-5,83 1,12-3,60 0,81-3,90 4,26 2,76 2,93 (1) (1) (1) 1,53-11,02 0,84-5,59 1,87-6,03 59,06 55,84(6) 97,47 36,92-116,60 43,74-85,75 58,71-118,65 2,76 1,12 1,30 (1) (1) (1) 0,00-4,27 0,00-2,56 0,81-2,84 3,75 2,21(1) 1,87(1) 2,18-7,54 0,74-5,13 0,96-3,43 26,78 (6) 20,68 12,68 (1) 16,03-5,08 12,12-4,98 8,68-6,35 24,46 41,75(1) 55,05(1) 16,45-38,27 27,07-58,06 24,20-75,19 27,07 32,30 47,09(1) 9,62-30,33 15,77-49,73 27,69-82,21 115,34 (1) 96,13-161,26 1,88 (1,6) 0,00-3,78 3,33 (1) 1,47-6,92 89,97(1) 68,57-156,32 1,66 (1) 0,00-3,28 4,73 2,89-7,39 20,09 14,5-33,8 43,11(1) 31,20-58,09 31,53(1) 22,69-56,43 6 19-45 лет n=45 171,70 (1,3) 116,25-204,57 5,73(5) 2,20-0,50 4,59 (1) 2,40-5,83 134,90(1,3) 86,41-199,34 1,81 (1) 0,88-3,23 1,48(1) 1,11-2,80 13,01 (2,1) 8,51-25,9 21,72(1) 15,02-47,12 65,90(1) 46,08-87,71 Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 Относительное содержание Th2 субпопуляции значимо повышено только у взрослых по сравнению с детьми всех без исключения возрастных групп (рисунок 3.4). Что касается абсолютного количества этих клеток, то их минимальное содержание характеризует группу 15-18 летних подростков (таблица 3.1). Для того чтобы оценить баланс цитокин-экспрессирующих лимфоцитов первого и второго типа, определено соотношение Th1/Th2 и Tc1/Tc2 лимфоцитов. Для этого соотношение процентного содержания CD3+CD4+IFN-+/CD3+CD4+IL-4+, а также CD3+CD8+ IFN-+/CD3+CD8+IL-4+ рассчитано для каждого представителя возрастной группы, а затем определена медиана этого показателя в группе. Поскольку у детей 7-12 мес уровень Th1 лимфоцитов незначительно превышает содержание Th2 клеток, в этом возрасте наблюдается минимальное соотношение Th1/Th2 лимфоцитов. Максимальный коэффициент, характеризующий соотношение Th1/Th2 клеток, отмечен в группе 8-14 летних детей. Соотношение цитотоксических Т-лимфоцитов первого и второго типа (Тс1/Тс2) также минимально у детей до года, 76 достоверно отличаясь от показателей у детей старших возрастных групп и взрослых (таблица 3.1). Относительное содержание Т-хелперов, способных под действием неспецифической стимуляции, синтезировать IL-17A (Th17), находится на стабильно низком уровне во всех исследуемых возрастных группах. Медиана их абсолютного количества значимо повышена у детей 7-12 мес. Та же динамика характеризует изменение содержания Tnc17. Следует отметить увеличение относительного содержания Tnc17 в подростковом возрасте, которому соответствует уже упомянутое снижение содержания Th2 лимфоцитов. Относительное содержание Treg лимфоцитов минимально у детей до года, достоверно повышается лишь у подростков 15-18 лет. Абсолютное содержание Treg, напротив, максимально у детей 7-12 мес, достоверно отличаясь от показателей в группе 8-14 летних детей и взрослых (рисунок 3.5). 160 12 Median 25%-75% а Min-Max 140 Median 25%-75% б Min-Max 10 120 8 Treg, % 6/ Treg, 10 л 100 80 60 6 4 40 2 20 0 0 7-12 мес 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 19-45 лет 7-12 мес 4-7 лет 1-3 года возрастные группы 15-18 лет 8-14 лет 19-45 лет возрастные группы Рисунок 3.5 - Абсолютное (а) и относительное (б) содержание Treg-лимфоцитов в разных возрастных группах 3.2. Взаимосвязь между содержанием Т-эффекторов, клеток памяти и других показателей врожденного и адаптивного иммунитета Взаимосвязь между содержанием Th1, Th2, Tc1, Tc2, Th17, Tnc17, Treg субпопопуляций лимфоцитов и клеток памяти Относительное содержание в периферической крови центральных CD4+Тлимфоцитов памяти (CD3+CD4+CD45RA-CD62L+) (CD4+TCM) постепенно увеличивается с возрастом, достоверно отличаясь в группе подростков 15-18 лет и 77 взрослых от наблюдаемого у детей младших возрастных групп. Относительное содержание эффекторных CD4+Т-лимфоцитов памяти (CD3+CD4+CD45RA-CD62L-) (CD4+TEM) минимально у детей 7-12 мес, достоверно отличаясь от показателей всех остальных возрастных групп. Максимального значения относительное содержание CD4+TEM достигает у подростков 15-18 летнего возраста (рисунок 3.6). 80 60 а 70 Median 25%-75% Non-Outlier Range б 50 CD3+CD4+T EM, % CD3+CD4+T CM , % 60 40 30 50 40 30 20 20 10 10 0 0 7-12 мес 1-3 г ода 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 7-12 мес 19-45 лет 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 19-45 лет возрастные группы возрастн ые г руп п ы Рисунок 3.6 - Относительное содержание центральных (а) и эффекторных (б) СD4+ Тлимфоцитов памяти 120 CD3+CD4+TCM CD3+CD4+TEM 100 % 80 60 40 20 0 7-12 м ес 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 19-45 лет возрастные группы Рисунок 3.7 - Доля центральных и эффекторных СD4+ Т-лимфоцитов памяти в пуле СD4+ Т-клеток памяти в периферической крови в разных возрастных группах Как видно из рисунка 3.7 доля центральных и эффекторных CD4+Тлимфоцитов памяти в общем пуле CD4+ T клеток памяти изменяется с возрастом: процент CD4+TCM увеличивается, в то время как доля CD4+ TEM снижается с 78 возрастом, в результате у взрослых процентное содержание анализируемых субпопуляций клеток памяти в периферической крови становится равным и составляет около 50%. Относительное содержание в периферической крови CD8+TCM постепенно увеличивается с возрастом, достигая статистически значимой разницы только у взрослых. Доля CD8+TEM минимальна у детей 7-12 мес, достигая к 1-3 годам жизни значений, не отличающихся достоверно от медианы этого показателя во взрослой группе (рисунок 3.8). 70 35 а 60 б Median 25%-75% Non-Outlier Range 50 25 CD3+CD8+T EM, % CD3+CD8+TCM, % 30 20 15 40 30 10 20 5 10 0 0 7-12 мес 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 7-12 мес 19-45 лет 1-3 года 4-7 лет возрастные группы 8-14 лет 15-18 лет 19-45 лет возрастные группы Рисунок 3.8 - Относительное содержание центральных (а) и эффекторных (б) СD8+ Тлимфоцитов памяти в разных возрастных группах 120 CD3+CD8+TCM CD3+CD8+TEM 100 % 80 60 40 20 0 7-12 мес 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 19-45 лет возрастные группы Рисунок 3.9 - Доля центральных и эффекторных СD8+ Т-лимфоцитов памяти в пуле СD8+ Т-клеток памяти в периферической крови в разных возрастных группах 79 Доля CD8+TEM в пуле цитотоксических Т-лимфоцитов памяти в периферической крови значительно превышает процент CD8+TCM во всех возрастных группах. Тенденция к снижению CD8+TEM и некоторому увеличению CD8+TCM наблюдается только у взрослых (рисунок 3.9). В целом, общая тенденция увеличения относительного содержания в зависимости от возраста характерна и для СD4+ и для CD8+ Т-лимфоцитов памяти (рисунок 3.10). Что касается абсолютного содержания пула СD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов памяти в периферической крови, то абсолютное количество Т-хелперов-памяти повышено у детей 7-12 мес, в остальных возрастных группах оно достоверно ниже, чем у детей первого года жизни. Минимальное значение характеризует содержание Т-хелперов-памяти у 8-14 летних детей. Абсолютное содержание общих CD8+ Т-лимфоцитов памяти остается стабильным во всех возрастных группах (таблица 3.2). Таблица 3.2 - Абсолютное содержание наивных Т-лимфоцитов и Т-клеток памяти, Ме (LQ-UQ) Т-клеточные субпопуляции СD4+ TCM СD4+ TEM СD4+ Тклетки памяти СD8+ TCM СD8+ TEM CD8+Т-клетки памяти CD4+CD45RA + CD62LCD8+TEMRA CD4+Tnaive CD8+Tnaive Возрастные группы 1 7-12 мес n=30 2 3 4 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет n=30 n=30 n=30 Абсолютное содержание/мкл 5 15-18 лет n=30 6 19-45 лет n=45 119(3) 60-309 456 354-709 640(3,4,5,6) 493-766 97(6) 41-213 370 276-643 573(4) 435-732 84(1,6) 34-121 308 179-487 387(1) 310-560 80(6) 32-151 254 186-343 363(1,2) 314-445 155(6) 86-264 320 199-467 508(1) 413-649 290(2,3,4,5) 193-356 221 165-339 530(1) 435-648 13,68 (6) 7,82-28,38 190 133-288 224 150-326 14,86 (6) 5,25-31,76 262(6) 155-337 298 180-346 11,62 (6) 5,52-27,15 215 159-335 235 174-360 14.65 (6) 6,60-23,70 183 134-244 198 136-265 24,08 (6) 16,50-38,77 197 139-277 246 166-292 53,41 (1,2,3,4,5) 27,65-75,22 154(2) 115-235 213 163-310 1424(2,3,4,5,6) 983-2017 722(1,4,5,6) 386-1077 435(1,6) 202-708 246(1,2) 101-430 84(1,2) 22-331 12(1,2,3) 4-72 540(3,4,5,6) 391-756 715(3,4,5,6) 262-1061 164 76-306 439(4,5,6) 254-683 301(4,5,6) 135-1037 120 41-328 258(1,5,6) 187-457 234(1) 70-466 108 37-259 153(1,2) 81-370 153(1,2) 78-285 63 24-174 129(1,2,3) 74-299 243(1,2) 103-418 135 58-244 95(1,2,3) 52-184 227(1,2) 113-403 127 73-189 Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 80 100 90 120 а Median 25%-75% Min-Max б Median 25%-75% Min-Max 100 CD8+ Т-клетки памяти, % CD4 Т-клетки памяти, % 80 70 60 50 40 30 20 80 60 40 20 10 0 0 7-12 мес 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 19-45 лет 7-12 мес 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 19-45 лет возрастные группы возрастные группы Рисунок 3.10. Относительное содержание: CD3+СD4+ (а) и CD3+CD8+ (б) Тлимфоцитов памяти в разных возрастных группах Изучение корреляционных связей между содержанием Th1, Th2, Tc1, Tc2, Th17, Tnc17, Treg субпопопуляций показало, что наибольший лимфоцитов и CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов памяти коэффициент корреляции связывает показатели содержания CD4+Т-клеток-памяти и Th1 субпопуляции лимфоцитов (r=0,646, р=0,0000). При чем количество Th1 лимфоцитов коррелирует как с содержанием CD4+TCM (r=0,434, р=0,0000), так и с количеством CD4+TЕM (r=0,340, р=0,0000). В меньшей степени количество CD4+Т-лимфоцитов памяти коррелирует с числом Th2 лимфоцитов (r=0,267, р=0,0002). Еще меньше ассоциация между CD4+Т-клетками памяти и Th17 лимфоцитами (r=0,082, р=0,0269). Достаточно выраженная связь присутствует также между содержанием CD8+Тлимфоцитов-памяти и Тс1 лимфоцитами (r=0,499, р=0,0000). Также как и Th1 лимфоциты, Тс1 субпопуляция коррелирует как с содержанием CD8+TCM (r=0,387, р=0,0000), так и с количеством CD8+TЕM (r=0,386, р=0,0000). Отсутствует корреляционная связь между содержанием CD8+Т-лимфоцитов-памяти и Tc2, Tnc17 субпопуляциями Т-клеток. Таким образом, увеличение по мере взросления ребенка относительного содержания Th1 и Тс1 субпопуляций лимфоцитов непосредственно связано с формированием пула Т-лимфоцитов памяти. Лимфоциты с другими эффекторными функциями (Th2, Tc2, Th17, Tnc17) составляют в составе клетокпамяти гораздо меньшую долю. 81 Относительное и абсолютное содержание терминально-дифференцированных эффекторных клеток памяти (TEMRA) как CD3+CD4+, так и CD3+CD8+ фенотипа постепенно снижается с возрастом, достигая минимума у взрослых людей (рисунок 3.11) (таблица 3.2). 80 CD3+CD8+CD45RA+CD62L- (T TEMRA ) CD3+CD4+CD45RA+CD62L- 70 60 % 50 40 30 20 10 0 7-12 м ес 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 19-45 лет возрастные группы Рисунок 3.11 - Относительное (от числа CD3+CD4+ и CD3+CD8+ лимфоцитов) содержание терминально-дифференцированных CD4+ и CD8+Т-эффекторов памяти, (Ме, LQ-UQ) 50 45 2400 CD3+CD8+T naive CD3+CD4+T naive а 2200 CD3+CD8+ T n a i v e CD3+CD4+T n a i v e б 2000 40 1800 35 1600 1400 6 10 /л % 30 25 1200 1000 20 800 15 600 10 400 200 5 0 0 7-12 мес 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 19-45 лет 7-12 мес 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 19-45 лет возрастные группы возрастные группы Рисунок 3.12 - Относительное (от числа CD3+CD4+ и CD3+CD8+ лимфоцитов) (а) и абсолютное содержание (б) наивных CD4+ и +CD8+Т-лимфоцитов, (Ме, LQ-UQ) Относительное содержание наивных Т-хелперов и цитотоксических Т- лимфоцитов значимо не изменяется в разных возрастных группах, тем не менее, в соответствии с динамикой изменения абсолютного содержания лимфоцитов, 82 абсолютное содержание наивных CD3+CD4+Т-лимфоцитов снижается параллельно увеличению возраста (рисунок 3.12). Взаимосвязь между содержанием Т-эффекторов и другими показателями врожденного и приобретенного иммунитета Из показателей, характеризующих систему врожденного иммунитета, в данном исследовании гранулоцитов, (завершенность проанализированы: моноцитов, фагоцитоза) содержание общая и и поглотительная бактерицидная активность активность НАДФ-Н2-оксидазной активность лейкоцитов системы нейтрофилов в спонтанном и стимулированном НСТ-тесте. Кроме того, рассчитан показатель эффективности фагоцитоза, равный сумме фагоцитирующих гранулоцитов и моноцитов, умноженной на завершенность фагоцитоза. Абсолютное содержание гранулоцитов, а также относительное и абсолютное содержание фагоцитирующих гранулоцитов (функционально активных) значимо не отличается у детей разных возрастных групп и взрослых. Напротив, абсолютное содержание моноцитов, а также абсолютное содержание фагоцитирующих моноцитов повышено у детей до 3 лет, отличаясь от показателей в старших возрастных группах (рисунок 3.13). Median; Whisker: 25%, 75% 900 фагоцит.моноциты моноциты 800 106/л 700 600 500 400 300 200 7-12 м ес 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 19-45 лет возрастные группы Рисунок 3.13 - Абсолютное содержание фагоцитирующих моноцитов в разных возрастных группах 83 Показатели спонтанного и стимулированного НСТ-теста свидетельствует о достаточно высоком потенциале кислород-зависимых механизмов киллинга у детей 7-12 мес (значимо превышающие показатели во всех остальных возрастных группах). Максимальный показатель бактерицидной активности лейкоцитов характеризует детей в возрасте 4-7 лет. В этой же возрастной группе показатель общей эффективности фагоцитоза значимо превышает показатели эффективности фагоцитоза у детей младших возрастных групп и соответствует значениям у детей старшего возраста и взрослых. Относительное содержание естественных киллеров не отличается у детей разных возрастных групп, достигая максимальных значений у взрослых. Абсолютное количество этих клеток достигает максимума у детей в возрасте 1-3 лет. Общее содержание лимфоцитов снижается по мере взросления ребенка, что отражается на абсолютном содержании всех лимфоцитарных субпопуляций. Наиболее выраженным является снижение абсолютного содержания Т-лимфоцитов и их хелперной субпопуляции (относительное содержание Т-хелперов максимально у детей до года, а затем к 1-3 годам достигает значений, характерных для взрослых) (рисунок 3.14). Median; Whisker: 25%, 75% 6000 CD3+ CD19+ CD3+CD4+ CD3+CD8+ CD3+HLA-DR+ 5000 6 10 /л 4000 3000 2000 1000 0 7-12 мес 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 19-45 лет возрастные группы Рисунок 3.14 - Абсолютное содержание отдельных лимфоцитарных субпопуляций в зависимости от возраста 84 Абсолютное содержание хелперной субпопуляции Т-лимфоцитов у детей до года и в возрасте 1-3 лет значительно превышает их количество у детей старшего возраста и взрослых (по сравнению с взрослыми превышение составляет: в 3,2 и 2,3 раза, соответственно). У детей 4-7 лет абсолютное содержание Т-хелперов значимо не отличается от их количества у взрослых. Та же динамика характеризует содержание В-лимфоцитов, и относительное и абсолютное их количество уменьшается по мере взросления ребенка, достигая минимальных значений у взрослых. Что касается цитотоксических Т-лимфоцитов, то их относительное содержание, самое низкое у детей до года, напротив, увеличивается с возрастом. Абсолютное количество этих клеток значимо выше у детей до 3 лет по сравнению со всеми остальными возрастными группами. Из показателей, иммунитета, в данном характеризующих гуморальные факторы исследовании проанализировано адаптивного общее содержание иммуноглобулинов основных классов (IgG, IgA, IgM, IgE) и циркулирующих иммунных комплексов. 2,2 2,0 16 3 ,5 а 3 ,0 б 14 в 1,8 2 ,5 12 2 ,0 10 1,2 IgG, г/л 1,4 IgA, г/л IgM, г/л 1,6 1 ,5 8 1 ,0 6 0 ,5 4 1,0 0,8 0,6 0,4 2 0 ,0 7-12 1-3 4-7 8-14 15-18 19-45 возрастные группы 7-12 1-3 4-7 8-14 15-18 19-45 7-12 1-3 4-7 8-14 15-18 возрастные группы возрастные группы 19-45 Median 25% -75% Рисунок 3.15 - Уровень содержания иммуноглобулинов классов IgM (а), IgA (б), IgG (в) в разных возрастных группах, (Ме, LQ-UQ) Как видно из рисунка 3.15 уровень иммуноглобулинов основных классов имеет общую тенденцию к увеличению с возрастом. При этом, содержание иммуноглобулинов класса IgG увеличивается вплоть до 15-18-летнего возраста, достигая значений, характерных, в том числе, и для взрослых здоровых людей. Та же динамика характеризует и содержание общих иммуноглобулинов IgA класса. Что же касается IgM-антител, то их концентрация значимо ниже показателей в остальных 85 группах лишь у детей 7-12 мес. Далее уровень иммуноглобулинов этого класса из-за значительных колебаний показателя не достигает статистически значимой разницы в разных возрастных группах. Определение содержания общих иммуноглобулинов, относящихся к IgE классу, продемонстрировало увеличение их содержания с возрастом с появлением статистически значимой разницы во взрослой возрастной группе по сравнению с детьми до года. Отражая динамику изменения концентрации основных классов иммуноглобулинов, содержание циркулирующих иммунных комплексов также постепенно увеличивается с возрастом, достигая максимальных значений у взрослых. Для оценки взаимосвязи параметров иммунного статуса и уровня содержания Тэффекторов определены коэффициенты корреляции, связывающие абсолютные значения содержания Th1, Th2, Tc1, Tc2, Th17, Tnc17, Treg субпопопуляций и показателей, характеризующих системы врожденного и адаптивного иммунитета во всех возрастных группах. Следует отметить, что для субпопуляций Т-эффекторов, синтезирующих цитокины одного типа (Th1, Tc1, T1); (Th2, Tc2, T2) и (Th17, Tnc17, T17), характерны однонаправленные корреляционные связи с анализируемыми иммунологическими параметрами. Так, увеличение абсолютного содержания IFN-γ-синтезирующих Тлимфоцитов (Th1, Tc1, T1) в онтогенезе сопровождается увеличением относительного и абсолютного содержания гранулоцитов, снижением относительного и абсолютного содержания В-лимфоцитов и Т-хелперов, увеличением относительного содержания Тцитотоксических лимфоцитов, а также увеличением относительного и абсолютного содержания активированных Т-лимфоцитов и естественных киллеров. Кроме того, динамика изменения численности Th1, Tc1, T1 лимфоцитов коррелирует с изменением в онтогенезе концентрации иммуноглобулинов основных классов (IgA, IgM, IgG). Отрицательные коэффициенты корреляции связывают содержание Th1, Tc1, T1 субпопуляций с концентрацией IL-4 в сыворотке крови (таблица 3.3). 86 Таблица 3.3 - Взаимосвязь иммунологических показателей с содержанием Th1, Tc1, T1 субпопуляций лимфоцитов Th1 лимфоциты, 106/л Tc1 лимфоциты, 106/л R, Spearman p-уровень R, Spearman p-уровень R, Spearman p-уровень Гранулоциты, % 0,1495 0,0433 0,2155 0,0035 0,1819 0,0139 Гранулоциты, 106/л 0,1633 0,0267 0,2202 0,0028 0,1984 0,0071 В-лимфоциты, % -0,2723 0,0001 -0,3088 0,0000 -0,2839 0,0001 В-лимфоциты, 106/л Т-хелперы, % -0,2120 0,0039 -0,2539 0,0006 -0,2148 0,0036 -0,2450 0,0008 -0,3618 0,0000 -0,3152 0,0000 Т-хелперы, 106/л -0,1681 0,0233 -0,2185 0,0031 -0,1784 0,0162 Т-цитотоксические лимфоциты, % 0,2443 0,0008 0,4994 0,0000 0,3718 0,0000 Активированные Т-лимфоциты, % 0,2597 0,0004 0,2759 0,0002 0,2765 0,0001 Активированные Т-лимфоциты, 106/л CD3+CD16+56+, % 0,2402 0,0012 0,2471 0,0009 0,2677 0,0003 0,3135 0,0000 0,3696 0,0000 0,3459 0,0000 CD3+CD16+56+, 106/л 0,3326 0,0000 0,3776 0,0000 0,3701 0,0000 NK лимфоциты, % 0,3209 0,0000 0,2258 0,0023 0,2759 0,0001 0,1990 0,0070 0,0960 0,1996 0,1804 0,0151 IgA, г/л 0,3898 0,0000 0,4361 0,0000 0,4045 0,0000 IgM, г/л 0,1847 0,0120 0,1544 0,0374 0,1727 0,0194 IgG, г/л 0,3891 0,0000 0,4131 0,0000 0,4016 0,0000 IL-4, пг/мл -0,1635 0,0287 -0,1462 0,0508 -0,1543 0,0397 Иммунологические показатели NK 106/л лимфоциты, T1 лимфоциты, 106/л Изменение численности IL-4-экспрессирующих субпопуляций Т-лимфоцитов в онтогенезе коррелирует с изменением абсолютного содержания лейкоцитов (Тс2, Т2), В-лимфоцитов (Тс2, Т2), Т-хелперов (Тс2, Т2) и концентрацией IL-17 (Th2, Tc2, T2) (таблица 3.4). 87 Таблица 3.4 - Взаимосвязь иммунологических показателей с содержанием Th2, Tc2, T2 субпопуляций лимфоцитов Th2 лимфоциты, 106/л Tc2 лимфоциты, 106/л R, Spearman p-уровень R, Spearman p-уровень R, Spearman p-уровень Лейкоциты, 106/л 0,1218 0,0994 0,2445 0,0008 0,3095 0,0000 В-лимфоциты, 106/л Т-хелперы, 106/л 0,0249 0,7376 0,1973 0,0074 0,1484 0,0442 0,0605 0,4164 0,2594 0,0004 0,2391 0,0011 IL-17, пг/мл 0,1624 0,0302 0,1449 0,0500 0,1731 0,0208 Иммунологические показатели T2 лимфоциты, 106/л Изменение численности IL-17А-экспрессирующих субпопуляций Т-лимфоцитов коррелирует с изменением абсолютного содержания лейкоцитов, моноцитов, Тлимфоцитов, Т-хелперов, цитотоксических Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов, а также фагоцитарной активностью моноцитов (таблица 3.5). Таблица 3.5 - Взаимосвязь иммунологических показателей с содержанием Th17, Tnc17, T17 субпопуляций лимфоцитов Иммунологические показатели Th17 лимфоциты, 106/л Tnc17 лимфоциты, 106/л T17 лимфоциты, 106/л R, Spearman p-уровень R, Spearman p-уровень R, Spearman p-уровень Лейкоциты, 106/л 0,2245 0,0021 0,4296 0,0000 0,4499 0,0000 Моноциты, 106/л 0,145 0,0500 0,3308 0,0000 0,3183 0,0000 Т-лимфоциты, 106/л В-лимфоциты, 106/л Т-хелперы, 106/л 0,2487 0,0006 0,4793 0,0000 0,4494 0,0000 0,1994 0,0067 0,3810 0,0000 0,3984 0,0000 0,2474 0,0007 0,4512 0,0000 0,4369 0,0000 Т-цитотоксические лимфоциты, 106/л Фагоцитарная активность моноцитов, 106/л 0,1777 0,0160 0,4458 0,0000 0,3531 0,0000 0,1498 0,0490 0,2923 0,0000 0,3291 0,0000 Изменение численности Treg субпопуляций Т-лимфоцитов в онтогенезе коррелирует с изменением абсолютного содержания лейкоцитов, лимфоцитов, Тлимфоцитов, Т-хелперов, цитотоксических Т-лимфоцитов и В-лимфоцитов. 88 Отрицательные коэффициенты корреляции связывают содержание Treg лимфоцитов и численность гранулоцитов, естественных киллеров, а также уровни общих иммуноглобулинов основных классов (таблица 3.6). Таблица 3.6 - Взаимосвязь иммунологических показателей с содержанием Treg субпопуляций лимфоцитов Иммунологические показатели Treg лимфоциты, 106/л R, Spearman p-уровень Лейкоциты, 106/л 0,3897 0,0000 Лимфоциты, % 0,4494 0,0000 Лимфоциты, 106/л 0,5145 0,0000 Гранулоциты, % -0,4276 0,0000 Т-лимфоциты, 106/л 0,5464 0,0000 В-лимфоциты, 106/л 0,4085 0,0000 Т-хелперы, 106/л 0,5517 0,0000 Т-цитотоксические лимфоциты, 106/л 0,4587 0,0000 NK лимфоциты, 106/л -0,3052 0,0000 IgA, г/л -0,2542 0,0005 IgM, г/л -0,2498 0,0006 IgG, г/л -0,3320 0,0000 3.3. Ассоциированные с полом различия в содержании Т-эффекторных субпопуляций и других показателей врожденного и адаптивного иммунитета Результаты проведенных исследований показали, что ассоциированные с полом иммунологические отличия у детей до 14-летнего возраста относятся к системе естественного иммунитета и свидетельствуют о более высокой эффективности фагоцитоза у представителей мужского пола. Абсолютное содержание фагоцитирующих гранулоцитов в среднем выше у мальчиков, достигая статистически 89 значимой разницы к 1-3 годам. С увеличением возраста у детей и у взрослых мужчин и женщин разница фагоцитарной активности гранулоцитов становится не значимой. Та же закономерность характеризует и общую эффективность фагоцитоза. Еѐ показатель в среднем выше у мальчиков вплоть до 8-14 летнего возраста (рисунок 3.16). Median; Whis k er: 25%, 75% Median; Whisker: 25%, 75% 2,6 5000 4500 2,4 а 2,0 4000 1,8 3500 усл.ед. абс.кл/мкл б 2,2 3000 1,6 1,4 1,2 2500 1,0 0,8 2000 0,6 1500 7-12 мес 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 0,4 19-45 лет возрастные группы жен. муж. 7-12 мес 1-3 года 4-7 лет 15-18 лет 8-14 лет 19-45 лет возрастные группы жен. муж. Рисунок 3.16 - Отдельные параметры естественного иммунитета: поглотительная активность гранулоцитов (а); эффективность фагоцитоза (б) в зависимости от пола в разных возрастных группах Уровень эффективности фагоцитоза находится в обратной корреляционной зависимости от концентрации фолликулостимулирующего гормона (ФСГ) в сыворотке крови (r=-0,17, p=0,029). Из показателей, относящихся к системе врожденного иммунитета, помимо фагоцитирующих лейкоцитов, оценивали также относительное и абсолютное содержание NK лимфоцитов в периферической крови. Статистически значимой разницы в содержании NK клеток в зависимости от пола не было обнаружено ни в одной возрастной группе. Определение относительного и абсолютного содержания основных субпопуляций лимфоцитов в периферической крови также не выявило устойчивых ассоциированных с полом различий. Значимые различия в содержании субпопуляций Т-хелперов обнаружены только в старших возрастных группах. Так, у юношей 15-18 лет абсолютное содержание Th1 лимфоцитов превышает их количество у девушек (рисунок 3.17). Количество Th1 лимфоцитов коррелирует с концентрацией в периферической крови 90 лютеинизирующего гормона (ЛГ) (r=0,21, p=0,0057), прогестерона (r=0,18, p=0,015), эстрадиола (r=0,16, p=0,041) и тестостерона (r=0,17, p=0,026). Максимальный коэффициент корреляции связывает абсолютное содержание Th1 лимфоцитов и дегидроэпиандростерон-сульфата (ДГЭАс) (r=0,25, p=0,0015). У женщин содержание Th2 лимфоцитов вдвое превышает их содержание у мужчин (рисунок 3.17). Median; Whisker: 25%, 75% Median; Whisker: 25%, 75% 0,7 16 14 а 0,6 б 12 0,5 10 % % 0,4 8 0,3 6 0,2 4 0,1 2 0 7-12 м ес 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 19-45 лет возрастные группы 0,0 7-12 мес жен муж 4-7 лет 1-3 года 15-18 лет 8-14 лет 19-45 лет возрастные группы жен. муж. Рисунок 3.17 - Относительное содержание: Th1 (а) и Th2 (б) лимфоцитов в зависимости от пола в разных возрастных группах Единственный значимый коэффициент корреляции связывает содержание IL-4положительных Т-хелперов с уровнем эстрадиола (r=0,19, p=0,013). Ассоциированных с полом различий абсолютного содержания Тreg лимфоцитов не обнаружено. Определение содержания общих иммуноглобулинов классов IgG, IgM, IgA показало, что содержание IgM-антител у девочек 1-3 лет, а также у девушек 15-18 лет и взрослых женщин выше их концентрации у мужчин. Та же тенденция характеризует общее содержание антител класса IgG, их концентрация становится значимо выше у женщин по сравнению с мужчинами 25-45 летнего возраста (рисунок 3.18). Корреляционный анализ продемонстрировал наличие положительных связей между уровнем иммуноглобулинов класса IgM и ФСГ (r=0,22, p=0,004), ЛГ (r=0,28, p=0,0003), прогестероном (r=0,19, p=0,014), эстрадиолом (r=0,24, p=0,002) и ДГЭАс (r=0,25, p=0,0009). 91 Median; Whisker: 25%, 75% Median; Whisker: 25%, 75% 2,6 18 2,4 16 2,2 14 2,0 12 1,6 г/л г/л 1,8 1,4 1,2 10 8 1,0 6 0,8 4 0,6 0,4 7-12 мес 4-7 лет 1-3 года 8-14 лет 15-18 лет 2 жен. муж. 19-45 лет возрастные группы 7-12 мес 4-7 лет 1-3 года 15-18 лет 8-14 лет жен. муж. 19-45 лет возрастные группы Рисунок 3.18 - Содержание иммуноглобулинов классов IgM (а), IgG (б) в зависимости от пола в разных возрастных группах 3.4. Абсолютная интегрированная средняя интенсивность флюоресценции как комплексный показатель, характеризующий цитокиновую экспрессию Тэффекторов В отличие от иммуноферментного анализа или других технологий, оценивающих количество секретированных цитокинов, проточноцитометрический анализ внутриклеточно окрашенных цитокинов позволяет идентифицировать клетки, продуцирующие данные цитокины. Однако, результаты внутриклеточного окрашивания цитокинов могут быть выражены не только процентом цитокинпозитивных клеток, но и средней интенсивностью их флюоресценции. В отличие от относительной частоты (или процента) цитокин-позитивных клеток, характеризующих количество Т-клеток, экспрессирующих данный цитокин, средняя интенсивность флюоресценции характеризует качество цитокиновой экспрессии или среднее содержание цитокинов в синтезирующих их клетках. Оценка средней интенсивности флюоресценции цитокинов (СИФЦ) в разных возрастных группах показала, что среднее содержание цитокинов, синтезирующихся в одинаковых существенные условиях различными возрастные отличия. субпопуляциями Как видно из Т-лимфоцитов, таблицы 3.7, имеет СИФЦ, характеризующая среднее содержание цитокинов в цитокин-экспрессирующих Тлимфоцитах, характеризуется минимальными значениями в отношении всех 92 анализируемых цитокинов в популяциях CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов у детей 7-12 мес. Таблица 3.7 - Средняя интенсивность флюоресценции, Ме (LQ-UQ) Субпопуляции Т-лимфоцитов CD3+CD4+IFN-+ CD3+CD4+TNF-α+ CD3+CD4+IL-2+ CD3+CD4+IL-4+ CD3+CD4+IL-17A+ CD3+CD8+IFN-+ CD3+CD8+TNF-α+ CD3+CD8+IL-2+ CD3+CD8+IL-4+ CD3+CD8+IL-17A+ Возрастные группы 1 7-12 мес n=30 2 1-3 года n=30 3 4-7 лет n=30 4 8-14 лет n=30 5 15-18 лет n=30 6 19-45 лет n=45 1924 (3,4,5,6) 1458-2713 2212(3,4,5,6) 1751-3387 1484(3,4,5,6) 1054-1848 848(3,4,5,6) 769-1008 853(3,4,5,6) 733-1023 1895(2,3,4,5,6) 1487-2925 2481(3,4,5,6) 1720-4255 1181(3,4,5,6) 886-1365 931(3,4,5,6) 844-1016 965(4,5,6) 837-1059 2657(3,4,5,6) 2285-3107 2695(3,4,5,6) 2374-3505 1505(3,4,5,6) 1315-1798 972(4,5,6) 766-1093 812(3,4,5,6) 705-1002 2607(1,3,4,5,6) 2016-2883 3266(3,4,5,6) 2408-4029 1001(3,4,5,6) 816-1235 971 (4,5) 886-1132 936(3,4,5,6) 854-1054 3194(1,2,4) 2458-4027 4268(1,2,4,6) 3287-5841 2179(1,2,6) 1738-2905 1077(1) 897-1624 999(1,2) 866-1423 3095(1,2,4) 2350-3751 4906(1,2,4,5) 3917-6534 1421(1,2,5,6) 1110-1854 1134(1) 972-1387 1086(2) 949-1438 4439(1,2,3) 3754-5042 6406(1,2,3) 4708-7928 2915(1,2) 1897-3457 1533(1,2) 991-1964 1232(1,2) 920-1871 4263(1,2,3) 3265-5275 8738(1,2,3) 6567-11334 1772(1,2) 1332-1988 1199(1,2) 1012-1401 1072(1,2) 928-1536 3885(1,2) 2773-4716 4808(1,2) 3890-8594 2675(1,2,6) 2106-3024 1264(1,2) 942-1480 1244(1,2) 948-1710 3595(1,2) 2569-4430 6994(1,2,3) 4429-8994 1827(1,2,3) 1611-2228 1190(1,2) 1024-1468 1116(1,2) 1004-1332 3330(1,2) 3107-5072 6152(1,2,3) 4857-9463 3278(1,2,3,5) 2822-4240 1444(1,2) 1255-2286 1012(1,2) 953-1529 3632(1,2) 2863-4369 6002(1,2) 5411-9900 2404(1,2,3) 1605-3555 1474(1) 991-3603 1702(1,2) 1058-1885 Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 С возрастом показатель СИФЦ увеличивается, достигая у детей 4-7 лет в отношении ряда показателей, и к 8-14 годам - по всем показателям значений, значимо не отличающихся от данных, полученных в группах подростков и взрослых. Показатель интегрированной средней интенсивности флюоресценции цитокинов (иСИФЦ) предложен Darrah et al. как комплексный маркер, учитывающий и среднее содержание цитокинов в клетке (среднюю интенсивность флюоресценции), и относительное содержание клеток, продуцирующих данный цитокин (процент цитокин-позитивных клеток) [118]. Последующий анализ уровня секретированных и внутриклеточных цитокинов, выполненный Shooshtari P. et al., показал, что уровень интегрированной средней интенсивности флюоресценции тесно коррелирует с концентрацией секретированных цитокинов и может быть использован как биомаркер клеточно-опосредованного иммунитета [393]. ИСИФЦ рассчитывается по формуле: иСИФЦ=СИФЦ*Р (Р-процент цитокин-положительных клеток). В связи со 93 значительным изменением абсолютного содержания лимфоцитов и их отдельных субпопуляций в модифицировать разных возрастных показатель группах мы интегрированной сочли целесообразным средней интенсивности флюоресценции цитокинов (иСИФЦ), учитывая при его расчете абсолютное содержание цитокин-экспрессирующих субпопуляций. Абсолютную интегральную интенсивность флюоресценции рассчитывали по формуле: аиСИФЦ=СИФЦ*Абс/л. (абсолютное содержание цитокин-положительных клеток). Используя данный критерий, проведено сравнение абсолютной интегрированной средней интенсивности флюоресценции анализируемых цитокинов (аиСИФЦ) в разных возрастных группах. Анализ аиСИФЦ в разных возрастных группах выявил значимые различия уровня цитокиновой экспрессии (таблица 3.8). АиСИФЦ Th1 и Тс1 субпопуляций, будучи минимальной у детей 7-12 мес, к 8-14 годам увеличивается до значений, характерных для старших возрастных групп. Такая же закономерность характеризует TNF-αположительные цитотоксические Т-лимфоциты, в то время как аиСИФЦ CD3+CD4+TNF-α+, CD3+CD4+IL-2+, CD3+CD4+IL-4+, CD3+CD4+IL-17A+ лимфоцитов значимо не изменяется с возрастом. Таблица 3.8 - Абсолютная интегрированная средняя интенсивность флюоресценции, Ме (LQ-UQ) Субпопуляции Т-лимфоцитов CD3+CD4+IFN-+ CD3+CD4+TNF-α+ CD3+CD4+IL-2+ CD3+CD4+IL-4+ CD3+CD4+IL-17A+ CD3+CD8+IFN-+ CD3+CD8+TNF-α+ CD3+CD8+IL-2+ CD3+CD8+IL-4+ CD3+CD8+IL-17A+ Возрастные группы 1 7-12 мес n=30 2 1-3 года n=30 3 4-7 лет n=30 4 8-14 лет n=30 5 15-18 лет n=30 6 19-45лет n=45 92,1 (4,5,6) 34,8-188,2 1178,4 507,8-4046,9 430,4 183,2-1384,5 2,3 0-6,3 8,8 3,2-14,9 65,1 (4,5) 33,2-124,5 82,7 (4,5) 47,5-152,0 19,1 (5) 14,0-79,6 4,3 (3,4,5) 0-8,1 6,6 (3,4) 3,8-12,6 265,7 (4) 142,8-462,0 1206,5 541,6-2268,9 580,8 359,1-1375,2 3,9 0,3-6,1 3,9 0,9-7,9 157,3 70,0-305,3 131,2 (4,5) 70,1-382,8 32,3 (5) 8,4-46,4 2,5 0-4,9 3,7 2,3-7,2 310,0 130,2-533,8 1980,5 1073,4-3700,1 813,8 319,9-1375,8 2,6 1,0-4,0 3,0 0,9-5,2 184,4 127,8-316,3 407,5 (4,5) 172,9-541,7 36,3 (5) 16,6-51,4 1,5 (1) 0-2,7 2,3 (1) 0,9-7,3 541,2 (1,2) 403,7-981,2 3374,8 1851,8-5310,9 998,1 529,3-1976,1 2,9 0,5-6,4 4,1 1,9-6,4 370,9 (1) 247,6-526,9 852,0 (1,2,3) 479,4-1112,1 50,7 16,6-89,6 1,5 (1) 0,6-3,2 1,7 (1) 1,0-4,7 440,9 (1) 327,8-592,7 2056,7 982,2-6204,3 892,5 490,7-1484,6 2,2 0-5,1 4,3 1,9-11,5 294,0 (1) 189,6-591,2 631,5 (1,2,3) 406,9-1390,7 76,3 (1,2,3) 33,5-167,6 2,0 (1) 0-4,3 5,2 3,3-9,7 476,0 (1) 216,0-494,4 1479,0 533,9-5907,7 858,1 401,1-1983,8 4,9 2,2-5,5 2,9 1,6-7,6 210,6 129,5-309,2 404,7 197,5-690,8 60,1 35,4-84,1 7,3 0-10,2 4,6 0-8,3 Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 94 АиСИФЦ IL-2-экспрессирующих CD8+ субпопуляций постепенно нарастает с возрастом, достигая максимума у подростков. Максимальная аиСИФЦ Tс2 и Тnс17 субпопуляций наблюдается у детей 7-12 мес, снижаясь к 4-7 годам. 3.5. Обсуждение результатов Возрастные особенности содержания эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов Уже в процессе внутриутробного развития, а тем более с момента рождения ребенка происходит постоянное взаимодействие иммунной системы с антигенами окружения, включая антигены, поступающие в организм при проведении вакцинации. Это способствует постепенному изменению содержания наивных Т-клеток и Т-клеток эффекторов/клеток памяти, синтезирующих цитокины Th1, Th2, Th17 и т.д. профилей [151, 152]. Опубликованные на сегодняшний день данные об уровне нормальной цитокиновой продукции в различных возрастных группах касаются в основном оценки цитокинов в супернатантах мононуклеаров, что не позволяет экстраполировать их на содержание ответственных за их синтез Т-клеточных субпопуляций. Альтернативным методическим подходом является оценка коэкспрессии маркерных цитокинов (методом внутриклеточного окрашивания) и поверхностных рецепторов на уровне отдельной клетки с помощью проточной цитометрии [343]. Поскольку наивные Т-лимфоциты в основном не продуцируют IFN-, IL-4 или IL17-A, проточно-цитометрический анализ внутриклеточной продукции цитокинов, позволяющий оценить уровень IFN-+, IL-4+ или IL-17A+ Тлимфоцитов, отражает в целом уровень предшествовавшей антиген-опосредованной дифференцировки Т-лимфоцитов [90]. Результаты настоящего исследования показали, что в 7-12 мес возрасте у детей относительное содержание Th1 лимфоцитов снижено в 8 раз, их абсолютное содержание практически в 3 раза ниже показателя взрослой группы. Еще более выраженное «отставание» характеризовало содержание Тс1 лимфоцитов (снижение в 12 и 4,7 раза, соответственно для относительного и абсолютного содержания). Увеличение относительного содержания Th1 субпопуляции лимфоцитов происходит в логарифмической зависимости от возраста и может быть описано с помощью функции: Th1(%)=1,36+3,94*log10(возраст, годы) 95 (F=415,51; p=0,00000; R2=0,7308; R(adjusted)2=0,7291). Изменение процентного содержания Тс1-лимфоцитов с возрастом также подчиняется логарифмической зависимости: Тс1(%)=0,63+3,71*log10(возраст, годы) (F=206,0; p=0,00000; R2=0,5614; R(adjusted)2=0,5586). Изучение корреляционных связей между содержанием различных эффекторных CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов и CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов памяти показало, что увеличение по мере взросления ребенка относительного содержания Th1 и Тс1 субпопуляций лимфоцитов непосредственно связано с формированием пула Т-лимфоцитов памяти. На фоне сниженного содержания Th1 и Тс1 клеток количество Th2 лимфоцитов у 7-12 мес детей соответствовало возрастной норме взрослых людей, а абсолютное содержание Tc2 лимфоцитов было даже выше, чем во всех остальных возрастных группах. Абсолютное содержание Th17, Tnc17 лимфоцитов и Treg у детей 7-12 мес превышало их содержание у взрослых, т.о. на 7-12 мес жизни у ребенка наблюдалась преимущественная поляризация дифференцировки Т-лимфоцитов по пути Th2 (Tc2) и Th17 (Tnc17), что, по мнению ряда авторов, способствует манифестации Th2опосредованных аллергических заболеваний у детей первого года жизни [52, 90]. К возможным причинам девиации в отношении Th2 субпопуляции у детей первого года жизни относят апоптоз стимулированных Th1-лимфоцитов [255], эпигенетические трансформации, способствующие дифференцировке Th2-лимфоцитов [373] и т.д. У детей старше одного года абсолютное количество Th1 и Тс1, а также Th2 и Тс2 лимфоцитов (за исключением группы подростков) значимо не отличается от содержания этих субпопуляций у взрослых. Однако, эффективность синтеза цитокинов Т-лимфоцитарными количественным содержанием субпопуляциями определяется цитокин-положительных не только лимфоцитов. Для комплексной оценки уровня цитокиновой экспрессии различных Т-лимфоцитарных субпопуляций предложен показатель аиСИФЦ, представляющий собой произведение абсолютного содержания цитокин-положительных лимфоцитов и СИФЦ, характеризующей среднее содержания цитокинов в продуцирующих их клетках. В соответствии с полученными результатами аиСИФЦ Th1 и Тс1 субпопуляций, будучи минимальной у детей 7-12 мес, к 8-14 годам увеличивается до значений, характерных для старших возрастных групп. Такая же закономерность характеризует TNF-αположительные цитотоксические Т-лимфоциты, в то время как аиСИФЦ 96 CD3+CD4+TNF-α+, CD3+CD4+IL-2+, CD3+CD4+IL-4+, CD3+CD4+IL-17A+ лимфоцитов значимо не изменяется с возрастом. Максимальная аиСИФЦ Tс2 и Тnс17 субпопуляций наблюдается у детей 7-12 мес, снижаясь к 4-7 годам. Таким образом, детей младших возрастных групп характеризует сниженная эффективность экспрессии цитокинов Th1(Тс1)-типа, в то время как экспрессия цитокинов Th2(Tc2)и Th17 (Tnc17)-типов либо значимо не отличается от наблюдаемой в старших возрастных группах, либо превышает еѐ (для Tс2 и Тnс17 субпопуляций). Ассоциированные с полом особенности иммунного статуса Примеры ассоциированных с полом различий количественных и функциональных характеристик иммунной системы известны как у людей, так и среди позвоночных в целом [54, 86, 161, 375]. Они касаются механизмов естественного и адаптивного иммунитета и находят свое отражение в различной восприимчивости к инфекционным заболеваниям, различной степенью риска развития аутоиммунной патологии и опухолевого роста [54, 86, 117, 150, 334]. Иммунологический диморфизм формируется под влиянием генетических, гормональных факторов, гендер-специфических особенностей и т.д. Половые стероиды играют значительную роль в формировании ассоциированных с полом особенностей иммунного ответа. Помимо влияния половых гормонов на созревание и функционирование компонентов адаптивного иммунитета, подробно описанного в соответствующем разделе обзора литературы, очевидно участие половых гормонов в регуляции механизмов естественного иммунитета. Неоднократно отмеченный факт увеличения количества гранулоцитов во время беременности и лютеиновой фазы менструального цикла позволяет предположить влияние на этот показатель прогестерона и эстрогенов [84]. Одним из возможных механизмов увеличения численности нейтрофильных гранулоцитов под действием указанных гормонов является выход молодых клеток из костного мозга или отсроченный апоптоз [314]. Тем не менее, как показали наши исследования, также как и исследования, проведенные Bouman A. et al. [85], базовое абсолютное содержание гранулоцитов у мужчин не отличается от их количества у женщин. Кроме того, поглотительная активность и, в целом, эффективность фагоцитоза у мальчиков до 14 летнего возраста выше соответствующих показателей у девочек. Фагоцитарная активность 97 нейтрофилов зависит от их способности реагировать на хемотаксические стимулы и продуцировать факторы, в том числе свободные радикалы, участвующие во внутриклеточном киллинге. Изучению влияния половых стероидов на функции нейтрофильных гранулоцитов посвящены немногочисленные исследования. Опубликованы отдельные сообщения о влиянии половых стероидов на хемотаксис, образование свободных радикалов и NO [53, 76, 307, 314]. Установлено, что прогестерон усиливает хемотаксическую активность нейтрофилов, в то время как эстрогены снижают ее [307]. Влияние половых гормонов на продукцию нейтрофилами свободных радикалов изучено несколькими исследовательскими группами с диаметрально противоположными результатами [76, 314]. Безусловно, эффекты, оказываемые половыми гормонами на количественные и качественные характеристики системы фагоцитирующих лейкоцитов, нуждаются в дальнейшем изучении. Проведенные исследования подтвердили результаты, полученные рядом авторов и свидетельствующие о том, что базовое содержание периферических NK клеток значимо не отличается у мужчин и женщин, также как и у детей разного пола [86]. Однако, половые стероиды могут оказывать значительное влияние на функциональные характеристики NK клеток. Например, экспозиция с эстрадиолом (E2) in vitro усиливает цитотоксичность NK клеток и продукцию IFN-γ [323], но снижает экспрессию поверхностных активационных маркеров и секрецию гранзима B и FasL [175]. В концентрациях, соответствующих овуляторной фазе и беременности, эстрогены подавляют цитотоксическую активность NK клеток [175]. Таким образом, эффекты, оказываемые эстрогенами на NK клетки, являются дозозависимыми: высокие дозы оказывают супрессорное действие, в то время как низкие дозы могут не оказывать никакого влияния. Немало особенностей публикаций посвящено субпопуляционного изучению состава ассоциированных лимфоцитов. Не с полом противоречит литературным данным установленный в настоящем исследовании факт равенства абсолютного содержания лимфоцитов и их основных субпопуляций у мужчин и женщин, а также детей и подростков разного пола. Хотя рядом исследователей отмечено снижение процентного содержания Т-лимфоцитов у мужчин [85]. Большинство авторов не обнаружили различий в общем количестве циркулирующих 98 лимфоцитов и их субпопуляций в зависимости от фазы менструального цикла [84, 135], что свидетельствует о том, что ни прогестерон, ни эстрогены не оказывают значительного воздействия на субпопуляционный состав лимфоцитов (по крайней мере, при цикличном изменении их концентрации). В результате проведенных нами исследований установлены значимые различия в содержании основных субпопуляций Т-хелперов в старших возрастных группах. У юношей 15-18 лет продемонстрировано повышенное абсолютное содержание Th1 лимфоцитов по сравнению с девушками, коррелирующее с концентрацией ДГЭАс в периферической крови. Абсолютное содержания Th2 лимфоцитов у женщин практически вдвое превышает их содержание в периферической крови мужчин с единственным значимым коэффициентом корреляции, связывающим количество Th2 клеток с уровнем эстрадиола в периферической крови. Иммуномодулирующее действие эстрогенов на экспрессию цитокинов Th1- и Th2-типов является дозозависимым, определяется временем экспозиции, плотностью, распределением и типом ER. Низкие уровни эстрогенов коррелируют с повышением экспрессии транскрипционного фактора T-bet, участвующего в дифференцировке Th1 клеток [144]. Повышение продукции IFN-γ Th1 клетками под действием E2 описано Bao M. et al. [69] и Maret A. et al. [285]. Помимо про-Th1 эффекта E2 влияет и на дифференцировку Th2 клеток [135, 239]. Стимуляция эстрогенами Th2 ответа и антителообразования показана в исследованиях Giron-Gonzalez et al. [160], Fish et al. [144], Gonzalez et al. [163]. Высокие уровни эстрогенов ингибируют IRF1 (интерферон регулирующий фактор 1), благоприятствуя Th2 иммунитету и экспрессии IL-4 [144]. Про-Th2 эффект описан также для прогестерона (P4) [135]. Кроме того, P4 ингибирует дифференцировку Th1, усиливая Th2 поляризацию [308] и снижает экспрессию IFN-γ в лютеиновую фазу [130]. Что касается участия андрогенов в формировании ассоциированных с полом различий в содержании основных эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов, то результаты, описывающие иммуномодулирующее действие тестостерона на дифференцировку Th1 клеток, носят противоречивый характер [144, 160, 163, 231]. Тем не менее, описано ингибирующее действие андрогенов на дифференцировку Th2 субпопуляций [183]. Опубликованы также результаты исследований, демонстрирующие, что влияние ДГЭА приводит к повышению продукции IL-2 и способствует синтезу цитокинов Th1-типа [92, 324]. Таким образом, изменение 99 базовых концентраций половых гормонов в периферической крови в ходе полового созревания приводит к возникновению ассоциированных с полом различий в содержании основных эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов. Половые стероиды также модулируют созревание В-клеток и их функциональную активность [384]. Эстрадиол ингибирует апоптоз незрелых Влимфоцитов и способствует соматической гипермутации и переключению класса синтезируемых иммуноглобулинов, приводя к образованию высокоаффинных Igпродуцирующих клеток. Эти эффекты эстрадиола способствуют эффективному формированию гуморального иммунного ответа у женщин. Поэтому представительниц женского пола отличают более высокие уровни циркулирующих антител. В присутствии же андрогенов апоптоз незрелых В клеток усиливается и ограничивается переключения синтеза антител с IgM на IgG [384]. Полученные нами результаты согласуются с выводами Kanda с соавт., продемонстрировавшими, что эстрогены повышают продукцию IgG и IgM антител [219]. Таким образом, детей младших возрастных групп (до 7 лет) характеризует сниженная эффективность экспрессии цитокинов Th1(Тс1)-типа, в то время как синтез цитокинов Th2(Tc2)- и Th17 (Tnc17)-типов либо значимо не отличается от наблюдаемого в старших возрастных группах, либо превышает его (для Tс2 и Тnс17 субпопуляций у детей 7-12 мес). Динамика изменения относительного содержания Th1 субпопуляции лимфоцитов в зависимости от возраста может быть описана с помощью логарифмической функции: Th1(%)=1,36+3,94*log10 (возраст, годы) (F=415,51; p=0,00000; R2=0,7308; R(adjusted)2=0,7291). Изменение процентного содержания Тс1-лимфоцитов с возрастом также подчиняется логарифмической зависимости: Тс1(%)=0,63+3,71*log10 (возраст, годы) (F=206,0; p=0,00000; R2=0,5614; R(adjusted)2=0,5586). Изучение корреляционных связей между содержанием различных эффекторных CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов и CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов памяти свидетельствует, что увеличение по мере взросления ребенка относительного содержания Th1 и Тс1 субпопуляций лимфоцитов непосредственно связано с формированием пула Т-лимфоцитов памяти. Ассоциированные с полом иммунологические отличия у детей до 14-летнего возраста относятся к системе естественного иммунитета и свидетельствуют о более высокой эффективности фагоцитоза у представителей мужского пола. В старших 100 возрастных группах (15-18 лет, взрослые мужчины и женщины) значимыми становятся отличия в содержании основных субпопуляций Т-хелперов (увеличение у юношей 15-18 лет абсолютного содержание Th1 лимфоцитов и повышение содержания Th2 лимфоцитов у женщин по сравнению с мужчинами), а также в содержании иммуноглобулинов классов IgM и IgG, чья концентрация у девушек и женщин превышает их уровень у мужчин. Ассоциированные с полом различия в количественном содержании факторов естественного и адаптивного иммунитета формируются параллельно с изменением концентрации половых гормонов. Материалы данной главы представлены в следующих публикациях: 1. Лагерева, Ю.Г. Содержание Т-лимфоцитов первого и второго порядка у детей разных возрастных групп / Ю.Г. Лагерева, Л.В. Богданова, А.Ю. Дружинина, С.В. Меньшиков, Я.Б. Бейкин // Уральский медицинский журнал.-2006.-№5.-С.3-7. 2. Лагерева, Ю.Г. Содержание Т-лимфоцитов первого и второго порядка у взрослых и детей г.Екатеринбурга / Ю.Г. Лагерева, Я.Б. Бейкин, С.В. Меньшиков, А.И. Кузьмин, М.Л. Галимов // Вестник Уральской медицинской академической науки.- 2009.-№2.- С.54-55. 3. Богданова, Л.В. Уровень эндоплазматических цитокинов и показатели клеточного иммунитета у детей дошкольного возраста 2 и 3 групп здоровья / Л.В. Богданова, В.И. Шилко, Я.Б. Бейкин, Ю.Г. Лагерева // Вестник уральской медицинской академической науки.- 2010.-№2/1.-С.16. 4. Богданова, Л.В. Тип иммунной адаптации у детей дошкольного возраста 2 группы здоровья / Л.В.Богданова, Я.Б.Бейкин, Ю.Г.Лагерева // Уральский медицинский журнал.-2010.-№06(71).-С.56-60. 5. Лагерева, Ю.Г. Оценка содержания различных Т-эффекторных субпопуляций у детей и взрослых методом внутриклеточного окрашивания цитокинов / Ю.Г. Лагерева, С.В. Меньшиков, Т.Л. Савинова, Я.Б. Бейкин, В.А. Черешнев / Медицинская иммунология.- 2012.- Т.14, №4-5.-С.295-304. 6. Лагерева, Ю.Г. Гендер-специфические иммунологические различия у детей и взрослых / Ю.Г. Лагерева, С.В. Беляева, Я.Б. Бейкин, В.А. Черешнев // Российский иммунологический журнал.-2012.-Т.6(15).-№4.-С.363-369. 101 7. Лагерева, Ю.Г. Содержание ТH1-, TH2-, TH-17, Treg лимфоцитов у детей разного возраста / Ю.Г. Лагерева, С.В. Меньшиков, Я.Б. Бейкин, А.Ю. Еременко // Вестник уральской медицинской академической науки. – 2012.- №4.-С47-48. 8. Лагерева, Ю.Г. Субпопуляционный состав лимфоцитов у практически здоровых детей г.Екатеринбурга / Ю.Г. Лагерева, С.В. Меньшиков, А.Ю. Еременко, Я.Б. Бейкин // Российский иммунологический журнал.-2012.- том 6(14), №3(1).-С.9899. 9. Lagereva, J.G. T-lymphocytes effectors/memory cells detection by intracellular cytokines staining in children of different age and adults [Электронный ресурс]/ J.G. Lagereva, J.B. Beykin // Front. Immunol. Conference Abstract: 15th International Congress of Immunology (ICI). doi: 2013; Published 10.3389/conf.fimmu.2013.02.00018. Online: 22 Aug Received: 09 2013.-Режим Mar доступа: http://www.frontiersin.org/10.3389/conf.fimmu.2013.02.00049/event_abstract?sname=15th _International_Congress_of_Immunology_(ICI) 10. Lagereva, J. Gender specific immune status differences in children and adults [Электронный ресурс]/ J. Lagereva, S. Belyaeva // Front. Immunol. Conference Abstract: 15th International Congress of Immunology (ICI). doi: 10.3389/conf.fimmu.2013.02.00049. Received: 09 Mar 2013; Published Online: 22 Aug 2013.-Режим доступа: http://www.frontiersin.org/10.3389/conf.fimmu.2013.02.00049/event_abstract?sname=15th _International_Congress_of_Immunology_(ICI) 102 Глава 4. КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ ЭНТЕРОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ С СЕРОЗНЫМ МЕНИНГИТОМ В РАЗНЫХ ВОЗРАСТНЫХ ГРУППАХ 4.1. Клиническая характеристика энтеровирусной инфекции с серозным менингитом в возрастных группах: 1-3 лет, 4-7 лет, 15-18 лет, 19-45 лет В данном разделе проанализированы частота и длительность основных клинических симптомов, сопровождающих ЭВИ с СМ в пяти возрастных группах от 1 года до 45 лет. Несмотря на то, что лихорадка является одним из наиболее часто встречающихся клинических симптомов при ЭВИ с СМ, частота ее регистрации у детей в возрасте 1-3 года заметно ниже, чем во всех остальных возрастных группах, при этом длительность лихорадочного периода и максимальная температура не зависят от возраста (таблица 4.1). Волнообразную лихорадку чаще всего наблюдали у детей от 3 до 14 лет. Головная боль отмечена при ЭВИ с СМ практически у всех заболевших старше 3-х летнего возраста. Длительность цефалгии увеличивается с возрастом, средняя продолжительность в 4 (3-6) дней характеризует взрослых пациентов. Рвота характерна в большей степени для пациентов младшего возраста. Частота регистрации рвоты достоверно уменьшается с возрастом. Из наиболее часто регистрируемых менингеальных симптомов достоверные различия получены только в частоте регистрации симптомов Брудзинского, чаще отмечаемых у детей до 14 лет. Таким образом, если у детей до 14 лет полный менингеальный симптомокомплекс регистрировали в 62,2-96,3% случаев, то у подростков и взрослых его частота составляла 6,7% и 8%, соответственно. Сходные результаты получены и в отношении реже отмечаемых преходящих очаговых симптомов (анизорефлексия, атаксия, интенционный тремор и т.д.), которые также чаще регистрировали у детей до 14 лет, нежели у подростков и взрослых. Из неспецифических клинических симптомов гиперемию зева с одинаковой частотой наблюдали во всех возрастных группах. Катаральные же явления в виде 103 насморка, кашля, коньюктивита характерны в большей степени для детей в возрасте 1-3 года. Таблица 4.1 - Клиническая характеристика энтеровирусной инфекции с серозным менингитом в разных возрастных группах Клинические симптомы (частота, %) и их продолжительность (сутки, Ме (LQ-UQ)) - Подъем температуры длительность лих.периода - волнообразная лихорадка - головная боль длительность цефалгии - рвота длительность рвоты Менингеальные симптомы, в т.ч.: - ригидность затылочных мышц длительность р.з.м. - симптом Кернига длительность с-ма Кернига - симптомы Брудзинского длительность с-мов Брудз. Полный менингеальный комплекс Диссоциированный менингеальный комплекс Очаговые симптомы (анизорефлексия, атаксия, интенционный тремор и т.д.) Катаральные явления, в т.ч. -насморк -кашель -гиперемия зева Увеличение лимфоузлов Кишечные дисфункции Сыпь Длительность состояния средней тяжести Длительность тяжелого состояния Продолжительность заболевания Период госпитализации 1-3 года (n=58) Возрастные группы 4-7 8-14 15-18 лет лет лет (n=107) (n=180) (n=30) 19-45 лет (n=25) 84,5 (2,3,4,5) 3(1-4) 17,2 (2,3) 87,9 (2,3, 4, 5) 1(1-2) (3,4,5) 82,7 (4,5) 1(1-2) (3) 100 96,5 3(2-4) 87,9 2(1-3) 89,6 (3,4,5) 2(1-3) (4,5) 77,6 (2,3,4,5) 100 (1,3) 3(2-5) 39,2 (1,4,5) 97,2 (1,4,5) 2(1-3) (5) 86,9 (3,4,5) 1(1-1) (3) 99,1 99,1 3(2,3-5) 89,7 3(2-4) 85,9 (3,4,5) 2(1-3) (4,5) 96,3 (1,3,4,5) 97,8 (1,2,4,5) 3 (2-5) 35,5 (1,5) 99,4 (1) 2(1-4) (1,5) 75,6 (2,4,5) 2(1-4) (1,2,4,5) 98,9 98,9 3(2-5) 93,3 (5) 2(2-3) 73,3 (1,2,4,5) 2(1-3) (4,5) 62,2 (1,2,4,5) 100 (1,3) 3 (2-5) 20,0 (2) 100 (1,2) 3(2-4) (1,5) 53,3 (1,2,3) 1(1-2) (3) 93,3 90,0 3,5(2-4) 90,0 3(2-4) 6,6 (1,2,3) 1(1-1) (1,2,3) 6,7(1,2,3) 100 (1,3) 3(2-5) 16 (2,3) 100 (1,2) 4(3-6) (1,2,3,4) 36 (1,2,3) 1(1-1) (3) 100 100 2,5(1-5) 76 (3) 3(1,8-4,3) 8 (1,2,3) 0 (1,2,3) 8 (1,2,3) 22,4 (2,3,4,5) 3,7 (1,3,4,5) 37,8 (1,2,4,5) 93,3 (1,2,3) 92 (1,2,3) 27,6 (4,5) 22,4 (4,5) 18,3 (4,5) 0 (1,2,3) 0 (1,2,3) 32,7 (3,4,5) 15,5 (2,4) 74,1 24,1 (5) 50,0 (4,5) 10,3 (4) 10(8-12) (4,5) 24,3 (4) 6,5 (1,4) 67,3 29,9 (5) 45,8 (4,5) 7,5 (4) 10(8-12) (4,5) 18,9 (1) 8,9 (4) 63,3 21,7 (5) 48,3 (4,5) 4,4 (4) 10(8-12) (4,5) 10 (1,2) 0 (1,2,3) 53,3 23,3 (5) 10 (1,2,3) 0 (1,2,3) 4(3-6,5) (1,2,3) 12 (1) 8 52 4 (1,2,3,4) 8 (1,2,3) 4 6(5-7,3) (1,2,3) 2(1-3,3) 2(1,5-3,5) (4,5) 3(1-6,3) (4,5) 0 (2,3) 0 (2,3) 20(17-22,3) 20(18-23) (4,5) 18(17-20) (4,5) 20(18,3-23) (4,5) 18(17-20) (4,5) 17,5(1519,5) (2,3) 15(12,817,3) (2,3) 17,5(1621,3) (2,3) 15(12,817,3) (2,3) 18(16-19) Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 В этом же возрасте чаще отмечена сыпь (пятнисто-папулезного характера). Кроме того, у детей до 14 лет, чаще, чем в старшем возрасте, регистрировали 104 различные кишечные дисфункции (боль в животе, нарушение стула). В целом, по результатам исследования, тяжелое состояние в ходе заболевания чаще отмечено у детей до 14 лет (максимальная длительность его 3 (1-6,3) дня отмечена у детей 8-14 лет). Длительность состояния средней тяжести также у детей до 14 лет в среднем превышала показатели у подростков и взрослых. В итоге, продолжительность заболевания и период госпитализации у детей до 14 лет значимо превышали показатели у пациентов старшего возраста. 4.2. Иммунологические особенности энтеровирусной инфекции с серозным менингитом в возрастных группах: 1-3 лет, 4-7 лет, 15-18 лет, 19-45 лет Иммунологическая характеристика энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у детей 1-3 лет ЭВИ с СМ у детей 1-3 лет сопровождалась относительной лимфопенией, сохраняющейся на протяжении 1-10 суток от начала заболевания (таблица 4.2). Абсолютную лимфопению наблюдали в течение первых 10 дней от начала заболевания, далее содержание лимфоцитов постепенно нормализовалось, достигая к 11-20 суткам контрольных значений. Относительное и абсолютное содержание моноцитов в динамике острого периода заболевания значимо не изменялось по отношению к показателям группы сравнения. Относительное содержание гранулоцитов было повышено в 1-10 сутки от начала заболевания, далее значимо снижалось, при этом абсолютное количество гранулоцитов не превышало показателей, наблюдаемых в группе практически здоровых детей. Тесты, характеризующие функциональное состояние нейтрофильных гранулоцитов, свидетельствуют о повышении активности НАДФ-Н2-оксидазной системы нейтрофилов в спонтанном и стимулированном НСТ-тесте в 1-10 сутки от начала заболевания и повышении поглотительной активности гранулоцитов, наблюдаемом в 11-20 сутки острого периода ЭВИ с СМ (таблица 4.3). 105 Таблица 4.2 - Показатели гемо- и иммуноцитограммы при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у детей 1-3 лет в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Показатель Периоды обследования от начала заболевания 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=58) 2 (n=58) 3(n=30) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% Лейкоциты, 109/л 8,40 6,45 10,50 8,00 6,82 9,00 8,90 7,95 10,72 Гранулоциты, % Гранулоциты, 109/л Моноциты, % 45,70 (2,3) 37,00 55,10 40,70 (1) 33,72 45,57 36,20 31,60 43,85 3,39 (2) 2,66 5,11 3,19 (1) 2,46 3,94 3,40 2,71 4,12 6,10 5,05 8,10 6,75 5,12 8,97 6,65 5,40 7,77 Моноциты, 109/л 0,51 0,42 0,66 0,54 0,41 0,64 0,59 0,44 0,76 47,10 (2,3) 38,80 57,20 50,95 (1) 47,25 58,07 55,50 47,85 61,30 3,91 (3) 3,00 4,83 4,17 3,32 5,05 5,24 3,86 5,92 64,20 (2,3) 60,25 69,05 68,85 (1) 64,87 75,72 70,80 66,40 75,40 2,59 (3) 1,81 3,12 2,86 (3) 2,33 3,39 3,62 2,75 4,24 20,50 17,53 24,18 17,05 14,20 21,62 16,90 14,90 18,70 0,82 0,57 1,03 0,71 0,53 0,93 0,79 0,64 1,06 35,70 (3) 31,80 39,60 38,45 (3) 32,87 41,27 40,70 36,30 46,70 1,44 (3) 0,99 1,65 1,55 (3) 1,19 1,88 1,97 1,75 2,52 23,90 (2) 20,15 27,20 26,05 (1,3) 22,52 29,75 20,70 17,50 26,40 0,88 (2) 0,67 1,18 1,01 (1) 0,83 1,30 1,09 0,68 1,31 11,40 (3) 7,29 15,30 9,95 6,28 15,22 7,42 4,61 10,50 0,41 0,24 0,58 0,42 0,22 0,59 0,35 0,21 0,58 0,80 0,47 1,64 0,77 0,50 0,96 0,53 0,25 0,92 0,027 0,017 0,065 0,034 0,017 0,042 0,029 0,013 0,035 0,94 (3) 0,34 1,79 0,47 0,24 0,92 0,31 0,21 0,59 0,030 (3) 0,010 0,066 0,022 0,079 0,043 0,014 0,010 0,022 Лимфоциты, % Лимфоциты, 109/л Т-лимфоциты (CD3+), % Т-лимфоциты (CD3+), 109/л В-лимфоциты (CD19+), % В-лимфоциты (CD19+), 109/л Т-хелперы (CD3+CD4+), % Т-хелперы (CD3+CD4+), 109/л Т-цитотокс. (CD3+CD8+), % Т-цитотокс. (CD3+CD8+), 109/л NK-клетки (CD3CD16+56+), % NK-клетки (CD3CD16+56+), 109/л CD3+HLA-DR+, % CD3+HLA-DR+, 109/л CD3+CD16+CD56+, % CD3+CD16+CD56+, 109/л Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 В этот же период в периферической крови значимо увеличивалась концентрация IL-18 (таблица 4.5). Показатели общей бактерицидной активность лейкоцитов, а также поглотительной активности моноцитов не претерпевали каких-либо значимых изменений (таблица 4.3). 106 Таблица 4.3 - Показатели, характеризующие фагоцитарную активность нейтрофилов и моноцитов, при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у детей 1-3 лет в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Показатель Периоды обследования от начала заболевания Фагоцитарная активность нейтрофилов, % Фагоцитарная активность нейтрофилов, 109/л Фагоцитарная активность моноцитов, % Фагоцитарная активность моноцитов, 109/л Бактерицидная активность лейкоцитов НСТ-тест спонтанный, % НСТ-тест стимулированный, % 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=58) 2 (n=58) 3 (n=30) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% 91,60 86,58 94,58 92,59 (3) 90,87 95,90 89,35 84,87 92,40 2,99 2,49 4,61 2,94 2,46 3,70 3,08 2,47 3,73 83,10 75,68 89,63 86,80 77,30 90,42 80,15 77,80 86,70 0,44 0,30 0,54 0,46 0,34 0,52 0,46 0,33 0,62 32,25 27,18 39,33 35,50 23,67 43,50 30,10 22,15 33,95 11,00 (2,3) 6,00 18,00 6,50 (1) 3,00 11,25 7,00 4,00 8,50 19,00 (2,3) 12,00 28,50 11,50 (1) 6,75 19,25 8,50 5,75 12,50 Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 Помимо снижения общего содержания лимфоцитов при ЭВИ с СМ у детей 1-3 лет происходило лимфоцитарных перераспределение субпопуляций: относительного снижалось содержания количество основных Т-лимфоцитов (относительную Т-лимфопению наблюдали на протяжении 10 суток от начала заболевания, абсолютную – в течение первых 20 дней). Снижалось относительное и абсолютное содержание Т-хелперных лимфоцитов. Относительное содержание цитотоксических Т-лимфоцитов увеличивалось на 11-20 сутки от начала заболевания, при этом абсолютное содержание этой субпопуляции значимо не изменялось по отношению к группе сравнения. В целом значение иммунорегуляторного индекса (Th/Tc) в остром периоде ЭВИ с СМ у детей 1-3 лет оставалось сниженным на протяжении, по крайней мере, 20 суток от начала заболевания. Относительное содержание NK клеток увеличивалось в 1-10 сутки от начала заболевания, далее возвращаясь относительное к нормальным и значениям. абсолютное экспрессирующих CD16+СD56+. В содержание этот же период субпопуляции увеличивалось Т-лимфоцитов, 107 Таблица 4.4 - Содержание Т-эффекторов при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у детей 1-3 лет в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Показатель Периоды обследования от начала заболевания 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=58) 2 (n=58) 3 (n=30) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% СD3+IFN-+ , % 10,25 (3) 6,58 14,95 12,40 (3) 8,25 15,60 4,00 2,80 6,50 СD3+IFN-+, 106/л 396,17 (3) 222,33 600,46 460,05 (3) 285,69 677,41 204,65 126,68 312,76 СD3+TNF-+ , % 16,00 10,73 20,25 18,30 14,90 23,05 15,45 6,65 23,47 СD3+TNF-+ , 106/л 564,20 384,95 816,34 688,00 602,32 943,36 584,65 335,43 865,48 СD3+IL-2+ , % 6,80 (3) 4,28 11,30 10,10 6,65 13,35 9,10 5,37 18,62 259,30 (3) 190,14 430,58 409,46 277,03 603,78 419,18 238,04 848,49 СD3+IL-4+, % 1,10 (3) 0,40 1,83 1,10 (3) 0,60 2,40 0,30 0,20 0,42 СD3+IL-4+ , 106/л 37,18 (3) 15,92 92,59 37,41 (3) 20,60 95,45 11,54 8,23 16,31 СD3+IL-17А+, % 0,10(3) 0,10 0,15 0,08(3) 0,08 0,09 0,30 0,20 0,80 СD3+IL-17A+ , 106/л 4,84(3) 4,22 6,04 2,78(3) 2,54 3,92 14,17 9,60 35,53 СD3+CD4+IFN-+ , % 3,95 (3) 2,10 5,96 4,43 (3) 3,23 6,42 2,55 1,33 3,39 СD3+CD4+IFN-+, 106/л 162,35 86,99 237,29 185,35 (3) 120,33 258,78 108,08 65,91 153,05 СD3+CD4+TNF-+ , % 9,85 6,66 14,00 12,86 10,76 15,82 11,39 6,16 19,11 СD3 CD4 TNF- , 106/л 363,71 (3) 236,70 538,84 529,31 441,76 680,00 479,34 290,05 797,46 СD3+CD4+IL-2+ , % 5,81 (3) 3,72 9,85 8,61 5,36 11,33 8,35 4,62 16,06 239,01 (3) 165,67 330,57 348,94 238,65 460,78 370,25 196,81 648,76 0,93 (3) 0,31 1,49 0,73 (3) 0,40 1,61 0,07 0,03 0,14 СD3 CD4 IL-4 , 10 /л 31,08 (3) 12,30 71,53 27,32 (3) 13,73 63,99 3,82 1,00 5,83 СD3+CD4+IL-17А+, % 0,00 0,00 0,03 0,00 0,00 0,04 0,13 0,06 0,19 0,00 (3) 0,00 0,65 0,00 (3) 0,00 1,39 4,26 1,52 11,02 4,81 (3) 2,92 7,21 6,39 (3) 4,25 8,27 1,50 0,93 2,38 СD3 CD8 IFN- , 10 /л 199,37 (3) 105,20 283,48 250,36 (3) 136,88 371,32 59,06 36,91 116,59 СD3 CD8 TNF- , % 3,62 (3) 2,17 5,58 3,95 (3) 3,08 5,59 1,10 0,74 2,30 СD3 CD8 TNF- , 106/л 138,59 85,64 210,94 159,23 (3) 123,53 225,27 47,26 30,54 115,27 СD3+CD8+IL-2+ , % 0,36 (3) 0,23 0,66 0,54 0,34 0,83 0,70 0,35 1,11 СD3+CD8+IL-2+,106/л 14,69 (3) 9,82 21,68 18,23 13,61 35,02 30,42 13,33 49,31 0,24 0,09 0,40 0,29 0,10 0,69 0,07 0,00 0,09 СD3+CD8+IL-4+ , 106/л 7,59 (2) 3,03 20,18 10,85 (2,3) 4,41 27,68 2,76 0,00 4,26 СD3+CD8+IL-17А+, % 0,13 0,09 0,17 0,08 0,04 0,21 0,07 0,06 0,13 СD3+CD8+IL-17A+ , 106/л 6,29 3,79 6,94 2,30 1,15 3,68 3,75 2,18 7,54 СD3+IL-2+,106/л + + + СD3 CD4 IL-2 ,10 /л + + + 6 СD3+CD4+IL-4+, % + + + 6 СD3 CD4 IL-17A , 106/л + + + СD3+CD8+IFN-+ , % + + + + + + + 6 + + СD3+CD8+IL-4+, % Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 Относительное и абсолютное содержание В-лимфоцитов у детей 1-3 лет в остром периоде ЭВИ с СМ значимо не изменялось. Наблюдали повышение общего уровня 108 иммуноглобулинов классов IgG и IgE в 1-10 сутки от начала заболевания (таблица 4.5.). Содержание антител класса IgM и ЦИК было повышено по отношению к группе сравнения в течение всего периода наблюдения. ЭВИ с СМ у детей 1-3 лет характеризовалась значимым повышением относительного и абсолютного содержания IFN--положительных СD4+ Т- лимфоцитов (Th1), при этом содержание Т-хелперов, экспрессирующих IL-2 и TNFα, в 1-10 сутки от начала заболевания снижалось, нормализуясь на 11-20 сутки. Таблица 4.5 - Содержание гуморальных факторов иммунитета в периферической крови энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у детей 1-3 лет в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Показатель Периоды обследования от начала заболевания 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=58) 2 (n=58) 3 (n=30) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% IgA, г/л 0,50 0,40 0,90 0,50 0,30 0,90 0,40 0,40 0,70 IgM, г/л 1,60 (3) 1,10 2,00 1,50 (3) 1,20 1,90 1,20 0,92 1,30 IgG, г/л 8,10 (3) 6,40 10,50 7,40 6,00 8,50 6,60 5,72 8,07 IgE, МЕ/мл 135,05 (3) 36,10 217,33 61,60 21,95 151,15 27,75 8,62 41,65 ЦИК, ед. 68,00 (3) 45,50 96,00 40,00 (3) 26,00 67,75 16,00 11,50 27,50 TNF-, пг/мл 0,00 0,00 61,43 2,10 0,00 25,49 4,47 2,76 5,88 IFN-, пг/мл 3,39 0,74 14,83 13,86 (3) 3,15 17,15 0,00 0,00 3,26 IL-1, пг/мл 4,64 0,00 10,92 5,82 0,00 12,46 3,29 0,00 4,46 IL-6, пг/мл 4,89 3,63 5,67 3,71 2,81 4,01 3,34 2,55 5,01 IL-8, пг/мл 5,44 3,88 7,36 3,48 1,81 7,74 5,67 2,95 9,74 IL-4, пг/мл 1,60 0,00 5,53 4,16 0,19 6,01 3,05 0,64 3,92 IL-2, пг/мл 6,00 5,53 6,40 7,52 7,03 8,15 7,29 6,43 9,69 IL-17, пг/мл 1,08 1,04 1,13 1,22 1,04 6,69 13,2 5,12 16,4 IL-18, пг/мл 262,80 260,00 264,52 432,25 (3) 412,42 512,07 119,70 77,92 173,97 IFN-, пг/мл 5,42 1,01 10,97 1,26 0,83 9,73 0,00 0,00 4,90 Примечение: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 Количество Th2 лимфоцитов также увеличивалось, оставаясь повышенным на протяжении всего срока наблюдения. Соотношение Th1/Th2 лимфоцитов было снижено по отношению к показателю в группе сравнения в течение острого периода ЭВИ с СМ. Еще более выраженным было увеличение численности Tс1 лимфоцитов. Максимальное содержание Tc1 клеток наблюдали на 11-20 сутки от начала 109 заболевания, чему соответствовало значимое увеличение концентрации IFN- в периферической крови (таблица 4.4). В отличие от CD3+CD4+TNF-α+ лимфоцитов содержание CD3+CD8+TNF-α+ лимфоцитов не снижалось, а увеличивалось по отношению к группе сравнения. В то же время относительное и абсолютное содержание CD3+CD8+IL-2+ лимфоцитов в 1-10 сутки от начала заболевания у детей 1-3 лет было также снижено по сравнению с нормальными значениями. Количество Tc2 лимфоцитов увеличивалось на 11-20 сутки от начала заболевания. Содержание Tnc17 лимфоцитов значимо не изменялось, в то время как количество Th17 лимфоцитов было снижено на протяжении всего периода обследования. В целом, в остром периоде ЭВИ с СМ у детей 1-3 лет в периферической крови происходило значимое увеличение относительного и абсолютного содержания Тлимфоцитов, экспрессирующих IFN- и IL-4. Относительное и абсолютное содержание TNF-α+ Т-лимфоцитов не изменялось, в то время как численность IL-2+Тлимфоцитов снижалась в 1-10 сутки от начала заболевания. Относительное и абсолютное содержание IL-17А+Т-лимфоцитов также было снижено на протяжении всго периода обследования. Для оценки взаимосвязи иммунологических, клинических показателей и клеточного состава ЦСЖ с содержанием эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов рассчитаны парные коэффициенты корреляции Спирмена (Spearman, r). В первую декаду заболевания содержание IFN-+ и TNF-+Т-хелперов коррелировало с абсолютным содержанием в периферической крови моноцитов и их поглотительной активностью, содержанием ЦИК, уровнем других субпопуляций Тэффекторов. Отрицательные корреляционные связи установлены между уровнем Th1 лимфоцитов и длительностью регистрации рвоты и кожной сыпи, степенью выраженности ригидности затылочных мышц (ЗМ). Содержание Тh2 клеток коррелировало с абсолютным содержанием в периферической крови моноцитов и их поглотительной активностью, содержанием других субпопуляций Т-эффекторов. Положительная корреляционная связь установлена между уровнем Th2 лимфоцитов и длительностью регистрации гиперемии зева (таблица 4.6). 110 Таблица 4.6 - Взаимосвязь иммунологических и клинических показателей с содержанием эффекторных субпопуляций CD4+ Т-лимфоцитов в 1-10 сутки заболевания энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом у детей 1-3 лет, (Spearman, r), n=58 Показатели Моноциты, 109/л Фагоцитарная активность моноцитов, 109/л ЦИК, ед. СD3+CD4+IFN-+, 106/л СD3+CD4+TNF-+ , 106/л СD3+CD4+IL-4+ , 106/л СD3+CD8+IFN-+, 106/л СD3+CD8+TNF-+ , 106/л СD3+CD8+IL-4+ , 106/л Рвота, длительность, сутки Ригидность ЗМ, см Кожная сыпь, длительность, сутки Гиперемия зева, длительность, сутки IFN-+, 106/л p 0,3954 p Th1/Th2 p 0,0049 IL-4+, 106/л 0,3947 0,0042 -0,1435 0,3150 0,5060 0,0002 0,3889 0,0053 -0,0647 0,6554 0,0296 0,0020 0,9887 0,1890 0,1841 -0,0577 0,6843 - - 0,6495 0,0000 0,5619 0,0000 0,0683 0,6338 0,6495 0,0000 - - 0,3162 0,0238 0,1205 0,3998 0,5619 0,0000 0,3162 0,0238 - - -0,7431 0,0000 0,8924 0,0000 0,6748 0,0000 0,5243 0,0001 0,0354 0,8053 0,6872 0,0000 0,8286 0,0000 0,3310 0,0177 0,1308 0,3604 0,6095 0,0000 0,2530 0,0732 0,8777 0,0000 -0,5790 0,0000 -0,3459 0,0418 -0,3389 0,0464 -0,1888 0,2775 -0,0066 0,9694 -0,1806 0,3395 -0,4157 0,0223 -0,1673 0,3769 -0,0323 0,8630 -0,2854 0,1018 -0,4503 0,0075 -0,2341 0,1827 0,0491 0,7794 0,2608 0,1303 0,0704 0,6876 0,4421 0,0078 -0,2199 0,1976 0,0041 TNF-+, 106/л 0,3879 0,4880 0,0003 0,3048 p В первую декаду заболевания содержание IFN-+ и TNF-+Т-цитотоксических лимфоцитов коррелировало с абсолютным содержанием в периферической крови моноцитов и их поглотительной активностью, содержанием NK клеток, других субпопуляций Т-эффекторов (таблица 4.7). Отрицательная корреляционная связь установлена между уровнем Tс1 лимфоцитов и длительностью регистрации симптомов Брудзинского. Содержание Тс2 клеток коррелировало с абсолютным содержанием в периферической крови моноцитов и их поглотительной активностью, уровнем циркулирующих иммунных комплексов, содержанием других субпопуляций Т-эффекторов. Положительная корреляционная связь установлена между уровнем Tс2 лимфоцитов и длительностью регистрации гиперемии зева и длительностью госпитализации. 111 Таблица 4.7 - Взаимосвязь иммунологических и клинических показателей с содержанием эффекторных субпопуляций CD8+ Т-лимфоцитов в 1-10 сутки заболевания энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом у детей 1-3 лет, (Spearman, r), n=58 Показатели Моноциты, 109/л NK-клетки (CD3CD16+56+), 109/л ЦИК, ед. Фагоцитарная активность моноцитов, 109/л СD3+CD4+IFN-+, 106/л СD3+CD4+TNF-+ , 106/л СD3+CD4+IL-4+ , 106/л СD3+CD8+IFN-+, 106/л СD3+CD8+TNF-+ , 106/л СD3+CD8+IL-4+ , 106/л Длительность госпитализации, сутки С.Брудзинского, длительность, сутки Гиперемия зева, длительность, сутки p Tс1/Tс2 p 0,0118 IL-4+, 106/л 0,4477 0,0010 -0,1995 0,1789 0,2905 0,0386 0,0004 0,9980 0,1852 0,2125 0,1690 0,0471 0,7429 0,3401 0,0146 -0,2373 0,1043 0,5135 0,0001 0,5173 0,0001 0,4576 0,0008 -0,1208 0,4185 0,8924 0,0000 0,6872 0,0000 0,6095 0,0000 0,1040 0,4868 0,6748 0,0000 0,8286 0,0000 0,2530 0,0732 0,2161 0,1446 0,5243 0,0001 0,3310 0,0177 0,8777 0,0000 -0,6031 0,0000 - - 0,8393 0,0000 0,5406 0,0000 0,1427 0,3387 0,8393 0,0000 - - 0,3891 0,0048 0,2190 0,1391 0,5406 0,0000 0,3891 0,0048 - - -0,6593 0,0000 0,1753 0,3540 0,1578 0,4050 0,3819 0,0373 -0,1745 0,3745 -0,3847 0,0358 -0,2440 0,1939 -0,2849 0,1270 0,1900 0,3329 0,1674 0,3364 0,0715 0,6833 0,4799 0,0035 -0,1165 0,5186 IFN-+, 106/л 0,3904 p 0,0046 TNF-+, 106/л 0,3502 0,2722 0,0533 0,1956 p Во вторую декаду заболевания содержание IFN-+ и TNF-+Т-хелперов коррелировало с абсолютным содержанием в периферической крови В-лимфоцитов, цитотоксических Т-лимфоцитов, активированных Т-лимфоцитов, других субпопуляций Т-эффекторов (таблица 4.8). Отрицательные корреляционные связи установлены между уровнем TNF-+ Tхелперов и содержанием общих иммуноглобулинов классов IgA и IgG, длительностью лихорадочного периода и регистации гиперемии зева; между уровнем Th1 клеток и длительностью лихорадки, а также регистрации ригидности затылочных мышц. Положительная корреляционная связь установлена между уровнем Th2 лимфоцитов и длительностью течения заболевания. Соотношение Th1/Th2 связано с длительностью заболевания и продолжительностью регистрации менингеальных 112 симптомов (с. Брудзинского) отрицательными корреляционными связями (таблица 4.8). Таблица 4.8 - Взаимосвязь иммунологических и клинических показателей с содержанием эффекторных субпопуляций CD4+ Т-лимфоцитов в 11-20 сутки заболевания энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом у детей 1-3 лет, (Spearman, r), n=58 Показатели В-лимфоциты (CD19+), 109/л Т-цитотокс. (CD3+CD8+), 109/л CD3+HLA-DR+, 109/л CD3+CD16+CD56+, 109/л IgA, г/л IgG, г/л СD3+CD4+IFN-+, 106/л СD3+CD4+TNF-+ , 106/л СD3+CD4+IL-4+ , 106/л СD3+CD8+IFN-+, 106/л СD3+CD8+TNF-+ , 106/л СD3+CD8+IL-4+ , 106/л Длительность заболевания, сутки Длительность лихорадки, сутки Ригидность ЗМ, длительность, сутки С.Брудзинского, длительность, сутки Гиперемия зева, длительность, сутки IFN-+, 106/л p TNF-+, 106/л p IL-4+, 106/л p Th1/Th2 p 0,4004 0,0141 0,3376 0,0410 0,1712 0,3111 -0,0734 0,6707 0,4929 0,0019 0,3300 0,0461 0,0107 0,9500 0,2615 0,1234 0,5059 0,0031 0,2966 0,0993 -0,0843 0,6464 0,3464 0,0563 0,6419 0,0000 0,1334 0,4520 0,2367 0,1778 -0,0144 0,9367 0,0416 -0,3217 0,8071 0,0522 -0,3406 -0,4028 0,0391 0,0134 0,0860 0,0323 0,6128 0,8497 0,0014 -0,1503 0,9931 0,3612 - - 0,5064 0,0014 0,3378 0,0409 0,1017 0,5552 0,5064 0,0014 - - -0,0209 0,9025 0,2301 0,1770 0,3378 0,0409 -0,0209 0,9025 - - -0,8129 0,0000 0,8025 0,0000 0,3817 0,0197 0,3196 0,0538 -0,0391 0,8208 0,5133 0,0012 0,3720 0,0234 0,2124 0,2069 -0,1292 0,4526 0,3297 0,0463 -0,1258 0,4582 0,9579 0,0000 -0,7673 0,0000 0,1238 0,5556 0,2914 0,1576 0,4497 0,0241 -0,4491 0,0188 -0,4286 0,0257 -0,4971 0,0083 -0,2039 0,3077 -0,0415 0,8309 -0,3914 0,0435 -0,3499 0,0736 -0,2180 0,2747 -0,2225 0,2460 -0,2552 0,1990 -0,1923 0,3365 0,2375 0,2330 -0,5241 0,0035 0,1171 0,5608 -0,3959 0,0410 0,1008 0,6168 -0,0828 0,6694 Во вторую декаду заболевания содержание IFN-+ и TNF-+Т-цитотоксических лимфоцитов коррелировало с абсолютным содержанием в периферической крови активных моноцитов и активированных Т-лимфоцитов, других субпопуляций Тэффекторов (таблица 4.9). Отрицательная корреляционная связь установлена между уровнем Tс1 лимфоцитов и длительностью регистрации ригидности мышц шеи. Содержание Тс2 клеток коррелировало с длительностью течения заболевания. Соотношение Tс1/Tс2 113 связано с длительностью заболевания и продолжительностью регистрации симптомов Брудзинского отрицательными корреляционными связями (таблица 4.9). Таблица 4.9 - Взаимосвязь иммунологических и клинических показателей с содержанием эффекторных субпопуляций CD8+ Т-лимфоцитов в 11-20 сутки заболевания энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом у детей 1-3 лет, (Spearman, r), n=58 Показатели CD3+HLA-DR+, 109/л Фагоцитарная активность моноцитов, 109/л CD3+CD16+CD56+, 109/л СD3+CD4+IFN-+, 106/л СD3+CD4+TNF-+ , 106/л СD3+CD4+IL-4+ , 106/л СD3+CD8+IFN-+, 106/л СD3+CD8+TNF-+ , 106/л СD3+CD8+IL-4+ , 106/л Длительность заболевания, сутки Ригидность ЗМ, длительность, сутки С.Брудзинского, длительность, сутки p Tс1/Tс2 p 0,5531 IL-4+, 106/л -0,1162 0,5265 0,2685 0,1514 0,2008 0,2334 0,1952 0,2468 -0,1675 0,3361 0,0009 0,3378 0,0507 0,2679 0,1256 -0,0568 0,7574 0,8025 0,0000 0,5133 0,0012 0,3297 0,0463 0,0190 0,9135 0,3817 0,0197 0,3720 0,0234 -0,1258 0,4582 0,2087 0,2290 0,3196 0,0538 0,2124 0,2069 0,9579 0,0000 -0,8050 0,0000 - - 0,8286 0,0000 0,3190 0,0543 0,1672 0,3370 0,8286 0,0000 - - 0,2159 0,1994 0,1779 0,3067 0,3190 0,0543 0,2159 0,1994 - - -0,8431 0,0000 0,1242 0,5543 0,3585 0,0784 0,4202 0,0365 -0,4406 0,0243 -0,4008 0,0383 -0,2481 0,2120 -0,1190 0,5542 -0,2284 0,2424 -0,2511 0,2065 -0,0565 0,7794 0,2981 0,1310 -0,5060 0,0060 IFN-+, 106/л 0,3948 p 0,0253 TNF-+, 106/л 0,1089 0,3326 0,0443 0,5438 p Иммунологическая характеристика энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у детей 4-7 лет У детей 4-7 лет в остром периоде ЭВИ с СМ наблюдали транзиторное снижение абсолютного содержания лимфоцитов в 1-10 сутки от начала заболевания. Относительное и абсолютное содержание моноцитов и гранулоцитов в динамике острого периода заболевания значимо не изменялось по отношению к показателям группы сравнения (таблица 4.10). Показатели поглотительной активности моноцитов и нейтрофилов, а также тесты, характеризующие состояние НАДФ-Н2-оксидазной системы нейтрофилов, значимо не отличались от параметров группы сравнения. 114 Таблица 4.10 - Показатели гемо- и иммуноцитограммы при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у детей 4-7 лет в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Показатель Периоды обследования от начала заболевания 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=107) 2 (n=107) 3 (n=30) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% Лейкоциты, 109/л 6,90 5,50 8,40 6,90 5,90 8,50 7,40 5,67 8,20 Гранулоциты, % 55,05 (2) 45,95 63,47 48,60 (1) 40,70 56,20 51,30 45,70 56,60 3,46 2,64 5,09 3,35 2,57 4,14 3,75 3,07 4,59 6,15 (2) 4,92 7,97 7,00 (1) 5,40 8,80 6,40 4,97 7,30 0,43 0,31 0,61 0,51 0,34 0,66 0,46 0,32 0,61 Лимфоциты, % 38,60 (2) 29,90 46,70 44,00 (1) 37,20 49,70 41,95 37,60 48,17 Лимфоциты, 109/л Т-лимфоциты (CD3+), % Т-лимфоциты (CD3+), 109/л В-лимфоциты (CD19+), % В-лимфоциты (CD19+), 109/л Т-хелперы (CD3+CD4+), % Т-хелперы (CD3+CD4+), 109/л Т-цитотокс. (CD3+CD8+), % Т-цитотокс. (CD3+CD8+), 109/л 2,56 (3) 1,99 3,20 2,97 2,47 3,58 3,11 2,19 3,45 64,5 (2,3) 59,30 70,30 70,20 (1) 65,00 74,90 70,75 66,72 76,42 1,66 (2,3) 1,28 2,07 2,05 (1) 1,74 2,52 2,09 1,54 2,56 18,0 (2,3) 14,90 21,00 15,50 (1) 12,50 18,50 15,20 13,20 17,00 0,45 0,34 0,61 0,46 0,34 0,58 0,47 0,30 0,56 32,8 (2,3) 28,70 37,50 37,00 (1) 32,50 43,50 41,50 33,47 45,35 0,82 (2,3) 0,66 1,09 1,07 (1) 0,89 1,38 1,13 0,85 1,49 25,00 (2) 21,60 28,90 26,20 (1) 22,70 29,40 24,60 20,70 26,15 0,64 0,47 0,86 0,81 0,59 0,99 0,69 0,51 0,92 13,80 9,67 18,30 11,20 (1) 6,36 16,00 8,75 5,47 12,85 0,33 0,21 0,49 0,33 0,19 0,49 0,28 0,15 0,49 1,16 0,58 2,15 0,96 0,49 1,65 0,97 0,62 1,40 0,027 0,014 0,051 0,029 0,014 0,045 0,029 0,014 0,039 0,93 0,47 1,98 0,96 0,52 1,70 0,81 0,26 1,33 0,022 0,012 0,053 0,027 0,015 0,048 0,018 0,008 0,040 Гранулоциты, 109/л Моноциты, % Моноциты, 109/л NK-клетки (CD3CD16+56+), % - NK-клетки (CD3 CD16+56+), 109/л CD3+HLA-DR+, % CD3+HLA-DR+, 109/л CD3+CD16+CD56+, % CD3+CD16+CD56+, 109/л (2,3) Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 Бактерицидная активность лейкоцитов оставалась сниженной на протяжении всего периода наблюдения (таблица 4.11). В остром периоде ЭВИ с СМ у детей 4-7 лет происходило лимфоцитарных перераспределение субпопуляций: относительного снижалось содержания количество основных Т-лимфоцитов (относительную и абсолютную Т-лимфопению наблюдали на протяжении 10 суток от 115 начала заболевания). Снижалось относительное и абсолютное содержание Тхелперных лимфоцитов (нормализовалось на 11-20 сутки от начала заболевания). Таблица 4.11 - Показатели, характеризующие фагоцитарную активность нейтрофилов и моноцитов, при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у детей 4-7 лет в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Показатель Фагоцитарная активность нейтрофилов, % Фагоцитарная активность нейтрофилов, 109/л Фагоцитарная активность моноцитов, % Фагоцитарная активность моноцитов, 109/л Бактерицидная активность лейкоцитов НСТ-тест спонтанный, % НСТ-тест стимулированный, % Периоды обследования от начала заболевания 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=107) 2 (n=107) 3 (n=30) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% 91,95 87,62 95,50 92,70 87,75 95,40 91,70 87,20 93,70 3,18 2,45 4,54 3,08 2,31 3,78 3,24 2,88 4,04 84,35 75,30 89,62 81,90 73,55 88,05 79,40 62,50 88,40 0,35 0,26 0,45 0,41 0,28 0,54 0,32 0,26 0,45 32,90 (3) 24,97 39,70 32,00 (3) 24,70 41,50 45,20 35,90 52,50 9,00 5,00 16,00 7,00 4,00 13,00 5,00 3,00 9,75 17,00 10,00 25,00 15,00 7,00 23,50 10,00 5,00 15,00 Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 Значение иммунорегуляторного индекса (Th/Tc) в остром периоде ЭВИ с СМ у детей 4-7 лет оставалось сниженным на протяжении первой декады острого периода заболевания. Относительное содержание NK увеличивалось в 1-10 сутки от начала заболевания, далее возвращаясь к нормальным значениям. Относительное и абсолютное содержание субпопуляции Т-лимфоцитов, экспрессирующих CD16+СD56+, значимо не изменялось (таблица 4.10). У детей 4-7 лет в остром периоде ЭВИ с СМ увеличивалось относительное содержание В-лимфоцитов в 1-10 сутки от начала заболевания. Абсолютное количество этих клеток не изменялось по отношению к группе сравнения. В этот же период наблюдали повышение общего уровня иммуноглобулинов классов IgG и IgE. Содержание ЦИК было повышено по отношению к группе сравнения в течение всего периода наблюдения (таблица 4.13). 116 Таблица 4.12 - Содержание Т-эффекторов при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у детей 4-7 лет в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Показатель Периоды обследования от начала заболевания 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=107) 2 (n=107) 3 (n=30) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% СD3+IFN-+ , % 14,90 (3) 10,40 19,82 13,10 (3) 8,30 18,72 6,00 4,20 8,50 СD3+IFN-+, 106/л 327,13 (3) 236,63 534,26 392,77 (3) 249,96 588,57 150,56 104,64 249,74 СD3+TNF-+ , % 24,40 (2) 19,20 29,62 20,75 (1) 14,10 27,00 20,30 14,55 29,55 573,09 427,06 765,02 608,09 415,25 854,46 679,61 346,00 904,17 СD3+IL-2+ , % 10,60 (3) 6,50 14,67 8,35 (3) 5,02 13,00 13,70 7,60 21,90 СD3+IL-2+,106/л 231,69 (3) 139,81 373,59 257,71 (3) 145,36 379,96 366,68 201,48 656,13 СD3+IL-4+, % 1,30 (3) 0,60 2,82 1,60 (3) 0,50 2,70 0,30 0,10 0,40 СD3+IL-4+ , 106/л 38,26 (3) 13,48 72,43 46,47 (3) 18,59 80,89 6,39 3,21 14,11 СD3+TNF-+ , 106/л 0,10 0,05 0,40 0,10 (3) 0,00 0,15 0,40 0,10 0,70 3,34 (3) 1,57 8,11 2,22 (3) 0,00 4,80 11,01 3,13 20,62 6,98 (3) 5,10 9,83 6,49 (3) 4,03 9,38 3,80 1,96 4,50 СD3 CD4 IFN- , 10 /л 157,28 (3) 110,53 262,96 196,03 (3) 123,08 281,21 82,16 53,57 143,54 СD3 CD4 TNF- , % 17,92 13,62 22,50 15,47 10,51 21,05 16,07 12,20 25,26 СD3+CD4+TNF-+ , 106/л 430,96 293,77 566,23 453,89 311,88 639,72 484,91 307,38 787,21 СD3+CD4+IL-2+ , % 9,17 (3) 4,99 12,65 7,23 (3) 4,27 11,47 13,03 6,64 18,79 197,05 (3) 117,33 321,96 227,34 (3) 123,67 326,52 318,36 183,18 522,62 СD3+CD4+IL-4+, % 0,75 (3) 0,34 1,61 0,74 (3) 0,23 1,29 0,07 0,06 0,12 СD3+CD4+IL-4+ , 106/л 21,27 (3) 8,51 40,66 22,74 (3) 8,24 37,68 2,22 1,12 3,59 СD3+CD4+IL-17А+, % 0,00(3) 0,00 0,05 0,00(3) 0,00 0,00 0,08 0,06 0,25 СD3+CD4+IL-17A+ , 106/л 0,00 (3) 0,00 1,36 0,00 (3) 0,00 0,00 2,75 0,84 5,59 СD3+CD8+IFN-+ , % 6,68 (3) 4,57 9,02 6,67 (3) 3,93 8,95 2,30 1,50 2,90 СD3+CD8+IFN-+, 106/л 146,24 (3) 103,34 233,38 192,33 (3) 116,29 297,51 55,84 43,74 85,75 СD3+CD8+TNF-+ , % 5,73 (2,3) 4,11 7,49 4,53 (1) 2,80 6,19 2,77 1,89 3,94 СD3 CD8 TNF- , 106/л 138,63 85,01 195,26 129,56 88,74 190,49 76,32 44,19 119,88 СD3+CD8+IL-2+ , % 1,17 (2) 0,65 1,85 0,79 (1) 0,51 1,24 0,82 0,51 1,13 26,47 16,79 44,34 23,53 13,13 38,89 23,22 12,01 37,48 СD3+CD8+IL-4+, % 0,50 (3) 0,23 1,08 0,71 (3) 0,22 1,21 0,04 0,00 0,07 СD3+CD8+IL-4+ , 106/л 14,75 (3) 6,04 27,21 20,78 (3) 7,02 36,17 1,12 0,00 2,56 СD3+CD8+IL-17А+, % 0,07 0,00 0,23 0,08 0,00 0,26 0,08 0,03 0,15 СD3 CD8 IL-17A , 106/л 1,70 0,21 5,08 2,68 0,00 5,83 2,21 0,74 5,13 СD3+IL-17А+, % СD3 IL-17A , 10 /л + + 6 СD3 CD4 IFN- , % + + + + + + + + 6 + СD3+CD4+IL-2+,106/л + + + СD3+CD8+IL-2+,106/л + + + Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 117 Изменение относительного и абсолютного содержания основных субпопуляций CD4+ и CD8+Т-эффекторов в остром периоде ЭВИ с СМ у детей 4-7 лет характеризовалось значимым повышением относительного и абсолютного содержания Th1 лимфоцитов. Содержание Т-хелперов, экспрессирующих TNF-α, не отличалось от показателей в группе сравнения, в то время как количество IL-2положительных Т-хелперов оставалось сниженным на протяжении всего периода наблюдения (таблица 4.12). Относительное и абсолютное содержание Th2 лимфоцитов значимо увеличивалось и оставалось повышенным на протяжении 20 суток от начала заболевания. Соотношение Th1/Th2 лимфоцитов было снижено по отношению к показателю в группе сравнения в течение острого периода ЭВИ с СМ. Практически в три раза увеличивалась численность Tс1 клеток. Максимальное содержание Tc1 лимфоцитов наблюдали на 11-20 сутки от начала заболевания. Содержание CD3+CD8+TNF-α+ лимфоцитов увеличивалось по отношению к группе сравнения в 110 сутки от начала заболевания. Относительное и абсолютное содержание CD3+CD8+IL-2+ лимфоцитов у детей 4-7 лет не изменялось по сравнению с нормальными значениями. Количество Tc2 лимфоцитов увеличивалось с первой декады заболевания до конца периода обследования. В целом, в остром периоде ЭВИ с СМ у детей 4-7 лет в периферической крови происходило значимое увеличение относительного и абсолютного содержания Тлимфоцитов, экспрессирующих IFN- и IL-4. Относительное и абсолютное содержание TNF-+Т-лимфоцитов не изменялось, в то время как численность IL-2+Тлимфоцитов оставалась сниженной на протяжении 20 суток от начала заболевания. Абсолютное содержание Т-лимфоцитов, экспрессирующих IL-17A, а также Th17 лимфоцитов у детей 4-7 лет было снижено на протяжении всего периода наблюдения. Изменение численности Т-лимфоцитов-эффекторов в периферической крови сопровождалось значимым увеличением концентрации IFN-, IL-4 и IL-2, снижением уровня IL-10 и IL-17. На протяжении 1-10 суток от начала заболевания в периферической крови у детей 4-7 лет зарегистрирован повышенный уровень IL-18 (таблица 4.13). 118 Таблица 4.13 - Содержание гуморальных факторов иммунитета в периферической крови при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у детей 4-7 лет в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Показатель Периоды обследования от начала заболевания 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=107) 2 (n=107) 3 (n=30) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% IgA, г/л 1,00 0,70 1,30 0,90 0,60 1,20 0,90 0,70 1,30 IgM, г/л 1,60 1,10 2,02 1,40 1,10 1,90 1,30 1,10 1,60 IgG, г/л 10,20 (3) 8,47 13,10 9,50 7,60 11,70 9,10 7,60 10,90 90 (3) 40,80 231,25 79,75 41,00 203,25 22,20 10,10 90,35 61,00 (3) 40,00 90,00 50,50 (3) 31,00 75,75 21,00 17,50 32,50 TNF-, пг/мл 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 0,00 3,66 2,43 5,32 IFN-, пг/мл 8,50 (3) 0,00 13,20 5,44 (3) 0,00 14,50 0,00 0,00 2,35 IL-1, пг/мл 3,46 0,66 4,81 3,28 1,00 4,37 1,43 0,00 2,37 IL-6, пг/мл 3,81 1,47 8,94 3,04 1,63 4,62 2,97 1,79 4,71 IL-8, пг/мл 7,81 4,02 25,08 6,23 4,54 16,41 5,73 2,48 8,83 IL-4, пг/мл 5,45 (3) 1,73 9,27 5,73 (3) 1,93 9,57 2,89 0,26 3,26 IL-10, пг/мл 2,27 (3) 1,87 2,96 2,25 (3) 1,94 2,79 8,63 5,21 12,89 IL-2, пг/мл 17,21 (3) 11,30 18,12 17,21 (3) 12,50 18,83 6,10 4,63 7,35 IL-17, пг/мл 3,53 (3) 1,09 4,80 4,11 (3) 1,98 5,16 8,15 5,80 12,05 IL-18, пг/мл 275,40 (3) 185,30 429,60 179,35 137,97 326,90 139,40 109,31 214,05 IFN-, пг/мл 0,00 0,00 2,03 0,00 0,00 2,55 0,00 0,00 4,90 IgE, МЕ/мл ЦИК, ед. Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 Для оценки взаимосвязи иммунологических, клинических показателей и клеточного состава ЦСЖ с содержанием эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов рассчитаны парные коэффициенты корреляции Спирмена (Spearman, r). В первую декаду заболевания содержание IFN-+ и TNF-+Т-хелперов коррелировало с абсолютным содержанием в периферической крови моноцитов и их поглотительной активностью, а также бактерицидной активностью лейкоцитов, содержанием В- лимфоцитов, цитотоксических Т-лимфоцитов, NK, активированных Т-лимфоцитов, циркулирующих иммунных комплексов, содержанием других субпопуляций Тэффекторов. Отрицательные корреляционные связи установлены между уровнем Th1 лимфоцитов и длительностью регистрации симптомов Брудзинского (таблица 4.14). 119 Таблица 4.14 - Взаимосвязь иммунологических, клинических показателей и клеточного состава ЦСЖ с содержанием эффекторных субпопуляций CD4+ Тлимфоцитов в 1-10 сутки заболевания энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом у детей 4-7 лет, (Spearman, r), n=107 Показатели Моноциты, 109/л В-лимфоциты (CD19+), 109/л Т-цитотокс. (CD3+CD8+), 109/л CD3+HLA-DR+, 109/л NK-клетки (CD3CD16+56+), 109/л ЦИК, ед. Бактерицидная активность лейкоцитов, % Фагоцитарная активность моноцитов, 109/л CD3+CD16+CD56+, 109/л СD3+CD4+IFN-+, 106/л СD3+CD4+TNF-+ , 106/л СD3+CD4+IL-4+ , 106/л СD3+CD8+IFN-+, 106/л СD3+CD8+TNF-+ , 106/л СD3+CD8+IL-4+ , 106/л Длительность заболевания, сутки Длительность госпитализации, сутки С.Брудзинского, сутки Содержание нейтрофилов в ЦСЖ в 1-10 сутки, 106/л Содержание лимфоцитов в ЦСЖ в 1-10 сутки, % Содержание нейтрофилов в ЦСЖ в 11-20 сутки, 106/л Содержание лимфоцитов в ЦСЖ в 11-20 сутки, % p Th1/Th2 p 0,0472 IL-4+, 106/л 0,3336 0,0002 -0,1490 0,1104 0,2898 0,0015 0,0686 0,4622 -0,0066 0,9442 0,0000 0,5277 0,0000 0,2001 0,0306 0,0617 0,5103 0,3695 0,0001 0,1200 0,2206 0,1321 0,1771 0,0650 0,5102 0,2488 0,0068 0,2938 0,0013 0,0790 0,3971 0,0786 0,4017 0,2284 0,0150 0,1211 0,2012 0,2887 0,0019 -0,1790 0,0579 0,1871 0,0434 0,1192 0,2005 0,3552 0,0001 -0,3098 0,0007 0,3995 0,0000 0,2641 0,0040 0,3776 0,0000 -0,1734 0,0627 0,3744 0,0000 0,2872 0,0018 0,2919 0,0015 -0,0869 0,3560 - - 0,6425 0,0000 0,4842 0,0000 0,0621 0,5078 0,6425 0,0000 - - 0,2467 0,0073 0,1144 0,2216 0,4842 0,0000 0,2467 0,0073 - - -0,8246 0,0000 0,9099 0,0000 0,5978 0,0000 0,4742 0,0000 0,0038 0,9676 0,6716 0,0000 0,7904 0,0000 0,2275 0,0136 0,1394 0,1355 0,4891 0,0000 0,1946 0,0355 0,9332 0,0000 -0,7217 0,0000 0,1072 0,4405 -0,0679 0,6258 0,3756 0,0051 -0,3130 0,0200 -0,0920 0,5080 -0,1281 0,3560 0,2128 0,1224 -0,3351 0,0124 -0,3455 0,0098 -0,0986 0,4738 0,0380 0,7831 -0,2512 0,0618 -0,1024 0,4247 -0,1453 0,2559 0,2641 0,0365 -0,3031 0,0149 0,2893 0,0226 0,2899 0,0223 -0,1750 0,1738 0,3550 0,0043 -0,1668 0,2281 -0,2965 0,0295 0,0709 0,6102 -0,1519 0,2682 0,1059 0,4458 0,2700 0,0483 -0,0655 0,6377 0,0917 0,5057 IFN-+, 106/л 0,3710 p 0,0000 TNF-+, 106/л 0,1839 0,1697 0,0674 0,4900 p Уровень Тh1 клеток в периферической крови коррелировал с относительным содержанием лимфоцитов в ЦСЖ в 1-10 и 11-20 сутки от начала заболевания. Содержание Тh2 лимфоцитов коррелировало с абсолютным содержанием в периферической крови моноцитов, их поглотительной активностью, а также бактерицидной активностью лейкоцитов; содержанием цитотоксических Т- 120 лимфоцитов и циркулирующих иммунных комплексов. Положительная корреляционная связь установлена между уровнем Th2 лимфоцитов и длительностью заболевания, а также содержанием нейтрофилов в ЦСЖ (1-10 сутки). Соотношение Th1/Th2 связано с длительностью течения заболевания и госпитализации, а также содержанием нейтрофилов в ЦСЖ отрицательными корреляционными связями (таблица 4.14). В первую декаду заболевания содержание IFN-+ и TNF-+Т-цитотоксических лимфоцитов коррелировало с абсолютным содержанием в периферической крови моноцитов и их поглотительной активностью, а также бактерицидной активностью лейкоцитов, содержанием В-лимфоцитов, Т-хелперов, NK, активированных Тлимфоцитов, циркулирующих иммунных комплексов, содержанием других субпопуляций Т-эффекторов. Отрицательные корреляционные связи установлены между уровнем Tс1 лимфоцитов и степенью выраженности симптома Кернига (таблица 4.15). Таблица 4.15 - Взаимосвязь иммунологических, клинических показателей и клеточного состава цереброспинальной жидкости с содержанием эффекторных субпопуляций CD8+ Т-лимфоцитов в 1-10 сутки заболевания энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом у детей 4-7 лет, (Spearman, r), n=107 Показатели Моноциты, 109/л В-лимфоциты (CD19+), 109/л Т-хелперы (CD3+CD4+), 109/л CD3+HLA-DR+, 109/л NK-клетки (CD3CD16+56+), 109/л ЦИК, ед. Бактерицидная активность лейкоцитов, % Фагоцитарная активность моноцитов, 109/л CD3+CD16+CD56+, 109/л СD3+CD4+IFN-+, 106/л СD3+CD4+TNF-+ , 106/л СD3+CD4+IL-4+ , 106/л СD3+CD8+IFN-+, 106/л СD3+CD8+TNF-+ , 106/л p Tс1/Tс2 p 0,0096 IL-4+, 106/л 0,3875 0,0000 -0,2580 0,0065 0,2409 0,0089 0,0358 0,7018 -0,0266 0,7823 0,0024 0,3647 0,0001 0,1388 0,1354 -0,0714 0,4587 0,3220 0,0008 0,2173 0,0252 0,1506 0,1232 0,0266 0,7942 0,2916 0,0014 0,3358 0,0002 0,0379 0,6851 0,0836 0,3855 0,2777 0,0029 0,0708 0,4564 0,2344 0,0125 -0,1374 0,1562 0,1953 0,0348 0,1011 0,2780 0,2761 0,0026 -0,1724 0,0703 0,3758 0,0000 0,3047 0,0008 0,4184 0,0000 -0,2933 0,0019 0,3582 0,0001 0,3368 0,0002 0,3048 0,0009 -0,0871 0,3678 0,9099 0,0000 0,6716 0,0000 0,4891 0,0000 0,0060 0,9503 0,5978 0,0000 0,7904 0,0000 0,1946 0,0355 0,1296 0,1770 0,4742 0,0000 0,2275 0,0136 0,9332 0,0000 -0,7711 0,0000 - - 0,7400 0,0000 0,4729 0,0000 0,0323 0,7373 0,7400 0,0000 - - 0,2670 0,0036 0,0987 0,3051 IFN-+, 106/л 0,3313 p 0,0003 TNF-+, 106/л 0,2384 0,2114 0,0221 0,2785 p 121 Продолжение таблицы 4.15 Показатели СD3+CD8+IL-4+ , 106/л Длительность заболевания, сутки Длительность госпитализации, сутки С.Кернига Гиперемия зева, длительность, сутки Содержание лейкоцитов в ЦСЖ в 1-10 сутки, 106/л Содержание нейтрофилов в ЦСЖ в 1-10 сутки, % Содержание нейтрофилов в ЦСЖ в 1-10 сутки, 106/л Содержание лимфоцитов в ЦСЖ в 1-10 сутки, % Содержание нейтрофилов в ЦСЖ в 11-20 сутки, 106/л p Tс1/Tс2 p 0,0036 IL-4+, 106/л - - -0,8474 0,0000 -0,0540 0,6980 0,3638 0,0069 -0,3398 0,0128 0,5023 -0,1329 0,3379 0,2075 0,1321 -0,3450 0,0114 -0,3455 0,0098 -0,1106 0,4213 0,0239 0,8626 -0,2232 0,1047 -0,0631 0,6174 -0,0531 0,6744 0,2120 0,0901 -0,2545 0,0441 -0,0281 0,8254 -0,0988 0,4372 0,2342 0,0625 -0,2621 0,0396 -0,2629 0,0407 -0,2761 0,0312 0,2139 0,0978 -0,3565 0,0056 -0,0797 0,5347 -0,1386 0,2787 0,2648 0,0360 -0,3010 0,0184 0,2755 0,0302 0,2832 0,0257 -0,1832 0,1541 0,3293 0,0102 -0,1586 0,2522 -0,2134 0,1214 0,0896 0,5195 -0,2765 0,0472 IFN-+, 106/л 0,4729 p 0,0000 TNF-+, 106/л 0,2670 0,1028 0,4596 -0,0933 p Уровень Тс1 клеток в периферической крови коррелировал с относительным содержанием лимфоцитов в ЦСЖ в 1-10 сутки от начала заболевания. Содержание Тс2 лимфоцитов коррелировало с абсолютным содержанием в периферической крови моноцитов, их поглотительной активностью, а также бактерицидной активностью лейкоцитов; содержанием циркулирующих иммунных комплексов, других субпопуляций Т-эффекторов. Положительная содержанием корреляционная связь установлена между уровнем Tс2 лимфоцитов и длительностью заболевания, а также содержанием нейтрофилов в ЦСЖ (1-10 сутки). Соотношение Tс1/Tс2 связано с длительностью заболевания и госпитализации и продолжительностью регистрации гиперемии зева, а также с уровнем лейкоцитов и нейтрофилов в ЦСЖ отрицательными корреляционными связями. Во вторую декаду заболевания содержание IFN-+ и TNF-+Т-хелперов коррелировало с абсолютным содержанием в периферической крови моноцитов и их поглотительной активностью, содержанием В-лимфоцитов, NK, содержанием других субпопуляций Т-эффекторов. Положительная корреляционная связь установлена между уровнем Th1 лимфоцитов и степенью выраженности симптомов Брудзинского, а также уровнем плеоцитоза в ЦСЖ (11-20 сутки). Содержание Т-хелперов второго типа коррелировало с абсолютным содержанием в периферической крови моноцитов, 122 их поглотительной активностью и содержанием циркулирующих иммунных комплексов (таблица 4.16). Таблица 4.16 - Взаимосвязь иммунологических, клинических показателей и клеточного состава цереброспинальной жидкости с содержанием эффекторных субпопуляций CD4+ Т-лимфоцитов в 11-20 сутки заболевания энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом у детей 4-7 лет, (Spearman, r), n=107 Показатели IFN-+, 106/л p TNF-+, 106/л p IL-4+, 106/л p Th1/Th2 p Моноциты, 109/л В-лимфоциты (CD19+), 109/л NK-клетки (CD3CD16+56+), 109/л ЦИК, ед. Бактерицидная активность лейкоцитов, % Фагоцитарная активность моноцитов, 109/л CD3+CD16+CD56+, 109/л СD3+CD4+IFN-+, 106/л СD3+CD4+TNF-+ , 106/л СD3+CD4+IL-4+ , 106/л СD3+CD8+IFN-+, 106/л СD3+CD8+TNF-+ , 106/л СD3+CD8+IL-4+ , 106/л С.Брудзинского Содержание лейкоцитов в ЦСЖ в 11-20 сутки, 106/л 0,4248 0,0000 0,3287 0,0013 0,2394 0,0208 -0,0338 0,7562 0,3444 0,0007 0,3152 0,0021 0,0791 0,4511 0,1818 0,0920 0,4605 0,0000 0,3377 0,0009 0,1733 0,0967 0,0921 0,3963 0,1026 0,3331 0,0058 0,9564 0,2963 0,0044 -0,2933 0,0064 0,1109 0,2901 0,0395 0,7073 0,1843 0,0769 -0,2249 0,0362 0,4356 0,0000 0,2583 0,0124 0,3069 0,0028 -0,0553 0,6110 0,3269 0,0016 0,1995 0,0580 0,2960 0,0044 -0,0548 0,6182 - - 0,6859 0,0000 0,4653 0,0000 0,2210 0,0396 0,6859 0,0000 - - 0,1472 0,1592 0,3580 0,0007 0,4653 0,0000 0,1472 0,1592 - - -0,7113 0,0000 0,9440 0,0000 0,6825 0,0000 0,4835 0,0000 0,1950 0,0703 0,7004 0,0000 0,8975 0,0000 0,1963 0,0593 0,3296 0,0018 0,4997 0,2966 0,0000 0,0453 0,1373 0,2768 0,1893 0,0626 0,9244 0,1573 0,0000 0,2965 -0,5987 0,1982 0,0000 0,1868 0,2542 0,0883 0,3091 0,0366 0,2894 0,0511 -0,1570 0,2974 Во вторую декаду заболевания содержание Тс1 лимфоцитов коррелировало с абсолютным содержанием в периферической крови моноцитов и их поглотительной активностью, содержанием содержанием В-лимфоцитов, Т-хелперов, естественных киллеров, других субпопуляций Т-эффекторов. Содержание Тс2 клеток коррелировало с абсолютным содержанием в периферической крови моноцитов, их поглотительной активностью, содержанием циркулирующих иммунных комплексов, естественных киллеров и содержанием других субпопуляций Т- эффекторов. Положительная корреляционная связь установлена между уровнем Tс2 лимфоцитов и длительностью регистрации симптомов Брудзинского (таблица 4.17). 123 Таблица 4.17 - Взаимосвязь иммунологических и клинических показателей с содержанием эффекторных субпопуляций CD8+ Т-лимфоцитов в 11-20 сутки заболевания энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом у детей 4-7 лет, (Spearman, r), n=107 Показатели CD8+ IFN-+, 106/л p CD8+ TNF-+, 106/л p CD8+ IL-4+, 106/л p Tс1/Tс2 p Моноциты, 109/л В-лимфоциты (CD19+), 109/л Т-хелперы (CD3+CD4+), 109/л NK-клетки (CD3CD16+56+), 109/л IgA, г/л ЦИК, ед. Фагоцитарная активность моноцитов, 109/л CD3+CD16+CD56+, 109/л СD3+CD4+IFN-+, 106/л СD3+CD4+TNF-+ , 106/л СD3+CD4+IL-4+ , 106/л СD3+CD8+IFN-+, 106/л СD3+CD8+TNF-+ , 106/л СD3+CD8+IL-4+ , 106/л Длительность заболевания, сутки С.Брудзинского, длительность, сутки 0,4505 0,0000 0,4229 0,0000 0,3228 0,0016 -0,1129 0,2949 0,3439 0,0007 0,3129 0,0023 0,1090 0,2985 0,1261 0,2418 0,2408 0,0201 0,3653 0,0003 0,0594 0,5717 0,0420 0,6973 0,3971 0,0001 0,3563 0,0005 0,2065 0,0470 -0,0152 0,8885 -0,1896 0,1137 0,0687 0,2834 -0,2341 0,0286 0,0239 0,7876 -0,1822 0,3211 0,0804 0,0019 0,0952 -0,2891 0,3775 0,0069 0,4651 0,0000 0,3640 0,0003 0,3569 0,0004 -0,1798 0,0937 0,3422 0,0009 0,2734 0,0087 0,3109 0,0027 -0,0958 0,3801 0,9440 0,0000 0,7004 0,0000 0,4997 0,0000 0,0517 0,6326 0,6825 0,0000 0,8975 0,0000 0,1373 0,1893 0,3357 0,0014 0,4835 0,0000 0,1963 0,0593 0,9244 0,0000 -0,7065 0,0000 - - 0,7754 0,0000 0,4922 0,0000 0,0706 0,5131 0,7754 0,0000 - - 0,1916 0,0658 0,3040 0,0040 0,4922 0,0000 0,1916 0,0658 - - -0,7434 0,0000 -0,1814 0,2277 -0,1003 0,5071 0,1816 0,2272 -0,3710 0,0111 0,2066 0,1500 0,1316 0,3622 0,3088 0,0291 -0,0994 0,4921 Иммунологическая характеристика энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у детей 8-14 лет У детей 8-14 лет в остром периоде ЭВИ с СМ относительное и абсолютное содержание лимфоцитов, моноцитов и гранулоцитов в динамике острого периода заболевания значимо не изменялось по отношению к показателям группы сравнения (таблица 4.18). Показатели поглотительной и бактерицидной активности моноцитов и нейтрофилов значимо не отличались от параметров группы сравнения за исключением показателей стимулированного НСТ-теста, превышающего значения в группе сравнения (таблица 4.19). При ЭВИ с СМ у детей 8-14 лет происходило перераспределение относительного содержания основных лимфоцитарных субпопуляций: снижалось относительное содержание Т-лимфоцитов (относительную 124 Т-лимфопению наблюдали на протяжении 10 суток от начала заболевания) за счет снижения относительного содержания Т-хелперных лимфоцитов. Относительное и абсолютное содержание Т-цитотоксических лимфоцитов увеличивалось во вторую декаду заболевания. Значение иммунорегуляторного индекса (Th/Tc) в остром периоде ЭВИ с СМ у детей 8-14 лет оставалось сниженным на протяжении всего острого периода заболевания. Таблица 4.18 - Показатели гемо- и иммуноцитограммы при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у детей 8-14 лет в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Показате Периоды обследования от начала заболевания ль 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=180) 2 (n=180) 3 (n=30) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% Лейкоциты, 109/л 6,10 (2) 4,90 7,50 6,80 (1) 5,77 8,14 6,25 5,10 7,27 Гранулоциты, % 55,25 47,55 62,77 55,30 48,00 61,05 56,25 50,32 59,52 Гранулоциты, 10 /л 3,23 2,43 4,37 3,66 2,87 4,82 3,54 2,82 4,21 Моноциты, % 6,30 5,10 8,17 6,20 4,90 7,95 6,85 5,52 7,90 Моноциты, 10 /л 0,39 0,30 0,49 0,45 0,36 0,55 0,38 0,31 0,58 Лимфоциты, % 38,10 31,27 44,80 37,70 32,30 45,00 35,30 32,85 39,80 2,17 (2) 1,68 2,76 2,54 (1) 2,17 3,04 2,14 1,79 2,62 66,20(2,3) 60,72 71,50 69,50 (1) 64,60 74,70 71,35 66,22 76,32 1,40 (2) 1,08 1,83 1,73 (1) 1,46 2,11 1,49 1,23 1,90 15,20 12,40 19,97 14,10 11,90 17,50 13,35 10,25 18,75 0,33 0,24 0,45 0,36 0,29 0,45 0,32 0,21 0,42 34,50 (3) 29,80 40,27 35,90 (3) 31,70 41,50 40,55 35,50 44,30 0,74 (2) 0,59 0,95 0,92 (1) 0,74 1,12 0,86 0,69 1,08 25,30 (2) 21,27 29,35 27,30 (1,3) 23,20 31,80 23,20 19,72 28,75 0,54 (2) 0,38 0,73 0,69 (1,3) 0,53 0,89 0,53 0,35 0,68 9,20 20,90 13,00 (1) 7,60 17,50 10,10 6,02 14,82 0,29 0,18 0,48 0,32 (3) 0,19 0,46 0,19 0,13 0,32 1,53 0,71 2,61 1,64 0,84 3,00 0,80 0,45 1,90 0,029 0,016 0,057 0,040 0,019 0,077 0,016 0,009 0,037 1,58 (3) 0,77 3,07 1,37 (3) 0,76 3,20 0,60 0,33 1,14 0,032 (3) 0,015 0,072 0,038 (3) 0,017 0,078 0,015 0,007 0,026 9 9 9 Лимфоциты, 10 /л Т-лимфоциты (CD3+), % Т-лимфоциты (CD3+), 109/л В-лимфоциты (CD19+), % В-лимфоциты (CD19+), 109/л Т-хелперы (CD3+CD4+), % Т-хелперы (CD3+CD4+), 109/л Т-цитотокс. (CD3+CD8+), % Т-цитотокс. (CD3+CD8+), 109/л NK-клетки (CD3CD16+56+), % NK-клетки (CD3CD16+56+), 109/л CD3+HLA-DR+, % CD3+HLA-DR+, 109/л CD3+CD16+CD56+, % CD3+CD16+CD56+, 109/л 14,20 (2,3) Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 125 Таблица 4.19 - Показатели, характеризующие фагоцитарную активность нейтрофилов и моноцитов, при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у детей 8-14 лет в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Показатель Фагоцитарная активность нейтрофилов, % Фагоцитарная активность нейтрофилов, 109/л Фагоцитарная активность моноцитов, % Фагоцитарная активность моноцитов, 109/л Бактерицидная активность лейкоцитов НСТ-тест спонтанный, % НСТ-тест стимулированный, % Периоды обследования от начала заболевания 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=180) 2 (n=180) 3 (n=30) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% 93,90 89,10 96,60 93,10 90,07 95,90 92,90 87,32 94,42 3,03 2,28 4,03 3,40 2,68 4,34 3,32 2,60 3,71 86,20 79,00 92,80 83,25 75,87 89,72 82,50 76,80 89,50 0,331 0,250 0,417 0,363 0,288 0,454 0,314 0,250 0,463 35,90 29,12 42,20 35,25 28,12 42,15 36,65 32,85 46,87 10,00 6,00 16,00 9,00 5,00 18,00 4,00 2,00 9,00 17,50 (3) 10,00 26,00 17,00 (3) 10,00 26,00 7,00 4,25 12,75 Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 Относительное содержание NK увеличивалось в 1-10 сутки от начала заболевания, далее возвращаясь к нормальным значениям. Абсолютное содержание NK повышалось на 11-20 сутки от начала заболевания. Значимо увеличивалось и содержание субпопуляции Т-лимфоцитов, экспрессирующих CD16+СD56+. Относительное и абсолютное содержание В-лимфоцитов не изменялось по отношению к группе сравнения. Не отличались от группы сравнения и показатели содержания общих иммуноглобулинов основных классов. При этом содержание ЦИК было повышено по отношению к группе сравнения в течение всего периода наблюдения (таблица 4.21). Изменение относительного и абсолютного содержания основных субпопуляций CD4+ и CD8+Т-эффекторов в остром периоде ЭВИ с СМ у детей 8-14 лет не характеризовалось значимым повышением относительного и абсолютного содержания Th1 лимфоцитов. 126 Таблица 4.20 - Содержание Т-эффекторов при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у детей 8-14 лет в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Показатель Периоды обследования от начала заболевания 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=180) 2 (n=180) 3 (n=30) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% СD3+IFN-+ , % 17,60 (3) 12,62 23,60 16,80 (3) 12,55 21,77 10,40 9,00 13,40 СD3+IFN-+, 106/л 371,17 (3) 227,62 564,46 430,20 (3) 285,33 568,51 236,76 174,87 280,06 СD3+TNF-+ , % 26,15 (2) 18,87 34,35 24,00 (1,3) 18,35 29,40 29,50 22,30 38,20 542,77 362,91 817,40 560,24 392,32 820,97 631,80 468,42 787,47 СD3+IL-2+ , % 12,15 (3) 7,85 15,95 10,80 (3) 7,32 15,80 18,70 16,10 26,50 СD3+IL-2+,106/л 240,85 (3) 162,36 361,14 282,66 (3) 186,34 437,95 398,31 315,94 559,68 СD3+IL-4+, % 1,90 (3) 0,90 3,50 1,70 (3) 0,80 3,30 0,30 0,10 0,50 СD3+IL-4+ , 106/л 36,26 (3) 15,14 72,25 47,43 (3) 22,07 76,68 7,60 2,81 11,71 0,05 0,00 0,10 0,10 0,10 0,35 0,60 0,20 0,80 1,09 0,00 3,13 2,89 2,45 9,62 14,64 5,59 17,70 7,68 5,26 10,22 7,48 5,12 9,48 6,34 5,47 8,17 СD3 CD4 IFN- , 10 /л 160,83 94,63 242,43 188,67 121,26 259,79 125,50 98,54 169,78 СD3 CD4 TNF- , % 17,87 (2,3) 12,83 23,89 14,90 (1,3) 11,32 18,98 23,20 18,70 35,02 СD3+CD4+TNF-+ , 106/л 372,40 (3) 245,51 560,53 354,01 (3) 244,47 518,68 548,69 375,62 665,66 СD3+CD4+IL-2+ , % 10,75 (3) 6,97 13,82 9,04 (3) 6,00 13,92 17,47 13,00 22,44 СD3+CD4+IL-2+,106/л 210,67 (3) 140,49 310,90 247,76 (3) 155,19 361,40 376,52 289,93 526,81 СD3+CD4+IL-4+, % 1,34 (3) 0,62 2,41 1,21 (3) 0,64 2,35 0,12 0,06 0,21 СD3+CD4+IL-4+ , 106/л 25,23 (3) 10,58 49,80 34,56 (3) 16,46 54,82 2,61 0,81 3,89 СD3+CD4+IL-17А+, % 0,00(3) 0,00 0,00 0,00 0,00 0,10 0,15 0,10 0,24 СD3+CD4+IL-17A+ , 106/л 0,00 (3) 0,00 0,00 0,00 0,00 2,89 2,93 1,87 6,02 СD3+CD8+IFN-+ , % 7,73 (3) 5,26 10,29 8,30 (3) 6,02 10,89 4,05 3,40 5,46 СD3+CD8+IFN-+, 106/л 161,69 (2,3) 94,32 248,79 205,77 (1,3) 135,89 288,64 97,47 58,71 118,65 СD3+CD8+TNF-+ , % 6,26 (3) 4,26 8,68 6,31 (3) 4,73 7,94 3,94 3,04 5,59 СD3 CD8 TNF- , 106/л 127,51 (3) 83,02 202,42 150,79 (3) 107,13 216,09 93,73 68,41 113,01 СD3+CD8+IL-2+ , % 1,15 (2) 0,72 1,57 0,84 (1,3) 0,55 1,27 1,33 0,70 2,11 21,83 13,68 36,32 21,95 14,36 33,03 30,95 15,33 44,10 СD3+CD8+IL-4+, % 0,41 (3) 0,18 0,76 0,40 (3) 0,20 0,82 0,07 0,06 0,08 СD3+CD8+IL-4+ , 106/л 8,10 (3) 3,30 15,76 12,18 (3) 5,03 19,34 1,29 0,81 2,83 СD3+CD8+IL-17А+, % 0,00(2) 0,00 0,00 0,14(1) 0,07 0,32 0,07 0,03 0,15 СD3+CD8+IL-17A+ , 106/л 0,00(2) 0,00 0,00 2,83(1) 1,41 8,23 1,87 0,95 3,42 СD3+TNF-+ , 106/л СD3+IL-17А+, % СD3 IL-17A , 10 /л + + 6 СD3 CD4 IFN- , % + + + + + + + + + + 6 + + СD3+CD8+IL-2+,106/л Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 127 Содержание Т-хелперов, экспрессирующих TNF-α и IL-2, оставалось сниженным на протяжении всего периода наблюдения. Относительное и абсолютное содержание Th2 лимфоцитов значимо увеличивалось и оставалось повышенным на протяжении 20 суток от начала заболевания. Относительное и абсолютное содержание Т-хелперов, экспрессирующих IL-17A, было снижено в первую декаду заболевания (таблица 4.20). Таблица 4.21 - Содержание гуморальных факторов иммунитета в периферической крови при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у детей 8-14 лет в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Показатель Периоды обследования от начала заболевания 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=180) 2 (n=180) 3 (n=30) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиа 25% 75% на IgA, г/л 1,30 0,90 1,90 1,20 0,80 1,70 1,10 0,80 1,97 IgM, г/л 1,50 1,10 1,90 1,50 1,00 2,00 1,30 1,20 1,77 IgG, г/л 11,10 8,80 13,50 10,90 8,10 12,70 11,35 10,47 12,55 IgE, МЕ/мл 78,80 24,25 273,20 70,70 23,00 248,00 48,30 23,90 65,40 68,50 (2,3) 45,00 97,25 57,00 (1,3) 32,00 78,00 22,50 16,00 36,00 TNF-, пг/мл 0,00 0,00 16,77 0,00 0,00 20,33 1,86 0,71 3,91 IFN-, пг/мл 13,77 3,61 16,35 9,40 0,00 15,28 0,00 0,00 2,44 IL-1, пг/мл 4,54 (3) 2,75 6,34 3,66 0,00 8,42 1,05 0,00 2,49 IL-6, пг/мл 4,54 2,14 9,76 2,88 1,63 4,44 3,07 2,21 5,31 IL-8, пг/мл 4,37 3,57 19,19 3,40 1,28 7,60 4,30 3,41 6,61 IL-4, пг/мл 5,45 1,37 6,53 3,28 0,00 6,52 2,89 2,67 4,00 IL-10, пг/мл 2,67 (3) 2,08 3,54 2,06 (3) 1,43 2,68 13,95 5,15 17,53 IL-2, пг/мл 11,51 6,00 16,69 6,76 5,92 11,26 6,59 5,25 8,41 IL-17, пг/мл 2,87 (3) 1,10 3,78 0,78 (3) 0,33 0,95 6,68 4,48 10,60 IL-18, пг/мл 493,90 (3) 326,45 568,65 377,30 (3) 88,57 558,80 106,70 85,94 135,20 IFN-, пг/мл 9,21 0,00 11,87 6,98 1,39 9,60 0,00 0,00 4,45 ЦИК, ед. Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 Численность Tс1 лимфоцитов при ЭВИ с СМ у детей 8-14 лет, в отличие от Th1 клеток, значимо увеличивалась в остром периоде заболевания. Содержание Тцитотоксических лимфоцитов, экспрессирующих TNF-α, также было повышено по 128 отношению к группе сравнения на протяжении всего периода наблюдения. Относительное содержание CD3+CD8+IL-2+ лимфоцитов оставалось сниженным на протяжении острого периода заболевания. Количество лимфоцитов Tc2 увеличивалось с первой декады заболевания до конца периода обследования. Соотношение Tс1/Tс2 лимфоцитов было снижено по отношению к показателю в группе сравнения в течение острого периода ЭВИ с СМ. Изменение численности Тлимфоцитов-эффекторов в периферической крови не сопровождалось значимым изменением в периферической крови концентрации IFN-, TNF-, IL-2 и IL-4. Однако, уровень IL-17 и IL-10 в периферической крови детей 8-14 лет был снижен в течение всего периода наблюдения, а уровень IL-1 - повышен в 1-10 сутки. На протяжении 20 суток от начала заболевания в периферической крови зарегистрирован повышенный уровень IL-18 (таблица 4.21). Результаты определения содержания CD4+ и CD8+ субпопуляций наивных Тлимфоцитов и Т-лимфоцитов памяти в периферической крови детей 8-14 лет в динамике ЭВИ с СМ показали, что в течение острого периода происходило значительное снижение содержания наивных Т-лимфоцитов, относящихся как к CD4+, так и CD8+субпопуляциям (рисунок 4.1). 1200 1000 1200 N 1-10 сутки 11-20 сутки а 1000 N 1-10 сутки 11-20 сутки б * 800 * 600 106/л 106 /л 800 * 600 * * 400 400 * * 200 * * 200 * * * * 0 0 CD4+Tnaive CD4+TEM CD4+TCM CD8+Tnaive CD4+CD62L-CD45RA+ CD8+TEM CD8+TCM CD8+CD62L-CD45RA+ Рисунок 4.1 - Абсолютное содержание наивных Т-лимфоцитов и различных субпопуляций Т-клеток памяти в пуле: CD3+CD4+(а); CD3+CD8+(б) клеток в динамике острого периода энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у детей 8-14 лет, (Ме, LQ-UQ). Примечание: * – р<0,05 к показателям группы сравнения 129 Сниженное относительное и абсолютное содержание наивных Т-хелперов и Тцитотоксических лимфоцитов в периферической крови наблюдали и на 11-20 сутки от начала заболевания. Помимо наивных клеток, в периферическом кровотоке детей значимо снижалось относительное и абсолютное содержание центральных клеток памяти (CD4+ TCM и CD8+TCM). В отличие от наивных CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов и центральных Т-лимфоцитов памяти, содержание эффекторных Т-лимфоцитов памяти (как CD4+, так и CD8+ фенотипа) в динамике заболевания увеличивалось, достигая на 11-20 сутки от начала инфекции статистически значимой разницы по отношению к группе сравнения. Кроме того, значимо увеличивалось относительное и абсолютное содержание CD8+ TEMRA на 11-20 сутки от начала заболевания. Для оценки взаимосвязи иммунологических, клинических показателей и клеточного состава ЦСЖ с содержанием эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов рассчитаны парные коэффициенты корреляции Спирмена (Spearman, r). В первую декаду заболевания содержание Тh1 клеток коррелировало с абсолютным содержанием в периферической крови моноцитов и их поглотительной активностью, содержанием В-лимфоцитов, цитотоксических Т-лимфоцитов, естественных киллеров, активированных Т-лимфоцитов, содержанием других субпопуляций Т-эффекторов. Содержание Тh2 лимфоцитов коррелировало с абсолютным содержанием в периферической крови моноцитов, их поглотительной активностью, содержанием цитотоксических Т-лимфоцитов, В-лимфоцитов и ЦИК, содержанием других субпопуляций Т-эффекторов (таблица 4.22). Таблица 4.22 - Взаимосвязь иммунологических, клинических показателей и клеточного состава цереброспинальной жидкости с содержанием эффекторных субпопуляций CD4+ Т-лимфоцитов в 1-10 сутки заболевания энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом у детей 8-14 лет, (Spearman, r), n=180 Показатели Моноциты, 109/л В-лимфоциты (CD19+), 109/л Т-цитотокс. (CD3+CD8+), 109/л CD3+HLA-DR+, 109/л NK-клетки (CD3CD16+56+), 109/л ЦИК, ед. p Th1/Th2 p 0,1043 IL-4+, 106/л 0,2830 0,0000 -0,1273 0,0675 0,3188 0,0000 0,1595 0,0214 0,0403 0,5644 0,0000 0,6055 0,0000 0,2644 0,0001 0,2065 0,0028 0,2982 0,0000 0,2098 0,0040 0,1198 0,1023 0,1105 0,1332 0,4140 0,0000 0,3619 0,0000 0,1163 0,0943 0,1822 0,0086 0,0776 0,2763 0,0078 0,9126 0,1475 0,0376 -0,1136 0,1109 IFN-+, 106/л 0,2469 p 0,0003 TNF-+, 106/л 0,1130 0,2838 0,0000 0,6649 p 130 Продолжение таблицы 4.22 Показатели Фагоцитарная активность моноцитов, 109/л CD3+CD16+CD56+, 109/л СD3+CD4+IFN-+, 106/л СD3+CD4+TNF-+ , 106/л СD3+CD4+IL-4+ , 106/л СD3+CD8+IFN-+, 106/л СD3+CD8+TNF-+ , 106/л СD3+CD8+IL-4+ , 106/л С.Брудзинского, длительность, сутки Гиперемия зева, длительность, сутки Содержание лейкоцитов в ЦСЖ в 1-10 сутки, 106/л Содержание нейтрофилов в ЦСЖ в 1-10 сутки, 106/л IFN-+, 106/л p TNF-+, 106/л p IL-4+, 106/л p Th1/Th2 p 0,3077 0,0000 0,2097 0,0024 0,2884 0,0000 -0,0793 0,2570 0,3650 0,0000 0,2407 0,0005 0,0778 0,2674 0,1485 0,0340 - - 0,7975 0,0000 0,4056 0,0000 0,2498 0,0003 0,7975 0,0000 - - 0,1920 0,0055 0,3494 0,0000 0,4056 0,0000 0,1920 0,0055 - - -0,7267 0,0000 0,9474 0,0000 0,7418 0,0000 0,4047 0,0000 0,2351 0,0007 0,7820 0,0000 0,8997 0,0000 0,2046 0,0030 0,3358 0,0000 0,4124 0,0000 0,1780 0,0101 0,9688 0,0000 -0,6930 0,0000 0,1406 0,0872 0,0341 0,6799 0,2364 0,0037 -0,1137 0,1672 0,0116 0,8888 -0,0032 0,9691 0,2172 0,0080 -0,2568 0,0016 -0,0242 0,7725 -0,0197 0,8140 0,2041 0,0138 -0,2354 0,0044 -0,0269 0,7491 -0,0501 0,5508 0,2217 0,0076 -0,2462 0,0029 Положительная корреляционная связь установлена между уровнем Th2 лимфоцитов и длительностью регистрации симптомов Брудзинского, гиперемии зева, а также содержанием лейкоцитов и нейтрофилов в ЦСЖ (1-10 сутки). В первую декаду заболевания содержание IFN-+ и TNF-+ Т-цитотоксических лимфоцитов коррелировало с абсолютным содержанием в периферической крови моноцитов и их поглотительной активностью, содержанием В-лимфоцитов, Т- хелперов, NK, активированных Т-лимфоцитов, содержанием других субпопуляций Тэффекторов (таблица 4.23). Содержание Тс2 лимфоцитов коррелировало с абсолютным содержанием в периферической крови моноцитов, их поглотительной активностью, содержанием Влимфоцитов и ЦИК, содержанием других субпопуляций Т-эффекторов. Положительная корреляционная связь установлена между уровнем Tс2 лимфоцитов и длительностью лихорадочного периода, продолжительностью регистрации симптомов Брудзинского и гиперемии зева, а также содержанием лейкоцитов и нейтрофилов в ЦСЖ (1-10 сутки). 131 Таблица 4.23 - Взаимосвязь иммунологических, клинических показателей и клеточного состава цереброспинальной жидкости с содержанием эффекторных субпопуляций CD8+ Т-лимфоцитов в 1-10 сутки заболевания энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом у детей 8-14 лет, (Spearman, r), n=180 Показатели IFN-+, 106/л p TNF-+, 106/л p IL-4+, 106/л p Tс1/Tс2 p Моноциты, 109/л В-лимфоциты (CD19+), 109/л Т-хелперы (CD3+CD4+), 109/л CD3+HLA-DR+, 109/л NK-клетки (CD3CD16+56+), 109/л ЦИК, ед. Фагоцитарная активность моноцитов, 109/л CD3+CD16+CD56+, 109/л СD3+CD4+IFN-+, 106/л СD3+CD4+TNF-+ , 106/л СD3+CD4+IL-4+ , 106/л СD3+CD8+IFN-+, 106/л СD3+CD8+TNF-+ , 106/л СD3+CD8+IL-4+ , 106/л Длительность лихорадки, сутки С.Брудзинского, длительность, сутки Гиперемия зева, длительность, сутки Содержание лейкоцитов в ЦСЖ в 1-10 сутки, 106/л Содержание нейтрофилов в ЦСЖ в 1-10 сутки, 106/л 0,2340 0,0007 0,1482 0,0327 0,2944 0,0000 -0,1418 0,0469 0,2067 0,0027 0,2514 0,0002 0,1788 0,0098 -0,0564 0,4309 0,3555 0,0000 0,3639 0,0000 0,3026 0,0000 -0,1170 0,1017 0,3508 0,0000 0,2730 0,0002 0,1156 0,1152 0,0858 0,2575 0,4118 0,0000 0,3835 0,0000 0,1084 0,1190 0,2130 0,0027 0,0791 0,2669 0,0361 0,6127 0,1592 0,0247 -0,0788 0,2812 0,2944 0,0000 0,2320 0,0008 0,2968 0,0000 -0,0868 0,2264 0,3794 0,0000 0,2842 0,0000 0,1001 0,1535 0,1945 0,0066 0,9474 0,0000 0,7820 0,0000 0,4124 0,0000 0,3008 0,0000 0,7418 0,0000 0,8997 0,0000 0,1780 0,0101 0,4006 0,0000 0,4047 0,0000 0,2046 0,0030 0,9688 0,0000 -0,6661 0,0000 - - 0,8309 0,0000 0,3940 0,0000 0,3015 0,0000 0,8309 0,0000 - - 0,1971 0,0043 0,3777 0,0000 0,3940 0,0000 0,1971 0,0043 - - -0,6857 0,0000 0,0716 0,3838 -0,0641 0,4357 0,2046 0,0120 -0,1376 0,1000 0,1395 0,0898 0,0809 0,3268 0,2386 0,0034 -0,0675 0,4229 -0,0180 0,8282 0,0067 0,9356 0,2288 0,0052 -0,2197 0,0086 -0,0296 0,7238 -0,0118 0,8884 0,1896 0,0223 -0,2469 0,0034 -0,0216 0,7975 -0,0113 0,8932 0,2101 0,0115 -0,2406 0,0045 Во вторую декаду заболевания содержание IFN-+ и TNF-+Т-хелперов коррелировало с абсолютным содержанием в периферической крови моноцитов, содержанием В-лимфоцитов, цитотоксических Т-лимфоцитов, NK, активированных Т-лимфоцитов, содержанием других субпопуляций Т-эффекторов. Содержание Тh2 лимфоцитов коррелировало с абсолютным содержанием в периферической крови 132 моноцитов, содержанием цитотоксических Т-лимфоцитов, В-лимфоцитов, общих IgM антител и ЦИК, содержанием других субпопуляций Т-эффекторов. Положительная корреляционная связь установлена между уровнем Th2 лимфоцитов и продолжительностью заболевания и госпитализации, длительностью регистрации симптомов Брудзинского и гиперемии зева (таблица 4.24). Таблица 4.24 - Взаимосвязь иммунологических и клинических показателей с содержанием эффекторных субпопуляций CD4+ Т-лимфоцитов в 11-20 сутки заболевания энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом у детей 8-14 лет, (Spearman, r), n=180 Показатели Моноциты, 109/л 9 Гранулоциты, 10 /л В-лимфоциты (CD19+), 109/л Т-цитотокс. (CD3+CD8+), 109/л CD3+HLA-DR+, 109/л NK-клетки (CD3CD16+56+), 109/л IgA, г/л IgM, г/л IgG, г/л ЦИК, ед. CD3+CD16+CD56+, 109/л СD3+CD4+IFN-+, 106/л СD3+CD4+TNF-+ , 106/л СD3+CD4+IL-4+ , 106/л СD3+CD8+IFN-+, 106/л СD3+CD8+TNF-+ , 106/л СD3+CD8+IL-4+ , 106/л Длительность заболевания, сутки Длительность госпитализации, сутки Длительность цефалгии, сутки С.Брудзинского, длительность, сутки Гиперемия зева, длительность, сутки CD4+ IFN-+, 106/л p CD4+ TNF-+, 106/л p CD4+ IL-4+, 106/л p Th1/Th2 p 0,2385 -0,1041 0,0018 0,1781 0,1071 -0,1030 0,1658 0,1826 0,4125 0,1211 0,0000 0,1169 -0,2302 -0,1950 0,0027 0,0113 0,1623 0,0351 0,1823 0,0177 0,2401 0,0017 -0,1341 0,0830 0,4642 0,0000 0,4960 0,0000 0,1679 0,0291 0,1307 0,0912 0,1778 0,0279 0,1687 0,0371 0,0166 0,8386 0,1270 0,1189 0,3339 0,0000 0,2830 0,0002 -0,0372 0,6311 0,2887 0,0001 0,0367 0,0648 -0,1435 0,0851 0,6360 0,4028 0,0626 0,2788 0,0492 -0,0029 -0,1146 0,0580 0,5256 0,9697 0,1380 0,4603 -0,2151 0,1703 -0,1988 0,2049 0,0050 0,0269 0,0095 0,0085 0,2550 -0,1184 0,1117 -0,1476 0,0009 0,1264 0,1496 0,0600 0,1545 0,0469 0,1156 0,1380 0,0293 0,7082 0,0867 0,2681 - - 0,7661 0,0000 0,3253 0,0000 0,3187 0,0000 0,7661 0,0000 - - 0,1627 0,0346 0,3277 0,0000 0,3253 0,0000 0,1627 0,0346 - - -0,7545 0,0000 0,9096 0,0000 0,7341 0,0000 0,3380 0,0000 0,2606 0,0006 0,7153 0,0000 0,9220 0,0000 0,2299 0,0026 0,2352 0,0021 0,3142 0,0000 0,1327 0,0854 0,9784 0,0000 -0,7394 0,0000 0,0161 0,8734 0,1202 0,2312 0,2351 0,0179 -0,1868 0,0614 0,0443 0,6617 0,0874 0,3871 0,2121 0,0341 -0,1651 0,1008 0,0922 0,3067 0,2142 0,0164 -0,0352 0,6968 0,0626 0,4896 0,1031 0,2544 0,1045 0,2482 0,1914 0,0333 -0,1274 0,1602 -0,0576 0,5321 -0,0867 0,3464 0,2733 0,0025 -0,2773 0,0023 133 Во вторую декаду заболевания содержание Тс1 лимфоцитов (IFN-+, TNF-+) коррелировало с абсолютным содержанием в периферической крови моноцитов и их поглотительной активностью, содержанием В-лимфоцитов, NK, активированных Тлимфоцитов, содержанием других субпопуляций Т-эффекторов (таблица 4.25). Таблица 4.25 - Взаимосвязь иммунологических и клинических показателей с содержанием эффекторных субпопуляций CD8+ Т-лимфоцитов в 11-20 сутки заболевания энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом у детей 8-14 лет, (Spearman, r), n=180 Показатели Моноциты, 109/л 9 Гранулоциты, 10 /л В-лимфоциты (CD19+), 109/л CD3+HLA-DR+, 109/л NK-клетки (CD3CD16+56+), 109/л IgA, г/л IgM, г/л IgG, г/л ЦИК, ед. Фагоцитарная активность моноцитов, 109/л CD3+CD16+CD56+, 109/л СD3+CD4+IFN-+, 106/л СD3+CD4+TNF-+ , 106/л СD3+CD4+IL-4+ , 106/л СD3+CD8+IFN-+, 106/л СD3+CD8+TNF-+ , 106/л СD3+CD8+IL-4+ , 106/л Длительность заболевания, сутки Длительность госпитализации, сутки Длительность цефалгии, сутки С.Брудзинского, длительность, сутки Гиперемия зева, длительность, сутки IFN-+, 106/л p TNF-+, 106/л p IL-4+, 106/л p Tс1/Tс2 p 0,2768 -0,0764 0,0003 0,3238 0,1934 -0,0651 0,0118 0,4004 0,4159 0,1080 0,0000 0,1621 -0,1938 -0,1787 0,0132 0,0224 0,2202 0,0040 0,2321 0,0024 0,2183 0,0043 -0,1081 0,1697 0,1955 0,0154 0,2004 0,0130 0,0565 0,4881 0,1243 0,1335 0,3267 0,0000 0,2778 0,0003 -0,0289 0,7094 0,2945 0,0001 0,0119 0,0582 -0,1179 0,0923 0,8783 0,4525 0,1270 0,2398 0,0336 0,0217 -0,0783 0,1050 0,6645 0,7798 0,3117 0,1809 -0,2234 0,1931 -0,2002 0,2234 0,0035 0,0119 0,0091 0,0040 0,2344 -0,1085 0,1497 -0,1055 0,0026 0,1680 0,0564 0,1869 0,2936 0,0001 0,2351 0,0022 0,3850 0,0000 -0,1477 0,0615 0,1793 0,0208 0,1651 0,0336 0,0748 0,3380 0,0756 0,3423 0,9096 0,0000 0,7153 0,0000 0,3142 0,0000 0,3080 0,0001 0,7341 0,0000 0,9220 0,0000 0,1327 0,0854 0,3131 0,0000 0,3380 0,0000 0,2299 0,0026 0,9784 0,0000 -0,7391 0,0000 - - 0,8149 0,0000 0,3148 0,0000 0,3297 0,0000 0,8149 0,0000 - - 0,2073 0,0068 0,2924 0,0002 0,3148 0,0000 0,2073 0,0068 - - -0,7601 0,0000 0,0257 0,7989 0,1282 0,2013 0,2375 0,0168 -0,1687 0,0933 0,0529 0,6009 0,0933 0,3561 0,2152 0,0315 -0,1483 0,1428 0,0910 0,3130 0,2080 0,0199 -0,0344 0,7033 0,0577 0,5280 0,1265 0,1616 0,1283 0,1555 0,1962 0,0290 -0,1214 0,1846 -0,0296 0,7479 -0,0517 0,5750 0,2850 0,0016 -0,2563 0,0053 Содержание Тс2 лимфоцитов коррелировало с абсолютным содержанием в периферической крови моноцитов, их поглотительной активностью, содержанием В- 134 лимфоцитов, общих IgM антител и ЦИК, содержанием других субпопуляций Тэффекторов. Положительная корреляционная связь установлена между уровнем Tс2 лимфоцитов и продолжительностью заболевания и госпитализации, длительностью регистрации симптомов Брудзинского и гиперемии зева. Иммунологическая характеристика энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у подростков 15-18 лет ЭВИ с СМ у подростков 15-18 лет не сопровождалась значимыми изменениями содержания лимфоцитов, гранулоцитов, моноцитов, тромбоцитов и эритроцитов в периферической крови (таблица 4.26). Показатели поглотительной активности моноцитов и нейтрофилов, бактерицидная активность лейкоцитов, а также тесты, характеризующие состояние НАДФ-Н2-оксидазной системы нейтрофилов, значимо не отличались от параметров группы сравнения (таблица 4.27). При незначительном снижении содержания Т-лимфоцитов у подростков 15-18 лет в остром периоде ЭВИ с СМ увеличивалось относительное содержание Влимфоцитов в 1-10 сутки от начала заболевания. Абсолютное количество В-клеток не изменялось по отношению к группе сравнения. Не изменялось в динамике острого периода заболевания также относительное и абсолютное содержание Т-хелперных и Т-цитотоксических лимфоцитов, субпопуляции Т-лимфоцитов, экспрессирующих CD16+СD56+. Абсолютное содержание NK было снижено на протяжении всего периода обследования. В остром периоде ЭВИ с СМ у подростков 15-18 лет не происходило значимого повышения относительного и абсолютного содержания Th1 лимфоцитов. Содержание Т-хелперов, экспрессирующих TNF-α и IL-2, оставалось сниженным на протяжении всего периода наблюдения. Относительное и абсолютное содержание Th2 лимфоцитов значимо увеличивалось и оставалось повышенным на протяжении 20 суток от начала заболевания (таблица 4.28). Численность Tс1 лимфоцитов при ЭВИ с СМ у подростков 15-18 лет не увеличивалась. Содержание Тцитотоксических лимфоцитов, экспрессирующих IL-2, оставалось сниженным на протяжении всего периода наблюдения. Количество Tc2 лимфоцитов увеличивалось с первой декады заболевания до конца периода обследования. Абсолютное содержание Th17 и Tnc17 лимфоцитов у подростков 15-18 лет значимо не изменялось 135 на протяжении всего периода наблюдения. Изменение численности Т-лимфоцитовэффекторов в периферической крови сопровождалось значимым увеличением концентрации IFN- и TNF-, снижением концентрации IL-4. На протяжении 1-10 суток от начала заболевания в периферической крови у подростков 15-18 лет зарегистрирован повышенный уровень IL-18 (таблица 4.29). Таблица 4.26 - Показатели гемо- и иммуноцитограммы при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у подростков 15-18 лет в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Показатель Периоды обследования от начала заболевания 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=30) 2 (n=30) 3 (n=30) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% Лейкоциты, 109/л 5,90 5,20 7,00 6,60 5,10 7,95 6,35 5,10 7,57 Гранулоциты, % 60,00 51,50 66,60 61,80 54,30 68,30 59,85 50,90 65,02 Гранулоциты, 109/л 3,47 2,58 4,66 3,95 2,96 5,24 3,29 2,97 4,77 Моноциты, % 5,30 4,40 6,60 5,40 4,50 7,40 6,60 4,17 7,50 Моноциты, 109/л 0,37 0,24 0,43 0,38 0,33 0,48 0,36 0,31 0,45 Лимфоциты, % 34,90 28,10 41,90 31,00 26,75 37,20 33,95 28,07 42,25 Лимфоциты, 109/л Т-лимфоциты (CD3+), % Т-лимфоциты (CD3+), 109/л В-лимфоциты (CD19+), % В-лимфоциты (CD19+), 109/л Т-хелперы (CD3+CD4+), % Т-хелперы (CD3+CD4+), 109/л Т-цитотокс. (CD3+CD8+), % Т-цитотокс. (CD3+CD8+), 109/л NK-клетки (CD3CD16+56+), % NK-клетки (CD3CD16+56+), 109/л CD3+HLA-DR+, % CD3+HLA-DR+, 109/л CD3+CD16+CD56+, % CD3+CD16+CD56+, 109/л 1,85 1,67 2,46 1,91 1,72 2,48 2,19 1,76 2,74 70,70 (2) 67,90 77,60 76,90 (1) 74,25 79,50 75,55 73,27 77,80 1,35 1,24 2,04 1,47 1,34 1,78 1,66 1,35 2,02 19,10 (3) 13,80 23,00 15,20 11,35 18,20 12,35 9,84 15,10 0,33 0,23 0,44 0,29 0,21 0,43 0,26 0,21 0,37 43,40 (2) 39,10 46,50 46,00 (1) 44,15 53,00 43,60 39,87 50,35 0,83 0,69 0,98 0,95 0,81 1,11 0,98 0,86 1,28 25,80 22,60 27,70 26,10 22,55 29,70 24,95 21,92 28,87 0,49 0,41 0,68 0,47 0,42 0,61 0,54 0,42 0,72 5,20 3,94 8,39 6,26 3,33 7,54 8,86 5,72 12,57 0,12 (3) 0,08 0,16 0,12 (3) 0,07 0,16 0,18 0,13 0,28 1,43 0,84 2,47 1,34 0,92 1,97 0,65 0,45 1,23 0,023 0,018 0,050 0,025 0,017 0,043 0,016 0,008 0,026 1,23 1,02 2,19 1,37 0,88 1,81 1,22 0,86 2,09 0,029 0,017 0,038 0,025 0,016 0,034 0,028 0,016 0,043 Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 136 Таблица 4.27 - Показатели, характеризующие фагоцитарную активность нейтрофилов и моноцитов, при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у подростков 15-18 лет в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Показатель Периоды обследования от начала заболевания 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=30) 2 (n=30) 3 (n=30) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиа 25% 75% на Фагоцитарная активность нейтрофилов, % Фагоцитарная активность нейтрофилов, 109/л Фагоцитарная активность моноцитов, % Фагоцитарная активность моноцитов, 109/л Бактерицидная активность лейкоцитов НСТ-тест спонтанный, % НСТ-тест стимулированный, % 92,50 86,80 95,20 91,50 85,30 95,50 92,30 87,25 94,25 3,09 2,33 4,02 3,58 2,69 4,48 3,06 2,79 3,97 82,40 70,80 89,20 75,40 72,25 85,05 81,10 77,45 87,40 0,271 0,200 0,374 0,303 0,227 0,360 0,303 0,231 0,392 38,40 29,05 45,62 32,10 28,60 41,10 36,60 31,45 45,52 11,00 9,00 20,00 11,00 5,00 18,50 13,50 11,00 16,00 16,00 1,00 25,00 20,00 10,50 25,50 16,50 13,00 21,25 Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 Содержание в периферической крови общих иммуноглобулинов основных классов не отличалось от группы сравнения. При этом содержание ЦИК было повышено по отношению к группе сравнения в течение всего периода наблюдения (таблица 4.29). Для оценки взаимосвязи иммунологических, клинических показателей и клеточного состава ЦСЖ с содержанием эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов рассчитаны парные коэффициенты корреляции Спирмена (Spearman, r). В первую декаду заболевания содержание Тh1 лимфоцитов коррелировало с абсолютным содержанием CD3+CD16+CD56+ лимфоцитов, содержанием других субпопуляций Тэффекторов. 137 Таблица 4.28 - Содержание Т-эффекторов при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у подростков 15-18 лет в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Показатель Периоды обследования от начала заболевания 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=30) 2 (n=30) 3 (n=30) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% СD3 IFN- , % 10,80 7,70 15,90 10,80 5,25 14,55 9,90 8,50 14,30 СD3 IFN- , 10 /л 189,24 141,17 377,34 186,69 110,23 296,85 232,83 191,45 309,08 СD3 TNF- , % 19,60 (3) 11,10 29,20 13,10 (3) 9,05 22,40 27,80 15,25 47,10 341,00 (3) 214,76 495,08 239,89 (3) 179,94 421,19 564,20 404,69 1039,3 7,10 (3) 3,40 12,40 3,90 (3) 2,15 7,15 21,50 11,25 30,10 152,66 (3) 57,31 270,19 66,05 (3) 39,55 125,36 408,62 287,08 641,49 1,70 (3) 1,30 2,40 1,60 (3) 0,45 2,95 0,40 0,20 0,55 30,54 (3) 15,38 47,01 31,68 (3) 9,92 49,88 7,61 5,12 11,90 0,30 0,25 1,25 0,90 0,65 0,95 0,60 0,30 0,95 5,91 4,18 17,87 22,22 16,39 22,38 14,11 8,67 23,15 6,22 4,00 9,18 4,86 2,11 6,86 5,30 4,42 6,40 СD3 CD4 IFN- , 10 /л 102,99 69,79 219,04 84,01 39,51 144,48 115,33 96,13 161,26 СD3 CD4 TNF- , % 15,46 (3) 7,80 22,27 8,77 (3) 6,36 15,44 19,74 11,78 33,93 СD3 CD4 TNF- , 106/л 252,19 (3) 153,35 396,41 160,73 (3) 117,26 296,77 443,83 289,67 836,08 СD3+CD4+IL-2+ , % 5,25 (3) 2,40 9,39 3,24 (3) 1,78 6,28 19,30 9,42 23,01 104,47 (3) 42,41 199,88 63,57 (3) 31,63 110,28 381,26 234,20 569,43 1,14 (3) 0,74 1,67 0,94 (3) 0,26 2,21 0,07 0,00 0,15 СD3 CD4 IL-4 , 10 /л 19,28 (3) 10,00 31,50 23,31 (3) 6,33 37,41 1,88 0,00 3,77 СD3 CD4 IL-17А , % 0,17 0,16 0,95 0,45 0,42 0,48 0,14 0,07 0,29 СD3 CD4 IL-17A , 106/л 5,02 3,16 14,31 11,27 10,91 11,41 3,33 1,47 6,91 СD3+CD8+IFN-+ , % 4,50 3,40 6,36 4,18 2,63 5,83 4,22 3,35 6,54 СD3+CD8+IFN-+, 106/л 80,90 59,64 150,94 81,66 53,14 128,29 89,97 68,56 156,32 СD3+CD8+TNF-+ , % 3,60 2,41 5,37 3,40 2,56 5,40 4,58 3,20 7,79 СD3 CD8 TNF- , 106/л 79,88 45,10 102,79 65,73 49,79 109,42 96,10 68,67 215,31 СD3+CD8+IL-2+ , % 0,60 (3) 0,30 0,87 0,62 (3) 0,25 1,18 1,54 1,17 3,52 СD3+CD8+IL-2+,106/л 9,83 (3) 5,33 18,28 12,25 (3) 4,57 20,79 34,10 20,55 89,38 СD3+CD8+IL-4+, % 0,25 (3) 0,10 0,32 0,42 (3) 0,08 0,73 0,07 0,00 0,14 СD3+CD8+IL-4+ , 106/л 4,08 (2) 1,91 6,53 8,29 (1,3) 2,18 12,80 1,66 0,00 3,27 СD3+CD8+IL-17А+, % 0,08 0,04 0,28 0,08 0,04 0,13 0,21 0,14 0,31 СD3+CD8+IL-17A+ , 106/л 0,66 0,33 3,65 2,11 1,06 3,31 4,73 2,88 7,38 + + + + + 6 + СD3 TNF- , 10 /л + + 6 СD3 IL-2 , % + + СD3 IL-2 ,10 /л + + 6 СD3 IL-4 , % + + СD3 IL-4 , 10 /л + + 6 СD3 IL-17А , % + + СD3 IL-17A , 10 /л + + 6 СD3 CD4 IFN- , % + + + + + + + + + 6 + + + СD3 CD4 IL-2 ,10 /л + + + 6 СD3 CD4 IL-4 , % + + + + + + + + + + + + 6 + + + Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 138 Таблица 4.29 - Содержание гуморальных факторов иммунитета в периферической крови при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у подростков 15-18 лет в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Показатель Периоды обследования от начала заболевания 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=30) 2 (n=30) 3 (n=30) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% IgA, г/л 1,30 1,02 1,77 1,30 1,00 1,75 1,85 1,37 2,50 IgM, г/л 1,60 1,25 2,00 1,80 1,50 2,05 1,90 1,30 1,92 IgG, г/л 10,20 8,30 12,65 11,40 9,25 11,85 12,60 10,85 14,15 ЦИК, ед. 71,00 (3) 49,00 86,00 63,00 (3) 58,00 78,50 26,00 17,50 36,50 TNF-, пг/мл 2,94 2,11 2,97 7,66 (3) 3,54 13,87 2,94 1,62 3,98 IFN-, пг/мл 14,00 (3) 6,04 19,95 12,70 (3) 10,07 15,27 0,00 0,00 3,78 IL-1, пг/мл 0,98 0,00 1,02 2,50 0,84 3,40 0,00 0,00 2,59 IL-6, пг/мл 3,40 0,00 11,04 3,30 2,68 4,25 2,99 2,42 3,91 IL-8, пг/мл 0,00 0,00 5,55 0,95 0,00 10,75 7,55 3,98 10,48 IL-4, пг/мл 0,29 (3) 0,00 0,72 1,04 (3) 0,16 1,95 2,82 2,03 3,26 IL-10, пг/мл 9,02 7,53 10,52 9,11 7,44 11,21 8,94 5,28 14,31 IL-2, пг/мл 3,61 0,00 8,43 9,00 5,57 9,53 6,35 4,81 7,29 IL-17, пг/мл 4,26 4,20 5,61 3,59 2,88 4,62 5,81 4,58 8,05 IL-18, пг/мл 244,30 (3) 133,9 264,00 185,00 126,25 244,50 104,70 70,43 141,95 Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 Содержание TNF-+ Т-хелперов коррелировало с длительностью заболевания, продолжительностью лихорадочного периода и регистрации ригидности ЗМ. Содержание Тh2 клеток коррелировало с абсолютным содержанием в периферической крови моноцитов и других субпопуляций Т-эффекторов (таблица 4.30). В первую декаду заболевания содержание Тс1 лимфоцитов (IFN-+, TNF-+) коррелировало с абсолютным содержанием NK, других субпопуляций Т-эффекторов. Положительная корреляционная связь установлена между уровнем Tс2 лимфоцитов и длительностью заболевания и госпитализации (таблица 4.31). Во вторую декаду заболевания содержание IFN-+ и TNF-+Т-хелперов коррелировало с абсолютным содержанием гранулоцитов и их поглотительной активностью, содержанием других субпопуляций Т-эффекторов. 139 Таблица 4.30 - Взаимосвязь иммунологических и клинических показателей с содержанием эффекторных субпопуляций CD4+ Т-лимфоцитов в 1-10 сутки заболевания энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом у подростков 15-18 лет, (Spearman, r), n=30 Показатели IFN-+, 106/л p TNF-+, 106/л p IL-4+, 106/л p Th1/Th2 p Моноциты, 109/л NK-клетки (CD3CD16+56+), 109/л CD3+CD16+CD56+, 109/л СD3+CD4+IFN-+, 106/л СD3+CD4+TNF-+ , 106/л СD3+CD4+IL-4+ , 106/л СD3+CD8+IFN-+, 106/л СD3+CD8+TNF-+ , 106/л СD3+CD8+IL-4+ , 106/л Длительность заболевания, сутки Длительность лихорадки, сутки Ригидность ЗМШ, длительность, сутки 0,2813 0,1470 0,2414 0,2159 0,5036 0,0063 -0,3465 0,0709 0,3093 0,1093 0,4587 0,0141 -0,0635 0,7482 0,2841 0,1429 0,4849 0,0089 0,4012 0,0343 0,5255 0,0041 -0,1724 0,3803 - - 0,8276 0,0000 0,4291 0,0227 0,2956 0,1268 0,8276 0,0000 - - 0,2868 0,1389 0,2846 0,1421 0,4291 0,0227 0,2868 0,1389 - - -0,6749 0,0001 0,8894 0,0000 0,7756 0,0000 0,3842 0,0435 0,2611 0,1796 0,7105 0,0000 0,7816 0,0000 0,1489 0,4496 0,4220 0,0253 0,3952 0,0374 0,2854 0,1410 0,8260 0,0000 -0,4907 0,0080 0,4760 0,0624 0,5203 0,0388 0,3045 0,2515 0,1329 0,6110 0,3514 0,1820 0,5467 0,0284 -0,0135 0,9604 0,3798 0,1326 0,3680 0,1607 0,5162 0,0407 0,0180 0,9474 0,3340 0,1901 Таблица 4.31 - Взаимосвязь иммунологических и клинических показателей с содержанием эффекторных субпопуляций CD8+ Т-лимфоцитов в 1-10 сутки заболевания энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом у подростков 15-18 лет, (Spearman, r), n=30 Показатели NK-клетки (CD3CD16+56+), 109/л НСТ-тест спонтанный, % CD3+CD16+CD56+, 109/л СD3+CD4+IFN-+, 106/л СD3+CD4+TNF-+ , 106/л СD3+CD4+IL-4+ , 106/л СD3+CD8+IFN-+, 106/л IFN-+, 106/л p TNF-+, 106/л p IL-4+, 106/л p Tс1/Tс2 p 0,3793 0,0465 0,4888 0,0083 -0,1476 0,4534 0,4506 0,0309 0,1585 0,4299 0,0768 0,7035 -0,4394 0,0218 0,5592 0,0055 0,5703 0,0015 0,4773 0,0102 0,4665 0,0123 0,0988 0,6537 0,8894 0,0000 0,7105 0,0000 0,3952 0,0374 0,6285 0,0013 0,7756 0,0000 0,7816 0,0000 0,2854 0,1410 0,5603 0,0054 0,3842 0,0435 0,1489 0,4496 0,8260 0,0000 -0,2984 0,1666 - - 0,7958 0,0000 0,2860 0,1402 0,5998 0,0025 140 Продолжение таблицы 4.31 Показатели СD3+CD8+TNF-+ , 106/л СD3+CD8+IL-4+ , 106/л Длительность заболевания, сутки Длительность госпитализации, сутки Ригидность ЗМ, длительность, сутки IFN-+, 106/л p TNF-+, 106/л p IL-4+, 106/л p Tс1/Tс2 p 0,7958 0,0000 - - 0,0933 0,6368 0,5138 0,0121 0,2860 0,1402 0,0933 0,6368 - - -0,5178 0,0114 0,3858 0,1400 0,4878 0,0553 0,5662 0,0222 -0,1132 0,6652 0,1658 0,5394 0,3035 0,2532 0,6144 0,0113 -0,2834 0,2703 0,2603 0,3302 0,5027 0,0472 0,2828 0,2886 0,0288 0,9127 Отрицательные коэффициенты корреляции связывали содержание Th1 клеток с уровнем общих IgM антител и ЦИК (таблица 4.32). Таблица 4.32 - Взаимосвязь иммунологических и клинических показателей с содержанием эффекторных субпопуляций CD4+ Т-лимфоцитов в 11-20 сутки заболевания энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом у подростков 15-18 лет, (Spearman, r), n=30 Показатели IFN-+, 106/л p TNF-+, 106/л p IL-4+, 106/л p Th1/Th2 p Гранулоциты, 109/л IgA, г/л 0,4081 -0,1807 -0,3270 -0,4187 0,0532 0,4092 0,1278 0,0468 0,6107 -0,2226 -0,4414 -0,4598 0,0020 0,3074 0,0350 0,0273 -0,0870 -0,4367 -0,2864 0,0267 0,6932 0,0372 0,1853 0,9037 0,3336 0,3633 0,1784 -0,2715 0,1198 0,0884 0,4154 0,2101 0,3923 0,0641 0,5968 0,0026 -0,1067 0,6279 0,3568 0,0947 -0,0217 0,9216 0,0198 0,9287 0,4427 0,0344 -0,4304 0,0403 0,3370 0,1159 0,2717 0,2097 - - -0,8342 0,0000 0,8804 0,0000 0,7628 0,0000 0,3686 0,0835 0,1102 0,6167 0,7480 0,0000 0,7974 0,0000 0,2905 0,1787 0,1829 0,4037 0,4160 0,0483 0,3145 0,1438 0,8886 0,0000 -0,7208 0,0001 IgM, г/л ЦИК, ед. Фагоцитарная активность нейтрофилов, 109/л CD3+CD16+CD56+, 109/л СD3+CD4+IL-4+ , 106/л СD3+CD8+IFN-+, 106/л СD3+CD8+TNF-+ , 106/л СD3+CD8+IL-4+ , 106/л Во вторую декаду заболевания содержание цитотоксических Т-лимфоцитов первого типа (IFN-+, TNF-+) коррелировало с абсолютным содержанием гранулоцитов и их поглотительной активностью, содержанием других субпопуляций Т-эффекторов; отрицательные коэффициенты корреляции связывали содержание Tс1 клеток с уровнем ЦИК (таблица 4.33). 141 Таблица 4.33 - Взаимосвязь иммунологических и клинических показателей с содержанием эффекторных субпопуляций CD8+ Т-лимфоцитов в 11-20 сутки заболевания энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом у подростков 15-18 лет, (Spearman, r), n=30 Показатели CD8+ IFN-+, 106/л p CD8+ TNF-+, 106/л p CD8+ IL-4+, 106/л p Tс1/Tс2 p Гранулоциты, 109/л IgM, г/л 0,3696 -0,3433 -0,4855 0,0826 0,1087 0,0188 0,5148 -0,2809 -0,3425 0,0119 0,1942 0,1097 -0,0297 -0,4477 -0,1203 0,8929 0,0322 0,5845 0,3105 0,0704 -0,1185 0,1957 0,7745 0,6289 0,3162 0,1416 0,4862 0,0187 -0,0649 0,7687 0,3088 0,1984 0,8804 0,0000 0,7480 0,0000 0,4160 0,0483 0,4386 0,0603 0,7628 0,0000 0,7974 0,0000 0,3145 0,1438 0,4702 0,0422 0,3686 0,5211 0,0835 0,0108 0,2905 0,2912 0,1787 0,1776 0,8886 - 0,0000 - -0,7684 -0,7702 0,0001 0,0001 ЦИК, ед. Фагоцитарная активность нейтрофилов, 109/л СD3+CD4+IFN-+, 106/л СD3+CD4+TNF-+ , 106/л СD3+CD4+IL-4+ , 106/л СD3+CD8+IL-4+ , 106/л Иммунологическая характеристика энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у взрослых ЭВИ с СМ у взрослых не сопровождалась какими-либо значимыми изменениями содержания лимфоцитов, гранулоцитов и моноцитов (таблица 4.34). Показатели поглотительной активности моноцитов и нейтрофилов значимо не отличались от параметров группы сравнения. Показатели тестов, характеризующих состояние НАДФ-Н2-оксидазной системы нейтрофилов, были повышены в 1-20 сутки от начала заболевания. Общая бактерицидная активность лейкоцитов также повышена в 1-10 сутки от начала заболевания (таблица 4.35). В остром периоде ЭВИ с СМ у взрослых 19-45 лет увеличивалось относительное содержание В-лимфоцитов. Абсолютное количество этих клеток повышалось по отношению к группе сравнения в 1-10 сутки от начала заболевания. Не изменялось в динамике острого периода заболевания относительное и абсолютное содержание Тхелперных и Т-цитотоксических лимфоцитов, а также значение иммунорегуляторного индекса. Относительное и абсолютное содержание NK в периферической крови было снижено в течение всего острого периода (таблица 4.34). 142 Таблица 4.34 - Показатели гемо- и иммуноцитограммы при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у взрослых пациентов (19-45 лет) в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Показатель Периоды обследования от начала заболевания 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=25) 2 (n=25) 3 (n=45) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% Лейкоциты, 109/л 6,20 5,22 7,52 5,40 4,80 7,67 7,12 5,32 7,10 Гранулоциты, % 62,95 53,55 68,72 61,50 60,05 69,62 61,50 56,70 65,85 Гранулоциты, 109/л 3,94 2,89 4,91 3,67 2,74 4,69 3,85 2,93 4,25 Моноциты, % 6,45 4,45 8,22 5,85 4,97 6,80 6,30 5,30 8,00 Моноциты, 109/л 0,39 0,32 0,46 0,36 0,28 0,43 0,37 0,28 0,49 Лимфоциты, % 30,15 26,25 38,52 31,95 24,52 33,92 32,35 29,62 35,60 Лимфоциты, 109/л 1,89 1,43 2,31 1,74 1,51 1,97 1,91 1,62 2,29 Т-лимфоциты (CD3+), % Т-лимфоциты (CD3+), 109/л В-лимфоциты (CD19+), % В-лимфоциты (CD19+), 109/л Т-хелперы (CD3+CD4+), % Т-хелперы (CD3+CD4+), 109/л Т-цитотокс. (CD3+CD8+), % Т-цитотокс. (CD3+CD8+), 109/л NK-клетки (CD3CD16+56+), % NK-клетки (CD3CD16+56+), 109/л 75,25 71,70 79,45 77,15 71,70 81,25 76,05 69,95 80,20 1,42 1,08 1,80 1,38 1,14 1,43 1,38 1,18 1,72 13,60 (3) 11,10 18,50 12,20 (3) 10,10 15,42 8,48 6,56 11,40 0,24(3) 0,16 0,35 0,20 0,15 0,27 0,17 0,11 0,22 44,95 38,62 50,15 46,25 42,10 50,47 45,00 39,02 48,87 0,78 0,51 1,01 0,88 0,69 0,96 0,85 0,69 1,03 25,35 20,82 30,45 25,65 21,05 26,80 25,10 20,65 29,82 0,45 0,35 0,63 0,41 0,38 0,48 0,48 0,37 0,59 8,18(3) 5,46 12,17 6,83 (3) 5,05 9,85 11,40 8,41 16,07 0,15 (3) 0,10 0,19 0,13 (3) 0,09 0,22 0,20 0,14 0,34 2,22 0,70 3,46 1,40 0,89 2,77 1,49 0,87 2,35 0,032 0,015 0,056 0,026 0,015 0,045 0,026 0,014 0,053 1,87 1,12 3,13 1,90 1,11 3,11 2,78 1,55 4,72 0,029 0,019 0,046 0,032 0,022 0,048 0,051 0,027 0,093 CD3+HLA-DR+, % + + CD3 HLA-DR , 109/л CD3+CD16+CD56+, % CD3+CD16+CD56+, 109/л Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 Изменение относительного и абсолютного содержания основных субпопуляций CD4+ Т-эффекторов в остром периоде ЭВИ с СМ у взрослых пациентов не характеризовалось значимым повышением относительного и абсолютного содержания Th1 лимфоцитов. Абсолютное содержание Т-хелперов, экспрессирующих IFN-γ и TNF-α, снижалось во вторую декаду заболевания. Количество IL-2- 143 положительных Т-хелперов было снижено на протяжении всего периода обследования. Относительное и абсолютное содержание Th2 лимфоцитов значимо увеличивалось и оставалось повышенным на протяжении 20 суток от начала заболевания (таблица 4.36). Численность Tс1 лимфоцитов при ЭВИ с СМ у взрослых до 45 лет значимо снижалась во вторую декаду заболевания. Таблица 4.35. - Показатели, характеризующие фагоцитарную активность нейтрофилов и моноцитов, при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у взрослых пациентов (19-45 лет) в динамике острого периода заболевания, Ме (LQUQ) Показатель Периоды обследования от начала заболевания Фагоцитарная активность нейтрофилов, % Фагоцитарная активность нейтрофилов, 109/л Фагоцитарная активность моноцитов, % Фагоцитарная активность моноцитов, 109/л Бактерицидная активность лейкоцитов НСТ-тест спонтанный, % НСТ-тест стимулированный, % 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=25) 2 (n=25) 3 (n=45) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% 95,8 87,97 96,52 89,8 86,5 93,7 92,55 89,22 94,9 3,79 2,76 4,33 3,07 2,55 4,15 3,45 2,72 3,82 84,4 72,57 88,67 73,90 63,70 80,70 79,55 74,55 86,32 0,33 0,19 0,40 0,24 0,19 0,32 0,28 0,22 0,39 42,5 30,7 48,9 36,8 23,9 43,3 33,5 22,97 39,7 9,5 (3) 3,7 15,5 9(3) 5 15 4 3 6 16 (3) 12,5 22,5 14(3) 7 27 8 5 12 Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 Количество Tc2 лимфоцитов увеличивалось с первой декады заболевания до конца периода обследования. Абсолютное содержание Th17 и Tnc17 лимфоцитов у взрослых значимо не изменялось на протяжении всего периода наблюдения. Изменение численности Т-лимфоцитов-эффекторов в периферической крови сопровождалось значимым увеличением концентрации IFN- и IL-6 на протяжении 144 всего периода обследования. В 1-10 сутки от начала заболевания зарегистрирован повышенный уровень IL-18. Таблица 4.36 - Содержание Т-эффекторов при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у взрослых пациентов (19-45 лет) в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Показатель Периоды обследования от начала заболевания 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=25) 2 (n=25) 3 (n=45) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% СD3 IFN- , % 18,20 13,35 22,80 12,40(3) 6,37 17,65 18,28 12,51 21,33 СD3 IFN- , 10 /л 326,39 256,00 386,39 255,06(3) 116,44 305,29 318,42 213,13 434,02 СD3 TNF- , % 30,80 25,10 34,95 14,20(3) 13,55 27,70 37,10 31,57 45,65 СD3 TNF- , 10 /л 462,28(3) 397,81 638,40 292,77(3) 224,64 476,66 736,67 521,13 942,19 СD3 IL-2 , % 15,00 (3) 7,55 23,70 8,10 (3) 4,57 12,52 27,50 21,82 34,45 СD3 IL-2 ,10 /л 210,10 (3) 144,54 385,85 115,29 (3) 67,53 233,55 522,62 328,97 650,82 1,80 (3) 0,70 2,35 2,10 (3) 0,77 2,90 0,70 0,40 1,10 30,77 (3) 11,44 48,15 35,20 (3) 14,54 45,13 12,73 5,86 21,00 0,65 0,37 1,02 0,90 0,40 1,00 0,50 0,30 0,70 12,71 7,34 16,63 21,97 10,56 22,22 10,61 5,49 13,17 8,85 6,50 12,04 5,80 4,16 9,31 8,76 6,84 10,13 СD3 CD4 IFN- , 10 /л 158,72 121,55 224,03 126,29(3) 59,63 159,91 171,66 116,25 204,57 СD3 CD4 TNF- , % 24,20 18,18 27,34 10,15(3) 9,85 19,60 27,15 22,45 32,71 СD3 CD4 TNF- , 106/л 328,51 282,78 539,57 246,41(3) 160,37 348,55 547,29 373,86 646,93 СD3+CD4+IL-2+ , % 13,54 (3) 6,36 20,74 6,97 (3) 4,42 10,75 22,50 17,15 29,69 СD3 CD4 IL-2 ,10 /л 191,81 (3) 121,74 349,75 101,80(3) 63,61 206,88 429,68 274,81 567,83 1,30 (3) 0,51 1,79 1,17 (3) 0,35 2,12 0,31 0,14 0,55 СD3 CD4 IL-4 , 10 /л 22,46 (3) 8,36 31,03 15,53 (3) 4,69 32,06 5,73 2,20 10,50 СD3 CD4 IL-17А , % 0,44(3) 0,16 0,77 0,45 0,40 0,52 0,23 0,09 0,32 СD3 CD4 IL-17A , 106/л 7,61 2,70 12,14 11,27 10,56 11,55 4,59 2,40 5,83 СD3+CD8+IFN-+ , % 5,80 4,87 8,29 4,90(3) 3,05 6,73 6,96 4,32 10,28 СD3+CD8+IFN-+, 106/л 109,11 83,46 135,30 91,28(3) 43,57 119,40 134,86 86,42 199,35 СD3+CD8+TNF-+ , % 5,94 4,64 8,39 3,80(3) 3,41 6,53 7,30 4,50 9,01 СD3 CD8 TNF- , 106/л 100,51 91,44 117,11 76,33(3) 57,29 117,19 131,75 93,43 181,84 СD3+CD8+IL-2+ , % 1,40 0,82 2,87 1,09(3) 0,73 1,69 2,05 1,33 3,07 СD3+CD8+IL-2+,106/л 25,11 16,41 40,99 15,67(3) 10,47 29,66 39,68 25,41 63,22 СD3+CD8+IL-4+, % 0,44 (3) 0,21 0,60 0,52 (3) 0,14 0,75 0,08 0,06 0,154 СD3+CD8+IL-4+ , 106/л 6,37 (3) 3,94 12,50 7,43 (3) 2,46 11,78 1,81 0,87 3,23 СD3+CD8+IL-17А+, % 0,09 0,07 0,25 0,08 0,08 0,18 0,08 0,07 0,12 СD3+CD8+IL-17A+ , 106/л 1,69 0,85 4,08 2,11 1,47 3,38 1,48 1,11 2,79 + + + + + + + + + 6 + 6 + + 6 СD3 IL-4 , % + + СD3 IL-4 , 10 /л + + 6 СD3 IL-17А , % + + СD3 IL-17A , 10 /л + + 6 СD3 CD4 IFN- , % + + + + + + + + + + + + + 6 + + 6 СD3 CD4 IL-4 , % + + + + + + + + + + + + 6 + + + Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 145 Таблица 4.37 - Содержание гуморальных факторов иммунитета в периферической крови при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у взрослых пациентов (19-45 лет) в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Показатель Периоды обследования от начала заболевания 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=25) 2 (n=25) 3 (n=45) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% IgA, г/л 1,55 1,10 2,72 2,00 1,40 2,60 2,15 1,4 3,02 IgM, г/л 1,60 1,15 2,47 2,30(3) 1,90 2,70 1,6 0,92 2,1 IgG, г/л 11,00 8,15 14,30 10,80 9,40 13,50 12,7 9,85 15,3 ЦИК, ед. 69 (3) 45,50 94 80 (3) 53 114 23 20 35 TNF-, пг/мл 2,12 1,35 4,01 2,45 1,62 12,73 1,41 0,34 2,68 IFN-, пг/мл 12,45 (3) 9,06 14,91 15,18 (3) 12,29 17,76 3,41 0,27 7,48 IL-1, пг/мл 1,56 0,85 3,26 1,53 0,42 2,88 1,71 0,88 2,58 IL-6, пг/мл 11,04 (3) 1,63 14,41 4,85 (3) 2,48 9,76 0 0 1,96 IL-8, пг/мл 3,51 0,78 6,92 5,34 3,78 8,73 4,59 1,79 8,55 IL-4, пг/мл 0,15 0,00 0,65 0,08 0,05 0,58 0 0 0,75 IL-10, пг/мл 5,50 4,47 8,66 9,11 6,46 9,88 9,58 5,57 13,73 IL-2, пг/мл 5,99 0,47 12,50 3,52 1,86 6,88 4,11 1,02 5,75 IL-17, пг/мл 3,94 2,75 5,38 3,57 2,73 4,80 7,5 2,61 10,55 IL-18, пг/мл 219,65 121,22 263,25 162,30 106,77 233,02 96,16 68,77 125,2 (3) Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 Содержание общих иммуноглобулинов IgG, IgA классов не отличалось от группы сравнения. Уровень общих IgM антител увеличивался на 11-20 сутки от начала заболевания. Содержание ЦИК было повышено по отношению к группе сравнения в течение всего периода наблюдения (таблица 4.37). Для оценки взаимосвязи иммунологических, клинических показателей и клеточного состава ЦСЖ с содержанием эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов рассчитаны парные коэффициенты корреляции Спирмена (Spearman, r). В первую декаду заболевания содержание IFN-+ и TNF-+Т-хелперов коррелировало с абсолютным содержанием моноцитов, цитотоксических Т- лимфоцитов, содержанием других субпопуляций Т-эффекторов, относительным 146 содержанием лимфоцитов в ЦСЖ (1-10 сутки). Содержание Тh2 клеток коррелировало с бактерицидной активностью лейкоцитов (таблица 4.38). Таблица 4.38 - Взаимосвязь иммунологических, клинических показателей и клеточного состава цереброспинальной жидкости с содержанием эффекторных субпопуляций CD4+ Т-лимфоцитов в 1-10 сутки заболевания энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом у взрослых19-45 лет, (Spearman, r), n=25 Показатели IFN-+, 106/л p TNF-+, 106/л p IL-4+, 106/л p Th1/Th2 p Моноциты, 109/л Т-цитотокс. (CD3+CD8+), 109/л ЦИК, ед. Бактерицидная активность лейкоцитов, % Фагоцитарная активность моноцитов, 109/л CD3+CD16+CD56+, 109/л СD3+CD4+IFN-+, 106/л СD3+CD4+TNF-+ , 106/л СD3+CD4+IL-4+ , 106/л СD3+CD8+IFN-+, 106/л СD3+CD8+TNF-+ , 106/л СD3+CD8+IL-4+ , 106/л Ригидность ЗМ, см Содержание нейтрофилов в ЦСЖ в 1-10 сутки, % Содержание лимфоцитов в ЦСЖ в 1-10 сутки, % 0,4279 0,0417 0,1937 0,3759 0,1571 0,4740 0,0296 0,8932 0,4279 0,0417 0,4881 0,0181 0,3142 0,1442 -0,0494 0,8229 0,0751 0,7333 -0,4844 0,0192 0,2304 0,2903 -0,2308 0,2893 -0,1350 0,5492 0,0723 0,7492 0,5705 0,0056 -0,6032 0,0030 0,0776 0,7249 0,1226 0,5775 -0,4304 0,0403 0,4601 0,0272 0,3093 0,1510 0,6630 0,0006 -0,1245 0,5714 0,2075 0,3421 - - 0,4377 0,0367 0,2144 0,3259 0,2213 0,3101 0,4377 0,0367 - - 0,0326 0,8826 0,1887 0,3884 0,2144 0,3259 0,0326 0,8826 - - -0,8508 0,0000 0,7016 0,0002 0,4437 0,0340 0,1403 0,5231 0,2569 0,2366 0,6996 0,0002 0,5593 0,0055 0,1156 0,5994 0,2500 0,2499 0,3642 -0,3189 0,0875 0,2287 -0,1255 -0,0997 0,5682 0,7132 0,5723 0,3826 0,0043 0,1435 -0,4166 -0,6017 0,0480 0,0137 -0,5151 0,0411 -0,1742 0,5188 -0,0812 0,7650 -0,1653 0,5406 0,5170 0,0336 0,2579 0,3177 -0,0148 0,9550 0,2517 0,3298 В первую декаду заболевания содержание Тс1 лимфоцитов (IFN-+, TNF-+) коррелировало с абсолютным содержанием моноцитов и их поглотительной активностью, содержанием других субпопуляций Т-эффекторов и относительным содержанием лимфоцитов в ЦСЖ (1-10 сутки). Отрицательная корреляционная связь установлена между уровнем Tс2 лимфоцитов и содержанием гранулоцитов в периферической крови и уровнем их фагоцитарной активности (таблица 4.39). 147 Таблица 4.39 - Взаимосвязь иммунологических, клинических показателей и клеточного состава цереброспинальной жидкости с содержанием эффекторных субпопуляций CD8+ Т-лимфоцитов в 1-10 сутки заболевания энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом у взрослых 19-45 лет, (Spearman, r), n=25 Показатели Моноциты, 109/л 9 Нейтрофилы, 10 /л Фагоцитарная активность моноцитов, 109/л Фагоцитарная активность нейтрофилов, 109/л CD3+CD16+CD56+, 109/л СD3+CD4+IFN-+, 106/л СD3+CD4+TNF-+ , 106/л СD3+CD4+IL-4+ , 106/л СD3+CD8+IFN-+, 106/л СD3+CD8+TNF-+ , 106/л СD3+CD8+IL-4+ , 106/л Содержание нейтрофилов в ЦСЖ в 1-10 сутки, % Содержание лимфоцитов в ЦСЖ в 1-10 сутки, % Содержание лейкоцитов в ЦСЖ в 11-20 сутки, 106/л IFN-+, 106/л p TNF-+, 106/л p IL-4+, 106/л p Tс1/Tс2 p 0,6423 -0,2292 0,0010 0,2927 0,5395 -0,2619 0,0079 0,2274 0,3741 -0,5441 0,0786 0,0073 -0,1234 0,0701 0,5942 0,7626 0,5781 0,0039 0,4792 0,0207 0,3341 0,1192 -0,1377 0,5518 -0,2194 0,3146 -0,2312 0,2884 -0,5194 0,0111 0,0403 0,8624 0,0929 0,6734 0,4150 0,0489 -0,2837 0,1896 0,1753 0,4472 0,7016 0,0002 0,6996 0,0002 0,3642 0,0875 -0,0571 0,8057 0,4437 0,0340 0,5593 0,0055 -0,1255 0,5682 0,0338 0,8845 0,1403 0,5231 0,1156 0,5994 0,5723 0,0043 -0,5597 0,0083 - - 0,7964 0,0000 0,4339 0,0386 0,1117 0,6298 0,7964 0,0000 - - 0,4304 0,0403 0,0429 0,8537 0,4339 0,0386 0,4304 0,0403 - - -0,6260 0,0024 -0,5683 0,0216 -0,2376 0,3755 -0,3072 0,2471 0,3425 0,2306 0,6144 0,0087 0,3307 0,1948 0,2062 0,4272 -0,1587 0,5721 0,3916 0,1200 0,5296 0,0288 0,3892 0,1226 -0,5207 0,0386 Во вторую декаду заболевания содержание IFN-+ и TNF-+Т-хелперов коррелировало с абсолютным фагоцитарной активностью, содержанием содержанием моноцитов, нейтрофилов цитотоксических и их Т-лимфоцитов, активированных Т-лимфоцитов, содержанием других субпопуляций Т-эффекторов (таблица 4.40). 148 Таблица 4.40 - Взаимосвязь иммунологических, клинических показателей и клеточного состава цереброспинальной жидкости с содержанием эффекторных субпопуляций CD4+ Т-лимфоцитов в 11-20 сутки заболевания энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом у взрослых19-45 лет, (Spearman, r), n=25 Показатели IFN-+, 106/л p TNF-+, 106/л p IL-4+, 106/л p Th1/Th2 p Моноциты, 109/л Нейтрофилы, 109/л Т-цитотокс. (CD3+CD8+), 109/л CD3+HLA-DR+, 109/л Фагоцитарная активность моноцитов, 109/л Фагоцитарная активность нейтрофилов, 109/л СD3+CD4+IFN-+, 106/л СD3+CD4+TNF-+ , 106/л СD3+CD4+IL-4+ , 106/л СD3+CD8+IFN-+, 106/л СD3+CD8+TNF-+ , 106/л СD3+CD8+IL-4+ , 106/л Содержание лейкоцитов в ЦСЖ в 1-10 сутки, 106/л 0,4840 0,3407 0,0795 0,2333 0,7151 0,6088 0,0040 0,0209 0,0858 0,0462 0,7705 0,8755 0,0946 0,1033 0,7477 0,7253 0,2132 0,4643 0,6044 0,0221 0,1033 0,7253 0,0286 0,9228 0,8110 0,0004 0,6308 0,0156 -0,1253 0,6696 0,4066 0,1491 0,6264 0,0165 0,7099 0,0045 0,1473 0,6154 0,0637 0,8286 0,3099 0,2809 0,6000 0,0233 -0,0198 0,9465 0,1385 0,6369 - - 0,8022 0,0006 0,0813 0,7823 0,3011 0,2955 0,8022 0,0006 - - -0,0901 0,7593 0,4242 0,1306 0,0813 0,7823 -0,0901 0,7593 - - -0,8901 0,0000 0,5736 0,0320 0,5956 0,0246 0,3407 0,2333 -0,0681 0,8170 0,7055 0,0048 0,8330 0,0002 -0,0330 0,9109 0,2967 0,3030 0,2484 0,3919 0,1209 0,6806 0,5604 0,0371 -0,4637 0,0949 -0,5516 0,0408 -0,3055 0,2882 0,2659 0,3581 -0,4725 0,0880 Во вторую декаду заболевания содержание Т-цитотоксических лимфоцитов первого типа (IFN-+, TNF-+) коррелировало с абсолютным содержанием моноцитов и нейтрофилов и их поглотительной активностью, содержанием других субпопуляций Т-эффекторов. Положительная корреляционная связь отмечена между содержанием в периферической крови Тс2 клеток и степенью выраженностью симптома Кернига (таблица 4.41). 149 Таблица 4.41 - Взаимосвязь иммунологических и клинических показателей с содержанием эффекторных субпопуляций CD8+ Т-лимфоцитов в 11-20 сутки заболевания энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом у взрослых 19-45 лет, (Spearman, r), n=25 Показатели IFN-+, 106/л p TNF-+, 106/л p IL-4+, 106/л p Tс1/Tс2 p Моноциты, 109/л 0,7085 0,4813 -0,5655 0,0046 0,0814 0,0351 0,7701 0,6264 -0,4334 0,0013 0,0165 0,1216 0,2860 -0,0374 -0,3982 0,3215 0,8991 0,1585 0,0578 0,3736 0,0468 0,8513 0,2086 0,8794 0,6791 0,0076 0,6967 0,0056 0,3758 0,1854 -0,0824 0,7890 0,4505 0,1059 0,5912 0,0260 -0,1033 0,7253 0,4176 0,1557 0,5736 0,0320 0,7055 0,0048 0,2484 0,3919 0,1758 0,5656 0,5956 0,0246 0,8330 0,0002 0,1209 0,6806 0,3736 0,2086 0,3407 0,2333 -0,0330 0,9109 0,5604 0,0371 -0,2747 0,3637 - - 0,8242 0,0003 0,5604 0,0371 -0,0549 0,8585 0,8242 0,0003 - - 0,3363 0,2398 0,0934 0,7615 0,5604 0,3719 0,0371 0,2601 0,3363 -0,0653 0,2398 0,8487 0,7689 0,0057 -0,8626 -0,5176 0,0001 0,1029 Нейтрофилы, 109/л ЦИК, ед. Фагоцитарная активность моноцитов, 109/л Фагоцитарная активность нейтрофилов, 109/л СD3+CD4+IFN-+, 106/л СD3+CD4+TNF-+ , 106/л СD3+CD4+IL-4+ , 106/л СD3+CD8+IFN-+, 106/л СD3+CD8+TNF-+ , 106/л СD3+CD8+IL-4+ , 106/л С.Кернига 4.3. Значение абсолютной интегрированной средней интенсивности флюоресценции цитокинов у детей с энтеровирусными менингитами Оценка средней интенсивности флюоресценции цитокинов (СИФЦ) в остром периоде ЭВИ с СМ в возрастных группах 4-7 и 8-14-летних детей показала, что выявленные при обследовании групп сравнения возрастные отличия в среднем содержании цитокинов, имеют место и в отношении цитокиновой экспрессии при ЭВИ с СМ. По сравнению с детьми старшего возраста у детей 4-7 лет наблюдали более низкую среднюю интенсивность флюоресценции CD3+CD4+IFN-+, CD3+CD4+TNF-α+ и CD3+CD8+TNF-α+ лимфоцитарных субпопуляций (таблица 4.42). Повышение среднего содержание цитокинов по сравнению с группами сравнения характеризовало TNF-α-положительную субпопуляцию Т-хелперов у детей 8-14 лет и IFN--положительные Т-цитотоксические лимфоциты у детей 4-7 лет. 150 Таблица 4.42 - Средняя интенсивность флюоресценции, Ме (LQ-UQ) Субпопуляции Т-лимфоцитов CD3+CD4+IFN-+ CD3+CD4+TNF-α+ CD3+CD4+IL-2+ CD3+CD4+IL-4+ CD3+CD8+IFN-+ CD3+CD8+TNF-α+ CD3+CD8+IL-2+ CD3+CD8+IL-4+ Возрастные группы, период обследования 1 (4-7 лет) 1-10 сутки 2 (4-7 лет) 11-20 сутки 4320(4) 3436-5681 5540(4) 4523-6779 2993 2146-3654 1361 919-1755 4225(3) 3491-5342 6397(4) 5894-8031 1377 1175-1959 648 483-909 5050 3099-6235 5095 3539-5846 3035 1734-3944 1830 1571-1887 4163 2948-5392 5082 3849-7413 1064(4) 800-1796 1111 713-1860 3 (4-7 лет) группа сравнения 3194 2458-4027 4268 3287-5841 2179 1738-2905 1077 897-1624 3095 2350-3751 4906 3917-6534 1421 1110-1854 1134 972-1387 4 (8-14 лет) 1-10 сутки 5465(1) 4597-7435 8846(1,6) 8116-10641 3496 3093-3962 1640 1215-2407 4851 3841-5877 8880(1) 6464-14271 1463 1214-1802 687 546-1573 5 (8-14 лет) 11-20 сутки 5871 4046-7517 6594 5100-8770 3453 2505-4179 1563 1311-1981 5136 3317-6646 6628 6050-9232 1797(1) 1431-2126 953 726-1546 6 (8-14 лет) группа сравнения 4439 3754-5042 6406 4708-7928 2915 1897-3457 1533 991-1964 4263 3265-5275 8738 6567-11334 1772 1332-1988 1199 1012-1401 Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 Таблица 4.43 - Абсолютная интегрированная средняя интенсивность флюоресценции, Ме (LQ-UQ) Субпопуляции Т-лимфоцитов CD3+CD4+IFN-+ CD3+CD4+TNF-α+ CD3+CD4+IL-2+ CD3+CD4+IL-4+ CD3+CD8+IFN-+ CD3+CD8+TNF-α+ CD3+CD8+IL-2+ CD3+CD8+IL-4+ Возрастные группы, период обследования 1 (4-7 лет) 1-10 сутки 2 (4-7 лет) 11-20 сутки 541,5 (3) 235,9-786,2 2492 1809-3345 899,2 326,2-1141 18,3(3) 5,3-31,6 1219 (3) 605,9-1961 2733 (3) 1219-4214 64,3 32,3-137 0 0-2,7 532,4 (3) 251,7-1315 2287 1197-4053 1211 343,9-1615 14,5 (3) 7,1-33,5 1076 (3) 545,6-1554 1740 858,5-2155 47,3 2,2-164,8 0,9 0-3,3 3 (4-7 лет) группа сравнения 310,0 130,2-533,8 1980,5 1073,4-3700,1 813,8 319,9-1375,8 2,6 1,0-4,0 184,4 127,8-316,3 407,5 172,9-541,7 36,3 16,6-51,4 1,5 0-2,7 4 (8-14 лет) 1-10 сутки 605,6 369,5-1056 4125 3299-4880 839,3 450,3-1264 10,0 (6) 3,95-28,3 1136 (6) 791,6-1891 3106 (6) 1284-5234 99,9 39,6-173,8 0 (5) 0-2,4 5 (8-14 лет) 11-20 сутки 631,8 419,1-1409 3207 1522-4547 919 474,7-1409 16,7 (6) 12,5-59,6 930,1 (6) 799,4-1251 1832 1024-3335 155,1 (6) 39,9-285,9 1,8 (4) 0,8-15,7 6 (8-14 лет) группа сравнения 541,2 403,7-981,2 3374,8 1851,8-5310,9 998,1 529,3-1976,1 2,9 0,5-6,4 370,9 247,6-526,9 852,0 (1,2,3) 479,4-1112,1 50,7 16,6-89,6 1,5 0,6-3,2 Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 Анализ данных, характеризующих абсолютную интегрированную среднюю интенсивность флюоресценции цитокинов (аиСИФЦ) у детей в остром периоде ЭВИ с СМ, показал, что в возрастной группе 4-7-летних детей в острый период заболевания происходит увеличение аиСИФЦ Th1, Th2 и Tc1 субпопуляций Т- 151 лимфоцитов (таблица 4.43). У детей старшего возраста (8-14 лет) увеличивается аиСИФЦ Th2 и Tc1 субпопуляций Т-клеток. АиСИФЦ Th1 лимфоцитов не отличается от показателя в группе 4-7-летних детей, но не превышает значений группы сравнения. 4.4. Ассоциированные с полом особенности иммунного ответа при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом Несмотря на то, что представители мужского и женского пола в равной степени подвержены инфицированию НПЭВ, частота развития таких клинических форм НПЭВ-инфекции, как острый миокардит и серозный менингит, выше среди лиц мужского пола [91, 185]. Анализ 1720 случаев заболевания ЭВИ с СМ в г.Екатеринбурге с 2003 по 2014 гг. показал, что представители мужского пола среди заболевших составляют в среднем 61,3% (58,1-64,3%). Соотношение случаев заболевания, зафиксированных у представителей мужского и женского пола, в среднем составляющее 1,58 (1,39-1,80), варьирует от 1,2 в возрасте до 1 года до 2,6 у детей 14 лет. Тенденция к повышению соотношения в пользу лиц мужского пола наблюдается с увеличением возраста пациентов (данные представлены в Главе 2). Ассоциированные с полом особенности иммунного ответа при CVB3миокардитах на протяжении многих лет являются предметом интенсивного исследования, в то время как иммунные механизмы, лежащие в основе повышенной чувствительности лиц мужского пола к развитию ЭВИ с СМ, остаются не раскрытыми. Сравнительный анализ данных иммунологического обследования продемонстрировал, что во всех возрастных группах существует определенный комплекс показателей, характеризующих системы как врожденного, так и адаптивного иммунитета, отличающихся у заболевших лиц мужского и женского пола. 152 Таблица 4.44 – Показатели врожденного и адаптивного иммунитета в динамике энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у детей 1-3 лет в зависимости от пола, Ме (LQ-UQ) Показатель 1-10 сутки Муж. Жен. n=32 n=26 Периоды обследования 11-20 сутки Муж. Жен. n=32 n=26 Группы сравнения Муж. Жен. n=15 n=15 Гранулоциты, 106/л 3183,9 2667,5-5781,9 3670,4 2644,9-4645,5 2985,7 2680,0-4665,8 3205,8 2363,4-3644,6 4017,3 3321,3-5455,6 2711,4 2210,0-3678,0 Фагоцитарная активность нейтрофилов, 106/л 2851,8 2483,3-4798,1 3133,1* 2514,6-4049,5 2876,1 2579,8-3998,7 2939,8 2202,6-3283,1 3841,4 3036,9-4355,4 2427,5 2111,3-3226,8 530,6 413,9-674,6 494,1 422,8-632,5 534,8 409,6-694,2 560,0 418,3-642,3 664,8 491,8-902,1 599,0 400,9-726,3 454,92 310,77-528,45 435,28 302,82-553,42 442,58 311,79-536,97 475,86 347,67-515,02 457,11 381,33-741,47 472,32 338,26-584,61 11,0* 8,7-19,7 19,50* 12,75-28,00 29,00 23,00-38,30 3956,0 2807,0-4821,3 411,6 292,9-721,8 2604,8* 1736,1-3029,3 1355,2* 963,2-1666,8 870,2 638,8-1126,7 36,88* 16,64-68,22 9,0 4,7-15,2 19,00* 10,25-30,50 34,00* 28,35-39,85 3903,2* 3152,8-4915,7 370,3 170,6-526,9 2548,3* 2074,8-3191,4 1459,6* 1174,7-1630,7 986,8 693,9-1184,6 24,68 13,43-56,39 6,0 4,0-12,5 10,00 5,50-19,50 30,80 19,80-44,25 4136,0 3198,0-5063,9 426,3 227,5-649,7 2866,1* 2261,1-3456,7 1532,6* 1193,8-1854,6 1024,1 754,7-1291,8 36,49* 27,11-43,53 7,0 3,0-10,0 12,00 7,00-18,75 37,00 25,70-43,25 4190,2* 3479,1-4986,3 414,8 202,3-520,0 2860,9* 2395,2-3328,5 1601,6* 1226,7-1922,2 1006,7 881,9-1318,3 26,59 8,87-42,99 7,00 4,00-11,50 9,00 7,50-15,00 27,30 22,45-32,30 4570,0 4048,2-5906,9 367,82 279,1-526,6 3181,9 2766,6-3998,1 1912,6 1599,7-2124,5 1090,3 685,2-1359,1 16,32 9,38-32,80 5,50 4,00-7,00 8,00 5,25-11,50 30,95 21,58-33,28 5385,6 4471,2-6420,6 404,56 218,4-670,1 4168,4 2968,9-4251,4 2515,1 1798,9-2768,2 1091,3 616,7-1206,6 31,24 15,32-35,31 185,76 92,73-280,17 134,04 78,22-212,69 191,60 120,33-258,78 168,60 123,22-255,43 108,08 47,87-151,10 143,08 102,12-180,69 236,83* 124,52-332,27 158,97* 92,76-257,35 321,41* 143,34-378,27 208,24* 137,88-340,33 59,06 35,01-104,07 91,87 50,80-121,67 27,80* 13,34-63,97 7,58* 2,91-16,64 0,00* 0,00-0,00 3,75 2,31-7,31 37,26* 11,78-71,53 10,06* 3,32-20,18 0,00* 0,00-0,00 4,54 3,14-11.29 770,8 464,7-889,5 1,4* 0,9-1,9 0,50 0,30-1,00 7,80* 6,40-10,00 57,0* 32,0-87,0 890,9* 684,6-1190 1,9* 1,2-2,05 0,70* 0,40-0,80 8,95* 6,88-11,15 81,0* 56,0-97,0 20,70* 7,29-41,36 5,61* 3,65-17,89 0,00* 0,00-0,00 6,94 6,62-7,27 705,3 531,4-892,0 1,35* 1,1-1,5 0,45 0,30-0,90 7,05* 5,80-8,23 35,0* 19,2-59,5 33,23* 22,57-83,83 14,38* 9,76-36,26 0,00* 0,00-1,39 6,05 5,13-7,14 747,3 550,9-1003 1,8* 1,4-2,2 0,60 0,40-0,90 7,70 6,65-9,00 48,5* 30,2-68,5 3,91 3,01-5,08 0,00 0,00-2,16 6,43 5,65-11,73 10,01 6,15-13,87 783,65 599,4-1102 1,05 0,85 -1,30 0,40 0,40-0,63 6,05 5,55-7,08 12,00 8,50-20,00 4,17 0,00-7,48 3,74 0,00-6,38 3,48 0,00-12,22 6,15 3,08-10,01 883,24 723,74-1046 1,20 1,20-1,53 0,40 0,33-0,68 7,00 6,30-8,08 20,00 15,00-31,00 Моноциты, 106/л Фагоцитарная активность моноцитов, 106/л НСТ-тест спонтанный, % НСТ-тест стимулир., % Бактерицидная активность, % Лимфоциты, 106/л NK-клетки (CD16+56+), 106/л Т-лимфоциты (CD3+), 106/л Т-хелперы (CD3+CD4+), 106/л Т-цитотокс. (CD3+CD8+), 106/л Актив. Т-лимф. (CD3+HLA-DR+), 106/л Th1 (СD3+CD4+IFN-+), 106/л Tc1 (СD3+CD8+IFN-+), 106/л Th2 (СD3+CD4+IL-4+), 106/л Tc2 (СD3+CD8+IL-4+), 106/л Th17 (СD3+CD4+IL17А+), 106/л Tnc17 (СD3+CD8+IL17А+), 106/л В-лимфоциты (CD19+), 106/л IgM, г/л IgA, г/л IgG, г/л ЦИК, ед. Примечание: значения, выделенные шрифтом, указывают на значимые различия в группах, p<0,05; * - значимые различия с группами сравнения, p<0,05 153 У здоровых детей лет 1-3 при сравнении базового содержания иммунологических показателей, обнаружены значимые отличия в содержании нейтрофильных гранулоцитов и их фагоцитарной активности (выше у представителей мужского пола). В остром периоде ЭВИ с СМ численность фагоцитирующих нейтрофилов у девочек увеличивается, нивелируя эту разницу (таблица 4.44). Повышается также процент НСТ-положительных нейтрофилов, причем в спонтанном тесте доля НСТ-положительных нейтрофилов у мальчиков становится выше, чем у девочек. Т-лимфопения, обусловленная снижением содержания Т-хелперных субпопуляций лимфоцитов, регистрируется в течение 20 суток от начала заболевания у представителей обоих полов. Абсолютное содержание цитотоксических Т-лимфоцитов значимо не изменяется. Что касается эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов, то вне зависимости от пола при ЭВИ с СМ у детей 1-3 лет происходит увеличение содержания Th2, Тс2 и Тс1 лимфоцитов и снижение содержания Th17 клеток. Значимые ассоциированные с полом отличия обнаружены в содержании основных гуморальных компонентов иммунитета. У заболевших ЭВИ с СМ девочек зарегистрировано более высокое по сравнению с мальчиками содержание Влимфоцитов (1-10-е сутки), уровень общих иммуноглобулинов IgM класса (1-20-е сутки) и ЦИК (таблица 4.44). По другим анализируемым показателям значимых отличий не обнаружено. В возрасте 4-7 лет численность нейтрофильных гранулоцитов и их поглотительная активность становится выше у мальчиков с ЭВИ с СМ. Вне зависимости от пола в остром периоде заболевания происходит увеличение содержания следующих эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов: Th1, Tc1, Th2 и Тс2. При этом, у мальчиков 4-7 лет в первую декаду заболевания содержание Th1 и Tc1 клеток в среднем выше, чем у девочек (таблица 4.45). Кроме того, только у мальчиков значимо ниже содержания Th17 лимфоцитов в первую декаду заболевания. В свою очередь, заболевшие девочки характеризуются повышением содержания общих иммуноглобулинов классов IgA и IgG, более высоким содержанием IgMантител и ЦИК. 154 Таблица 4.45 - Показатели врожденного и адаптивного иммунитета в динамике энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у детей 4-7 лет в зависимости от пола, Ме (LQ-UQ) Показатель 1-10 сутки Муж. Жен. n=69 n=38 Периоды обследования 11-20 сутки Муж. Жен. n=69 n=38 Группы сравнения Муж. Жен. n=15 n=15 Гранулоциты, 106/л 3352,4 2689,6-4686,1 3931,2 2616,2-5726,6 3564,8 2692,8-4665,6 3131,7 2161,0-3885,5 3936,8 2915,0-4583,8 3147,2 2751,9-3856,5 Фагоцитарная активность нейтрофилов, 106/л 3042,9 (2440,1-4117,2) 3683,5 (2463,3-5047,9) 3358,8 (2429,0-4339,0) 2739,7 (2071,9-3490,3) 3485,8 3187,6-4045,3 3009,7 2614,5-3409,2 417,10 325,90-610,30 450,80 293,40-562,20 518,00 348,00-653,20 504,50 333,20-732,00 453,60 340,20-537,20 461,50 267,55-701,20 345,12 267,86-442,10 367,60 239,15-461,23 398,54 301,06-531,70 417,13 260,72-597,44 339,26 284,99-382,04 351,24 238,94-569,32 9,00 6,00-16,00 17,00 10,00-24,00 33,60* 24,70-40,05 2554,6 1990,9-3195,5 338,40 219,99-515,41 1658,7* 1280,3-2089,8 797,81* 630,1-1084,6 681,17 459,55-897,81 24,20 13,84-48,64 175,9* (125,1-293,5) 173,2* (113,5-262,3) 21,72* 9,73-38,89 14,53* 7,23-26,01 8,00* 5,00-15,50 17,00* 9,50-26,50 32,60 26,68-39,53 2581,2 2029,0-3181,0 307,36 203,36-467,37 1658,8* 1308,5-2024,2 844,3* 679,8-1100,9 597,19 480,49-772,53 33,59 15,29-52,31 133,1* (95,5-232,9) 122,4* (87,5-211,5) 20,82* 8,22-51,73 15,35* 4,82-34,60 0,00* 0,00-0,00 1,70 0,23-4,10 413,2 (326,2-592,4) 1,4 (1,1-1,9) 1,00 0,70-1,30 10,00 8,10-12,70 60,0* (40,0-86,0) 1,35 0,76-1,35 2,52 0,63-6,00 486,6 (383,8-623,6) 1,9* (1,4-2,3) 1,00* 0,70-1,30 10,35* 9,30-13,45 70,0* (39,5-96,0) 7,00 4,00-14,25 15,50 7,00-23,25 31,50* 24,48-39,85 2985,4 2485,0-3578,4 331,73 235,42-549,45 2053,9 1714,6-2524,9 1068,5 871,6-1295,6 853,81 609,68-1011,35 29,77 14,54-44,40 209,7* (137,1-306,4) 219,7* (122,3-303,1) 22,88* 8,13-43,59 21,02* 7,02-41,85 0,00* 0,00-0,00 2,68 0,00-3,85 447,2 (319,7-584,3) 1,2 (0,9-1,6) 0,90 0,60-1,20 8,80 7,08-11,63 47,0* (24,0-67,0) 7,00* 4,00-12,50 14,00* 8,50-23,00 32,60 24,70-43,55 2866,3 2418,5-3709,5 254,70 161,14-443,10 1982,2 1671,3-2559,7 1079,7 911,9-1477,3 703,52 566,05-941,79 24,34 14,43-52,38 185,8* (108,2-243,5) 181,2* (108,2-255,4) 20,75* 8,78-37,01 19,92* 7,02-35,53 0,00* 0,00-0,00 2,91 0,00-9,55 496,8 (362,2-584,0) 1,8* (1,3-2,1) 0,90 0,55-1,15 10,10* 8,45-12,25 62,0* (37,0-91,0) 7,50 4,00-12,25 12,00 7,00-15,00 44,30 38,15-55,70 3166,8 2710,9-3513,3 380,66 224,51-489,62 2287,6 1779,2-2613,3 1188,2 843,8-1493,5 815,59 591,01-1104,78 32,91 26,88-43,32 82,16 67,15-132,82 70,90 43,74-100,82 2,42 1,37-4,56 2,13 0,93-3,10 3,36 1,76-5,79 3,39 0,99-6,19 448,1 292,4-514,1 1,3 1,1-1,6 0,80 0,70-1,30 9,60 8,50-10,90 19,5 16,0-24,5 4,50 3,00-7,75 9,00 4.50-11,50 42,10 26,45-48,85 3057,0 2243,3-4161,2 162,25 111,84-341,34 2094,8 1604,0-3324,8 1255,7 887,9-1839,4 724,06 514,06-829,81 28,65 13.18-37,69 75,24 51,81-141,69 54,23 36,51-74,83 2,22 0,50-3,65 1,40 0,00-3,79 2,21 0,00-4,79 2,09 0,00-3,28 556,2 390,8-622,0 1,2 1,05-1,5 0,80 0,55-0,90 7,60 6,30-10,50 27,0 17,5-34,0 Моноциты, 106/л Фагоцитарная активность моноцитов, 106/л НСТ-тест спонтанный, % НСТ-тест стимулир., % Бактерицидная активность, % Лимфоциты, 106/л NK-клетки (CD16+56+), 106/л Т-лимфоциты (CD3+), 106/л Т-хелперы (CD3+CD4+), 106/л Т-цитотокс. (CD3+CD8+), 106/л Актив. Т-лимф. (CD3+HLA-DR+), 106/л Th1 (СD3+CD4+IFN-+), 106/л Tc1 (СD3+CD8+IFN-+), 106/л Th2 (СD3+CD4+IL-4+), 106/л Tc2 (СD3+CD8+IL-4+), 106/л Th17 (СD3+CD4+IL17А+), 106/л Tnc17 (СD3+CD8+IL17А+), 106/л В-лимфоциты (CD19+), 106/л IgM, г/л IgA, г/л IgG, г/л ЦИК, ед. Примечание: значения, выделенные шрифтом, указывают на значимые различия в группах, p<0,05; * - значимые различия с группами сравнения, p<0,05 В возрасте 8-14 лет в группах сравнения у девочек базовое содержание Тхелперов превышает их количество у мальчиков. Несмотря на снижение численности 155 Т-хелперов у девочек в первую декаду заболевания, в 11-20-е сутки заболевания их абсолютное содержание превышает количество Т-хелперов у мальчиков с ЭВИ с СМ (таблица 4.46). Таблица 4.46 – Показатели врожденного и адаптивного иммунитета в динамике энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у детей 8-14 лет в зависимости от пола, Ме (LQ-UQ) Показатель 1-10 сутки Муж. Жен. n=130 n=50 Периоды обследования 11-20 сутки Муж. Жен. n=130 n=50 Группы сравнения Муж. Жен. n=15 n=15 Гранулоциты, 106/л 3230,2 2394,3-4253,9 3233,8 2754,7-4487,9 3710,2 2915,0-4823,3 3582,6 2718,4-4827,4 3603,6 2946,5-4696,8 3428,1 2595,5-4031,0 Фагоцитарная активность нейтрофилов, 106/л 3025,0 2253,7-3873,6 3029,7 2572,2-4098,3 3482,7 2721,0-4321,1 3314,7 2575,5-4349,4 3321,3 2821,7-3951,3 3115,1 2444,0-3708,3 Моноциты, 106/л 396,90 318,70-499,80 392,20 284,40-497,73 454,90 389,10-551,35 406,15 325,55-547,35 380,15 315,23-490,78 392,25 308,75-583,80 331,95 258,92-419,01 327,77 224,07-404,36 365,69 309,27-472,07 355,42 248, 51-428,77 320,31 242,35-445,35 314,48 260,59-452,60 10,00* 5,00-17,00 17,00* 9,00-26,00 35,40 29,00-41,30 2189,6 1711,5-2902,3 321,9* (205,6-512,8) 1424,6 1076,4-1840,2 737,0 (580,3-928,6) 551,07 382,00-752,32 30,68 16,97-57,23 165,79 101,13-249,34 167,84* 100,19-250,69 28,19* 12,49-52,38 8,92* 3,36-16,58 0,00* 0,00-0,00 0,00* 0,00-0,23 337,31 248,77-454,09 1,4 (1,0-1,8) 1,20 1,00-1,90 11,10 8,80-13,20 64,0* (41,0-87,0) 10,50* 6,25-15,75 18,00* 11,00-27,75 37,40 29,50-43,60 2070,5 1624,8-2497,5 253,7 (160,8-372,9) 1362,1 1122,6-1767,5 735,1* (614,6-1000,3) 518,35 363,62-681,21 27,30 12,22-62,23 145,27 88,44-212,96 139,28* 81,35-241,34 20,50* 9,99-42,50 6,79* 3,23-13,69 0,00* 0,00-0,00 0,00* 0,00-0,00 296,24 225,01-417,72 1,8 (1,4-2,3) 1,35 0,88-1,80 11,20 8,88-13,75 85,0* (53,5-107,5) 9,50* 5,00-18,00 19,00* 10,75-27,00 34,60 29,23-43,00 2486,0* 2140,1-3048,9 331,9* (202,8-453,5) 1679,1* 1443,7-2071,0 8,00* 4,00-15,50 14,00* 10,00-22,00 36,20 26,10-41,40 2601,9 2226,1-2969,5 279,3 (183,2-483,2) 1911,2 1525,5-2154,3 4,50 2,00-9,00 6,50 5,00-13,75 41,95 34,90-49,75 1876,0 1699,2-2274,3 181,9 149,0-294,3 1244,4 999,8-1621,3 3,00 2,00-9,00 7,50 4,25-12,75 33,90 26,73-42,50 2380,5 1947,5-2792,1 216,2 122,1-406,1 1643,9 1357,8-2065,2 892,3 (728,3-1079,4) 689,36* 516,08-883,52 41,80* 21,31-79,50 181,90* 120,25-266,14 205,39* 135,74-290,84 34,85* 14,96-53,34 12,37* 4,96-18,93 2,89 1,45-4,34 1,42 0,71-2,13 355,42 294,36-447,76 1,4 (1,0-1,8) 1,30 0,90-1,80 10,80 8,10-12,73 48,0* (28,0-70,0) 964,8 (746,3-1194,2) 707,30* 540,47-897,59 39,25* 17,98-72,78 194,42 125,26-256,15 206,66* 138,04-285,48 33,68* 18,72-57,00 11,95* 5,84-20,18 0,00* 0,00-0,00 1,36 0,50-1,40 362,05 283,71-456,93 1,7 (1,2-2,1) 1,15 0,70-1,70 11,15 8,20-12,70 70,0* (49,5-94,0) 721,04 581,6-853,2 420,86 326,03-688,86 15,57 11,50-39,87 124,30 99,29-149,58 100,50 75,74-118,67 2,02 0,70-3,70 1,21 0,90-1,53 2,87 1,90-6,15 2,58 1,47-4,36 292,11 258,87-396,49 1,25 1,15-1,60 1,85 1,00-2,15 11,35 11,00-13,60 19,00 16,00-22,00 926,4 851,1-1310,4 574,14 430,57-660,24 16,52 8,08-23,18 155,23 80,00-191,42 83,96 58,35-112,93 2,89 0,81-4,23 1,41 0,00-3,02 3,90 1,87-5,77 1,33 0,40-2,61 341,35 197,91-439,88 1,60 1,23-1,80 0,95 0,80-1,25 11,35 10,48-12,30 27,50 20,75-40,50 Фагоцитарная активность моноцитов, 106/л НСТ-тест спонтанный, % НСТ-тест стимулир., % Бактерицидная активность, % Лимфоциты, 106/л NK-клетки (CD16+56+), 106/л Т-лимфоциты (CD3+), 106/л Т-хелперы (CD3+CD4+), 106/л Т-цитотокс. (CD3+CD8+), 106/л Актив. Т-лимф. (CD3+HLA-DR+), 106/л Th1 (СD3+CD4+IFN-+), 106/л Tc1 (СD3+CD8+IFN-+), 106/л Th2 (СD3+CD4+IL-4+), 106/л Tc2 (СD3+CD8+IL-4+), 106/л Th17 (СD3+CD4+IL17А+), 106/л Tnc17 (СD3+CD8+IL17А+), 106/л В-лимфоциты (CD19+), 106/л IgM, г/л IgA, г/л IgG, г/л ЦИК, ед. Примечание: значения, выделенные шрифтом, указывают на значимые различия в группах, p<0,05; * - значимые различия с группами сравнения, p<0,05 156 Таблица 4.47 - Показатели врожденного и адаптивного иммунитета в динамике энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у детей 15-18 лет в зависимости от пола, Ме (LQ-UQ) Показатель 1-10 сутки Муж. Жен. n=23 n=7 Периоды обследования 11-20 сутки Муж. Жен. n=23 n=7 Группы сравнения Муж. Жен. n=15 n=15 Гранулоциты, 106/л 3496,7 2577,0-4120,8 3120,0 2654,5-5526,0 4091,1 3228,9-5237,8 3657,5 2822,4-5047,2 3263,1 3102,6-3541,1 3304,8 2937,6-5465,5 Фагоцитарная активность нейтрофилов, 106/л 3219,7 2413,3-3967,4 2926,6 2243,5-4723,4 3703,3 2830,1-4884,9 3478,3 2342,6-4078,1 3005,3 2870,4-3309,1 3069,4 2770,2-4123,9 Моноциты, 106/л 310,00* 229,00-416,68 430,00 383,15-601,60 357,50 296,38-394,88 433,50* 388,80-513,60 451,40 379,60-569,90 357,00 280,80-424,80 261,88 192,50-354,93 325,73 267,12-461,97 292,18 222,61-345,55 313,85 262,44-375,96 376,26 290,76-414,68 299,88 220,65-338,90 11,50* 9,00-20,00 16,00 11,00-26,50 42,80 35,60-49,40 1806,7* 1577,9-2055,2 122,70* 89,82-158,76 10,00* 9,00-19,00 16,00* 14,50-20,50 29,50 26,20-34,25 1967,0 1848,8-3222,4 87,17* 83,71-156,98 1285,1* 1117,9-1610,2 769,3* (646,4-979,9) 478,13 289,9-622,3 22,84 18,29-37,19 100,06 57,53-199,14 68,21 57,66-126,67 1459,5 1412,5-2531,3 908,7 (868,1-1404,0) 505,5 465,9-859,9 32,74* 21,38-60,50 178,58 128,73-264,62 127,56 91,95-189,02 13,50* 9,00-18,75 23,00 10.50-24,00 30,75 28,45-36,25 1955,1 1791, 2-2512,0 115,61* 78,66-141,58 1549,4* 1345,7-1785,1 951,2 (840,5-1101,5) 475,9 407,6-620,6 24,27 15,42-37,68 115,71 45,63-145,96 88,23 74,42-138,80 9,00* 7,00-12,00 18,00* 12,00-29,00 36,50 30,60-45,10 1828,2 1674,0-2083,8 144,50 71,38-164,62 1422,1 1356,5-1602,4 967,6 (811,4-1106,5) 467,9 437,7-502,2 29,87 21,70-46,33 76,51* 41,50-98,38 76,51 41,50-98,38 5,00 3,50-6,50 13,00 8,00-26,50 33,60 25,20-44,15 2865,2 2448,3-3155,9 309,44 175,52-328,16 1939,7 1747,7-2326,9 1272,8 921,6-1339,4 783,0 458,9-890,7 18,62 15,93-37,31 167,99 123,92-288,37 134,92 92,09-287,53 2,00 1,00-6,00 5,00 2,00-10,00 37,90 31,70-45,40 2042,4 1721,9-2489,8 181,21 128,32-264,38 1569,8 1320,7-1927,5 938,1 807,1-1185,1 530,9 400,9-659,5 15,41 7,71-26,81 104,01 93,87-123,78 81,83 69,24-131,30 16,7* (7,2-26,3) 3,37 (1,06-6,16) 31,6* (28,2-45,1) 5,66* (5,05-8,08) 11,7* (3,3-24,9) 2,50 (0,37-9,52) 35,1* (23,3-45,3) 11,71* (7,77-15,11) 2,27 0,92-3,17 3,67 1,23-5,34 1,85 0,00-3,74 1,58 0,00-2,43 5,02 3,16-14,31 1,66 0,32-3,65 332,36 256,84-426,52 1,60 1,20-1,95 1,30 1,00-1,80 10,00 8,15-12,50 3,02 2,42-10,05 1,45 0,21 -5,65 252,94 199,66-445,42 1,60 1,50-2,25 1,30 1,10-1,50 10,40 9,75-12,75 11,27* 10,91-11,41 2,11 1,05-3,31 343,32 228,43-482,80 1,75 1,35-2,08 1,35 1,03-2,15 11,20 7,38-11,88 8,13 6,73 -10,32 1,99 1,00-2,59 270,89 143,91-342,22 1,80 1,50-1,90 1,30 1,00-1,30 11,50 10,40-11,80 2,27 1,75-4,39 5,82 3,72-7,07 324,28 300,93-460,42 1,30 0,85-1,90 2,10 1,90-2,60 10,90 10,30-11,60 3,51 1,34-8,97 4,31 3,01-7,51 239,84 192,7-324,45 1,90 1,30-2,20 1,80 1,30-2,50 13,20 11,70-14,40 69,00* 46,50-77,50 86,00* 66,50-97,00 60,50* 44,25-73,00 75,00* 63,00-89,00 22,00 17,00-28,50 26,50 18,75-37,25 Фагоцитарная активность моноцитов, 106/л НСТ-тест спонтанный, % НСТ-тест стимулир., % Бактерицидная активность, % Лимфоциты, 106/л NK-клетки (CD16+56+), 106/л Т-лимфоциты (CD3+), 106/л Т-хелперы (CD3+CD4+), 106/л Т-цитотокс. (CD3+CD8+), 106/л Актив. Т-лимф. (CD3+HLA-DR+), 106/л Th1 (СD3+CD4+IFN-+), 106/л Tc1 (СD3+CD8+IFN-+), 106/л Th2 (СD3+CD4+IL-4+), 106/л Tc2 (СD3+CD8+IL-4+), 106/л Th17 (СD3+CD4+IL17А+), 106/л Tnc17 (СD3+CD8+IL17А+), 106/л В-лимфоциты (CD19+), 106/л IgM, г/л IgA, г/л IgG, г/л ЦИК, ед. Примечание: значения, выделенные шрифтом, указывают на значимые различия в группах, p<0,05 Вне зависимости от пола у детей 8-14 лет в остром периоде заболевания увеличивается число НСТ-положительных нейтрофилов. В течение всего наблюдения 157 повышено содержание Tc1, Th2 и Тс2 лимфоцитов, снижено в 1-10-е сутки содержание Th17 и Tnc17 субпопуляций. Количество Th1 клеток увеличивается только у мальчиков в 11-20-е сутки от начала заболевания. Кроме того, мальчики в первую декаду заболевания характеризуются повышенным содержанием NK и более высокой относительной поглотительной активностью моноцитов. Заболевших девочек, как и в младших возрастных группах, отличает высокое содержание общих IgM-антител и ЦИК. К числу ассоциированных с полом иммунологических отличий в группах практически здоровых подростков 15-18 лет относятся: повышенное содержание моноцитов, НСТ-положительных нейтрофилов, Th1 лимфоцитов у юношей и более высокое базовое содержание общих иммуноглобулинов класса IgG у представительниц женского пола (таблица 4.47). В острый период ЭВИ с СМ у юношей происходит значимое снижение содержания в периферической крови моноцитов, лимфоцитов, Т-лимфоцитов и их хелперных субпопуляций. Из эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов у подростков с ЭВИ с СМ увеличивается только содержание Th2 лимфоцитов (на протяжении всего периода обследования) и Tc2 (у девушек – с первой декады заболевания, у юношей – со второй). Кроме того, в 11-20-е сутки от начала заболевания у юношей увеличивается абсолютное содержание в периферической крови Th17 субпопуляции. У 15-18-летних девушек по сравнению с юношами зарегистрировано более высокое содержание Тхелперов, Th2 и Tc2 субпопуляций лимфоцитов и циркулирующих иммунных комплексов. В группе пациентов 19-45 летнего возраста анализ ассоциированных с полом особенностей иммунного ответа при ЭВИ с СМ не проводили в связи с недостаточно репрезентативной выборкой. 158 4.5. Связь полиморфизма HLA с чувствительностью к энтеровирусным менингитам В результате типирования HLA I (A, B, Cw) и II класса (DRB1, DQA1 и DQB1) у пациентов с ЭВИ с СМ получены данные, характеризующие частоту аллелей HLA I и II класса, суммированные в таблицах 4.48-4.52. Для сравнения частот аллелей и их носителей использованы: результаты обследования практически здоровых детей и взрослых (HLA-DRB1); данные, полученные при типировании лимфоцитов периферической крови по HLA-антигенам I класса 2856 жителей г .Екатеринбурга [49]. Кроме того, использовали базы данных HLA » Allele Frequency Search » Classical ресурса http://www.allelefrequencies.net. В качестве группы сравнения выбрана популяция, обследованная в г.Челябинск (54º 32' N, 60º 20' E, Sample Size: 207, Loci typed: A, B, DQA1, DQB1, DRB1, Author(s): T.A. Suslova, A.L. Burmistrova, M.S Chernova, E.B. Khromova, E.I. Lupar, S.V. Timofeeva, M.N. Vavilov, I.V. Devald & C.Darke) и европеоидная популяция г. Санкт-Петербург (59º 58' N, 30º 18' E, Sample Size: 100, Loci typed: A, B, C, DQB1, DRB1, Author(s): Ludmila Bubnova, Poster presentation P28 EFI 2012). Из 14 аллелей HLA-A (A1, A2, A3, A11, A19, A23, A24, A25, A26, A28, A29, A30, A31, A32), HLA-A3 и HLA-A31 имели положительную ассоциацию с заболеванием, HLA-A2, напротив, отрицательную. Распределение аллелей HLA-B и HLA-Cw в группе пациентов с ЭВИ с СМ значимо не отличалось от показателей групп сравнения. Наиболее существенные отличия получены в частоте аллелей HLA II класса (DRB1, DQA1 и DQB1). Так в группе пациентов с ЭВИ с СМ у 50% заболевших присутствовал HLA-DRB1*01, при этом средняя частота этого аллеля в группе сравнения составила 18,2% (OR=4,500, 95% CI=2,391-8,471, p<0,0001). Эти же пациенты характеризовались присутствием аллелей HLADQA1*01:01 и HLA-DQB1*05:01. Таким образом, частота гаплотипа HLADRB1*01;DQA1*01:01;DQB1*05:01 (соответствует варианту HLA-DR1;DQ5) составила 25%, что значительно превышает его частоту в популяции европеоидов (8,5%) [220]. Это дает основание рассматривать данное сочетание HLA II в качестве гаплотипа-провокатора, ассоциированного с высокой чувствительностью к ЭВИ с СМ (OR=3,588; 95% CI= 1,916-6,718, p<0,0001). 159 Таблица 4.48 - Распределение HLA-A аллелей у пациентов с энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом и в группах сравнения Частота аллелей, (% носителей аллелей) HLA- A Odds Ratio ЭВИ с СМ группа сравнения 1 группа сравнения 2 n = 50 n = 2856 n = 207 A1 0,0945 (18,0) 0,1170 (22,06) 0,1810 (31,9) A2 0,1876 (34,0) 0,2870 (49,12) 0,2970 (51,7) A3 0,2517 (44,0) 0,1430 (26,58) 0,1590 (29,0) A11 0,0305 (6,0) 0,0620 (12,01) 0,0460 (8,7) A23 0,0000 (0,0) н.д. 0,0220 (4,3) A24 0,1515 (28,0) н.д. A25 0,0408 (8,0) A26 P (95% CI) 0,7761(0,375-1,604) 0,6101 0,4692 (0,215-1,021) 0,0276 0,5331 (0,295-0,962) 0,0480 0,4822 (0,252-0,918) 0,0276 2,1711 (1,234-3,818) 0,0058 1,9252 (1,021-3,629) 0,0444 0,4671 (0,145-1,511) 0,2794 0,6702 (0,189-2,371) 0,5891 - - 0,0890 (17,4) 1,847 (0,904-3,774) 0,1104 н.д. 0,0430 (8,7) 0,913 (0,295-2,827) 1,0000 0,0726 (14,0) н.д. 0,0390 (7,7) 1,943 (0,753-5,014) 0,1717 A28 0,0513 (10,0) 0,0260 (5,15) н.д. 2,048 (0,801-5,235) - A29 0,0202 (4,0) 0,0110 (2,17) 0,0100 (1,9) A30 0,0000 (0,0) н.д. A31 0,0835 (16,0) A32 0,0100 (2,0) 1,8781 (0,446-7,899) - 2,1152 (0,376-11,884) 0,6002 0,0140 (2,9) - 0,3590 н.д. 0,0190 (3,9) 4,738(1,683-13,338) 0,0044 н.д. 0,0340 (6,3) 0,304 (0,039-2,385) 0,3162 Примечание: шрифтом выделены значимые различия с группами сравнения, p<0,05 Таблица 4.49 - Распределение HLA-B аллелей у пациентов с энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом и в группах сравнения HLA-B B7 Частота аллелей, (% носителей аллелей) ЭВИ с СМ группа сравнения 1 группа сравнения 2 n = 50 n = 2856 n = 207 0,1055 (20,0) 0,1310 (24,42) 0,1470 (24,6) 0,0726 (14,0) 0,0610 (11,79) 0,0770 (15,5) 0,0945 (18,0) 0,0870 (16,61) н.д. 0,0305 (6,0) 0,0560 (10,84) 0,0530 (10,6) 0,0202 (4,0) 0,0260 (5,10) 0,0170 (3,4) 0,0304 (6,0) 0,0500 (9,75) 0,0820 (15,5) B16 (38, 39) 0,0619 (12,0) 0,0610 (11,79) н.д. B17 (57) B18 0,0726 (14,0) 0,0520 (10,20) н.д. 0,1056 (20,0) 0,0550 (10,66) 0,0560 (11,1) B21 (49,50) B22 (54,55,56) B27 0,0304 (6,0) 0,0304 (6,0) 0,0210 (4,12) 0,0190 (3,77) н.д. н.д. 0,0619 (12,0) 0,0640 (12,39) 0,0530 (9,7) B8 B12 (44, 45) B13 B14 B15(62) Odds Ratio (95% CI) P 0,7741 (0,385-1,556) 0,7652 (0,357-1,638) 1,2171 (0,543-2,727) 0,8902 (0,368-2,153) 1,103 (0,533-2,285) 0,5241 (0,162-1,694) 0,5372 (0,154-1,869) 0,7731 (0,186-3,213) 1,1902 (0,239-5,913) 0,5921 (0,183-1,914) 0,3492 (0,102-1,190) 1,019 (0,431-2,410) 0,5776 0,5805 0,7913 0,8322 0,9203 0,3865 0,4303 1,0000 0,1065 0,8625 1,435(0,639-3,219) 2,0991 (1,039-4,239) 2,0002 (0,883-4,529) 1,481 (0,454-4,828) 1,624 (0,498-5,301) 0,9641 (0,408-2,278) 1,2752 (0,483-3,362) 0,5169 0,0599 0,1016 0,8875 0,7944 160 HLA-B B35 B37 B40 (60) B41 B51 Частота аллелей, (% носителей аллелей) ЭВИ с СМ группа сравнения 1 группа сравнения 2 n = 50 n = 2856 n = 207 0,1754 (32,0) 0,1170 (22,13) 0,0970 (17,4) 0,0000 (0,0) 0,0030 (0,63) 0,0120 (2,4) 0,0514 (10,0) 0,0850 (16,25) 0,0480 (9,7) 0,0100 (2,0) 0,0350 (6,76) 0,0310 (6,3) 0,0619 (12,0) н.д. 0,0430 (8,7) Odds Ratio (95% CI) P 1,6561 (0,908-3,019) 2,2352 (1,116-4,476) 0,5731 (0,226-1,451) 1,0392 (0,369-2,917) 0,2821 (0,038-2,050) 0,3052 (0,039-2,385) 1,432 (0,537-3,817) 0,1362 0,0299 0,5864 0,3197 1,0000 0,3162 0,5871 Таблица 4.50 - Распределение HLA-Cw аллелей у пациентов с энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом и в группах сравнения HLA-Cw Cw1 Cw2 Cw3 Cw4 Cw5 Cw6 Cw7 Частота аллелей, n аллелей/ 2n (% носителей аллелей) ЭВИ с СМ группа сравнения 3 n = 50 n = 100 0,0619 (12,0) 0,0619 (12,0) 0,0835 (16,0) 0,2000 (36,0) 0,0304 (6,0) 0,1168 (22,0) 0,3519 (58,0) 0,0450 (9,0) 0,0400 (8,0) 0,1450 (26,0) 0,1300 (24,0) 0,0600 (12,0) 0,1100 (22,0) 0,2650 (48,0) Odds Ratio (95% CI) P 1,378 (0,462-4,117) 1,568 (0,513-4,796) 0,542 (0,225-1,305) 1,781 (0,852-3,724) 0,468 (0,126-1,741) 1,000 (0,441-2,269) 1,496 (0,754-2,968) 0,7741 0,5524 0,2157 0,1764 0,3871 1,0000 0,2993 Таблица 4.51 - Распределение HLA-DRB1 аллелей у пациентов с энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом и в группах сравнения HLA-DRB1 *01 *03 *04 *07 *08 *09 *10 *11 *12 *13 *14 *15 *16 Частота аллелей, n аллелей/ 2n (% носителей аллелей) ЭВИ с СМ группа сравнения группа сравнения 2 n = 70 n = 143 n = 207 0,2500 (50,0) 0,0944 (18,2) 0,1570 (28,5) 0,0643 (12,9) 0,0909 (17,5) 0,0940 (18,4) 0,0929 (17,1) 0,1329 (21,7) 0,1090 (19,8) 0,0857 (15,7) 0,1993 (38,5) 0,1350 (26,6) 0,0357 (7,1) 0,0315 (6,3) 0,0430 (7,7) 0,0143 (2,9) 0,01140 (2,8) 0,0140 (2,9) 0,0214 (4,3) 0,0035 (0,7) 0,0170 (3,4) 0,1286 (22,9) 0,1189 (20,9) 0,0970 (18,8) 0,0286 (5,7) 0,0210 (4,2) 0,0100 (1,9) 0,0857 (17,1) 0,1154 (22,4) 0,1260 (24,2) 0,0143 (2,9) 0,0000 (0,0) 0,0170 (3,4) 0,1357 (25,7) 0,1538 (28,7) 0,1470 (28,5) 0,0429 (8,6) 0,0245 (4,2) 0,0340 (6,8) Odds Ratio (95% CI) P 4,5001 (2,391-8,471) 2,5082 (1,437-4,379) 0,6961 (0,306-1,585) 0,6562 (0,299-1,436) 0,7471 (0,357-1,563) 0,8372 (0,412-1,703) 0,2981 (0,144-0,617) 0,5152 (0,252-1,052) 1,1451 (0,369-3,555) 0,9182 (0,324-2,605) 1,0221 (0,183-5,719) 0,9852 (0,194-4,997) 6,3851 (0,649-62,27) 1,2792 (0,322-5,088) 1,1161 (0,561-2,221) 1,2762 (0,661-2,464) 1,3841 (0,378-5,072) 3,0762 (0,748-12,642) 0,7181 (0,344-1,497) 0,6492 (0,323-1,306) 0,8402 (0,170-4,143) 0,8611 (0,451-1,645) 0,8682 (0,469-1,606) 2,1411 (0,664-6,896) 1,2922 (0,477-3,504) <0,0001 0,0013 0,4327 0,3585 0,4734 0,7263 0,0008 0,0747 1,0000 1,0000 1,0000 1,0000 0,1049 0,9999 0,8594 0,4900 0,7323 0,2083 0,4717 0,2494 0,1069 1,0000 0,7451 0,7579 0,2146 0,7901 Примечание: шрифтом выделены значимые различия с группами сравнения, p<0,05 161 Таблица 4.52 - Распределение HLA-DQA1 и DQB1 аллелей у пациентов с энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом и в группах сравнения HLA-DQA1 *01:01 *01:02 *01:03 *02:01 *03:01 *04:01 *05:01 HLA-DQB1 *02 *03:01 *03:02 *03:03 *04:01/04:02 *05:01 *05:02/05:04 *05:03 *06:02-8 Частота аллелей, n аллелей/ 2n (% носителей аллелей) ЭВИ с СМ группа сравнения 2 n = 50 n = 207 0,2600 (50,0) 0,1900 (34,3) 0,2300 (42,0) 0,1760 (32,4) 0,0500 (10,0) 0,1010 (18,8) 0,1100 (20,0) 0,1330 (26,1) 0,1100 (18,0) 0,1250 (23,2) 0,0200 (4,0) 0,0350 (6,3) 0,2200 (38,0) 0,2340 (44,0) 0,1300 (24,0) 0,1600 (30,0) 0,0900 (16,0) 0,0700 (14,0) 0,0200 (4,0) 0,2500 (50,0) 0,0500 (10,0) 0,0100 (2,0) 0,2200 (42,0) 0,1980 (36,7) 0,1780 (33,3) 0,0720 (14,5) 0,0430 (8,7) н.д. 0,1810 (32,4) н.д. 0,0140 (2,9) 0,2070 (38,2) Odds Ratio (95% CI) P 1,919 (1,026-3,576) 1,513 (0,804-2,848) 0,479 (0,178-1,285) 0,708 (0,331-1,513) 0,727 (0,329-1,603) 0,622 (0,136-2,848) 0,781 (0,415-1,472) 0,0492 0,2448 0,1498 0,4669 0,4575 0,7425 0,5248 0,544 (0,268-1,105) 0,857 (0,438-1,676) 1,124 (0,481-2,627) 1,709 (0,672-4.348) 2,089 (1,117-3,908) 0,684 (0,080-5,810) 0,0987 0,7381 0,8247 0,2869 0,0222 1,0000 1,173 (0,626-2,198) 0,6308 Примечание: шрифтом выделены значимые различия с группами сравнения, p<0,05 После выделения пациентов-носителей HLA-DR1;DQ5 в отдельную подгруппу вновь определены частоты аллелей HLA I и II класса, суммированные в таблицах 4.53 - 4.57. Помимо 100% носительства гаплотипа HLA-DR1;DQ5 для пациентов первой подгруппы характерно присутствие HLA-A31, HLA-B35, HLA-Cw4 аллелей. Напротив, частота носительства HLA-DRB1*04, HLA-DRB1*07 была значимо ниже, чем в группах сравнения. Таблица 4.53 - Распределение HLA-A аллелей у пациентов-носителей HLA-DR1;DQ5 и в группах сравнения Частота аллелей, (% носителей аллелей) HLA- A A1 A2 A3 A11 A23 A24 A25 A26 ЭВИ с СМ группа сравнения 1 группа сравнения 2 n = 24 n = 2856 n = 207 0,1103 (20,83) 0,1170 (22,06) 0,1810 (31,9) 0,2362 (41,67) 0,2870 (49,12) 0,2970 (51,7) 0,2641 (45,83) 0,1430 (26,58) 0,1590 (29,0) 0,0426 (8,33) 0,0620 (12,01) 0,0460 (8,7) 0,0000 (0,00) 0,1103 (20,83) 0,0000 (0,00) 0,0871 (16,67) н.д. н.д. н.д. н.д. 0,0220 (4,3) 0,0890 (17,4) 0,0430 (8,7) 0,0390 (7,7) Odds Ratio P (95% CI) 0,9291 (0,346-2,500) 0,5622 (0,201-1,571) 0,7391(0,327-1,671) 0,6682 (0,284-1,571) 2,3381(1,043-5,241) 2,0732 (0,879-4,886) 0,6661(0,156-2,845) 0,9542 (0,207-4,391) 1,250 (0,438-3,567) 2,387 (0,727-7,837) 0,8875 0,2674 0,6033 0,3938 0,0584 0,1041 1,0000 0,6030 0,7772 0,2290 0,2390 162 Продолжение таблицы 4.53 Частота аллелей, (% носителей аллелей) HLA- A A28 A29 A30 A31 A32 Odds Ratio ЭВИ с СМ группа сравнения 1 группа сравнения 2 n = 24 n = 2856 n = 207 0,0646 (12,50) 0,0260 (5,15) н.д. 0,0000 (0,00) 0,0110 (2,17) 0,0100 (1,9) 0,0000 (0,00) н.д. 0,0140 (2,9) 0,0871 (16,67) 0,0000 (0,00) н.д. н.д. 0,0190 (3,9) 0,0340 (6,3) P (95% CI) 2,633 (0,776-8,927) 4,975 (1,376-17,988) - 1,0000 1,0000 0,0253 0,3711 Примечание: шрифтом выделены значимые различия с группами сравнения, p<0,05 Таблица 4.54 - Распределение HLA-B аллелей у пациентов-носителей HLA-DR1;DQ5 и в группах сравнения HLA-B B7 B8 B12 (44, 45) B13 B14 B15(62) B16 (38, 39) B17 (57) B18 B21 (49,50) B22 (54,55,56) B27 B35 B37 B40 (60) B41 B51 Частота аллелей, (% носителей аллелей) ЭВИ с СМ группа сравнения 1 группа сравнения 2 n = 24 n = 2856 n = 207 0,0646 (12,50) 0,1310 (24,42) 0,1470 (24,6) 0,0646 (12,50) 0,0610 (11,79) 0,0770 (15,5) 0,1103 (20,83) 0,0870 (16,61) н.д. 0,0210 (4,17) 0,0560 (10,84) 0,0530 (10,6) 0,0210 (4,17) 0,0260 (5,10) 0,0170 (3,4) 0,0000 (0,00) 0,0500 (9,75) 0,0820 (15,5) 0,0646 (12,50) 0,0646 (12,50) 0,0610 (11,79) 0,0520 (10,20) н.д. н.д. 0,0646 (12,50) 0,0550 (10,66) 0,0560 (11,1) 0,0000 (0,00) 0,0425 (8,33) 0,0210 (4,12) 0,0190 (3,77) н.д. н.д. 0,0871 (16,67) 0,0640 (12,39) 0,0530 (9,7) 0,2929 (50,0) 0,1170 (22,13) 0,0970 (17,4) 0,0000 (0,00) 0,0030 (0,63) 0,0120 (2,4) 0,0646 (12,50) 0,0850 (16,25) 0,0480 (9,7) 0,0000 (0,00) 0,0350 (6,76) 0,0310 (6,3) 0,0425 (8,33) н.д. 0,0430 (8,7) Odds Ratio (95% CI) P 0,4421 (0,132-1,488) 0,4372 (0,125-1,526) 1,0681 (0,317-3,599) 0,7812 (0,220-2,774) 1,322 (0,491-3,559) 0,3571 (0,048-2,653) 0,3562 (0,047-2,841) 0,8071 (0,108-6,017) 1,2422 (0,146-10,55) 1,068 (0,317-3,599) 0,2655 0,2140 0,7783 0,4821 1,0000 0,0537 - 1,259 (0,373-4,247) 1,9991 (0,356-4,044) 1,1432 (0,316-4,131) 2,313 (0,537-9,963) 1,4141 (0,480-4,159) 1,8702 (0,581-6,015) 3,5191 (1,573-7,871) 4,7502 (1,976-11,41) 0,7361 (0,218-2,479) 1,3362 (0,366-4,875) 0,954 (0,207-4,391) 1,0000 0,2887 0,0025 0,0007 1,0000 0,7159 0,3711 1,0000 Примечание: шрифтом выделены значимые различия с группами сравнения, p<0,05 Таблица 4.55 - Распределение HLA-Cw аллелей у пациентов-носителей HLA- DR1;DQ5 и в группах сравнения HLA-Cw Cw1 Cw2 Cw3 Cw4 Cw5 Cw6 Cw7 Частота аллелей, (% носителей аллелей) ЭВИ с СМ группа сравнения 3 n = 24 n = 100 0,0425 (8,33) 0,0646 (12,50) 0,0871 (16,67) 0,3230 (54,17) 0,0425 (8,33) 0,1103 (20,83) 0,2639 (45,83) 0,0450 (9,0) 0,0400 (8,0) 0,1450 (26,0) 0,1300 (24,0) 0,0600 (12,0) 0,1100 (22,0) 0,2650 (48,0) Odds Ratio (95% CI) P 0,919 (0,185-4,559) 1,642 (0,401-6,723) 0,569 (0,178-1,821) 3,742 (1,484-9,436) 0,667 (0,139-3,198) 0,933 (0,313-2,783) 1,280 (0,524-3,129) 0,6398 0,6895 0,4322 0,0059 0,7365 1,0000 0,6530 163 Таблица 4.56 - Распределение HLA-DRB1 аллелей у пациентов-носителей HLA- DR1;DQ5 и в группах сравнения HLA-DRB1 *01 *03 *04 *07 *08 *09 *10 *11 *12 *13 *14 *15 *16 Частота аллелей, n аллелей/ 2n (% носителей аллелей) ЭВИ с СМ группа сравнения группа сравнения 2 n = 35 n = 143 n = 207 0,5000 (100,00) 0,0944 (18,2) 0,1570 (28,5) 0,0571 (11,43) 0,0909 (17,5) 0,0940 (18,4) 0,0143 (2,86) 0,1329 (21,7) 0,1090 (19,8) 0,0429 (8,57) 0,1993 (38,5) 0,1350 (26,6) 0,0286 (5,71) 0,0315 (6,3) 0,0430 (7,7) 0,0143 (2,86) 0,01140 (2,8) 0,0140 (2,9) 0,0143 (2,86) 0,0035 (0,7) 0,0170 (3,4) 0,0714 (14,29) 0,1189 (20,9) 0,0970 (18,8) 0,0143 (2,86) 0,0210 (4,2) 0,0100 (1,9) 0,0857 (17,14) 0,1154 (22,4) 0,1260 (24,2) 0,0143 (2,86) 0,0000 (0,0) 0,0170 (3,4) 0,1000 (20,00) 0,1538 (28,7) 0,1470 (28,5) 0,0429 (8,57) 0,0245 (4,2) 0,0340 (6,8) Odds Ratio (95% CI) P 0,6091 (0.197-1,880) 0,5742 (0,191-1,722) 0,1061 (0,014-0,807) 0,1192 (0,015-0,895) 0,1001 (0,023-0,434) 0,1722 (0,040-0,744) 0,9021 (0,186-4,375) 0,7232 (0,159-3,294) 1,0221 (0,111-9,441) 0,9852 (0,115-8,442) 4,1761 (0,254-68,47) 0,8402 (0,100-7,047) 0,6271 (0,224-1,756) 0,7172 (0,262-1,969) 0,6721 (0,078-5,766) 1,4932 (0,162-13,760) 0,7171 (0,274-1,880) 0,6492 (0,255-1,654) 0,8402 (0,100-7,047) 0,6221 (0,252-1,536) 0,6272 (0,259-1,514) 2,1401 (0,508-9,020) 1,2922 (0,351-4,751) <0,0001 <0,0001 0,4553 0,3517 0,0119 0,0137 <0,0001 0,0078 1,0000 1,0000 1,0000 1,0000 0,3555 1,0000 0,4798 0,6396 1,0000 1,0000 0,6466 0,3984 0,1966 1,0000 0,3963 0,3168 0,3820 0,7194 Примечание: шрифтом выделены значимые различия с группами сравнения, p<0,05 Таблица 4.57 - Распределение HLA-DQA1 и DQB1 аллелей у пациентов-носителей HLA-DR1;DQ5 и в группах сравнения HLA-DQA1 *01:01 *01:02 *01:03 *02:01 *03:01 *04:01 *05:01 *02 *03:01 *03:02 *03:03 *04:01/04:02 *05:01 *05:02/05:04 *05:03 *06:02-8 Частота аллелей, n аллелей/ 2n (% носителей аллелей) ЭВИ с СМ группа сравнения 2 n = 24 n = 207 0,5208 (100,00) 0,1900 (34,3) 0,1667 (33,33) 0,1760 (32,4) 0,0625 (12,50) 0,1010 (18,8) 0,0417 (8,33) 0,1330 (26,1) 0,0417 (8,33) 0,1250 (23,2) 0,0208 (4,17) 0,0350 (6,3) 0,1458 (29,17) 0,2340 (44,0) 0,0833 (16,67) 0,1042 (20,83) 0,0000 (0,00) 0,0417 (8,33) 0,0208 (4,17) 0,5000 (100,00) 0,0417 (8,33) 0,0208 (4,17) 0,1875 (37,50) 0,1980 (36,7) 0,1780 (33,3) 0,0720 (14,5) 0,0430 (8,7) н.д. 0,1810 (32,4) н.д. 0,0140 (2,9) 0,2070 (38,2) Odds Ratio (95% CI) P 1,045 (0,426-2,563) 0,615 (0,175-2,167) 0,257 (0,058-1,132) 0,301 (0,068-1,327) 0,649 (0,081-5,190) 0,524 (0,208-1,319) <0,0001 1,0000 0,5826 0,0756 0,1182 1,0000 0,1946 0,344 (0,113-1,046) 1,134 (0,398-3,223) 0,954 (0,207-4,391) 1,456 (0,167-12,63) 0,0684 0,999 0,0510 1,0000 <0,0001 1,0000 0,972 (0,406-2,327) 1,0000 Примечание: шрифтом выделены значимые различия с группами сравнения, p<0,05 164 Сформирована подгруппа пациентов с ЭВИ с СМ, в генотипе которых отсутствовал HLA-DR1;DQ5 гаплотип. У пациентов с ЭВИ с СМ, не имеющих в генотипе HLA-DR1;DQ5, значимо реже, чем в группах сравнения, встречался аллель HLA-A2. Выше, чем в среднем в популяции, была частота носительства HLA-A31 и HLA-В18. Из аллелей локусов, относящихся ко второму классу HLA, в данной подгруппе помимо HLA-DRB1*01, HLA-DQA1*01:01 и HLA-DQB1*05:01, входящих в отсутствующий в данной подгруппе гаплотип, выше, чем в группе сравнения частота HLA-DQB1*03:02 (таблицы 4.58-4.62). Таблица 4.58 - Распределение HLA-A аллелей у пациентов, не имеющих в генотипе HLA-DR1;DQ5, и в группах сравнения HLA- A A1 Частота аллелей, (% носителей аллелей) ЭВИ с СМ группа сравнения 1 группа сравнения 2 n = 26 n = 2856 n = 207 0,0835 (16,0) 0,1170 (22,06) 0,1810 (31,9) 0,1282 (24,0) 0,2870 (49,12) 0,2970 (51,7) 0,2254 (40,0) 0,1430 (26,58) 0,1590 (29,0) 0,0202 (4,0) 0,0620 (12,01) 0,0460 (8,7) A23 A24 A25 A26 A28 A29 0,0000 (0,0) 0,1754 (32,0) 0,0835 (16,0) 0,0619 (12,0) 0,0408 (8,0) н.д. н.д. н.д. н.д. 0,0260 (5,15) 0,0220 (4,3) 0,0890 (17,4) 0,0430 (8,7) 0,0390 (7,7) н.д. 0,0408 (8,0) 0,0110 (2,17) 0,0100 (1,9) A30 A31 A32 0,0000 (0,0) 0,0835 (16,0) 0,0202 (4,0) н.д. н.д. н.д. 0,0140 (2,9) 0,0190 (3,9) 0,0340 (6,3) A2 A3 A11 Odds Ratio (95% CI) P 0,6731 (0,230-1,967) 0,4072 (1,134-1,233) 0,3271 (0,130-0,821) 0,2952 (0,113-0,769) 1,8421 (0,824-4,117) 1,6332 (0,694-3,839) 0,3051 (0,041-2,264) 0,4372 (0,056-3,426) 2,235 (0,896-5,575) 2,000 (0,618-6,466) 1,628 (0,439-6,031) 1,602 (0,374-6,862) 3,9181 (0,904-16,98) 4,4132 (0,766-25,42) 4,738 (1,315-17,07) 0,622 (0,077-4,966) 0,6242 0,1127 0,0213 0,0105 0,1989 0,3558 0,4987 0,6025 0,1022 0,2706 0,7021 0,1277 1,0000 0,0288 1,0000 Примечание: шрифтом выделены значимые различия с группами сравнения, p<0,05 Таблица 4.59 - Распределение HLA-B аллелей у пациентов, не имеющих в генотипе HLA-DR1;DQ5, и в группах сравнения HLA-B B7 B8 B12 (44, 45) B13 B14 Частота аллелей, (% носителей аллелей) ЭВИ с СМ группа сравнения 1 группа сравнения 2 n = 26 n = 2856 n = 207 0,1282 (24,0) 0,1310 (24,42) 0,1470 (24,6) 0,0619 (12,0) 0,0610 (11,79) 0,0770 (15,5) 0,0835 (16,0) 0,0870 (16,61) н.д. 0,0408 (8,0) 0,0560 (10,84) 0,0530 (10,6) 0,0202 (4,0) 0,0260 (5,10) 0,0170 (3,4) 0,0500 (9,75) 0,0820 (15,5) 0,0610 (11,79) 0,0520 (10,20) н.д. н.д. B15(62) 0,0619 (12,0) B16 (38, 39) 0,0619 (12,0) B17 (57) 0,0619 (12,0) Odds Ratio (95% CI) P 0,9781 (0,389-2,459) 0,9662 (0,366-2,550) 1,0191 (0,303-3,424) 0,7462 (0,211-2,639) 0,957 (0,327-2,801) 0,7141 (0,167-3,044) 0,7312 (0,161-3,313) 0,7731 (0,104-5,757) 1,1902 (0,140-10,09) 1,2641 (0,376-4,252) 0,7452 (0,211-2,639) 1,019 (0,303-3,424) 0,8625 1,0000 0,7759 1,0000 1,0000 0,7758 - 1,202 (0,357-4,040) - 165 Продолжение таблицы 4.59 HLA-B B18 B21 (49,50) B22 (54,55,56) B27 B35 B37 B40 (60) B41 B51 Частота аллелей, (% носителей аллелей) ЭВИ с СМ группа сравнения 1 группа сравнения 2 n = 26 n = 2856 n = 207 0,1515 (28,0) 0,0550 (10,66) 0,0560 (11,1) 0,0619 (12,0) 0,0202 (4,0) 0,0210 (4,12) 0,0190 (3,77) н.д. н.д. 0,0408 (8,0) 0,0640 (12,39) 0,0530 (9,7) 0,0835 (16,0) 0,1170 (22,13) 0,0970 (17,4) 0,0000 (0,0) 0,0030 (0,63) 0,0120 (2,4) 0,0408 (8,0) 0,0850 (16,25) 0,0480 (9,7) 0,0202 (4,0) 0,0350 (6,76) 0,0310 (6,3) 0,0835 (16,0) н.д. 0,0430 (8,7) Odds Ratio (95% CI) P 3,2641 (1,352-7,879) 3,1112 (1,174-8,246) 3,164 (0,933-10,72) 1,060 (0,142-7,909) 0,6151 (0,144-2,618) 0,8132 (0,178-3,705) 0,6701 (0,229-1,959) 0,9052 (0,293-2,795) 0,4481 (0,105-1,908) 0,8132 (0,178-3,705) 0,5751 (0,077-4,272) 0,6222 (0,077-4,966) 2,000 (0,618-6,466) 0,0267 1,0000 1,0000 1,0000 1,0000 1,0000 0,2706 Примечание: шрифтом выделены значимые различия с группами сравнения, p<0,05 Таблица 4.60 - Распределение HLA-Cw аллелей у пациентов, не имеющих в генотипе HLA-DR1;DQ5, и в группах сравнения HLA-Cw Cw1 Cw2 Cw3 Cw4 Cw5 Cw6 Cw7 Частота аллелей, (% носителей аллелей) ЭВИ с СМ группа сравнения 3 n = 26 n = 100 0,0835 (16,0) 0,0619 (12,0) 0,0835 (16,0) 0,1056 (20,0) 0,0202 (4,0) 0,1282 (24,0) 0,4343 (68,0) 0,0450 (9,0) 0,0400 (8,0) 0,1450 (26,0) 0,1300 (24,0) 0,0600 (12,0) 0,1100 (22,0) 0,2650 (48,0) Odds Ratio (95% CI) P 1,926 (0,541-6,857) 1,568 (0,384-6,398) 0,542 (0,170-1,727) 0,792 (0,268-2,336) 0,306 (0,038-2,469) 1,119 (0,398-3,144) 2,302 (0,910-5,819) 0,4625 0,6922 0,4328 0,7949 0,3053 1,0000 0,1161 Таблица 4.61 - Распределение HLA-DRB1 аллелей у пациентов, не имеющих в генотипе HLA-DR1;DQ5, и в группах сравнения HLA-DRB1 *01 *03 *04 *07 *08 Частота аллелей, n аллелей/ 2n (% носителей аллелей) ЭВИ с СМ группа сравнения группа сравнения 2 n = 35 n = 143 n = 207 0,0000 (0,00) 0,0944 (18,2) 0,1570 (28,5) 0,0714 (14,29) 0,0909 (17,5) 0,0940 (18,4) 0,1714 (31,43) 0,1329 (21,7) 0,1090 (19,8) 0,1286 (22,86) 0,1993 (38,5) 0,1350 (26,6) 0,0429 (8,57) 0,0315 (6,3) 0,0430 (7,7) Odds Ratio (95% CI) P 0,7871 (0,277-2,227) 0,7412 (0,270-2,035) 1,6561 (0.731-3,749) 1,8562 (0,841-4,094) 0,4741 (0,201-1,118) 0,8192 (0,351-1,910) 1,3951 (0,357-5,451) 1,1192 (0,308-4,060) 0,0055 0,0001 0,8033 0,6412 0,2668 0,1797 0,1140 0,6849 0,7060 1,0000 166 Продолжение таблицы 4.61 HLA-DRB1 *09 *10 *11 *12 *13 *14 *15 *16 Частота аллелей, n аллелей/ 2n (% носителей аллелей) ЭВИ с СМ группа сравнения группа сравнения 2 n = 35 n = 143 n = 207 0,0143 (2,86) 0,01140 (2,8) 0,0140 (2,9) 0,0286 (5,71) 0,0035 (0,7) 0,0170 (3,4) 0,1857 (31,43) 0,1189 (20,9) 0,0970 (18,8) 0,0429 (8,57) 0,0210 (4,2) 0,0100 (1,9) 0,0857 (17,14) 0,1154 (22,4) 0,1260 (24,2) 0,0143 (2,86) 0,0000 (0,0) 0,0170 (3,4) 0,1714 (31,43) 0,1538 (28,7) 0,1470 (28,5) 0,0429 (8,57) 0,0245 (4,2) 0,0340 (6,8) Odds Ratio (95% CI) P 1,0221 (0,110-9,441) 0,9852 (0,115-8,442) 8,6061 (0,757-97,7) 1,7322 (0,344-8,698) 1,7261 (0,761-3,917) 1,9742 (0,892-4,368) 2,1461 (0,508-9,020) 4,7582 (1,017-22,25) 0,7171 (0,274-1,880) 0,6492 (0,255-1,655) 0,8402 (0,100-7,047) 1,1401 (0,512-2,538) 1,1492 (0,529-2,495) 2,1411 (0,508-9,020) 1,2922 (0,351-4,751) 1,0000 1,0000 0,0991 0,6218 0,2616 0,1126 0,3820 0,0644 0,6466 0,3984 0,1966 1,0000 0,8360 0,8404 0,3820 0,7195 Примечание: шрифтом выделены значимые различия с группами сравнения, p<0,05 Таблица 4.62 - Распределение HLA-DQA1 и DQB1 аллелей у пациентов, не имеющих в генотипе HLA-DR1;DQ5, и в группах сравнения HLA-DQA1 *01:01 *01:02 *01:03 *02:01 *03:01 *04:01 *05:01 HLA-DQB1 *02 *03:01 *03:02 *03:03 *04:01/04:02 *05:01 *05:02/05:04 *05:03 *06:02-8 Частота аллелей, n аллелей/ 2n (% носителей аллелей) ЭВИ с СМ группа сравнения 2 n = 26 n = 207 Odds Ratio (95% CI) P 0,0192 (3,85) 0,2885 (50,00) 0,0385 (7,69) 0,1731 (30,77) 0,1731 (26,92) 0,0192 (3,85) 0,2885 (46,15) 0,1900 (34,3) 0,1760 (32,4) 0,1010 (18,8) 0,1330 (26,1) 0,1250 (23,2) 0,0350 (6,3) 0,2340 (44,0) 0,076 (0,010-0,577) 2,089 (0,918-4,754) 0,359 (0,081-1,583) 1,259 (0,518-3,063) 1,220 (0,484-3,077) 0,597 (0,075-4,759) 1,093 (0,482-2,477) 0,0011 0,0828 0,1854 0,6399 0,8065 1,0000 0,8373 0,1731 (30,77) 0,2115 (38,46) 0,1731 (30,77) 0,0962 (19,23) 0,0192 (3,85) 0,0192 (3,85) 0,0577 (11,54) 0,0000 (0,00) 0,2500 (46,15) 0,1980 (36,7) 0,1780 (33,3) 0,0720 (14,5) 0,0430 (8,7) н.д. 0,1810 (32,4) н.д. 0,0140 (2,9) 0,2070 (38,2) 0,766 (0,318-1,846) 1,250 (0,539-2,899) 2,622 (1,047-6,569) 2,500 (0,842-7,425) 0,083 (0,011-0,630) - 0,6668 0,6618 0,0469 0,1515 0,0021 0,6234 1,388 (0,611-3,155) 0,5231 Примечание: шрифтом выделены значимые различия с группами сравнения, p<0,05 167 Сравнительный анализ частот аллелей HLA I и II класса в группах HLADR1;DQ5 (+) и HLA-DR1;DQ5 (-) пациентов с ЭВИ с СМ позволил выявить аллели, частота носительства которых значимо отличалась у пациентов данных групп (таблицы 4.63 -4.67). Таблица 4.63 - Частота HLA-A аллелей и их носителей в группах HLA-DR1;DQ5 (+) и HLA-DR1;DQ5 (-) пациентов с энтеровирусной инфекции с серозным менингитом Частота аллелей, (% носителей аллелей) HLA- A HLA-DR1;DQ5 (-) HLA-DR1;DQ5 (+) n = 26 n = 24 A1 A2 0,0835 (16,0) 0,1103 (20,83) 0,1282 (24,0) 0,2362 (41,67) A3 0,2254 (40,0) 0,0202 (4,0) 0,0000 (0,0) 0,1754 (32,0) 0,0835 (16,0) 0,0619 (12,0) 0,0408 (8,0) 0,0408 (8,0) 0,0000 (0,0) 0,0835 (16,0) 0,0202 (4,0) 0,2641 (45,83) 0,0426 (8,33) 0,0000 (0,00) 0,1103 (20,83) 0,0000 (0,00) 0,0871 (16,67) 0,0646 (12,50) 0,0000 (0,00) 0,0000 (0,00) 0,0871 (16,67) 0,0000 (0,00) A11 A23 A24 A25 A26 A28 A29 A30 A31 A32 P 0,7252 0,2321 0,7761 0,6092 1,0000 0,5202 0,1098 0,7019 0,6671 0,4898 1,0000 1,0000 1,0000 Таблица 4.64 - Распределение HLA-Cw аллелей и их носителей в группах HLADR1;DQ5 (+) и HLA-DR1;DQ5 (-) пациентов с энтеровирусной инфекции с серозным менингитом HLA-Cw Cw1 Cw2 Cw3 Cw4 Cw5 Cw6 Cw7 Частота аллелей, (% носителей аллелей) HLA-DR1;DQ5 (-) HLA-DR1;DQ5 (+) n = 26 n = 24 0,0835 (16,0) 0,0619 (12,0) 0,0835 (16,0) 0,1056 (20,0) 0,0202 (4,0) 0,1282 (24,0) 0,4343 (68,0) 0,0425 (8,33) 0,0646 (12,50) 0,0871 (16,67) 0,3230 (54,17) 0,0425 (8,33) 0,1103 (20,83) 0,2639 (45,83) Примечание: шрифтом выделены значимые различия в группах, p<0,05 P 0,6671 1,0000 1,0000 0,0186 0,6092 1,0000 0,1536 168 Таблица 4.65 - Распределение HLA-B аллелей и их носителей в группах HLADR1;DQ5 (+) и HLA-DR1;DQ5 (-) пациентов с энтеровирусной инфекции с серозным менингитом Частота аллелей, n аллелей/ 2n (% носителей аллелей) HLA-B P HLA-DR1;DQ5 (-) HLA-DR1;DQ5 (+) n = 26 n = 24 B7 B8 B12 (44, 45) B13 B14 B15(62) B16 (38, 39) 0,1282 (24,0) 0,0619 (12,0) 0,0835 (16,0) 0,0408 (8,0) 0,0202 (4,0) 0,0619 (12,0) 0,0619 (12,0) 0,0646 (12,50) 0,0646 (12,50) 0,1103 (20,83) 0,0210 (4,17) 0,0210 (4,17) 0,0000 (0,00) B17 (57) B18 B21 (49,50) B22 (54,55,56) B27 B35 B37 B40 (60) B41 B51 0,0619 (12,0) 0,1515 (28,0) 0,0619 (12,0) 0,0202 (4,0) 0,0408 (8,0) 0,0835 (16,0) 0,0000 (0,0) 0,0408 (8,0) 0,0202 (4,0) 0,0835 (16,0) 0,4635 1,0000 0,7252 1,0000 1,0000 0,2347 1,0000 0,0646 (12,50) 0,0646 (12,50) 0,0646 (12,50) 0,0000 (0,00) 0,0425 (8,33) 0,0871 (16,67) 0,2929 (50,0) 0,0000 (0,00) 0,0646 (12,50) 0,0000 (0,00) 0,0425 (8,33) 1,0000 0,2890 0,2347 0,6092 0,4174 0,0156 1,0000 0,6671 1,0000 0,6671 Примечание: шрифтом выделены значимые различия в группах, p<0,05 Таблица 4.66 - Распределение HLA-DRB1 аллелей и их носителей в группах HLADR1;DQ5 (+) и HLA-DR1;DQ5 (-) пациентов с энтеровирусной инфекции с серозным менингитом Частота аллелей, n аллелей/ 2n (% носителей аллелей) HLA-DRB1 *01 *03 *04 *07 *08 *09 *10 *11 *12 *13 *14 *15 *16 Помимо HLA-DR1;DQ5 (+) n = 35 n = 35 0,0000 (0,00) 0,0714 (14,29) 0,1714 (31,43) 0,1286 (22,86) 0,0429 (8,57) 0,0143 (2,86) 0,0286 (5,71) 0,1857 (31,43) 0,0429 (8,57) 0,0857 (17,14) 0,0143 (2,86) 0,1714 (31,43) 0,0429 (8,57) 0,5000 (100,00) 0,0571 (11,43) 0,0143 (2,86) 0,0429 (8,57) 0,0286 (5,71) 0,0143 (2,86) 0,0143 (2,86) 0,0714 (14,29) 0,0143 (2,86) 0,0857 (17,14) 0,0143 (2,86) 0,1000 (20,00) 0,0429 (8,57) аллелей, дискриминатора P HLA-DR1;DQ5 (-) входящих (HLA-DRB1*01, в гаплотип, <0,0001 1,0000 0,0029 0,1875 0,9999 1,0000 0,9999 0,1534 0,6139 1,0000 1,0000 0,4125 1,0000 используемый HLA-DQA1*01:01, в качестве HLA-DQB1*05:01), в 169 анализируемых группах отличалась частота носительства HLA-B35, HLA-Cw4, HLADRB1*04 и HLA-DQA1*03:02. Таблица 4.67 - Распределение HLA-DQA1 и DQB1 аллелей и их носителей в группах HLA-DR1;DQ5 (+) и HLA-DR1;DQ5 (-) пациентов с энтеровирусной инфекции с серозным менингитом Частота аллелей, n аллелей/ 2n (% носителей аллелей) HLA-DQA1 P HLA-DR1;DQ5 (-) HLA-DR1;DQ5 (+) n = 26 n = 24 0,0192 (3,85) 0,2885 (50,00) 0,0385 (7,69) 0,1731 (30,77) 0,1731 (26,92) 0,0192 (3,85) 0,2885 (46,15) 0,5208 (100,00) 0,1667 (33,33) 0,0625 (12,50) 0,0417 (8,33) 0,0417 (8,33) 0,0208 (4,17) 0,1458 (29,17) <0,0001 0,2649 0,6613 0,0765 0,1417 1,0000 0,2549 0,1731 (30,77) 0,2115 (38,46) 0,1731 (30,77) 0,0962 (19,23) 0,0192 (3,85) 0,0192 (3,85) 0,0577 (11,54) 0,0000 (0,00) 0,2500 (46,15) 0,0833 (16,67) 0,1042 (20,83) 0,0000 (0,00) 0,0417 (8,33) 0,0208 (4,17) 0,5000 (100,00) 0,0417 (8,33) 0,0208 (4,17) 0,1875 (37,50) 0,3269 0,2242 0,0043 0,4205 1,0000 <0,0001 1,0000 0,4800 *01:01 *01:02 *01:03 *02:01 *03:01 *04:01 *05:01 HLA-DQB1 *02 *03:01 *03:02 *03:03 *04:01/04:02 *05:01 *05:02/05:04 *05:03 *06:02-8 0,5780 Примечание: шрифтом выделены значимые различия в группах, p<0,05 Особенности иммунного ответа у пациентов с HLA-DR1;DQ5 гаплотипом. Для того, чтобы оценить особенности иммунного ответа в остром периоде ЭВИ с СМ у пациентов-носителей гаплотипа-провокатора и заболевших детей, не имеющих в генотипе HLA-DR1;DQ5, проведено сравнение иммунологических показателей в группах детей 4-7 и 8-14 лет с HLA-DR1;DQ5 гаплотипом и без него в остром периоде ЭВИ с СМ. 170 2800 2600 3000 N DR1;DQ5(+) DR1;DQ5(-) а 2400 б N DRB1;DQ5 (+) DRB1;DQ5 (-) 2500 2200 2000 2000 1800 106/л 106/л 1600 1400 1500 * * 1200 1000 *# * * 800 1000 * 600 * * 500 400 ** 200 * * 0 0 CD3+ CD3+CD4+ CD19+ CD3+HLA-DR+ CD3+CD8+ CD16+CD56+ CD3+ 1-10 сутки CD3+CD4+ CD19+ CD3+HLA-DR+ CD3+CD8+ CD16+CD56+ 11-20 сутки Рисунок 4.2 - Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови в группах HLA-DR1;DQ5(+) и HLA-DR1;DQ5(-) 4-7 летних детей в: 1-10 сутки (а) и 1120 сутки (б) острого периода энтеровирусной инфекции с серозным менингитом, (Ме, LQ-UQ). Примечание: * – р<0,05 к показателям группы сравнения (N) ; # - p<0,05 между группами DRB1;DQ5(+) и DRB1;DQ5(-) Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови в остром периоде ЭВИ с СМ в обеих анализируемых группах детей 4-7 лет характеризовался в 1-10 сутки от начала заболевания снижением относительного содержания Т-лимфоцитов, относительного и абсолютного содержания Т-хелперов и увеличением относительного и абсолютного содержания В-лимфоцитов, активированных Тлимфоцитов и NK клеток. Причем, в группе детей HLA-DR1;DQ5(-) уровень NK в периферической крови был значимо выше в первую декаду заболевания по сравнению с группой HLA-DR1;DQ5(+). На 11-20 сутки в обеих группах сохранялся повышенный уровень активированных Т-лимфоцитов и NK (рисунок 4.2). Результаты внутриклеточного окрашивания цитокинов в активированных Тлимфоцитах периферической крови свидетельствуют о повышении содержания IFN- и TNF--экспрессирующих цитотоксических лимфоцитов в остром периоде заболевания как в группе HLA-DR1;DQ5-положительных детей 4-7 лет, так и HLADR1;DQ5-отрицательных. Количество Тh1 лимфоцитов увеличивалось в обеих группах во вторую декаду заболевания, содержание TNF--положительных Тхелперов значимо не изменялось. Однако анализ абсолютной интегрированной интенсивности флюоресценции показал, что во вторую декаду заболевания 171 показатели CD3+CD4+IFN- аиСИФЦ CD3+CD4+TNF- и лимфоцитов увеличивались по отношению к группе сравнения только у носителей HLA-DR1;DQ5 Рисунок 4.3 - 6000 * 5000 4000 3000 2000 * Показатели абсолютной CD8+TNF-a+(11-20) CD8+IFN-y+(11-20) CD8+TNF-a+ (1-10) CD8+IFN-y+(1-10) CD4+TNF-a+(11-20) CD4+IFN-y+(11-20) 0 CD4+TNF-a+ (1-10) 1000 CD4+IFN-y+(1-10) абсолютная интегрированная интенсивность флюоресценции, усл. ед. гаплотипа (рисунок 4.3). N DR1;DQ5(+) DR1;DQ5(-) интегрированной интенсивности флюоресценции IFN- и TNF- CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов в зависимости от HLADR1;DQ5 гаплотипа в динамике заболевания, (Ме, LQ-UQ). Примечание: * – р<0,05 к показателям группы сравнения (N) Значительные отличия обнаружены в содержании Тh2 субпопуляции. В обеих группах содержание Th2 клеток увеличивалось в 1-10 сутки от начала заболевания, однако, содержание Th2 лимфоцитов было значимо ниже у детей-носителей HLADR1;DQ5 гаплотипа (рисунок 4.4). На 11-20 сутки количество Th2 клеток в группе HLA-DR1;DQ5-положительных детей увеличивалось, превышая показатель в группе HLA-DR1;DQ5(-). Показатели общего уровня иммуноглобулинов классов IgA, IgM, IgG, IgE, средний титр вирус-специфических нейтрализующих антител к аутоштаммам, а также содержание циркулирующих иммунных комплексов значимо не отличались в исследуемых группах, при этом содержание иммуноглобулинов IgE класса и ЦИК в обеих группах превышало показатели в группе сравнения. 172 500 900 800 а N DR1;DQ5 (+) DR1;DQ5 (-) * б * * N DR1;DQ5 (+) DR1;DQ5(-) * 400 700 * * 600 500 * 106/л 106/л 300 * 400 200 300 ** 200 100 100 0 0 IFN-y+ (1-10) IL-2+ (1-10) TNF-a+ (11-20) TNF-a+ (1-10) IFN-y+ (11-20) IL-2+ (11-20) IFN-y+ (1-10) IL-2+ (1-10) TNF-a+ (11-20) TNF-a+(1-10) IFN-y+ (11-20) IL-2+ (11-20) Median; Box: 25%-75%; Whisker: Non-Outlier Range 100 DR1;DQ5(+) DR1;DQ5(-) в 80 106/л 60 40 # 20 0 1-10 сутки 11-20 сутки Рисунок 4.4 - Содержание Т-эффекторов: CD3+CD4+ (Ме, LQ-UQ) (а); CD3+CD8+ (Ме, LQ-UQ) (б); CD3+CD4+IL-4+ (Th2) (Ме, LQ-UQ, min-max) (в) в периферической крови детей 4-7 лет в острый период энтеровирусной инфекции с серозным менингитом. Примечание: * – р<0,05 к показателям группы сравнения (N); # - р<0,05 в группах HLA-DR1;DQ5(+) и HLA-DR1;DQ5 (-) Аналогичный комплекс исследований выполнен в группе 8-14 летних детей в острый период ЭВИ с СМ. У 8-14 летних детей в обеих анализируемых группах наблюдали снижение относительного содержания Т-лимфоцитов и Т-хелперов, при этом абсолютное количество этих лимфоцитарных субпопуляций в периферической крови не отличалось от их уровня в группе относительно здоровых детей. DR1;DQ5(-) 173 2600 2000 1800 а 2400 б N DR1;DB5(+) DR1;DQ5(-) 2200 1600 2000 1400 1800 1600 106/л 106/л 1200 1000 800 1400 1200 1000 600 * * * 800 * * 600 400 ** 400 * * 200 200 0 CD3+ CD3+CD4+ CD19+ CD3+HLA-DR+ CD3+CD8+ CD16+CD56+ 1-10 сутки 0 CD3+ CD3+CD4+ CD19+ CD3+HLA-DR+ CD3+CD8+ CD16+CD56+ 11-20 сутки Рисунок 4.5 - Субпопуляционный состав лимфоцитов периферической крови в группах HLA-DR1;DQ5(+) и HLA-DR1;DQ5(-) 8-14 летних детей в: 1-10 сутки (а) и 11-20 сутки (б) острого периода энтеровирусной инфекции с серозным менингитом, (Ме, LQ-UQ). Примечание: * – р<0,05 к показателям группы сравнения (N) На протяжении всего периода обследования в обеих группах было повышено относительное и абсолютное содержание NK и активированных Т-лимфоцитов. Кроме того, на 11-20 сутки от начала заболевания у детей-носителей гаплотипа HLADR1;DQ5 значимо повышалось содержание цитотоксических Т-лимфоцитов (рисунок 4.5). Повышение содержания IFN-- и TNF--экспрессирующих цитотоксических лимфоцитов в остром периоде заболевания наблюдали как в группе HLA-DR1;DQ5положительных 8-14-летних детей, так и HLA-DR1;DQ5-отрицательных. Количество Th1 лимфоцитов во вторую декаду заболевания увеличивалось только у носителей гаплотипа-провокатора. Содержание TNF-+ Т-хелперов значимо не изменялось. Относительное содержание IL-2+ Т-хелперов было снижено в течение всего периода обследования (рисунок 4.6). Значительные отличия, как и у детей младшего возраста, обнаружены в содержании Тh2 субпопуляции. В обеих группах содержание Th2 клеток увеличивалось в 1-10 сутки от начала заболевания, однако, содержание Th2 лимфоцитов было значимо ниже у детей-носителей HLA-DR1;DQ5 гаплотипа (рисунок 4.6). Кроме того, у детей старшего возраста обнаружены статистически значимые отличия и в содержании иммуноглобулинов основных классов. 174 600 900 800 N DR1;DQ5(+) DR1;DQ5(-) а 700 * ** 400 600 * * * * 500 106/л 106/л б N DR1;DQ5(+) DR1;DQ5(-) 500 400 * 300 * 200 300 200 100 100 0 0 IFN-y+ (1-10) IL-2+(1-10) TNF-a+(11-20) TNF-a+(1-10) IFN-y+(11-20) IL-2+ (11-20) IFN-y+ (1-10) IL-2+ (1-10) TNF-a+ (11-20) TNF-a+ (1-10) IFN-y+ (11-20) IL-2+ (11-20) 50 45 в DR1;DQ5(+) DR1;DQ5(-) 40 35 106/л 30 25 20 15 # 10 5 0 1-10 сутки 11-20 сутки Рисунок 4.6 - Содержание Т-эффекторов: CD3+CD4+ (Ме, LQ-UQ) (а); CD3+CD8+ (Ме, LQ-UQ) (б); CD3+CD4+IL-4+ (Th2) (Ме, LQ-UQ, min-max) (в) в периферической крови детей 8-14 лет в острый период энтеровирусной инфекции с серозным менингитом. Примечание: * – р<0,05 к показателям группы сравнения (N); # - р<0,05 в группах HLA-DR1;DQ5(+) и HLA-DR1;DQ5 (-) Ниже, чем в группе сравнения у носителей HLA-DR1;DQ5 был уровень иммуноглобулинов класса IgM и только у детей без данного гаплотипа значимо по сравнению с контрольной группой повышалось содержание общих IgG антител (таблица 4.68). Сравнение средних геометрических титров вирус-нейтрализующих антител к аутоштаммам в группах 4-7 и 8-14 летних детей с HLA-DR1;DQ5 гаплотипом и без него показало, что носителей HLA-DR1;DQ5 также отличают в старшей возрастной группе более низкие титры специфических противовирусных антител к аутоштаммам в 1-10 сутки от начала заболевания (таблица 4.69). 175 Таблица 4.68 - Содержание гуморальных факторов иммунитета в периферической крови при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у детей 8-14 лет в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Показатель Периоды обследования от начала заболевания IgA, г/л IgM, г/л IgG, г/л IgE, МЕ/мл ЦИК, ед. HLA-DR1;DQ5 (+) HLA-DR1;DQ5 (-) группа 1 (n=12) 2 (n=13) сравнения 1-10 сутки 11-20 сутки 1-10 сутки 11-20 сутки 3 (n=30) 1,80(3) (1,40 -2,40) 1,60 (1,10-1,80) 12,00 (10,50-14,90) 107,50(3) (80,22-339,75) 90,00(3) (71,00-109,00) 1,40 (1,15-2,20) 1,30 (1,10-1,65) 13,00 (9,85-13,85) 73,70 (40,40-238,00) 70,00(3) (38,50-99,50) 1,95 (3) (1,42-2,50) 1,65 (1,20-2,32) 14,00 (3) (11,90-15,65) 119,50(3) (31,57-303,00) 102,00(3) (70,50-114,75) 1,80 (1,40-2,00) 1,80 (1,3) (1,70-2,00) 13,00 (3) (11,50-15,30) 111,00 (48,30-304,00) 88,50(3) (51,00-129,75) 1,10 (0,80-1,97) 1,30 (1,20-1,77) 11,35 (10,47-12,55) 48,30 (23,90-65,40) 22,50 (16,00-36,00) Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 Таблица 4.69 - Значения отрицательных логарифмов (log2) и средних геометрических титров вирус-нейтрализующих антител к аутоштаммам (M±m) у детей с энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом Возрастные группы Показатели р HLA- HLA- HLA- HLA- DR1;DQ5 (+) DR1;DQ5 (+) DR1;DQ5 (-) DR1;DQ5 (-) 11-20 сутки 2 4,431,10 1:21,1 1-10 сутки 3 3,421,33 1:10,6 11-20 сутки 4 4,461,21 1:22,6 4-7 лет log2 титр 1-10 сутки 1 3,361,17 1:10,6 8-14 лет log2 1,361,15 3,550,93 3,471,31 4,140,61 титр 1:2,6 1:12,1 1:11,3 1:17,1 P12=0,2000 P13=0,9481 P34=0,2700 P24=0,2665 P12=0,0096 P13=0,0269 P34=0,3702 P24=0,3065 4.6. Обсуждение результатов Факторы врожденного иммунитета. ЭВИ с СМ не сопровождается ни в одной возрастной группе выраженным лейкоцитозом. Относительное содержание гранулоцитов повышается в 1-10 сутки от начала заболевания только у детей 1-3 лет. 176 Относительное содержание NK клеток увеличивается в 1-10 сутки от начала заболевания у детей до 14 лет. Абсолютное содержание NK достигает максимальных значений у детей 8-14 лет на 11-20 сутки от начала заболевания и стабильно снижено у подростков и взрослых пациентов. Активное участие в противовирусном иммунном ответе при ЭВИ с СМ у детей дошкольного возраста компонентов врожденного иммунитета отмечено Хамановой Ю.Б. [48]. Низкий уровень NK клеток описан у подростков с энтеровирусными менингитами [2]. Таким образом, значение NK иммунитета в иммунном ответе при ЭВИ с СМ отличается у детей младшего возраста и в старших возрастных группах. NK клетки могут ингибировать вирусную инфекцию, по крайней мере, с участием двух основных механизмов: во-первых, прямым цитотоксическим действием (чаще перфорин-опосредованным); во-вторых, путем секреции антивирусных цитокинов, таких как IFN-γ. Прямой литический эффект естественных киллеров ингибируется MHC I класса, таким образом, NKчувствительные мишени обычно характеризуются сниженной экспрессией этого типа молекул. Инфекции, вызываемые различными пикорнавирусами, включая НПЭВ, существенно снижают экспрессию MHC I на поверхности клеток [107, 108], таким образом, снижая ингибиторную активность НПЭВ-инфицированных клеток, что объясняет важную роль NK, по крайней мере, на мышиных моделях. Содержание про- и противовоспалительных цитокинов в периферической крови. ЭВИ с СМ почти во всех возрастных группах сопровождается увеличением содержания в периферической крови концентрации IFN- (с первой или со второй декады заболевания). Еще одним универсальным иммунологическим феноменом, наблюдаемым во всех возрастных группах при ЭВИ с СМ, является увеличение содержания IL-18. Уровень IL-2 и IL-4 повышается в большей степени у детей в возрастной группе 4-7 лет. Повышение содержания таких провоспалительных цитокинов, как TNF- и IL-6, регистрируется только в старших возрастных группах (15-18 и 19-45 лет). Не отличается от показателей в группах сравнения уровень в периферической крови IFN-, IL-1 и IL-8. Ранее увеличение концентрации TNF- продемонстрировано в работах Ешмолова С.Н. [9], Протасени И.И. [38] и Хамановой Ю.Б. [48], в то же время Мишакина Н.О. описывает стабильное снижение уровня данного цитокина у детей дошкольного возраста и подростков с ЭВИ с СМ [29]. В отношении IFN- и IL-4 отмечено как снижение, так и повышение, и отсутствие 177 изменения их концентрации при ЭВИ с СМ [9, 29, 38, 39]. В исследованиях Ешмолова С.Н. [9] и Протасени И.И. [38] описано увеличение в крови уровня IL-1 и IL-8. Кроме того, исследователями отмечено: увеличение в остром периоде заболевания уровня IL-6 [29, 38], увеличение уровня IL-18 [38, 48]. Получены также результаты, свидетельствующие о повышении уровня IFN- в разгар заболевания ЭВИ с СМ [38]. Отдельного обсуждения требует обнаруженный в данном исследовании факт повышения концентрации IFN- в периферической крови при неизменном содержании IFN-. Теоретически индукция синтеза IFN I должна происходить после распознавания НПЭВ TLR-3, RIG-1 и MDA5. Однако, EV обладают разнообразными способами блокировать на разных этапах путь индукции IFN I. Белки, синтезируемые EV и кардиовирусами (TMEV), могут контр-реагировать с механизмами врожденного иммунитета [55]. НПЭВ снижают уровень RIG-I и нарушают RIG-I опосредованный сигнальный путь [71]. В результате блокирования энтеровирусами путей индукции синтеза IFN I практически не образуется IFN-β mRNA [326]. Примечательно, что CVB3 репликация более эффективно происходит в TLR3дефицитных (TLR3−/−) спленоцитах, свидетельствуя о том, что CVB3-опосредованная активация TLR3 вносит вклад в противовирусный ответ. У TLR3-Tg Ifnar1−/− мышей, при введении анти-IFN II блокирующих антител титр вируса в сыворотке увеличивался в сотни раз, что свидетельствует о том, что IFN II является основной эффекторной молекулой активации TLR3 in vivo [326]. Поскольку RIG-I/MDA5-IFN I путь – ключевой момент в противовирусном иммунном ответе, TLR3-IFN II путь может быть задействован в распознавании и ответе на те вирусы (в т.ч. и энтеровирусы), в отношении которых не формируется выраженный IFN I ответ. Дополнительным механизмом, активизирующим синтез IFN-γ как клетками врожденного иммунитета (NK), так и дифференцирующимися в ходе адаптивного иммунного ответа Th1 и Tc1 лимфоцитами, является действие IL-18. Увеличение уровня IL-18 при НПЭВ-инфекциях описано при СМ у детей [38, 48] и на мышиных моделях CVB3-миокардита [136] и, по-видимому, является универсальной реакцией на НПЭВ. Подобно IL-1β, IL-18 синтезируется в виде неактивного предшественника, нуждающегося в процессинге с помощью каспазы-1. Но, в отличие от IL-1β, предшественник IL-18 конститутивно присутствует практически во всех клетках 178 организма человека и животных, в том числе эндотелиальных клетках, кератиноцитах и интестинальных эпителиальных клетках в ЖКТ. Одним из возможных путей активации синтеза IL-18 является взаимодействие НПЭВ с TLR4, стимулирующее протеолитическое расщепление каспазы-1 подобно механизму, описанному для респираторно-синцитиального вируса [238]. IL-18 способен индуцировать синтез IFN-γ, действуя синергично с IL-12, повышая экспрессию IL-12Rβ2, а также STATнезависимым путем [136]. Кроме того, IL-18 проявляет характеристики других провоспалительных цитокинов, т.е. повышает экспрессию адгезионных молекул, синтез оксида азота и продукцию хемокинов [127]. Особенности изменения содержания субпопуляций Т-лимфоцитов при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом в разных возрастных группах. Универсальным иммунологическим феноменом, наблюдаемым у детей в остром периоде ЭВИ с СМ, является транзиторная Т-лимфопения. Абсолютная лимфопения регистрируется в течение первых 10 дней от начала заболевания у детей младших возрастных групп (до 7 лет). Снижение содержания лимфоцитов в периферической крови происходит за счет уменьшения содержания Т-лимфоцитов. Феномен транзиторной относительной Тлимфопении при ЭВИ с СМ наблюдается у детей вплоть до 14-летнего возраста и не характерен только для подростков и взрослых. Абсолютное содержание Т- лимфоцитов снижено у детей 1-3 и 4-7 лет. В свою очередь среди Т-лимфоцитарных субпопуляций наблюдается значимое снижение Т-хелперов (рисунок 4.7). Наиболее выраженное уменьшение содержания Т-хелперов характеризует детей в возрасте 1-3 лет. В этой возрастной группе дефицит Т-хелперов в периферической крови наблюдается и на 11-20 сутки от начала заболевания. Относительное содержание цитотоксических Т-лимфоцитов увеличивается в основном на 11-20 сутки от начала заболевания, но абсолютное содержание этой субпопуляции значимо не изменяется по отношению к группе сравнения, за исключением группы 8-14летних детей (рисунок 4.7). 179 30 20 80 а 1-10 сутки 11-20 сутки 60 N б 1- 10 сутки 11-20 сутки N 10 40 0 * -30 % % -20 * 20 -10 * 0 * * -20 -40 -40 -50 -60 1-3 года 4-7 лет * лет 8-14 -60 15-18 лет 19-45 лет 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 19-45 лет Рисунок 4.7 - Изменение (в % от N) абсолютного содержания CD3+CD4+ (а) и CD3+CD8+ (б) лимфоцитов в разных возрастных группах в динамике острого периода энтеровирусной инфекции с серозным менингитом. Примечание: * – р<0,05 к показателям групп сравнения В целом значение иммунорегуляторного индекса (Th/Tc) в остром периоде менингеальной формы остается сниженным на протяжении, по крайней мере, 20 суток от начала заболевания. Определение содержания различных цитокин-экспрессирующих субпопуляций Т-хелперных и Т-цитотоксических лимфоцитов позволило установить, что снижение содержания в периферической крови Т-хелперных лимфоцитов происходит за счет уменьшения содержания IL-2+ и TNF-α+ Т-хелперов. Содержание IFN-+ Th1 лимфоцитов значимо увеличивается у детей 1-3 и 4-7 лет, оставаясь повышенным в течение всего срока наблюдения. В старших возрастных группах их относительное и абсолютное содержание значимо не изменяется. Содержание Th2 клеток значительно увеличивается при ЭВИ с СМ и остается повышенным на протяжении всего острого периода заболевания во всех возрастных группах (рисунок 4.8). В целом, с возрастом менее выраженным становится увеличение содержания IFN-+ и IL-4+ Т-хелперов и значительнее снижение в периферической крови содержания TNF+- и IL-2+ Т-хелперов. У детей до 14 лет в остром периоде ЭВИ с СМ происходит снижение содержания Th17 лимфоцитов. 180 40 60 1-10 сутки 11-20 сутки N а 40 0 0 -20 * % % 20 1-10 сутки 11-20 сутки N б 20 * -40 -20 * * * * * -40 * * * -60 * * * -60 -100 -80 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 19-45 лет 300 250 * -80 * 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет в 1-10 сутки 11-20 сутки N г 2000 1800 1600 1400 * 100 * * * * 1200 % % 150 1000 * 0 * * 800 * 600 * * 400 * -50 200 * 0 -100 19-45 лет 2200 1-10 сутки 11-20 сутки N 200 50 15-18 лет -200 1-3 года Рисунок 4-7 лет 4.8 8-14 лет - 15-18 лет Изменение 19-45 лет 1-3 года абсолютного 4-7 лет 8-14 лет содержания: 15-18 лет 19-45 лет CD3+CD4+IFN-+(а); CD3+CD4+TNF-+(б); CD3+CD4+IL-2+(в); CD3+CD4+IL-4+(г) лимфоцитов в разных возрастных группах в динамике острого периода энтеровирусной инфекции с серозным менингитом (в % от N). Примечание: * – р<0,05 к показателям группы сравнения Выраженным увеличением характеризуется численность Tс1 лимфоцитов у детей до 14 лет. Максимальное содержание Tc1 лимфоцитов (как и цитотоксических Т-лимфоцитов в целом) наблюдается в основном на 11-20 сутки от начала заболевания. Содержание CD3+CD8+TNF-α+ увеличивается по отношению к группе сравнения также у детей до 14 лет (рисунок 4.9). 181 400 500 а 400 1-10 сутки 11-20 сутки N б 1-10 сутки 11-20 сутки N 300 * * 300 * 200 * % % * 200 * * * 100 * 100 * * 0 0 * * -100 -100 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 4-7 лет 1-3 года 19-45 лет 8-14 лет 15-18 лет 19-45 лет 3000 80 60 * 1-10 сутки 11-20 сутки N в 1-10 сутки 11-20 сутки N г 2500 40 2000 * 20 1500 % % 0 -20 1000 * * -40 500 -60 * * * * * * * * * 0 -80 -100 1-3 года Рисунок 4-7 лет 4.9 8-14 лет - 15-18 лет Изменение 19-45 лет -500 1-3 года абсолютного CD3+CD8+TNF-+(б); CD3+CD8+IL-2+(в); 4-7 лет 8-14 лет содержания: 15-18 лет 19-45 лет CD3+CD8+IFN-+(а); CD3+CD8+IL-4+(г) лимфоцитов в разных возрастных группах в динамике острого периода энтеровирусной инфекции с серозным менингитом (в % от N). Примечание: * – р<0,05 к показателям группы сравнения Абсолютное содержание CD3+CD8+IL-2+ лимфоцитов снижено по сравнению с нормальными значениями у детей 1-3 лет и у пациентов старше 14 лет. Абсолютное содержание Tc2 лимфоцитов увеличивается с 1-10 суток и остается повышенным на протяжении всего периода наблюдения. Особенно выраженным повышением Tc2 лимфоцитов характеризуются дети 4-7 летнего возраста. Таким образом, наиболее значительное увеличение содержания IFN-+, TNF-+ и IL-4+ Т-эффекторов происходит при ЭВИ с СМ у детей до 14 лет. Из всех анализируемых субпопуляций 182 цитотоксических Т-лимфоцитов снижается лишь содержание CD3+CD8+IL-2+ лимфоцитов. Феномен кратковременной лимфопении, связанной со снижением содержания Тлимфоцитов, неоднократно отмечен в остром периоде ЭВИ с СМ [2, 35, 48, 274]. Содержание в периферической крови различных субпопуляций Т-лимфоцитов в остром периоде вирусных инфекций представляет собой результат их динамического перераспределения в ходе: 1) активной миграции наивных лимфоцитов в периферические лимфоидные органы при формировании иммунного ответа; 2) пролиферации и выхода примированных антигеном Т-лимфоцитов из периферических лимфоидных органов в кровь; 3) миграции в ткани-мишени, специфического удерживания Т-лимфоцитов в тканях; 4) выхода в периферический кровоток; 5) возвращения в периферические лимфатические органы, апоптоза и т.д. [284]. Полученные в данном исследовании результаты свидетельствуют, что транзиторное снижение в периферической крови содержания Т-лимфоцитов обусловлено снижением уровня наивных CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов, а также CD4+ и CD8+ TСМ. TСМ сохраняют экспрессию хоминговых рецепторов: L-селектина и хемокинового рецептора (ССR7) и, подобно наивным клеткам, способны мигрировать в периферические лимфоидные органы в ходе формирования иммунного ответа, а также локализоваться в очагах воспаления. Поскольку наивные Т-лимфоциты и TСМ в ответ на TCR-активацию синтезируют в основном IL-2 [295], снижение их содержания в остром периоде ЭВИ с СМ коррелирует с уменьшением численности IL-2+ Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов. В отличие от наивных CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов и TСМ, содержание TEFF и TEM (как CD4+, так и CD8+ фенотипа) в динамике заболевания увеличивается, достигая на 11-20 сутки от начала инфекции статистически значимой разницы по отношению к группе сравнения. TEFF и TEM являются CCR7-негативными, большинство из них также L-селектин-/low и теряют способность мигрировать в периферические лимфатические органы, поэтому находятся преимущественно в периферическом кровотоке и не-лимфоидных тканях. TEFF и CD62L- эффекторные клетки памяти обладают большим количеством функций по сравнению с TСМ: они поляризованы в отношении продукции цитокинов и продуцируют не только IL-2, но и эффекторные цитокины IFN-γ, IL-4, TNF-α. CD8+ TEM содержат большое количество перфорина. 183 Таким образом, пул TEFF и TEM у человека включает в себя дифференцированные Th1, Th2, а также другие субпопуляции Т-хелперов и CTL. Образование в динамике инфекционного процесса при ЭВИ с СМ TEFF и TEM приводит к восстановлению общей численности лимфоцитов в периферическом кровотоке уже на 11-20 сутки от начала заболевания и сопровождается изменением содержания в периферической крови основных эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов. Изучению участия Тлимфоцитарных субпопуляций в механизмах иммунопатогенеза ЭВИ с СМ у человека посвящены отдельные исследования. Однако, они ограничиваются оценкой содержания общего пула Т-лимфоцитов, синтезирующих эффекторные цитокины, не дающей представление об изменении уровня отдельных Т-хелперных и Тцитотоксических субпопуляций эффекторных лимфоцитов [2, 48]. Между тем, проведенные нами исследования свидетельствуют о зачастую разнонаправленном изменении их содержания. Полученные результаты позволили продемонстрировать, что в остром периоде заболевания ЭВИ с СМ происходит значимое повышение относительного и абсолютного содержания IFN-+ и TNF-+ Тс1 лимфоцитов (у детей до 14 лет), а также IL-4+ Тс2-клеток (во всех анализируемых возрастных группах). В отличие от цитотоксических Т-лимфоцитов, содержание IFN-+Th1 субпопуляции в остром периоде ЭВИ с СМ значимо увеличивается только у детей до 7 лет, а содержание CD3+CD4+TNF-+ лимфоцитов снижено (у детей старше 7 лет на протяжении всего периода обследования). Описанный феномен может быть обусловлен либо активной миграцией данных субпопуляций лимфоцитов в «заинтересованные» ткани, в т.ч. ЦНС, либо меньшей активацией CD4+ T-клеточного ответа. В частности, последние исследования свидетельствуют, что для антигенной презентации с помощью MHC II класса важную роль играет аутофагия [247]; поэтому логично предположить, что ингибирующее влияние на аутофагию НПЭВ может оказывать подавляющее действие на вирус-специфический CD4+T-клеточный ответ [226]. Повышение численности Th2 и Тс2 субпопуляций – универсальный механизм, характеризующий противовирусный иммунный ответ при энтеровирусных менингитах во всех возрастных группах. Увеличение содержания Th2 лимфоцитов ранее отмечено при ЭВИ, в частности в остром периоде болезни HFMD (hand, foot and mouth disease), вызванной EV71 [444]. Об активации канонических Th2 184 субпопуляций при ЭВИ с СМ свидетельствует эозинофилия в остром периоде энтеровирусных менингитов [3]. Одним из вероятных механизмов Th2-поляризации дифференцировки Т-эффекторов при ЭВИ может быть индукция под действием дцРНК НПЭВ на PRRs эпителиальных клеток, базофилов и DC синтеза тимического стромального лимфопоэтина (TSLP) Опубликованы [337]. данные, свидетельствующие о том, что к экспрессии TSLP приводит активация TLR3 [222] и RIG-I [246] – основных сенсоров РНК-содержащих вирусов, в том числе НПЭВ. TSLP воздействует на DC или непосредственно на Т-лимфоциты, повышая экспрессию OX40L и приводя к индукции синтеза CCL17 и CCL22, и подавляя продукцию IL-12 [202], что создает оптимальные условия для дифференцировки IL-4+ предшественников Th2 лимфоцитов и Тс2 субпопуляции. Дифференцировка Т-эффекторов 17 типа зависит от супрессивного эффекта альтернативных Т-клеточных субпопуляций. В частности, показано, что IFN-γ и IL12, ключевые цитокины Th1-типа, ингибируют дифференцировку Th17 клеток [177]. Таким образом, сниженное содержание IL-17 и продуцирующих его Т- лимфоцитарных субпопуляций у детей до 14 лет на фоне роста содержания Th1 и Тс1 субпопуляций, а также уровня IFN-γ в периферической крови в динамике ЭВИ с СМ, может быть результатом ингибирующего действия факторов, участвующих в дифференцировке эффекторов первого типа. Впервые при ЭВИ с СМ проведена оценка содержания терминальнодифференцированных Т-лимфоцитов памяти. Субпопуляцию TEMRA образуют зрелые цитотоксические CD8+Т-лимфоциты, содержащие перфорин и гранзим В, экспрессирующие FasL и продуцирующие IFN-γ и TNF-α. Подобно наивным Тлимфоцитам они экпрессируют CD45RA. Так же как эффекторные клетки памяти лишены CD62L и CCR7, несут CD11a/CD18, CD11b, CD49d. Зрелые цитокинпродуценты с аналогичным фенотипом CD45RA+CD62L-CCR7- обнаружены и среди CD4+ Т-лимфоцитов. Если абсолютное содержание CD45RA+CD62L-CD4+Т-клеток памяти при ЭВИ с СМ существенно не изменяется, то численность CD8+ TEMRA значимо увеличивается на 11-20 сутки от начала заболевания, что свидетельствует о существенной роли этой субпопуляции Т-лимфоцитов в элиминации НПЭВ. В целом, увеличение в периферической крови содержания CD8+TEM и CD8+TEFF, а также CD8+ 185 TEMRA соответствует общему увеличению численности цитотоксических Т- лимфоцитов во вторую декаду заболевания. и HLA-полиморфизм образование субпопуляций Т-эффекторов при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом. Учитывая связь молекул HLA с контролем противовирусного иммунного ответа посредством регуляции дифференцировки эффекторных субпопуляций [281], проведен анализ иммуногенетических ассоциаций аллельных вариантов HLA I (HLAA, -B, -Cw) и II класса (HLA-DRB1, -DQA1, -DQB1) с развитием ЭВИ с СМ. Полученные результаты свидетельствуют о том, частота гаплотипа HLA-DR1;DQ5 у пациентов с ЭВИ с СМ значительно превышает среднепопуляционную с высокой вероятностью ассоциации с чувствительностью к заболеванию. Пациентов-носителей HLA-DR1;DQ5 характеризует эффективное образование Тh1 и Tc1 лимфоцитов (IFNγ+ и TNF-+) в остром периоде заболевания, в то время как содержание Th2 клеток значимо снижено по сравнению с детьми того же возраста, не имеющими в генотипе HLA-DR1;DQ5. Кроме того, в группе детей 8-14 лет HLA-DR1;DQ5(+) со сниженным содержанием Th2 лимфоцитов отмечен низкий уровень общих иммуноглобулинов IgM и IgG классов и средний титр специфических противовирусных нейтрализующих антител. По-видимому, гаплотип HLA-DR1;DQ5 является одним из факторов, который со стороны хозяина влияет на эффективность дифференцировки Th2 и TFH, в конечном итоге, на интенсивность гуморального противовирусного ответа. Если он оказывается недостаточно эффективным, происходит дальнейшая диссеминация вируса, в клиренсе которого принимают активное участие Т-хелперы и цитотоксические Т-лимфоциты 1 типа. В свою очередь, у пациентов, не имеющих в генотипе HLA-DR1;DQ5, (у которых реже, чем в группах сравнения, встречается аллель HLA-A2, выше - частота носительства HLA-A31 и HLA-В18), на фоне повышенного содержания Th2 лимфоцитов и факторов специфического гуморального иммунитета, менее эффективна дифференцировка Th1 субпопуляции лимфоцитов. Ассоциированные с полом особенности иммунного ответа при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом. Результаты проведенных исследований свидетельствуют, что ЭВИ с СМ чаще регистрируется у пациентов мужского пола с тенденцией к повышению соотношения заболевших мужского и женского пола с 186 увеличением возраста от 0 до 18 лет. У мальчиков и юношей ЭВИ с СМ в большей степени ассоциирована с увеличением содержания клеточных компонентов противовирусного иммунного ответа: Th1 и Tc1 лимфоцитов, NK, а также поглотительной активности нейтрофилов и моноцитов, в то время как пациентки женского пола наряду с повышением содержания в периферической крови Тхелперов, в том числе Th2 клеток, характеризуются выраженным увеличением показателей гуморального иммунного ответа: высоким содержанием В-лимфоцитов, уровнем общих иммуноглобулинов IgM класса и ЦИК. Несмотря на то, что исследователями неоднократно отмечено преобладание пациентов мужского пола среди заболевших ЭВИ с СМ, ассоциированные с полом особенности иммунного ответа в остром периоде заболевания изучены нами впервые. Тем не менее, данные о преимущественной дифференцировке при НПЭВ-инфекции Th1 лимфоцитов у особей мужского пола и Th2 – у женского, ранее получены на моделях CVB3-миокардита у мышей. Как и у человека, острый энтеровирусный миокардит у мышей чаще развивается у особей мужского пола и, если у самок BALB/c мышей преобладают Th2 лимфоциты в ответ на CVB3 и в основном синтезируются антитела IgG1 изотипа, то у самцов имеет место, в основном, Th1-ответ и превалируют IgG2a антитела [194]. В экспериментах на C57Bl/6 мышах также продемонстрировано, что CVB3-инфекция у самцов приводит к более выраженному острому воспалению миокарда, поскольку у самцов формируется Th1 воспалительный ответ, в то время как у самок развивается ответ по Th2 типу [370]. На основании обобщения результатов собственных исследований и данных, касающихся ассоциированных с полом иммунологических особенностей формирования иммунного ответа при НПЭВ-инфекциях, полученных, в основном, на моделях CVB3-миокардита, предложены возможные механизмы ассоциированных с полом особенностей поляризации иммунного ответа на НПЭВ (рисунок 4.10). Несмотря на безусловное участие половых гормонов в формировании ассоциированных с полом особенностей иммунного ответа на НПЭВ, тот факт, что характерные отличия наблюдаются, в том числе у детей в возрасте, исключающем значимые отличия в базовом содержании половых стероидов, позволяет предполагать наличие механизмов, не зависящих от их участия. В частности, при CVB3- 187 миокардитах у мышей показано разнонаправленное изменение экспрессии TLR2 и TLR4 на клетках врожденного и адаптивного иммунитета. TLR4 TLR2 TIR Каспаза-1 TIRAP TRIF MyD88 MyD88 MAPK /ERK или независимый путь IRAK1/ IRAK4 ATG5 Th1 TLR7 аутофагия IRF-3 IL-18 NF-ĸB IFN-α/β TIRAP TRAM RIG I XX IL-6, TNF-α IFN-α/β IFN-γ Поглотит. актив. лейкоцитов Воспаление NK Репликация вируса Treg Th17 ЦИК Th2 IgM IL-4+TFH В-лф Рисунок 4.10 - Возможные механизмы формирования ассоциированного с полом иммунологического диморфизма при реализации иммунного ответа на неполиомиелитные энтеровирусы Примечание: - изменения, наблюдаемые у представительниц женского пола, возможная регуляция с участием половых стероидов – синий цвет - изменения, наблюдаемые у представителей мужского пола, возможная регуляция с участием половых стероидов – красный цвет, штриховка TLR2 – Toll-подобный рецептор 2, TLR4 - Toll-подобный рецептор 4, TLR7 - Toll-подобный рецептор 7, TIR Toll/IL-1 рецептор резистентности, TIRAP- Toll/IL-1 рецептор домен содержащий адаптерный белок, TRAMTRIF-связанная адаптерная молекула, TRIF-TIR домен содержащий адаптер, индуцирующий IFN-β, MyD88белок первичного ответа миелоидной дифференцировки 88, RIG I- индуцируемый ретиноевой кислотой ген I, ATG5 –связанный с аутофагией ген 5, MAPK-митоген активируемая протеинкиназа, ERK½ –киназы, регулируемые внеклеточными сигналами; NF-κB –ядерный фактор κB; IRAK1/IRAK4 - интерлейкин-1 рецептор-ассоциированная киназа 1 и 4, NK-естественный киллер, Treg- регуляторный Т-лимфоцит, Th1-Тхелпер первого типа, Th2-Т-хелпер второго типа, IL-4+TFH- IL-4-экспрессирующий фолликулярный Т-хелпер, IgM - иммуноглобулин класса М, X- половая хромосома, IFN-α/β – интерфероны 1 типа, IFN-γ – интерферонгамма, IL-18 – интерлейкин-18, IL-6 – интерлейкин-6, TNF-α – фактор некроза опухолей-альфа, ЦИК – циркулирующие иммунные комплексы, В-лф – В-лимфоцит 188 ЭВИ сопровождается увеличением экспрессии TLR2 у самок C57Bl/6 мышей, в то время как у самцов регистрируется повышение экспрессии TLR4 [369]. Активация TLR4 индуцирует Th1 ответ в результате IL-18-опосредованных механизмов в большей степени, нежели классического IL-12/STAT4-IFN-γ сигнального пути [136, 148, 149]. В свою очередь, повышение при CVB3-инфекции экспрессии TLR2 у особей женского пола может быть связано с индукцией Th2 ответа [137]. Описаны механизмы Th2 поляризации с участием TLR2 путем индукции киназы, регулируемой экстраклеточными сигналами (extracellular signal-regulated kinase-ERK) и раннего ростового транскрипционного фактора c-Fos [126], а также ERK-независимой индукции [133]. Причины разнонаправленной регуляции экспрессии TLR у особей разного пола не до конца понятны. Гены, кодирующие TLR2 и TLR4, не связаны с Х хромосомой, а расположены у мышей на 3 и 4 хромосомах, соответственно. В модулировании их экспрессии могут быть задействованы цитокины, половые гормоны и другие факторы, требующие дальнейшего изучения. В частности, к снижению экспрессии TLR4 при ЭВИ приводит повышение экспрессии T-клеточного иммуноглобулинового муцина-3 (Tim-3) на тучных клетках и макрофагах самок [148, 149]. Возможно, в формировании ассоциированных с полом особенностей иммунного ответа при ЭВИ с СМ у человека также задействована экспрессия TLR и других PRRs. Однако, экстраполяция результатов исследований TLR (и других механизмов врожденного иммунитета), проведенных на животных моделях, осложняется выраженными межвидовыми вариациями. Половые стероиды оказывают иммуномодулирующее влияние на различные эффекторные клетки иммунной системы, регулируя, в том числе и экспрессию TLR, и дифференцировку различных субпопуляций Т-лимфоцитов. носит комплексный, дозозависимый противоположным результатам. характер и Действие эстрогенов зачастую приводит к С одной стороны, эстрадиол (Е2) увеличивает экспрессию TLR4 на клетках врожденного иммунитета [368]. С другой стороны, эстрогены способны ингибировать TLR4-индуцированный провоспалительный ответ у человека [123, 342]. Описано также как про-Th1 влияние низких доз эстрогенов [4], так и ингибирующее действие Е2 на Th1-ответ [265, 344], в том числе, в результате регуляции активности ядерного фактора κB (NF-κB) [141]. Стимуляция эстрогенами Th2 ответа продемонстрирована в исследованиях Giron-Gonzalez et al. [160], Fish EN 189 et al. [144], Gonzalez et al. [163]. Помимо эстрогенов в поляризации иммунного ответа у представительниц женского пола может играть роль прогестерон (Р4), обладающий выраженным про-Th2 действием [135]. Кроме того, P4 ингибирует дифференцировку Th1 клеток [308]. Менее понятна роль андрогенов в регуляции дифференцировки Тэффекторов. Ряд исследований свидетельствует об участии тестостерона в повышении экспрессии TLR4 на APC [149] и стимулирующем действии андрогенов на Th1 ответ у человека и грызунов [148, 149], но эти результаты нуждаются в уточнении. Изучение влияния андрогенов затрудняет то обстоятельство, что тестостерон активирует одновременно андрогеновые и эстрогеновые рецепторы в связи с конверсией тестостерона в эстрогены с участием ароматазы [298]. Влияние половых стероидов и особенности экспрессии TLR при ЭВИ создают условия для преимущественной дифференцировки Th1 лимфоцитов у представителей мужского пола. Увеличение секреции IL-18, связанное с активацией TLR4 и дифференцировкой Th1 лимфоцитов, способствует также активации NK-лимфоцитов преимущественно у представителей мужского пола [136]. Стимулирующее действие на NK клетки и фагоциты оказывают цитокины, синтезируемые собственно Th1 и Тс1 лимфоцитами (IFN-γ, TNF-), что обусловливает повышение уровня показателей, характеризующих количественное содержание и функциональное состояние этих компонентов при ЭВИ с СМ, наблюдаемое у мальчиков и юношей. Повышенный уровень Th2 (Tc2) субпопуляций у пациенток женского пола в определенной мере также является следствием уже описанного иммуномодулирующего действия половых гормонов на дифференцировку эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов. Кроме того, половые стероиды регулируют созревание функциональную активность [384], что обусловливает В-клеток и их более эффективное формирование гуморального иммунного ответа у женщин. В отличие от данных, полученных при CVB3-миокардитах у мышей, сопровождающихся увеличением содержания Th17 субпопуляции у инфицированных самцов и связанными с этим иммунопатологическими реакциями [258], результаты проведенного нами исследования свидетельствуют в основном о снижении содержания в периферической крови Th17 и Tnc17 клеток при ЭВИ с СМ. При этом у мальчиков 4-7 лет содержание Th17 лимфоцитов в первую декаду заболевания было значимо ниже, чем у девочек. В течение длительного времени господствовала точка 190 зрения, что E2 ингибирует образование Th17 клеток [75] и продукцию IL-17 [438]. Однако, Khan D. et al. показали, что E2 усиливает экспрессию IL-17 и RORγ стимулированными спленоцитами мышей [228]. Таким образом, очевидно, что E2 регулирует образование Th17, однако, эффект в данном случае также зависит от контекста. P4 ингибирует дифференцировку Th17 субпопуляций [131], в то время как действие андрогенов может приводить к увеличению синтеза IL-17A [476]. Помимо регулирующего действия гормонов дифференцировка каждой Т-хелперной линии частично зависит от ингибирующего эффекта альтернативных Т-клеточных субпопуляций. Показано, что IFN-γ и IL-12, ключевые Th1-цитокины, подавляют дифференцировку Th17 клеток [177]. Сниженное содержание IL-17-продуцирующих Т-лимфоцитарных субпопуляций при ЭВИ с СМ, таким образом, может быть обусловлено ингибирующим действием на дифференцировку Th17/Tnc17 эстрогенов и Т-эффекторов первого типа. Отсутствием ингибирующего эффекта, по-видимому, обусловлено повышение содержания Th17 клеток в периферической крови 15-18летних юношей в отсутствии значимого увеличения численности Th1 и Tc1 клеток. Еще одним механизмом формирования ассоциированного с полом иммунологического диморфизма при ЭВИ является дисбаланс в экспрессии генов, кодируемых X хромосомой [62, 375]. Многие гены, кодируемые X хромосомой, играют важную роль в модулировании ассоциированных с полом различий в формировании иммунного ответа на инфекционный агент и развитии иммуноопосредованной патологии [261]. К ним относятся гены таких паттернраспознающих рецепторов, как TLR7 и TLR8, участвующих, в том числе, в распознавании НПЭВ (TLR7), цитокиновых рецепторов (например, Il2rg и Il13ra2) и транскрипционных факторов (например, Foxp3) [144]. Поэтому механизмы, связанные с частичной инактивацией генов, кодируемых Х хромосомой, также могут быть задействованы в регуляции активации, например Treg, при ЭВИ [371]. Наконец, экспрессия связанных с аутофагией генов (autophagy-related genes -ATG), а именно ATG5 при ЭВИ также избирательно подавляется в основном у особей женского пола [234]. Поскольку ATG5–ATG12 ингибируют RIG-I сигналинг, блокируя врожденный противовирусный иммунный ответ [215], сниженный уровень ATG5 у самок в ходе ЭВИ обеспечивает, с одной стороны, снижение титра вируса в результате подавления 191 процессов аутофагии, используемой НПЭВ для репликации, с другой стороны, cтимулирует секрецию IFN I. Таким образом, энтеровирусные менингиты имеют характерные особенности клинического течения в разных возрастных группах и сопровождаются изменением содержания в периферической крови отдельных субпопуляций Т-эффекторов. Иммунологическим феноменом, наблюдаемым при ЭВИ с СМ, является снижение содержания в периферической крови IL-2+ наивных CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов, а также CD4+ и CD8+ центральных Т-лимфоцитов памяти. Миграция соответствующих субпопуляций в органы-мишени (в т.ч. ЦНС), а также в периферические лимфатические органы представляет собой один из механизмов транзиторной Тлимфопении в остром периоде ЭВИ с СМ. Выраженное повышение содержания субпопуляций Тh1 и Tc1 эффекторов в периферической крови характерно только для детей до 7 лет, связано со сниженной эффективностью синтеза цитокинов Th1(Tc1)типа у детей младшего возраста и происходит на фоне снижения содержания Th17 субпопуляции. Повышение численности Th2 и Тс2 субпопуляций – универсальный механизм, характеризующий противовирусный иммунный ответ при энтеровирусных менингитах во всех возрастных группах. Частота гаплотипа HLA-DRB1*01;HLA-DQA1*01:01;HLA-DQB1*05:01 у пациентов с ЭВИ с СМ значительно превышает среднепопуляционную с высокой вероятностью ассоциации с чувствительностью к заболеванию. Пациентов-носителей гаплотипа-провокатора характеризует эффективное образование Тh1 и Tc1 субпопуляций лимфоцитов в остром периоде заболевания, в то время как дифференцировка Th2 клеток значимо снижена по сравнению с детьми того же возраста, не имеющими в генотипе HLA-DR1;DQ5. Кроме того, в группе детей HLADR1;DQ5(+) отмечены более низкие уровни общих иммуноглобулинов IgM и IgG классов, а также титров специфических вирус-нейтрализующих антител. Повидимому, гаплотип HLA-DR1;DQ5 является одним из факторов, который со стороны хозяина влияет на эффективность дифференцировки Th2 и, в конечном итоге, на интенсивность гуморального противовирусного ответа. Если он оказывается недостаточно эффективным, происходит дальнейшая диссеминация вируса, в клиренсе которого принимают активное участие Т-хелперы и цитотоксические Тлимфоциты 1 типа. 192 Иммунный ответ при ЭВИ с СМ характеризуется ассоциированным с полом диморфизмом, стероидов, обусловленным дисбалансом в иммуномодулирующим экспрессии генов, действием кодируемых половых хромосомой, X избирательной регуляцией других генов, играющих роль в формировании иммунного ответа на НПЭВ, регуляции вирусной репликации и т.д. Пациентов мужского пола характеризует преимущественная активация клеточных компонентов иммунитета, обладающих цитотоксическим и фагоцитарным потенциалом (естественных киллеров, моноцитов и нейтрофильных гранулоцитов) и повышение содержания Th1(Тс1) эффекторных субпопуляций. Для пациенток с ЭВИ с СМ характерны высокие уровни показателей гуморального иммунного ответа: содержания Влимфоцитов, IgM антител, ЦИК, а также Th2 (Тс2) субпопуляций лимфоцитов. Эффективная индукция гуморального иммунитета, имеющего важнейшее значение в контроле НПЭВ, включая реакции раннего антителообразования, ассоциированные с увеличением содержания Th2 лимфоцитов, по-видимому, обеспечивают представительницам женского пола более высокую резистентность в отношении развития ЭВИ с СМ. Устойчивое повышение при ЭВИ с СМ содержания Th2 и Тс2 субпопуляций во всех возрастных группах, а также тот факт, что сниженное содержание эффекторов второго типа коррелирует с уровнем гуморального ответа и характеризует иммунный ответ у носителей гаплотипа-провокатора HLA-DR1;DQ5 и у пациентов мужского пола, наиболее подверженных развитию ЭВИ с СМ, свидетельствуют о значимой роли Th2 на ранних этапах противовирусного иммунного ответа для предупреждения развития энтеровирусных менингитов. Однако, стимуляция индукции дифференцировки Th2 клеток одновременно может быть причиной снижения уровня образования Th1 и Тс1 лимфоцитов. Поскольку Th1 и Тс1 клетки являются важнейшими эффекторами, участвующими в клеточных механизмах адаптивного противовирусного иммунитета, нарушение баланса дифференцировки Th1 (Тс1) и Th2 (Тс2) субпопуляций также может быть одним из факторов, способствующих развитию ЭВИ с СМ у детей младших возрастных групп и пациентов, не имеющих в генотипе HLA-DR1;DQ5 и т.д. О важнейшей роли Th1 и Тс1 субпопуляций в иммунопатогенезе ЭВИ с СМ свидетельствуют данные, полученные при оценки корреляционных связей между уровнем данных субпопуляций в периферической 193 крови и показателями, характеризующими клиническое течение ЭВИ с СМ. Повышенное содержание эффекторов первого типа в первую декаду заболевания коррелирует с уменьшением длительности регистрации основных клинических симптомов, в том числе менингеальных. Таким образом, баланс эффекторных субпопуляций первого и второго типа имеет принципиальное значение в иммунопатогенезе ЭВИ с СМ. Материалы данной главы представлены в следующих публикациях: 1. Лагерева, Ю.Г. Цитокиновый профиль Т-лимфоцитов при менингитах энтеровирусной этиологии / Ю.Г.Лагерева, Л.Г.Беседина, Н.Н.Сбитнева, Я.Б.Бейкин, Ю.Б.Хаманова // Российский иммунологический журнал.-2008.-Том.2(11).-№2-3.С.253. 2. Бацкалевич, Н.А. Оценка иммунитета и иммунотропной терапии энтеровирусных менингитов / Н.А. Бацкалевич, В.К. Веревщиков, Ю.Г. Лагерева // Инфекционные болезни.-2009.- Т.7, №3.-С.30-34. 3. Фомин, В.В. Клиническая, иммунологическая характеристика энтеровирусного менингита у подростков [Электронный ресурс]/ В.В.Фомин, Н.А.Бацкалевич, Ю.Б.Хаманова, Ю.Г.Лагерева // Современные проблемы науки и образования.-2009.№6.-Режим доступа: http:/online.rae.ru/447 4. Бацкалевич, Н.А. Возрастные иммунологические аспекты менингеальной формы энтеровирусной инфекции / Н.А. Бацкалевич, Ю.Б. Хаманова, О.А. Чеснакова, Ю.Г. Лагерева // Вестник Уральской медицинской академической науки.-2009.-№2/1.С.19-20. 5. Хаманова, Ю.Б. Состояние клеточного иммунитета при вирусных инфекциях / Ю.Б.Хаманова, В.В.Фомин, А.У.Сабитов, Ю.Г. Лагерева // Лабораторная диагностика в клинике инфекционной и соматической патологии: сб. науч.трудов/ под ред. Я.Б.Бейкина и др.-Екатеринбург: Из-во АМБ.-2010.-С.71-75. 6. Хаманова, Ю.Б. Клиническая оценка эффективности лечения менингеальной формы энтеровирусной инфекции иммуномодуляторами / Ю.Б. Хаманова, А.У. Сабитов, В.В. Фомин, О.А. Чеснакова, А.О. Овчинникова, Ю.Г. Лагерева // Уральский медицинский журнал.-2013.-№06(111).-С.50-54. 194 7. Фомин, В.В. Применение эргоферона при энтеровирусных менингитах и эндоплазматические цитокины / В.В. Фомин, А.У. Сабитов, А.О. Овчинникова, Ю.Г. Лагерева // Российский иммунологический журнал.-2013.-Т.7(16).-№2-3.-С.147-148. 8. Оленькова, О.М. Энтеровирусные менингиты у детей: оценка эпидемиологической значимости, особенности диагностики и клинического течения / О.М. Оленькова, О.П. Ковтун, Я.Б. Бейкин, Ю.Г. Лагерева, Н.Н. Сбитнева, Т.П. Павленко // Вестник уральской медицинской академической науки.-2014.-№1(47).С.18-22. 9. Лагерева, Ю.Г. Содержание различных субпопуляций лимфоцитов в динамике острого периода менингеальной формы энтеровирусной инфекции у детей / Ю.Г. Лагерева, В.А. Черешнев, Н.Н. Сбитнева, О.М. Оленькова, Т.П. Павленко, Я.Б. Бейкин // Российский иммунологический журнал.-2014.-Т.8 (17), №2.-С.177-185. 10. Лагерева, Ю.Г. Содержание наивных и Т-лимфоцитов памяти в динамике острого периода энтеровирусных менингитов у детей / Ю.Г. Лагерева, Я.Б. Бейкин, Н.В. Ищенко, Н.Н. Сбитнева, О.М. Оленькова // Журнал инфектологии.- 2014.-Т.6, № 2.-С. 63-64. 11. Лагерева, Ю.Г. Ассоциированный с полом иммунологический диморфизм при менингитах энтеровирусной этиологии / Ю.Г.Лагерева, Я.Б.Бейкин // Российский иммунологический журнал.-2015.-Т9 (18), №2 (2).-С.53-56. 12. Лагерева, Ю.Г. Особенности иммунного ответа на неполиомиелитные энтеровирусы у носителей гаплотипа HLA-DRB1*01;DQA1*01:01;DQB1*05:01 / Ю.Г.Лагерева, И.В.Рыбина, Я.Б.Бейкин // Российский иммунологический журнал.2015.-Т9 (18), №2 (2).-С.57-60. 13. Лагерева, Ю.Г. Ассоциированные с полом особенности иммунного ответа при менингеальной форме энтеровирусной инфекции / Ю.Г. Лагерева, Я.Б. Бейкин // Лабораторная диагностика инфекционных и соматических заболеваний: Сб. науч. трудов / под ред. Я. Б. Бейкина, В. В. Фомина, В. А. Шалаева.-Екатеринбург: Изд-во ООО ГК «Граффика».-2015.-С.31-54. 14. Лагерева, Ю.Г. Связь полиморфизма антигенов HLA с чувствительностью к менингитам, вызываемым неполиомиелитными энтеровирусами / Ю.Г.Лагерева, И.В.Рыбина, Я.Б. Бейкин, Е.В. Рыбакова, А.В.Рякшина, О.М. Оленькова, Н.Н. Сбитнева, А.Ю. Еременко, Н.В. Ищенко, С.В. Меньшиков, Т.П. Павленко // 195 Лабораторная диагностика инфекционных и соматических заболеваний: Сб. науч. трудов / под ред. Я. Б. Бейкина, В. В. Фомина, В. А. Шалаева.-Екатеринбург: Изд-во ООО ГК «Граффика».-2015.-С.128-144. 15. Харитонов, энтеровирусных А.Н. инфекций Эпидемиологические / А.Н.Харитонов, проблемы профилактики М.Т.Искакова, Э.А.Рыбинскова, Я.Б.Бейкин, Т.И.Праздничкова, Ю.Г.Лагерева, О.М.Оленькова // Лабораторная диагностика инфекционных и соматических заболеваний: Сб. науч. трудов / под ред. Я. Б. Бейкина, В. В. Фомина, В. А. Шалаева.-Екатеринбург: Изд-во ООО ГК «Граффика».-2015.-С.157-165. 196 Глава 5. РОЛЬ ЭФФЕКТОРНЫХ СУБПОПУЛЯЦИЙ ТЛИМФОЦИТОВ ПРИ COXSACKIE B- И ECHOМЕНИНГИТАХ У ДЕТЕЙ В предыдущей главе описаны возрастные и ассоциированные с полом и полиморфизмом HLA особенности дифференцировки основных эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов при ЭВИ с СМ вне зависимости от серотипа возбудителя. Данная глава посвящена исследованию роли Т-эффекторов при ЭВИ с СМ, вызванных отдельными серотипами НПЭВ. 5.1. Изменение содержания основных субпопуляций Т-эффекторов при Coxsackie B5-менингитах у детей Coxsackie B5-вирус (CVB5) выделен у 6 детей в возрасте 1-3 лет, 17 детей в возрасте 4-7 лет и 27 заболевших в возрасте 8-14 лет. Закономерности изменения содержания различных субпопуляций эффекторных Т-лимфоцитов в данных возрастных группах приведены в таблицах 5.1-5.3. Как видно из таблицы 5.1 CVB5-менингит у детей 1-3 лет характеризовался значимым повышением относительного содержания Th1 лимфоцитов на 11-20-е сутки от начала заболевания. Еще более выраженным являлось увеличение численности Tс1 клеток. Максимальное содержание Tc1 лимфоцитов наблюдали на 11-20-е сутки от начала заболевания. Содержание Т-хелперов, экспрессирующих IL-2 и TNF-α, не отличалось от значений в группе сравнения. В отличие от CD3+CD4+TNFα+ лимфоцитов содержание CD3+CD8+TNF-α+ клеток увеличивалось по отношению к группе сравнения. Количество Th2 и Tc2 лимфоцитов увеличивалось, оставаясь повышенным на протяжении всего срока наблюдения. 197 Таблица 5.1 - Содержание Т-эффекторов при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом, вызванной Coxsackie В5-вирусом у детей 1-3 лет в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Показатель Периоды обследования от начала заболевания 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=6) 2 (n=6) 3 (n=30) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% 4,52 4,27 4,95 5,15 (3) 3,98 6,16 2,55 1,33 3,39 СD3 CD4 IFN- , 10 /л 181,36 152,66 205,09 185,35 173,31 210,59 108,08 65,91 153,05 СD3+CD4+TNF-+ , % 8,20 7,73 9,48 13,29216 11,05 16,83 11,39 6,16 19,11 СD3 CD4 TNF- , 106/л 312,01 269,47 378,44 556,57 373,72 702,09 479,34 290,05 797,46 СD3+CD4+IL-2+ , % 5,79 5,00 6,68 8,18 5,79 9,62 8,35 4,62 16,06 СD3 CD4 IL-2 ,10 /л 225,02 200,02 244,74 321,20 230,02 407,16 370,25 196,81 648,76 СD3+CD4+IL-4+, % 1,77 (3) 1,37 2,29 2,14 (3) 1,54 2,34 0,07 0,03 0,14 65,81 (3) 57,12 78,39 87,60 (3) 43,35 104,32 3,82 1,00 5,83 5,37 5,06 5,88 6,59 (3) 5,10 7,88 1,50 0,93 2,38 СD3+CD8+IFN-+, 106/л 215,08 (3) 181,05 243,22 237,11 (3) 221,71 269,4 59,06 36,91 116,59 СD3+CD8+TNF-+ , % 3,26 3,08 3,77 4,39 3,65 5,56 1,10 0,74 2,30 СD3 CD8 TNF- , 106/л 124,36 107,40 150,83 183,98 (3) 123,53 232,08 47,26 30,54 115,27 СD3+CD8+IL-2+ , % 0,38 0,33 0,44 0,55 0,39 0,65 0,70 0,35 1,11 15,03 13,36 16,34 21,86 15,65 27,71 30,42 13,33 49,31 0,50 (3) 0,38 0,64 0,92 (3) 0,66 1,01 0,07 0,00 0,09 18,57 (3) 16,11 22,11 37,89 (3) 18,75 45,12 2,76 0,00 4,26 3,60 3,36 3,66 3,69 3,03 4,35 5,24 3,86 5,92 Т-лимфоциты (CD3 ), % 68,40 62,77 73,5 74,8 66,975 76,7 70,80 66,40 75,40 Т-лимфоциты (CD3+), 109/л 2,36 1,95 2,66 2,70 2,17 3,25 3,62 2,75 4,24 Т-хелперы (CD3+CD4+), % 38,30 35,50 40,27 41,2 40,05 42,12 40,70 36,30 46,70 Т-хелперы (CD3+CD4+), 109/л 1,29 1,15 1,43 1,57 1,19 2,01 1,97 1,75 2,52 Т-цитотокс. (CD3+CD8+), % 27,8 25,625 28,10 25,60 23,22 29,17 20,70 17,50 26,40 Т-цитотокс. (CD3+CD8+), 109/л 1,01 0,60 1,06 0,88 0,82 0,97 1,09 0,68 1,31 СD3+CD4+IFN-+ , % + + + + + + + + + + + 6 + + 6 + 6 СD3 CD4 IL-4 , 10 /л + СD3 CD8 IFN- , % + + + + + + 6 СD3 CD8 IL-2 ,10 /л СD3+CD8+IL-4+, % + + + 6 СD3 CD8 IL-4 , 10 /л 9 Лимфоциты, 10 /л + Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 198 Таблица 5.2 - Содержание Т-эффекторов при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом, вызванной Coxsackie В5-вирусом у детей 4-7 лет в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Периоды обследования от начала заболевания Показатель 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=17) 2 (n=17) 3 (n=30) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% 6,75 (3) 5,08 12,46 6,51 (3) 5,81 10,48 3,80 1,96 4,50 159,72 (3) 114,43 331,83 212,67 (3) 119,80 290,79 82,16 53,57 143,54 СD3+CD4+TNF-+ , % 20,38 12,29 23,39 15,04 8,89 22,68 16,07 12,20 25,26 СD3+CD4+TNF-+ , 106/л 482,31 311,61 632,90 468,63 206,33 710,05 484,91 307,38 787,21 СD3+CD4+IL-2+ , % 8,35 4,84 10,32 4,38 (3) 3,36 6,46 13,03 6,64 18,79 143,63 124,62 273,03 130,80 (3) 99,57 147,55 318,36 183,18 522,62 1,67 (3) 1,1528 2,04 0,97 (3) 0,66 1,25 0,07 0,06 0,12 СD3 CD4 IL-4 , 106/л 38,51 (3) 28,30 64,45 40,46 (3) 14,88 46,84 2,22 1,12 3,59 СD3+CD8+IFN-+ , % 5,75 (3) 4,61 11,31 6,35 (3) 5,67 10,22 2,30 1,50 2,90 145,00 (3) 103,89 301,25 207,42 (3) 128,63 283,62 55,84 43,74 85,75 СD3+CD8+TNF-+ , % 6,64 (3) 4,00 7,62 4,65 2,60 6,64 2,77 1,89 3,94 СD3+CD8+TNF-+ , 106/л 184,00 101,57 211,52 166,54 60,43 215,15 76,32 44,19 119,88 СD3+CD8+IL-2+ , % 1,22 0,71 1,51 0,51 0,39 0,76 0,82 0,51 1,13 СD3+CD8+IL-2+,106/л 21,05 18,26 40,01 17,46 11,77 18,44 23,22 12,01 37,48 1,11 (3) 0,77 1,36 0,93 (3) 0,63 1,20 0,04 0,00 0,07 28,44 (3) 18,93 43,12 27,32 (3) 14,28 35,37 1,12 0,00 2,56 + + + СD3 CD4 IFN- , % СD3+CD4+IFN-+, 106/л + + + + + + + + + 6 СD3 CD4 IL-2 ,10 /л СD3 CD4 IL-4 , % СD3+CD8+IFN-+, 106/л + + + + + + СD3 CD8 IL-4 , % СD3 CD8 IL-4 , 106/л Лимфоциты, 109/л 2,68 2,32 3,27 3,14 2,47 3,94 3,11 2,19 3,45 Т-лимфоциты (CD3+), % 64,3 (3) 62,1 66,8 69,5 65,2 74,9 70,75 66,72 76,42 Т-лимфоциты (CD3+), 109/л 1,67 1,65 2,06 2,18 1,61 2,87 2,09 1,54 2,56 32,0 (3) 31 37,6 33,1 (3) 30,4 39,1 41,50 33,47 45,35 Т-хелперы (CD3+CD4+), 109/л 0,94 0,80 1,04 1,04 0,66 1,31 1,13 0,85 1,49 Т-цитотокс. (CD3+CD8+), % 28,1 22,7 29,25 29,2 27 32,1 24,60 20,70 26,15 Т-цитотокс. (CD3+CD8+), 109/л 0,74 0,63 0,90 0,82 0,70 1,07 0,69 0,51 0,92 Т-хелперы (CD3+CD4+), % Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 199 Изменение относительного и абсолютного содержания основных субпопуляций CD4+ и CD8+Т-эффекторов в остром периоде CVB5-менингитов у детей 4-7 лет характеризовалось значимым повышением относительного и содержания Th1 клеток. Содержание Т-хелперов, экспрессирующих абсолютного TNF-α, не отличалось от показателей в группе сравнения, в то время как количество IL-2- положительных Т-хелперов снижалось, особенно на 11-20-е сутки от начала заболевания. Относительное и абсолютное содержание Th2 лимфоцитов значимо увеличивалось и оставалось повышенным на протяжении 20 суток от начала заболевания (таблица 5.2). Практически в три раза увеличивалась численность Tс1 лимфоцитов. Максимальное содержание Tc1 лимфоцитов наблюдали на 11-20-е сутки от начала заболевания. Относительное содержание CD3+CD8+TNF-α+ лимфоцитов увеличивалось по отношению к группе сравнения в 1-10-е сутки от начала заболевания. Относительное и абсолютное содержание CD3+CD8+IL-2+ лимфоцитов у детей 4-7 лет не изменялось по сравнению с нормальными значениями. Количество Tc2-лимфоцитов увеличивалось с первой декады заболевания до конца периода обследования. В целом, у детей 4-7 лет в остром периоде CVB5-менингитов наблюдали транзиторное снижение относительного содержания Т-лимфоцитов в 1-10 сутки от начала заболевания. Снижалось также относительное содержание Т-хелперных лимфоцитов (на протяжении всего периода наблюдения). Изменение относительного и абсолютного содержания основных субпопуляций CD4+ и CD8+Т-эффекторов в остром периоде CVB5-менингитов у детей 8-14 лет не характеризовалось значимым повышением относительного и абсолютного содержания Th1 лимфоцитов. Содержание Т-хелперов, экспрессирующих TNF-α и IL-2, оставалось сниженным на протяжении всего периода наблюдения. Относительное и абсолютное содержание Th2 лимфоцитов значимо увеличивалось и оставалось повышенным на протяжении 20 суток от начала заболевания (таблица 5.3). Численность Tс1 клеток при CVB5-менингитах у детей 8-14 лет, в отличие от Th1 клеток, значимо увеличивалась в остром периоде заболевания. 200 Таблица 5.3 - Содержание Т-эффекторов при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом, вызванной Coxsackie В5-вирусом у детей 8-14 лет в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Периоды обследования от начала заболевания Показатель 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=27) 2 (n=27) 3 (n=30) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% 8,16 5,08 10,48 6,83 6,36 9,63 6,34 5,47 8,17 160,83 101,81 199,97 159,81 130,82 223,70 125,50 98,54 169,78 СD3+CD4+TNF-+ , % 16,98 (3) 10,10 20,65 12,96 (3) 12,03 15,89 23,20 18,70 35,02 СD3+CD4+TNF-+ , 106/л 324,84 (3) 246,12 426,06 304,41 (3) 269,42 383,94 548,69 375,62 665,66 8,28 (3) 6,08 11,91 8,11 (3) 5,44 10,88 17,47 13,00 22,44 192,19 (3) 125,07 223,03 204,09 (3) 124,41 257,22 376,52 289,93 526,81 СD3 CD4 IL-4 , % 1,82 (3) 1,15 2,34 2,21 (3) 1,56 2,56 0,12 0,06 0,21 СD3+CD4+IL-4+ , 106/л 40,41 (3) 19,10 49,36 47,23 (3) 34,85 56,86 2,61 0,81 3,89 СD3+CD8+IFN-+ , % 8,20 (3) 5,11 10,53 8,04 (3) 7,48 11,33 4,05 3,40 5,46 161,68 (3) 97,87 201,04 188,02 (3) 153,90 263,18 97,47 58,71 118,65 СD3+CD8+TNF-+ , % 5,73 3,49 7,28 5,75 (3) 5,20 7,05 3,94 3,04 5,59 СD3+CD8+TNF-+ , 106/л 107,37 75,91 145,84 133,04 (3) 100,31 170,44 93,73 68,41 113,01 СD3+CD8+IL-2+ , % 0,87 (3) 0,56 1,26 0,75 (3) 0,50 1,00 1,33 0,70 2,11 СD3+CD8+IL-2+,106/л 19,95 (3) 12,87 23,67 18,89 (3) 11,51 23,81 30,95 15,33 44,10 СD3+CD8+IL-4+, % 0,57 (3) 0,36 0,74 0,78 (3) 0,55 0,91 0,07 0,06 0,08 12,79 (3) 6,04 15,62 16,77 (3) 12,37 20,18 1,29 0,81 2,83 2,34 1,80 2,76 2,42 1,84 3,11 2,14 1,79 2,62 Т-лимфоциты (CD3+), % 66,5 (3) 60,6 70,5 69,7 62,6 72,92 71,35 66,22 76,32 Т-лимфоциты (CD3+), 109/л 1,46 1,02 1,90 1,66 1,34 2,08 1,49 1,23 1,90 Т-хелперы (CD3+CD4+), % 36,4 28,7 41,5 35,55 33,05 42,25 40,55 35,50 44,30 Т-хелперы (CD3+CD4+), 109/л 0,80 0,61 1,06 0,93 0,66 1,12 0,86 0,69 1,08 Т-цитотокс. (CD3+CD8+), % 24,5 21,9 29 26,55 25,42 28,47 23,20 19,72 28,75 Т-цитотокс. (CD3+CD8+), 109/л 0,49 0,42 0,63 0,65 0,50 0,79 0,53 0,35 0,68 + + + + + + СD3 CD4 IFN- , % СD3 CD4 IFN- , 106/л + + + + + + + + + СD3 CD4 IL-2 , % 6 СD3 CD4 IL-2 ,10 /л СD3+CD8+IFN-+, 106/л + + + СD3 CD8 IL-4 , 106/л Лимфоциты, 109/л Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 201 Содержание цитотоксических Т-лимфоцитов, экспрессирующих TNF-α, также было повышено по отношению к группе сравнения на протяжении 11-20 суток наблюдения. Относительное и абсолютное содержание CD3+CD8+IL-2+ лимфоцитов оставалось сниженным на протяжении острого периода заболевания. Количество Tc2 лимфоцитов увеличивалось с первой декады заболевания до конца периода обследования. В целом, у детей 8-14 лет с CVB5-менингитами происходило перераспределение в периферической крови относительного содержания основных лимфоцитарных субпопуляций: снижалось количество Т-лимфоцитов (относительная Т-лимфопения наблюдалась на протяжении 10 суток от начала заболевания) в основном за счет снижения относительного содержания Т-хелперных лимфоцитов. 5.2. Сравнительная характеристика эффекторных субпопуляций Тлимфоцитов при Coxsackie В1-В5-менингитах В группе детей 4-7 летнего возраста Coxsackie B1-вирус (CVB1) выделен у 10 детей, Coxsackie B2-вирус (CVB2) – у 10 человек, Coxsackie B3-вирус (CVB3) – у 8 человек, Coxsackie B4-вирус (CVB4) - у 10 человек и Coxsackie B5-вирус (CVB5) – у 16 детей. Сравнительный анализ содержания основных эффекторных субпопуляций Тлимфоцитов в остром периоде менингитов, вызванных разными серотипами CVB, показал, что вне зависимости от серотипа CVB1-5 у детей 4-7 лет в 1-10-е сутки от начала заболевания увеличивалось содержание Th1 и Th2 лимфоцитов. Относительное и абсолютное содержание CD3+CD4+IL-2+ и CD3+CD4+TNF-α+ субпопуляций значимо не изменялось ни в одной из анализируемых групп. Кроме того, содержание различных субпопуляций Т-хелперов в группах детей, инфицированных разными серотипами CVB1-5, также не имело значимых различий (рисунок 5.1) 202 800 1600 а б 1400 600 1200 500 1000 106/л 106/л 700 400 800 300 600 200 400 100 200 0 CVB 1 CVB 2 CVB 3 CVB 4 CVB 5 N Median 25%-75% Min-Max Median 25%-75% Min-Max 0 CVB 1 CVB 2 CVB 3 CVB 4 CVB 5 N 900 220 в 800 г 200 180 700 160 600 140 106/л 106/л 500 400 120 100 80 300 60 200 40 100 20 0 CVB 1 CVB 2 CVB 3 CVB 4 CVB 5 N Median 25%-75% Min-Max 0 CVB 1 CVB 2 CVB 3 CVB 4 CVB 5 N Median 25%-75% Min-Max Рисунок 5.1 - Абсолютное содержание CD4+ Т-эффекторов: CD3+CD4+IFN-+(а); CD3+CD4+TNF-+(б); CD3+CD4+IL-2+(в); CD3+CD4+IL-4+(г) при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом, вызванной Coxsackie B-вирусами (CVB1-5) у детей 4-7 лет Что касается субпопуляций CD8+Т-эффекторов, то подобно их CD4+ аналогам в 1-10-е сутки от начала заболевания у детей, инфицированных различными серотипами CVB1-5, увеличивалась численность Tc1 и Тс2 лимфоцитов вне зависимости от серотипа возбудителя. Причем содержание этих субпопуляций в периферической крови также не имело значимых различий в сравниваемых группах (рисунок 5.2). Только при CVB3-менингитах зафиксировано увеличение содержания CD3+CD8+TNF-α+ клеток в периферической крови по отношению к показателю в группе сравнения. Тем не менее, относительное и абсолютное содержание этих клеток также значимо не отличалось при сравнении с другими серотипами возбудителя. 203 500 700 а 600 б 450 400 500 350 300 106/л 106/л 400 250 300 200 150 200 100 100 50 0 CVB 1 CVB 2 CVB 3 CVB 4 CVB 5 N Median 25%-75% Min-Max 0 CVB 1 CVB 2 CVB 3 CVB 4 CVB 5 N Median 25%-75% Min-Max 180 140 в 160 г 120 140 100 120 100 106/л 106/л 80 80 60 60 40 40 20 20 0 CVB 1 CVB 2 CVB 3 CVB 4 CVB 5 N Median 25%-75% Min-Max 0 CVB 1 CVB 2 CVB 3 CVB 4 CVB 5 N Median 25%-75% Min-Max Рисунок 5.2 - Абсолютное содержание CD8+ Т-эффекторов: CD3+CD8+IFN-+(а); CD3+CD8+TNF-+(б); CD3+CD8+IL-2+(в); CD3+CD8+IL-4+(г) при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом, вызванной Coxsackie B-вирусами (CVB1-5) у детей 4-7 лет Во вторую декаду заболевания у детей 4-7 лет повышенным оставалось вне зависимости от серотипа возбудителя содержание в периферической крови Тс1, Th2 и Tc2 лимфоцитов. Наиболее высокое содержание Th2 и Tc2 лимфоцитов на 11-20-е сутки болезни характеризовало детей с CVB1- и CVB2-менингитами. В группе детей 8-14 летнего возраста CVB1 выделен у 12 детей, CVB2 – у 5 человек, CVB3 – у 15 человек, CVB4 - у 10 человек и CVB5 – у 31 ребенка. Сравнительный анализ содержания основных эффекторных субпопуляций Тлимфоцитов в остром периоде менингитов, вызванных разными серотипами CVB, показал, что у детей 8-14 лет в 1-10-е сутки от начала заболевания абсолютное содержание в периферической крови Тh1 клеток значимо не увеличивалось. Вне зависимости от серотипа возбудителя при CVB-менингитах у детей 8-14 лет в 204 периферическом кровотоке снижалось содержание IL-2-экспрессирующих Т- хелперов и увеличивалась численность Th2 субпопуляции лимфоцитов. Абсолютное содержание Тс1 лимфоцитов у детей 8-14 лет в 1-10 сутки от начала заболевания значимо увеличивалось только при CVB1-, CVB3- и CVB5- менингитах. В остальных случаях численность этой субпопуляции возрастала, но не достигала статистически значимой разницы с группой сравнения, тем не менее, относительное и абсолютное содержание Tс1 лимфоцитов при инфицировании различными серотипами CVB1-5 также достоверно не различалось. Вне зависимости от серотипа возбудителя при CVB-менингитах у детей 8-14 лет в периферическом кровотоке увеличивалась численность Tс2 субпопуляции лимфоцитов. Во вторую декаду заболевания у детей 8-14 лет повышалось содержание Th1 лимфоцитов при CVB1-менингитах (значимо не отличаясь от показателей в других группах). Снижалось содержание CD3+CD4+TNF-α+ клеток (наиболее выраженное снижение характеризует CVB3- и CVB5-менингиты). Оставалось сниженным содержание IL-2-экспрессирующих Т-хелперов (наиболее низкие значения наблюдали при CVB4 и CVB5-менингитах). Содержание Th2 лимфоцитов оставалось повышенным вне зависимости от типа возбудителя. Также во всех анализируемых группах во вторую декаду заболевания было повышено содержание в периферической крови Тс1 и Tc2 лимфоцитов. 5.3. Сравнительная характеристика эффекторных субпопуляций Тлимфоцитов при ECHO-менингитах, вызванных вирусами ECHO 11 и ECHO 30 В группе детей 4-7 летнего возраста ECHO11 выделен у 7 детей, ECHO30 – у 15 человек. Сравнительный анализ содержания основных эффекторных субпопуляций Тлимфоцитов в остром периоде менингитов, вызванных разными серотипами ECHOвирусов, показал, что вне зависимости от серотипа ECHO-вирусов у детей 4-7 лет в 110-е сутки от начала заболевания увеличивалось содержание Th2 и Tc2 лимфоцитов. Относительное и абсолютное содержание IL-2-экспрессирующих CD4+ и CD8+ Тлимфоцитов значимо не изменялось ни в одной из анализируемых групп. 205 Содержание CD3+CD8+TNF-α+ субпопуляции увеличивалось при инфицировании как ECHO 11, так и ECHO 30. При этом содержание Тh1 и Тc1 лимфоцитов значимо возрастало только при ECHO11-менингитах, превышая содержание этих клеток у детей с ECHO30-менингитом (таблица 5.4). На 11-20 сутки от начала заболевания в обеих анализируемых группах оставалось повышенным содержание Th2 лимфоцитов (более выраженное при ECHO30-менингитах), а также Тс2 субпопуляции лимфоцитов. Кроме того, ECHO11менингиты характеризовались повышенным содержанием по отношение к группе сравнения Tc1 клеток (их содержание, тем не менее, значимо не отличалось от показателя при ECHO30-менингитах). Таблица 5.4 - Содержание Т-эффекторов при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом, вызванной ECHO 11 и ECHO 30 у детей 4-7 лет (1-10 сутки от начала заболевания), Ме (LQ-UQ) Периоды обследования от начала заболевания ECHO 11 ECHO 30 группа сравнения 1 (n=7) 2 (n=15) 3 (n=30) Показатель медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиан а 25% 75% СD3+CD4+IFN-+ , % 7,55 (2,3) 6,95 11,61 4,14 (1) 3,40 6,00 3,80 1,96 4,50 СD3+CD4+IFN-+, 106/л 308,4(2,3) 155,16 464,18 102,96(1) 96,43 123,91 82,16 53,57 143,54 СD3+CD4+TNF-+ , % 25,04 19,71 27,46 18,62 16,40 21,63 16,07 12,20 25,26 СD3 CD4 TNF- , 106/л 615,94 515,28 766,28 474,84 380,62 525,67 484,91 307,38 787,21 СD3+CD4+IL-2+ , % 7,45 5,34 10,41 5,73 4,10 12,09 13,03 6,64 18,79 СD3+CD4+IL-2+,106/л 164,35 119,71 202,81 142,72 110,72 286,54 318,36 183,18 522,62 СD3+CD4+IL-4+, % 0,66(3) 0,53 0,75 0,45(3) 0,30 0,73 0,07 0,06 0,12 СD3 CD4 IL-4 , 10 /л 17,61(3) 16,49 18,41 11,72(3) 5,16 17,54 2,22 1,12 3,59 СD3 CD8 IFN- , % 6,85(2,3) 6,31 10,54 3,40(1) 3,09 5,45 2,30 1,50 2,90 СD3 CD8 IFN- , 10 /л 279,9(2,3) 140,86 421,41 88,91(1) 81,46 112,49 55,84 43,74 85,75 СD3+CD8+TNF-+ , % 8,16(3) 6,42 8,95 6,19(3) 5,24 7,99 2,77 1,89 3,94 СD3 CD8 TNF- , 106/л 200,77(3) 167,96 249,77 143,92(3) 111,09 171,34 76,32 44,19 119,88 СD3+CD8+IL-2+ , % 1,09 0,78 1,53 0,80 0,65 1,59 0,82 0,51 1,13 СD3 CD8 IL-2 ,10 /л 24,09 17,54 29,72 21,18 16,64 36,05 23,22 12,01 37,48 0,44(3) 0,36 0,50 0,22(3) 0,13 0,41 0,04 0,00 0,07 11,78(3) 11,03 12,32 5,07(3) 2,92 8,13 1,12 0,00 2,56 + + + + + + + + + + + + + + + + 6 6 + + 6 СD3+CD8+IL-4+, % СD3 CD8 IL-4 , 10 /л + + + 6 Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 206 В группе детей 8-14 летнего возраста ECHO11 выделен у 7 детей, ECHO30 – у 30 человек. Сравнительный анализ содержания основных эффекторных субпопуляций Тлимфоцитов в остром периоде менингитов, вызванных разными серотипами ECHOвирусов, показал, что различия в содержании Th1 и Tc1 лимфоцитов, описанные у детей 4-7 лет при ECHO11- ECHO30-менингитах в первую декаду заболевания, полностью нивелируются у детей 8-14 лет. В этом возрасте при ECHO-менингитах независимо от серотипа возбудителя зафиксировано повышение содержания Th2 и Tc2 субпопуляций (более выраженное при ECHO30-менингитах); снижение содержания Т-хелперов, экспрессирующих IL-2 и повышение содержания Тс1 лимфоцитов, экспрессирующих IFN- и TNF- (таблица 5.5). Таблица 5.5 - Содержание Т-эффекторов при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом, вызванной ECHO 11 и ECHO 30 у детей 8-14 лет (1-10 сутки от начала заболевания), Ме (LQ-UQ) Периоды обследования от начала заболевания ECHO 11 ECHO 30 группа сравнения 1 (n=7) 2 (n=30) 3 (n=30) Показатель медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиан а 25% 75% 8,03 5,61 9,45 6,45 4,49 8,41 6,34 5,47 8,17 СD3 CD4 IFN- , 10 /л 122,68 99,35 296,89 128,13 88,40 192,77 125,50 98,54 169,78 СD3 CD4 TNF- , % 21,82 19,11 24,97 21,58 15,54 27,35 23,20 18,70 35,02 СD3 CD4 TNF- , 106/л 350,49 332,73 705,29 414,06 280,95 661,01 548,69 375,62 665,66 СD3 CD4 IL-2 , % 9,30(3) 5,27 12,53 11,40(3) 4,88 14,28 17,47 13,00 22,44 СD3+CD4+IFN-+ , % + + + + + + + + + + 6 + + СD3+CD4+IL-2+,106/л 203,26(3) 123,17 268,42 215,95(3) 100,44 350,70 376,52 289,93 526,81 СD3+CD4+IL-4+, % 0,34(3) 0,22 0,57 0,65(3) 0,29 0,98 0,12 0,06 0,21 СD3+CD4+IL-4+ , 106/л 7,63(3) 4,14 15,00 13,33(3) 7,01 23,56 2,61 0,81 3,89 СD3+CD8+IFN-+ , % 9,22(3) 7,77 9,83 6,32 4,10 9,18 4,05 3,40 5,46 СD3+CD8+IFN-+, 106/л 184,66(3) 118,78 324,58 135,42(3) 88,92 190,21 97,47 58,71 118,65 СD3+CD8+TNF-+ , % 8,54(3) 7,54 9,22 7,44(3) 4,58 9,63 3,94 3,04 5,59 СD3+CD8+TNF-+ , 106/л 183,52(3) 117,79 278,17 131,78(3) 99,06 207,09 93,73 68,41 113,01 СD3 CD8 IL-2 , % 0,93 0,56 1,30 1,21 0,49 1,42 1,33 0,70 2,11 СD3+CD8+IL-2+,106/л + + + 20,58 13,08 28,00 21,15 10,66 34,63 30,95 15,33 44,10 СD3+CD8+IL-4+, % 0,11(3) 0,05 0,18 0,19(3) 0,10 0,30 0,07 0,06 0,08 СD3+CD8+IL-4+ , 106/л 2,41(3) 1,16 4,75 3,34(3) 1,75 6,42 1,29 0,81 2,83 Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 207 На 11-20 сутки у детей 8-14 лет с ECHO-менингитами независимо от серотипа возбудителя повышено содержание Тh2 и Тc2 лимфоцитов. Кроме того, при ECHO11инфекции увеличивалось число Th1 эффекторов, а при ECHO30 – значимо снижалось содержание IL-2 и TNF--экспрессирующих Т-хелперов. 5.4. Эффекторные субпопуляции Т-лимфоцитов и особенности клинического течения ECHO- и Coxsackie В-менингитов Для сравнения содержания анализируемых субпопуляций эффекторных CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов в остром периоде ЭВИ с СМ, вызванной серотипами вирусов, относящихся к ECHO- и Coxsackie В-группе проведен анализ численности отдельных Т-лимфоцитарных субпопуляций у детей двух возрастных групп с ECHO 11-, ECHO 30- и CVB5-менингитами. Данные, характеризующие содержание CD4+ и CD8+ Тэффекторов у детей 4-7 и 8-14 лет в остром периоде ECHO- и Coxsackie В-менингитов приведены в таблицах 5.5 и 5.7. Анализ полученных результатов в группе 4-7-летних детей показал, что при CVB5-менингите в большей степени увеличивалось число Th2 и Тс2 субпопуляций лимфоцитов по сравнению с обоими вариантами ECHO-менингитов. В то же время, содержание Th1 и Тс1 субпопуляций в меньшей степени отличалось при ECHO11 и CVB5-менингите, чем при ECHO30-инфекции. Таблица 5.6 - Содержание Т-эффекторов при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом, вызванной ECHO 11, ECHO 30 и CVB5 у детей 4-7 лет (1-10 сутки от начала заболевания), Ме (LQ-UQ) Группы Показатель ECHO 11 ECHO 30 CVB5 1 (n=7) 2 (n=15) 3 (n=16) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% СD3+CD4+IFN-+ , % 7,55 (2) 6,95 11,61 4,14 (1,3) 3,40 6,00 6,75(2) 5,08 12,46 СD3 CD4 IFN- , 10 /л 308,4(2) 155,16 464,18 102,96(1,3) 96,43 123,91 159,7(2) 114,44 331,83 СD3 CD4 TNF- , % 25,04 19,71 27,46 18,62 16,40 21,63 20,38 12,30 23,40 СD3 CD4 TNF- , 106/л 615,94 515,28 766,28 474,84 380,62 525,67 562,31 311,61 632,91 + + + + + + + 6 + + 208 Продолжение таблицы 5.6 Группы Показатель ECHO 11 ECHO 30 CVB5 1 (n=7) 2 (n=15) 3 (n=16) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% 7,45 5,34 10,41 5,73 4,10 12,09 8,36 4,85 10,32 СD3 CD4 IL-2 ,10 /л 164,35 119,71 202,81 142,72 110,72 286,54 143,63 124,62 273,03 СD3 CD4 IL-4 , % 0,66 (3) 0,53 0,75 0,45(3) 0,30 0,73 1,67(1,2) 1,15 2,05 СD3 CD4 IL-4 , 10 /л 17,61(3) 16,49 18,41 11,72 (3) 5,16 17,54 42,5(1,2) 28,30 64,46 СD3+CD8+IFN-+ , % 6,85(2) 6,31 10,54 3,40(3) 3,09 5,45 5,75 (2) 4,62 11,32 СD3+CD8+IFN-+, 106/л 279,9(2) 140,86 421,41 88,91(3) 81,46 112,49 145,0(2) 103,89 301,26 СD3 CD8 TNF- , % 8,16 6,42 8,95 6,19 5,24 7,99 6,64 4,01 7,63 СD3 CD8 TNF- , 106/л 200,77 167,96 249,77 143,92 111,09 171,34 184,01 101,57 211,52 СD3+CD8+IL-2+ , % 1,09 0,78 1,53 0,80 0,65 1,59 1,23 0,71 1,51 СD3+CD8+IL-2+,106/л 24,09 17,54 29,72 21,18 16,64 36,05 21,05 18,26 40,01 0,44(3) 0,36 0,50 0,22(3) 0,13 0,41 1,1(1,2) 0,77 1,37 11,78(3) 11,03 12,32 5,07(3) 2,92 8,13 28,4(1,2) 18,94 43,12 СD3+CD4+IL-2+ , % + + + + + + + + + 6 + + 6 + + + + СD3 CD8 IL-4 , % + + + СD3 CD8 IL-4 , 10 /л + + + 6 Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 Таблица 5.7 - Содержание Т-эффекторов при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом, вызванной ECHO 11, ECHO 30 и CVB5 у детей 8-14 лет (1-10 сутки от начала заболевания), Ме (LQ-UQ) Группы Показатель ECHO 11 ECHO 30 CVB5 1 (n=7) 2 (n=30) 3 (n=31) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% 8,03 5,61 9,45 6,45 4,49 8,41 7,60 5,18 9,67 СD3 CD4 IFN- , 10 /л 122,68 99,35 296,89 128,13 88,40 192,77 153,89 96,29 190,62 СD3 CD4 TNF- , % 21,82 19,11 24,97 21,58 15,54 27,35 15,51 9,95 19,21 СD3+CD4+TNF-+ , 106/л 350,49 332,73 705,29 414,06 280,95 661,01 282,28 193,71 413,67 СD3 CD4 IL-2 , % СD3+CD4+IFN-+ , % + + + + + + + 6 + + 9,30 5,27 12,53 11,40 4,88 14,28 8,46 6,31 11,75 СD3+CD4+IL-2+,106/л 203,26 123,17 268,42 215,95 100,44 350,70 175,15 123,90 210,96 СD3+CD4+IL-4+, % 0,34 (3) 0,22 0,57 0,65 (3) 0,29 0,98 1,9(1,2) 1,10 2,41 СD3+CD4+IL-4+ , 106/л 7,63 (3) 4,14 15,00 13,33 (3) 7,01 23,56 40,4(1,2) 19,10 49,37 СD3+CD8+IFN-+ , % 9,22 7,77 9,83 6,32 4,10 9,18 7,64 5,21 9,72 СD3+CD8+IFN-+, 106/л 184,66 118,78 324,58 135,42 88,92 190,21 154,71 92,26 191,64 СD3+CD8+TNF-+ , % 8,54 7,54 9,22 7,44 4,58 9,63 5,06 3,46 6,77 183,52 117,79 278,17 131,78 99,06 207,09 98,84 66,50 138,23 СD3+CD8+TNF-+ , 106/л 209 Продолжение таблицы 5.7 Группы ECHO 11 Показатель ECHO 30 1 (n=7) CVB5 2 (n=30) 3 (n=31) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% СD3 CD8 IL-2 , % 0,93 0,56 1,30 1,21 0,49 1,42 0,90 0,58 1,25 СD3+CD8+IL-2+,106/л + + + 20,58 13,08 28,00 21,15 10,66 34,63 17,82 12,88 22,34 СD3+CD8+IL-4+, % 0,11(3) 0,05 0,18 0,19(3) 0,10 0,30 0,6(1,2) 0,35 0,76 СD3+CD8+IL-4+ , 106/л 2,41(3) 1,16 4,75 3,34(3) 1,75 6,42 12,8(1,2) 6,05 15,63 Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 У детей 8-14-летнего возраста достоверных отличий в содержании основных субпопуляций Т-эффекторов в группах с ECHO 11- и ECHO 30-менингитами не обнаружено, в то время как при CVB5-инфекции также наблюдали повышенное по сравнению с обоими вариантами ECHО-менингитов содержание Th2 и Тс2 субпопуляций. Учитывая существенную разницу в содержании Th1(Tc1) и Th2(Tc2) субпопуляций лимфоцитов у детей 4-7 лет с CVB5- и ECHO30-менингитами, проведено сравнение частоты и длительности регистрации основных клинических симптомов, наблюдаемых у детей в этих группах (таблица 5.8). Сравнительный анализ данных клинического обследования детей в возрасте 4-7 лет с ЭВИ с СМ, вызванными CVB5- и ECHO30-вирусами, позволил установить общие закономерности клинического течения и клинические особенности энтеровирусных менингитов, обусловленных CVB5- и ECHO30-серотипами. В целом, для ЭВИ с СМ у детей 4-7 лет вне зависимости от типа возбудителя характерно острое начало с подъемом температуры, головной болью и рвотой. Менингеальные симптомы в ходе заболевания отмечали в 100% случаев, чаще регистрировали полный менингеальный симптомокомплекс, реже – диссоциированный. Однако, несмотря на то, что частота и длительность большинства основных клинических симптомов, характеризующих CVB5- и ECHO30-менингиты, не имела статистически значимых различий, установлены следующие клинические особенности данных форм заболевания: при менингеальной форме CVB5-инфекции чаще регистрировали симптомы Брудзинского, а также преходящие очаговые симптомы. В свою очередь, ECHO30менингиты чаще сопровождались появлением кожной сыпи. 210 Таблица 5.8 - Сравнительная клиническая характеристика энтеровирусной инфекции с серозным менингитом, вызванной Coxsackie B5- и ECHO30-вирусами у детей 4-7 лет Клинические симптомы Coxsackie B5 (n=31) Частота (%) Длительность заболевания Продолжительность госпитализации Подъем температуры Волнообразная лихорадка Головная боль Рвота Менингеальные симптомы, в т.ч.: - ригидность затылочных мышц - симптом Кернига - симптомы Брудзинского Очаговые симптомы (анизорефлексия, атаксия, интенционный тремор и т.д) Катаральные явления, в т.ч. -гиперемия зева -затруднение носового дыхания Увеличение лимфоузлов Кишечные дисфункции Сыпь Продолжительность Me (Q25%-Q75%) ECHO30 (n=30) Частота (%) 20 (18-23) 18 (17,5-19) 100 25 100 93,7 3 (2-5) 100 87,5 93,7 37,5 37,5 6,2 18 (17,75-19,25) 17 (17-18,25) 100 40 100 100 2 (1-3,25) 1 (1-2) 100 2 (1,8-2,1) 3 (2-3) 2 (2-3) 93,3 60 3 (2-3) 2 (2-3) 1 (1-2) 37,5 68,7 12,5 Продолжительнос ть Me (Q25%-Q75%) 2 (2-2,5) 73,3 26,7 2=2,40 р=0,023 2=2,24 р=0,032 6,7 1 (1-2,75) 1(1-1) 2 / р 2 (1-3) 2(2-2) 26,7 53,3 40 2=2,41 р=0,022 Исследование клеточного состава ЦСЖ в динамике острого периода у детей 47 лет с Coxsackie B5- и ECHO30-менингитам продемонстрировало более высокий плеоцитоз при CVB5-инфекции (333,00 (93,00-413,00)*106/л против 85,00 (55,00- 138,00)*106/л) при ECHO30-инфекции в 1-10 сутки от начала заболевания. Причем, если абсолютное содержание нейтрофилов в первой пробе ЦСЖ у детей с CVB5- и ECHO30-менингитам не отличалось, то абсолютное содержание лимфоцитов при CVB5- инфекции значимо превышало их содержание у детей с ECHO30-менингитам. При повторном пунктировании (11-20 сутки) количество лейкоцитов в ЦСЖ составило 13 (8,20-21,00)*106/л и 10 (8,5-14,50)*106/л, соответственно. 211 Для оценки взаимосвязи основных клинических симптомов, а также клеточного состава ЦСЖ при CVB5- и ECHO30-менингитах у детей 4-7 лет с содержанием в периферической крови отдельных эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов рассчитаны парные коэффициенты корреляции Спирмена (таблица 5.9). Таблица 5.9 - Взаимосвязь клинических показателей, клеточного состава цереброспинальной жидкости с содержанием эффекторных субпопуляций CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов в 1-10 сутки острого периода энтеровирусной инфекции с серозным менингитом (Coxsackie B5- и ECHO30-этиологии) у детей 4-7 лет CD4+ IFN-+, 106/л CD4+ TNF-+, 106/л CD4+ IL-4+, 106/л Th1/Th2 CD8+ IFN-+, 106/л CD8+ TNF-+, 106/л CD8+ IL-4+, 106/л Tc1/Tc2 Показатель Длительность заболевания, сутки 0,2582 0,3582 -0,3057 0,3025 0,3037 0,3043 -0,2969 0,5282 Длительность лихорадки, сутки 0,2756 0,3351 0,1213 0,3065 0,3506 -0,2452 0,5557 0,6218 Ригидность ЗМ, сутки --0,1758 0,0879 -0,1050 -0,2165 -0,3184 -0,0493 0,1075 -0,4300 Состояние средней тяжести, сутки -0,0571 0,2643 0,2000 0,1286 -0,04286 -0,5429 0,3644 -0,7937 Общее содержание лейкоцитов в ЦСЖ (1-10 сутки) 0,2952 0,0539 0,3212 -0,0711 -0,6265 0,5637 -0,5882 0,6103 Содержание нейтрофилов в ЦСЖ 1-10 сутки, % 0,0361 0,1136 -0,0227 0,0692 -0,4196 -0,6770 -0,5302 -0,6667 Содержание лимфоцитов в ЦСЖ 1-10 сутки, % -0,0299 -0,1189 0,0289 -0,0744 0,4248 0,6722 0,5315 0,6618 Примечание: шрифтом выделены статистически значимые коэффициенты корреляции (Spearman-Rank), p<0,05 Анализ полученных коэффициентов корреляции показал, что статистически значимая зависимость существует между абсолютным содержанием Th2 клеток и длительностью заболевания. Содержание эффекторов второго типа также коррелирует с уровнем плеоцитоза в ЦСЖ в 1-10 сутки от начала заболевания. Отрицательная корреляционная связь установлена между содержанием TNF-экспрессирующих Т-хелперов и длительностью регистрации ригидности затылочных 212 мышц. Длительность лихорадочного периода зависит от уровня содержания TNF-экспрессирующих хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов. Уровень TNF-положительных CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов коррелирует также с клеточным составом ЦСЖ в 1-10 сутки от начала заболевания. Чем выше содержание данных субпопуляций Т-эффекторов в периферической крови, тем выше процентное содержание лимфоцитов и меньше относительная доля нейтрофилов в ЦСЖ. Соотношение эффекторов первого и второго типа (Th1/Th2 и Tc1/Tc2) связано с длительностью регистрации состояния средней тяжести, уровнем плеоцитоза и содержанием нейтрофилов в первой пробе ЦСЖ (1-10 сутки) отрицательной корреляционной связью. Сравнительный анализ данных клинического обследования детей в возрасте 814 лет с ЭВИ с СМ, вызванной CVB5- и ECHO30-вирусами, показал, что частота и длительность регистрации основных клиническим симптомов при менингитах CVB5и ECHO30-этиологии в этой возрастной группе не имеет статистически значимых отличий (таблица 5.10). Исследование клеточного состава ЦСЖ в динамике острого периода у детей 8-14 лет с CVB5- и ECHO30-менингитам показало, что уровень стартового плеоцитоза при CVB5-инфекции составляет 224,00 (78,50-454,00)*106/л, в то время как при ECHO30-инфекции - 112,00 (50,00-169,00)*106/л) в 1-10 сутки от начала заболевания и не имеет статистически значимых различий. Не отличался и клеточный состав ЦСЖ. При повторном пунктировании (11-20 сутки) количество лейкоцитов в ЦСЖ составило 15 (12,25-23,75)*106/л и 14 (8,25-20,50)*106/л, соответственно. Таким образом, клиническая картина CVB5- и ECHO30-менингитов у детей 8-14 лет имела схожее течение, что соответствовало практически идентичному составу Тэффекторов в периферической крови (в этой возрастной группе дети с CVB5менингитами отличались только более высоким содержанием Th2 и Тс2 субпопуляций Т-лимфоцитов, в то время как содержание остальных анализируемых Т-эффекторов не отличалось от наблюдаемого при ECHO30-менингитах). 213 Таблица 5.10 - Сравнительная клиническая характеристика энтеровирусной инфекции с серозным менингитом, вызванной Coxsackie B5- и ECHO30-вирусами у детей 8-14 лет Клинические симптомы Coxsackie B5 (n=16) Частота (%) Длительность заболевания Продолжительность госпитализации Подъем температуры Волнообразная лихорадка Головная боль Рвота Менингеальные симптомы, в т.ч.: - ригидность затылочных мышц - симптом Кернига - симптомы Брудзинского Очаговые симптомы (анизорефлексия, атаксия, интенционный тремор и т.д.) Катаральные явления, в т.ч. -гиперемия зева -затруднение носового дыхания Увеличение лимфоузлов Кишечные дисфункции Сыпь Продолжительность Me (Q25%-Q75%) ECHO30 (n=15) Частота (%) 20 (19-22) 18 (18-19) 96,8 25,8 100 80,6 3 (2-4,5) 96,8 Продолжительность Me (Q25%-Q75%) 19 (18-20) 17 (16-18) 100 26,7 100 73,3 2 (2-3) 3 (2-4) 100 3 (2-5) 93,5 67,7 16,1 2 (1-2) 2 (1-3) 96,7 53,3 6,7 3 (2-5) 2 (2-3) 61,3 32,3 1 (1-2) 3(2-3) 50 16,7 2 (2-4) 4,5(3,75-5) 32,3 41,9 0 2 (1-3) 3 (2-5) 20 40 6,7 5.5. Обсуждение результатов Возрастные закономерности изменения содержания основных субпопуляций Т-эффекторов при Coxsackie B5-инфекции у детей. Анализ наблюдаемых при CVB5-менингитах изменений содержания основных субпопуляций CD4+ и CD8+ Т-эффекторов показал, что выраженное повышение содержания субпопуляций Тh1 и Tc1 эффекторов при CVB5-менингитах характерно только для детей младшего возраста. 214 180 20 а НПЭВ (1-10 сутки) CVB5 (1-10 сутки) НПЭВ (11-20 сутки) CVB5 (11-20 сутки) N % от медианы группы сравнения 140 120 100 80 60 40 20 НПЭВ (1-10 сутки) CVB5 (1-10 сутки) НПЭВ (11-20 сутки) CVB5 (11-20 сутки) N б 10 % от медианы группы сравнения 160 0 -10 -20 -30 -40 -50 0 -60 -20 -70 -40 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 1-3 года 19-45 лет 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 19-45 лет 10 2000 в НПЭВ (1-10 сутки) CVB5 (1-10 сутки) НПЭВ (11-20 сутки) CVB5 (11-20 сутки) -10 1800 г НПЭВ (1-10 сутки) СVB5 (1-10 сутки) НПЭВ (1-20 сутки) CVB5 (11-20 сутки) N 1600 N % от медианы группы сравнения % от медианы группы сравнения 0 -20 -30 -40 -50 -60 -70 1400 1200 1000 800 600 400 200 -80 0 -90 -200 1-3 года Рисунок 4-7 лет 5.3 8-14 лет - 15-18 лет 19-45 лет Изменение 1-3 года абсолютного 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет содержания: 19-45 лет CD3+CD4+IFN-+(а); CD3+CD4+TNF-+(б); CD3+CD4+IL-2+(в); CD3+CD4+IL-4+(г) лимфоцитов в разных возрастных группах в динамике острого периода Coxsackie B5-менингитов (в % от N) В то же время, повышение численности Th2 и Тс2 субпопуляций – универсальный механизм, характеризующий противовирусный иммунный ответ при CVB5-менингитах во всех возрастных группах. Что касается, субпопуляций CD4+ Тлимфоцитов, экспрессирующих IL-2то чем старше становится ребенок, тем существенней становится снижение их содержание в периферической крови. Содержание CD3+CD4+TNF-+также значимо снижается только у детей 8-14 лет. 215 350 а НПЭВ (1-10 сутки) CVB5 (1-10 сутки) НПЭВ (11-20 сутки) CVB5 (11-20 сутки) N 250 200 150 100 50 300 % от медианы группы сравнения % от медианы группы сравнения 300 350 200 150 100 50 0 -50 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет -50 19-45 лет 20 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет 15-18 лет 19-45 лет 2600 в НПЭВ (1-10 сутки) CVB5 (1-10 сутки) НПЭВ (11-20 сутки) CVB5 (1-20 сутки) N 0 -10 -20 -30 -40 -50 -60 2400 2200 % от медианы группы сравнения % от медианы группы сравнения НПЭВ (1-10 сутки) CVB5 (1-10 сутки) НПЭВ (11-20 сутки) CVB5 (11-20 сутки) N 250 0 10 б г НПЭВ (1-10 сутки) CVB5 (-10 сутки) НПЭВ (11-20 сутки) CVB5 (1-20 сутки) 2000 1800 N 1600 1400 1200 1000 800 600 400 200 -70 -80 Рисунок 0 -200 1-3 года 5.4 4-7 лет - 8-14 лет 15-18 лет Изменение 19-45 лет абсолютного 1-3 года 4-7 лет 8-14 лет содержания: 15-18 лет 19-45 лет CD3+CD8+IFN-+(а); CD3+CD8+TNF-+(б); CD3+CD8+IL-2+(в); CD3+CD8+IL-4+(г) лимфоцитов в разных возрастных группах в динамике острого периода Coxsackie B5-менингитов (в % от N) В целом, описанные для CVB5-менингитов возрастные закономерности изменения содержания Т-эффекторов повторяют данные, полученные при характеристике ЭВИ с СМ в разных возрастных группах вне зависимости от возбудителя (рисунок 5.3 и рисунок 5.4). Сравнительная характеристика роли различных эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов при Coxsackie В- и ECHO-менингитах, вызванных различными серотипами вирусов (CVB1, CVB2, CVB3, CVB4, CVB5, ECHO11, ECHO30) Роль различных Т-лимфоцитарных субпопуляций при заболеваниях, этиологическими агентами которых являются вирусы CVB- и ECHO-групп, является 216 предметом интенсивного изучения в связи с их особым эпидемиологическим значением, широчайшим клиническим полиморфизмом вызываемых ими заболеваний, способностью к персистенции и индукции аутоиммунного воспаления. Современные представления об участии Т-хелперных и цитотоксических Тлимфоцитов в иммунном ответе при НПЭВ-инфекции изложены в обзоре литературы. Однако, роль отдельных эффекторных субпопуляций CD4+ и CD8+ Тлимфоцитов при CVB- и ECHO-инфекции с СМ, вызванной различными серотипами вирусов (CVB1, CVB2, CVB3, CVB4, CVB5, ECHO11, ECHO30) изучена впервые. Изменение содержания изучаемых субпопуляций Т-эффекторов в острый период CVB1-5 менингитов у детей в каждой возрастной группе за редким исключением подчинялось общим закономерностям. В частности, у детей 4-7 лет в первую декаду заболевания наблюдали значимое нарастание в периферической крови количества Th1, Tc1 и Th2, Tc2 лимфоцитов при всех вариантах CVB1-5-менингитов и только при CVB3-менингитах увеличивалась численность TNF--положительных CD8+Тлимфоцитов. Вторая декада заболевания также вне зависимости от типа возбудителя сопровождалась повышенным содержанием Th2, Tc1 и Tc2 лимфоцитов. В старшей возрастной группе (дети 8-14 лет) наблюдали общие для всех CVB15-менингитов закономерности изменения содержания CD4+ и CD8+ Т-эффекторов, которые, однако, отличались от обнаруженных у детей младшего возраста. Так, если содержание Th2 и Tc2 лимфоцитов, как и у детей 4-7 лет, в старшей возрастной группе было повышено на протяжении всего периода обследования, то снижение содержания IL-2-положительных Т-хелперов в первую декаду заболевания при CVB1-5-менингитах наблюдали только в старшей возрастной группе. Кроме того, в отличие от детей 4-7 лет в 1-10 сутки от начала заболевания у детей 8-14 лет не было зарегистрировано значимого повышения численности Th1 клеток, а содержание Tc1 эффекторов повышалось только при CVB1, CVB3 и CVB5 менингитах. Во вторую декаду заболевания в отличие от детей 4-7 лет в старшей возрастной группе наблюдали сниженное содержание IL-2 и TNF--положительных Т-хелперов. Количество Тс1 лимфоцитов было повышено, как и в младшей возрастной группе. Таким образом, возрастные особенности динамики и уровня дифференцировки Тэффекторов в большей степени определяли содержание той или иной субпопуляции CD4+ и CD8+ Т-эффекторов, чем серотип возбудителя Coxsackie В1-5-менингитов. В 217 целом, более выраженное увеличение содержания эффекторных субпопуляций Тхелперов и Т-цитотоксических лимфоцитов у детей 4-7 лет приводило к значимому повышению содержания Th1 лимфоцитов и нивелировало снижение содержания в периферической крови TNF--положительных Т-хелперов, активно мигрирующих в органы мишени, наблюдаемое у детей старшего возраста. Наконец, абсолютно универсальным иммунологическим феноменом, наблюдаемым при всех вариантах CVB1-5-менингитов у детей разных возрастных групп являлось продолжительное увеличение содержания Th2 и Tc2 субпопуляций лимфоцитов. Несмотря на то, что довольно распространенным подходом среди исследователей является противопоставление клинических и иммунологических особенностей, характеризующих менингиты, этиологическими агентами которых являются вирусы, относящиеся к CVB- и ECHO-группам, полученные результаты свидетельствуют, что содержание отдельных эффекторов адаптивного иммунного ответа при ECHO11 и ECHO30 менингитах у детей, например 4-7 лет, отличалось в большей степени, чем при сравнении ECHO11 и CVB5-инфекции. Тем не менее, описанные для CVB1-5-менингитов возрастные особенности динамики и уровня дифференцировки Т-эффекторов/клеток памяти наблюдали и при ECHO-менингитах. Для анализа клинико-иммунологических параллелей, проведено сравнение данных клинического обследования детей в возрасте 4-7 лет и 8-14 лет с энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом, вызванной CVB5 и ECHO30-вирусами. Частота и продолжительность основных клинических симптомов при CVB5- и ECHO30менингитах у детей 8-14 лет не имели статистически значимых различий, что соответствовало практически идентичному составу Т-эффекторов в периферической крови. В то же время особенности клинического течения CVB5-менингитов у детей 4-7 лет, более высокий уровень плеоцитоза в ЦСЖ, обусловленного, в том числе, повышенным содержанием лимфоцитов, позволили сделать вывод, что увеличение содержания эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов Th1- и Th2-типа в периферической крови и их соотношение коррелирует с клиническим течением заболевания и выраженностью воспалительной реакции в ЦНС. Материалы данной главы представлены в следующих публикациях: 218 1. Лагерева, Ю.Г. Особенности иммунного статуса при Коксаки- и ЕСНО- менингитах у детей 3-6 лет / Ю.Г. Лагерева, Я.Б. Бейкин, Н.Н. Сбитнева, Н.С. Субботина, Ю.Б. Хаманова // Инфекционные болезни.- 2010.- Т.8, №1.-С.29-33. 2. Оленькова, О.М. Менингиты ECHO-и КОКСАКИ-В-вирусной этиологии у детей: клинико-иммунологические особенности / О.М. Оленькова, О.П. Ковтун, Я.Б. Бейкин, Ю.Г. Лагерева, Н.Н. Сбитнева, Т.П. Павленко // Медицинская наука и образование Урала.-2013.-№4.-С.131-137. 219 Глава 6. ХАРАКТЕРИСТИКА ОТДЕЛЬНЫХ КОМПОНЕНТОВ ВРОЖДЕННОГО И АДАПТИВНОГО ИММУНИТЕТА В ЦЕРЕБРОСПИНАЛЬНОЙ ЖИДКОСТИ ПРИ МЕНИНГЕАЛЬНОЙ ФОРМЕ ЭНТЕРОВИРУСНОЙ ИНФЕКЦИИ 6.1. Изменение клеточного состава и характеристика Т-лимфоцитарных субпопуляций в цереброспинальной жидкости Исследование ЦСЖ в динамике острого периода ЭВИ с СМ продемонстрировало увеличение содержания лейкоцитов в ЦСЖ в 1-10 сутки от начала заболевания во всех возрастных группах. Минимальный плеоцитоз наблюдается у детей 1-3 лет и составляет 58 (40-305)*106/л. Максимальный - у детей 8-14 лет (до 131 (53-234) *106/л). В группе подростков 15-18 лет и взрослых уровень плеоцитоза в 1-10 сутки незначительно ниже, чем у детей 4-14 лет. При повторном пунктировании (11-20 сутки) количество лейкоцитов в ЦСЖ составляет от 6,00 (4,00-12,00)*106/л у детей 13 лет до 19,5(10,8-26,3)*106/л у взрослых. Характер «стартового» плеоцитоза зависит от возраста. Так, у детей младшего возраста (до 7 лет) большую долю лейкоцитов в ЦСЖ составляют гранулоциты (таблица 6.1). На 6-10 сутки происходит перекрест содержания форменных элементов в ЦСЖ, сопровождающийся увеличением относительного содержания лимфоцитов (рисунок 6.1). У детей 8-14 лет клеточный состав в ЦСЖ представлен в равной мере сегментоядерными нейтрофильными гранулоцитами (42,9 (17,0-71,0) %; 43,68 (11,2897,20) кл/мкл) и лимфоцитами (42,4 (21,7-74,1) %; 50,0 (18,0-75,2) кл/мкл). В старших возрастных группах относительное содержание лимфоцитов преобладает над гранулоцитами (таблица 6.1). При повторном пунктировании на 11-20 сутки от начала заболевания вне зависимости от возраста преимущественно лимфоцитарный характер. обследуемого плеоцитоз носит 220 Таблица 6.1 - Показатели гемо- и иммуноцитограммы цереброспинальной жидкости при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом (1-10 сутки), Ме (LQ-UQ) Показатель Возрастные группы, n 1 1-3 года n=12 2 4-7 лет n=41 3 8-14 лет n=46 4 15-18 лет n=10 5 19-45 лет n=11 Лейкоциты, 106/л 58 (40-305) 127 (85-341) 131 (53-234) 80 (80-105) 62,5 (25-101) Гранулоциты, % 64,5 (55,0-71,7) 72,0 (47,0-83,0) 42,9 (17,0-71,0) 36,0 (36,0-37,5) 27,0 (6,8-50,5) Гранулоциты, 106/л 42,6 (22,8- 91,4 (45,4-130,6) 43,7 (11,3-97,2) 28,8 (28,8-39,9) 10,7 (2,6-29,8) Лимфоциты, % 30,5 (28,2-45,0) 25,0 (16,0-52,9) 42,4 (21,7-74,1) 60,0 (60,0-64,0) 69,0 (49,5-93,2) 216,7) 5 6 Лимфоциты, 10 /л 16,9 (9,7-37,4) 2 31,6 (17,0-71,7) 50,0 (18,0-75,2) 48,2 (44,9-62,5) 3,5 2 83,9 (83,9-84,0) 84,3 (69,2-90,5) 94,7 (89,6-96,3) 4 3 40,3 (18,0-52,3) 2 Т-лимфоциты (CD3+), % 85,7 (74,9-89,3) Т-лимфоциты (CD3+), 106/л В-лимфоциты (CD19+), % В-лимфоциты (CD19+), 106/л Т-хелперы (CD3+CD4+), % 36,7 (5,9-94,4) 30,2 (14,3-59,7) 44,3 (17,4-91,8) 48,8 (37,2-61,4) 36,6 (17,4-48,1) 1,4 (0,5-14,2) 0,5 (0,5-0,5) 0,4 (0,0-1,5) 0,6 (0,0-1,3) 1,05 (0,4-1,3) 0,7 (0,3-1,2) 0,17 (0,06-0,39) 0,3 (0,0-0,9) 0,3 (0,0-0,6) 0,3 (0,1-0,6) 42,0 (41,0-57,4) 64,9 (64,6-65,0) 55,1 (40,7-62,8) 72,9 (71,5-74,6) 72,8 (62,2-80,4) 2,4,5 1,3 2,4,5 1,3 1,3 17,4 (2,7-54,4) 24,0 (11,0-46,1) 21,7 (9,9-66,4) 36,9 (31,9-46,0) 30,3 (14,3-40,2) 25,5 (23,1-36,7) 17,2 (17,1-17,5) 20,2 (16,2-24,1) 17,1 (10,1-21,7) 17,7 (10,8-22,2) 10,9 (2,9-25,1) 6,1 (2,8-13,3) 9,8 (4,0-26,4) 6,7 (4,1-13,2) 5,9 (2,5-7,5) 6,1 (1,2-8,3) 8,0 (8,0-8,1) 11,5 (4,9-24,3) 3,2 (1,7-4,1) 4,5 (3,3-6,1) 0,2 (0,0-4,6) 2,6 (0,9-6,6) 6,2 (2,9-17,4) 1,1 (0,8-1,9) 1,7 (0,9-2,3) 3,3 (0,1-9,4) 5,3 (5,0-5,4) 9,7 (4,6-20,6) 5,9 (4,1-7,5) 5,6 (3,7-7,9) 4,6 (0,9-9,1) 2,1 (0,7-4,1) 5,6 (2,0-16,8) 2,4 (0,8-4,1) 2,2 (0,6-3,5) 0,2 (0,0-0,6) 1,2 (0,0-2,5) 1,6 (0,6-3,3) 1,4 (0,3-7,7) 2,2 (0,4-9,8) 0,0 (0,0-0,8) 0,5 (0,1-2,2) 0,9 (0,2-1,8) 0,7 (0,1-3,3) 0,6 (0,2-4,9) Т-хелперы (CD3+CD4+), 106/л Т-цитотокс. (CD3+CD8+), % Т-цитотокс. (CD3+CD8+), 106/л NK-клетки (CD3CD16+56+), % NK-клетки (CD3CD16+56+), 106/л CD3+HLA-DR+, % + + CD3 HLA-DR , 106/л CD3+CD16+CD56+, % CD3+CD16+CD56+, 106/л 92,7 (89,6-95,0) Примечание: значения, выделенные курсивом, указывают на значимые различия в группах, p<0,05 221 Median; Whis k er: 25%, 75% Median; Whis k er: 25%, 75% 120 120 100 а нейтрофилы лим фоциты нейтрофилы лим фоциты 100 б 80 80 60 % % 60 40 40 20 20 0 0 -20 -20 0-5 6-10 11-15 0-5 16-20 6-10 11-15 16-20 сутки от начала заболевания сутки от начала заболевания Рисунок 6.1 - Относительное содержание нейтрофилов и лимфоцитов в ЦСЖ у детей: 1-3 лет (а); 4-7 лет (б) в остром периоде энтеровирусной инфекции с серозным менингитом Субпопуляционный состав лимфоцитов ЦСЖ в разных возрастных группах практически не отличается, за исключением более высокого относительного содержания Т-хелперных лимфоцитов в старших возрастных группах. Для сравнительного анализа субпопуляционного состава ЦСЖ и периферической крови выбрана группа 8-14 летних детей. 100 * * ЦСЖ (1-10 сутки) ЦСЖ (11-20 сутки) периф. кровь (1-10 сутки) периф.кровь (11-20 сутки) 80 * * % 60 40 * * 20 ** * 0 CD3+ CD3+CD4+ CD19+ CD3+HLA-DR+ CD3+CD8+ CD3-CD16+CD56+ Рисунок 6.2 - Относительное содержание отдельных субпопуляций лимфоцитов в цереброспинальной жидкости и периферической крови при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом у детей 8-14 лет, (Ме, LQ-UQ). Примечание: * – р<0,05 к показателям в периферической крови 222 В 1-10 сутки от начала заболевания лимфоциты в ЦСЖ представлены в основном Т-клетками. Доля Т-лимфоцитов в ЦСЖ значительно превышает их относительное содержание в периферической крови (84,3 (69,17-90,52)% против 66,2 (60,72-71,5)%). В свою очередь, большую часть Т-лимфоцитов в ЦСЖ составляют Т-хелперы (55,15 (40,7-62,9)%). Относительное содержание Т-хелперов также выше данного показателя в периферической крови (рисунок 6.2). Доля цитотоксических Т-лимфоцитов, напротив, снижена по сравнению с содержанием цитотоксических Т-лимфоцитов в периферической крови и составляет 20,25 (16,16-24,07)%. Значимо выше, чем в периферической крови в ЦСЖ содержание активированных Т-лимфоцитов, экспрессирующих HLA-DR (9,65 (4,62-20,6)% против 1,53 (0,71-2,61)%). Содержание В-клеток в ЦСЖ резко снижено по сравнению с показателем в периферической крови (0,4 (0-1,5)% против 15,2 (12,4-19,9)%). Относительное содержание NK в ЦСЖ в 1-10 сутки от начала заболевания значимо не отличается от показателя в периферической крови (11,5% (4,96-24,35)% и 14,2 (9,20-20,9)%, соответственно). 100 ЦСЖ (1-10 сутки) ЦСЖ (11-20 сутки) 80 106/л 60 40 20 0 CD3+ CD3+CD4+ CD3+CD19+ CD3+HLA-DR+ CD3+CD8+ CD3-CD16+CD56+ Рисунок 6.3 - Абсолютное содержание отдельных субпопуляций лимфоцитов в цереброспинальной жидкости при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом, (Ме, LQ-UQ) В образцах ЦСЖ, полученных на 11-20 сутки от начала заболевания, подавляющее большинство лимфоцитов составляют Т-клетки (92,1 (87,9-94,5)%). Они, по-прежнему, представлены в большей степени Т-хелперной субпопуляцией (50 (41,3-63,7)%). Т-цитотоксические клетки составляют 23,5 (19,6-24,4)% от общего 223 числа лимфоцитов. Относительное содержание активированных Т-лимфоцитов также как и в первых пробах, значимо превышает содержание CD3+HLA-DR+ лимфоцитов в периферической крови. Минорное содержание характеризует субпопуляции Влимфоцитов (0 (0-1,55)%) и NK (2,35 (0,01-5,42)%). Максимальное абсолютное содержание лимфоцитов наблюдали в 1-10 сутки от начала заболевания. Самое высокое абсолютное значение характеризует содержание Т-лимфоцитов (44,26 (17,42-91,80) кл/мкл) и их Т-хелперной субпопуляции (21,75 (9,95-66,44) кл/мкл). В динамике заболевания происходит значимое снижение абсолютного содержания в ЦСЖ всех субпопуляций лимфоцитов (рисунок 6.3). Содержание наивных Т-лимфоцитов и Т-лимфоцитов памяти в цереброспинальной жидкости в динамике острого периода энтеровирусной инфекции с серозным менингитом Т-хелперы в ЦСЖ в 1-10 сутки от начала заболевания ЭВИ с СМ представлены в основном CD4+ эффекторными Т-лимфоцитами/клетками памяти, которые составляли 51,4 (38,7-60,5)%, и центральными CD4+Т-клетками памяти, составляющими 40,0 (14,2-49,4)% (рисунок 6.4). Если относительное содержание CD4+TEM и CD4+TEFF значимо не отличается от показателя, наблюдаемого в периферической крови, то доля центральных Т-хелперов памяти превышает относительное содержание CD4+TCM в периферической крови практически в 20 раз. Наивные Т-хелперы представлены в ЦСЖ в минорном количестве (2,6 (0,2-6,2)% и 2,6 (0,15-11,45)%, соответственно). Помимо CD8+ эффекторных Т- лимфоцитов/клеток памяти (36,3 (27,8-39,7) %) большинство цитотоксических Тлимфоцитов в ЦСЖ в 1-10 сутки от начала заболевания составляют терминальнодифференцированные CD3+CD8+ лимфоциты (37,2 (30,9-55,12)%). Минимальное относительное содержание характеризует CD8+TCM (6,9 (0-10,1)%), при этом их доля в ЦСЖ превосходит относительное содержание данной субпопуляции лимфоцитов в периферической крови (0,75 (0,47-1,00)%). Еще более выраженным по сравнению с периферической кровью является увеличение содержания в ЦСЖ наивных цитотоксических Т-лимфоцитов (22,30 (19,60-25,10)% против 2,50 (2,00-3,82)%). 224 90 70 а ЦСЖ (1-10) ЦСЖ (11-20) периф.кровь (1-10) периф.кровь (11-20) 80 70 б ЦСЖ (1-10) ЦСЖ (11-20) периф.кровь (1-10) периф.кровь (11-20) 60 50 60 *# * 40 % % 50 40 30 * * 30 * 20 20 10 # * * 0 CD4+Tnaiv e *# 10 0 CD4+TEM CD4+TCM CD8+Tnaive CD4+CD62L-CD45RA+ CD8+TCM CD8+TEM CD8+TEMRA Рисунок 6.4 - Относительное содержание наивных Т-лимфоцитов и Тлимфоцитов памяти CD3+CD4+(а) и CD3+CD8+(б) -фенотипа в цереброспинальной жидкости и периферической крови при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом, (Ме, LQ-UQ). Примечание: * – р<0,05 к показателям в периферической крови; # - p<0,05 в разные сроки обследования 9 26 24 а ЦСЖ (1-10 сутки) ЦСЖ (11-20 сутки) 22 8 б ЦСЖ (1-10 сутки) ЦСЖ (11-20 сутки) 7 20 18 6 14 106/л 106/л 16 12 5 4 10 3 8 6 2 4 1 2 0 0 CD4+T naive CD8+Tnaive CD4+TEM CD4+TCM CD8+TCM CD8+TEM CD 8+TTEMRA CD4+CD62L-CD45R+ Рисунок 6.5 - Абсолютное содержание наивных Т-лимфоцитов и Т-лимфоцитов памяти: CD3+CD4+ (а); CD3+CD8+ (б) -фенотипа в цереброспинальной жидкости при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом, (Ме, LQ-UQ) В динамике заболевания на 11-20 сутки в ЦСЖ зарегистрировано значимое снижение содержания CD4+TCM и увеличение относительного содержания наивных Т- 225 хелперов. Субпопуляционный состав цитотоксических лимфоцитов в этот период характеризуется значимым снижением содержания CD8+TCM. Анализируя абсолютное содержание наивных Т-лимфоцитов и различных субпопуляций Т-эффекторов в ЦСЖ, следует подчеркнуть, что в соответствии с максимальным плеоцитозом, наиболее высокое абсолютное содержание характеризует субпопуляции CD4+TEM, CD4+TEFF и CD4+TCM лимфоцитов, а также CD8+TEMRA и CD8+TEM в 1-10 сутки от начала заболевания. Во вторую декаду заболевания более половины Т-лимфоцитов в ЦСЖ представлено CD4+TEM и CD4+TEFF субпопуляциями (рисунок 6.5). Содержание IFN-, TNF-, IL-2 и IL-4-синтезирующих Т-лимфоцитов в цереброспинальной жидкости Относительное содержание IFN-, TNF- и IL-2-положительных Т-хелперов в ЦСЖ в 1-10 сутки от начала заболевания значимо ниже их содержания в периферической крови. В динамике заболевания относительное содержание CD3+CD4+IL-2+ лимфоцитов в ЦСЖ повышается до уровня, наблюдаемого в периферической крови. Относительное количество IL-4+ Т-хелперов в ЦСЖ соответствует показателю в периферической крови. В целом, количество TNF-+ и IL2+ Т-хелперов превышает в ЦСЖ содержание IFN- и IL-4-экспрессирующих CD3+CD4+ лимфоцитов. Наиболее высокое относительное содержание среди цитотоксических Т-лимфоцитов характеризует в первую декаду заболевания субпопуляцию CD3+CD8+IL-2+ клеток (рисунок 6.6). Их доля в ЦСЖ превышает относительное содержание данной субпопуляции в периферической крови, снижаясь во вторую декаду заболевания до цифр, наблюдаемых в периферической крови. Относительное содержание IFN- и TNF-экспрессирующих цитотоксических Т-лимфоцитов в ЦСЖ устойчиво ниже, чем в периферической крови. В ЦСЖ также зарегистрированы единичные Тс2 лимфоциты. Клеток, относящихся к Th17 и Tnc17 субпопуляциям, не обнаружено. 226 20 ЦСЖ (1-10 сутки) ЦСЖ (11-20 сутки) 18 16 14 % 12 10 8 6 4 Рисунок 6.6 - Содержание цитокин-положительных CD8+IL-4+ CD8+IL-2+ CD8+TNF-a+ CD8+IFN-y+ CD4+IL-4+ CD4+IL-2+ CD4+IFN-y+ 0 CD4+TNF-a+ 2 Т-лимфоцитов в цереброспинальной жидкости при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом, (Ме, LQ-UQ) 6.2. Содержание про- и противовоспалительных цитокинов в цереброспинальной жидкости В течение первой декады острого периода ЭВИ с СМ в ЦСЖ по сравнению с образцами периферической крови, взятой в этот же период обследования, вне зависимости от возраста значимо повышено содержание таких цитокинов, как IL-6 и IL-8. Уровень IFN- превышает его содержание в периферической крови (повышенное при ЭВИ с СМ) у детей 8-14 лет и взрослых. Концентрация IL-2, IL-4 повышается в ЦСЖ также только у пациентов старше 18 лет. В динамике заболевания (11-20 сутки) уровень IFN- снижается до значений, наблюдаемых в этот же период в периферической крови. Концентрация IL-6 и IL-8 значимо снижается по сравнению со стартовыми показателями, но, по-прежнему превышает показатели содержания данных цитокинов в периферической крови. Уровень IL-18 в ЦСЖ во всех возрастных группах ниже, чем в периферической крови. Концентрация остальных цитокинов (TNF-, IFN-, IL-1, IL-10, IL-17) значимо не отличается от показателей, регистрируемых в периферической крови (таблица 6.2). 227 Таблица 6.2 - Содержание про- и противовоспалительных цитокинов в цереброспинальной жидкости при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом (1-10 сутки), Ме (LQ-UQ) Показатель Возрастные группы 4-7 лет n=41 8-14 лет n=46 15-18 лет n=10 19-45 лет n=11 0,0(0,0-12,1) 0,0 (0,0-16,3) 5,3 (0,1-11,2) 0,1 (0,0-2,1) IFN-, пг/мл 26,4 (12,4-53,8) 29,0 (17,1-64,2) 20,5 (18,9-31,2) 34,3 (25,1-45,2) IL-1, пг/мл IL-6, пг/мл 3,0 (0,0-4,9) 5,6 (3,4-9,7) 2,5 (1,3-3,2) 3,2 (2,5-4,0) 543,5 (403,7-813,8) 820,1 (614,1-1005,1) 495,1 (228,8-660,8) 599,7 (428,0-810,9) IL-8, пг/мл 318,7 (99,8-456,6) 364,5 (284,5-410,3) 114,7 (41,7-424,4) 366,6 (128,1-519,0) IL-4, пг/мл 2,1 (0,0-13,5) 1,7 (0,0-6,8) 6,1 (1,6-10,9) 13,4 (10,3-16,7) IL-2, пг/мл 20,3 (12,9-21,8) 10,4 (9,4-17,2) 12,5 (7,4-19,7) 19,2 (17,7-20,3) 4,7 (3,1-5,8) 3,1 (1,0-6,7) 2,9 (1,0-5,0) 4,8 (3,3-6,8) 9,4 (7,3-12,3) 13,8 (11,5-15,5) 11,3 (10,2-20,4) 15,5 (9,5-21,6) 8,2 (0,0-12,3) 10,2 (6,5-13,2) 10,2 (6,5-13,2) н.д. 2,6 (0,0-4,1) 1,5 (0,0-3,8) 2,7 (2,4-2,7) 2,8 (2,7-7,2) TNF-, пг/мл IL-17, пг/мл IL-18, пг/мл IFN-, пг/мл IL-10, пг/мл Примечание: значения, выделенные шрифтом, имеют значимые различия по сравнению с показателями в периферической крови, p<0,05 6.3. Обсуждение результатов В результате комплексного использования стандартных цитологических методов и проточноцитометрического анализа ЦСЖ при ЭВИ с СМ в данном исследовании получены новые данные, характеризующие особенности формирования локального иммунного ответа на энтеровирусную инфекцию ЦНС. Установлено, что наибольшей выраженности воспалительная реакция в ЦНС при ЭВИ с СМ достигает в 1-10 сутки от начала заболевания. Максимальный плеоцитоз в этот период обусловлен активной миграцией в ЦНС из периферической крови клеточных компонентов как врожденного (нейтрофильные гранулоциты, моноциты, NK), так и адаптивного иммунитета (Тлимфоциты). Стимуляция клеточной миграции происходит, прежде всего, под действием цитокинов и хемокинов, синтезируемых резидентными макрофагами (микроглией) наряду с активными формами кислорода, глутаматом и металлопротеиназами, которые могут быть задействованы в нарушении целостности ГЭБ [352]. Миграции клеток воспаления через ГЭБ способствуют IL-6 и IL-8 [68, 78]. 228 Как показали результаты проведенных исследований, ЭВИ с СМ на ранних этапах сопровождается значительным увеличением концентрации IL-6 и IL-8 в ЦСЖ, отмеченным и другими авторами [1, 48, 390]. Считается, что продукция IL-6 необходима на ранних стадиях постинфекции для индукции противовирусного иммунного ответа посредством активации и привлечения иммуноцитов [273], однако, длительно поддерживаемый высокий уровень IL-6 может приводить к повреждению тканей и иммунопатологии [441]. К основным эффекторным функциям IL-8 относятся активация и привлечение в очаг воспаления нейтрофилов. Кроме того, синтез IL-8 вносит вклад в индуцируемое вирусом действие на цитоскелет и плотные контакты, что в конечном итоге повышает трансэндотелиальную проницаемость [417]. ЭВИ с СМ не сопровождаются увеличением содержания IFN- ни в периферической крови, ни в ЦСЖ. Таким образом, развитию ЭВИ с СМ может способствовать нарушение раннего контроля вирусной репликации, в то время как концентрация IFN-, отвечающего за клиренс вирусов из ЦНС и долговременный контроль за вирусной репликацией [406], значимо повышена в ЦСЖ в первую декаду заболевания менингеальной формой энтеровирусной инфекции. Основным источником IFN-, в том числе в пределах ЦНС, являются NK клетки и активированные Т-лимфоциты (Th1, Тс1). Миграция NK из периферической крови в ЦСЖ осуществляется в 1-10 сутки от начала заболевания ЭВИ с СМ, далее (11-20 сутки) их уровень в ЦСЖ резко снижается. Помимо секреции антивирусных цитокинов, таких как IFN-γ, NK клетки подавляют вирусную инфекцию прямым цитотоксическим действием (чаще перфорин-опосредованным), что может приводить к развитию нежелательных иммунопатологических последствий в ЦНС. По-видимому, участие NK в противовирусном иммунном ответе в ЦНС при ЭВИ с СМ ограничивается самыми ранними этапами воспалительной реакции. Наряду с NK, моноцитами и сегментоядерными нейтрофилами, в ЦСЖ на ранних этапах заболевания мигрируют Т-лимфоциты. Несоответствие относительного содержания лимфоцитарных субпопуляций в ЦСЖ и периферической крови свидетельствует о селективной миграции в ЦНС их отдельных субпопуляций [48, 253, 291]. В результате проведенных исследований впервые установлено, что на ранних этапах ЭВИ с СМ происходит активная миграция в ЦСЖ Т-хелперов с фенотипом центральных клеток памяти, а также эффекторных Т-лимфоцитов памяти. Значительная пропорция 229 CD4+TCM в общем пуле Т-хелперов в ЦСЖ позволяет объяснить и тот факт, что содержание IL-2-положительных Т-хелперов в ЦСЖ – одно из самых высоких (по крайней мере, из анализируемых нами цитокинов). Примечателен и тот факт, что содержание CD4+TCM (как относительное, так и абсолютное) резко снижается уже на 11-20 сутки от начала заболевания (этот феномен наблюдается и в отношении CD8+TCM), что, по-видимому, свидетельствует о том, что большая часть мигрирующих на ранних этапах развития заболевания в ЦНС CD4+TCM (и CD8+TCM) не являются вирус-специфическими. Известно, что центральные Т-лимфоциты памяти обладают необходимым рецепторным аппаратом для миграции не только в лимфоидные органы, но и в очаги воспаления [284]. Кроме того, трафик Тлимфоцитов в ЦНС может происходить и антиген-независимым путем, но активация, удерживание и антивирусный иммунный ответ в ЦНС зависит от MHCрестриктированной презентации антигена [78, 167]. Таким образом, «незаинтересованные» TCM (как CD4+, так и CD8+) покидают ЦНС, приводя к резкому снижению содержания данных субпопуляций лимфоцитов в ЦСЖ во вторую декаду заболевания. Кроме того, антиген-специфические TCM в результате активации могут дифференцироваться в эффекторные Т-лимфоциты памяти. В отличие от центральных Т-клеток памяти относительное содержание CD4+ Т-лимфоцитов с фенотипом эффекторных Т-лимфоцитов (одно из самых высоких в ЦСЖ в 1-10 сутки от начала заболевания), а также терминально-дифференцированных Т-хелперов не уменьшается в динамике заболевания. Напротив, более половины Т-лимфоцитов в ЦСЖ на 11-20 сутки представлено CD4+TEM и CD4+TEFF субпопуляциями. Впервые в данном исследовании проведена оценка уровня в ЦСЖ основных субпопуляций Тэффекторов. Значительная доля TNF-α-, IFN-γ- и IL-4-экспрессирующих Т-хелперов при отсутствии Th17 субпопуляции лимфоцитов в ЦСЖ позволяет предполагать, что именно CD4+TEM и CD4+TEFF, относящиеся к Th1- и Th2-типу, контролируют энтеровирусную инфекцию ЦНС. Мигрирующие в ЦНС на ранних этапах ЭВИ с СМ цитотоксические Т-лимфоциты представлены в основном CD8+ эффекторными Тлимфоцитами/клетками памяти и CD8+ TEMRA, т.е. зрелыми цитотоксическими CD8++Т-лимфоцитами, содержащими перфорин и гранзим В, экспрессирующими FasL и продуцирующими IFN-γ и TNF-α. Что касается В-лимфоцитов, то теоретически возможен диапедез стимулированных антигеном, в частности в шейных 230 лимфоузлах, В-лимфоцитов через ГЭБ, их созревание и дифференцировка в Ig- секретирующие плазматические клетки. Более того, инфильтрация ЦНС антигенспецифическими антитела-секретирующими В-лимфоцитами необходима для элиминации многих нейротропных вирусов, включая WNV, SINV, RABV и коронавирусы [87, 190, 300]. Тем не менее, содержание В-лимфоцитов в ЦСЖ при энтеровирусных менингитах ничтожно мало, что, однако, не означает, что гуморальный иммунитет не задействован в элиминации энтеровирусов из ЦНС. Таким образом, энтеровирусные менингиты сопровождаются выраженной воспалительной реакцией в ЦСЖ, обусловленной, в том числе, активной миграцией в ЦНС из периферической крови нейтрофильных гранулоцитов, моноцитов, NK и Тлимфоцитов. Повышение проницаемости ГЭБ происходит под действием целого ряда факторов, связанных с воспалением, в частности увеличения концентрации в ЦСЖ провоспалительных цитокинов (IL-6) и хемокинов (IL-8). На ранних этапах ЭВИ с СМ у детей происходит также активная миграция в ЦСЖ Т-хелперов с фенотипом центральных клеток памяти, а также эффекторных Т-лимфоцитов памяти и коротко живущих Т-эффекторов. По-видимому, именно CD4+TEM и CD4+TEFF, относящиеся к Th1- и Th2-типу, контролируют энтеровирусную инфекцию ЦНС. Th1 лимфоциты, наряду с естественными киллерами, являются основным источником IFN- в ЦНС. Цитотоксические Т-лимфоциты, мигрирующие через ГЭБ на ранних этапах ЭВИ с СМ, представленные в основном CD8+ эффекторными Тлимфоцитами/клетками памяти Тс1-типа и CD8+ TEMRA. Материалы данной главы представлены в следующих публикациях: 1. Лагерева, Ю.Г. Характеристика отдельных компонентов врожденного и адаптивного иммунитета центральной нервной системы при менингеальной форме энтеровирусной инфекции у детей / Ю.Г. Лагерева, В.А. Черешнев, А.Ю. Еременко, Я.Б. Бейкин // Инфекционные болезни.-2014.-Т.12, №2.-С.68-75. 2. Лагерева, Ю.Г. Содержание CD4+ и CD8+Т-клеток памяти, наивных и терминально-дифференцированных Т-эффекторов в цереброспинальной жидкости при менингеальной форме энтеровирусной инфекции у детей / Ю.Г. Лагерева, В.А. Черешнев, А.Ю. Еременко, Я.Б. Бейкин // Российский иммунологический журнал.2014.-Т.8 (17), №3.-С.823-825. 231 Глава 7. КЛИНИКО-ИММУНОЛОГИЧЕСКИЕ ОСОБЕННОСТИ МЕНИНГЕАЛЬНОЙ ФОРМЫ КЛЕЩЕВОГО ЭНЦЕФАЛИТА 7.1. Сравнительная клинико-иммунологическая характеристика менингеальной формы клещевого энцефалита и энтеровирусной инфекции с серозным менингитом Клиническая характеристика менингеальной формы клещевого энцефалита. Большинство обследованных пациентов с МФ КЭ поступило в стационар на 3 (2-5) день болезни. Повышение температуры в первые дни болезни отмечено у всех пациентов (таблица 7.1). Таблица 7.1 - Клиническая характеристика менингеальной формы клещевого энцефалита у взрослых (n=35) Клинические симптомы Подъем температуры Волнообразная лихорадка Головная боль Рвота Менингеальные симптомы, в т.ч.: - ригидность затылочных мышц - симптом Кернига - симптомы Брудзинского Полный менингеальный комплекс Диссоциированный менингеальный комплекс Очаговые симптомы (гиперрефлексия, анизорефлексия, статическая атаксия, нистагм и т.д.) Катаральные явления, в т.ч. -насморк -кашель Увеличение лимфоузлов Кишечные дисфункции Абс. 35 10 35 10 29 27 Отн.(%) 100,0 28,6 100,0 28,6 82,9 77,1 21 2 2 60,0 5,7 5,7 27 77,1 19 54,3 3 0 3 0 2 8,6 0 8,6 0 5,7 232 Чаще всего повышение температуры регистрировали в диапазоне 37,6-38,50С (40,0%) и 38,6-39,50С (37,1%), реже – в диапазоне 37,0-37,50С (5,7%). Медиана продолжительности лихорадки у взрослых составила 7 (5-10) дней. Максимальная длительность лихорадочного периода – 20 дней. Волнообразный температурной кривой имели 28,6% пациентов. Головная боль характер отмечена у всех пациентов с МФ КЭ (100%). Более половины пациентов (71,4%) оценивали головную боль как диффузную. Медиана продолжительности головной боли составила 6,5 (3,59) дней. Рвота названа в числе жалоб при поступлении в стационар у 28,6% взрослых пациентов. Менингеальные симптомы зарегистрированы у 82,9% пациентов в т.ч. ригидность затылочных мышц (77,1%), симптом Кернига (60,0%) и симптомы Брудзинского (5,7%). Продолжительность регистрации ригидности затылочных мышц составила 5 (2-7) дней. Положительный симптом Кернига наблюдали в 11,4% случаев, сомнительный – в 48,6%. Медиана длительности регистрации симптома Кернига составила 5 (2-6) дней. У 54,3% пациентов с МФ КЭ была зарегистрирована преходящая очаговая симптоматика (гиперрефлексия, анизорефлексия, статическая атаксия, нистагм и т.д.) Увеличение лимфоузлов при МФ КЭ не наблюдали ни у одного пациента. Бледность кожи или гиперемия зарегистрированы в 8,6% случаев. Состояние средней тяжести отмечено у 100% взрослых пациентов с МФ КЭ (продолжительность 11 (9-15) дней), у 5 пациентов отмечено тяжелое состояние здоровья. Длительность заболевания составила 30 (25,5-36) дней, срок пребывания в стационаре – 25 (22-29,5) дней. Данные иммунологического обследования. МФ КЭ у взрослых сопровождалась транзиторным снижением относительного и абсолютного содержания лимфоцитов в периферической крови в 1-10 сутки от начала заболевания. Снижено в 1-10 сутки было и относительное содержание моноцитов (таблица 7.2). В этот же период повышалось содержание полиморфноядерных лейкоцитов, а также показатели поглотительной активности нейтрофилов. Тесты, характеризующие состояние НАДФ-Н2-оксидазной системы нейтрофилов, были повышены на протяжении всего 233 периода обследования. Бактерицидная активность лейкоцитов увеличивалась на 11-20 сутки острого периода заболевания (таблица 7.3). Таблица 7.2 - Показатели гемо- и иммуноцитограммы при менингеальной форме клещевого энцефалита у взрослых пациентов (19-45 лет) в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Показатель Периоды обследования от начала заболевания 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=35) 2 (n=35) 3 (n=45) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% Лейкоциты, 109/л 7,20(3) 6,05 8,15 6,50 5,50 7,70 6,20 5,32 7,10 Гранулоциты, % 72,10 (2,3) 63,90 77,00 59,60 (1) 55,90 69,00 61,50 56,70 65,85 Гранулоциты, 109/л 4,99 (2,3) 4,11 6,23 3,99(1) 3,12 4,62 3,85 2,93 4,25 Моноциты, % 5,10 (2,3) 4,35 6,00 6,20 (1) 5,70 7,00 6,30 5,30 8,00 0,35(2) 0,25 0,43 0,44(1) 0,34 0,49 0,37 0,28 0,49 Лимфоциты, % 21,30 (2,3) 18,75 28,40 33,70 (1) 23,10 38,00 32,35 29,62 35,60 Лимфоциты, 109/л Т-лимфоциты (CD3+), % Т-лимфоциты (CD3+), 109/л В-лимфоциты (CD19+), % В-лимфоциты (CD19+), 109/л Т-хелперы (CD3+CD4+), % Т-хелперы (CD3+CD4+), 109/л Т-цитотокс. (CD3+CD8+), % Т-цитотокс. (CD3+CD8+), 109/л NK-клетки (CD3CD16+56+), % NK-клетки (CD3CD16+56+), 109/л CD3+HLA-DR+, % CD3+HLA-DR+, 109/л CD3+CD16+CD56+, % CD3+CD16+CD56+, 109/л 1,68 (2,3) 1,29 1,95 2,09(1) 1,63 2,62 1,91 1,62 2,29 76,40 66,85 78,45 77,90 71,40 80,80 76,05 69,95 80,20 1,23 (2,3) 0,92 1,45 1,68 (1) 1,15 1,94 1,38 1,18 1,72 12,10(3) 8,75 16,75 10,00 (1) 8,00 12,60 8,48 6,56 11,40 0,20 0,11 0,28 0,20 0,14 0,27 0,17 0,11 0,22 42,40 37,30 49,00 47,10 40,20 50,00 45,00 39,02 48,87 0,64(2,3) 0,48 0,95 0,96(1) 0,69 1,12 0,85 0,69 1,03 23,10 20,55 29,05 26,90 22,90 30,50 25,10 20,65 29,82 0,37(2) 0,30 0,59 0,52(1) 0,41 0,75 0,48 0,37 0,59 8,58 6,35 12,55 8,30 4,50 11,40 11,40 8,41 16,07 0,13(3) 0,09 0,23 0,15 0,08 0,30 0,20 0,14 0,34 2,98(3) 1,31 5,20 4,07(3) 2,07 6,82 1,49 0,87 2,35 0,043 0,021 0,075 0,079(3) 0,040 0,115 0,026 0,014 0,053 4,39 1,67 6,57 4,10 1,69 5,70 2,78 1,55 4,72 0,034 0,028 0,101 0,060 0,036 0,101 0,051 0,027 0,093 Моноциты, 109/л Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 234 Таблица 7.3 - Показатели, характеризующие фагоцитарную активность нейтрофилов и моноцитов, при менингеальной форме клещевого энцефалита у взрослых пациентов (19-45 лет), Ме (LQ-UQ) Показатель Фагоцитарная активность нейтрофилов, % Фагоцитарная активность нейтрофилов, 109/л Фагоцитарная активность моноцитов, % Фагоцитарная активность моноцитов, 109/л Бактерицидная активность лейкоцитов НСТ-тест спонтанный, % НСТ-тест стимулированный, % Периоды обследования от начала заболевания 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=35) 2 (n=35) 3 (n=45) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% 92,55 88,22 95,40 92,80 89,30 95,10 92,55 89,22 94,9 4,43(3) 3,79 5,33 3,67 2,94 4,18 3,45 2,72 3,82 81,55 73,32 85,85 82,10 74,20 91,10 79,55 74,55 86,32 0,26(2) 0,20 0,37 0,36(1) 0,26 0,43 0,28 0,22 0,39 33,45 28,82 42,37 38,00(3) 30,40 45,70 33,5 22,97 39,7 11,50(3) 6,25 18,00 15,00(3) 8,00 18,00 4 3 6 17,00(3) 8,00 35,00 20,00(3) 13,00 25,00 8 5 12 Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 Лимфопения в остром периоде МФ КЭ у взрослых 19-45 лет сопровождалась снижением абсолютного содержания Т-лимфоцитов, Т-хелперов и естественных киллеров (1-10 сутки). С первой декады заболевания увеличивалось относительное и абсолютное содержание активированных Т-лимфоцитов. Содержание основных субпопуляций CD4+ Т-эффекторов в остром периоде МФ КЭ у взрослых пациентов не характеризовалось значимым изменением относительного и абсолютного содержания Th1 лимфоцитов. В 1-10 сутки происходило транзиторное снижение абсолютного содержания TNF-α-положительных Т-хелперов. Количество IL-2-положительных CD3+CD4+ лимфоцитов оставалось сниженным на протяжении всего периода обследования. Относительное и абсолютное содержание Th2 лимфоцитов было повышено на протяжении 20 суток от начала заболевания. Численность Tс1 лимфоцитов при МФ КЭ у взрослых до 45 лет значимо не изменялась. Количество Tc2 лимфоцитов 235 увеличивалось с первой декады заболевания до конца периода обследования (таблица 7.4). Таблица 7.4 - Содержание Т-эффекторов при менингеальной форме клещевого энцефалита у взрослых пациентов (19-45 лет) в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Показатель Периоды обследования от начала заболевания 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=35) 2 (n=35) 3 (n=45) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% СD3+IFN-+ , % 20,50 13,25 23,70 14,10 11,85 22,60 18,28 12,51 21,33 СD3+IFN-+, 106/л 267,85 170,92 475,06 332,36 235,15 429,32 318,42 213,13 434,02 СD3+TNF-+ , % 34,60 20,00 49,40 29,00(3) 22,50 39,70 37,10 31,57 45,65 482,39(3) 335,65 760,89 560,05 411,72 783,21 736,67 521,13 942,19 25,40 8,30 32,15 13,50(3) 8,70 27,95 27,50 21,82 34,45 321,90(3) 168,44 548,30 269,65(3) 151,28 596,16 522,62 328,97 650,82 СD3+IL-4+, % 1,50(3) 0,65 2,90 1,10(3) 0,55 2,90 0,70 0,40 1,10 СD3+IL-4+ , 106/л 23,96(3) 7,94 60,39 29,74(3) 10,33 62,10 12,73 5,86 21,00 СD3+IL-17А+, % 0,80 0,60 1,37 0,55 0,20 1,05 0,50 0,30 0,70 СD3+IL-17A+ , 106/л 11,85 7,35 16,07 8,19 3,15 17,13 10,61 5,49 13,17 СD3+CD4+IFN-+ , % 9,18 5,92 12,69 8,20 6,69 13,60 8,76 6,84 10,13 СD3+CD4+IFN-+, 106/л 110,57 86,87 242,33 184,04 144,60 270,73 171,66 116,25 204,57 СD3+CD4+TNF-+ , % 22,20 15,91 35,75 19,34 16,63 32,49 27,15 22,45 32,71 СD3 CD4 TNF- , 106/л 357,78(3) 264,27 570,67 424,19 327,90 597,16 547,29 373,86 646,93 СD3+CD4+IL-2+ , % 19,60 6,77 27,82 12,56(3) 6,85 24,97 22,50 17,15 29,69 262,97(3) 138,12 464,46 251,56(3) 136,00 460,82 429,68 274,81 567,83 СD3+CD4+IL-4+, % 0,80(3) 0,33 1,83 0,71(3) 0,30 1,59 0,31 0,14 0,55 СD3+CD4+IL-4+ , 106/л 17,22(3) 4,21 37,49 20,20(3) 6,11 35,22 5,73 2,20 10,50 СD3+CD4+IL-17А+, % 0,47 0,17 0,70 0,30 0,17 0,41 0,23 0,09 0,32 СD3 CD4 IL1-7A , 106/л 6,39 2,10 8,49 4,75 3,33 5,73 4,59 2,40 5,82 СD3+CD8+IFN-+ , % 8,66 5,61 10,26 6,50 4,54 9,17 6,96 4,32 10,28 СD3+CD8+IFN-+, 106/л 105,53 66,72 204,56 137,00 110,78 180,12 134,86 86,42 199,35 СD3+CD8+TNF-+ , % 8,15 7,22 10,39 6,70 5,06 11,24 7,30 4,50 9,01 СD3 CD8 TNF- , 106/л 147,88 95,27 207,80 150,37 107,62 228,42 131,75 93,43 181,84 СD3+CD8+IL-2+ , % 2,27 1,23 3,44 1,16 0,85 3,36 2,05 1,33 3,07 СD3+CD8+IL-2+,106/л 29,48 21,49 64,21 35,05 17,03 64,67 39,68 25,41 63,22 СD3+CD8+IL-4+, % 0,60(3) 0,20 1,18 0,63(3) 0,10 1,03 0,08 0,06 0,154 СD3+CD8+IL-4+ , 106/л 9,11(3) 2,81 23,00 13,76(3) 1,83 25,60 1,81 0,87 3,23 СD3+CD8+IL-17А+, % 0,10 0,09 0,14 0,05 0,00 0,17 0,08 0,07 0,12 СD3 CD8 IL-17A , 106/л 1,45 1,18 2,54 0,82 0,00 3,17 1,48 1,11 2,79 СD3+TNF-+ , 106/л СD3+IL-2+ , % СD3+IL-2+,106/л + + + СD3+CD4+IL-2+,106/л + + + + + + + + + Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 236 Абсолютное содержание Th17 и Tnc17 лимфоцитов у взрослых пациентов с МФ КЭ значимо не изменялось на протяжении всего периода наблюдения. В периферической крови регистрировали увеличение концентрации IFN- и IL-4 на протяжении всего периода обследования. Концентрация TNF-и IL-6 также увеличивалась с 1-10 суток до конца обследования (таблица 7.5). Таблица 7.5 - Содержание гуморальных факторов иммунитета в периферической крови при менингеальной форме клещевого энцефалита у взрослых пациентов (19-45 лет) в динамике острого периода заболевания, Ме (LQ-UQ) Показатель Периоды обследования от начала заболевания 1-10 сутки 11-20 сутки группа сравнения 1 (n=35) 2 (n=35) 3 (n=45) медиана 25% 75% медиана 25% 75% медиана 25% 75% IgA, г/л 1,60 1,30 2,12 1,80 1,40 2,70 2,15 1,4 3,02 IgM, г/л 1,50 1,00 2,02 2,00(3) 1,40 2,50 1,6 0,92 2,1 IgG, г/л 10,15(3) 7,95 13,12 9,30(3) 8,00 11,40 12,7 9,85 15,3 ЦИК, ед. 40,5(3) 20,7 54 41(3) 26 74 23 20 35 TNF-, пг/мл 2,09(3) 0,65 13,39 5,78(3) 0,70 33,23 1,41 0,34 2,68 IFN-, пг/мл 9,00(3) 4,24 13,18 12,80(3) 2,07 14,91 3,41 0,27 7,48 IL-1, пг/мл 1,89 0,71 3,69 0,58 0,01 3,39 1,71 0,88 2,58 IL-6, пг/мл 11,94(3) 4,99 14,41 3,35(3) 0,00 8,85 0 0 1,96 IL-8, пг/мл 7,14 2,30 17,17 3,56 0,00 6,29 4,59 1,79 8,55 IL-4, пг/мл 0,42(3) 0,00 2,41 1,89(3) 0,24 3,45 0 0 0,75 IL-10, пг/мл 7,49 6,33 7,92 7,30 4,35 11,05 9,58 5,57 13,73 IL-2, пг/мл 4,52 0,17 6,66 5,70 0,00 7,53 4,11 1,02 5,75 IL-17, пг/мл 3,10(3) 2,51 3,99 2,03(3) 1,50 2,45 7,5 2,61 10,55 IL-18, пг/мл 116,05 76,94 167,08 103,83 68,25 175,85 96,16 68,77 125,2 Примечание: значения в скобках указывают на значимые различия в группах, p<0,05 Содержание общих иммуноглобулинов IgA класса не отличалось от показателя в группе сравнения. Уровень общих IgM антител увеличивался на 11-20 сутки от начала заболевания. Содержание общих иммуноглобулинов IgG класса на протяжении всего периода обследования было ниже уровня в группе сравнения. 237 Содержание ЦИК было повышено по отношению к группе сравнения в течение всего периода наблюдения. Сравнительная клинико-иммунологическая характеристика менингеальной формы клещевого энцефалита и энтеровирусной инфекции с серозным менингитом Сравнительный анализ данных клинического обследования взрослых пациентов с ЭВИ с СМ и МФ КЭ позволил установить общие закономерности клинического течения и клинические особенности менингитов, обусловленных НПЭВ и TBEV (таблица 7.6). Таблица 7.6 - Сравнительная клиническая характеристика менингеальной формы клещевого энцефалита и энтеровирусной инфекции с серозным менингитом Клинические симптомы Длительность заболевания Продолжительность госпитализации Подъем температуры Волнообразная лихорадка Головная боль Рвота Менингеальные симптомы, в т.ч.: - ригидность затылочных мышц - симптом Кернига - симптомы Брудзинского Полный менингеальный комплекс Диссоциированный менингеальный комплекс Очаговые симптомы (гиперрефлексия, анизорефлексия, атаксия, нистагм и т.г.) Катаральные явления -насморк -кашель Увеличение лимфоузлов Кишечные дисфункции ЭВИ с СМ (n=25) Частота Продолжительность (%) Me (Q25%-Q75%) Частота (%) 17,5 (16-21,25) 15 (12,75-17,25) 100,0 16,0 100,0 36,0 100,0 3 (2-5) 100,0 76,0 8,0 8,0 МФ КЭ (n=35) Продолжительность Me (Q25%-Q75%) 30 (25,5-36) 25 (22-29,5) р=0,000 7 (5-10) р=0,000 100,0 28,6 100,0 28,6 82,9 6,5 (3,5-9) 2,5 (1-5) 77,1 5 (2-7) 3 (1,75-4,25) 1 (1-1) 60,0 5,7 5,7 5 (2-6) 1 (1-1) 4 (3-6) 92,0 77,1 0,0 54,3 20,0 12,0 8,0 4,0 8,0 8,6 0 8,6 0 5,7 р р=0,000 2=2,69 р=0,009 2=3,22 р=0,002 р=0,000 238 В целом, для ЭВИ с СМ и МФ КЭ вне зависимости от типа возбудителя характерно острое начало с подъемом температуры, головной болью и рвотой. Часто наблюдали двухволновое течение заболевания. К особенностям клинического течения МФ КЭ относятся: более длительный период подъема температуры; реже, чем при ЭВИ с СМ регистрируемые менингеальные симптомы, в частности ригидность затылочных мышц. Однако, МФ КЭ чаще, чем ЭВИ с СМ, сопровождалась преходящими очаговыми симптомами, такими как сухожильная гиперрефлексия, анизорефлексия, атаксия и т.д. В целом, клиническое течение МФ КЭ можно характеризовать, как более тяжелое и продолжительное с более длительным периодом заболевания и госпитализации. Сравнительный анализ данных иммунологического обследования взрослых пациентов с ЭВИ с СМ и МФ КЭ показал, что ряд иммунологических феноменов, наблюдаемых при энтеровирусных менингитах и МФ КЭ, имеют однонаправленный характер и являются универсальной реакцией на вирусную инфекцию с вовлечением структур ЦНС. МФ КЭ и ЭВИ с СМ у взрослых сопровождалась повышением показателей активности НАДФ-Н2-оксидазной системы нейтрофилов, а также бактерицидной активности лейкоцитов. В остром периоде при обоих видах заболевания у взрослых пациентов происходило относительное и снижение абсолютное содержания содержание NK клеток. В-лимфоцитов. Увеличивалось Кроме того, зарегистрировано в обоих случаях увеличение концентрации IgM антител на 11-20 сутки с увеличением содержания ЦИК в периферической крови. Что касается численности эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов, то при энтеровирусных и флавивирусных менингитах происходило снижение содержания в периферической крови взрослых пациентов IL-2+CD4+ Т-лимфоцитов в первую декаду заболевания. При этом, количество Th2 и Tc2 лимфоцитов увеличивалось с первых суток от начала заболевания до конца периода обследования. В периферической крови при обеих инфекциях регистрировалось значимое увеличение концентрации IFN- и IL-6. Сравнительный анализ данных иммунологического обследования позволил также сформулировать и основные особенности, отличающие МФ КЭ и ЭВИ с СМ. Так, в 1-10 сутки от начала заболевания при флавивирусных менингитах в периферической крови содержание полиморфноядерных лейкоцитов значимо 239 превышало их численность при ЭВИ с СМ. В тоже время относительное и абсолютное содержание лимфоцитов при МФ КЭ было существенно ниже, чем при ЭВИ с СМ. Увеличение содержания гранулоцитов в периферической крови пациентов с МФ КЭ сопровождалось и повышением абсолютной поглотительной активности нейтрофилов. В свою очередь энтеровирусные менингиты в 1-10 сутки от начала заболевания характеризовались более высоким содержанием в периферической крови ЦИК и IL-18. Отличия в содержании эффекторных субпопуляций лимфоцитов выявлены во вторую декаду заболевания. По сравнению с ЭВИ с СМ при МФ КЭ на 11-20 сутки от начала заболевания повышено абсолютное содержание Т-лимфоцитов за счет цитотоксической субпопуляции. Кроме того, выше, чем при ЭВИ с СМ при МФ КЭ была численность IFN-+, TNF-α+ и IL-2+ Т-хелперов и IFN-+, а также TNF-α+ Тцитотоксических субпопуляций (рисунок 7.1). 260 700 а 600 # МФ КЭ (11-20 сутки) ЭВИ с СМ (11-20 сутки) 240 б 220 200 # 500 # МФ КЭ (11-20 сутки) ЭВИ с СМ (11-20 сутки) # 180 160 # 300 140 106/л 106/л 400 120 100 80 200 60 100 40 20 0 0 CD3+CD4+IFN-y+ CD3+CD4+IL-2+ CD3+CD4+TNF-a+ CD3+CD4+IL-4+ CD3+CD8+IFN-y+ CD3+CD8+IL-2+ CD3+CD8+TNF-a+ CD3+CD8+IL-4+ Рисунок 7.1 - Абсолютное содержание IFN--, TNF-α-, IL-2- и IL-4положительных: CD3+CD4+(а); CD3+CD8+(б) лимфоцитов при менингеальной форме клещевого энцефалита и энтеровирусной инфекции с серозным менингитом, (Ме, LQUQ). Примечание: # – р<0,05 в сравниваемых группах 240 7.2. Сравнительная характеристика иммунологических показателей цереброспинальной жидкости при менингеальной форме клещевого энцефалита и энтеровирусной инфекции с серозным менингитом Клеточный состав цереброспинальной жидкости при менингеальной форме клещевого энцефалита и энтеровирусной инфекции с серозным менингитом. Исследование ЦСЖ в остром периоде МФ КЭ и ЭВИ с СМ продемонстрировало увеличение содержания лейкоцитов в ЦСЖ в 1-10 сутки от начала заболевания. Плеоцитоз составил 58,0 (20,1-153,6)*106/л и 62,5 (25-101)*106/л при МФ КЭ и ЭВИ с СМ, соответственно. Клеточный состав ЦСЖ при обеих формах заболевания представлен в основном лимфоцитами (КЭ- 31,9(13,8-90,2) кл/мкл; ЭВИ- 40,3(18,052,3) кл/мкл) и, в меньшей степени, нейтрофилами (КЭ- 15,0(5,5-68,1) кл/мкл; ЭВИ10,7 (2,6-29,8) кл/мкл). Субпопуляционный состав лимфоцитов ЦСЖ при МФ КЭ и ЭВИ с СМ практически не отличался, за исключением более высокого относительного содержания Т-хелперных лимфоцитов при ЭВИ с СМ (рисунок 7.2). 100 МФ КЭ (ЦСЖ) ЭВИ с СМ (ЦСЖ) МФ КЭ (периф. кровь) ЭВИ с СМ (периф.кровь) 80 # % 60 40 20 0 CD3+ CD3+CD4+ CD19+ CD3+HLA-DR+ CD3+CD8+ CD3-CD16+56+ Рисунок 7.2 - Относительное содержание отдельных субпопуляций лимфоцитов в цереброспинальной жидкости и периферической крови при менингеальной форме клещевого энцефалита и энтеровирусной инфекции с серозным менингитом, (Ме, LQUQ). Примечание: # – р<0,05 в сравниваемых группах И при энтеровирусных, и флавивирусных менингитах в 1-10 сутки от начала заболевания лимфоциты в ЦСЖ представлены в основном Т-клетками. В свою 241 очередь, большую часть Т-лимфоцитов в ЦСЖ составляли Т-хелперы (КЭ- 60,0(44,863,8)%; ЭВИ- 72,8 (62,2-80,4) %). Относительное содержание Т-хелперов при обеих формах заболевания было выше данного показателя в периферической крови. Содержание В-клеток при ЭВИ с СМ и МФ КЭ в ЦСЖ резко снижено по сравнению с их уровнем в периферической крови. Относительное содержание NK в ЦСЖ в 1-10 сутки от начала заболевания значимо не отличалось от показателя в периферической крови в этот же период обследования (рисунок 7.2). Абсолютное содержание отдельных субпопуляций лимфоцитов в ЦСЖ при МФ КЭ и ЭВИ с СМ значимо не отличалось. Содержание IFN-, TNF-, IL-2 и IL-4-экспрессирующих Т-лимфоцитов в цереброспинальной жидкости. Относительное содержание IFN-+ TNF-+ и IL-2+ Тхелперов в ЦСЖ при МФ КЭ в 1-10 сутки от начала заболевания было значимо ниже их содержания в периферической крови, в то время как относительное количество IL4+ Т-хелперов в ЦСЖ соответствовало показателю в периферической крови. В целом, количество TNF-+ и IFN-+ Т-хелперов превышало в ЦСЖ содержание IL-2+ и IL-4+ CD3+CD4+ лимфоцитов (рисунок 7.3). 18 16 10 а б МФ КЭ ЭВИ с СМ МФ КЭ ЭВИ с СМ 8 14 12 6 # % % 10 8 4 6 # 2 4 2 0 0 CD3+CD4+IFN-y+ CD3+CD4+IL-2+ CD3+CD4+TNF-a+ CD3+CD4+IL-4+ Рисунок 7.3 - CD3+CD8+IFN-y+ CD3+CD8+IL-2+ CD3+CD8+TNF-a+ CD3+CD8+IL-4+ Абсолютное содержание IFN--, TNF-α-, IL-2- и IL-4- положительных: CD3+CD4+(а); CD3+CD8+(б) лимфоцитов при менингеальной форме клещевого энцефалита и энтеровирусной инфекции с серозным менингитом, (Ме, LQUQ). Примечание: # – р<0,05 в сравниваемых группах 242 Наиболее высокое относительное содержание среди цитотоксических Тлимфоцитов при МФ КЭ характеризовало в первую декаду заболевания субпопуляцию CD3+CD8+TNF-+ клеток. Их доля в ЦСЖ, также как и относительное содержание IL-2+ и IL-4+ цитотоксических Т-лимфоцитов, значимо не отличалась от содержания в периферической крови, в то время как содержание Тс1 субпопуляции было существенно ниже по сравнению с показателем периферической крови в этот же период обследования. Из всех показателей, характеризующих состав CD4+ и CD8+Тсубпопуляций в ЦСЖ, при энтеровирусных и флавивирусных менингитах значимо отличалось содержание CD3+CD8+TNF-+ и CD3+CD8+IL-4+ Т-лимфоцитов, превышающее при МФ КЭ значения, полученные при ЭВИ с СМ. Содержание про- и противовоспалительных цитокинов в цереброспинальной жидкости. В течение первой декады острого периода ЭВИ с СМ и МФ КЭ в ЦСЖ по сравнению с образцами периферической крови, взятой в этот же период обследования, вне зависимости от возбудителя было значимо повышено содержание таких цитокинов, как IFN-, IL-2, IL-4, IL-6 и IL-8 (таблица 7.7). Таблица 7.7 - Содержание про- и противовоспалительных цитокинов в цереброспинальной жидкости при менингеальной форме клещевого энцефалита и энтеровирусной инфекции с серозным менингитом, Ме (LQ-UQ) Показатель Клещевой энцефалит n=12 Энтеровирусная инфекция n=11 0,0 (0,0-1,6) 0,1 (0,0-2,1) IFN-, пг/мл 24,9 (15,1-207,8) 34,3 (25,1-45,2) IL-1, пг/мл IL-6, пг/мл 4,7 (4,2-8,2) 3,2 (2,5-4,0) 493,6 (309,2-584,7) 599,7 (428,0-810,9) IL-8, пг/мл 113,4 (56,8-199,3) * 366,6 (128,1-519,0) * IL-4, пг/мл 16,2 (11,1-18,9) 13,4 (10,3-16,7) IL-2, пг/мл 19,9 (18,9-20,7) 19,2 (17,7-20,3) 5,2 (3,9-5,8) 4,8 (3,3-6,8) 19,9 (14,6-46,9) 15,5 (9,5-21,6) 0,0 (0,0-0,9) н.д. 2,9 (2,3-3,8) 2,8 (2,7-7,2) TNF-, пг/мл IL-17, пг/мл IL-18, пг/мл IFN-, пг/мл IL-10, пг/мл Примечание: значения, выделенные шрифтом, или , имеют значимые различия по сравнению с показателями в периферической крови, p<0,05. Значения, выделенные *, имеют значимые различия в сравниваемых группах, p<0,05 243 При этом концентрация IL-8 в ЦСЖ при ЭВИ с СМ превышала уровень данного цитокина в ЦСЖ при МФ КЭ. Уровень IL-18 в ЦСЖ в обоих случаях был ниже, чем в периферической крови. Концентрация остальных цитокинов (TNF-, IFN-, IL-1, IL10, IL-17) значимо не отличалась от показателей, регистрируемых в периферической крови. 7.3. Обсуждение результатов К основным механизмам врожденного противовирусного иммунитета, которые должны обеспечивать немедленный ответ в т.ч. при флавивирусных инфекциях, относятся: синтез IFN I, провоспалительных цитокинов, NK-ответ, апоптоз и аутофагия. Однако, как и в случае энтеровирусных менингитов, при МФ КЭ не происходит значимого повышения содержания IFN- ни в периферическом кровотоке, ни в ЦСЖ. Полученные результаты можно объяснить эффективными механизмами, используемыми флавивирусами для подавления индукции IFN I. Результаты последних исследований демонстрируют, что TBEV инфекция приводит к образованию внутриклеточных мембранных везикул, которые укрывают вирусную дцРНК от распознавания, что приводит к задержке синтеза антивирусных IFN I и беспрепятственному образованию вирионов в течение более 24 часов [341]. Кроме того, для многих представителей рода флавивирусов известны механизмы подавления транскрипции IFN генов [61, 268, 269, 462], а также супрессии IFN-ответа [64, 134, 451]. Флавивирусы также могут ингибировать отдельные ISGs для того, чтобы противодействовать антивирусному ответу хозяина [115, 208, 411]. Поскольку, как и при ЭВИ с СМ, МФ КЭ сопровождается значимым повышением содержания в периферической крови и ЦСЖ IFN-, можно предположить, что для индукции IFN II при КЭ используется альтернативный задействуется в ответ на вариант TLR3 сигналинга, который вирусы (в т.ч. НПЭВ), в отношении которых не формируется выраженный IFN I ответ. В периферической крови пациентов с МФ КЭ зафиксировано повышение концентрации IL-6 и TNF-α, источником которых являются различные типы клеток, в том числе и DC. Следует отметить, что повышение концентрации данных цитокинов наблюдали и при энтеровирусных менингитах у пациентов 19-45 лет. По-видимому, 244 IL-6 и TNF-α являются универсальными компонентами воспалительной реакции, развивающейся при анализируемых типах вирусных инфекций. Повышение концентрации IL-6 и TNF-α рассматривается и как один из возможных механизмов нарушения проницаемости ГЭБ, используемых нейротропными вирусами для проникновения в ЦНС [65]. Кроме индукции интерферонового ответа и синтеза провоспалительных цитокинов, ключевым фактором, определяющим течение флавивирусной инфекции, является вирус-индуцированная активация APC, главным образом DC, принимающих участие в активации и дифференцировке Т- лимфоцитарных субпопуляций. Низкая экспрессия MHC и ко-стимуляторных молекул при КЭ снижает способность DC соответствующим образом презентировать антиген и активировать Т-клетки [290], что может обусловливать абберантный антивирусный иммунный ответ, не достаточно эффективный для клиренса вирусов. Необходимо также учитывать, что слюна клеща содержит огромное количество белков с иммуномодулирующей активностью, которые прямо могут влиять на ответ DC. У DC мышей, обработанных слюной клещей, нарушена способность к презентации антигена и Th1-поляризующие дифференцировке лимфоцитов Th2-типа [467]. свойства, что способствует Данные настоящего исследования свидетельствуют о том, что МФ КЭ сопровождается увеличением содержания Th2 и Tc2 субпопуляций лимфоцитов на протяжении всего острого периода заболевания. Кроме того, при МФ КЭ происходит значимое увеличение содержания IL-4 как в сыворотке крови, так и в ЦСЖ. Повышенное содержание Th2 и Tc2 субпопуляций в остром периоде заболевания наблюдали также при ЭВИ с СМ, что связано с особой ролью гуморального иммунного ответа при ЭВИ. Не менее важную роль гуморальный иммунный ответ играет в контроле флавивирусной инфекции и диссеминации вирусов. Пассивный перенос поликлональных или моноклональных антител защищает мышей от летального поражения флавивирусами [125]. Напротив, мыши, лишенные В-лимфоцитов, чрезвычайно уязвимы для флавивирусов [125]. При менингитах как энтеровирусной, так и флавивирусной этиологии зарегистрировано увеличение относительного и абсолютного содержания В-лимфоцитов. Кроме того, отмечено в обоих случаях увеличение концентрации IgM антител на 11-20 сутки с увеличением содержания ЦИК в периферической крови. Однако, гуморальный иммунный ответ, индуцированный флавивирусами, также может наблюдаться при 245 манифестации тяжелых флавивирусных заболеваний. Таким образом, флавивирусы безусловно обладают механизмами, позволяющими модулировать гуморальный иммунный ответ в организме хозяина, такими как антигенные вариации [74, 387], антител-зависимое усиление (ADE) инфекции [311, 430] и частичное созревание предшественника мембранного белка (prM) [216, 313]. Помимо гуморального иммунного ответа для клиренса флавивирусов требуется активация адаптивного клеточного иммунитета. Результаты проведенных исследований свидетельствуют о том, что в остром периоде МФ КЭ, как и при энтеровирусных менингитах, не наблюдается значимого увеличения содержания в периферической крови Тh1 лимфоцитов. Описанный выше при характеристике энтеровирусных менингитов феномен устойчивого снижения численности в периферической крови IL-2-положительных CD3+CD4+ лимфоцитов имеет место и при МФ КЭ и, по-видимому, обусловлен универсальной реакцией перераспределения лимфоцитарных субпопуляций в результате активной миграции IL-2- экспрессирующих наивных Т-лимфоцитов и TCM в периферический лимфатические органы и органы-мишени (для TCM). Абсолютное содержание цитотоксических Тлимфоцитов, экспрессирующих IFN-, TNF-, IL-2 и IL-17A, значимо не изменяется в периферической крови пациентов в МФ КЭ на протяжении всего периода наблюдения. Однако, несмотря на отсутствие выраженного увеличения содержания Th1 и Tc1 клеток при КЭ, сравнительный анализ их содержания при флавивирусных и энтеровирусных менингитах показал, что на 11-20 сутки от начала заболевания их численность при КЭ была выше, чем при ЭВИ с СМ. В целом, абсолютное содержание цитотоксической субпопуляции Т-лимфоцитов в периферическом кровотоке при МФ КЭ во вторую декаду заболевания было выше, чем при энтеровирусных менингитах. Кроме экспрессирующих TNF- и IL-4, того, количество CD8+Т-лимфоцитов, в ЦСЖ при МФ КЭ значимо превышало их содержание у пациентов с энтеровирусными менингитами, у которых, в свою очередь, наблюдалось более высокое относительное содержание Т-хелперных лимфоцитов. Мишенью для цитотоксических Т-лимфоцитов в ЦНС являются TBEVинфицированные клетки. Так, гранзим-В-положительные лимфоциты были обнаружены рядом с TBEV-инфицированными нейронами [156]. Результаты исследования тканей мозга погибших от КЭ людей и эксперименты на мышиных 246 моделях свидетельствуют о том, что TBEV-связанная иммунопатология в основном определяется функционированием цитотоксических Т-лимфоцитов [156, 157, 376]. Роль прямого цитотоксическим поражения нейронов TBEV и апоптоза, которые наряду с действием CD8+Т-лимфоцитов принимают участие в формировании нейропатологии, нуждается в дальнейшем изучении. Несмотря на то, что доля мигрирующих в ЦНС при КЭ Т-хелперов ниже, чем при ЭВИ с СМ, именно Th1 лимфоциты, экспрессирующие IFN- и TNF-, составляют абсолютное большинство Т-лимфоцитов в ЦСЖ. Таким образом, TBEV инфекция ЦНС приводит к миграции в ЦСЖ Т-лимфоцитов, что в свою очередь становится причиной иммунопатологических реакций, обусловленных действием, в том числе, цитотоксических Т-лимфоцитов. С другой стороны, участие Th1, Th2, Tc1 и Tc2 лимфоцитов в клиренсе вирусов в пределах ЦНС, по-видимому, играет гораздо большую роль, чем гуморальный противовирусный ответ, поскольку высокие титры TBEV-специфических IgG в ЦСЖ не влияют на тяжесть заболевания [217]. Материалы данной главы представлены в следующих публикациях: 1. Бейкин, Я.Б. Особенности цитокиновой регуляции при клещевом энцефалите и Лайм-боррелиозе / Я.Б. Бейкин, Ю.Г. Лагерева, М.Г. Топоркова, Л.Г. Беседина, А.Ю. Дружинина // Вестник РАМН.- 2007.- №9.-С.16-19. 2. Образцова, Р.Г. и др. Патоморфоз острого клещевого энцефалита на Среднем Урале (глава «Иммунология клещевого энцефалита» Я.Б. Бейкин, Ю.Г. Лагерева).Екатеринбург: Изд-во УрГСХА.-2008.-228 с. 3. Лагерева, Ю.Г. Некоторые аспекты иммунопатогенеза менингеальной формы клещевого энцефалита / Ю.Г. Лагерева, Я.Б. Бейкин, О.М.Оленькова, М.Г. Топоркова // Лабораторная диагностика в клинике инфекционной и соматической патологии: сб.науч.трудов/ под ред. Я.Б. Бейкина и др.- Екатеринбург: Из-во АМБ.-2010.-С.46-58. 4. Лагерева, Ю.Г. Исследование клеточных и гуморальных факторов иммунитета в периферической крови и цереброспинальной жидкости при менингеальной форме клещевого энцефалита / Ю.Г. Лагерева, Я.Б. Бейкин, М.Г. Топоркова // Вестник Уральской государственной медицинской академии.-2010.-№21.-С.101-109. 247 ЗАКЛЮЧЕНИЕ Концепция иммунопатогенеза энтеровирусных менингитов Одним из самых распространенных подходов к концептуализации патогенеза вирусных заболеваний является представление их в виде последовательности отдельных стадий, отражающих основные этапы распространения вируса в организме хозяина и механизмы, участвующие в его ограничении [233]. Роль цитокинового и биохимического дисбаланса в ЦСЖ в патогенезе нейроинфекций представлена в работах Скрипченко Н.В., Алексеевой Л.А., Железниковой Г.Ф и Мазаевой Е.М. [1, 10, 22]. Двухфазовая модель, предполагающая параллельно развивающиеся системную воспалительную реакцию и локальный иммунный ответ, предложена в качестве концепции патогенеза энтеровирусных менингитов у детей Хамановой Ю.Б. [48]. В данном исследовании впервые изучена роль в иммунопатогенезе ЭВИ с СМ основных эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов с позиций возрастных, ассоциированных с полом и полиморфизмом HLA особенностей их дифференцировки. Обобщая результаты собственных исследований и современные представления о взаимодействии НПЭВ с иммунной системой хозяина, имунопатогенез ЭВИ с СМ может быть представлен следующим образом. Первичными клетками-мишенями для НПЭВ при фекально-оральном (основном) типе инфицирования являются эпителиоциты, DC и резидентные макрофаги слизистой желудочно-кишечного тракта (ЖКТ). НПЭВ используют разнообразные рецепторы и механизмы проникновения в клетку. В частности, EV 71 прикрепляется к сиалилированным гликанам, гликопротеиновому лиганду-1 P селектина и скавенджер рецептору B2 [330]. CVB используют для проникновения в клетку фактор ускорения распада (DAF) и рецептор для Coxsackie- и аденовирусов (CAR) в зависимости от типа клетки-мишени. Несомненно, экспрессия рецепторов на потенциальных клетках-мишенях является первым барьером на пути вируса. Врожденный иммунный ответ начинается с распознавания вируса паттернраспознающими рецепторами. НПЭВ активируют определенные сенсоры, включая TLR3, TLR4, RIG-I и MDA5. TLR4 экспрессируются на клеточной поверхности и участвуют в распознавании некоторых вирусов, в частности доказано, что TLR4 на 248 клетках человеческой поджелудочной железы взаимодействуют с CVB4 [427]. TLR3 расположены на мембране эндосом или на плазматической мембране и распознают дцРНК, которая образуется цитоплазматическим сенсорам в ходе EV репликации относятся всех РНК вирусов. DExD/H-box-содержащие К РНК хеликазы, такие как RIG-I и MDA5. TLR-3, RIG-1 и MDA5 – важнейшие индукторы IFN I ответа. TLR-3 индуцируют продукцию IFN I путем активации транскрипционных факторов Interferon Regulatory Factor 3 (IRF3), NF-κB и AP-I через адаптерный белок TIR-домен-содержащий адаптер, индуцирующий интерферон β (TRIF) [292, 459]. RIG-I и MDA-5 взаимодействуют с адаптерной молекулой IPS-1 (стимулятор промотора IFN-p) через CARD (caspase recruitment domains) домены. IPS1 передает активационный сигнал киназам, которые в свою очередь активируют IRF-3 и другие транскрипционные факторы, участвующие в индукции IFN I [223]. Образовавшиеся IFN I связываются с рецепторами либо на синтезировавших их клетках, или на соседних клетках, что приводит к индукции транскрипции антивирусных микроРНК и IFN Stimulated Genes (ISGs) JAK/STAT путем. В свою очередь, белки, синтезируемые НПЭВ, контр-реагируют с механизмами врожденного иммунитета [55], снижая уровень экспрессии PRRs и нарушая PRRs-опосредованные сигнальные пути [72]. В результате блокирования энтеровирусами путей индукции синтеза IFN I практически не образуется IFN-/β мРНК [326]. Однако, у врожденной системы антивирусного иммунитета существует альтернативный TLR3-IFN II вариант для защиты от энтеровирусов, ингибирующих RIG-I-MDA5-IFN I сигнальные пути. Повышение концентрации IFN-γ в периферической крови в остром периоде энтеровирусной инфекции свидетельствует об активации НПЭВ синтеза IFN II. Дополнительным механизмом, активизирующим синтез IFN-γ клетками врожденного иммунитета (NK) и дифференцирующимися в ходе адаптивного иммунного ответа Th1 и Tc1 лимфоцитами, является действие IL-18. Подобно IL-1β, IL-18 синтезируется в виде неактивного предшественника, нуждающегося в процессинге с помощью каспазы-1. Но, в отличие от IL-1β, предшественник IL-18 конститутивно присутствует практически во всех клетках организма человека и животных, в том числе эндотелиальных клетках, кератиноцитах и интестинальных эпителиальных клетках в ЖКТ, которые при ЭВИ являются источником IL-18, наряду с макрофагами и DC. Одним из возможных путей активации синтеза IL-18 является взаимодействие 249 НПЭВ с TLR4, стимулирующее протеолитическое расщепление каспазы-1 подобно механизму, описанному для респираторно-синцитиального вируса [Kurt-Jones EA, 2000]. IL-18 способен индуцировать синтез IFN-γ, действуя синергично с IL-12, повышая экспрессию IL-12Rβ2, а также STAT-независимым путем [136]. Кроме того, IL-18 проявляет характеристики других про-воспалительных цитокинов, т.е. повышает экспрессию адгезионных молекул, синтез оксида азота и продукцию хемокинов [127]. Инфекции, вызываемые различными пикорнавирусами, включая НПЭВ, существенно снижают экспрессию MHC I на поверхности клеток [107, 108], что объясняет важнейшую роль NK, по крайней мере, на мышиных моделях. Увеличение их содержания зарегистрировано в данном исследовании только у детей до 14 лет, в то время как у подростков и взрослых наблюдали снижение численности NK в периферической крови. Параллельно с осуществлением ранних реакций врожденного иммунитета DC и макрофаги мигрируют в регионарные лимфоидные органы, где представляют вирусные антигены Т-лимфоцитам и способствуют диссеминации вируса в лимфоидных образованиях, ассоциированных со слизистой ЖКТ. Таким образом, первичная репродукция энтеровирусов происходит в лимфатических образованиях слизистой оболочки рото- и носоглотки, а также тонкой кишки одновременное с индукцией адаптивного противовирусного иммунного ответа. Активная миграция наивных лимфоцитов в периферические лимфоидные органы, пролиферация и выход примированных антигеном Т-лимфоцитов из периферических лимфоидных органов в кровоток, активация внутрисосудистого роллинга и миграция в ткани-мишени, специфическое удерживание Т-лимфоцитов в тканях, апоптоз и т.д. обусловливают динамическое изменение содержания в периферической крови отдельных субпопуляций Т-лимфоцитов в острой период ЭВИ. Транзиторное снижение в периферической крови содержания Т-лимфоцитов, наблюдаемое в 1-10 сутки развития ЭВИ с СМ, обусловлено, в том числе, снижением численности IL-2экспрессирующих Т-хелперов и цитотоксических Т-лимфоцитов. Одним из возможных механизмов кратковременного снижения содержания CD3+CD4+IL-2+ и CD3+CD8+IL-2+ лимфоцитов является активная миграция наивных Т-лимфоцитов и ТCM в периферические лимфоидные органы. ТCM сохраняют экспрессию хоминговых рецепторов: L-селектина и хемокинового рецептора (ССR7) и, подобно наивным 250 клеткам, способны мигрировать в периферические лимфоидные органы в ходе формирования иммунного ответа. TCM также могут локализоваться в очагах воспаления. Кроме того, и наивные Т-лимфоциты, и ТCM в ответ на TCR-активацию синтезируют в основном IL-2 [295]. Как показали проведенные исследования, в динамике острого периода ЭВИ с СМ происходит снижение содержания в периферической крови наивных CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов, а также CD4+ и CD8+ ТCM, сопоставимое со снижением IL-2+ Т-лимфоцитов. В отличие от наивных CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов и ТCM, содержание TEFF и TEM (как CD4+, так и CD8+ фенотипа) в динамике заболевания увеличивается, достигая на 11-20 сутки от начала инфекции статистически значимой разницы по отношению к группе сравнения. Образование в динамике инфекционного процесса при энтеровирусных менингитах TEFF и TEM приводит к восстановлению общей численности лимфоцитов в периферическом кровотоке уже на 11-20 сутки от начала заболевания и сопровождается изменением содержания в периферической крови основных эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов и их соотношения. Устойчивое повышение при ЭВИ с СМ содержания Th2 и Тс2 субпопуляций во всех возрастных группах, а также тот факт, что сниженное содержание эффекторов второго типа коррелирует с уровнем гуморального ответа и характеризует иммунный ответ у носителей гаплотипа-провокатора HLA-DR1;DQ5 и у пациентов мужского пола, наиболее подверженных развитию СМ энтеровирусной этиологии, свидетельствуют о значимой роли Th2 на ранних этапах противовирусного иммунного ответа для предупреждения развития ЭВИ с СМ. Корреляция между содержанием Th2 клеток и уровнем антител в периферической крови, по-видимому, обусловлена тесной связью между образованием канонических Th2 эффекторов и IL4+TFH, непосредственно участвующих в развитии антиген-специфического гуморального иммунитета. Несмотря на то, что представления о взаимоотношениях между TFH и Th2 продолжают оставаться противоречивыми, ряд исследователей предполагает возможность дифференцировки этих клеточных субпопуляций из одних и тех же предшественников, что, в свою очередь, позволяет координировать гуморальный иммунитет в ходе противоинфекционного иммунного ответа in vivo [252, 366]. Опубликованы данные, подтверждающие, что дифференцировка TFH и Th2 происходит преимущественно вне Т-клеточных зон лимфоузлов (ЛУ), на границе с В- 251 клеточными фолликулами [252]. Наивные T клетки, находящиеся в ЛУ рядом с Вклеточными фолликулами и экспрессирующие CXCR5, mRNA IL-4, Bcl6, удерживаются в этих зонах CXCR5+ антиген-презентирующими DC и в результате активации транскрипционных сетей дифференцируются в TFH [111, 434, 475] и Th2 эффекторные субпопуляции [349]. В T-клетках, которые получают ко- стимулирующий сигнал от антиген-представляющих B-клеток, поддерживается экспрессия Bcl6 и CXCR5, в результате образуются TFH клетки [73, 103, 162], сохраняющие способность продуцировать IL-4 [229, 475]. Они участвуют в реакциях раннего антителообразования в результате образования экстра-фолликулярных короткоживущих конечно-дифференцированных антител-образующих клеток (АОК) или перемещаются в В-клеточные фолликулы, образуя популяцию фолликулярных Тхелперов герминативных центров (GCTFH), участвующих в дифференцировке Вклеток памяти. IL-4, секретируемый TFH, индуцирует клональную пролиферацию Вклеток, переключение класса синтезируемых антител на IgE, возрастание аффинности антител и т.д. [227]. Однако, IL-4+ TFH в основном сосредоточены в экстрафолликулярных областях и преобладают на начальных этапах формирования герминативных центров, что свидетельствует об активном участии IL-4+TFH в регуляции синтеза ранних антител. Их образование на начальных этапах иммунного ответа является одной из стратегий, обеспечивающих гуморальную защиту до появления высокоаффинных антител. Ранние антитела участвуют в активации механизмов врожденного и адаптивного иммунитета, фиксации комплемента, опсонизации, нейтрализации и т.д. Поэтому, продукция IL-4+TFH описана не только при паразитарных инвазиях [229, 366, 475], но и при вирусных инфекциях [474]. Исследование процессов антителообразования при ЭВИ продемонстрировало, что НПЭВ индуцируют быстрый и мощный нейтрализующий гуморальный ответ, формирование которого во многом зависит от CD4+ T-лимфоцитов [251]. Поскольку антитела играют важную роль в контроле НПЭВ, своевременная индукция антителообразования, наряду с более высоким базовым уровнем предсуществующих антител, обладающих перекрестной реактивностью, возможно, имеет решающее значение, определяющее чувствительность/резистентность в отношении развития СМ. При ЭВИ с СМ об образовании IL-4+TFH свидетельствует повышение уровня IgE в периферической крови, наиболее выраженное в первую декаду заболевания. В 252 последнее десятилетие неуклонно растет количество публикаций, свидетельствующих о существенной роли IgE в регуляции иммунного ответа, в том числе при вирусных инфекциях. В частности, установлено участие IgE в презентации антигена Т-лимфоцитам через FcRI и FcRII на APC, имеющее важнейшее значение в раннюю фазу инфекционных заболеваний [11]. Т-клетки, которые не взаимодействуют с антиген-презентирующими Влимфоцитами, утрачивают экспрессию Bcl6 и CXCR5 и дифференцируются в канонические Th2 клетки, которые покидают ЛУ и мигрируют в периферические ткани. Результатом повышения их содержания, является эозинофилия, описанная в остром периоде ЭВИ [3]. Роль канонической Th2 субпопуляции при ЭВИ с СМ нуждается в дальнейшем изучении. Так, увеличение содержания Th2 лимфоцитов при ЭВИ, в частности в остром периоде болезни HFMD (hand, foot and mouth disease), вызванной EV 71 [444], ассоциировано с более продолжительным лихорадочным периодом и длительным течением заболевания. Результаты проведенных нами исследований свидетельствуют, что повышенный уровень Th2 и Tc2 лимфоцитов, регистрируемый у заболевших ЭВИ с СМ в остром периоде и в динамике заболевания, ассоциирован с увеличением продолжительности заболевания, а также длительности регистрации основных клинических симптомов. Стимуляция индукции дифференцировки Th2 клеток одновременно может быть причиной снижения уровня образования Th1 лимфоцитов. Значимое повышение абсолютного содержания Th1 субпопуляции при ЭВИ с СМ наблюдали только у детей до 7 лет. Поскольку, как показали проведенные исследования, эффективность синтеза цитокинов Th1 типа, оцениваемая по аиСИФЦ, снижена у детей младшего возраста, наблюдаемое увеличение содержания Th1 является в какой-то мере численной компенсацией их функциональной незрелости. Поскольку Th1 клетки являются важнейшими эффекторами, участвующими в клеточных механизмах адаптивного противовирусного иммунитета, нарушение баланса дифференцировки Th1 и Tс1 субпопуляций также может быть одним из факторов, способствующих развитию ЭВИ с СМ у детей младших возрастных групп, пациентов, не имеющих в генотипе HLA-DR1;DQ5 и т.д. О важнейшей роли Th1 и Тс1 субпопуляций в иммунопатогенезе ЭВИ с СМ свидетельствуют данные, полученные при оценки корреляционных связей между уровнем данных субпопуляций в периферической 253 крови и показателями, характеризующими клиническое течение заболевания. Повышенное содержание эффекторов первого типа в первую декаду заболевания коррелирует с уменьшением длительности регистрации основных клинических симптомов, в том числе менингеальных. Содержание TNF--экспрессирующих эффекторов, в свою очередь, коррелирует с уровнем плеоцитоза и увеличением относительного содержания лимфоцитов в ЦСЖ. Тh1 и Tc1 лимфоциты играют важную роль в клиренсе НПЭВ, благодаря действию основных противовирусных клеточных механизмов: киллингу инфицированных клеток с участием перфорина и гранзима (CTL) и посредством FAS-L и TRAIL, индуцирующих каспаз-зависимый апоптоз (CD4+ Т-лимфоциты); синтезу цитокинов, обладающих противовирусным действием и т.д. С другой стороны, повышение численности Th1 субпопуляции в ходе иммунного ответа при энтеровирусных инфекциях, продемонстрированное, в частности, на модели CVB3-индуцированных миокардитов, ассоциировано с выраженностью воспалительной реакции в тканях сердца [136, 137, 148]. Повидимому, участие Т-эффекторов 1 типа в противовирусном адаптивном иммунном ответе при НПЭВ-инфекции необходимо для более эффективной элиминации вируса, предотвращает развитие хронической патологии, связанной, в том числе, с длительной персистенцией вируса, но может быть сопряжено с иммунопатологическим поражением тканей органов-мишеней в остром периоде. В целом, снижение соотношения Th1/Th2, а также Тс1/Тс2 ассоциировано с увеличеним продолжительности заболевания. Таким образом, принципиальное значение в иммунопатогенезе ЭВИ с СМ имеет баланс эффекторных субпопуляций первого и второго типа. Дифференцировка Th17 клеток также зависит от супрессивного эффекта альтернативных Т-клеточных субпопуляций. IFN-γ и IL-12, маркерные Th1 цитокины, ингибируют дифференцировку Th17 клеток [177]. В ряде исследований показано, что IL-17 может подавлять IL-12–индуцированную дифференцировку Th1 клеток [322, 424]. Именно такое развитие событий исследователи наблюдали при развитии CVB3индуцированных острых вирусных миокардитов [471]. Сниженное содержание IL-17 и продуцирующих его Т-лимфоцитарных субпопуляций у детей на фоне роста содержания Th1 и Тс1 субпопуляций, а также уровня IFN-γ в периферической крови в 254 динамике ЭВИ с СМ, свидетельствуют о возможном ингибирующем действии дифференцировки Th1 клеток на образование Th17/Tnc17. Выход вируса в кровь после репликации в эпителии и лимфатической ткани в желудочно-кишечном энтеровирусных тракте инфекциях. обусловливает Виремия первичную способствует виремию диссеминации вируса при и размножению его во многих органах и тканях: лимфатических узлах, селезенке, печени, легких, почках, поджелудочной железе, сосудистом тракте глаза, сердечной мышце и т.д. При дальнейшей диссеминации энтеровирусов в организме хозяина основными мишенями становятся ацинарные клетки поджелудочной железы, кардиомиоциты, активированные лимфоциты маргинальной зоны селезенки, инфильтрирующие нестин-положительные миелоидные клетки, пролиферирующие стволовые клетки в ЦНС (NPSCs) и незрелые нейроны. Вирус проникает в различные ткани и органы, в том числе ЦНС, либо через эндотелий мелких сосудов, либо по периферическим нервам. Несмотря на многочисленные исследования, проводимые для изучения вирусной инвазии ЦНС, многие вопросы по-прежнему остаются нерешенными. Возможно, прямое проникновение через ГЭБ происходит на ранних этапах ЭВИ, что нарушает целостность ГЭБ и позволяет следующим поколениям вирусов проникать в ЦНС независимо от экспрессии рецепторов для НПЭВ. Вторая модель предполагает распространение НПЭВ по мышечной ткани в ЦНС вдоль нервных окончаний. Этот путь был подробно описан Gromeier и Wimmer в 1998 для полиовируса как ретроградный аксональный транспорт из пораженной мышечной ткани в ЦНС [169]. Другой распространенной моделью проникновения вируса в ЦНС является использование инфицированных НПЭВ иммуноцитов, мигрирующих в ЦНС (модель «Троянского коня»). Как подтверждение этой гипотезы, получены доказательства поражения вирусом лимфоцитов и моноцитов при распространении в первичные органы мишени с максимальной репликацией CVB3 [297]. Прикрепление вирусов к белкам межклеточных контактов, таким как CAR может быть способом инфицировать мигрирующие иммуноциты, так как они осуществляют диапедез через плотные контакты. Показано, что CVB3 инфицируют нестин-положительные миелоидные клетки в ходе их инфильтрации через плотные контакты эпителиальных клеток сосудистого сплетения [412]. Воспалительные реакции при ЭВИ с СМ 255 затрагивают сосудистые сплетения, а также мягкую и паутинную оболочки, но редко вызывают паренхиматозное поражение мозга. Помимо цитопатического действия энтеровирусов повреждение нейронов и других клеточных компонентов ЦНС происходит в результате апоптоза, индуцируемого энтеровирусами [412]. Разрушение клеток приводит к нарушению функционирования сосудистого сплетения, основного органа, участвующего в продукции ЦСЖ и иммунной регуляции. Поражение сосудистых сплетений и изменение вегетативной иннервации сосудов при энтеровирусных менингитах обуславливают гиперпродукцию ЦСЖ и нарушение регуляции мозгового кровотока. Внутричерепная гипертензия и серозное воспаление способствуют как изменению венозного оттока, так и нарушению церебрального нейрометаболизма, что в совокупности обуславливает гипоксию и ишемию головного мозга [40, 41, 42]. Микроглия и астроциты – основные типы клеток, которые способны поддерживать иммунологические реакции против нейтротропных вирусов в ЦНС [89, 140]. После распознавания патогена активированная микроглия аккумулируется в местах повреждения ткани и экспрессирует гены, связанные с воспалением: гены провоспалительных цитокинов/хемокинов, энзимов, адгезионных молекул и свободных радикалов. В результате реакций врожденного иммунитета происходит также рекрутирование в ЦНС лейкоцитов и формирование той среды, которая регулирует функционирование инфильтрующих ЦНС клеток. Во время активной ЦНС-инфекции вирусные антигены могут покидать пределы ЦНС, используя афферентный лимфодренаж в шейные лимфоузлы. Антигены презентируется лимфоцитам, которые мигрируют в ЦНС, преодолевая ГЭБ, используя соответствующие хемотаксические сигналы. Кроме того, Т- и Влимфоциты первоначально активированные в региональных периферических лимфоузлах, преодолевают ГЭБ и реактивируются, взаимодействуя с антигеноммишенью, представленным локальными антиген-представляющими клетками (микроглия и астроциты) [128]. В результате комплексного использования стандартных цитологических методов и проточноцитометрического анализа ЦСЖ при ЭВИ с СМ получены данные, характеризующие особенности формирования локального иммунного ответа на энтеровирусную инфекцию ЦНС. Установлено, что наибольшей выраженности воспалительная реакция в ЦНС при ЭВИ с СМ достигает в 1-10 сутки от начала 256 заболевания. Максимальный плеоцитоз в этот период обусловлен активной миграцией в ЦНС из периферической крови клеточных компонентов как врожденного (нейтрофильные гранулоциты, моноциты, NK), так и адаптивного иммунитета (Тлимфоциты). Стимуляция клеточной миграции происходит, прежде всего, под действием цитокинов и хемокинов, синтезируемых резидентными макрофагами (микроглией) наряду с активными формами кислорода, глутаматом и металлопротеиназами, которые могут быть задействованы в нарушении целостности ГЭБ [352]. Миграции клеток воспаления через ГЭБ способствуют IL-6 и IL-8 [68, 78]. ЭВИ с СМ на ранних этапах сопровождается значительным увеличением концентрации этих цитокинов, отмеченным ранее и другими авторами [1, 39, 48, 390]. Продукция IL-6 необходима на ранних стадиях постинфекции для индукции противовирусного иммунного ответа посредством активации и привлечения иммуноцитов, однако, длительно поддерживаемый высокий уровень IL-6 может приводить к повреждению тканей и иммунопатологии [441]. К основным эффекторным функциям IL-8 относится активация и привлечение в очаг воспаления нейтрофилов. Кроме того, синтез IL-8 вносит вклад в индуцируемое вирусом действие на цитоскелет и плотные контакты, что в конечном итоге повышает трансэндотелиальную проницаемость [417]. ЭВИ с СМ не сопровождаются увеличением содержания IFN- ни в периферической крови, ни в ЦСЖ. Таким образом, развитию ЭВИ с СМ может способствовать нарушение раннего контроля вирусной репликации, в то время как концентрация IFN-, отвечающего за клиренс вирусов из ЦНС и долговременный контроль за вирусной репликацией, значимо повышена в ЦСЖ в первую декаду заболевания. В норме IFN-γ не присутствует в ЦСЖ и паренхиме мозга [441]. Повышение его концентрации в ЦСЖ всегда сопутствует тяжелому вирусному поражению ЦНС [440]. IFN-γ способствует развитию воспаления и глиоза, благодаря действию на астроциты. Воспаление, как и прямое противовирусное действие IFN-γ, способствует ограничению инфекции, но усугубляет повреждение тканей ЦНС [338]. Основным источником IFN-, в том числе в пределах ЦНС, являются NK и активированные Т-лимфоциты (Th1, Тс1). Миграция NK из периферической крови в ЦСЖ осуществляется в 1-10 сутки от начала заболевания ЭВИ с СМ, далее их уровень в ЦСЖ резко снижается. Помимо секреции антивирусных цитокинов, таких как IFN-γ, NK клетки подавляют вирусную 257 инфекцию прямым цитотоксическим действием (чаще перфорин-опосредованным), что может приводить к развитию нежелательных иммунопатологических последствий в ЦНС. По-видимому, участие NK в противовирусном иммунном ответе в ЦНС при ЭВИ с СМ ограничивается самыми ранними этапами воспалительной реакции. Наряду с NK, моноцитами и сегментоядерными нейтрофилами, в ЦСЖ на ранних этапах заболевания мигрируют лимфоциты. Несоответствие относительного содержания лимфоцитарных субпопуляций в ЦСЖ и периферической крови свидетельствует о селективной миграции в ЦНС их отдельных субпопуляций. Как показали результаты проведенных исследований, на ранних этапах ЭВИ с СМ происходит активная миграция в ЦСЖ Т-хелперов с фенотипом центральных клеток памяти, а также эффекторных Т-лимфоцитов памяти. Значительная пропорция CD4+TCM в общем пуле Т-хелперов в ЦСЖ позволяет объяснить и тот факт, что содержание IL-2-положительных Т-хелперов в ЦСЖ – одно из самых высоких (по крайней мере, из анализируемых нами цитокинов). Примечателен и тот факт, что содержание CD4+TCM (как относительное, так и абсолютное) резко снижается уже на 11-20 сутки от начала заболевания (этот феномен наблюдается и в отношении CD8+TCM), что, может быть следствием как того, что большая часть мигрирующих на ранних этапах развития заболевания в ЦНС CD4+TCM (и CD8+TCM) не являются вирусспецифическими. Известно, что TCM обладают необходимым рецепторным аппаратом для миграции не только в лимфоидные органы, но и в очаги воспаления [284]. Кроме того, трафик Т-лимфоцитов в ЦНС может происходить и антиген-независимым путем, но активация, удерживание и антивирусный иммунный ответ в ЦНС зависит от MHC-рестриктированной презентации антигена [78, 167]. Таким образом, «незаинтересованные» TCM (как CD4+, так и CD8+ фенотипа) покидают ЦНС, приводя к резкому снижению содержания данных субпопуляций лимфоцитов в ЦСЖ во вторую декаду заболевания. Кроме того, антиген-специфические TCM в результате активации могут дифференцироваться в эффекторные Т-лимфоциты памяти. В отличие от TCM относительное содержание CD4+ Т-лимфоцитов с фенотипом эффекторных Т-лимфоцитов (одно из самых высоких в ЦСЖ в 1-10 сутки от начала заболевания), а также Т-хелперов с фенотипом терминально-дифференцированных лимфоцитов не уменьшается в динамике заболевания. Напротив, более половины Тлимфоцитов в ЦСЖ на 11-20 сутки представлено CD4+TEM и CD4+TEFF 258 субпопуляциями. По-видимому, именно CD4+TEM и CD4+TEFF, относящиеся к Th1- и Th-2 типу, контролируют НПЭВ-инфекцию ЦНС. Мигрирующие в ЦНС на ранних этапах ЭВИ с СМ цитотоксические Т-лимфоциты представлены в основном CD8+ эффекторными Т-лимфоцитами/клетками памяти и CD8+ TEMRA, т.е. зрелыми цитотоксическими CD8+Т-лимфоцитами, содержащими перфорин и гранзим В, экспрессирующими FasL и продуцирующими IFN-γ и TNF-α. Роль различных субпопуляций Т-лимфоцитов в иммунопатогенезе вирусного поражения ЦНС позволил оценить сравнительный анализ содержания Т-эффекторов в периферической крови и ЦСЖ при энтеровирусных менингитах и менингеальной форме клещевого энцефалита. Для МФ КЭ наряду с общими для энтеровирусных и флавивирусных менингитов иммунологическими феноменами (повышение содержания Th2 и Tc2 лимфоцитов и активация гуморального иммунитета, отсутствие выраженного увеличения содержания Th1, Tc1, а также Th17 и Tnc17 субпопуляций Т-лимфоцитов) характерно увеличение миграции в ЦНС CD8+Тлимфоцитов, экспрессирующих TNF- и IL-4. У пациентов с ЭВИ с СМ, в свою очередь, наблюдали более высокое относительное содержание Т-хелперных лимфоцитов. В экспериментах с использованием адоптивного переноса на мышиных моделях доказано, что CD4+Т-лимфоциты ограничивают TBEV инфекцию ЦНС и играют протективную роль, благодаря синтезу IFN- и других провоспалительных цитокинов и/или стимуляции макрофаг-подобных клеток [398]. В то же время иммунопатологические реакции при КЭ обусловлены участием CD8+Т-клеток [398, 443]. Что касается протективного значения цитотоксических Т-лимфоцитов, то выводы об их роли в клиренсе вирусов, диаметрально противоположны [376, 394]. Полученные в результате проведенных исследований новые данные, расширяющие современные представления об участии в патогенезе ЭВИ с СМ отдельных эффекторных субпопуляций Т-лимфоцитов, включены в схему иммунопатогенеза энтеровирусных менингитов (рисунок 8). Перспективы дальнейшей разработки темы связаны с изучением роли HLA I- и HLA II-рестриктированного ответа на отдельные эпитопы энтеровирусов в формировании противовирусного иммунитета и иммунопатологических реакций, что имеет важнейшее значение для разработки новых подходов к специфической профилактике ЭВИ. 259 Блокирование EV путей индукции IFN I Распознавание EV PRRs (TLR3, TLR4, RIG-I, MDA5) IL-18↑ (DC, МКФ, ЭЦ) IFN-/ IFN-↑ (NK) TSLP (DC, БФ, ЭЦ) индуктор Th1 индуктор Th2 Дифференцировка TEFF TFH IL-6, TNF-↑ Миграция DC и МКФ в GALT Первичная репродукция EV Виремия ЛУ, селезенка, сердце, печень, легкие, почки, поджел. железа, сос.тракт глаза ЦНС Эффективность снижена у детей до 7 лет Миграция Tnaive и TCM Сниженная эффективность ассоциирована с муж. полом, HLA-DR1;DQ5 Th17 Th1 Tc1 Tc2 Th2 (IL-17A, IL-17F, IL-21, IL-22) Индукция воспаления посредством активации клеток врожденного иммунитета ( CXCL1, CXCL2, IL-6), активация и аккумуляция НФ, ингибирующее действие на Th1 и Tc1 лимфоциты. (IFN-, TNF-) Клиренс EV (FASL, TRAILзависимый апоптоз, активация NK, макрофагов, повышение экспрессии MHC, иммунопатолог. реакции (IFN-, TNF-) Клиренс EV (FAS-L, TRAIL-зависимый апоптоз, перфорингранзимовый механизм, активация NK, макрофагов, повышение экспрессии MHC, иммунопатолог. реакции (IL-4, IL-5 и т.д.) Перфорингранзимовый механизм цитотоксичности и аналогичные Th2-эффекторные функции. (IL-4, IL-5, IL-13) Стимуляция дифф-ки ЦТЛ, альтер. активация макрофагов, экспрессии MHCII, активация ЭФ, бокалов. клеток, восстановл. тканей, ингибирующее действие на Th1 и Tc1 лимфоциты. Дифференцировка в TEМ Цитопатическое действие EV, апоптоз IL-4 В-лф Активация EV PRRs (микроглия, астроциты) IL-6, IL8↑ Активация и привлечение иммуноцитов, повышение прониц. ГЭБ, иммунопат. реакции IgM IgA IgG IgE В-лф IgM IgE ЦИК Нейтрализация EV, клиренс EV, индукция аллергических реакций Экссудативное серозное воспаление с участием мигрирующих в ЦСЖ НФ, МЦ, NK, Т-лимфоцитов и резидентных ИКК, затрагивающее мягкую и паутинную оболочки, приводит к нарушению функционирования сосудистого сплетения и обуславливает гиперпродукцию ЦСЖ и нарушение регуляции мозгового кровотока. Параллельно происходит клиренс EVs с участием TEM и TEFF Th1-, Th2и Tc1-типа, а также CD8+ TEMRA. Рисунок 8 - Схема иммунопатогенеза энтеровирусной инфекции с серозным менингитом 260 ВЫВОДЫ 1. Установлены возрастные закономерности изменения содержания основных субпопуляций Т-эффекторов/клеток памяти: на 7-12 месяце жизни у детей наблюдается преимущественная поляризация дифференцировки Т-лимфоцитов по пути Th2 (Tc2) и Th17 (Tnc17) и максимальное содержание Treg клеток. Сниженная эффективность экспрессии цитокинов Th1(Тс1)-типа характеризует детей младших возрастных групп (до 7 лет). Увеличение относительного содержания Th1 и Тс1 субпопуляций происходит непосредственно связано в логарифмической с формированием зависимости пула от возраста Т-лимфоцитов и памяти. Формирование базовых ассоциированных с полом различий в количественном содержании Th1 и Th2 субпопуляций Т-эффекторов происходит параллельно с изменением концентрации половых гормонов. 2. При энтеровирусной инфекции с серозным менингитом происходит снижение содержания в периферической крови наивных CD4+ и CD8+ Т-лимфоцитов, а также CD4+ и CD8+ центральных Т-лимфоцитов памяти. Миграция соответствующих субпопуляций в органы-мишени (в т.ч. центральную нервную систему) представляет собой один из механизмов транзиторной Т-лимфопении в остром периоде заболевания. 3. Энтеровирусные инфекции с серозным менингитом в острый период заболевания сопровождаются увеличением содержания в периферической крови CD4+ и CD8+ эффекторных Т-лимфоцитов, в т.ч. эффекторных клеток памяти и терминально-дифференцированных CD8+ Т-эффекторов памяти. Выраженное повышение содержания субпопуляций Тh1 и Tc1 эффекторов на фоне снижения уровня Th17 лимфоцитов характерно только для детей до 7 лет. Повышение численности Th2 и Тс2 субпопуляций – универсальный механизм, характеризующий противовирусный иммунный ответ энтеровирусной инфекции с серозным менингитом в возрастных группах от 1 до 45 лет. 4. Соотношение эффекторных субпопуляций первого и второго типа коррелирует с клиническим течением заболевания и выраженностью воспалительной реакции в центральной нервной системе. Снижение соотношения Th1/Th2, а также Тс1/Тс2 261 лимфоцитов ассоциировано с увеличением степени выраженности и продолжительности основных клинических симптомов энтеровирусной инфекции с серозным менингитом, а также повышением уровня плеоцитоза в цереброспинальной жидкости. 5. Возрастные особенности динамики и уровня дифференцировки Т- эффекторов/клеток памяти при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом в большей степени определяют содержание субпопуляций CD4+ и CD8+ Т-эффекторов, чем серотип возбудителя (CVB1-5, ECHO11, ECHO30). Выявлены ассоциированные с полом особенности реакций врожденного 6. и адаптивного иммунитета при энтеровирусной инфекции с серозным менингитом: у пациентов мужского пола – увеличение содержания и активация клеточных компонентов иммунитета, обладающих цитотоксическим и фагоцитарным потенциалом (естественных киллеров, моноцитов, нейтрофильных гранулоцитов, Th1 и Тс1 эффекторных субпопуляций). Пациенток с серозными менингитами энтеровирусной этиологии характеризуют более высокие уровни показателей гуморального иммунного ответа: содержание В-лимфоцитов, циркулирующих иммунных комплексов, а также антител, IgM Th2 (Тс2) субпопуляций лимфоцитов. 7. HLA-DRB1*01;DQA1*01:01;DQB1*05:01 гаплотип ассоциирован с предрасположенностью к развитию серозных менингитов энтеровирусной этиологии. Пациентов-носителей HLA-DRB1*01;DQA1*01:01;DQB1*05:01 характеризует более низкое содержание Th2 субпопуляций лимфоцитов в первую декаду заболевания, сниженный титр вирус-специфических нейтрализующих антител и уровень общих IgM антител. У пациентов, не имеющих в генотипе HLA- DRB1*01;DQA1*01:01;DQB1*05:01, ниже частота носительства HLA-A2, выше HLA-A31 и HLA-В18 и менее эффективна дифференцировка Th1 субпопуляции лимфоцитов. 8. Энтеровирусные выраженной инфекции воспалительной обусловленной увеличением с серозным реакцией менингитом сопровождаются в цереброспинальной жидкости, концентрации провоспалительных цитокинов (интерлейкин-6), интерферон- и хемокинов (интерлейкин-8), а также активной миграцией в центральную нервную систему из периферической крови 262 нейтрофильных гранулоцитов, моноцитов, естественных киллеров и Т-лимфоцитов. Энтеровирусную инфекцию центральной нервной системы контролируют CD4+Tэффекторы/клетки памяти Th1- и Th2-типа, а также CD8+ эффекторные Т-лимфоциты Тс1-типа и терминально-дифференцированные CD8+ T-эффекторы памяти. 9. Для менингеальной формы клещевого энцефалита наряду с общими для энтеровирусных и флавивирусных менингитов иммунологическими феноменами (повышение содержания Th2 и Tc2 лимфоцитов и активация гуморального иммунитета, отсутствие выраженного увеличения содержания Th1, Tc1, а также Th17 и Tnc17 субпопуляций Т-лимфоцитов) характерно увеличение миграции в цереброспинальную жидкость CD8+Т-лимфоцитов, экспрессирующих фактор некроза опухолей- и интерлейкин-4. 263 ПРАКТИЧЕСКИЕ РЕКОМЕНДАЦИИ 1. Разработанные нормативные показатели, характеризующие содержание CD4+ и CD8+Т-лимфоцитарных субпопуляций, синтезирующих цитокины Th1, Th2, Th17-типов, Treg-лимфоцитов, наивных Т-лимфоцитов и различных субпопуляций CD4+ и CD8+Т-лимфоцитов памяти у детей и взрослых рекомендуется использовать в практике лабораторий, осуществляющих иммунологические исследования, в качестве референтных значений (таблица 3.1, таблица 3.2). 2. Для использовать комплексной оценки цитокиновой экспрессии рекомендуется показатель абсолютной интегрированной средней интенсивности флюоресценции цитокинов, представляющий собой произведение абсолютного содержания цитокин-положительных лимфоцитов и средней интенсивности флюоресценции, характеризующей среднее содержания цитокинов в продуцирующих их клетках. 3. В иммунопатогенетической терапии и при разработке лечебных и профилактических вакцин необходимо учитывать гетерогенность групп чувствительных к серозным менингитам энтеровирусной этиологии пациентов, обусловленную HLA-полиморфизмом: 50% заболевших энтеровирусной инфекцией с серозным менингитом являются носителями гаплотипа HLA- DRB1*01;DQA1*01:01;DQB1*05:01, ассоциированного с низким титром вирусспецифических нейтрализующих антител. У пациентов, не имеющих в генотипе HLADRB1*01;DQA1*01:01;DQB1*05:01, ниже частота носительства HLA-A2, выше HLA-A31 и HLA-В18 и снижена эффективность Th1 ответа. 264 СПИСОК ЛИТЕРАТУРЫ 1. Алексеева, Л.А. Цитокины в цереброспинальной жидкости при менингитах у детей / Л.А.Алексеева, Е.М.Мазаева, Н.В.Скрипченко и др./ Журнал инфектологии.-2012.-Том 6.-№1.-С.54-59. 2. Бацкалевич, Н.А. Клинические, иммунологические особенности и прогностическая оценка показателей врожденного и адаптивного иммунитета у подростков с энтеровирусным менингитом: дис…. канд. мед.наук: 14.00.09 / Бацкалевич Наталья Александровна; ГОУ ВПО Уральская гос. мед. акад. Росздрава. -Екатеринбург, 2009.- 109 с. 3. Богвилене, Я.А. Энтеровирусные инфекции у детей: учебное пособие / Я.А. Богвилене, Е.В. Вайцель, Л.П. Алыева. – Красноярск: тип. КрасГМУ, 2010.–186 с. 4. Богданова, Л. В. Способ определения группы здоровья у детей. Пат.2438560 Российская федерация, МПК А61В 5/00 / Л.В. Богданова, Я.Б. Бейкин, Т.Л. Савинова, В.В. Фомин, Ю.Б. Хаманова, Ю.Г. Лагерева // заявитель и патентообладатель Учреждение российской академии наук Институт иммунологии и физиологии Уральского отделения РАН. – № 2010110947/14; заявл. 22.03.2010; опубл. 10.01.2012 // Изобретения. Полезные модели: офиц. Бюл. – 2001. –№1. 5. Волкова, Л.И. Клещевой энцефалит на Среднем Урале: клинико- эпидемиологический анализ острых и хронических форм, пути оптимизации оказания специализированной медицинской помощи в эндемичном очаге: автореф. дис… доктора мед. наук: 14.00.13 / Волкова Лариса Ивановна; ГОУ ВПО Уральская медицинская академия.-Екатеринбург, 2009.-45 с. 6. Ворошилова, М.К. Методы лабораторной диагностики энтеровирусных инфекций / М.К.Ворошилова, В.И.Жевандрова, М.С.Балаян.-Москва: Изд-во «Медицина», 1964.-151 с. 7. Гриневич, Ю.А. Определение иммунных комплексов в крови онкологических больных / Ю.А.Гриневич, А.Н.Алферов // Лаб. Дело.- 1981.- №8.-C. 493-496. 8. Ермакова, Н.В. Нейроиммунные аспекты патогенеза лихорадочной и менингеальной форм клещевого энцефалита: дис… канд. мед. наук: 14.00.10 / 265 Ермакова Наталья Владимировна; ГОУ ВПО Челябинская гос.мед. академия ФА ЗСР .-Челябинск, 2007.-173 с. 9. Ешмолов, С.Н. Клинико-лабораторные особенности и оптимизация терапии энтеровирусных канд.мед.наук: менингитов 14.01.09 / у детей Ешмолов на Сергей соверемнном Николаевич; этапе: ГБОУ дис… ВПО «Ярославская государственная медицинская академия» МЗ РФ.-Москва, 2013.149 с. 10. Железникова, Г.Ф. Факторы иммунной защиты в цереброспинальной жидкости при вирусных инфекциях центральной нервной системы / Г.Ф. Железникова, Н.В. Скрипченко // Журнал неврологии и психиатрии.-2012.-№4.-С.83-88. 11. Железникова, Г.Ф. Иммуноглобулин Е при вирусных инфекциях человека / Г.Ф. Железникова // Российский иммунологический журнал.-2014.-Т.8(17).-№2.С.152-166. 12. Зима, А.П. Система цитокинов и их рецепторов при хронических вирусных инфекциях: молекулярные механизмы дизрегуляции: дис…. д-ра мед. наук: 14.00.16, 03.00.25 / Зима Анастасия Павловна; ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» МЗ и СР РФ.- Томск, 2008.-347 с. 13. Казакова, Ю.В. Менингеальная форма клещевого энцефалита: клинические аспекты диагностики и эффективность терапии лейкинфероном: дис…канд. мед.наук: 14.00.10 / Казакова Юлия Викторовна; ФА ЗСР Новосибирский государственный медицинский университет.-Новосибирск, 2007.-149 с. 14. Карева, Е.Н. Половые стероиды и иммунитет / Е.Н. Карева, Л.В. Ганковская, Н.Л. Шимановский // Российский иммунологический журнал.-2012.-том 6(15).№1.-С.3-13. 15. Кветкова, Э.А. Вирусологические и иммунологические аспекты патогенеза клещевого энцефалита: дис…д-ра мед. наук / Э.А.Кветкова; Ленинград, 1984.417 с. 16. Ковтун, О.П. Иммунология клещевого энцефалита / О.П.Ковтун, Е.А.Андреева, В.Г.Мельников // Вторичные иммунодефицитные состояния.-Екатеринбург, 1997.-С.159-173. 266 17. Конев, В.П. Клетки-мишени для вируса клещевого энцефалита в лимфоидных органах / В.П.Конев, Э.А.Кветкова, А.А.Рычкова // Актуальные проблемы инфекционной патологии.-Санкт-Петербург, 1993.-Часть 2.-С.34. 18. Контякова, Е.Л. Прогностические критерии течения и исхода тяжелых форм клещевого энцефалита: дис…. канд. мед. наук: 14.01.09 / Контякова Екатерина Леонидовна; ГБОУ ВПО Кировская гос. мед. академия.- Киров, 2011.-163 с. 19. Куприна, Н.П. Клинико-лабораторные особенности энтеровирусных менингитов у детей [Электронный ресурс] / Н.П.Куприна, С.П.Кокорева, Е.Ю.Середина, Т.А.Карпачева, С.Ю.Ларина // Научно-медицинский вестник Центрального Черноземья.-2002.-№10.-Режим доступа: http:/www.vsma. ac.ru/publ/vestnik/vest/010/html/003.htm 20. Лукашев, А.Н. Молекулярная эпидемиология вируса ECHO 6 - возбудителя вспышки серозного менингита в Хабаровске в 2006 г. / А.Н.Лукашев, В.А.Резник, О.Е.Иванова и соавт. // Вопросы вирусологии.-2008.-№1.-С.16-21. 21. Медицинская вирусология: Руководство/ под. Ред.Д.К.Львова.-М.:ООО «Медицинское информационное агентство», 2008.-656 с. 22. Мазаева, Е.М. Клинико-лабораторная характеристика интратекального гомеостаза при нейроинфекциях у детей: дис… канд. мед. наук:14.01.09, 14.03.10 / Мазаева Екатерина Михайловна; ФГБУ «Научно-исследовательский институт детских инфекций Федерального медико-биологического агентства России».-Санкт-Петербург, 2014.-109 с. 23. Мазуров, Д.В. Оценка внутриклеточного киллинга стафилококка фагоцитами периферической крови с помощью проточной цитометрии / / Д.В. Мазуров, С.В. Дамбаева, Б.В. Пинегин // Иммунология.- 2000а.-№ 2.-С.57-59. 24. Мазуров, Д.В. Оценка поглощения бактерий гранулоцитами и моноцитами периферической крови методом проточной цитометрии / Д.В.Мазуров, К.Ф.Хамидуллина, Б.В.Пинегин // Иммунология.- 2000б.-№ 1.-С.57-61. 25. Малиновская, В.В. Система интерферона при остром клещевом энцефалите и влияние на динамику клиниколабораторных показателей различных методов интерферонотерапии/ В.В.Малиновская, Г.М.Волегова, //Вопросы вирусологии. -1995.- № 5.- С. 234-238. О.Ю.Устинова 267 26. Маянский, А.Н. Клинические перспективы изучения фагоцитоза / А.Н. Маянский, О.И. Пикуза // Казан. мед. журнал.-1993.-№3.-С. 193-196. 27. Мельников, В.Г. Клинико-иммунологические критерии диагностики клещевого энцефалита у детей: автореф. дис…канд.мед.наук / Мельников Владимир Геннадьевич; Екатеринбург, 1997.-112 с. 28. Михайлова, Е.В. Менингиты энтеровирусной этиологии у детей: современные подходы к диагностике и особенности клинического течения / Е.В.Михайлова, А.В.Штейнберг, И.Г.Еремеева // Инфекционные болезни.- 2008.- т.6.- №1.- С.31-34. 29. Мишакина, Н.О. Клинико-патогенетические особенности острого и отдаленного периодов при серозном менингите энтеровирусной этиологии у детей: дис…. канд. мед.наук: 14.01.08 / Мишакина Наталья Олеговна; ГБОУ ВПО «Тюменская государственная медицинская академия» МЗ и СР РФ.- Тюмень, 2012.-150 с. 30. Моргацкий, Н.В. Возрастная клинико-иммунологическая характеристика клещевого энцефалита у детей: дис…. канд. мед.наук: 14.00.13, 14.00.10 / Моргацкий Николай Валерьевич; ФА ЗСР ФГУ НИИДИ.- Санкт-Петербург, 2006.-162 с. 31. Мурина, Е.А. Особенности вспышек серозных менингитов в Санкт-Петербурге за 2008-2010 годы / Е.А. Мурина, М.В. Иванова, З.А.Осипова и др. // Журнал инфектологии.-2011.-Т.3, №3.-С.78. 32. Надеждина, М.В. Клинико-серологические особенности у больных с разными формами острого клещевого энцефалита при новом методе введения отечественного иммуноглобулина / М.В.Надеждина, А.Ю.Полякова // Инфекционная патология.-2000.-Т.7, №3-4.-С.13-17. 33. Новикова, Н.А. Молекулярный мониторинг неполиомиелитных энтеровирусов на европейской территории в 2008-2011 гг. / Н.А.Новикова, Л.Н.Голицин, С.Г.Фомина и соавт. // Журнал микробиологии.-2013.-№1.-С.75-78. 34. Онищенко, Г.Г. Сезон энтеровирусного серозного менингита в Нижнем Новгороде в 2007 году: молекулярно-эпидемиологические аспекты / Г.Г.Онищенко, Н.А.Новикова, Е.И.Ефимов и соавт. // ЖМЭИ.-2009.-№2.-С.2430. 268 35. Панина, О.А. Клинико-иммунологическое значение интерферонотерапии в лечении серозных менингитов у детей: дис…. канд. мед.наук: 14.00.10/ Панина Ольга Александровна; ГОУ ВПО Воронежская гос. мед. акад. имени Н.Н.Бурденко Росздрава. Моква, 2005.- 137 с. 36. Пирогова, Н.П. Механизмы нарушений клеточного звена резистентности при клещевых природно-очаговых инфекциях: дис…. д-ра мед.наук: 14.00.16, 03.00.25 / Пирогова Наталья Петросовна; ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» МЗ и СР РФ.- Томск, 2003.-276 с. 37. Погодина, В.В. Хронический клещевой энцефалит / В.В.Погодина, М.П.Фролова, Б.А.Ерман-Новосибирск: Наука, 1986.-234 с. 38. Протасеня, И.И. Энтеровирусная инфекция у детей (на примере Хабаровского края): дис… д-ра мед.наук: 14.01.09 / Протасеня Ирина Ивановна; ГОУ ВПО «Дальневосточный государственный медицинский университет Росздрава».Москва, 2010.-319 с. 39. Протасеня, И.И. Иммуновоспалительные изменения в ликворе детей, больных энтеровирусным менингитом / И.И Протасеня, В.П Молочный, Е.С.Новик, Г.Г.Обухова // Дальневосточный медицинский журнал.-2010.-№10.-С.32-35. 40. Энтеровирусная инфекция у детей (эпидемиология, этиология, диагностика, клиника, терапия, профилактика): учебное пособие для врачей и медицинских сестер / под ред. Н.В. Скрипченко – СПб, 2009. - 96с. 41. Скрипченко, Н.В. Нейроинфекции у детей / Н.В.Скрипченко, Ю.В.Лобзин, Г.П.Иванова и др.// Детские инфекции.-2014.-№1.-С.8-17. 42. Сорокина, М.Н. Вирусные энцефалиты и менингиты у детей: Руководство для врачей / М.Н. Сорокина, Н.В. Скрипченко.-М.:ОАО «Издательство «Медицина», 2004.-416 с. 43. Струин, Н.Л. Изучение некоторых параметров клеточного иммунитета у больных острым и хроническим клещевым энцефалитом / Н.Л.Струин, Н.Н.Александрова // Эпидемиология и профилактика вирусных инфекций.Свердловск, 1987.-С.109-112. 44. Талаев, В.Ю. Содержание центральных и эффекторных клеток памяти и функциональные свойства Т-лимфоцитов новорожденных и взрослых при 269 различных способах активации in vitro / В.Ю.Талаев, И.Е.Зинченко, О.Н.Бабайкина и др. // Иммунология.-2005.-№5.-С.267-274. 45. Тер-Багдасарян, Л.В. Прогностическое значение иммунологических показателей в ранней дифференциальной диагностике клинических форм клещевого энцефалита: автореф. дис… канд.мед.наук / Л.В.Тер-Багдасарян; Челябинск, 2002.-22 с. 46. Удинцева, И.Н. Клинико-иммунологические проявления лихорадочной и стертой форм клещевого энцефалита в различные периоды заболевания: автореф. дис… канд.мед.наук: 14.01.11 / Удинцева Ирина Николаевна; ГОУ ВПО «Сибирский государственный медицинский университет» МЗ и СР РФ Томск, 2010.-24 с. 47. Федорова, Е.В. Патогенетическая терапия клещевых нейроинфекций при тяжелом течении заболевания: дис… канд.мед.наук: 14.00.13 / Федорова Екатерина Владимировна; ГОУ ВПО «Институт повышения квалификации ФМБА РФ».-Москва, 2007.-93 с. 48. Хаманова, Ю.Б. Клиника, иммунопатогенез и оптимизация лечения энтеровирусных менингитов у детей: дис… доктора мед.наук: 14.01.08 / Хаманова Юлия Борисовна; ГОУ ВПО «Уральская государственная медицинская академия» МЗ РФ.-Екатеринбург, 2013.-279 с. 49. Черешнев, В.А. Иммунологические и генетические факторы нарушения репродуктивной функции / В.А.Черешнев, И.В.Рыбина, Я.Б.Бейкин, Т.А.Обоскалова. – Екатеринбург: УрО РАН, 2005.–176 с. 50. Черницына, Л.О. Ассоциированность аллельных вариантов генов HLAкомплекса класса I с интенсивностью гуморального иммунного ответа к антигенам вируса клещевого энцефалита в процессе заболевания / Л.О.Черницына, В.И.Коненков, Л.П.Илюшенко и др. // Иммунология.- 1994.- № 6.-С. 51–54. 51. Шакарян, А.К. Энтеровирусная инфекция: некоторые клинические аспекты / А.К.Шакарян // Инфекционные болезни.-2013.-№4.-С.23-26. 52. Иммунология детского возраста / Под ред. проф. Щербины А.Ю. и проф. Пашанова Е.Д.-М.: ИД Медпрактика, 2006.-431 с. 53. Ширшев, С.В. Влияние эстрадиола на фагоцитарную и окислительную активность моноцитов и нейтрофилов / С.В. Ширшев, Е.М. Куклина, У.С. 270 Гудина // Вестник Пермского университета. Серия: Биология.- 2008.- №9.- С. 96-99. 54. Ackerman, L.S. Sex hormones and the genesis of autoimmunity / L.S.Ackerman // Arch Dermatol.- 2006.-Vol. 142.-P. 371-376. 55. Agol, V.I. Viral security proteins: counteracting host defences / V.I. Agol, A.P. Gmyl // Nat Rev Microbiol.- 2010.-Vol.8.-P.867–878. 56. Aleyas, A.G. Functional modulation of dendritic cells and macrophages by Japanese encephalitis virus through MyD88 adaptor moleculedependent and -independent pathways / A.G. Aleyas, J.A. George, Y.W. Han et al. // J Immunol.- 2009.-Vol.183.P.2462–74. 57. Aleyas, A.G. Multifront assault on antigen presentation by Japanese encephalitis virus subverts CD8+ T cell responses / A.G. Aleyas, Y.W. Han, J.A. George et al. // J Immunol.- 2010.-Vol.185(3).-P.1429–41. 58. Amsen, D. Instruction of distinct CD4 T helper cell fates by different notch ligands on antigen-presenting cells / D. Amsen, J.M. Blander, G.R. Lee et al. // Cell.-2004.Vol.117.-Р.515-526. 59. Appanna, R. Susceptible and protective HLA class 1 alleles against dengue fever and dengue hemorrhagic fever patients in a Malaysian population / R. Appanna, S. Ponnampalavanar, L. Lum Chai See, et al. // PLoS One.-2010.-5:e13029. doi:10.1371/journal.pone.0013029 60. Arens, R. Plasticity in programming of effector and memory CD8+ T-cell formation / R.Arens, S.P.Schoenberger // Immunol.Rev.-2010.-Vol. 235(1).-P.190-205. 61. Arjona, A. West Nile virus envelope protein inhibits dsRNA-induced innate immune responses / A. Arjona, M. Ledizet, K. Anthony et al. // J Immunol.- 2007.Vol.179(12).-P.8403–9. 62. Arnold, A.P. What does the "four core genotypes" mouse model tell us about sex differences in the brain and other tissues? / A.P. Arnold, X. Chen // Front. Neuroendocrinol. 2009.-Vol.30.-P.1–9. 63. Arruvito, L. Expansion of CD4+CD25+ and FOXP3+ regulatory T cells during the follicular phase of the menstrual cycle: implications for human reproduction / L. Arruvito, M. Sanz, A.H. Banham, L. Fainboim // J. Immunol.-2007.-Vol.178.-P. 2572–2578. 271 64. Ashour, J. NS5 of dengue virus mediates STAT2 binding and degradation / J. Ashour, M. Laurent-Rolle, P.Y. Shi et al. // J Virol. - 2009.-Vol. 83(11).-P.5408–18. 65. Atrasheuskaya, A.V. Changes in immune parameters and their correction in human cases of tickborne encephalitis / A.V. Atrasheuskaya, T.M. Fredeking, G.M. Ignatyev // Clin Exp Immunol.- 2003.-Vol.131(1).-P.148e54. 66. Bacchetta, R. Growth and expansion of human T regulatory type 1 cells are independent from TCR activation but require exogenous cytokines / R. Bacchetta, C. Sartirana, M.K. Levings et al. // Eur.J.Immunol.-2002.- Vol.32.-Р.2237-2245. 67. Balkow, S. Friend retrovirus infection of myeloid dendritic cells impairs maturation, prolongs contact to naive T cells, and favors expansion of regulatory T cells / S. Balkow, F. Krux, K. Loser et al. // Blood.-2007.-Vol.110.-P.3949–58. 68. Banks, W.A. The blood-brain barrier and immune function and dysfunction / W.A. Banks, M.A. Erickson // Neurobiol Dis.-2010.-Vol. 37.-P. 26-32. 69. Bao, M. Molecular mechanisms for gender differences in susceptibility to T cellmediated autoimmune diabetes in nonobese diabetic mice / M. Bao, Y. Yang, H.S. Jun et al. // J. Immunol.-2002.-Vol.168(10).-P.5369–5375. 70. Barba-Spaeth, G. Live attenuated yellow fever 17D infects human DCs and allows for presentation of endogenous and recombinant T cell epitopes / G. Barba-Spaeth, R.S. Longman, M.L. Albert et al. // J Exp Med.- 2005.-Vol.202.-P.1179–84. 71. Barral, P.M. MDA-5 is cleaved in poliovirus-infected cells / P.M. Barral, J.M. Morrison, J. Drahos et al. // J Virol. - 2007.-Vol. 81.-P.3677–3684. 72. Barral, P.M. RIG-I is cleaved during picornavirus infection / P.M. Barral, D. Sarkar, P.B. Fisher et al. // Virology. -2009.-Vol. 391.-P.171–176. 73. Baumjohann, D. Cutting Edge: Distinct waves of BCL6 expression during T follicular helper cell development / D. Baumjohann, T. Okada, K.M. Ansel // J. Immunol.2011.-Vol. 187.-P. 2089–2092. 74. Beasley, D.W. Identification of neutralizing epitopes within structural domain III of the West Nile virus envelope protein / D.W. Beasley, A.D. Barrett // J Virol. - 2002.Vol.76.-P.13097–100. 75. Bebo, B.F. Low-dose estrogen therapy ameliorates experimental autoimmune encephalomyelitis in two different inbred mouse strains / B.F. Bebo, A. Fyfe-Johnson, K. Adlard et al. // J. Immunol.-2001.-Vol.166(3).-P.2080–2089. 272 76. Bekesi, G. In vitro effects of different steroid hormones on superoxide anion production of human neutrophil granulocytes / G.Bekesi, R.Kakucs, S.Varbiro et al. // Steroids. - 2000.-Vol. 65.-P. 889-894. 77. Belkaid, Y. Role FoxP3-positive regulatory T cells during infection / Y. Belkaid // Eur.J.Immunol.-2008. - Vol.38.-Р.918-921. 78. Bergmann, C.C. Coronavirus infection of the central nervous system: host-virus stand-off / C.C. Bergmann, T.E. Lane, S.A. Stohlman // Nat Rev Microbiol.-2006.Vol.4.-P. 121-132. 79. Best, S.M. Inhibition of interferon-stimulated JAK-STAT signaling by a tick-borne flavivirus and identification of NS5 as an interferon antagonist / S.M. Best, K.L. Morris, J.G. Shannon et al. // J Virol.- 2005.-Vol.79.-P.12828–39. 80. Bettelli, E. Reciprocal developmental pathway for the generation of pathogenic effector Th17 and regulatory T cells / E. Bettelli, Y. Carrier, W. Gao et al. // Nature.2006.- Vol.441.-Р.235-238. 81. Bevan, M.J. Helping the CD8 (+) T-cell response / M.J.Bevan // Immunol.-2004.Vol.4.-P.595-602. 82. Blander, J.M. A pool of central memory-like CD4 N cells contains effector memory precursors / J.M. Blander, D.B. Sant’Angelo, D. Metz et al. // J Immunol.-2003.Vol.170.-P.2940-2948. 83. Borrow, P. Inhibition of the Type I interferon antiviral response during arenavirus infection / P. Borrow, L. Martinez-Sobrido, J.C. de La Torre et al. // Viruses.-2010.Vol.2.-P.2443-2480. 84. Bouman, A. The immune response during the luteal phase of the ovarian cycle: increasing sensitivity of human monocytes to endotoxin / A. Bouman, H. Moes, M.J. Heineman et al. // Fertil Steril.-2001.-Vol.76.-Р.555-559. 85. Bouman, A. Gender difference in the non-specific and specific immune response in humans / A. Bouman, M. Schipper, M.J. Heineman et al. // Am J Reprod Immunol.2004.-Vol.52.-P.19-26. 86. Bouman, A. Sex hormones and the immune response in humans / A. Bouman, M.J. Heineman, M.M. Faas // Hum Reprod Update.-2005.-Vol.11.-P.411-423. 273 87. Brehin, A.C. Dynamics of immune cell recruitment during West Nile encephalitis and identification of a new CD19+B220-BST-2+ leukocyte population / A.C.Brehin, J.Mouries, M.P.Frenkiel et al. // J. Immunol.-2008.-Vol.180.-P.6760-6767. 88. Bressanelli, S. Structure of a flavivirus envelope glycoprotein in its low-pH-induced membrane fusion conformation / S. Bressanelli, K. Stiasny, S.L. Allison et al. // EMBO J. - 2004.-Vol.23.-P.728–38. 89. Bsibsi, М. Broad expression of Toll-like receptors in the human central nervous system / М.Bsibsi, R.Ravid, D.Gveric et al. // J. Neuropathol. Exp. Neurol.-2002.V.61.-P. 1013-1021. 90. Buck, R.H. Longitudinal study of intracellular T cell cytokine production in infants compared to adults / R.H. Buck, C.T. Cordle, D.J. Thomas et al. // Clin Exp Immunol.-2002.-Vol.128.-P.490-497. 91. Jimenez Cabalero, P.E. Descriptive analysis of viral meningitis in a general hospital: differences in the characteristics between children and adults / P.E. Jimenez Cabalero, F. Munoz Escudero, S. Murcia Carretero et al. // Neurologia. - 2011.-Vol. 26(8).-P. 468-473. 92. Canning, M.O. Opposing effects of dehydroepiandrosterone and dexamethasone on the generation of monocyte-derived dendritic cells / M.O. Canning, K. Grotenhuis, H.J. de Wit, H.A. Drexhage // Eur. J. Endocrinol.-2000.-Vol.143(5).-P.687-95. 93. Cao, S. Japanese encephalitis virus wild strain infection suppresses dendritic cells maturation and function, and causes the expansion of regulatory T cells / S. Cao, Y. Li, J. Ye et al. // Virol J.- 2011.-Vol.8.-P.39. 94. Cerwenka, A. In vivo persistence of CD8 polarized T cell subsets producing type 1 or type 2 cytokines / A.Cerwenka, L.L.Carter, J.B.Reome et al. // J.Immunol.-1998.Vol.161.-P.97-105. 95. Chackerian, A.A. Neutralization or absence of the interleukin-23 pathway does not compromise immunity to mycobacterial infection / A.A. Chackerian, S.J. Chen, S.J. Brodie et al. // Infect.Immun.-2006.-Vol.74.-P. 6092-6099. 96. Chang, L.Y. HLA-A33 Is Associated With Susceptibility to Enterovirus 71 Infection / L.Y. Chang, I.S. Chang, W.J.Chen et al. // Pediatrics.-2008.-Vol.122(6).-P. 12711276. 274 97. Chang, T.H. Flavivirus induces interferon-beta gene expression through a pathway involving RIG-I-dependent IRF-3 and PI3K-dependent NFkappaB activation. / T.H. Chang, C.L. Liao, YL. Lin // Microbes Infect. - 2006.-Vol. 8(1).-P.157–71. 98. Chase, A.J. Impairment of CD4+ T cell polarization by dengue virus-infected dendritic cells / A.J. Chase, F.A. Medina, J.L. Mu˜noz-Jordan // J Infect Dis.- 2011.Vol.203(12).-P.1763–74. 99. Chen, J. Increased frequency of Th17 cells in the peripheral blood of children infected with enterovirus 71 / J. Chen, J. Tong, H. Liu et al. // J Med Virol.- 2012. - Vol. 84(5).-P.763-7. 100. Cheng, Y. Major histocompatibility complex class I (MHC I) induction by West Nile virus: involvement of 2 signaling pathways in MHC-I up-regulation / Y.Cheng, N.J. King, A.M. Kesson // J Infect Dis. - 2004.-Vol.189.-P.658–68. 101. Chevaliez, S. Role of class I human leukocyte antigen molecules in early steps of echovirus infection of rhabdomyosarcoma cells / S. Chevaliez, J. Balanant, P. Maillard et al. // Virology.-2008.-Vol.25; 381(2).-P.203-14. 102. Chipeta, J. CD4+ and CD8+ cell cytokine profiles in neonates. Older children, and adults: increasing T helper type 1 and T cytotoxic type 1 cell populations with age / J. Chipeta, Y. Komada, X.I. Zhang et al. // Cell Immunol.-1998.-Vol.183.-P.149-56. 103. Choi, Y.S. ICOS receptor instructs T follicular helper cell versus effector cell differentiation via induction of the transcriptional repressor Bcl6 / Y.S Choi, R. Kageyama, D. Eto et al. // Immunity.-2011.-Vol.34.-P.932–946. 104. Chung, D.R. CD4+ T cells mediate abscess formation in intra-abdominal sepsis by an IL-17-dependent mechanism / D.R. Chung, D.L. Kasper, R.J. Panzo et al. // J.Immunol.-2003.-Vol.170.-P.1958-1963. 105. Chung, K.M. Antibodies against West Nile virus nonstructural protein NS1 prevent lethal infection through Fc gamma receptor-dependent and -independent mechanisms / K.M. Chung, G.E. Nybakken, B.S. Thompson et al. // J Virol.- 2006.-Vol.80.P.1340–51. 106. Coffman, R.L. T cell activity that enhances polyclonal IgE production and its inhibition by interferon-γ / R.L. Coffman, J.A. Carty // Immunol.-1986.-Vol. 136.P.949-954. 275 107. Cornell, C.T. Inhibition of protein trafficking by coxsackievirus B3: multiple viral proteins target a single organelle / C.T. Cornell, W.B. Kiosses, S. Harkins et al. // J. Virol.- 2006.-Vol.80.-P.6637–6647. 108. Cornell, C.T. Coxsackievirus B3 proteins directionally complement each other to downregulate surface MHC class I / C.T. Cornell, W.B. Kiosses, S. Harkins et al. // J. Virol.- 2007.-Vol.81.-P.6785–6797. 109. Cronin, D.C. IL-4 producing CD8+ N cell clones can provide B cell help / D.C. Cronin, R. Stack, F.W. Fitch // J.Immunol.-1995.-Vol.154.-P.3118. 110. Crotty, S. SAP is required for generating long-term humoral immunity / S. Crotty, E.N. Kersh, J. Cannons et al. // Nature.-2003.-Vol.421.-P.6785-97. 111. Crotty, S. Follicular helper CD4 T cells (TFH) / S. Crotty // Annu. Rev. Immunol.2011.-Vol.29.-P.621–663. 112. Cvoro, A. Selective estrogen receptor-beta agonists repress transcription of proinflammatory genes / A. Cvoro, D. Tatomer, M.K. Tee et al. // Immunol.-2008.Vol.180(1).-P.630-636. 113. Daffis, S. Toll-like receptor 3 has a protective role against West Nile virus infection / S. Daffis, M.A. Samuel, M.S. Suthar et al. // J Virol.- 2008а.-Vol.82(21).-P.10349– 58. 114. Daffis, S. Interferon regulatory factor IRF-7 induces the antiviral alpha interferon response and protects against lethal West Nile virus infection / S. Daffis, M.A. Samuel, M.S. Suthar et al. // J Virol.- 2008б.-82(17).-P.8465–75. 115. Daffis, S. 2-O methylation of the viral mRNA cap evades host restriction by IFIT family members / S. Daffis, K.J. Szretter, J. Schriewer et al. // Nature.- 2010.Vol.2468(7322).-P.452–6. 116. da Matta Guedes, P.M. IL-17 produced during Trypanosoma cruzi infection plays a central role in regulating parasite-induced myocarditis / P.M. da Matta Guedes, F.R. Gutierrez, F.L. Maia et al. // PLoS Negl. Trop. Dis. - 2010.-Vol.4.-P. e604. 117. Dao, H. Gender differences in skin: a review of the literature / H. Dao, R.A.Kazin // Gend. Med. - 2007.-Vol.4.-P. 308-328. 118. Darrah, P.A. Multifunctional TH 1 Cells Define a Correlate of Vaccine Mediated Protection Against Leishmania Major / P.A. Darrah, D.T. Patel, P.M. De Luca et al. // Nat Med.- 2007.-13(7).-P.843–50. 276 119. Decaluwe, H. Gamma (c) deficiency precludes CD8+ T cell memory despite formation of potent T cell effectors / H.Decaluwe, M.Taillardet, E.Corcuff et al. // Proc.Nat.Acad.Sci.USA.-2010.-Vol.107.-P.9311-9316. 120. de Jong, A.S. The coxsackievirus 2B protein increases efflux of ions from the endoplasmic reticulum and Golgi, thereby inhibiting protein trafficking through the Golgi / A.S. de Jong, H.J.Visch, F. de Mattia et al. // J. Biol. Chem.- 2006.-Vol.281.P.14144–14150. 121. de Jong, A.S. Functional analysis of picornavirus 2B proteins: effects on calcium homeostasis and intracellular protein trafficking / A.S. de Jong, M.F. de Jong, M.M. van Dommelen et al. //J. Virol. - 2008.-Vol.82.-P.3782–3790. 122. de la Rosa, M. Interleukin-2 is essential for CD4+CD25+regulatory T cell function / M. de la Rosa, S. Rurtz, H. Dorninger et al. // Eur. J.Immunol.-2004.-Vol.34.-P.24802488. 123. Demyanets, S. The estrogen metabolite 17b-dihydroequilenin counteracts interleukin1α induced expression of inflammatory mediators in human endothelial cells in vitro via NF-κB pathway / S. Demyanets, S. Pfaffenberger, C. Kaun et al. // Thromb. Haemost.-2006.-Vol. 95.-P.107–116. 124. Der, E. Gr1+ cells suppress T-dependent antibody responses in (NZB _ NZW)F1 male mice through inhibition of T follicular helper cells and germinal center formation / E. Der, J. Dimo, A. Trigunaite et al. // J.Immunol.-2014.-Vol. 192.-P. 1570–1576. 125. Diamond, M.S. B cells and antibody play critical roles in the immediate defense of disseminated infection by West Nile encephalitis virus / M.S. Diamond, B. Shrestha, A. Marri et al. // J Virol.- 2003.-Vol.77.-P.2578–86. 126. Dillon, S. A Toll-like receptor 2 ligand stimulates Th2 responses in vivo via induction of extracellular signal-regulated kinase mitogen-activated protein kinase and c-Fos in dendritic cells / S. Dillon, A. Agrawal, T. van Dyke et al. // J. Immunol.-2004.-Vol. 172.-P.4733–4743. 127. Dinarello, С.А. Interleukin-18 and IL-18 binding protein [Электронный ресурс]/ C.A. Dinarello, D. Novick, S. Kim et al.-Электрон. Дан.- Front. Immunol.-2013. doi: 10.3389/fimmu.2013.00289. 277 128. Dong, Y. Immune function of astrocytes / Y.Dong, E.N. Benveniste // Glia.-2001.V.36.-P.180-190. 129. Do¨rrbecker, B. Tick-borne encephalitis virus and the immune response of the mammalian host / B. Do¨rrbecker, G. Dobler, M. Spiegel et al. // Travel Medicine and Infectious Disease.-2010.-Vol.8.-P. 213-222. 130. Dosiou, C. Interferon-related and other immune genes are downregulated in peripheral blood leukocytes in the luteal phase of the menstrual cycle / C. Dosiou, R.B. Lathi, S. Tulac et al. // J. Clin. Endocrinol. Metab.-2004.-Vol.89 (5).-P.2501– 410. 131. Dosiou, C. Expression of membrane progesterone receptors on human T lymphocytes and Jurkat cells and activation of G-proteins by progesterone / C. Dosiou, A.E. Hamilton, Y. Pang et al. // J. Endocrinol.-2008.-Vol.196(1).-P.67–77. 132. Dotta, F. Enteroviral infections and development of type 1 diabetes: The Brothers Karamazov within the CVBs / F. Dotta, G. Sebastiani // Diabetes.- 2014.-Vol.63(2).P.384-6. 133. Duraisingham, S.S. CD34-derived human Langerhans cells stimulate a T helper type 2 response independently of extracellular-signal-regulated kinase phosphorylation / S.S. Duraisingham, J. Hornig, F. Gotch, S. Patterson // Immunology.-2010.-Vol. 131(2).-P.210-219. 134. Evans, J.D. West Nile virus infection induces depletion of IFNAR1 protein levels / J.D. Evans, R.A. Crown, J.A. Sohn et al. // Viral Immunol.- 2011.-Vol.24(4).-P.253– 63. 135. Faas, M. The immune response during the luteal phase of the ovarian cycle: a th2type response? / M. Faas, A. Bouman, H. Moes et al. // Fertil Steril. - 2000.-Vol.74.P.1008-1013. 136. Fairweather, D. IL-12Rβ1 and TLR4 increase IL-1β and IL-18-associated myocarditis and coxsackievirus replication / D. Fairweather, S. Yusung, S. Frisancho-Kiss et al. // J. Immunol. 2003.-Vol.170.-P.4731–4737. 278 137. Fairweather, D. Sex differences in autoimmune disease from a pathological perspective / D. Fairweather, S. Frisancho-Kiss, N.R. Rose // Am. J. Pathol.- 2008.Vol.173(3).P.600-609. 138. Fairweather, D. Update on coxsackievirus B3 myocarditis / D. Fairweather, K.A. Stafford, Y.K. Sung // Curr Opin Rheumatol.- 2012.-Vol.24 (4).-P.401-7. 139. Falcon-Lezama, J.A. HLA class I and II polymorphisms in Mexican Mestizo patients with dengue fever / J.A. Falcon-Lezama, C. Ramos, J. Zuniga et al. // Acta Trop.2009.-Vol.112.-P.193–7. 140. Farina, C. Preferential expression and function of Toll-like receptor 3 in human astrocytes / C.Farina, М.Krumbholz, Т.Giese et al. // J. Neuroimmunol.-2005.-V.159.P.12-19. 141. Feldman, I. Identification of proteins within the nuclear factor-kappa B transcriptional complex including estrogen receptor-alpha / I. Feldman, G.M. Feldman, C. Mobarak et al. // Am. J. Obstet. Gynecol.- 2007.-Vol.196.-P.394.e1–394.e11. 142. Feuer, R. Viral persistence and chronic immunopathology in the adult central nervous system following Coxsackievirus infection during the neonatal period / R. Feuer, C.M. Ruller, N. An et al. // J Virol. - 2009.-Vol. 83.-P.9356–9369. 143. Fijak, M. Testosterone replacement effectively inhibits the development of experimental autoimmune orchitis in rats: evidence for a direct role of testosterone on regulatory T cell expansion / M. Fijak, E. Schneider, J. Klug et al. // J.Immunol.2011.-Vol.186.-P. 5162–5172. 144. Fish, E.N. The X-files in immunity: sex-based differences predispose immune responses / E.N. Fish // Nat. Rev. Immunol.-2008.-Vol.8.-P. 737–744. 145. Fontenot, J.D. A function for interleukin 2 in Foxp3-expressing regulatory T cells / J.D. Fontenot, J.P. Rasmussen, M.A. Gavin et al. // Nat.Immunol.-2005.-Vol.6.P.1142-1151. 146. Fredericksen, B.L. West Nile virus evades activation of interferon regulatory factor 3 through RIG-I-dependent and –independent pathways without antagonizing host defense signaling / B.L. Fredericksen, Jr.M. Gale // J Virol.- 2006.-Vol.80(6).-P. 2913–23. 279 147. Fredericksen, B.L. Establishment and maintenance of the innate antiviral response to West Nile virus involves both RIG-I and MDA5 signaling through IPS-1 / B.L. Fredericksen, B.C. Keller, J. Fornek et al. // J Virol.- 2008.-Vol.82(2).-P.609–16. 148. Frisancho-Kiss, S. Sex differences in coxsackievirus B3-induced myocarditis: IL12Rbeta1 signaling and IFN-gamma increase inflammation in males independent from STAT4 / S. Frisancho-Kiss, J.F. Nyland, S.E. Davis et al. // Brain Res.- 2006.Vol.18;1126(1).-P.139-47. 149. Frisancho-Kiss, S. Cutting edge: cross-regulation by TLR4 and T cell Ig mucin-3 determines sex differences in inflammatory heart disease / S. Frisancho-Kiss, S.E. Davis, J.F. Nyland et al. // J. Immunol.-2007.-Vol.178.-P.6710–6714. 150. Furman, D. Sexual dimorphism in immunity: improving our understanding of vaccine immune response in men / D. Furman // Expert Rev.Vaccines.-2015.-Vol.14 (3).P.461-71. 151. Gardner, E.M. Age-related changes in Type 1 and Type 2 cytokine production in humans / E.M. Gardner, D.M. Murasko // Biogerontology.- 2002.-Vol.3.-P.271-90. 152. Gasparoni, A. Age-related changes in intracellular TH1/TH2 cytokine production, immunoproliferative T lymphocyte response and natural killer cell activity in newborns, children and adults / A. Gasparoni, L. Giardelli, A. Avanzini et al. // Biol. Neonate.-2003.-Vol.84.-P.297-303. 153. Gavin, M.A. Foxp3-dependent programme of regulatory T-cell differentiation / M.A. Gavin, J.P. Rasmussen, J.D. Fontenot et al. // Nature.-2007.-Vol. 445.-P. 771–775. 154. Geginat, J. Plasticity of human CD4 T cell subsets / J.Geginat, M. Paroni, S. Maglie, J.S. Alfen et al. / /Frontiers in Immunology.-2014.-Vol. 5 published: 16 December 2014 doi: 10.3389/fimmu.2014.00630 155. Geller, T.J. A case of protracted Сoxsackie virus meningoencephalitis in a marginally immunodeficient child treated successfully with intravenous immunoglobulin / T.J. Geller, D.Condie // J. Neurol. Sci.-1995.-Vol.129.-P.131–133. 156. Gelpi, E. Visualization of Central European tick-borne encephalitis infection in fatal human cases / E. Gelpi, M. Preusser, F. Garzuly et al. // J Neuropathol Exp Neurol.2005.-Vol. 64(6).-P.506-12. 280 157. Gelpi, E. Inflammatory response in human tick-borne encephalitis: analysis of postmortem brain tissue / E. Gelpi, M. Preusser, U. Laggner et al. // J Neurovirol. 2006.-Vol.12 (4).-P.322-7. 158. Geng, D. When Toll-like receptor and T-cell receptor signals collide: a mechanism for enhanced CD8 T-cell effector function / D.Geng, L.Zheng, R.Srivastava et al. // Blood.-2010.-Vol.116.-P.3494-3504. 159. Giltay, E.J. In vivo effects of sex steroids on lymphocyte responsiveness and immunoglobulin levels in humans / E.J. Giltay, J.C. Fonk, B.M. von Blomberg et al. // J. Clin. Endicrinol. Metab.-2000.-Vol.85.-P.1648-1657. 160. Giron-Gonzales, J.A. Consistent production of a higher TH1:TH2 cytokine ratio by stimulated T cells in men compared with women / J.A. Giron-Gonzales, F.J. Moral, J. Elvira et al. // Eur. J. Endocrinol.-2000.-Vol.143.-P. 31-36. 161. Gleicher, N. Gender and risk factor for autoimmune diseases / N. Gleicher, D.H. Barad // J. Autoimmun. - 2007.-Vol. 28.-P. 1-6. 162. Goenka, R. Cutting edge: dendritic cell-restricted antigen presentation initiates the follicular helper T cell program but cannot complete ultimate effector differentiation / R. Goenka, L.G. Barnett, J.S. Silver et al. // J. Immunol. 2011.-Vol.187.-P.1091– 1095. 163. Gonzalez, D.A. Sex hormones and autoimmunity / D.A. Gonzalez, B.B. Diaz, C. Rodriguez Perez Mdel et al. // Immunol. Lett.-2010.-Vol.133.-P. 6–13. 164. Gorbea, C. A role for Toll-like receptor 3 variants in host susceptibility to enteroviral myocarditis and dilated cardiomyopathy / C. Gorbea, K.A. Makar, M. Pauschinger et al. // J Biol Chem. - 2010.-Vol. 285.-P.23208–23223. 165. Gould, E.A. Pathogenic flaviviruses / E.A. Gould, T. Solomon // Lancet. - 2008.Vol.371.-P.500–9. 166. Gram, A.M. Ressing Inflammasomes and viruses: cellular defence versus viral offence / A.M. Gram, F. Joost, E. Maaike // Journal of General Virology.-2012.-Vol. 93.-P. 2063–2075. 167. Griffin, D.E. Immune responses to RNA-virus infections of the CNS / D.E. Griffin // Nat. Rev. Immunol.-2003.-V.3.-P.493-502. 168. Grimaldi, C.M. Hormonal modulation of B cell development and repertoire selection / C.M. Grimaldi, L. Hill, X. Xu et al. // Mol Immunol.- 2005.-Vol. 42.-P. 811-820. 281 169. Gromeier, M. Mechanism of injury-provoked poliomyelitis / M. Gromeier, E.Wimmer // J. Virol.- 1998.-Vol.72(6).-P.5056-60. 170. Groom, J.R. CXCR3 ligands: Redundant, collaborative and antagonistic functions / J.R.Groom, A.D.Luster // Cell biol.-2011.-Vol.89.-P.207-215. 171. Guarda, G. L-selectin-negative CCR7-effector and memory CD8+ T cells enter reactive lymph nodes and kill dendritic cells / G. Guarda, M. Hons, S.F. Soriano et al. // Nat. Immunol.-2007.-Vol.8.-P.743-52. 172. Gubler, D. Flaviviruses / D. Gubler, G. Kuno, L. Markoff // Knipe DM, Howley PM, editors. - Philadelphia: Lippincott William & Wilkins, 2007.- Р. 1153–253. 173. Guo, J.T. West Nile virus inhibits the signal transduction pathway of alpha interferon / J.T. Guo, J. Hayashi, C. Seeger // J Virol. - 2005.-Vol.79.-P.1343–50. 174. Halim, S.S. Immunogenicity of a foreign peptide expressed within a capsid protein of an attenuated coxsackievirus / S.S. Halim, S.E. Ostrowski, W.T. Lee et al.// Vaccine.2001.-Vol.19.-P.958–965. 175. Hao, S. Modulation of 17beta-estradiol on the number andcytotoxicity of NK cells in vivo related to MCM and activating receptors / S. Hao, J. Zhao, J. Zhou et al. // Int. Immunopharmacol. -2007.-Vol.7.-P.1765–1775. 176. Happel, K.I. Divergent roles of IL-23 and IL-12 in host defense against Klebsiella pneumoniae / K.I. Happel, P.J. Dubin, M. Zheng et al. // J.Exp.Med.-2005.-Vol.202.P.761-769. 177. Harrington, L.E. Interleukin 17-producing CD4+ effector T cells develop via a lineage distinct from the T helper type 1 and 2 lineages / L.E. Harrington, R.D. Hatton, P.R. Mangan et al. // Nat. Immunol.- 2005.-Vol.6.-P. 1123–1132. 178. Harrington, L.E. Memory CD4 T cells emerge from effector T-cell progenitors / L.E. Harrington, K.M. Janowski, J.R. Oliver et al. // Nature.-2008.-Vol. 452.-P. 356–360. 179. Haynes, L. Effects of aging on T cell function / L. Haynes, A.C. Maue // Curr. Opin. Immunol. -2009.-Vol.21.-P.414–417. 180. He, D. IL-17 promotes tumor development through the induction of tumor promoting microenvironments at tumor sites and myeloid-derived suppressor cells / D. He, H. Li, N. Yusuf et al. // J. Immunol. -2010.-Vol.184.-P. 2281–2288. 181. Heldring, N. Estrogen receptors: how do they signal and what are their targets / N. Heldring, A. Pike, S. Andersson et al. // Physiol. Rev.- 2007.-Vol. 87.-P. 905-931. 282 182. Henke, A. The role of CD8+ T lymphocytes in coxsackievirus B3-induced myocarditis / A. Henke, S.A. Huber, A. Stelzner et al.// J. Virol.- 1995.-Vol.69.P.6720–6728. 183. Hepworth, M.R. The role of sex hormones in the development of Th2 immunity in a gender-biased model of Trichuris muris infection / M.R. Hepworth, M.J. Hardman, R.K. Grencis // Eur. J. Immunol.-2010.-Vol.40.-P.406–416. 184. Hershkovitz, O. Dengue virus replicon expressing the nonstructural proteins suffices to enhance membrane expression of HLA class I and inhibit lysis by human NK cells / O. Hershkovitz, A. Zilka, A. Bar-Ilan et al. // J Virol.- 2008.-Vol.82(15).-P.7666–76. 185. Hiar, R.E.L. Enteroviral central nervous system infections in children of region of Monastir, Tunisia: diagnosis, laboratory findings of cerebrospinal fluid and clinical manifestations / R.E.L. Hiar, S.Haddad, H.Jaidne et al. // Indian J.Virol. -2012.-Vol. 23(3).-P. 294-302. 186. Hibbert, L. IL-27 and IFN-α signal via Stat1 and stat3 and induce T-Bet and IL12Rβ2 in naïve T cells / L. Hibbert, S. Pflanz, R. De Waal Malefyt et al. // J.Interferon Cytokine Res.-2003.-Vol.23.-P.513-522. 187. Hober, D. Enteroviral pathogenesis of type 1 diabetes: queries and answers / D. Hober, E.K. Alidjinou // Curr Opin Infect Dis. - 2013.-Vol.26(3).-P.263-9. 188. Hoenen, A. West Nile virus-induced cytoplasmic membrane structures provide partial protection against the interferon-induced antiviral MxA protein / A. Hoenen, W. Liu, G. Kochs et al. // J Gen Virol.- 2007.-Vol.88(Pt 11).-P.3013–7. 189. Hoffmann, F. Intracellular T-cell cytokine levels are age-dependent in healthy children and adults / F. Hoffmann, M.H. Albert, S. Arenz et al. // Eur. Cytokine Netw. - 2005.-Vol.16.-P.283-288. 190. Hooper, D.C. The production of antibody by invading В cells is required for the clearance of rabies virus from the central nervous system / D.C.Hooper, T.W.Phares, M.J.Fabis et al.// PLoS Negl Trop Dis.-2009.-V.3.-P.e535. 191. Hou, W. Th17 cells enhance viral persistence and inhibit T cell cytotoxicity in a model of chronic virus infection / W. Hou, H.S. Kang, B.S. Kim. // J. Exp. Med.2009.-Vol. 206.-P. 313–328. 283 192. Huang, W. Requirement of interleukin-17A for systemic anti-Candida albicans host defense in mice / W. Huang, L. Na, P.L. Fidel et al. // I.Infect.Dis.-2004.-Vol.190.P.624-631. 193. Huber, S.A. T cells expressing the γδ T-cell receptor potentiate coxsackievirus B3induced myocarditis / S.A.Huber, A. Moraska, M.Choate // J. Virol.- 1992.-Vol.66.P.6541–6546. 194. Huber, S.A. Differential Th1 and Th2 cell responses in male and female BALB/c mice infected with coxsackievirus group B type 3 / S.A.Huber, B.Pfaeffle // J. Virol.1994.-Vol.68.-P.5126–5132. 195. Huber, S.A. Apoptosis in coxsackievirus B3-induced myocarditis and dilated cardiomyopathy / S.A. Huber, R.C. Budd, K. Rossner et al. // Ann. NY Acad. Sci. 1999.-Vol.887.-P.181–190. 196. Huber, S.A. Hormonal regulation of CD4(+) T-cell responses in coxsackievirus B3induced myocarditis in mice / S.A. Huber, J. Kupperman, M.K. Newell // J Virol.1999.-Vol.73 (6).-P.4689-95. 197. Huber, S. T cells expressing the Vγ1 T-cell receptor enhance virus-neutralizing antibody response during coxsackievirus B3 infection of BALB/c mice: differences in male and female mice / S.Huber, D.Sartini // Viral Immunol. -2005.-Vol.18.-P.730– 739. 198. Huhn, M.H. IFN-γ production dominates the early human natural killer cell response to coxsackievirus infection / M.H. Huhn, M. Hultcrantz, K. Lind et al. // Cell. Microbiol. - 2008.-Vol.10.-P.426–436. 199. Infante-Duarte, C. Microbial lipopeptides induce the production of IL-17 in Th cells / C. Infante-Duarte, H.F. Horton, M.C. Byrne et al. // J.Immunol.-2000.-Vol.165.P.6107-6115. 200. Ireland, D.D. RNase L mediated protection from virus induced demyelination / D.D. Ireland, S.A. Stohlman, D.R. Hinton et al. // PLoS Pathog. - 2009.-Vol. 5.P.e1000602. 201. Itano, A.A. Antigen presentation to naive CD4 T cells in the lymph node / A.A. Itano, M.K. Jenkins // Nat Immunol.- 2003.-Vol.4.-P.733–739. 284 202. Ito, T. TSLP-activated dendritic cells induce an inflammaory T helper 2 cell response through OX40 ligand / T. Ito, Y.H.Wang, O.Duramad et al.// J.Exp.Med.-2005.Vol.202.-P.1213-23. 203. Ivanov, I.I. The orphan nuclear receptor RORt directs the differentiation program of proinflammatory IL-17+ T helper cells / I.I. Ivanov, B.S. McKenzie, L. Zhou et al. // Cell.-2006.-Vol. 126.-P.1121–1133. 204. Jakel, S. Differential interferon responses enhance viral epitope generation by myocardial immunoproteasomes in murine enterovirus myocarditis / S. Jakel, U. Kuckelkorn, G. Szalay et al. // Am. J. Pathol.-2009.-Vol.175.-P.510–518. 205. Janeway, С.А. Immunobiology: The Immune System in Health and Disease / C.A. Janeway, P. Travers, M. Walport et al.- Churchill Livingstone; 6th Revised edition edition.-2004.-848 p. 206. Jankovic, D. Single cell analysis reveals that IL-4 receptor/Stat6 signaling is not required for the in vivo or in vitro development of CD4+ lymphocytes with a Th2 cytokine profile / D. Jankovic, M.C. Kullberg, N. Noben-Trauth et al. // J. Immunol.2000.-Vol. 164.-P. 3047–3055. 207. Jetten, A.M. The ROR nuclear orphan receptor subfamily: critical regulators of multiple biological processes / A.M. Jetten, S. Kurebayashi, E. Ueda // Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol.-2001.-Vol. 69.-P. 205–247. 208. Jiang, D. Identification of three interferon-inducible cellular enzymes that inhibit the replication of hepatitis C virus / D. Jiang, H. Guo, C. Xu et al. // J Virol.- 2008.-Vol. 82(4).-P.1665–78. 209. Jiang, Z. CVB3-induced viral myocarditis by in vivo Th2 polarization via hydrodynamics-based interleukin-4 gene transfer / Z. Jiang, W. Xu, K. Li et al. // J Gene Med.- 2008.-Vol.10 (8).-P.918-29. 210. Joetham, A. Plasticity of regulatory T cells: subversion of suppressive function and conversion to enhancement of lung allergic responses / A. Joetham, S. Matsubara, M. Okamoto et al. // J. Immunol.-2008.-Vol. 180.-P. 7117–7124. 211. Johnston, L.J. Langerhans cells migrate to local lymph nodes following cutaneous infe infection with an arbovirus / L.J. Johnston, G.M. Halliday, N.J.C. King // J Invest Dermatol.-2000.-Vol.114 (3).-P.560-568. 285 212. Johnston, R.J. Bcl6 and Blimp-1 are reciprocal and antagonistic regulators of T follicular helper cell differentiation / R.J.Johnston, A.C.Poholec, D.DiToro et al. // Science.-2009.-Vol.325 (5943).-P.1006-10. 213. Jones, M. Dengue virus inhibits alpha interferon signaling by reducing STAT2 expression / M. Jones, A. Davidson, L. Hibbert et al. // J Virol.- 2005.-Vol.79.P.5414–20. 214. Joshi, N.S. Inflammation directs memory precursor and short-lived effector CD8(+) T cell fates via the graded expression of T-bet transcription factor / N.S.Joshi, Е.Cui, A.Chandele et al. // Immunity.-2007.-Vol.27.-P.281-295. 215. Jounai, N. The Atg5 Atg12 conjugate associates with innate antiviral immune responses / N. Jounai, F. Takeshita, K. Kobiyama et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A.- 2007.-Vol.104 (35).-P.14050–14055. 216. Junjhon, J. Influence of pr-M cleavage on the heterogeneity of extracellular dengue virus particles / J. Junjhon, T.J. Edwards, U. Utaipat et al. // J Virol.- 2010.-Vol.84.P.8353–8. 217. Kaiser, R. Laboratory findings in tick-borne encephalitise correlation with clinical outcome / R. Kaiser, H. Holzmann // Infection. - 2000.-Vol.28 (2).-P.78-84. 218. Kallies, A. Distinct regulation of effector and memory T-cell differentiation / A. Kallies // Immunol. & Cell Biol.-2008.-Vol.86.-P.325-332. 219. Kanda, N. Estrogen enhances immunoglobulin production by human PBMCs / N. Kanda, K. Tamaki // J. Allergy Clin. Immunol.-1999.-Vol.103.-P.282–288. 220. Kapustin, S. HLA class II molecular polymorphisms in healthy Slavic individuals from North-Western Russia / S. Kapustin, A. Lyshchov, J. Alexandrova et al. // Tissue Antigens.-1999.-Vol.54(5).-P.517-20. 221. Katamura, K. Non-progressive viral myelitis in X-linked agammaglobulinemia / K. Katamura, H. Hattori, T. Kunishima et al. // Brain Dev. - 2002.-Vol.24.-P.109–111. 222. Kato, A. TLR3- and Th2 cytokine-dependent production of thymic stromal lymphopoietin in human airway epithelial cells / A. Kato, S.J. Favoreto, P.C. et al. // J. Immunol. -2007.-Vol.15, 179(2).-P.1080-1087. 223. Kato, H. Differential roles of MDA5 and RIG-I helicases in the recognition of RNA viruses / H. Kato, O. Takeuchi, S. Sato et al. // Nature. - 2006.-Vol. 441.-P.101–105. 286 224. Kemball, C.C. Enumeration and functional evaluation of virus-specific CD4+and CD8+ T cells in lymphoid and peripheral sites of coxsackievirus B3 infection / C.C. Kemball, S. Harkins, J.L. Whitton et al.// J. Virol.-2008.-Vol.82.-P.4331–4342. 225. Kemball, C.C. Coxsackievirus B3 inhibits antigen presentation in vivo, exerting a profound and selective effect on the MHC class I pathway / C.C. Kemball, S. Harkins, J.K. Whitmire et al. // PLoS Path.- 2009.-Vol.5.P.E1000618 226. Kemball, C.C. Type B coxsackieviruses and their interactions with the innate and adaptive immune systems / C.C. Kemball, A. Mehrdad, J.L. Whitton // Future Microbiol.- 2010.- Vol.5(9).-P. 1329–1347. 227. Kemeny, D.M. The role of the T follicular helper cells in allergic disease / D.M. Kemeny // Cellular &Molecular Immunology.-2012.-Vol.9.-P.386-389. 228. Khan, D. Estrogen increases, whereas IL-27 and IFN-gamma decrease, splenocyte IL17 production in WT mice / D. Khan, R. Dai, E. Karpuzoglu et al. // Eur. J. Immunol.2010.-Vol.40(9).-P.2549–56. 229. King, I.L. IL-4-producing CD4+ T cells in reactive lymph nodes during helminth infection are T follicular helper cells / I.L. King, M. Mohrs // J. Exp. Med.- 2009.Vol. 206.-P.1001–1007. 230. King, N.J. Immunopathology of flavivirus infections / N.J. King, D.R. Getts, M.T. Getts et al. // Immunol Cell Biol.-2007.-Vol.85.-P.33–42. 231. Kissick, H.T. Androgens alter T-cell immunity by inhibiting T-helper 1 differentiation / H.T. Kissick, M.G. Sanda, L.K. Dunn et al. // Proc. Natl. Acad. Sci. U.S.A.-2014.Vol. 111.-P. 9887–9892. 232. Kleinschek, M.A. IL-23 enhances the inflammatory cell response in Cryptococcus neoformans infection and induces a cytokine pattern distinct from IL-12 / M.A. Kleinschek, U. Muller, S.J. Brodie et al. // J.Immunol.- 2006.-Vol.176.-P.1098-1106. 233. Knipe, D.M. Fields virology/ editors -in-chief, D.M. Knipe, Peter M. Howley. – 6th ed. Wolters Kluwer Lippincott Williams&Wilkins.-2013.-2456 p. 234. Koenig, A. The role of sex differences in autophagy in the heart during coxsackievirus B3 induced myocarditis / A. Koenig, A. Sateriale, R.C. Budd et al. // J. Cardiovasc. Transl. Res. -2014.-Vol. 7(2).-P. 182–191. 235. Kolls, J.K. Interleukin-17 family members and inflammation / J.K. Kolls, A. Linden // Immunity.-2004.-Vol.21.-P.467-476. 287 236. Krishnan, M.N. Rab 5 is required for the cellular entry of dengue and West Nile viruses / M.N. Krishnan, B. Sukumaran, U. Pal et al. // J Virol.-2007.-Vol.81.P.4881–5. 237. Krylova, N.V. Molecular Mechanisms of Interaction Between Human Immune Cells and Far Eastern Tick-Borne Encephalitis Virus Strains / N.V. Krylova, T.P. Smolina, G.N.Leonova // Viral Immunol. 2015. Feb 19 [Epub ahead of print]. 238. Kurt-Jones, E.A. Pattern recognition receptors TLR4 and CD14 mediate response to respiratory syncytial virus / E.A. Kurt-Jones, L.Popova, L.Kwinn et al. // Nat. Immune. -2000.-Vol.1.-P. 398. 239. Lambert, K.C. Estrogen receptor alpha (ERalpha) deficiency in macrophages results in increased stimulation of CD4+ T cells while 17beta-estradiol acts through ERalpha to increase IL-4 and GATA-3 expression in CD4+ T cells independent of antigen presentation / K.C. Lambert, E.M. Curran, B.M. Judy et al. // J. Immunol.-2005.Vol.175(9).-P.5716–23. 240. Lane, T.E. A central role for CD4 (+) T cells and RANTES in virus-induced central nervous system inflammation and demyelination / T.E. Lane, M.T.Liu, B.P.Chen et al. // J.Virol.-2000.-Vol. 74(3).-P.1415-24. 241. Langrish, C.L. IL-23 drives a pathogenic T cell population that induces autoimmune inflammation / C.L. Langrish, Y. Chen, W.M. Blumenschein et al. // J.Exp.Med.2005.-Vol.201.-P.233-240. 242. Lanier, LL. Evolutionary struggles between NK cells and viruses / L.L. Lanier // Nat Rev Immunol. - 2008.-Vol.8.-P.259–68. 243. Lanzavecchia, A. Understanding the generation and function of memory T cell subsets / A. Lanzavecchia, F. Salusto // Curr. Opin. Immunol. - 2005.-Vol.17.-P.326332. 244. LeibundGut-Landmann, S. Syk- and CARD9-dependent coupling of innate immunity to the induction of T helper cells that produce interleukin 17 / S. LeibundGutLandmann, O. Gross, M.J. Robinson et al. // Nat. Immunol.-2007.-Vol.8.-P.630-638. 245. Lee, B.E. Pediatric investigators collaborative network on infections in Canada (PICNIC) study of aseptic meningitis / B.E. Lee, R. Chawla, J.M. Lngley et al. // BCM Infectious Diseases.- 2006.-Vol. 6(68). 288 246. Lee, H.C. Thymic stromal lymphopoietin is induced by respiratory syncytial virus– infected airway epithelial cells and promotes a type 2 response to infection / H.C. Lee, M.B. Headley, Y.M. Loo et al. // J. Allergy Clin. Immunol.- 2012.-Vol.130(5).P.1187–1196. 247. Lee, H.K. In vivo requirement for Atg5 in antigen presentation by dendritic cells / H.K. Lee, L.M. Mattei, B.E. Steinberg et al. // Immunity. -2010.-Vol.32.-P.227–239. 248. Lee, J.H. Progesterone promotes differentiation of human cord blood fetal T cells into T regulatory cells but suppresses their differentiation into Th17 cells / J.H. Lee, B. Ulrich, J. Cho et al. // J. Immunol.-2011.-Vol. 187(4).-P.1778–8710. 249. Lee, J.H. Progesterone suppresses the mTOR pathway and promotes generation of induced regulatory T cells with increased stability / J.H. Lee, J.P. Lydon, C.H. Kim // Eur. J. Immunol.-2012.-Vol.42(10).-P.2683–96. 250. Lee, Y.K. Late developmental plasticity in the T helper 17 lineage / Y.K. Lee, H. Turner, C.L. Maynard et al. // Immunity.-2009.-Vol. 30.-P. 92–107. 251. Leipner, C. Coxsackievirus B3-induced myocarditis in MHC class II-deficient mice / C. Leipner, M. Borchers, I.Merkle et al. // J. Hum. Virol. -1999.-Vol.2.-P.102–114. 252. León, B. Regulation of TH2 development by CXCR5+dendritic cells and lymphotoxin-expressing B cells / B. León, A. Ballesteros-Tato, J.L. Browning et al. // Nat. Immunol.-2013.-Vol. 13(7).-P. 681–690. 253. Lepej, S.Z. Naïve and memory CD4+ T-cells in the cerebrospinal fluid of children with aseptic meningitis following measles-mumps-rubella vaccination and enteroviral meningitis / S.Z. Lepej, G.Tesovic, S.L. Sternak et al. // Immun.Inv.-2007.-V.36.P.321-335. 254. Leung, B.P. Combined effects of IL-12 and IL-18 on the induction of collageninduced arthritis / B.P. Leung, I.B. McInnes, E. Esfandiari et al. // J. Immunol.- 2000.Vol. 164.-P. 6495–6502. 255. Li, L. IL-4 utilizes an alternative receptor to drive apoptosis of Th1 cells and skews neonatal immunity toward Th2 / L.Li, H.H.Lee, J.J.Bell et al. // Immunity.-2004.Vol.20(4).-P.429-440. 256. Li, L. The flavivirus precursor membrane envelope protein complex: structure and maturation / L. Li, S.M. Lok, I.M. Yu et al. // Science.-2008.-Vol.319.-P.1830–4. 289 257. Li, M.O. Trancforming growth factor-β regulation of immune responses / M.O. Li, J.J. Wan, S. Sanjabi et al. // Ann.Rev.Immunol.-2006.-Vol.24.-P. 99-146. 258. Li, Z. Distinct Th17 inductions contribute to the gender bias in CVB3-induced myocarditis / Z. Li, Y. Yue, S. Xiong // Cardiovasc. Pathol.- 2013.-Vol. 22(5).-P.37382. 259. Liang, S.C. Interleukin (IL)-22 and IL-17 are coexpressed by Th17 cells and cooperatively enhance expression of antimicrobial peptides / S.C. Liang, X.Y. Tan, D.P. Luxenberg et al. // J.Exp.Med.-2006.-Vol.203.-P. 2271-2279. 260. Licon Luna, R.M. Lack of both Fas ligand and perforin protects from flavivirusmediated encephalitis in mice / R.M. Licon Luna, E.Lee, A.Mullbacher et al. // J.Virol.-2002.-V.76.-P.3202-3211. 261. Libert, C. The X chromosome in immune functions: when a chromosome makes the difference / C. Libert, L. Dejager, I. Pinheiro // Nat. Rev. Immunol.- 2010.-Vol. 10.P.594–604. 262. Lieberman, L.A. IL-23 provides a limited mechanism of resistance to acute toxoplasmosis in the absence of IL-12 // L.A. Lieberman, F. Gardillo, A.M. Owyang et al. // J.Immunol.-2004.-Vol.173.-P.1887-1893. 263. Lin, T.Y. Proinflammatory cytokine reactions in enterovirus 71 infections of the central nervous system / T.Y. Lin, S.H. Hsia, Y.C. Huang et al. // Clin Infect Dis.2003.-Vol. 36.-P.269–274. 264. Lindenbach, B.D. Flaviviridae: the viruses and their replication / B.D. Lindenbach, H.J. Thiel, C.M. Rice // Philadelphia, USA: Lippincott William & Wilkins, 2007. - P. 1101–52. 265. Liu, H.B. Estrogen receptor α mediates estrogen’s immune protection in autoimmune disease / H.B. Liu, K.K. Loo, K. Palaszynski et al. // J. Immunol.- 2003.-Vol. 171.P.6936–6940. 266. Liu, S.C. Different Cytokine Levels in Enterovirus Meningitis and Encephalitis / S.C. Liu, P.I. Lee, C.Y. Lee et al. // Infectious Diseases in Clinical Practice. - 2005.-Vol.13 (5).-P.241-246. 267. Liu, S.J. Induction of a distinct CD8 Tnc17 subset by transforming growth factor-β and interleukin-6 / S.J.Liu, J.P.Tsai, C.R.Shen et al. // J.Leukoc.Biol.-2007.-Vol.82.P.354-360. 290 268. Liu, W.J. Analysis of adaptive mutations in kunjin virus replicon RNA reveals a novel role for the flavivirus nonstructural protein NS2A in inhibition of beta interferon promoter-driven transcription / W.J. Liu, H.B. Chen, X.J. Wang et al. // J Virol.- 2004.-Vol.78(22).-P.12225–35. 269. Liu, W.J. A single amino acid substitution in the West Nile virus nonstructural protein NS2A disables its ability to inhibit alpha/beta interferon induction and attenuates virus virulence in mice / W.J. Liu, X.J. Wang, D.C. Clark et al. // J Virol.- 2006.Vol.80(5).-P.2396–404. 270. Lodge, P.A. Coxsackievirus B-3 myocarditis. Acute and chronic forms of the disease caused by different immunopathogenic mechanisms / P.A. Lodge, M. Herzum, J. Olszewski et al. // Am. J. Pathol. -1987.-Vol.128.-P.455–463. 271. Lohoff, M. Dysregulated T helper cell differentiation in the absence of interferon regulatory factor 4 / M. Lohoff, H.W. Mittrucker, S. Prechtl et al. // Proc. Natl Acad. Sci. USA.-2002.-Vol. 99.-P. 11808–11812. 272. Loke, H. Strong HLA class I – restricted T cell responses in dengue hemorrhagic fever: a double-edged sword? / H. Loke, D.B. Bethell, C.X. Phuong et al. // J Infect Dis.-2001.-Vol. 184.-P.1369–73. 273. Lokensgard, J.R. Robust expression of TNF-alpha, IL-lbeta, RANTES, and IP-10 by human microglial cells during nonproductive infection with herpes simplex virus / J.R. Lokensgard, S. Hu, W. Sheng et al. // J Neurovirol.-2001.-Vol. 7.-P. 208-219. 274. Lucht, F. Evidence for T-cell involvement during the acute phase of Echovirus meningitis / F.Lucht, G.Gordier, B.Pozzetto et al. // J.Med.Virology.-1992.-Vol. 38.P.92-96. 275. Lund, J.M. Coordination of early protective immunity to viral infection by regulatory T cells / J.M. Lund, L. Hsing, T.T. Pham et al. // Science.-2008.-Vol.320.-P.12201224. 276. Lv, K. Galectin-9 administration ameliorates CVB3 induced myocarditis by promoting the proliferation of regulatory T cells and alternatively activated Th2 cells / K. Lv, W. Xu, C. Wang et al. // Clin Immunol.- 2011.-Vol.140 (1).-P.92-101. 277. Maggi, E. Th2-like CD8+ T cells showing B cell helper function and reduced cytolytic activity in human immunodeficiency virus type 1 infection // E. Maggi, M.G. Giudizi, R. Biagiotti et al. // J. Exp. Med.-1994.-Vol.180.-P. 489. 291 278. Malathi, K. Small self-RNA generated by RNase L amplifies antiviral innate immunity / K. Malathi, B. Dong, M.Jr. Gale et al. // Nature.- 2007.-Vol. 448.-P.816– 819. 279. Malavige, G.N. HLA class I and class II associations in dengue viral infections in a Sri Lankan population / G.N. Malavige, T. Rostron, L.T. Rohanachandra et al. // PLoS One.-2011.-Vol.6:e20581. 280. Mancini, M. Immunochemical guatitation of antigens by single radial immynodifusion / M.Mancini, A.O.Carbonata, J.F Heremans // Jmmynochemistry.1965.-Vol. 2.-P. 235-254. 281. Mangalam, A.K. HLA Class II Molecules Influence Susceptibility vs Protection in Inflammatory Diseases by Determining the Cytokine Profile / A.K. Mangalam, V. Taneja, C.S. David // J Immunol.- 2013.-190(2).-Р. 513–519. 282. Mangan, P.R. Transforming growth factor-β induces development of the T(H)17 lineage / P.R. Mangan, L.E. Harrington, D.B. O’Quinn et al. // Nature.-2006.Vol.441.-P.231-234. 283. Mantadakis, E. Echovirus 30 outbreak associated with a high meningitis attack rate in Thrace, Greece. / E. Mantadakis, V. Pogka, A. Voulgari-Kokota et al. // Pediatr. Infect. Dis. J.-2013.-Vol. 32(8).-P.914-6. doi: 10.1097/INF.0b013e31828f875c. 284. Marelli-Berg, F.M. Memory T-cell trafficking: new directions for busy commuters / F.M. Marelli-Berg, H. Fu, F. Vianello et al. // Immunology.-2010.-Vol.130.-P.158165. 285. Maret, A. Estradiol enhances primary antigen-specific CD4 T cell responses and Th1 development in vivo. Essential role of estrogen receptor alpha expression in hematopoietic cells / A. Maret, J.D. Coudert, L. Garidou et al. // Eur. J. Immunol.2003.-Vol.33(2).-P.512–21. 286. Markle, J.G. Sex differences in the gut microbiome drive hormone-dependent regulation of autoimmunity / J.G. Markle, D.N. Frank, S. Mortin-Toth et al. // Science.-2013.-Vol. 339.-P. 1084–1088 287. Martin-Orozco, N. T helper 17 cells promote cytotoxic T cell activation in tumor immunity / N. Martin-Orozco, P. Muranski, Y. Chung et al. // Immunity.- 2009.-Vol. 31.-P. 787–798. 292 288. Martin-Fontecha, A. CD40L+CD4+memory T cells migrate in a CD62P-dependent fashion into reactive lymph nodes and license dendritic cells for T cell priming / A. Martin-Fontecha, D. Baumjohann, G. Guarda et al. // J. Exp. Med.-2008.-Vol.205.P.2561-74. 289. Marzo, A.L. Tissue-level regulation of Th1 and th2 primary and memory CD4 T cells in response to Listeria infection / A.L. Marzo, V. Vezys, K. Williams et al. // J. Immunol.-2002.-Vol. 168(9).-P.4504-10. 290. Masson, F. Dendritic cells: driving the differentiation programme of T-cells in viral infections / F. Masson, A.M. Mount, N.S. Wilson, G.T. Belz // Immunol Cell Biol.2008.-Vol.86.-P.333–42. 291. Matsubara, N. Mononuclear cells and cytokines in the cerebrospinal fluid of Echovirus 30 meningitis patients / N.Matsubara, T.Matsuoka, K.Katayama, T.Yoshitomi et al. // Scand J Infect Dis.-2000.-V.32.-P.471-474. 292. Matsumoto, M. TLR3: interferon induction by double-stranded RNA including poly (I:C) / M. Matsumoto, T. Seya // Adv Drug Deliv Rev.- 2008.-Vol. 60.-P.805–812. 293. McHeyzer-Williams, L.J. Developmentally distinct Th cells control plasma cell production in vivo / L.J. McHeyzer-Williams, M.G. McHeyzer-Williams // Immunity.-2004.-Vol.20(2).-P.231-42. 294. McHeyzer-Williams, L.J. Follicular helper T cells as cognate regulators of B cell immunity / L.J.McHeyzer-Williams, N. Pelletier, L.Mark et al. // Curr.Opin.Immunol.-2009.-Vol.21(3).-P.266-73. 295. McKinstry, K.K. The potential of CD4 T-cell memory / K.K. McKinstry, T.M. Strutt, S.L. Swain // Immunology.-2010.-Vol.130.-P.1-9. 296. Melinda, M. Epidemiologic, clinical, and laboratory features of Coxsackie B1-B5 infections in the United States, 1970-79 / M.Melinda, M.H. Kaplan, J. McPhee et al. // Public Health Reports.- 1984.- Vol.99 (5).-P. 515-522 297. Mena, I. Coxsackievirus infection of the pancreas: evaluation of receptor expression, pathogenesis, and immunopathology /, C. Fischer, J.R. Gebhard et al. // Virology.2000.-Vol.271.-P.276–288. 298. Mendelsohn, M.E. Molecular and cellular basis of cardiovascular gender differences / M.E. Mendelsohn, R.H. Karas // Science.- 2005.-Vol. 308.-P.1583–1587. 293 299. Mescher, M.F. Signal required for programming effector and memory development by CD8+ T cells / M.F.Mescher, J.M.Curtsinger, P.Agarwal et al. // Immunol.Rev.2006.-Vol.211.-P.81-92. 300. Metcalf, T.U. Alphavirus-induced encephalomyelitis: antibody secreting cells and viral clearance from the nervous system / T.U.Metcalf, D.E. Griffin // J. Virol.-2011.V.85.-P.11490-11301. 301. Michalek, R.D. The metabolic life and times of a T-cell / R.D.Michalek, J.C.Rathmell // Immunol.Rev.-2010.-Vol.236.-P.190-202. 302. Michos, A.G. Aseptic meningitis in children: analysis of 506 cases / A.G. Michos, V.P. Syriopoulou, C. Hadjichristodoulou et al. // PLoS One. - 2007.-Vol. 2.-P.e674. 303. Milia, M.G. Recent outbreak of aseptic meningitis in Italy due to Echovirus 30 and phylogenetic relationship with other European circulating strains // M.G. Milia, F. Cerutti, G. Gregori et al. // J.Clin.Virol.-2013.-Vol. 58(3).-P.579-83. doi: 10.1016/j.jcv.2013.08.023. 304. Miller, J.D. Human effector and memory CD8+ T cell responses to smallpox and yellow fever vaccines / J.D. Miller, R.G. van der Most, R.S. Akondy et al.// Immunity.- 2008.-Vol.28.-P.710–722. 305. Min, B. Basophils produce IL-4 and accumulate in tissues after infection with a Th2inducing parasite / B. Min, M. Prout, J. Hu-Li et al. // J. Exp. Med.-2004.-Vol. 200.-P. 507–517. 306. Misbah, S.A. Chronic enteroviral meningoencephalitis in agammaglobulinemia: case report and literature review / S.A. Misbah, G.P. Spickett, P.C. Ryba et al. // J. Clin. Immunol.- 1992.-Vol.12.-P.266–270. 307. Miyagi, M. Effects of sex hormones on chemotaxis of human peripheral polymorphonuclear leukocytes and monocytes / M.Miyagi, H.Aoyama, M.Morishita et al. // J Periodontol.- 1992.-Vol. 63.-P. 28-32. 308. Miyaura, H. Direct and indirect inhibition of Th1 development by progesterone and glucocorticoids / Miyaura H, Iwata M. // J. Immunol.-2002.-Vol. 168(3).-P.1087– 9410. 309. Mladenova, Z. Aseptic meningitis outbreak caused by echovirus 30 in two regions in Bulgaria, May-August 2012 / Z.Mladenova, G.Buttinelli, A.Dikova et al. // Epidemiol Infect.- 2014.-Vol.142(10).-P.2159-65. doi: 10.1017/S0950268813003221. 294 310. Mo, R. Estrogen regulates CCR gene expression and function in T lymphocytes / R. Mo, J. Chen, A. Grolleau-Julius et al. // J. Immunol.-2005.-Vol 174.-P.6023–6029. 311. Modhiran, N. Subversion of innate defenses by the interplay between DENV and preexisting enhancing antibodies: TLRs signaling collapse / N. Modhiran, S. Kalayanarooj, S.Ubol // PLoS Negl Trop Dis. - 2010.-Vol.4(12).-P.e924. 312. Modlin, J.F. Perinatal transmission of coxsackievirus B3 in mice / J.F.Modlin, M.Bowman // J. Infect. Dis.-1987.-Vol.156.-P.21–25. 313. Moesker, B. Characterization of the functional requirements of West Nile virus membrane fusion / B. Moesker, I.A. Rodenhuis-Zybert, T. Meijerhof et al. // J Gen Virol. - 2010.-Vol.91.-P.389–93. 314. Molloy, E.J. Sex-specific alterations in neutrophil apoptosis: the role of estradiol and progesterone / E.J. Molloy, A.J. O’Neill, J.J. Grantham et al. // Blood. - 2003.-Vol. 102.-P. 2653-2659. 315. Mosmann, T.R. Two types of murine helper T cell clone. I. Definition according to profiles of lymphokine activities and secreted proteins / T.R. Mosmann, H. Cherwinski, M.W. Bond et al. // J.Immunol.-1986.-Vol.136.-P.2348-2357. 316. Mosmann, T.R. Functions of CD8 T-cell subsets secreting different cytokine patterns / T.R. Mosmann, L. Li, S. Sad // Semin Immunol.- 1997.-9(2).-P.87-92. 317. Moutaftsi, M. Human cytomegalovirus inhibits maturation and impairs function of monocyte-derived dendritic cells / M. Moutaftsi, A.M. Mehl, L.K. Borysiewicz et al. // Blood. - 2002.-Vol.99.-P.2913–21. 318. Mueller, Y.M. IL-15 enhances the function and inhibits CD95/Fas-induced apoptosis of human CD4+ and CD8+ effector/memory T cells / Y.M.Mueller, V.Makar, P.M.Bojczuk et al. // Int.Immunol.-2003.-Vol.15.-N.1.-P.49-58. 319. Mukhopadhyay, S. A structural perspective of the flavivirus life cycle / S. Mukhopadhyay, R.J. Kuhn, M.G.Rossmann // Nat Rev Microbiol.- 2005.-Vol.3.P.13–22. 320. Mu˜noz-Jordаn, J.L. Inhibition of alpha/beta interferon signaling by the NS4B protein of flaviviruses / J.L. Mu˜noz-Jordаn, M. Laurent-Rolle, J. Ashour et al. // J Virol. 2005.-Vol.79.-P.8004–13. 321. Murphy, K.M. Effector T cell plasticity: flexibility in the face of changing circumstances / K.M. Murphy, B. Stockinger // Nat Immunol.- 2010.-11(8).-P.674-80. 295 322. Nakae, S. Phenotypic differences between Th1 and Th17 cells and negative regulation of Th1 cell differentiation by IL-17 / S. Nakae, Y. Iwakura, H. Suto et al. // J. Leukoc. Biol.-2007.-Vol.81.-P. 1258–1268. 323. Nakaya, M. Effect of estrogens on the interferon-gamma producing cell population of mouse splenocytes / M. Nakaya, H. Tachibana, K. Yamada // Biosci. Biotechnol. Biochem.- 2006.-Vol. 70.-P.47–53. 324. Namazi, M.R. The Th1-Promoting Effects of Dehydroepiandrosterone Can Provide an Explanation for the Stronger Th1-Immune Response of Women / M.R. Namazi // Iran J. Allergy Asthma Immunol.-2009.-Vol.8(1).-P. 65-69. 325. Naugler, W.E. Gender disparity in liver cancer due to sex differences in MyD88dependent IL-6 production / W.E. Naugler, T. Sakurai, S. Kim et al.// Science.- 2007.Vol. 317.-P. 121-124. 326. Negishi, H. A critical link between Toll-like receptor 3 and type II interferon signaling pathways in antiviral innate immunity / H. Negishi, T. Osawa, K. Ogami et al. // Proc Natl Acad Sci U S A.- 2008.-Vol.23;105(51).-P.20446-51. 327. Nelson, S. Maturation of West Nile virus modulates sensitivity to antibody-mediated neutralization / S. Nelson, C.A. Jost, Q. Xu et al. // PloS Pathog.-2008.-Vol. 4(5).P.e1000060. 328. Nilsen, J. Divergent impact of progesterone and medroxyprogesterone acetate (Provera) on nuclear mitogen-activated protein kinase signaling / J. Nilsen, R.D. Brinton // Proc. Natl. Acad. Sci. U S A.- 2003.-Vol.100.-P.10506–11. 329. Nimmerjahn, F. Fcgamma receptors: old friends and new family members / F. Nimmerjahn, J.V. Ravetch // Immunity.- 2006.-Vol.24.-P.19–28. 330. Nishimura, Y. Infection mechanism of enterovirus 71 / Y. Nishimura // Uirusu. 2012.-Vol. 62(1).-P.121-8. 331. Nguyen, T.P. Protective and enhancing HLA alleles, HLA-DRB1*0901 and HLAA*24, for severe forms of dengue virus infection, dengue hemorrhagic fever and dengue shock syndrome / T.P. Nguyen, M. Kikuchi, T.Q. Vu et al. // PLoS Negl Trop Dis.-2008.- 2:e304. doi:10.1371/journal.pntd.0000304 332. Nurieva, R. Essential autocrine regulation by IL-21 in the generation of inflammatory T cells / R. Nurieva, X.O. Yang, G. Martinez et al. // Nature.-2007.-Vol.448.-P.480483. 296 333. Oberste, M.S. Molecular phylogeny and proposed classification of the simian picornaviruses / M.S. Oberste, K. Maher, M.A. Pallansch // J Virol. - 2002.-Vol. 76.P.1244–1251. 334. Oertelt-Prigione, S. The influence of sex and gender on the immune response / S. Oertelt-Prigione // Autoimmunity Reviews.-2012.-Vol. 11(9).-P. A479-485. 335. Oikarinen, M. Type 1 diabetes is associated with enterovirus infection in gut mucosa / M. Oikarinen, S. Tauriainen, S. Oikarinen et al. // Diabetes.- 2012.-Vol.61(3).-P.68791. 336. Oikarinen, S. Virus antibody survey in different European populations indicates risk association between coxsackievirus B1 and type 1 diabetes / S. Oikarinen, S. Tauriainen, D. Hober et al. // Diabetes.- 2014.-V.63(2).-P.655-62. 337. Okoye, I.S. CD4+T helper 2 cells – microbial triggers, differentiation requirements and effector functions / I.S.Okoye, M.S.Wilson // Immunology.-2011.-Vol.134.P.368-377. 338. Olsson, T. Neuronal interferon-γ immunoreactive molecule: bioactivities and purification / T. Olsson, S. Kelic, C. Edlund et al. // European Journal of Immunology.-1994.-Vol. 24 (2).-P. 308–314. 339. Olsen, N.J. Evidence that androgens modulate human thymic T cell output / N.J. Olsen, W.J. Kovacs // J. Investig. Med.-2011.-Vol. 59.-P. 32–35. 340. Orbach, H. Hyperprolactinemia and autoimmune diseases / H. Orbach, Y. Shoenfeld // Autoimmune Rev. - 2007.- Vol.6.-P. 537-542. 341. Overby, A.K. Tick-borne encephalitis virus delays interferon induction and hides its double-stranded RNA in intracellular membrane vesicles / A.K. Overby, V.L. Popov, M. Niedrig et al. // J Virol.- 2010.-Vol.84(17).-P.8470–83. 342. Paimela, T. The effect of 17beta-estradiol on IL-6 secretion and NF-kappaB DNAbinding activity in human retinal pigment epithelial cells / T. Paimela, T. Ryhanen, E. Mannermaa et al. // Immunol. Lett. -2007.-Vol.110.-P.139–144. 343. Pala, P. Flow cytometric measurement of intracellular cytokines / P.Pala, T.Hussell, P.J. Openshaw // J Immunol Methods.- 2000.-Vol.21; 243(1-2).-p.107-24. 344. Palaszynski, K. Estriol treatment ameliorates disease in males with experimental autoimmune encephalomyelitis: implications for multiple sclerosis / K. Palaszynski, H-B. Liu, K.K. Loo, R.R.Voskuhl // J. Neuroimmunol.- 2004.-Vol. 149.-P.84–89. 297 345. Palmer, E.M. IFN gamma-producing, virus-specific CD8+effector cells acquire the ability to produce IL-10 as a result of entry into the infected lung environment / E.M. Palmer, B.C.Holbrook, S.Arimilli et al. // Virology.-2010.-Vol.404.-P.225-230. 346. Papon, L. The viral RNA recognition sensor RIG-I is degraded during encephalomyocarditis virus (EMCV) infection / L. Papon, A. Oteiza, T. Imaizumi et al. // Virology. -2009.-Vol. 393.-P.311–318. 347. Parham, C. A receptor for the heterodimeric cytokine IL-23 is composed of IL-12Rβ1 and a novel cytokine receptor subunit, IL-23R / C. Parham, M. Chirica, J. Timans et al. // J.Immunol.-2002.-Vol.168.-P.5699-5708. 348. Parish, I.A. Diversity in CD8 (+) T cell differentiation / I.A.Parish, S.M.Kaech // Curr.Opin.Immunol.-2009.-Vol.21.-P.291-297. 349. Paul, W.E. How are T(H)2-type immune responses initiated and amplified? / W.E. Paul, J. Zhu // Nat. Rev. Immunol.- 2010.-Vol.10.-P.225–235. 350. Pearce, E.L. Generation of CD8 T cell memory is regulated by IL-12 / E.L.Pearce, H.Shen // J.Immunol.-2007.-Vol.179.-P.2074-2081. 351. Pedersen, I.M. Interferon modulation of cellular microRNAs as an antiviral mechanism / I.M. Pedersen, G. Cheng, S. Wieland et al. // Nature. - 2007.-Vol. 449.P.919–922. 352. Persidsky, Y. Mononuclear phagocyte immunity and the neuropathogenesis of HIV-1 infection / Y. Persidsky, H.E. Gendelman // J Leukocyte Biol.-2003. - Vol.74.-P. 691701. 353. Pflanz, S. IL-27, a heterodimeric cytokine composed of EBI3 and p28 protein, induces proliferation of naïve CD4(+) T cells / S. Pflanz, J.C. Timans, J. Cheung et al. // Immunity.-2002.-Vol.16.-P. 779-790. 354. Piccinni, M.P. Progesterone favors the development of human T helper cells producing Th2-type cytokines and promotes both IL-4 production and membrane CD30 expression in established Th1 cell clones / M.P. Piccinni, M.G. Giudizi, R. Biagiotti et al. // J. Immunol.-1995.-Vol.155(1).-P.128–33. 355. Polanczyk, M.J. Cutting edge: estrogen drives expansion of the CD4+CD25+ regulatory T cell compartment / M.J. Polanczyk, B.D. Carson, S. Subramanian et al. // J. Immunol.-2004.-Vol.173(4).-P.2227–30. 298 356. Polanczyk, M.J. Estrogen-mediated immunomodulation involves reduced activation of effector T cells, potentiation of Treg cells, and enhanced expression of the PD-1 costimulatory pathway / M.J. Polanczyk, C. Hopke, A.A. Vandenbark et al. // J. Neurosci. Res.-2006.-Vol.84(2).-P.370–81. 357. Posma, E. The effect of testosterone on cytokine production in the specific and nonspecific immune response / E. Posma, H. Moes, M.J. Heineman et al. // Am. J. Reprod. Immunol.-2004.-Vol.52.-P.237-243. 358. Powell, J.M. The effects of dehydroepiandrosterone (DHEA) on in vitro spleen cell proliferation and cytokine production / J.M. Powell, G. Sonnenfeld // J. Interferon. cytokine Res.-2006.-Vol. 26.-P.34 –9. 359. Prieto, G.A. Oestradiol potentiates the suppressive function of human CD4 CD25 regulatory T cells by promoting their proliferation / G.A. Prieto, Y. Rosenstein // Immunology.-2006.-Vol.118(1).-P.58–65. 360. Priyanka, H.P. Estrogen modulates in vitro T cell responses in a concentration- and receptor-dependent manner: effects on intracellular molecular targets and antioxidant enzymes / H.P. Priyanka, H.C. Krishnan, R.V. Singh et al.// Mol. Immunol.-2013.Vol.56(4).-P.328–39. 361. Quigley, M. A ctitical role for direct TLR2-MyD88 signaling in CD8 T-cell clonal expansion and memory formation following vaccinia viral infection / M. Quigley, J.Martinez, X.Huang et al. // Blood.-2009.-Vol.113.-P.2256-2264. 362. Radhakrishnan, S. Reprogrammed FoxP3+ T regulatory cells become IL-17+ antigenspecific autoimmune effectors in vitro and in vivo / S. Radhakrishnan, R. Cabrera, E.L. Schenk et al. // J. Immunol.-2008.-Vol. 181.-P. 3137–3147. 363. Ramsingh, A.I. T cells contribute to disease severity during coxsackievirus B4 infection / A.I. Ramsingh, W.T. Lee, D.N. Collins et al. // J. Virol.- 1999.-Vol.73.P.3080–3086. 364. Rao, R.R. The mTOR kinase determines effector versus memory CD8+T cell fate by regulating the expression of transcription factors T-bet and Eomesodermin / R.R. Rao, Q.Li, K.Odunsi et al. // Immunity.-2010.-Vol.32.-P.67-78. 365. Raphael, I. T cell subsets and their signature cytokines in autoimmune and inflammatory diseases / I. Raphael, S. Nalawade, T.N. Eagar, T.G. Forsthuber // Cytokine.- 2014 .-pii: S1043-4666(14)00539-0. doi: 10.1016/j.cyto.2014.09.011. 299 366. Reinhardt, R.L. Cytokine-secreting follicular T cells shape the antibody repertoire / R. L. Reinhardt, H. Liang, R.M. Locksley // Nat.Immunol.-2009.-Vol.10(4).-P.385-393. 367. Rengarajan, J. Interferon regulatory factor 4 (IRF4) interacts with NFATc2 to modulate interleukin 4 gene expression / J. Rengarajan, K.A. Mowen, K.D. McBride et al. // J. Exp. Med.-2002.-Vol. 195.-P. 1003–1012. 368. Rettew, J.A. Estrogens augment cell surface TLR4 expression on murine macrophages and regulate sepsis susceptibility in vivo / J.A. Rettew, Y.M. Huet, I. Marriott // Endocrinology. -2009.-Vol.150.-P.3877–3884. 369. Roberts, B.J. Sex-specific signaling through Toll-Like Receptors 2 and 4 contributes to survival outcome of Coxsackievirus B3 infection in C57Bl/6 mice / B.J. Roberts , J.A. Dragon, M. Moussawi, S.A. Huber // Biol. Sex. Differ.- 2012.-Vol.15;3(1).-P.25. doi: 10.1186/2042-6410-3-25. 370. Roberts, B.J. Sex differences in TLR2 and TLR4 expression and their effect on coxsackievirus-induced autoimmune myocarditis / B.J. Roberts, M. Moussawi, S.A. Huber // Exp Mol Pathol.- 2013.-Vol.94 (1).-P.58-64. 371. Robinson, D.P. Sex chromosome complement contributes to sex differences in coxsackievirus B3 but not influenza A virus pathogenesis / D.P. Robinson, S.A. Huber, M. Moussawi et al. // Biology of Sex differences.- 2011.-Vol.2:8 http://www.bsd-journal.com/content/2/1/8 372. Roman, E. CD4 effector T cell subsets in the response to influenza: heterogeneity, migration, and function / E. Roman, E.Miller, A.Harmsen et al. // J.Exp.Med.-2002.Vol. 196(7).-P.957-68. 373. Rose, S. Murine neonatal CD4+ cells are poised for rapid Th2 effector-like function / S.Rose, M.Lichtenheld, M.R.Foote et al. // J.Immunology.-2007.-Vol.178(5).-P.26672678. 374. Rotbart, H.A. Enteroviral infections of the central nervous system / H.A. Rotbart // Clin Infect Dis. - 1995.-20(4).-P.971-81. 375. Rubtsov, A.V. Genetic and hormonal factors infemale-biased autoimmunity / A.V. Rubtsov, K.Rubtsova, J.W.Kappler et al. // Autoimmun Rev.-2010.-Vol. 9.-P. 494498. 376. Ruzek, D. CD8+ T-cells mediate immunopathology in tick-borne encephalitis / D. Ruzek, J. Salat, M. Palus et al. // J.Virology. - 2009.-Vol. 384.-P. 1-6. 300 377. Ruzek, D. Breakdown of the blood-brain barrier during tick-borne encephalitis in mice is not dependent on CD8+ T-cells / D. Ruzek, J. Salat, S K Singh et al. // PloS One.- 2011.-Vol. 6(5).-P. e20472. 378. Sad, S. Cytokine-induced differentiation of precursor mouse CD8+ T cells into cytotoxic CD8+ cells secreting TH1 or TH2 cytokines / S. Sad, R. Marcotte, T.R. Mossmann // Immunity.-1995.-Vol.2.-P.271. 379. Sad, S. Cytotoxicity and weak CD40 ligand expression of CD8+ type 2 cytotoxic T cells restricts their potential B cell helper activity / S. Sad, L. Krishnan, R.C. Bleackley et al. // Eur. J. Immunol.-1997.-Vol.27.-P.914. 380. Sadeharju, K. The HLA-DR phenotype modulates the humoral immune response to enterovirus antigens / K. Sadeharju, M. Knip, M. Hiltunen et al. // Diabetologia.2003.-Vol.46 (8).-P.1100-5. 381. Sader, M.A. Androgen receptor gene expression in leucocytes in hormonally regulated: implications for gender differences in disease pathogenesis / M.A.Sader, K.C.McGrath, M.D.Hill et al. // Clin Endocrinol (Oxf). - 2005.-Vol. 62.-P.56-63. 382. Saha, S. Prolactin, systemic lupus erythematosus, and autoreactive B cell: lessons learnt from murine models / S.Saha, A.Tieng, K.P.Pepeljugoski et al. // Clin Rev Allergy Immunol. - 2011.-Vol. 40.-P. 8-15. 383. Sakaguchi, S. Naturally arising CD4+ regulatory T cells for immunologic selftolerance and negative control of immune responses / S.Sakaguchi // Annu.Rev.Immunol.- 2004.-Vol.22.-P.531-562. 384. Sakiani, S. Gonadal steroids and humoral immunity / S. Sakiani, N.J. Olsen, W.J. Kovacs // Nat. Rev. Endocrinol.- 2013.-Vol. 9.-P.56–62. 385. Salmond, R.J. MAPK, phosphatidylinositol 3-kinase, and mammalian target of rapamycin pathways converge at the level of ribosomal protein S6 phosphorylation to control metabolic signaling in CD8 T cells / R.J.Salmond, J.Emery, K.Okkenhaug et al. // J.Immunol.-2009.-Vol.183.-P.7388-7397. 386. Sallusto, F. Central memory and effector memory T cell subsets: function, generation, and maintenance / F. Sallusto, J. Geginat, A. Lanzavecchia // Ann.Rev.Immunol.2004.-Vol.22.-P.745-63. 301 387. Sapkal, G.N. Neutralization escape variant of West Nile virus associated with altered peripheral pathogenicity and differential cytokine profile / G.N. Sapkal, S. Harini, V.M. Ayachit et al. // Virus Res.- 2011.-Vol.158(1–2).-P.130–9. 388. Saraiva, M. The regulation of IL-10 production by immune cells / M.Saraiva, A.O’Garra // Nat.Rev.Immunol.-2010.-Vol.10.-P.170-181. 389. Sareneva, T. IFN-α and IL-12 induce IL-18 receptor gene expression in human NK and T cells / T.Sareneva, I. Julkinen, S. Matikainen // J.Immunol.-2000.-Vol.165.P.1933-1938. 390. Sato, M. Cytokine and cellular inflammatory sequence in enteroviral meningitis / M.Sato, M.Hosoya, K.Honzumi et al. // Pediatrics.-2003.-V.112 (5).-P.1103-7. 391. Schmitt, E. Th9 cells, new players in adaptive immunity / E. Schmitt, M. Klein, T.Bopp // Trends Immunol.- 2014.-Vol.35(2).-P.61-8. 392. Shearer, G.M. Th1/Th2 changes in aging / G.M. Shearer // Mech. Ageing Dev.-1997.Vol.94.-P.1-5. 393. Shooshtari, P. Correlation analysis of intracellular and secreted cytokines via the generalized integrated mean fluorescence intensity / P. Shooshtari, E.S. Fortuno 3rd, D. Blimkie // Cytometry A.-2010.-Vol.77(9).-P.873-80. doi: 10.1002/cyto.a.20943. 394. Shrestha, B. Role of CD8+T cells in control of West Nile virus infection / B. Shrestha, M.S. Diamond // J.Virol.-2004.-Vol.78.-P. 8312-8321. 395. Shrikant, P.A. Regulating functional cell fates in CD8 T cells / P.A. Shrikant, R.Rao, Q.Li et al. // Immunol Res.-2010.-Vol.46.-P.12-22. 396. Sierra, B. HLA-A, -B, -C, and -DRB1 allele frequencies in Cuban individuals with antecedents of dengue 2 disease: advantages of the Cuban population for HLA studies of dengue virus infection / B. Sierra, R. Alegre, A.B. Perez et al. / Hum Immunol.2007.-Vol. 68.-P.531–40. 397. Singh, S.K. Neuroviral infections. RNA viruses nd retroviruses / S.K.Singh, D.Ruzek.-Taylor &Francis Group, 2013.-499 p. 398. Sitati, E.M. CD4+ T-cell responses are required for clearance of West Nile virus from the central nervous system / E.M. Sitati, M.S. Diamond // J. Virol.-2006.-Vol. 80.-P. 12060-12069. 302 399. Smits, H.H. Intercellular adhesion molecule-1/LFA-1 ligation favors human Th1 development / H.H. Smits, E.C. de Jong, J.H. Schuitemaker et al. // J.Immunol.2002.-Vol.168.-P.1710-1716. 400. Stalkup, J.R. Enterovirus infections: a review of clinical presentation, diagnosis, and treatment / J.R.Stalkup, S.Chilukuri // Dermtol Clin. - 2002.-Vol.20.-P. 217-223. 401. Stassen, M. Human CD25+ regulatory T cells: two subsets defined by the integrins α 4 β 7 or α 4 β1 confer distinct suppressive properties upon CD4+ T helper cells / M. Stassen, S. Fondel, T. Bopp et al. // Eur.J.Immunol.-2004.-Vol.34.-P.1303-1311. 402. Steil, B.P. Cis-active RNA elements (CREs) and picornavirus RNA replication / B.P. Steil, D.J. Barton // Virus Res. -2009.-Vol. 139(2).-P.240–252. 403. Stemberger, C. Origin of CD8+effector and memory T cell subsets / C.Stemberger, M.Neuenhahn, V.R.Buchholz et al. // Cell &Mol.Immunol.-2007.-Vol.4 (6).-P.399405. 404. Stephens, H.A. HLA-A and -B allele associations with secondary dengue virus infections correlate with disease severity and the infecting viral serotype in ethnic Thais / H.A. Stephens, R. Klaythong, M. Sirikong et al. // Tissue Antigens.-2002.Vol. 60.-P.309–18. 405. Strikas, R.A. Temporal and geographic patterns of isolates of nonpolio enterovirus in the United States, 1970-1983 / R.A. Strikas, L.J. Anderson, R.A. Parker // J Infect Dis.- 1986.-Vol. 153.-P. 346-51. 406. Stubblefield Park, S.R. T cell-, interleukin-12-, and gamma interferon-driven viral clearance in measles virus-infected brain tissue / S.R. Stubblefield Park, М. Widness, A.D. Levine et al. // J Virol.-2011.-Vol. 85.-P. 3664-3676. 407. Suh, W.K. Life of T Follicular Helper Cells / W.K. Suh // Mol Cells.- 2014.-Vol. 24. doi: 10.14348/molcells.2015.2331. 408. Sun, J. Effector T cells control lung inflammation during acute influenza virus infection by producing IL-10 / J.Sun, R.Madan, C.L.Carp et al. // Nat.Med.-2009.Vol.15.-P.277-284. 409. Sun, J. CD4 T cell help and innate-derived IL-27 induce Blimp-1-dependent IL-10 production by antiviral CTLs / J.Sun, H.Dodd, E.K.Moser et al. // Nat.Immunol.2011.-Vol.12.-P.327-334. 303 410. Sutherland, J.S. Activation of thymic regeneration in mice and humans following androgen blockade / J.S. Sutherland, G.L. Goldberg, M.V. Hammett et al. // J.Immunol.-2005.-Vol.175.-P. 2741–2753. 411. Szretter, K.J. 2-O methylation of the viral mRNA cap by West Nile virus evades ifit1dependent and -independent mechanisms of host restriction in vivo / K.J. Szretter, B.P. Daniels, H. Cho et al. // PLoS Pathog.- 2012.-Vol.8.-P.e1002698. 412. Tabor-Godwin, J.M. A novel population of myeloid cells responding to coxsackievirus infection assists in the dissemination of virus within the neonatal CNS / J.M. Tabor-Godwin, C.M. Ruller , N. Bagalso et al. // J Neurosci.-2010.- Vol.23;30(25).-P.8676-91. doi: 10.1523/JNEUROSCI.1860-10.2010. 413. Takaoka, A. Interferon signalling network in innate defence / A. Takaoka, H. Yanai // Cell Microbiol. - 2006.-Vol.8.-P.907–22. 414. Takeba, Y. Txk, a member of nonreceptor tyrosine kinase of Tec family, acts as a Th1 cell-specific transcription factor and regulates IFN-γ gene transcription / Y. Takeba, H. Nagafuchi, M. Takeno et al. // J.Immunol.-2002.-Vol.168.-P.2365-2370. 415. Takeda, A. Cutting edge: role of IL-27/WSX-1 signaling for induction of T-bet through activation of STAT1 during initial Th1 commitment / A.Takeda, S. Hamano, A. Yamanaka et al. // J.Immunol.-2003.-Vol.170.-P. 4886-4890. 416. Takemoto, N. Cutting edge: IL-12 inversely regulates T-bet and eomesodermin expression during pathogen-induced CD8+T cell differentiation / N.Takemoto, A.M.Intlekofer, J.T.Northrup et al. // J.Immunol.-2006.-Vol.177.-P.7515-7519. 417. Talavera, D. IL8 release, tight junction and cytoskeleton dynamic reorganization conducive to permeability increase are induced by dengue virus infection of microvascular endothelial monolayers / D. Talavera, A. M. Castillo, M. C. Dominguez et al. // Journal of General Virology.-2004.-Vol.85 (7).-P.1801–1813. 418. Tam, P.E. Coxsackievirus myocarditis: interplay between virus and host in the pathogenesis of heart disease/ P.E. Tam // Viral. Immunol. - 2006.-Vol.19.-P.133– 146. 419. Tan, X. An outbreak of echovirus 33 in schools in China in 2013 / X.Tan, L.Gao, X.Ma et al.// Arch Virol.-2014.-Vol.159(9).-P.2233-41. doi: 10.1007/s00705-0142059-6. 304 420. Tang, S. Increased CD8+ T-cell function following castration and immunization is countered by parallel expansion of regulatory T cells / S. Tang, M.L. Moore, J.M. Grayson, P. Dubey // Cancer Res. -2012.-Vol.72.-P.1975–1985. 421. Tanriverdi, F. The hypothalamic-pituitary-gonadal axis: immune function and autoimmunity / F. Tanriverdi, L.F. Silveira, G.S. MacColl, P.M. Bouloux // J. Endocrinol. -2003.-Vol.176.-P. 293–304. 422. Thornton, A.M. Cutting edge: IL-2 is critically required for the in vitro activation of CD4+CD25+ T cell suppressor function / A.M. Thornton, E.E. Donovan, C.A. Piccirillo et al. // J.Immunol.-2004a.-Vol.172.-P. 6519-6523. 423. Thornton, A.M. Activation requirements for the induction of CD4+CD25+ T cells suppressor function / A.M. Thornton, C.A. Piccirillo, E.M. Shevach // J.Eur.Immunol.-2004b.-Vol.34.-P.366-367. 424. Toh, M.L. IL-17 inhibits human Th1 differentiation through IL-12R beta 2 downregulation / M.L. Toh, M. Kawashima, S. Zrioual et al. // Cytokine.- 2009.-Vol. 48.-P. 226–230. 425. Torcia, M.G. Sex differences in the response to viral infections: TLR8 and TLR9 ligand stimulation induce higher IL10 production in males / M.G. Torcia, L. Nencioni, A.M. Clemente et al. // PLoS One.-2012.-Vol. 7.-P.e39853 426. Trandem, K. Highly activated cytotoxic CD8 T cells express protective IL-10 at the peak of coronavirus-induced encephalitis / K.Trandem, J.Zhao, E.Fleming et al. // J.Immunol.-2011.-Vol.186.-P.3642-3652. 427. Triantafilou, K. Coxsackievirus B4-induced cytokine production in pancreatic cells is mediated through toll-like receptor 4 / K. Triantafilou, M..Triantafilou // J. Virol.2004.-Vol.78.-P.11313–11320. 428. Trowsdale, J. The MHC, disease and selection / J. Trowsdale // Immunol Lett. 2011.-Vol.137.-P.1–8. 429. Tsai, Y.T. Human TLR3 recognizes dengue virus and modulates viral replication in vitro / Y.T. Tsai, S.Y. Chang, C.N. Lee et al. // Cell Microbiol.- 2009.-Vol.11.P.604–15. 430. Ubol, S. Mechanisms of immune evasion induced by a complex of dengue virus and preexisting enhancing antibodies / S. Ubol, W. Phuklia, S. Kalayanarooj et al. // J Infect Dis.- 2010.-Vol.201(6).-P.923–35. 305 431. Valor, L. Estradiol-dependent perforin expression by human regulatory T-cells / L. Valor, R. Teijeiro, C. Aristimuno et al. // Eur. J. Clin. Invest.-2011.-Vol.41(4).-P.357– 64. 432. Vander Heiden, M.G. Understanding the Warburg effect: the metabolic requirements of cell proliferation / M.G.Vander Heiden, L.C.Cantley, C.B.Thompson // Science.2009.-Vol.324.-P.1029-1033. 433. Vaughn, D.W. Dengue viremia titer, antibody response pattern, and virus serotype correlate with disease severity / D.W. Vaughn, S. Green, S. Kalayanarooj et al. // J Infect Dis.- 2000.-Vol.181.-P.2–9. 434. Vinuesa, C.G. How T cells earn the follicular rite of passage / C.G. Vinuesa, J.G. Cyster // Immunity.-2011.-Vol.35.-P.671–680. 435. Vieira, P.L. IL-10-secreting regulatory T cells do not express FoxP3 but have comparable regulatory function to naturally occurring CD4+CD25+ regulatory T cells / P.L. Vieira, J.R. Christensen, S. Minaee et al. // J.Immunol.-2004.-Vol.172.-P.59865993. 436. Walldén, J. Effect of HLA genotype or CTLA-4 polymorphism on cytokine response in healthy children / J. Walldén, J. Ilonen, M. Roivainen et al. // Scand J Immunol.2008.-Vol. 68(3).-P.345-50. 437. Wan, Y.Y. Regulatory T-cell functions are subverted and converted owing to attenuated Foxp3 expression / Y.Y. Wan, R.A. Flavell // Nature.-2007.-Vol. 445.P.766–770. 438. Wang, C. Oestrogen modulates experimental autoimmune encephalomyelitis and interleukin-17 production via programmed death 1 / C. Wang, B. Dehghani, Y. Li et al. // Immunology.-2009.-Vol.126(3).-P.329–35. 439. Wang, J.P. Flavivirus activation of plasmacytoid dendritic cells delineates key elements of TLR7 signaling beyond endosomal recognition / J.P. Wang, P. Liu, E. Latz et al. // J Immunol.- 2006.-Vol.177(10).-P. 7114–21. 440. Wang, S.M. Cerebrospinal fluid cytokines in enterovirus 71 brain stem encephalitis and echovirus meningitis infections of varying severity / S.M. Wang, H. Y. Lei, L. Y. Su et al. // Clinical Microbiology and Infection.-2007.-Vol. 13 (7).-P.677–682. 306 441. Wang, S.M. Cytokine Immunopathogenesis of Enterovirus 71 Brain Stem Encephalitis / S.M.Wang, H.Y.Lei, C.C. Liu // Clin Dev Immunol.-2012.Vol.2012(2012), ID 876241, 8 pages, http://dx.doi.org/10.1155/2012/876241. 442. Wang, T. Toll-like receptor 3 mediates West Nile virus entry into the brain causing lethal encephalitis / T. Wang, T. Town, L. Alexopoulou et al. // Nat Med.- 2004.Vol.10(12).-P.1366–73. 443. Wang, Y. CD8+ T cells mediate recovery and immunopathology in West Nile virus encephalitis / Y.Wang, M. Lobigs, E. Lee et al. // J.Virol. -2003.-Vol. 77.-P. 1332313334. 444. Wei, R. Elevated antigen-specific Th2 type response is associated with the poor prognosis of hand, foot and mouth disease / R. Wei, L. Xu , N. Zhang et al. //Virus Res.- 2013.- Vol.177(1).-P.62-65. 445. Weinberg, A. Effect of menstrual cycle variation in female sex hormones on cellular immunity and regulation / A. Weinberg, L. Enomoto, R. Marcus et al. // J. Reprod. Immunol.-2011.-Vol.89(1).-P.70–71. 446. Weinzierl, A.O. Identification of HLA-A*01- and HLA-A*02-restricted CD8+ T-cell epitopes shared among group B enteroviruses / A.O. Weinzierl, D. Rudolf, D. Maurer et al.// J. Gen. Virol.- 2008.-Vol.89.-P.2090–2097. 447. Weinzierl, A.O. Effective chemokine secretion by dendritic cells and expansion of cross-presenting CD4−/ CD8+ dendritic cells define a protective phenotype in the mouse model of coxsackievirus myocarditis / A.O. Weinzierl, G. Szalay, H. Wolburg et al.// J. Virol.- 2008.-Vol.82.-P.8149–8160. 448. Weiskopf, D. Comprehensive analysis of dengue virus-specific responses supports an HLA-linked protective role for CD8+ T cells / D. Weiskopf, M.A. Angelo, E.L. De Azeredo et al. // Proc Natl Acad Sci U S A.-2013.-Vol. 110.-P.E2046–53. doi:10.1073/pnas.1305227110 449. Weiskopf, D. T-cell immunity to infection with dengue virus in humans [Электронный ресурс] / D.Weiskopf, A. Sette .-Электрон. дан. Front. Immunol. 2014.-doi: 10.3389/fimmu.2014.00093 450. Welsch, S. Composition and threedimensional architecture of the dengue virus replication and assembly sites / S. Welsch, S. Miller, I. Romero-Brey // Cell Host Microbe.-2009.-Vol.23.-P.365–75. 307 451. Werme, K. Tick-borne encephalitis virus NS5 associates with membrane protein scribble and impairs interferon-stimulated JAK-STAT signaling / K. Werme, M. Wigerius, M. Johansson // Cell Microbiol.- 2008.-Vol.10(3).-P.696–712. 452. Wessels, E. A proline-rich region in the coxsackievirus 3A protein is required for the protein to inhibit endoplasmic reticulum-to-Golgi transport / E. Wessels, D. Duijsings, R.A. Notebaart et al. // J. Virol. -2005.-Vol.79.-P.5163–5173. 453. Wessels, E. A viral protein that blocks Arf1-mediated COP-I assembly by inhibiting the guanine nucleotide exchange factor GBF1 / E. Wessels, D. Duijsings, T.K. Niu et al.// Dev. Cell.- 2006.-Vol.11.-P.191–201. 454. Wessels, E. Effects of picornavirus 3A proteins on protein transport and GBF1dependent COP-I recruitment / E. Wessels, D. Duijsings, K.H. Lanke et al.// J. Virol.2006.-Vol.80.-P.11852–11860. 455. Whitmire, J.K. Precursor frequency, nonlinear proliferation, and functional maturation of virus-specific CD4+T cells / J.K.Whitmire, N.Benning, J.L.Whitton // J.Immunol.-2006.-Vol.176 (5).-P.3028-36. 456. Whitmire, J.K. Increasing the CD4+T cell precursor frequency leads to competition for IFN-gamma thereby degrading memory cell quantity and quality / J.K.Whitmire, N.Benning, B.Eam et al. // J.Immunol.-2008.-Vol.180(10).-P.6777-85. 457. Whitmire, J.K. Induction and function of virus-specific CD4+ T cell responses / J.K.Whitmire // Virology.-2011.-Vol.411 (2).-P.216-228. 458. Wiegering, V. Age-related changes in intracellular cytokine expression in healthy children / V. Wiegering, M. Eyrich, C. Wunder et al. // Eur.Cytokine Netw.-2009.Vol.20.-P.75-80. 459. Wilkins, C. Recognition of viruses by cytoplasmic sensors / C.Wilkins, M.Gale // Curr.Opin.Immunol.-2010.-Vol.22 (1).-P.41-7. 460. Williams, L.M. Maintenance of the Foxp3-dependent developmental program in mature regulatory T cells requires continued expression of Foxp3 / L.M. Williams, A.Y. Rudensky // Nat. Immunol.-2007.-Vol. 8.-P. 277–284. 461. Williams, M.A. Effector and memory CTL differentiation / M.A.Williams, M.J.Bevan // Annu.Rev.Immunol.-2007.-Vol.25.-P.171-92. 308 462. Wilson, J.R. West Nile virus nonstructural protein 1 inhibits TLR3 signal transduction / J.R. Wilson, P.F. de Sessions, M.A. Leon et al. // J Virol. - 2008.-Vol.82(17).P.8262–71. 463. Witso, E. HLA-DRB1-DQA1-DQB1 genotype and frequency of enterovirus in longitudinal monthly fecal samples from healthy infants / E. Witso, O. Cinek, G. Tapia et al. // Viral Immunol.- 2012.-Vol. 25(3).-P.187-92. 464. Wong, C.Y. Generation of cytotoxic T lymphocytes during coxsackievirus B-3 infection. Model and viral specificity. / C.Y.Wong, J.J. Woodruff, J.F. Woodruff // J. Immunol. - 1977.-Vol.118.-P.1159–1164. 465. Xiao, H. Complete genome sequence analysis of human echovirus 30 isolated during a large outbreak in Guangdong Province of China, in 2012 / Xiao H, Huang K, Li L et al. // Arch.Virol.- 2014.-Vol. 159(2).-P.379-83. doi: 10.1007/s00705-013-1818-0. 466. Yan, Z.H. Relationship between HLA-DR gene polymorphisms and outcomes of hepatitis B viral infections: A meta-analysis / Z.H. Yan, Y. Fan, X.H. Wang et al. // World J Gastroenterol. - 2012.-Vol.18.-P.3119–3128. 467. Yea, J. Immune evasion strategies of flaviviruses / J. Yea, B. Zhu, Z.F. Fu et al. / Vaccine.-2013.-Vol.31.-P. 461– 471. 468. Yen, D. IL-23 is essential for T cel-mediated colitis and promotes inflammation via IL-17 and IL-6 / D. Yen, J. Cheung, H. Scheerens et al. // J.Clin.Invest.-2006.Vol.116.-P.1310-1316. 469. Yu, L. Specific requirements for elements of the 5’ and 3’ terminal regions in flavivirus RNA synthesis and viral replication / L. Yu, M. Nomaguchi, R. Padmanabhan et al. // Virology.- 2008.-Vol.374.-P.170–85. 470. Yuan, J. CXCL10 inhibits viral replication through recruitment of natural killer cells in coxsackievirus B3-induced myocarditis / J. Yuan, Z. Liu, T. Lim et al.// Circ. Res.2009.-Vol.104(5).-P.628–638. 471. Yuan, J. Th17 Cells Contribute to Viral Replication in Coxsackievirus B3-Induced Acute Viral Myocarditis / J. Yuan, Miao Yu, Qiong-Wen Lin et al. // J. Immunol.2010.-Vol.185.-P.4004-4010. 472. Yue, Y. Enhanced resistance to coxsackievirus B3-induced myocarditis by intranasal co-immunization of lymphotactin gene encapsulated in chitosan particle / Y. Yue, W. Xu, L. Hu et al. //Virology.- 2009.-Vol.386.-P.438–447. 309 473. Yue, Y. Gene therapy with CCL2 (MCP-1) mutant protects CVB3-induced myocarditis by compromising Th1 polarization / Y. Yue, J. Gui, W. Xu et al. // Mol Immunol.- 2011.-Vol.48 (4).-P.706-13. 474. Yusuf, I. Germinal center T follicular helper cell IL-4 production is dependent on signaling lymphocytic activation molecule receptor (CD150) / I.Yusuf, R.Kageyama, L.Monticelli et al. // J.Immunol.-2010.-Vol.185(1).-P.190-202. 475. Zaretsky, A.G. T follicular helper cells differentiate from Th2 cells in response to helminth antigens / A.G. Zaretsky // J. Exp. Med.-2009.-Vol.206.-P.991–999. 476. Zhang, M.A. Peroxisome proliferator-activated receptor (PPAR) alpha and -gamma regulate IFNgamma and IL-17A production by human T cells in a sex-specific way / M.A. Zhang, D. Rego, M. Moshkova et al. // Proc. Natl Acad. Sci. USA.-2012.Vol.109.-P. 9505–9510. 477. Zhang, N. CD8+T cells: foot soldiers of the immune system / N.Zhang, M.J.Bevan // Immunity.-2011.-Vol.35 (2).-P.161-168. 478. Zhao, Y. The adaptor molecule MyD88 directly promotes CD8 T cell responses to vaccinia virus / Y.Zhao, C.De Trez, R.Flynn et al. // J.Immunol.-2009.-Vol.183.P.6278-6286. 479. Zheng, Y. Interleukin-22, a T(H)17 cytokine, mediates IL-23-induced dermal inflammation and acanthosis / Y. Zheng, D.M. Danilenko, P. Valdez et al. // Nature.2007.-Vol.445.-P.648-651. 480. Zhou, L. IL-6 programs T(H)-17 cell differentiation by promoting sequential engagement of the IL-21 and IL-23 pathways / L. Zhou, I.I. Ivanov, R. Spolski et al. // Nat.Immunol.- 2007.-Vol.8.-P.967-974. 481. Zhu, J. Stat6 is necessary and sufficient for IL-4’s role in Th2 differentiation and cell expansion / J. Zhu, L. Guo, C.J. Watson et al. // J. Immunol. -2001.-Vol. 166.-P. 7276–7281. 482. Zhu, J. Conditional deletion of Gata3 shows its essential function in T(H)1-T(H)2 responses / J. Zhu, B. Min, J. Hu-Li et al. // Nat. Immunol.-2004.-Vol. 5.-P. 1157– 1165.
