IONICS 3Q 220 Molecular Analyzer

АНАЛИЗ СТЕРОИДНЫХ ГОРМОНОВ С ПОМОЩЬЮ ТРОЙНОГО
КВАДРУПОЛЬНОГО МАСС-СПЕКТРОМЕТРА
IONICS 3Q 220 Molecular Analyzer
Краткое описание технической заметки

Масс спектрометр IONICS 3Q 220 Molecular Analyzer использован для анализа панели
стероидов в сыворотке крови.

Показано, что андрогены, глюкокортикоиды и прогестагены могут быть определены
одновременно в одной пробы, и таким образом, вся панель может анализироваться одним
методом.

С помощью масс-спектрометра IONICS 3Q 220 стероиды определяются с высокой
чувствительностью и точностью . Нижний предел определения находится на уровне пг/мл при
точности определения 91 -106%.
1. ВВЕДЕНИЕ
Количественное определение большого количества стероидов в одной пробе биологической жидкости важно
как с точки зрения диагностики заболеваний, так и понимания протекания болезни и её лечения. В этих анализах
метод ВЭЖХ/МС/МС является оптимальным.
Получение высокой чувствительности при анализе панели стероидов является достаточно сложной задачей в
сязи с различиями в оптимальных условиях ионизации индивидуальных стероидов. Так, например, оптимальные
условия источника ионов для дельта-5 стероидов (таких как прегнанолон) отличаются от условий определения
кортизола. Достижение клинически релевантной чувствительности для всей панели в одних и тех же условиаях
является исключительно актуальной задачей.
2. МЕТОД
2.1. Пробоподготовка
Матрица для приготовления проб была получена смешиванием одного объёма не содержащей стероиды
сыворотки крови с двумя объёмами охлаждённого ацетонитрила. Смесь перемешивалась и центрифугировалась.
Верхний слой отделялся и использовался в качестве матрицы.
Стандартные растворы готовились в этой матрице в приведенных в таблице 3 диапазонах концентраций.
Каждый образец анализировался пятикратно.
Точность определялась как среднее для всего диапазона
концентраций. %CV определялся по 5 инжекциям для каждой концентрации.
2.2 Параметры масс-спектрометрии.
Таблица 1. Параметры масс-спектрометра:
Напряжение на капилляре (V)
Температура HSID (oC)
Газ-распылитель
Газ-осушитель
Газ-нагреватель
Температура источника (oC)
Время детектирования (мс)
Время паузы (мс)
5500
350
350
120
350
350
50
5
Таблица 2. MRM переходы
Тестостерон
Прогестерон
17-OH-прогестерон
Дезоксикортикостерон
Кортикостерон
11-Дезоксикортизол
DHEA (дегидроэпиандростерон)
17-OH-прегнанолон
Аллопрегнанолон
289.2/97.1
315.1/97.1
331.0/97.1
331.0/97.1
347.2/121.1
347.2/97.1
253.0/197.0
315.2/279.2
301.1/135.1
2.3 Хроматографические условия
Хроматографирование проводилось на системе ВЭЖХ Shimadzu Prominence. Объём пробы 10 мкл. Колонка
C18 (2.1x50 мм, 2.7 мкм), скорость подвижной фазы 0,5 мл/мин. Использовалось градиентное элюирование. Фаза А:
Н2О, содержащий 5 ммоль ацетата аммония и 0,1% муравьиную кислоту. Фаза В: МеОН, содержащий 5 ммоль
ацетата аммония и 0,1% муравьиную кислоту.
3. РЕЗУЛЬТАТЫ
Статистически обработанные результаты приведены в таблице 3.
Таблица 3. Результаты анализа панели стероидов.
Соединение
Нижний предел (нг/мл)
Тестостерон
0.0024
Прогестерон
0.0024
17-OH-Прогестерон
0.0012
Дезоксикортикостерон
0.0024
Кортикостерон
0.025
11-Дезоксикортизол
0.0048
DHEA (дегидроэпиандростерон)
0.098
17-OH-прегнанолон
0.025
Аллопрегнанолон
0.025
Точность (%)
101
96
96
97
104
106
98
91
100
CV (%)
13
7
17
5
15
12
9
18
17
Диапазон (нг/мл)
0.0024-10
0.0024-5
0.0012-10
0.0024-20
0.025-25
0.0048-10
0.050-25
0.025-50
0.025-100
3.1. Экстрагированные ионные хроматограммы (EIC)
На рисунках 1- 4 приведенны экстрагированные ионные хроматограммы тестостерона, прогестерона , DHEA и 11дезоксикортизола при концентрации в матрице 0,01 нг/мл. Эти хроматограммы являютсв репрезентативными для всей
панели определяемых стероидов.
Рис. 1. EIC тестостерона в матрице
Рис. 2. EIC прогестерона в матрице
Рис. 3 EIC DHEA в матрице
Рис. 2 EIC 11-дезоксикортизола в матрице
3.2 Линейность.
Для всех анализируемых соединений линейность наблюдалась в измеряемых диапазонах концентраций.
Точность и прецизионность соответствуют требованиям биоаналитических анализов. Применение изотопных
внутренних стандартов ещё больше повысит точность и прецизионность анализа. Рисунки 5 и 6 демонстрируют
линейность для тестостерона и DHEA и являются репрезентативными для всей панели стероидов.
Рис. 5 Калибровочная кривая тестостерона (289.2/97.1)
Рис. 6: Калибровочная кривая DHEA (253.1/197.1)
4. ЗАКЛЮЧЕНИЕ
Масс-спектрометр IONICS 3Q 220 Molecular Analyzer обладает чувствительностью, позволяющей
определять стероиды на уровне пг/мл в биологических образцах. Подобная чувствительность может быть
достигнута для андрогенов, глюкокортикоидов и прогестагенов в одной пробе, и таким образом, даёт
возможность определения всей панели одним методом.
5. Контактная информация
Для того, чтобы узнать больше о масс-спектрометрах, услугах и других
продуктах компании IONICS Вы можете посетить веб-сайт www.ionics.ca или
связаться с представителями компании напрямую.
Контакты:
ООО «БиоФармЭксперт»,
т. +7-915-180-5909
sales@biopharmexpert.com