Федеральная целевая программа

14.604.21.0025
<Номер постера>
Федеральная целевая программа
«Исследования и разработки по приоритетным направлениям развития научно-технологического
комплекса России на 2014—2020 годы»
Науки о жизни
Тема: Разработка технологии производства высокоаффинных моноклональных антител на примере
получения антител к онкомаркеру Her2 с пикомолярными значениями константы диссоциации, Kd
Руководитель проекта: старший научный сотрудник,
Прусакова Ольга Вадимовна
Соглашение №14.604.21.0025
на период 2014 - 2015 гг.
Получатель субсидии: Федеральное государственное бюджетное учреждение науки Институт теоретической и
экспериментальной биофизики Российской академии наук
Цели и задачи проекта
Моноклональные антитела широко используются в различных областях науки и народного хозяйства. Значения констант диссоциации (Kd) наиболее охарактеризованных
моноклональных антител, как правило, лежат в наномолярной области. Это накладывает ограничения на предел чувствительности при их использовании. Очевидно, что
разработка и внедрение технологии получения высокоаффинных антител является одной из актуальных проблем. Классическая гибридомная технология использует
мышиные лимфоциты, как источник моноклональных антител. Однако, известно, что кроличьи лимфоциты способны производить антитела с более низкими значениями
Kd. Таким образом, одним из решений может стать вариант получения высокоаффинных антител с помощью лимфоцитов кролика.
Цель проекта Разработка технологии, позволяющей получать моноклональные антитела с пикомолярными значениями констант диссоциации в течение одного месяца.
Задачи
• Разработка системы скрининга клеток-продуцентов высокоаффинных антител;
• Разработка экспрессионных векторов для получения рекомбинантных антител;
• Наработка высокоаффинных рекомбинантных антител, специфичных к модельному белку Her2.
Ожидаемые результаты проекта
1.
Технология, которая позволит:
•
Получить моноклональные антитела с аффинностью порядка пМ;
•
Выбрать и наработать антитела в течение одного месяца;
•
Получить культуру клеток-суперпродуцентов антител;
2.
Экспрессионные плазмидные векторы для наработки рекомбинантных антител;
3.
Высокоаффинные рекомбинантные антитела, специфичные к онкомаркеру Her2.
Перспективы практического использования
Разработанная технология может быть использована для получения антител различного назначения:
• для проведения научных исследований;
• для диагностикумов и тест-систем высокочувствительного анализа биологических объектов;
• в фармацевтической промышленности для получения высокоэффективных лекарственных средств.
Результаты исследовательской работы, полученные в 2015 г.
Разработана технология получения моноклональных антител. Она включает несколько стадий:
1.
Выделение клеток-продуцентов антител;
2.
Скрининг клеток:
•
Отбор клеток-продуцентов специфических антител методом аффинной адсорбции;
•
Культивирование для получения антитело-секретирующих плазматических клеток;
•
Отбор клеток, секретирующих высокоаффинные антитела.
3.
Амплификация и клонирование кДНК иммуноглобулинов в экспрессионных векторах;
4.
Наработка антител в культуре клеток HEK293T;
5.
Анализ антител с помощью ИФА.
Выделение клетокпродуцентов антител
Разработаны парные экспрессионные векторы для наработки рекомбинантных антител в
Отбор клеток, секретирующих
высокоаффинные антитела
культуре клеток млекопитающих HEK293T. Конструкция векторов обеспечивает:
•
Получение рекомбинантных иммуноглобулинов, по структуре и функциям
соответствующих природным аналогам;
•
Наработку аналитических количеств антител в течение 15 дней;
•
Получение культур клеток-суперпродуцентов антител с выходом продукта до 1 г/л.
Отбор клеток-продуцентов
специфических антител
методом аффинной адсорбции
Культивирование для получения
антитело-секретирующих
плазматических клеток
Выделение РНК из
одной клетки
С применением разработанной технологии получены высокоаффинные антитела, специфичные
к онкомаркеру Her2. Аффинность антител превышает соответствующий показатель широко
Наработка антител в
культуре клеток HEK293T
используемых коммерческих антител Herceptin.Подобрана пара антител для диагностики
онкомаркера Her2.
Амплификация и клонирование кДНК иммуноглобулинов
в экспрессионных векторах
Партнеры проекта
Индустриальный партнер проекта : ООО «Инноград Пущино»– российская научно-производственная компания, специализирующаяся на разработке
и коммерциализации новых методов и технологий для экспресс-обнаружения биологических агентов.
Финансовая поддержка выполнения исследовательских работ 3 513 514 (Три миллиона пятьсот тринадцать тысяч пятьсот четырнадцать)
рублей
14.604.21.0025
<Номер постера>