МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФГБОУ ВПО «ОРЕНБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ»
advertisement
МИНИСТЕРСТВО СЕЛЬСКОГО ХОЗЯЙСТВА РОССИЙСКОЙ ФЕДЕРАЦИИ ФГБОУ ВПО «ОРЕНБУРГСКИЙ ГОСУДАРСТВЕННЫЙ АГРАРНЫЙ УНИВЕРСИТЕТ» На правах рукописи АНИПКО Вадим Владимирович МОРФОФУНКЦИОНАЛЬНЫЕ ИЗМЕНЕНИЯ МОЛОЧНОЙ ЖЕЛЕЗЫ КРОЛЬЧИХ ПОД ВЛИЯНИЕМ ПРЕПАРАТОВ СЕЛЕНА 06.02.01. – диагностика болезней и терапия животных, патология, онкология и морфология животных ДИССЕРТАЦИЯ на соискание ученой степени кандидата биологических наук Научный руководитель: доктор биологических наук, профессор Л.Л. Абрамова Оренбург – 2011 Оглавление Перечень условных обозначений, использованных в диссертации 4 ВВЕДЕНИЕ 5 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ 13 1.1. Биологические особенности размножения и лактации зайцеобразных 1.2. Морфогенез 13 множественной молочной железы при смене функциональных состояний самки 1.3. Морфофункциональные 15 особенности молочных желез зайцеобразных 19 1.4. Состав и объем секретируемого молока крольчих 22 1.5. Нейрогуморальная регуляция маммогенеза, лактогенеза и лактопоэза 23 1.6. Биологическая роль, механизм действия и применение селена в животноводстве 29 1.7. Заключение 40 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ 42 3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ 53 3.1. Гистология паренхиматозных органов крольчих, при воздействии разных доз препаратов «Е-селен» и «Селенолин®» 3.2. Морфогенез отделов выводной системы молочной 53 железы крольчих в норме и при влиянии препаратов селена 58 3.3. Особенности гистофизиологии железы на фоне применения препаратов селена в периоды половой и физиологической зрелости самки 71 3.3.1. Молочная железа крольчих в возрасте трех месяцев 71 3.3.2. Особенности морфофизиологии молочной железы крольчих в возрасте шести месяцев 77 3.4. Особенности морфофизиологии молочной железы беременных крольчих 85 2 3.5. Особенности гистофизиологии железы и ее секреции при воздействии препаратов селена в период родов и лактации 94 3.5.1. Молочная железа в период родов 94 3.5.2. Хронодинамика лактогематического барьера в первые часы после окрола и в середине лактации 101 3.6. Молочная продуктивность и сравнительный состав молозива и молока крольчих при влиянии препаратов «Е – селен» и Селенолин®» 138 3.7. Особенности гистофизиологии железы при действии препаратов селена в период отъема и в постлактационную инволюцию 146 3.7.1. Молочная железа в период отъема 146 3.7.2. Молочная железа в период постлактационной инволюции 153 4. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ 161 5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ 175 6. РЕКОМЕНДАЦИИ К ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ 176 ВЫВОДЫ 177 БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК 180 3 ПЕРЕЧЕНЬ условных обозначений, использованных в диссертации Ø диаметр V объем Прл пролактин ПРг прогестерон ФСГ фолликулостимулирующий гормон ЛГ лютеинизирующий гормон Е-2 эстрадиол Ig G иммуноглобулин G СОМО сухой обезжиренный молочный остаток Ca кальций P фосфор АСТ аспартатовая трансаминаза АЛТ аланиновая трансаминаза Cs коэффициент точности Cv коэффициент вариации 4 ВВЕДЕНИЕ «Наука никогда не решает вопроса, не поставив при этом десятка новых…» Б. Шоу Актуальность проблемы. Для Российской Федерации насущной проблемой является обеспечение продовольственной независимости и безопасности, разрешить которую можно лишь за счет значительной интенсификации сельского хозяйства, в том числе животноводства. В результате аграрной политики последних лет значительно сократились поголовье и продуктивность сельскохозяйственных животных, изменилось качество продукции. Это связано, в том числе, с недостаточным поступлением в организм животных селена, выполняющего важнейшие биологические функции (Блинов В.А., 2010). В настоящее время кролиководство как отрасль мясного животноводства является перспективной, поскольку кролики – это источник ценного диетического мяса, а так же пуха и мехового сырья. Благодаря их скороспелости и высокой интенсивности размножения значительный объем этой продукции можно получить в сравнительно короткий срок. Рентабельное выращивание кроликов в производственных условиях требует знаний морфологических основ их воспроизводства и вскармливания потомства (Кролики и нутрии, 2000). Молочная железа – уникальный орган, вырабатывающий молозиво→молоко, содержащее в себе необходимые новорожденному, особенно в первые часы его жизни, пластический материал и факторы неспецифической защиты (Грачев И.И., 1973; Ануфриев А.И., 2007). Раскрытие особенностей морфофизиологии железы в периоды маммогенеза, лактогенеза и лактопоэза, особенно для перворожавших самок, имеет большое значение в совершенствовании технологии выращивания молодняка. Изучению морфологии молочной железы млекопитающих посвящены работы С.Г. Сайко (1990), П.А. Чумаченко, И.П. Шлыкова (1991), 5 Г.Б. Тверского (1993), Л.Л. Абрамовой (1998–2008), О.Г. Гуляевой (2001), А.В. Рыбакова (2003), Б.П. Шевченко (2003), Л.П. Соловьевой (2004), Л.П. Соловьевой, А.В. Бородулиной, О.А. Голубевой (2005), Е.П. Смирновой, Л.П. Соловьевой (2005), В.Ф. Коколиной, М.А. Фоминой (2006), Р.Г. Калякиной (2006), Г.Г. Черепанова, З.Н. Макар (2007), С.В. Волкова, Н.А. Татарниковой (2008), М.В. Щипакина (2009), В.М. Гончаровой (2010), M.M. Richert, K.L. Schwertfeger, J.W. Ryder (2000), T.S. La Ganga (2001), M.R. Warner (2005), в которых накоплен значительный материал о видовых, возрастных и других особенностях строения и функциях этого органа. Информация о морфологии молочной железы крольчих в разные периоды репродуктивного цикла, включая этапы сукрольности, родов и лактации – весьма ограничена, за исключением работ Л.В. Курбатовой (1972–1977), Н.М. Грезиной, Н.А. Зиновьевой (2005). Не смотря на то, что роль эссенциальных микронутриентов в поддержании нормального течения физиологических процессов в оранизме животных существенна (Георгиевский В.И., Анненков Б.Н., Самохин В.Т., 1979; Авцын А.П., 1990; Соколов А.В., Замана С.П., 2001; Баскакова А.А., 2005; Лебедев С.В., Рахматуллин Ш.Г., Сизова Е.А., 2008; Трошина Т.А., Вакилов Р.Ф., 2008), до сих пор отсутствуют данные об их влиянии на морфогенез органа. Особая роль в этом принадлежит селену – мощному антиоксиданту, создающему благоприятные условия для нормального осуществления ферментативных процессов, участвующему в окислительно- восстановительных реакциях организма, усиливающему действие витаминов А, Е и D3 (Чугай Б.Л., Краснослободцева А.С., Крысин М.П., Фролов А.И., 2009; Родионова Т.Н., Васильев В.Ю., Ульихина Л.И., 2001; Крапивина Е.В., Ващенин Е.П., Иванов В.П., 2002; Кокорев В.А., Прытков Ю.Н., Кистина А.А., Пугачев М.Ф., 2001; Shargorodsky M., Debby O., Matas Z., Zimlichman R., 2010; Camargo E.V., Dos Anjos Lopes S.T., Costa M.M., Paim F., et all., 2010). В то же время, на территории Российской Федерации 6 практически повсеместно отмечаются зоны, эндемичные по селену (Давлетшина Д.Ф., Фаритов Т.А., 2005), причем последние два десятелетия их площади увеличиваются (Сидоркин В.А., Улизко М.А., Клищенко О.А., 2009). Оренбургская область также входит в этот неблагополучный список (Боев В.М., 2005, Бурцева Т.И., Голубкина Н.А., Мирошников С.А., Скальный А.К. и др., 2008). Раскрытие особенностей морфогенеза молочной железы крольчих в периоды репродуктивного цикла в норме и при влиянии селенсодержащих препаратов на сегодняшний день является актуальным. Цель исследования: выявить закономерности гистофизиологии молочной железы и хронодинамику структур ее лактогематического барьера у крольчих породы советская шиншилла в разные периоды репродуктивного цикла в норме и при влиянии препаратов «Е – селен» и «Селенолин®». Для реализации данной цели поставлены следующие задачи: 1. Выявить закономерности роста и развития паренхиматозного и стромального компонентов молочной железы крольчих при влиянии препаратов селена, их взаимосвязь с динамикой половых гормонов при смене функциональной напряженности органа. 2. Изучить особенности морфогенеза и динамику отделов выводной системы молочной железы, проследить их корреляцию с массой органа в норме и при влиянии препаратов селена. 3. Оценить адаптационную пластичность и взаимосвязь структур паренхиматозного компонента и интегрирующих систем (сосуды, нервы) альвеолярного отдела молочной железы крольчих в норме и при влиянии препаратов селена, в периоды репродуктивного цикла самки (интактность, беременность, роды, лактация, отъем и постлактационная инволюция). 4. Проследить лактогематического временнýю барьера молочной динамику железы проницаемости крольчих для иммуноглобулина G и селена под влиянием препаратов селена и изменением концентрации половых гормонов, определить разницу состава молозива и 7 молока в начале и середине лактации, изучить влияние препаратов селена на морфологические, биохимические показатели крови крольчих в различные периоды репродуктивного цикла. Научная новизна и ценность полученных результатов заключается в том, что: • впервые получены сведения о росте и развитии паренхиматозного и стромального компонентов молочной железы крольчих при воздействии препаратов селена, их взаимосвязи с динамикой половых гормонов в периоды репродуктивного цикла самки; • изучены закономерности морфогенеза железы, динамика и корреляция морфометрических показателей отделов выводной системы с массой органа в норме и при влиянии препаратов селена; • впервые в молочной железе крольчих контрольных и опытных групп выявлена взаимосвязь структур информационно-обеспечивающими изменением концентраций альвеолярного системами половых гормонов (нервы, и отдела сосуды), их с с адаптационная пластичность при разной функциональной напряженности органа; • приоритетны сведения о хронодинамике структур лактогематического барьера, обеспечивающих его проницаемость для иммуноглобулина G и селена на фоне изменения концентраций половых гормонов, о биохимическом составе молозива и молока крольчих в начале и середине лактации при воздействии препаратов «Е - селен» и «Селенолин®». Полученные новые результаты позволили дать практические рекомендации в технологию промышленного кролиководства. Теоретическая и практическая значимость работы: Диссертационное исследование посвящено актуальным вопросам биологии: изучению гистофизиологии молочной железы крольчих в разные периоды репродуктивного цикла на фоне влияния препаратов «Е - селен» и «Селенолин®», а также вопросам функциональной и клинической морфологии, микроэлементологии. Выполнение задач, поставленных в 8 работе, существенно дополнило имеющиеся представления о морфофункциональных изменениях множественной молочной железы. Полученные результаты могут быть использованы в учебном процессе на ветеринарных, зооинженерных, и других факультетах, на курсах повышения квалификации, а также при написании учебников, учебных пособий и монографий. Кроме того, материалы диссертации могут быть полезны научным сотрудникам НИИ, занимающимся проблемами экспериментальной и функциональной морфологии желез. Клиницистам предложены морфологические критерии для цито- и гистологической оценки биоптатов органа с целью диагностики заболеваний молочной железы. Разработанная, стимулирования апробированная молочной и продуктивности внедренная крольчих «Технология парентеральным введением препаратов селена» позволила увеличить секрецию и объем выделяемого молозива→молока, улучшить их качественные показатели, в том числе по IgG, повысить жизнеспособность и сохранность крольчат. Результаты исследования внедрены в КФХ «Раздолье» Тюльганского района Оренбургской области (акт внедрения от 25 марта 2010 г). Реализация результатов исследований. Внедрение материалов диссертационной работы в научные исследования и учебный процесс осуществлялось в лабораториях ГНУ Дальневосточного зонального НИВИ Россельхозакадемии, на морфологических кафедрах Мордовского ГУ им. Н.П. Огарева, Кубанского ГАУ, Саратовского ГАУ им. Н.И. Вавилова, Ставропольского ГАУ, Омского ГАУ, Алтайского ГАУ, Воронежского ГАУ им. К.Д. Глинки, Казанской ГАВМ им. Н.Э. Баумана, Уральской ГАВМ, Самарской ГСХА, Нижегородской ГСХА, Белгородской ГСХА, Ульяновской ГСХА, Бурятской ГСХА им. В.Р. Филиппова в форме выпуска карт обратной связи. В процессе исследования разработаны: «Способ повышения плодовитости и молочной продуктивности крольчих парентеральным 9 введением селенсодержащих препаратов» (решение о выдаче патента на изобретение № 2010123251/10(033072 от 04. октября 2011 г.) и «Способ определения концентрации селена в крови», (приоритетная справка Патентного ведомства № 2011120673/15 (030563) от 20.05.2011г). Связь исследований с научной программой. Диссертация выполнена в рамках научно-исследовательской работы в соответствии с планом НИР кафедры морфологии, физиологии и патологии ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет». Регистрационный номер темы: 01201161504. Апробация работы. Материалы диссертации доложены и обсуждены на IV Всероссийской научно-практической конференции «Проблемы экологии Южного Урала» (Оренбург, 2009), VI Всероссийском съезде анатомов, гистологов и эмбриологов (Саратов, 2009), конференции молодых ученых и специалистов молодежном Оренбургской инновационном международной форуме научно-практической области ПФО (Оренбург, (Ульяновск, конференции 2010), 2010), «Современные тенденции развития ветеринарной медицины и инновационные технологии в ветеринарии и животноводстве» посвященной 75-летию факультета ветеринарной медицины Бурятской ГСХА (Улан-Удэ, 2010), III international simposium «Topic problem of biophotonics» (St- Peterburg - Nizhniy Novgorod, Russia, 2011). Результаты исследования послужили основой для создания научного проекта «Внедрение технологии стимулирования репродуктивной функции и молочности крольчих парентеральным введением селенсодержащих препаратов», удостоенного диплома лауреата областной выставки научнотехнического творчества молодежи «НТТМ-2010» (Оренбург, 2010), гранта и диплома победителя конкурса «Оренбуржью – достойные кадры», проводимым Оренбургским региональным отделением общероссийской общественной организации «Российское аграрное движение – РАД» (Оренбург, 2010), диплома лауреата Молодежного инновационного форума 10 Приволжского федерального округа (Ульяновск, 2010), Президентского гранта для поддержки талантливой молодежи на Всероссийской выставке научно-технического творчества молодежи «НТТМ-2010» (Москва, 2010), бронзовой медали и диплома III степени VI Саратовского салона изобретений, инноваций и инвестиций (Саратов, 2011). Основные положения, выносимые на защиту: выявленные закономерности роста и развития молочной железы • крольчих и взаимосвязь ее структур с динамикой половых гормонов под воздействием препаратов селена при разной функциональной напряженности органа; • особенности морфогенеза железы, динамика и корреляция отделов выводной системы с массой органа в норме и при парентеральном введении селенсодержащих препаратов – источников биотического эссенциального элемента; • взаимосвязь структур альвеолярного отдела органа с информационно-обеспечивающими системами (нервы, сосуды), изменением концентраций половых гормонов, их адаптационная пластичность в разные периоды репродуктивного цикла самки в норме и при влиянии препаратов селена; • временнàя динамика структур лактогематического барьера молочной железы, регулируемая половыми гормонами и влияющая на интенсивность выхода в молозиво→молоко иммуноглобулина G и селена, а также особенность секреторного цикла лактоцита, определяющая биохимический состав молозива и молока крольчих под воздействием препаратов селена в начале и середине лактации и объемы их выработки. Публикации результатов исследований. По материалам собственных научных исследований опубликовано восемь печатных работ, из них пять – в изданиях, рекомендованных ВАК РФ. Личный вклад соискателя. Представленная работа является результатом исследований автора в период с 2008 по 2011 годы. 11 Экспериментальную часть, работу по систематизации и анализу полученных результатов автор провел лично. Часть научных трудов опубликована в соавторстве с Калякиной Р.Г., Маряхиной В.С., Гончаровой В.М., Душкиной Е.А. Представленные в диссертационный совет справки подтверждают, что в диссертации их данные не использованы. Объем и структура диссертации. Диссертационная работа изложена на 210 страницах компьютерного набора и состоит из оглавления, перечня условных обозначений, используемых в диссертации, введения, обзора литературы, материала и методов исследования, семи глав собственных исследований, обсуждения рекомендаций к полученных использованию результатов, научных выводов, заключения, выводов, библиографического списка и приложения к диссертации в объеме 67 страниц. Библиографический список включает 303 наименования работ, из них 116 – зарубежных авторов. Материалы диссертации иллюстрированы 70 рисунками и 41 таблицей. 12 1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ Кролиководство является перспективной отраслью животноводства. В связи с непродолжительным периодом беременности, многоплодием и высокой скороспелостью, за год от одной крольчихи можно получить количество мяса, в 30 раз превышающее её собственную массу (Приступа В.Н., 2000). Крольчатина нежная, вкусная, легко усвояемая организмом, по химическому составу является диетическим продуктом и необходима при заболеваниях печени, гастритах, малокровии, ожирении, полезна детям и пожилым людям. По сравнению с другими животными жирами, ценность кроличьего жира выше: в нем очень высокое отношение ненасыщенных жирных кислот к насыщенным (Энциклопедия, 2003). Шкурковое сырье кроликов используют в меховой промышленности, из кожи изготавливают обувь и кожгалантерейные изделия, пух идет на производство дорогих сортов фетра, велюра и трикотажа (Седов Ю.Д., 2008). 1.1. Биологические особенности размножения и лактации зайцеобразных Согласно современной зоологической классификации, зайцеобразные выделены в самостоятельный отряд (Lagomorpha), представленный сравнительно однообразными по внешнему виду зверями, объединенными в два семейства: зайцы (Leporidae) и пищухи, или сеноставки (Lagomyidae). К семейству зайцев относятся жесткошерстные зайцы (маньчжурский заяц), кролики и зайцы (беляк, русак, толай и др.) (Кобылкин К.А., Давыдов В.Н., 2001; Кузнецов Л.В., 2002; Энциклопедия, 2003; Трапезов О.В., Трапезова Л.И., 2006). У разных видов отряда продолжительность беременности, лактации, степень развития новорожденных неодинаковы. У одних, детеныши рождаются покрытыми волосами и зрячими, у других – голыми, слепыми и беспомощными. Различия в степени зрелости новорожденного потомства 13 (при равном весе тела) объясняются различной продолжительностью беременности (Седов Ю.Д., 2008; Тузова Р.В., 1989). Для зайчих (беляк, русак), у которых беременность длится около 44 – 51 суток, характерно зрелорождение: детеныши рождаются зрячими, покрытыми шерстью (рис. 1). Сразу же после родов мать кормит их молоком, после чего покидает. Зайчата затаиваются поодиночке и остаются в таком положении три-четыре дня. Следующее кормление молоком может осуществляться не обязательно их матерью, а любой другой лактирующей зайчихой. Через семь-десять дней зайчата начинают питаться травой. В целом они потребляют молоко матери не более 12 – 15 дней, при этом не каждый день (Грачев И.И., Галанцев В.П., 1973). Рис 1. Однодневные детеныши кролика (а) и зайца-беляка (б) Беременность крольчих (сукрольность) почти вдвое короче: 28–30 дней (Плотников В.Г., 1992; Diaz P., Rodriguez J.M., 1987). Исследования Ю.А. Калугина (2007) показали, что в среднем продолжительность сукрольности равняется 31,5 суткам. Это связано с числом крольчат в помете: чем их больше, тем она короче, и наоборот. Для крольчат характерно незрелорождение: они голые, слепые, совершенно беспомощные, однако растут очень интенсивно, удваивая свой вес к пятому дню (Котенкова Е.В., Федосов Е.В., Ушакова Н.А., 2010) (рис. 1). За 20–30 дней лактации масса детенышей кроликов увеличивается в среднем на 500–700 г., а за весь период кормления в 10,3 раза, в то время как детеныши крысы только в 9,2 раза, а морской свинки – в 3,2 раза (Минина И.С., Майоров А.И., 1988). Период лактации у крольчих довольно продолжителен и колеблется от 30 до 62 дней, хотя иногда может продолжаться до трех-четырех месяцев 14 (Карпов В.А., 1990; Кролики и нутрии, 2000; Кулько К.С., 2004). Кормящие крольчихи могут принять самца, т.е. способны совмещать сукрольность с лактацией, однако в таких случаях ее продуктивность обычно не высокая (Литвинова Л.Ф., 1993; Трапезов О.В., Трапезова Л.И., 2006; Калугин Ю.А., 2007; Нигматуллин Р.М., 2008). Обычно самка приходит на гнездо один раз в сутки. За недолгий акт кормления (от 2 до 4,5 мин), крольчата успевают потребить необходимый объем секрета, поскольку сосут самку очень энергично (Вакуленко И.С., 1984; Плотников В.Г., 1992, Котенкова Е.В., Федосов Е.В., Ушакова Н.А., 2010; Gonzalez-Mariscal G., Melo A.I., Chirino R., Jimenez C., et all., 1998). Таким образом, у зайцеобразных стимуляция молочных желез, имеющая место при сосании, происходит значительно реже, чем у многих других млекопитающих (Плотников В.Г., 2001). 1.2. Морфогенез множественной молочной железы при смене функциональных состояний самки Молочные железы – одно из поздних филогенетических образований животных, признак класса млекопитающих. Это производные кожного покрова, относящиеся к специализированным железам с апокриновым типом секреции, образующиеся как вторичный половой признак. Это сложноорганизованный, высоколабильный орган, состоящий из связанных воедино тканей (железистой, миоэпителиальной, гладкомышечной, соединительной), кровеносных и лимфатических сосудов, нервов, их волокон и окончаний. Причины, вызывающие изменчивость тканевых компонентов органа обусловлены сменой физиологического состояния организма. Размножение, беременность, лактация определяют общую биологическую направленность функций половых органов и молочной железы на обеспечение продолжительности жизни рода (Жеребцов Н.А., 2000; Племяшов К.В., Соколов В.И., Конопатов Ю.В., 2007). Следовательно, для железы характерны повторные циклы структурного развития, функционального дифференцирования и регресса. Морфогенез 15 органа начинается в эмбриональный период и заключается в последовательном взаимодействии клеток органа между собой, и внешней средой (Hennighausen L., Robinson G.W., Wagner K.U., Liu X., 1997). Наиболее сложно устроены молочные железы плацентарных: они относятся к альвеолярно-трубчатому типу (Гистология, 2002). У кобыл, лосих и жвачных животных молочные железы концентрируются в компактное вымя, расположенное в паховых областях ниже лонного сращения (Георгиевский В.И., Медведев И.К., Булачев В.Н. 1988; Смирнова Е.П., Соловьева Л.П., 2005; Соловьева Л.П., Бородулина А.В., Голубева О.А., 2005). Вымя коровы состоит из правой и левой долей, в каждой из которых различают переднюю и заднюю четверти. Оно имеет две, реже – три пары сосков с одним сосковым каналом в каждом (Тверской Г.Б., Макар З.Н., Мещеряков В.П., 1993; Рыбаков А.В., Ложкин Э.Ф., 2003). Вымя кобылы, овцы, козы состоит из правой и левой долей, у каждой из них по одному соску. У кобылы он имеет два сосковых канала и две цистерны, а у овцы и козы – один канал и одну цистерну (Абрамова Л.Л., Антипов А.А., Сечин В.А., 2000; Соловьева Л.П., Горбунова Н.П., 2004; Щипакин М.В., 2009). У мышей, крыс, крольчих, кошек, норок, собак, свиней и медведиц молочная железа множественная, с одинаковыми чертами закладки и формирования ее структур. Доли их железы (от трех до восьми пар) располагаются по всей вентральной поверхности грудной клетки и живота (Сайко С.Г., 1988, 1990; Гуляева О.Г., Дроздова Л.И., Тулакина Л.Г., 1998, Гуляева О.Г., 2001; Шевченко Б.П., 2003; Грезина Н.М., Зиновьева Н.А., 2005; Абрамова Л.Л., Меерзон Т.И., 2008; Волков С.В., Татарникова Н.А., 2008; Гончарова В.М., 2010; Richert M.M., Schwertfeger K.L., Ryder J.W., 2000; La Ganga T.S., 2001; Warner M.R., 2005). У многоплодных животных зачатки молочной железы закладываются в конце эмбрионального периода в виде первичных отростков, образованных на месте клеток мезенхимы, вытесненных обширными группами эктодермальных клеток (Гистология, 2002; Cunha G.R., Hom Y.K., 1996). В 16 зачатке формируются протоки выводной системы, развиваются внутриорганное сосудистое русло и элементы автономной нервной системы (Абрамова Л.Л., 1999; Crandall D.L., Hausmann G.J., Kral J.G., 1997). Рождается самка уже со сформированной, рудиментарной протоковой системой, которая до лактации заполнена ороговевшими клетками. Затем в результате действия на них лизирующих протеолитических ферментов, или лимфоидных клеток, путь для прохождения секрета открывается (Георгиевский В.Н., 1990). Т.S. Kliinsten (2008) отмечает, что во множественной молочной железе система протоков приобретает сложный вид до половой зрелости самки. В это время объем железы увеличивается только за счет роста жировой и соединительной тканей (Smas C.M., Sul H.S., 1995). У большинства самок развития секреторной ткани не происходит, хотя у норок, крольчих, начинают формироваться разделенные широкими соединительнотканными прослойками молочные дольки (Курбатова Л.В., 1977; Сайко С.Г., 1990). Каналы молочной железы грызунов формируются в латеральном направлении, примыкая к контурам стенок тела (Flook A.C., 2003). Активный рост их концевых частей обеспечивает разрастание протоковой системы, формирование альвеолярной структуры молочной дольки органа (Лаврова Э.Н., 1974; Овчинникова Р.Е., 1985). В период пролиферации секреторного эпителия численность фибробластов в молочной железе преобладает над таковой макрофагов (Dijkstra J., France J., Dhanoa M.S., Maas J.A., et all., 1997). В беременность морфофункциональное становление органа идет интенсивно: недифференцированные клетки, расположенные на концевых участках активно развивающихся протоков, дают начало альвеолам, что приводит к активному разрастанию долек молочной железы (Никитченко В.В., Андрущак Л.А., Хаевская В.И., Хаецкий И.К., 1987; Witty J.P., Wright J.H., Matrisian L.M., 1995). У кроликов это приходится на последнюю треть беременности, что связано с цикличностью морфогенеза железы 17 (Грезина Н.М., Зиновьева Н.А., 2005). C.H. Knight, (2000) оценивает процесс активной дифференцировки эпителиоцитов альвеол как медленно прогрессирующий во время беременности и резко ускоряющийся после родов. Ранее преобладающая в органе соединительная ткань уступает место железистой, причем эта перестройка заканчивается к концу беременности. В это время альвеолы сформированы, их полости растянуты, заполнены секретом (Гуляева О.Г., Дроздова Л.И., Тулакина Л.Г., 1998). С началом лактации заканчивается процесс дифференцировки структур органа. Железистые клетки стабилизируются, начинают активную выработку секрета (Скопичев В.Г., Камардина Т.А., 1988; Lund L.R., Bjorn S.F., Sternlicht M.D., 2000), соседние дольки сближаются за счет увеличения альвеол и истончения соединительнотканных прослоек (Иванов В.Н., Кабишев А.А., Городецкий С.И., 1990). D. Pitelka, B. Taggat, S. Hamamoto (1983) установили, что в лактирующей молочной железе крыс величина и размер альвеол варьируют в зависимости от их местонахождения. Барьерная резистентность в этот функциональный период обеспечивается лимфоцитами, плазмацитами, эозинофильными гранулоцитами рыхлой соединительной ткани, расположенной между железистыми дольками молочной железы (Smith G.H., Chepko G., 2001). В инволюирующей молочной железе альвеолы сжимаются за счет сужения их просвета (Гончарова В.М., 2010). Следовательно, молочные дольки не исчезают, а уменьшаются в размерах и полной инволюции не подвергаются (Никитченко В.В., Андрущак Л.А., Хаевская В.И., Хаецкий И.К., 1987; Furth, P.A. 1999; Wiesen J.F., Werb Z., 2000), место железистой ткани активно занимает жировая ткань (Alexander C.M., Selvarajan S., Mudgett J., Werb Z., 2001). Преобразования железистого эпителия сопровождаются увеличением макрофагов, содержания во тучных клеток, внутридольковой нейтрофилов, строме лимфоцитов, фибробластов, плазмоцитов (Калякина Р.Г., 2006; Weaver V.M., Bissell M.J., 1999; Lund L.R., Bjorn S.F., Sternlicht M.D., 2000). По данным В.Г. Скопичева, Г.Б. Балакиной, 18 О.И. Турбаевой (1983), при дегенерации железистой ткани молочной железы не происходит изменения миоэпителиальных клеток. 1.3. Морфофункциональные особенности молочных желез зайцеобразных Из всех зайцеобразных наиболее подробно морфология молочной железы изучена у крольчих, тогда как у других представителей этого отряда данный вопрос менее или совершенно не изучен (Грезина Н.М., Зиновьева Н.А., 2005). В развитом состоянии молочные железы наблюдаются только у кормящих самок, в остальное время они сильно редуцированы, об их наличии можно судить только по соскам, скрытым в шерсти брюха (Курбатова Л.В., 1977). У крольчихи четыре-пять пар молочных желез (долей), располагающихся вдоль белой линии живота. Обычно их три-пять пар, но иногда бывает шесть и более. Первая пара расположена у основания шеи, вторая – в грудной области, третья – на уровне последнего ребра, а четвертая – в паховой области. Если у самки их пять, то четвертая пара располагается перед паховыми сосками на брюшной стенке (Минина И.С., Майоров А.И., 1988; Кулько К.С., 2004; Karen P., Kermit L.C., 1998). Соски у крольчих короткие и лишь у кормящих самок достигают 0,8 – 1,5 см. длины, цилиндрической формы, с округлой верхушкой, на которой открывается от одного до 14 отверстий сосковых каналов. Молочных синусов (цистерн) соска у кроликов нет, что является особенностью множественной молочной железы. Кожа, покрывающая железу, тонкая, с волосяным покровом, полностью скрывающим сосок, у кормящей самки волосы отклоняются, таким образом, оголяя его. Вокруг каждого соска имеется ободок, образованный слабопигментированной кожей, шириной 1-2 мм., а у кормящих самок до 8-10 мм. (Жеденов В.Н., Бигдан С.С., Лукьянова В.П., 1957). 19 У эмбрионов кроликов сосковая, или млечная линия проходит от зачатка передних конечностей до паховой области и состоит из клеток мальпигиевого слоя, в возрасте 11-12 дней, в результате развития млечной линии, образуются сферические утолщения – млечные бугорки. M.L. Mikkola (2006) отмечает, что у эмбрионов кролика в 12-дневном возрасте отсутствуют закладки молочных желез. Начиная с 13-го дня, за счет миграции эпидермальных клеток, начинает формироваться млечная линия. Зачатки сосков – млечные бугорки – постепенно принимают форму линзы и опускаются в мезенхиму. Позднее зачаток принимает характерную колбообразную форму. На этой стадии начинается дифференциация клеток зачатка железы и образование первичных отростков (Грачев И.И., Попов С.М., Скопичев В.Г., 1976). У крольчат перед рождением и сразу же после него в первичных отростках образуются просветы, расширяющиеся спустя 15 суток после рождения. От образовавшихся таким образом каналов отпочковываются вторичные отростки, дающие начало вторичным каналам (Грачев И.И., Галанцев В.П., 1973). По мнению Л.В. Курбатовой (1972), Н.М. Грезиной, Н.А. Зиновьевой (2005), с момента рождения крольчих и до наступления половой зрелости, существенных изменений молочной железы не происходит. Лишь у половозрелой самки начинается интенсивное ветвление молочных протоков, состоящих из двух слоев эпителиальных клеток. В это время находящиеся на стадии формирования альвеолы не многочисленны (Грачев И.И., Галанцев В.П., 1973). У интактной крольчихи между дольками и внутри их имеются довольно толстые соединительнотканные перегородки, паренхима развита слабо, ее незначительные скопления расположены вокруг сосков (Dragin S., Pivko J., Massanyi P., et all., 2006). После первой течки молочные протоки растут более интенсивно, но количество альвеол увеличивается незначительно (Лаврова Э.Н., 1974; Попов С.М., 1989; Dragin S., Pivko J., Massanyi P., et all., 2006). 20 У интактной крольчихи молочные железы имеют массу десяти грамм, на 28-й день сукрольности – 37 г., а перед родами – 80 г. Таким образом, за первые четыре недели сукрольности молочная железа увеличивается относительно медленно, а за последние три дня перед окролом – интенсивнее в 15 раз (Калугин Ю.А., 2007). Подобная скорость увеличения массы органа наболюдается при ложной беременности крольчихи, вследствие увеличения содержания пролактина в крови (Ginsburg E., Vonderhaar B.K., 1997). В первые дни сукрольности у ранее нерожавших самок идет интенсивный рост протоков и формирование долек, причем в течение первых 12-13 дней беременности рост и развитие желез полностью совпадает с картиной, наблюдающейся при ложной беременности (помимо роста долек, начинают появляться признаки секреторной деятельности клеток эпителия альвеол). Просветы альвеол увеличиваются, совместно с протоками заполняются секретом. Количество соединительной ткани в железе резко уменьшается, причем со второй ее половины внутри долек она почти не обнаруживается, а между ними становится очень тонкой. В результате сильного разрастания желез границы между ними становятся едва различимыми, и они принимают вид двух сплошных железистых пластов, вытянутых вдоль средней линии нижней части туловища. В основном рост молочной железы завершается в период между завершением первой половины и началом последней трети беременности (Курбатова Л.В., 1972, 1977; Грезина Н.М., Зиновьева Н.А., 2005). В лактацию железистые дольки отграничены друг от друга тонкими прослойками соединительной ткани, хорошо сформированы альвеолы, в различной степени наполнены секретом, плотно прилегают друг к другу (Грезина Н.М., Зиновьева Н.А, 2005). С затуханием лактации начинается инволюция железы, в которую, по мнению Н.М. Грезина, Н.А. Зиновьева (2005), Р.Г. Калякина (2006), R.S. Talhouk, M.J. Bissell, Z. Werb (1992), L.W. Hebbard, M. Garlatti, R.G. Oshima, B. Ranscht et all. (2008) резко уменьшается объем железистой 21 ткани, а соединительной – увеличивается. Признаки её появляются и при искусственном прерывании лактации. Например, уже через 15 дней после отъёма детёнышей от матери просветы альвеол сильно уменьшаются, доля соединительной ткани увеличивается, через 25 дней просветы альвеол исчезают, уменьшаются и размеры клеток (Курбатова Л.В., 1972). 1.4. Состав и объем секретируемого молока крольчих Молоко крольчихи густое, богатое питательными веществами (Mather I.H., Keenan T.W., 1998). В первые дни лактации молозиво самок породы советская шиншилла в среднем содержит 26,5% сухого вещества, 11,9% жира, 11,5% белка и 1,5% золы (Минина И.С., Майоров А.И., 1988). P. Chrenek, A.V. Makarevich, J. Pivko et all. (2009) отмечают, что, по сравнению с молозивом, в зрелом молоке бoльше жира, белка, необходимых для жизни аминокислот. В отличие от молока других сельскохозяйственных животных, в молоке крольчих больше лизина, гистидина, треонина, глутаминовой кислоты, но меньше лейцина, аргинина и валина (Burgoyne R., 1998). H.L. McClellan, S.J. Miller, P.E. Hartmann (2008) указывают, что в среднем в молоке крольчих содержится 12,4% белка, а в его сыворотке – 6,1%. T. Malewski (2002) отмечает, что в их молоке относительно невелико содержание молочного сахара (около 2%), а неорганических веществ в среднем 2,5%. Так, концентрация калия у новозеландских кроликов колеблется от 145 до 212 мг/100 г, а натрия от 82 до 160 мг/100 г. В молоке зайца-беляка обнаружено примерно такое же количество сахара и неорганических веществ (Han Z.S., Li Q.W., Zhang Z.Y., et all., 2008). Подобно другим животным состав молока крольчих существенно меняется в зависимости от породы, кратности окрола, стадии лактации и сезона года. Особо значительны колебания содержания жира: от 10 до 20% и белка от 10 до 15%, также сильно колеблется молочность крольчих (Минина И.С., 2002; Кулько К.С., 2004; Седов Ю.Д., 2008). В среднем, в 22 сутки самки выделяют около 200 мл. молока. Наибольшее его количество секретируется за вторую и третью декады лактации (Минина И.С., Майоров А.И., 1988), снижение секреции приходится на 25 - 30-е сутки лактации, когда самки дают 12 - 20 г. молока в сутки (Maertens L., Coudert P., 2006). По данным И.С. Вакуленко (1984), с третьего по десятый дни лактации крольчихи дают в среднем 512 г. молока, с 11-го по 20-й - 1006 г. и с 21 по 28-й - 639 г. (всего 2157 г.). Прибавка к рациону антибиотиков во время лактации увеличивает молочную продукцию самок до 52% и задерживает инволюцию молочной железы. Крольчихи породы советская шиншилла в первую декаду дают в среднем 118 г. молока в сутки, во вторую – 174 г., в третью – 179 г., в четвертую – 110 г., в пятую – 86 г. и в шестую – 63 г. (Седов Ю.В., 2008). Наименьшей молочностью характеризуются крольчихи в возрасте шести месяцев. Наиболее высокой молочностью отличаются породы венский голубой, серый великан и советская шиншилла. Немаловажную роль в уровне секреторной активности молочных желез играет и величина помета (Вакуленко И.С., 1984; Энциклопедия, 2003). Лактация у крольчих, как и у других животных, в значительной степени зависит от характера афферентной импульсации, поскольку для развития лактационной функции существенную роль играет величина и характер раздражения рецепторов соска (Гормональная регуляция, 1987; Maertens L., Coudert P., 2006). 1.5. Нейрогуморальная регуляция маммогенеза, лактогенеза и лактопоэза В различные функциональные периоды нервный аппарат молочной железы крольчих неодинаков и тесно связан со степенью развития железистой ткани (Грезина Н.М., Зиновьева Н.А, 2005; Dragin S., Pivko J., Massanyi P., et all., 2006). Нервы молочной железы – динамичное образование, тесно связанное с развитием и функциональным состоянием паренхимы органа. Их изменения 23 выражаются в увеличении числа волокон, размеров пучков, формировании нервных сплетений при беременности с последующей их резорбцией в инволюцию (Грачев И.И., Алексеев Н.П., 1980; Oftedal O.T., 2002; Lefèvre C.M., Sharp J.A., Nicholas K.R., 2010). Г.Н. Шишкина, (1997); C.G. Prosser, 1996; A.G. Naccarato, P. Viacava, G. Bocci, G.F. et all., (2003); M.S. Smith, (2002); C. Beyer, K.L. Hoffman, O. Gonzalez - Flores, (2007) описывают достаточно простую устроенность нервного аппарата железы интактных крольчих. Он представлен небольшими пучками миелиновых и безмиелиновых волокон, имеющих форму компактных и диффузных кустиков, расположенных между протоками по ходу кровеносных сосудов. Н.М., Грезина, Н.А. Зиновьева (2005) отмечают, что у половозрелой (а особенно у беременной крольчихи) конструкция нервного аппарата в железистой паренхиме усложняется. Одновременно с этим изменяется характер реактивности нервных структур, который, нарастая до определенного уровня, снижается, что совпадает с началом секреторной активности железистых элементов и касается не только осевых цилиндров, но и мякотных оболочек (Толкунов Ю.А., Марков А.Г., 1994; Sternlicht M.D., 2006). Следовательно, в механизме перестройки иннервации молочных желез, наряду с изменением конструкции нервного аппарата, важную роль играет изменение реактивности нервных структур, причем динамика этих изменений носит циклический характер (Oftedal O.T., 2002). В соске крольчих различают три нервных сплетения: основное, крупное широкопетлистое, располагающееся в глубоких слоях соединительной ткани и два в подэпителиальном слое кожи и эпителии сосковых каналов. От этих сплетений отходят нервные волокна к гладким мышцам, кровеносным сосудам, соединительнотканным элементам, сальным железам и волосяным луковицам, окончания которых имеют форму усиков, кустиков различной сложности (Закс М.Г., 1964). Во время беременности в связи с улучшением его кровоснабжения заметно нарастает количество нервных пучков и обильно ветвящихся чувствительных окончаний, связь 24 которых часто обнаруживается с сосудами. Выявлены и инкапсулированные окончания типа колб Краузе (Сотников О.С., 1986; Farr V.C., Prosser C.G., Davis S.R., 2000). С увеличением срока беременности нарастает реактивность нервных волокон и рецепторов, чаще выявляется неравномерность импрегнации и неровность контуров, что так же выражено и в послеродовой период. В части нервных волокон реактивные изменения переходят в дегенеративные (Гормональная регуляция, 1987). O.T. Oftedal (2002) отмечает, что нервные элементы в соске имеют сложную организацию, они многочисленнее и разнообразнее, чем в железистой паренхиме. Это, по утверждению Л.Н. Колодиной, В.В. Корхова (1985), О.С. Сотникова (1986) связано с возникающими при сосании нейрорефлекторными реакциями, содержащими мощный поток импульсации. Структура нервного компонента соска непостоянна, динамика ее зависит от общего строения соска и изменяется в процессе его перестройки. В инволюцию реактивные изменения нервных структур переходят в деструктивные, перестройки изменяется меньшая, нервный чем в аппарат соска, железистой ткани причем степень молочной железы (Eriksson M., Lindh B., Uvnas-Moberg K., Hokfelt T., 1996). Известно, что рост, развитие, активность метаболических процессов молочных желез находятся под контролем целого ряда гормонов, синтезируемых яичником и аденогипофизом. Кроме того, регуляцию маммогенеза осуществляют подобные гормонам половые стероиды и вещества, вырабатываемые плацентой (Баграмян Э.Р., Бурдина Л.М., Волобуев А.И., 1990; Atwood C.S., Ikeda М., Vonderhaar В.К., 1995). В настоящее время, впрочем, как и много лет назад, ученые придерживаются нейрогормональной теории регуляции морфогенеза и функциональной деятельности молочной железы, предложенной И.П. Павловым (Абельсон Ю.О., 1994; Стадников А.А., 1999). Для нормального течения маммогенеза, лактогенеза и лактопоэза необходим комплекс гормонов (Тараненко А.Г., 1987, Гормональная 25 регуляция, 1987; Алиев А.А., Садиков М.М., 1990; Шпаков А.О., 2009; Brisken C., 2002; Stull M.A., Rowzee A.M., Loladze A.V., Wood T.L., 2004; Purna J.A., 2006; Ezzat A.A., Saito H., Sawada T., Yaegashi T., et all., 2010), разделенный на три группы. В первую входят эстрогены, прогестерон, плацентарный лактоген, пролактин и окситоцин, действие которых направлено на формирование молочной железы, регуляцию процесса лактации. Представители второй группы – соматотропный гормон, кортикостероиды, гормоны щитовидной железы, инсулин – «метаболические гормоны», третьей – гормоны, выделяемые самой молочной железой, – пролактин и лептин (Чумаченко П.А., Хмельницкий О.К., Шлыков И.П., 1987; Мнихович М.В., 2009; Politis I., Bloock E., Turner J.D., 1990; Neville M.C., Mc.Fadden T.B., Forsyth I., 2002, Chun E.Y., Belair L., Jolivet G., Djiane J., Jammes H., 2005). Биологическое действие гормонов может осуществляться путем прямого воздействия их молекул или его фрагментов на субклеточные структуры клеток-мишеней (Маринченко Г.В., 1985). Не участвуя на ранних стадиях эмбриогенеза, гормоны начинают включаться в регуляцию маммогенеза позднее, проникая через плацентарный барьер из крови матери в кровь, завершающей утробное развитие самки (Oka T., Yoshima M., Lavandero S., 1991; Forsyth I.A., Wallis M., 2002). Самое активное участие в развитии молочной железы принимает пролактин, вырабатываемый лактотропоцитами гипофиза, рецепторы которого располагаются на базальной мембране эпителиоцитов альвеол молочной железы (Gass S., Harris J., Ormandy C., Brisken C., 2003; Tran-Thanh D., Arneson N.C., Pintilie M., Deliallisi A., Warren K.S., Bane A., Done S.J., 2010). Гипофиз человеческого плода способен секретировать этот гормон уже на 12-й неделе беременности (Chatzicharalampous C., Rizos D., Pliatsika P., Leonardou A., et all., 2010). Закладка альвеол молочной железы контролируется инсулиноподобным ростовым фактором (ИРФ-2), мРНК которого находится в эпителии железы. Под воздействием пролактина 26 начинается синтез ИРФ-2, который и стимулирует альвеологенез (Сергеева Н.И., Дзеранова Л.К., Меских Е.В., Рожкова Н.И. и др., 2005). При достижении самкой половой зрелости, гормональный контроль осуществляется синтезируемыми яичниками эстрогенами и прогестероном, причем эстрогены вызывают рост протоков, а прогестерон – альвеол (Рожнов В.В., Найденко Св.В., Найденко С.В., 2007; Токмаков А.А., Фуками Я., 2009; Anderson E., Clarke R.B., 2004; Сastoria G., Barone M.V., Di Domenico M., Bilancio A. et all., 2008; Sinkevicius K.W., 2008). Однако этот эффект проявляется при обязательном влиянии пролактина, синтез которого усиливается с середины беременности (Берестов В.А., 1987; Халипаев М.Г., 2003, Smith J.J., 1991; Blanco A., Moya L., Flores R., 2002), достигая максимума в лактацию (Тараненко А.Г., 1987; Новиков В.С., Цыган В.Н., 1997; Vonderhaar B.K., 1998). В роли источника стероидных и полипептидных гормонов, идентичных гипофизарным, в период беременности самки выступает плацента (Шманенкова Н.А., 1978). Снижение уровня прогестерона во время родов способствует началу секреции молока (Сеитов М.С., Клёнов В.А., Сорокин В.И., 2000; Рожнов В.В., Найденко Св.В., Найденко С.В., 2007; Proietti C., Salatino M., Rosemblit C., Carnevale R., et all., 2005). В процессе акта сосания стимуляция соска молочной железы способствует повышению уровня пролактина в сыворотке крови. И чем дольше происходит лактация, тем выше его содержание (Оllivier-Bousguet M., 1978; Tennekoon K.H., Arulambalam P.D., Karunanayake E.H., Seneviratne H.R., 2001). Главный эффект действия этого гормона – синтез и секреция основных компонентов молока (Маринченко Г.В., 1989; Нурушев М.Ж., Шевченко Б.П., Сеитов М.С., Гончаров А.Г., Баймишев Х.Б., 2011; Plaut K.I., 1990; Vijay I.K., 1998; Malewski T., Gajewska M., Zebrowska T., Zwierzchowski L., 2002). Известна стимуляция индукции экспрессии гена молочного протеина (β-казеина) пролактином, что вызывает образование белковых компонентов молока (Макарзин Г.Ю., Черепанов Г.Г., Бояршинов 27 И.А., 2003; Horseman N.D., 1999), совместно с соматотропином, тироксином и инсулином активизирует систему ферментов, необходимую для образования лактозы, синтеза казеина, причем, чем выше его концентрация, тем интенсивнее идет этот процесс (Jagoda C.A., 2000). Под его действием увеличивается число эстрогеновых рецепторов в ткани молочной железы, что повышает скорость синтеза ДНК (Wang S., 1995; Xiang Q.L., Chen Y.K., Lin G.P., Tan Z.W., Wang T.H., 2006). Совместно с плацентарным лактогеном стимулируется синтез РНК. Данный факт доказан на изолированных эпителиальных клетках молочной железы (Тараненко А.Г., 1987). После родов резкое падение продукции половых гормонов способствует увеличению секреции пролактина и наступлению лактопоэза (Нурушев М.Ж., Шевченко Б.П., Сеитов М.С., Гончаров А.Г., Баймишев Х.Б., 2011; Politis I., Gorewit R.C., Muller T., Grosse R., 1992; Pedram A., Razandi M., Sainson R.C., Kim J.K., et. all., 2007; Thomas P., 2008). В ответ на действие пролактина лактирующая молочная железа увеличивает синтез белка, жира и определенных ферментов – компонентов молока. Железа, имеющая большее развитие эндоплазматической сети, способна к более активному синтезу последних (Сarrington C.A., Hosick H.L., Forsyth I.A., Dils R.R., 1981; Knight C.H., 2000). В период инволюции выработка пролактина снижается, причем, чем интенсивнее это происходит, тем быстрее она наступает (Литвинова Л.Ф., 1993; Watanabe Y.G., 1985). В экспериментах, проводимых in vivo Г.В. Маринченко (1985), доказано, что связывание пролактина в молочной железе сопровождается его деградацией, что необходимо для устранения прореагировавших гормонов и является этапом механизма их действия. В субклеточных фракциях молочной железы крыс и коз найдено несколько классов протеиназ, способных к гидролизации пролактина. 28 1.6. Биологическая роль, механизм действия и применение селена в животноводстве Селен - биоэлемент, металл VI группы, главной подгруппы периодической системы Д.И. Менделеева, с высокой химической и биологической активностью, способный образовывать соли и органические соединения. Название его произошло от греческого слова «selene» - в честь луны. Микроэлемент открыт в 1817 году шведским химиком M.H. Klaproth и был описан как теллур, но вскоре Я. Берцелиус констатировал, что новый элемент отличается от него уникальными свойствами, в том числе высокой токсичностью. В результате описания свойств селена его открытие принадлежит Берцелиусу (цитировано по Назаренко И.И., Ермакову И.Н., 1971; Ермакову В.В., Ковальскому В.В., 1974). На поверхности Земли селен распространен повсеместно, но неравномерно, что ведет к существованию областей с естественно повышенной и пониженной его концентрацией в окружающей среде (Вапиров В.В., Шубина М.Э., Вапирова Н.В. и др., 2000; Osterin V., Batueva S., Shvalcenson A., 2010). Регионы, в которых отмечается дефицит микроэлемента, называют эндемичными (Oram L.L., Strawn D.G., Morra M.J., Mоller G., 2010; Svechnikova A.A., Golubkina N.A., Meliakina E.I., 2010). Российская Федерация – не исключение. На ее территории практически повсеместно отмечаются зоны, эндемичные по селену (Давлетшина Д.Ф., Фаритов Т.А., 2005), причем последние два десятилетия их площади увеличиваются (Сидоркин В.А., Улизко М.А., Клищенко О.А., 2009). Как ни печально, но Оренбургская область входит в этот неблагополучный список (Боев В.М., 2005; Т.И. Бурцева, Н.А. Голубкина, С.А. Мирошников, А.К. Скальный, и др., 2008). На территории таких зон встречаются специфические заболевания животных и человека, обусловленных недостатком микронутриента в организме, имеющих общее название – гипоселенозы. С 1950-х годов известно о существовании более 20 таковых, 29 характеризующихся нарушением микроциркуляции и увеличением проницаемости капиллярных и клеточных мембран, ведущим к отечности, кровоизлияниям и изменению структуры клеток организма (Кактурский Л.В., Строчкова Л.С., Истомин А.А., 1990; Кудрин А.В., Скальный А.В., 2001; Сидоркин В.А., Улизко М.А., Якунин К.А., Власов С.А., и др., 2008). Селен – жизненно важный микроэлемент с уникальными биологическими функциями и широким спектром действия его соединений. Биохимические функции этого микроэлемента связаны с высокой каталитической способностью его малых доз и заключаются в регуляции скорости окислительно-восстановительных процессов, а также реакций, идущих с участием ферментов, витаминов и гормонов, усилении процессов биологического окисления и фосфорилирования (Печенникова Е.В., Вашкова В.В., Можаев Е.А., 1997; Дженбаев Б.М., Мурсалиев А.М., Ермаков В.В., Аденов Ж.А., 1999; Трифонов Г., Перунова Е., 2001, Пронин В.В., Плешаков Н.Ф., Наумова В.В., Волкова М.В., 2005). Установлено, что благодаря высокой биохимической активности, микроэлемент участвует в обмене жиров и углеводов, синтезе белка, РНК, ДНК в клетках, улучшает адаптацию организма к неблагоприятным для него факторам (Решетник Л.А., Парфенова Е.О., 2000). Он необходим для поддержания функции мембран, образования макроэргических соединений в митохондриях (Касумов С.Н., 1981), есть предположение, что микроэлемент участвует в водно-солевом обмене, перераспределении тканевых жидкостей, в том числе и крови (Шабунин С.В., Беляев В.И., Дубовской И.И. и др., 2007). В связи с тем, что организм животного находится под постоянным воздействием свободных радикалов, являющихся естественными последствиями метаболизма, а так же следствием воздействия иммунной системы на вторгающиеся микроорганизмы, присутствие природных антиоксидантов в живых организмах – главный фактор, позволяющий выжить им в богатой кислородом окружающей среде. У них общее название – «антиоксидантная система», которая разнообразна и включает в себя 30 природные жирорастворимые антиоксиданты (витамины А, Е, каратиноиды, убихиноны), мочевая водорастворимые кислота, антиоксиданты таурин), (аскорбиновая антиоксидантные кислота, ферменты: глутатионпероксидаза, каталаза, супероксиддисмутаза (Папазян Т.Т., Сурай П.Ф., 2007; Grоber U., 2010). Антиоксидантное свойство селена играет в биосфере важную роль (Ермаков В.В., 2004), являясь основополагающим в метаболических функциях его соединений как органической, так и неорганической природы, что достаточно подробно освещено в работах М.И. Смирнова, В.И. Воробьева, А.А. Загрекова 2000, K.P. Surai, P.F. Surai, B.K. Speake 2003, В. Трапезова, Л.И. Трапезовой, 2008, И.В. Киреева, В.А. Оробец, В.С. Скрипкина и др. 2010, A.C. Elia, M. Prearo, N. Pacini, A.J. Dоrr, et all. 2010, H. Vural, H. Demirin, Y. Kara, I. Eren, et all. 2010. Антиокислительный селенсодержащими механизм микроэлемента ферментами осуществляется (глутатионпероксидаза, фосфолипидгидропероксид, глицинредуктаза, формиатдегидрогеназа и др.), в которых он присутствует в форме селеноцистеина (Shchrauser H.W., 2003). Наиболее биологически осуществляющая важный разложение и из них – детоксикацию глутатионпероксидаза, пероксида водорода, гидропероксидов и органических пероксидов, что защищает мембранные структуры, клеточные органеллы от перекисного окисления липидов (Барабой В.А., 2004; Mu C., Ni D., Zhao J., Wang L., et all., 2010; Shargorodsky M., Debby O., Matas Z., Zimlichman R., 2010). Молекула глутатионпероксидазы состоит из 4 субъединиц, в состав каждой из них входит по одному атому селеноцистеина. Поступивший в организм селен в составе органических и неорганических веществ индуцирует и усиливает активность глутатионпероксидазы, а дефицит микроэлемента снижает ее вплоть до нуля (Michiels C., Raes M., Toussaint O., Remacle J., 1994; Leal M.L., De Camargo E.V., Ross D.H., Molento M.B., et all., 2010). Глутатионпероксидаза в комплексе с другими ферментами защищает прямо и опосредованно липиды, белки, НАДФ и НАДФН, клетки от 31 фотосенсибилизированной гибели (Барабой В.А., 2004), обнаружено присутствие фермента во многих органах, в том числе и в молочной железе (Behne D., Weiss-Nowak Ch., Kalcklosch M., 2007). Сильным антиоксидантом является витамин Е, однако использование только его одного для подавления перекисного окисления в большинстве случаев является недостаточным (Dobbelaar P., Bouwstra R.J., Goselink R.M., Jorritsma R., et all., 2010). Л.З. Болиева, А.В. Сергеев, А.Р. Чочиева, (2008); Папазян Т.Т., Фисинин В.И., Сурай П.Ф., (2009); Сидоркин В.А., Улизко М.А., Клищенко О.А., (2009); Bernstein G., Gruber G., (2002); Dobbelaar P., Bouwstra R.J., Goselink R.M., Jorritsma R., et all., (2010) отмечают эффективность совместного его применения с селеном, поскольку они являются необходимыми компонентами обмена веществ у животных. Отмечено, что только в больших дозах (100 мг/кг) витамин Е вызывает эффекты, сходные с таковыми при малых дозах селенита натрия 100мкг/кг. Кроме того, они являются синергистами (Теняев А., 2001; Shargorodsky M., Debby O., Matas Z., Zimlichman R., 2010), поддерживая селен в активной форме или препятствуя выведению из организма, витамин Е уменьшает потребности организма в микроэлементе (Давлетшина Д.Ф., Фаритов Т.А., 2005; Camargo E.V., Dos Anjos Lopes S.T., Costa M.M., Paim F., et all., 2010). При комплексном введении витамина Е и селена кроликам (Mizutani T., Kishimoto E., Yamada K., 2009), крысам (Cemek M., Buyukokuroglu M.E., Hazman O., Konuk M., et all., 2010), отмечено стимулирование антителообразования, увеличение срока сохранности антител, увеличение эндогенной системы антиоксидантной защиты крови и, соответственно, предотвращение перекисного окисления липидов. При отдельном введении витамина Е и селена существенных изменений не наблюдалось. Доказано, что препарат «Селенолин®» способствует поддержанию необходимого уровня витамина Е в организме животного путем его защиты от разрушения радикалами и окислителями (Гуменюк А.П., Воронин С.П., Скорляков В.М., 2009). 32 В работах Е.А. Егоровой, И.В. Гмошинского, С.И. Зорина,, (2006), Т.Т. Папазян, П.Ф. Сурай, (2007), A. Fairbrother, J. Towles, (1990), G. Alfthan, A. Aro, H. Arvilommi, J.K. Hutunnen., (1991), Y.Y. Kim , (1999), Y.A. Belozertsev, S.V. Yuntsev, A.V. Voshchenko, G.A. Dremina, (2000), V. Glaser, E.M. Nazari, Y.M. Muller, L. характеристики Feksa, et all., биологической (2010) приводятся эффективности сравнительные неорганических и органических соединений селена. Первые способностью к аккумулированию не обладают, высок риск интоксикации организма в случае передозировки ими. Кроме того, являясь окислителями, они реагируют с компонентами кормов, ухудшая их питательную ценность. Органические формы селена в значительной мере лишены указанных недостатков: депонируясь, обеспечивают себе пролонгированность действия, характеризуются высокой ретенцией, пониженной токсичностью и, соответственно, более предпочтительны для применения в животноводстве. (Родионова Т.Н., Васильев В.Ю., Ульихина Л.И., 2001; Yan L., Frenkel G.D., 1992). При интегральной оценке биодоступности различных источников селена решающую роль играют не факторы его абсорбции в желудочнокишечном тракте, а показатели ретенции (включения в обменные процессы) и потенциальной токсичности. В этом отношении данные А. Никитенкова, А. Яхина, В. Крохина (2001), И.В. Гмошинского, В.К. Мазо (2006) подтверждают преимущество органической формы селена в качестве источника этого микроэлемента. По данным В.В. Ермакова, В.В. Ковальского (1974) и С.Н. Касумова (1981), наиболее высокой степенью усвоения обладает органический селенометионин. Благодаря большей химической стабильности, эта селенсодержащая аминокислота может использоваться в большей степени по сравнению с селенитом натрия в качестве резерва при недостатке селена в рационе, так как именно эта форма депонируется наиболее полно. Учеными доказана наибольшая эффективность препаратов селена органической формы в повышении: продуктивности бройлеров, 33 (Фисинин В.И.; Папазян Т.Т., 2003), интенсивности роста телят от 1 до 6 месячного возраста, (Алиев А.А., Садиков М.М., 2010), содержания гемоглобина, общего белка, витамина А, иммунного статуса, прироста массы тела супоросных свиноматок. Они положительно влияют на течение беременности животных, обеспечивают биологическую готовность организма к родам, способствуют оптимальной динамике родового акта, увеличивают жизнеспособность, активность роста, развитие и сохранность приплода, профилактируют послеродовые заболевания (Беляев В.И., Балым Ю.П., 2007). Большей эффективностью в усилении свойств других антиоксидантов обладает органическая форма селена (Shen Q., Zhang B., Xu R., Wang Y., et all., 2010). Т.Н. Родионова, В.Ю. Васильев, Л.И. Ульихина (2001) апробировали селеноорганический препарат «ДАФС-25» на кроликах. Согласно их результатам, отмечено повышение содержания общего белка, гемоглобина в крови животных опытной группы, относительно контроля, они отличались большей живой массой. Доказано, что все физиологически необходимые метаболитические формы селена могут быть образованы из селенометионина (Schrauser H.W., 2003). По сравнению с селенитом, он менее токсичен, лучше аккумулируется в органах и тканях животных, эффективнее транспортируется через плаценту, а так же в большом количестве поступает в молозиво и молоко, что очень важно для новорожденных. В молозиве коров, получавших органический селен, обнаруживалось большее содержание селена, нежели селенит натрия (Папазян Т.Т., Голубкина Н.А., 2004; Давлетшина Д.Ф., Фаритов Т.А., 2005). Q. Pang, H. Hou, Ch. Zhang, J. Lu. (1998) в опытах in vitro доказали, что селенит натрия способен увеличивать концентрацию иммуноглобулинов в сыворотке крови, особенно G - и M фракций. В связи с дешевизной и широким рынком сбыта, селенит натрия остается самым предпочтительным, несмотря на токсичность, узкий интервал действия и возможность проявления прооксидантных свойств (Иванов В.Н., 34 Никитина Л.П., Аникина Л.В., 1997; Решетник Л.А., Парфенова Е.О., 2000; Ключникова Н., Ключников М., 2006). Спорным вопросом является способ применения селенсодержащих препаратов. Н.А. Голубкина и В.И. Беляев (2004), В. Саломатин, А. Ряднов, А. Шперов (2008) наиболее оптимальным для использования в животноводстве считают перроральный метод введения препаратов селена. В связи с отсутствием гарантии полного съедания корма животным с содержанием этого микроэлемента, низкой усвояемостью селена в ЖКТ, токсичностью его солей, и необходимостью точной дозировки, Д.Ф. Давлетшина, Т.А. Фаритов (2005), И.Ф. Горлов, В.Н. Храмова (2006), В.И. Беляев, Ю.П. Балым (2007) таковым считают парентеральный метод. М.Н. Панфилова, Т.Н. Родионова, С.П. Воронин (2004) отмечают преимущества парентерального введения препарата «Селенолин®» над перроральным: точная дозировка и большой срок задержки в организме, гарантирующий высокий селеновый статус. Скорость всасывания селена зависит от формы соединения и происходит в следующем порядке: органические соединения селена > селенаты > селениты > селениды. Всасывание обоих форм является активным процессом. Селенометионин переносится против градиента концентрации, а абсорбция селенита происходит путем пассивной диффузии с участием глутатионпероксидазы. Транспорт и депонирование селена осуществляется особыми белками - переносчиками, содержащими селеноцистеин. Селеносодержащие аминокислоты имеют общие механизмы и места всасывания (Camargo E.V., Dos Anjos Lopes S.T., Costa M.M., Paim F., et all., 2010). Всосавшийся, или введенный парентерально селен поступает в кровь, где обнаруживается в альбумине, а также в β- и γ- глобулинах плазмы, причем в последних – в нарастающем количестве и в зависимости от концентрации и формы, в которой находится селен, возможны существенные перераспределения его между фракциями. Если при малых дозах селен связывается с глобулинами в виде устойчивых к диализу комплексов, то при 35 высоких образуются неустойчивые соединения с альбуминами (Трошина Т.А., Вакилов Р.Ф., 2008). До 70% селена, содержащегося в крови, сосредоточено в эритроцитах, причем препараты этого микроэлемента, в частности, селеноорганический препарат «Селенолин®», обладают мембранопротекторным действием. Доказано его препятствие разрушению мембран эритроцитов в осмотически неадекватной среде (Гуменюк А.П., Воронин С.П., Скорляков В.М., 2009). Также он включается в лейкоциты, эритроциты, нейтрофилы, липопротеиды, фибриноген, глобин, повышая их физиологическую активность (Ермаков В.В., Ковальский В.В., 1974). По наличию селена в крови можно судить об обеспеченности им организма. Содержание его в 100 мл цельной крови разных видов животных колеблется от 5 до 18 мкг, или (0,05-0,20) мкг/мл (Георгиевский В.И., Анненков Б.Н., Самохин В.Т., 1979). Нижним пределом нормального содержания селена в крови считают 40 мкг/л (Ермаков В.В., Ковальский В.В., 1974). Учеными отмечено стимулирующее действие препаратов селена на эритро- и лейкопоэз, положительное влияние на белковый спектр крови (Родионова Т.Н., 1992; Джакупов И.Т., Кабаков В.В., 2004; Картекенова Р.В., Галлиев Б.Х., Картекенов К.Ш., 2008). Sandukji A., Al-Sawaf H., Mohamadin A., Alrashidi Y., et all. (2010) отмечают повышение содержания общего кальция в сыворотке крови при комплексном введении селена с витаминами А, E, и C. В экспериментах К.А. Сидоровой, Н.А. Черемениной (2009), при применении кормовой добавки «Сел-Плекс», И.А. Яппарова, Т.Н. Родионовой (2006), применявших препарат «Селебен» на кроликах, И.Ф. Горлова, В.Н. Храмовой, А.И. Сивкова (2006), использовавших препараты «Карсел», «Горсел», «Тыкворсел» парентерально на коровах, Ю.Н. Прыткова, В.А. Кокорева, А.А Кистиной (2005) на молодняке КРС, Т.Н. Родионовой, В.А. Белаш (2000) на курах-несушках получены данные о 36 положительном влиянии селена на обменные процессы в организме животных. Это выражалось в увеличении содержания морфологических (гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов), биохимических (глюкозы, амилазы, белка, кальция) показателей крови, понижении уровня билирубина, АсАТ и АлАТ, что свидетельствовало об уменьшении ксенобиотической нагрузки на печень антиоксидантным и антитоксическим действием селена. Последние отмечают, что, помимо морфологического состава крови, препараты влияют на естественный гуморальный иммунитет животных, а именно, способствуют увеличению в крови количества лизоцима и нейтрофилов. Согласно данным В.А. Кокорева, Ю.Н. Прыткова, А.А. Кистиной (2001), A.C. Elia, M. Prearo, N. Pacini, A.J. Dоrr, et all. (2010), концентрация селена в тканях снижается в следующем порядке: почки > печень > селезенка > поджелудочная железа > семенники > сердечная мышца > кишечник > легкие > головной мозг. У кроликов регистрируется несколько иной порядок: почки > поджелудочная железа > печень > мышцы > миокард > желудок > надпочечники > легкие (Чернуха И.М., Бабурина М.И., Кирилов М.П., Яхин А.Я., 2006; Derejczuk J., Drozdz M., Chwistek M., Ludyga K., 1988). В процессе роста внутренних органов содержание микроэлемента в них варьируется, что, возможно, связано с периодами физиологического и полового развития животных и соответствующим протеканием обмена веществ в их организме (Прытков Ю.Н., Кокорев В.А., Кистина А.А., 2005). Селен хорошо проходит через плаценту, накапливаясь в тканях плода, легко преодолевает тканевые барьеры яичника и молочной железы, обнаруживается в яйцах и молоке (Надаринская М.А., 2005; Прытков Ю.Н., Кокорев В.А., Кистина А.А., 2005; Debski B., Finley D.A., Picanto M.F., 2002). Элиминирование селена из организма происходит через желудочнокишечный тракт, почки, легкие, степень участия каждого органа в выделении селена зависит от характера селенового соединения и способа его введения в организм (Прытков Ю.Н., Кокорев В.А., Кистина А.А., 2005; Kohrle J., Brigelius-Flohe R., Meyer O., Flohe L., 2000). При парентеральном – основная 37 масса (до 60%) выделяется с мочой, пять-семь процентов с калом, 4-10% с выдыхаемым воздухом, в виде диметилселенида. Токсичность и доступность селена зависят от природы соединения. Доказано, что уровень безопасного потребления неорганического селена гораздо ниже уровня органических форм наиболее токсичными являются неорганические формы. (Третьяк Л.Н., Герасимов Е.М., 2007; Волкотруб Л.П., Андронова Т.В., 2001; Bala L.S, Bhoopendra S., Kavita G., Seth S.D., 1999). В условиях высоких концентрации селен обладает прооксидантными свойствами, что угнетает тканевое окислительно-восстановительных дыхание, ферментов. понижает Это активность вызывает глубокие нарушения обменных процессов, приводит к появлению специфических реакций, иногда и к смерти (Стрейн Дж.., 2000; Тутельян В.А., Княжев В.А., Хотимченко С.А., Голубкина Н.А., и др., 2002; Zbikowska H.M., 1997). R.E. Lopez, A.L. Jr. Knable, J.B. Burruss, (2010) отмечают, что явления токсикоза наблюдаются при уровне потребления селена, приблизительно в 10 раз превышающем его выделение. Для животных летальным является содержание селена в корме 10 мг/кг сухого вещества или 10-11 мг/кг живой массы при парентеральном использовании (Дунин И.М., Лебенгарц Я.З., 1997). Последнее время селен все чаще привлекает внимание специалистов в области животноводства, звероводства, птицеводства как необходимый биотический элемент для нормального развития и роста животных. Активно и - самое главное - результативно этот микроэлемент применяется для улучшения сохранности молодняка, продуктивных качеств животных (Родионова Т.Н., 1992; Мишанин Ю.Ф., Мишанин М.Ю., Кочерга А.В., Даниленко Е.С., 2007). В данном направлении эксперименты проводятся на различных животных с применением как органических, так и неорганических форм селена в виде инъекций или кормовых добавок (Лебедев Н.И., 1990; 38 Тутельян В.А., Княжев В.А., Хотимченко С.А., Голубкина Н.А., и др., 2002; Булатов А.П., Суханова С.Ф., 2005). Доказано существование «материнской программы», начинающейся с раннего периода эмбрионального развития, заключающейся в способности селена проникать с током крови в яйцеклетку, внедряться в развивающийся эмбрион, причем способность к этому имеет только его органическая форма. Это и является ключевым фактором, определяющим не только эмбриональное развитие, выход на свет, а также жизнеспособность и темпы роста молодняка (Surai P., 2002). Эффект, касающийся усиления роста молодого организма, повышения его сохранности в целом при применении селенсодержащих препаратов, проявляется на всех видах животных, включая мышей, крыс, кроликов, поросят, ягнят, телят. Результат зависит от вида животного, его возраста и от условий содержания и кормления (Голубкина Н.А., Манкуева С.Д., Широков Д.В., 2003; Гуменюк А.П., Воронин С.П., Скорляков В.М., 2009). Применяя препарат «Селенолин®», установлено: снижение летальности и заболеваемости новорожденных телят, их гипотрофности (Гуменюк А.П., Воронин С.П., Скорляков В.М., 2009), увеличение количества, сохранности поросят, их живой массы к отъему (Дубравная Г.А., Абакин С.С., 2008; Дубравная Г.А., 2009). И.А. Яппаров, Т.Н. Родионова (2006), И.М.Чернуха, М.И. Бабурина, М.П. Кирилов, А.Я. Яхин (2006) изучали и внедрили в кролиководстве препараты «Сел-Плекс» и «Селебен». Ими отмечено улучшение и активизирование обменных процессов у кроликов, повышение прироста результат, молодняка, увеличение выражающийся в его сохранности. увеличении Положительный зажеребляемости, выхода полноценного молодняка, повышении рентабельности коневодства при применении органической формы селена - «Сел-Плекс» был получен А.В. Дворянцевым, Н.В. Дубровиной (2009). Добавление «ДАФС-25» в рационы супоросных и подсосных свиноматок привело к высоким приростам живой массы за эти периоды, рождению поросят большей живой массы, 39 более интенсивному их росту, увеличению сохранности молодняка, что актуально в свиноводстве, (Никитенков А., Яхин А., Крохина В., 2001; Васильев А.М., Прытков Ю.Н., 2007;). И.Т. Джакупов, В.В. Кабаков (2004), применяя препарат «Е-селен» на крупном рогатом скоте, установили улучшение общей сопротивляемости организма первотелок, сокращение частоты послеродовых осложнений, повышение сохранности молодняка, молочной продуктивности. Парентеральное введение животным селеноорганических препаратов «Селенолин®», «Селенопиран», «ДАФС-25» положительно повлияло на уровень среднесуточного удоя и качественные показатели молока коров и коз. Отмечалось увеличение содержания в нем белка, казеина, жира, лактозы, СОМО, улучшение его состава по незаменимым аминокислотам, микроэлементам. Плотность молока у лактирующих коров и коз опытных групп была несколько выше, чем в контроле при практически равной кислотности (Надаринская М.А., 2005; Горлов И.Ф., Храмова В.Н., Сивков А.И., 2006; Горлов И.Ф., Варакин А.Т., Варакина Е.А., 2006; Гуменюк А.П., Воронин С.П., Скорляков В.М.., 2009; Чугай Б.Л., Краснослободцева А.С., Крысин М.П., Фролов А.И., 2009; Кистина А.А., Прытков Ю.Н., Гурьянов А.М., 2010). 1.7. Заключение Изучение и анализ информационного поля по данной тематике позволил представить обзор научной литературы, имеющей место на сегодняшний день, о морфологии множественной молочной железы (Сайко С.Г., 1990; Гуляева О.Г., Дроздова Л.И., Тулакина Л.Г., 1998, Гуляева О.Г., 2001; Шевченко Б.П., 2003; Абрамова Л.Л., Меерзон Т.И., 2008; Волков С.В., Татарникова Н.А., 2008; Гончарова В.М., 2010; Richert M.M., Schwertfeger K.L., Ryder J.W., 2000; La Ganga T.S., 2001; Warner M.R., 2005), в том числе крольчих (Курбатова Л.В., 1972, 1977; Попов С.М., 1989; Кулько К.С., 2004; Грезина Н.М., Зиновьева Н.А., 2005; Mikkola M.L., 40 Millar S.E., 2006; Dragin S., Pivko J., Massanyi P., 2006). Имеются данные о гормональной регуляции маммогенеза, лактогенеза и лактопоэза (Тараненко А.Г., 1987; Гормональная регуляция, 1987; Шпаков А.О., 2009; Brisken C., 2002; Stull M.A., Rowzee A.M., Loladze A.V., Wood T.L., 2004; Purna J.A., 2006; Ezzat A.A., Saito H., Sawada T., Yaegashi T., et all., 2010), Однако весьма ограничены сведения о морфофизиологии молочной железы крольчих и ее регуляции в периоды репродуктивного цикла самки (Оllivier-Bousguet M., 1978). Имеются работы о влиянии селена на молочную продуктивность коров, коз, качество их молока и сохранность молодняка (Надаринская М.А., 2005; Горлов И.Ф., Храмова В.Н., Сивков А.И., 2006; Горлов И.Ф., Варакин А.Т., Варакина Е.А., 2006; Гуменюк А.П., Воронин С.П., Скорляков В.М.., 2009; Чугай Б.Л., Краснослободцева А.С., Крысин М.П., Фролов А.И., 2009; Кистина А.А., Прытков Ю.Н., Гурьянов А.М., 2010). Тем не менее, не освещена степень воздействия неорганической и органической форм селена, получаемых парентерально, на аналогичные показатели у крольчих в разные периоды репродуктивного цикла. Все это и повлияло на выбор темы научно-исследовательской работы. 41 2. МАТЕРИАЛ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЯ Работа выполнена в период с 2008 по 2011 годы на базе кролиководческого комплекса КФХ «Раздолье» Тюльганского района Оренбургской области, а также в условиях кафедры морфологии, физиологии и патологии ФГБОУ ВПО «Оренбургский государственный аграрный университет». Материал получали в КФХ «Раздолье» при убое самок кроликов с хозяйственной целью (акты прилагаются). Гистологические пробы брали поствитально, не позднее одного часа и способом биопсии (Абрамова Л.Л., 2000). Перед убоем у животных в одно и то же время измеряли температуру, пульс, дыхание, из краевой ушной вены брали пробы крови для ее биохимического исследования, определения в сыворотке крови концентрации селена, половых гормонов (пролактина, прогестерона, фолликулостимулирующего, лютеинизирующего и эстрадиола), иммуноглобулина G. Объектом исследований служили молочные железы клинически здоровых крольчих породы советская шиншилла в возрасте от трех до девяти месяцев разных функциональных состояний: эструс полового созревания, эструс физиологической зрелости, 15-ти суток сукрольности, одного, девяти, 18, 27, 36, 45, 54 часов, трех и 15-ти суток после родов, 15-ти суток лактации, вторых суток после отъема и постлактационной инволюции. Материал в каждой группе брали не менее чем от 3-х голов. Всего в опыте использовано 111 животных (табл. 1). Таблица 1. Характеристика исследованных животных Возраст, мес. 3 6 6,5 7 7,5 8 9 ИТОГО: Физиологическое состояние Эструс (полового созревания) Эструс (физиологической зрелости) Беременность Роды Лактация Отъем Инволюция Количество животных 9 30 9 9 36 9 9 111 42 КФХ «Раздолье» находится в благополучной зоне по инфекционным и инвазионным заболеваниям. В течение всего экспериментального периода животные содержались в одинаковых условиях и обслуживались одним кролиководом. При формировании групп аналогов (в соответствии с периодизацией Rommers J.M., Kemp B., Meijerhof R., 1999) животных отбирали по возрасту, живой массе, телосложению, упитанности, клиническому (ТПД), физиологическому состоянию, численности молочных холмов и размерам сосков. Возраст крольчих определяли по данным регистрационных записей журналов учета зооветслужбы хозяйства, по скелету и зубам (Шевченко Б.П., Дегтярев В.В., Абрамова Л.Л., Маховых М.Ю., 2010). Кормление животных осуществляли по нормам ВИЖа, состав рациона представлен в табл. 2. Таблица 2. Схема рациона крольчих в КФХ «Раздолье» (по Бондаренко С.П., 2003) Периоды Показатели Лактация, дни интактность сукрольность 1-10 11-20 21-30 Зерно ячменя цельное, г Отруби пшеничные, г Жмых подсолнечный, г Дрожжи кормовые, г Рыбная мука, г Сено (луговое), г Корнеплоды, г Поваренная соль, г Трикальцийфосфат, г Зерно ячменя цельное, г Отруби пшеничные, г Жмых подсолнечный, г Дрожжи кормовые, г Рыбная мука, г Трава подвяленная (луговая), г Поваренная соль, г Для проведения Зимний период 80,0 85,0 15,0 20,0 55,0 65,0 90,0 190,0 260,0 1,0 1,5 1,5 2,5 Летний период 68,0 80,0 13,0 13,0 38,0 238,0 1,0 327,0 1,5 экспериментальной 105,0 30,0 80,0 132,5 400,0 2,0 3,0 120,0 50,0 100,0 20,0 177,5 530,0 2,0 3,0 135,0 70,0 120,0 20,0 20,0 227,5 670,0 2,5 3,0 89,0 26,0 68,0 - 102,0 42,5 85,0 17,0 493,0 2,0 654,5 2,0 115,0 59,5 102,0 17,0 17,0 833,0 2,5 части по влиянию селенсодержащих препаратов на морфофизиологию молочной железы крольчих использовали препараты «Е-селен» и «Селенолин®». 43 Первый – воднодисперсный комплекс витамина Е и селенита натрия. Второй препарат представляет собой инъекционную форму стерильного 2% масляного раствора диацетофенонилселенида (ДАФС-25) в растительном масле, разработан в ЗАО «Биоамид» (г. Саратов). В отличие от первого препарата, селен в нем присутствует в форме органического соединения. В связи с тем, что в наставлениях по применению препаратов «Еселен» и «Селенолин®» и в доступной научной литературе отсутствует информация о дозах, не оказывающих токсического воздействия на организм испытуемых животных, нами был проведен опыт по отработке оптимальных доз. Для этого по принципу пар-аналогов было сформировано семь групп шестимесячных половозрелых интактных крольчих, по три головы в каждой (n=21). Первая группа служила контролем. Крольчихам второй группы (опытной) однократно внутримышечно, во внутреннюю сторону бедра, вводили препараты: «Е-селен» в дозах 0,04мл/кг, 0,06мл/кг и 0,08мл/кг. Крольчихам третьей группы (опытной) однократно внутримышечно вводили препарат «Селенолин®» в дозах 0,008 мл/кг, 0,018 мл/кг и 0,028 мл/кг массы тела. Перед введением препаратов, согласно наставлениям по применению, содержимое флаконов подогревали до 38-40°С, «Е-селен» разводили водой для инъекций, а «Селенолин®» – стерильным маслом. В дальнейшем на всех этапах эксперимента нами использовалась именно эта технология парентерального введения селенсодержащих препаратов. Через десять дней производили убой животных и взятие гистопроб органов (сердца, печени, почки и молочной железы), для выявления степени токсичности доз препаратов. В результате эксперимента нами установлено, что оптимальными дозами для организма кроликов являются соответственно 0,04 мл/кг для «Еселена» и 0,008 мл/кг массы тела животного – для «Селенолина®». Согласно наставлениям по применению препаратов, в одном см3 «Е-селена» содержится 0,5мг селена в виде селенита натрия, а «Селенолин®» 44 представляет собой 2% раствор диацетофенонилселенида в растительном масле, в одном см3 препарата содержится 5 мг активного селена. При перерасчете на активный селен, получаемый животным с рекомендуемыми дозами препаратов на единицу массы тела (кг), выяснили, что с дозой препарата «Е-селен» животное получает 0,02 мг, а с дозой препарата «Селенолин®» – 0,04 мг активного селена. Далее эксперимент проводили поэтапно. На первом этапе изучали влияние препаратов селена на маммогенез у интактных крольчих в период полового созревания (3 мес.) и в период физиологической зрелости (6 мес.). Для этого были сформированы три группы трехмесячных и столько же шестимесячных крольчих – аналогов, по три головы в каждой (n=18). Первые две группы обоих возрастов служили контролем, крольчихам четырех опытных групп в начале течки (фаза эструс полового цикла), согласно технологии, вводили препараты «Е-селен» и «Селенолин®» в приработанных дозах. На втором этапе изучали влияние селенсодержащих препаратов на морфофизиологию и адаптационную пластичность молочной железы в периоды лактогенеза и лактопоэза, а так же молочную продуктивность и состав молозива крольчих. Для этого формировали 3 группы животных – аналогов в возрасте шести месяцев, по 24 головы в каждой (n=72). Первая группа служила контролем. Крольчихам двух опытных групп вначале течки (фаза эструс полового цикла), согласно технологии, вводили препараты «Е-селен» и «Селенолин®» в оптимальных дозах, после чего через 6-7 дней в раннее утреннее время проводили покрытие крольчих в соответствии с графиком эксперимента. Готовность самок к случке определяли по поведению (Плотников В.Г., 2001) и состоянию наружных половых органов (Нигматуллин Р.М., 2007). Согласно рекомендациям В.Г. Плотникова (2001), Н.И. Тинаева (2007), во избежание прохолоста через неделю проводили контрольную подсадку к самцу, а на 12-ый, 15-ый день после случки осторожно прощупывали 45 крольчих, поместив их на ровной поверхности головой к себе, держа правой рукой за холку, левой пальпировали живот по ходу рогов матки. В том случае, если эмбрионы прощупывались, самку считали сукрольной, холостых случали повторно. Изучение влияния препаратов селена на морфофизиологию молочной железы крольчих в периоды беременности (n=9) и родов (n=9) проведено на втором этапе эксперимента. На третьем этапе, исследования по влиянию препаратов «Е-селен» и «Селенолин®» на морфофизиологию молочной железы крольчих в период лактации проводились в двух направлениях: изучение хронодинамики проницаемости структур лактогематического барьера по часам (один, девять, 18, 27, 45, 54 часа) после окрола (n=9) и влияния препаратов «Е-селен» и «Селенолин®» на объем выделяемого секрета и состав молока (n=27). На четвертом и пятом этапах эксперимента изучали морфофизиологию молочной железы крольчих на фоне влияния препаратов селена в период отъема крольчат от самки (n=9) и постлактационной инволюции (n=9). Экспериментальная часть включала в себя комплексное исследование, которое проводили согласно схеме опыта, представленной на рис. 2. Анатомическое исследование начинали с определения массы тела и молочной железы крольчих, диаметра и длины сосков. При изучение отделов выводной системы железы использовали макро-микроскопический метод селективной окраски железистой ткани метиленовой синью по Романовскому - Гимза. Материалом для гистологического исследования служили гистологические пробы и биоптаты молочной железы (1см3) от половозрелых самок всех исследуемых групп. Гистологический материал фиксировали в 10% растворе нейтрального формалина и жидкости Карнуа, проводили через батарею спиртов возрастающей крепости и заливали в парафин. Срезы толщиной 5-6 мкм окрашивали гематоксилином Майера-эозином, углеводсодержащие биополимеры выявляли по Хочкису, РНК ядрышек и 46 цитоплазмы выявляли по методу Браше. Световую микроскопию осуществляли при помощи микроскопа Micros MSD 500 (Австрия), оснащенного цифровой камерой. При проведении гистохимических реакций нами проведена следующая методика: на предметные стекла наклеивали серию парафин – целлоидиновых срезов образцов ткани железы, взятых от животных разных функциональных состояний и, одномоментно, в соответствии с методикой, стёкла погружали в растворы. Цитологическое исследование проб железы (0,025 см3 - для изготовления ультратонких срезов) начинали с фиксации в охлажденном 2,5% растворе глютарового альдегида на фосфатном буфере (рН 7,4). После общепринятой подготовки и дегидратации, материал заключали в смесь эпон-аралдит и на ультратоме LKB V (Швеция) изготавливали срезы толщиной 0,07-0,08 мкм, которые окрашивали 1% раствором толуидинового синего, приготовленного на 2,5% безводной соде. Электронную микроскопию производили на микроскопе JEM – 7A (Япония). Морфометрическое исследование цито- и гистоструктур молочной железы, количественную информацию об объемах и других параметрах клеточных структур, их ядер, наружных диаметрах сосудов ГМЦР, а также о соотношении площадей эпителиальных и соединительнотканных компонентов получали при использовании винтового окуляр-микрометра МОВ-1-15х1500 (ГОСТ 15150-69) и лицензионной программы «ТестМорфо 4.0». В отдельном образце ткани измерение каждого показателя осуществляли не менее чем в 16 полях зрения каждого объекта. Физиологическое исследование молочной продуктивности самок в первые трое суток после окрола проводили путем взвешивания крольчат до и после сосания. Для этого потомство содержали изолированно, матерей подпускали один раз в сутки, в определенное время. Чтобы избежать погрешности в учете, взвешивание производили сразу же после кормления. Поскольку численность новорожденных крольчат в помете самок 47 контрольной и опытных групп была различной, учитывали данные, полученные от восьми крольчат. МОЛОЧНАЯ ЖЕЛЕЗА КРОЛЬЧИХ ПОРОДЫ СОВЕТСКАЯ ШИНШИЛЛА Анатомические и гистологические исследования Определение массы тела, массы молочной железы, морфометрия отделов выводной системы органа (111 животных). Тривиальные методы окрашивания, импрегнация сосудов ГМЦР молочной железы, селективное выявление углеводсодержащих биополимеров, РНК, ДНК в микроструктурах органа (531 проба); Субмикроскопические исследования биоптатов органа Трансмиссионная электронная микроскопия, микрометрия основных клеточных элементов, органотипических структур молочной железы (42 пробы); Физиологические и иммунологические исследования Молочной продуктивности самок (9 животных), анализ сывороток крови (39 проб), молозива→молока крольчих (18 проб) на содержание IgG; Морфологические и биохимические исследования Крови крольчих (63 пробы), ее сыворотки на содержание гормонов: Прл, ПРг, ФСГ, ЛГ, Е-2 (84 проб). Исследования биохимического состава молозива→молока (18 проб); Химико – аналитические исследования Сыворотки крови (63 пробы) и молозива→молока на содержание селена (18 проб); МОРФОМЕТРИЯ │ СТАТИСТИЧЕСКАЯ ОБРАБОТКА МАТЕРИАЛА │ РЕАЛИЗАЦИЯ │ В УЧЕБНЫЙ ПРОЦЕСС │ В ПРОМЫШЛЕННОЕ КРОЛИКОВОДСТВО Рис. 2. Схема опыта 48 Иммунологическое исследование концентрации иммуноглобулина G (IgG) в пробах сыворотки крови и молозива→молока проводили методом твердофазного иммуноферментного анализа с использованием набора реагентов – «Иммуноскрин - G - ИФА-БЕСТ» на спектрофотометре Multiscan Labsystems (Финляндия). Сыворотку молозива→молока готовили методом осаждения казеина 5% уксусной кислотой по методике В.С. Антоновой, С.А. Соловьева, М.А. Сечиной (2007). Биохимическое исследование крови проводили по следующим показателям и методикам: количество гемоглобина, эритроцитов, лейкоцитов определялось гематологическим анализатором Medoniс СА 620. Прибор использует для подсчета кондуктометрический клеток метод, а и для измерения измерения их размеров гемоглобина – колориметрический метод (Кондрахин И.П., 1985). Общий белок сыворотки крови исследовали по биуретовой реакции, АСТ и АЛТ – кинетическим спектрофотометрическим методом, кальций – унифицированным калориметрическим методом, фосфор - UV методом без депротеинизации (Камышников В.С., 2000; Тиц Н.У., 2003; Клиническое руководство, 2004). Коэффициент де Ритиса вычисляли исходя из соотношения: АСТ/АЛТ (Медведева М.А., 2008). Взятие проб молозива→молока производили путем ручного доения крольчих. Массовую долю белка в молозиве и молоке определяли рефрактометром ИРФ-464, содержание жира, сухого обезжиренного молочного остатка (СОМО), определение плотности проводили с помощью анализатора молока «Лактан 1-4 мини». Концентрацию половых гормонов (пролактина, прогестерона, фолликулостимулирующего, лютеинизирующего, эстрадиола) в сыворотке крови осуществляли методом твердофазного иммуноферментного анализа на спектрофотометре «Multiscan Labsystems» (Финляндия), с использованием стандартных наборов реагентов: «DRG-diagnostics» (США), «Гонадотропин 49 ИФА-ЛГ», «Гонадотропин ИФА-ФСГ», «ИФА-пролактин - 01», «Стероид ИФА-прогестерон-01» (Санкт-Петербург). Химико-аналитическое исследование количественного содержания селена в сыворотке крови, молозива→молока осуществляли усовершенствованным нами флуориметрическим методом (Anipko V.V., Maryakhina V.S., Abramova L.L., 2011), на спектрофлуориметре SOLAR CM-2203. Сыворотку крови получали путем отделения клеточных элементов крови на центрифуге EU Imtex CM-50 при 8000 об/мин в течение 10 минут. Взятие биоптатов органа. С целью изучения временнóй динамики проницаемости лактогематического барьера органа в первые сутки после окрола с помощью гисто- и цитологического исследований, от девяти крольчих всех трех групп производили взятие биоптатов молочной железы. Для соблюдения чистоты эксперимента мы разработали и предложили схему (рис. 3) и методику взятия биопсий молочной железы у крольчих. Рис. 3. Схема и временные интервалы взятия биопсийного материала Проведя анестезию животного внутримышечным введением 2,5% раствора аминозина, из расчета - 0,1 мл на килограмм массы тела животного, фиксировали крольчиху на столе Виноградова. Подготовив поле по Пирогову, по периферии молочного холма скальпелем рассекали кожный покров и фасции. Увеличивая ранорасширителем площадь разреза, от железы 50 отсекали биоптат объемом 1см3 для гистологического исследования, от которого отбирали пробу 0,025 см3 для цитологического исследования. После взятия биоптата рану присыпали трициллином, края раны сшивали прерывисто-узловатым швом, затем обрабатывали поверхность вокруг раны 5% спиртовым раствором йода, снятие швов производили на девятые сутки после операции. Учитывая, специфичность иммунологических исследований, забор проб крови и биоптатов железы производили через равные промежутки времени (9 часов). Статистическая обработка данных результатов исследований заключалась в построении вариационных рядов, определении средних величин показателей вариации и проверке нормальности распределений полученных данных при использовании программы «Microsoft Excel» (Базаров М.К., 2008). Для оценки различий двух групп показателей применяли критерий морфометрических достоверности показателей Стъюдента. гистоструктур Взаимовлияние выражали через коэффициенты парной корреляции, построение регрессионных уравнений (Автандилов Г.Г., 1990, 2002). Приготовление гистопрепаратов, исследование гистоструктуры молочной железы, морфометрию ее структур, статистическую обработку полученных данных и их корреляционный анализ проводили в условиях кафедры анатомии, «Оренбургский электронную патанатомии ГАУ». и Получение микроскопию гистологии ультратонких осуществляли на ФГБОУ срезов базе ВПО и их лаборатории электронной микроскопии ФГУ «Всероссийский центр глазной и пластической хирургии Росздрава» (г. Уфа). Исследование концентрации половых гормонов в сыворотке крови крольчих проводили на базе проблемной лаборатории по изучению иммунитета проводили «Оренбургской в ГМА». гематологической механизмов естественного Биохимический лаборатории анализ ВНИИМС крови РАСХН. 51 Исследование концентрации селена в сыворотке крови проводили в институте «Микро- и нанотехнологий» при содействии заведующего лабораторией В.С. Маряхиной, профессора С.Н. Летуты. Биохимический анализ молозива→молока – в условиях лаборатории кафедры технологии переработки молока и мяса Оренбургского ГУ при содействии профессора О.В. Богатовой, доцента Н.Г. Догаревой. Концентрации иммуноглобулинов определяли на базе лаборатории института клеточного и внеклеточного симбиоза Уральского отделения РАН. Названия анатомических, гистологических и эмбриологических структур и образований приведены в соответствии с Международной (Парижской) анатомической и гистологической номенклатурой (N.A.V., N.H., N.E.V., 1994), уточненной на международных конгрессах, а русские эквиваленты – по 4-ой редакции Международной ветеринарной анатомической номенклатуры (Зеленевский Н.В., 2003). 52 3. Результаты собственных исследований 3.1. Гистология паренхиматозных органов крольчих при воздействии разных доз препаратов «Е-селен» и «Селенолин®» Исследования по степени воздействия на ткани печени, почек и миокарда сердца крольчих препаратов «Е-селен» в дозах 0,04мл/кг, 0,06мл/кг и 0,08мл/кг и «Селенолин®» в дозах 0,008 мл/кг, 0,018 мл/кг и 0,028 мл/кг массы тела животного позволили получить следующие результаты: при влиянии препарата «Е-селен» в дозе 0,08 мл/кг массы тела животного (рис. 4 А) структура печени в целом сохранена, балочная структура сглажена. Синусоидные капилляры местами сужены, гепатоциты имеют выраженные границы, в цитоплазме регистрируется присутствие липохромных гранул. А Б В Рис. 4. Микроморфология паренхиматозных органов при влиянии препарата «Е-селен» в дозе 0,08 мл/кг массы тела животного. Гематоксилин и эозин. Об.40.Ок.15. А - печень; Б - почка; В - сердце В междольковых соединительнотканных трабекулах органа, в области триад, воспалительный процесс сопровождается мелкоклеточной инфильтрацией лимфоцитами. В почке (Рис. 4 Б) подоциты капсулы Шумлянского увеличены в объёме, просветы канальцев умеренно расширены, эпителиоциты проксимального отдела высокопризматические, местами выражена их дистрофия. В миокарде на большой площади микрососуды расширены (Рис. 4 В), в кардиомиоцитах нарушена структура саркомера и обмен миоглобина, ядра кардиомиоцитов слабо базофильные. Все это характеризует проявление признаков токсического эффекта. На фоне воздействия препарата «Селенолин®» в дозе 0,028 мл/кг массы тела животного в печени (Рис. 5 А) большая часть балочной структуры долек 53 сохранена, синусоидные микрососудов капилляры выражено расширены. набухшие, Эндотелий, имеют место стенки небольшие периваскулярные отёки. Стенки центральной вены разрыхлены. В балках высокий процент двуядерных гепатоцитов, в цитоплазме которых визуализируется большое содержание липохромных гранул, включений. Вокруг желчных протоков, в области триад, значительная мелкоклеточная инфильтрация. В почке (Рис. 5 Б) наблюдается атрофия части клубочков, перерождение и деградация подоцитов. Канальцы нефрона расширены, отмечается белковая дистрофия эпителия. А Б В Б Рис. 5. Микроморфология паренхиматозных органов при влиянии препарата «Селенолин®», в дозе 0,028 мл/кг массы тела животного. Гематоксилин и эозин. Об.40.Ок.15.А - печень; Б - почка; В - сердце В миокарде (Рис. 5 В) кардиомиоциты с признаками деградации, светлые, что может свидетельствовать о нарушении обмена миоглобина, с нарушением структуры саркомера. Ядра части кардиомиоцитов гипертрофированы, слабо базофильные, набухшие. Все это в комплексе характеризует проявление высокотоксического эффекта. При влиянии препарата «Е- селен» в дозе 0,06 мл/кг массы тела животного структуры долек печени (Рис. 6 А) в состоянии относительной нормы. В цитоплазме гепатоцитов большое количество мелкодисперсных включений. В почке (Рис. 6 Б) увеличен объём полостей капсулы Шаумлянского и канала нефрона, микрососуды расширены. В миокарде кардиомиоцитов. (Рис. Пучки 6 В) отмечали кардиомиоцитов деградацию разрыхленные, малого числа микрососуды эндомизия расширены. Саркомеры в большинстве кардиомиоцитов хорошо 54 выражены. Данные признаки являются показателями слабовыраженного токсического эффекта этой дозы препарата. А А Б В В Рис. 6. Микроморфология паренхиматозных органов при влиянии препарата «Е-селен» в дозе 0,06 мл/кг массы тела животного. Гематоксилин и эозин. Об.40.Ок.15. А - печень; Б - почка; В - сердце На фоне воздействия «Селенолина®» в дозе 0,018 мл/кг массы тела животного в печени (Рис. 7 А) наблюдается изменение балочной структуры, с уменьшением численности функционирующих синусоидных капилляров. В цитоплазме гепатоцитов визуализировали присутствие липохромных гранул. В местах триад наблюдали выраженную крупноклеточную инфильтрацию (нейтрофилами). Вокруг желчных протоков, артериол, венул большое количество макрофагов, макроцитов. А Б В Рис. 7. Микроморфология паренхиматозных органов при влиянии препарата «Селенолин®», в дозе 0,018 мл/кг массы тела животного. Гематоксилин и эозин. Об.40.Ок.15.А - печень; Б - почка; В - сердце В почечных нефронах (Рис. 7 Б) капсула тонкая, хорошо выражена, полость увеличена, сосуды расширены. Канальцы нефрона расширены и разрыхлены, эпителиоциты набухшие, границы между ними плохо выражены, в их цитоплазме визуализируется мелкая зернистость. Капилляры периартериальной сети расширены, что связано с нарушением процесса реабсорбции компонентов мочи. 55 В миокарде (Рис. 7 В) небольшие пучки кардиомиоцитов истончены, ядра в отдельных клетках подвержены деградации и лизису, изменена структура саркомера. У большей части кардиомиоцитов структура не нарушена. При применении данной дозы препарата в органах выражено проявление токсического эффекта. При влиянии «Е-селена» в дозе 0,04 мл/кг массы тела животного печень (Рис. 8 А) имеет нормальную балочную структуру, синусоидные капилляры в пределах нормы, реакции со стороны эндотелия и стенок микрососудов отсутствуют, ядра гепатоцитов слабо базофильные. Редко встречающиеся двуядерные гепатоциты с малым объемом цитоплазмы. Почечные канальцы не расширены (Рис. 8 Б), в состоянии нормы, структура эпителиоцитов сохранена. В стенке сердца (Рис. 8 В) кардиомиоциты расположены плотными пучками, их ядра умеренно базофильные. Структура саркомера хорошо выражена, гемокапилляры эндомизия не изменены. В целом все органы в состоянии физиологической нормы. А Б В Рис. 8. Микроморфология паренхиматозных органов при влиянии препарата «Е-селен» в дозе 0,04 мл/кг массы тела животного. Гематоксилин и эозин. Об.40.Ок.15. А - печень; Б - почка; В - сердце На фоне воздействия препарата «Селенолин®» в дозе 0,008 мл/кг массы тела животного балочная структура в печени (Рис. 9 А) сохранена, гепатоциты вариабельных размеров, их ядра крупные, округлые. Клетки с выраженной базофилией ядер встречаются редко, цитоплазма гепатоцитов имеет сетчатую структуру. Синусоидные капилляры в дольках расширены. В почке (Рис. 9 Б) ядра эпителиоцитов всех отделов нефронов без видимых изменений. В микрососудах эритроцитарные стазы. В стенке сердца (Рис. 9 В) сосуды эндомизия расширены в пределах нормы, структура 56 эндотелиоцитов в них сохранена. Кардиомиоциты имеют хорошо выраженную поперечную исчерченность, объемы ядер вариабельны, от выражено до слабобазофильных. Исследованные органы в состоянии относительной нормы. А Б В Рис 9. Микроморфология паренхиматозных органов при влиянии препарата «Селенолин®», в дозе 0,008 мл/кг массы тела животного. Гематоксилин и эозин. Об.40.Ок.15.А - печень; Б - почка; В - сердце Таким образом, исходя из анализа результатов исследования по приработке доз, следует, что вводимая парентерально избыточная доза неорганического селена, входящая в состав препарата «Е-селен», оказывает токсичное воздействие на ткани печени, почек, миокарда крольчих. Воздействие высокой дозы органического селена в составе препарата «Селенолин®» оказывает высокотоксичный эффект на гистофизиологию органов. Для кроликов оптимальными (не токсичными) дозами препаратов «Еселен» являются 0,04 мл/кг, а «Селенолин®» – 0,008 мл/кг массы тела животного. 57 3.2. Морфогенез отделов выводной системы молочной железы крольчих в норме и при влиянии препаратов селена У крольчихи четыре - пять пар молочных желез (долей), располагающихся вдоль белой линии живота. Каждая доля отдельной молочной железы, в свою очередь, состоит из расположенных радиально вокруг соска шести - восьми долек, открывающихся в сосок молочными ходами (от одного до 14). В сосках молочных желез крольчих отсутствуют молочные синусы (цистерны), вследствие чего выделение секрета идет напрямую. Молочная железа крольчихи в возрасте трех месяцев, в период половой зрелости имела вид небольших бугорков, расположенных рядами по грудобрюшной стенке с системой слаборазветвленных протоков. Таблица 3. Абсолютные показатели структур молочной железы крольчих в возрасте трех месяцев (эструс половой зрелости) Группа животных Структуры масса железы, г длина соска, см диаметр соска, см 4,83±0,138 Контроль 0,32±0,005 0,22±0,003 I опытная 8,65±0,235* 0,32±0,004 0,22±0,004 II опытная 12,39±0,279* 0,32±0,004 0,22±0,003 Примечание: * - Р≤0,05 У крольчих масса молочной железы на 79% (I опытная) и 156% (II опытная) была больше, чем в контрольной группе (табл. 3). Несмотря на то, что к моменту наступления половой зрелости самки в сыворотке крови появлялись половые гормоны и начинался интенсивный маммогенез, изменений параметров выводной системы у крольчих всех групп не отмечалось. К шести зрелость. молочной увеличение К месяцам этому железы, у крольчихи наступает времени регистрировалось активное формирование паренхиматозно-стромального физиологическая увеличение системы массы протоков, отношения, что характеризовало готовность органа к выкармливанию потомства. 58 Масса железы крольчих при применении препарата «Е-селен» на 70% превосходила массу органа у животных контрольной группы и на 145% при влиянии препарата «Селенолин ®» (табл. 4). Таблица 4. Абсолютные показатели структур молочной железы крольчих в возрасте шести месяцев (физиологическая зрелость) Группа животных Структуры масса железы, г длина соска, см диаметр соска, см 22,09±0,775 Контроль 0,41±0,003 0,32±0,004 I опытная 37,48±0,385** 0,42±0,003 0,32±0,004 II опытная 54,147±0,774** 0,43±0,002 0,32±0,004 Примечание: ** - Р≤0,001 По сравнению с самками трех месяцев онтогенеза, у животных шести месяцев в контрольной группе масса органа увеличилась в 4,6 раз, в опытных группах – соответственно, в 4,3 («Е-селен») и 4,4 раза («Селенолин ®»). Увеличение массы органа шло параллельно с развитием выводной системы. Длина соска у крольчих первой и второй опытных групп, по сравнению с контрольной, увеличилась, соответственно, на 2,4% и 4,5%, что больше соответствующих показателей у крольчих в возрасте трех месяцев в среднем в 1,3 раза. Значимых изменений диаметра соска у крольчих всех групп зарегистрировано не было. В период сукрольности (15 суток) происходило активное разрастание паренхимы молочной железы за счет прорастания в соединительную и жировую ткань концевых отделов протоков и их ветвления, вследствие чего они приобретали вид виноградных гроздей, хорошо визуализировались дольки. Таблица 5. Абсолютные показатели структур молочной железы крольчих в период беременности Группа животных Структуры масса железы, г длина соска, см диаметр соска, см 40,64±1,094 Контроль 0,41±0,003 0,32±0,004 I опытная 50,41±1,446** 0,42±0,003 0,32±0,004 II опытная 67,08±1,064** 0,43±0,002 0,32±0,004 Примечание: ** - Р≤0,001 В период беременности (табл. 5), у крольчих контрольной группы, масса органа в 1,8 раза превосходила массу молочной железы 59 шестимесячных самок. При влиянии препаратов селена масса железы беременных крольчих была выше, чем у шестимесячных самок, а также в 1,3 раза – в первой опытной группе и в 1,2 раза – во второй опытной группе. При сравнении массы органа сукрольных крольчих всех групп была видна существенная разница. Так, у крольчих, которым парентерально вводили препарат «Е-селен», масса молочной железы на 24% была больше, по сравнению с контролем, а на фоне действия «Селенолина ®», масса органа на 65% превышала таковой показатель самок контрольной группы (табл. 4). Сравнение показателей длины и диаметра соска железы у крольчих опытных и контрольной групп не дали достоверной разницы, равно как и при сравнении их с таковыми у интактных самок. К моменту родов на фоне повышения содержания пролактина в крови крольчих, доли молочной железы существенно увеличивались в объеме, просветы сформированных альвеол были заполнены секретом. Увеличение массы органа происходило при интенсивном развитии железистого компонента и замещении им жировой ткани. Таблица 6. Абсолютные показатели структур молочной железы крольчих в период родов Группа животных Структуры масса железы, г длина соска, см диаметр соска, см Контроль 55,02±2,091 0,61±0,004 0,42±0,005 I опытная 62,98±1,115** 0,65±0,004** 0,44±0,003** II опытная 82,7±1,282** 0,65±0,004** 0,44±0,004** Примечание: ** - Р≤0,001 У крольчих при применении препаратов «Е-селен» и «Селенолин ®» масса железы превосходила контрольный показатель, соответственно, на 14,5% и на 50% (табл. 6). По сравнению с сукрольными, у самок контрольной группы в период родов масса органа увеличивалась в 1,4 раза, а в опытных группах, соответственно, в 1,25 и 1,2 раза. 60 В этот период репродуктивного цикла интенсивный рост органа сопровождался активизацией развития выводной системы. У крольчих опытных групп, по сравнению с контрольной, длина соска увеличивалась в 1,1 раза. Сравнив этот показатель у крольчих опытных групп, было видно, что в роды они в 1,5 раза выше, чем в беременность, а в контроле превышение было незначительным. На период лактации приходился пик развития молочной железы. В это время орган внешне имел вид непрерывных тяжей (слившихся холмов) длиной 40 см и шириной 2 - 4 см., серо-белого цвета, расположенных по обе стороны брюха. Масса железы крольчих при применении препарата «Е-селен» на 31% превосходила массу органа у животных контрольной группы и на 66% при влиянии препарата «Селенолин ®» (табл. 7). Таблица 7. Абсолютные показатели структур молочной железы крольчих в период лактации Группа животных Структуры масса железы, г длина соска, см диаметр соска, см 75,97±2,137 Контроль 0,91±0,01 0,57±0,006 I опытная 99,63±1,885** 1,01±0,03** 0,58±0,005** II опытная 126,29±1,283** 1,04±0,03** 0,58±0,007** Примечание: ** - Р≤0,001 При сравнении длины и диаметра соска железы у крольчих опытных и контрольной групп была установлена достоверность показателей. У самок первой опытной группы – в 1,1 и 1,02 раза, а у второй – в 1,14 и 1,02 раза, соответственно. Эти величины превышали таковые у самок контрольной группы. В лактацию у крольчих контрольной группы масса органа на 38% превосходила массу молочной железы самок в период родов. При влиянии препаратов селена масса железы лактирующих крольчих была выше, чем у сукрольных самок, на 58,2% в первой опытной группе и на 53% во второй опытной группе. За первую половину лактации длина соска у самок контрольной группы увеличилась в 1,5 раза, при применении препарата «Е-селен» – в 1,55 раза, а «Селенолин ®» – 1,6 раза. 61 К отъему крольчат у самки снижалась секреторная активность молочной железы, большая часть альвеол спадалась, происходило увеличение доли стромального компонента органа, что являлось признаком завершения лактации. Таблица 8. Абсолютные показатели структур молочной железы крольчих в период отъема Группа животных Структуры масса железы, г длина соска, см диаметр соска, см 64,31±1,360 Контроль 0,91±0,01 0,57±0,006 I опытная 83,26±1,919** 1,01±0,003** 0,58±0,005** II опытная 93,42±1,679** 1,04±0,03* 0,58±0,007** Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 В этот период у самок всех трех групп было зарегистрировано уменьшение массы молочной железы (табл. 8). По сравнению с лактирующими крольчихами, в отбивку масса органа у животных контрольной группы уменьшалась на 15,35%, первой опытной группы – на 16,43%, второй – на 26,03%. Значения параметров выводной системы во всех группах были незначительными. В период постлактационной инволюции в молочной железе происходило существенное замещение объема, ранее занимаемого железистой тканью, жировыми дольками, в связи с чем уменьшались размеры и масса органа. При сравнении массы органа крольчих всех групп в период постлактационной инволюции была видна существенная разница (табл. 9). Таблица 9. Абсолютные показатели структур молочной железы крольчих в период инволюции Группа животных Структуры масса железы, г длина соска, см диаметр соска, см 47,317±0,822 Контроль 0,70±0,006 0,49±0,007 I опытная 63,73±1,618** 0,80±0,005** 0,51±0,004** II опытная 75,62±1,489** 0,82±0,008** 0,52±0,004** Примечание: ** - Р≤0,001 Так, у крольчих, которым парентерально вводили препарат «Еселен», масса молочной железы на 77% была больше, по сравнению с 62 контролем, а на фоне действия «Селенолина ®», масса органа на 68% превышала таковой показатель самок контрольной группы. Длина соска у крольчих первой опытной группы в 1,14, второй – в 1,17 раза превышала данный показатель у самок контрольной группы, диаметр соска у животных опытных групп, соответственно, на 4,1% и 6,1% превышал таковой у самок контрольной группы. При сопоставлении показателей массы инволюирующей молочной железы с массой железы в период отъема отмечали ее уменьшение на 26,4% в контрольной группе, в первой опытной - на 23,45%, во второй – на 19%. Длина соска у крольчих всех трех групп уменьшилась, соответственно, на 23%, 21% и 21,15%. диаметр соска на 14%, 12,1% и 10%. Проведя парный корреляционный анализ, выявили, что у крольчих контрольной группы в возрасте трех месяцев (фаза эструс полового цикла) максимально положительная взаимосвязь массы железы с диаметрами протоков, артерий, диаметром и длиной соска, концентрацией Прл, ФСГ, ЛГ и ПРг и Е-2 (r=+1) – как регуляторов процесса маммогенеза со стороны яичника (прилож., табл. 8). У самок первой опытной группы динамика концентрации ПРг, ФСГ, ЛГ и селена (r=+1) влияла на процесс маммогенеза, рост протоков и венозных сосудов, а уровень взаимосвязи концентрации Прл со структурами органа (r=-1) свидетельствовал о его роли в стабилизации системы (прилож., табл. 9). Во второй опытной группе отмечалась положительная взаимосвязь массы молочной железы с диаметром артерии (r=+0,86) и концентрацией половых гормонов (Прл, ПРг, ФСГ, Е-2), отрицательная – с концентрацией селена и ЛГ (r=-1) (прилож., табл. 10). К шести месяцам (в фазу эструс) у интактных крольчих контрольной группы снижался уровень взаимосвязи массы органа с диаметром протока (r=+0,85) при высокой положительной ее корреляции с диаметром артерии (r=+1) и вены (r=+0,85), концентрацией Прл, ФСГ, 63 (r=+0,99). Выявлена отрицательная взаимосвязь массы органа с диаметром соска (r=-0,94) и с концентрацией Е-2 (r=-0,83). На рост диаметра соска влияла концентрация эстрогена – Е-2 (r=+0,97), а на динамику длины соска – концентрация ПРг, ЛГ (r=-0,95) (прилож., табл. 11). У самок первой опытной группы масса молочной железы, диаметр внутридолькового протока, а также концентрации половых гормонов (Прл, ФСГ, ПРг, ЛГ) проявляли высокую положительную взаимосвязь с уровнем содержания селена в сыворотке крови (r=+1) (прилож., табл. 12). Во второй опытной группе отмечалась специфическая положительная взаимосвязь массы молочной железы с длиной соска, с концентрацией ФСГ (r=+0,87), а с концентрацией Прл, ПРг, ЛГ, Е-2 и уровнем содержания селена в сыворотке ее связь была отрицательной (r=-1) (прилож., табл. 13). Отсутствие в возрасте шести месяцев значимых взаимосвязей между структурами молочной железы и сосудами свидетельствовало о достижении органом полной морфофункциональной зрелости. У беременных крольчих контрольной группы отмечалась положительная взаимосвязь массы молочной железы, диаметра и длины соска с концентрациями Прл, ФСГ, ЛГ (r=+1), которые осуществляли гормональный контроль лактогенеза, в чем гормоны яичника Е-2 и ПРг не принимали участия (r=-1) (прилож., табл. 14). У крольчих первой опытной группы была зарегистрирована отрицательная взаимосвязь массы молочной железы с диаметром артерии и концентрацией селена в сыворотке крови (r=-1), а положительная – с концентрацией Прл, ПРг, ФСГ, ЛГ и Е-2 (r=+1), подтверждающая непосредственный контроль именно этими гормонами процесса лактогенеза на фоне механизма действия неорганического селена. Положительная взаимосвязь диаметра артерий с концентрацией селена в сыворотке крови крольчих (r=+0,97) объясняла инициацию 64 артериального притока и ангиогенез в формирующихся железистых дольках органа (прилож., табл. 15). Во второй опытной группе между массой органа, диаметром протока, диаметром артерии и длиной соска, а также концентрациями гормонов Прл, ПРг, ФСГ, ЛГ регистрировалась положительная взаимосвязь (r=+1).Уровень селена и Е-2 в сыворотке крови проявлял со структурами органа и другими гормонами отрицательную взаимосвязь (r=-1) (прилож., табл. 16). В период родов у крольчих контрольной группы регистрировалась положительная взаимосвязь массы молочной железы с диаметрами соска, протока, диаметром артерии и концентрациями Прл, ФСГ, ЛГ, ПРг (яичника и плаценты) (r=+1) (прилож., табл. 17). У крольчих первой опытной группы масса молочной железы, диаметр протока и концентрации гормонов Прл, ФСГ, ПРг и селена проявляли положительную взаимосвязь (r=+1), в то время как корреляция концентрации ЛГ и Е-2 с диаметром, длиной соска и диаметром вены была отрицательной (r=-1) (прилож., табл. 18). Во второй опытной группе между массой органа, диаметром, длиной соска, диаметром артерии, концентрацией Прл, ФСГ, ПРг, ЛГ, Е2 и селена регистрировалась положительная взаимосвязь (r=+1),а их обратная коррелятивная зависимость с диаметром вены (r=-0,98). Переход органа от лактогенеза к лактопоэзу здесь контролировался полным гормональным комплексом, активированным селеном (прилож., табл. 19). В середине лактации в молочной железе крольчихи контрольной группы регистрировалась положительная взаимосвязь массы органа с диаметром вены и концентрацией Прл (r=+1). Однако между диаметром, длиной соска, диаметром протока, артерии и концентрацией гормонов ФСГ, ПРг, ЛГ, Е-2 взаимосвязь была отрицательной (r=-1) (прилож., табл. 20). 65 У крольчих первой опытной группы отмечалась положительная взаимосвязь массы молочной железы с диаметром протоков и концентрацией ФСГ, ПРг (r=+0,99). Взаимосвязь диаметра, длины соска, диаметра артерий, вен и протока с концентрацией Прл, ЛГ, Е-2, селена отражала развитие лактопоэза в молочной железе (r=-1) (прилож., табл. 21). В молочной железе крольчих второй опытной группы, концентрация Прл как ведущего гормона и уровень селена, регулировали положительную взаимосвязь массы органа с диаметром, длиной соска, диаметром артерии (r=+1) и отрицательно коррелируют с ФСГ, ПРг, ЛГ, Е-2, диаметром протока (r=-1) (прилож., табл. 22). В период отъема у самок контрольной группы масса молочной железы положительно коррелировала с длиной, диаметром соска, диаметрами артерий и вен, концентрацией ФСГ (r=+1) (прилож., табл. 23). В первой опытной группе регистрировалась положительная взаимосвязь массы железы с концентрацией ФСГ, ПРг и селена в сыворотке крови (r=+1) и отрицательная корреляция с длиной, диаметром соска, диаметром артерий и концентрациями Прл, ЛГ и Е-2 (r=+1) (прилож., табл. 24). В молочной железе крольчих второй опытной группы отмечали положительную взаимосвязь массы органа с концентрацией Прл, диаметром протока (r=+1) и отрицательную корреляцию с диаметром соска, диаметром артерии, с концентрацией ФСГ, ПРг, ЛГ, Е-2 и селена (r=-1) в сыворотке крови (прилож., табл. 25). В период инволюции в молочной железе крольчих контрольной группы регистрировали положительную взаимосвязь массы органа с диаметрами артерий и вен, концентрацией Прл и ФСГ (r=+0,99) и отрицательную – с длиной, диаметром соска и концентрацией ПРг, ЛГ, Е-2 (r=-1) (прилож., табл. 26). 66 В первой опытной группе картина взаимосвязей показателей менялась: масса органа проявляла положительную связь с диаметром артерий, концентрацией Прл, ФСГ, ПРг, ЛГ, Е-2 (r=+1) и отрицательную – с длиной соска (r=-1) (прилож., табл. 27). В молочной железе крольчих второй опытной группы отмечали положительную взаимосвязь массы железы с концентрацией Прл, ФСГ, ПРг, и Е-2, с диаметрами вен и артерий (r=+1) и отрицательную – с концентрацией ЛГ (r=-1) (прилож., табл. 28). Таким образом, в три месяца маммогенеза, у крольчих контрольной группы начало гормональной регуляции инициировало увеличение массы молочной железы, что происходило сдержанно (число отрицательных связей - 56). В шесть месяцев, несмотря на установившуюся цикличность влияния гормонов, также отмечали сдерживание роста массы органа и протоков всех уровней (число отрицательных связей – 72). У самок первой опытной группы в три месяца механизм действия селена в комплексе с витамином Е способствовал повышению выработки Прл, сдерживанию артериального притока в органе. В шесть месяцев при увеличении выработки Прл, ФСГ, ЛГ и ПРг инициировался рост протоков, интенсивной каналикуляции эпителия и росту паренхимы органа (число отрицательных связей в три месяца – 39, в шесть – 0). Воздействие препарата «Е-селен», в сравнении с контрольной группой, десинхронизировало маммогенез и способствовало более раннему формированию структур выводной системы и достижению органом полной морфофункциональной зрелости. У крольчих второй опытной группы в возрасте трех месяцев механизм воздействия органического селена стимулировал продукцию ЛГ и Е-2, при этом снижалась выработка ФСГ и ПРг. Интенсифицировалось артериальное кровоснабжение, масса молочной железы изменялась незначительно. В шесть месяцев отмечали увеличение продукции ФСГ, ПРг, ЛГ, Е-2, снижение выработки Прл. Происходил интенсивный рост массы железы, длины соска 67 (число отрицательных связей в три месяца – 24, в шесть месяцев – 36). В сравнении с контрольной и первой опытной группами, воздействие препарата «Селенолин®» в три месяца оказывало еще более выраженное десинхронизирующее действие на маммогенез и способствовало его завершению к шести месяцам. В период беременности у крольчих контрольной группы на фоне высокой взаимосвязи плацентарного ПРг с Прл и умеренной выработки ФСГ и ЛГ отмечался интенсивный рост длины соска (число отрицательных связей - 40). На фоне влияния «Е-селена», выработка ФСГ увеличивалась, усиливался артериальный приток в молочной железе. В этот период на маммогенез совместно влияли плацентарный ПРг с Прл (число отрицательных связей – 32). При влиянии препарата «Селенолин®» активизации артериального притока инициировала существенный рост диаметра протоков (число отрицательных связей – 54). В роды у самок контрольной группы отмечали интенсификацию артериального притока, увеличение диаметров протоков и соска, регуляция чего осуществлялась гуморальной и нервной системами (число отрицательных связей – 48). В первой опытной группе увеличение массы органа и диаметра протоков происходило за счет интенсивного секретообразования, а уменьшение – при опорожнении системы, регулируемых, главным образом, автономной нервной системой. Механизм действия неорганического селена, в комплексе с витамином Е обусловливал низкое содержание ЛГ и Е-2 в сыворотке крови самки, а влияние «Селенолина®» инициировало повышенное содержание Прл в сыворотке крови, на фоне чего отмечали увеличение массы органа. В середине лактации в контрольной группе, ритмичная выработка и выведение компонентов секрета, регулируемые высокой концентрацией Прл, влияли на динамику массы железы крольчих и интенсивность притока крови. 68 Увеличение численности отрицательных связей (n=47) характеризовало появление первых признаков инволюции железы. В первой опытной группе уравновешивание артериального притока и оттока стабилизировало уровень секреции молока. Несмотря на достаточно высокое содержание Прл и высокий уровень ФСГ и ПРг в сыворотке крови, создавало тенденцию к снижению секреции компонентов молока и началу инволюторных процессов в молочной железе. В сравнении с контролем, на фоне «Е-селена» обнаруживалась тенденция к увеличению длительности процесса лактации (число отрицательных связей – 64). У крольчих второй опытной группы действие органического селена обусловило вялотекущие дегенеративные изменения в паренхиматозном компоненте железы на фоне интенсивного артериального притока, увеличения уровня концентрации Прл в сыворотке крови, и подтверждало тенденцию к увеличению продолжительности процесса лактации (число отрицательных связей – 72). В период отъема крольчат и последующей инволюции между структурами молочной железы крольчих контрольной группы значительное уменьшение концентрации ПРг, ЛГ в сыворотке крови обусловило нахождение органа в фазе относительного покоя (число отрицательных связей – 72). Поскольку у самок первой опытной группы длительность процесса лактации увеличивалась, снижение активности притока крови, а затем – умеренность вели к замедлению темпов роста жировой ткани и снижению объема железистой паренхимы в пользу стромального компонента (число отрицательных связей: в отбивку – 48, в инволюцию – 28). У крольчих второй опытной группы к отбивке с последующей инволюцией появление положительной взаимосвязи массы органа с диаметром миоцита протока, диаметром самого протока и концентрацией Прл свидетельствовало о большей степени воздействия органического селена на продолжительность секреторного цикла лактоцитов, чем при применении 69 препарата «Е-селен» (число отрицательных связей в отбивку – 64, в инволюцию – 50). В сравнении продолжительность с контролем, процесса препараты лактации, селена увеличивали особенно при использовании «Селенолина®», они проявляли стимулирующее воздействие на процессы маммогенеза, лактогенеза и лактопоэза. Несмотря на то, что «Е-селен» уступал по эффективности «Селенолину®», его воздействие на гистофизиологию железы было равномерным и щадящим. 70 3.3. Особенности гистофизиологии железы на фоне применения препаратов селена в периоды половой и физиологической зрелости самки В три месяца у крольчих наступает половая зрелость, первая течка – сигнал готовности половой системы к спариванию. Но в это время организм самки еще не является сформированным, готовым к вынашиванию, рождению и выкармливанию потомства. Следовательно, лишь в шесть месяцев, с наступлением периода физиологической зрелости, самка становится способной к реализации материнского инстинкта. 3.3.1. Молочная железа крольчих в возрасте трех месяцев В половую представлена зрелость жировой большая тканью, с часть молочной множеством железы интенсивно ветвящихся кровеносных сосудов и нервов. В этот период, показатель концентрации селена в сыворотке крови самок первой опытной группы в три, второй – в четыре раза был выше показателя контрольной группы (рис. 10). 0,06 0,05 0,04 0,03 0,02 0,01 0 Контроль I опытная II опытная Рис. 10. Концентрация селена в сыворотке крови крольчих в возрасте трех месяцев (мкг/мл) 71 Гормональный фон самок (табл. 10) был следующий: в первой и второй опытных группах показатель концентрации Прл, соответственно, на 4,8% и 10%, ФСГ на 6,1% и 7,8%, ПРг на 65% и 68% был ниже, чем в контрольной. Таблица 10. Концентрация половых гормонов в сыворотке крови крольчих в возрасте трех месяцев Группы Прл, ФСГ, ЛГ, ПРг, Е-2, животных ммЕ/л ммЕ/мл ммЕ/мл Нмоль/л Пг/мл Контрольная 76,0±2,08 1,32±0,03 1,13±0,02 6,25±0,07 17,66±1,76 I опытная 72,33±2,60** 1,24±0,01** 1,22±0,02** 2,18±0,03** 20,33±2,03* II опытная 68,33±2,40* 1,22±0,03* 1,19±0,02** 2,0±0,04* 26,33±1,45** Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 Концентрация ЛГ в сыворотке крови крольчих первой и второй опытных групп, соответственно, на 8% и 5,3%, а Е-2 – на 15% и 49% была выше показателей контрольной группы. На фоне применения препаратов селена количество эритроцитов и лейкоцитов в крови животных первой опытной группы, соответственно, на 13% и 4,8%, второй – на 19% и 7% превышало таковое у крольчих контрольной группы (прилож., табл. 1). Содержание гемоглобина и общего белка в первой опытной группе, соответственно, на 7,4% и 13%, во второй – на 11,6% и 14,3% было выше, чем в контрольной группе. В крови самок первой опытной группы, содержание белков альбуминовой и глобулиновой фракции (α, β, γ), соответственно, на 9,2%, 4%, 2,5% и 6%, второй – на 12%, 8,6%, 6% и 3,7% было выше, чем у крольчих контрольной группы. Содержание кальция и фосфора в сыворотке крови животных первой опытной группы, соответственно, на 4,3% и 18,3%, второй – на 15% и 22% было больше контрольных показателей. Количественное содержание ферментов АСТ и АЛТ в сыворотке крови крольчих первой опытной группы, соответственно, на 8,7% и 3,4% было выше, чем у контрольных, а во второй – ниже на 2,2% и 1,7, по сравнению с показателями контрольной группы. Коэффициент Ритиса у 72 самок всех групп был в переделах нормы, что подтверждает отсутствие токсичного эффекта препаратов. В данный период репродуктивного цикла, в молочной железе крольчих контрольной группы только начинается формирование зачатков молочных ходов и протоков (рис. 11). А Б В 1 5 1 4 2 1 2 6 3 7 Рис. 11. Гистоструктура молочной железы крольчих контрольной группы в возрасте трех месяцев. Гематоксилин и эозин. Об.10 Ок.15 (А); Об.40.Ок.15 (Б); Об. 100.Ок.15 (В). 1 – протоки; 2 – стромальный компонент; 3 – пролиферирующая часть протока; 4 – коллагеновые волокна; 5 – нервное окончание; 6 – сосуды ГМЦР; 7 - эпителиоцит В местах образования железистых долек визуализируется достаточное количество нервных окончаний, пучков, выполняющих важные функции в маммогенезе. В строме формы, с органа обнаруживаются перстневидными ядрами, адипоциты большое округло й количество коллагеновых волокон. А Б В 4 3 1 1 2 5 Рис. 12. Гистоструктура молочной железы крольчих первой опытной группы, в возрасте трех месяцев. Гематоксилин и эозин. Об.10 Ок.15 (А); Об.40.Ок.15 (Б); Об. 100.Ок.15 (В). 1 – протоки; 2 – стромальный компонент; 3 – скопления адипоцитов; 4 – коллагеновые волокна; 5 – нерв В органе самок опытных групп (рис. 12, 13) отмечалас ь пролиферация эпителия и каналикуляция в жирову ю ткань 73 терминальных отделов молочных ходов и протоко в, причем интенсивность этого процесса выше во второй оп ытной группе. Ядра клеток концевых отделов протоков с выраженной базофилией, что свидетельствовало об активном ядерном синтезе. Сильных разветвлений эпителиальных тяжей не наблюдалось. А Б В 4 2 5 3 1 Рис. 13. Гистоструктура молочной железы крольчих второй опытной группы в возрасте трех месяцев. Гематоксилин и эозин. Об.10 Ок.15 (А); Об.40.Ок.15 (Б); Об. 100.Ок.15 (В). 1 – протоки; 2 – соединительнотканная трабекула; 3 – скопления адипоцитов; 4 – сосуд ГМЦР; 5 – нервы На фоне влияния препаратов селена в органе отмечается большое количество питающих его кровеносных сосудов. В жировых дольках органа крольчих контрольной группы визуализируются цитоплазме высоко которых дифференцированные множество адипоциты, вакуолей, в заполненны х триглицеридами (рис. 14 А). А Б 1 1 2 В 3 2 3 1 2 Рис. 14. Электронограмма ультратонкого среза молочной железы крольчихи в возрасте трех месяцев: (А) Контрольная группа,. Ув.х 10000; (Б) Первая опытная группа, Ув.х 10000; (В) Вторая опытная группа, Ув.х 10000; 1 – цитоплазма адипоцита, 2 – вакуоли с триглициридами, 3 – ядро адипоцита жировой дольки В первой опытной группе на фоне влияния «Е-селена» вокруг зон пролиферации терминалий малодифференцированных протоков, в эп ителиоцитов соединительнотканных трабекулах, выражен ангиогенез (рис. 14 Б). 74 Во второй опытной группе при влиянии «Селенолина ® » в стенках протоков видны дифференцированные миоциты, активное формирование в соединительнотканных трабек улах сосудов обменного звена гемомикроциркуляторного русла (рис. 14 В). Показатели вариабельности (Cv %) результатов колебались в пределах от 0,05 до 1,7%: в контрольной группе (минимальны для диаметра нервного пучка, максимальны для диаметра железистой дольки), от 0,07 до 0,22 в первой (минимальны для диаметра железистой дольки, максимальны для диаметров адипоцита и внутридолькового протока) и от 0,06 до 0,27 во второй опытных (минимальны для диаметра междолькового протока, максимальны для диаметра адипоцита) группах (табл. 11). Таблица 11. Показатели гистоструктур молочной железы крольчих в возрасте трех месяцев (мкм) Показатели Группы животных Контрольная 25,6±2,52 артериолы 35,58±2,43 собирательной венулы 11,45±0,30 нервного пучка 232,52±12,15 железистой дольки 69,45±2,47 адипоцита 16,88±1,68 междолькового протока 6,05±0,50 внутридолькового протока 5,14±0,49 эпителиоцитов протоков Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 I опытная II опытная 27,21±1,76* 41,08±2,70** 12,45±0,70** 241,81±7,73* 82,07±6,35 18,40±0,61* 6,5±0,65* 30,13±1,64** 50,24±2,95* 13,35±0,75** 247,22±7,1** 84,32±8,67 19,08±0,48** 6,7±0,48** 5,87±0,30* 6,22±0,32* Коэффициент точности (Cs%) колебался от 2,5 до 10,28%, что свидетельствует о низкой точности величин. Проведя парный корреляционный анализ между структурами молочной железы и гормонами, у крольчих контрольной группы выявлена максимальная положительная взаимосвязь (r=+0,99) массы молочной железы с Е-2 и ПРг, и артериальными сосудами, при максимально отрицательной взаимосвязи с Прл (r=-0,99), объемом адипоцита (-0,79) и диаметром протока (-0,76). 75 Обнаружена максимальная положительная (r=+0,86) взаимосвязь фонового селена с объемом адипоцита и диаметром протока, а отрицательная – с массой молочной железы и диаметром артерии (r=0,98) (прилож., табл. 29). В первой опытной группе (прилож. табл. 9) зарегистрирована максимально положительная связь между массой молочной железы и ЛГ (r=+0,99) и максимально отрицательная взаимосвязь Прл с селеном (r=-0,99) (прилож., табл. 30). Во второй опытной группе (прилож. табл. 10) максимальная положительная связь зарегистрирована между массой молочной железы и объемом адипоцита (r=+0,96), диаметром артерии и селеном. Максимальная отрицательная взаимосвязь – между Прл и диаметром нервного пучка (r=-0,99), ФСГ, ПРг и селеном (r=-0,99) (прилож., табл. 31). Таким образом, в сыворотке крови животных контрольной группы в период эструс первого полового цикла на фоне недостатка селена увеличивается содержание Прл, ФСГ, и ЛГ, в то время как ПРг и Е-2 – снижается. Это сдерживает ангиогенез, интенсивный рост массы молочной железы, но способствует увеличению объема жировых долек и диаметра протока. В первой опытной группе на фоне применения «Е-селена» в крови повышается концентрация селена, механизм влияния которого способствует увеличению выработки Прл, ФСГ, ЛГ и ПРг и снижению Е-2, что приводит к изменению взаимосвязи структур, к сдерживанию ангиогенеза и притока артериальной крови, уменьшению объема жировых долек. Во второй опытной группе препарат «Селенолин ®» способствует снижению концентрации ФСГ и Прг, повышению Е-2 и ЛГ, стимулирует ангиогенез, приток артериальной крови, рост и численность нервных волокон и их окончаний, сдерживает интенсивный рост паренхимы. 76 По сравнению с контролем, препараты селена способствовали изменению морфологических и биохимических показателей крови в сторону их увеличения в пределах физиологической нормы. 3.3.2. Особенности морфофизиологии молочной железы крольчих в возрасте шести месяцев В физиологическую зрелость, наступившую в возрасте шести месяцев, концентрация селена в сыворотке крови самок первой опытной группы – в три, второй – в четыре раза был выше показателя контрольной группы (рис. 15). 0,06 0,05 0,04 0,03 0,02 0,01 0 Контроль I опытная II опытная Рис. 15. Концентрация селена в сыворотке крови крольчих в возрасте шести месяцев (мкг/мл) По сравнению с предыдущим периодом, в контрольной и первой опытных группах она снизилась, соответственно, на 7% и 4,5%. Таблица 12. Концентрация половых гормонов в сыворотке шести месяцев Группы Прл, ФСГ, ЛГ, животных ммЕ/л ммЕ/мл ммЕ/мл Контрольная 61,66±2,03 1,41±0,02 1,53±0,02 I опытная 62,67±3,53* 1,23±0,06* 1,17±0,03 II опытная 66,0±2,65** 1,54±0,08 1,65±0,03* Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 крови крольчих в возрасте ПРг, Нмоль/л 3,87±0,12 5,40±0,53 5,10±0,40* Е-2, Пг/мл 11,66±1,20 16,83±1,16 16,40±0,98** В первой и второй опытных группах, концентрация Прл, соответственно, на 1,6% и 7%, Е-2 на 44% и 41%, ПРг – на 39% и 32% была выше, чем в контрольной. В первой опытной группе 77 концентрация ФСГ и ЛГ в сыворотке крови была ниже, соответственно, на 13% и 24%, а во второй – на 9% и 8% выше, нежели в контрольной группе (табл. 12). Сравнивая с предыдущим периодом, в сыворотке крови крольчих контрольной группы отмечалась тенденция к снижению Прл, ПРг и Е-2, соответственно, на 19%, 38% и 34%, в то время как концентрация ФСГ на 7%, а ЛГ на 35% повышалась. В первой и второй опытных группах, соответственно, наблюдалось снижение концентрации Прл на 13% и 3% и Е-2 на 17% и 38%, только в первой – ФСГ на 0,8%, ЛГ – на 4,1%. Повышение показателей Прг на 147% и 155% было отмечено, соответственно, в первой и второй опытных группах, а только во второй – ФСГ повысился на 26%, ЛГ – на 39%. При применении препаратов селена, количественное содержание эритроцитов и лейкоцитов в крови животных первой опытной группы, соответственно, на 3,4% и 5%, второй – на 5% и 18% превышало таковое у крольчих контрольной группы (прилож., табл. 2). По сравнению с тремя месяцами, содержание эритроцитов и лейкоцитов в контрольной группе снизилось, соответственно, на 1,2% и 6%, в первой опытной – на 9% и 6%, во второй опытной наблюдалось снижение только эритроцитов на 13%, в то время как содержание лейкоцитов поднялось на 3,5%. В первой опытной группе содержание гемоглобина и общего белка, соответственно, на 5% и 0,6%, во второй – на 7,4% и 1,7% было выше, чем в контрольной группе. В этот период, по сравнению с тремя месяцами, содержание гемоглобина в контрольной группе снизилось на 3,2%, в первой и второй опытных группах, соответственно, на 5,4% и 7%. В контрольной группе, содержание общего белка повысилось на 1,5%, а в первой и второй опытных, соответственно, снизилось на 9,5% и 10%. Содержание альбуминов, α–, β–, γ – глобулинов в крови самок первой опытной группы, соответственно, на 3%, 3,4%, 6,3% и 3%, второй – на 6%, 6%, 6% и 3% было выше, чем у крольчих контрольной группы. Сравнивая 78 с тремя месяцами, отмечалось снижение альбуминов в контрольной, первой и второй опытных группах, соответственно, на 4%, 9,4% и 9%, повышение α– глобулинов в контрольной группе на 1,2%, в первой опытной – на 0,7%, снижение во второй опытной группе на 0,9%. В контрольной и второй опытной группах, содержание β– глобулинов снизилось, соответственно, на 1,6% и 1,1%, а в первой опытной – повысилось на 2%. В контрольной, первой и второй опытных группах, отмечена тенденция к увеличению концентрации γ– глобулинов, соответственно, на 4%, 1,2% и 3%. Содержание кальция и фосфора в сыворотке крови животных первой опытной группы, соответственно, на 6% и 1,5%, второй – на 6% и 7,4% было больше контрольных показателей. Сравнив их с показателями крови самок в возрасте трех месяцев, было отмечено, что в контрольной группе содержание Са и Р, соответственно, было выше на 5% и 8,6%. В опытных группах картина несколько иная: в первой опытной группе содержание кальция увеличилось на 6%, фосфора – уменьшилось на 7%, во второй, содержание обоих уменьшилось на 4%. Количественное содержание ферментов АСТ и АЛТ в сыворотке крови крольчих первой опытной группы, соответственно, на 25% и 4%, а во второй – на 16,6% и 4% было ниже, чем в контрольной группе. По сравнению с тремя месяцами, показатель АСТ в контрольной группе увеличился на 4,3%, а в первой и второй опытных группах уменьшился, соответственно, на 28% и 11%, а АЛТ в контрольной группе был ниже на 8,6%, на 15% – в первой, на 10,5% – во второй опытных группах. Показатель коэффициента Ритиса у самок всех групп был в переделах нормы. В период физиологической зрелости происходило вытеснение жировой ткани каналикулирующей железистой паренхимой (рис. 16, 17, 18). Следовательно, в органе снижалось количество адипоцитов. Особо ускоренно этот процесс протекал в опытных группах. 79 Стенки междольковых протоков, состоящие из двухрядного эпителия, утолщались за счет слоев миоцитов. Терминальные отделы протоков формировали железистые дольки с концевыми отделами сферической формы. Цитоплазма эпителиоцитов внутри- и междольковых протоков слабо оксифильна, ядро с явно выраженной базофилией. А Б 2 В 3 1 2 4 2 Рис. 16. Гистоструктура молочной железы крольчих контрольной группы в возрасте шести месяцев. Гематоксилин и эозин. Об.10 Ок.15 (А); Об.40.Ок.15 (Б); Об. 100.Ок.15 (В). 1 – железистые дольки; 2 – протоки; 3 – сосуд ГМЦР; 4 – концевые сферические участки протока В эпителиоцитах концевых отделов протоков цитоплазма слабо базофильна, а ядра – выражено базофильны, крупные, занимающие большую часть клетки, что является малодифференцированной характеристикой эпителиальной клетки структуры эктодермального дифферона молочной железы. А Б В 1 2 6 4 5 2 3 4 Рис. 17. Гистоструктура молочной железы крольчих первой опытной группы, в возрасте шести месяцев. Гематоксилин и эозин. Об.10 Ок.15 (А); Об.40.Ок.15 (Б); Об. 100.Ок.15 (В). 1 – железистые дольки; 2 – протоки; 3 – сосуд ГМЦР; 4 – формирующаяся альвеола; 5 – эпителиоцит; 6 – терминаль нервного волокна Регистрировалось увеличение численности гемокапилляров и нервных волокон в железистых составе соединительнотканных образованиях видна трабекул. сферическая В концевых ориентация клеток, небольшие просветы, часть эпителиоцитов диффериенцированы. 80 У крольчих контрольной разрастание соединительной пролиферацию и группы (рис. ткани органа, дифференцировку клеток 16) отмечал и активную концевых отделов протоков. 3 А 3 Б 1 В 2 3 2 2 4 2 Рис. 18. Гистоструктура молочной железы крольчих второй опытной группы, в возрасте шести месяцев. Гематоксилин и эозин. Об.10 Ок.15 (А); Об.40.Ок.15 (Б); Об. 100.Ок.15 (В). 1 – железистые дольки; 2 – протоки; 3 – сосуды ГМЦР; 4 – скопления адипоцитов Во всех группах происходило формирование железистых долек с сосудами обменного звена и нервными окончаниями, что свидетельствовало о повышении роли нервной системы в регуляции процессов дифференцировки структур на завершающем этапе маммогенеза (рис. 19). А Б 2 В 4 1 2 2 3 2 Рис. 19. Электронограмма ультратонкого среза молочной железы крольчихи в возрасте шести месяцев. (А) Контрольная группа, Ув. х. 14000; (Б) Первая опытная группа, Ув. х. 10000); (В) Вторая опытная группа, Ув. х. 10000); 1 – ядро фиброцита, 2 – ядро малодифференцированного эпителиоцита, 3 – безмиелинизированное нервное волокно, 4 – митохондрия При влиянии препаратов селена, а в особенности «Селенолина®» (рис. 19 В), в цитоплазме клеток отмечали увеличение структур гладкого ЭПР и рибосом, участвующих в синтезе белков. Показатели вариабельности (Cv %) результатов колебались в пределах от 0,03 до 0,45%: в контрольной группе (минимальны для диаметра адипоцита, максимальны для диаметра артерии), от 0,03 до 0,31 в первой (минимальны для диаметра железистой дольки, максимальны для 81 диаметра нервного пучка) и от 0,06 до 0,30 во второй опытных (минимальны для диаметра адипоцита, максимальны для диаметра нервного пучка) группах. Таблица 13. Показатели гистоструктур молочной железы крольчих в возрасте шести месяцев (мкм) Показатели Группы животных артериолы собирательной венулы нервного пучка железистой дольки адипоцита междолькового протока внутридолькового протока Контрольная I опытная II опытная 29,9±4,67 60,18±2,89 14,01±0,88 250,58±6,34 71,39±1,1 70,31±1,93 15,35±1,8 33,09±1,93* 56,32±4,9* 16,66±2,35* 265,81±3,96* 70,3±1,34** 78,5±2,78** 19,07±2,08 34,66±1,07** 54,30±4,05** 17,03±2,28* 270,74±7,09 69,7±1,97* 79,98±2,88* 20,27±1,37** 5,77±0,18** 6,13±0,25 5,67±0,26 эпителиоцитов протоков Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 Коэффициент точности (Cs%) колебался от 2,62 до 13,51%, что свидетельствует о низкой точности величин (табл. 13). Проведя парный корреляционный анализ, выявили, что в этот период в молочной железе крольчих контрольной группы выявлена максимальная положительная взаимосвязь массы молочной железы с концентрацией ФСГ (r=+1), Прл (r=+0,99), диаметром протока (r=+0,85), диаметра миоцита с ЛГ (0,99), объема альвеол с ПРг (r=+0,98), объема эпителиоцита с концентрацией селена и Е-2 (r=+0,98), диаметра артерии с концентрацией селена (r=+0,96). Максимальная отрицательная связь зарегистрирована между концентрациями селена и Прл (r=-0,99), объемом ядра эпителиоцита (r=-0,99), массой молочной железы (r=-0,98) и диаметром протока (r=-0,93) (прилож., табл. 32). В первой опытной группе зарегистрирована максимально положительная взаимосвязь между ЛГ и Прл (r=+1), массой молочной железы с Прл и ПРг и Лг (r=+0,98). Максимальная отрицательная связь отмечена между объемом ядра миоэпителиоцита и концентрациями Прл и ЛГ (r=-0,99), ФСГ и ПРг (r=-0,95), а также массой молочной железы 82 (r=-0,97), между объемом ядра эпителиоцита и Е-2 (r=-0,98), диаметром нервного пучка и концентрацией Е-2 (r=-0,95) (прилож., табл. 33). Во второй максимальная опытной положительная группе (прилож. взаимосвязь табл.13) диаметра отмечена протока с концентрацией Прл, ПРг, (r=+1) объема эпителиоцита с концентрацией селена в сыворотке крови (r=+0,99), Е-2 (r=+0,92), ЛГ (r=+0,80), объема альвеол с концентрацией ПРг (r=+0,98) (прилож., табл. 34). Максимальная отрицательная связь зарегистрирована между диаметром протока и концентрациями ФСГ, ЛГ, селена, массой молочной железы, объемом ядра эпителиоцита и диаметром протока (r=1). Масса молочной железы в отрицательной связи с ПРг (r=-0,98), Прл (r=-0,92) и ЛГ (r=-0,83). Таким образом, у животных контрольной группы, в период эструс полового цикла на фоне низкого содержания селена в крови существенно увеличивается концентрация ЛГ и ПРг, незначительно – концентрация Прл и ФСГ, и снижается концентрация Е-2. Сдерживается увеличение массы молочной железы, рост протоков, но при этом происходит активный ангиогенез, артериальный приток, дифференцировка миоэпителиоцитов, ядра и цитоплазмы эпителиоцитов концевых отделов протоков. Изменение опытной группы селенового статуса незначительно организма увеличивает крольчих выработку первой половых гормонов (Прл, ФСГ, ЛГ и ПРг). При снижении Е-2 поддерживается рост терминальных отделов протоков и нервов. Вместе с тем на этом этапе маммогенеза происходит увеличение диаметра сосудов, усиление артериального притока, дифференцировка миоэпителиоцитов, задержка дифференцировки эпителиоцитов и роста альвеол. В концевых участках протоков отмечается активная пролиферация эпителиоцитов. На фоне влияния «Селенолина®» повышается концентрация ЛГ, ПРг, Е-2 и ФСГ. Следовательно, стимулируется рост массы железы, ангиогенез и артериальный приток. Отмечается активное образование альвеол и 83 стимулирование дифференцировки эпителиоцитов (ядерный белковый синтез в малодифференцированных клетках) альвеол. Сдерживается рост протоков за счет снижения концентрации Прл и повышения присутствия в крови ПРг. В этот период в обеих опытных группах препараты селена повышали уровень гематологических показателей. 84 3.4. Особенности морфофизиологии молочной железы беременных крольчих Лактогенез – важный период становления морфологии молочной железы с целью реализации основной функции – лактации. В это время на фоне специфической динамики гормонов завершается рост и дифференцировка железистого компонента органа, получают максимальное развитие выводная система и дольки. У сукрольных самок первой опытной группы концентрация селена в сыворотке крови в три, второй – в 3,8 раза была выше показателя контрольной группы (рис. 20). 0,06 0,05 0,04 0,03 0,02 0,01 0 Контроль I опытная II опытная Рис. 20. Концентрация селена в сыворотке крови беременных крольчих (мкг/мл) По сравнению с предыдущим периодом, в контрольной и первой опытной группах она оставалась на том же уровне, а во второй опытной – снизилась на 1,85%. В сыворотке крови крольчих первой и второй опытных групп, концентрация Прл, соответственно, на 3,9% и 18,1%, ФСГ – на 35,9 и 6,9%, ПРг – на 111% и 114%, Е-2 на 108% и 118% была выше, чем в контрольной группе (табл. 14). Концентрация ЛГ в первой опытной группе на 14,6% была ниже, чем в контрольной, а во второй - выше на 18,75%. В сыворотке крови самок контрольной, первой и второй опытных групп, по сравнению с крольчихами в возрасте шести месяцев, снижалась 85 концентрация Прл, соответственно, на 21%, 19,3% и 13%, ПРг – на 43%, 14,07% и 7,84%, а ЛГ – на 37%, 30% и 31%. Таблица 14. Концентрация половых гормонов в сыворотке крови беременных крольчих Группы Прл, ФСГ, ЛГ, ПРг, Е-2, животных ммЕ/л ммЕ/мл ммЕ/мл Нмоль/л Пг/мл Контрольная 48,69±3,51 1,31±0,12 0,96±0,07 2,20±0,54 9,36±0,96 I опытная 50,57±1,50** 1,78±0,12** 0,82±0,04* 4,64±0,73* 19,50±0,88* II опытная 57,50±1,64** 1,40±0,01** 1,14±0,01** 4,70±0,35** 20,37±0,36** Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 Концентрация ФСГ в контрольной группе на 7,1%, во второй опытной – на 9,1% была ниже, в первой опытной – выше на 44,7%. В контрольной группе концентрация Е-2 снизилась на 19,7%, в то время, как в первой и второй опытных группах повысилась, соответственно, на 15,86% и 24,2%. На фоне влияния препаратов селена количественное содержание эритроцитов и лейкоцитов в крови животных первой опытной группы, соответственно, на 14,9% и 3,5%, второй – на 19,5% и 14,6% превышало таковое у крольчих контрольной группы (прилож., табл. 3). По сравнению с шестью месяцами, в контрольной, первой и второй опытных группах, соответственно, на 15,2%, 5,7% и 3,06% снизилось содержание эритроцитов, а лейкоцитов – повысилось, на 8,14%, 6,67% и 5,4%. По сравнению с контролем, в первой опытной группе содержание гемоглобина и общего белка, соответственно, – на 14,1% и 8,16%, во второй – на 15,2% и 9,7% было выше. По сравнению с шестью месяцами, содержание гемоглобина в контрольной группе снизилось на 4,7%, а в первой и второй опытных увеличилось, соответственно, на 3,65% и 2,3%, снизилось и содержание общего белка в контрольной, первой и второй опытных группах, соответственно, на 8,04% и 1,2% и 0,81%. Содержание альбуминов и γ– глобулинов в крови самок первой, соответственно, на 3,6% и 10,5% и второй – на 7,05% и 7,4% опытных групп было выше, тогда как α– и β– глобулинов, соответственно, на 7,3% и 86 14,9% - в первой, на 5,5% и 21% – во второй опытных группах было ниже, чем в контроле. При сравнении с возрастом шести месяцев, в беременность отмечено увеличение альбуминов и γ– глобулинов в контрольной, первой и второй опытных группах, соответственно, на 1,3% и 15%, 2,12% и 24%, 2,33% и 20,2%. В контрольной группе зарегистрировано увеличение содержания α– глобулинов – на 4,7%, β– глобулинов – на 17%, отмечена тенденция к снижению этих показателей в первой опытной на 6% и 6,21%, второй опытной – на 7% и 13%. Содержание кальция и фосфора в сыворотке крови животных первой опытной группы, соответственно, на 3,03% и 12,14%, второй – на 6,06% и 23,6% было больше контрольных показателей. При сравнении их с показателями крови самок в возрасте шести месяцев, было отмечено, что в контрольной группе содержание Са было ниже на 19,5%, а Р – на 30,7%. В опытных группах их содержание также снижалось, соответственно, в первой на 21,5% и 23,4%, во второй - на 19,2% и 20,3%. Количественное содержание ферментов АСТ и АЛТ в сыворотке крови крольчих первой опытной группы, соответственно, на 33% ниже, и 29,2%, чем месяцами, в а во контрольной показатель второй второй на 18,75%, 28% на 9,4%, 33,3% группе. АСТ опытных – в 30%, и так 29%. 28,2% По и сравнению контрольной, группах и на снизился, же как и АЛТ, Показатель 25% с было шестью первой и соответственно, соответственно, коэффициента Ритиса у самок всех групп был в переделах нормы. Несмотря жировая ткань, способствовала отделов на то, активному интенсивная протоков, с что большую часть органа занимала развитию паренхиматозного пролиферация его эпителия дальнейшей компонента терминальных каналикуляцией в 87 жировую ее ткань железистой (рис. 21, тканью 22, 23). происходило Постепенное по мере замещение формирования концевых секретирующих отделов с радиально ориентированными в них эпителиоцитами и железистых долек. 2 А Б В 4 6 3 7 5 1 Рис. 21. Гистоструктура молочной железы беременных крольчих контрольной группы. Гематоксилин и эозин. Об.10 Ок.15 (А); Об.40.Ок.15 (Б); Об. 100.Ок.15 (В). 1 – железистые дольки; 2 – жировая ткань; 3 – соединительнотканная трабекула; 4 – формирующиеся альвеолы; 5 – сосуд ГМЦР; 6 – терминаль нервного волокна, 7 – альвеолы В отдельных альвеолах молочной железы самок опытны х групп (рис. 22, 23) выявляли границы между эпителиоцитами и полости, заполненные небольшим количеством секрета. А Б В 3 7 3 5 4 1 2 4 6 Рис. 22. Гистоструктура молочной железы сукрольных крольчих первой опытной группы. Гематоксилин и эозин (А,Б); Толуидиновый синий (В). Об.10 Ок.15 (А); Об.40.Ок.15 (Б); Об. 100.Ок.15 (В). 1 – железистые дольки; 2 – жировая ткань; 3 – протоки; 4 – сосуды ГМЦР; 5 – формирующиеся альвеолы; 6 – нервное волокно; 7 – ядра эпителиоцитов протока В деградирующих дольках железы жировых отмечали и развивающихся изменения в железистых паренхиматозно - стромальном соотношении, в соединительнотканных трабекулах, сосудах и нервах. В первой (рис. 22) и, особенно, группах, хорошо формировали развитые выводную во второй (рис. 23) опытных внутри- и систему железы, междольковые в протоки, некоторых из 88 них визуализировалось небольшое количество секрета. Эпителий стенок протоков – двухслойный. А Б В 3 2 1 5 6 3 7 4 Рис. 23. Гистоструктура молочной железы сукрольных крольчих второй опытной группы. Гематоксилин и эозин (А, Б); Толуидиновый синий (В). Об.10 Ок.15 (А); Об.40.Ок.15 (Б); Об. 100.Ок.15 (В). 1 – железистые дольки; 2 – жировая ткань; 3 – протоки; 4 – сосуды ГМЦР; 5 – формирующиеся альвеолы; 6 – нервное волокно; 7 – ядра эпителиоцитов формирующихся альвеол В молочной железе крольчих опытных групп (рис. 24 Б, В) просветленные ядра эпителиоцитов с одним или двумя ядрышками, богатые эухроматином, со слабой базофилией цитоплазмы. Отмечено, что в одних лактоцитах альвеол возрастала численность систем белкового синтеза (гранулярной эндоплазматической сети), что обеспечивало синтез белков и формирование гранул казеина и указывало на их готовность к секреции компонентов молозива. При этом эпителиоциты протоков и их концевых отделов находились на разных стадиях секреторного цикла. А Б В 2 3 2 1 2 4 1 Рис. 24. Электронограмма ультратонких срезов молочной железы беременных крольчих. (А) Контрольная группа, Ув. х. 7200; (Б) Первая опытная группа, Ув. х 18000; (В) Вторая опытная группа Ув. х 10000. 1 – ядро лактоцита; 2 – цитоплазма лактоцита; 3 – митохондрия; 4 – агранулярная эндоплазматическая сеть В других лактоцитах альвеол мощное развитие аппарата Гольджи и агранулярной эндоплазматической сети свидетельствовало о преобладании синтеза триглицеридов и образовании липидных гранул. При этом наблюдали трансмембранный обмен веществ между двумя видами клеток. В 89 контрольной группе (рис. 24 А) секреторная активность эпителиоцитов уступала таковой в опытных группах. В концевых отделах протоков отмечали снижение интенсивности пролиферации эпителиоцитов, формирование сферической структуры и полости. Эпителиоциты кубической формы находились на стадии дифференцировки. В ядрах последних происходила конденсация хроматина, визуализировались одно-два ядрышка. Дифференцировка цитоплазмы миоэпителиоцитов сопровождалась увеличением количества митохондрий и гладкой эндоплазматической сети. Таблица 15. Показатели гистоструктур молочной железы крольчих в период беременности (мкм) Показатели Группы животных Контрольная 57,03±4,34 артериолы 77,51±2,12 собирательной венулы 18,60±1,08 нервного пучка 327,36±25,93 железистой дольки 54,67±2,16 адипоцита 81,64±2,23 междолькового протока 28,20±1,82 внутридолькового протока 7,03±0,34 эпителиоцитов протоков Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 I опытная II опытная 59,73±4,25 90,73±4,53* 20,75±1,4* 348,66±29,57* 52,31±2,02** 82,38±2,07* 28,99±1,4* 7,32±0,24* 61,70±1,98** 94,50±5,16 22,20±1,15* 386,05±18,29** 51,66±2,13* 97,96±5,33 31,63±1,38** 7,56±0,15** Показатели вариабельности (Cv%) результатов колебались в контрольной группе в пределах от 0,07 до 0,23% (минимальны для диаметра междолькового протока, максимальны для диаметра артериолы), от 0,06 до 0,21 в первой (минимальны для диаметра междолькового протока, максимальны для диаметра железистой дольки) и от 0,06 до 0,14 во второй опытных (минимальны для диаметра эпителиоцита протока, максимальны для диаметра междолькового протока) группах. Коэффициент точности (Cs%) колебался от 1,98 до 8,48%, что свидетельствует о низкой точности величин (табл. 15). Проведя парный корреляционный анализ между структурами молочной железы и концентрациями гормонов крольчих контрольной группы, выявлены максимальные положительные взаимосвязи: массы 90 молочной железы с ФСГ и ЛГ и долькой органа (r=+0,99) при ее максимально отрицательной взаимосвязи с диаметром артерии (r=-0,88), объемом адипоцита (-0,79) и диаметром протока (-0,76). Также обнаружена максимально положительная взаимосвязь объема адипоцита с объемами альвеолы и ядра миоэпителиоцита, при этом последнее коррелировало с диаметром протока и объемом лактоцита (r=+0,99) (прилож., табл. 35). В первой положительные опытной связи: группе массы зарегистрированы молочной железы максимально с диаметрами миоэпителиальной клетки и нерва; диаметра миоэпителиальной клетки с концентрациями Прл, ПРг, селена и объемами ядра и самого лактоцита, а также с диаметром дольки; диаметра протока с концентрациями ФСГ, ЛГ и Е-2, диаметром артерии, объемами альвеол и лактоцитов (r=+1). Отмечены максимально отрицательные взаимосвязи диаметра протока с концентрацией селена, массой железы и объемом ядра лактоцита; диаметра нерва с диаметрами кровеносного сосуда, протока, а также с объемами альвеолы и лактоцита (r=-1) (прилож., табл. 36). Во второй опытной группе (прилож. табл. 16) максимальная положительная связь зарегистрирована между концентрациями Прл, ФСГ и ПРг; диаметром дольки и концентрациями Е-2 и селена, массой органа, объемами ядер лактоцита и миоэпителиоцита, диаметром артерии (r=+1). Максимальная отрицательные взаимосвязи выявлены между диаметром дольки и концентрациями ПРл, ФСГ, ПРг и ЛГ, диаметром протока, а также объемом лактоцита (r=-1) (прилож., табл. 37). Таким образом, в контрольной группе на фоне высокой взаимосвязи Прл с ПРг инициировался рост протоков, численность и объем альвеол, рост объема лактоцитов и дифференцировка миоэпителиоцитов. Умеренная концентрация ФСГ и ЛГ, их высокая взаимосвязь между собой, обуславливала возникновение тенденции к 91 активизации артериального притока, росту железистой дольки и массы молочной железы. Низкая концентрация фона селена в крови крольчих определяла уровень дифференциации эпителиоцитов альвеол и переход их в лактоциты. Активизация артериального притока инициировала увеличение объема железистых долек и альвеол и дифференцировку миоэпителиоцитов. Последняя лактоцитов. При этом, масса Динамика определялась степенью зрелости железы изменялась незначительно. паренхиматозно-стромального отношения, взаимосвязь структур железы проявляли тенденцию к реализации на заключительном этапе сукрольности. При воздействии «Е-селена», влияние высокого фонового значения микроэлемента на отделы ЦНС и гипоталамуса, приводило к снижению выработки Прл и увеличению концентрации ФСГ, инициирующих рост сосудов гемомикроциркуляторного русла (артериальный приток), протоков, увеличение численности и объема альвеол и сдерживающих цитодифференцировку миоэпителиальных клеток. За счет интенсивной пролиферации эпителия терминальных отделов протоков незначительно увеличивалась доля железистой паренхимы органа, несущественно увеличивался объем железистых долек и масса железы. Таким специфическая активизировали образом, нейрогуморальное сочетанность гормонов пролиферацию в взаимодействие середине и беременности малодифференцированных эпителиальных элементов органа. Механизм влияния органического селена в составе препарата «Селенолин®» вызывал снижение концентрации половых гормонов в сыворотке крови самки (кроме Е-2), инициировал в молочной железе ангиогенез и приток артериальной крови, за счет пролиферации эпителия – рост железистых долек, цитодифференцировку миоэпителиоцитов, сдерживал дифференцировку эпителиоцитов альвеол и рост протоков. 92 Анализируя показатели морфологии и биохимии крови, на фоне применения препаратов селена отмечали повышение в пределах нормы количественного содержания эритроцитов и лейкоцитов, концентрации гемоглобина, альбуминов, γ– глобулинов, а также снижение концентрации α– и β– глобулинов, содержания кальция и фосфора. 93 3.5. Особенности гистофизиологии железы и ее секреции при воздействии препаратов селена в период родов и лактации В период родов, измененный гормональный фон самки способствует окончательной дифференцировке лактоцитов, миоэпителиоцитов и эндотелиоцитов гемокапилляров, образующих лактогематический барьер органа. Именно в это время завершается развитие органа, его ангиогенез и дифференцировка эндотелиоцитов капилляров, что обеспечивает готовность железы к переходу от лактогенеза к лактопоэзу. 3.5.1. Молочная железа в период родов В период родов концентрация селена в сыворотке крови крольчих первой опытной группы в 2,6, второй в 3,8 раза была выше показателя контрольной группы (рис. 25). 0,05 0,045 0,04 0,035 0,03 0,025 0,02 0,015 0,01 0,005 0 Контроль I опытная II опытная Рис. 25. Концентрация селена в сыворотке крови крольчих в период родов (мкг/мл) По сравнению с беременностью, снижение концентрации селена в крови произошло во всех группах: в контрольной – на 1,4%, первой опытной – на 24%, во второй – на 14,8%. Концентрации ФСГ, ЛГ и Е-2 в сыворотке крови крольчи х первой опытной группы, соответственно, на 14,3%, 282%, 131%, второй – на 3,6%, 136%, 47,5% превышали показатели контрольной группы (табл. 16). Содержание Прл в сыворотке крови самок первой и второй опытных групп было ниже контрольной, соответственно, на 31% и 4,2%. С концентрацией ПРг картина 94 была несколько другой – если в первой опытной группе она была ниже контрольного показателя на 61,2%, то во второй – выше на 51,7%. Таблица 16. Концентрация половых гормонов в сыворотке крови крольчих в период родов Группы Прл, ФСГ, ЛГ, ПРг, Е-2, животных ммЕ/л ммЕ/мл ммЕ/мл Нмоль/л Пг/мл Контрольная 79,45±5,63 1,12±0,12 0,61±0,05 2,94±0,32 8,65±0,20 I опытная 55,0±0,88** 1,28±0,12* 2,33±0,04* 1,14±0,05* 19,95±0,03** II опытная 76,13±1,33** 1,16±0,01** 1,44±0,02** 4,46±0,10** 12,76±0,40* Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 По сравнению с беременными крольчихами, в период родов в сыворотке крови самок контрольной, первой и второй опытных групп концентрация Прл была выше, соответственно, на 63,2%, 8,8% и 32,4%, а концентрация ФСГ была ниже, соответственно, на 14,5%, 28% и 17%. Концентрация ЛГ и Е-2 в контрольной группе была ниже, соответственно, на 36% и 7,6%. В первой опытной превышала таковой показатель сукрольных самок на 184% и 2,3%, а во второй опытной – концентрация ЛГ была выше на 26%, а Е-2 – ниже на 37%. В контроле концентрация Прг на 34% была выше: в первой опытной – на 75%, второй – на 5% ниже, чем в беременность. При действии препаратов селена, количественное содержание эритроцитов и лейкоцитов в крови животных первой опытной группы, соответственно, на 6,5% и 18%, второй – на 19% и 32% превышало таковое у крольчих контрольной группы (прилож., табл. 4). По сравнению с беременностью, в контрольной, первой и второй опытных группах снизилось, соответственно, на 2%, 9% и 2% содержание эритроцитов и на 15%, 3% и 2% содержание лейкоцитов. По сравнению с контролем, содержание гемоглобина и общего белка в первой опытной группе было выше, соответственно, на 6,5% и 13%, во второй – на 11% и 15%. В отличие от периода беременности, в период родов у крольчих всех групп происходило снижение содержания этих показателей: в контрольной группе, соответственно, на 12,6% и 5,6%, 95 первой опытной на 18,4% и 1%, на 15,7% и 0,63% – во второй опытной группе. В крови самок первой опытной группы содержание альбуминов на 4%, второй – 8,4%, α–, β–, γ– глобулинов в первой опытной группе, соответственно, на 1,3%, 12% и 9,5%, второй опытной – на 1,8%, 7,2%, 12,7% было выше, чем в контрольной группе. При сравнении с периодом беременности, в период родов отмечено снижение содержания альбуминов в контрольной группе на 4%, первой и второй опытных группах, соответственно, на 3,5% и 2,8%. В контрольной группе содержание α– и β– глобулинов было ниже, соответственно, на 3% и 11,8%, в то время как в опытных группах оно повышалось: в первой, соответственно, на 5,8% и 16,3%, второй – на 4,4% и 16,7%. С содержанием γ– глобулинов картина несколько иная: в контрольной, первой и второй опытных группах обнаруживали тенденцию к повышению, соответственно, на 1,9%, 0,93% и 6,9%. Количественное содержание кальция и фосфора в сыворотке крови животных первой опытной группы, на 2% и 8%, второй – на 6,4% и 12,3% было больше контрольных показателей. При сравнении их с показателями крови беременных самок, было отмечено незначительное повышение кальция: на 3% в контрольной группе, на 1,96% в первой и 3,3% во второй опытных группах, и достаточное повышение фосфора в контрольной, первой и второй опытных группах, соответственно, на 33,6%, 28,7% и 21,4%. Количественное содержание ферментов АСТ и АЛТ в сыворотке крови крольчих первой опытной группы, соответственно, на 22% и 29,5%, во второй – на 16,7% и 25% было ниже, чем в контрольной группе. По сравнению с периодом беременности самок, показатель АСТ в контрольной группе снизился на 7,7%, а в первой и второй опытных группах повысился, соответственно, на 7,7% и 7%. Отмечено снижение значения АЛТ на 8,3%, в контрольной и второй опытной группе и на 8,8% – в первой опытной группе. 96 Показатель коэффициента Ритиса у самок всех групп был в переделах нормы, что говорило об отсутствии токсичного эффекта препаратов на организм животных. В период родов у крольчих всех групп внутри железистых долек молочной железы и между ними хорошо визуализировалась сложная система протоков, просветы которых заполнены секретом (рис. 26, 27, 28). А Б В 1 3 7 6 4 2 3 5 Рис. 26. Гистоструктура молочной железы крольчих контрольной группы в период родов. Гематоксилин и эозин. Об.10 Ок.15 (А); Об.40.Ок.15 (Б); Об. 100.Ок.15 (В). 1 – железистые дольки; 2 – соединительнотканная трабекула; 3 – альвеолы; 4 – сосуд ГМЦР; 5 – протоки; 6 – нервы; 7 – ядра лактоцитов Достаточно объемные железистые дольки вариабельных размеров, причем они крупнее в опытных группах. А Б В 2 4 3 3 1 6 5 Рис. 27. Гистоструктура молочной железы крольчих первой опытной группы в период родов. Гематоксилин и эозин. Об.10 Ок.15 (А); Об.40.Ок.15 (Б); Об. 100.Ок.15 (В). 1 – железистые дольки; 2 – соединительнотканная трабекула; 3 – альвеолы; 4 – сосуд ГМЦР; 5 – проток; 6 – терминаль нерва Отмечалось продолжение внедрения эпителиальных тяжей в жировую ткань и образование новых железистых долек, за счет чего значительно уменьшался объем жировой ткани и, соответственно, увеличивалась доля паренхиматозного компонента железы. Визуализировались альвеолы округлой и овальной формы, большого объема, размеры которых варьировали. Заполненность их просвета секретом 97 свидетельствовала о начале деятельности лактоцитов, направленной на выделение секрета. Во второй опытной группе (рис. 27) секреторная активность лактоцитов отличалась от контрольной (рис. 26) и первой (рис. 27) опытной групп. А Б 2 В 3 3 1 3 4 5 Рис. 28. Гистоструктура молочной железы крольчих второй опытной группы в период родов. Гематоксилин и эозин. Об.10 Ок.15 (А); Об.40.Ок.15 (Б); Об. 100.Ок.15 (В). 1 – железистые дольки; 2 – протоки; 3 – альвеолы; 4 – сосуды ГМЦР; 5 – скопление нервов Плазмалемма лактоцита четко идентифицировалась, в некоторых из них наблюдалось просветление цитоплазмы, наличие в ядре высокого содержания эухроматина (рис. 29). А Б В 1 3 3 2 1 2 2 1 Рис. 29. Электронограмма ультратонких срезов молочной железы крольчих в период родов. (А) Контрольная группа, Ув. х 4800; (Б) Первая опытная группа, Ув. х 10000; (В) Вторая опытная группа Ув. х 10000. 1 – лактоцит; 2 – ядро лактоцита; 3 – ЭПР Визуализировали наличие вакуолей с различным содержимым: в одних – гранулы казеина, в других – триглицериды (рис. 29 А, В). Отмечали окончание дифференцировки лактоцитов альвеол, миоэпителиоцитов и эпителиоцитов внутридольковых протоков. В контрольной группе показатели вариабельности (Cv %) результатов колебались в пределах от 0,04 до 0,18%. Минимальны они были для диаметра внутридолькового протока, максимальны для диаметра железистой дольки. В первой опытной группе от 0,04 до 0,16%, причем минимальны они 98 были для диаметра внутридолькового протока, максимальны - для диаметров адипоцита и железистой дольки. Во второй опытной группе от 0,04 до 0,0,14% (минимальны для диаметра междолькового протока, максимальны – для диаметров железистой дольки и артериолы) группах (табл.17). Таблица 17. Показатели гистоструктур молочной железы крольчих в период родов (мкм) Показатели Группы животных Контрольная 61,64±3,30 артериолы 99,24±3,57 собирательной венулы 20,64±1,26 нервного пучка 414,18±28,25 железистой дольки 22,39±1,35 адипоцита 90,13±1,63 междолькового протока 40,45±0,62 внутридолькового протока 7,20±0,23 эпителиоцитов протоков Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 I опытная II опытная 60,03±2,98* 103,48±2,33* 21,67±1,19* 424,02±25,07* 21,58±1,26* 92,83±1,78* 41,09±0,67* 63,38±3,27* 104,15±2,42* 21,90±1,03** 435,94±21,48** 18,55±0,80* 94,20±1,58** 43,21±0,95* 7,65±0,15* 8,20±0,22* Коэффициент точности (Cs%) колебался от 1,68 до 5,16%, что свидетельствует о низкой точности величин. Проведя парный корреляционный анализ, у крольчих контрольной группы между структурами молочной железы и концентрациями гормонов выявлены максимальные положительные взаимосвязи: массы молочной железы с диаметром протока объемом лактоцита (r=+0,97); объема ядра миоэпителиоцита с диаметром артерии (r=+0,93); концентрации Прл, ФСГ, ПРг и ЛГ между собой (r=+0,99). Обнаружена максимально отрицательная взаимосвязь концентрации Е-2 с массой молочной железы и диаметром протока (r=0,99); объема альвеолы с концентрациями Прл, ФСГ, ПРг и ЛГ (r=-0,99); объема дольки с диаметром артерии и объемом ядра лактоцита (r=-0,99) (прилож., табл. 38). В первой опытной группе зарегистрированы максимально положительные связи: диаметра дольки с концентрациями Прл, ФСГ, ПРг и селена, массой молочной железы, диаметрами артерии и нерва, 99 объемами ядер лактоцита и миоэпителиоцита (r=+1); объема ядра лактоцита с концентрациями Прл и ФСГ (r=+0,99); ФСГ с концентрацией селена; массы молочной железы с диаметром нерва и концентрацией Прг; диаметра протока с концентрациями ЛГ и Е-2 (r=+0,98). Отмечены максимально отрицательные взаимосвязи: диаметра дольки с концентрациями ЛГ и Е-2, диаметром и объемами альвеолы и лактоцита (r=-1); диаметра протока и концентрации ПРг, массы железы и Е-2 (r=-0,98) (прилож., табл. 39). Во второй опытной группе максимальная положительная связь зарегистрирована между массой органа и диаметром миоэпителиоцита; диаметром дольки и концентрацией ПРг; концентрациями селена и Прл(r=+0,99) (прилож., табл. 40). Максимальная отрицательная взаимосвязь выявлена между объемом лактоцита и концентрациями Прл, ФСГ и ПРг; диаметром артерии и Е-2; диаметром дольки и объемами ядра лактоцита и альвеолы (r=-0,99). Таким образом, в роды у самок контрольной группы на фоне низкой концентрации селена в сыворотке крови отмечали интенсификацию артериального притока (обменное звено), цитодифференцировку и начало функционирвания миоэпителиоцита с одновременным включением ядерного белкового синтеза в лактоцитах и миоэпителиоцитах, что свидетельствует о готовности системы к выделению секрета. Увеличение массы молочной железы, объема лактоцитов, диаметра протоков явилось следствием стаза молозива и проталкивания его миоэпителиальными клетками из концевых отделов. Хотя изменение объема железистых долек было несущественным, проявлялась тенденция к их увеличению. В первой опытной группе, механизм воздействия селена с витамином Е в период родов обусловливал существенное увеличение концентрации ФСГ, и эстрогенов, что свидетельствовало об активизации фолликулогенеза в яичнике и снижение Прл и ПРг. Снижение индекса концентрации Прл/ФСГ 100 специфичное для этого периода запускал ядерно-белковый синтез в лактоцитах (секреторный миоэпителиоцитов. цикл), Цитоплазма но ингибировал лактоцитов функционирование альвеол насыщалась секретируемыми компонентами готовыми к секреции. Незначительное изменение объемов альвеол и железистых долек происходило за счет накопления секрета. Вокруг концевых секретирующих отделов отмечали активизацию нейрогенеза, рост нервных волокон и формирование их терминалей. Отсутствие давления миоэпителиальных клеток в секреторных отделах способствовало расширению альвеол и заполнению протоков молозивом. Следовательно, в виду стаза молозива в концевых отделах и отсутствия интенсивного притока крови лактоциты не включались в новый секреторный цикл. Во второй опытной группе оптимальное количество органического селена, поступившего с «Селенолином®», в сыворотке крови повышало содержание Прл и снижало выработку эстрогенов. На фоне этого отмечали увеличение объемов железистых долек и альвеол за счет ингибирования ретракции миоэпителиоцитов в концевых отделах и стаза молозива, препятствующих вхождению лактоцита в новый секреторный цикл, а также относительно первой опытной группы в дольках выявляли меньшую степень влияния на нейрогенез. 3.5.2. Хронодинамика лактогематического барьера в первые часы после окрола и в середине лактации Регуляцию лактогенеза в репродуктивном цикле обеспечивают половые гормоны, выполняя важную роль в развитии физиологической адаптации организма самки к вскармливанию детенышей и переходе молочной железы от секреции молозива к выработке молока, участвуют в синтезе его компонентов. 101 Нами изучена взаимосвязь клеточных и тканевых структур лактогематического барьера молочной железы крольчих с динамикой (и индексами) концентрации половых гормонов и IgG в сыворотке крови в течение первых 54 часов после родов в норме и при влиянии препаратов «Еселен» и «Селенолин®». В первый час после окрола, по сравнению с периодом беременности, концентрация Прл в сыворотке крови крольчих контрольной группы увеличилась на 60%, в первой опытной группе – на 7,17%, второй – на 32% (табл. 18). У крольчих всех трех групп произошло снижение концентрации ФСГ, соответственно, на 14,5%, 28%, 18%. Увеличение концентрации ПРг было зарегистрировано у самок контрольной и первой опытной группы, соответственно, на 31,4% и 75,9%, а снижение на 5,3% – во второй опытной. В сыворотке крови крольчих контрольной группы концентрации ЛГ и Е-2 была ниже, соответственно, на 37,5% и 6,84%, в то время, как на фоне применения препаратов селена – выше, соответственно, на 180% и 2,2% – в первой и на 26% и 37,3% во второй опытных группах. Таблица 18. Концентрация половых гормонов в сыворотке крови крольчих через один час после окрола Группы Прл, ФСГ, ЛГ, ПРг, Е-2, животных ммЕ/л ммЕ/мл ммЕ/мл Нмоль/л Пг/мл Контрольная 77,93±5,30 1,12±0,16 0,60±0,05 2,89±0,31 8,72±0,30 I опытная 54,47±0,73** 1,27±0,02** 2,29±0,01** 1,12±0,05** 19,93±0,04** II опытная 76,15±1,36* 1,14±0,01** 1,44±0,01** 4,45±0,10* 12,76±0,40* Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 Относительно контроля в первой опытной группе уровень индекса Прл/ФСГ был ниже в 1,6 раза, а индекс Прл/ЛГ ниже в 5,4 раза. Во второй опытной группе индекс Прл/ФСГ относительно контроля был ниже в 1,03 раза, а Прл/ЛГ – в 2,5 раза. В молочной железе крольчих контрольной и опытных групп на фоне динамики гормонов увеличивались диаметр сосудов обменного звена микроциркуляторного русла, площадь железистых долек, численность нервных волокон и их окончаний (рис. 30). 102 В стромальном компоненте органа отмечалось уменьшение жировой ткани. В этот период многочисленные кровенаполненные капилляры обеспечивали значительное увеличение артериального притока крови к железистым долькам и альвеолам органа, активизацию секреторного цикла в лактоцитах и наполнение молозивом полостей большинства альвеол (рис. 30 А, Б, В). Б А В 2 2 1 5 2 4 3 3 Г 3 Д 5 Е 6 1 3 7 3 2 4 Рис. 30. Гистоструктура молочной железы крольчих, через час после окрола. Гематоксилин и эозин. А – контрольная группа, Об.100. Ок.15; Б – первая опытная группа, Об.100.Ок.15; В – вторая опытная группа, Об. 40. Ок.15. 1 – проток; 2 – альвеола; 3 – сосуды ГМЦР; 4 – ядра лактоцитов. Электронограмма ультратонкого среза молочной железы Ув.х7200. Г – контрольная группа; Д – первая опытная группа; Е – вторая опытная группа. 1 – ядро адипоцита; 2 – вакуоль с триглицеридами; 3 – ядра фибробластов; 4 – ЭПР; 5 – базальная мембрана; 6 – вакуоль; 7 – ядро светлого лактоцита Вместе с тем, в лактоцитах отмечено активизирование ядерного и цитоплазматического синтезов, способствующих выработке компонентов секрета. Сокращение миоэпителиоцитов, густо оплетающих лактоциты альвеол, регулируемое гормонами, способствует выведению секрета во внутридольковый проток. Отмечается небольшое количество деградирующих адипоцитов и ядер фиброцитов во внутридольковых трабекулах (рис.30 Г, Д, Е ). При сравнении структур лактогематического барьера молочной железы крольчих, на фоне применения препаратов селена отмечалась тенденция к их увеличению (табл. 19). 103 Таблица 19. Показатели гистоструктур молочной железы крольчих через один час после окрола Группы V лактоцита V ядра Ø капилляра, V ядра м/э, животных мкм3 лактоцита, мкм3 мкм мкм3 Контрольная 66,14±3,22 20,50±0,97 1,50±0,2 9,4±0,34 I опытная 68,05±2,81** 23,27±0,83** 1,75±0,2* 10,4±0,56** II опытная 69,02±3,06** 69,32±3,00** 1,84±0,18* 9,88±0,79* Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 А именно: диаметр капилляра, объем ядра и самого лактоцита в железе крольчих первой опытной группы, соответственно, в 1,1, 1,03, 1,1 раза, второй – в 1,2, 1,04, 3,4 раза был больше таковых показателей у крольчих контрольной группы. 22% 78 % А 15,7% 16% 84,3% 84% Б В Рис. 31. Доля IgG (100% – их общее количество) сыворотки крови, вышедших через лактогематический барьер в молозиво, спустя один час после окрола в контрольной (А – зеленый), первой (Б – оранжевый) и второй (В – лиловый) опытных группах Показатели вариабельности (Cv%) результатов колебались в пределах от 0,07 до 0,32 % в контрольной группе (минимальны были для объема ядра миоэпителиоцита, максимальны для диаметра капилляра), от 0,1 до 0,27 в первой (минимальны были для объема ядра лактоцита, максимальны для диаметра капилляра) и от 0,07 до 0,23 во второй опытных (минимальны были для объемов ядра и самого лактоцита, максимальны для диаметра капилляра) 104 группах. Коэффициент точности (Cs%) колебался от 4 до 13%, что свидетельствует о низкой точности величин. В первый час после окрола процент выхода IgG из крови в молозиво составил 78% в контрольной группе (рис. 31 А), 84% - в первой (рис. 31 Б) и 84,3% во второй опытных группах (рис. 31 В). % 12,5 12 12 10 11,5 8 11 % 6 10,5 4 10 2 9,5 А Контроль I опытная Б II опытная 0 Контроль I опытная II опытная Рис 32. Концентрация IgG в сыворотке крови (А) и молозива (Б) крольчих через один час после окрола, (%) Концентрация иммуноглобулина в сыворотках крови (рис. 32 А) и молозива (рис. 32 Б) у крольчих первой опытной группы, соответственно, была выше контрольного показателя на 15,2% и 24,3%, а во второй опытной группе – на 17% и 26,7%. Парный корреляционный анализ показал, что в первый час после родов на фоне ведущего влияния ФСГ и Прг (r=+0,99) в альвеолах молочной железы крольчих существенная контрольной взаимосвязь и опытных групп между объемом ядра регистрировалась миоэпителиоцитов, диаметром капилляров и диаметром альвеол (r=+0,99). На показатели последнего в большей степени оказывает влияние концентрация Прг (r=+1,0), но на фоне комплексного действия ФСГ и ЛГ (r=+0,99). Высокую взаимосвязь диаметров альвеол и капилляров (r=+1,0) усиливает сочетанное влияние ФСГ (r=+0,99) и гормонального комплекса (Прл, ЛГ) (r=+0,99). Объем ядер лактоцитов нейрогуморальных лактогематического реактивно факторов барьера и и изменяется динамики проявляет под влиянием других структур высокую вариабельность. Коэффициент корреляции объема ядра лактоцита на фоне препаратов селена выше («Е-селен» – r≤0,86, «Селенолин®» – r≤0,98) такового контрольной 105 группы (r≤0,75) (прилож., табл. 41-43). Подобную взаимосвязь мы объясняем приобретением структурами лактогематического барьера лабильности, определяющей его высокую проницаемость. Итак, в первый час после окрола регистрируемая взаимосвязь половых гормонов (ФСГ, Прг и Лг) со структурами гематотканевого барьера обусловливала высокую вариабельность диаметра сосудов обменного звена за счет интенсивного притока крови, активизацию в лактоцитах цитоплазматического синтеза и секреции, а также, что немаловажно, лабильность структур цито- барьера и его высокую проницаемость, в том числе и для IgG. К девятому часу после окрола, по сравнению с первым часом, концентрация Прл и ЛГ в сыворотке крови крольчих контрольной группы была выше, соответственно, на 0,5% и 1,6%, в первой опытной группе на 0,05% и 1,7%,, а во второй опытной группе показатели были на прежнем уровне (табл. 20). Таблица 20. Концентрация половых гормонов в сыворотке крови крольчих через девять часов после окрола Группы Прл, ФСГ, ЛГ, ПРг, Е-2, животных ммЕ/л ммЕ/мл ммЕ/мл Нмоль/л Пг/мл Контрольная 78,30±5,60 1,12±0,17 0,61±0,05 2,89±0,30 8,65±0,2 I опытная 54,50±0,73** 1,26±0,02** 2,33±0,04** 1,14±0,05* 19,95±0,03** II опытная 76,15±1,33** 1,14±0,01** 1,44±0,02** 4,46±0,10** 12,76±0,4* Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 Концентрация ФСГ и ПРг у самок контрольной группы не изменялась, однако на фоне применения препарата «Е-селен» концентрация первого гормона снизилась на 0,78%, а второго – увеличилась на 1,8%, в то время как при влиянии «Селенолина®» ФСГ оставался на уровне первого часа, а концентрация ПРг увеличивалась на 0,2%. В сыворотке крови крольчих контрольной группы концентрация Е-2 была ниже на 0,8%, в первой опытной группе выше на 0,1%, во второй оставалась без изменений. Относительно контроля в первой опытной группе индекс Прл/ФСГ был ниже в 1,7 раза, а индекс Прл/ЛГ – в 5,56 раза, во второй опытной группе, соответственно, в 1,08 и 2,45 раза. 106 В этот временной интервал в молочной железе самок контрольной и опытных групп отмечалось увеличение диаметра капилляра, соответственно, в 1,14 и 1,1 раза и объема ядра лактоцита в 1,14 раза в контрольной группе и 1,1 раза в опытных группах (табл. 21). Таблица 21. Показатели гистоструктур молочной железы крольчих через девять часов после окрола Группы V лактоцита V ядра Ø капилляра, V ядра м/э, животных мкм3 лактоцита, мкм3 мкм мкм3 Контрольная 65,91±2,21 23,38±2,02 1,94±0,12 7,40±0,31 I опытная 67,33±2,23* 25,84±1,90** 1,97±0,12** 7,84±0,71* II опытная 68,81±2,14** 68,26±2,08* 1,90±0,18* 8,81±0,50** Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 А Б 5 3 4 В 6 2 3 1 3 Г 7 Д 3 Е 1 2 2 1 1 Рис. 33. Гистоструктура молочной железы крольчих, через 9 часов после окрола. Гематоксилин и эозин. А – контрольная группа, Об.100. Ок.15; Б – первая опытная группа, Об.100.Ок.15; В – вторая опытная группа, Об.40.Ок.15. 1 – проток; 2 – альвеола; 3 – сосуды ГМЦР; 4 –лактоцит; 5 – ядра лактоцитов; нервные терминалии; 7 – ядро миоэпителиальной клетки. Электронограмма ультратонкого среза молочной железы Ув.х7200. Г – контрольная группа, Д – первая опытная группа, Е – вторая опытная группа. 1 – ядро светлого лактоцита; 2 – ядро темного лактоцита; 3 – белковая глобула Показатели группе были вариабельности колебались для в объема пределах (Cv%) от ядра результатов 0,08 до в контрольной 0,24% (минимальны миоэпителиоцита, максимальны для объема ядра лактоцита), от 0,09 до 0,21 в первой опытной (минимальны для во объема второй были ядра опытной для объема лактоцита) (минимальны лактоцита, и от были 0,09 для максимальны до 0,18 объема ядра 107 и самого группах. лактоцита, максимальны Коэффициент точности для (Cs%) диаметра колебался капилляра) от 3,1%, до 9,47%, что свидетельствовало о средней точности величин. Во всех группах объем лактоцитов и объем ядра миоэпителиальных клеток оставался без изменений. В гистологической соединительнотканных картине трабекул органа между отмечено уменьшение железистыми дольками, увеличение размеров ядер лактоцитов, что косвенно свидетельствовало о нарастающем ядерно-цитоплазматическом синтезе (рис. 33). Так же, как и в предыдущем периоде, отмечали большое количество нервных волокон и их терминалей. 15% 85 % А 14,5% 14% 86% Б 85,5% В Рис. 34. Доля IgG (100% – их общее количество) сыворотки крови, вышедших через лактогематический барьер в молозиво, спустя девять часов после окрола в контрольной (А – зеленый), первой (Б – оранжевый) и второй (В – лиловый) опытных группах В данный период процент выхода IgG из крови в молозиво составил 85% в контрольной группе (рис. 34 А), 86% в первой (рис. 34 Б) и 85,5% во второй опытных группах (рис. 34 В), что, соответственно, выше на 9%, 2,4%, 1,4%, чем через один час после окрола. 108 В сыворотке крови и молозива концентрация иммуноглобулина у крольчих первой опытной группы, соответственно, была выше контрольного показателя на 14,6% и 16% (рис. 35 А), а во второй опытной группе – на 16% и 17% (рис. 35 Б). При сравнении с предыдущим периодом, показатель концентрации IgG в сыворотке крови самок контрольной группы увеличивался на 0,6%, а в опытных группах на 0,1%, тогда как в сыворотке молозива динамика была наиболее существенной: так, в контрольной группе увеличение было на 10,3%, на 3% – в первой и на 1,5% – во второй опытных группах. 12,5 11 12 10,5 11,5 10 11 % 9,5 10,5 9 10 8,5 % 9,5 А 8 Контроль I опытная II опытная Б Контроль I опытная II опытная Рис. 35. Концентрация IgG в сыворотке крови (А) и молозива (Б) крольчих через девять часов после окрола (%) По результатам проведенного парного корреляционного анализа видно, что спустя девять часов после родов регуляция лактопоэза, осуществляется сочетанной работой гормонального комплекса: (Прл, ФСГ, ПРг, Е2) (r=+1), антагонистом которого выступает ЛГ (r=-1), что выражается наибольшей достоверностью коэффициентов корреляции (r=+1) структур лактогематического барьера и диаметра альвеол. Так, во всех трех группах взаимосвязь объема лактоцитов с диаметрами альвеол и капилляров, концентрацией IgG положительна (r=+1), а с объемом ядер лактоцитов отрицательна (r=-1). При этом последний положительно взаимосвязан с объемом ядер миоэпителиоцитов (r=1), а с диаметром альвеол – отрицательно (r=-1) (прилож., табл. 44 – 46). Таким образом, на данном этапе, регистрируемая комплексная работа Прл, ФСГ, ПРг, Е2 в регуляции высоко положительных взаимосвязей 109 структур лактогематического барьера органа, проявлялась изменением морфофункциональных параметров его составляющих, проницаемости и эффективности транспорта IgG в молозиво. По истечении 18 часов после окрола, концентрация Прл и ФСГ в сыворотке крови крольчих увеличилась, соответственно, на 1,7% и 6,25% в контрольной группе, на 0,04% и 2,4% в первой опытной и на 0,03% и 3,5% во второй опытной группе (табл. 22). Таблица 22. Концентрация половых гормонов в сыворотке крови крольчих через 18 часов после окрола Группы Прл, ФСГ, ЛГ, ПРг, Е-2, животных ммЕ/л ммЕ/мл ммЕ/мл Нмоль/л Пг/мл Контрольная 79,62±5,91 1,19±0,17 0,59±0,05 2,95±0,32 8,63±0,20 I опытная 54,52±0,74** 1,29±0,01** 2,29±0,02** 1,12±0,04** 19,9±0,04** II опытная 76,17±1,33** 1,18±0,006** 1,43±0,01** 4,44±0,10** 12,76±0,4* Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 В контроле регистрировали повышение концентрации ПРг на 2,1%, и снижение ЛГ и Е-2, соответственно, на 3,3% и 0,23%. В первой опытной группе концентрации снизились: ЛГ – на 1,72%, ПРг – на 1,75%, Е-2 – на 0,25%, во второй, соответственно, на 0,69% и 0,45%, а концентрация Е-2 не изменялась. Относительно контроля в первой опытной группе индекс Прл/ФСГ был ниже в 1,6 раза, а Прл/Лг – в 5,6 раза, во второй опытной, соответственно, в 1,05 и 2,45 раза. Таблица 23. Показатели гистоструктур молочной железы крольчих через окрола Группы V лактоцита V ядра Ø капилляра, 3 3 животных мкм лактоцита, мкм мкм Контрольная 98,6±3,03 34,71±2,20 4,07±0,11 I опытная 99,86±2,52** 36,66±2,13** 4,09±0,12* II опытная 102,42±2,66** 101,35±2,50* 4,29±0,23* Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 18 часов после V ядра м/э, мкм3 9,34±0,50 10,38±0,43** 11,54±0,63* Для структур лактогематического барьера молочной железы всех групп через 18 часов после родов характерен динамический рост (табл. 23). В контрольной группе показатели вариабельности (Cv%) результатов колебались в пределах от 0,07 до 0,2% (минимальны были для диаметра капилляра, максимальны – для объема ядра лактоцита), от 0,07 до 0,16 в первой (минимальны были для диаметра капилляра, максимальны для объема 110 ядра лактоцита) и от 0,07 до 0,13 во второй опытной группах (минимальны были для объема ядра и самого лактоцита, максимальны для диаметра капилляра). Коэффициент точности (Cs%) колебался от 2,5% до 6,3%, что свидетельствовало о средней точности величин. Увеличение объема лактоцита в 1,5 раза отмечено в контрольной и опытных группах, во столько же раз увеличился объем ядра лактоцита в молочной железе самок контрольной и второй опытной групп, в первой – в 1,4 раза. Показатели диаметра капилляра и объем ядра миоэпителиальных клеток, соответственно, в контрольной группе увеличились в 2,1 и 1,26 раза, в первой опытной – в 2,08 и 1,3 раза, во второй – в 2,26 и 1,31 раза. А Б 6 В 2 3 6 1 4 3 1 5 Г Д Е 3 1 1 1 1 2 Рис. 36. Гистоструктура молочной железы крольчих, через 18 часов после окрола. Гематоксилин и эозин. А – контрольная группа, Об.100. Ок.15; Б – первая опытная группа, Об.100.Ок.15; В – вторая опытная группа, Об.40.Ок.15. 1 – протоки; 2 – альвеола; 3 – сосуды ГМЦР; 4 –лактоциты; 5 – ядра лактоцитов; 6 – нервная терминаль. Электронограмма ультратонкого среза молочной железы. Ув.х 7200. Г–контрольная группа, Д–первая опытная группа, Е – вторая опытная группа. 1 – ядро лактоцита; 2 – вакуоли с секретом; 3 – цитоплазма лактоцита В соединительнотканных трабекулах железы, особенно в опытных группах, отмечалось увеличение количества нервных волокон и их окончаний (рис. 36). В железистых дольках лактоциты альвеол и капилляры образуют гематотканевый барьер. В этот период железистая часть органа развивается интенсивно за счет истончения соединительнотканных трабекул и максимального увеличения диаметра альвеол. Ядра лактоцитов слабо 111 базофильны, объем цитоплазмы существенно увеличился за счет разрастания белоксинтезирующих систем, набирающих активность в выработке компонентов секрета (рис. 36 Г, Д, Е). В 18 часов лактации в контрольной группе выход IgG из крови в молозиво составил 90% (рис. 37 А), а в первой (рис. 37 Б) и второй (рис. 37 В) опытных группах, соответственно, 87% и 86%. 10% 90 % А 14% 13% 87% Б 86% В Рис. 37. Доля IgG (100% – их общее количество) сыворотки крови, вышедших через лактогематический барьер в молозиво, спустя 18 часов после окрола в контрольной (А – зеленый), первой (Б – оранжевый) и второй (В – лиловый) опытных группах Это было выше подобных показателей в девять часов после окрола, соответственно, на 6%, 1,2%, 0,6%. Концентрация IgG в сыворотке крови крольчих первой опытной группы на 15% (рис. 38 А), а второй на 17%, в сыворотке молозива, соответственно, на 11% и 12% была выше контрольного показателя (рис. 38 Б). При сравнении с девятью часами после окрола, в контрольной и первой опытной группах показатель концентрации IgG в сыворотке крови снижался на 0,2%, тогда как во второй опытной группе оставался на том же уровне. 112 12,5 10,8 10,6 12 10,4 10,2 11,5 10 11 % % 9,8 9,6 10,5 9,4 9,2 10 9 9,5 А 8,8 Контроль I опытная Б II опытная Контроль I опытная II опытная Рис. 38. Концентрация IgG в сыворотке крови (А) и молозива (Б) крольчих через 18 часов после окрола, (%) В сыворотке молозива, происходило увеличение этого показателя на 0,33% в контрольной группе, на 0,12% в первой опытной и на 0,21% – во второй опытной группах. Анализ молочной взаимосвязей железы самок структур лактогематического контрольной и опытных барьера групп спустя 18 часов после родов показал, что концентрации комплекса гормонов (Прл и ФСГ) и IgG находятся в тесной взаимосвязи (r=+1). Так, объемы ядра и самого лактоцита коррелировали с диаметрами альвеол и капилляров (r=+1). Объем лактоцитов проявлял взаимосвязь с диаметром капилляров и объемом ядра миоэпителиоцита (r=+1), который взаимодействовал с объемом ядра лактоцита, диаметрами альвеол и капилляров (r=+1) (прилож., табл. 47–49). В результате этого к 18 часам лактации взаимосвязь Прл и ФСГ со структурами железы характеризовал установившийся постоянный характер уровня проницаемости лактогематического барьера, высокую его проницаемость, способствующий и в этом периоде большему выходу IgG из сыворотки крови в молозиво. В 27 часов лактации отмечали тенденцию к увеличению концентрации Прл, ФСГ, ЛГ и ПРг в сыворотке крови животных контрольной группы, опытной соответственно, – на 0,04%, на 0,5%, 2,32%, 0,8%, 2,2% и 6,8% 6,25%, и 0,68%, второй первой опытной группы – на 0,04%, 1,7%, 2,1% и 0,9% (табл. 24). 113 Таблица 24. Концентрация половых гормонов в сыворотке крови крольчих через 27 часов после окрола. Группы Прл, ФСГ, ЛГ, ПРг, Е-2, животных ммЕ/л ммЕ/мл ммЕ/мл Нмоль/л Пг/мл Контрольная 80,01±5,71 1,20±0,17 0,63±0,05 2,97±0,32 8,62±0,20 I опытная 54,54±0,73** 1,32±0,01** 2,34±0,02** 1,19±0,05** 19,9±0,05** II опытная 76,20±1,32* 1,20±0,007** 1,46±0,02** 4,48±0,10** 12,75±0,40* Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 Было зарегистрировано уменьшение концентрации Е-2 в контрольной группе на 0,1%, во второй опытной на 0,08%, в первой опытной концентрация этого гормона не изменялась. Относительно контроля индекс Прл/ФСГ в первой опытной группе был ниже в 1,62 раза, а ПРл/ЛГ – в 5,45 раз. Во второй опытной группе, соответственно – в 1,06 и 2,43 раза. По сравнению с 18 часами после окрола, в 27 часов отмечалось снижение показателей структур, обеспечивающих проницаемость гематотканевого барьера молочной железы (табл. 25). Таблица 25. Показатели гистоструктур молочной железы крольчих через 27 часов после окрола Группы V лактоцита V ядра Ø капилляра, V ядра м/э, 3 3 животных мкм лактоцита, мкм мкм мкм3 Контрольная 76,87±2,93 27,70±2,90 1,93±0,20 8,43±0,23 I опытная 79,25±3,05** 30,57±3,14* 2,03±0,19** 9,53±0,45** II опытная 80,66±3,35** 80,60±3,20** 2,00±0,19** 9,54±0,93* Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 Показатели вариабельности (Cv%) результатов колебались в пределах от 0,05 до 0,25% в контрольной группе (минимальны были для объема ядра миоэпителиоцита, максимальны для диаметра капилляра), от 0,09 до 0,23 в первой опытной (минимальны были для объема ядра миоэпителиоцита, максимальны для диаметра капилляра) и от 0,11 до 0,23 во второй опытной группах (минимальны были для объема ядра лактоцита, максимальны для диаметра капилляра). Коэффициент точности (Cs %) колебался от 2,7% до 10,5%, что свидетельствовало о средней точности величин. 114 Объем лактоцита в органе крольчих контрольной группы уменьшился в 0,77 раз, в первой и во второй опытных группах – в 0,8 раза. Объем ядра лактоцита во всех трех группах – в 0,8 раза. Диаметр капилляра соответственно, и в объем ядра контрольной миоэпителиальных группе в 0,47 и клеток, 0,9 раза, в первой опытной – в 0,5 и 0,92 раза, во второй – в 0,46 и 0,83 раза. Уменьшение объемов лактоцита, миоэпителиоцита свидетельствует о фазе выделения Полости большей артериальный цикл, секрета части приток секрецию в в протоковую альвеол систему запустевшие. инициировал уплощенных органа. Интенсивный новый секреторный лактоцитах и активность структур лактогематического барьера (рис. 39). А Б В 3 1 3 2 4 Г Д Е 4 2 1 3 3 1 3 3 Рис. 39. Гистоструктура молочной железы крольчих, через 27 часов после окрола. Гематоксилин и эозин. А – контрольная группа, Об.100. Ок.15; Б – первая опытная группа, Об.100.Ок.15; В – вторая опытная группа, Об.40.Ок.15. 1 – проток; 2 – альвеола; 3 – сосуды ГМЦР; 4 – нервные терминалии. Электронограмма ультратонкого среза молочной железы. Ув.х 7200. Г – контрольная группа, Д – первая опытная группа, Е – вторая опытная группа. 1 – ядро опустошенного адипоцита; 2 – ядро макрофага; 3 – ядро лактоцита; 4 – межклеточное пространство Спустя крови в через контрольной 27 часов после лактогематический группе 89% окрола барьер (рис. в 40 выход IgG молозиво А), из составил в первой опытной – 87% (рис. 40 Б), второй опытной – 86% (рис. 40 В). 115 11% 89 % А 14% 13% 87% 86% Б В Рис. 40. Доля IgG (100% – их общее количество) сыворотки крови, вышедших через лактогематический барьер в молозиво, спустя 27 часов после окрола в контрольной (А – зеленый), первой (Б – оранжевый) и второй (В – лиловый) опытных группах По сравнению с 18 часами, данный показатель в контрольной группе снизился на 1,1%, в опытных группах остался на прежнем уровне. 12,5 10,8 10,6 12 10,4 10,2 11,5 % 10 11 % 9,8 9,6 9,4 10,5 9,2 9 10 8,8 9,5 А 8,6 Контроль I опытная II опытная Б Контроль I опытная II опытная Рис. 41. Концентрация IgG в сыворотке крови (А) и молозива (Б) крольчих через 27 часов после окрола, (%) В сыворотке крови крольчих первой и второй опытных групп, концентрация IgG, соответственно, на 15%, и 17% (рис. 41 А), а в сыворотке молозива на 11% и 13% была выше показателя контрольной группы (рис. 41 Б). Сравнивая с 18 часами после окрола, в сыворотке крови крольчих контрольной группы происходило небольшое снижение концентрации иммуноглобулина на 0,1%, причем в опытных группах она не изменялась. В 116 сыворотке молозива в контрольной группе отмечали снижение на 0,6%, в первой опытной – увеличение на 0,1%, а во второй – тот же уровень. В этот период результаты корреляционного анализа показали, что структуры лактогематического барьера являются мишенью для гормонов комплекса, представленного (ФСГ, Прл, ЛГ, ПРг), причем взаимосвязь в контрольной группе (r=+0,99) немного уступает таковой в обеих опытных группах (r=+1), тогда как Е-2 является его антагонистом (r=-0,76). Объемы ядра и самого лактоцита во всех группах проявляют высокую взаимосвязь с диаметрами альвеол и капилляров и объемом ядра миоэпителиоцита (r=+1), что подтверждает сочетанность работы лактоцита, миоэпителиоцита и альвеол определяющей максимальную выработку и дальнейшее выделение секрета (прилож., табл. 50– 52). Итак, к 27 часам после окрола комплексное действие ФСГ, Прл, ЛГ и ПРг на гематотканевый барьер характеризует снижение уровня его проницаемости, в том числе и для IgG в контрольной группе. Именно в этот временной период высокая степень достоверной прямой взаимосвязи структур органа отражает специфику его цитофизиологии связанную с началом перестройки секреторного цикла лактоцита с выработки молозива на образование компонентов молока. В 36 часов после родов наблюдалось повышение концентрации Прл, ФСГ и Е-2 в сыворотке крови крольчих контрольной группы, соответственно, на 0,07%, 3,3%, 1,7%, первой опытной – на 0,04%, 1,5% и 1,25%, второй – на 0,03%, 0,8 и 0,55% (табл. 26). Таблица 26. Концентрация половых гормонов в сыворотке крови крольчих через 36 часов после окрола Группы Прл, ФСГ, ЛГ, ПРг, Е-2, животных ммЕ/л ммЕ/мл ммЕ/мл Нмоль/л Пг/мл Контрольная 80,07±5,76 1,24±0,13 0,63±0,06 2,97±0,32 8,77±0,28 I опытная 54,56±0,73** 1,34±0,01** 2,36±0,01** 1,20±0,04** 20,15±0,04** II опытная 76,22±1,33** 1,21±0,006** 1,48±0,02** 4,5±0,10** 12,82±0,40* Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 Содержание ЛГ и ПРг в контрольной группе оставалось на том же уровне, а в опытных группах показатели концентрации этих 117 гормонов повышались, соответственно, на 0,85% и 0,84% при влиянии препарата «Е-селен» и на 1,37% и 0,45% на фоне влияния препарата «Селенолин®». Как и в предыдущий период, в молочной железе продолжается снижение показателей структур, обеспечивающих проницаемость лактогематического барьера (табл. 27). Объем лактоцита в железе крольчих контрольной группы уменьшился в 0,6 раза, в 0,47 раза произошло снижение объема ядра лактоцита в органе самок контрольной группы и в 0,46 раза – в опытных группах. Таблица 27. Показатели гистоструктур молочной железы крольчих через тридцать шесть часов после окрола Группы V лактоцита V ядра Ø капилляра, V ядра м/э, 3 3 животных мкм лактоцита, мкм мкм мкм3 Контрольная 45,14±2,14 12,98±0,70 1,83±0,09 7,26±0,61 I опытная 46,88±2,71* 14,08±0,93** 2,0±0,09** 7,89±0,65** II опытная 49,39±2,64* 49,44±2,76* 2,07±0,10* 8,88±0,70* Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 Показатели вариабельности (Cv%) результатов колебались в пределах от 0,11 до 0,17% в контрольной группе (минимальны были для диаметра капилляра, максимальны для объема ядра миоэпителиоцита), от 0,11 до 0,16 в первой опытной (минимальны были для диаметра капилляра, максимальны для объемов лактоцита и ядра миоэпителиоцита) и от 0,12 до 0,16 во второй опытной (минимальны были для диаметра капилляра, максимальны для объемов ядер лактоцита и миоэпителиоцита) группах. Коэффициент точности (Cs%) колебался от 4,5% до 8,4%, что свидетельствовало низкой точности величин. У крольчих контрольной группы диаметр капилляра и объем ядра миоэпителиальных клеток снизился, соответственно, в 0,95 и 0,86 раза, в 0,98 и 0,83 раза – в первой опытной и 1,03 и 0,93 раза – во второй опытной группах. Альвеолы у крольчих числа железы второй светлых не полностью опытной группы лактоцитов, заполнены отмечали участвовавших в секретом, преобладание продуцировании 118 компонентов секрета, существенная над темными разница (рис. в 42 В, Е). Отмечается цитоморфологии органа между самками контрольной и опытных групп (рис. 42). А Б 3 В 1 4 1 6 3 3 2 5 5 Г Д 2 1 Е 2 3 2 4 Рис. 42. Гистоструктура молочной железы крольчих, через 36 часов после окрола. Гематоксилин и эозин. А – контрольная группа, Об.100. Ок.15; Б – первая опытная группа, Об.100.Ок.15; В – вторая опытная группа, Об.40.Ок.15. 1 – протоки; 2 – полость альвеолы; 3 – сосуды ГМЦР; 4 – нервные терминалии, 5 – ядра миоэпителиальных клеток; 6 – ядра лактоцитов. Электронограмма ультратонкого среза молочной железы. Ув.х 7200. Г – контрольная группа, Д – первая опытная группа, Е – вторая опытная группа. 1 – ядро светлого лактоцита; 2 – цитоплазма сетлого лактоцита; 3 – капсулированная нервная терминаль; 4 – глобула белка У самок контрольной группы в 36 часов лактации, выход IgG из крови в молозиво составил 89% (рис. 43 А), а в первой (рис. 43 Б) и второй (рис. 43 В) опытных группах, соответственно, 87% и 86%. При сравнении с 27 часами после окрола, процент выхода иммуноглобулина в контрольной и опытных группах не изменялся. В сыворотке концентрация IgG крови у (рис. 44 животных А) и молозива первой (рис. опытной 44 Б), группы, соответственно, на 15% и 12%, второй – на 17% и 13% превышала показатель контрольной группы. 119 11% 89 % А 14% 13% 87% 86% Б В Рис. 43. Доля IgG (100% - их общее количество) сыворотки крови, вышедших через лактогематический барьер в молозиво, спустя 36 часов после окрола в контрольной (А- зеленый), первой (Б- оранжевый) и второй (В- лиловый) опытных группах Сравнивая с 27 часами после родов, в сыворотке крови концентрация не изменялась, а молозива в контрольной, первой группах наблюдали снижение концентрации и второй опытных IgG, соответственно, на 0,5%, 0,2% и 0,3%. 12,5 10,6 10,4 12 10,2 10 11,5 9,8 % 11 % 9,6 9,4 10,5 9,2 9 10 8,8 9,5 А 8,6 Контроль I опытная II опытная Б Контроль I опытная II опытная Рис. 44. Концентрация IgG в сыворотке крови (А) и молозива (Б) крольчих через 36 часов после окрола (%) Данные корреляционного анализа показали, что в 36 часов с начала лактации у крольчих всех групп регистрируется высокая взаимосвязь комплекса гормонов (Прл, ФСГ, Е-2, ПРг, ЛГ) (r=+1), объема ядра и самого лактоцита с диаметром альвеол, объемом ядра миоэпителиоцита (r=+0,99) (прилож., табл. 53-55). 120 Итак, спустя 36 часов после окрола, изменение параметров проницаемости лактогематического барьера определяло динамику состава секрета, изменение выхода в него IgG, переход лактоцитов во всех группах на синтез компонентов молока и увеличение общего объема выработки секрета за счет сочетания функционирования всех структур альвеолярного комплекса молочной железы и активизации пассивного транспорта воды. В сыворотке крови крольчих контрольной группы в 45 часов после окрола концентрация Прл, ФСГ, ЛГ, и ПРг повысилась, соответственно, на 0,46%, 3,22%, 1,59%, и 4,4%, содержание Е -2 в этой группе не изменялось (табл. 28). Таблица 28. Концентрация половых гормонов в сыворотке крови крольчих через 45 часов после окрола Группы Прл, ФСГ, ЛГ, ПРг, Е-2, животных ммЕ/л ммЕ/мл ммЕ/мл Нмоль/л Пг/мл Контрольная 80,44±6,50 1,28±0,11 0,64±0,06 3,10±0,31 8,77±0,30 I опытная 54,58±0,73** 1,35±0,06* 2,38±0,01** 1,21±0,03** 20,17±0,04** II опытная 76,24±1,33** 1,22±0,01** 1,49±0,02* 4,5±0,09** 12,85±0,40* Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 В первой опытной группе концентрация Прл повысилась на ПРг 0,04%, – на ФСГ 0,83% – на и Е-2 0,75%, – ЛГ на – на 0,85%, 0,1%, во второй зарегистрировано повышение Прл на 0,03%, ФСГ на 0,83%, ЛГ на 0,67%, Е-2 на 0,23%, а содержание ПРг оставалось на том же уровне. В этот период отмечали повышение показателей объема лактоцита и объема ядра лактоцита в 1,5 раза в контрольной группе, в первой опытной, соответственно, в 1,36 и 1,56 раза, во второй – в 2 и 1,33 раза (табл. 29). Таблица 29. Показатели гистоструктур молочной железы крольчих через 45 часов после окрола Группы V лактоцита V ядра Ø капилляра, V ядра м/э, животных мкм3 лактоцита, мкм3 мкм мкм3 Контрольная 67,75±2,24 20,2±1,01 1,58±0,11 5,2±0,37 I опытная 63,81±2,07** 22,02±1,03* 1,70±0,11** 6,13±0,98* II опытная 97,97±1,85** 65,7±2,20* 1,8±0,12** 5,55±0,48* Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 121 Показатели вариабельности (Cv%) результатов в контрольной группе колебались в пределах от 0,1 до 0,16% (минимальны были для объема лактоцита, максимальны для объема ядра лактоцита), от 0,09 до 0,32 в первой (минимальны были для объема лактоцита, максимальны для объема ядра миоэпителиоцита) и от 0,08 до 0,17%, во второй опытной группах (минимальны были для объема лактоцита, максимальны для объема ядра миоэпителиоцита) группах. Коэффициент точности (Cs %) колебался от 1,9% до 16%, что свидетельствовало о низкой точности величин. Зарегистрировали снижение диаметра капилляра и объем ядра миоэпителиальных клеток, соответственно, в 0,86 и 0,72 раза в контрольной группе, в 0,85 и 0,78 раза при влиянии препарата «Е-селен» и 0,87 и 0,62 раза – на фоне действия препарата «Селенолин®». А Б В 5 2 2 1 4 3 Г 3 Д Е 5 3 1 2 4 1 5 Рис. 45. Гистоструктура молочной железы крольчих через 45 часов после окрола. Гематоксилин и эозин. А – контрольная группа, Об.40. Ок.15; Б – первая опытная группа, Об.100. Ок.15; В – вторая опытная группа, Об.40.Ок.15. 1 – протоки; 2 – полость альвеолы; 3 – сосуды ГМЦР; 4 – нервные терминалии; 5 – лактоцит; Электронограмма ультратонкого среза молочной железы. Ув.х 7200. Г – контрольная группа, Д – первая опытная группа, Е – вторая опытная группа. 1 – ядро миоэпителиоцита; 2 – вакуоли с триглицеридами; 3 – ядро адипоцита; 4 – ядро макрофага; 5 – ядро лактоцита Во второй опытной группе (рис.45В) отмечались плотно прилегающие к поверхности лактоцитов миоэпителиальные клетки. Множество крупных сосудов обменного звена, располагающихся по всей части органа, свидетельствовало об увеличении оборотности продукции секрета. 122 По истечении 45 часов после окрола процент выхода IgG из крови в молозиво в контрольной группе составил 89% (рис. 46 А), 86% – в первой (рис. 46 Б) и 86% во второй (рис. 46 В) опытных группах. 11% 89 % А 14% 14% 86% 86% Б В Рис. 46. Доля IgG (100% - их общее количество) сыворотки крови, вышедших через лактогематический барьер в молозиво, спустя 45 часов после окрола в контрольной (А- зеленый), первой (Б- оранжевый) и второй (В- лиловый) опытных группах При сравнении с 36 часами после окрола этот показатель в первой опытной группе снижался на 1,1%, тогда как в контрольной и второй опытной группах не изменялся. Концентрация IgG в сыворотке крови (рис. 47 А) крольчих первой опытной группы на 15%, а второй – на 17%, в сыворотке молозива, соответственно, на 12% и 13% была выше контрольного показателя (рис. 47 Б). 12,5 10,6 10,4 12 10,2 10 11,5 9,8 11 % % 9,6 9,4 10,5 9,2 9 10 8,8 9,5 А 8,6 Контроль I опытная II опытная Б Контроль I опытная II опытная Рис. 47. Концентрация IgG в сыворотке крови (А) и молозива (Б) крольчих через 45 часов после окрола (%) 123 В сравнении с 36 часами лактации, значительных изменений концентрации IgG в сыворотке крови не отмечали, тогда как в сыворотке молозива она снизилась на 0,2% в контрольной группе, а в первой и второй опытных группах, соответственно, на 0,5 и 0,3%. Парный корреляционный анализ показал, что в 45 часов лактации гормональная регуляция структур лактогематического барьера обусловлена высокой степенью взаимосвязи гормонального комплекса: (Прл, ПРг, ФСГ) (r=+0,99). Е - 2 выступает как его антагонист (r=- 0,83). Объемы ядра и самого лактоцита обнаруживают достоверную взаимосвязь с диаметром альвеол (r=+1). Гормональную регуляцию взаимосвязи объема ядра миоэпителиоцита, диаметра капилляра и альвеол (r=+0,9) осуществляют ЛГ (r=+0,99) и Е-2 (r=+0,97). Объем лактоцитов взаимосвязан с диаметром капилляра, объемами ядра миоэпителиоцита и лактоцита (r=+0,99) (прилож., табл. 56–58). Итак, по истечении 45 часов после окрола цитофизиологическая специфичность структур альвеолярного комплекса и гематотканевого барьера железы, обусловленные регуляцией ПРг, Прл, ФСГ подтверждают установившуюся работу железы на выработку секрета. По истечении 54 часов после окрола, соответственно, на 0,06% и 1,56%, 0,04% и 0,84%, 0,01% и 0,67% наблюдалось повышение концентрации Прл и ЛГ в сыворотке крови крольчих контрольной, первой и второй опытных группах (табл. 30). Таблица 30. Концентрация половых гормонов в сыворотке крови крольчих через 54 часов после окрола Группы Прл, ФСГ, ЛГ, ПРг, Е-2, животных ммЕ/л ммЕ/мл ммЕ/мл Нмоль/л Пг/мл Контрольная 80,49±6,55 1,28±0,11 0,65±0,06 3,01±0,31 8,78±0,30 I опытная 54,6±0,73* 1,30±0,006** 2,40±0,01** 1,21±0,03* 20,19±0,04** II опытная 76,25±1,32** 1,21±0,006** 1,50±0,01** 4,51±0,09** 12,85±0,40* Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 Концентрация ФСГ у самок контрольной группы не изменялась, а в опытных она снижалась, соответственно, на 3,7% и 0,82%. В контрольной группе снижалась концентрация ПРг, а Е-2 повышалась, соответственно, на 124 2,9% и 0,11%, концентрации ПРг, а во второй – Е-2 оставались на том же уровне. Однако в первой опытной группе регистрировали увеличении концентрации Е-2 на 0,1%, а во второй – ПРг на 0,22%. Относительно контроля в первой опытной группе уровни индексов Прл/ФСГ, Прл/ЛГ был ниже, соответственно, в 1,61 раза и 5,44 раза, во второй опытной – в 1,02 и 2,43 раза. В 54 часа лактации произошло повышение объема лактоцита в контрольной в 1,04 раза и первой опытной группе в 1,14 раза, во второй опытной – снижение в 0,77 раза (табл. 31). Таблица 31. Показатели гистоструктур молочной железы крольчих через пятьдесят четыре часа после окрола Группы V лактоцита V ядра Ø капилляра, V ядра м/э, 3 3 животных мкм лактоцита, мкм мкм мкм3 Контрольная 70,45±1,97 20,24±1,13 1,56±0,10 4,98±0,23 I опытная 73,09±2,37* 21,72±1,20* 1,76±0,14* 5,67±0,75** II опытная 75,73±2,66* 75,43±2,36* 1,79±0,17* 5,91±0,79* Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 В контрольной и во второй опытной группах показатель объема ядра лактоцита увеличился, соответственно, в один и 1,15 раза, а в первой опытной снизился в один раз. Показатели вариабельности (Cv%) результатов колебались в пределах от 0,08 до 0,27% в контрольной группе (объема лактоцита, максимальны для объема ядра миоэпителиоцита), от 0,09 до 0,26 в первой опытной (минимальны были для объема лактоцита, максимальны для объема ядра миоэпителиоцита) и от 0,08 до 0,27%, во второй опытной (минимальны были для объема лактоцита, максимальны для объема ядра миоэпителиоцита) группах. Коэффициент точности (Cs%) колебался от 2,8% до 13,4%, что свидетельствовало о низкой точности величин. Показатель диаметра капилляра в контрольной и во второй опытной группах снизился в один раз, а в первой опытной группе в 1,03 раза повысился. Зарегистрировано уменьшение объема ядра миоэпителиальных клеток в контрольной группе в 0,96 раза, во второй опытной в 0,92 раза и в 125 1,06 раза – повышение этого показателя на фоне действия препарата «Селенолин®». 3 А Б В 3 2 1 4 3 5 Г Д Е 1 1 1 2 1 Рис. 48. Гистоструктура молочной железы крольчих, через 54 часа после окрола. Гематоксилин и эозин. А – контрольная группа, Об.100. Ок.15; Б – первая опытная группа, Об.40.Ок.15; В – вторая опытная группа, Об.40.Ок.15. 1 – проток; 2 – полость альвеолы; 3 – сосуды ГМЦР; 4 – лактоцит; 5 – ядро лактоцита. Электронограмма ультратонкого среза молочной железы. Ув.х 7200. Г – контрольная группа, Д – первая опытная группа, Е – вторая опытная группа. 1 – ядро лактоцита; 2 – цитоплазма лактоцита Протоки железы расширены, заполнены секретом. В альвеолах преобладают светлые лактоциты. Ядра темных лактоцитов неправильной формы, тогда как у светлых лактоцитов она не изменялась. Применение препаратов селена давало еще более выраженную картину (рис. 48). Большое количество нервных окончаний, располагающихся около лактоцитов и гемокапилляров, свидетельствовало о роли нервной регуляции в функционировании лактогематического барьера. В 54 часа после окрола в контрольной группе (рис. 49 А) выход IgG из крови в молозиво составил 88%, 86% – в первой (рис. 49 Б) и 85% во второй (рис. 49 В) опытных группах. При сравнении с 45 часами лактации наблюдалось снижение показателя в контрольной и второй опытной группах, соответственно, на 1,1% и 1,2%. 126 12% 88 % А 15% 14% 86% 85% Б В Рис. 49. Доля IgG (100% – их общее количество) сыворотки крови, вышедших через лактогематический барьер в молозиво, спустя 54 часа после окрола в контрольной (А – зеленый), первой (Б – оранжевый) и второй (В – лиловый) опытных группах В опытных группах, показатель концентрации IgG в сыворотке крови (рис. 50 А) превышал подобный контрольной группы на 15% в первой и на 17% – во второй группе, а в сыворотке молозива на 12% в обеих группах (рис. 50 Б). По сравнению с 54 часами после окрола, существенных изменений концентрации иммуноглобулина в сыворотке крови не отмечали, однако, в сыворотке молока самок контрольной, первой и второй опытных групп этот показатель снижался, соответственно, на 0,43%, 0,4% и 0,67%. 12,5 10,6 10,4 12 10,2 10 11,5 9,8 11 % % 9,6 9,4 10,5 9,2 9 10 8,8 А 9,5 Контроль I опытная II опытная Б 8,6 Контроль I опытная II опытная Рис. 50. Концентрация IgG в сыворотке крови (А) и молозива (Б) крольчих через 54 часа после окрола (%) 127 Анализируя данные парной корреляционной взаимосвязи, отмечаем, что в 54 часа лактации диаметр альвеол проявлял высокую коррелятивную взаимосвязь с комплексом гормонов (Прл, ФСГ, Е-2, ПРг, ЛГ) (r=1), а также с объемом ядра и самого лактоцита, объемом ядра миоэпителиоцита и диаметром капилляров (r=+0,99) (прилож., табл. 59– 61). Итак, за первые 54 часа лактации самки включение в работу всех гормонов (Прл, ФСГ, Е-2, ПРг, ЛГ) на фоне активизирующегося артериального притока инициирует изменение параметров проницаемости лактогематического барьера, активизирует в лактоцитах секреторный цикл, направленный на увеличение объема вырабатываемого молока. Таким образом, временной анализ динамики морфологических показателей (характеристик) структур органа в течение первых 54 часов после окрола показал, что механизм влияния препаратов селена на лактопоэз выражается в снижении уровня индексов Прл/ФСГ и Прл/ЛГ. Это может быть обусловлено обратной взаимосвязью структур яичника с нейросекреторными клетками ядер гипоталамуса и аденотропоцитами гипофиза. Специфическое соотношение половых гормонов, факторов паракринной регуляции, особенно в первый час лактации, инициировало увеличение проницаемости лактогематического барьера железы и высокую лабильность его структур. Так, в контрольной группе в первый час после окрола при низкой концентрации селена в сыворотке крови и повышении содержания Прл и ПРг отмечали усиление притока артериальной крови, способствующее активизации работы гематотканевого барьера. На протяжении первых 27 часов постепенно увеличивалось содержание IgG в сыворотке крови, по истечении которых регистрировали плавное его снижение. Именно в 27 часов лактации регистрировали переход лактоцитов с выработки компонентов молозива на секрецию молока. При применении препарата «Е-селен» в первый час после окрола уровень содержания Прл был ниже относительно контроля. Содержание ПРг, 128 ЛГ и Е-2 повышалось. Пусковым механизмом ядерно-белкового синтеза в лактоцитах являлся Относительно снижающийся контроля индекс отмечали концентрации увеличение Прл/ФСГ. параметров структур лактогематического барьера, что особо выражалось в первые 18 часов, поскольку в это время отмечалась максимально сочетанная работа структур барьера. На фоне комплексного воздействия селена и витамина Е тенденция к перестройке лактоцитов с выработки молозива на молоко наблюдалась после 36 часов после окрола, а процент выхода IgG имел тенденцию к увеличению до 54 часов. Во второй опытной группе в первый час после окрола при повышении концентрации Прл, ЛГ, Е-2 в сыворотке крови отмечалась динамика увеличения диаметра капилляра, объема ядра и самого лактоцита, увеличение числа нервных волокон и их окончаний. Органическая форма селена перестройке пролонгирует лактоцитов реализуется явилось к 54 после усиление часам. но, белкового относительно концентрация была молоко подтверждением чему наступало выше, в лактоцитах «Селенолин®» первой к на синтеза препарата секрете тенденция молозива часов, влиянии в период, выработки ядерного IgG поскольку с 36 При концентрации молозивный после опытной снижение снижение 36 часов, группы было его плавным, не скачкообразным. Выявление особенности хронодинамики структур лактогематического барьера железы обнаружило первый, самый девятый регистрировалась регуляции и крольчих и контрольной и высокий уровень его 18 после окрола. часы ведущая роль морфофункциональных параметров повышения поступающих его проницаемости, из плазмы крови. в том В 18 опытных групп проницаемости С девяти в часов гуморальной структур числе часов и барьера для - IgG, высокая 129 взаимосвязь лактоцита, определяла капилляра, специфику барьера, цитофизиологии инициировала молозиво. миоэпителиоцита эффективный Изменение индексов и альвеолы лактогематического выход IgG концентрации в половых гормонов с высокой амплитудой колебаний было более выражено до 27 часов лактации у самок контрольной группы, в то время как влияние препаратов селена уменьшало амплитуду колебаний и периодичность этого процесса. Во всех трех группах с 18 до 27 часов отмечали стабильный характер долю с проницаемости выхода IgG генетически секреторного гематотканевого из крови в обусловленным цикла лактоцита барьера, секрет определяющий и связанный процессом с выработки перестройки компонентов молозива на молоко, реализуемым после 27 часов после окрола. В середине лактации (15 суток) в сыворотке крови крольчи х первой опытной группы концентрация селена в 2,6, во второй в 3,3 раза была выше, чем в контрольной группе (рис. 51). По сравнению с периодом родов, в контрольной, первой и второй опытных группах концентрация селена снизилась, соответственно, на 17%, 19% и 28%. 0,035 0,03 0,025 0,02 0,015 0,01 0,005 0 Контроль I опытная II опытная Рис. 51. Концентрация селена в сыворотке крови крольчих в 15 суток лактации (мкг/мл) 130 В опытных группах показатели концентрации Прл, ФСГ, ЛГ, ПРг и Е-2 превышали таковые контрольной группы, соответственно, на 0,8%, 193%, 16%, 74%, 8% в первой и на 1%, 144%, 137%, 70%, 19% во второй опытных группах (табл. 32). Таблица 32. Концентрация половых гормонов в сыворотке крови крольчих в 15 суток лактации Группы Прл, ФСГ, ЛГ, ПРг, Е-2, животных ммЕ/л ммЕ/мл ммЕ/мл Нмоль/л Пг/мл Контрольная 115,4±0,68 0,55±0,15 1,13±0,22 4,50±0,74 10,63±0,33 I опытная 116,3±1,21* 1,61±0,12** 1,31±0,23* 7,84±0,24** 11,47±0,98* II опытная 116,6±2,54* 1,34±0,10** 2,68±0,35* 7,66±0,38** 12,67±0,77* Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 По сравнению с 54 часами после окрола, в сыворотке крови самок, лактирующих в течение 15 суток, возросла концентрация Прл и ПРг в контрольной группе, соответственно, на 43% и 49,5%, в первой опытной – на 113% и 548%, во второй – на 53% и 70%. Концентрация ФСГ в контрольной группе снижалась на 57%, а в первой и второй опытных группах повышалась на 24% и 11%. В середину лактации концентрация ЛГ и Е-2 в сыворотке крови животных контрольной группы была выше, чем в 54 часа лактации, соответственно, на 74% и 21%, в первой опытной группе – ниже на 45% и 43%. Во второй опытной группе концентрация Лг на 79% была выше, а Е-2 на 1,4% ниже. В крови животных первой опытной группы количественное содержание эритроцитов и лейкоцитов было выше, чем у крольчих контрольной группы, соответственно, на 3% и 1,7%, второй группы – на 6,2% и 10,3% (прилож., табл. 5). Сравнивая контрольной с периодом группы родов, количественное в крови лактирующих самок содержание эритроцитов и лейкоцитов было выше, соответственно, на 1,6% и 17,3%. В первой и второй опытных группах содержание эритроцитов снижалось, соответственно, на 1,7% и 9%. Содержание лейкоцитов в крови крольчих первой опытной группы было выше на 0,94%, второй – ниже на 2%. 131 Содержание гемоглобина и общего белка в крови самок первой опытной группы, соответственно, на 5,8% и 4%, во второй – на 12% и 4,7% было выше, в отличие от контрольной группы. По сравнению с предыдущим периодом, у лактирующих крольчих всех групп происходило повышение концентрации гемоглобина и общего белка, соответственно: в контрольной группе – на 2% и 32%, в первой опытной – на 1,3% и 21,6%, во второй опытной группе – на 2,7% и 20%. В крови самок первой опытной группы содержание альбуминов было выше на 3%, а во второй – ниже на 2,8% показателя контрольной группы. Содержание α–, β–, γ– глобулинов в первой опытной группе было выше, соответственно, на 1,5%, 4,4% и 2%, по сравнению с контрольной группой, во второй опытной группе показатель концентрации α– глобулина был ниже на 1%, а β– и γ– глобулина выше, соответственно, на 4,1% и 1,5%. При сравнении с периодом родов, в лактацию отмечали повышение содержания альбуминов в контрольной и первой опытной группах, соответственно, на 1,3% и 0,25%, во второй опытной группе – снижение на 4%. Содержание α– и γ– глобулинов во всех группах, соответственно, снижалось на 12,7% и 27,5% - в контрольной, на 12,6% и 32,5% – первой опытной, на 15,2% и 35,3% - второй опытной группах. С содержанием β– глобулинов картина была несколько иная: в контрольной и второй опытной группах наблюдалось повышение этого показателя, соответственно, на 5,8%, 2,7%, а в первой опытной – снижение на 1,6%. Количественное содержание кальция и фосфора в сыворотке крови животных первой опытной группы на 9,4% и 5,6%, второй – на 15,5% и 4,9% было выше контрольных показателей. Сравнивая их с показателями крови самок в период родов, во всех группах лактирующих самок было отмечено снижение содержания кальция и фосфора, соответственно, на 11,8%, 23,5% в контрольной группе, на 5,3% и 25,2% в первой и на 4% и 28,6% – во второй опытных группах. 132 По сравнению с контрольной группой, в сыворотке крови крольчих первой опытной группы содержание ферментов АСТ и АЛТ было ниже, соответственно, на 48% и 32%, во второй – на 45,8% и 24%. Сравнивая с периодом родов, в лактацию отмечалось повышение этих показателей у крольчих контрольной группы, соответственно, на 33% и 14%. В первой и второй опытных АСТ, соответственно, АЛТ на группах на 9,7% организм отмечалось на и 11% 15%. животных снижение и 13% Отсутствие подтверждал и значения повышение токсичного показатель эффекта коэффициента Ритиса в переделах нормы. В середине групп имела находилась молочная максимальную в расширение лактации периоде железа секреторную наивысшего внутридольковых пика и животных всех активность и лактации. Отмечалось междольковых протоков за счет заполнения их секретом (рис. 52-54, табл. 32 ). В (рис. молочной 52) рядом железе с крольчих сосудами трабекулах встречались адипоцитов. Однако, контрольной в соединительнотканных единичные самый группы большой или группы объем органа занимал паренхиматозный компонент. А Б 2 В 1 6 4 2 5 3 Рис. 52. Гистоструктура молочной железы крольчих контрольной группы в 15 суток лактации. Гематоксилин и эозин (А,Б); Толуидиновый синий (В). Об.10 Ок.15 (А); Об.40.Ок.15 (Б); Об. 100.Ок.15 (В). 1 – железистые дольки; 2 – протоки; 3 – полости альвеол; 4 – сосуды ГМЦР; 5 – терминаль нерва, с отходящим от нее нервным волокном; 6 – ядра миоэпителиальных клеток В дольках железы недифференцированных визуализировались эпителиоцитов. Вокруг скопления долек 133 организовывалась специфическая мелкопетлистая сеть сосудов микроциркуляторного русла. А Б В 7 4 3 1 6 2 5 Рис. 53. Гистоструктура молочной железы крольчих первой опытной группы в 15 суток лактации. Гематоксилин и эозин (А, Б); Толуидиновый синий (В). Об.10 Ок.15 (А); Об.40.Ок.15 (Б); Об. 100.Ок.15 (В). 1 – железистые дольки; 2 – стенка протока; 3 – полость протока; 4 – сосуды ГМЦР; 5 – нервные терминалии; 6 – миоэпителиальная клетка; 7 – полость альвеолы, заполненная секретом В опытных группах весь объем составляла клеток не долек и выявлено. масса гетерохронно в (рис. 53, 54) железы, присутствие Объем молочной соответствии железистая жировых сформированных железы с (холмы) интенсивностью ткань альвеол, увеличивались секреторного цикла и объемом синтезируемого секрета. А Б 3 2 В 6 4 4 1 5 Рис. 54. Гистоструктура молочной железы крольчих второй опытной группы в 15 суток лактации. Гематоксилин и эозин (А, Б); Толуидиновый синий (В). Об.10 Ок.15 (А); Об.100.Ок.15 (Б); Об. 100.Ок.15 (В). 1 – железистые дольки; 2 – протоки; 3 – полость альвеол с секретом; 4 – нервная терминаль; 5 – миоэпителиальные клетки; 6 – гемокапилляр Показатели вариабельности (Cv %) результатов колебались в пределах от 0,05 до 1,89%: в контрольной группе (минимальны для диаметра междолькового протока, максимальны для диаметра вены), от 0,06 до 0,14% в первой (минимальны для диаметров артерии и вены, максимальны для диаметра лактоцита) и от 0,05 до 0,15% во второй опытных (минимальны 134 для диаметра внутри- и междолькового протоков, максимальны для диаметра нервного пучка) группах. Таблица 33. Показатели гистоструктур молочной железы крольчих в период лактации (мкм) Показатели Группы животных Контрольная 69,80±3,35 артериолы 102,7±1,94 собирательной венулы 21,24±1,15 нервного пучка 424,19±29,57 железистой дольки 25,22±0,96 альвеолы 92,73±1,65 междолькового протока 46,26±1,50 внутридолькового протока 7,73±0,24 лактоцита Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 I опытная II опытная 74,35±1,51* 109,5±2,25* 21,59±1,09** 433,77±22,05** 29,78±1,48* 99,7±2,32* 45,63±1,04* 9,30±0,46* 76,72±1,63* 114,45±2,61* 22,05±1,24* 450,56±22,26* 30,36±1,12** 104,00±1,82** 47,84±0,91** 9,77±0,30** Коэффициент точности (Cs%) колебался от 1,75 до 5,62%, что свидетельствует о низкой точности величин (табл. 33). При проведении парного корреляционного анализа между структурами молочной железы и концентрациями гормонов у крольчих контрольной группы выявлены максимальные положительные взаимосвязи: концентрации ЛГ с объемом ядра лактоцита с (r=+0,99), а также объемами альвеолы, лактоцита ЛГ (r=+0,96). Обнаружена максимально отрицательная взаимосвязь объемов лактоцита и альвеолы с концентрацией Е-2; диаметра протока с концентрацией Прл (r=-0,99); массы молочной железы с концентрацией ФСГ (r=-0,98) (прилож., табл. 62). В первой опытной группе зарегистрированы максимально положительные связи: диаметра миоэпителиальной клетки с массой молочной железы и концентрацией ПРг (r=+0,99); объема ядра лактоцита с концентрацией Прл (r=+0,98); концентрации селена и ЛГ(r=+0,95). Отмечена максимально отрицательная взаимосвязь: диаметра дольки с массой органа, диаметром миоэпителиоцита и концентрацией ПРг (r=-0,99) (прилож., табл. 63). Во второй опытной группе максимальная положительная связь зарегистрирована между диаметром артерии и концентрацией ФСГ; 135 объемом ядра лактоцита и концентрацией Прл; концентрацией селена в сыворотке крови и объемами ядра и самого лактоцита; массой железы и объемом лактоцита (r=+0,99) (прилож., табл. 64). Максимальная отрицательная взаимосвязь выявлена между диаметром протока и концентрацией ПРг; диаметрами протока и дольки (r=-0,99). Таким образом, в середине лактации при низкой концентрации селена в сыворотке крови крольчих контрольной группы создается специфическое соотношение концентрации половых гормонов при повышении индекса Прл/ФСГ и снижения – Прл/ЛГ. Недостаток селена не препятствует массовой овуляции и образованию циклических желтых тел, что способствует повышению концентрации ПРг в сыворотке крови. В молочной железе отмечали активный приток крови, ритмичный характер секреторных циклов лактоцитов, изменение объема альвеол, выявляли зависимость интенсивности функционирования миоэпителиоцитов от концентрации селена в сыворотке крови, интенсивное сокращение протоков, обеспечивающее опорожнение системы. В первой опытной группе механизм влияния концентрации селена и витамина Е инициировал повышение индексов концентрации Прл/ФСГ и Прл/ЛГ. При этом в 15 суток лактации в сыворотке крови самок регистрировалось высокое значение концентрации ПРг (увеличение в 6,48 раз) и снижение в два раза концентрации эстрогенов. По сравнению с контролем, кровеносные сосуды в дольках в меньшей степени были подвержены регуляции, отмечалось снижение интенсивности кровотока. При этом активизировались секреторные циклы лактоцита и функция миоэпителия, а объем лактоцита, диаметр протока и масса железы, в отличие от объема альвеол и долек, не проявляли взаимосвязи с концентрациями гормонов и другими структурами системы. Во второй опытной группе на фоне влияния органического селена увеличивался индекс концентрации Прл/ФСГ и снижался индекс Прл/ЛГ, 136 при этом в сыворотке крови сохранялось высокое значение концентрации Прг и эстрогенов. Механизм воздействия органического селена на функционирование изменении гипоталамо-гипофизарной секреции половых гормонов, системы проявлялся в гормонально-паракринных взаимосвязей, диаметра протоков. Это, в целом, так характеризовало процессы: «включения» секреторного цикла, выведения лактоцитами синтезируемого секрета (ретракция миоэпителия) и наполнения альвеол, увеличения массы железы и запуск ретракции миоцитов протоков как регулируемых, чего не наблюдали при действии «Е-селена». Так же, как и в случае с «Е-селеном», интенсивность притока крови и степень наполнения кровеносных сосудов в дольках не были регулируемыми (за исключением влияния концентрации ФСГ). 137 3.6. Молочная продуктивность и сравнительный состав молозива и молока крольчих при влиянии препаратов «Е – селен» и «Селенолин®» Материнский инстинкт самки – генетически запрограммированный процесс, определяющийся необходимостью выкармливания воспроизведенного ею на свет потомства. Но молочная железа не каждой самки продуцирует необходимый объем и состав молозива→молока. Для полноценного развития потомства особо существенна эта проблема в многоплодных пометах. На молочную продуктивность самки влияют уровень кормления и условия содержания, а так же степень секреторной активности ее молочной железы. При сравнении молочной продуктивности и состава секрета крольчих (табл. 34) выявлено, что до кормления среднее значение массы одного крольчонка в трехдневном возрасте из помета самки первой опытной группы на 12%, второй опытной - на 13% было выше контрольной группы. После кормления самками крольчат регистрировалась та же разница массы потомства первой и второй опытных групп относительно контроля. Таблица 34. Сравнительные характеристики молочной продуктивности крольчих контрольной и опытных групп Группы Показатели Масса одного Масса одного Масса молозива, Масса секрета, животных крольчонка до кормления, (г) Контрольная 122,98 ±0,24 I опытная 138,11±0,38** II опытная 139,10±0,11** Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 Средняя масса крольчонка после кормления, (г) потребленного одним крольчонком, (г) выделенного самкой за одно кормление, (г) 140,61±0,31 157,29±0,40** 159,13±0,21** 17,63±0,09 19,17±0,09* 19,76±0,21* 141,3±0,72 153,4±0,75** 158,16±1,70* молока, высосанного одним крольчонком, в каждой из опытных групп на 12% превышала контрольный показатель. Наиболее был у высоким самок второй показатель опытной молочной группы, продуктивности который на 12% превышал аналогичный показатель самок контрольной группы. 138 Относительно контрольной группы молочная продуктивность самок первой опытной группы была выше на 8,6%. Таблица 35. Биохимический состав молозива крольчих контрольной и опытных групп Группы Показатели животных Жир, % Белок, % СОМО, % Плотность, °А Контрольная 10,87±0,17 14,26±0,35 20,95±0,23 44,22±0,24 I опытная 11,77±0,22* 15,15±0,14** 22,00±0,33** 46,01±0,20** II опытная 12,93±0,20* 15,87±0,07** 23,50±0,57* 46,82±0,16** Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 В первые крольчих сутки первой после и окрола второй содержание опытных жира групп в молозиве на 8,3% и 19% превышало показатель контрольной группы (табл. 35). У крольчих первой опытной группы содержание в молозиве белка на 6%, у самок второй опытной группы на 11,3% было больше, чем в контрольной группе. Рис. 55. Электронограмма ультратонкого среза молочной железы крольчихи контрольной группы в первые сутки лактации. Ув х 7200. 1 – ядра темных лактоцитов, 2 – пролонгированный синтез липидных гранул, 3 – ядро светлого лактоцита Показатели концентрации этих веществ в молозиве проявляли высокую и положительную депонирования взаимосвязь белковых с и процессами липидных синтеза гранул 139 в цитоплазме светлых лактоцитов, преобладающих в молочной железе во второй опытной группе (рис. 57). Рис. 56 Электронограмма ультратонкого среза молочной железы крольчихи первой опытной группы в первые сутки лактации. Ув х 7200. 1 – гранула казеина, 2 – липидные гранулы, 3 – ядра светлых лактоцитов У крольчих обеих опытных групп (рис. 56, 57), в сравнении с контрольной (рис. 55), активизировался трансмембранный переход компонентов молозива в цитоплазму соседнего лактоцита. Рис. 57. Электронограмма ультратонкого среза молочной железы крольчихи второй опытной группы в первые сутки лактации. Ув х. 10000. 1 – полость альвеолы, 2 – накопление гранул казеина, 3 – ядро светлого лактоцита, 4 – цитоплазма соседнего лактоцита, 5 - гранулы липидов, 6 – микроворсинки на поверхности лактоцита 140 При этом в цитоплазме клетки «донора» нарушалась целостность оболочки везикулы казеина. Затем из клетки цитоплазмы «реципиента» секреция мелких клетки «донора» в осуществлялась везикул липидов и цитоплазму трансмембранная белка с дальнейшим формированием крупных гранул казеина и вакуолей триглициридов. У крольчих активности первой транспорта опытной группы (рис. компонентов 56) степень секрета немного уступала таковому во второй группе (рис. 57), что обусловливало разницу в содержании жира и белка в составе молозива. В контрольной группе (рис. 55) этот процесс протекал менее активно, группы значение нежели в опытных группах. В молозиве самок первой опытной СОМО на 5%, второй на 12% было больше, чем в контрольной. Плотность групп, молозива от соответственно, самок на первой 4% и 6% и второй опытных превышала подобный контрольный (табл. 34). В середине лактации (15 суток) содержание жира в молоке крольчих первой опытной группы на 4%, второй – на 12,6% было выше контрольного значения (табл. 36). Таблица 36. Биохимический состав молока крольчих контрольной и опытных групп Группы Показатели животных Жир, % Белок, % СОМО, % Плотность, °А Контрольная 9,78±0,21 13,86±0,14 18,72±0,11 42,82±0,21 I опытная 10,17±0,13** 14,34±0,25* 20,14±0,33* 44,08±0,13** II опытная 11,01±0,13* 15,04±0,13** 21,15±0,34** 45,23±0,30** Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 Содержание опытной группы, белка в молоке соответственно, на крольчих 3% и первой 8% и было второй больше, по сравнению с контрольной группой. У крольчих контрольной и опытных групп в середине лактации в 1 мл молока, в сравнении с молозивом, отмечалось 141 снижение количества увеличением жира и общего белка, что объема было обусловлено выделяемого секрета лактоцитов молочной за счет активизации пассивного транспорта воды. Однако железы в цитоплазме одновременно секреторной с активности, светлых этим на регистрировалось что повышение указывало увеличение количества белковых и липидных гранул (рис. 58, 59, 60). Рис.58. Электронограмма ультратонкого среза молочной железы крольчихи контрольной группы в середину лактации. Ув. х 7200. 1 – адипоцит, 2 – ядра эпителиоцитов протоков, 3 – ядро темного лактоцита, 4 – цитоплазма темного лактоцита Показатели содержания положительно и жира коррелировали депонирования и белка с белковых и в молоке высоко процессами липидных синтеза гранул в цитоплазме секреторных клеток альвеол. Трансмембранный фоне по влияния сравнению время во транспорта переход препаратов с селена контрольной второй (рис. группой опытной компонентов компонентов группе секрета 59, молока 60) (рис. шел 58). (рис.60) превышала на активнее, В то же активность таковую у крольчих первой опытной группы (рис. 59). 142 Рис. 59. Электронограмма ультратонкого среза молочной железы крольчихи первой опытной группы в середину лактации. Ув. х 10000. 1 – гранулы казеина, 2 – транспорт гранул казеина, 3 – ядро темного лактоцита, 4 – ядро светлого лактоцита Значение СОМО в молоке самок первой опытной группы на 7,6%, второй опытной группы на 13% было выше контрольной цифры. Плотность молока от самок первой опытной группы на 3%, второй на 5,6% была выше относительно контроля (табл. 35). Рис. 60. Электронограмма ультратонкого среза молочной железы крольчихи второй опытной группы в середину лактации. Ув. х 7200. 1 – трансмембранный транспорт веществ, 2 – гранулы казеина, 3 – микроворсинка на поверхности светлого лактоцита, 4 – гранулы триглицеридов, 5 – цитоплазма темного лактоцита, 6 – ядро темного лактоцита, 7 – ядро светлого лактоцита 143 В единице объема молозива (в первые сутки лактации) содержание IgG было выше, чем что связано с барьера молозиво и и в молоке высокой активным в середину проницаемостью транспортом максимально лактации высокими (табл. 5), лактогематического веществ из значениями крови в концентрации иммуноглобулина в сыворотке крови (рис. 61). 12 10 8 6 4 II опытная 2 I опытная 0 Контроль молозиво молоко Рис. 61. Сравнительные показатели содержания IgG в молозиве и молоке крольчих контрольной и опытных групп (%) Содержание IgG в молозиве крольчих первой и второй опытных групп, соответственно, на 11% и 12% было выше, чем в контрольной группе. В середине лактации в молоке крольчих первой опытной группы относительно контроля содержание иммуноглобулина на 14%, во второй – на 32% было выше (рис. 61). В молоке самок контрольной, первой и второй опытных групп, концентрация IgG, соответственно, на 40%, 38% и 29% была ниже, чем в молозиве. Таблица 37. Сравнительные показатели содержания селена в крови, молозиве и молоке крольчих контрольной и опытных групп (мкг/мл). Группы Содержание селена, (мкг/мл) животных Сыворотка крови Молозиво Молоко Контрольная 0,01±0,0006 0,007±0,0003 0,005±0,0006 I опытная 0,026±0,0009** 0,019±0,0006** 0,013±0,0006* II опытная 0,033±0,001** 0,026±0,0006** 0,020±0,0009** Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 144 По сравнению с контрольной группой, содержание селена в сыворотке крови крольчих первой опытной группы было больше в 2,6 раза, а второй опытной в 3,3 раза (табл. 37). У крольчих первой и второй опытных групп относительно контроля концентрация селена в молозиве была больше, соответственно, в 2,83 и 3,88 раза, в молоке, соответственно, в 2,6 и 3,6 раза. Таким группе образом, влияние относительно препарата контроля «Е-селен» в первой способствовало опытной повышению содержания селена в сыворотке крови, молозива и молока, увеличению живой массы новорожденных крольчат; повышению молочной продуктивности самки. Вследствие увеличения активности транспорта компонентов секрета, в молозиве и молоке повысилось содержание жира, белка, СОМО, увеличилась плотность секрета. В сыворотке крови, а также в молозиве→молоке увеличилось содержание IgG. На фоне применения препарата «Селенолин®» концентрация селена в сыворотке опытной крови, молозива и молока была группе, в результате новорожденных крольчат, продуктивности крольчих. опытной группы концентрации IgG по более отмечали высокие Молозиво содержанию имели чего выше, чем и жира, превосходство в первой большую показатели молоко белка, над молочной крольчих СОМО, массу второй плотности, таковыми секрета крольчих первой опытной группы. 145 3.7. Особенности гистофизиологии железы при действии препаратов селена в период отъема и в постлактационную инволюцию Несмотря на то, что первые признаки инволюторных изменений в органе отмечены в середине лактации, только после отъема крольчат от самки происходит полное завершение лактопоэза, когда включаются механизмы, приводящие орган в состояние постлактационной инволюции. Этот процесс находится под соответствующим гормональным контролем факторов паракринной регуляции и является заключительным этапом репродуктивного цикла. 3.7.1. Молочная железа в период отъем а В отъем, завершение лактации сопровождалось перестройкой органа и замещением железистой ткани жировой. В этот период показатель концентрации селена в сыворотке крови самок первой опытной группы был выше показателя контрольной группы в два, второй в 2,6 раза (рис. 62). 0,025 0,02 0,015 0,01 0,005 0 Контроль I опытная II опытная Рис. 62. Концентрация селена в сыворотке крови крольчих в период отъема (мкг/мл) В период отъема, по сравнению с периодом лактации, в сыворотке крови крольчих контрольной, первой и второй опытных групп происходило снижение концентрации селена, соответственно, на 10%, 31% и 27%. 146 На фоне влияния селенсодержащих препаратов регистрировалось повышение концентрации половых гормонов в сыворотке крови крольчих (табл.38), а именно: в первой и второй опытных группах, соответственно, концентрации Прл - на 3,8% и 5%, ФСГ – на 163% и 282%, ЛГ - на 367% и 420%, ПРг – на 43,6% и 44%, Е-2 - на 3% и 17%. Таблица 38. Концентрация половых гормонов в сыворотке крови крольчих в период отъема Группы Прл, ФСГ, ЛГ, ПРг, Е-2, животных ммЕ/л ммЕ/мл ммЕ/мл Нмоль/л Пг/мл Контрольная 100,2±3,45 0,38±0,03 0,30±0,03 2,02±0,06 36,95±2,40 I опытная 103,8±2,22** 1,00±0,12* 1,40±0,03** 2,90±0,07* 38,10±2,22* II опытная 105,0±3,12* 1,45±0,05** 1,56±0,04** 2,91±0,05** 43,17±1,42** Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 По сравнению с лактирующими самками, в период отъема происходило снижение концентрации Прл в сыворотке крови самок контрольной, первой и второй опытных групп, соответственно, на 13%, 11% и 10%, а ПРг - на 55%, 63% и 62%. Концентрация ФСГ в контрольной и первой опытной группах, соответственно, на 31%, и 38% была ниже, а во второй опытной – на 8% выше показателей периода лактации, тогда как ЛГ – ниже на 73% и 42%, соответственно, в контрольной и второй опытной группах; в первой опытной группе этот показатель был выше такового периода лактации на 7%. В контрольной, первой и второй опытных группах концентрация Е-2 была выше, соответственно, на 248%, 232% и 241%. При влиянии селенсодержащих препаратов увеличивалось количественное содержание эритроцитов и лейкоцитов в крови животных первой опытной группы на 15% и 2,3%, во второй – на 11% и 6%, по сравнению с контрольной группой (прилож., табл. 6). Сравнивая с лактацией, в крови крольчих контрольной группы в период отъема отмечалось повышение содержания как эритроцитов, так и лейкоцитов, соответственно, на 8,4% и 3,1%, в первой опытной – на 21% и 4%, а во второй опытной – повышение количественного содержания эритроцитов на 14%, но на 1% снижение содержания лейкоцитов. 147 Содержание гемоглобина и общего белка в первой опытной группе, соответственно, – на 28% и 9%, во второй – на 24% и 10% было выше, чем в контрольной группе. В отличие от периода лактации, к отъему содержание гемоглобина в контрольной, первой и второй опытных группах было выше, соответственно, на 18%, 28% и 24%, а общего белка – ниже на 10% в контрольной и второй опытной группе, на 9% – в первой опытной группе. Содержание альбуминов, α–, β–, γ– глобулинов в крови самок первой опытной группы, соответственно, на 0,7%, 0,5%, 0,54% и 2,5%, во второй – на 1%, 0,5%, 0,4% и 2,5%, было выше, чем в контрольной группе. По сравнению с лактацией, в отъем регистрировали повышение содержания альбуминов, α– и γ– глобулинов в контрольной группе, соответственно, на 18%, 15%, и 7%, в первой опытной группе – на 15%, 14%, и 7,5%, во второй – на 16%, 17%, и 9%. Содержание β– глобулинов снижалось на 3% в контрольной группе, на 6% – в обеих опытных группах. Содержание кальция в сыворотке крови животных первой опытной группы на 5,5%, второй – на 14% было больше контрольного показателя. Содержание фосфора в обеих опытных группах на 4,1% было выше, показателя контрольной группы. При сравнении их с показателями крови лактирующих самок, было отмечено повышение содержания как кальция, так и фосфора, соответственно, на 22% и 2,8% в контрольной группе, на 18% и 1,3% в первой и на 20% и 2% во второй опытных группах. Количественное содержание ферментов АСТ в сыворотке крови крольчих первой опытной группы было выше, чем в контрольной группе на 2%, а во второй – на 16%, а АЛТ в первой опытной группе оставалось на том же уровне, во второй было выше контрольного показателя на 8%. Показатель коэффициента Ритиса у самок всех групп был в переделах нормы. В железе крольчих контрольной группы (рис. 63) отмечали уменьшение объема железистых долек и альвеол, обусловленное изменением 148 секреторных циклов лактоцитов, направленным на реабсорбцию секрета из полости альвеол, лактоциты находились на стадии деградации. По периферии железистых долек формировалась специфическая мелкопетлистая сеть сосудов гемомикроциркуляторного русла. Отмечали образование одиночных адипоцитов. А Б В 3 4 2 1 5 6 Рис. 63. Гистоструктура молочной железы крольчих контрольной группы в период отъема. Гематоксилин и эозин. Об.10 Ок.15 (А); Об.40.Ок.15 (Б); Об. 100.Ок.15 (В). 1 – железистые дольки; 2 – протоки; 3 – полость альвеол с секретом; 4 – нервные терминалии с отходящими от них волокнами; 5 – миоэпителиальные клетки; 6 – сосуды ГМЦР В опытных группах (рис. 64, 65) железистые дольки по объему превосходили таковые контрольной группы. Гетерохронное нарушение структурной организации значительной части альвеол проявлялось в утрате геометрически правильной формы и истончении стенок. Деградация лактоцитов проявлялась в вакуолизации цитоплазмы одних клеток, что является одним из признаков аппоптоза, другая часть лактоцитов подвергалась атрофии. А 1 Б В 3 3 2 4 5 Рис.64. Гистоструктура молочной железы крольчих первой опытной группы в период отъема. Гематоксилин и эозин. Об.10 Ок.15 (А); Об.40.Ок.15 (Б); Об. 100.Ок.15 (В). 1 – железистые дольки; 2 – соединительнотканная трабекула; 3 – полость альвеол с секретом; 4 – лактоциты с базофильными ядрами; 5 – сосуды ГМЦР Полость альвеол с небольшим количеством секрета инфильтрировалась клетками лимфоидного ряда. Вокруг отдельных альвеол отмечали разрастание сети капилляров и посткапиллярных венул. 149 Междольковые соединительнотканные трабекулы разрастались интенсивнее в первой опытной группе. А Б В 5 4 5 2 1 3 6 Рис. 65. Гистоструктура молочной железы крольчих второй опытной группы в период отъема. Гематоксилин и эозин. Об.10 Ок.15 (А); Об.40.Ок.15 (Б); Об. 100.Ок.15 (В). 1 – железистые дольки; 2 – соединительнотканная трабекула; 3 – полость альвеол с секретом; 4 – нервная терминаль с отходящим от нее отростком; 5 – сосуды ГМЦР; 6 – ядра миоэпителиальных клеток В органе самок второй опытной группы (рис. 65) отмечали значительное отставание процесса деградации паренхиматозного компонента органа от контрольной (рис. 63) и первой опытной групп (рис. 64). А Б 3 В 3 1 2 1 4 Рис. 66. Электронограмма ультратонких срезов молочной железы крольчих в период отъема. (А) Контрольная группа, Ув. х 4800; (Б) Первая опытная группа, Ув. х 7200; (В) Вторая опытная группа Ув. х 7200. 1 – апоптозные тела лактоцитов, 2 – вакуоль с триглицеридами, 3 –вакуолизация цитоплазмы, 4 – ядро лактоцита В цитоплазме дегенерирующих лактоцитов всех групп (рис. 66), причем в контрольной группе этот процесс более выражен (рис. 66 А), отмечали образование вакуолей и лизис органоидов, характерное перераспределение хроматина и нарушение целостности кариолеммы. Показатели вариабельности (Cv%) результатов колебались в пределах от 0,05 до 0,22% в контрольной группе (минимальны для диаметра вены, максимальны для диаметра железистой дольки), от 0,06 до 0,15% – в первой (минимальны для диаметров лактоцита и междолькового протока, максимальны для диаметра нервного пучка) и от 0,05 до 0,16% во 150 второй опытных (минимальны для диаметров внутри- и междолькового протоков, максимальны для диаметра нервного пучка) группах (табл. 39). Таблица 39. Показатели гистоструктур молочной железы крольчих в период отъема (мкм) Показатели Группы животных Контрольная 68,03±3,41 артериолы 101,02±1,86 собирательной венулы 20,65±1,18 нервного пучка 401,09±33,22 железистой дольки 24,35±1,00 альвеолы 91,75±1,84 междолькового протока 45,72±1,50 внутридолькового протока 5,41±0,31 лактоцита Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 I опытная II опытная 72,80±2,25* 104,63±2,56* 21,22±1,24** 423,08±21,52* 28,65±1,4* 98,56±2,09* 45,60±1,13* 8,39±0,19** 75,59±1,65** 112,87±2,29** 21,72±1,35** 444,87±20,73* 29,80±1,16* 102,66±1,94* 47,30±0,84** 9,14±0,30** Коэффициент точности (Cs%) колебался от 1,84 до 8,28%, что свидетельствует о низкой точности величин. Проведя парный корреляционный анализ, у крольчих контрольной группы между структурами молочной железы и концентрациями гормонов выявлены диаметров максимальные миоэпителиоцита и положительные нерва между взаимосвязи собой, а также концентрацией ЛГ (r=+0,99); массы молочной железы с концентрацией ФСГ; объема ядра миоэпителиоцита с концентрацией ЛГ (r=+0,98). Обнаружена максимально отрицательная взаимосвязь массы молочной железы с концентрацией ПРг; объема ядра лактоцита с концентрацией ЛГ; диаметра вены с концентрацией Прл; объема ядра лактоцита с миоэпителиальной клеткой и диаметром нерва (r=-0,99) (прилож., табл. 65). В первой опытной группе зарегистрированы максимально положительные связи диаметра протока с концентрациями Прл, ФСГ, ПРг, ЛГ и Е-2 и селена, объемами ядра и самого лактоцита; диаметра миоэпителиоцита с массой молочной железы, диаметром сосуда венозного звена и объемом альвеолы (r=+1); объема ядра и самого лактоцита с концентрациями ФСГ и ПРг (r=+0,99). 151 Отмечена максимально отрицательная взаимосвязь диаметра миоэпителиоцита с концентрациями Прл, ФСГ, ПРг, ЛГ и Е-2 и селена, объемами ядра и самого лактоцита диаметром протока; последнего с массой железы, диаметрами вены, нерва и миоэпителиальной клетки, а также объемами альвеол и ядра миоэпителиоцита (r=-1); концентрации ПРг с объемом ядра миоэпителиоцита; массы органа с концентрацией Прл (r=-0,99) (прилож., табл. 66). Во второй опытной группе максимальная положительная связь зарегистрирована между диаметром вены и концентрациями ЛГ и Е-2; объемом лактоцита, диаметром миоэпителиальной клетки и концентрацией Прл (r=+0,99). Максимальная отрицательная взаимосвязь выявлена между объемом ядра миоэпителиоцита и массой молочной железы (r=-0,99), а также диаметром протока (r=-0,98); объемом альвеолы и концентрацией ЛГ (r=-0,98) (прилож., табл. 67). Таким образом, у самок контрольной группы в период отъема крольчат механизм действия низкого содержания селена в сыворотке крови активизировал выработку Е-2, существенное снижение концентрации ЛГ, ФСГ и ПРг и незначительное – Прл. Это способствовало уменьшению артериального притока, реорганизации секреторного цикла в лактоците, направленной на реабсорбцию компонентов молока, ингибированию нейрогенеза и функции миоэпителиоцитов, уменьшению объема альвеол и массы молочной железы, причем, наибольшее влияние на эти процессы оказывало снижение концентрации ПРг и ЛГ. В первой опытной группе на фоне значительного присутствия в сыворотке крови неорганического селена и витамина Е отмечали увеличение продукции ЛГ и снижение концентрации ФСГ и ПРг, что обусловило снижение активности притока крови, «торможение» ядерного белкового синтеза лактоцитов синтетической (выключение активности их секреторного цикла), цитоплазмы с повышение одновременным 152 снижением в ее объема. состоянии умеренное При миоэпителиоциты находились Также происходило альвеол, приостановка иннактивации. уменьшение нейрогенеза. этом На объема фоне «Е-селена» отмечалась задержка старта инволюторных процессов. Во второй опытной «Селенолин®» препарата соотношение в Прл, Масса молочной имели тенденцию и ЛГ, ПРг к так венозных стимулирования альвеол цикл, характеризующийся и изгнание отмечали активность секрета «Селенолин®» в в крови изменялось в снижении на звеньев Е-2. протока фоне возрастания со стороны как активно и диаметр микроциркуляторного нейрогенеза. При этом протекающий в секреторный продукцией компонентов миоэпителиоцитов, осуществляющих протоковую молочной ФСГ альвеол, уменьшению и применения повышении объем лактоцитах секрета, и кровоснабжения артериальных, фоне выражающееся железы, интенсивности на сыворотке гормонов, концентрации русла группе железе систему. Влияние способствовало препарата пролонгированию процесса лактации. 3.7.2. Молочная железа в период постлактационной инволюции Показатель инволюирующих концентрации самок первой селена в опытной сыворотке группы – крови в два, второй – в три раза был выше показателя контрольной группы (рис. 67). По первой сравнению опытной с периодом группах она отъема, была в ниже, контрольной и соответственно, на 11% и 5,5%, а во второй опытной оставалась на том же уровне. 153 0,025 0,02 0,015 0,01 0,005 0 Контроль I опытная II опытная Рис. 67. Концентрация селена в сыворотке крови крольчих в период инволюции (мкг/мл) В сыворотке крови крольчих первой и второй опытных групп, по сравнению с контрольной, концентрация Прл, соответственно, на 6,6% и 11%, была ниже, а ПРг в первой опытной группе на 61% была ниже, а во второй – на 4% выше, нежели в контрольной группе. Концентрации ФСГ, ЛГ и Е-2 в сыворотке крови самок первой опытной группы, соответственно, на 1,8%, 6,6% и 7%, второй – на 11%, 17% и 13% были выше контрольных показателей (табл. 40). Таблица 40. Концентрация половых гормонов в сыворотке крови крольчих в период инволюции Группы Прл, ФСГ, ЛГ, ПРг, Е-2, животных ммЕ/л ммЕ/мл ммЕ/мл Нмоль/л Пг/мл Контрольная 65,0±2,08 1,11±0,02 1,05±0,03 0,78±0,02 63,00±3,50 I опытная 61,0±2,89** 1,13±0,02* 1,12±0,01* 0,30±0,01* 67,37±2,21** II опытная 58,0±1,73** 1,23±0,01** 1,23±0,03** 0,81±0,05** 71,00±3,46* Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 В инволюцию продолжалось снижение концентрации Прл и ПРг в сыворотке крови. Сравнивая с периодом отъема, они были ниже, соответственно, на 35% и 61% в контрольной группе, на 41% и 90% – в первой, на 45% и 72% – во второй опытных группах. В контрольной и первой опытной группах концентрация ФСГ была выше, соответственно, на 192%, и 13%, а во второй опытной – на 15,2% ниже. Наблюдалось повышение концентрации ЛГ в контрольной группе на 250%, в то время как на фоне влияния препаратов селена отмечалось 154 снижение на 20% в первой и на 21% – во второй опытных группах. Концентрация Е-2 в контрольной, первой и второй опытных группах была выше, соответственно, на 70%, 77% и 64%. При влиянии селенсодержащих препаратов обнаружено увеличение относительно контроля количественного содержания эритроцитов и лейкоцитов в крови крольчих первой опытной группы, соответственно, на 4% и 14%, второй – на 10% и 14,4% (прилож., табл. 7). По сравнению с показателями периода отбивки, количественное содержание эритроцитов в контрольной, первой и второй опытных группах в инволюцию увеличивалось, соответственно, на 12%, 1% и 10%, а лейкоцитов – снижалось, соответственно, на 16%, 7% и 9,7%. Относительно контрольных показателей, в первой опытной группе содержание гемоглобина и общего белка было выше, соответственно, на 4% и 3%, во второй – на 8% и 4,4%. По сравнению с периодом отбивки, в крови инволюирующих самок контрольной группы регистрировалось повышение содержания гемоглобина на 4,6%, а в первой и второй опытных группах отмечалось его снижение, соответственно, на 5% и 4%. Содержание общего белка в контрольной, первой и второй опытных группах снижалось, соответственно, на 1,5% и 4% и 2%. Содержание альбуминов и γ– глобулинов в сыворотке крови самок первой опытной группы, соответственно, на 0,7% и 3%, второй – на 1,3% и 5% было выше, нежели в контрольной. В первой опытной группе содержание α– и β– глобулинов было ниже контрольного показателя, соответственно, на 0,3% и 2%, во второй на 0,6% было выше содержание αглобулинов и на 0,33% - ниже содержание β– глобулинов. Относительно показателей периода отъема в сыворотке крови инволюирующих и α–, β– в контрольной крольчих глобулинов, группе, снижалось соответственно, на 13%, 1,6% содержание альбуминов на 13%, 0,8% и и 5,5% – первой в 3% 155 опытной и группах. 11% на В 12,7%, 0,66% контрольной отмечалось и и 3,9% первой увеличение – во второй опытной содержания γ– опытной группах на глобулинов, во второй опытной – на 13%. В сыворотке крови животных первой опытной группы содержание кальция и фосфора, соответственно, на 5,7% и 4%, второй – на 4,5% и 8,7% было больше контрольных показателей. Сравнивая эти показатели с таковыми в период отбивки, было отмечено, что содержание кальция на 12% было выше в контрольной и первой опытной группе и на 3% – во второй. Содержание фосфора в контрольной, первой и второй опытных группах, соответственно, на 41%, 42% и 48% было выше, нежели в предыдущем периоде. Относительно контроля в сыворотке крови крольчих первой опытной группы показатель содержания АСТ был на прежнем уровне, в то время как во второй он снижался на 10%. Показатель АЛТ в первой и второй опытных группах увеличивался, соответственно, на 11% и 1,8%, показатель коэффициента Ритиса у крольчих всех групп был в переделах нормы. В молочной железе крольчих контрольной группы (рис. 68) отмечали уменьшение объема железистых долек и альвеол, обусловленное изменением секреторных циклов лактоцитов, направленным на реабсорбцию секрета из полости альвеол, деградацию внутренних структур и формирование апоптозных тел. А Б 1 В 5 7 2 3 1 6 4 Рис. 68. Гистоструктура молочной железы крольчих контрольной группы в период инволюции. Гематоксилин и эозин. Об.10 Ок.15 (А); Об.40.Ок.15 (Б); Об. 100.Ок.15 (В). 1 – железистые дольки; 2 – соединительнотканный чехол; 3 – жировые дольки; 4 – сосуды ГМЦР; 5 – ядра миоэпителиальных клеток; 6 – деградирующие лактоциты; 7 – альвеолы, находящиеся на стадии деградации 156 Регистрировали активизацию притока артериальной крови. Вокруг атрофирующихся железистых долек визуализировались соединительнотканные «чехлы», обнаруживались пласты жировых долей, слившиеся между собой. А Б 2 В 6 5 4 3 1 Рис. 69. Гистоструктура молочной железы крольчих первой опытной группы в период инволюции. Гематоксилин и эозин. Об.10 Ок.15 (А); Об.40.Ок.15 (Б); Об. 100.Ок.15 (В). 1 – железистые дольки; 2 – скопления адипоцитов; 3 – сосуды ГМЦР; 4 – ядро миоэпителиальной клетки; 5 – нервная терминаль с волокном; 6 – деградация альвеол В первой достаточно опытной большого группе объема. (рис. 69) железистые Междольковые дольки соединительно- тканные прослойки мощные, адипоциты в них единичные или располагались малочисленными группами. Внутри железисты х долек больше спавшихся альвеол, чем во второй опытной группе. В базальной мембране альвеол и цитоплазме миоэпителиоцитов выявлялись PAS-позитивные субстраты. Между альвеолами формируются скопления малодифференцированных эпителиальных клеток с выраженной базофилией ядра и малым объемом цитоплазмы. А Б 1 В 4 3 2 3 Рис. 70. Гистоструктура молочной железы крольчих второй опытной группы в период инволюции. Гематоксилин и эозин. Об.10 Ок.15 (А); Об.40.Ок.15 (Б); Об. 100.Ок.15 (В). 1 – железистые дольки; 2 – скопления адипоцитов; 3 – сосуды ГМЦР; 4 –деградирующие лактоциты В органе самок второй опытной группы (рис. 70) отмечали существенное отставание в деградации паренхиматозного компонента с 157 сохранением объема железистых долек и альвеол без содержимого, что отличается от контрольной и первой опытной групп. Образование вакуолей, лизис органоидов в цитоплазме лактоцитов и нарушение целостности оболочки ядра имело локальный характер. Таблица 41. Показатели гистоструктур молочной железы крольчих в период инволюции (мкм) Показатели Группы животных Контрольная 67,93±3,36 артериолы 100,33±1,85 собирательной венулы 19,92±1,29 нервного пучка 258,78±26,83 железистой дольки 48,13±2,03 адипоцита 22,22±0,85 альвеолы 90,57±1,64 междолькового протока 44,01±1,65 внутридолькового протока 3,99±0,18 лактоцита Примечание: * - Р≤0,05; ** - Р≤0,001 I опытная II опытная 72,34±2,30* 104,19±2,38* 20,90±1,26** 337,48±45,56 40,85±1,65* 23,33±1,12* 82,01±2,89* 35,69±1,67* 4,03±0,3 74,97±1,69** 112,73±2,32* 21,56±1,26** 399,16±20,33 38,41±1,84** 28,19±1,21* 97,52±2,48 45,71±1,17** 4,18±0,13** Показатели вариабельности (Cv%) результатов колебались в пределах от 0,05 до 0,19%: в контрольной группе (минимальны для диаметров вены и междолькового протока, максимальны для диаметра железистой дольки), от 0,06 до 0,36% в первой (минимальны для диаметра вены, максимальны для диаметра железистой дольки) и от 0,06 до 0,15% во второй опытных (минимальны для диаметров артерии и вены, максимальны для диаметра нервного пучка) группах. Коэффициент точности (Cs%) колебался от 2,05 до 5,84%, что свидетельствует о низкой точности величин (табл. 41). Проведя парный корреляционный анализ, между структурами органа и концентрациями половых гормонов у крольчих контрольной группы выявлены максимальные положительные взаимосвязи диаметра протока с концентрацией ЛГ и селена, диаметрами протока и миоэпителиоцита, а также объемами альвеолы и лактоцита (r=+1); диаметра артерии и концентрации Е-2 (r=+0,99), концентрации селена с объемом альвеолы (r=+0,98). 158 Обнаружена максимально отрицательная взаимосвязь диаметра протока и миоэпителиоцита с концентрациями Прл, ФСГ, ПРг, и Е-2, массой молочной железы, объемами ядер лактоцита и миоэпителиоцита, объемом адипоцита (r=-1) (прилож., табл. 68). В первой опытной группе зарегистрированы максимально положительные связи массы молочной железы с объемом ядра лактоцита и концентрацией селена (r=+0,99). Максимально отрицательная взаимосвязь зарегистрирована между диаметром железистой дольки и концентрацией ФСГ; диаметром протока и концентрацией ЛГ; диаметром нерва и концентрацией селена, массой органа и объемом ядра лактоцита (r=-0,99) (прилож., табл. 69). Во второй опытной группе максимальная положительная связь зарегистрирована между объемом ядра лактоцита и концентрацией селена; объемом альвеолы и диаметром миоэпителиальной клетки. Максимальная концентрацией Прл отрицательная и взаимосвязь массой органа, объемом выявлена ядра между лактоцита; концентрациями в сыворотке крови ФСГ и селена, объемом ядра лактоцита; диаметром миоэпителиальной клетки и концентрацией ПРг (r=-0,99) (прилож., табл. 70). Таким образом, в период инволюции, низкая концентрация селена в сыворотке крови крольчих контрольной группы способствовала увеличению массы молочной железы за счет нарастания численности адипоцитов и формированию жировых долек. Вокруг жировых долек в мелкопетлистой сети микроциркуляторного русла отмечали интенсивную васкуляризацию. Паренхиматозно-стромальное отношение изменялось в пользу соединительной и жировой ткани. Замещение железистой ткани жировой происходило следующим образом: по периферии альвеол, адвентициальные клетки трабекул дифференцировались в адипоциты. По мере накопления в последних триглицеридов они формировали вокруг альвеол «жировое кольцо». 159 В результате внутренней реорганизации лактоцитов альвеол малочисленных мелких железистых долек происходило «выключение» их секреторного цикла. Деградация и апоптоз большей их части приводили к сохранению небольшого числа эпителиоцитов и малодифференцированных миоэпителиальных элементов. По мере разрастания в органе жировой ткани и активной деградации лактоцитов шло замещение альвеол железистой ткани жировыми дольками. Протоки находились в спавшемся состоянии, циклический характер выработки половых гормонов способствовал их росту. В первой опытной группе механизм воздействия неорганического селена в сочетании с витамином Е, стимулировал выработку ФСГ и подавлял секрецию ПРг, поддерживал умеренное кровоснабжение в железистых дольках. Несмотря на продолжение процессов реабсорбции в цитоплазме лактоцитов альвеол, они находились на стадии «выключения» ядернобелкового синтеза, то есть прекращения секреторных циклов. Отмечали ингибирование функции миоэпителиальных клеток и начало их деградации Альвеолы поддерживали свой объем за счет содержимого. Однако объем железистых долек имел тенденцию к уменьшению, а жировые увеличивали долю своего присутствия в органе. Вокруг формирующихся жировых долек образовывалась мелкопетлистая сеть сосудов обменного звена, отмечался нейрогенез. Во второй опытной группе механизм воздействия органического селена в период инволюции подавлял выработку всех половых гормонов. И только поддерживающийся высокий уровень концентрации эстрогенов подтверждает активный фолликулогенез в яичнике самки. Отмечали активное участие лактоцитов в процессе реабсорбции, а миоэпителиоцитов в ретракции и некоторое запаздывание процесса замещения железистых долек жировыми. Размеры альвеол были значительны, как и объем железистых долек. 160 4. ОБСУЖДЕНИЕ ПОЛУЧЕННЫХ РЕЗУЛЬТАТОВ Многократно изучаемые и обсуждаемые вопросы развития молочных желез до сих пор требуют уточнений и остаются дискуссионными. Несомненно, этот орган имеет эктодермальное происхождение и принадлежит к производным кожи. Установлена их общность строения, определенные особенности в связи с различными приспособлениями. В связи с необходимостью полноценного выкармливания потомства самкой, решением проблем качества молока, снижением гипотрофии новорожденных в животноводстве используют различные препараты, в том числе на основе селена. Известно ведущее действие половых гормонов на маммогенез и гистофизиологию молочной железы в периоды репродуктивного цикла самки. В целом, следует согласиться с мнением C.A. Сarrington, H.L. Hosick, I.A. Forsyth, R.R. Dils (1981) о том, что активное развитие органа в периоды половой и физиологической зрелости связано с изменением гормонального статуса самки. Использование системного анализа при изучении особенностей морфологии молочной железы крольчих в периоды репродуктивного цикла позволило нам выявить ведущие структуры, определяющие становление органа на каждом его этапе, что согласуется с данными Л.Л. Абрамовой (1998). На протяжении всех этапов эксперимента осуществляли контроль влияния препаратов селена на гематологические показатели самок. В результате того, что дозы применяемых нами препаратов были оптимальны и не токсичны, в целом отмечаем их положительное действие на кровь. Лучшие результаты были получены во второй опытной группе – при влиянии «Селенолина®». Отмечаем повышение содержания изучаемых нами показателей крови, что свидетельствует о комплексном участии селена в метаболических процессах самок и, следовательно, их интенсификации, а 161 также в активизации развития и созревания клеток крови, чем подтверждаем данные И.Т. Джакупова, В.В. Кабакова (2004), К.А. Сидоровой, К.С. Есенбаевой, Н.А. Петровой, А.А. Бекташевой (2007), Р.В. Картекенова, Б.Х. Галиева, К.Ш. Картекенова (2008), Т.А. Трошиной (2008). Мы согласны с Т.И. Лапиной, Л.В. Ивановой (2008) в том, что на фоне влияния селеносодержащих препаратов, а в особенности, селенорганического препарата, происходит увеличение количества гемоглобина и эритроцитов, что объясняется усилением гемопоэза в костном мозге. На основании результатов биохимического исследования крови под действием препаратов селена заметно увеличение общего белка и белковых фракций, чем подтверждаем данные М.Н. Панфиловой, М.И. Смирнова (2001); Т.А. Трошиной (2008) и объясняем этот факт способнстью селена накапливаться в сыворотке крови, транспортироваться альбумином и включаться в α– и β– глобулины. Принимая во внимание повышение альбуминов в крови крольчих опытных групп, отмечаем усиление белково-синтетической способности печени. Иммунотропное действие препаратов связано с увеличением уровня фракции γ– глобулинов. Мы согласны с данными A. Sandukji, H. AlSawaf, A. Mohamadin, Y. Alrashidi еt all. (2010), что механизм действия «Е-селена» и «Селенолина®» активизирует минеральный обмен, поскольку повышение селенового статуса крольчих положительно сказалось на динамике концентрации кальция и фосфора в сыворотке крови. Уровень АСТ и АЛТ в сыворотке крови в основном был ниже контрольных значений. Следовательно, как отмечали Старков М.В., Мерзлякова Е.А., Трошина Т.А. (2006), не происходило повреждения паренхиматозных органов и повышения α– и β– глобулиновых фракций белка. В три месяца маммогенеза у крольчих контрольной группы на фоне недостатка селена начало гормональной регуляции, а именно: увеличение содержания Прл, ФСГ, и Лг и снижение Прг и Е-2 – в сыворотке крови 162 сдерживало увеличение массы молочной железы, равно как и ангиогенез, способствовало увеличению объема жировых долек и диаметра протока. В контрольной группе мы наблюдали синхронность в секреции Прг и Е-2, что не согласуется с данными Л.Н. Колодиной и В.В. Корхова (1985), отмечавших асинхронность процесса выработки Е-2 и ПРГ в период полового созревания. В шесть месяцев на фоне низкого содержания селена в крови установилась цикличность гормональной регуляции, существенно увеличивалась концентрация Лг и Прг, незначительно – концентрация Прл и ФСГ, снижалась концентрация Е-2 на фоне чего происходил рост массы органа и протоков всех уровней, что согласуется с данными Н.М. Грезиной, Н.А. Зиновьевой (2005), но малоинтенсивно, по сравнению с опытными группами. Регистрировался активный ангиогенез, артериальный приток, дифференцировка миоэпителиоцитов и эпителиоцитов концевых отделов протоков. У самок первой опытной группы в три - шесть месяцев на фоне применения «Е-селена» в крови повышалась концентрация селена, механизм влияния которого способствовал увеличению выработки Прл, Лг и Прг и снижению Е-2, что совместно приводило к изменению взаимосвязи структур железы и инициировало каналикуляцию эпителия, рост нервов и терминальных отделов протоков, активную пролиферацию эпителиоцитов в их концевых участках. В сравнении с контрольной группой, воздействие препарата «Е-селен» десинхронизировало маммогенез и способствовало более раннему формированию структур выводной системы и достижению органом полной морфофункциональной зрелости. У крольчих второй опытной группы в возрасте трех месяцев препарат «Селенолин®» способствовал снижению концентрации ФСГ и Прг, повышению Е-2 и Лг, влиял на интенсивность артериального кровоснабжения и массу молочной железы, сдерживал интенсивный рост паренхимы, способствовал росту, увеличению численности нервных 163 волокон и их окончаний. В шесть месяцев на фоне влияния «Селенолина®» повышалась концентрация Лг, Прг, Е-2 и ФСГ. Повышение последнего связано с активизацией оогенеза и подготовкой к овуляции. Наши данные согласуются с данными М.Г. Халипаева (2003), сообщившего о характере колебания этого гормона в периоды репродуктивного цикла самки. Отмечали интенсивный ангиогенез и артериальный приток, рост массы железы, длины соска. Отмечалось активное образование альвеол и стимулирование дифференцировки эпителиоцитов альвеол. Сдерживался рост протоков за счет снижения концентрации Прл и повышения присутствия в крови Прг. В сравнении с контрольной и первой опытной группами, воздействие препарата «Селенолин®» в три месяца оказывало еще более выраженное десинхронизирующее действие на маммогенез и способствовало его завершению к шести месяцам. В период беременности у крольчих контрольной группы на фоне высокой взаимосвязи Прл с Прг, отмечали интенсивный рост длины соска, инициацию роста протоков, увеличение численности и объема альвеол, рост объема лактоцитов и дифференцировку миоэпителиоцитов, что согласуется с данными А.А. Токмакова, Я. Фуками (2009). Умеренная концентрация ФСГ и Лг, их высокая взаимосвязь между собой, связанная с активным влиянием последнего на овулирование яйцеклеток (Халипаев М.Г., 2003), обусловливала возникновение тенденции к активизации артериального притока, росту железистых долек и массы молочной железы. В период беременности синхронности в нарастании концентрации половых гормонов не наблюдали, что позволяет оспорить мнение G. Сastoria, M.V. Barone, M. Di Domenico, A. Bilancio et all (1999), об отсутствии их прямого влияния на секрецию друг друга. Низкая концентрация селена в крови крольчих определяла уровень дифференциации эпителиоцитов альвеол и переход их в лактоциты. Активизация артериального притока инициировала увеличение объема 164 железистых долек и альвеол и дифференцировку миоэпителиоцитов, последняя определялась степенью зрелости лактоцитов, при этом масса железы изменялась незначительно. Динамика паренхиматозно- стромального отношения, взаимосвязь структур железы проявляли тенденцию к реализации на заключительном этапе сукрольности. На фоне влияния «Е-селена» высокое фоновое значение микроэлемента опосредовано влияло на нейро-гипоталамо-гипофизарную взаимосвязь, что приводило к увеличению концентрации ФСГ и снижению выработки Прл, но, несмотря на это, он совместно с плацентарным Прг влиял на маммогенез. Их действие выражалось в инициации роста сосудов гемомикроциркуляторного русла и протоков, усилении артериального притока, увеличении численности и объема альвеол и сдерживании цитодифференцировки миоэпителиальных клеток. За счет интенсивной пролиферации эпителия терминальных отделов протоков незначительно увеличивалась доля железистой паренхимы органа, несущественно увеличивался объем железистых долек и масса железы. При действии препарата «Селенолин®» механизм влияния входящего в его состав органического селена вызывал снижение концентрации половых гормонов в сыворотке крови самки (кроме Е-2), что инициировало в молочной железе крольчих ангиогенез и приток артериальной крови. За счет пролиферации эпителия – рост железистых долек, цитодифференцировку миоэпителиоцитов. Сдерживал дифференцировку эпителиоцитов альвеол и рост протоков. Следует согласиться с результатами исследований Л.В. Курбатовой (1972, 1977), Н.М. Грезиной, Н.А. Зиновьевой (2005) в том, что вследствие прогрессивного увеличения объема паренхимы, на месте локализации жировых долек формируются железистые. Резкое возрастание скорости роста массы железы наступает после первой половины беременности. В беременность уменьшение объема жировой ткани происходит за счет 165 транспорта из жировых долек триглицеридов. Как и P.A. Dechamma, S.S. Kamath, P.S. Shetty (1986), мы считаем, что это связано с развитием плода и паренхимы железы. В роды у самок контрольной группы на фоне низкой концентрации селена в сыворотке крови отмечали интенсификацию артериального притока (обменное звено), увеличение диаметров протоков и соска, под влиянием нейро-гуморальной регуляции. Регистрировали цитодифференцировку и начало функционирвания миоэпителиоцита с одновременным включением ядерного белкового синтеза в лактоцитах и миоэпителиоцитах, что свидетельствует о готовности системы к выделению секрета. Увеличение массы молочной железы, объема лактоцитов, диаметра протоков явились следствием стаза молозива и проталкивания его миоэпителиальными клетками из концевых отделов. Хотя изменение объема железистых долек было несущественным, проявлялась тенденция к их увеличению. В первой опытной группе механизм воздействия селена с витамином Е в период родов обусловливал существенное увеличение концентрации ФСГ и эстрогенов, что свидетельствовало об активизации фолликулогенеза в яичнике и снижение Прл и Прг. Увеличение массы органа и диаметра протоков происходило за счет интенсивного секретообразования, а уменьшение – при опорожнении системы, регулируемые, главным образом, автономной нервной системой. Снижение индекса концентрации Прл/ФСГ специфичное для этого периода запускал ядерно-белковый синтез в лактоцитах (секреторный миоэпителиоцитов. цикл), Цитоплазма но ингибировал лактоцитов функционирование альвеол насыщалась секретируемыми компонентами, готовыми к секреции. Незначительное изменение объемов альвеол и железистых долек происходило за счет накопления секрета. Вокруг концевых секретирующих отделов отмечали активизацию нейрогенеза: рост нервных волокон и формирование их терминалей. Отсутствие давления миоэпителиальных клеток в секреторных отделах способствовало расширению альвеол и заполнению протоков 166 молозивом. Следовательно, ввиду стаза молозива в концевых отделах и отсутствия интенсивного притока крови лактоциты не включались в новый секреторный цикл. Влияние органической формы селена инициировало повышенное содержание Прл и снижало выработку эстрогенов в сыворотке крови крольчих, что согласуется с данными В.А. Берестова (1987). На фоне этого отмечали увеличение объемов железистых долек и альвеол за счет ингибирования ретракции миоэпителиоцитов в концевых отделах и стаза молозива, препятствующих вхождению лактоцита в новый секреторный цикл, а также относительно первой опытной группы в дольках выявляли меньшую степень влияния на нейрогенез. В первые 54 часа после родов механизм влияния препаратов селена на лактопоэз выражался в снижении уровня индексов Прл/ФСГ и Прл/Лг, что обусловлено обратной взаимосвязью структур яичника с нейросекреторными клетками ядер гипоталамуса и аденотропоцитами гипофиза). Специфическое соотношение половых гормонов, факторов паракринной регуляции, особенно в первый час лактации, инициировало увеличение проницаемости лактогематического барьера железы и высокую лабильность его структур. В первый час после окрола в контрольной группе при низкой концентрации селена в сыворотке крови и повышении содержания Прл и Прг, отмечали усиление притока артериальной крови, способствующее активизации работы гематотканевого барьера. На протяжении первых 27 часов постепенно увеличивалось содержание IgG в сыворотке крови, по истечении которых регистрировали плавное его снижение. Именно в 27 часов лактации регистрировали переход лактоцитов с выработки компонентов молозива на секрецию молока. При применении препарата «Е-селен» в первый час после окрола уровень содержания Прл был ниже контроля. Содержание Прг, Лг и Е-2 повышалось. Пусковым механизмом ядерно-белкового синтеза в лактоцитах являлся снижающийся индекс концентрации Прл/ФСГ. Относительно 167 контроля отмечали увеличение параметров структур лактогематического барьера, что было особенно выражено в первые 18 часов, поскольку в это время сочетанность в работе структур барьера была максимальной. На фоне комплексного воздействия селена и витамина Е тенденция к перестройке лактоцитов с выработки молозива на молоко наблюдалась после 36 часов после окрола, а процент выхода IgG имел тенденцию к увеличению до 54 часов. Во второй опытной группе в первый час после окрола при повышении концентрации Прл, Лг, Е-2 в сыворотке крови отмечалась динамика увеличения диаметра капилляра, объема ядра и самого лактоцита, увеличение числа нервных волокон и их окончаний. Органическая форма селена пролонгирует молозивный период, тенденция к перестройке лактоцитов с выработки молозива на молоко реализуется после 36 часов, подтверждением чему явилось усиление ядерного белкового синтеза в лактоцитах к 54 часам. При влиянии препарата «Селенолин®» снижение концентрации IgG в секрете наступало после 36 часов, но поскольку относительно первой опытной группы его концентрация была выше, снижение было плавным, не скачкообразным. Выявление особенности хронодинамики структур лактогематического барьера железы крольчих контрольной и опытных групп обнаружило самый высокий уровень его проницаемости в первый, девятый и 18 часы после окрола. С девяти часов регистрировалась ведущая роль гуморальной регуляции морфофункциональных параметров структур барьера и повышения его проницаемости, в том числе и для IgG, поступающих из плазмы крови. В 18 часов – высокая взаимосвязь лактоцита, капилляра, миоэпителиоцита и альвеолы определяла специфику цитофизиологии лактогематического барьера, инициировала эффективный выход IgG в молозиво. Изменение индексов концентрации половых гормонов с высокой амплитудой колебаний было более выражено до 27 часов лактации у 168 самок контрольной группы, в то время как влияние препаратов селена уменьшало амплитуду колебаний и периодичность этого процесса. Во всех трех группах с 18 до 27 часов отмечали стабильный характер проницаемости гематотканевого барьера, определяющий долю выхода IgG из крови в секрет и связанный с генетически обусловленным процессом перестройки секреторного цикла лактоцита с выработки компонентов молозива на молоко, реализуемым после 27 часов после окрола. В середине лактации при низкой концентрации селена в сыворотке крови крольчих контрольной группы создавалось специфическое соотношение концентрации половых гормонов при повышении индекса Прл/ФСГ и снижения – Прл/Лг. Недостаток селена не препятствует массовой овуляции и образованию циклических желтых тел, что способствует повышению концентрации Прг в сыворотке крови, что, по объяснению В.В. Рожнова, Св.В. Найденко, С.В. Найденко (2007), связано с возможностью спонтанной овуляции. Ритмичная выработка и выведение компонентов секрета, регулируемые высокой концентрацией Прл, влияли на динамику массы железы крольчих, интенсивность притока и оттока крови. Наряду с активным лактированием железы отмечали появление первых признаков инволюции. Ритмичность секреторных циклов лактоцитов, изменение объема альвеол были зависимы от интенсивности функционирования миоэпителиоцитов, концентрации селена в сыворотке крови, интенсивности сокращение протоков, обеспечивающей опорожнение системы. В первой опытной группе механизм влияния концентрации селена и витамина Е инициировал повышение индексов концентрации Прл/ФСГ и Прл/Лг. При этом в сыворотке крови самок регистрировалось высокое значение концентрации Прг и снижение в два раза концентрации эстрогенов. По сравнению с контролем, кровеносные сосуды долек в меньшей степени были подвержены регуляции, отмечалось снижение интенсивности кровотока. При этом активизировались секреторные циклы лактоцита и 169 функция миоэпителия, а объем лактоцита, диаметр протока и масса железы, в отличии от объема альвеол и долек, не проявляли взаимосвязи с концентрациями гормонов и другими структурами системы. В сравнении с контролем, на фоне «Е-селена» обнаруживалась тенденция к увеличению длительности процесса лактации. Во второй опытной группе на фоне влияния органического селена увеличивался индекс концентрации Прл/ФСГ и снижался индекс Прл/Лг, при этом в сыворотке крови сохранялось высокое значение концентрации Прг и эстрогенов. Механизм функционирование воздействия органического гипоталамо-гипофизарной селена системы на обусловил вялотекущие дегенеративные изменения в паренхиматозном компоненте железы на фоне интенсивного артериального притока, что подтверждало тенденцию к увеличению продолжительности процесса лактации. Выкармливание самкой потомства, воспроизведенного на свет, является генетически запрограммированным процессом, чем и определяется материнский инстинкт. Но молочная железа не каждой самки способна продуцировать тот объем и состав молозива→молока, которые необходимы для полноценного развития потомства, особенно в многоплодных пометах (Вакуленко И.С., 1984). Это часто приводит к гипотрофии молодняка и, следовательно, низкой его сохранности, что является одной из серьезных проблем промышленного кролиководства (Седов Ю.Д., 2008). На молочную продуктивность самки влияют уровень кормления и условия содержания, а также степень секреторной активности ее молочной железы. Важным в период лактации является обеспечение организма самки необходимыми микроэлементами, где существенную роль играет селен. Анализируя полученные нами данные по концентрации селена в сыворотке крови крольчих контрольной группы, мы заключили, что селеновый статус их организма низок, поскольку согласно результатам А.А. Кудрявцева (1974), нижним пределом нормы содержания селена в сыворотке крови животных является 0,01±0,0006 мкг/мл. 170 Согласно A.M. Rousel, R.A. Anderson, A.E. Favier (2000), повышение микроэлементного статуса самки, в том числе и селенового, способствует повышению концентрации микроэлемента в молозиве и молоке, что очень важно для полноценного развития потомства. Полученные нами результаты позволяют согласиться с авторами, поскольку применяемые препараты «Еселен» и «Селенолин®» способствовали повышению у крольчих содержания селена в сыворотках их крови, молозива и молока. Причем у самок, которым прокалывали препарат «Селенолин®», в молозиве и молоке обнаруживалось большее содержание селена, нежели «Е-селен», что согласуется с данными Т.Т. Папазян, Н.А. Голубкиной (2004); Д.Ф. Давлетшиной, Т.А. Фаритова, (2005). Получив в эксперименте увеличение живой массы новорожденных крольчат, при применении препаратов селена, мы согласны с А. Никитенковым, А. Яхиным, В. Крохиным (2001); И.Т. Джакуповым, В.В. Кабаковым (2004), И.А. Яппаровым, Т.Н. Родионовой (2006), И.М.Чернухой, М.И. Бабуриной, М.П. Кириловым, А.Я. Яхиным (2006), А.М. Васильевым, Ю.Н. Прытковым (2007), Г.А. Дубравной, С.С. Абакиным (2008), Г.А. Дубравной (2009), А.В. Дворянцевым, Н.В. Дубровиной (2009), экспериментально доказавшими, что селенсодержащие препараты способствуют увеличению живой массы новорожденных, их сохранности и активному росту. При этом отмечаем большую эффективность «Селенолина®», что подтверждает результаты А.П. Гуменюк, С.П. Воронина, В.М. Скорлякова (2009), В.А. Блинова, С.Н. Буршиной, Е.А. Шапулина (2010). Отмечаем улучшение состава молозива и молока крольчих на фоне влияния препаратов селена. Повышается содержание жира, белка, СОМО, увеличивается М.А. плотность Надаринской (2005), секрета, В.А. в чем Оробец следует (2005), согласиться И.Ф. с Горловым, В.Н. Храмовой, А.И. Сивковым (2006), Б.Л. Чугай, А.С. Краснослободцевой, М.П. Крысиным, А.И. Фроловым (2009), А.А. Кистиной, Ю.Н. Прытковым, 171 А.М. Гурьяновым (2010), получившими аналогичные результаты на коровах и И.Ф. Горловым, А.Т. Варакиным, Е.А. Варакиной (2006) – на козах. По данным Н.Н. Шульги, Т.А. Сокольниковой, В.Н. Шульги (2006), перед родами у животных иммуноглобулины крови устремляются в молочную железу, где становятся иммунными белками молозива. Q. Pang, H. Hou, Ch. Zhang, J. Lu (1998) в опытах in vitro доказали, что селенит натрия способен увеличивать концентрацию иммуноглобулинов, особенно G и M фракций. Мы же отмечаем, что препараты селена положительно сказываются на увеличении концентрации IgG в крови, а следовательно, и в молозиве, и молоке. Эффективность действия препарата «Селенолин®» на основе органического селена была выше, что позволяет согласиться с данными А.Г. Шахова, Ю.Н. Бригадирова, Ю.Н. Масьянова, В.И. Беляева (2004), указывающими на способность именно органического селена существенно повышать содержание иммуноглобулинов G в сыворотке крови. Л.Н. Колодина, В.В. Корхов (1985) говорят о существующей прямой зависимости между поглощением (накоплением) пролактина в молочной железе и активностью в ней секреторных процессов. Поскольку полученные нами данные подтверждают влияние механизма действия селена на увеличение объемов выработки молозива→молока, мы, согласившись с авторами, объясняем это увеличением концентрации Прл в сыворотке крови. В отбивку, а особенно в инволюцию, происходит регрессивное развитие структур молочной железы: уменьшается объем железистой ткани, а соединительной – увеличивается (Грезина Н.М., Зиновьева Н.А., 2005; Калякина Р.Г., 2006; Talhouk R.S., Bissell M.J., Werb Z., 1992; Hebbard L.W., Garlatti M., Oshima R.G., Ranscht B., et all. 2008). В период отъема крольчат у самок контрольной группы механизм действия низкого содержания селена в сыворотке крови активизировал выработку Е-2, существенное снижение концентрации Лг, ФСГ и Прг и незначительное – Прл, что способствовало уменьшению артериального притока, реорганизации секреторного цикла в лактоците, направленной на 172 реабсорбцию компонентов молока, ингибированию нейрогенеза и функции миоэпителиоцитов, уменьшению объема альвеол и массы молочной железы, причем, наибольшее влияние на эти процессы оказывало снижение концентрации Прг и Лг. В инволюцию низкая концентрация селена в сыворотке крови крольчих контрольной группы способствовала увеличению массы молочной железы за счет нарастания численности адипоцитов и формированию жировых долек. Вокруг жировых долек в мелкопетлистой сети микроциркуляторного русла отмечали интенсивную васкуляризацию. Паренхиматозно–стромальное отношение изменялось в пользу соединительной и жировой ткани. Замещение железистой ткани жировой происходило следующим образом: по периферии альвеол, адвентициальные клетки трабекул дифференцировались в адипоциты. По мере накопления в последних триглициридов они формировали вокруг альвеол «жировое кольцо». В результате внутренней реорганизации лактоцитов альвеол малочисленных, мелких железистых долек происходило «выключение» их секреторного цикла, деградация и апоптоз их большей части, что приводило к сохранению небольшого числа эпителиоцитов и малодифференцированных миоэпителиальных элементов. По мере разрастания в органе жировой ткани и активной деградации лактоцитов шло замещение альвеол железистой ткани жировыми дольками. Протоки находились в спавшемся состоянии, циклический характер выработки половых гормонов способствовал их росту. В отбивку в первой опытной группе на фоне значительного присутствия в сыворотке крови неорганического селена и витамина Е отмечали увеличение продукции Лг и снижение концентрации ФСГ и Прг, что обусловливало снижение активности притока крови, «торможение» ядерного белкового синтеза лактоцитов, повышение синтетической активности их цитоплазмы с одновременным снижением ее объема, при этом миоэпителиоциты находились в состоянии инактивации. Также происходило умеренное уменьшение объема альвеол, приостановка нейрогенеза. 173 Поскольку у самок первой опытной группы длительность процесса лактации увеличивалась, рост жировой ткани и снижение объема железистой паренхимы в пользу стромального компонента органа шло замедленными темпами, что подтверждало задержку старта инволюторных процессов. В инволюцию в первой опытной группе механизм воздействия неорганического селена в сочетании с витамином Е стимулировал выработку ФСГ и подавлял секрецию Прг, поддерживал умеренное кровоснабжение в железистых дольках. Несмотря на продолжение процессов реабсорбции в цитоплазме лактоцитов альвеол, они находились на стадии «выключения» ядерно-белкового синтеза, то есть прекращения секреторных циклов. Отмечали ингибирование функции миоэпителиальных клеток и начало их деградации Альвеолы поддерживали свой объем за счет содержимого, однако объем железистых долек имел тенденцию к уменьшению, а жировые увеличивали долю своего присутствия в органе. Вокруг формирующихся жировых долек образовывалась мелкопетлистая сеть сосудов обменного звена, отмечался нейрогенез. Во второй опытной группе в отбивку на фоне применения препарата «Селенолин®» в сыворотке крови изменялось соотношение гормонов, выражающееся в снижении концентрации Прл, Лг, Прг и повышении ФСГ и Е-2. Масса молочной железы, объем альвеол, диаметр протока имели тенденцию к уменьшению на фоне возрастания интенсивности кровоснабжения как со стороны артериальных, так и венозных звеньев микроциркуляторного русла и стимулирования нейрогенеза. При этом в лактоцитах альвеол отмечали активно протекающий секреторный цикл, характеризующийся продукцией компонентов секрета, миоэпителиоцитов, осуществляющих изгнание секрета систему. Влияние способствовало препарата «Селенолин®» пролонгированию процесса в и активность в протоковую молочной лактации. Мы железе можем предположить, что это связано с влиянием механизма действия селена на замедление снижения концентрации Прл в сыворотке крови, поскольку, 174 согласно Н.И. Сергеевой, Л.К. Дзерановой, Е.В. Меских, Н.И. Рожковой и др. (2005), начало инволюторных процессов в молочной железе связано со снижением концентрации Прл в сыворотке крови. Во второй опытной группе в инволюцию механизм воздействия органического селена подавлял выработку всех половых гормонов и только поддерживающийся высокий уровень концентрации эстрогенов подтверждает активный фолликулогенез в яичнике самки, что согласуется с утверждением В.А. Берестова (1987). Отмечали активное участие лактоцитов в процессе реабсорбции, а миоэпителиоцитов в ретракции и некоторое запаздывание процесса замещения железистых долек жировыми. Размеры альвеол были значительны, как и объем железистых долек. 5. ЗАКЛЮЧЕНИЕ Проведенное нами комплексное исследование и системный анализ морфофизиологии молочной железы крольчих как уникального органа, вырабатывающего молозиво→молоко, содержащего в себе необходимые новорожденному (особенно в первые часы его жизни), пластический материал и факторы неспецифической защиты, в периоды репродуктивного цикла в норме и при влиянии препаратов селена позволили проследить динамику и адаптационную пластичность ее структур, проницаемость лактогематического барьера на фоне нейрогуморальной регуляции. В ходе исследований выявлено, что механизм действия селена, включенного в ферментативные системы обмена веществ самки, направлен на ускорение маммо-, лактогенеза и пролонгирование лактопоэза, улучшение иммуноглобулинуG. Все состава это секрета, позволило в нам том числе разработать по схему применения препаратов «Е-селен» и «Селенолин®» в кролиководстве. 175 6. РЕКОМЕНДАЦИИ К ИСПОЛЬЗОВАНИЮ НАУЧНЫХ ВЫВОДОВ Выявленные особенности морфофизиологии молочной железы крольчих при влиянии препаратов «Е-селен» и «Селенолин®» могут быть использованы: - на ветеринарных, биологических, биотехнологических факультетах высших учебных заведений для подготовки специалистов; - при написании соответствующих разделов руководств, учебников, монографий по морфологии множественной молочной железы и влиянию на нее селенсодержащих препаратов; - в лабораториях, НИИ, занимающихся разработкой теории органогенеза, проблемами экспериментальной и функциональной морфологии желез, влияния микроэлементов на развитие молочной железы; - клиницистам в качестве морфологических критериев при цито- и гистологической оценке биоптатов органа с целью диагностики заболеваний молочной железы. Рекомендуем в промышленное кролиководство: - использование специалистами кролиководческих комплексов разработанной и внедренной нами в технологию призводства схемы парентерального введения препаратов селена крольчихам для стимуляции функций молочной железы, что позволит решить проблему их гипогалактии, повысить сохранность молодняка; - в связи с этим рекомендуем за 6 – 7 дней до случки (в первые сутки течки) самкам однократно внутримышечно вводить препараты «Е-селен» и «Селенолин®» в дозах, соответственно, 0,04мл/кг и 0,008 мл/кг массы тела животного. 176 ВЫВОДЫ 1. Вводимые парентерально крольчихам неорганический селен («Е-селен») в дозах 0,06 мл/кг и 0,08 мл/кг и органический селен («Селенолин®») в дозах 0,018 мл/кг и 0,028 мл/кг массы тела животного оказывали, соответственно, токсический и высокотоксический эффекты на гистофизиологию тканей печени, почек, миокарда. В эксперименте использованы опитимальные дозы препаратов: «Е-селен» – 0,04 мл/кг и «Селенолин®» – 0,008 мл/кг массы тела животного. 2. У крольчих контрольной группы в три месяца (эструс первого полового цикла) на фоне недостатка селена и специфической гормональной регуляции маммогенез выражается сдерживанием ангиогенеза, увеличением протоков и объема стромального компонента (жировых долек). В шесть месяцев активизация ангиогенеза обеспечивает рост массы органа, протоков и дифференцировку миоэпителиоцитов, при этом сдерживается рост и созревание эпителиоцитов концевых отделов. Воздействие «Е-селена» и «Селенолина®» десинхронизирует маммогенез, что проявляется в интенсивном ангио- и нейрогенезе, более раннем формировании выводной системы, образовании альвеол и дифференцировки их эпителиоцитов и достижении органом полной морфофункциональной зрелости к шести месяцам. 3. В периоды беременности и родов, нейрогуморальные взаимодействия и специфическое соотношение гормонов (ПРл/ФСГ = 35) определяют протекающие гетерохронно, увеличения массы молочной железы, диаметра соска, протоков, численности и объема железистых долек, альвеол на фоне пролиферации малодифференцированных эпителиоцитов и активизации нейрогенеза, а также увеличение лактоцитов, миоэпителиоцитов, и начало их функционирования в роды. Механизм инициирующего воздействия селена снижает индекс концентрации 177 пролактина к фолликулостимулирующему гормону (34), «запускает» в лактоцитах секреторный цикл, но ингибирует ретракцию миоэпителиоцитов, в результате чего в концевых отделах отмечается временный стаз молозива. 4. Хронобиологический анализ динамики структур лактогематического барьера позволил обнаружить самый высокий уровень его проницаемости, в том числе и для иммуноглобулина G, в первый, девятый и 18 часы после окрола. При относительном постоянстве концентрации иммуноглобулина G в сыворотке крови в молозиве она возрастает к 9 и 18 часу, соответственно, в 1,1 и 1,45 раза. На фоне воздействия неорганического селена к 9 и 18 часам после окрола проницаемость лактогематического барьера увеличивается, соответственно, в 1,3 и 1,6 раза, а при использовании органического селена, соответственно, в 1,38 и 1,86 раз. К 27 часам лактации вырабатывается молозиво с достоверно высоким присутствием иммуноглобулина G, после чего отмечается тенденция к перестройке секреторного цикла лактоцитов с выработки молозива на молоко. Органическая форма селена пролонгирует молозивный период. 5. В середине лактации индексы концентрации пролактина к фолликулостимулирующему лютеинизирующему гормону гормону (102) (209) и определяют пролактина к интенсивность секретообразования, регулируют динамику массы железы и венозный отток. Механизм действия селена создает тенденции к пролонгированию лактации при некотором снижении уровня секреции. Несмотря на то, что «Е-селен» уступает по эффективности «Селенолину®», его воздействие на гистофизиологию железы было равномерным и щадящим. 6. Препарат «Е-селен» в крови, молозиве→молоке повышает содержание селена (в 2,6 раза) и иммуноглобулина G (на 16%), активизирует выведение секрета, увеличивает молочную продуктивность самки (на 12%). 178 В молозиве→молоке повышает содержание жира (на 8,3%), белка (на 6%), сухого обезжиренного молочного остатка (на 5%), их плотность (на 4%), что в целом обеспечивает прирост живой массы новорожденных крольчат. При воздействии органического селена все показатели выше в 1,2 раза. 7. В период отъема в крови самки контрольной группы низкие концентрации селена и половых гормонов инициируют реализацию гистотипических потенций тканей железы, что выражается реорганизацией секреторного цикла лактоцита в направлении реабсорбции компонентов молока, ингибированием нейрогенеза и функции миоэпителиоцита, уменьшением объема альвеол и массы железы. Механизм действия селена, поддерживая слабую синтетическую активность лактоцитов, одновременно способствует снижению объема клеток, сдерживанию инволюторных процессов в железистой паренхиме жировой ткани. и увеличению присутствия в органе В постлактационную инволюцию неорганическая и органическая формы селена пролонгируют процессы реабсорбции в лактоцитах, активную ретракцию миоэпителиоцитов и процесс замещения объема железистой паренхимы жировой тканью. 179 БИБЛИОГРАФИЧЕСКИЙ СПИСОК 1. Абельсон Ю.О. Роль гипоталамических нонапептидов в регуляции вегетативных функций; под ред. член-корр. РАН А.Л. Поленова. В 2-х ч. Ч. 2. // Нейроэндокринология. - СПб.: Наука, 1994. С. 259–283. 2. Абрамова Л.Л. Корреляция гистоструктур молочной железы и влияние на них факторов возраста и функции в постнатальном периоде онтогенеза // Морфология / Тезисы докладов IV Конгресса Международной Ассоциации морфологов. СПб.: Эскулап, 1998. Т. 113. Вып. 3. С. 12. 3. Абрамова Л.Л. Пренатальный гистогенез молочной железы коз оренбургской пуховой породы // Вестник ветеринарии / Научные труды Академии ветеринарной медицины (Оренбургский ГАУ, Оренбургское областное управление ветеринарии). Оренбург: Издательский центр ОГАУ, 1999. Вып. 1. С. 11 – 14. 4. Абрамова Л.Л. Способ витальной биопсии молочной железы коз и оценки её морфофункционального состояния // Рационализаторское предложение. 2000. № 1. 5. аспекты Абрамова Л.Л., Антипов А.А., Сечин В.А. Функциональные морфогенеза совершенствования молочной технологии железы отрасли // коз в направлении Актуальные проблемы производства и переработки продукции животноводства и птицеводства: материалы первой международной конференции. Уфа, 2000. С. 14–19. 6. Абрамова Л.Л., Меерзон Т.И. Функциональная морфология молочной железы собак // Оренбург: Изд. ОГПУ. 2008. 203 с. 7. Автандилов Г.Г. Медицинская морфометрия. М.: Издательство «Медицина», 1990. 382 с. 8. Автандилов Г.Г. Основы количественной патологической анатомии. М.: Издательство «Медицина», 2002. 240 с. 9. Авцын А.П. Недостаточность эссенциальных микроэлементов и ее проявление в патологии // Архив патологии. 1990. Т. 52. № 3. С. 3–8. 180 10. Алиев А.А., Садиков М.М. Влияние различных препаратов селена в составе опытно-минерального премикса (ОМП) на прирост живой массы телят от 1 до 6 месячного возраста // Современные проблемы и перспективы развития аграрной науки: сборник статей Междунар. науч.практич. конф., посв. 65-летию Победы в ВОВ. В 2-х ч. Ч. 1. Махачкала: ДГСХА, 2010. С. 291–293. 11. Алиев М.Г., Исмаилов Ю.Б. Стимуляция секреции пролактина одновременной ингибицией дофаминэргической и активацией серотонической систем гипоталамуса // Физиологический журнал СССР им. И.М. Сеченова. 1990. Т. 76. № 6. С. 795–800. 12. Антонова В.С., Соловьев С.А., Сечина М.А. Методические указания для лабораторно-практических занятий по курсу «Технология переработки молока» Оренбург: Издательский центр ОГАУ, 2007. 87 с. 13. Ануфриев А.И., Волкова С.В., Ануфриев П.А. Этиология незаразных факторных заболеваний органов размножения и молочной железы у свиней / Современные наукоемкие технологии. 2007. №12. С.29–31. 14. Баграмян Э.Р., Бурдина Л.М., Волобуев А.И. Гормоны и маммогенез // Акушерство и гинекология. 1990. Т. 1. № 12. С. 3–6. 15. средствами Базаров М.К. Статистическая обработка результатов наблюдений Microsoft Excel: пособие для аспирантов. Оренбург: Издательский центр ОГАУ, 2008. 44 с. 16. Барабой В.А. Биологические функции, метаболизм и механизмы действия селена // Успехи современной биологии. 2004. Т. 124. № 2. С. 157–168. 17. Баскакова А.А. Влияние витаминов и микроэлементов на репродуктивную систему собак // Практик. 2005. № 1–2. С. 100–103. 18. Беляев В.И., Балым Ю.П. Влияние селенита натрия и селеданта на супоросных свиноматок и потомство // Ветеринария. 2007. № 11. С. 33–35. 19. Берестов В.А. Очерки по физиологии пушных зверей. Л.: Издательство «Наука», 1987. 239 с. 181 20. Блинов В.А., Буршина С.Н., Шапулина Е.А. Селенолин (биохимические и патофизиологические аспекты): монография. Саратов: ИЦ «Наука», 2010. 126 с. 21. Боев В.М. Микроэлементы и доказательная медицина. М.: Медицина, 2005. 208 с. 22. Болиева Л.З., Сергеев А.В., Чочиева А.Р. Изучение иммуномодулирующей активности витаминов Е, С, бета - каротина и селена // Фундаментальные исследования. 2008. № 6. С. 139 – 140. 23. Булатов А.П., С.Ф. Суханова Повышение продуктивных качеств маточного стада гусей применением селенсодержащих препаратов // Зоотехния. 2005. № 5. С. 11–13. 24. Бондаренко С.П. Энциклопедия травоядных пушных животных. М.: ООО «Издательство АСТ»; Донецк: Сталкер, 2003. 416 с. 25. об Бурцева Т.И., Голубкина Н.А., Мирошников С.А. и др. К вопросу обеспеченности селеном жителей Оренбургского региона // Микроэлементы в медицине. 2008. Т. 9. Вып. 1–2. С. 88–89. 26. Вакуленко И.С. Молочная продуктивность крольчих и рост молодняка // Кролиководство и звероводство. 1984. № 5. С. 11–13. 27. Вапиров В.В., Шубина М.Э., Вапирова Н.В. и др. Селен. Некоторые аспекты химии, экологии и участия в развитии патологии (обзор). Петрозаводск: ПетрГУ, 2000. 68 с. 28. Васильев А.М., Прытков Ю.Н. Влияние ДАФС-25 на продуктивность растущих свиней // Достижения науки и техники АПК. 2007. № 4. С. 50. 29. Волков С.В., Татарникова Н.А. Рак молочной железы у кошек // Пермский аграрный вестник. В 2-х ч. Ч. 1. Пермь, 2008. С. 204–206. 30. Волкотруб Л.П., Андронова Т.В. Роль селена в развитии и предупреждении заболеваний // Гигиена и санитария. 2001. № 3. С. 57–61. 31. Георгиевский В.И., Анненков Б.Н., Самохин В.Т. Минеральное питание животных. М.: Издательство «Колос», 1979. 470 с. 182 32. Георгиевский В.И., Медведев И.К., Булачев В.Н. Регуляция роста и развития молочной железы у жвачных животных // Известия ТСХА. 1988. № 1. С. 141–151. 33. Георгиевский В.Н. Физиология сельскохозяйственных животных. М.: Издательство «Агропромиздат», 1990. 511 с. 34. Гистология / под ред. Ю.И. Афанасьеа. Изд. 5-е, перераб. и доп. М.: Издательство «Медицина», 2002. 744 с. 35. Гмошинский И.В., Мазо В.К. Минеральные вещества в питании человека. Селен: всасывание и биодоступность // Вопросы питания. 2006. Т. 75. № 5. С. 15–21. 36. Голубкина Н.А., Манкуева С.Д., Широков Д.В. Пресноводные виды рыб России как источник диетического селена // Хранение и переработка сельхозсырья. 2003. № 8. С. 74–77. 37. Голубкина Н.А., Беляев В.И. Некоторые особенности аккумулирования селена тканями и органами животных // Свободные радикалы. Антиоксиданты и здоровье животных: мат. междунар. науч.-практ. конф. Воронеж, 2004. С. 52–55. 38. Гончарова В.М. Морфологические основы лактогенеза у свиней крупной белой породы в первую половину супоросности // Актуальные проблемы ветеринарии и животноводства: материалы межрег. науч. - практич. конф. Самара: ГНУ СамНИВС Россельхозакадемии, 2010. С. 100 - 103. 39. Горлов И.Ф., Храмова В.Н., Сивков А.И. Влияние селенсодержащих препаратов на молоко коров // Вестник РАСХН. 2006. № 4. С. 94–96. 40. Горлов И.Ф., Варакин А.Т., Варакина Е.А. Использование кормовых добавок при производстве козьего молока // Хранение и переработка с.-х. сырья. 2006. № 5. С. 42–45. 183 41. Горлов И.Ф., Храмова В.Н. Повышение пищевой ценности молока за счет обогащения рациона коров органическим селеном // Хранение и переработка с.-х. сырья. 2006. № 4. С. 49–52. 42. Гормональная регуляция размножения у млекопитающих/ под ред. К. Остина, Р. Шорта; пер. с англ. М.: Издательство «Мир», 1987. 305 с. 43. Грачев И.И., Галанцев В.П. Физиология лактации, общая и сравнительная. М.: Издательство «Наука», 1973. 590 с. 44. Грачев И.И., Попов С.М., Скопичев В.Г. Цитофизиология секреции молока Л., 1976. 242 с. 45. Грачев И.И., Алексеев Н.П. Роль рецепторов в регуляции лактации. Л.: Наука, 1980. 220 с. 46. Грезина Н.М., Зиновьева Н.А. Развитие молочной железы крольчих // Цитология. 2005. Т. 47. № 1. С. 49–56. 47. Гуляева О.Г., Дроздова Л.И., Тулакина Л.Г. Гистологическое и ультраструктурное строение молочной железы морской свинки // Морфофизиология и ультраструктура организма животных и птиц при патогенном воздействии. 1998. С. 26–33. 48. Гуляева О.Г. Гистологическое строение лактирующей молочной железы морской свинки // Материалы Междунар. науч. - практич. конференции морфологов, посвящ. памяти акад. Ю.Ф. Юдичева «Достижения эволюционной, возрастной и экологической морфологии – практике медицины и ветеринарии». Омск, 2001. С. 168–169. 49. Гуменюк А.П., Воронин С.П., Скорляков В.М. Новый селенсодержащий ветеринарный препарат «Селенолин®». Применение и перспективы // Аграрный вестник Юго-Востока. 2009. № 1. С. 45–47. 50. Давлетшина Д.Ф., Фаритов Т.А. Применение препаратов селена при выращивании телят до шести месяцев // Зоотехния. 2005. № 6. С. 12–15. 51. Дворянцев А.В., Дубровина Н.В. Использование селеносодержащих препаратов в коневодстве // Материалы междунар. науч. - практич. конф. «Актуальные проблемы биологии и ветеринарной 184 медицины мелких домашних животных». 21 мая 2009г. Троицк: УГАВМ, 2009. С. 188–190. 52. Джакупов И.Т., Кабаков В.В. Влияние Е-селена на воспроизводительную функцию и продуктивность коров // Ветеринария. 2004. № 12. С. 37–39. 53. Дженбаев Б.М., Мурсалиев А.М., Ермаков В.В. и др. Биогенность химических элементов и селеновый статус. Бишкек: НАН РК, 1999. 89 с. 54. Дубравная Г.А., Абакин С.С. Влияние препарата «Селенолин» на организм свиноматок крупной белой породы // Проблемы и перспективы современной науки: сб. науч. тр. Вып 1. Томск, 2008. С. 87. 55. Дубравная Г.А. Оценка качественных показателей потомства свиноматок крупной белой породы при воздействии препарата «Селенолин» // Свиноводство. 2009. № 6. С. 60–62. 56. Дунин И.М., Лебенгарц Я.З. Экологические аспекты использования селена в молочном скотоводстве // С.-х. биология. 1997. № 6. С. 71–81. 57. Егорова Е.А., Гмошинский И.В., Зорин С.И. Изучение биодоступности различных пищевых форм микроэлемента селена в эксперименте // Вопросы питания. 2006. Т. 75. № 3. С. 45–49. 58. Ермаков В.В. Ковальский В.В. Биологическое значение селена М.: Издательство «Наука», 1974. 300 с. 59. Ермаков В.В. Биогеохимия селена и его значение в профилактике эндемических заболеваний человека // Вестник отделения наук о Земле РАН. 2004. № 1. С. 1–17. 60. Жеденов В.Н., Бигдан С.С., Лукьянова В.П. и др. Анатомия кролика М.: «Медицина», 1957. 311 с. 61. Жеребцов Н.А. Цитология, гистология и эмбриология. - Ульяновск, 2000. 144 с. 62. Закс М.Г. Молочная железа. Нервная и гормональная регуляция ее развития и функции. М.: «Литература», 1964. 275 с. 185 63. Зеленевский Н.В. Международная ветеринарная анатомическая номенклатура. Четвертая редакция. М.: «Колос», 2003. 351 с. 64. Иванов В.Н., Кабишев А.А., Городецкий С.И. Активизация транс- действующего фактора транскрипции NF 1 в лактирующей молочной железе // Молекулярная биология. 1990. № 4. С. 1605–1615. 65. Иванов В.Н., Никитина Л.П., Аникина Л.В. Биоселен - эффективное средство в лечении сердечнососудистых заболеваний // Морской медицинский журнал. 1997. № 1. С. 9–43. 66. Кактурский Л.В., Строчкова Л.С., Истомин А.А. Гипоселенозы // Архив патологии. 1990. Т. 52. № 12. С. 3. 67. Калугин Ю.А. Сукрольность крольчих // Кролиководство и звероводство. 2007. № 3. С. 29–31. 68. Калякина Р.Г. Динамика и топография популяций тучных клеток молочной железы крольчих при смене функциональных состояний // Пермский аграрный вестник: сб. науч. трудов XXXIV Всеросс. науч.– практич. конф. ученых и специалистов, посв. 140-летию со дня рождения академика Д.Н. Прянишникова (18–19 апреля 2006 г., г. Пермь). Вып. XVI. Ч. I. Пермь: Пермская ГСХА, 2006. С. 281–282. 69. Камышников В.С. Справочник по клинико-биохимической лабораторной диагностике. Т 2. Минск: Беларусь, 2000. 495 с. 70. Карпов В.А. Акушерство и гинекология мелких домашних животных. М.: Издательство «Росагропромиздат», 1990. 288 с. 71. Картекенова Р.В., Галлиев Б.Х., Картекенов К.Ш. Гематологические и биохимические показатели крови при скармливании селена бычкам мясного направления // Вестник Оренбургского государственного университета. 2008. № 82. С. 206–207. 72. Касумов С.Н. Основы применения селена в кормлении сельскохозяйственной птицы. М.: Издательство «ВНИИТЭИСХ», 1981. 61 с. 73. Киреев И.В., Оробец В.А., Скрипкин В.С. и др. Влияние препарата «Селевит» на активность антиоксидантных ферментов в крови 186 телят // Материалы междунар. науч. - практич. конф., посв. 75-летию факультета ветеринарной медицины «Современные тенденции развития ветеринарной медицины и инновационные технологии в ветеринарии и животноводстве». 24–25 июня 2010 г. г. Улан-Удэ, 2010. С. 86–87. 74. Кистина А.А., Прытков Ю.Н., Гурьянов А.М. Эффективность применения селенсодержащих препаратов в молочном скотоводстве // Достижения науки и техники в АПК. 2010. № 3. С. 50–52. 75. Клиническое руководство по лабораторным тестам / под ред. Н. Тица; пер. с англ. М.: Юнимед ПРЕСС, 2004. 960 с. 76. Ключникова Н., Ключников М. Применение селенита натрия на фермах Дальневосточного региона // Молочное и мясное скотоводство. 2006. № 5. С. 26–27. 77. Кобылкин К.А., Давыдов В.Н. Домашние кролики // Вестник БГУ. 2001. В. 4. № 6. С. 51–54. 78. Коколина В.Ф. Фомина М.А. Развитие молочных желез в процессе созревания репродуктивной системы // Российский вестник акушера-гинеколога. 2006. № 3. С. 26–32. 79. Кокорев В.А., Кистина А.А., Прытков Ю.Н. и др. Влияние селена на продуктивность бычков // Зоотехния. 1997. № 1. С. 15–95. 80. Кокорев В.А., Прытков Ю.Н., Кистина А.А. Биологическое обоснование потребности ремонтных телок в селене при травяном типе кормления // Сельскохозяйственная биология. 2001. № 6. С. 85–17. 81. Колодина Л.Н., Корхов В.В. Нейрогормональная регуляция лактации // Акушерство и гинекология. 1985. № 5. С. 5–8. 82. Кондрахин И.П. Методы ветеринарной клинической лабораторной диагностики. М.: Издательство «Колос», 1985. 520 с. 83. на рост Котенкова Е.В., Федосов Е.В., Ушакова Н.А. Влияние матери и развитие кроликов на разных стадиях онтогенеза: теоретические и прикладные аспекты // Успехи современной биологии. 2010. Т. 130. № 5. С. 497–513. 187 84. Крапивина Е.В., Ващенин Е.П., Иванов В.П. и др. О влиянии селенопирана и витаминов А, Д, Е на иммунный статус молодняка крупного рогатого скота черно-пестрой породы // Сельскохозяйственная биология. 2002. № 6. С. 107–112. 85. Кролики и нутрии. Разведение и выращивание. Ростов н/Д: Издательство «Проф-Пресс», 2000. 192 с. 86. Кудрин А.В., Скальный А.В. Микроэлементы в онкологии // Микроэлементы в медицине. 2001. № 2. С. 31–39. 87. Кудрявцев А.А. Селен в кормлении животных и предупреждение его недостаточности // Сельское хозяйство за рубежом. 1974. № 1. С.14–17. 88. Кузнецов Л.В. Чарльз Дарвин о кроликах // Кролиководство и звероводство. 2002. № 3. С. 22. 89. Кулько К.С. Биологические особенности кроликов // Кролиководство и звероводство. 2004. № 5. С. 24. 90. Курбатова Л.В. Макро-микроскопическая картина протоковой системы молочных желез крольчих породы шиншилла и белый великан в возрастном аспекте // Тез. докладов Всесоюз. конф. по анатомии, гистологии и эмбриологии сельскохозяйственных животных (29 июня – 4 июля 1972г.). Москва, 1972. С. 112–123. 91. Курбатова Л.В. Особенности развития секреторных отделов молочных желез при первой сукрольности у кроликов пород шиншилла и белый великан // Возрастные и типовые особенности строения органов сельскохозяйственных животных. Т. 43. Пермь, 1977. С. 37–44. 92. Курбатова Л.В. Развитие протоковой и емкостных систем молочных желез у крольчих // Возрастные и типовые особенности строения органов сельскохозяйственных животных. Т. 43. Пермь, 1977. С. 45–49. 93. Лаврова Э.Н. Взаимосвязи тканевых компонентов молочной железы // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии. 1974. Т. XVII. № 8. С. 82–87. 188 94. Лапина Т.И., Иванова Л.В. Эффективность применения селенсодержащих препаратов в звероводстве // Методические рекомендации. Ставрополь: Сильная реклама, 2008. 20 с. 95. Лебедев Н.И. Использование микродобавок для повышения продуктивности жвачных животных: Издательство «Агропромиздат», 1990. 96 с. 96. Лебедев С.В., Рахматуллин Ш.Г., Сизова Е.А. и др. Элементный статус организма цыплят-бройлеров на фоне различной нутриентной обеспеченности // Известия Оренбургского государственного аграрного университета. 2008. № 4. С. 103–105. 97. Литвинова Л.Ф. Половой цикл у рефлекторно овулирующих кроликов // Физиология животных. 1993. Т. 79. № 3. С. 103–108. 98. органного Макарзин Г.Ю., Черепанов Г.Г., Бояршинов И.А. Взаимосвязь кровотока, поглощения субстратов из крови, активности транспорта в секреторные клетки молочной железы и образования компонентов молока у млекопитающих // Российский физиологический журнал им. И.М. Сеченова. 2003. Т. 89. № 8. С. 951–959. 99. Маринченко Г.В. Специфически протеазы, деградирующие пролактин в молочной железе; субклеточная локализация и ингибиторный анализ // Биохимия. 1985. Т. 50. № 2. С. 200–210. 100. Маринченко Г.В. Лизосомальный путь деградации пролактина в молочной железе: кенетика гидролиза пролактина катепсином D и образующиеся фрагменты // Биохимия. 1989. Т. 54. № 4. С. 629–638. 101. Медведева М.А. Клиническая ветеринарная лабораторная диагностика // Справочник для ветеринарных врачей. М.: ООО «АквариумПринт», 2008. 416 с. 102. Минина И.С., Майоров А.И. Все о кроликах // Агропромиздат, 1988. 181 с. 103. Минина И.С. Выращивание крольчат - дело не простое // Кролиководство и звероводство. 2002. № 4. С. 28–30. 189 104. Мишанин Ю.Ф. Мишанин М.Ю., Кочерга А.В. и др. Содержание витаминов в яйцах кур-несушек в зависимости от доли селена в кормовом рационе // Известия вузов, пищевая технология. 2007. № 1. С. 14–15. 105. Мнихович М.В. Экстрацеллюлярный матрикс молочной железы и варианты клеточных взаимодействий в молочной железе при введении половых гормонов // Морфология. 2009. Т. 136. № 4. С. 100. 106. Надаринская М.А. Влияние разных уровней селена на минеральный обмен у высокопродуктивных коров // Актуальные проблемы интенсивного развития животноводства: сборник научных трудов / Министерство сельского хозяйства и продовольствия Республики Беларусь, Главное управление образования, науки и кадров, Учреждение образования «Белорусская государственная сельскохозяйственная академия». Горки, 2005. Вып. 8. Ч. 2. С. 91–93. 107. Назаренко И.И., И.Н. Ермаков Аналитическая химия селена и теллура // М.: Наука, 1971. 254 с. 108. Нигматуллин Р.М. Эффективный метод определения половой активности крольчих / Кролиководство и звероводство. 2007. № 2. С. 30–31. 109. Нигматуллин Р.М. Ритмичность полового цикла у ремонтных крольчих породы калифорнийская // Кролиководство и звероводство. 2008. № 2. С. 30–31. 110. Никитенков А., Яхин А., Крохина В. Селеноорганический препарат в комбикормах для свиноматок // Комбикорма: производство и использование. 2001. № 6. С. 45. 111. Никитченко В.В., Андрущак Л.А., Хаевская В.И. и др. Эволюция молочных желез крыс после прерывания беременности, прекращения лактации и воздействия витамина А // Архив анатомии, гистологии и эмбриологии Л., 1987. Вып. 93. № 11. С. 98–104. 112. Новиков В.С., Цыган В.Н. Физиологические аспекты апоптоза // Российский физиологический журнал. 1997. Т. 83. № 4. С. 13–23. 190 113. Нурушев М.Ж., Шевченко Б.П., Сеитов М.С. Возрастная биология органов внутренней секреции и гемоцитопоэза // Кокшетау: АО «Кокше-Полиграфия», 2011. 140 с. 114. Овчинникова Р.Е. Молочная железа интактных свиней крупной белой породы // Анатомия молочной железы сельскохозяйственных животных в состоянии нормы и при патологии: межвуз. сб. науч. тр. Пермь, 1985. С. 71–76. 115. Оробец В.А. Эффективность применения Е-селена у молочных коров // Актуальные вопросы зоотехнической науки и практики как основа улучшения продуктивных качеств и здоровья с.-х. животных. Ставрополь: Агрус, 2005. С. 396–397. 116. Панфилова содержание селена, М.Н., Смирнов альбуминов и М.И. Влияние глобулинов в ДАФС-25 сыворотке на крови телят // Новые фармакологические средства для животноводства и ветеринарии: сб. матер. науч. - практич. конф. посвящ. 55-летию «ГУ Краснодарский НИВС». Краснодар, 2001. С. 122–123. 117. Панфилова М.Н., Родионова Т.Н., Воронин С.П. Применение селенолина для коров в сухостойный период / Сб. матер. Всероссийской научно-практической конф. Пенза. 2004. 223 с. 118. Папазян Т.Т. Голубкина Н.А. Селен в кормах сельскохозяйственных животных, птицы, рыбы // Вестник РАСХН. 2004. № 5. С. 64–66. 119. Папазян Т.Т., Сурай П.Ф. Роль антиоксидантов в размножении и способности к оплодотворению птицы // Птица и птицепродукты. 2007. № 2. С.49–52. 120. Папазян Т.Т. Фисинин В.И., Сурай П.Ф. Взаимодействие между витамином Е и селеном: новый взгляд на старую проблему // Птица и птицепродукты. 2009. № 1. С.37–39. 191 121. Печенникова Е.В. Вашкова В.В., Можаев Е.А. О биологическом значении микроэлементов (обзор зарубежной литературы) // Гигиена и санитария. 1997. № 4. С.41–43. 122. Племяшов К.В. Соколов В.И., Конопатов Ю.В. Молочная железа - морфология, физиология и биохимические аспекты лактогенеза // СПбГАВМ, Санкт-Петербург, 2007. 30 с. 123. Плотников В.Г. Беременность самок и подготовка к окролам // Кролиководство и звероводство. 1992. № 1. С. 26–27. 124. Плотников В.Г. Планирование окролов // Кролиководство и звероводство. 2001. № 2. С. 28–29. 125. Попов С.М. Клеточные механизмы регуляции секреторного процесса в молочной железе. Л., 1989. 200 с. 126. Приступа В.Н. Энциклопедия животноводства: справочное пособие // Ростов н/Д: Феникс, 2000. 640 с. 127. Пронин В.В., Плешаков Н.Ф., Наумова В.В. Профилактика и лечение микроэлементной недостаточности у овец романовской породы в Ивановской области: рекомендации // Иваново, 2005. 19 с. 128. Прытков Ю.Н., Кокорев В.А., Кистина А.А. Оптимизация норм селена в рационе в пастбищный период содержания молодняка крупного рогатого скота // Доклады РАСХН, 2005. № 3. С. 52–55. 129. Решетник Л.А., Парфенова Е.О. Селен и здоровье человека // Российский педиатрический журнал. 2000. № 2. С. 41–43. 130. Родионова Т.Н. Динамика белков и белковых фракций сыворотки крови у кур-несушек при включении в рацион различных доз селена // Диагностика и профилактика болезней сельскохозяйственных животных: сборник научных трудов. Саратов, 1992. С. 121–128. 131. Родионова Т.Н., Белаш В.А. Влияние селеноорганического препарата «ДАФС-25» на некоторые показатели обмена веществ и продуктивность кур-несушек // Ветеринария и зоотехния: юбилейный 192 сборник научных трудов, посвящ. 150-летию ин-та вет. мед. СГАУ им. Н.И. Вавилова. Саратов, 2000. С.211–217. 132. Родионова Селенорганический Т.Н., Васильев препарат «ДАФС-25» В.Ю., в Ульихина кормлении Л.И. кроликов // Зоотехния. 2001. № 3, С. 19–20. 133. Рожнов В.В., Найденко Св.В., Найденко С.В. Изменение уровня стероидных гормонов в плазме крови у трех видов куньих (Mammalia, Carnivora: Mustelidae) в течение годового цикла // Доклады Академии наук, 2007. Т. 413. № 1, С. 138–141. 134. Рыбаков А.В., Ложкин Э.Ф. Влияние продуктивности и качества лактаций на развитие артериальной сети вымени крупного рогатого скота // Актуальные проблемы науки в АПК. Материалы междунар. науч.-практич. конф. Кострома. 2003. Т. 2. С. 158. 135. Сайко С.Г. Особенности макромикроскопического строения молочной железы американской норки в зависимости от возраста и морфофункционального состояния половой системы // Тр. Свердл. СХИ. Свердловск, 1988. Т. 54. С. 86–93. 136. Сайко С.Г. Морфологические особенности молочных желез у половозрелых самок американской норки // Макро- и микроморфология сельскохозяйственных животных и пушных зверей: межвуз. сб. науч. тр. Омск, 1990. С. 35–38. 137. Саломатин В., Ряднов А., Шперов А. Селенсодержащие препараты в кормлении свиней // Комбикорма. 2008. № 8. С. 76–77. 138. Седов Ю.Д. Кролики. Разведение, содержание, уход. // Изд. 2-е. Ростов н/Д: Феникс, 2008. 173 с. 139. Сеитов М.С., Клёнов В.А., Сорокин В.И. Некоторые аспекты эндокринной регуляции репродуктивной функции коз оренбургской пуховой породы // Юбилейный сборник трудов ученых Оренбургского ГАУ. Оренбург: Издательский центр ОГАУ, 2000. С. 17–20. 193 140. Шабунин С.В., Беляев В.И., Дубовской И.И. и др. Селен (биологические свойства и применение в животноводстве и ветеринарии) // Воронеж, 2007. 96 с. 141. Сергеева Н.И., Л.К. Дзеранова, Е.В. Меских, и др. Участие пролактина в маммогенезе и канцерогенезе молочной железы // Акушерство и гинекология. 2005. № 3, С 13–17. 142. Сидоркин В.А., Улизко М.А., Якунин К.А. и др. Лечение и профилактика селенодефицитных состояний животных // Ветеринария. 2008. № 3. С. 8–9. 143. Сидоркин В.А., Улизко М.А., Клищенко О.А. Беломышечная болезнь крупного рогатого скота в зоне селенодефицита // Кролиководство и звероводство. 2009. № 1. С. 50–51. 144. Сидорова К.А., Есенбаева К.С., Петрова Н.А. и др. Влияние пробиотиков на показатели крови кроликов // Вестник Тюменской ГСХА. Вып. 1. Тюмень, 2007. С. 162–163. 145. Сидорова К.А., Череменина Н.А. Изучение влияния селена на обменные процессы кроликов // Фундаментальные исследования. 2009. № 3. С. 73. 146. Скопичев В.Г., Морфофункциональная Балакина организация Г.Б., межклеточного Турбаева О.И. взаимодействия в альвеолах молочной железы // Вопросы нейроэндокринологии. Л.: ЛГУ, 1983. С. 59–65. 147. Скопичев В.Г., Камардина Т.А. Изменение ядер железистых клеток молочной железы в секреторном цикле // Цитология. 1988. № 2. С. 183–187. 148. Смирнов М.И., Воробьев В.И., Загреков А.А. Влияние «ДАФС25» на антиоксидантную систему и продуктивность овец/ М.И. Смирнов, // 3я международная конференция «Актуальные проблемы биологии в животноводстве»: тезисы докладов. Боровск, 2000. С. 342–343. 194 149. Смирнова Е.П., Соловьева Л.П. Строение молочной железы лосих // Актуальные Сибирского вопросы международного ветеринарной медицины: ветеринарного материалы конгресса. Новосибирск, 2005. С. 334. 150. Соколов А.В., Замана С.П. Дефицит эссенциальных элементов в кормах как следствие низкого уровня минерального питания кормовых угодий // Аграрная наука. 2001. № 2. С. 22–23. 151. Соловьева Л.П., Горбунова Н.П. Морфогенез молочной железы овец романовской породы // Формирование правовой системы Российской Федерации, ее влияние на становление государственности нового типа в Костромской области: мат. межрегион. науч.-практич. конф. Кострома, 2004. С. 240–243. 152. Соловьева Л.П., Бородулина А.В., Голубева О.А. Морфология молочной железы кобыл орловской породы // Актуальные проблемы науки в АПК: мат. 56-й междунар. науч.-практич. конф. Кострома, 2005. Т. 2. С. 152– 153. 153. Сотников О.С. Динамика структуры живого нейрона. Л.: Наука, 1986. 159 с. 154. Стадников А.А. Гипоталамические факторы регуляции процессов роста, пролиферации и цитодифференцировки эпителия аденогипофиза. Екатеринбург: Уро РАН, 1999. 140 с. 155. Старков М.В., Мерзлякова Е.А., Трошина Т.А. Изменение показателей АлАт, АсАТ и гистологической структуры печени на фоне применения премиксов при откорме крупного рогатого скота // Научное обеспечение реализации национальных проектов в сельском хозяйстве: материалы Всерос. науч.-практ. конф. ФГОУ ВПО Ижевская ГСХА. Ижевск: РИО ФГОУ ВПО Ижевская ГСХА, 2006. Т. 2. С. 263–265. 156. Стрейн Дж. Последствия превышения рекомендуемой суточной дозы микронутриентов: фолиевой кислоты и селена // Вопросы питания. 2000. С. 50–53. 195 157. Тараненко А.Г. Пролактин и лактация // М.: Агропромиздат, 1987. 237 с. 158. Тверской Г.Б. Макар З.Н., Мещеряков В.П. Влияние денервации половины вымени на его кровоснабжение // Бюлл. ВНИИФБиП с.-х. животных. 1993. Вып. 1 (105). С. 26–30. 159. Теняев А. Важность витамина Е в кормах для животных // Комбикорма: производство и использование. 2001. № 2. С. 52–54. 160. Тинаев Н.И. Случка кроликов // Кролиководство и звероводство. 2007. № 5. С. 23–24. 161. Тиц Н.У Клиническое руководство по лабораторным тестам // М.: Юнимед-пресс, 2003. 178 с. 162. Токмаков А.А., Фуками Я. Внегеномные механизмы действия прогестерона // Цитология. 2009 Т. 51. № 5. С. 403–416. 163. Толкунов Ю.А., Марков А.Г. Лактация // Нейроэндокринология. СПб., 1994. Т. 2. С. 248–258. 164. Трапезов О.В., Трапезова Л.И. Кролики и цивилизация // Кролиководство и звероводство. 2006 № 1. С. 16. 165. Трапезов О.В., Трапезова Л.И. Об антиоксидантах и бесконтрольном их применении / О.В. Трапезов, // Ветеринария. 2008 № 10. С. 4–5. 166. Третьяк Л.Н., Герасимов Е.М. Специфика влияния селена на организм человека и животных (применительно к проблеме создания селеносодержащих продуктов питания) // Вестник Оренбургского государственного университета. 2007. № 12. С.136–144. 167. Трифонов Г., Перунова Е. Влияние препаратов микроэлемента селена на воспроизводительные качества свиней // Свиноводство. 2001. № 1. С. 18–20. 168. Трошина Т.А. Биохимические показатели крови пушных зверей // Естествознание и гуманизм: сб. науч. трудов «Современный мир, природа и человек». Томск, 2008. Т. 5. № 1. С. 39. 196 169. Трошина Т.А., Вакилов Р.Ф. К вопросу баланса микронутриентов у животных // Научный потенциал–аграрному производству: мат. Всерос. науч.-произв. конф., 2008 г. Ижевск, 2008. Т. 3. С. 169–171. 170. Тузова Р.В. Эволюция домашних животных. // М.: Изд-во «Знание», 1989. 140 с. 171. Тутельян В.А., Княжев В.А., Хотимченко С.А. и др. Селен в организме человека: метаболизм, антиоксидантные свойства, роль в канцерогенезе. М.: Изд-во РАМН, 2002. 224 с. 172. Фисинин В.И., Папазян Т.Т. Повышение продуктивности птицы, качества яиц и мяса: роль селена // Птицеводство. 2003. № 6. С. 2–5. 173. Халипаев М.Г. Содержание гормонов в сыворотке крови маток в зависимости от сезона года // Овцы, козы, шерстяное дело. 2003. № 1. - С. 12–14. 174. Черепанов Г.Г., Макар З.Н. Сопряженная регуляция органного кровотока и метаболизма секреторных клеток молочной железы: анализ проблемы // Успехи физиологических наук. 2007. Т. 38. № 1. С. 74–84. 175. Чернуха И.М. Бабурина М.И., Кирилов М.П. и др. Прижизненное обогащение мяса кроликов селеном // Кролиководство и звероводство. 2006. № 2. С. 12–14. 176. Чугай Б.Л., Краснослободцева А.С., Крысин М.П. и др. Селеноорганические препараты «ДАФС-25» и «Селенолин®» в животноводстве // Вестник ТГУ. 2009. Т. 14. Вып.1 С. 156–157. 177. Чумаченко П.А., Хмельницкий О.К., Шлыков И.П. Молочная железа и эндокринный гомеостаз. Воронеж: ВГУ, 1987. С. 132. 178. Чумаченко П.А., Шлыков И.П. Молочная железа: морфометрический анализ. Воронеж: Издательство ВГУ, 1991. 160 с. 179. Шахов А.Г., Бригадиров Ю.Н., Масьянов Ю.Н. и др. Влияние лигфола и селекора на показатели неспецифической резистентности и формирование иммунитета у свиноматок и поросят // Свободные радикалы, 197 антиоксиданты и здоровье животных: мат. междунар. науч.-пр. конф. 21–22сентября 2004 г. Воронеж, 2004. С. 309–313. 180. Шевченко Б.П. Анатомия бурого медведя. Оренбург, 2003. 452 с. 181. Шевченко Б.П., Дегтярев В.В., Абрамова Л.Л. Клиническая и экспертная анатомия (в схемах, рисунках и таблицах). Изд. 2-е, испр. и доп. Оренбург: Издательский центр ОГАУ, 2010. 111 с. 182. Шишкина Г.Н., Дэгало Н.Н. Молекулярная физиология адренергических рецепторов // Успехи физиологических наук, 1997. Т. 28. № 1. С. 61–74. 183. Шманенкова Н.А. Физиология сельскохозяйственных животных. Л.: Наука, 1978. 223 с. 184. Шпаков А.О. Структурно-функциональная организация рецепторов полипептидных гормонов, содержащих LRR-повторы, и их взаимодействие с гетеротримерными G-белками // Цитология. 2009. Т. 51. № 8. С. 637–649. 185. Шульга Н.Н., Сокольникова Т.А., Шульга В.Н. Динамика иммуноглобулинов в крови стельных коров // Вестник РАСХН, 2006. № 2. С. 48–49. 186. Щипакин М.В. Строение молочной железы новорожденных коз зааненской породы // Материалы междунар. науч.-практ. конф. «Актуальные проблемы биологии и ветеринарной медицины мелких домашних животных», 21 мая 2009 г. Троицк, 2009. С. 127–129. 187. Энциклопедия травоядных пушных животных / авт.-сост. С.П. Бондаренко. М.: ООО «Издательство АСТ»; Донецк: Сталкер, 2003. 416 с. 188. Яппаров И.А., Родионова Т.Н. Испытание «Селебена» на растущих кроликах // Кролиководство и звероводство. 2006. № 6. С. 11. 189. Alexander C.M., Selvarajan S., Mudgett J. et all. Stromelysin-1 regulates adipogenesis during mammary gland involution // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 2001. Vol. 14. № 2. P. 42–51. 198 190. Alfthan G., Aro A., Arvilommi H. et all. Deposition of selenium in toenails is dependent on the form of dietary selenium // Biomarkers of Dietary Exposure: Proc. 3 rd Meet. Nat. Epidem. Rotterdam, Jan., 23-25 1991. P. 110. 191. Anderson E., Clarke R.B. Steroid receptors and cell cycle in normal mammary epithelium // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 2004. Vol. 9. № 1. P. 3–13. 192. Atwood C.S., Ikeda М., Vonderhaar В.К. Involution of mouse mammary glands in whole organ culture: a model for studying programmed cell death // Biochem. Biophys. Res. Commun. 1995. Vol. 207. № 2. P. 860–867. 193. Bala L.S., Bhoopendra S., Kavita G. et all. Role of nutrition in toxic injury // Indian J. Exp. Biol. 1999. Vol. 37. № 2. P. 109–116. 194. Behne D., Weiss-Nowak Ch., Kalcklosch M. Studies on the distribution and characteristics of new mammalian selenoproteins // J. Environ. Sci. 2007. № 1. P. 2–23. 195. Belozertsev Y.A. Yuntsev S.V., Voshchenko A.V. Action of honey and selenium supplements on cognitive status // VIII Rus.-Jap. Int. Med. Symp. Sept. 21-22. Blagoveshensk. 2000. P. 409–410. 196. Bernstein G., Gruber G. Dietary selenium, vitamin E and ultraviolet light on the skin of chicks and hairless mice // The J. of Clinical Endocrinology & Metabolism. 2002. Vol. 86, № 3. Р. 1136–1141. 197. Beyer C., Hoffman K.L., Gonzalez O. Flores Neuroedocrine regulation of estrous behavior in the rabbit: Similarities and differences with the rat // J. Hormones and Behavior. 2007. Vol.. 52. № 1. P. 2–14. 198. Blanco A., Moya L., Flores R. Effects of anabolic implants of estradiol alone or in combination with trenbolone acetate on the ultrastructure of mammary glands in female lambs regarding their interference in prolactin secretion // J. Vet. Med. A: Physiol. Pathol. Clin. Med. 2002. Vol. 49. № 1. P. 13–17. 199 199. Brisken C. Hormonal control of alveolar development and its implications for breast carcinogenesis // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 2002. Vol. 7. № 1. P. 39–48. 200. Burgoyne R., Duncan J. Secretion of Milk Proteins // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 1998. Vol. 3. № 3. P. 275–286. 201. Camargo E.V., Dos Anjos Lopes S.T., Costa M.M. et all. Neutrophil oxidative metabolism and haemogram of sheep experimentally infected with haemonchus contortus and supplemented with selenium and vitamin E // J. Anim. Physiol. Anim. Nutr. (Berl). 2010. № 6. Р. 264–268. 202. Сarrington C.A., Hosick H.L., Forsyth I.A. et all. Novel multialveolar epithelial structures from rabbit mammary gland that synthesize milk specific fatty acids in response to prolactin // J. In Vitro. 1981. Vol. 17. № 5. P. 364–368. 203. Castoria G., Barone M.V., Di Domenico M. et all. Non-transcriptional action of oestradiol and progestin triggers DNA synthesis // EMBO J. 1999. № 18. P. 2500–2510. 204. Castoria G., Megliaccio A., D´Amato L. Integrating signals between cAMP and MAPK pathways in breast cancer // J. Front. Biosci. 2008. № 13. P. 1318–1327. 205. Cemek M., Buyukokuroglu M.E., Hazman O. et all. The Roles of melatonin and vitamin E plus selenium in prevention of oxidative stress induced by naloxone-precipitated withdrawal in heroin-addicted rats // J. Biol. Trace Elem. Res. 2010. № 6. Р. 197–201. 206. Chun E.Y., Belair L., Jolivet G. Transduction pathways of GH in ovine mammary acini involving regulated and functional growth hormone receptors // J. Growth Factors. 2005. Vol. 23. № 1. P. 55–66. 207. Chatzicharalampous C., Rizos D., Pliatsika P. et all. Reproductive hormones and postpartum mood disturbances in Greek women // J. Gynecol. Endocrinol. 2010. № 11. P. 98–101. 200 208. Chrenek P., A.V. Makarevich, J. Pivko, et all.Characteristics of rabbit transgenic mammary gland expressing recombinant human factor VIII // J. Anat. Histol. Embryol. 2009. Vol. 38. № 1. P.: 85–88. 209. Crandall D.L., Hausmann G.J., Kral J.G. A review of the microcirculation of adipose tissue: anatomical, metabolic and angiogenic perspectives // J. Microcirculation. 1997. № 4. Р. 211–232. 210. Cunha G.R., Hom Y.K. Role of mesenchymal - epithelial interactions in mammary gland development // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 1996. № 1. Р. 21–35. 211. Debski B., Finley D.A., Picanto M.F. Selenium content and glutathione peroxidase activity of milk from vegetarian and nonvegetarian women // J. Nutr. 2002. № 2. P. 215–220. 212. Dechamma P.A., Kamath S.S., Shetty P.S. Histomorphology, adipocyte size and total fat cell namber in the interscapular brown adipose tissue of pregnant and lactating rats // Proc. Indian Acad. Sci., Anina Sci. 1986. V. 95. № 1. P. 45–50. 213. Derejczuk J., Drozdz M., Chwistek M. Dynamiczna ocena narzadowego rozmieszczemia selenu u krolikow // Bromatol. J. Chem. Toxicol. 1988. № 3. P. 244–250. 214. Diaz P., Rodriguez J.M. Cyclic ovarian activity in post partum rabbits // J. Appl. Rabbit Res. 1987. № 3. P. 122–125. 215. Dijkstra J., France J., Dhanoa M.S. A model to describe growth patterns of the mammary gland during pregnancy and lactation // J. Dairy Sci. 1997. Vol. 80. № 6. P. 2340–2354. 216. Dobbelaar P., Bouwstra R.J., Goselink R.M. Effects of vitamin E supplementation on and the association of body condition score with changes in peroxidative biomarkers and antioxidants around calving in dairy heifers // J. Dairy Sci. 2010 № 7. Р. 3103–3113. 201 217. Dragin S., Pivko J., Massanyi P. Ultrastructural morphometry of mammary gland in transgenic and non-transgenic rabbits // J. Anat. Histol. Embryol. 2006. Vol. 35. № 6. P. 351–356. 218. Elia A.C., Prearo M., Pacini N. et all. Effects of selenium diets on growth, accumulation and antioxidant response in juvenile carp // J. Ecotoxicol. Environ Saf. 2010. № 6. Р. 79–82. 219. Eriksson M. Lindh B., Uvnas-Moberg K. et all. Distribution and origin of peptide containing nerve fibres in the rat and rabbit mammary gland // J. Neuroscience. 1996. Vol. 70. № 1. P. 227–245. 220. Ezzat A.A., Saito H., Sawada T. The role of sexual steroid hormones in the direct stimulation by kisspeptin-10 of the secretion of luteinizing hormone, follicle-stimulating hormone and prolactin from bovine anterior pituitary cells // J. Anim Reprod Sci. 2010. № 9. P. 116–118. 221. Fairbrother A., Towles J. Subchronic effects of sodium selenite and selenomethionine on several immune functions in mallards // Arch. Environ. Contam. and Toxicol. 1990. Vol. 19. № 6. Р. 836–844. 222. Farr V.C., Prosser C.G., Davis S.R. Effects of mammary engorgement and feed withdrawal on microvascular function in lactating rabbits mammary glands // J. Cell. Biol. 2000. V. 279. P. 1813–1818. 223. Flook A.C. Progesterone and cortisol in the hamster: their role in parturition, as well as the growth and lactogenesis of the mammary glands // J. Veterinary Research Communications. 2003. Vol. 27. P. 811–814. 224. Forsyth I.A., Wallis M. Growth hormone and prolactin - molecular and functional evolution // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 2002. Vol. 7. № 3. P. 291–312. 225. Furth P.A. Mammary gland involution and apoptosis of mammary epithelial cells // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 1999. № 4. Р. 123–127. 226. Gass S., Harris J., Ormandy C. et all. Using gene expression arrays to elucidate transcriptional profiles underlying prolactin function // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 2003. Vol. 8. № 3. P. 269–285. 202 227. Ginsburg E., Vonderhaar B.K. Prolactin: an autocrine growth factor in the mammary gland // Biological signaling and the mammary gland. Ayr, UK: Hannah Res. Inst. 1997. P. 47–58. 228. Glaser V., Nazari E.M., Müller Y.M. et all. Effects of inorganic selenium administration in methylmercury-induced neurotoxicity in mouse cerebral cortex // Int. J. Dev. Neurosci. 2010. № 7. Р. 1154–1162. 229. Gonzalez-Mariscal G. Melo A.I., Chirino R. et all. Importance of mother/young contact at parturition and across lactation for the expression of maternal behavior in rabbits // J. Dev. Psychobiology. 1998. Vol. 32 № 2. P 101–111. 230. Grоber U. Selenium in complementary oncology. A critical comments on the select trial // J. Med. Monatsschr. Pharm. 2010. № 4. Р. 140–142. 231. Han Z.S., Li Q.W., Zhang Z.Y. et all. Adenoviral vector mediates high expression levels of lactoferrin in the milk of rabbits // J. Microbiol. Biotechnol. 2008. Vol. 18. № 1 P. 153–159. 232. Hebbard L.W., Garlatti M., Oshima R.G. et all. T-cadherin supports angiogenesis and adiponectin association with the vasculature in a rabbit mammary tumor model // J. Cancer Research. 2008. Vol. 68. № 5. P. 1407–1416. 233. Hennighausen L., Robinson G.W., Wagner K.U. Developing a mammary gland is a stat affair // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 1997. № 2. Р. 365–372. 234. Horseman N.D. Prolactin and Mammary Gland Development // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 1999. Vol. 4. № 1. P. 79–88. 235. Jagoda C.A. Prolactin stimulation of lactose biosynthesis in mouse mammary gland // Isr. Med. Assoc. J. 2000. Vol. 2. № 4. P. 287–291. 236. Karen P., Kermit L.C. Preface: evolution and comparative biology of the mammary gland / J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 1998. Vol. 7. № 3. P. 223–224. 203 237. Kim Y.Y. Selenium metabolism and toxicity of inorganic and organic selenium sources and levels on growth, reproduction and other mineral nutrients in swine // J. Ann. Rev. Nutr. 1999. № 12. Р. 64–68. 238. Kliinsten Т.S. Laws of growth of mammary gland tissues in in vivo culture // Am. J. of Veterinary Research. 2008. Vol. 69. № 10. P. 1323–1328. 239. Knight C.H. Overview of prolactin´s role in farm animal lactation // J. Livestock Production Science. 2000. Vol. 70. № 1-2. P. 87–93. 240. Kohrle J., Brigelius-Flohe R., Meyer O. Selenium in biology. Facts and medical perspectives // J. Biol. Chem. 2000. V. 381. № 4. P. 849–864. 241. La Ganga T.S. Mammary gland growth during early lactation in the hooded Norway rat // J. Cell and Tissue Research. 2001. Vol. 303. № 1. P. 69–80. 242. Leal M.L., de Camargo E.V., Ross D.H. et all. Effect of selenium and vitamin E on oxidative stress in lambs experimentally infected with haemonchus contortus // J. Vet. Res. Commun. 2010. № 7. Р. 143–147. 243. Lefevre C.M., Sharp J.A., Nicholas K.R. Evolution of lactation: ancient origin and extreme adaptations of the lactation system // Annual Review of Genomics and Human Genetics. 2010. № 11. P. 219–238. 244. Lopez R.E., Knable A.L. Jr., Burruss J.B. Ingestion of a dietary supplement resulting in selenium toxicity // Am. J. Acad. Dermatol. 2010. № 1. Р. 168–169. 244. Lund L.R., Bjorn S.F., Sternlicht M.D., et all. Lactational development and involution of the mammary gland requires plasminogen // J. Development. 2000. Vol. 127. № 3. P. 4481–4492. 245. Maertens L., Coudert P. Recent advances in rabbit sciences. «ILVO» 2006. 300 p. 246. Malewski T., Gajewska M., Zebrowska T.Differential induction of transcription factors and expression of milk protein genes by prolactin and growth hormone in the mammary gland of // J. Growth Hormone & IGF Research. 2002. Vol. 12. № 1. P. 41–53. 204 247. Mather I.H., Keenan T.W. The cell biology of milk secretion: historical notes // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 1998. Vol. 3. № 3. P. 227–232. 248. McClellan H.L., Miller S.J., Hartmann P.E. Evolution of lactation: nutrition protection with special reference to five mammalian species // J. Nutr. Res. Rev. 2008. Vol. 21. № 2. P. 97–116. 249. Michiels C., Raes M., Toussaint O. Importance of Se-glutathione peroxidase, catalase, and Cu/Zn-SOD for cell survival against oxidative stress // Free Radic. Biol. Med. 1994. № 3. Р.235–248. 250. Mikkola M.L., Millar S.E. The mammary bud as a skin appendage: unique and shared aspects of development // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 2006. Vol. 11. № 3–4. P. 187–203. 251. Mizutani T., Kishimoto E., Yamada K. Trase selenium and vitamin E in regulation of immunity and infection of rabbits // Int. J. Epidem. 2009. № 4, P. 918–922. 252. Mu C., Ni D., Zhao J. et all. cDNA cloning and mRNA expression of a selenium-dependent glutathione peroxidase from Zhikong scallop Chlamys farreri // J. Comp. Biochem., Physiol., Biochem. and Mol. Biol. 2010. № 6. Р. 259–268. 253. N.A.V. 4th ed. – N.H. rev. 2nd ed. – N.E.V. New-York, 1994. 316 p. 254. Naccarato A.G., Viacava P., Bocci G. et all. Definition of the microvascular pattern of the normal rabbit mammary gland / J. of Anatomy. 2003. Vol. 203. № 6. P. 599–603. 255. Neville M.C., Medina D., Monks J. The mammary fat рad // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 1998. № 3. Р. 109–115. 256. Neville M.C. Mc.Fadden T.B., Forsyth I. Hormonal regulation of mammary differentiation and milk sekretion // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 2002. Vol. 7. № 1. P. 49–66. 257. Oftedal O.T. The mammary gland and its origin during synapsid evolution // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 2002. Vol. 3. № 7. P. 225–252. 205 258. Oka T., Yoshima M., Lavandero S. Control of growth and differentiation of the mammary gland by growth factors // J. Dairy Sci., 1991. V. 74. № 8. P. 2788–2800. 259. Ollivier-Bousquet M. Early effects of prolactin on lactating rabbit mammary gland // J. Cell. Tiss. Res. 1978. Vol. 187. № 1. P. 25–43. 260. Oram L.L., Strawn D.G., Morra M.J. et all. Selenium biogeochemical cycling and fluxes in the hyporheic zone of a mining-impacted stream // J. Environ. Sci. Technol. 2010. № 11. Р. 4176–4183. 261. Osterin V., Batueva S., Shvalcenson A. Natural micronutrient deficiency as a cause of the disease digestive characteristics in Chuvashia // J. Eksp. Klin. Gastroenterol. 2010. №4. Р. 93–99. 262. Pang Q., Hou H., Zhang Ch. Et all. The influence of subcutaneous injection of VE and Se to the pregnant sows on the serum immunoglobulins of the suckle piglets // Trace Elem. and Food Chain: 2nd Int. Symp. Nov. 12–15 Wuhan (China). 1998. P. 77. 263. Pedram A. A., Razandi M., Sainson R.C. et all. A conserved mechanism for steroid receptor translocation to the plasma membrane // J. Biol. Chem.2007. № 282. P. 22278–22288. 264. Pitelka D., Taggat B., Hamamoto S. Effect of extracellular calcium depletionon membrane topography and occluding junctions mammary epithelium cells in culture // J. Cell. Biol. 1983. Vol. 96. № 7. P. 613–624. 265. Plaut K.I. Endocrine regulation of lactation: Prolactin, somatotropin, insulin-like growth factor I // J. Endocrinology. 1990. Vol. 4. № 5. Р. 218–232. 266. Politis I., Bloock E., Turner J.D. Effect of somatotropin on the plasminogen and plasmin system in the mammary gland: proposed mechanism of action for somatotropin on the mammary gland // J. Dairy Sci. 1990. V. 73. № 6. P. 1494–1499. 267. Politis I., Gorewit R.C., Muller T. et all. Mammary-derived growth inhibitor in lactation and involution // J. Domest. Anim. Endocrinol. 1992. № 9. P. 89. 206 268. Proietti C., Salatino M., Rosemblit C. et all. Progestin induce transcriptional activation of signal transducer and activator of transcriptions 3 (stat 3) via a Jak-and Src-dependent mechanism in breast cancer cells // J. Mol. Cell. Biol. 2005. № 25. P. 4826–4840. 269. Prosser C.G., Davis S.R., Fair V.C. et all. Regulation of blood flow in the mammary microvasculature // J. Dairy Sci. 1996. V. 79. P. 1184–1197. 270. Purna J.A. Alx 4, a stromally-restricted homeodomain protein, is required for normal mammary epithelial morphogenesis // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 2006. Vol. 8. № 2. P. 18–25. 271. Richert M.M., Schwertfeger K.L., Ryder J.W. Development of mouse mammary gland // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 2000. Vol. 5. № 2. Р. 227–241. 272. Rommers J.M., Kemp B., Meijerhof R. Rearing management of rabbit does: a revieu // World Rabbits Sci. 1999. № 7. P. 125–138. 273. Rousel A.M., Anderson R.A., Favier A.E. Trace Elements in Man and Animals // Plenum Publishers, New York. 2000. 358 p. 274. Sandukji A., Al-Sawaf H., Mohamadin A. et all. Oxidative stress and bone markers in plasma of patients with long-bone fixative surgery: role of antioxidants // Hum. Exp. Toxicol. 2010. № 9. Р. 201–207. 275. Shargorodsky M., Debby O., Matas Z. Effect of long-term treatment with antioxidants (vitamin C, vitamin E, coenzyme Q10 and selenium) on arterial compliance, humoral factors and inflammatory markers in patients with multiple cardiovascular risk factors // Nutr. Metab. 2010. № 7. Р.369–381. 276. Shchrauser H.W. Selenium // Elements and their Compounds in the Environment. Non metals. Ed. Merian et all. Wiley – VCH Verlag. 2003. Vol. 3. P. 100–106. 277. Shen Q., Zhang B., Xu R. et all. Antioxidant activity in vitro of the selenium-contained protein from the Se-enriched Bifidobacterium animalis // J. Anaerobe. 2010. № 6. Р. 96– 111. 207 278. Sinkevicius K.W. Characterization of estrogen non-responsive estrogen receptor alpha knock-in mice // J. Endocrinology. 2008. Vol. 2. № 2. Р. 362–381. 279. Smas C.M., Sul H.S. Control of adipocyte differentiation // J.Biochem. 1995. Vol. 309. № 11. P. 697–710. 280. Smith J.J. Variation in mammary and liver prolactin receptor expression among ruminants and rodents // J. Clin. Endocrinol. Metab. 1991. Vol. 56, № 6. P. 347–352. 281. Smith G.H., Chepko G. Mammary epithelial stem cells // Microsc. Res. Tech. 2001. Vol. 52. № 8. P. 190–203. 282. Smith M.S. Grove K.L. Integration of the regulation of reproductive function and energy balance: lactation as a madel // J. Frontiers in Neuroendocrinology. 2002. Vol. 23. № 3. P. 225–256. 283. Sternlicht M.D. Key stages in mammary gland development: the cues that regulate ductal branching morphogenesis // Breast Cancer Res. 2006. № 8. P 201. 284. Stull M.A., Rowzee A.M., Loladze A.V. Growth factor regulation of cell cycle progression in mammary epithelial cells // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 2004. Vol. 9. № 1. P. 15–26. 285. Surai P. Selenium // Natural antioxidant in avian nutrition and reproduction. Nottingham. 2002. P. 233–304. 286. Surai K.P., Surai P.F., Speake B.K. Antioxidant - prooxidant balance in the intestine // Food for thought. Prooxidants nutritional genomics and functional Foods. 2003. V. 1. № 1. P. 51–70. 287. Svechnikova A.A., Golubkina N.A., Meliakina E.I. The human selenium status in Astrakhan region // J. Vopr. Pitan. 2010. № 2. Р. 78–80. 288. Talhouk R.S., Bissell M.J., Werb Z. Coordinated expression of extracellular matrix-degrading proteinases and their inhibitors regulates mammary epithelial function during involution // J. Cell. Biol. 1992. Vol. 118. № 6. P. 1271–1282. 208 289. Tennekoon K.N., Arulambalam P.D., Karunanayake E.H. et all. Prolactin response to suckling in a group of fully breast feeding women during the early postpartum period // J. Ceylon Med. 2001. Vol. 46. № 1. P. 6–10. 290. Thomas P. Characteristics of membrane progestin receptor alpha (m P Ralpha) and progesterone membrane receptor component I (PGMRCI) and their roles in mediating rapid progestin actions // J. Front. Neuroendocrinol. 2008. № 29. P. 292–312. 291. Tran-Thanh D., Arneson N.C., Pintilie M. Amplification of the prolactin receptor gene in mammary lobular neoplasia // Breast Cancer Res. Treat. 2010. № 7. P. 127. 292. Vijay I.K. Developmental and hormonal regulation of protein Nglycosylation in the mammary gland // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 1998. Vol. 3. № 3. P. 325–336. 293. Vonderhaar B.K. Prolactin in development of the mammary gland and reproductive tract // Hormones and growth factors in development and neoplasia. New York: Wiley Liss. 1998. P. 193–206. 294. Vural H., Demirin H., Kara Y. Alterations of plasma magnesium, copper, zinc, iron and selenium concentrations and some related erythrocyte antioxidant enzyme activities in patients with Alzheimer's disease // J. Trace Elem. Med. Biol. 2010. № 3. Р. 169–173. 295. Wang S. The role of mammary epithelial-stromal cell interactions in relation to growth regulation by estrogen and progestin // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 1995. Vol. 3. № 2. P. 103–109. 296. Warner M.R. Mammary gland morphology offemale beagle dogs. Studies in vivo and in vitro // J. of Dairy Research. 2005. Т. 72. № 1. С. 90–97. 297. Watanabe Y.G. An immunohistochemical study on the mouse adenohypophysis with reference to the spatial relationship between GH cells and other types of hormone-producing cells // J. Anat. and Embriol. 1985. V. 172. № 3. P. 277–280. 209 298. Weaver V.M., Bissell M.J. Functional culture models to study mechanisms governing apoptosis in normal and malignant mammary epithelial cells // J. Mammary Gland Biol. Neoplasia. 1999. № 4. P. 193–201. 299. Wiesen J.F., Werb Z. Proteinases, cell cycle regulation and apoptosis during development and involution of the mammary gland //J. Mol. Reprod. 2000. Vol. 56. № 2. P. 534–540. 300. Witty J.P., Wright J.H., Matrisian L.M. Matrix metalloproteinases are expressed during ductal and alveolar mammary morphogenesis, and misregulation of stromelysin-1 in transgenic mice induces unscheduled alveolar development // J. Mol. Biol. Cell. 1995. № 6. P. 1287–1303. 301. Xiang Q.L., Chen Y.K., Lin G.P. et all. Effects of selective estrogen receptor modulator raloxifene plus 17-beta estradiol in aorta and mammary gland of female experimental atherosclerosis rabbits and possible involvement of ERK signal transduction pathway // Chin. J. Physiol. 2006. Vol 30. № 6. P. 132–140. 302. Yan L., Frenkel G.D. Selenite inhibits cell attachement to extracellular matrix //Selenium in Biol. and Med.: 5th Int Symp. July, 20-23, 1992. Vanderbilt Univ. School. Of Med., Nashville, Tennessee (USA). P. 116. 303. Zbikowska H.M. Selen w organizmach zywych. Toksycznosc selenu I dzialanie antynowotworowe // Acta UL. Folia Biochim. Et Biophys. 1997. № 12. P. 29–37. 210 211