Диссертация Дуденковой Н. А

Министерство образования и науки Российской Федерации
Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение
высшего профессионального образования
«Мордовский государственный педагогический институт
имени М. Е. Евсевьева»
На правах рукописи
Дуденкова Наталья Анатолиевна
МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ОСОБЕННОСТИ
РЕПРОДУКТИВНОЙ СИСТЕМЫ
ПРИ СВИНЦОВОЙ ИНТОКСИКАЦИИ
(экспериментальное исследование)
ДИССЕРТАЦИЯ
на соискание ученой степени кандидата биологических наук
06.02.01 – Диагностика болезней и терапия животных, патология,
онкология и морфология животных
Научный руководитель:
доктор биологических наук, профессор,
Шубина Ольга Сергеевна.
Саранск – 2015
СОДЕРЖАНИЕ
1. ВВЕДЕНИЕ...................................................................................................... 3
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ.................................................................................... 7
2.1. Строение семенников и особенности протекания в них процесса
сперматогенеза.................................................................................................
7
2.2. Строение яичников и особенности протекания в них процесса
фолликулогенеза.............................................................................................. 16
2.3. Влияние тяжелых металлов (в том числе и свинца) на репродуктивную систему человека и животных................................................................ 24
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ…………………...……... 32
3.1. Общая характеристика экспериментального материала……………... 33
3.2. Характеристика весовых параметров половых желез экспериментальных животных…………………………………………………………... 34
3.3. Морфометрическое исследование семенников самцов белых крыс… 35
3.4. Цитологическая оценка состояния и репродуктивная активность
семенников самцов белых крыс…………...……………………………….. 36
3.5. Исследование репродуктивности семенников самцов белых крыс…. 38
3.6. Морфометрическое исследование яичников самок белых крыс…….. 39
3.7. Определение стадий эстрального цикла самок крыс методом
влагалищных мазков………………………………………………………… 40
3.8. Методы статистической обработки результатов исследования……... 41
4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ……………...……. 42
4.1. Морфофункциональные изменения семенников самцов белых крыс
в норме и при воздействии ацетата свинца……………...………………… 42
4.1.1. Морфологические изменения семенников самцов белых крыс в
норме и при воздействии ацетата свинца…………………………..…… 42
4.1.2. Функциональные изменения семенников самцов белых крыс в
норме и при воздействии ацетата свинца……………………………..… 59
4.2. Морфофункциальные изменения яичников самок белых крыс в
норме и при воздействии ацетата свинца.....................................................
70
4.2.1. Морфологические изменения яичников самок белых крыс в
норме и при воздействии ацетата свинца................................................. 70
4.2.2. Функциональные изменения яичников самок белых крыс в
норме и при воздействии ацетата свинца………………………..……… 88
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ..................................... 96
ЗАКЛЮЧЕНИЕ.................................................................................................... 112
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ (РЕКОМЕНДАЦИИ)........................... 114
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ............................................ 115
2
1. ВВЕДЕНИЕ
Актуальность темы. Экзогенное воздействие свинца на репродуктивную систему организма является важным аспектом в прогнозировании и предупреждении патологии беременности и родов у человека и животных (Волощенко О. И., Мудрый И. В., 1991; Савельева Г. М. и соавт., 1991; Полякова
А. Н. и соавт., 1995; Saxena D. K. et al., 1994; Gupta G., 1997; Schneider H.,
1997; Torry D. S., Torry R. J., 1997; Reichrtova E. et al., 1998). Однако до сих
пор остается неясным вопрос о влиянии ацетата свинца на морфофункциональное состояние мужских и женских половых желез (Вылегжанина Т. А.,
Кузнецова Т. Е., Манеева О. А. и соавт., 1993; Корнева Е. В., 2003; Нарбутова Т. Е., 2011; Butrimovitz G. P., 1983; Sallmen M., 2001; Sallmen M.,
Lindbohm L., Anttila A. et al., 2000).
В условиях падения рождаемости и высокого уровня общей смертности
населения проблема охраны репродуктивного здоровья приобретает особую,
не только медицинскую, но и социальную значимость. Уровень заболеваемости мужчин в плане репродуктивной патологии неуклонно растет. Среди
этиологических факторов, вызывающих бесплодие, практически всеми исследователями
выделяются
воздействия
факторов
внешней
среды
(Галимов Ш. Н., Амирова З. К., Галимова З. К., 2005; Снакин В. В., 1999).
Данная проблема приобретает особую актуальность в настоящее время и в
связи с тем, что параллельно с увеличением степени загрязнения окружающей среды и ослаблением контроля за ее качеством, наблюдается рост так
называемого идиопатического бесплодия, то есть тех его форм, при которых
найти явную причину патологических изменений в организме пациента не
представляется возможным (Божедомов В. А., Громенко Д. С., Ушакова И. В.
и соавт., 2009; Вылегжанина Т. А., Кузнецова Т. Е., Рыжковская Е. Л., 2008).
Механизмы этих нарушений интенсивно изучаются. Но по некоторым принципиальным аспектам рассматриваемой проблемы единое мнение отсутствует. Поэтому возникла необходимость изучения воздействия ацетата свинца
3
(проведения экспериментального исследования) на мужские и женские половые железы в период постнатального развития организма.
Цель исследования: анализ поражения семенников и яичников белых
крыс ацетатом свинца в условиях эксперимента.
Задачи исследования:
1. Изучить морфологию семенников и яичников белых крыс, а также
особенности протекания в них процессов сперматогенеза и фолликулогенеза
(контроль).
2. С помощью гистохимических и морфометрических методов исследования изучить изменения, происходящие в семенниках и яичниках белых
крыс при воздействии ацетата свинца.
3. Выяснить влияние ацетата свинца на особенности протекания процессов сперматогенеза и фолликулогенеза.
4. Изучить влияние ацетата свинца на эстральный цикл самок белых
крыс.
Научная новизна. Установлено, что ацетат свинца влияет на морфофункциональное состояние мужских и женских половых желез, а также протекающие в них процессы образования и формирования половых клеток. Доказано, что при воздействии ацетата свинца снижается репродуктивность половых желез.
Научно-практическая значимость работы. Полученные данные по
морфофункциональным изменениям половых желез белых крыс в условиях
свинцовой интоксикации представляют интерес для сравнительной морфологии и физиологии животных и человека.
Данные по изменениям процессов сперматогенеза и фолликулогенеза
белых крыс в условиях антропогенного воздействия свинца могут быть использованы для прогнозирования наступления и течения беременности, а
также возможных форм патологий у плода.
Результаты по морфофункциональному состоянию половых желез в
условиях свинцовой интоксикации могут быть рекомендованы к использова4
нию во врачебной практике для глубокого понимания патогенеза заболеваний, связанных с нарушением репродуктивных функций в экологически неблагоприятных регионах.
Полученные экспериментальные данные могут быть использованы
анатомами, гистологами, экологами в практике научных исследований,
направленных на прогнозирование и углубленное изучение роли ацетата
свинца при оценке состояния репродуктивной системы животных, а также в
оценке их продуктивности.
Положения, выносимые на защиту:
1. Морфофункциональные изменения в яичниках и семенниках в норме
и после воздействия ацетата свинца.
2. Сперматогенез, фолликулогенез и сроки прохождения различных
стадий эстрального цикла в норме и после воздействия ацетата свинца.
Реализация результатов исследования. Материалы исследования используются в научных и учебных целях на кафедрах биологического профиля: Мордовского педагогического института; Брянского, Мордовского государственных университетов; Казанской, Санкт-Петербургской академий ветеринарной медицины; Воронежского, Омского, Оренбургского, Ставропольского аграрных университетов; Орловской, Ивановской, Костромской
сельскохозяйственных академий.
По материалам диссертации опубликовано 24 работы, в том числе
5 работ в журналах, входящих в перечень, рекомендованных ВАК Министерства образования и науки РФ и 5 работ – в журналах, входящих в базу цитирования Scopus и Web of Science.
Материалы диссертации доложены и опубликованы: на Всероссийской
научно-практической интернет-конференции с международным участием
«Окружающая среда: экологические и медицинские проблемы» (Саранск,
2011); на VI Международной заочной научно-практическая конференции
«Научная дискуссия: вопросы физики, химии, биологии» (Москва, 2013); на
XX Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых
5
«ЛОМОНОСОВ – 2013» (Москва, 2013); 3rd International Conference on Science and Technology (London, 2013); на XXIX Международной научнопрактической конференции «Инновации в науке» (Новосибирск, 2014); на
Всероссийской заочной студенческой научно-практической конференции
«Актуальные проблемы науки в студенческих исследованиях (биология, экология и химия)» (Саранск, 2014); на XXI Международной конференции студентов, аспирантов и молодых ученых «ЛОМОНОСОВ – 2014» (Москва,
2014); на Международной научно-практической конференции с элементами
научной школы для молодых ученых «50-е Евсевьевские чтения» (Саранск,
2014); на XIV Международной научно-практической конференции «Теория и
практика современной науки» (Москва, 2014); 4th European Conference on
Biology and Medical Sciences (Vienna, 2015); на V Международной научнопрактической конференции «Современная биология: актуальные вопросы»
(Санкт-Петербург, 2015).
Структура
и
объем
диссертации.
Диссертация
изложена
на
138 страницах машинописного текста и состоит из введения, обзора литературы, методов исследования, результатов собственных исследований, обсуждения результатов исследований, выводов и списка литературы, включающего
224 источника, из которых отечественных работ – 143, иностранных – 81.
Текст иллюстрирован 46 рисунками (фотографии, графики) и 12 таблицами.
6
2. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ ПО ТЕМЕ ИССЛЕДОВАНИЯ
2.1. Строение семенников и особенности протекания в них процесса
сперматогенеза
Семенники – парные органы, расположенные у человека и животных
не в полости тела, а в мошонке. Левый семенник несколько крупнее правого
и свисает ниже, что предохраняет его от ущемления в мошонке суженном
пространстве позади бедер (Самусев Р. П., Капитонова М. Ю., 2010).
У млекопитающих яички в большинстве случаев спускаются в мошонку через паховый канал и остаются там или навсегда, как у человека. В период половой деятельности семенники вновь втягиваются сокращением
m. cremasteris в полость живота через открытый паховый канал (грызуны,
сумчатые) (Стусь В. П., 2006; Liu H. X, Qin W. H., Wang G. R. et al., 1995).
Вынос семенников за пределы полости тела связан с тем, что для нормального созревания сперматозоидов необходима температура не выше 35 °C
(Дубынин В. А., Каменский А. А., Сапин М. Р., Сивоглазов В. И., 2010). Развиваясь в брюшной полости, семенники спускаются в мошонку на поздних
стадиях созревания плода под влиянием гормона, вырабатываемого плацентой (Волошин Н. А., Тополенко Т. А., 2009).
Макроциркуляторная сеть семенника состоит из совокупности приносящих и выносящих сосудов, которые проводят кровь через него. Яичковая
артерия берет свое начало непосредственно от аорты и направляется в семенник, где вступает в средостение органа, проходит между белочной оболочкой и паренхимой семенника, отдавая в радиальном направлении дочерние ветви, идущие по соединительнотканным перегородкам и входящие в
дольки, где они окружают семенные извитые канальцы и клетки Лейдига. Из
яичка кровь возвращается благодаря обширной сети венул, которые сходятся
около пахового канала и формируют яичковую вену. Венозное русло муж-
7
ских гонад существенно отличается у различных видов млекопитающих
(Desjardins C., 1993; Setchell B. P., 1970).
Семенники имеют чрезвычайно высокую чувствительность к действию
многих повреждающих факторов: нервно-психологических и инфекционнотоксических, эндокринных, физических (температурных, ионизирующего облучения, травм) (Астахов О. Б., Белкин В. Ш., 2014), влиянию сосудистых
расстройств (Нарбутова Т. Е., 2011).
Снаружи большая часть яичка покрыта серозной оболочкой – брюшиной, под которой располагается плотная соединительнотканная оболочка,
получившая название белочной, которую назвали так из-за большого количества в ней белой фиброзной ткани. Внутренний слой ее богат кровеносными сосудами – это сосудистая оболочка (Артифексов С. Б., Артюхин А. А., 2007; Бойчук Н. В., Исламов Р. Р., Улумбеков Э. Г., Челышев Ю. А., 1995). Капсула заднего края яичка резко утолщена и на некоторое расстояние распространяется вглубь железы с образованием прослоек,
которые не проходят через всю толщу железы. Поскольку эти неполные перегородки располагаются главным образом в центральной части железы, то
их вместе с утолщенным участком капсулы, из которого они исходят, называют средостением яичка (Russell L. D., Ettlin R. A., Hikim A. P. and
Clegg E. D., 1990; Самусев Р. П., Зубарева Е. В., 2011).
Средостение каждого яичка пронизано протоками, выстланными эпителием. Эти протоки образуют сеть яичка. Все семенные канальцы яичка открываются в полость протоков сети яичка (Бойчук Н. В., Исламов Р. Р.,
Улумбеков Э. Г., Челышев Ю. А., 1995).
От средостения внутрь семенника отходят перегородки, разделяющие
семенник на дольки конической формы. Каждая долька содержит от одного до
четырех извитых семенных канальцев (Кузнецова Т. Е, Манеева О. А., Рыжковская Е. Л., 2006; Малишкін І. Н., 2000).
В семенниках различают два структурно-функциональных компонента:
извитые семенные канальцы и интерстициальные клетки Лейдига, располо8
женные в рыхлой соединительной ткани между семенными канальцами. Генеративная функция (сперматогенез) осуществляется в семенных канальцах
(Рузен-Ранге Э., 1980), а эндокринная – клетками Лейдига (гландулоцитами)
(Багацька Н. В., 2004; Потапов С. Н., Горголь Н. И., Андреев А. В., 2011).
Семенник состоит из множества извитых семенных канальцев, в которых после наступления половой зрелости происходит созревание сперматозоидов. Причем у многих животных этот процесс имеет сезонный характер, а
у других видов, в том числе и человека, происходит постоянно (Нишлаг Э.,
Бере Г. М., 2005).
Извитые семенные канальцы открываются в прямые, по которым сперматозоиды попадают в сеть семенника.
Сеть семенника – это система анастомозирующих тонкостенных трубочек, продолжающаяся в выносящие канальцы придатка семенника, в котором накапливаются сперматозоиды (Хэм А., Кормак Д., 1983).
Стенку семенного канальца образует собственная оболочка, состоящая
из базального слоя, миоидного слоя и волокнистого слоя. Внутреннюю выстилку канальца образует сперматогенный эпителий, расположенный на базальной мембране.
Базальный слой (внутренний волокнистый слой), расположенный между двумя базальными мембранами (сперматогенного эпителия и миоидных
клеток), состоит из сети коллагеновых волокон.
Непосредственно кнаружи от базальной мембраны расположен футляр
из рыхлой соединительной ткани, в состав которого входит особый непрерывный слой миоидных клеток (Мирский В. Е., Михайличенко В. В., Заезжалкин В. В, 2003; Пальцев М. А., Аничков Н. М., 2001). У крыс и мышей эти
клетки хорошо развиты и обладают сократимостью, благодаря чему семенным
канальцам присущи небольшие ритмические сокращения (Харченко Т. Н.,
1988). Миоидные клетки имеют форму чешуек. У человека они мало напоминают гладкомышечные клетки. Миоидные клетки содержат актиновые микрофиламенты (Мирский В. Е., Михайличенко В. В., Заезжалкин В. В, 2003).
9
Извитые семенные канальцы выстланы сперматогенным эпителием,
который содержит клетки двух типов – это гаметы с их предшественниками
на различных стадиях дифференцировки (сперматогонии, сперматоциты
первого порядка, сперматоциты второго порядка, сперматиды, сперматозоиды) и поддерживающие клетки Сертоли (сустентоциты) (Топка Э. Г, Горпинченко И. И., Малышкин И. Н., 1993).
Клетки Сертоли располагаются на базальной мембране, имеют пирамидальную форму и достигают своей вершиной просвета извитого семенного канальца. Они делят сперматогенный эпителий на базальное и адлюминальное пространства. В базальном пространстве находятся только сперматогонии. В адлюминальном пространстве располагаются сперматоциты первого и второго порядков, сперматиды и сперматозоиды (Улумбеков Э. Г.,
Челышев Ю. А., 2001; Павлюченкова С. М., 2014).
Клетки Сертоли обеспечивают развивающиеся гаметы питательными
веществами (трофическая функция), фагоцитируют остатки цитоплазмы
формирующихся сперматозоидов и дегенерирующие половые клетки, секретируют жидкость для транспорта сперматозоидов в семенных канальцах
(Држевецкая И. А., 1983).
Клетки сперматогенного эпителия в семеннике половозрелых млекопитающих включены в процесс сперматогенеза, который представляет собой
длинную цепь цитологических преобразований, приводящих к формированию из относительно малодифференцированной сперматогонии высокоспециализированной клетки – сперматозоида (Vazquez-Memije M. E., Capin R.,
Tolosa A., El-Hafidi M., 2008).
Сперматогенез протекает в четыре периода: период размножения; период роста, в течение которого происходит заметное увеличение размеров
половых клеток; период созревания, включающий мейоз; период формирования, завершающийся появлением сперматозоидов (Соколов И. И., 1966;
Молнар Е., 1969). Пространство, на котором развертываются все изменения
клеток в стенке канальцев, можно подразделить на две обширные области:
10
базальную, прилежащую к мембране, которая ограничивает каналец, и
адлюминальную, т. е. расположенную ближе к просвету канальца (Евдокимов В. В., Селиванов Т. О., 2006).
Начальной фазой сперматогенеза является размножение сперматогоний, занимающих наиболее периферическое (базальное) положение в сперматогенном эпителии.
Согласно современным представлениям, среди сперматогонии можно
выделить два типа клеток:
1) стволовые сперматогонии, которые подразделяются на две субпопуляции: долгоживущие, резервные стволовые клетки и быстро обновляющиеся полустволовые клетки, которые делятся один раз в течение цикла сперматогенного эпителия;
2) дифференцирующиеся сперматогонии (Волошин Н. А., Тополенко Т. А., 2009).
Сперматиды представляют собой небольшие округлые клетки со сравнительно крупными ядрами. Скапливаясь около верхушек поддерживающих
клеток, сперматиды частично погружаются в их цитоплазму.
Сперматиды больше не делятся, но путем сложной перестройки. Вблизи просвета канальца они подвергаются метаморфозу, превращаясь в сперматозоиды. В ходе такого превращения они отделяются друг от друга и становятся «свободноживущими» клетками (Молнар Е., 1969; Плехова Е. И., Хижняк О. О., Левчук Л. П., 2000; Топка Э. Г., Горпинченко И. И., Малышкин И. Н., 1993).
После того, как завершено превращение сперматиды в сперматозоид,
неиспользованный при таком метаморфозе избыток цитоплазмы отбрасывается клеткой в виде остаточного тельца, которое фагоцитируется клеткой
Сертоли (Дроздов А. Л., Иванков В. Н., 2000).
Тонкий слой, покрывающий ядро, среднюю часть жгутика и хвост
(кроме его конечной части) – вот все, что остается от цитоплазмы в сперма-
11
тозоиде (Morteza K., Mansoureh M., Seyed J. M., Hamid G., 2012; Боголюбов С. В., Поздняков О. Б., Артамонов А. А., Алисенов А. М., 2014).
Однако в современной литературе чаще принято подразделять сперматогенез на три этапа, поскольку рост мужских половых клеток в ходе сперматогенеза выражен слабо (Реунов А.А., 2005).
Согласно данной концепции, первым этапом сперматогенеза является
сперматоцитогенез (Bloom W., Fawcett D. W., 1975; Реунов А. А., 2005). На
данном этапе происходит размножение сперматогоний. Пролиферация сперматогоний сопровождается образованием ряда генераций, причем каждая последующая генерация становится более дифференцированной, чем предыдущая. Данные клетки располагаются на базальной мембране семенных извитых
канальцев (Долгов В. В., 2006). С морфологической точки зрения сперматогонии представляют собой клетки округлой или овальной формы, имеющие
ЭПС, аппарат Гольджи, а также большое количество рибосом и полисом (Реунов А. А., 2005). Характерной особенностью сперматогониев является наличие половых детерминантов (зародышевой плазмы). Ряд исследований указывает на то, что в формировании данной субстанции принимает участие митохондриальный матрикс (Reunov А. А. et al., 2000; Реунов А. А., 2004).
Для млекопитающих существует четкая классификация сперматогоний
в зависимости от морфологии ядер (Leblond C. P., Clermont Y., 1952), однако
у различных групп млекопитающих количество групп, на которые можно поделить всю популяцию сперматогоний, будет отличаться. Так, у грызунов
сперматогонии делят на 3 популяции: A – незрелые, B – зрелые и сперматогонии промежуточного типа (In).
Следующая стадия сперматогонеза – мейоз. Данный процесс включает
в себя спаривание хромосом, кроссинговер, а также два последовательных
деления сперматоцитов, в результате чего образуются сперматиды с гаплоидным набором хромосом. Первичные сперматоциты имеют тот же набор органоидов, что и сперматогонии, а также обладают схожими размерами, однако в их цитоплазме материал половых детерминантов присутствует только в
12
остаточных количествах (Реунов А. А., 2005). Отростки сустентоцитов внедряются между базальной мембраной и сперматоцитами и смещают клетки, в
результате чего сперматоциты начинают перемещаться в сторону просвета. К
концу интерфазы количество ДНК в сперматоцитах первого порядка удваивается (Dym M., 1994).
Профаза мейотического деления складывается из четырех фаз: лептотенной, зиготенной, пахитенной и диплотенной. Лептотенные сперматоциты
уже не соприкасаются с собственной оболочкой семенных извитых канальцев и имеют ядро, которое содержит хромосомы, имеющее вид тонких нитей.
Митохондрии данных клеток также претерпевают изменения: кристы выглядят набухшими, утрачивают параллельное расположение. Сами митохондрии
начинают ветвиться, что свидетельствует об их делении (Brökelmann J.,
1963). В цитоплазме обнаруживаются маленькие пузырьки гладкой ЭПС.
Сперматоциты на стадии зиготены характеризуются увеличением размера
ядер, нитевидные хромосомы в них собираются в пары. При этом образуются
синаптонемные комплексы, располагающиеся между конъюгирующими хромосомами, удерживая их друг около друга и способствуя осуществлению
процесса кроссинговера (Moses M. J., 1969). Наличие в цитоплазме синаптинемальных комплексов является основным признаком, позволяющим идентифицировать первичные сперматоциты (Данилова Л. В., 1982). Объем ядер
пахитенных сперматоцитов увеличивается, в них появляется крупное шаровидное ядрышко, а хромосомы становятся толстыми и короткими. В течение
диплотены и диакинеза хромосомы становятся максимально короткими, а
синаптонемальные комплексы исчезают, а к концу профазы мейоза исчезает
ядерная мембрана. В период метафазы первого деления созревания тетрады
хроматид располагаются в области экваториальной пластинки. В анафазе
первого деления созревания центромеры каждой пары гомологичных хромосом начинают двигаться к противоположным полюсам клетки, увлекая за собой диады хроматид. Анафаза I и телофаза I быстро завершаются, в результа-
13
те чего образуются вторичные сперматоциты. Они быстро проходят второе
деление созревания, в результате чего образуются сперматиды.
Морфологическая трансформация, в ходе которой сперматиды превращаются в сперматозоиды, получила название спермиогенеза. Данный процесс был детально изучен у крыс (Leblond C. P., Clermont Y., 1952). Выделяют 19 этапов спермиогенеза, которые могут быть сгруппированы в четыре
фазы (O'Donnell L., et al., 2011).
Рассмотренная выше трехэтапная схема сперматогенеза характерна для
всех животных с модифицированными сперматозоидами, включая позвоночных (Scheltinga D. M. et al., 2001), в том числе человека (Fawcett D. W., 1975)
и считается традиционной (Реунов А. А., 2005).
Сперматогенный слой чрезвычайно чувствителен к повреждающим
действиям (Малишкін, І. Н., 2000; Arbuckle T. E. et al., 1999; Hess et al., 2008).
При различных интоксикациях, авитаминозах, недостаточности питания и
других условиях (особенно при воздействии ионизирующего излучения)
сперматогенез ослабляется или даже прекращается, а сперматогенный эпителий атрофируется (Нарбутова Т. Е., 2011; Калимов Ф. Х., Галимов Ш. Н.,
Акметдинов Э. Ф., 2002; Мамина В. П., Шейко Л. Д., 2001).
Установлено, что временной цикл развития сперматогенеза стабилен и
отличается видовой специфичностью (Иен С. С. К., Джаффе Р. Б., 1998;
Baker H. W. G., Brindle J., Irvine D.S., Aitken R. J., 1996). Общая продолжительность всего процесса сперматогенеза составляет у человека 74,4 дня, у
крыс этот срок равен 48 дням (Chang C., Chen Y. T., Yen S. D. et al., 2004).
В семенниках имеются интерстициальные эндокриноциты (клетки
Лейдига), которые расположены в виде скоплений в щелевидных пространствах между семенными канальцами в рыхлой соединительной ткани (интерстиции). Они вырабатывают мужской половой гормон – тестостерон (Демченко В. Н., 1983).
Зрелые клетки Лейдига семенников млекопитающих характеризуются
хорошо развитой гладкой ЭПС тубулярного, тубуло-везикулярного либо ве14
зикулярного типа, а также развитым комплексом Гольджи. Гранулярная
ЭПС, как правило, плохо развита. В цитоплазме данных клеток содержатся
многочисленные митохондрии с электроннопрозрачным матриксом и кристами тубуловезикулярного типа, а также липидные капли различных размеров и электронной плотности. Для андрогенпродуцирующих клеток Лейдига
характерны тесные взаимодействия структур гладкой ЭПС, митохондрий и
липидных капель. В цитоплазме этих клеток нередко отмечается высокое содержание фибриллярных структур (как правило, в условиях сниженной секреторной активности) (Шевлюк Н. Н. и соавт., 2010; Волков В. П., 2015).
Основным андрогеном, секретируемым клетками Лейдига, является тестостерон, однако в небольших количествах образуется и другой высокоактивный стероид – дигидротестостерон, однако он составляет лишь небольшую часть пула андрогенов в крови мужчин. Кроме того, в яичках вырабатываются андростендион, 17-α гидроксипрогестерон, прогестерон. Установлено, что семенники являются источником образования 95% тестостерона, циркулирующего в крови (Lipsett M. B. et al., 1966). Транспорт тестостерона по
кровеносному руслу осуществляется, в основном, в связанном с белками
плазмы
виде.
Одним
из
этих
белков
является
тестостерон-
эстрадиолсвязывающий глобулин (ТЭСГ). Только 3% тестостерона циркулирует в свободном виде, 30% связано с ТЭСГ, остальные 67% – с альбумином
и другими белками.
Тестостерон оказывает биологическое действие практически на все органы и ткани организма. Эффекты, вызванные действием тестостерона и его метаболитов на развитие мужской репродуктивной системы и вторичных половых
признаков, классифицируют как андрогенные, а эффекты на соматические ткани – как анаболические (Науменко Т. В., Осадчук А. В., Серова Л. И., 1983).
Тестостерон связывается в просвете канальцев с андрогенсвязывающим белком, выделяемым клетками Сертоли и после этого оказывает влияние на развитие сперматоцитов и сперматид. В клетках Лейдига содер-
15
жатся также ферменты, метаболизирующие мужской половой гормон
(Држевецкая И. А., 1983).
Тестостерон и его производные регулируют дифференцировку половых
органов, половое развитие, сперматогенез и образование спермы и необходимы для поддержания полового влечения, потенции и эякуляции.
У большинства позвоночных размножение связано с определенным сезоном, в связи с этим семенники функционируют ограниченное время, которое определяется периодом размножения. У человека, некоторых позвоночных животных (собака, морская свинка, крыса, мыши) семенники функционируют, начиная со времени половой зрелости, и развития сперматозоидов у
них происходит непрерывно (Самусев Р. П., Капитонова М. Ю., 2010; Шевлюк Н. Н., Блинова Е. В., Боков Д. А., Рыскулов М. Ф., 2014).
2.2. Строение яичников и особенности протекания в них
процесса фолликулогенеза
Яичники – это парный орган, выполняющий две важные функции: репродуктивную, выражающуюся в формировании женских половых клеток, и
эндокринную, реализующуюся в продукции половых гормонов.
Яичники расположены в малом тазу несколько асимметрично на заднем
листке широкой связки. К короткой части этого листка (мезоварий) яичники
прикреплены нижним краем. Каждый яичник имеет две связки: одна из них
(воронко-тазовая связка) направляется от верхнего полюса яичника к боковой
стенки таза, другая (собственная связка яичника) связывает яичник с маткой,
связка заканчивается позади и несколько ниже маточной трубы. В связках
проходят кровеносные и лимфатические сосуды и нервы. В яичниках основная
их масса проходит через мезоварий (Сапин М. Р., Билич Г. Л., 2002).
Яичник функционирует циклично и, следовательно, его строение зависит от фазы менструального (овариального) цикла или наличия беременности
16
(Клочков Д. В., Алехина Т. А., 2012). Снаружи, кроме области ворот, яичник
покрыт эпителием, который именуется покровным, поверхностным, зачатковым, или герминативным (Волкова О. В., 1983). С поверхности яичник окружен белочной оболочкой, образованной плотной волокнистой соединительной тканью, покрытой мезотелием. Свободная поверхность мезотелия снабжена микроворсинками (Афанасьев Ю. И., Юрина Н. А., 2002).
В дефинитивном яичнике топографически различимы две зоны корковое и мозговое вещество. Корковое вещество занимает периферическую часть яичника и характеризуется наличием овариальных фолликулов.
Мозговое вещество расположено в центре и от фолликулов свободно. В нем
располагаются крупные органные сосуды, которые распадаются на более
мелкие ветви, уходящие в корковое вещество. Стромальная часть коркового
и мозгового вещества яичника является производным мезенхимы и представляет собой специализированную рыхлую волокнистую соединительную
ткань (Волкова О. В., 1989).
Основой коркового и мозгового вещества является соединительнотканная строма. В корковом веществе она состоит из плотно лежащих фибробластов и межклеточного вещества. Мозговое вещество представлено большим
количеством неупорядоченных эластических волокон, гладкомышечными
клетками и большим количеством кровеносных сосудов. Основная часть кровеносных сосудов сосредоточена в мозговом веществе яичника (Александровская О. В., Радостина Т. Н., Козлов Н. А., 1987; Волкова О. В., 1983, 1989).
Толщина коркового вещества от рождения до репродуктивного периода
онтогенеза непрерывно возрастает, а затем происходит уменьшение медленным темпом. Толщина мозгового вещества – самая наименьшая в период новорожденности, а наибольшая – в период старости (Терехова М. Н., 1994).
Корковое вещество состоит из тесно расположенных веретеновидных
клеток, напоминающих набухшие фибробласты, межклеточного вещества в
нем мало, а в тонкой внешней зоне этого вещества прослеживается полоса
коллагеновой стромы, которая содержит относительно мало клеток. Во внут17
ренней зоне коркового вещества яичников располагаются фолликулы, являющиеся основной структурно-функциональной единицей (Брюхин Г. В.,
Вторушина Е. В., 2004). При изучении морфологии яичников используется
Международная гистологическая номенклатура (1983), согласно которой
фолликулы подразделяются на примордиальные, первичные (преполостные),
вторичные (полостные) и третичные (зрелые, преовуляторные, граафовы)
(Ковальский Г. Б, Китаев Э.М., Рыжавский Б. Я., Мельникова Л. М., 1996).
Развитие фолликулов происходит по схеме: примордиальный → первичный → вторичный → третичный (Иванов Ю. Н., Клочков Д. В., Позняков М. А., 2011). С периода полового созревания отмечается начало развития
примордиальных фолликулов и спиралевидных артерий. В репродуктивный
период фолликулы расположены в строме коркового вещества, примордиальные – периферийно, а зреющие в более глубоких зонах коркового вещества (Клочков Д. В., Алехина Т. А., Прокудина О. И., 2011; Lima F. B.,
Szawka R. E., Anselmo-Franci J. A., Franci C. R., 2007). Примордиальный фолликул состоит из окруженного одним слоем плоских фолликулярных клеток
ооцита первого порядка. Ооцит является ключевым элементом, основой
структурного и функционального единства фолликулярного комплекса (Karaca T., Uslu S., 2007).
В примордиальных фолликулах гранулезные клетки небольших размеров. В дальнейшем увеличивается число и размеры гранулезы. Они становятся кубическими, цилиндрическими, формируют несколько слоев (Боярский К. Ю., 2002; Ковальский Г. Б, Китаев Э.М., Рыжавский Б. Я., Мельникова Л. М., 1996; Кэттайл В.М., Арки Р.А., 2001).
На ранних этапах фолликулогенеза динамика размеров ооцита пропорциональна росту примордиального фолликула (Обухова Ю. Д., 2010).
Первичные фолликулы образованы ооцитом первого порядка, окруженным несколькими слоями фолликулярных клеток кубической, цилиндрической или округлой формы. По мере созревания фолликула веретенообразные клетки слоями окружают фолликул, увеличиваются в объеме, становятся
18
эпителиоидными. По периферии остаются слои веретенообразных клеток,
сливающиеся со стромой (Боярский К. Ю., 2002)
Полость вторичного фолликула выстлана гранулезными клетками, снаружи он окружен внутренней и наружной текой. В яичнике происходит одновременное развитие нескольких полостных фолликулов, но только один из
них становится доминантным (Волкова О. В., Боровая Т. Г., Погорельская Е. О., Бичерова И. А., 2003; Ковальский Г. Б, Китаев Э. М., Рыжавский
Б. Я., Мельникова Л. М., 1996).
По мере роста вторичный фолликул заполняется фолликулярной жидкостью, оттесняя яйцеклетку к одному из полюсов, и превращается в граафов
пузырек. Яйцеклетка располагается в яйценосном холмике. Сверху она покрывается блестящей оболочкой, лучистым венцом и зернистой оболочкой
(Александровская О. В., Радостина Т. Н., Козлов Н. А., 1987; Волкова О. В.,
1989, 2003; Хэм А., Кормак Д., 1983).
Граафов пузырек разрастается, в результате чего из него вместе с фолликулярной жидкостью выбрасывается яйцеклетка. После овуляции и выброса яйцеклетки на месте фолликула образуется желтое тело (Волкова О. В.,
1983, 1989; Empereire J.-C., 1999).
При оценке стадий развития фолликула по основным морфологическим
признакам (форма и количество слоев фолликулярных клеток, наличие лакун) выделяют следующие группы: примордиальные (1), вступившие в рост
однослойные фолликулы (2), однослойные фолликулы с примордиальными
клетками (3), двуслойные (4), многослойные (5), лакунарные (6).
Ооцит интенсивно растет до стадии 4, практически достигая видового
размера. На стадии 5 и 6 фолликул увеличивает свои размеры за счет возрастания слоев фолликулярных клеток и формирования лакун. Основное увеличение размеров ооцита приходится на гормононезависимый период роста
фолликулов (Лебедева Т. С., Храмова Ю. В., 2014).
Желтые тела в яичниках формируются после овуляции зрелого фолликула из лютеинизированных клеток внутренней теки и периферических клеток
19
зернистого слоя. Желтое тело – орган с обильной васкуляризацией и интенсивным стероидогенезом (Pfaff D., Ribeiro A., Mattews J., Kow L.-M., 2008).
В стадию расцвета желтое тело несколько выступает над поверхностью
яичника и становится багрового цвета. В его состав входят два типа клеток:
гранулезолютеиновые (располагаются в центре), которые синтезируют прогестерон, и текалютеиновые (располагаются по периферии), продуцирующие
эстрогены (Вихляева Е. М., 2006).
Четвертая стадия, или стадия регресса (обратного развития), наступает
в том случае, если оплодотворение не произошло. Заканчивается стадия регресса менструацией. В эту стадию начинается дистрофические изменения в
клетках, они уменьшаются, между ними начинает врастать соединительная
ткань, формируя гиалиновое образование (беловатое тело) (Афанасьев Ю. И.,
Юрина Н. А., 2002).
В яичниках встречаются два вида желтых тел: менструальное желтое
тело и желтое тело беременности. Разница между желтым телом беременности и менструальным ограничивается только длительностью периода расцвета и размерами в диаметре. Менструальное желтое тело в 3-4 раза меньше
желтого тела беременности и функционирует по времени оно меньше.
После прекращения функционирования и желтое тело беременности,
и менструальное претерпевают инволюцию (стадию обратного развития).
Железистые клетки атрофируются, а соединительная ткань центрального
рубца разрастается. В результате на месте бывшего желтого тела формируется белое тело – соединительнотканный рубец (Боровая Т. Г., 1993; Обухова Ю. Д., 2010). В яичнике также обнаруживаются атрезирующиеся фолликулы. В настоящее время известно два основных варианта атрезии овариальных полостных фолликулов.
Фолликулогенез можно разделить на следующие стадии:
1) формирование пула растущих фолликулов;
2) базальный рост (рост до стадии антрального фолликула 4-го класса);
20
3) селекция и созревание доминантного фолликула. Зависимость первых двух этапов от гипофизарных гонадотропинов, преимущественно от
FSH, является непрямой и скорее опосредована внутрияичниковыми факторами, и лишь последний этап напрямую регулируется гипофизом (Волкова О. В., Боровая Т. Г., 1999).
Несомненна роль факторов клеточной адгезии и других факторов, отвечающих за межклеточные взаимодействия в фолликулогенезе и овуляции.
В миграции первичной половой клетки участвуют интегрины α 3, 6, β
(Epifano O., Dean J., 2002). В агрегации клеток при колонизации урогенитальных гребешков играют важную роль Е-кадерин и Р-кадерин, которые
экспрессируются в предшественниках клеток Сертоли (Di Carlo A., De
Fella M., 2000; Lin L., DePhilip R., 1996). В образовании фолликулов и установлении взаимодействия ооцита и окружающих соматических клеток
несомненна роль факторов клеточной адгезии коннексинов. Так, у мышей,
дефицитных по коннексину СХ43, имеются серьезные нарушения в образовании примордиальных фолликулов (Simon A., 1997). Р-селектин играет
важную роль на начальных стадиях диапедеза лейкоцитов из кровотока во
время воспаления (Sayasith K. et al., 2005).
Мозговое вещество яичников построено из рыхлой соединительной
ткани. Вокруг сосудов и нервных стволиков нередко определяются небольшие пучки из округлых или полигональных клеток эпителиоидного вида.
Эти клетки предположительно являются рудиментарными остатками гонад,
проходящих примитивную двуполую фазу развития. Они вырабатывают
стероиды и поэтому напоминают интерстициальные элементы яичек. Стероидпродуцирующие клетки яичников – фолликулоциты гранулезной оболочки, текоциты внутренней теки, текоцитоподобные клетки стромы
(Broekmans F. J., Visser J. A., Laven J. S. et al., 2008; Fortune J. E.,
Rivera G. M., Yang M. Y., 2004).
В литературе нет единого мнения о строении стромы яичника. По данным Боровой Т. Г. (1993), строма яичников представлена самым «простым
21
вариантом» рыхлой соединительной ткани, практически единственными клеточными элементами, которой в корковом и мозговом веществе являются
фибробласты и фиброциты. Помимо этого, в мозговом веществе присутствуют гладкомышечные и тучные клетки и некоторое количество разных форм
лейкоцитов.
По данным других исследователей строма яичника представлена двумя
типами клеток:
1) веретенообразные, со скудной цитоплазмой, похожие на фибробласты, располагающиеся в плотной сети волокон с различными количествами
коллагена;
2) полигональные, с эозинофильной цитоплазмой, свойственными стероидопродуцирующим клеткам ультраструктурными особенностями, богатые липидными включениями (Боровая Т. Г., 1993).
Согласно современным представлениям, основной морфологический
признак стареющей гонады – гиалиноз артерий, наблюдается не только в
яичниках менопаузального возраста. Вены при этом компенсаторно расширяются, гиалиноз венозных сосудов практически не встречается.
Для инволюционного типа строения яичника характерными признаками являются: крупнобугристая поверхность этого органа, утолщение белочной оболочки, склероз стромы, немногочисленность разных форм фолликулов, многочисленность фиброзных и белых тел (Кузнецов С. Л., Мушкамбаров Н. Н., 2005). В мозговом веществе преобладание грубоволокнистой соединительной ткани, иногда наличие очагового гиалиноза его стромы, склероз сосудов разной степени (Visser J. A., de Jong F. H., Laven J. S.,
Themmen A. P., 2006).
Овуляция – одно из самых динамических явлений. Она сопровождается воспалением и вероятно характеризуется воспалительным выбросом цитокинов макрофагами (Vinatier D., Dufour P., Tordjeman-Rizzi N. et al., 1995).
Однако, точная роль иммунологических и воспалительных событий в овуляции остается неясной. Моноциты, макрофаги, ацидофильные гранулоци22
ты, и нейтрофилы, инфильтрируют область, окружающую доминирующий
фолликул перед овуляцией. Проникновение лейкоцитов, особенно нейтрофилов, наблюдается в theca слое яичника у человека (Brannstrom M.,
Wang L., Norman R. J., 1993) и крысы (Brannstrom M., Pascoe V., Norman R. J.,
McClure N., 1994) непосредственно перед овуляцией. Стромальные макрофаги могут быть вовлечены в регуляцию фолликулярного роста и разрыва, регуляцию эстрального цикла (Van der Hoek К. Н. et al., 2000).
Только ограниченное число примордиальных фолликулов в яичниках
млекопитающих растѐт и дифференцируется, достигая стадии доминантного
фолликула и впоследствии овулирует. 99% фолликулов в яичнике подвергаются атрезии на различных стадиях развития. В репродуктивном возрасте
атрезия совместно с формированием доминантного фолликула является одним из проявлений физиологии овариальной функции и фолликулогенеза: в
ходе роста фолликулы соревнуются за лидерство, и поступательное развитие продолжают только те из них, которые способны обеспечить оптимальное морфофункциональное состояние собственного гистиона. В течение
жизни в яичниках человека прогрессивно сокращается содержание половых
клеток. Сравнительно небольшой процент этой убыли связан с созреванием
и овуляцией ооцитов в репродуктивном периоде, и значительно больший - с
атрезией овариальных фолликулов и гибелью половых клеток, происходящими практически в течение всей жизни. Апоптоз – фундаментальный механизм фолликулярной атрезии и постовуляторного регресса у млекопитающих (Wood A. W., Van Der Kraak G. J., 2001).
Со времени наступления половозрелости половые органы самки подвержены циклическим изменениям, которые протекают в организме при
участии нейроэндокринных стимулов и находятся под влиянием факторов
внешней и внутренней среды, которые, вероятно, оказывают влияние на репродуктивную функцию. Менструальная функция у женщин может нарушаться под действием стресса (Кустаров В Н., Линде В. А., Ильяшевич В. И.,
2008). В результате антропогенных влияний растет число экологически за23
висимых патологических нарушений в женской репродуктивной системе.
Так, по данным Губаревой Л. И. (2001), в яичниках крыс, подвергавшихся
воздействию сульфида и кадмия, наблюдается гибель значительной части
фолликулов на разных стадиях созревания.
Таким образом, яичник является уникальным органом, в котором в течении жизни женщины происходит постоянная перестройка микроциркуляторного русла, компонентов внеклеточного матрикса, миграция лейкоцитов
и тучных клеток, формирование и рост различных функциональных структур: малых, средних, больших и атретических фолликулов, жѐлтых тел. На
основании данных литературы можно заключить, что генеративная и эндокринная функция яичников регулируется сложным комплексом гуморальных факторов.
2.3. Влияние тяжелых металлов (в том числе и свинца)
на репродуктивную систему человека и животных
Свинец – один из старейших и наиболее распространенных промышленных ядов, занимает по уровню мирового производства четвертое место
после алюминия, меди и цинка (Корбакова А. А., Сорокина Н. С., Молодкина Н. Н. и соавт., 2001; Winship K. A., 1999). Содержание свинца в продуктах питания, питьевой воде, атмосферном воздухе и т.д. жестко нормируется ГОСТом 12.1.007 «ССБТ. Вредные вещества. Классификация и общие требования безопасности».
В настоящее время в России свинцовая интоксикация среди профессиональных занимает первое место (Снакин В. В., 1999). Лица, контактирующие со свинцом и его соединениями в ходе своей профессиональной
деятельности, находятся под воздействием двойной экспозиции свинца:
металл содержится в атмосферном воздухе и в воздухе рабочей зоны (Измеров Н. Ф., 2000).
24
Локальные загрязнения окружающей среды свинцом связаны с добыванием свинцовых руд, выплавкой свинца и других металлов из полиметаллических руд, которые содержат свинец, производством аккумуляторов,
свинцовых красок, стекла, полиграфической промышленностью и т.п. Однако одним из основных источников поступления свинца в окружающую среду
являются выхлопные газы автомобильного и авиационного транспорта.
Концентрация свинца в окружающей среде в данное время в ряде городов России превышена в 2-5 раз. В воздухе помещений, которые находятся
вблизи уличных магистралей, свинец накапливается в больших количествах,
нередко значительно превышая допустимые концентрации (Батян А. Н.,
Фрумин Г. Т., Базылев В. Н., 2009).
Из-за широкого распространения свинцового загрязнения, практически
все население подвергается риску его воздействия, независимо от социальноэкономического статуса, расовой и этнической принадлежности или места
проживания (сельская местность, город или пригород). Хроническое свинцовое отравление создает угрозу, прежде всего, здоровью и умственному развитию подрастающего поколения и тем самым – будущему всего человечества
(Печкурова Е. А., Новикова О. Н., 1997; Сетко Н. П., Захарова Е. А., 2008;
Столяров И. Д., Огурцов Р. П., Вотинцева М. В. и соавт., 1998; Трахтенберг И. М., 1997). Повышенное внимание к данной проблеме обусловлено
тем, что из профессиональной плоскости она перешла в экопатологическую,
из-за глобального распространения свинца (Колосова И. И., 2013).
Всего в организме взрослого человека содержится 130 мг свинца
(Авцын А. П., Жаворонков А. А., Риш М. А., Строчкова Л. С., 1991).
Каждые сутки человек с пищей и водой получает 20-200 мкг свинца
(Измеров Н. Ф., 2000). Свинец способен поражать жизненно важные органы и системы организма, в том числе и репродуктивную систему (Измеров Н. Ф., 2000). Экзогенное воздействие свинца на репродуктивную систему организма является очень важным и актуальным аспектом в прогнозировании и предупреждении возможного его влияния на течение бере25
менности и развитие плода (Волощенко О. И., Мудрый И. В., 1991; Савельева Г. М. и соавт., 1991; Saxena D. K. et al., 1994; Gupta G. S., Singh J.,
Gupta A., 1997; Schneider H., 1997; Torry D. S., Torry R. J., 1997;
Reichrtova E., Dorociak F., Palkovicova L., 1998).
Неблагоприятные эффекты воздействий повышенных концентраций
свинца на репродуктивную функцию освещены в ряде исследований (Паранько Н. М., Рублевская Н. И., Белицкая Э. Н. и соавт., 2002; Arbuckle T. E., Scharader S. M., Cole D. et al., 1999). В последние годы было показано, что концентрации, считавшиеся безопасными в соответствии с OHS
(стандарты профессионального здоровья; т.е. концентрации свинца в крови
порядка 400-600 мкг/л), ассоциированы с ухудшением качества спермы
(Луцкий Д. Л, Выборнов С. В., Луцкая А. М. и соавт., 2009; Dawson E. B.,
Evans D. R., Harris W. A., Powell L. C., 2000) и снижением фертильности
(Liu H. X, Qin W. H., Wang G. R et al., 1995). B. Alexander и соавт. (1998)
установили, что рабочие на цинк-свинец-плавильных производствах при
уровне свинца в крови более 400 мкг/л имеют повышенный риск снижения
концентрации и общего количества сперматозоидов по сравнению с нормой. В работе S. Telisman и соавт. (2000) показана достоверная (p<0,05)
корреляция уровня свинца в крови со снижением концентрации, общего
количества, количества подвижных и жизнеспособных сперматозоидов и с
увеличением патологии головки сперматозоидов, сывороточного уровня
тестостерона и эстрадиола.
Эксперименты по влиянию свинца на гонады крыс-самцов показали,
что при длительном введении крысам-самцам свинца в дозе 0,006 мг/кг к
концу 6 месяца введения определялось сокращение времени подвижности
сперматозоидов, снижение их резистентности к 1%-ому раствору хлорида
натрия (Кундиев Ю. И., Трахтенберг И. М., 1991).
В настоящее время механизм взаимосвязи повышения уровня свинца
в крови и снижения продукции спермы не вполне ясен (Кулибин А. Ю.,
2005). Эксперименты, проведенные на лабораторных животных, свиде26
тельствуют о прямом влиянии свинца на тестикулярную функцию или о
нарушении гормональной регуляции сперматогенеза (Хван П. А., 1983;
Tomei G., Rosati M. V., Ciarrocca M. et al., 2007). По результатам официальной статистики среди профессиональных интоксикаций свинцовая занимает первое место. Среди рабочих, пострадавших от воздействия свинца, около 40% составляют женщины. По данным научной литературы в обследованных городах с металлургическим производством у женщин увеличено число случаев бесплодия, самопроизвольных абортов, токсикозов,
мертворождаемости и рождения детей с уродствами: дефектами развития
костно-суставной системы, врожденными пороками сердца и др. частота
врожденных пороков развития выше среди детей, родители которых работают на металлургических комбинатах (Бiлецька Е. М., 1999; Оксенгендлер Г. И., 1991; Шустов В. Я., Королев В. В., Ольховская А. Г., 1991).
В литературе есть данные о том, что наиболее уязвимым при воздействии свинца является эстральный цикл. Устойчивые нарушения эстрального цикла наступают значительно раньше, чем количественные изменения морфоструктурных элементов яичника (Мелик-Алавердян Н. О., 1967;
Лужников Е. А., 1994). В научной литературе имеются экспериментальные
данные, свидетельствующие о способности свинца проходить через плацентарный барьер (Динерман А. А., 1980; Дмитруха Н. М., 2004). Проницаемость плацентарного барьера не является постоянной величиной в течение беременности. При однократной затравке самок белых крыс азотнокислым свинцом в дозировке по свинцу 50 мг/кг на разных стадиях беременности наибольшее количество свинца проходило плацентарный барьер
в период начала плацентации. Для человека о возможности проникновения
свинца через фитоплацентарный барьер может свидетельствовать повышение его содержания в крови и волосах новорожденных в зонах экологического неблагополучия (Даутов Ф. Ф., Яруллин И. А., 1993). Доказано, что
введение свинцовых припоев крысам-самкам внутрижелудочно в дозировке 25 и 250 мг/кг в течение 1 месяца до беременности и первых 12 суток
27
беременности вызвало нарушение эстрального цикла. Введение припоя в
количестве 250 мг/кг снижало способность к оплодотворению (Салангина Л. И., Дубейковская Л. С., Сладкова Ю. Н., Маркова О. Л., 2000).
При введении морским свинкам-самкам водного раствора ацетата
свинца в дозе 50 мг/кг ежедневно в течение 25 суток были обнаружены
структурные изменения яичников (дегенерационная атрезия примордиальных и растущих фолликулов, образование крупных, функциональноактивных желтых тел или редких в стадии регрессии, образование кист)
(Вылегжанина Т. А., Кузнецова Т. Е., Рыжковская Е. Л., 2008). Свинец в
концентрации 0,1 мг/м3 вызывал изменение структуры яичников у самок и
снижение жизнеспособности их потомства, а в концентрации 1,0 мг/м3 –
уменьшение количества сперматогоний и увеличение числа патологических сперматозоидов у самцов (Хмелевская Г.В., 1978).
Экспериментальные и клинические исследования свидетельствуют о
том, что высокое содержание свинца в организме матери приводит к задержке психомоторного развития плода, к различным морфофункциональным нарушениям его развития (Мудрый И.В., Петрова Р.П., 1993;
Чэн Ф. Ю., Цун Л. Ю., 1996; Чухловина М. А., 1997; Lu J., Petroianu G.,
Widjaja B., Rufer R., 1997; Novak D. A., Beveridge M. J., Malandro M., Seo J.,
1996; Richter J., Hajek Z., Pfeifer I., Subrt P., 1997).
В начале XX века не было прямых экспериментальных доказательств
нарушения
эмбрионального
развития
при
свинцовой
интоксикации.
C. Weller (1915) проводившая наблюдение на морских свинках, сделала заключение, что свинец обладает специфическим неблагоприятным действием на эмбриональную ткань. Однако результаты последующих экспериментов в одних случаях подтверждали нарушение воспроизводства, в других
такие нарушения не обнаруживались. Эта разноречивость отмечается и в
отношении влияния свинца на развитие плода человека (Динерман А. А.,
1980).
28
Результаты экспериментальных исследований многих авторов указывают на нарушение процессов репродукции при воздействии свинца. В
этих экспериментах свинец вводили как до спаривания, так и на протяжении беременности. При такой постановке опытов нарушение эмбрионального развития является результатом гонадотоксического, так и эмбриотоксического действия (Харченко Т. Н., Андреева С. К., 1987).
Изучение эффекта свинцовой интоксикации (300 мг/л) самок крыс в течение всей беременности и периода лактации на развитие репродуктивных
органов потомства показало угнетение функций семенников, придатков, семенных пузырьков и сдвиги биохимических процессов в этих органах
(Rondia D., 1999; Yang Ying, Dong Sheng-zhang, Lin Zhong-ning, 2003). Высказано предположение, что ядра сперматозоидов крыс, подвергшихся воздействию свинца, содержат такое количество этого металла, которое достаточно
для свинцовой интоксикации зиготы с последующим нарушением в ней обменных процессов (Stowe H. O. et al., 1973). В эксперименте при введении
свинца в организм неполовозрелых самок морских свинок и обезьян резус
отмечено замедление постнатального развития яичников, нарушение лютеальной функции, падение уровня прогестерона в крови, ускорение процессов
атрезии фолликулов, нарушение полового цикла (Miller R. K., Genbacev O.,
Turner M. A. et al., 2005). При пероральном введении свинца мышам и крысам в период беременности, а также лактации в гонадах плодов обоего пола
отмечены дегенеративные изменения первичных половых клеток, снижение в
них количества сперматогенных элементов (Нарбутова Т. Е., 2011).
Влияние тяжелых металлов, и в частности соединений свинца, приводит к нарушению различных систем органов репродуктивной системы.
Наиболее часто проявляемые последствия воздействия тяжелых металлов на
органы репродукции – это дегенерационная атрезия примордиальных и растущих фолликулов, образование крупных, функционально-активных желтых
тел или редких в стадии регрессии, образование кистоподобных структур
(Колосова И. И., 2013).
29
Эмбриотоксическое
действие
оказывало
однократное
введение
50 мг/кг нитрата свинца, что выразилось в снижении плодовитости и числа
живых эмбрионов в помете и увеличении числа резорбции, общей и постимплантационной смертности. В наибольшей степени эмбриотоксические
нарушения были выражены при однократном введении на 4 день беременности. Накопление свинца в целом эмбрионе при ежедневном воздействии
на протяжении 20 суток беременности 0,005 мг/кг сопровождается нарушением процессов биоэнергетики. В гомогенате плаценты достоверно увеличивается потребление фруктозодифосфата без значимого изменения прироста молочной кислоты. Окислительное фосфорилирование в митохондриях
эмбриональной печени достоверно не изменяется (Динерман А. А., 1980).
Сходный тип строения плаценты у человека и белых крыс, у которых
выявлено эмбриотоксическое действие свинца и его прохождение через
плаценту, свидетельствуют о потенциальной опасности действия свинца
для эмбрионального развития человека. Были исследованы плаценты женщин, имевших производственный или бытовой контакт со свинцом, и плаценты крыс, получавших энтерально уксуснокислый свинец в дозе
75 мг/кг/сутки. Действие на организм животных солей свинца приводило к
развитию плацентарной недостаточности, наиболее интенсивно проявляющейся в лабиринтной зоне плаценты, и сопровождалось приближением
кровеносных сосудов лабиринта к краю трофобластической балки, истончением цито- и синцитиотрофобласта, вакуолизацией и просветлением цитоплазматического матрикса, деструкцией митохондрий, образованием
крупных полостей и цитоплазме компонентов трофобласта на месте скоплений гранул гликогена, уменьшением межклеточных контактов между
цито- и синцитиотрофобластическими элементами (Шубина О. С., Грызлова Л. В., 2004; Шубина О. С., Грызлова Л. В., Киреева Ю. В., 2007; Тельцов Л. П., Шубина О. С., Киреева Ю. В. и соавт., 2010).
30
Изучение состояния новорожденных показало, что у женщин с вредными факторами производства, достоверно выше процент рождения детей с
признаками недоношенности, гипотрофии внутриутробного инфицирования,
детей в состоянии асфиксии. У женщин же отмечались такие осложнения беременности, как гестоз II половины беременности, преждевременные роды на
фоне длительной угрозы прерывания беременности, а также анемия беременных и сочетанные виды патологии (Патутин В. Н., Костючек Д. Ф., 2003; Баряева О. Е., 2005).
31
3. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ
Экспериментальная работа выполнена на кафедре биологии, географии
и методик обучения, на базе научно-исследовательской лаборатории «Цифровая микроскопия» и научно-образовательной лаборатории «Молекулярная
и клеточная биология» научно-образовательного центра «Естественнонаучное образование» ФГБОУ ВПО «Мордовский государственный педагогический институт имени М. Е. Евсевьева» в течение 2011-2014 гг. при финансовой поддержке Минобрнауки России в рамках:
1. Программы стратегического развития «Педагогические кадры для
инновационной России» на 2012-2016 гг. (Проект 2.2.2. Решение комплексных проблем в области биологии, экологии, химии, физиологии, спортивной
медицины
на
базе
научно-образовательного
центра
и
научно-
исследовательских лабораторий (Развитие Научно-образовательного центра
«Естественнонаучное образование»));
2. Базовой части государственного задания вузу на 2014-2016 гг. в части выполнения научно-исследовательских работ (проект «Влияние антропогенных факторов на морфофункциональное состояние организма»);
3. Программы «Участник молодежного научно-инновационного конкурса» («УМНИК») при финансовой поддержке Фонда содействия развитию
малых форм предприятий в научно-технической сфере на 2015-2016 гг.
(проект «Исследование морфофункциональных особенностей органов репродуктивной системы при антропогенном воздействия свинца»).
В настоящей главе научной работы излагаются методы проведения
экспериментальных исследований на самцах и самках белых беспородных
половозрелых крыс. Дается характеристика методов цитологических, гистологических и морфометрических исследований, а также методы статистической обработки результатов исследования.
32
3.1. Общая характеристика экспериментального материала
В качестве биологического тест-объекта в работе использовали самцов и самок белых беспородных половозрелых крыс массой 200-250 г. в
возрасте 60 суток, т. к. согласно литературным данным период полового созревания у крыс наступает на 60-й день (Бабичев В. Н., 1981; Шаляпина В. Г.,
1991). Всего использовано 300 животных из 38 пометов – 150 самцов и
150 самок белых крыс.
Выбор белых крыс для проведения исследования обусловлен тем, что
они обладают сходными с человеком строением половых желез, а также протеканием процессов сперматогенеза и фолликулогенеза. Точность и легкость
установления продолжительностью полового цикла (от 4-х до 6 суток) и отдельных его стадий – эструс и диэструс, отражающих фолликулярную и лютеиновую фазы яичников позволили без особых трудностей выявить отклонения от нормы и делают этот объект удобным для исследования.
Эксперимент проводился в течение года в помещении при температуре
воздуха 22-25 °C и относительной влажности 67-70%. Животные находились
на общем режиме вивария, имели свободный доступ к корму и воде.
В соответствии с поставленными задачами животные разбивались на
две группы. Контрольную группу животных составили крысы, содержащихся
на общем режиме вивария. Опытную группу составили животные, получавшие в течение 7 суток перорально ацетат свинца Pb(CH3COO)2  3H2O в среднетоксической дозе – 45 мг/кг/сутки (в пересчете на свинец).
Животные забивались путем декапитации под наркозом эфира с хлороформом (1:1) с соблюдением принципов гуманности, изложенных в директивах Европейского сообщества (86/609/ЕЕС) и Хельсинкской декларации, и
в соответствии с требованиями правил проведения работ с использованием
экспериментальных животных.
Для более точного исследования яичников самок белых крыс забивали
в стадию диэструса, которая характеризуется как стадия активности желтого
33
тела, которое в норме у крыс функционирует в течение двух суток, а затем
подвергается регрессии (Шейко Л. Д., 1998).
Материалом исследования служили половые железы половозрелых
самцов и самок белых крыс. Для гистологического исследования образцы
тканей половых желез фиксировали в 10%-ном растворе нейтрального формалина. Зафиксированные образцы после промывки в проточной воде подвергали обезвоживанию путем помещения исследуемого материала в спирты
возрастающей концентрации и заливали в парафин по общепринятой методике. Готовили гистологические поперечные срезы семенных желез толщиной 10-15 мкм, окрашивали их гематоксилин-эозином (Семченко В. В., 2006).
Образцы
тканей
исследовали
с
помощью
цифрового
микроскопа
Axio Imager.M2 (ZEISS, Япония) с программным обеспечением для анализа
изображений AxioVision SE64 Rel. 4.8.3 и ZEN 2011.
Фотосъемку препаратов производили встроенной цифровой камерой
AxioCam MRc5 (ZEISS, Япония) с последующей обработкой изображения в
Abode Photoshop Elements 11.
Морфометрические измерения семенников производили при увеличении 10×10, 40×10 и 100×10, яичников – при увеличении 5×10, 20×10, 40×10 и
100×10. Разрешение полученных изображений – 1300×1030 пикселей.
3.2. Характеристика весовых параметров половых желез
экспериментальных животных
Весовые характеристики половых желез являются одними из ведущих
показателей физиологической зрелости животных (Клевезаль Г. А., 2007).
Считается, что они во многом зависят от состояния матери в период беременности (Аршавский И. А., 1982) и отражают действие генетических и
средовых факторов (Рыжавский Б. Я., Литвинцева Е. М., Учакина Р. В.,
2009), к числу которых относятся внимание со стороны матери, обеспечен34
ность пищей, а также уровень стрессогенности среды (Дмитриева Н. Г., Голосова Е. В., Ковалева В. Ю., 1990; Ермакова О. В., 1998; Рыжавский Б. Я.,
2006).
Одним из показателей функционального состояния органа является его
масса (Мина М. В., Клевезаль Г. А., 1976). В связи с этим нами производился
анализ абсолютного и относительного веса семенников и яичников у самцов
и самок белых крыс. Вес семенников и яичников определяли при помощи
аналитических весов Sartorius (Германия). Наиболее чувствительным показателем, отражающим морфофункциональное состояния органа является его
весовой индекс, представляющий собой отношение массы органа к массе тела, выраженное в процентах (Мина М. В., Клевезаль Г. А., 1976).
3.3. Морфометрическое исследование семенников самцов белых крыс
При обзорной микроскопии изучали морфологические особенности
строения семенных желез, после чего определяли следующие морфометрические параметры:
1) толщину белочной оболочки семенника;
2) количество извитых семенных канальцев в одном поле зрения, площадь поперечного сечения извитого семенного канальца и его просвета,
площадь сперматогенного эпителия и его толщину;
3) количество участков интерстиция между извитыми семенными канальцами в одном поле зрения, а также их площадь;
4) количество миоидных клеток в стенке извитого семенного канальца,
площадь миоидных клеток, площадь цитоплазмы миоидных клеток, диаметр
и площадь их ядер;
5) количество клеток Сертоли в сперматогенном эпителии извитого семенного канальца, ширину базальной и длину апикальной частей клеток Сертоли, площадь клеток, диаметр и площадь их ядер;
35
6) количество разных видов сперматогенных клеток (сперматогоний
различной степени зрелости, первичных и вторичных сперматоцитов, ранних
и поздних сперматид) в сперматогенном эпителии извитого семенного канальца, площадь и диаметр сперматогенных клеток и их ядер, площадь цитоплазмы сперматогенных клеток, длину и толщину жгутика у поздних сперматид;
Подсчѐт сперматогоний вели, начиная с 60-го дня постнатального онтогенеза, поскольку, согласно современным представлениям о процессах сперматогенеза, у крыс в период новорожденности практически все сперматогенные
клетки являются гоноцитамии (Zogbi C. et al., 2012), образование первых сперматогоний датируется 3-6 сутками постнатального онтогенеза (De Rooij D. G.,
1998; Morales A., Mohamed F., Cavicchia J. C., 2007; Zoghi C. et al, 2012).
7) количество сперматозоидов в просвете извитого семенного канальца,
площадь головки и ядра сперматозоида, ширину шейки и длину его хвостовой части;
8) количество клеток Лейдига в участке интерстиция, площадь и диаметр клеток и их ядер, а также площадь цитоплазмы;
9) отношение площади интерстициальной ткани к площади извитых
семенных канальцев в одном поле зрения препарата.
Измерения проводили в 75 поперечных срезах извитых семенных канальцев и окружающих их участках интерстициальной ткани.
3.4. Цитологическая оценка состояния и репродуктивная
активность семенников самцов белых крыс
На основе количественных данных, полученных при цитологическом
исследовании семенников, рассчитывали ряд информативных показателей,
характеризующих состояние сперматогенеза. К этим показателям относятся:
36
1. Сперматограмма (цитологический профиль сперматогенеза) – процентное распределение клеток сперматогенного эпителия в одном извитом семенном канальце (Шейко Л. Д., 1998).
2. Индекс сперматогенеза – отношение суммы всех подсчитанных слоев клеток в одном канальце к количеству всех просчитанных канальцев.
Индекс
сперматогенеза
рассчитывали
по
формуле:
Is=∑a/N,
где а – количество слоев, выделенных в каждом канальце (первый слой –
сперматогонии, второй – сперматоциты, третий – сперматиды, четвертый –
сперматозоиды); N – количество просчитанных канальцев (Нарбутова Т. Е., 2011). Индекс сперматогенеза является одним из важнейших показателей состояния сперматогенного пласта (Саноцкий И. В., Фоменко В. Н.,
1979; Черток В. М., Ботвич Т. А., 1998).
3. Индекс релаксации (напряженности сперматогенеза или клеточный
индекс Сертоли) – отношение суммы всех сперматогенных клеток к сумме
клеток Сертоли в одном извитом семенном канальце (Шейко Л. Д., 1998).
Клеточный индекс Сертоли является одним из лучших показателей продуктивности процессов сперматогенеза, поскольку его величина положительно
коррелирует со спермопродукцией (Espey L. L., 1994).
4. Индекс созревания – отношение сумм юных (сперматогонии, сперматоциты) и зрелых форм сперматогенного эпителия (сперматиды, сперматозоиды) в одном извитом семенном канальце (Шевантаева О. Н., 2012).
5. Индекс мейотической активности – отношение суммы мейотических
клеток (сперматоцитов) к сумме остальных половых клеток в одном извитом
семенном канальце (Шевантаева О. Н., 2012).
6. Герминативный индекс – отношение суммы сперматогоний к сумме
клеток Сертоли в одном извитом семенном канальце (Шевантаева О. Н., 2012).
37
3.5. Исследование репродуктивности семенников самцов белых крыс
Влияние ацетата свинца на продуктивность семенных желез самцов белых крыс оценивали по следующим показателям:
1) общая концентрация сперматозоидов;
2) концентрация живых сперматозоидов;
3) концентрация мертвых сперматозоидов;
4) жизнеспособность сперматозоидов (% живых клеток от их общего
количества) (Шейко Л. Д., 1998).
Для определения вышеперечисленных показателей смесь суспензии
сперматозоидов и физраствора (1:4) окрашивали трипановым синим на предметном стекле и исследовали с помощью автоматического счетчика клеток
Countess™ (Invitrogen, США) при увеличении 100×2,3 (Мельникова Н. А. и
соавт., 2013). Живые клетки трипановый синий окрашивает по краям, мертвые – однородно по всей клетке (Николаев В. В., Строев В. А., Астраханцев А. Ф., 1993). Суспензию сперматозоидов получали из хвостовой части
продольно вскрытого и освобожденного от жира придатка семенника (эпидидимиса).
Для анализа морфофункциональных параметров эпидидимальных
сперматозоидов качества сперматозоидов самцов белых крыс суспензию
сперматозоидов исследовали на предметном стекле при помощи цифрового
микроскопа Axio Imager.M2 (ZEISS, Япония) при увеличении 40×10, после
чего определяли следующие морфометрические параметры:
1) площадь головки сперматозоида;
2) длина хвостовой части сперматозоида;
3) ширина шейки сперматозоида.
Для анализа интенсивности развития сперматозоидов в стадию роста
подсчитывали изменения их морфометрических показателей в просвете
извитых семенных канальцев и в суспензии, полученной из придатков семенников.
38
3.6. Морфометрическое исследование яичников самок белых крыс
Для изучения функционального состояния яичников в норме и патологии применяли следующие методы:
1) количественная оценка микроструктурных элементов яичника;
2) исследование эстрального цикла (Шейко Л. Д., 1998).
Количественную оценку микроструктурных элементов яичника изучали по следующим морфометрическим параметрам:
1) толщина однослойного эпителия, покрывающего яичник, а также
толщина белочной оболочки;
2) площадь поперечного среза яичника;
3) площадь и толщина коркового и мозгового вещества яичника;
4) количество разных типов фолликулов в корковом веществе яичника,
их площадь, толщина наружной оболочки фолликула, а также площадь ооцита, толщина оболочки, окружающей ооцит, количество и площадь окружающих его фолликулярных клеток, количество, площадь полостей и толщину
теки, появляющихся у вторичных и третичных фолликулов;
5) количество и площадь менструальных желтых тел в корковом веществе яичника, количество и площадь составляющих их лютеиновых клеток, а
также площадь их ядер;
6) площадь клеток соединительнотканной стромы, составляющих корковое и мозговое вещество яичника, а также их ядер;
7) диаметр кровеносных сосудов, пронизывающих мозговое вещество
яичника;
8) отношение площади мозгового вещества яичника к корковому.
39
3.7. Определение стадий эстрального цикла самок крыс
методом влагалищных мазков
Эстральный цикл является наиболее чувствительным к воздействию
каких-либо факторов внешней среды. По данным Мелик-Алавердяна Н. О.
(1967), устойчивые нарушения эстрального цикла наступают значительно
раньше, чем количественные изменения морфоструктурных элементов
яичника.
Динамика эстрального цикла в контрольной и опытной группе животных изучалась в соответствии с правилом «одного часа». Учитывалась общая
продолжительность эстрального цикла, длительность отдельных фаз и ритмичность их чередования. Методика основана на том, что циклические изменения стенки влагалища отражаются на влагалищном содержимом, а последнее легко исследуется взятием влагалищного мазка. Каждой фазе полового
цикла соответствует определенный клеточный состав влагалищного мазка
(Leng Z. et al., 1998). Учитывая, что период полового созревания у крыс
наступает на 60-й день – период пубертата, а 90-й день – период ранней половозрелости (Бабичев В. Н., 1981; Шаляпина В. Г., 1991), определение стадии эстрального цикла начинали с возраста 60 суток. С помощью данной методики возможно судить о наступлении полового созревания, о нормальной
циклической функции яичников, о различных нарушениях этой функции.
Для определения стадий эстрального цикла у самок белых крыс обернутый ватой и смоченный физиологическим раствором конец палочки осторожно вводили во влагалище самки и слегка поворачивали. Вынув его из
влагалища переносили захваченную ватой пробу на предметное стекло. Анализ влагалищных мазков осуществляли при осмотре под цифровым микроскопом Axio Imager.M2 (ZEISS, Япония) при увеличении 10010.
Весь эстральный цикл условно разбивается на следующие стадии:
1) диэструс – стадия покоя;
2) проэструс – стадия подготовки к течке (предтечка);
40
3) эструс – течка;
4) матаэструс – «послетечка», последующие за течкой изменения и возвращение к исходному состоянию.
Соответственно изменяется и состав влагалищного содержимого (Кабак Я. И., 1968). В связи короткими стадиями проэструса и метаэструса (12 и
6 часов соответственно), характер эстральной цикличности исследовали по
более продолжительным стадиям – эструс и диэструс, по следующим характеристикам:
1) эструс – мазок практически состоит из ороговевших безъядерных
эпителиальных клеток (≥90%);
2) диэструс – в мазке содержатся в основном лейкоцитарные клетки
(≥60%) и редкие эпителиальные клетки (Клочков Д. В., Алехина Т. А., 2012).
Для получения более полной характеристики эстрального цикла, также
было изучено количество циклов, приходившихся на самку в течение последних 22 суток экспозиции.
3.8. Методы статистической обработки результатов исследования
Статистическая обработка цифровых данных проводилась с помощью
программ FStat и Excel. Проверка статистических гипотез осуществлялась по
t-критерию Стьюдента (Лапач С. Н., Чубенко А. В., Бабич П. Н., 2001).
Математическая обработка результатов морфометрических исследований проводилась с использованием метода корреляционного анализа по Пирсону с расчетом коэффициента корреляции (Мюллер П. и соавт., 1982).
Все наблюдаемые различия считали достоверными при уровне значимости Р≤0,05.
При величине коэффициента от 0 до 0,3 корреляция оценивалась как
слабая, в интервале 0,3-0,5 – зависимая, 0,5-0,7 – тесная, 0,8-0,9 – весьма тесная, и при 0,9-1 – функциональная корреляционная зависимость.
41
4. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
4.1. Морфофункциональные изменения семенников самцов белых крыс
в норме и при воздействии ацетата свинца
4.1.1. Морфологические изменения семенников самцов белых крыс в
норме и при воздействии ацетата свинца
В ходе проведенных исследований было выявлено, что после 7 суток
воздействия ацетата свинца происходит увеличение массы семенников самцов
белых крыс, по сравнению с контролем, с 0,588±0,014 г. до 0,798±0,012 г., т. е.
на 35,71% (P≤0,05). Причем масса левого семенника несколько превышает
массу правого. Увеличение массы семенных желез самцов белых крыс свидетельствует, возможно, о их отеке.
Установлено, что после 7 суток воздействия ацетата свинца весовой
индекс семенника, по сравнению с контролем, увеличивается с 0,235±0,006%
до 0,319±0,005%, т. е. на 26,33% (P≤0,05).
Морфометрические исследования показали, что в опытной группе животных, по сравнению с контролем, происходит уменьшение толщины белочной оболочки семенника с 35,23±3,42 до 20,35±4,73, т. е. на 42,24% (P≤0,05).
В извитых семенных канальцах происходят следующие изменения:
1) уменьшается количество извитых семенных канальцев в одном поле
зрения на 25,14% (P≤0,05) (табл. 1);
2) увеличивается площадь поперечного сечения извитых семенных канальцев и их просвета соответственно на 13,72% (P≤0,05) и 58,01% (P≤0,05)
(табл. 1);
3) уменьшается площадь сперматогенного эпителия и его толщина соответственно на 13,76% (P≤0,05) и 21,19% (P≤0,05) (табл. 1);
4) уменьшается количество миоидных клеток в стенке извитого семенного канальца на 35,80% (P≤0,001), при этом увеличивается площадь миоид42
ных клеток на 44,26% (P≤0,05), площадь ядра – на 22,45% (P≤0,05), диаметр
ядра – на 20,44% (P≤0,05), площадь цитоплазмы – на 44,89% (P≤0,05)
(табл. 1);
5) уменьшается количество клеток Сертоли в сперматогенном эпителии
извитого семенного канальца на 22,48% (P≤0,05) (табл. 1);
6) уменьшается площадь и ширина базальной части клеток Сертоли соответственно на 19,81% (P≤0,05) и 7,39%, увеличивается высота их апикальной части на 10,54% (табл. 1);
7) уменьшается площадь и диаметр ядер клеток Сертоли соответственно на 36,35% (P≤0,05) и 33,41% (P≤0,05) (табл. 1);
8) уменьшается площадь цитоплазмы клеток Сертоли соответственно
на 21,11% (P≤0,05) (табл. 1);
9) уменьшается количество стволовых сперматогониев в сперматогенном эпителии извитого семенного канальца, их площадь и диаметр, площадь
и диаметр их ядер, а также площадь цитоплазмы соответственно на 12,30%
(P≤0,05), 3,56%, 1,73%%, 9,00%, 2,49%, 3,20% (табл. 1);
10) уменьшается количество дифференцирующихся сперматогониев в
сперматогенном эпителии извитого семенного канальца, их площадь и диаметр, площадь и диаметр их ядер, а также площадь цитоплазмы соответственно на 6,31%, 29,77% (P≤0,05), 16,36% (P≤0,05), 33,33% (P≤0,05), 18,11%
(P≤0,05), 28,87% (P≤0,05) (табл. 1);
11) уменьшается количество сперматоцитов, их площадь и диаметр,
площадь и диаметр их ядер, а также площадь цитоплазмы соответственно на
8,43%, 19,83% (P≤0,05), 10,50%, 12,24% (P≤0,05), 6,31% и 20,53% (P≤0,05)
(табл. 1);
12) уменьшается количество сперматид в сперматогенном эпителии извитого семенного канальца, их площадь и диаметр, площадь и диаметр их
ядер, а также площадь цитоплазмы соответственно на 17,36% (P≤0,05),
12,27% (P≤0,05), 6,36%, 28,67% (P≤0,05), 15,54% (P≤0,05) и 10,68% (табл. 1);
43
13) увеличивается длина жгутика поздних сперматид на 20,06%
(P≤0,05), при одновременном уменьшении его толщины на 12,30% (P≤0,05)
(табл. 1);
14) уменьшается количество сперматозоидов в просвете извитого семенного канальца, площадь головки сперматозоида и его ядра, а также ширина шейки соответственно на 26,70% (P≤0,05), 12,41% (P≤0,05), 25,97%
(P≤0,05), 10,11%. В тоже время обнаружено увеличение длины его хвостовой части на 8,05% (табл. 1).
Наружный осмотр семенников крыс-самцов показал, что они розоватобелого цвета, мягко-эластической консистенции, эллиптической формы.
При малом увеличении микроскопа заметна розовая полоса, идущая по
краю препарата – это белочная оболочка, состоящая из плотной неоформленной соединительной ткани. Основную массу семенника образуют извитые
семенные канальцы, разрезанные поперек или косо (тангенциально), округлой или эллипсовидной формы. Извитые семенные канальцы отделены друг
от друга тонкой оболочкой интерстициальной соединительной ткани. Стенка
канальца представлена сперматогенным эпителием на разных стадиях развития. Участки интерстиция между извитыми семенными канальцами расположены равномерно. Они преимущественно треугольной формы. В центре извитого канальца имеется просвет, куда выходят образованные спермии. Даже
при слабом увеличении заметно, что в разных канальцах идут разные стадии
сперматогенеза (рис. 1).
На базальной мембране изолировано от других клеток лежат стволовые
сперматогонии. Они имеют округлую форму (рис. 2).
44
Таблица 1 – Морфометрические показатели извитых семенных канальцев белых крыс.
№
п/п
Морфометрические показатели
Контроль
Опыт
1
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
3
34,68±0,94
45469,74±1746,76
8878,17±832,41
36591,57±1243,36
36,62±2,34
19,44±1,42
10,63±2,55
1,14±0,30
1,09±0,08
9,70±0,98
23,84±3,16
4
25,96±0,69*
52701,15±2703,18*
21146,15±1091,75*
31554,72±2526,31*
28,86±1,77*
12,48±1,49*
19,07±4,49*
1,47±0,29*
1,37±0,12*
17,60±1,25*
18,48±2,52*
12
13
14
15
16
2
Количество извитых семенных канальцев в одном поле зрения
Площадь поперечного сечения извитого семенного канальца, мкм2
Площадь просвета канальца, мкм2
Площадь сперматогенного эпителия, мкм2
Толщина сперматогенного эпителия, мкм
Количество миоидных клеток в стенке извитого семенного канальца
Площадь миоидной клетки, мкм2
Площадь ядра миоидной клетки, мкм2
Диаметр ядра миоидной клетки, мкм
Площадь цитоплазмы миоидной клетки, мкм2
Количество клеток Сертоли в сперматогенном эпителии извитого семенного канальца
Площадь клетки Сертоли, мкм2
Ширина базальной части клетки Сертоли, мкм
Высота апикальной части клетки Сертоли, мкм
Площадь ядра клетки Сертоли, мкм2
Диаметр ядра клетки Сертоли, мкм
189,73±18,59
13,39±1,04
15,78±4,14
15,82±0,73
4,49±0,18
152,15±13,96*
12,40±1,38
17,64±2,96
10,07±1,72*
2,99±0,23*
17
Площадь цитоплазмы клетки Сертоли, мкм2
183,91±1,39
145,08±2,12*
45
1
18
31
32
33
2
Количество стволовых сперматогониев в сперматогенном эпителии
извитого семенного канальца
Площадь стволового сперматогония, мкм2
Диаметр стволового сперматогония, мкм
Площадь ядра стволового сперматогония, мкм2
Диаметр ядра стволового сперматогония, мкм
Площадь цитоплазмы стволового сперматогония, мкм2
Количество дифференцирующихся сперматогониев в сперматогенном
эпителии извитого семенного канальца
Площадь дифференцирующегося сперматогония, мкм2
Диаметр дифференцирующегося сперматогония, мкм
Площадь ядра дифференцирующегося сперматогония, мкм2
Диаметр ядра дифференцирующегося сперматогония, мкм
Площадь цитоплазмы дифференцирующегося сперматогония, мкм2
Количество сперматоцитов в сперматогенном эпителии извитого семенного канальца
Площадь сперматоцита, мкм2
Диаметр сперматоцита, мкм
Площадь ядра сперматоцита, мкм2
34
35
Диаметр ядра сперматоцита, мкм
Площадь цитоплазмы сперматоцита, мкм2
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
46
3
17,89±3,32
Продолжение таблицы 1
4
15,69±3,02*
150,70±7,99
13,85±0,36
25,99±2,44
5,63±0,37
125,70±10,08
52,44±1,46
145,33±5,32
13,61±0,69
23,65±1,96
5,49±0,22
121,68±8,49
49,44±1,30
27,58±2,07
5,93±0,11
5,55±1,52
2,65±0,12
22,03±11,16
40,80±1,97
19,37±2,68*
4,96±0,23*
3,70±0,74*
2,17±0,13
15,67±1,78*
37,36±1,71
41,19±5,86
7,24±0,29
3,35±0,43
33,02±2,07*
6,48±0,11
2,94±0,34*
2,06±0,09
37,85±3,19
1,93±0,09
30,08±1,12*
1
36
37
38
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
2
Количество сперматид в сперматогенном эпителии извитого семенного канальца
Площадь сперматиды, мкм2
Диаметр сперматиды, мкм
Площадь ядра сперматиды, мкм2
Диаметр ядра сперматиды, мкм2
Площадь цитоплазмы сперматиды, мкм2
Длина жгутика поздних сперматид, мкм
Толщина жгутика поздних сперматид, мкм
Количество сперматозоидов в просвете извитого семенного канальца
Площадь головки сперматозоида, мкм2
Ширина шейки сперматозоида, мкм
Длина хвостовой части сперматозоида, мкм
Площадь ядра сперматозоида, мкм2
Примечание: * – достоверно по отношению к контролю P≤0,05.
47
3
34,80±1,52
32,69±4,36
6,45±0,22
2,93±0,52
1,93±0,06
29,77±2,17
10,08±2,15
3,17±0,75
304,52±13,14
17,48±2,12
2,97±0,23
20,11±0,96
1,81±0,56
Продолжение таблицы 1
4
28,76±1,31*
28,68±4,26*
6,04±0,22
2,09±0,43*
1,63±0,08*
26,59±2,06
12,61±3,02*
2,78±0,56*
223,20±31,02*
15,31±0,82*
2,67±1,46*
21,87±1,05
1,34±0,81
1
2
2
3
3
4
3
4
Рис. 1. Поперечный срез семенников (контроль). Окраска гематоксилин-эозин. Об. 10 × ок. 10: 1 – извитой семенной каналец; 2 – сперматогенный эпителий; 3 – просвет канальца; 4 – интерстициальная ткань.
Рис. 2. Стволовые сперматогонии в извитых семенных канальцах семенников (контроль). Окраска гематоксилин-эозин. Об. 100 × ок. 10.
48
Дифференцирующиеся (зрелые) сперматогонии с темным оптически
плотным ядром и узким ободком цитоплазмы. Между ними видны клетки
Сертоли, имеющие крупные бледно-розовые ядра. Основания клеток Сертоли лежат на базальной мембране между сперматогониями. Апикальная часть
клетки обращена к просвету семенного канальца и имеет треугольную или
пирамидальную форму. Ближе к центру канальца располагаются сперматоциты. Это крупные клетки с большим ядром и широким ободком цитоплазмы. Они имеют округлую или овальную форму. Самый внутренний слой извитого канальца составляют сперматиды, мелкие со светлым ядром клетки,
лежащие в несколько рядов. Ранние сперматиды округлой формы со сферическим ядром, находятся в средних слоях сперматогенного эпителия. Поздние сперматиды лежат в слое, прилегающем к просвету канальца, имеют вытянутую форму. У некоторых поздних сперматид обнаруживается жгутик. В
некоторых канальцах видны сформированные сперматозоиды. Их темные
вытянутые головки направлены на периферию канальца в сторону клеток
Сертоли, а хвосты свисают в просвет канальца (рис. 3).
Сперматозоиды в просвете извитого семенного канальца располагаются группами в количестве 6-8 по всему контуру просвета (рис. 4).
На мазках зрелые сперматозоиды имеют четкое разделение на составляющие части: головку, шейку и хвост. У большинства сперматозоидов головка имеет форму крючка (рис. 5).
После проведенных исследований по оценке жизнеспособности сперматозоидов было выявлено, что суспензия сперматозоидов контрольной
группы животных имеет густую консистенцию. Он мутного или молочнобелого цвета. Отмечена высокая концентрация сперматозоидов (рис. 6).
49
1
7
7
5
6
4
3
2
Рис. 3. Извитой семенной каналец (контроль). Окраска гематоксилинэозин. Об. 40 × ок. 10: 1 – миоидные клетки; 2 – клетки Сертоли; 3 – дифференцирующиеся сперматогонии; 4 – сперматоциты; 5 – ранние сперматиды; 6 – поздние сперматиды; 7 – сперматозоиды.
Рис. 4. Сперматозоиды самцов белых крыс в просвете извитого семенного канальца (контроль). Окраска гематоксилин-эозин. Об. 100 × ок. 10.
50
Рис. 5. Эпидидимальные сперматозоиды самцов белых крыс (контроль).
Мазок. Головка сперматозоидов имеет форму крючка. Об. 40 ×ок. 10.
Рис. 6.
Эпидидимальные
сперматозоиды
самцов
(контроль). Окраска трипановым синим. Об. 100 × ок. 2,3.
51
белых
крыс
В интерстициальной ткани семенных желез проходят кровеносные сосуды, вокруг которых залегают с большим сферическим ядром одиночные,
или чаще группами по 5-7 клеток крупные овальной или многоугольной
формы клетки Лейдига. Общее количество гландулоцитов в одном участке
интерстиция достигало 10-12 шт. (рис. 7).
2
2
1
3
2
Рис. 7. Интерстициальная ткань семенных желез (контроль). Окраска
гематоксилин-эозин. Об. 100 × ок. 10: 1 – участок интерстиция; 2 – клетки
Лейдига; 3 – кровеносный сосуд.
После 7 суток воздействия ацетата свинца выявлено, что белочная оболочка, окружающая семенники, имеет неоднородную толщину. Извитые семенные канальцы неправильной многогранной формы. Они располагаются
свободно, не прилегают плотно друг к другу. Лишь изредка встречаются извитые семенные канальцы эллипсовидной формы. Граница между сперматогенным эпителием и просветом канальца плохо просматривается и имеет нечеткие контуры. В собственной оболочке канальцев отмечено разволокнение
и дезорганизация базальных мембран. Между канальцами находятся прослойки интерстициальной соединительной ткани толщиной 12-17 мкм.
52
Участки интерстиция между извитыми семенными канальцами располагаются неравномерно, рыхло, в большинстве случаев имеет многогранную форму.
Даже невооруженным взглядом видно увеличение площади интерстициальной ткани между извитыми семенными канальцами, что возможно связано с
еѐ отеком, причем независимо от исследуемого поля и наличия или отсутствия сосудов микроциркуляторного русла в нем (рис. 8).
4
1
4
2
3
Рис. 8. Поперечный срез семенных желез (опыт). Окраска гематоксилин-эозин. Об. 10 × ок. 10: 1 – извитой семенной каналец; 2 – сперматогенный эпителий; 3 – просвет канальца; 4 – интерстициальная ткань.
По сравнению с контролем происходит изменение формы миоидных
клеток до полукруглой или овальной. Они располагаются по контуру извитого семенного канальца неравномерно, залегая группами или одиночно. Базальная часть клеток Сертоли значительно уменьшается в размерах и имеет
более округлую форму. Апикальная часть клетки имеет более вытянутую
форму. Сперматогонии, по сравнению с контролем, имеют меньший размер.
Стволовые сперматогонии имеют неправильную форму. Сперматоциты приобретают овальную, реже сферическую форму. Ранние и поздние спермати53
ды практически не различаются между собой. Они преимущественно овальной формы. Их ядра смещаются в центр клетки (рис. 9, 10).
После 7 суток воздействия ацетата свинца, по сравнению с контролем,
отмечено беспорядочное расположение сперматозоидов в просвете канальца.
Уменьшаются размеры и форма головки сперматозоида. На гистопрепаратах
наблюдаются обрывы хвостов и агглютинация сперматозоидов (рис. 11, 12).
Были обнаружены извитые семенные канальцы, в просвете которых отсутствовали сперматозоиды (рис. 13, 14).
После 7 суток воздействия ацетата свинца отмечено, что суспензия
сперматозоидов приобретает более прозрачный цвет и меньшую вязкость. На
мазках наблюдается снижение концентрации сперматозоидов (рис. 15).
Рис. 9. Стволовые сперматогонии в извитых семенных канальцах семенников (опыт). Окраска гематоксилин-эозин. Об. 100 × ок. 10.
54
1
3
4
7
6
7
5
3
2
Рис. 10. Извитой семенной каналец (опыт). Окраска гематоксилинэозин. Об. 40 × ок. 10: 1 – миоидные клетки; 2 – клетки Сертоли; 3 – дифференцирующиеся сперматогонии; 4 – сперматоциты; 5 – ранние сперматиды;
6 – поздние сперматиды; 7 – сперматозоиды.
2
1
2
Рис. 11. Сперматозоиды в просвете извитого семенного канальца
(опыт). Окраска гематоксилин-эозин. Об. 100 × ок. 10: 1 – обрывы хвостов;
2 – агглютинация сперматозоидов.
55
2
1
Рис. 12. Эпидидимальные сперматозоиды самцов белых крыс (опыт).
Мазок. Об. 40 × ок. 10: 1 – обрывы хвостов; 2 – агглютинация сперматозоидов.
Рис. 13. Извитой семенной каналец (опыт). Четко видно отсутствие
сперматозоидов
в
просвете
канальца.
Об. 40 ×ок. 10.
56
Окраска
гематоксилин-эозин.
Рис. 14. Просвет извитого семенного канальца (опыт). Видно отсутствие сперматозоидов. Окраска гематоксилин-эозин. Об. 100 × ок. 10.
1
2
1
2
Рис. 15. Эпидидимальные сперматозоиды самцов белых крыс (опыт).
Окраска трипановым синим. Об. 100 × ок. 2,3: 1 – обрывы хвостов; 2 – агглютинация сперматозоидов.
57
После 7 суток воздействия ацетата свинца обнаружено увеличение количества кровеносных капилляров, что может быть связано либо с включением в работу уже имеющихся, но ранее функционально неактивных капилляров микроциркуляторного русла, либо с прорастанием новых капилляров в
интерстициальную ткань.
Общая картина распределения клеток Лейдига в интерстициальной ткани носила диффузный характер. Интерстициальные гландулоциты располагались одиночно, лишь изредка встречаются небольшие группы по 2-3 клетки.
Общее их количество в одном участке интерстиция достигало 5-7 шт. Гландулоциты округлой формы, их ядра овальные и вытянутой формы (рис. 16).
3
2
3
3
1
2
Рис. 16. Интерстициальная ткань семенных желез (опыт). Окраска гематоксилин-эозин. Об. 100 × ок. 10: 1 – участок интерстиция; 2 – клетки Лейдига; 3 – кровеносный сосуд.
58
4.1.2. Функциональные изменения семенников самцов белых крыс
в норме и при воздействии ацетата свинца
Изучение сперматогенеза у крыс после 7 суток воздействия выявило
нарушение этого процесса по ряду функциональных показателей.
При расчете процентного распределения клеток сперматогенного эпителия выявил небольшие отклонения опытной группы по сравнению с контролем. Отмечено уменьшение процентного отношения сперматид и клеток
Сертоли по отношению к общему количеству клеток сперматогенного эпителия (табл. 2, рис. 17).
Наиболее конкретную информацию об интенсивности функционального процесса сперматогенеза дают такие показатели, как: индекс сперматогенеза, индекс релаксации (напряженности сперматогенеза, клеточный индекс
Сертоли), индекс созревания, индекс мейотической активности и герминативный индекс.
После 7 суток воздействия ацетата свинца отмечено снижение индекса
сперматогенеза и индекса релаксации, по сравнению с контролем, соответственно на 10,24%, 4,46%, что свидетельствует о снижении функциональной
активности семенных желез. Одновременно с этим, по сравнению с контролем, происходит увеличение индекса созревания на 20,00% (P≤0,05), индекса
мейотической активности – на 23,08% (P≤0,001) и герминативного индекса –
на 31,79% (P≤0,05), что свидетельствует о преобладании молодых клеток над
более зрелыми, а также задержке созревания мужских половых клеток
(табл. 3).
59
Таблица 2 – Сперматограмма (цитологический профиль сперматогенеза).
№
п/п
1
2
3
4
Показатели
Сперматогонии, %
Сперматоциты, %
Сперматиды, %
Клетки Сертоли, %
Контроль
Опыт
34,53±0,91
26,86±1,23
22,91±0,95
15,70±1,97
36,88±0,92
27,87±1,21
21,46±0,93*
13,79±1,79*
Примечание: * – достоверно по отношению к контролю Р≤0,05.
40
36,88
34,53
35
30
26,86 27,87
%
25
22,91
21,46
20
15,7
13,79
15
10
5
0
1
2
3
Контроль
Опыт
4
Рис. 17. Сперматограмма самцов белых крыс: 1 – сперматогонии;
2 – сперматоциты; 3 – сперматиды; 4 – клетки Сертоли.
60
Таблица 3 –Функциональная активность семенных желез самцов
белых крыс в норме и при воздействии ацетата свинца.
№
Показатель
п/п
1 Индекс сперматогенеза
2 Индекс релаксации (напряженности
сперматогенеза, клеточный индекс
Сертоли)
3 Индекс созревания
4 Индекс мейотической активности
5 Герминативный индекс
Контроль
Опыт
3,32±0,15
18,14±1,72
2,98±0,12
17,33±1,02
0,28±0,01
0,10±0,01
2,21±0,17
0,35±0,04*
0,13±0,01*
3,24±0,36*
Примечание: * – достоверно по отношению к контролю Р≤0,05.
Поскольку чувствительность разных типов половых клеток неодинакова к воздействию ацетата свинца, закономерно встает вопрос, какое звено гаметогенеза в количественном отношении страдает больше других. Для этого
было целесообразно проследить, как меняется численность отдельных типов
половых клеток, находящихся на разных стадиях сперматогенного цикла при
воздействии ацетата свинца
При воздействии ацетата свинца происходит снижение продукции всех
сперматогенных клеток: сперматогоний – на 6,31%, спермотоцитов – на
8,43%, сперматид – на 17,36% (P≤0,05) и сперматозоидов на 26,70% (P≤0,05)
(табл. 4, рис. 18, 19).
Изучение содержания сперматогенных клеток в семенных извитых канальцах позволило установить, что у экспериментальных животных в извитых
семенных канальцах, по сравнению с контролем, наблюдается увеличение
процентного содержания сперматогенных клеток в сперматогенном эпителии
к общему количеству половых клеток на 4,45%.
Проведенное исследование позволило выявить, что при воздействии
ацетата свинца происходит снижение численности в первую очередь зрелых
форм сперматогенных клеток – сперматид. Также было отмечено уменьше61
ние числа стволовых клеток сперматогоний, что является неблагоприятным
прогностическим фактором.
Проведенные исследования показали, что в опытной группе животных,
по сравнению с контролем, происходит уменьшение общей концентрации
сперматозоидов в 1 мл суспензии, концентрации живых сперматозоидов, а также их жизнеспособности соответственно на 50,63% (P≤0,05), 77,41% (P≤0,05) и
53,05% (P≤0,05). Одновременно с этим происходит увеличение концентрации
Кол-во
мертвых сперматозоидов на 60,68% (P≤0,05) (табл. 5, рис. 20).
330
300
270
240
210
180
150
120
90
60
30
0
304,52
223,2
70,33 65,13
40,8 37,36
1
34,8 28,76
2
3
Контроль
4
Опыт
Рис. 18. Количественное изменение отдельных типов сперматогенных
клеток в извитых семенных канальцах семенников самцов белых крыс при
воздействии ацетата свинца: 1 – сперматогонии; 2 – сперматоциты; 3 – сперматиды; 4 – сперматозоиды.
62
Таблица 4 – Количественное изменение отдельных типов сперматогенных клеток
в извитом семенном канальце семенников самцов белых крыс.
№
п/п
1
2
3
4
Показатель
Сперматогонии
Сперматоциты
Сперматиды
Сперматозоиды
Контроль
Опыт
Количество клеток в
% от общего
Количество клеток
% от общего
извитом семенном
количества
в извитом семенколичества
канальце
сперматогенных
ном канальце
сперматогенных
клеток
клеток
70,33±4,78
12,12±2,71
65,13±4,32*
16,59±2,56*
40,80±1,97
9,43±1,61
37,36±1,71*
10,03±2,37*
34,80±1,52
8,04±1,20
28,76±1,31*
7,49±1,35*
304,52±13,14
70,41±4,14
223,20±31,02*
65,89±5,20
Примечание: * – – достоверно по отношению к контролю Р≤0,05.
63
Рис. 19. Процентное соотношение всех типов половых клеток в извитых семенных канальцах семенных желез самцов белых крыс.
Таблица 5 – Количественные и качественные показатели
продуктивности семенников самцов белых крыс.
№
Показатель
Контроль
п/п
1 Общая концентрация сперматозоидов в 7,96±0,45
суспензии, 107/мл
2 Концентрация живых сперматозоидов 7,04±0,12
суспензии, 107/мл
3 Концентрация мертвых сперматозоидов в 0,92±0,07
суспензии, 107/мл
4 Жизнеспособность сперматозоидов, %
88,62±3,48
Опыт
3,93±0,11*
1,59±0,09*
2,34±0,14*
35,57±2,75*
Примечание: * – достоверно по отношению к контролю P≤0,05.
64
Рис. 20. Суспензия сперматозоидов самцов белых крыс.
Морфометрические исследования показали, что в опытной группе животных, по сравнению с контролем, происходит уменьшение площади головки сперматозоида и ширины его шейки соответственно на 16,99% (Р≤0,05) и
13,60% (Р≤0,05). При этом одновременно происходит увеличение его хвостовой части на 9,39% (Р≤0,05) (табл. 6).
Таблица 6 – Морфометрические показатели эпидимальных
сперматозоидов самцов белых крыс.
№
Показатели
Контроль
п/п
1 Площадь головки сперматозоида, мкм2
185,86±6,49
2 Длина хвостовой части сперматозоида, 300,64±11,18
мкм
3 Ширина шейки сперматозоида, мкм
6,60±0,68
Опыт
158,86±2,93*
328,86±8,95*
5,81±0,28*
Примечание: * – достоверно по отношению к контролю P≤0,05.
Анализ интенсивности развития сперматозоидов в стадию роста показал, что:
1) площадь головки сперматозоида в контроле увеличивается примерно
в 10,63 раза, а в опыте – 10,38 раза;
65
2) длина хвостовой части сперматозоида в контроле увеличивается
примерно в 14,95 раза, а в опыте – 15,04 раза;
3) ширина шейки сперматозоида в контроле увеличивается примерно в
2,22 раза, а в опыте – 2,18 раза (табл. 7).
Исследование участков интерстиция между извитыми семенными канальцами показало, что происходит увеличение площади интерстициальной
ткани между извитыми семенными канальцами на 23,01% (P≤0,05) при одновременном уменьшение количества участков интерстиция на 10,34%, площади клеток Лейдига – на 61,13% (P≤0,05), диаметра клеток Лейдига – на
37,88% (P≤0,05), площади ядер клеток Лейдина – на 69,68% (P≤0,05), диаметра ядер клеток Лейдига – на 49,33% (P≤0,05), площади цитоплазмы клеток Лейдига – на 58,03% (P≤0,05), а также их количества в участке интерстиция соответственно на 32,61% (P≤0,05) (табл. 8).
Возможно, это связано с тем, что клетки Лейдига находятся в неактивном состоянии.
66
Таблица 7 – Изменения морфометрических показателей сперматозоидов самцов белых крыс.
№
п/п
Показатели
1
Площадь
головки
сперматозоида, мкм2
Длина хвостовой части
сперматозоида,
мкм
Ширина шейки сперматозоида, мкм
2
3
Контроль
Сперматозоиды в
Эпипидимальные
просвете извитого
сперматозоиды в
семенного канальца
придатке семенника
17,48±2,12
185,86±6,49
Опыт
Сперматозоиды в
Эпипидимальные
просвете извитого
сперматозоиды в
семенного канальца
придатке семенника
15,31±0,82*
158,86±2,93*
20,11±0,96
300,64±11,18
21,87±1,05*
328,86±8,95*
2,97±0,23
6,60±0,68
2,67±1,46*
5,81±0,28*
Примечание: * – достоверно по отношению к контролю P≤0,05.
67
Таблица 8 – Морфометрические показатели интерстициальной
ткани семенных желез самцов белых крыс.
№
Показатели
Контроль
п/п
1 Площадь интерстициальной тка- 1226,14±103,75
ни, мкм2
2 Количество участков интерстиция
42,56±2,26
между извитыми семенными канальцами в одном поле зрения
препарата
3 Площадь клетки Лейдига, мкм
40,44±1,30
4 Диаметр клетки Лейдига, мкм
7,18±1,12
5 Площадь ядра клетки Лейдига,
10,82±1,06
2
мкм
6 Диаметр ядра клетки Лейдига,
3,71±0,25
2
мкм
7 Площадь цитоплазмы клетки
29,62±1,23
2
Лейдига, мкм
8 Количество клеток Лейдига в
9,20±1,20
участке интерстиция
Опыт
1592,66±138,96*
38,16±1,77
15,72±2,07*
4,46±1,18*
3,28±1,33**
1,88±0,36*
12,43±0,88**
6,20±1,80*
Примечание: * – достоверно по отношению к контролю P≤0,05.
При исследовании соотношения площади интерстициальной ткани к
площади извитых семенных канальцев в одном поле зрения препарата выявлено, что в контроле оно составляет примерно 1:30. После воздействия ацетата свинца соотношение площади интерстициальной ткани к площади извитых семенных канальцев в одном поле зрения препарата составляет примерно 1:23, что, возможно, свидетельствует о отеке интерстициальной ткани.
Совокупность полученных в ходе экспериментального исследования
данных позволяют говорить о том, воздействие ацетата свинца приводит к
следующим морфологическим и функциональным изменениям семенных
желез белых беспородных крыс-самцов:
68
1) увеличению веса семенников, увеличению площади поперечного
сечения извитых семенных канальцев и площади интерстиция, при одновременном уменьшении толщины белочной оболочки семенников, усилению кровоснабжения семенников;
2) уменьшению площади сперматогенного эпителия и его толщины;
3) уменьшению количества миоидных клеток в стенке извитого семенного канальца, увеличению площади клеток и их ядер;
4) снижению продукции всех популяций клеток сперматогенного
эпителия, и в первую очередь зрелых форм – сперматид, а также уменьшению числа стволовых сперматогоний, что является неблагоприятным прогностическим фактором.
5) уменьшению количества клеток Лейдига и клеток Сертоли, изменению их формы, уменьшению площади клеток и их ядер, что, возможно,
приводит к снижению выработки тестостерона и андрогенсвязывающего
белка, а также замедляет редукционное деление половых клеток.
6) снижению индекса сперматогенеза и индекса релаксации (напряженности сперматогенеза). Это свидетельствует о понижении функциональной активности семенных желез;
7) увеличению индекса созревания, индекса мейотической активности
и герминативного индекса, что свидетельствует о преобладании молодых
клеток над более зрелыми, а также задержке созревания мужских половых
клеток;
8) изменению интенсивности развития сперматозоидов в стадию роста.
69
4.2. Морфофункциальные изменения яичников самок белых крыс в
норме и при воздействии ацетата свинца
4.2.1. Морфологические изменения яичников самок белых крыс
в норме и при воздействии ацетата свинца
В ходе проведенных исследований было выявлено, что после 7 суток
воздействия ацетата свинца происходит увеличение массы яичников самок
белых крыс, по сравнению с контролем, с 0,103±0,004 г. до 0,111±0,003 г.,
т. е. на 7,77%.
Установлено, что после 7 суток воздействия ацетата свинца весовой
индекс яичника, по сравнению с контролем, уменьшается с 0,046±0,002% до
0,049±0,002, т. е. на 6,12%.
Морфометрические исследования показали, что в опытной группе животных, по сравнению с контролем, происходит:
1) уменьшение толщины однослойного эпителия и белочной оболочки,
соответственно на 35,55% (Р≤0,05) и 13,88% (Р≤0,05) (табл. 9);
2) увеличение площади поперечного среза яичника, площади и толщины его мозгового вещества соответственно на 2,85%, 30,03% (Р≤0,05) и
19,01% (Р≤0,05), при одновременном уменьшении толщины коркового вещества яичника на 12,04% (Р≤0,05) и площади – на 6,18% (табл. 9);
3) увеличение диаметра кровеносных сосудов, пронизывающих мозговое вещество яичника на 34,02% (Р≤0,05) (табл. 9).
При исследовании соотношения площади мозгового вещества яичника
к корковому выявлено, что в контроле оно составляет примерно 1:3. После
воздействия ацетата свинца соотношение площади мозгового вещества яичника к корковому составляет примерно 1:2.
Все полученные данные свидетельствуют об усилении кровоснабжения
яичников, что, возможно, свидетельствует об отеке мозгового вещества яичника.
70
Таблица 9 – Макроскопические показатели яичников самок белых крыс.
№
п/п
1
2
3
4
5
6
7
8
Показатели
Контроль
Опыт
Толщина однослойного эпителия, мкм
Толщина белочной оболочки яичника, мкм
Площадь поперечного среза яичника, ×103 мкм2
Площадь коркового вещества яичника, ×103 мкм2
Толщина коркового вещества яичника, мкм
Площадь мозгового вещества яичника, ×103 мкм2
Толщина мозгового вещества яичника, мкм
Диаметр кровеносных сосудов, пронизывающих мозговое вещество
яичника, мкм
10,07±0,48
19,67±0,38
9586,76±25,50
6912,15±23,79
1538,98±18,73
2176,05±24,84
799,43±3,79
11,81±1,38
6,49±0,24*
16,94±0,39*
9868,51±28,27
6484,89±22,63*
1353,73±21,07*
3110,23±22,63
987,09±5,92*
17,90±1,97*
Примечание: * – достоверно по отношению к контролю P≤0,05.
71
Анализ фолликулярного аппарата яичников показал, что в опытной
группе животных, по сравнению с контролем, происходит:
1) снижение количества примордиальных фолликулов в яичнике на
15,12% (Р≤0,05) (табл. 10, рис. 21);
2) уменьшение площади примордиальных фолликулов и их диаметра,
площади ооцита и его диаметра, а также площади и диаметра ядра ооцита соответственно на 0,59%, 0,29%, 1,40%, 0,72%, 6,57%, 3,73% (табл. 10);
3) уменьшение количества фолликулярных клеток в фолликулярном
слое, площади фолликулярных клеток и их ядер соответственно на 23,36%
(Р≤0,05), 7,52% и 16,41% (Р≤0,05) (табл. 10);
4) снижение количества первичных фолликулов в яичнике на 18,73%
(Р≤0,05) (табл. 10, рис. 21);
5) уменьшение площади первичных фолликулов и их диаметра, площади ооцита и его диаметра, а также площади и диаметра ядра ооцита соответственно на 4,29%, 2,18%, 2,15%, 1,08%, 5,75%, 2,92%;
6) уменьшение толщины блестящей оболочки ооцита в первичном
фолликуле на 12,34% (Р≤0,05) (табл. 10);
7) уменьшение толщины фолликулярного слоя в первичном фолликуле,
количества фолликулярных клеток в фолликулярном слое, площади фолликулярных клеток и их ядер соответственно на 3,07%, 19,01% (Р≤0,05), 2,14%
и 6,14% (табл. 10);
8) снижение количества вторичных фолликулов в яичнике на 44,32%
(Р≤0,05) (табл. 10, рис. 21);
9) уменьшение площади вторичных фолликулов и их диаметра, площади ооцита и его диаметра, а также площади и диаметра ядра ооцита соответственно на 15,91% (Р≤0,05), 8,41%, 5,27%, 2,78%, 8,59% и 4,26% (табл. 10);
10) уменьшение толщины теки, окружающей вторичный фолликул,
толщины блестящей оболочки ооцита во вторичном фолликуле соответственно на 26,80% (Р≤0,05), 20,52% (Р≤0,05) (табл. 10);
72
11) уменьшение толщины фолликулярного слоя во вторичном фолликуле, количества фолликулярных клеток в фолликулярном слое, площади
фолликулярных клеток и их ядер соответственно на 6,80%, 20,56% (Р≤0,05),
7,73% и 21,06% (Р≤0,001) (табл. 10);
12) уменьшение площади полости во вторичном фолликуле на 18,72%
(Р≤0,001) (табл. 10);
13) снижение количества третичных фолликулов в яичнике на 49,43%
(Р≤0,05) (табл. 10, рис. 21);
14) уменьшение площади третичных фолликулов и их диаметра, площади ооцита и его диаметра, а также площади и диаметра ядра ооцита соответственно на 32,16% (Р≤0,05), 17,63% (Р≤0,05), 8,28%, 4,23%, 10,41%
(Р≤0,05) и 5,33% (табл. 10);
15) уменьшение толщины теки, окружающей третичный фолликул, толщины блестящей и зернистой оболочек ооцита в третичном фолликуле соответственно на 17,41% (Р≤0,05), 32,40% (Р≤0,05), 54,32% (Р≤0,05) (табл. 10);
16) уменьшение толщины фолликулярного слоя в третичном фолликуле, количества фолликулярных клеток в фолликулярном слое, площади фолликулярных клеток и их ядер соответственно на 22,03% (Р≤0,05), 21,51%
(Р≤0,05), 5,40% и 29,47% (Р≤0,001);
17) уменьшение площади полости в третичном фолликуле на 17,31%
(Р≤0,001) (табл. 10);
18) увеличение количества атретических фолликулов на 54,54%
(Р≤0,05) (табл. 10, рис. 21);
19) увеличение площади клеток соединительнотканной стромы, составляющих корковое и мозговое вещество яичника, а также их ядер соответственно на 16,45% (Р≤0,05) и 4,98% (табл. 10, рис. 43).
.
73
Таблица 10 – Морфометрические показатели фолликулярного аппарата яичников белых крыс.
№
п/п
1
1
2
3
4
5
6
7
8
9
10
11
12
13
14
15
16
17
18
Показатели
Контроль
Опыт
2
Количество примордиальных фолликулов в яичнике
Площадь примордиального фолликула, мкм2
Диаметр примордиального фолликула, мкм
Площадь ооцита в примордиальном фолликуле, мкм2
Диаметр ооцита в примордиальном фолликуле, мкм
Площадь ядра ооцита в примордиальном фолликуле, мкм2
Диаметр ядра ооцита в примордиальном фолликуле, мкм
Количество фолликулярных клеток в фолликулярном слое примордиального фолликула
Площадь фолликулярных клеток в примордиальном фолликуле, мкм2
Площадь ядра фолликулярных клеток в примордиальном фолликуле, мкм2
Количество первичных фолликулов в яичнике
Площадь первичного фолликула, мкм2
Диаметр первичного фолликула, мкм
Площадь ооцита в первичного фолликуле, мкм2
Диаметр ооцита в первичном фолликуле, мкм
Толщина блестящей оболочки ооцита в первичном фолликуле, мкм
Площадь ядра ооцита в первичном фолликуле, мкм2
Диаметр ядра ооцита в первичном фолликуле, мкм
3
17,72±1,31
1142,38±1,01
38,15±0,02
256,86±2,04
18,09±0,07
43,09±1,39
7,41±0,12
5,48±0,69
4
15,04±0,78*
1135,68±1,23
38,04±0,02
253,27±1,33
17,96±0,05
40,26±0,9
7,16±0,08
4,20±0,75*
36,05±0,79
5,91±0,14
13,88±1,09
6937,52±68,12
94,01±0,46
1427,48±4,11
42,64±0,06
3,97±0,22
354,72±2,75
21,26±0,08
33,34±1,01
4,94±0,11*
11,28±1,07*
6639,89±131,99
91,96±0,91
1396,80±15,56
42,18±0,24
3,48±0,24*
334,31±5,01
20,64±0,15
74
1
19
20
21
22
23
24
25
26
27
28
29
30
31
32
33
34
35
36
37
38
2
Толщина фолликулярного слоя в первичном фолликуле, мкм
Количество фолликулярных клеток в фолликулярном слое первичного
фолликула
Площадь фолликулярных клеток в первичном фолликуле, мкм2
Площадь ядра фолликулярных клеток в первичном фолликуле, мкм2
Количество вторичных фолликулов в яичнике
Площадь вторичного фолликула, ×103 мкм2
Диаметр вторичного фолликула, мкм
Толщина теки, окружающей вторичный фолликул, мкм
Площадь ооцита во вторичном фолликуле, ×103 мкм2
Диаметр ооцита во вторичном фолликуле, мкм
Толщина блестящей оболочки ооцита во вторичном фолликуле, мкм
Площадь ядра ооцита во вторичном фолликуле, мкм2
Диаметр ядра ооцита во вторичном фолликуле, мкм
Толщина фолликулярного слоя во вторичном фолликуле, мкм
Количество фолликулярных клеток в фолликулярном слое вторичного
фолликула
Площадь фолликулярных клеток во вторичном фолликуле, мкм2
Площадь ядра фолликулярных клеток во вторичном фолликуле, мкм2
Площадь полости во вторичном фолликуле, мкм2
Количество третичных фолликулов в яичнике
Площадь третичного фолликула, ×103 мкм2
75
Продолжение таблицы 10
3
4
25,68±0,22
24,89±0,50
29,68±2,20
24,04±1,64*
42,85±0,50
6,51±0,16
10,92±0,98
41,23±2,85
229,18±11,02
20,15±1,30
4,93±0,12
79,25±2,31
4,63±0,46
455,91±7,12
23,95±1,08
71,28±2,91
72,16±8,10
41,93±0,31
6,11±0,25**
6,08±0,68*
34,67±3,34*
209,90±10,13
14,75±0,62*
4,67±0,30
77,05±2,45
3,68±0,28*
416,72±8,85**
22,93±1,12*
66,43±3,84
57,32±5,51*
70,25±2,17
9,07±1,03
2973,84±112,31
7,04±0,77
252,44±07,76
64,82±2,39
7,16±0,98**
2417,61±202,71**
3,56±0,33*
171,25±4,36*
1
39
40
41
42
43
44
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
2
Диаметр третичного фолликула, мкм
Толщина теки, окружающей третичный фолликул, мкм
Площадь ооцита в третичном фолликуле, ×103 мкм2
Диаметр ооцита в третичном фолликуле, мкм
Толщина блестящей оболочки ооцита в третичном фолликуле, мкм
Толщина зернистой оболочки ооцита в третичном фолликуле, мкм
Площадь ядра ооцита в третичном фолликуле, мкм2
Диаметр ядра ооцита в третичном фолликуле, мкм
Толщина фолликулярного слоя в третичном фолликуле, мкм
Количество фолликулярных клеток в фолликулярном слое третичного
фолликула
Площадь фолликулярных клеток в третичном фолликуле, мкм2
Площадь ядра фолликулярных клеток в третичном фолликуле, мкм2
Площадь полости в третичном фолликуле, ×103 мкм2
Количество атретических фолликулов в яичнике
Площадь клеток соединительнотканной стромы, составляющих корковое
и мозговое вещество яичника, мкм2
Площадь ядер клеток соединительнотканной стромы, составляющих корковое и мозговое вещество яичника, мкм2
Примечание: * – достоверно по отношению к контролю P≤0,05.
76
Продолжение таблицы 10
3
4
566,97±8,74
467,02±5,94*
43,66±3,53
36,06±2,13*
15,45±0,21
14,17±0,19
140,27±0,96
134,34±0,92
5,71±0,45
3,86±0,39*
8,80±0,84
4,02±0,30*
557,09±8,43
499,12±4,64*
26,64±0,20
25,22±0,12
213,35±4,35
166,34±3,00*
120,32±14,60
94,44±7,67*
81,56±10,33
11,64±1,28
104,78±8,94
2,80±0,78
73,36±5,58
77,15±2,65
8,21±0,75*
86,65±6,53*
6,16±0,76*
87,80±8,61*
7,25±1,15
7,63±1,33
20
18
17,72
15,04
16
13,88
Кол-во
14
11,28
12
10,92
10
8
6,08
7,04
6,16
6
3,56
4
2,08
2
0
1
2
Контроль
3
4
5
Опыт
Рис. 21. Фолликулярный аппарат яичников самок белых крыс: 1 – примордиальные фолликулы; 2 – первичные фолликулы; 3 – вторичные фолликулы; 4 – третичные фолликулы; 5 – атретические фолликулы; 6 – желтые тела.
Проведенные гистологические и морфометрические исследования
позволили выявить состояние основных структур яичников белых крыс –
фолликулов, желтых тел, а также сосудов как в контроле, так и в опыте.
В ходе проведенных исследованиях было выявлено, что клетки однослойного эпителия, покрывающего яичник снаружи, имеют кубическую
форму. Белочная оболочка имеет однородную структуру и слабо васкуляризирована (рис. 22). Хорошо различимы корковый и мозговой слои яичника
(рис. 23).
В корковом веществе яичника фолликулы находятся на разных стадиях
развития вплоть до зрелых граафовых пузырьков (третичных фолликулов).
Они округлой формы. Местами наблюдаются атретические фолликулы
(рис. 24). Между фолликулами располагается соединительнотканная строма
яичника. Клетки соединительнотканной основы коркового вещества имеют
веретенообразную форму (рис. 25).
77
1
2
Рис. 22. Поверхность яичника (контроль). Окраска гематоксилин-эозин.
Об. 100 × ок. 10: 1 – однослойный эпителий; 2 – белочная оболочка.
1
2
Рис. 23. Поперечный срез яичника (контроль). Окраска гематоксилинэозин. Об. 5 × ок. 10: 1 – корковое вещество; 2 – мозговое вещество.
78
5
3
3
2
4
1
1
2
Рис. 24. Корковое вещество яичника (контроль). Окраска гематоксилин-эозин. Об. 20 × ок. 10: 1 –примордиальные фолликулы; 2 – первичные
фолликулы; 3 – вторичные фолликулы; 4 – соединительнотканная основа; 5 –
желтое тело.
Рис. 25. Клетки соединительнотканной стромы яичника (контроль).
Четко видно, что они имеют веретенообразную форму. Окраска гематоксилин-эозин. Об. 100 × ок. 10.
79
Примордиальные фолликулы располагаются непосредственно под белочной оболочкой яичника в виде компактных групп. Лишь изредка встречаются одиночные примордиальные фолликулы. Ооциты в примордиальных
фолликулах окружены одним слоем фолликулярных клеток, имеющих плоскую или округлую форму (рис. 26).
Рис. 26. Примордиальные фолликулы в корковом веществе яичника
(контроль). Окраска гематоксилин-эозин. Об. 40 × ок. 10.
Первичные фолликулы отличаются большим размером первичного ооцита и появлением вокруг него блестящей оболочки. Фолликулярные клетки
в
первичном
фолликуле
имеют
кубическую
форму
и
лежат
в
1-2 слоя. Хорошо различимы ядра первичных ооцитов (рис. 27).
Вторичные фолликулы имеют значительно большие размеры, по сравнению с первичными фолликулами. Вокруг фолликула начинает формироваться дополнительная оболочка – тека. Фолликулярный эпителий становится многослойным. В фолликуле появляется одна или несколько мелких полостей, заполненных жидкостью (рис. 28).
80
Рис. 27. Первичные фолликулы в корковом веществе яичника (контроль). Четко видны ядра ооцитов и окружающая их блестящая оболочка.
Окраска гематоксилин-эозин. Об. 40 × ок. 10.
Рис. 28. Вторичный фолликул в корковом веществе яичника (контроль). Окраска гематоксилин-эозин. Об. 20 × ок. 10.
81
Основной объѐм третичного фолликула занят большой полостью с жидкостью. Встречаются также малые полости, ещѐ не успевшие слиться с основной полостью. У третичного фолликула более выражена текальная оболочка.
Внутренний слой теки содержит интерстициальные (текальные) клетки
с округлыми ядрами. Наружный слой теки образован плотной волокнистой
соединительной тканью. Клетки (фибробласты) имеют узкие ядра.
Ооцит окружен блестящей оболочкой и слоем фолликулярных клеток –
зернистым слоем. При этом внутренние части фолликулярных клеток (обращѐнные к блестящей оболочке) выглядят как лучистый венец (рис. 29).
Рис. 29. Третичный фолликул в корковом веществе яичника (контроль).
Четко выражена текальная оболочка вокруг фолликула. Окраска гематоксилин-эозин. Об. 20 × ок. 10.
Мозговое вещество яичника невелико по сравнению с корковым, хорошо васкуляризировано. Небольшие кровеносные сосуды проходят из мозгового вещества в корковое Соединительнотканная основа мозгового вещества не упорядочена (рис. 30).
82
2
1
1
Рис. 30. Мозговое вещество яичника (контроль). Окраска гематоксилин-эозин. Об. 100 × ок. 10: 1 – соединительнотканная основа; 2 – кровеносный сосуд.
После проведенных исследований выявлено, что после воздействия
ацетата свинца клетки однослойного эпителия, покрывающего яичник снаружи, имеют удлиненную форму. Белочная оболочка по сравнению с контролем обладает более плотной структурой (рис. 31). Отмечается увеличение
объема мозгового вещества яичника по отношению к корковому (рис. 32).
Выявлено, что примордиальные фолликулы располагаются преимущественно одиночно. Лишь изредка встречаются небольшие группы (рис. 33).
Среди более зрелых форм фолликулов, были выявлены фолликулы овальной
и неправильной формы (рис. 34, 35). Обращает на себя внимание высокое содержание атретических фолликулов. Атрезии чаще подвергаются вторичные
растущие фолликулы, реже третичные фолликулы (рис. 36, 37).
83
1
2
Рис. 31. Поверхность яичника (опыт). Окраска гематоксилин-эозин.
Об. 100 × ок. 10: 1 – однослойный эпителий; 2 – белочная оболочка.
2
1
Рис. 32. Поперечный срез яичника (опыт). Окраска гематоксилинэозин. Об. 5 × ок. 10: 1 –корковое вещество; 2 – мозговое вещество.
84
1
5
2
3
55
4
1
5
6
Рис. 33. Корковое вещество яичника (опыт). Окраска гематоксилинэозин. Об. 20 × ок. 10: 1 –примордиальные фолликулы; 2 – первичные фолликулы; 3 – вторичные фолликулы; 4 – третичные фолликулы; 5 – соединительнотканная основа; 6 – желтое тело.
Рис. 34. Вторичный фолликул (опыт). Окраска гематоксилин-эозин.
Об. 20 × ок. 10.
85
Рис. 35. Третичный фолликул (опыт). Окраска гематоксилин-эозин.
Об. 20 × ок. 10.
Рис. 36. Атретический фолликул (опыт). Окраска гематоксилин-эозин.
Об. 20 × ок. 10.
86
Рис. 37. Начало атрезии фолликула (стрелкой показана сморщенная
блестящая оболочка ооцита). Окраска гематоксилин-эозин. Об. 20 × ок. 10.
После воздействия ацетата свинца, по сравнению с контролем, клетки
соединительнотканной основы коркового вещества имеют более округлую
форму (рис. 38).
Рис. 38. Клетки соединительнотканной стромы яичника (опыт). Окраска гематоксилин-эозин. Об. 100 × ок. 10.
87
Мозговое вещество содержит более крупные сосуды, чем в контроле,
что свидетельствует об усилении кровоснабжения яичника (рис. 39).
2
11
2
11
11
2
Рис. 39. Мозговое вещество яичника (опыт). Окраска гематоксилинэозин. Об. 100 × ок. 10: 1 – соединительнотканная основа; 2 – кровеносные сосуды.
4.2.2. Функциональные изменения яичников самок белых крыс
в норме и при воздействии ацетата свинца
После проведенных исследований выявлено, что в контроле в корковом
веществе яичника желтые тела располагаются равномерно, покрыты соединительнотканной капсулой, от которой к центру направляются тонкие прослойки, содержащие кровеносные и лимфатические сосуды. Обнаруженные
желтые тела имеют округлую или овальную форму. Большинство из них
находятся в стадии образования или зрелости (рис. 40, 41).
88
Рис. 40. Менструальное жѐлтое тело в яичнике (контроль). Окраска
гематоксилин-эозин. Об. 20 × ок. 10.
Рис. 41. Менструальное жѐлтое тело в яичнике (контроль). Четко видно
скопление кровеносных сосудов в центре желтого тела (показано стрелкой).
Окраска гематоксилин-эозин. Об. 40 × ок. 10.
89
При исследовании лютеиновых клеток, составляющих основу желтого
тела, обнаружено, что они располагаются плотно друг к другу и имеют неправильную многогранную форму. Клеточный состав в различных участках
менструального желтого тела неодинаков. По периферии преобладают мелкие лютеоциты, а ближе к центру – крупные. Ядра лютеиновых клеток относительно крупные, темные вследствие равномерного распределения гранул
хроматина, и располагаются, как правило, в центре клетки (рис. 42).
Рис. 42. Лютеиновые клетки менструального желтого тела яичника
(контроль). Окраска гематоксилин-эозин. Об. 100 × ок. 10.
После 7 суток перорального введения ацетата свинца отмечено уменьшение количества менструальных желтых тел в яичниках самок белых крыс
по сравнению с контролем, что свидетельствует об уменьшении количества
созревших и вышедших из яичника яйцеклеток. Обнаруженные желтые тела
имеют неправильную форму. Большинство из них находятся в стадии инволюции или на начальном этапе образования. Сосуды менструального желтого
тела, по сравнению с контролем, находятся в разном морфофункциональном
состоянии. В одних участках желтого тела капилляры расширены и кровенаполнены, а в других – разрушены (рис. 43, 44).
90
Рис. 43. Менструальное жѐлтое тело в яичнике (опыт). Окраска гематоксилин-эозин. Об. 20 × ок. 10.
Рис. 44. Менструальное жѐлтое тело в яичнике (опыт). Четко видно
рассредоточение мелких кровеносных сосудов по всему контуру желтого тела (показано стрелкой). Окраска гематоксилин-эозин. Об. 40 × ок. 10.
91
Также выявлено, что при воздействии ацетата свинца, по сравнению с
контролем, лютеиновые клетки располагаются более свободно, уменьшены в
размерах, имеют округлую или овальную форму и концентрируются преимущественно вокруг кровеносных сосудов. Ядра лютеоцитов смещаются, как правило, к одному из полюсов клетки, более светлые, по сравнению с контролем,
вследствие расположения хроматина по краям в виде глыбок (рис. 45).
Рис. 45. Лютеиновые клетки желтого тела (опыт). Окраска гематоксилин-эозин. Об. 100 × ок. 10.
Морфометрические исследования показали, что в опытной группе животных, по сравнению с контролем, происходит уменьшение количества менструальных желтых тел в яичнике и их площади соответственно на 45,30%
(P≤0,05), 30,23% (P≤0,05). Уменьшается количество лютеиновых клеток, составляющих желтое тело, площадь лютеиновых клеток и площадь их ядер
соответственно на 22,58% (P≤0,05), 26,19% (P≤0,05), 33,54% (P≤0,05)
(табл. 11).
92
Таблица 11 – Показатели менструальных желтых тел в яичниках
самок белых крыс.
№
Показатели
Контроль
Опыт
п/п
1 Количество менструальных желтых тел
4,68±0,68
2,56±0,62*
в яичнике
2 Площадь менструального желтого тела, 863,43±6,56 602,38±7,24*
×103 мкм2
3 Количество лютеиновых клеток в мен- 877,24±13,01 679,12±17,53*
струальном желтом теле
4 Площадь лютеиновых клеток, мкм2
185,90±2,30 137,20±2,32*
2
5 Площадь ядер лютеиновых клеток, мкм
19,65±0,68
13,06±0,46*
Примечание: * – достоверно по отношению к контролю Р≤0,05.
Полученные данные показали, что яичники крыс реагируют на воздействие ацетата свинца снижением репродуктивной способности.
Весь эстральный цикл условно разбивается на следующие стадии:
1) диэструс – стадия покоя;
2) проэструс – стадия подготовки к течке (предтечка);
3) эструс – течка;
4) матаэструс – «послетечка», последующие за течкой изменения и возвращение к исходному состоянию.
Соответственно изменяется и состав влагалищного содержимого (Кабак Я. И., 1968). В связи короткими стадиями проэструса и метаэструса (12 и
6 часов соответственно), характер эстральной цикличности исследовали по
более продолжительным стадиям – эструс и диэструс, по следующим характеристикам:
1) эструс – мазок практически состоит из ороговевших безъядерных
эпителиальных клеток (≥90%);
2) диэструс – в мазке содержатся в основном лейкоцитарные клетки
(≥60%) и редкие эпителиальные клетки (Клочков Д. В., Алехина Т. А., 2012).
93
В результате воздействия ацетата свинца происходит уменьшение количества эстральных циклов в течение 22 суток с 4,270,39 до 3,600,48, т. е. на
15,69% (Р≤0,05), увеличение их продолжительности на 11,56% (Р≤0,05),
нарушение последовательности фаз со смещением его в сторону диэструса.
Отмечено уменьшение продолжительности стадии эструс на 9,78% и увеличение продолжительности стадии диэструс на 19,31% (Р≤0,05) (табл. 12, рис. 46).
Таблица 12 – Продолжительность эстрального цикла и отдельных его
стадий у самок белых крыс.
№
п/п
1
2
Группа
Контроль
Опыт
Показатели
Продолжительность стадии
эструс, сутки
1,330,11
1,200,12*
Продолжительность эстрального цикла, сутки
4,130,26
4,670,28*
Продолжительность стадии диэструс, сутки
2,800,15
3,470,19*
Примечание: * – достоверно по отношению к контролю Р≤0,05.
4
3,47
Кол-во суток
3,5
2,8
3
2,5
2
1,33
1,5
1,2
1
0,5
0
1
2
Контроль
Опыт
Рис. 46. Продолжительность отдельных стадий эстрального цикла
у самок белых крыс: 1 – эструс; 2 – диэструс.
94
Проведенные исследования показали, что воздействие ацетата свинца
приводит к негативным эффектам со стороны женской репродуктивной системы крыс. Отмечается морфофункциональная перестройка коркового и
мозгового вещества яичников. Отмечено уменьшение толщины покрывающего яичник снаружи однослойного эпителия, толщины белочной оболочки,
площади и толщины коркового вещества яичника, при одновременном увеличении площади и толщины мозгового вещества, а также площади и ядер
клеток соединительнотканной стромы яичника.
В корковом веществе ярко выражена атрезия фолликулов. Атрезии чаще
подвергались вторичные растущие фолликулы, реже третичные фолликулы.
Мозговое вещество содержит более крупные сосуды, что свидетельствует об усилении кровоснабжения яичников.
В следствии морфологических изменений яичников под воздействием
ацетата свинца происходит уменьшение числа циклов на одну самку, уменьшение продолжительности стадии эструс и увеличение стадии диэструс.
95
ОБСУЖДЕНИЕ РЕЗУЛЬТАТОВ ИССЛЕДОВАНИЙ
Из-за широкого распространения свинцового загрязнения, практически
все население подвергается риску его воздействия, независимо от социальноэкономического статуса, расовой и этнической принадлежности или места
проживания (сельская местность, город или пригород). Хроническое свинцовое отравление создает угрозу, прежде всего, здоровью и умственному развитию подрастающего поколения и тем самым – будущему всего человечества
(Печкурова Е. А., Новикова О. Н., 1997; Сетко Н. П., Захарова Е. А., 2008;
Столяров И. Д., Огурцов Р. П., Вотинцева М. В. и соавт., 1998; Трахтенберг И. М., 1997). Повышенное внимание к данной проблеме обусловлено
тем, что из профессиональной плоскости она перешла в экопатологическую,
из-за глобального распространения свинца (Колосова И. И., 2013).
Свинец способен поражать жизненно важные органы и системы организма, в том числе и репродуктивную систему (Измеров Н. Ф., 2000; Зубарев И. В., 2012; Ласьков Д. С., 2014).
Экзогенное воздействие свинца на репродуктивную систему организма
является очень важным и актуальным аспектом в прогнозировании и предупреждении возможного его влияния на течение беременности и развитие плода
(Волощенко О. И., Мудрый И. В., 1991; Савельева Г. М. и соавт., 1991;
Saxena D. K. et al., 1994; Gupta G. S., Singh J., Gupta A., 1997; Schneider H., 1997;
Torry D. S., Torry R. J., 1997; Reichrtova E., Dorociak F., Palkovicova L., 1998).
В связи с этим представляется весьма актуальным изучение влияния
ацетата свинца на мужские и женские половые железы.
Объектом нашего исследования были взяты семенники и яичники половозрелых белых крыс с экспериментальным свинцовым поражением организма.
Установлено, что при воздействии ацетата свинца вес семенников самцов белых крыс увеличивается на 35,71% (P≤0,05), а вес яичников самок белых крыс увеличивается на 7,77%, по сравнению с контролем.
96
После 7 суток воздействия ацетата свинца весовой индекс семенника,
по сравнению с контролем, увеличивается на 26,33% (P≤0,05), а весовой индекс яичника – на 6,12%.
Таким образом, при воздействии ацетата свинца на организм экспериментальных животных наблюдаются признаки нарушения весовых параметров семенников и яичников, что может свидетельствовать о нарушении строения и функций данных органов.
Гистологическое изучение сперматогенного пласта семенных канальцев показал, что в норме стволовые сперматогонии лежат на базальной мембране изолировано от других клеток. Они имеют округлую форму.
Дифференцирующиеся (зрелые) сперматогонии с темным оптически
плотным ядром и узким ободком цитоплазмы. Между ними видны клетки
Сертоли, имеющие крупные бледно-розовые ядра. Основания клеток Сертоли лежат на базальной мембране между сперматогониями. Апикальная
часть клетки обращена к просвету семенного канальца и имеет треугольную
или пирамидальную форму. Ближе к центру канальца располагаются сперматоциты. Это крупные клетки с большим ядром и широким ободком цитоплазмы. Они имеют округлую или овальную форму.
Самый внутренний слой извитого канальца составляют сперматиды,
мелкие со светлым ядром клетки, лежащие в несколько рядов. Ранние сперматиды округлой формы со сферическим ядром, находятся в средних слоях
сперматогенного эпителия. Поздние сперматиды лежат в слое, прилегающем
к просвету канальца, имеют вытянутую форму. У некоторых поздних сперматид обнаруживается жгутик. В некоторых канальцах видны сформированные сперматозоиды. Их темные вытянутые головки направлены на периферию канальца в сторону клеток Сертоли, а хвосты свисают в просвет канальца. Сперматозоиды в просвете извитого семенного канальца располагаются
группами в количестве 6-8 по всему контуру просвета.
В ходе проведенных исследований отмечено, что сперматогонии, по
сравнению с контролем, имеют меньший размер. Стволовые сперматогонии
97
имеют неправильную форму. Сперматоциты приобретают овальную, реже
сферическую форму. Ранние и поздние сперматиды практически не различаются между собой. Они преимущественно овальной формы. Их ядра смещаются в центр клетки.
После 7 суток воздействия ацетата свинца, по сравнению с контролем,
отмечено беспорядочное расположение сперматозоидов в просвете канальца.
Уменьшаются размеры и форма головки сперматозоида. На гистопрепаратах
наблюдаются обрывы хвостов и агглютинация сперматозоидов. Были обнаружены извитые семенные канальцы, в просвете которых отсутствовали
сперматозоиды.
При оценке структурных особенностей семенников экспериментальных
животных нами использовались следующие морфометрические показатели:
количество извитых семенных канальцев в одном поле зрения, площадь поперечного сечения извитого семенного канальца, его просвета, а также площадь сперматогенного эпителия и его площадь. По мнению ряда авторов,
данные показатели служат достоверным критерием, отражающим структурно-функциональное состояние мужских гонад (Creasy D. M., 2001; Orth J. M.,
1993; Сизоненко М. Л., Брюхин Г. В., 2012). Установлено, что площадь извитых семенных канальцев у самцов крыс при свинцовой интоксикации увеличивается на 13,72% (P≤0,05), по сравнению с контролем, при одновременном
уменьшении площади сперматогеннного эпителия и его толщины соответственно на 13,76% (P≤0,05) и 21,19% (P≤0,05).
Изменения размеров извитых семенных канальцев являются важными
количественными показателями, указывающими на изменения процесса сперматогенеза (Саяпина И. Ю., 2013). Увеличение размеров извитых семенных
канальцев является распространенным изменением со стороны мужской репродуктивной системы при различных интоксикациях (Волков В. П., 2014),
особенно ярко развивается при гиперандрогинемии (Васильева С. Г. и соавт.,
2011), а также асептических воспалениях (Шепитько В. И., Стецук Е. В., 2007).
Подобные изменения обычно сопровождаются истончением сперматогенного
98
пласта и уменьшением количества клеток в его составе (Васильева С. Г. и соавт., 2011; Creasy D. M., 2001), что мы и наблюдали в наших исследованиях.
Для анализа цитологического профиля сперматогенеза нами производился подсчѐт суммарного количества сперматогенных клеток в поперечных
срезах извитых семенных канальцев, а также подсчѐт отдельных видов сперматогенных клеток: сперматогоний различной степени зрелости, а также их
суммарного количества, первичных и вторичных сперматоцитов, ранних и
поздних сперматид, сперматозоидов.
Изучение содержания сперматогенных клеток в семенных извитых канальцах позволило установить, что у экспериментальных животных в извитых
семенных канальцах наблюдается увеличение процентного содержания сперматогониальных клеток в сперматогенном эпителии к общему количеству половых клеток на 4,45%, по сравнению с контролем, что может свидетельствовать
о усиленной пролиферацией гоноцитов (Васильева С. Е., 2011).
Подсчѐт сперматогоний вели, начиная с 60-го дня постнатального онтогенеза, поскольку, согласно современным представлениям о процессах
сперматогенеза, у крыс в период новорожденности практически все сперматогенные клетки являются гоноцитамии (Zoghi C. et al., 2012) образование
первых сперматогоний датируется 3-6 сутками постнатального онтогенеза
(De Rooij D. G., 1998; Morales A. et al., 2007; Saito K., O'Donnell L.,
McLachlan R. I., Robertson D. M., 2000; Zoghi C. et al, 2012), хотя, согласно
отдельным сообщениям, даже у 15-суточных животных часть клеток, морфологически идентичных сперматогониям, в действительности являются гоноцитами (Zoghi C. et al., 2012).
Анализ суммарного количества сперматогоний показал, что их количество у животных экспериментальной группы на 60-е сутки снижено, по сравнению с контролем, на 6,31%.
Снижение данного показателя, очевидно, связанно с началом новой
волны сперматогенеза к периоду полового созревания, проходящего более
интенсивно и завершающегося уже не апоптозом, а формированием полно99
ценных
сперматозоидов
(Saito
K.,
O'Donnell
L.,
McLachlan
R.
I.,
Robertson D. M., 2000).
Согласно данным литературы, первые сперматоциты в семенниках
крыс появляются на 9-10 сутки постнатального онтогенеза (Marchlewska K. et
al., 2011), позже в результате первой волны сперматогенеза количество сперматоцитов сначала растѐт, а затем останавливается на определѐнном уровне,
ограниченном апоптозом (Moreno R. D. et al., 2006; Morales A. et al., 2007). У
половозрелых животных активность апоптоза сперматоцитов уменьшается и
протекает полноценный сперматогенез, сопровождающийся увеличением содержания изучаемых клеток в данном периоде (Jahnukainen K. et al., 2004).
Поэтому изучение данного показателя мы начинали с 60-х суток постнатального онтогенеза. Анализ суммарного количества сперматоцит и сперматид
экспериментальной группы животных позволил установить, что их количество снижено, по сравнению с контролем, соответственно на 8,43% и 17,36%
(P≤0,05).
В результате полученных исследований отмечено снижение числа
сперматозоидов в просвете извитого семенного канальца на 26,70% (P≤0,05),
по сравнению с контролем, уменьшение количества данных клеток является,
по-видимому, отражением изменения численности сперматогоний, сперматоцит и сперматид.
Клетки Сертоли играют ключевую роль в процессах развития и
функционирования яичек, поскольку именно они играют роль специфического микроокружения для развивающихся половых клеток, являясь единственными клетками соматического типа, входящими в состав сперматогенного эпителия (Sharpe R. M. et al., 2003; Hess R. A., De Franca L. R.,
2008). Они обеспечивают развивающиеся гаметы питательными веществами (трофическая функция), фагоцитируют остатки цитоплазмы формирующихся сперматозоидов и дегенерирующие половые клетки, секретируют
жидкость для транспорта сперматозоидов в семенных канальцах (Држевецкая И. А., 1983).
100
Проведенные гистологические исследования показали, что клетки Сертоли располагаются между сперматогониями, их основания лежат на базальной мембране. Апикальная часть клетки обращена к просвету семенного канальца и имеет треугольную или пирамидальную форму. После 7 суток воздействия ацетата свинца, по сравнению с контролем, отмечено значительное
уменьшение количество клеток Сертоли. Базальная часть клеток значительно
уменьшается в размерах и имеет более округлую форму. Апикальная часть
клетки имеет более вытянутую форму. Производился подсчѐт количества
клеток Сертоли в поперечных срезах семенных извитых канальцев. На основе полученных данных был рассчитан клеточный индекс Сертоли, который
является одним из лучших показателей продуктивности процессов сперматогенеза, поскольку его величина положительно коррелирует со спермопродукцией (Kuriyama K., Kitamura T., Yokoi R., Hayashi M., Kobayashi K.,
Kuroda J., Tsujii H., 2004). Клеточный индекс Сертоли рассчитывался как отношение общего числа сперматогенных клеток различного типа к общему
количеству клеток Сертоли в тех же канальцах (Шейко Л. Д., 1998). Проведенные исследования показали, что после воздействия ацетата свинца, по
сравнению с контролем происходит снижение данного показателя с
18,14±1,72 до 17,33±1,02, т. е. на 22,48% (P≤0,05).
Согласно современным представлениям, в процессе формирования
стенки семенных извитых канальцев учувствуют 2 популяции сустентоцитов – «светлые» и «темные», соотношение которых на разных этапах постнатального развития неодинаково (Wartenberg H., Hilscher B., Hilscher W.,
1998; Ritzen E. M., de Kretser D., 1981). «Тѐмные» клетки развиваются из
пресустентоцитов в эмбриональном периоде и стимулируют процессы митоза просперматогоний, но к моменту рождения они исчезают, уступая место «светлым» клеткам, ингибирующим процесс сперматогенеза, однако на
5-е сутки постнатального развития темные клетки появляются вновь, стимулируя тем самым начало первой волны сперматогенеза (Кушнарев А. А.,
2002). Пролиферация сустентоцитов заканчивается после образования ге101
матотестикулярного барьера примерно на 16-18 сутки постнатального развития (Orth J. M., 1993), хотя при этом они не утрачивают полностью способности к делению (Захидов С. Т., Кулибин А. Ю., Малолина Е. А., Маршак Т. Л., 2009).
Очевидно, процессы усиления и угнетения секреции сустентоцитов
отражают развивающиеся в них неспецифические процессы адаптации и
исчерпания внутренних резервов (Гаркави Л. Х., Квакина Е. Б., Уколова М. А., 1977). В данном контексте наблюдаемое у животных опытной
группы повышение размеров извитых семенных канальцев может являться
следствием сильной интоксикации ацетатом свинца, и выраженного проявления угнетения функции поддержки своими отростками «скелета» спематогенного пласта.
Кроме изучения сперматогенного пласта семенников нами изучалась
интерстициальная ткань, в состав которой входят клетки Лейдига. В контроле
участки интерстиция между извитыми семенными канальцами расположены
равномерно. Они преимущественно треугольной формы. В ходе проведенного
эксперимента выявлено, что участки интерстиция между извитыми семенными канальцами располагаются неравномерно, рыхло, в большинстве случаев
имеет многогранную форму. Даже невооруженным взглядом видно увеличение площади интерстициальной ткани между извитыми семенными канальцами, что возможно связано с еѐ отеком, причем независимо от исследуемого
поля и наличия или отсутствия сосудов микроциркуляторного русла в нем.
Отмечено увеличение площади интерстициальной ткани по сравнению
с контролем на 23,01% (P≤0,05), что может свидетельствовать о развитии
процессов склеротизации. Клетки Лейдига помимо общего эндокринного
действия оказывают также паракринное, поскольку тестостерон, синтезируемый этими клетками, диффундирует через базальную мембрану семенных
извитых канальцев, регулируя тем самым интенсивность процессов сперматогенеза (Демяшкин Г. А., Амиров Н. Ш., 2009), поэтому изучение эндокринного компартмента семенников является необходимым условием для
102
оценки генеративной функции. Отмечено, что в контроле клетки Лейдига залегают вокруг кровеносных сосудов одиночно, или чаще группами по 5-7 клеток.
Они крупные, овальной или многоугольной формы. В контроле общее количество клеток Лейдига в одном участке интерстиция достигало 10-12 шт.
После воздействия ацетата свинца общая картина распределения клеток Лейдига в интерстициальной ткани носила диффузный характер. Интерстициальные гландулоциты располагались одиночно, лишь изредка встречаются небольшие группы по 2-3 клетки. Общее их количество в одном участке
интерстиция достигало 5-7 шт. Они округлой формы, их ядра овальные и вытянутой формы. Для оценки популяции клеток Лейдига производился подсчет суммарного количества данных клеток в одном участке интерстиция в
75 полях зрения, отдельно площади и диаметра клеток и их ядер, площади
цитоплазмы, а также площадь одного участка интерстициальной ткани между извитыми семенными канальцами. В ходе исследования при воздействии
ацетата свинца зафиксировано уменьшение площади и диаметра клеток Лейдига, площади и диаметра их ядер, площади цитоплазмы клеток Лейдига соответственно на 61,13% (P≤0,05), 37,88% (P≤0,05), 69,68% (P≤0,05), 49,33%
(P≤0,005) и 58,03% (P≤0,001), по сравнению с контролем.
Важнейшим количественным показателем, характеризующим генеративную активность семенника, является индекс сперматогенеза, отражающий количество генераций сперматогенных клеток в стенке извитых семенных канальцев (Саяпина И. Ю., 2013). Индекс сперматогенеза является одним из важнейших показателей состояния сперматогенного пласта (Саноцкий И. В., Фоменко В. Н., 1979; Черток В. М., Ботвич Т. А., 1998). Подсчѐт индекса производился в 75 поперечных срезах извитого семенного канальца. Отмечено снижение индекса сперматогенеза в экспериментальной группе по сравнению с контролем на 10,24%. Снижение данного показателя всегда свидетельствует о
нарушении процесса сперматогенеза и о снижении функциональной активности
семенных желез (Потемина Т. Е., 2008, 2009; Rezvanfar M. A. et al., 2008).
103
Увеличение индекса созревания на 20,00% (P≤0,05), индекса мейотической активности на 23,08% (P≤0,05) и герминативного индекса на 31,79%
(P≤0,05) свидетельствует о преобладании молодых клеток над более зрелыми, а также задержке созревания мужских половых клеток (Rezvanfar M. A. et
al., 2008).
Морфофункциональное состояние сперматозоидов оценивали комплексно, с учетом их содержания, характера жизнеспособности и морфометрических параметров (Молнар Е., 1969; Kuriyama K. et al., 2004) с помощью
автоматического счетчика клеток Countess™ (Invitrogen, США) при увеличении 100×2,3. Для этого смесь суспензии сперматозоидов и физраствора (1:4)
окрашивали трипановым синим. Живые клетки трипановый синий окрашивает по краям, мертвые – однородно по всей клетке (Николаев В. В., Строев В. А., Астраханцев А. Ф., 1993). Установлено, что у подопытных животных содержание эпидидимальных сперматозоидов в 1 мл суспензии снижено,
по сравнению с контрольной группой, на 50,63% (P≤0,05).
Таким образом, полученные данные коррелируют со значениями клеточного индекса Сертоли, что согласуется с литературными данными
(Gonçalves De Barros J. B. et al, 2007).
Другим показателем, оказывающим существенное влияние на фертильность, является жизнеспособность сперматозоидов. Установлено увеличение
количества мертвых сперматозоидов в гомогенате придатков мужских половых желѐз у половозрелых животных подопытных групп по сравнению с интактными контрольной группой животных на 60,68% (P≤0,05). Так у животных интактной контрольной группы содержание мѐртвых клеток в 1 мл суспензии составило 11,56% (P≤0,05) от общего количества клеток, а у животных экспериментальной группы – 59,54% (P≤0,05). Анализ количества патологических форм сперматозоидов позволил зафиксировать значительное увеличение количества дегенеративных форм после воздействия ацетата свинца.
В ходе проведенных исследований было выявлено, что в норме сперматозоиды в просвете извитого семенного канальца располагаются группами в
104
количестве 6-8 по всему контуру просвета. На мазках зрелые сперматозоиды
имеют четкое разделение на составляющие части: головку, шейку и хвост. У
большинства сперматозоидов головка имеет форму крючка. После 7 суток
воздействия ацетата свинца отмечено беспорядочное расположение сперматозоидов в просвете канальца. Уменьшаются размеры и форма головки сперматозоида. На гистопрепаратах наблюдаются обрывы хвостов и агглютинация сперматозоидов. Обнаружены извитые семенные канальцы, в просвете
которых отсутствовали сперматозоиды.
Таким образом, у животных подопытной группы существенно снижены
как количественные, так и качественные характеристики сперматозоидов
При оценке структурных особенностей яичников экспериментальных
животных кроме гистологических параметров нами использовались следующие общепринятые критерии: весовые параметры, величина площадей
коркового и мозгового вещества, содержание фолликулов на разных стадиях развития, атретических фолликулов и жѐлтых тел.
Особый интерес представляет описание морфологии разных типов
фолликулов в норме и при воздействии ацетата свинца.
В ходе проведенных исследований отмечено, в корковом веществе
яичника находятся фолликулы на разных стадиях развития вплоть до зрелых
граафовых пузырьков (третичных фолликулов). Они округлой формы. Местами наблюдаются атретические фолликулы. Между фолликулами располагается соединительнотканная строма яичника.
Примордиальные фолликулы располагаются непосредственно под белочной оболочкой яичника в виде компактных групп. Лишь изредка встречаются одиночные примордиальные фолликулы. Ооциты в примордиальных
фолликулах окружены одним слоем фолликулярных клеток, имеющих плоскую или округлую форму.
Первичные фолликулы отличаются большим размером первичного ооцита и появлением вокруг него блестящей оболочки. Фолликулярные клетки
105
в первичном фолликуле имеют кубическую форму и лежат в 1-2 слоя. Хорошо различимы ядра первичных ооцитов.
Вторичные фолликулы имеют значительно большие размеры, по сравнению с первичными фолликулами. Вокруг фолликула начинает формироваться дополнительная оболочка – тека. Фолликулярный эпителий становится многослойным. В фолликуле появляется одна или несколько мелких полостей, заполненных жидкостью.
Основной объѐм третичного фолликула занят большой полостью с
жидкостью. Встречаются также малые полости, ещѐ не успевшие слиться с
основной полостью. У третичного фолликула более выражена текальная оболочка.
Внутренний слой теки содержит интерстициальные (текальные) клетки
с округлыми ядрами. Наружный слой теки образован плотной волокнистой
соединительной тканью. Клетки (фибробласты) имеют узкие ядра. Ооцит в
третичном фолликуле окружен блестящей оболочкой и слоем фолликулярных клеток – зернистым слоем. При этом внутренние части фолликулярных
клеток (обращѐнные к блестящей оболочке) выглядят как лучистый венец.
В ходе проведенных исследований выявлено, что после воздействия
ацетата свинца примордиальные фолликулы располагаются преимущественно одиночно. Лишь изредка встречаются небольшие группы. Среди более
зрелых форм фолликулов, были выявлены фолликулы овальной и неправильной формы. Обращает на себя внимание высокое содержание атретических
фолликулов. Атрезии чаще подвергаются вторичные растущие фолликулы,
реже третичные фолликулы.
Проведенные морфометрические исследования показали, что после
7 суток воздействия ацетата свинца происходит, по сравнению с контролем,
увеличение площади и толщины мозгового вещества яичника соответственно
на 30,03% (Р≤0,05) и 19,01% (Р≤0,05), при этом одновременно происходит
уменьшение толщины и площади коркового вещества яичника соответственно на 12,04% (Р≤0,05) и 6,18%. При исследовании соотношения площади
106
мозгового вещества яичника к корковому выявлено, что в контроле оно составляет примерно 1:3. После воздействия ацетата свинца соотношение площади мозгового вещества яичника к корковому составляет примерно 1:2.
Уменьшение коэффициента, отражающего отношение площади коркового
вещества к мозговому веществу яичника, свидетельствует об уменьшении
массы коркового вещества, ответственного за осуществление генеративной и
эндокринной функции женских половых желѐз.
Отмечено, что после воздействия ацетата свинца происходит, по сравнению с контролем, увеличение диаметра кровеносных сосудов, пронизывающих мозговое вещество яичника на 34,02% (Р≤0,05), что свидетельствует об
усилении кровоснабжения яичников.
Одним из важнейших показателей структурно-функциональной зрелости
яичника является общее количество фолликулов и их популяционный состав.
В контроле общее количество фолликулов составило 52,36±4,93, при воздействии ацетата свинца 42,12± 3,62, что меньше на 19,56% (P≤0,05).
Особый интерес вызвал популяционный состав фолликулов. Установлено, что в контроле число примордиальных фолликулов в яичнике самок белых крыс составило 17,72±1,31, первичных – 13,88±1,09, вторичных –
10,92±0,98, третичных – 7,04±0,77.
В опытной группе число примордиальных фолликулов в яичнике самок
белых крыс составило 15,04±0,78 (P≤0,05), первичных – 11,28±1,07 (P≤0,05),
вторичных – 6,08±0,68, третичных – 3,56±0,33.
Многие авторы отмечают структурно-функциональные изменения
репродуктивных органов у самок млекопитающих, (увеличение или
уменьшение количества разных типов фолликулов, изменение скорости созревания яйцеклетки, усиление процесса атрезии созревающих фолликулов, задержка инволюции желтых тел и др.) в экстремальных условиях
обитания и экспериментах по действию токсичных веществ (МеликАлавердян Н. О., 1967; Шейко Л. Д., 1999; Иваницкая Н. Ф. и соавт., 2001).
107
Мы не встретили литературных данных по влиянию ацетата свинца на
фолликулярный состав яичников. Из приведенных нами данных видно, что
наибольшее изменение в количественном составе приходится на третичные
фолликулы (в опыте на 49,43% (Р≤0,05) меньше, чем в контроле).
Анализ морфометрических параметров фолликулярного аппарата яичников показал, что после 7 суток воздействия ацетата свинца происходит снижение площади примордиальных, первичных, вторичных и третичных фолликулов соответственно на 0,59%, 4,29%, 15,91% (Р≤0,001), 32,16% (Р≤0,001).
Таким образом, полученные данные свидетельствуют о том, что наиболее сильно свинцовой интоксикации подвергаются третичные фолликулы.
Одним из показателей интенсивности фолликулогенеза в яичниках экспериментальных животных является содержание атретических фолликулов
(Боровая Т. Г. и др., 1995). Проведенные нами количественные исследования
показали, что у экспериментальных животных число атретических фолликулов увеличилось на 54,54% (Р≤0,05) по сравнению с контролем, что указывает на связь между увеличением суммарного числа фолликулов и увеличением
их атрезии.
Функциональную эффективность роста и овуляции фолликула характеризует образование жѐлтых тел (Stocco C., Telleria C., Gibori G., 2007).
Проведенные исследования показали, что в контроле менструальные
желтые тела в корковом веществе яичника располагаются равномерно. Они
покрыты соединительнотканной капсулой, от которой к центру направляются тонкие прослойки, содержащие кровеносные и лимфатические сосуды.
Обнаруженные желтые тела имеют округлую или овальную форму. Большинство из них находятся в стадии образования или зрелости.
После 7 суток перорального введения ацетата свинца отмечено уменьшение количества менструальных желтых тел в яичниках самок белых крыс
по сравнению с контролем, что свидетельствует об уменьшении количества
созревших и вышедших из яичника яйцеклеток. Обнаруженные желтые тела
имеют неправильную форму. Большинство из них находятся в стадии инво108
люции или на начальном этапе образования. Сосуды менструального желтого
тела, по сравнению с контролем, находятся в разном морфофункциональном
состоянии. В одних участках желтого тела капилляры расширены и кровенаполнены, а в других – разрушены.
Исследования показали уменьшение числа менструальных жѐлтых тел
у экспериментальных животных на 45,30% (P≤0,05), по сравнению с контролем, что может отражать ослабленную овуляцию больших фолликулов у
подопытных животных. Полученные данные согласуются с общей тенденцией медленного роста и созревания фолликулов в подопытных группах.
Кроме того, было показано достоверное снижение площади жѐлтых тел
у подопытных животных на 30,23% (P≤0,05). Известно, что объѐм органа
может варьировать только в определѐнных пределах, не выходя за рамки своей нормы реакции (Мина М. В., 1976; Варшавский А. А., 1988). Снижение
площади жѐлтых тел может быть связано с ограничением, задаваемым максимальным общим объѐмом органа.
Таким образом, анализ результатов данной серии исследований позволяет сделать вывод, что у самок крыс с экспериментальным воздействием
ацетата свинца имеет место нарушение процесса фолликулогенеза, проявляющееся в снижении суммарного содержания фолликулов, изменением фолликулярного состава яичников и образования жѐлтых тел.
Во многих исследования доказано, что эстральный цикл является наиболее чувствительным к воздействию каких-либо факторов внешней среды (Быков В. Л., 2001). По данным Мелик-Алавердяна Н. О. (1967), устойчивые нарушения эстрального цикла наступают значительно раньше, чем количественные
изменения морфоструктурных элементов яичника. Динамика эстрального цикла в контрольной и опытной группе животных изучалась в соответствии с
правилом «одного часа». Учитывалась общая продолжительность эстрального цикла, длительность отдельных фаз и ритмичность их чередования. Методика основана на том, что циклические изменения стенки влагалища отражаются на влагалищном содержимом, а последнее легко исследуется взятием влага109
лищного мазка. Каждой фазе полового цикла соответствует определенный клеточный состав влагалищного мазка (Leng Z. et al., 1998).
Учитывая, что период полового созревания у крыс наступает на 60-е
сутки – период пубертата, а 90-е сутки – период ранней половозрелости (Бабичев В. Н., 1981; Шаляпина В. Г., 1991), определение стадии эстрального
цикла начинали с возраста 60 суток. С помощью данной методики, возможно,
судить о наступлении полового созревания, о нормальной циклической
функции яичников, о различных нарушениях этой функции.
Для получения более полной характеристики эстрального цикла, также
было изучено количество циклов, приходившихся на самку в течение последних 22 суток экспозиции. Полученные данные показали, что яичники крыс реагируют на воздействие ацетата свинца снижением репродуктивной способности. В результате воздействия ацетата свинца происходит уменьшение количества эстральных циклов в течение 22 суток с 4,270,39 до 3,600,48, т. е. на
15,69% (Р≤0,05), увеличение их продолжительности на 11,56% (Р≤0,05),
нарушение последовательности фаз со смещением его в сторону диэструса.
Отмечено уменьшение продолжительности стадии эструс на 9,78% и увеличение продолжительности стадии диэструс на 19,31% (Р≤0,05). В целом, полученные в ходе данной серии исследований результаты свидетельствуют о
нарушении структурно-функционального становления яичников самок крыс
при свинцовой интоксикации.
После воздействия ацетата свинца семенники подвергаются изменению кровоснабжения, гипоксии и нарушению аутоимунного процесса, что,
в конечном счете, может приводить к изменению экспрессии генов, отвечающих
за
митотический
потенциал
первичных
половых
клеток
(Pepling M. E., 2006).
Вместе с тем, существенную роль в развитии нарушений репродуктивной функции может играть и повреждение органов эндокринной системы. Согласно современным представлениям, интегрирующим центром
мужской репродуктивной системы является гипоталамус, осуществляю110
щий координацию регуляторных сигналов из высших центров и сигналов
обратной связи из гонад (Crowley W. F. et al., 1991; Стадников А. А., Бухарин О. В., 2012).
Под влиянием стрессорного повреждения со стороны ацетата свинца
яичники подвергаются изменению кровоснабжения, гормонального фона, гипоксии. Кроме того, возможно изменение экспрессии множества генов отвечающих за митотическии потенциал первичных половых клеток, формирование гнезда половых клеток, осуществление событий профазы мейоза (образование хиазм, синаптопемного комплекса, осуществление процесса рекомбинации), эпигенетическую перестройку генома, подготовку к разрушению
гнезда половых клеток и формированию пула примордиальных фолликулов
(Pepling M. E., Spradling A. C., 2001; Pepling M. E., 2006).
Репродуктивная функция, регулирует многоуровневую систему «гипоталамус – гипофиз – гонады», звенья которой тесно взаимосвязаны механизмами положительных и отрицательных обратных связей (Волкова О. В., Боровая Т. Г., 1990). Нарушение последних приводит к развитию патологического процесса, как в регулируемой системе, так и в организме в целом. При
этом изменения репродуктивной функции проявляются как у данного организма, так и сказываются на жизнеспособности последующих поколений.
111
ЗАКЛЮЧЕНИЕ
1. Ацетат свинца приводит к следующим морфологическим и морфометрическим изменениям семенных желез белых беспородных крыс-самцов:
а) уменьшению толщины белочной оболочки семенных желез;
б) увеличению площади поперечного сечения извитых семенных канальцев и площади интерстиция;
в) уменьшению площади сперматогенного эпителия и его толщины;
г) уменьшению количества миоидных клеток в стенке извитого семенного канальца, увеличению площади клеток и их ядер;
д) снижению продукции всех популяций клеток сперматогенного эпителия, особенно его зрелых форм – сперматид;
е) уменьшению количества клеток Лейдига и клеток Сертоли, изменению их формы, уменьшению площади клеток и их ядер.
2. При воздействии ацетата свинца отмечается снижение индекса сперматогенеза и индекса релаксации (напряженности сперматогенеза), что свидетельствует о понижении функциональной активности семенных желез. Увеличивается индекс созревания, индекс мейотической активности и герминативного индекс, что свидетельствует о преобладании молодых клеток над более
зрелыми, а также задержке созревания мужских половых клеток. Ацетат
свинца приводит к уменьшению продуктивности семенных желез, что проявляется в уменьшении концентрации эпидидимальных сперматозоидов в 1 мл
суспензии, а также их жизнеспособности.
3. Воздействие ацетата свинца приводит к следующим морфологическим
и морфометрическим изменениям яичников самок белых беспородных крыс:
а) уменьшению толщины покрывающего яичник снаружи однослойного эпителия;
б) уменьшению толщины белочной оболочки яичника;
в) уменьшению площади и толщины коркового вещества яичника, при
одновременном увеличении площади и толщины мозгового вещества;
112
г) уменьшению количества примордиальных, первичных, вторичных,
третичных фолликулов и желтых тел, при одновременном увеличении количества атретических фолликулов;
д) увеличению диаметра кровеносных сосудов, пронизывающих мозговое вещество яичника.
4. Ацетат свинца влияет на состояние эстрального цикла самок белых
крыс, что проявляется в уменьшение числа циклов на одну самку, уменьшении продолжительности стадии эструс и увеличении продолжительно-сти
диэструса. Ацетат свинца приводит к следующим морфологическим и морфметрическим изменениям менструального желтого тела в яичниках самок белых крыс:
а) изменению формы желтых тел от округлой или овальной до неправильной;
б) уменьшению количества желтых тел в яичнике, а также составляющих их лютеиновых клеток;
в) уменьшению площади желтых тел, площади лютеиновых клеток и их
ядер;
г) дезорганизация кровоснабжения в желтом теле.
113
ПРАКТИЧЕСКИЕ ПРЕДЛОЖЕНИЯ (РЕКОМЕНДАЦИИ)
1. Полученные результаты дополняют данные по особенностям строения
и структурной организации семенников и яичников, а также особенностям
протекания в них процессов сперматогенеза и фолликулогенеза могут быть
использованы в научных исследованиях и в учебном процессе при изложении
вопросов влияния экологических факторов на репродуктивную систему.
2. Описанные морфофункциональные изменения могут быть использованы клиницистами как норму и для проведения лечебно-профилактических
мероприятий с целью предотвращения развития патологических процессов в
семенниках и яичниках при свинцовой интоксикации, или же их фармакологической коррекции.
114
СПИСОК ИСПОЛЬЗОВАННОЙ ЛИТЕРАТУРЫ
1. Авцын, А. П., Микроэлементозы человека / А. П. Авцын, А. А. Жаворонков, М. А. Риш, Л. С. Строчкова. – М. : Медицина, 1991. – 496 с.
2. Александровская, О. В. Цитология, гистология и эмбриология/
О. В. Александровская, Т. Н. Радостина, H. A. Козлов. – М. : Агропромиздат,
1987. – С. 421-431.
3. Артифексов, С. Б. Состояние органного кровотока в семенниках и
придатках самцов крыс в условиях экспериментального венозного тестикулярного кровотока / С. Б. Артифексов, А. А. Артюхин // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2007. – Т. 143. – № 6. – С. 623-627.
4. Аршавский, И. А. Физиологические механизмы индивидуального
развития // И. А. Аршавский. – М. : Наука, 1982. – С. 270.
5. Аскарова, А. Е. Свинец-индуцированные патологические состояния (обзор литературы) / А. Е. Аскарова, А. Н. Нурмухамбетов // Вестник
КазНМУ. – 2013. – № 3 (2). – С. 54-56.
6. Астахов, О. Б. Морфофункциональный статус семенников белых
крыс в процессе адаптации к условиям Высогорья / О. Б. Астахов, В. Ш. Белкин // Морфология. – 2014. – Т. 145. – № 3. – С. 21.
7. Афанасьев, Ю. И. Гистология / Ю. И. Афанасьев, Н. А. Юрина,
Е. Ф. Котовский. – М. : Медицина, 2002. – 744 с.
8. Бабичев, В. Н. Нейроэндокринология пола / В. Н. Бабичев. – М. :
Наука, 1981. – 222 с.
9. Багацька, Н. В. Генетичні фактори у виникненні порушень статевого
розвитку у хлопців підлітків / Н. В. Багацька // Автореф. дис. … на здобуття
наук. ступеня д-ра біол. наук. – К., 2004. – 38 с.
10. Баряева, О. Е. Факторы риска задержки внутриутробного развития
плода в условиях промышленного города / О. Е. Баряева // Автореф. дис. …
канд. мед. наук. – Иркутск, 2005. – 27 с.
115
11. Батян, А. Н. Основы общей и экологической токсикологии : учебное пособие / А. Н. Батян, Г. Т. Фрумин, В. Н. Базылев. – СПб : СпецЛит,
2009. – 352 с.
12. Бiлецька, Е. М. Гiгiенiчнi аспекти важких металiв у навколишньому середовищi / Е. М. Бiлецька // Буковинський медичний вiсник. – 1999. –
Т. 3. – № 2. – С. 207-211.
13. Боголюбов, С. В. Структура сперматозоидов и функция простаты и
семенных пузырьков / С. В. Боголюбов, О. Б. Поздняков, А. А. Артамонов,
А. М. Алисенов // Морфология. – 2014. – Т. 145. – № 3. – С. 35.
14. Божедомов, В. А. Оксидативный стресс сперматозоидов в патогенезе мужского бесплодия / В. А. Божедомов, Д. С. Громенко, И. В. Ушакова и
др. // Урология . – 2009. – № 2. – С. 51-56.
15. Бойчук, Н. В. Курс гистологии / Н. В. Бойчук, Р. Р. Исламов,
Э. Г. Улумбеков, Ю. А. Челышев. – Казань : Поволжский книжный центр,
1995. – 282 с.
16. Боровая, Т. Г. Фолликулогенез и факторы его модуляции / Т. Г. Боровая // Автореф. докт. мед. наук. – М., 1993. – 50 с.
17. Боярский, К. Ю. Функциональные тесты, определяющие овариальный резерв, и вспомогательные репродуктивные технологии / К. Ю. Боярский // Проблемы репродукции. – 2002. – № 3. – С. 36-43.
18. Брюхин, Г. В. Особенности становления фолликулогенеза в яичниках
у потомства матерей с хроническим поражением гепатобилиарной системы в
условиях эксперимента / Г. В. Брюхин, Е. В. Вторушина // Проблемы репродукции. – 2004. – № 3. – С. 54-57.
19. Быков, В. Л. Функциональная морфология овуляции у человека /
В. Л. Быков // Морфология. – 2001. – № 1. – С.82-89.
20. Варшавский, А. А. Изменчивость размеров внутренних органов
грызунов / А. А. Варшавский // Актуальные проблемы морфологии и экологии высших позвоночных. – 1988. – Ч. 1. – С. 230-247.
116
21. Васильева, С. Г. Морфофункциональная характеристика семенников
крыс вистар при воздействии липополисахарида в условиях гиперандрогенемии / С. Г. Васильева, В. А. Мхитаров, А. М. Косырева, О. В. Макарова // Российский медико-биологический вестник имени академика И. П. Павлова. –
2011. – № 2. – С. 35-40.
22. Вихляева, Е. М. Руководство по эндокринной гинекологии /
Е. М. Вихляева. – М. : Медицинское информационное агентство, 2006. – 784 с.
23. Волков, В. П. Функциональная морфология гонад при антипсихотической терапии / В. П. Волков // Проблемы эндокринологии. – 2014. –
№ 4. – С. 30-34.
24. Волков, В. П. Морфологические изменения мужских гонад при антипсихотической терапии / В. П. Волков // Современная медицина: актуальные вопросы. – 2014. – № 30. – С. 14-21.
25. Волков, В. П. Функциональная морфология клеток Лейдига при антипсихотической терапии в зависимости от возраста / В. П. Волков // Инновации в науке. – 2015. – № 41. – С. 146-154.
26. Волкова, О. В. Функциональная морфология женской репродуктивной системы / О. В. Волкова. – М.: Медицина, 1983. – 224 с.
27. Волкова, О. В. Структура и регуляция функции яичников /
О. В. Волкова. – М. : Медицина, 1989. – 186 с.
28. Волкова, О. В. Методы количественного анализа в оценке морфофункционального состояния яичника / О. В. Волкова. Т. Г. Боровая // Архив
анатомии гистологии и эмбриологии. – 1990. – №11. – С. 81-84.
29. Волкова, О. В. Морфогенетические основы развития и функции
яичников /О. В. Волкова, Т. Г. Боровая. – М., 1999. – 254с.
30. Волкова, О. В. Актуальные аспекты ово-фолликулогенеза /
О. В. Волкова, Т. Г. Боровая, Е. О. Погорельская, И. А. Бичерова // Успехи
современного естествознания. – 2003. – № 1. – С. 45-47.
31. Волошин, Н. А. Морфофукциональные особенности формирования
яичек крыс от момента рождения до второго месяца жизни / Н. А. Волошин,
117
Т. А. Тополенко // Украінський морфологічний альманах. – 2009. – Т. 7. –
№ 2. – С. 32-34.
32. Волощенко, О. И. Гигиеническое значение поверхностно-активных
веществ / О. И. Волощенко, И. В. Мудрый. – Киев, 1991. – 115 с.
33. Вылегжанина, Т. А. Морфофункциональная характеристика яичников, щитовидной железы и надпочечников при экспериментальном отравлении уксуснокислым свинцом / Т. А. Вылегжанина, Т. Е. Кузнецова,
О. А. Манеева, И. И. Новиков, Е. Л. Рыжковская // Медицина труда и промышленная экология. – 1993. – № 9-10. – С. 6-8.
34. Вылегжанина, Т. А. Морфофункциональная характеристика реакции
некоторых органов репродуктивной и симпато-адреналовой систем на действие ацетата свинца / Т. А. Вылегжанина, Т. Е. Кузнецова, Е. Л. Рыжковская // Ксенобиотики и живые системы: матер. III междунар. научн. конф.,
Минск, 22-24 октября 2008 г. – Минск : Изд. Центр БГУ, 2008. – С. 25-27.
35. Галимов, Ш. Н. «Кризис сперматозоида» и техногенное загрязнение
окружающей среды: факты и гипотезы / Ш. Н. Галимов, З. К. Амирова,
Э. Ф. Галимова // Проблемы репродукции. – 2005. – № 2. – С. 19-22.
36. Гаркави, Л. Х. Адаптационные реакции и резистентность организма / Л. Х. Гаркави, Е. Б.Квакина, М. А.Уколова. – Ростов-на-Дону: Издво Ростовского ун-та, 1977. – 119с.
37. ГОСТ 12.1.007 «ССБТ. Вредные вещества. Классификация и общие
требования безопасности».
38. Губарева, Л. И. Экологический стресс : монография / Л. И. Губарева. – СПб. : Издательство «Лань», 2001. – 148с.
39. Губарева, Л. И. Экологический стресс / Л. И. Губарева. – СПб :
ЛАНЬ, Ставрополь: Ставропольсервисшкола, 2001. – 448 с.
40. Данилова, Л. В. Сперматогонии, сперматоциты, сперматиды /
Л. В. Данилова // Современные проблемы сперматогенеза. – М.: Наука,
1982. – С. 25-72.
118
41. Даутов, Ф. Ф. Изучение связи между загрязнением окружающей
среды и уровнем заболеваемости детского населения города / Ф. Ф. Даутов,
И. Я. Яруллин // Гигиена и санитария. – 1993. – № 8.– С. 4-6.
42. Демченко, В. Н. Андрогенная активность семенников препубертатных самцов крыс в условиях применения хлорида кадмия / В. Н. Демченко //
Тез. докл. II Всерос. конф. – 1983. – С. 45.
43. Демяшкин, Г. А. Паракринные механизмы регуляции функций семенника (иммуноцитохимический аспект) / Г. А. Демяшкин, Н. Ш. Амиров //
Фундаментальные исследования. – 2009. – № 2 – С. 88–90.
44. Динерман, А. А. Роль загрязнителей окружающей среды в нарушении
эмбрионального развития / А. А. Динерман. – М.: Медицина, 1980. – 192 с.
45. Дмитриева, Н. Г. Размножение красной полевки в естественных и
нарушенных лесных биоценозах Кузнецкого Алатау / Н. Г. Дмитриева,
Е. В. Голосова, В. Ю. Ковалева // 5 съезд Всесоюз. териол.4 о-ва АН
СССР. – 1990. – Т. 2. – С. 229-230.
46. Дмитруха, Н. М. Експериментальне дослiджения впливу важких
металiв (свинцю та кадмiю) на неспецифiчну резистентнiсть органiзму бiлих
щурив / Н. М. Дмитруха // Современные проблемы токсикологии. – 2004. –
№ 4. – С. 27-30.
47. Долгов, В. В. Лабораторная диагностика мужского бесплодия /
В. В. Долгов, С. А. Луговская, Н. Д. Фанченко, И. И. Миронова, Е. К. Назарова, Н. Г. Ракова, С. С. Раков, Т. О. Селиванов, А. М. Щелчков. – М. : ООО
«Издательство «Триада», 2006. – 144с.
48. Држевецкая, И. А. Основы физиологии обмена веществ и эндокринной системы / И. А. Држевецкая. – М. : Высш. шк., 1983. – 272 с.
49. Дроздов, А. Л. Морфология гамет животных / А. Л. Дроздов,
В. Н. Иванков. – М. : Круглый стол, 2000. – 460 с.
50. Дубынин, В. А. Регуляторные системы организма человека /
В. А. Дубынин, А. А. Каменский, М. Р. Сапин, В. И.Сивоглазов. – М. :
Дрофа, 2010. – 365 с.
119
51. Евдокимов, В. В. Нарушение сперматогенеза при варикоцеле: патогенез и прогноз лечения / В. В. Евдокимов, Т. О. Селиванов // Андрология и
генитальная хирургия. – 2006. – № 3. – С. 12-13.
52. Захидов, С. Т. Стволовые клетки сперматогониального компартмента / С. Т. Захидов, А. Ю. Кулибин, Е. А. Малолина, Т. Л. Маршак // Молекулярная медицина. – 2009. – № 4. – С. 37-44.
53. Зубарев, Н. Ф. Роль хронических поражений печени матери в
нарушении становления эндокринной и репродуктивной функции яичников потомства к условиях эксперимента / Н. Ф. Зубарев // Автореф. дис. …
канд. биол. наук. – Оренбург, 2012. – 25 с.
54. Иваницкая, Н. Ф. Сочетанное воздействие свинца и радиации на
потомство в период предимплантации / Н. Ф. Иваницкая, Ю. Н. Талакин,
Т. Ю. Бабич // Современные проблемы токсикологии. – 2001.– № 3. – С. 10-18.
55. Иен, C. C. K. Репродуктивная эндокринология: в 2-х т. Том 1 /
С. С. К. Иен, Р. Б. Джаффе. –М. : Медицина, 1998. – 704 с.
56. Измеров, Н. Ф. Свинец и здоровье. Гигиенический и медикобиологический мониторинг / Н. Ф. Измеров. – М. : Медицина, 2000. – 256 с.
57. Иванов, Ю. Н. Исследование синхронизации полового цикла у самок серой крысы (Rattus norvegicus) при совместном содержании /
Ю. Н. Иванов, Д. В. Клочков, М. А. Позняков // Вавиловский журнал генетики и селекции. – 2011. – Т. 15. – № 1. – С. 35-44.
58. Кабак, Я. М. Практикум по эндокринологии. Основы методики экспериментально эндокринологических исследований / Я. М. Кабак. – М. :
МГУ, 1968. – 276 с.
59. Калимов, Ф. Х. Синдром андрогенной недостаточности как маркер техногенного загрязнения среды обитания / Ф. Х. Калимов, Ш. Н. Галимов, Э. Ф. Акметдинов и др. // Проблемы репродукции. – 2002. – № 1. –
С. 46-50.
60. Клочков, Д. В. Возрастные особенности эстральной цикличности и
фолликулогенеза самок крыс линии ГК, селекционированных на проявление
120
кататонической реактивности / Д. В. Клочков, Т. А. Алехина, О. И. Прокудина // Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 2011. – Т. 151. –
№ 2. – С. 182-185.
61. Клочков, Д. В. Селекция на усиление кататонической реактивности
крыс, половая функция и синхронизация эстральной цикличности /
Д. В. Клочков, Т. А. Алехина // Вавиловский журнал генетики и селекции. –
2012. – № 16. – С. 1025-1031.
62. Ковальский, Г. Б. Структурные основы генеративной и эндокринной функции яичников в норме и патологии / Г. Б Ковальский, Э.М., Китаев,
Б. Я. Рыжавский, Л. М. Мельникова. – СПб, 1996. – 202 с.
63. Колосова, И. И. Влияние ацетата свинца, солей тяжелых металлов
на репродуктивную функцию / И. И. Колосова // Вiсник проблем бiологii i
медицини. – 2013. – Вип. 3. – Т. 2 (103). – С. 13-18.
64. Корбакова, А. И. Свинец и его действия на организм (обзор литературы) / А. И. Корбакова, Н. С. Сорокина, Н. Н. Молодкина, А. Е. Ермоленко,
К. А. Веселовская // Медицина труда и промышленная экология. – 2001. – № 5. –
С. 29-34.
65. Корнева, Е. В. Значение эндокринных деструкторов, действующих
перинатально, в половом развитии взрослой особи // Наука i соцiальнi проблеми суспiльства: медицина, фармацiя, бiотехнологiя: тези доп. III мiжнар.
наук.-практ. конф. – Харкiв, 2003. – Ч. 2. – С. 101.
66. Кузнецов, С. Л. Гистология, цитология и эмбриология / С. Л. Кузнецов, Н. Н. Мушкамбаров. – М. : Медицинское информационное агентство,
2005. – 600 с.
67. Кузнецова, Т. Е. Морфофункциональные изменения в некоторых
эндокринных органах крысят при действии ацетата свинца / Т. Е. Кузнецова,
О. А. Манеева, Е. Л. Рыжковская // Здоровье и окружающая среда: Сборник
научных трудов. – Минск, 2006. – Вып. 8. – С. 590-595.
68. Кулибин, А. Ю. Цитогенетические изменения сперматогенных клеток у мышей линии SAMP1 (Senescence-accelerated mouse prone) под влияни121
ем химического мутагена дипина / А. Ю. Кулибин // Тезисы Всероссийской
конференции молодых исследователей «Физиология и медицина». – Москва,
2005. – С. 61.
69. Кундиев, Ю. И. Эколого-гигиенические аспекты проблемы тяжелых
металлов как техногенных загрязнителей / Ю. И. Кундиев, И. М. Трахтенберг // Гигиена труда. – 1991. – Вып. 27. – С. 3-8.
70. Кустаров, В. Н. Нарушения менструального цикла / В. Н. Кустаров,
В. А. Линде, В. И. Ильяшевич. – СПб. : «Гиппократ», 2008. – 128 с.
71. Кушнарев, А. А. Две субпопуляции клеток Сертоли при экспериментальном крипторхизме и его хирургической коррекции / А. А. Кушнарев // Актуальні проблеми науки і освіти. – 2002. – № 3. – С.54-57.
72. Кэттайл, В. М. Патофизиология эндокринной системы / В. М. Кэттайл, Р. А. Арки. – СПб : БИНОМ, 2001. – 336 с.
73. Лапач, С. Н. Статистические методы в медико-биологических исследованиях с использованием Exсel / С. Н. Лапач, А. В. Чубенко,
П. Н. Бабич. – К. : МОРИОН, 2001.– 408 с.
74. Ласьков, Д. С. Особенности морфофункционального становления
генеративной функции семенников у потомства самок крыс с хроническим
экспериментальным поражением печени алкогольного и мезенхимного генеза / Д. С. Ласьков // Автореф. дис. … канд. биол. наук. – Оренбург,
2014. – 25 с.
75. Лебедева, Т. С. Морфодинамика фолликулогенеза млекопитающих /
Т. С. Лебедева, Ю. В. Храмова // ЛОМОНОСОВ – 2014: тез. докл.
XXI Междунар. конф. студентов, аспирантов и молодых ученых: Секция
«Биология», Москва, 7-11 апреля 2014 г. – М. : Изд. Московского университета, 2014. – С. 7.
76. Луцкий, Д. Л. Влияние химических факторов на состояние мужской
репродуктивной системы (обзор литературы) / Д. Л. Луцкий, С. В. Выборнов,
А. М. Луцкая, Л. А. Гончарова, Р. М. Махмудов // Проблемы репродукции. –
2009. – № 6. – С. 48-64.
122
77. Малишкін, І. Н. Дисперсійний аналіз інтеграції судинної та
гермінативної систем яєчка у патогегезі неплідності / І. Н. Малишкін //
Лікарська справа. – 2000. – № 3. – С. 77-80.
78. Мамина, В. П. Влияние ионизирующего излучения и ксенобиотиков
на сперматогенный эпителий лабораторных животных / В. П. Мамина,
Л. Д. Шейко // Гигиена и санитария. – 2001. – №6. – С. 24-27.
79. Мелик-Алавердян, Н. О. Генеративная функция яичников и эстральный цикл у крыс при хронической хлоропреновой интоксикации / Н. О.
Мелик-Алавердян. – Ереван : Айастан, 1967. – 162 с.
80. Мельникова, Н. А. Исследование жизнеспособности клеток при
воздействии ацетата свинца на организм крысы / Н. А. Мельникова,
О. С. Шубина, Н. А. Дуденкова, М. В. Лапшина, О. В. Лиференко,
О. И. Тимошкина // Современные проблемы науки и образования. – 2013. –
№ 5; URL: http://www.science-education.ru/111-10588
81. Мина, М. В. Рост животных / М. В. Мина, Г. А. Клевезаль //
М. :Наука, 1976. – 214 с.
82. Мирский, В. Е. Детская и подростковая андрология / В. Е. Мирский,
В. В. Михайличенко, В. В. Заезжалкин. – СПб. : Питер, 2003. – 224 с.
83. Молнар, Е. Общая сперматология / Е. Молнар. – Будапешт, 1969. –294 с.
84. Мудрый, И. В. Изучение эмбриотоксического и тератогенного воздействия свинца на организм белых крыс / И. В. Мудрый, Р. П. Петрова // Гигиена и санитария. – 1993. – № 4. – С. 51-52.
85. Мюллер, П. Таблицы по математической статистике / П. Мюллер,
П. Нойман, Р.Шторм. – М. : Финансы и статистика, 1982. – 278 с.
86. Нарбутова, Т. Е. Динамика структурно-функциональных изменений
семенников мышей второго поколения при кумуляции свинца в организме и
введении альфа-токоферола / Т. Е. Нарбутова // Biomedical and Biosocial Anthropology. – 2011. – № 16. – С. 27-31.
87. Нарбутова Т. Е. Морфологическое обоснование использования эрбисола для коррекции негативного влияния свинца на репродуктивную си123
стему у мышей в эксперименте / Т. Е. Нарбутова // Актуал. пробл. сучасн.
мед. : Вісн. Укр. мед. стомат. акад. : Науково-практичний ж-л. – 2011. –
Т. 11. – № 3. – С. 66-69.
88. Нарбутова, Т. Е. Динамика структурно-функциональных изменений
семенников мышей второго поколения при кумуляции свинца в организме и
введении альфа-токоферола / Т. Е. Набутова // Biomedical and Biosocial
Anthropology. – 2011. – №16. – С. 27-31.
89. Науменко, Т. В. Генетико-физиологические механизмы регуляции
функции семенников / Т. В. Науменко, А. В. Осадчук, Л. И. Серова – Новосибирск: Запфдно-Сибирское книжное издательство, 1983. – 286 с.
90. Николаев, В. В. Биохимические исследования спермоплазмы при
мужском бесплодии / В. В Николаев, В. А. Строев, А. Ф. Астраханцев // Урология и нефрология – 1993. – № 3. – С. 33-36.
91. Нишлаг, Э. Андрология. Мужское здоровье и дисфункция репродуктивной системы / Э. Нишлаг, Г. М. Бере. – М. : Медицина, 2005. – 554 с.
92. Обухова, Ю. Д. Морфология яичников в различные периоды онтогенеза. Обзор литературы / Обухова Ю. Д. // Вестник новых медицинских
технологий. – 2010. – Т. ХVII. – № 2 – С. 301-305.
93. Оксенгендлер, Г. И. Яды и организм / Г. И. Оксенгендлер. – СПб. :
Наука, 1991. – 320 с.
94. Павлюченкова, С. М. Клетки Сертоли половозрелых мышей разных
линий in vitro. Влияние условий культивирования / С. М. Павлюченкова //
ЛОМОНОСОВ – 2014: тез. докл. XXI Междунар. конф. студентов, аспирантов и молодых ученых: Секция «Биология», Москва, 7-11 апреля 2014 г. –
М. : Изд. Московского университета, 2014. – С. 10.
95. Пальцев, М. А. Патологическая анатомия / М. А. Пальцев,
Н. М. Аничков. – М. : Медицина, 2001. – Т. 2, ч. II. – 680 с.
96. Паранько, Н. М. Роль тяжелых металлов в возникновении репродуктивных нарушений / Н. М. Паранько, Н. И. Рублевская, Э. Н. Белицкая,
124
Т. А. Головкова, Т. Д. Землякова, Л. Е. Чуб, Г. Г. Шматков // Гигиена и санитария. – 2002. – № 1. – С. 28-30.
97. Патутин, В. Н. Особенности изменений менструальной функции в
различные периоды онтогенеза у работниц приборостроительной промышленности / В. Н. Патутин, Д. Ф. Костючек // Журнал акушерства и женских
болезней. – 2003. – № 2. – С. 59-61.
98. Печкурова, Е. А. Определение токсических элементов в продукции
животноводства / Е. А. Печкурова, О. Н. Новикова // Зоотехния. – 1997. –
№ 3. – С. 27-28.
99. Плехова, Е. И. Задержка полового развития мальчиков / Е. И. Плехова, О. О. Хижняк, Л. П. Левчук. – М. : Знание, 2000. – 112 с.
100. Полякова, А. Н. Результаты клинико-лабораторных исследований
населения для выявления неблагоприятного воздействия на организм солей тяжелых металлов как экологического фактора / А. Н. Полякова, С. Б. Назаров,
Г. Н. Кашманова // Гигиена и санитария. – 1995. – № 1. – С. 33-35.
101. Потапов, С. Н. Морфологические особенности клеток Лейдига
плодов и новорожденных от матерей с преэклампсией / С. Н. Потапов,
Н. И. Горголь, А. В. Андреев // Медицина сьогодні і завтра – 2011. –
№ 4 (53). – С. 23-26.
102. Потемина, Т. Е. Нарушение сперматогенеза в условиях стресса у
самцов крыс / Т. Е. Потемина // Бюллетень экспериментальной биологии и
медицины. – 2008. – Т. 145. – № 6. – С. 645-647.
103. Потемина, Т. Е. Изменение параметров семенной жидкости самцов
белых крыс при различных видах экспериментального стресса / Т. Е. Потемина, С. В. Кузнецова, В. А. Ляляев // Современные технологии в медицине. – 2009. – № 2. – С. 23-26.
104. Райцина, С. С. Сперматогенез и структурные основы его регуляции / С. С. Райцина. – М. : Наука, 1985. – 207 с.
105. Реунов, А. А. Ультраструктурное исследование взаимодействий
герминативных
гранул
и
митохондрий
125
у
Apostichopus
japonicus
(Echinodermata: Holothuroidea) и Pleuronectes asper (Teleostei: Pleuronectidae) /
А. А. Реунов // Биология моря. – 2004. – Т. 30. – № 3. – С. 244-246.
106. Реунов, А. А. Сперматогенез многоклеточных животных /
А. А. Реунов. – М. : Наука, 2005. – 123 с.
107. Рузен-Ранге, Э. Сперматогенез у животных / Э. Рузен-Ранге. – М. :
Мир, 1980. – 259 с.
108. Рыжавский, Б. Я. Влияние численности пометов крыс на показатели развития мозга, гонад и надпочечников / Б. Я. Рыжавский, Е. М. Литвинцева, Р. В. Учакина // Дальневосточный медицинский журнал. – 2009. –
№ 1. – С. 85-87.
109. Савельева, Г. В. Плацентарная недостаточность / Г. В. Савельева,
М. В. Федорова, П. А. Клименко, Л. Г. Сичинава. – М. : Медицина, 1991. – 270 с.
110. Салангина, Л. И. Гигиеническая оценка условий труда и состояние здоровья женщин, занятых процессами пайки / Л. И. Салангина,
Л. С. Дубейковская, Ю. Н. Сладкова, О. Л. Маркова // Медицина труда и
промышленная экология. – 2000. – № 10. – С. 8-13.
111. Самусев, Р. П. Общая и частная гистология / Р. П. Самусев,
М. Ю. Капитонова. – М. : Мир и Образование, 2010. – 336 с.
112. Самусев, Р. П. Железы внутренней секреции / Р. П. Самусев,
Е. В. Зубарева. – М. : Мир и образование, 2011. – 144 с.
113. Саноцкий, И. В. Отдаленные последствия влияния химических соединений на организм / И. В. Саноцкий, В. И. Фоменко – М. : Медицина,
1979. – 232 с.
114. Сапин, М. Р. Анатомия человека / М. Р. Сапин, Г. Л. Билич. – М. :
Медицина, 2002. – Т. 2. – 384 с.
115. Саяпина, И. Ю. Окислительный стресс в семенниках крыс, индуцированный адаптацией к низким температурам, и его коррекция дигидрокверцетином / И. Ю. Саяпина, Т. Л. Огородникова // Политематический сетевой
электронный научный журнал Кубанского государственного аграрного университета (Научный журнал КубГАУ). – Краснодар: КубГАУ, 2013. –
126
№ 05(89).
–
IDA
[article
ID]:
–
0891304039.
Режим
доступа:
http://ej.kubagro.ru/2013/05/pdf/39.pdf. (дата обращения: 20.12.2014)
116. Семченко, В.В. Гистологическая техника / В.В. Семченко. – Омск :
Омская медицинская академия, 2006. – 285с.
117. Сетко,
Н.
П.
Кинетика
металлов
в
системе
мать-плод-
новорожденный при техногенном воздействии / Н. П. Сетко, Е. А. Захарова //
Гигиена и санитария. – 2008. – № 6. – С. 65-67.
118. Сизоненко, М. Л. Становление генеративной функции семенников
потомства самок крыс с хроническим поражением печени / М. Л. Сизоненко,
Г. В. Брюхин // Проблемы репродукции. – 2012. – № 1. – С. 16-19.
119. Снакин, В. В. Загрязнение биосферы свинцом: масштабы и перспективы для России / В. В. Снакин // Медицина труда и промышленная экология. – 1999. – № 5. – С. 21-27.
120. Соколов, И. И. Цитологические основы полового размножения
многолкеточных животных / И. И. Соколов // Руководство по цитологии / под
ред. Л. Н. Жинкина, П. П. Румянцева. – Л. : Наука, 1966. – Т. 2. – C. 390-461.
121. Стадников, А. А. Гипоталамическая нейросекреция и структурнофункциональный гомеостаз про- и эукариот (морфологические основы реактивности, пластичности и регуляции) / А. А. Стадников, О. В. Бухарин –
Оренбург: ОрГМА, 2012. – 296 с.
122. Столяров, И. Д. Коррекция миелопидом иммунодефицита у сотрудников промышленного предприятия, работающих со свинецсодержащими материалами / И. Д. Столяров, Р. П. Огурцов, М. В. Вотинцева,
Е. В. Ивашкова, Л. А. Пестова, В. А. Елкина // Медицина труда и промышленная экология. – 1998. – № 12. – С. 18-24.
123. Стусь, В. П. Вмiст важких металiв у тканинах сечостатевих органiв
мешканцiв iнтенсивного промислового регiону / В. П. Стусь // Урологiя. –
2006. – № 4. – С. 30-37.
124. Тельцов, Л. П. Влияние ацетата свинца на строение почек потомства белых крыс / Л. П. Тельцов, О. С. Шубина, Ю. В. Киреева, Н. А. Мель127
никова, Н. А. Смертина, Л. В. Грызлова // Морфологические ведомости. –
2010. – № 1. – C. 93-97.
125. Терехова, М. Н. Клинико-морфофункциональная характеристика
развития яичников потомства при различном течении беременности /
М. Н. Терехова // Автореф. дис. … докт. мед. наук. – М., 1994. – 37 с.
126. Топка, Э. Г. Этиология, патогенез, клиническая картина и лечение вторичного мужского бесплодия / Э. Г. Топка, И. И. Горпинченко,
И. Н. Малышкин // Урология и нефрология. – 1993. – № 5. – С. 43-48.
127. Трахтенберг, И. М. Тяжелые металлы как химические загрязнители производственной и окружающей среды / И. М. Трахтенберг // Довкiлля та здоров’я. – 1997. – № 2. – С. 48-51.
128. Улумбеков, Э. Г. Гистология / Э. Г. Улумбеков, Ю. А. Челышев. –
М. : ГЭОТАР-МЕД, 2001. – 694 с.
129. Харченко, Т. Н. Развитие белых крыс в условиях хронической
свинцовой интоксикации / Т. Н. Харченко // Докл. АН УССР. – 1988. – № 2 –
С. 85-88.
130. Харченко, Т. Н. Гонадотоксическое действие ацетата свинца в эксперименте на белых крысах / Т. Н. Харченко, С. К. Андреева // Доклад АН
УССР. – 1987. – Т. 6. – № 5. – 81 с.
131. Хван, П. А. Структурно-функциональное состояние гонад крыс
при воздействии свинецсодержащей пыли / П. А. Хван // II Всерос. конф.
«Эндокринные системы и органы и вредные факторы внешней среды». Тез.
докл. – Л. – 1983 – С. 163.
132. Хмелевская, Г. В. Гигиеническое нормирование свинецсодержащих веществ в воздухе рабочей зоны / Г. В. Хмелевская // Свинец в окружающей среде (гигиенические аспекты). – М., 1978. – С 58-61.
133. Хэм, А. Гистология: Пер. с англ. / А. Хэм, Д. Кормак. – М. : Мир,
1983. – Т. 5. – 296 с.
134. Черток, В. М. Морфофункциональная характеристика семенников
крыс при воздействии жира печени минтая / В. М. Черток, Т. А. Ботвич //
128
Бюллетень экспериментальной биологии и медицины. – 1998. – № 6. –
С. 699-701.
135. Чэн, Ф. Ю. Содержание свинца и кадмия в крови взрослых людей
г. Чанша, КНР / Ф. Ю. Чэн, Л. Ю. Цун // Гигиена и санитария. – 1996. –
№ 2. – С. 39-40.
136. Чухловина, М. А. Свинец и нервная система / М. А. Чухловина //
Гигиена и санитария. – 1997. – № 5. – С. 39-42.
137. Шаляпина, В. Г. Эндокринология репродукции / В. Г. Шаляпина. –
СПб. : Наука, 1991. – 192 с.
138. Шевантаева, О. Н. Сперматогенез после экстремальных гипоксических и ишемических воздействий и возможность его медикаментозной
коррекции в эксперименте / О. Н. Шевантаева // Автореф. дис. … докт. мед.
наук. – М., 2012. – 37 с.
139. Шевлюк, Н. Н. Механизмы сезонного изменения активности сперматогенеза у животных с сезонным характером репродуктивной активности /
Н. Н. Шевлюк, Е. В. Блинова, Д. А. Боков, М. Ф. Рыскулов // Морфология. –
2014. – Т. 145. – № 3. – С. 221.
140. Шейко, Л. Д. Влияние малых доз шестивалентного хрома на репродуктивную функцию мелких млекопитающих: Модельный эксперимент /
Л. Д. Шейко // Автореф. дис. … канд. биол. наук. – Екатеринбург, 1998. – 28 с.
141. Шепитько, В. И. Динамика ранних сроков острого асептического
воспаления семенников под явлиянием трансплантации криоконсервированной плаценты / В. И. Шепитько, Е. В. Стецук // Морфологiя.– 2007. – Т. 1. –
№ 1. – С. 120-123.
142. Шубина, О. С. Свинец и его влияние на организм / О. С. Шубина,
Л. В. Грызлова, Ю. В. Киреева. – Саранск : Мордов. гос. пед. ин-т, 2007. – 58 с.
143. Шустов, В. Я. Профессиональные болезни / В. Я. Шустов,
В. В. Королев, А. Г. Ольховская. – Саратов : Изд-во Сарат. ун-та, 1991. – 202 с.
144. Alexander, B. H. Contrasting associations of blood and semen lead
concentration with semen quality among lead smelter workers / B. H. Alexan129
der, H. Checkoway, E. M. Faustman et al. // Am J Ind Med. – 1998. – № 34. –
P. 464-469.
145. Arbuckle, T. E. 2,4-Dichlorophenoxyacetic acid residues in semen of
Ontario farmers / T. E. Arbuckle, S. M. Scharader, D. Cole et al. //Reprod Toxicol. – 1999. – № 13. – P. 421-429.
146. Baker, H. W. G. Protective effect of antioxidants on the impairments of
sperm motility by activated polymorphonuclear leukocytes / H. W. G. Baker,
J. Brindle, D. S. Irvine, R. J. Aitken // Fertil. Steril. – 1996. – Vol. 65. – P. 411-419.
147. Bloom, W. Textbook of histology / W. Bloom, D. W. Fawcett. – New
York: Saunders Co., 1975. – 1033 p.
148. Brannstrom, M. Ovulatory effect of interleukin-ІВ on the perfused rat
ovary / M. Brannstrom, L. Wang, R. J. Norman // Endocrinology. – 1993. –Vol.
132. – P. 399-404.
149. Brannstrom, M. Localization^ leukocyte subsets in the follicle wall and in
the corpus luteum throughout the human menstrual cycle / M. Brannstrom, V. Pascoe,
R. J. Norman, N. McClure // Fertil. Steril. – 1994. – Vol. 61. – P. 488-495.
150. Broekmans, F. J. Anti-Mullerian hormone and ovarian dysfunction /
F. J.Broekmans, J. A. Visser., J. S. Laven et al. // Trends Endoсrinol. Metab. –
2008. – Vol. 19. – P. 340– 347.
151. Brökelmann, J. Fine structure of germ sell and Sertoli sell during the
cycle of the seminiferous epithelium in the rat / J. Brokelmann // Z Zellforsch
Mikrosk Anat. – 1963. – Vol. 59. – P. 820-850.
152. Butrimovitz, G. P. Extremely low seminal lead concentrations and
male fertility / G. P. Burimovitz, I. Lo, R. Sharlip. – Clin Chim Acta, 1983. –
P. 229-231.
153. Chang C. Infertility with defective spermatogenesis and hypotestosteronemia in male mice lacking the androgen receptor in Sertoli cells / C. Chang,
Y. T. Chen, S. D. Yen et al. // Proc. Natl. Acad. Sci USA. – 2004. – Vol. 101. –
P 6876 -6881.
130
154. Creasy, D. M. Pathogenesis of male reproductive toxicity /
D. M. Creasy // Toxicologic Pathology. – 2001. – Vol. 29. – P. 64-76.
155. Crowley, W. F. Jr. Neuroendocrine control of human reproduction in
the male / W. F. Jr. Crowley, R. W. Whitcomb, J. L. Jameson, J. Weiss,
J. S. Finkelstein, L. S. O'Dea // Recent Progress in Hormone Research. –
1991. – Vol. 47. P. 27-62.
156. Dawson, E. B. Seminal plasma trace metal levels in industrial workers /
E. B. Dawson, D. R. Evans, W. A. Harris, L. C. Powell // Biol Trace Elem Res. –
2000. – № 74. – P. 97-105.
157. De Rooij, D. G. Stem cells in the testis / D. G. De Rooij // International
Journal of Experimental Pathology. – 1998. – Vol. 79. – P. 67-80.
158. De Rooij, D. G. All you wonted to know about spermatogonia but were
afraid to ask / D. G. De Rooij, L. D. Russell // Andrology. –2000. – Vol. 21. –
P. 776-798.
159. Desjardins, C. Design and function of the microcirculation /
C. Desjardins // Cell and Molecular Biology of the Testis / ed. C. Desjardins,
L. L. Ewing. – New York: Oxford Press, 1993. – P.127-136.
160. Di Carlo, A. A role of E-cadlierin in mouse primordial germ cell development / A. Di Carlo, M. De Fella // Dev. Biol. – 2000. – Vol. 226. – P. 209-219.
161. Dym, M. Basement membrane regulation of Sertoli cells / M. Dym //
Endocr. Rev. – 1994 – Vol.15. – P. 102-115.
162. Empereire, J.-C. Le deslenchement le 'ovulation / J.-C. Empereire //
Gyn. Obs. – 1999. – № 408. – P. 24-26.
163. Epifano, О. Genelic control of early folliculogenesis in mice / O. Epifano,
J. Dean // Trends in Endocrinology and Metabolism. – 2002. – Vol. 13. – P. 169-173.
164. Espey, L. L. Current status of the hypothesis that mammalian ovulation is comparable to an inflammatory reaction / L. L. Espey // Biology Of Reproduction. – 1994. – Vol. 50. – P. 233-238.
165. Fawcett, D. W. The mammalian spermatozoon / D.W. Fawcett // Dev.
Biol. – 1975. – Vol. 44. – P. 394-436.
131
166. Fortune, J. E. Follicular development: the role of the follicular microenvironment in selection of the dominant follicle / J. E. Fortune, G. M. Rivera,
M. Y. Yang // Anim. Reprod. Sci. – 2004. – Vol. 83. – P. 109-126.
167. Gougeon, A. Evolution of diameters of the largest healthy and atretic
follicles during the human menstrual cycle / A. Gougeon, B. Lefevre // J. Reprod.
Fertil. – 1986. – Vol. 69. – P. 497-502.
168. Gupta, G. S. Trace metals and metalloenzymes in placenta after oral
administration of lead acetate / G. S. Gupta, J. Singh, A. Gupta // Biol. Trace. Elem. Res. – 1997 Oct-Nov. – V. 60. – № 1-2. – P 145-152.
169. Hess, R. A. Spermatogenesis and cycle of the seminiferous epithelium.
Molecular mechanisms in spermatogenesis / R. A. Hess, R. L. Franca // Austin.
TX: Landes Bioscience / Springer Science. – 2008. – pp. 1-15.
170. Jahnukainen, K. Increased Apoptosis Occurring During the First Wave
of Spermatogenesis Is Stage-Specific and Primarily Affects Midpachytene Spermatocytes in the Rat testis / K. Jahnukainen, D. Crhysis, M. Hou, M. Parvinen,
S. Eksborg, O. Söder // Biology of reproduction – 2004. – Vol. 70. – P. 290-296.
171. .Karaca, T. Distribution and quantitative patterns of mast cells in ovary and uterus of rat / T. Karaca, S. Uslu //Arch Med. – 2007. – V. 39. – № 2. –
P. 389-393.
172. Kuriyama, K. Evaluation of testicular toxity and sperm morphology in
rats treated with methyl methanesulphonate (MMS) / K. Kuriyama, T. Kitamura,
R. Yokoi, M. Hayashi, K. Kobayashi, J. Kuroda, H. Tsujii // Journal of Reproduction and Development. – 2004. – Vol. 50. – P. 455-461.
173. Leblond, C. P. Spermiogenesis of rat, mouse,hamster and guinea pig as
revealed by the periodic acid-fuchsinsulfurous acid technique / C. P. Leblond,
Y. Clermont // Am. J. Anat. – 1952. – Vol. 90(2). – P.167-215.
174. Leng, Z. Characterization of ciliary activity in distal Fallopian tube biopsies of women with obstructive tubal infertility / Z. Leng, D. E.Moore,
B. A. Mueller, C. W.Critchlow, D. L.Patton, S. A. Halbert, S. P. Wang // Hum Reprod. – 1998. – № 13(11). – P. 3121-3127.
132
175. Lin, L. Sex-dependent expression of placental (P) cadhetin during
mouse gonadogenesis / L. Lin, R. DePhilip // Anat. Rec. – 1996. – Vol. 246 –
P. 535-544.
176. Lima, F. B. Pargiline effect on luteinizing hormone secretion throughout the rat estruus cycle: correlation with serotonin, catecholamines and nitric oxide in the medial preoptic area / F. B. Lima, R. E. Szawka, J. A. Anselmo-Franci,
C. R. Franci // Brain Res. – 2007 . – V. 20. – № 1142. – P. 37-45.
177. Lipsett, M. B. Studies on Leydig cell physiology and pathology: Secretion and metabolism of testosterone / M. B. Lipsett, H. Wilson, M. A. Kirschner,
S. G. Korenman, L. M. Fishman, G. A. Sarfaty, C. W. Bardin // Recent Prog.
Horm. Res. – 1966. – Vol. 22. – P. 245.
178. Liu, H. X. Some altered concentrations of elements in semen of workers exposed to trinitrotoluene / H. X Liu, W. H. Qin, G. R. Wang et al. // Occup
Environ Med. – 1995. – № 52. – P. 842-845.
179. Lu, J. Transplacental kinetics of lead in pregnantmini-pigs / J. Lu,
G. Petroianu, B. Widjaja, R. Rufer //Arch. Toxicol. – 1997. – V. 71 – № 3. –
P. 187-192.
180. Marchlewska, K. Triiodothyronine modulates initiation of spermatogenesis in rats depending on treatment timing and blood level of the hormone /
K. Marchlewska, K. Kula, R. Walczak-Jedrzejowska, E. Oszukowska, S. Orkisz,
J. Slowikowska-Hilczer // Molecular and Cellular Endocrinology. –2011. –
Vol. 341. – P. 25-34.
181. Miller, R. K. Human placental explants in culture: approaches and assessments / R. K. Miller, O. Genbacev, M. A. Turner et al. // Placenta. – № 26. –
2005. – Р. 439-48.
182. Morales, A. Apoptosis and Blood-Testis Barrier During the First Spermatogenic Wave in the Pubertal Rat / A. Morales, F. Mohamed, J. C. Cavicchia //
The anatomical record – 2007. – Vol. – 290. – P. 206-214.
133
183. Moreno, S. G. High sensitivity of rat foetal germ cells to low dose-rate
irradiation / S. G. Moreno, B. Dutrillaux, H. Coffigny // Int. Radiat. Biol. – 2001. –
Vol. 77. – № 4. – P. 529-538.
184. Moreno, R. D. Caspase activation throughout the first wave of spermatogenesis in the rat / R. D. Moreno, C. Lizama, N. Urzúa, S. P. Vergara.
J. G. Reyes // Cell and Tissue Research. – 2006. – Vol. 325. – P. 533–540.
185. Morteza, K. Autologous Transplantation of Adult Mice Spermatogonial
Stem Cells into Gamma Irradiated Testes / K. Morteza, M. Mansoureh,
J. M. Seyed, G. Hamid // Cell Journal. – 2012. – № 14. – P. 82-89.
186. Moses, M. J. Structure and function of the synaptonemal complex /
M. J. Moses // Genetics. – 1969. – 61(1). – P. 41-51.
187. Novak, D. A. Ontogeny of amino acid transport system a in rat placenta / D. A. Novak, M. J. Beveridge, M. Malandro, J. Seo //Placenta. – 1996, October. – V. 17. – № 8. – P. 643-651.
188. O'Donnell, L. Spermiation: The process of sperm release / L. O'Donnell, P. K. Nicholls, M. K. O'Bryan, R. I. McLachlan, P. G. Stanton // Spermatogenesis. – 2011. – Vol. 1. – № 1. – P. 14-35.
189. Orth, J. M. Cell biology of testicular development in the fetus and
neonate / J. M. Orth // Cell and molecular biology of the testis, 1st ed. /
C. Desjardins, L. L. Ewing (Eds). – New York: Oxford University Press, 1993. –
P. 3-42.
190. Pepling, M. E. From primordial germ cell to primordial follicle: mammalian female germ cell development / M. E. Pepling // Genesis. – 2006. – Vol. 44 –
P. 622-632.
191. Pepling, M. E. Mouse ovarian germ cell cysts undergo programmed
breakdown to form primordial follicles / M. E. Pepling, A. C. Spradling // Dev.
Biol. – 2001. – Vol. 234. – P. 339-351.
192. Pfaff, D. Concepts and mechanisms of generalized central nervous system arousal / D. Pfaff, A. Ribeiro, J. Mattews, L.-M. Kow // Ann. N. Y. Acad.
Sci. – 2008. – № 1129. – P. 11-25.
134
193. Reichrtova, E. Sites of lead and nickel accumulation in the placental
tissue / E. Reichrtova, F. Dorociak, L. Palkovicova // Hum. Exp. Toxicol. –
1998. – V. 17. – № 3. – P. 176-81.
194. Reunov, A. Nuage constituents arising from mitochondria: is it possible? /
A. A. Reunov, V. V. Isaeva, D. W. T. Au, R. S. S. Wu // Development, Growth &
Differentiation. – 2000. – Vol. 42 – № 2. – P. 139-143.
195. Rezvanfar, M. A. Protection of cyclophosphamide-induced toxicity in
reproductive tract histology, sperm characteristics, and DNA damage by an herbal
source; evidence for role of free-radical toxic stress / M. A. Rezvanfar, R. A. Sadrkhanlou, A. Ahmadi, H. Shojaei-Sadee, M. A. Rezvanfar, A. Mohammadirad,
A. Salehnia, M. Abdollah // Human & Experimental Toxicology. – 2008. –
Vol. 27. – № 12. – P. 901-910.
196. Richards, J. Hormonal control of gene expression in the ovary /
J. Richards // Endocr. Rev. – 1994. – Vol. 15 – P. 725-751.
197. Richter, J. Relation of metal and lysozyme levels in the placentas of
women with intrauterine fetal growth retardation / J. Richter, Z. Hajek, I. Pfeifer,
P. Subrt //Ceska Gynekol. – 1997 Jun. – V. 62. – № 3. – P. 117-122.
198. Ritzen, E. M. The Sertoli cells / E. M. Ritzen, V. Hansson, F. S. French //
The testis / Ed H. Burger, D. de Kretser. – New York: Raven Press. – 1981. –
Р.171-195.
199. Rondia, D. Les metaux lourds et I environnement / D. Rondia // Elektricite. Belg. – 1999. – №188. – P. 3-20.
200. Russell, L. D. Histopathology of the testis quantit ative evaluation of
testis histopathology / L. D. Russell, R. A. Ettlin, A. P. Hikim and E. D. Clegg. –
1990. – P. 240-264.
201. Saito, K. Spermiation failure is a major contributor to early spermatogenic suppression caused by hormone withdrawal in adult rats / K. Saito,
L. O'Donnell, R. I. McLachlan, D. M.Robertson // Endocrinology. – 2000. –
Vol. 141. – № 8. – P. 2779-2785.
135
202. Sallmen, M. Exposure to lead and male fertility / M. Sallmen // Int
J Occup Med Environ Health. – 2001. – № 14. – Р. 219-222.
203. Sallmen, M. Time to pregnancy among the wives of men occupationally exposed to lead / M. Sallmen, M. L. Lindbohm, A. Anttila et al. // Epidemiology. – 2000. – № 11. – Р. 141-147.
204. Saxena, D. K. Blood and placental lead levees in an Indian city: a preliminary report / D. K Saxena, C. Singh, R. C. Murthy, N. Mathur, S. V. Chandra //
Arch. Environ Health. – 1994 Mar-Apr. – V. 49. – № 2. – P. 106-110.
205. Sayasith, K. Molecular Characterization of Equine P-Selectin
(CD62P) and Its Regulation in Ovarian Follicles During the Ovulatory Process /
K. Sayasith, N. Bouchard, D. Boerboom, K. A. Brown, M. Dore, J. Sirois // Biology Of Reproduction. – 2005. – Vol. 72 – P. 736-744.
206. Scheltinga, D. M. Descriptions of the mature spermatozoa of the lizards
Crotaphytus bicinctores, Gambelia wislizenii (Crotaphytidae), and Anolis carolinensis (Polychrotidae) (Reptilia, Squamata, Iguania) / D. M. Scheltinga,
B. G. Jamieson, R. E. Espinoza, K. S. Orrell // J. Morphol. – 2001. – Vol. 247. –
№ 2. – P. – P. 160-171.
207. Schneider, H. Physiology of the placenta: development of fetal nutrition during pregnancy / H. Schneider // Z. Geburtshilfe Neonatol. – 1997. –
V. 201 Suppl. – № 1. – P. 1-8.
208. Setchell, B. P. The secretion of fluid by the testes of rats, rams and
goats with some observations on the effect of age, cryptorchidism, and hypophysectomy / J. Reprod. Fertil. – 1970. – Vol. 23. – P. 79-85.
209. Sharpe, R. M. Proliferation and functional maturation of Sertoli cells,
and their relevance to disorders of testis function in adulthood / R. M. Sharpe,
C. McKinnell, C. Kivlin, J.S. Fisher // Reproduction. – 2003. – Vol. 125(6). –
P. 769-784.
210. Simon, A. Female infertility in mice lacking connexin 37 / A. Simon //
Nature. – 1997. – Vol. 385 – P. 525-529.
136
211. Stocco, C. He molecular control of corpus luteum formation, function,
and regression / C. Stocco, C. Telleria, G. Gibori // Endocr Rev. – 2007. –
Vol. 28(1). – P. 117-49.
212. Stowe, H. O. Experimental oral lead toxicity in young dogs: clinical
and morphologic effects / H. O. Stowe, R. A. Goyer, M. M. Krigman, M. Wilson,
M. Cates // Arch. Pathol. – 1973. – № 95. – Р. 106-116.
213. Telisman, S. Semen quality and reproductive endocrine function in relation to biomarkers of lead, cadmium, zinc, and copper in men / S. Telisman,
P. Cvitkovic, J. Jurasovic et al. // Environ Health Perspect. – 2000. – № 108. –
P. 45-53.
214. Tomei, G. Urban stressors and plasmatic 17-beta-estradiol (E2) in male
exposed workers / G. Tomei, M. V. Rosati, M. Ciarrocca et al. // Toxicol Ind
Health. – 2007. – № 23(9). – P. 537-543.
215. Torry, D. S. Angiogenesis and the expression of vascular endothelial
growth factor in endometrium and placenta / D. S Torry, R. J. Torry //Am. J. Reprod. Immunol. – 1997 Jan. – V. 37. – № 1. – P. 21-29.
216. Van der Hoeka, K. H. Intrabursal Injection of Clodronate Liposomes
Causes Macrophage Depletion and Inhibits Ovulation in the Mouse Ovary /
K. H. Van der Hoeka, S. Maddocksc, С. М.Woodhousea, N. Rooijend,
S. A. Robertsonb, R. J. Norman // Biology of Reproduction. – 2000. – Vol. 62. –
P. 1059-1066.
217. Vazquez-Memije, M. E. Analysis of age-associated changes in mitochondrial free radical generation by rat testis / M. E. Vazquez-Memije, R. Capin, A. Tolosa, M. El-Hafidi // Mol Cell Biochem. – 2008. – Vol. 307. – № 1. –
P. 23-30.
218. Vinatier, D. Immunological aspects of ovarian function: role of the cytokines / D. Vinatier, P. Dufour, N. Tordjeman-Rizzi et al. // Eur. J. Obstet. Gynecol. Reprod. Biol. – 1995. – Vol. 63. – P. 155-168.
137
219. Visser, J. A. Anti-Mullerian hormone: a new marker for ovarian function / J. A. Visser, F. H de Jong., J. S. Laven, A. P. Themmen // Reproduction. –
2006. – Vol. 131. – P. 1-9.
220. Wartenberg, H. Germ cell kinetics during early ovarian differentiation: an analysis of the oogonial cell cycle and the subsequent changes in oocyte
development during the onset of meiosis in the rat / H. Wartenberg, B. Hilscher,
W. Hilscher // Microsc. Res. Tech. – 1998. – Vol. 40. – P. 377-397.
221. Winship, K. A. Toxicity of lead: Areview / K. A. Winship // Adverse
Drug React and Acute Poison. Rev. – 1999. – V. 8. – № 3. – P. 117-153.
222. Wood, A. W. Apoptosis and ovarian function: novel perspectives from
the teleosts / A. W. Wood, G. J. Van Der Kraak // Biology of Reproduction. –
2001. –Vol. 64(1). – P. 264-271.
223. Zogbi, C. Gonocyte development in rats: proliferation, distribution and
death revisited / C. Zogbi, R. B. Tesser, G. Encinas, S. M. Miraglia, T. Stumpp //
Histochem Cell Biol. – 2012. – Vol. 138(2). – P. 305-322.
224. Yang, Ying. Huanjing yu fiankang zazhi / Yang Ying, Dong Shengzhang, Lin Zhong-ning // J. Environ, and Health. – 2003. – V. 20. – № 2. –
P. 86-88.
138