Методы нормализации воспроизводительной

ahakhnŠej` beŠephm`pmncn bp`)`
УПРАВЛЕНИЕ ВОСПРОИЗВОДСТВОМ
В МОЛОЧНОМ ЖИВОТНОВОДСТВЕ
Методические рекомендации для ветеринарных специалистов
Москва
2014 год
bnqopnhgbndqŠbn
УПРАВЛЕНИЕ ВОСПРОИЗВОДСТВОМ
В МОЛОЧНОМ ЖИВОТНОВОДСТВЕ
(издание 2-е, дополненное и переработанное)
Методические рекомендации для ветеринарных специалистов
Вареников М.В
Научно-практический центр эффективного животноводства
кандидат биологических наук
Чомаев А.М.
Государственное научное учреждение
«Всероссийский научно-исследовательский институт животноводства
Россельхозакадемии»
доктор биологических наук
Оборин А.Е.
ЗАО «Мосагроген»
кандидат биологических наук
Москва – 2014 год
МОСАГРОГЕН
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
1
1.
2.
2.1.
2.2.
2.3.
2.4.
2.5.
2.6.
3.
4.
5.
5.1.
6.
7.
8.
8.1.
8.2.
8.3.
8.4.
8.5.
2
СОДЕРЖАНИЕ
Введение
3
Оценка показателей воспроизводства в стаде. Экономические аспекты
4
Физиология репродуктивной функции
6
Динамика роста фолликулов и механизмы его регуляции
6
Гормонально-ферментативные механизмы процесса овуляции
14
Факторы, определяющие полноценность фолликулогенеза
15
и результативность осеменения. Отрицательный энергетический баланс
Время овуляции и результативность осеменения
19
Способы контроля охоты и овуляции
22
Синхронизация половой охоты
24
Основные принципы искусственного осеменения. Улучшение показателей
29
оплодотворяемости во время и после искусственного осеменения
Нарушения овуляции. Ановуляторные половые циклы и кисты яичников
39
Диагностика стельности. Современные способы ранней диагностики
44
Причины потери стельности. Ранняя эмбриональная смертность
48
Сухостойный период. Физиологические аспекты.
50
Профилактические мероприятия, проводимые в сухостойный период
Некоторые патологии родового периода
51
Послеотельный период. Его физиологические аспекты
57
Скорость инволюции матки
57
Задержание последа
58
Воспалительные заболевания органов репродуктивной системы
59
Гипофункция яичников
64
Профилактика послеотельных нарушений репродуктивной функции
66
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
ВВЕДЕНИЕ
Искусственное осеменение коров в настоящее время является наиболее эффективным и перспективным способом воспроизводства стада. Результативность искусственного осеменения зависит от целого ряда факторов:
1. Уровень молочной продуктивности;
2. Технология содержания;
3. Адекватность кормления животных;
4. Качество спермы;
5. Климат;
6. Иерархические взаимоотношения в стаде;
7. Возраст;
8. Квалификация специалистов;
9. Физиологическое состояние животных и др.
Для обеспечения высокой эффективности искусственного осеменения следует особое значение уделять срокам осеменения животных после отела, подготовке животных к
осеменению и выбору оптимального времени осеменения в период половой охоты.
Ключевыми гормонами, определяющими рост, созревание и овуляцию фолликулов,
являются фолликулостимулирующий (ФСГ) и лютеинизирующий (ЛГ) гормоны. Немаловажно для судьбы развивающихся фолликулов соотношение ЛГ и ФСГ. Фолликулогенез в
яичнике протекает волнообразно. Если овуляция не происходит, каждая волна роста заканчивается атрезией фолликулов. В течение полового цикла обычно насчитывается 2-3
волны фолликулярного роста.
Овуляция происходит под воздействием ЛГ на фоне регрессии желтого тела. Способность к овуляции развивается по мере того, как возрастает степень экспрессии ЛГ на
рецепторах клеток гранулёзы доминантного фолликула. Перед предовуляционным выбросом ЛГ внеклеточный матрикс доминантного фолликула подвергается интенсивной
реконструкции и реваскуляризации, подготавливая образование жёлтого тела.
Размеры предовуляционных фолликулов также оказывают влияние на результат
осеменения. Максимальная результативность осеменения достигается при диаметре овуляторного фолликула в пределах 12-16 мм. При увеличении или снижении диаметра результативность осеменения снижается. Важное значение имеют также и время овуляции
относительно времени осеменения и место введения спермы.
С целью профилактики дисфункции яичников и контроля показателей воспроизводства в молочном и мясном скотоводстве целесообразно применять синхронизацию
половой охоты с использованием биологически активных веществ. В настоящее время
существует множество схем синхронизации половой охоты, имеющих различную продолжительность и эффективность. Наибольшее распространение получили протоколы
«Ovsynch» и «Presynch».
В связи с выше изложенным, для повышения эффективности искусственного осеменения следует придерживаться следующих принципов:
1. Стимуляция развития предовуляторного фолликула;
2. Стимуляция развития и функции желтого тела;
3. Повышение уровня эндогенного прогестерона в течение первых трех недель после осеменения;
4. Снижение влияния доминантного фолликула в критический период после осеменения (15-20 дней);
5. Повышение активности антилютеолитических факторов в течение всего периода
стельности;
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
3
6. Повышение иммунного статуса животного;
7. Оптимизация метаболических процессов в организме животного.
Практическое применение выше приведенных принципов зависит от конкретных условий хозяйства, обуславливающих непосредственные причины снижения репродуктивной функции. При этом возможно использование различных методов работы со стадом,
подразумевающих как индивидуальный подход к животным (акушерско-гинекологическая диспансеризация, использование биологически активных веществ с учетом физиологического состояния животных и т.д.), так и групповую работу (коррекция кормления,
изменение элементов технологии содержания и управления стадом).
Немаловажное значение для уровня воспроизводства в стаде имеет и работа по профилактике и лечению послеотельных нарушений репродуктивной функции коров.
1. ОЦЕНКА ПОКАЗАТЕЛЕЙ ВОСПРОИЗВОДСТВА В СТАДЕ.
ЭКОНОМИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ
Высокопродуктивные стада в настоящее время приобретают все большее распространение в результате селективной работы, высокотехнологичного управления стадом и
полноценного кормления животных. Одновременно с ростом продуктивности отмечается
снижение репродуктивной функции коров во всем мире. Особенно это характерно для
животных черно-пестрой голштинской породы (Rodriguez-Martinez H. et al., 2008).
Установлено, что оплодотворяемость молочных коров может достигать 90 и более
процентов, что позволяет достигнуть приблизительно 70%-ой результативности осеменения с учетом ранней эмбриональной смертности (Humblot P., 2001; Andersen-Ranberg I.M.
et al., 2005). В то же время, на практике в большинстве случаев результативность осеменения не превышает 40% (Royal M.D. et al., 2000; Yusuf M. et al., 2010), а по сообщениям
некоторых авторов – опускается ниже 25% (Rodriguez-Martinez H. et al., 2008; Sartori R. et
al., 2006).
Многочисленные исследования подтверждают, что пролонгация сервис-периода свыше экономически обоснованных сроков снижает рентабельность молочного животноводства (Groenendaal H. et al., 2004; Артюх В.М. и др., 2004).
Существует множество методик расчета эффективности отрасли молочного животноводства. Воспроизводство стада при этом имеет ключевое значение, т.к. определяет не
только уровень ввода в стадо ремонтного молодняка, но и продуктивность стада в целом
за счет планового поступления «большого» молока от новотельных животных. Невозможно показать точные параметры рентабельности для всех хозяйств, т.к. этот показатель зависит от конкретных хозяйственно-экономических условий. Тем не менее, практикой и
многочисленными исследованиями установлены ориентировочные диапазоны показателей эффективного воспроизводства стада. В каждом конкретном случае они определяются
уровнем продуктивности, породными особенностями и технологией содержания животных. Ниже представлены основные показатели эффективного воспроизводства стада (таблица 1).
4
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
Таблица 1
Нормативы основных показателей воспроизводства стада
Показатели воспроизводства
Нормативные значения эффективного воспроизводства
Время от отела до первого осеменения (период ожидания)
40-80 дней
Сервис-период
80-120 дней
Время от первого до успешного осеменения
Менее 40 дней
Индекс осеменения
1,7
Процент животных, не проявивших признаков охоты
Более 65%
спустя 20 дней после осеменения
Результативность первого осеменения
55-65%
Количество животных, осеменявшихся 3 и более раз
менее 20%
Уровень выбраковки коров по причине нарушения
репродуктивной функции
5-10%
Количество абортов (в период от 45 до 265 дней
стельности)
менее 3%
Возраст на момент первого отела
24-26 месяцев
Факторы, снижающие показатели воспроизводства стада, можно разбить на 4 основных группы:
1. Качество спермы (низкая концентрация активных сперматозоидов в дозе, наличие в сперме инфекционных агентов, неправильное хранение и т.д.);
2. Квалификация и организация труда зооветспециалистов (неадекватный график
работы специалистов, низкая квалификация специалистов, нарушения техники работы со
спермой, слабая мотивация эффективности работы и т.д.);
3. Технология содержания (неудовлетворительный микроклимат в помещении,
сбои в графике кормления, неудовлетворительное качество кормления, неэффективная
система движения стада и т.д.);
4. Состояние здоровья коровы (наличие проблем с обменом веществ, хронические
инфекционные заболевания, проблемы с конечностями и др.).
В конечном итоге, отрицательное действие выше приведенных факторов выражается
в увеличении продолжительности сервис-периода. Установлено, что пролонгация сервиспериода является убыточной за счет снижения производства молока в целом по стаду. Это
обуславливается тем, что несмотря на высокую продуктивность в период раздоя и на пике
лактации, из-за пролонгации периода до плодотворного осеменения, затягивается период
лактации и большая часть стельности протекает на фоне низкой продуктивности, которая
не оправдывает затрат на содержание этой коровы.
Большое значение имеют и сроки выбраковки животных из стада. Как видно из представленных выше нормативных показателей, уровень выбраковки по причине бесплодия
(двусторонние спайки яичников и яйцеводов, разрывы шейки матки и промежности, необратимое перерождение железистого эпителия матки и т.д.) не должен превышать 10%
от фуражного поголовья. В структуре выбракованных животных (конечности, продуктивность, гинекологические заболевания и т.д.) выбраковка по причине репродуктивной
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
5
патологии составляет 25-27% и мало зависит от продуктивности стада (Суллер И.Л., Игнашкина А.А., 2006). Аналогичную информацию предоставило и министерство сельского
хозяйства США (2001), после анализа причин выбытия животных из стада (см. рисунок 1):
Рисунок 1
Причины ранней выбраковки дойных коров
2. ФИЗИОЛОГИЯ РЕПРОДУКТИВНОЙ ФУНКЦИИ
2.1. Динамика роста фолликулов и механизмы его регуляции
Репродуктивная функция, как самок, так и самцов млекопитающих, регулируется
сложным взаимодействием нервной и эндокринной систем. При этом значительную роль
играют и факторы внешней среды (освещение, температура, иерархические отношения в
стаде и т.д.), действие которых на органы репродуктивной системы происходит опосредовано через нервную систему, воспринимающую внешние раздражители.
Механизм нейрогуморальной регуляции воспроизводительной функции самки очень
сложен. Рассмотрим его более подробно. Систему нейрогуморальной регуляции репродуктивных процессов схематично можно представить четырьмя уровнями: ЦНС (гипоталамус), гипофиз, яичники и матка.
Главным центром регуляции полового цикла у животных является гипоталамус. Он
является своеобразным «посредником» между нервной и эндокринной системами. Гипоталамус представляет собой подбугровую область промежуточного мозга, располагается под
зрительными буграми и образует стенки и дно третьего мозгового желудочка. Гипоталамус
связан с передней долей гипофиза (аденогипофизом) через специальную воротную систему кровеносных сосудов, а с задней долей (нейрогипофизом) - по нервным путям. В ответ
на экзогенные и эндогенные импульсы, нервные клетки определенных ядер гипоталамуса
вырабатывают специфические нейросекреты, которые поступают в кровяное русло и по
воротной сосудистой межуточно-гипофизарной системе доставляются к клеткам аденогипофиза, стимулируя их к выработке тропных гормонов, посредством которых оказывается влияние на функцию яичников (Войткевич А.А., 1963; Киршенблат Я.Д., 1971, 1973).
Одновременно гипоталамус получает сигналы внутренней среды (главным образом в виде
изменений концентраций гормонов и других биологически активных веществ в крови).
Одним из наиболее известных и значимых секретов гипоталамуса является гонадотропный релизинг-гормон (Гн-РГ, люлиберин). Он представляет собой полипептид, состоящий из десяти аминокислотных остатков, что обуславливает короткую продолжительность его существования.
Введение корове Гн-РГ приводит к выделению как лютеинизирующего гормона (ЛГ),
так и фолликулостимулирующего гормона (ФСГ). Пульсирующее выделение Гн-РГ про-
6
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
исходит непрерывно, в количестве достаточном для поддержания развития фолликулов
и секреции ими эстрогенов. Эпизодическое выделение Гн-РГ обеспечивает циклическое
выделение гонадотропинов и овуляцию. В соответствии с этим, секреция гонадотропинов
также имеет, как пульсирующий характер, независимый от времени суток и физиологического состояния организма, так и циклический (появление пиков секреции ЛГ и ФСГ
перед овуляцией).
Получение Гн-РГ синтетическим путем позволило ученым изучить его влияние на
выделение гонадотропных гормонов у самок сельскохозяйственных животных. Исследования показали, что применение малых доз синтетического Гн-РГ вызывает быстрое увеличение содержания ЛГ в крови, с максимумом через 10 минут. Более высокие дозы дают
большее по величине выделение ЛГ с более поздним наступлением максимума – через 2040 минут. Менее выраженное увеличение уровней ФСГ в крови наблюдали значительно
позднее, чем уровней ЛГ, с максимумом через 40 – 60 минут (Савченко О.Н., Степанов Г.
С.,1977).
В структурах ЦНС выделены соединения – опиоидные пептиды. Основным местом
сосредоточения опиоидных пептидов мозга является гипоталамус. Изучена физиологическая роль нейропептидов головного мозга (мет- и лей-энкефалинов) в нейрогуморальной
регуляции функции воспроизведения крупного рогатого скота. При нагрузках в гипоталамусе и гипофизе усиленно синтезируются молекулы проопиомеланокортина, из которых образуется АКТГ, β-липотропин и крупный гликопротеид. В результате расщепления
β-липотропина образуются эндорфины, которые оказывают влияние на болеощущение
и воспроизводительную функцию. При повышенном действии эндорфинов к концу проэструса может быть заторможено предовуляторное увеличение содержания ФСГ и ЛГ и,
тем самым, созревание фолликулов.
Опиат-налтрексон стимулирует секрецию ЛГ в период поздней фолликулярной и лютеальной фазы, когда концентрация циклирующих стероидов высока. Он эпизодически
вызывает повышение концентрации ЛГ.
Установлено, что эндогенные опиоидные пептиды препятствуют выделению ЛГ in
vivo и гонадолиберина in vitro у ярок (Stansfield S.C., Knight P.G., Bryant M.J., 1987).
В нашей стране исследования с этой группой соединений стали возможны благодаря
синтезу мет- и лей-энкефалинов в ВКНЦ АМН РФ профессором Титовым М.И. Им был
синтезирован препарат №41 (даларгин).
Физиологическую роль эндорфинов и энкефалинов в воспроизводстве пока еще недостаточно изучили. Но предварительные исследования по изучению нейроэндокринного эффекта опиоидных пептидов в регуляции воспроизводительной функции открывают
широкие возможности применения этих веществ в ветеринарной эндокринологии.
Вторым уровнем регуляции репродуктивной функции является гипофиз. Гипофиз
состоит из двух основных отделов – передней доли, или аденогипофиза, и задней доли, или
нейрогипофиза.
Передняя доля гипофиза секретирует гонадотропные гормоны - ЛГ и ФСГ, представляющие собой гликопротеины. Функция яичника полностью зависит от секреции гонадотропных гормонов, а его реакция на ЛГ и ФСГ зависит от наличия специфических рецепторов на поверхности различных типов его клеток.
ФСГ может рассматриваться как инициатор овариальной активности, т.к. он способствует росту и дифференцировке овариальных фолликулов до антральной стадии, а так же
стимулирует митотическую пролиферацию гранулезных клеток и трансформацию окружающей стромы в слой текальных клеток яичника, секрецию фолликулярных гормонов и
пролиферативные изменения в матке и влагалище. Если вводить экзогенный ФСГ коровам
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
7
в больших дозах, когда рост фолликулов уже начался, это может привести к множественному росту фолликулов и суперовуляции. Однако под влиянием одного ФСГ фолликулы
не достигают стадии полного роста и секреторной активности, а только подготавливаются
к последующему воздействию ЛГ.
Во время полового цикла концентрация ФСГ периодически возрастает с интервалом
в 5 дней, пики приходятся на волны роста фолликулов во время лютеальной фазы цикла
(Schamps D. et al., 1977).
Функция ЛГ - стимулировать развитие и овуляцию антрального фолликула, а также
образование и поддержание функциональной активности желтого тела. Средние уровни
концентрации ЛГ низки почти на всем протяжении эстрального цикла с резким подъемом
перед эструсом, совпадающим с первым пиком ФСГ. Предовуляторное повышение концентрации ЛГ стимулирует процесс овуляции, начало лютеолизации гранулезных клеток
и клеток теки фолликула. Оно продолжается примерно 7 – 8 часов и овуляция наступает
примерно через 24-32 часа после его начала.
Концентрация ЛГ в сыворотке крови КРС в течение полового цикла колеблется в пределах 1,5-2,5 нг/мл. Во время половой охоты концентрация гормона повышается до 20-60
нг/мл. Начало накопления ЛГ обычно отмечается через 25 часов после первых признаков
охоты, затем концентрация гормонов в крови резко увеличивается и достигает максимума в течение 4-х часов, после чего концентрация ЛГ резко падает, снижаясь до исходного
уровня в течение 8 часов.
Под влиянием ЛГ внутри фолликула возрастает синтез простагландинов, что приводит к сокращению стенки фолликула и выбросу содержимого овулировавшего фолликула.
Хотя пульсы ЛГ наблюдаются редко во время лютеальной фазы, их величина и количество достаточны для поддержания функции желтого тела яичника. Поэтому ЛГ можно
рассматривать главным, если не единственным, лютеотропным гормоном у нестельных
коров (Hansel W. et al., 1973; Hoffman B. et al.,1974).
Во время предовуляторного пика ЛГ связывается с рецепторами клеток гранулезы
и вызывает быструю их лютеинизацию, приводя к синтезу прогестерона. Соединение ЛГ
с рецепторами сохраняется весь период функционирования желтого тела (Koch J. et al.,
1974). Однако более поздние данные показывают, что ФСГ также важен в регуляции выделения прогестерона в лютеальную фазу полового цикла (Walters D. L. et al., 1984).
ФСГ и ЛГ в норме вырабатывается одним и тем же типом клеток гипофиза, но соотношение между ними варьируется в зависимости от физиологической ситуации. Накоплено множество фактов, доказывающих синергизм взаимодействия между ФСГ и ЛГ,
который проявляется усилением действия одного гормона другим. Этот принцип широко
используется для искусственной стимуляции половых желез.
ФСГ вместе с эстрадиолом стимулируют развитие ЛГ-рецепторов на гранулезных
клетках созревающего фолликула. Таким образом, развитие фолликула зависит от тщательно скоординированной последовательности эндокринных стимулов, которая обеспечивает зрелость гранулезных клеток и клеток теки, а также ооцита к моменту наступления
овуляции.
Выделение гонадотропных гормонов гипофизом находится в прямой зависимости от
функционального состояния яичников и уровня секреции ими половых стероидов. Взаимоотношения гормонов гипофиза и яичников в регуляции полового цикла протекают по
принципу “плюс-минус” взаимодействия (Завадовский М. М., 1939). Если гормон одной
железы стимулирует другую, то гормон последней угнетает гормонообразование в первой.
По принципу обратной связи избыток эстрогенов ингибирует, а недостаток стимулирует
секрецию и выделение гонадотропинов.
8
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
Яичники являются третьим уровнем нейро-эндокринной регуляции репродуктивной функции. В яичниках находятся эндокринные железы: фолликулы, вырабатывающие
эстрогенные гормоны (эстрадиол, эстрон, эстриол), и желтые тела, вырабатывающие прогестерон. Данные гормоны относятся к классу стероидов.
Физиологическое значение эстрогенов заключается в воздействии, главным образом,
на матку и влагалище, делая их способными к половому акту и подготавливая почву для
оплодотворения. Эстрогены вместе с прогестероном воздействуют на организм в двух направлениях:
- действуют на ЦНС (гипоталамус), вызывая изменения в половом поведении животных;
- действуют на периферическую нервную систему (развитие вторичных половых признаков, увеличение размера матки в период течки, разрастание маточного эпителия, усиление сокращения матки), облегчая продвижение спермиев к яйцеводу.
Как и прогестерон, эстрогены принимают участие в процессах имплантации, стимулируют рост эпителия альвеолярных ходов молочной железы. Эстрадиол стимулирует
обмен веществ в клетке, увеличивая синтез РНК и изменяя свойства мембран эпителия
матки.
Высокие концентрации эстрадиола в течение фолликулярной фазы полового цикла
индуцируют увеличение секреции гонадотропинов через положительную обратную связь.
Этот механизм влияет на увеличение частоты пульсов секреции Гн-РГ и на повышение
чувствительности передней доли гипофиза к воздействию Гн-РГ, что приводит к выделению ЛГ и ФСГ (Kesner J.S. et al, 1981). С другой стороны, низкие концентрации эстрадиола
- 17 β, секретируемого развивающимися фолликулами во время лютеальной фазы, действуют вместе с прогестероном для создания отрицательной обратной связи на секрецию ЛГ.
Большая часть прогестерона (80%) секретируется в крупных клетках желтого тела,
которые занимают приблизительно 40% его объема. Помимо желтого тела, прогестерон
синтезируется в плаценте и коре надпочечников. Его концентрация начинает увеличиваться с 4-го дня полового цикла, достигая своего пика на 8-12 день, сохраняясь на этом
уровне до 17-го дня и резко снижаясь до базального уровня перед следующим эструсом и
овуляцией в случае отсутствия беременности.
Концентрация прогестерона в плазме крови прямо связана с активностью желтого
тела, она является точным показателем состояния овариальной функции и используется
для диагностики стельности, эстральных циклов и послеотельной овариальной активности.
Прогестерон создает условия для имплантации бластоцисты и дальнейшего развития
зародыша. Воздействуя на гипоталамус, он оказывает ингибирующее влияние на выделение ЛГ из гипофиза, не влияя на секрецию ФСГ. Сенсибилизируя половые центры нервной
системы, прогестерон увеличивает их чувствительность к эстрогенам. Кроме того, он оказывает общее действие на организм, влияя на белковый, минеральный и водный обмены.
Благодаря обратному тормозящему действию гормона желтого тела (прогестерона)
становится возможным регулирование циклической секреции гонадотропинов. Введение
прогестерона в организм или секреция его желтым телом подавляет циклическую секрецию гипофизарных гонадотропинов, необходимых для овуляции. Однако овулирующие
количества гонадотропинов выделяются немедленно, как только прекращается поступление прогестерона в организм, что приводит к предовуляторному росту фолликулов
и овуляции. Основываясь на этом, были подготовлены теоретические предпосылки для
разработки гормональных методов регуляции половой функции путем изменения продолжительности лютеальной стадии полового цикла с помощью применения стероидов с
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
9
прогестагенным действием.
Если считать яичник центральным звеном нейроэндокринной регуляции репродуктивной функции, то весь механизм регуляции репродуктивной функции можно представить в виде следующей схемы (рисунок 2):
Рисунок 2
Принципиальная схема нейроэндокринной регуляции репродуктивной функции
При морфологическом и гистологическом анализе яичников коров и тёлок, вне зависимости от их физиологического состояния, обнаруживается присутствие в них большого
числа фолликулов разнообразных по размерам. Среди всего разнообразия фолликулов
выделяют два пула: нерастущие и растущие. К числу нерастущих фолликулов относят примордиальные фолликулы, а среди растущих выделяют первичные, вторичные и третичные
фолликулы. Запас примордиальных фолликулов в яичниках формируется в эмбриональный период. С ним самки рождаются, но рост их до определённого возраста заторможен.
Точный механизм, инициирующий рост фолликулов, до конца не изучен. Среди факторов, которые могут вызывать начало роста фолликулов, называют два фактора: лейкемия-ингибирующий фактор (LIF) и bFGF -главный фактор роста фибробластов (Nilsson E.
et al., 2001, Nilsson E. et al., 2002). Влияние этих факторов определяется тем, что они способствуют изменениям степени выраженности матричной РНК (мРНК) на рецепторах клеток
теки и гранулёзы к гонадотропинам (ФСГ и ЛГ), к основным стероидогенным ферментам (стероидогенный регуляторный протеин (StAR) и инсулинподобным факторам роста
(IGF1 (для клеток гранулёзы) и IGF2 (для клеток теки)) (Beg M.A. et al., 2002).
При классификации фолликулов по размерам выделяют 4 класса. К первому классу
относят фолликулы размером 3-5 мм в диаметре. Такие фолликулы не способны к овуляции, клетки гранулёзы в них не обладают рецепторами к лютеинизирующему гормону, но
из их числа происходит отбор фолликулов, способных к последующему росту и превра-
10
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
щению в доминантные.
Ко второму классу относят фолликулы диаметром 6-9 мм. При резком угнетении
функции жёлтых тел (например, при экзогенном введении препаратов простагландина
F2α), фолликулы такого размера способны к овуляции, так как клетки их гранулёзы уже
имеют рецепторы к ЛГ.
К третьему классу относят фолликулы диаметром 10-15 мм. Это – доминантные фолликулы, на клетках их гранулёзы достаточная плотность рецепторов к ЛГ, они обладают
способностью к овуляции.
В четвертый класс выделяют фолликулы диаметром более 15 мм. Это – зрелые фолликулы, готовые к овуляции (Ireland J.J., Roche J.F., 1982, Lucy M.C. et al., 1991).
В 1960 году Radjakoski E., а затем и другие исследователи доказали, что на протяжении
полового цикла в яичниках коров и тёлок происходит две (Burke C.R. et al., 2000), а чаще
три волны роста фолликулов (Ahmad N. et al., 1997). А в некоторых исследованиях доказано, что в продолжение межовуляционного интервала в яичниках формируется до 4-х волн
роста (Rhodes F.M. et al., 1995).
Первая волна роста фолликулов берет начало в день овуляции, вторая – на 9-й или
10-й день в двух-волновом цикле. В трех-волновом цикле вторая волна роста появляется
на 8-й или 9-й день, а третья – на 16-й или 17-й день. Продолжительность двух-волнового
цикла составляет 20 дней, а 3-х волнового – 23 дня. Численность животных с двумя и тремя волнами роста фолликулов примерно
Рисунок 3
одинакова, результативность осеменеПримеры развития доминантных фолния не зависит от числа волн. У живот- ликулов на протяжении нормального полового
ных при недостаточной энергетической цикла с двумя (а) и тремя (b) волнами роста
обеспеченности рациона чаще встречафолликулов
ются трёх-волновые циклы, а при достаточной обеспеченности энергией – двухволновые (Murphy M.G., et al., 1991).
Появлению волн роста фолликулов
предшествует внезапное увеличение размеров десятка мелких (3-4 мм) фолликулов, которые в течение 2-х дней растут с
одинаковой скоростью, а затем скорость
одного из них возрастает, он становится
доминирующим, а остальные отстают в
росте, подвергаясь регрессии, атрезии
(Adams G.P., 1999). Доминантный, предовуляционный фолликул формируется
на второй, а чаще всего на третьей волне.
Это наглядно видно из схемы, представленной в статье Савио и соавторов ( Savio
J.D. et al., 1990):
Каков механизм отбора одного из
большого пула фолликулов, которому
предназначен дальнейший рост и превращение в доминирующий, до сих пор не
совсем ясно. Известно только, что этот
процесс стимулирует и ускоряет фолликулостимулирующий гормон, концентМОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
11
рация которого в крови возрастает после овуляции.
Исследование динамики роста фолликулов с помощью УЗИ показало, что уже на 3-4й день цикла в яичнике выявляются фолликулы среднего размера (6-9 мм). Доминантный
фолликул первой волны роста остаётся активным до средины цикла. На пике этой активности снова выделялся один из фолликулов и начинал расти, подавляя рост остальных.
Полагают, что подавление роста второстепенных фолликулов происходит под действием
протеинов фолликулярной жидкости. Если ослабить функцию желтого тела с 5-го по 8-й
день цикла (например введением простагландина F2α), то можно добиться того, что сможет овулировать доминантный фолликул первой волны роста (Kastelic J.P. et al., 1990).
Выяснено, что рост доминантных фолликулов первой волны обусловлен возрастанием активности ароматазы и увеличением концентрации эстрадиола в фолликулярной
жидкости. Это особенно выражено на 5-й день цикла. К 8-му дню ароматазная активность
доминирующего фолликула первой волны остаётся ещё высокой, а концентрация эстрадиола резко снижается. К 12-му дню снижается и концентрация ароматазы. Полагают, что
это происходит из-за пониженной концентрации андрогенов, как субстрата для ароматизации и для синтеза эстрогенов. Это может быть причиной начала атрезии доминантного фолликула 1-й волны. В течение всего периода роста доминантного фолликула первой
волны концентрация прогестерона в фолликулярной жидкости остаётся невысокой. В
этом плане второстепенные фолликулы первой волны отличаются от доминантных тем,
что в них, наряду с низкой ароматазной активностью и незначительной концентрацией
эстрадиола, к 8-му, а затем к 12-му дню цикла резко возрастает концентрация прогестерона. Это накопление прогестерона во второстепенных фолликулах первой волны роста
служит причиной их атрезии (Badinga et al., 1991).
Однако в большинстве случаев доминантный фолликул первой волны подвергается
атрезии, а зарождение новой волны роста фолликулов происходит под воздействием активности следующего доминантного фолликула (Ginther et al., 1989).
Доминантный фолликул второй волны также может овулировать, если происходит
спонтанная регрессия жёлтого тела. Но если активность жёлтого тела не будет спонтанно или искусственно снижена, то и доминантный фолликул второй волны подвергнется
атрезии и начнётся третья волна роста фолликулов. Поддержание роста и доминирования
фолликула, а также продолжительность его существования зависят от частоты пульсации
ЛГ. Если частота пульсации ЛГ невысокая, доминантный фолликул, даже в лютеальную
фазу цикла, останавливается в развитии и начинается новая волна роста фолликулов
(Tailor and Radjamahendran., 1991, Bergfelt et al., 1991).
Рост фолликулов контролируется комбинацией 2-х гормонов ФСГ и ЛГ и зависит от
концентрации соответствующих рецепторов на структурах фолликулов. ФСГ инициирует
рост фолликулов, а ЛГ – обеспечивает окончательное созревание доминантного предовуляционного фолликула. Успешность овуляции зависит как от возобновления базового
уровня ЛГ, так и от возобновления пульсирующего характера его выделения (Mihm M. et
al., 2002).
Возникновение волн роста фолликулов связывают с ростом или падением концентрации ФСГ в крови. Появлению волны роста предшествует рост концентрации ФСГ, а
секреция растущих фолликулов, особенно доминантных, по принципу обратной связи подавляет выделение ФСГ и способствует появлению новой волны (Adams G.P., 1999).
После появления волны роста в доминантном фолликуле концентрация эстардиола
возрастает в 20 раз. Введение экзогенного эстрадиола в лютеальную фазу цикла вызывает
регрессию доминантного фолликула, скорее всего из-за подавления секреции ЛГ и ФСГ.
Это вызывает появление новой волны роста.
12
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
Рецепторы к ФСГ располагаются только на клетках гранулёзы, тогда как рецепторы
к ЛГ присутствуют и на гранулёзных клетках и на клетках теки. В гранулёзных клетках
доминантного фолликула рецепторов к ЛГ больше, чем в клетках подчинённых, второстепенных фолликулов, поэтому он продолжает рост, а подчинённые фолликулы регрессируют.
В клетках теки присутствуют ферменты, способствующие превращению прогестерона в андрогены, а фермент ароматаза, способствующий превращать андрогены в эстрадиол, выявляется только в клетках гранулёзы (Adams G.P., 1999).
В возникновении волн роста фолликулов важную роль также играет ингибин. В частности, было показано, что подавление активности ингибина в период ранней лютеальной
фазы способствует резкому возрастанию секреции ФСГ. При этом, секреция эстрадиола и
прогестерона бывает обычно высокой (Kaneko H. еt al., 1997).
Титова В.А. с соавторами, используя УЗИ, провели анализ динамики роста фолликулов в течении полового цикла, индуцированного введением простагландина F2α. По их
данным, из 23 обработанных коров (500 мг ПГФ-2альфа) охоту проявила 21 корова. У 76%
коров было 2 волны роста фолликулов, у 24% – 3 волны. Срок появления 2-й волны – 11,3
дня, 3-й волны – 16,3 дня. По их наблюдениям, продолжительность доминирования фолликула составляла 6,1 дня. Диаметр доминантного фолликула перед овуляцией – 15,8 мм.
Интервал времени от появления охоты до овуляции составил в среднем 26,1 часа. У животных с 2-мя волнами доминантный фолликул первой волны достигал максимального
размера на 8-й день, второй волны – на 21-й день. Через 1 день после этого – овуляция. У
животных с 3-мя волнами доминантный фолликул первой волны достигал максимума на
9-10-й день, второй волны – на 16-й день, 3-й волны – на 23-й день. Овуляция в этом случае
проходила на 24-й день. Наивысшая концентрация прогестерона у животных с 2-мя волнами была на 12-й день (5,9 нг/мл), с 3-мя волнами – на 16-й день (6,4 нг/мл). Размер желтого
тела при максимальных значениях концентрации прогестерона был несколько больше у
животных с 3-мя волнами, однако связи между размером желтых тел и концентрацией
прогестерона не выявлено (Титова и др., 2007).
Интерес представляют исследования по изучению влияния размеров фолликулов на
их способность к овуляции. Овуляцию вызывали обработками ЛГ, а за динамикой роста
фолликулов так же следили с использованием УЗИ. Выяснено, что доминантный фолликул приобретает способность к овуляции с того момента, когда начинается отклонение в
скорости его роста в сравнении с ростом сопутствующих фолликулов, когда скорость его
роста начинает превышать скорость роста субдоминантного фолликула. Доза в 4 мг ЛГ
вызывала овуляцию фолликулов диаметром 12 мм у 100% коров. При величине фолликулов в 11 мм овуляция была лишь у 17% коров, а при размере фолликулов в 10 мм овуляции
не было ни у одной коровы. Фолликулы диаметром 10 мм дали положительную реакцию
на овуляцию только при введении 24 мг ЛГ, и то лишь у 9 из 13 коров (69%). У коров с
диаметром фолликулов в 7 и 8,5 мм овуляция не происходила даже при введении 40 мг
ЛГ. На основании этого сделан вывод, что приобретение способности к овуляции появляется у фолликулов только при достижении диаметра 10 мм. Таким образом, установлено,
что способность к овуляции развивается по мере того, как возрастает степень экспрессии
ЛГ на рецепторах клеток гранулёзы доминантного фолликула. Это сопровождается увеличением концентрации эстрадиола 17-бета в крови и уменьшением концентрации ФСГ
(Sartori R. et al., 2001).
В опытах на белоголовых канадских овцах показано, что при использовании определённой схемы гормональных обработок (на 8-й день цикла – введение простагландина
F2α с последующим введением на 6 дней импланта с медроксипрогестероном) можно доМОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
13
биться увеличения числа овуляций. Убой показал, что при этом овулировали не только
доминантные фолликулы последней волны, но и аналогичные фолликулы из предпоследней волны. Однако при этом выраженность экспрессии маркеров васкуляризации (фактор
YIII), ядерного антигена пролиферации и маркера межклеточной коммуникации (GJA1) на
клеточных структурах доминантных фолликулов предпоследней волны была существенно
слабее, чем на клетках доминантных фолликулов последней волны. И, хотя число овуляций при использовании применённой схемы гормональной обработки и увеличилось на
50%, оплодотворяемость от этого не повысилась (Seekallu S.V. et al., 2010).
2.2. Гормонально-ферментативные механизмы процесса овуляции
Овуляция – это вершина роста и развития фолликула, начинающегося с активации
его примордиального состояния и завершающегося вскрытием и выходом яйцеклетки,
способной к оплодотворению с образованием жёлтого тела на месте овулировавшего фолликла. Овуляцию инициирует ЛГ гипофиза, массированный выброс которого запускает
целый каскад событий, генерирует цепь паракринных и аутокринных действий, ферментных и транскрипционных факторов, обеспечивающих вскрытие апикального участка фолликулярной стенки с последующей реконструкцией внутриклеточного матрикса (ECM) и
дифференцировкой клеток (Goncales P.B.D et al., 2012). После выделения в качестве доминирующего, фолликул продолжает рост и приобретает способность к овуляции при достижении диаметра 12 мм.
Существует несколько версий относительно механизмов процесса овуляции.
Ю.Д.Клинский на основании анализа литературных данных и результатов собственных
исследований пришел к выводу, что среди распространённых версий механизма в качестве
дискуссионных можно рассматривать четыре (Клинский Ю.Д., 2011):
а) механическую: в качестве фактора, способствующего разрыву стенки фолликула,
рассматривается нарушение кровообращения и механическое давление фолликулярной
жидкости на истончённую стенку фолликула;
б) окситоциновую, полагающую в качестве основной причины вскрытия фолликула
массированное воздействие окситоцина на миоэпителиальные элементы фолликула;
в) ферментативную, объясняющую процесс вскрытия фолликула при овуляции воздействием литических ферментов
г) трикарбоновую, в соответствии с которой в качестве причины овуляции предполагают усиленный синтез трикарбоновых кислот.
Основные события, связанные с дифференцировкой доминантного фолликула, это
приобретение клетками его гранулёзы рецепторов к ЛГ и резкое возрастание экспрессии
клетками гранулёзы, приобретение клетками теки экстерна и теки интерна матричной
РНК (mRNA) стероидогенных ферментов HSD3B1 и CYP11A1, а также фермента CYP17A1
клетками теки (Tian et al., 1995).
Механизм окончательной клеточной дифференциации и приобретения доминантным фолликулом способности к овуляции связан с влиянием двух факторов: ооцит-секретируемого пептида BMP15 (Bone Morphogenetic Protein-15) и фактора роста и дифференцировки GDF9 (Growth and Differentiation Factor-9) (Juengel et al., 2009). Доказательство
участия этих факторов в процессе овуляции основано на том, что была достигнута полиовуляция у коров (у 6 из 10 коров) посредством иммунизации их против GDF9 и BMP15.
Перед предовуляционным выбросом ЛГ внеклеточный матрикс доминантного фолликула подвергается интенсивной реконструкции и реваскуляризации, подготавливая
образование жёлтого тела. В подготовке к разрыву верхушечной части фолликулярной
стенки перед овуляцией принимают участие ферменты MMPs (матричные металло-протеиназы), ADAMTS-протеазы, плазмин, а также активаторы плазминогена tPA и uPA
14
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
(Ogiwara et al., 2005).
Участие в процессе разрыва фолликулярной стенки принимают и тканевые ингибиторы металлопротеиназ (TIMPs). Снижение их уровня и повышение активности металлопротеиназ (MMPs) и активаторов плазминогена (PAs) облегчает процесс разрыва стенки
(Li et al., 2006).
В осуществлении процесса разрыва верхушечной поверхности фолликула и овуляции доказано участие ангиотензина (AngII). После выброса ЛГ концентрация этого пептида в фолликулярной жидкости возрастает. В фолликулах крупного рогатого скота выявлено два подтипа рецепторов к ангиотензину – AGTR-1 и AGTR-2. Рецепторы типа AGTR-1
оказывают воздействие на сокращение гладких мышц и регулируют давление крови, а рецепторы AGTR-2 выполняют роль медиаторов репродуктивной функции (Yoshimura et al.,
1996).
Было выяснено также, что в каскаде событий в предовуляционном процессе принимают участие и простагландины, главным образом ПГF2α. Доказано, что он расширяет
кровеносные сосуды в изменённых тканях апикального участка стенки фолликула. Введение внутривенно индометацина – антагониста ПГF2α – снижало концентрацию простагландина и блокировало овуляцию (Espey et al., 1986).
2.3. Факторы, определяющие полноценность фолликулогенеза и результативность осеменения. Отрицательный энергетический баланс.
В современном молочном скотоводстве селекция более двух десятилетий проводится
в направлении повышения продуктивности. Это значительно влияет на физиологический
статус молочных коров, особенно в послеотельный период, когда резко возрастающий
синтез молока не обеспечивается энергией поедаемого корма. В результате этого в организме возникает состояние так называемого отрицательного энергетического баланса. Недостаток энергии в ранний послеотёльный период вызывает характерные метаболические
и гормональные изменения, которые угнетают рост фолликулов и приводят к задержке
овуляции. (Butler W.R., 2005).
Степень негативного влияния отрицательного энергетического баланса связана со
степенью потери упитанности и массы тела коровами в первые 30 дней лактации. В исследованиях Batler’а показано, что чем сильнее был выражен отрицательный энергетический
баланс в начале лактации, тем больше коровы теряли упитанность и тем больше у них был
интервал от отёла до первой овуляции. При этом у коров, которые за первый месяц лактации снижали упитанность менее чем на 0,5 балла, первая овуляция проходила до 28 дней
после отёла. У коров, терявших от 0,5 до 1 балла упитанности, первая овуляция проходила
лишь к 40-му дню, а у терявших более 1 балла упитанности – лишь к 45-му дню (Butler W.R.,
2003) (таблица 2).
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
15
Таблица 2
Влияние уровня потери упитанности в новотельный период на показатели репродуктивной функции молочных коров
Уровень поДней от
Дней от
Дней от
%
тери упитанности отела до первой отела до первой отела до перво- стельных по(по 5-ти бальной овуляции
п ол н оц е н н ой го осеменения
сле первого
системе)
охоты
осеменения
менее 0,5
27
48
68
65%
0,5-1,0
31
41
67
53%
более1,0
42
62
79
17%
Отрицательный энергетический баланс приводит к мобилизации жировых депо и
поступлению в кровь неэстерифицированных жирных кислот. Печень не справляется с
возникающей высокой нагрузкой: глюконеогенез, окисление жирных кислот, производство инсулино-подобного фактора роста (IGF-1) (Batler W.R., 2005).
Чем выше концентрация неэстерифицированных жирных кислот и альфа-гидроксибутирата в крови сухостойных коров, а также чем выше содержание в печени триглицеридов, тем вероятнее нарушения процесса роста и овуляции фолликула.
Важным фактором является качество и сбалансированность рациона (Reinhardt T.A.
et al., 2011). Несбалансированное или недостаточное питание коров в сухостойный и ранний послеотельный периоды приводит к тому, что в крови снижается уровень глюкозы,
инсулина и инсулиноподобного фактора роста. Кроме того снижается частота пульсов ЛГ.
Одновременно увеличивается уровень β-оксибутирата, не этерифицированных жирных
кислот и триглицеридов (Rukkwamsuk T. et al., 1999; Roche J.F., 2006; Silvestre F.T. et al., 2011).
При этом, лимитирующим фактором является уровень потребления сухого вещества
(Patton J. et al., 2007). Избыточное содержание белка в рационе животных при одновременном недостатке жира может привести к снижению результативности осеменения за счет
снижения выработки простагландина F2α и снижения уровня пламенного прогестерона,
что обуславливает увеличение уровня гибели эмбрионов на стадии бластоцисты (Stronge
A.J.H. al., 2005). Избыточное питание молочных коров стимулирует метаболизм, что также приводит к снижению уровня стероидных гормонов, в частности эстрадиола-17β, что
снижает продолжительность и степень проявления половой охоты (Roche J.F., 2006; Seifi
H.A. et al., 2010).
Считается, что выраженность негативного проявления отрицательного энергетического баланса в меньшей степени связана с уровнем удоя, а в большей степени – с адекватной обеспеченностью организма энергией. Стратегия кормления молочных коров в
последние месяцы лактации предполагает поддержание умеренной упитанности их в этот
период (на уровне 3,5-3,75 баллов) с последующим существенным повышением энергетического уровня рациона в последние 3 недели перед отёлом. Для возобновления послеотёльной овуляции необходимо восстановление фолликулярной функции яичников, возобновление секреторной функции гипоталамуса и гипофиза и, соответственно, синтеза ФСГ
и ЛГ (Doepel et al., 2002).
Ультразвуковое обследование яичников у коров с 30 по 104 день послеотельного периода, получавших после отела высокоэнергетический рацион и низкоэнергетичекий рацион, показало разницу в диаметре доминантного фолликула при различном уровне энергии в рационе. Как видно из данных рисунка 4, у животных с высокой обеспеченностью
рациона энергией диаметр фолликулов был больше и появлялся он раньше.
16
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
Рисунок 4
Количество фолликулов диаметром 10-14 мм и более 15 мм у коров получавших высокоэнергетический (ВЭ) и низкоэнергетический (НЭ) рацион (Kendrick W., 1997)
Анализ результативности осеменений в связи с сезонами года показывает, что в летний сезон показатели воспроизведения повсеместно бывают хуже, чем в иные периоды.
Исследования, проводившиеся в США (штат Джорджия - 7 стад черно-пестрой голштинской породы; штат Флорида – 5 стад той же породы), на 8124 коровах, показали, что
результативность осеменения зависит не только от продуктивности животных, но и от
сезона года. Отмечалось снижение показателей воспроизводства стада в летний сезон во
всех группах продуктивности, что отображено на рисунке 5 (Al-Katanani Y.M., 1999).
Причиной ухудшения результативности осеменений в летнее жаркое время считают
нарушения фолликулогенеза и гонадального стероидогенеза. Гипертермия нарушает механизмы созревания доминантных фолликулов и овуляции, вызывает снижение секреции
прогестерона в результате нарушений функции жёлтого тела. При этом уровень оплодотворения бывает обычно высоким, но эмбриональное развитие нарушается, что приводит
к ранней или поздней эмбриональной смертности (Wolfenson et al., 2000, De Rensis and
Scaramuzzi, 2003).
Негативное влияние гипертермии на результаты воспроизведения тем более выражено, чем более выражен у коров уровень продуктивности. В исследованиях Аль-Катанани
показано, что у коров с продуктивностью от 5 до 9 тыс. кг в летние месяцы (июнь, июль,
август) процент стельности от первого осеменения составлял от 15 до 20% против 50-60%
в зимнее и осеннее время. А уже у коров с продуктивностью выше 9 тыс. кг в эти летние
месяцы уровень стельности опускался до 5-10% против 50-60% в осенний и зимний сезон
(Al-Katanani Y.M., 1999).
Негативное влияние гипертермии на воспроизведение молочных коров проявляется
и в странах умеренного климата. Доказано, что критический уровень температуры, после
которого появляются признаки гипертермии, составляет всего 25-27 градусов (Hansen P.J.,
1997).
В аномально жаркое лето 2010 года в Центральной полосе России, в частности в Подмосковье, показатели воспроизведения у коров были крайне низкими. При этом было
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
17
выяснено, что они зависели от времени нахождения коров под воздействием жары. Хуже
были результаты там, где коров круглый день (кроме доения) держали на пастбище: всего
10% стельности от первого осеменения. Там же, где днём коров держали в тени проветриваемых помещений, а пастьбу проводили в ночное время, результаты были гораздо лучше
– 36-40%.
Рисунок 5
Изменение результативности осеменения у коров с различной продуктивностью в зависимости от месяца осеменения (Al-Katanani Y.M., 1999)
Анализ результативности осеменений в жаркое время года, проведённый в штате Техас, показал, что она зависит от времени осеменения: лучшие результаты получены, когда
коров осеменяли сразу после выявления охоты. При осеменении спустя 12 часов после
выявления охоты результат получили хуже (Brodway J.L. et al., 1975).
Негативное действие гипертермии может продолжаться и после окончания жаркого
сезона. Поскольку процесс развития фолликулов от малых антральных до зрелых доминантных занимает значительный срок - от 40 до 50 дней (Roth Z. et al., 2001).
Влияние продуктивности на фолликулогенез и результативность осеменения широко
освещено в литературе. При этом в первую очередь это отражается на продолжительности
половой охоты. С ростом продуктивности она снижается, что отражено на рисунке 6.
Основной причиной выше приведенного факта является снижение качества фолликулогенеза в результате недостатка энергии в послеотельный период (Butler W.R., 2003;
Yusuf M. et al., 2010), что в свою очередь приводит к снижению выработки инсулиноподобного фактора роста, регулирующего в том числе фолликулогенез (Llewellyn S. et al., 2007).
Накопление неэтерифицированных жирных кислот и кетоновых тел в фолликулярной
жидкости подавляет развитие клеток гранулезы фолликула и яйцеклетки, что также снижает эффективность оплодотворения (Leroy J.L. et al., 2005; Vanholder T. et al., 2005; Silvestre
F.T. et al., 2011). Кроме того, снижение качества яйцеклетки может быть обусловлено ее
старением при задержке овуляции, одной из причин которой является повышенный уровень прогестерона в период половой охоты, что препятствует выделению ЛГ (Bage R. et al.,
2003).
18
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
Рисунок 6
Взаимосвязь уровня молочной продуктивности и продолжительности половой охоты
(Lopez et al., 2004)
2.4. Время овуляции и результативность осеменения
Оплодотворяемость молочных коров может достигать 90 и более процентов, что позволяет достигнуть приблизительно 70% результативности осеменения с учетом ранней
эмбриональной смертности (Humblot P., 2001; Andersen-Ranberg I.M. et al., 2005). В то же
время, на практике в большинстве случаев результативность осеменения не превышает
40%, а по сообщения некоторых авторов – опускается ниже 25%. Снижение результативности осеменения коров черно-пестрой голштинской породы американской селекции на
0,5-1% в год было установлено в конце 50-х годов прошлого века (Bousquet D. . et al., 2004;
Lucy M.C., 2005).
Многими исследованиями доказано, что результативность искусственного осеменения зависит от того, в какое время по отношению к моменту овуляции – проведено введение семени. Ещё в 1948 году американский исследователь Тримбергер показал, что наилучшие результаты при искусственном осеменении молочных коров в спонтанную охоту
получают при осеменении их за 13-18 часов до овуляции (Trimberger G.W., 1948).
Аналогичные выводы были сделаны и по результат многих других исследований, в
том числе выполненных отечественными учёными. Такие рекомендации приводят по результатам своих исследований учёные ВИЖа Тюпич М.М. ( 1957) и Шейкин В.Н. (1980),
Флегматова Н. А. и Шипилова В.С. (1959). По результатам этих и других подобных исследований общепризнанным стало утверждение, что при искусственном осеменении молочных коров оптимальным временем осеменения, введения семени, следует считать время за
10-15 часов до овуляции.
При определении времени овуляции разные исследователи за момент отсчёта времени берут разные показатели состояния животных. В одних случаях время овуляции определяют по отношению к моменту начала охоты, в других – по отношению к моменту окончания охоты, в третьих – по отношению к моменту окончания гормональных обработок.
А чаще всего – по отношению к моменту выявления, обнаружения охоты, так как точный
момент начала или окончания охоты практически зафиксировать невозможно. Ранними
работами американских учёных, а также учёных ВИЖа было выяснено, что если при опреМОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
19
делении времени овуляции за точку отсчёта брали время начала охоты, то она происходила в период от 28 до 40 часов после этого (Nalbandov A., Casida L.E., 1942, Герасимова А.А.,
1938).
Так же данные о времени овуляции у коров приводятся в работах д-р Р.Хан в учебнике
для подготовки операторов по искусственному осеменению коров в ФРГ. По его данным,
овуляция у молочных коров проходит, в среднем, через 13 часов после прекращения признаков охоты (Хан Р., 1976). Есть данные о более коротком интервале между окончанием
охоты и овуляцией. Так, исследования учёных Литовского института животноводства показали, что овуляция у молочных коров осуществляется через 10 часов (от 2 до 20) после
окончания охоты (Пакенас П., 1993).
В исследованиях, проведённых в США, где охоту у коров выявляли с использованием
шагомеров и уточняли затем с помощью визуального наблюдения, выяснили, что овуляция у большинства коров проходила в период от 26 до 40 часов с момента обнаружения
охоты. Результаты осеменения оказались наилучшими в тех случаях, когда коров осеменяли через 12 часов с момента выявления охоты (Maatje et al., 1997).
Сходные данные о времени овуляции приводят и отечественные «Методические указания по искусственному осеменению коров и тёлок», изданные по заданию МСХ РФ в
2009 года. На основе данных многих научных исследований в «Указаниях» говорится, что
овуляция у молочных коров проходит через 10-15 часов после окончания охоты или через
24-30 часов после её начала.
Такие же параметры овуляции отражены и в «Национальной технологии замораживания и использования спермы племенных быков-производителей», составленной авторским коллективом сотрудников научных учреждений Российской Академии сельскохозяйственных наук. В этом регламентном документе сказано, что овуляция у коров происходит
через 10-14 часов после окончания рефлекса неподвижности (Национальная технология.,
2008).
В Индии, в опытах на кроссбредных коровах с использованием УЗИ-сканнирования
следили за динамикой роста доминантных фолликулов и за овуляцией. Коров дважды, с
промежутком в 11 дней, обработали ПГФ-2альфа. От времени обработки простагландином до времени выявления охоты проходило 55-63 часа, а от времени выявления охоты до
овуляции – 35-40 часов. При этом было выяснено, что время овуляции зависело от того,
из какой волны роста был овулирующий фолликул. Если овулировал фолликул из первой
волны роста, то от начала охоты до овуляции проходило 40,7 часа, а если из второй волны
– то овуляция проходила через 34,6 часа от начала охоты (Patil L. et al., 2008).
Титова В.А. с сотрудниками исследовали с помощью УЗИ динамику роста фолликулов и овуляцию. Было выяснено, что у большинства коров (76%) в продолжение полового
цикла зарождалось две волны роста фолликулов. У 24% коров было 3 волны роста. Интервал времени от начала охоты до овуляции составил в данном исследовании 26,1 часа
(Титова В.А. и др., 2007)
Время овуляции у молочных коров в условиях Подмосковья было изучено Кононовым В.П. и Черных В.Я. Выяснено, что если отсчёт времени брали от момента начала охоты, то у 42% коров овуляция наступала через 20-25 часов, у 32% - через 26-35 часов, а у 26%
- через 36 часов и позже (Кононов В.П., Черных В.Я., 2009).
В исследованиях Субботина А.Д., проведённых также в молочных стадах Подмосковья, установлено, что в летне-пастбищный сезон интервал между моментом выявления
охоты и овуляцией был короче, чем в зимне-стойловый сезон. Так, в летний сезон у большинства коров (71%) овуляция проходила в срок от 15 до 24 часов после обнаружения
охоты. В зимний сезон в этот срок овуляцию отмечали лишь у 33% коров. Ещё у 45% коров
20
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
овуляция в этот сезон проходила в срок от 25 до 36 часов, а у 12% коров в зимний сезон
отмечались ановуляторные циклы (Субботин А.Д., 2011).
Исследования Roelofs и соавторов показали, что интервал между овуляцией и осеменением, имеющим высокую вероятность оплодотворения яйцеклетки, довольно продолжителен (36-12 часов до овуляции). Однако интервал между овуляцией и осеменением, в
течение которого оплодотворенная яйцеклетка с максимальной вероятностью превратится в здоровый эмбрион, является меньшим (24-12 часов до овуляции).
В условиях хозяйства невозможно постоянное наблюдение за коровой, если не используются вспомогательные средства (шагомеры, видеонаблюдение и т.д.), поэтому точно
определить время начала половой охоты затруднительно. В таких ситуациях можно пользоваться дополнительными признаками, например, консистенция течковой слизи. В начале половой охоты она жидкая, а к концу густеет и становится тягучей. (рисунок 7).
Рисунок 7
Слизь, характерная для конца половой охоты - тягучая и часто имеет включения
воздушных пузырьков
Таким образом, поводя итог можно сделать вывод, что оптимальным временем для
осеменения можно считать интервал
12 часов с момента выявления охоты.
На практике этот принцип работает
так: коров, выявленных в охоте утром
– осеменяют вечером, а выявленных в
вечернее время – утром. Это позволяет
сохранить в яйцеводах максимальное
количество жизнеспособных сперматозоидов к моменту выхода яйцеклетки, что обуславливает максимальную
вероятность оплодотворения. Кроме
того, осеменение «свежей» яйцеклетки
снижает риск эмбриональной смертности, что также способствует повышению результативности осеменения.
Влияние на продолжительность
половой охоты и результативность
осеменения оказывает и уровень продуктивности стада. В таблице 3 представлены данные различных источников с 1924 по 2002 год о влиянии уровня молочной
продуктивности на продолжительность половой охоты. За этот период селективные достижения позволили значительно увеличить уровень молочной продуктивности стад и
это отразилось на продолжительности половой охоты у дойных коров. Как видно из представленных данных, продолжительность половой охоты у коров за наблюдаемый период
сократилась более чем на 8 часов, в то время как у телок она практически не изменилась.
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
21
Таблица 3
Изменения продолжительности половой охоты у коров и телок в период
с 1924 по 2002 год
Литературный источник
Продолжительность половой охоты, часы
Коровы
Телки
Hammond, 1927
19,3
16,1
Trimberger, 1948
17,8
15,3
Dransfield et al., 1998
7,1
-
Nebel and Jones, 2002
10,8
-
-
15,2
Bage et al., 2002
Grimard B. низкую результативность искусственного осеменения в высокопродуктивном молочном стаде объясняет недостаточной функциональной активностью жёлтых
тел и повышенной эмбриональной смертностью, как на стадии поздних эмбрионов, так и
на раннеплодовой стадии (Grimard B. et al., 2006).
На наш взгляд, одной из перспективных стратегий является дифференцированный
подход ко времени осеменения в зависимости от продуктивности животных. При этом
осеменение коровы следует проводить только после стабилизации энергетического баланса, когда она имеет больше шансов плодотворно осемениться.
2.5. Способы контроля охоты и овуляции
По данным ряда исследователей, в высокопродуктивных стадах от 6 до 59% коров не
проявляют половой охоты спустя 60 и более дней после отела. Отмечается также увеличение уровня потерь стельности после первого осеменения. (Chebel R.C. et al., 2006; Santos
J.E.P. et al., 2004; Santos J.E.P. et al., 2009).
В связи с этим, в настоящее время в практике молочного животноводства используется множество разнообразных стратегий контроля репродуктивной функции, выбор которых зависит не только от квалификации специалистов, но и от технологии содержания
животных.
Не требует доказательств тот факт, что здоровая корова, осемененная в спонтанную
охоту, имеет больше шансов стать стельной, чем корова осемененная в индуцированную
охоту. В первую очередь это обусловлено качеством фолликула на момент осеменения. Но
осеменение в спонтанную охоту имеет и ряд недостатков:
1. Существует риск пропуска охоты;
2. Возможно несвоевременное осеменение;
3. Требуется постоянное наблюдение за стадом.
Животные проявляют охоту не только в течение дня, но и ночью. При этом, распределение, пришедших в охоту в течение суток неравномерно (рис. 8):
Это усредненные данные, в конкретном хозяйстве эти показатели могут несколько
изменяться, но принципиально тенденция не меняется. Таким образом, если с ростом продуктивности отмечается сокращение времени проявления признаков половой охоты, то
продуктивная корова, проявившая охоту в вечернее или ночное время, при наблюдении
следующим утром может не проявить поведенческих признаков и, следовательно, не осеменится.
22
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
Рисунок 8
Уровень проявления признаков половой охоты в течение суток
При использовании визуального контроля за проявлением охоты для повышения
уровня выявления необходимо постоянное и систематическое наблюдение за животными, а период наблюдения за сектором должен составлять не менее 20 минут (таблица 4).
Таблица 4
Влияние кратности и продолжительности наблюдения за стадом на уровень выявления животных в охоте в %
Кратность наблюдений в день
Продолжительность каждого наблюдения, минут
5
10
20
1
26
52
63
2
36
72
86
3
39
79
95
4
41
82
98
Разработано множество способов, облегчающих выявление коров, находящихся в
охоте:
Маркерные методы (детекторы садок) – подразумевают использование специальных
апликаторов или карандашей. С целью выявления охоты аппликатор прикрепляется в области крестца у основания хвоста. Если используется карандаш – по медиальной линии
рисуется полоска длиной около 30 см. Положительным сигналом считается изменение
цвета аппликатора или размазывание цветовой полоски. Данный метод требует индивидуального подхода к животному для закрепления аппликатора или нанесения полоски.
Кроме того, у части коров аппликаторы отпадают в ходе произведения садок. Возможна
также ложная реакция, особенно при групповом содержании коров. В настоящее время
существуют модификации аппликаторов, имеющие электронную систему регистрации и
автономный передатчик, позволяющий регистрировать на центральном компьютере не
только факт садки, но и ее продолжительность, время суток и количество.
Шагомеры – принцип работы основан на том, что в период половой охоты увеличивается активность животных. Прибор круглосуточно регистрирует активность животного
и в случае ее увеличения компьютер выводит предупреждение на монитор. При его внедрении эффективность выявления коров в охоте вырастает до 90 и более %. Недостатком
метода является потребность расчета индивидуальной активности коров, т.к. у каждой
особи есть свой темперамент и поведенческие особенности. Для получения средних данных системе необходимо от 10 до 14 дней с момента установки датчика. В этот период
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
23
животное в охоте выявлено не будет. Кроме того, ферма должна иметь компьютеризированную систему считывания и обработки получаемых данных, что делает данный метод
весьма дорогостоящим. Возможно также ложное реагирование при перестановке животных, массовых обработках и других мероприятиях.
Применение пробников. В настоящее время мало распространено. Подразумевает
использование вазоэктомированных быков или коров с андрогенизированными кистами
яичников. В США используются коровы, прошедшие обработку препаратом тестостерона, что также способствует проявлению «бычьего» поведения. Использование метода не
нашло широкого применения из-за необходимости контроля за пробниками, зачастую
проявляющими агрессию. Кроме того, бык-пробник способен переносить инфекционные
заболевания, такие как лейкоз, ИРТ, ВД и др.
Видеонаблюдение. Является разновидность визуального наблюдения. Преимуществом является возможность просмотра ранее произведенной записи в ускоренном режиме,
что сокращает время затрачиваемое на выявление охоты. При данном методе возможны
затруднения при идентификации животных, а также правильной интерпретации получаемой информации, что требует высокой квалификации и опыта от наблюдателя.
Изменение электропроводности вагинальной слизи и мускулатуры. Разработано
несколько приборов как отечественного, так и иностранного производства, работа которых основана та определении электропроводности вагинальной слизи или мускулатуры
влагалища, которая меняется в период половой охоты. Но показатель электропроводности
имеет значительные индивидуальные отклонения, что требует регистрации ранее полученных индивидуальных результатов каждого животного для более точного определения
половой охоты. В связи с этим данный метод имеет высокую погрешность.
Прогестероновый тест. Основан на принципе, что в период половой охоты уровень
прогестерона близок к нулевому. Это позволяет выявить оптимальное время для осеменения. Как правило, для определения уровня прогестерона применяется метод ИФА. Данный
метод требует отбора биологического материала для анализа (кровь или молоко), что в
ряде случаев трудно осуществимо. Кроме того, его проведение может занять несколько
часов, за этот период может произойти овуляция. Возможна также ошибка – в первые часы
после овуляции уровень прогестерона также находится на базальном уровне.
Анализируя все вышеперечисленные методы, можно сказать, что все они имеют те
или иные недостатки (либо низкую достоверность получаемых результатов, либо высокую стоимость и необходимость технического обслуживания) и в настоящее время не
существует методов определения спонтанной охоты, удовлетворяющих всем требованиям
животноводов.
2.6. Синхронизация половой охоты
По мере возрастания требований экономической эффективности и необходимости
непрерывного роста рентабельности производства молока и говядины стали сказываться
отдельные сдерживающие факторы, препятствующие расширению применения искусственного осеменения – как в молочном, так и, особенно, в мясном скотоводстве. Главный
среди этих факторов – это большие затраты времени и средств на выявление индивидуальной охоты, а также на выбор точных сроков осеменения. С целью преодоления этого
сдерживающего фактора возникла потребность в разработке способов синхронизации
охоты и овуляции.
Синхронизация половой охоты имеет следующие преимущества:
1. Позволяет осеменить коров и телок длительное время не выявляемых в охоте;
2. Позволяет планировать осеменение и растел животных в течение года с учетом
экономических особенностей региона и хозяйственных возможностей;
24
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
3. Упрощает работу осеменаторов, за счет возможности выбора максимально удобного времени для осеменения и работы с группой животных;
4. Позволяет профилактировать и лечить на начальных стадиях такие патологии
репродуктивной функции, как задержка овуляции, фолликулярные кисты, персистентные
желтые тела, начальные стадии гипофункции яичников.
Управляемую охоту можно индуцировать двумя путями. В первом случае - путём удлинения лютеальной фазы посредством введения прогестерона или его аналогов (прогестагенов). При этом рост фолликулов будет заторможен, а после прекращения действия
прогестагенов у всех обработанных животных течка проявится в относительно короткий промежуток времени. В другом случае эффект синхронизации охоты можно получить
путём сокращения продолжительности лютеальной фазы, что подразумевает применение
простагландина F2α.
Выбор конкретной схемы синхронизации зависит от многих факторов. В любом случае, схема синхронизации должна выполняться неукоснительно, со строгим соблюдением
интервалов времени между введениями препаратов и их дозировок. Использование схем
синхронизации должно не только способствовать индукции половой охоты, но и обеспечивать прогнозируемую результативность осеменения. В противном случае теряются все
преимущества использования синхронизации.
При выборе схемы синхронизации следует учитывать физиологический статус животных, обеспеченность энергией и микроэлементами, так как это в значительной степени
влияет на качество фолликулогенеза, а, следовательно, на результативность осеменения.
Наиболее известная и широко распространенная схема синхронизации, подразумевающая двукратное применение простагландина F2α, представлена на рисунке 9.
Рисунок 9
Схема синхронизации половой охоты с использованием
двукратного введения Магэстрофана®
При использовании данной схемы часть коров будет приходить в охоту после первого введения препарата. Это коровы или телки, у которых на момент введения простагландина были хорошо развитые или регрессирующие желтые тела. В случае проявления
охоты этих животных целесообразно осеменять. Практика показывает, что результативность осеменения при этом аналогична таковой при естественной охоте. Коровам, не проявившим признаков охоты через 11-14 суток, вводится повторно Магэстрофан®, согласно
выше приведенной схеме. Коров, не проявивших признаков половой охоты, осеменяют
через 72 часа после повторного введения. Из числа не проявивших признаков охоты около
30% животных становятся стельными.
Существует разновидность «простагландиновой» схемы, в которой препарат вводится трехкратно, через равные интервалы в 11-14 суток (рис. 10). Как правило, ее используют
на новотельных животных.
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
25
Рисунок 10
Схема синхронизации половой охоты с использованием
трехкратного введения Магэстрофана®
К преимуществам использования данных схем можно отнести простоту исполнения,
малое число «подходов» к животному и низкую стоимость обработки. Но, они могут применяться только на животных, имеющих половую цикличность. Максимальную эффективность они показывают при использовании для синхронизации охоты телок. У коров, с
ростом продуктивности, снижается эффективность ее применения. Это обусловлено тем,
что способствуя лизису желтого тела Магэстрофан®, как и любой другой аналог простагландина F2α, не оказывает влияния на фолликулогенез. А, как уже говорилось выше, с
ростом продуктивности отмечается снижение качества фолликулов.
Этот недостаток был устранен после появления схемы «Ovsynch». Эта схема предусматривает использование комбинации двух препаратов, воздействующих на разные функциональные системы яичника – Гн-Рг и ПГF2α, что дает возможность использовать ее на
разных стадиях полового цикла. Преимуществом этой схемы является возможность повысить качество фолликулогенеза за счет введения Гн-РГ (Сурфагон). За счет этого препарата
оказывается влияние и на сроки овуляции фолликула. Первое введение Сурфагона обеспечивает своевременный старт развития доминантного фолликула за счет ФСГ, а повторное
(в меньшей дозе) способствует своевременной овуляции за счет ЛГ. Существует несколько
вариантов данной схемы, подразумевающих применение разных препаратов и вариантов
их дозировок. Один из наиболее известных и распространенных вариантов представлен
на рисунке 11.
Рисунок 11
Схема «Ovsynch»
Преимуществом и одновременно недостатком данной схемы является необходимость строгого соблюдения временных интервалов между введениями, что обеспечивает
высокую результативность ее применения, аналогичную осеменению в спонтанную охоту. Но, в случае отклонения от указанных интервалов, результативность может оказаться
очень низкой. Как правило, осеменение удобней проводить в утренние часы. Поэтому в
большинстве случаев данную схему начинают также утром и последнее введение Сурфагона, обеспечивающее своевременную овуляцию фолликула, приходится на вечер, что не
26
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
всегда удобно для специалистов.
Совершенствование схемы «Ovsynch» привело к разработке модифицированной схемы, которую назвали «CO-Synch» (рис. 12). Основное достоинство этой модификации в
том, что, по мнению авторов, сокращается по времени процедура синхронизации. Это достигается тем, что в этом случае вторая обработка Гн-РГ совмещена по времени с искусственным осеменением коров, не проявивших признаков охоты на протяжении применения
схемы. За 10 дней до осеменения проводят первую инъекцию Гн-Рг, через 7 дней – инъекцию ПГF2α, а через 48-72 часа– вторую инъекцию гонадотропина с одновременным искусственным осеменением. Результативность применения этой схемы синхронизации овуляции почти не отличается от показателей результативности применения схемы «Ovsynch»,
хотя абсолютные цифры результативности несколько ниже (Sterry R. et al., 2007).
Рисунок 12
Схема «CO-Synch»
Vasconcelos и соавторы изучали влияние дня полового цикла в момент применения
схемы «Ovsynch» на результативность осеменения у молочных коров. Результаты представлены в таблице 5.
Таблица 5
Эффективность индукции половой охоты при использовании схемы «Ovsynch» на разных стадиях полового цикла
Дни полового цикла
Процент овуляции после
первой инъекции Гн-РГ
Процент овуляции после
второй инъекции Гн-РГ
1-4
23 %
94 %
5-9
96 %
89 %
10-16
54 %
85 %
17-21
77 %
81 %
В среднем
64 %
87 %
Как видно из представленных данных, нет необходимости выбора фазы полового цикла при использовании данной схемы синхронизации, что значительно облегчает работу
специалистов по подбору групп животных для синхронизации охоты. При этом сочетание
осеменения коров, проявивших охоту в течение схемы, и не осеменения, не проявивших
охоты в конце схемы, позволяет нивелировать снижение результативности схемы в результате пропуска охоты.
Существует также комбинированная схема индукции охоты, являющаяся модификацией «Ovsynch», но при этом осеменяются только животные, проявившие охоту – «SelectSynch».
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
27
Рисунок 13
Схема «Select-Synch»
Широкое применение на беспривязных молочных комплексах нашла схема синхронизации «Pre-Synch» (рис. 14). Эта схема используется в послеотельный период для лечения и профилактики послеотельных осложнений и сокращения сроков инволюции матки
с последующим осеменением в оптимальное время.
Рисунок 14
Схема «Pre-Synch»
Одной из особенностей беспривязного содержания является проблема своевременного обнаружения животного и его лечения согласно принятым в хозяйстве схемам. Поиск
нужных животных производится либо с помощью селекционных ворот, либо визуально в
секциях и расколах. В любом случае это требует времени. В связи с этим, имеется потребность в минимизации подходов к животному с сохранением при этом эффективности.
«Pre-Synch» представляет собой один из таких вариантов. Как видно из рисунка 14,
началом схемы является двукратное введение ПГF2α (Магэстрофан®) с интервалом 1114 дней. Через 12 дней после повторного введения ПГF2α, работа продолжается по схеме
«Ovsynch» - вводится Гн-РГ (Сурфагон), через 168 часов - ПГF2α и еще через 56-60 часов
– Гн-РГ. Спустя 12-16 часов (после последней инъекции) проводится осеменение коров, не
проявивших охоту самостоятельно в течение применения схемы.
Двукратное применение ПГF2α способствует не только лизису желтых тел, но и активации местного иммунитета слизистой матки, а также повышению тонуса гладкой мускулатуры матки, что в комплексе способствует лечению послеродовых эндометритов.
В связи с этим, схема используется преимущественно на новотельных коровах. Сроки
начала применения зависят от сроков желательного осеменения животных. Как правило,
после перевода с родильного отделения, когда нет возможности систематической санации
матки.
Так, если осеменение планируется проводить спустя 60-70 дней после отела, «PreSynch» начинают использовать спустя 30-35 дней после отела. Если требуется продлить
срок добровольного ожидания (высокопродуктивных коров целесообразней осеменять
спустя 80-90 дней после отела) – в схему включается дополнительное введение ПГF2α c
28
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
таким же интервалом (рисунок 15).Эту схему так же применяют при лечении послеродовых эндометритов, ускорении инволюции матки, пролонгации сроков от отела до первого
осеменения у высокопродуктивных коров.
Рисунок 15
Модифицированная схема «Pre-Synch», так называемый «двойной Pre-Synch»
Зачастую, при синхронизации охоты отмечают низкую результативность осеменения. Ниже представлены основные причины:
1. Несоблюдение схемы синхронизации:
• Пропуски инъекций;
• Несвоевременное введение препаратов;
• Несвоевременное искуственное осеменение;
• Неправильно выбрано место инъекции (например, поврежденные или загноившиеся ткани);
2. Неправильное ведение учета:
• Коровы не значатся в списке инъекций;
• Инъекции не вносятся в учетные записи;
• Осеменение не вносится в учетные записи;
• Коровы не найдены;
3. Неправильная техника искуственного осеменения:
• Неточное расположение введенного семени;
• Неоптимальное время осеменения;
• Низкая квалификация осеменаторов;
5. Неудовлетворительное физическое состояние коровы:
• Отрицательный баланс энергии коров;
• Коровы страдают избыточной массой;
• Заболевания органов репродуктивной системы.
3. ОСНОВНЫЕ ПРИНЦИПЫ ИСКУСТВЕННОГО ОСЕМЕНЕНИЯ.
УЛУЧШЕНИЕ ПОКАЗАТЕЛЕЙ ОПЛОДОТВОРЯЕМОСТИ ВО ВРЕМЯ И ПОСЛЕ ИСКУСТВЕННОГО ОСЕМЕНЕНИЯ.
Как говорилось выше, существует две стратегии осеменения животных – осеменение
в спонтанную охоту и осеменение в индуцированную охоту. Следует помнить, что спермии сохраняют жизнеспособность в половых путях 24-36 часов и проходят капацитацию
(приобретение сперматозоидами оплодотворяющей способности в половых путях самки) в течение 6-8 часов. Яйцеклетка жизнеспособна 2-8 часов. Поэтому, в обоих случаях
необходимо придерживаться правила – осеменять как можно ближе к концу охоты, что
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
29
обеспечивает максимальную вероятность положительного результата. Признаки ранней,
средней и поздней стадии половой охоты представлены в таблице 6.
Следует иметь ввиду, что представленный материал объединяет характерные признаки половой охоты, в то же время существуют атипичные охоты, например, когда отсутствуют такие признаки как течка (анэстральная) или стадия возбуждения. Поэтому
при определении сроков осеменения следует учитывать не только совокупность внешних
признаков, но в случае необходимости контролировать состояние матки и фолликулов
пальпацией или УЗИ.
Успех искусственного осеменения (ИО) зависит от нескольких факторов:
• Времени осеменения;
• Правильной техники ИО;
• Качества семени;
• Здоровья коровы;
• Условий окружающей среды.
Рассмотрим факторы, связанные с технологией подготовки спермы и самой техникой
осеменения, способных отрицательно влиять на результативность.
В настоящее время наиболее прогрессивным и результативным можно считать ректоцервикальный метод осеменения. Поэтому в данной главе остановимся на нем. Хотя, ряд
элементов универсален для всех методов искусственного осеменения.
Подготовка к работе.
Работать с семенем можно только в чистом помещении, максимально соблюдая условия стерильности окружающей среды! Перед началом рабочего дня всегда надо производить влажную уборку полов и рабочих поверхностей. Также важна и температура в
помещении, где размораживают семя – она должна быть не менее +20…+22°С. Непосредственно перед началом работы следует протереть все инструменты чистой отглаженной
салфеткой, удобно разложить на столе и подготовить их к работе. Выполнение других действий после извлечения соломинки из азота (например, ведение записей, разговор и т.п.)
категорически не допустимо!
Основные принципы работы со спермой.
Для того, чтобы разморозить семя, соломинку необходимо достать длинным пинцетом из сосуда, 2-3 раза бережно встряхнуть или вытереть сухим тампоном, чтобы удалить
остатки азота с поверхности, но не допуская вспенивания и расслоения семени в канале
соломинки. После этого перенести ее в термостат с водой +35…+37°С, опустив запаянным
концом вниз, а ватной пробочкой вверх. Эту процедуру необходимо сделать в течение НЕ
БОЛЕЕ 5 СЕКУНД ВРЕМЕНИ, иначе активность семени снижается! Размораживать семя в
соломинке 0,25 мл следует в течение 20 секунд, в соломинке 0,50 мл – в течение 40 секунд.
В это время следует энергично натереть шприц чистой салфеткой до температуры тела,
чтобы не вызвать у семени температурный шок. Никогда не размораживайте более 1 соломинки одновременно.
30
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
Слегка, иногда очень заметно
Отчетливо наблюдается
ПОЗДНЯЯ СТАДИЯ
Нет, но может быть у
коров, на которых делает
садку корова, приходящая в охоту
СРЕДНЯЯ СТАДИЯ
Нет
Очень немного и очень
водянистая, появляется при садке на других
животных
Слизь
Редко, алого цвета (из лопнувших сосудов слизистой оболочки)
Обильная и чистая, тяж тонкий,
15-20 см
Губы вульвы краснеют и
слегка набухают
Наружные половые органы
Через 1-3 дня после исчезновения всех признаков половой
охоты (темно-вишневого
цвета)
Слизь более густая, тянется
длинным толстым тяжом до
30-50 см, может быть мутной и
включать пузырьки воздуха
Губы вульвы красные и набухшие, стенки влагалища влажные
и блестящие
Мычит, ходит вдоль ограды, следует за другими
коровами, беспокоится
Делает садку на других
коров
Поведение
Припухлость губ вульвы
спадает
Благодушна, дружелюбна, по
прежнему следует за другими
коровами, облизывает их, не ест,
все еще испытывает беспокойство
Стоит в ожидании садки, но по
прежнему продолжает делать
садки на других коров
Вспрыгивание, ожидание
садки от других животных
Все признаки нервозности,
преследование других и стремление бодаться пропадает
Не стоит в ожидании садки, но
делает садки на других коров
Таблица 6.
Признаки ранней, средней и поздней стадий половой охоты
Кровяные
выделения
Шерсть на
корне хвоста
взъерошена
или стерта
РАННЯЯ СТАДИЯ
31
Выше приведен регламент оттаивания спермы, подходящий для большинства поставщиков. В настоящее время в Россию поставляется сперма разных производителей.
При этом, в случае рекомендации других параметров, важно соблюдать температурный
режим и временной регламент, рекомендованные поставщиком, т.к. возможно использование различных криопротекторов.
По истечении времени разморозки (20-40 секунд) соломинку следует достать из воды
пинцетом, находящимся в правой руке, твердо удерживая как можно ближе к запаянному
концу. После извлечения соломинку встряхивают, чтобы пузырьки воздуха поднялись к
запаянному концу и протирают теплой стерильной салфеткой одним движением левой
руки, чтобы удалить остатки воды.
Если этого не сделать, то при срезании кончика соломинки вода может попасть в
семя и вызвать гибель сперматозоидов. При этом нельзя касаться голыми пальцами (т.е.
без свернутой салфетки) той части соломинки, где находится семя, чтобы не вызвать температурный шок и гибель спермиев. Также нельзя допускать вспенивания и расслоения
семени, поэтому соломинки следует держать только вертикально.
Вставлять соломинку в шприц надо ватной пробочкой вниз до упора. При этом левой
рукой берут подготовленный чистый шприц с выдвинутым заранее поршнем, а правой
рукой пинцетом заправляют соломинку. Важно помнить, что, достав соломинку из воды,
заново ее пинцетом не перехватывают, а держат в одном положении. У правильно заправленной соломинки запаянный конец оказывается вверху и выступает из шприца примерно
на 1 см. Далее шприц с соломинкой держат в левой руке, не касаясь выдвинутого поршня,
а в правую руку берут ножницы для обрезания соломинок, и под прямым углом отрезают
запаянный конец в 3-5 мм от края шприца. Категорически запрещено обрезать соломинку
вровень со шприцом – тогда при осеменении часть семени останется в полости пипетки.
Во время этого этапа и одевания пипетки необходимо соблюдать осторожность, чтобы не
коснуться выдвинутого поршня.
Сразу после обрезки соломинки, в правую руку берут подготовленную заранее пипетку (немного выдвинутую из надрезанного упаковочного чехла голубым поршнем наружу) и надевают на шприц, держа только за часть с голубым поршнем, чтобы соблюсти
стерильность инструмента. При этом упаковочный чехол с пипетки не снимают – он остается на ней до самого осеменения! После хорошей фиксации пипетки на шприце, кончик
обрезанной соломинки должен почти касаться внутренней стороны верхушки пипетки.
Важно помнить, что количество пипеток равно количеству поставленных доз семени, а пипетки других производителей могут не подойти к используемым шприцам и соломинкам.
Если готовится несколько доз семени для осеменения, то заправленный шприц с пипеткой в чехле (инструмент) кладется на теплую +35…+37°С стерильную салфетку и заворачивается, чтобы избежать переохлаждения. Помните, что от извлечения семени из азота
до осеменения должно пройти не более 15 минут. Поэтому не рекомендуется готовить за
один раз больше 2-3 доз семени или надо привлекать для помощи второго специалиста.
Чтобы избежать переохлаждения семени, перед тем, как идти осеменять корову, инструмент помещают в термочехол. В случае его отсутствия надо спрятать инструмент в санитарном чехле запазуху или подмышку так, чтобы выдвинутый поршень торчал наружу.
Техника осеменения.
Осеменение производится ректоцервикальным способом в тело матки, отступая примерно на 0,3-0,5 см от шейки матки под контролем руки через прямую кишку (рисунок 16).
32
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
Рисунок 16
Правильное расположение инструмента в матке
Непосредственно перед осеменением аккуратно извлекают из термочехла (или из запазухи) инструмент правой рукой и вставляют прямо в чехле в половые пути коровы до
упора в заднюю стенку влагалища. Затем левую руку в перчатке вводят в прямую кишку, после чего находят и захватывают шейку матки, а правой рукой немного вводят в нее
инструмент в чехле, не касаясь поршня. После этого левой рукой аккуратно фиксируют
шейку матки с инструментом в ней, правой дергают за чехол назад, чтобы он прорвался,
и его можно было оттянуть назад, а в шейку матки вошла только стерильная пипетка. Это
действие требует некоторой ловкости или посторонней помощи! Давление на поршень
осуществляют только после введения инструмента в тело матки, медленно считая до пяти
или семи, на поршень нажимают до упора, иначе в инструменте останется не использованное семя. После осеменения шприц с пипеткой и прорванным чехлом правой рукой
извлекается наружу, а левой рукой в течение 10-15 секунд делается легкий массаж матки.
Использованный чехол с пипеткой выбрасывается, шприц дезинфицируется к следующему осеменению. Если предписано ветврачом, то осеменатор проводит дополнительные
процедуры или инъекции осемененной корове.
При беспривязном содержании осеменение, как правило, производится в зоне ветеринарно-санитарной обработки в доильном зале, после доения. При этом важно записывать номер группы, из которой отделена для осеменения корова, и возвращать ее обратно.
Учитывая, что сразу после доения активность матки минимальная, желательно осеменять коров до или через 1-2 часа после доения. Во время выдержки до и после осеменения у коров обязательно должен быть доступ к воде и минимум корма (например, сено),
что устраняет излишнее беспокойство и стресс у коровы, негативно отражающиеся на ее
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
33
оплодотворении. Осемененной корове для предупреждения выбрасывания семени назад
при движении животного, важно обеспечить неподвижность в течение 6-12 часов или
инъекционно повысить сократительную активность матки.
Подготовка коров к осеменению производится заранее осеменатором или его помощником, ДО РАЗМОРОЗКИ СЕМЕНИ И ЗАПРАВКИ ИНСТРУМЕНТОВ! Во время
подготовки корову надежно фиксируют в станке, затем зачищают щеткой заднюю часть
бедер, обмывают наружние половые органы и вход во влагалище дезинфектантом (слабый
раствор марганцевокислого калия, фурациллина). После этого наружние половые органы коровы вытирают насухо одноразовой салфеткой и фиксируют у животного хвост на
сторону или вверх. Такая корова считается подготовленной к осеменению и можно идти
размораживать семя. Перед разморозкой необходимо вымыть с мылом руки, сменить рабочую обувь и надеть чистый белый халат. Для осеменения необходимо выделить рабочую
одежду (удобно комбинезон), длинный фартук и нарукавники. При осеменении обязательно использовать одноразовые перчатки.
Улучшение показателей оплодотворяемости во время и после искусственного осеменения.
Низкая оплодотворяемость яйцеклеток у клинически здоровых животных может
быть обусловлена следующими причинами:
1. Снижение транспортной функции матки;
2. Задержка овуляции;
3. Низкое качество яйцеклетки;
4. Воздействие вирусных и бактериальных инфекций;
5. Низкое качество сперматозоидов;
6. Неадекватная среда в половых путях;
7. Иммунное бесплодие.
Из выше перечисленных причин последние три требуют комплексного подхода, т.к.
обусловлены в первую очередь неадекватным кормлением и неудовлетворительной стратегией подготовки животных к осеменению.
Снижение транспортной функции матки. Транспортная функция матки обеспечивает своевременно и в достаточном количестве поступление спермы в верхнюю треть яйцевода, где и происходит оплодотворение яйцеклетки. Снижение транспортной функции
может произойти по ряду причин. Одной из основных, но мало освещенных в литературе,
является блокирующее действие прогестерона выделяемого так называемыми «остаточными» желтыми телами. Это не полностью лизировавшие желтые тела предыдущих половых циклов, сохранившие секреторную функцию (рисунок 17).
Непосредственной причиной их сохранения является недостаточный синтез ПГF2α
эндометрием. Часто наблюдаются при хронических эндометритах и поражении слизистой
химическими веществами в результате неправильного лечения эндметритов. Они не мешают функции основного желтого тела и половой цикличности, но секретируют прогестерон в достаточном для снижения маточного тонуса количестве. По данным, полученным в
наших исследованиях, его уровень в период охоты достигает 1-1,5 нг/мл в сыворотке крови
таких коров.
Для профилактики данной патологии в первую очередь нужно определить причины,
приводящие к снижению секреции ПГF2α, повысить контроль за уровнем хронических
эндометритов у новотельных животных.
С целью повышения транспортной функции матки и снижения уровня прогестерона,
непосредственно после осеменения или в течение 30 минут до или после него внутримышечно вводится 2-3 мл Магэстрофана®.
34
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
Рисунок 17
«Остаточные» желтые тела на яичнике
Задержка овуляции. В норме у крупного рогатого скота овуляция наступает через
10-15 часов после окончания охоты. При этом отмечается увеличение пика ЛГ в 20-30 раз
по сравнению с базальным уровнем. По ряду причин (белковый перекорм, ацидоз, тепловой стресс, недостаток йода, меди и др.) отмечается снижение овуляторного пика ЛГ, что
приводит к задержке овуляции. Ее опасность в том, что при позднем выходе яйцеклетки спермии не доживают до контакта или количество живых незначительно. В результате оплодотворения не происходит. Ежегодно в летний период происходит снижение результативности осеменения (см. рисунок 4) в результате воздействия теплового стресса. В
высокопродуктивных хозяйствах при концентратном типе кормления задержка овуляции
является круглогодичной проблемой.
Диагностировать ее можно либо по времени появления овуляционной крови (рисунок 18) после осеменения (в норме это 1-2 суток) или путем обследования яичников на
наличие овуляционной ямки (пальпация или УЗИ).
Рисунок 18
Овуляционная кровь. Темно-вишневого цвета смешана со слизью.
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
35
Медикаментозное устранение этой проблемы – лишь устранение следствия. Естественно, что без выяснения и устранения причины присутствия в стаде данной проблемы,
будет существовать постоянная потребность применения гормональных препаратов для
повышения уровня ЛГ, что не только требует дополнительного приобретения препаратов,
но и трудоемко.
Если все же устранить причины не представляется возможным, во время осеменения
или в течение 1 часа до и после него внутримышечно вводится 5 мл Сурфагона или 10001500 МЕ препарата ХГЧ (Хорулон, Овулин).
Воздействие вирусных и бактериальных инфекций. С ростом продуктивности отмечается снижение резистентности организма. В результате, даже при наличии адекватной
системы вакцинаций, могут создаваться условия для латентного течения таких заболеваний как инфекционный ринотрахеит (ИРТ), вирусная диарея (ВД), лептоспироз, микплазмоз и другие, включая условнопатогенную и убиквитарную микрофлору. Общей чертой
для них является отрицательное воздействие на качество яйцеклетки и эмбрион, что приводит к снижению оплодотворяемости или гибели эмбриона на ранних стадиях развития.
В ряде случаев течение указанных заболеваний может протекать бессимптомно, возможно проявление в виде хронических эндометритов, эрозий и пустул на слизистой оболочке влагалища.
Для эффективной борьбы необходимо установить возбудителя и принимать меры с
учетом его специфики. Но данная стратегия может занять несколько месяцев, а в случае
широкого распространения данных патологий это приведет к большим экономическим
потерям из-за низкой результативности осеменения.
Поэтому сейчас мы поговорим о краткосрочных мерах, способных снизить отрицательный эффект инфекционных агентов до внедрения основной стратегии.
В случае присутствия признаков хронического эндометрита (как правило выявляется
во время охоты по наличию включений гноя в слизи) если охота не пропускается, через
3-5 часов после осеменения внутриматочно вводятся антибактериальные препараты (Полимиксин) или специальные внутриматочные средства (Эндометромаг-Т, -К, -БИО) в дозе
5-10 мл.
Непосредственно после осеменения используются иммуномодуляторы. Опыты, проведенные в ГНУ ВИЖ Россельхозакадемии показали высокую эффективность применения
Миксоферона® для повышения результативности осеменения в стадах Краснодарского
края, Московской и Нижегородской областей с хроническим течением вирусных заболеваний (таблица 7).
Препарат вводился непосредственно после осеменения по 10 и 20 доз, контролем служили коровы-аналоги, осемененные без применения Миксоферона®.
Как видно из представленных данных, применение препарата Миксоферон® непосредственно после осеменения оказывает явный позитивный эффект на результативность
осеменения. Стельных, по результатам УЗИ проведенного после осеменения, в опытных
группах выявлено в среднем на 5,25% больше, чем в контрольной группе. При этом результативность осеменения в опытной группе №2 на 7,3% выше аналогичного показателя
в опытной группе №1.
Полученные результаты, по нашему мнению, объясняются следующим. В первые 8-12
часов после введения Миксоферон® действует непосредственно сам препарат. Параллельно с действием экзогенного интерферона, примерно через 4-6 часов от введения препарата, следует второй подъем концентрации сывороточного интерферона, обусловленный
активацией эндогенной системы интерферона. Причем прослеживается явный дозозависимый эффект, когда концентрация вырабатываемого организмом эндогенного интер-
36
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
ферона напрямую зависит от вводимой концентрации экзогенного интерферона. Иными
словами, продукты метаболизма препарата, вероятно, играют роль индукторов выработки экзогенных интерферонов и обусловливают вторую, более выраженную и длительную
фазу действия препарата.
Таблица 7
Применение Миксоферона® для повышения результативности осеменения в стадах с
хроническим течением вирусных заболеваний
Показатели
Количество голов в группе
Стельных после первого
осеменения (30-35 дней после
осеменения)
Стельных после первого
осеменения (60-70 дней после
осеменения)
Стельных после повторного
осеменения
10 доз (1 млн.
МЕ суммарной
противовирусной активности
интерферона)
гуппа 1
голов
%
46
100
20 доз (2 млн.
МЕ суммарной
противовирусной активности
интерферона)
группа 2
голов
%
53
100
Контрольная
группа
голов
49
%
100
27
58,7
35
66,0
28
57,1
22
47,8
30
56,6
21
42,8
12
26,1
15
28,3
14
28,6
В результате этого действия происходит повышение противовирусной активности и
замедление локальных иммунных реакций, что в свою очередь приводит к повышению
результативности осеменения.
Положительное влияние препарата прослеживалось и в период проведенных нами
ректальных исследований на стельность. Так процент стельности в контрольной, а также 1-й и 2-й опытных группах составил 42,8%, 47,8% и 56,6% соответственно. При этом
наиболее сильное падение показателя стельности отмечено в группе контроля. Стельными после первого осеменения в ней признано на 14,3% коров меньше, нежели во время
первого исследования животных этой группы, что говорит о вероятном влиянии ранней
эмбриональной смертности. В это же время, в опытных группах показатели стельности сократились лишь на 10,9% и 9,4% соответственно, что можно отнести к непосредственному
действию интерферона. Известно, что интерферон способен имитировать эндокринные
эффекты многих гормонов, в том числе, он может индуцировать синтез стероидных гормонов в культуре клеток, осуществляя эту функцию через свои собственные рецепторы.
Действие Миксоферона®, в данном случае, как нам кажется, реализуется посредством
общего эффекта. Общий эффект препарата ассоциируется с повышением фагоцитарной
активности лейкоцитов, коррекцией основных классов иммуноглобулинов, влиянием на
интерфероновый статус выраженный в нормализации и увеличении выработки интерферонов.
Все это приводит к тому, что происходит мягкое воздействие на нарушенный иммунитет через регуляторные механизмы, в результате чего наблюдается гипосенсибилизация.
В следствии запуска, посредством применения Миксоферона®, неспецифических клеточных и гуморальных механизмов иммунного ответа, процент стельных коров по итогам
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
37
двух осеменений, в опытной группе №1 составил 73,91%, в группе №2 – 84,91%, в контроле
– всего 71,42%. При этом на лицо явное снижение эмбриональной смертности в опытных
группах. Разница в этом показателе между опытной группой №2 и контрольной группой
в проведенном эксперименте наиболее заметна, т.к. составила 10,71%. Хотя полученное
снижение эмбриональной смертности в опытной группе №1 на 6,48% тоже можно считать
весомым.
Иммунная перестройка организма коров произошедшая под влиянием экзогенных
интерферонов, входящих в состав препарата Миксоферон®, и вырабатываемого в ответ на
это воздействие эндогенного (собственного) интерферона проявилась возросшей устойчивостью организма по отношению к инфекции, формированием повышенной чувствительности замедленного типа и других, так называемых, клеточных реакций.
Схематически действие Миксоферона® можно представить следующим образом:
α-интерфероны, входящие в состав препарата, индуцируют синтез протеинкиназы, которая фосфорилирует один из инициирующих факторов трансляции. В результате не
образуется инициирующий комплекс для начала процесса трансляции. Избирательное подавление трансляции вирусных матриц обусловлено либо большей чувствительностью вирусной системы трансляции к фосфорилированию инициирующего фактора, либо специфическим выключением трансляции зараженной клетки. Кроме того, происходит процесс
активации специфической внутриклеточной рибонуклеазы, которая приводит к быстрой
деградации матричных РНК вируса.
С этих позиций легко объяснить антивирусный и антипролиферативный эффекты
интерферонов, входящих в состав препарата: ингибирование процессов транскрипции
и трансляции обусловливает прекращение репликации вирусов (антивирусный эффект)
или торможение размножения клеток (антипролиферативный эффект).
Кроме того, установлено, что рекомбинантные интерфероны активируют лизис и
переваривание золотистого стафилококка, хламидий, легионелл, токсоплазм, листерий и
кандид. Механизм бактерицидной и фунгицидной активности аналогов природного интерферона состоит в активации трансмембранного и цитозольного потока ионов Са, в дозозависимом усилении фагосомальной активности и фагоцитоза.
Таким образом, перечисленные эффекты, присущие интерферонам, делают их универсальным фактором неспецифической резистентности, обеспечивающим защиту организма от чужеродной информации (вирусы, бактерии, хламидии, микоплазмы, патогенные грибы), что позволяет использовать Миксоферон®, для повышения результативности
осеменения в стадах, причиной неудовлетворительного воспроизводства в которых являются инфекционные агенты.
Иммунное бесплодие коровы или телки на введение спермы может, в определенных
условиях, привести к снижению оплодотворяемости или эмбриональной гибели. Белок
спермы для организма самок является чужеродным, и на его введение организм вырабатывает антитела, которые накапливаются в слизистой оболочке половых путей самки. Антитела проявляют свое действие как агглютинины и лизины, повреждая сперматозоиды.
Иммунное бесплодие может достигать 20-25%. Интенсивность накопления антител к
сперме зависит от состояния половых путей самки при осеменении. Многократные осеменения приводят к сенсибилизации организма продуктами оплодотворения.
Для диагностики наличия иммунных причин нарушения функции воспроизведения
в условиях производства используется реакция агглютинации при использовании сыворотки крови исследуемого животного или течковой слизи. Методы определения иммунного состояния животного (РСК, реакция гемаглютинации) выполнимы только в условиях
специальных лабораторий. К факторам, способствующим формированию иммунного бес-
38
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
плодия, можно отнести нарушение инструкции по применению антибиотиков и вакцин,
что приводит к подавлению иммунной системы.
Профилактика иммунного бесплодия:
а) повышение иммунитета (специфического, неспецифического);
б) профилактика и своевременное лечение коров с эндометритами;
в) правильное использование антибиотиков и др. препаратов;
г) при многократных безрезультатных осеменениях следует применить пропуск очередной охоты, смена производителя.
4. НАРУШЕНИЯ ОВУЛЯЦИИ. АНОВУЛЯТОРНЫЕ ПОЛОВЫЕ ЦИКЛЫ И КИСТЫ ЯИЧНИКОВ
В первые 2 месяца после отёла почти у 50% высокопродуктивных молочных коров
бывают ановуляторные циклы, то есть состояния, когда доминантные фолликулы второй
или третьей волны роста не овулируют, а подвергаются деградации, атрезии или лютеинизации (Johnson W.A., 2008).
В зоотехнической литературе понятия «ановуляторный цикл» и «анэструс» употребляют часто как слова-синонимы. Но это – совсем разные физиологические состояния.
Анэструс – это неспособность животного проявить чёткие признаки охоты, но чаще всего
– это результат слабо организованной работы по выявлению охоты. На многих фермах
охота остаётся незамеченной, не выявленной почти у 50% коров и тёлок ( Полянцев Н.И.,
1991, Wiltbank M.C. et al., 2002, Субботин А.Д., 2011).
Основным фактором, обусловливающим развитие ановуляторных циклов, является
нарушение обмена веществ и несбалансированность рационов, чаще всего выражающаяся
в отрицательном энергетическом балансе. При высокой степени отрицательного энергетического баланса отмечается низкий уровень в крови инсулиноподобного фактора роста-1
(IGF-1), регулирующего процесс созревания доминантного фолликула в продолжение
первой послеотёльной волны роста фолликулов. Кроме того, состояние отрицательного
энергетического баланса сопровождается также повышенной секрецией гормона роста и
уменьшенной секрецией инсулина (Johnson W.H, 2008).
Признаками развития ановуляторных процессов, помимо проявлений отрицательного энергетического баланса и низкого уровня инсулино-подобного фактора роста, могут
служить уменьшение концентрации глюкозы в крови и, напротив, увеличение концентрации неэстерифицированных жирных кислот, кетоновых тел и жира в молоке (Kawashima
et al., 2007, Нежданов А.Г. и др., 2011).
Неовулировавшие фолликулы либо подвергаются лютеинизации и атрезии, либо
превращаются в кисты – фолликулярные или лютеальные. При характеристике кист яичников Peter A.T.,(2004) к числу фолликулярных относит неовулировавшие фолликулы диаметром более 2-х см, с тонкой стенкой, которые сохраняются в течение 10 дней и более.
О наличии фолликулярной кисты в яичнике свидетельствует характерное поведение: либо
животные часто проявляет признаки половой охоты, течки, либо полный анэструс. Кисты
могут формироваться как на одном из яичников, так и одновременно на обоих яичниках
(рисунок 19).
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
39
Рисунок 19
Двусторонняя фолликулярная киста. Хорошо просматриваются перегородки между
кистозными фолликулами
Рисунок 20
Вид фолликулярной кисты при УЗИ. Отчетливо видна однородная полость с жидкостью, с четкими ровными контурами, кверху и сбоку от кисты определяется ткань неизмененного яичника
Лютеальная киста – это также неовулировавший фолликул диаметром свыше 2-2,5 см
с частично лютеинизированными стенками и продолжительным присутствием в яичнике.
При наличии такой кисты у животного отмечают полное подавление течки и охоты.
40
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
Рисунок 21
Лютеальная киста
a – характерное утолщение стенки кисты за счет лютеинизации клеток теки интерна
фолликула;
b – полость лютеальной кисты
Одной из причин формирования кист могут быть стресс-факторы. Повышенная выработка кортизола в этих случаях тормозит секрецию эстрогенов, вследствие чего уменьшается секреция ЛГ и задерживается овуляция. Воздействие стресс-факторов может реализоваться через посредство опиоидных пептидов, которые также могут блокировать
секрецию эстрогенов и тормозить выброс ЛГ. Главная же причина нарушений овуляции
и формирования кист – это нарушения функции гипоталамо-гипофизарно-гонадальной
системы и недостаток рецепторов к ЛГ в клетках гранулёзы и теки фолликулов (Peter A.T.,
2004). В практическом животноводстве основные причины формирования фолликулярных кист – белковый перекорм, низкое качество основных кормов и микроэлементозы.
Устранить отрицательное влияние кист на результативность осеменения пытались
путём обработок животных прогестагенами. Их вводили либо в виде многократных внутримышечных инъекций, либо в виде влагалищных SIDR-устройств или ушных имплантов. Однако положительных результатов такие методы не давали (Calder et al., 1999). Не
даёт положительных результатов и обработка кистозных коров гонадолиберином (Jou P
et al., 1999).
Раздавливание либо дренаж кист через прокол стенки влагалища применять не рекомендуется из-за риска кровопотерь и образования спаек. Лучшим способом лечения кист
оказалось комбинированное применение Гн-РГ с последующей обработкой (с 7-го по 14-й
день) простагландином F2α. Способ оказался эффективным для лечения и фолликулярных и лютеальных кист (Вареников М.В. и др., 2008; Johnson W.A., 2008).
В яичниках с фолликулярными либо лютеальными кистами, как правило, отсутствуют жёлтые тела. Однако в 40% случаев жёлтые тела в «кистозных» яичниках присутствуют.
Ниже представлены схемы лечения фолликулярных и лютеальных кист:
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
41
Рисунок 22
Схема лечения фолликулярных кист яичников
Данная схема доказала свою эффективность. Ее результативность после первого
применения составляет около 80%. Трехкратное внутримышечное введение Сурфагона
способствует стойкому повышению уровня ЛГ и лютеинизации фолликулярной кисты.
Спустя 10-11 дней после последнего введения Сурфагона вводится 4-5 мл Магэстрофана®
для лизиса сформировавшейся лютеальной ткани, после чего животных выявляют в охоте
и осеменяют. Пик прихода в охоту приходится на 3-5 дни после введения Магэстрофана®.
Коров, не пришедших в охоту, осматривают через 7 дней после окончания схемы. В случае,
если полного лизиса фолликулярной кисты не произошло - схему повторяют. С животными, у которых функция яичников восстановилась, но охота была пропущена, можно
поступить двумя путями: 1. контролировать наступление спонтанной охоты; 2. применить
схему «Ovsynch» или аналоги для контролируемого осеменения.
К недостаткам выше указанной схемы можно отнести большое количество «подходов» к животному, что затрудняет ее использование на крупных комплексах беспривязного содержания. Для использования в хозяйствах с беспривязной технологией содержания
или в случаях отсутствия возможности использования выше приведенной схемы, была
предложена ее модификация. Вместо трехкратного внутримышечного применения Сурфагона в дозе 4-5 мл, было применено однокраное введение, внутривенно, в дозе 10 мл.
Через 10 дней после его введения, как и в предыдущей схеме, вводится Магэстрофан®, в
дозе 4-5 мл внутримышечно однократно (рисунок 23). Осеменение животных проводится,
как и в предыдущей схеме, по факту выявления охоты.
42
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
Рисунок 23
Схема лечения фолликулярных кист, подразумевающая внутривенное введение
Сурфагона (короткая)
В случае, если после применения указанных схем, киста не исчезла, рекомендуется
применение так называемого «прогестеронового» блока (рисунок 24). С этой целью однократно внутримышечно вводится 10 мл Прогестамага® (пролонгированная суспензия прогестерона). Через 6-7 дней (144-168 часов) после введения Прогестамага® – 10 мл сурфагона
внутривенно, а через 10 дней (240 часов) после этого вводится Магэстрофан® в дозе 4-5 мл.
Рисунок 24
Схема лечения фолликулярных кист яичников с применением «прогестеронового» блока
При лютеальных кистах яичников индукции ЛГ не требуется. По своей сути это большое скопление лютеальной ткани. Поэтому лечение заключается в применении повышенных доз простагландина F2α – вводится Магэстрофан® в дозе 4-5 мл однократно. Допускается дробное введение в стандартной дозе: по 2-3 мл с интервалом 48-72 часа (рисунок
25). Осеменение, как и после лечения фолликулярных кист, проводят по факту выявления
охоты.
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
43
Рисунок 25
Схема лечения лютеальной кисты
5. ДИАГНОСТИКА СТЕЛЬНОСТИ. СОВРЕМЕННЫЕ СПОСОБЫ РАННЕЙ ДИАГНОСТИКИ
Существующие методы диагностики стельности можно подразделить на 2 группы –
клинические методы и лабораторные методы. Самый простой и наиболее затратный метод
– это тщательное наблюдение за коровой в сроки с15 по 24 день после осеменения. В этот
период при нормальных условиях содержания животные, которые не оплодотворились в
предыдущую охоту, должны проявить ее в указанные выше сроки. Однако в настоящее
время при промышленной технологии, особенно при безвыгульном содержании животных в больших группах, установить течку бывает трудно. Кроме того, примерно 7% животных, проявляющих признаки охоты, могут быть стельными и их осеменение может
привести к гибели эмбриона.
Такие клинические признаки стельности как улучшение аппетита, спокойное поведение, учащенное мочеиспускание, наружный осмотр, изучение контуров живота, увеличение молочной железы – могут быть применимы лишь при индивидуальном содержании
животных в условиях крестьянских и мелких фермерских хозяйств.
Ректальный метод определения стельности. Является старейшим и наиболее широко используемым методом диагностики стельности у крупного рогатого скота. Его преимущество – оперативное получение информации о статусе животного непосредственно
во время исследования. Впервые данный метод был описан в 1948 году (Corvie T.A., 1948,
Comm. Agrycultural Joint. Publication, N13 Creat Britain, pp. 11-17). Этот метод является старейшим, которым пользуются и по настоящее время как окончательным для диагностики
беременности у крупного рогатого скота. Техника его описана в многочисленных учебных
изданиях и статьях по акушерству и гинекологии с/х животных. В практике большинство
специалистов пользуются данным методом для диагностики стельности спустя 60-70 дней
после осеменения, но опытный специалист может определить стельность через 35-40 дней
после осеменения.
Характерные признаки стельности, определяемые ректальной пальпацией на разных
сроках после осеменения, представлены в таблице 8.
44
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
Таблица 8
Характерные признаки стельности, определяемые ректальной пальпацией на разных
сроках после осеменения
Дней после
осеменения
Смещение
оболочки
Флюктуация
амниотической
полости
30
+
+
45
+
+
60
+
+
75
+
+
90
+
Плод
Карункулы
Вибрация
среднематочной артерии
+
+
+
105
+
+
+
120
+
+
+
150
+
+
+
+
+
+
+
180
210
+
Данный метод не лишен ряда отрицательных моментов. При грубом проведении
пальпации может быть разрыв амниотической оболочки, что вызовет гибель плода. Его
сложно применять на ранних сроках стельности, т.к. велика вероятность ошибки и повреждения эмбриона или его оболочек.
Ультразвуковое исследование на стельность. Режим трансректального УЗИ для исследования половой системы крупного рогатого в настоящее время приобретает широкое
распространение. Впервые об использовании ультразвукового исследования для диагностики беременности было сообщено Currans et al., 1986.
Ультразвуковая диагностика стельности намного расширяет возможность диагностики не только беременности крупного рогатого скота, но и позволяет получать дополнительную информацию о состоянии плода, в частности, выявление многоплодия, определение пола плода и изменении в развитии плода (таблица 9).
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
45
Таблица 9
Сроки определения параметров развития плода с помощью ультразвуковой диагностики (Adapted from Currant et al., 1986)
Отдельные характеристики
плода
Средняя дата обнаружения,
дни
Отклонения,
дни
Наличие эмбриона
20,3
от 19 до 24
Биение сердца
20,9
от 19 до 24
Алантоис
23,2
от 22 до 25
Спинная хорда
29,1
от 26 до 33
Закладка передних конечностей
29,1
от 28 до 31
Амнион
29,5
от 28 до 33
Глазные орбиты
30,2
от 29 до 33
Закладка задних конечностей
31,2
от 30 до 33
Плацента
35,2
от 33 до 38
Наполнение живота
44,6
от 42 до 49
Движение плода
44,8
от 42 до 50
Ребра
52,8
от 51 до 53
Ультразвуковой метод диагностики стельности уменьшает интервал от осеменения
до постановки точного диагноза на 25 и более дней, что позволяет сократить сервис-период по стаду за счет повторного осеменения выявленных бесплодных животных в более
ранние сроки.
К числу отрицательных моментов применения УЗИ в широкой практике следует отнести довольно дорогостоящее оборудование. Работа с ультразвуковыми сканерами требует высокой квалификации.
Необходимы дальнейшие исследования для выяснения вопросов, которые возникают
при использовании метода УЗИ.
Данный метод может быть использован в комплексе с другими методами, в частности, с ИФА содержания прогестерона в молоке или сыворотке крови.
ИФА уровня прогестерона в молоке и сыворотке крови
Уровень прогестерона в течение полового цикла изменяется в зависимости от стадии
развития желтого тела. Максимальная концентрация наблюдается в середине полового
цикла, когда желтое тело находится на максимуме развития. На рисунке 26 представлены
усредненные данные уровня прогестерона в течение полового цикла (ГНУ ВИЖ, 2011 г.).
46
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
Рисунок 26
Уровень прогестерона в сыворотке крови коров в течении полового цикла (пмоль/л)
После наступления стельности желтое тело сохраняется, т.к. химические сигналы эмбриона блокируют выброс ПГF2α эндометрием. Этим обусловлено сохранение и увеличение уровня прогестерона у стельных коров в первые месяцы стельности.
Принцип диагностики стельности на ранних сроках после осеменения, основанный
на определении уровня прогестерона в сыворотке крови или молоке, может применяться
через 20-24 дня после осеменения. При этом используется метод ИФА. Достоверность метода составляет 95-100% (Shearer J.K., 1992). Данный метод позволяет выявлять бесплодных животных на 7-15 дней раньше, чем метод УЗИ.
Практика показывает, что наиболее часто ошибка в постановке диагноза наблюдается
у высокопродуктивных коров (низкий уровень прогестерона при наличии стельности) и
при лютеальных кистах или персистенции желтого тела (высокий уровень прогестерона
из-за секреторной активности лютеальной ткани). Кроме того, на более поздних стадиях
развития стельности возможна гибель эмбриона. В связи с этим, нельзя полностью полагаться на результат данного метода. Разработана система применения данного способа диагностики стельности, когда уровень прогестерона определяется несколько раз (например,
20-й, 28-й, 42-й дни после осеменения), что позволяет выявлять коров, потерявших стельность после 20-го дня. В любом случае, коров, признанных бесплодными по результатам
ИФА, следует обследовать ректально или с помощью УЗИ для подтверждения отсутствия
в яичниках желтых тел. Если желтое тело присутствует, это может являться косвенным
доказательством стельности.
Помимо диагностики стельности уровень прогестерона может служить дополнительным показателем при диагностике патологий яичников (фолликулярные и лютеальные кисты, гипофункция яичников).
Гликопротеины. Гликопротеины специфичные для стельных животных сложные
молекулы, синтезируемые эпителиальными клетками в зоне взаимодействия хориона и
трофобласта. Это видоспецифичные соединения, большинство которых синтезируется на
ранних сроках стельности. Титр нарастает приблизительно с 15 до 35-го дня. Одновременно меняется соотношение данных гликопротеинов. Поэтому практическое использование
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
47
данного метода возможно не ранее 26-30 дней после осеменения (Humblot, 2001).
Точность метода довольно высока, но широкого распространения он пока не получил. Практическое его использование проводится в США, Канаде, Венгрии, Австралии,
Великобритании.
5.1. Причины потери стельности. Ранняя эмбриональная смертность.
Причины потери стельности подразделяют на незаразные, инфекционные и инвазионные.
К незаразным причинам можно отнести генетически обусловленные аномалии зародыша, которые передаются родителями, интоксикацию организма матери, стрессы, нарушения физиологических норм и условий содержания, климатический фактор, травмы, и
др.
Прерывание беременности может быть на ранней стадии (до 40 дней от момента
оплодотворения), что считается эмбриональной смертностью, затем подразделяется на
микроаборт и аборт. После формирования плода, основным фактором потери стельности
или рождения нежизнеспособного потомства является плацентарная недостаточность,
обусловленная неполноценным кормлением животных, высокой продуктивностью, факторами внешней среды (Kuhn C. et al., 2003; Kornmatitsuk B. et al., 2004; Lidfors L. et al., 2005).
Гибель эмбриона протекает практически бессимптомно, отмечается только пролонгация полового цикла, поэтому в практике чаще замечают аборты.
Аборты − это прерывание беременности с последующей резобцией, мумификацией,
мацерацией или изгнанием из матки мертвого плода. Аборты осложняются заболеваниями половых органов, ведущими к бесплодию, понижению продуктивности и не исключаются случаи гибели животного.
Клинические признаки. У животного наблюдаются слабые потуги или их отсутствие,
общее угнетение, тимпания или атония преджелудков. При этом шейка матки открыта и
из половых путей идут выделения катарального, гнойно-катарального, ихорозного или геморрагического характера.
Профилактика абортов заключает в себя комплекс мероприятий, которые сводятся к
созданию оптимальных условий кормления и содержания стельных животных. Это обеспечивает повышение резистентности организма и усиливает адаптационные способности
его к воздействию разнообразных стрессовых факторов.
Необходимо постоянно контролировать качество кормов, определять их питательность, предупреждать недостаток в рационах питательных веществ, микро-макроэлементов и витаминов. Не следует использовать испорченные и мороженые корма и холодную
воду для поения. Необходимо проводить правильный подбор родительских пар, не допуская близкородственного размножения.
Ветеринарная служба хозяйства должна проводить комплекс профилактических мероприятий с учетом сложившейся эпизоотической ситуации, контролировать микробную
обсемененность спермы. Проводить токсикологический контроль кормов, своевременно
лечить и профилактировать заболевания внутренних органов и т.д.
Эмбриональная смертность является одной из основных причин низкого уровня воспроизводства стада. Максимальный уровень гибели эмбрионов (до 20% от общего числа
потерь стельности) приходится на первые 3 недели после осеменения (ранняя эмбриональная смертность). Гибель эмбрионов в более поздние сроки в первую очередь обусловлена
высокой продуктивностью животных, вызывающей изменения метаболического и гормонального статуса. Установлено, что около 25% высокопродуктивных коров имели признаки ранней эмбриональной смертности, что возможно связано с морфологическими и биохимическими изменениями в цитоплазме клеток эмбрионов (Bage R. et al., 2003; Grimard
48
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
B. et al., 2006). Цитокины, формирующиеся при воспалительных реакциях (например мастит), также способны вызвать гибель эмбриона (Hansen P.J. et al., 2004). Неадекватный
гормональный фон, возникающий в результате напряженного метаболизма и высокой
продуктивности (низкий уровень прогестерона и инсулиноподобного фактора роста),
приводит к изменению параметров среды в матке, что также может являться причиной
ранней эмбриональной смертности (Butler W.R., 1998; Petersson K-J. et al., 2006; Leroy J.L. et
al., 2008). Наряду с выше приведенными факторами, следует также рассматривать факторы
внешней среды, такие как высокая температура, технология содержания и другие (Silke V.
et al., 2002; Santos J. et al., 2004; Jousan F.D. et al., 2005; García-Ispierto I. et al., 2006).
На развитие эмбриона оказывают влияние также эпигенетические факторы. В частности, изменение конформации хроматина и экспрессии генов, что может изменить фенотипические признаки некоторых типов клеток и оказать влияние на развитие эмбриона
(Trasler J.M., 2006). Сообщается о наличии таких изменений у эмбрионов, полученных in
vitro и при клонировании (Oishi M. et al., 2006; Constant F. et al., 2006).
Профилактика эмбриональной смертности зависит от непосредственных причин
гибели эмбрионов в конкретном хозяйстве. Принципы профилактических мероприятий
следующие:
1. Стимуляция развития предовуляторного фолликула;
2. Стимуляция развития желтого тела;
3. Повышение уровня эндогенного прогестерона в течение первых трех недель после осеменения;
4. Снижение активности лютеолитических факторов матки;
5. Повышение иммунного статуса организма;
6. Оптимизация метаболических процессов.
Стимуляция развития предовуляторного фолликула. Установлено, что уровень
прогестерона, выделяемого желтым телом, зависит от размеров фолликула, из которого
оно сформировалось. Это обусловлено количеством и качеством клеток теки интерна,
формирующих будущее желтое тело под воздействием ЛГ. Как уже говорилось выше, на
формирование фолликула оказывает значительное влияние обеспеченность рациона энергией и микроэлементами. Поэтому, рацион случных животных должен быть сбалансирован по этим показателям. Из ветеринарных мероприятий можно рекомендовать однократное использование Сурфагона в дозе 10 мл внутримышечно спустя 14-20 дней после отела
для индукции первой волны фолликулогенеза.
Стимуляция развития желтого тела заключается в индукции выработки ЛГ после
осеменения и овуляции фолликула, что будет способствовать интенсивному развитию лютеальных клеток. С этой целью, спустя 3-4 суток после осеменения, вводится Сурфагон в
дозе 4-5 мл или препараты ХГЧ (500-1000 МЕ).
Повышение уровня эндогенного прогестерона в течение первых трех недель после
осеменения также благотворно влияет на сохранность эмбрионов. Как правило, данная
причина гибели эмбрионов увеличивается с ростом продуктивности, т.к. при этом эндогенный прогестерон быстрее нейтрализуется печенью. В Германии с целью стабилизации
уровня прогестерона спустя 7-10 дней после осеменения вводят прогестерон-выделяющее
устройство (CIDR). Его извлечение производят через 20-21 день после осеменения.
При этом, бесплодные коровы приходят в охоту. Но данный метод дорогостоящий и
неудобен при массовом применении.
Хорошо зарекомендовало себя введение Прогестамага® в дозе 2 мл в/м через 5-7
дней после осеменения, что способствует повышению уровня сохранности эмбрионов
на 12-15%.
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
49
Снижение активности лютеолитических факторов матки в первую очередь подразумевает профилактику срессовых воздействий. Это не только тепловой стресс, но и
транспортный, а также иерархические конфликты внутри группы при перемещении животных.
Повышение иммунного статуса организма заключается в адекватной организации
противоэпизоотических мероприятий, позволяющих блокировать циркуляцию возбудителей, инициирующих гибель эмбриона и плода. Наибольший вред наносят такие заболевания как вирусная диарея, ИРТ, лептоспирозы, микоплазмоз.
Помимо специфических мероприятий, хороший эффект дало применение Миксоферона® в качестве иммуномодулятора непосредственно после осеменения.
На рисунке 27 представлена принципиальная схема профилактики ранней эмбриональной смертности.
Рисунок 27
Схема профилактики ранней эмбриональной смертности
6. СУХОСТОЙНЫЙ ПЕРИОД. ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ.
ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЕ МЕРОПРИЯТИЯ, ПРОВОДИМЫЕ В СУХОСТОЙНЫЙ ПЕРИОД
Для предупреждения и снижения интенсивности патологии репродуктивной функции большое значение имеет комплекс мероприятий, проводимых в сухостойный период
и непосредственно после отела. В сухостойный период происходит наиболее интенсивное
развитие плода, масса которого за 2 последних месяца беременности увеличивается на
80%. Кроме того, он имеет большое значение для продуктивности коров в следующую
лактацию. Поэтому животные в это время должны полностью обеспечиваться питательными веществами, необходимыми для поддержания жизнедеятельности и развития плода,
а также накопления энергетических запасов для предстоящей лактации. Сбалансированная программа кормления сухостойной коровы может увеличить продуктивность в следующую лактацию на 200-600 кг молока.
При этом очень важно учитывать сбалансированность рациона – изменение содержания одного или нескольких его компонентов в сторону недостатка или избытка способно существенно повлиять на усвоение других его составляющих и, следовательно, на весь
организм в целом. Даже при полноценном, сбалансированном рационе в сухостойный период часто наблюдается недостаток витаминов А, Д, Е, которые необходимы для обеспечения развития плода и поддержания нормального физиологического состояния матери.
Из микроэлементов первостепенное значение приобретает селен, участвующий в обмене
витамина Е. Препаратом, содержащим оба эти компанента, является Селемаг®.
С учетом физиологических особенностей сухостойный период можно разделить на
2 фазы.
50
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
Фаза первая начинается с запуска и заканчивается за 21 день до отела. Во время этой
фазы молочная железа коровы уменьшается в объеме, корова интенсивно набирает живую
массу. При этом важно не допустить ожирения. Упитанность не должна превышать 3,75
балла. Стратегия кормления должна быть рассчитана на среднесуточный прирост живой
массы в пределах 450 г. Потребление сухого вещества составляет от 1,8 до 2,5 % от живой
массы коровы. Минимизируется дача концентрированных коромов (1-1,5 кг), соли, сочных коромов. При этом следует контролировать упитанность. Нельзя допускать истощения животных. В случае, если основные корма низкого качества, допускается увеличение
доли концентратов.
Вторая фаза сухостойного периода – конец сухостоя, 21 день до предполагаемого отела. В этот период потребление сухого вещества начинает падать. Перед отелом потребление сухого вещества может быть на 15-30 % ниже потребления сухого вещества во время
первой фазы сухостоя. Плод интенсивно растет, требуя все больше питательных веществ.
Может начаться потеря живой массы и возрастает риск кетоза из-за мобилизации жировых запасов. Велик также риск жирового перерожднения печени.
Важно в эту фазу подготовить животное к лактации и предотвратить возможное нарушение обмена веществ в послеотельный период. С этой целью необходимо постепенно
менять стратегию кормления для подготовки микрофлоры рубца к потреблению рациона
лактирующих коров. Увеличение уровня концентратов способствует тому, что рубцовая
микрофлора к моменту отела способна перерабатывать высокоэнергетический рацион,
параллельно стимулируется развитие папиллом в рубце, увеличивается их поверхность.
В комплексе это в значительной степени снизит вероятность возникновения ацидозно-кетозного состояния в новотельный период и сохранит функцию печени.
Профилактические мероприятия проводимые в сухостойный период:
1. С целью создания качественного колострального иммунитета у новорожненных
телят, с учетом эпизоотического состояния хозяйства проводятся необходимые вакцинации коров;
2. Для коррекции метаболических процессов, в случае некачественного кормления,
3 раза за период сухостоя проводятся инъекции поливитаминных препаратов, содержащих витамины А,Д,Е. (Тривит®, Аквитин®, Тетрамаг®). Первая инъекция производится за
45 дней до отела, вторая и третья – с интервалом 10 дней. С этой же целью за 2-3 недели до
отела вводят гепатопротектор (пропиленгликоль, глицерин);
3. Непосредственно после отбора коров в группу сухостоя необходимо вводить селен-содержащие препараты (Селемаг® двукратно, по 10 мл с интервалом 25-30 дней), что
профилактирует беломышечную болезнь у новорожденных телят и способствует сохранению высокой резистентности.
4. Рекомендуется вводить йодные подкормки (кайод) или подкожные инпланты
специальных таблеток йодистого калия, так как йод участвует во многих обменных процессах (как непосредственно, так и через тиреоидные гормоны).
5. С целью профилактики фетоплацентарной недостаточности (часто отмечается у
первотелок), за 2-3 недели до предполагаемого отела вводят Плацентин в дозе 20-25 мл
подкожно однократно или АСД-2 в виде 10% раствора с поливитаминными препаратами
(1-2 мл).
7. НЕКОТОРЫЕ ПАТОЛОГИИ РОДОВОГО ПЕРИОДА
Маточное кровотечение. При нарушении целостности сосудов хориона и слизистой
оболочки матки наблюдается маточное кровотечение. Непосредственными причинами
данного явления могут быть ушибы, патогенное влияние возбудителей болезней и инваМОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
51
зий, расстройства эндокринной системы, нарушения минерального обмена и авитаминоз.
Эндометриты разной этиологии также могут вызвать кровотечение. У 4-6 % телок и коров
кровотечение из матки чаще происходит во время стадии возбуждения или на первый третий день после ее окончания.
Клинические признаки могут быть периодическими или постоянными, проявляясь
выделениями крови из половых путей. При незначительных выделениях крови состояние
животного остается без существенных изменений, при сильных кровопотерях наблюдаются признаки общей анемии.
Для постановки точного диагноза следует убедиться, что кровь выделяется из матки,
а не из влагалища. Для этого, с помощью влагалищного зеркала, делают осмотр слизистой
оболочки влагалища и влагалищной части шейки матки. Обычно кровь из матки выделяется сгустками, а при влагалищном кровотечении их не бывает.
Исход кровотечения зависит от его характера (артериальное, венозное, капиллярное) и общего состояния животного. При обнаружении кровотечения трудно определить
его источник. Если кровотечение не завершилось изгнанием плода, то излившаяся кровь
частично рассасывается, а оставшаяся часть обызвествляется, превращается в маточный
песок.
Лечение, в первую очередь, сводится к остановке кровотечения. Животному предоставляют полный покой, накладывают холодный компресс на область крестца и прекращают все вагинальные и ректальные исследования. Хорошо действуют отвлекающие втирания острых мазей в области груди и передних конечностей. Внутривенно вводят кальций
хлорид или кальция борглюконат в дозе 150-200 мл. На фоне применения витаминов К, С
и др. можно использовать ихтиолотерапию. А.С.Кашин рекомендует вводить внутривенно
1% раствор ихтиола из расчета 1 мл на 3 кг живой массы, но не более 150 мл.
Преждевременные схватки и потуги. Основными причинами могут быть нарушения технологии содержания, кормления и эксплуатации животных.
Клинические признаки проявляются в виде общего беспокойства, повышения температуры тела, учащения пульса и дыхания, появляются схватки с участием мышц брюшного пресса. В отличие от нормальных родов отсутствует комплекс предвестников. Иногда
после прекращения потуг плацентарная связь становится неполноценной и происходит
изгнание плода или его мумификация, мацерация.
Лечение. Животное переводят в темное изолированное помещение с мягкой подстилкой и покатым полом. На крестец и поясницу кладут горячие припарки. Вместе с этим
делают низкую сакральную анестезию 1-2% -ым раствором новокаина в дозе 10-20 мл.
Водянка матки встречается довольно редко и чаще в последнем триместре стельности. Примерно в 10% случаев водянки матки отмечается водянка амниона. Она обусловлена неправильным развитием плода, в связи с нарушением глотания или транспортировкичерез кишечник амниотической жидкости. Водянка аллантоиса встечается более часто и,
как правило, связана с нарушением плацентации, снижением количества плацентом. При
этом наблюдается быстрое (в течение нескольких дней или недель) вздутие живота, бока
становятся округлыми, если смотреть сзади. При патологии амниона увеличение объема
жидкости протекает более длительное время и форма живота может быть грушевидной.
Зачастую это отмечается при многоплодии, а также после трансплантации эмбрионов.
Кроме того, на формирование данной патологии могут влиять факторы кормления и генетически обусловленные патологии развития плода (гидроцефалия, осцит).
Основным внешним признаком развития водянки матки является прогрессирующее
увеличение объема брюшной полости в последний триместр стельности. При этом объем брюшной полости может достигать объемов, затрудняющих перемещение животного.
52
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
Одновременно может наблюдаться снижение аппетита. Наиболее часто водянка матки отмечается в течение последних 4-6 недель стельности. Реже эта патология отмечается во
втором триместре стельности. Увеличение объема матки приводит к снижению аппетита,
что в свою очередь может обуславливать возникновение вторичного кетоза и других форм
нарушения обмена веществ. Может отмечаться прогрессирующая тахикардия, снижение
аппетита и обезвоживание. Кроме того, зачастую у животных с гидроалантоисом отмечаются трудные отелы.
При лечении следует учитывать возможность немедленных и отсроченных осложнений. При гидроалантоисе часто отмечаются задержание последа и метриты, что в перспективе может привести к бесплодию животных. В послеродовой период отмечается нарушение функции сердечнососудистой системы, миопатия и послеродовое залеживание. При
многоводии вероятность послеродовых осложнений ниже, но увеличивается риск гибели
плода в период отела. Большинство коров, имевших в период стельности многоводие, спустя 4-6 недель после отела, имеют низкую продуктивность. В связи с этим, лечение должно
быть начато не позднее чем за 2 недели до отела. Коров, имеющих поражение опорно-двигательного аппарата и не способных вставать до отела, целесообразно выбраковать. Существует два варианта лечения многоводия:
1. Удаление излишков жидкости в течение 30-120 минут с помощью катетера, чтобы
избежать резкого снижения давления в брюшной полости. Одновременно вводятся растворы электролитов, т.к. для животных с данной патологией характерно обезвоживание. В
случае наличия признаков кетоза дополнительно вводится глюкоза, а при гипокальцемии
– препараты кальция (хлористый кальций, кальция борглюконат).
2. Индукция родов. С этой целью применяется Магэстрофан® в дозе 4-5 мл с одновременным введением препаратов дексаметазона в дозе 20 мг действующего вещества. Оба
препарата вводятся однократно внутримышечно. Для открытия шейки матки иногда используют препараты простагландина Е в виде гелей. Препарат наносится на область шейки
матки и слепого мешка влагалища три раза в день, но, следует заметить, что ветеринарных
препаратов простагландина Е не разработано и используются медицинские препараты,
стоимость которых высока. Кесарево сечение – целесообразно применять на фоне введения препаратов дексаметазона в дозе 20 мг действующего вещества внутримышечно, за 12
часов до начала операции.
В большинстве случаев полученные при данной патологии телята нежизнеспособны
или ослаблены, часто имеют патологию почек, а молозиво коров имеет низкое качество.
В таких слуяаях выпойку телят целесообразно производить молозивом от других коров
или использовать банк молозива. Так как зачастую имеет место задержание последа и послеродовые эндометриты, следует обратить внимание на их профилактику (антибиотики,
витамины, Эдометрамаг-Т®, - К®, - Био®).
Выпадение влагалища является результатом инвагинации влагалищной трубки с
выпячиванием образовавшейся складки через половую щель. Заболевание обусловливается расслаблением фиксирующего аппарата половых органов (растяжение маточной
брыжейки и промежуточной клетчатки) в сочетании с повышением внутрибрюшного
давления. Предрасполагают к выпадению влагалища отсутствие активного моциона, несбалансированность рационов, многоплодная беременность, старость, истощение животного, покатость пола стойла. Как правило, выпадение влагалища наблюдается во второй
половине беременности (рисунок 28).
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
53
Рисунок 28
Неполное выпадение влагалища у сухостойной коровы
По клиническим признакам различают полное выпадение влагалища, когда стенки
влагалища выступают из половой щели в виде шарообразной припухлости и видна шейка
матки, и неполное (частичное), когда стенки выступают только при лежании животного и
при вставании исчезают. При неполном выпадении влагалища незадолго до отела исход
заболевания может быть благоприятным. При полном выпадении все влагалище выходит
наружу, слизистая оболочка вначале розового цвета, затем становиться более темной, легко травмируется, нарушается дефекация и мочеиспускание. Затем возможны дальнейшие
осложнения в виде воспалительного процесса, вплоть до некроза тканей и сепсиса. В этом
случае прогноз неблагоприятный и животное чаще всего выбраковывают.
В качестве лечения проводят сакральную анестезию 2%-ным раствором новокаина в
дозе 10-15 мл, производят очистку выпавшей части, обрабатывают слабо дезинфицирующими растворами, смазывают противовоспалительными мазями, дорзальную часть вульвы стягивают 2-3 швами с валиками. Животное помещают в станок (помост) с уклоном
пола в сторону головы.
При полном выпадении влагалище вправляют в случаях отсутствия глубоких травм,
значительных отеков, некроза тканей и т.д. Предварительно влагалище обрабатывают в
той же последовательности. Для избежания повторного выпадения, влагалище фиксируют бандажами различной конструкции или накладывают валиковые, петлевые или кисетные швы.
Выпадение (выворот) матки является следствием осложненных родов (рисунок 29).
При этом отсутствие активных прогулок у беременных животных в значительной степени
усугубляет проявление данного заболевания. Главными предрасполагающими факторами
являются нарушение технологических и физиологических параметров содержания и кормления маточного поголовья, особенно в сухостойный период.
При полном выпадении матки из наружных половых органов выступает круглая или
грушевидная масса, опускающаяся иногда до скакательного сустава. У коров заметны свисающие гроздями сочные, иногда кровоточащие карункулы. Выпавшая матка вначале ярко-розового или красного цвета.
54
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
Рисунок 29
Выпадение матки у новотельной коровы
С развитием застойных явлений поверхность матки становится синюшно-серой,
слизистая оболочка отекает, кровоточит и легко травмируется. В последствии возникают
признаки воспаления, некроза, распада плаценты и выделение мягких крошковатых масс.
Если своевременно не проводить лечение, то развивается гангрена и процесс заканчивается сепсисом и летальным исходом.
При этом применяется оперативное лечение. На первоначальном этапе следует расправить матку рукой и обработать дезинфицирующим раствором. Это следует проводить
под местным наркозом или при эпидуральной анестезии. Уменьшению объема матки способствует введение в толщу мышечного слоя в несколько точек окситоцина в общей дозе
300 МЕ. Сочетая бандаж или веревочные петли, можно предотвратить повторное выпадение матки. Животное следует поставить на помост с уклоном в сторону головы.
Скручивание матки может проявляться в виде поворота вокруг продольной оси беременной матки или ее одного рога на 90-180 или даже 360 градусов. Скручивание матки
может возникать из-за своеобразия анатомо-топографической структуры ее фиксирующего аппарата. Заболевание чаще всего встречается у беременных животных незадолго
перед отелом. Сопутствующими причинами могут быть резкие движения беременных
животных, падения, переворачивание через спину, удары по брюшной стенке, чрезмерная
активность плода.
О скручивании матки можно предполагать по потугам и другим признакам начинающихся родов без изгнания плода. Животное беспокоится по причине болей в области
матки; отсутствует аппетит, температура тела нормальная.
При вагинальном и ректальном исследованиях находят косые или спиральные складки. Натяжение связок происходит с той стороны, в направлении которой произошло скручивание матки. При осмотре наружных половых органов отмечают втягивание вульвы в
сторону скручивания матки.
Прогноз зависит от степени скручивания и стадии беременности. Если скручивание
незначительное и сосуды, питающие матку, не ущемлены, беременность может протекать
нормально до родов, во время которых матка может самопроизвольно раскрутиться. При
сильном скручивании, когда артериальные и особенно венозные сосуды сдавливаются,
плод погибает и, вследствие асептической среды, мумифицируется и мацерируется. При
раскрытой шейке матки, когда микрофлора проникает в ее полость, возникают тяжелые и
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
55
опасные осложнения для жизни животного.
Лечение заключается в выправлении скрученной матки путем переворачивания туловища вокруг продольной оси в сторону заворота. Для этого корову валят на тот бок,
в сторону которого скручена матка, при этом задняя часть туловища должна быть выше
передней. При быстром повороте животного матка по инерции остается на месте и раскручивается.
Крупноплодие. При крупноплодии размеры плода не соответствуют просвету таза
матери. В норме масса новорожденного теленока должна составлять 5-6 % от массы тела
матери. Причинами данной патологии могут быть несбалансированное кормление, использование быков-производителей, дающих крупное потомство, некоторые заболевания
плода и т.д.
Крупноплодие устанавливают путем вагинального исследования членорасположения плода, его позиции, диспропорции размеров плода и просвета таза матери.
Перед родовспоможением предварительно родовые пути орошают стерильным веществом на жировой основе, либо раствором мыла или другими, создающими скольжение,
веществами, не обладающими агрессивным влиянием на эндометрий. При родовспоможении используют акушерские веревки и тесьму, различные крючья, щипцы, акушерский
экстрактор и т.д. Помощь животному состоит в извлечении плода усилием нескольких
человек или акушерского экстрактора под строгим контролем руки ветеринарного врача.
Как крайнюю меру для извлечения большого плода применяют кесарево сечение или фетотомию.
Слабые схватки и потуги. Слабые схватки возникают на фоне кратковременных и
недостаточных сокращеннй мышц матки, а слабые потуги - в результате недостаточного
сокращения брюшного пресса. При этом различают первичные и вторичные слабые схватки и потуги.
Причинами слабых схваток и потуг являются нарушения физиологических норм условий содержания и кормления, особенно в сухостойный период, многоплодие и крупноплодие, перерождение мышц матки, стрессы, расстройства функции матки, яичников и
т.д.
Клинические признаки этого заболевания выражаются в виде слабо проявляемых
всех фаз родового акта.
Лечение сводится к побуждению мускулатуры матки к сокращению. Иногда для этого
достаточно провести массаж матки ректальным путем. Из медикаментозных средств можно использовать внутривенно окситоцин в дозе 8-10 МЕ на 100 кг живой массы, 200-400 мл
40% раствора глюкозы и утеротон внутримышечно в дозе 10 мл.
Бурные схватки и потуги. Длительные и очень сильные, с короткими паузами или
без них, сокращения матки и брюшного пресса называются бурными схватками и потугами. Причинами могут быть крупноплодие, неправильное предродовое расположение плода, передозировка препаратов, попадание некоторых токсинов с кормом и т.д.
После длительного, безрезультативного напряжения мышцы расслабляются, потуги
прекращаются. Плод, в результате кислородного голодания (сжатие сосудов матки), чаще
всего погибает.
В качестве лечения рекомендована сакральная анестезия 2% раствором новокаина
(по В.В. Мосину). В этом случае раствор новокаина в дозе 10-15 мл вводят иглой между
последним крестцовым и первым хвостовым позвонками. Возможно применение Румитара, Ксилы.
56
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
8. ПОСЛЕОТЕЛЬНЫЙ ПЕРИОД.
ЕГО ФИЗИОЛОГИЧЕСКИЕ АСПЕКТЫ
В послеотельный период происходит восстановление половой функции коров. Матка
в результате инволюции уменьшается с 10-13 до 0,7-1,6 кг, ее длина – со 100 до 33 см, этот
период характеризуется выделением лохий. В норме они буро-коричневого цвета, густые.
Наиболее обильное их выделение происходит в период с 4 по 12 день, а у старых животных
– по16-й день после отела. Объем может колебаться от 500 мл у первотелок до 1000-2500
мл у коров. Лохии представляют собой отторгаемый некротизированный эпителий, ткани
карункулов, остатки околоплодной жидкости и пуповинной крови. Быстрая потеря массы
матки в этот период отчасти обусловлена потерей этих тканей.
Функция матки тесно связана с функцией яичников путем сложного взаимодействия
прогестерона, эстрогенов и простагландина F2α, с участием гипоталамо-гипофизарного
комплекса. У 70% коров возобновление циклической активности яичников происходит в
первый месяц после отела. Полное восстановление воспроизводительной функции должно завершиться в течение 50-60 дней после отела. На сроки восстановления воспроизводительной функции влияет целый ряд факторов. Первостепенное значение при этом имеет
обеспечение энергетическими компонентами и уровень общей резистентности коров. В
первые 100 дней лактации корова дает 40-45% молока от всей продуктивности за лактацию. Животные не могут полностью компенсировать с кормом потребности в питательных веществах, необходимых для образования молока, и вынуждены расходовать энергетические запасы организма, теряется масса. Это зачастую сопровождается нарушением
репродуктивной функции.
8.1. Скорость инволюции матки
В период до наступления стельности для восстановления нормальных размеров матки требуется от 21 до 30 дней. Но это не говорит о готовности животного к осеменению,
т.к. эпителий еще не восстановился и условия для оплодотворения яйцеклетки и жизни эмбриона не созданы. Время, необходимое для полной физиологической инволюции
(включая регенерацию эпителия эндометрия), варьируется от 40 до 50-ти дней. В течение
первых 7-23-х дней после отела повышается эндогенный уровень метаболитов ПГF2α, который способствует быстрой инволюции матки. Инволюция матки включает физическое
сокращение, некроз и выход остатков маточных карункулов и регенерацию эндометрия.
Взаимосвязь между скоростью инволюции матки и активностью яичников в ранний
послеотельный период до конца не изучена, но имеются данные о влиянии на это взаимодействие некоторых нейропепдидов и цитокинов, секретируемых плацентой.
Известно, что раннее восстановление нормальной активности яичников ускоряет
инволюцию матки. Более того, заметное усиление тонуса матки и уменьшение ее размеров
в период с 10-го по 14-й дни после отела, в норме происходящие у коров, обычно совпадают по времени с началом первого эструса и выработкой эстрогена. Эстрогены оказывают
благоприятное воздействие на местную резистентность матки и сокращение волокон гладкой маточной мускулатуры (Hussain, 1989). Матка также влияет на функцию яичников, через синтез и выделение ПГF2α эндометрием (Kindahl и соавт., 1992). Этим фактом, видимо,
обусловлено снижение скорости сокращения матки у коров с поражениями эндометрия.
У коров с нормальным протеканием послеотельного периода, а также у коров, имеющих
более длительный период высвобождения ПГF2α после отела, инволюция матки заканчивалась быстрее, а первая овуляция, за которой следовала лютеиновая фаза нормальной
длительности, происходила раньше. У коров с патологией послеродового периода и задержкой инволюции восстановление активности яичников также заметно запаздывало.
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
57
8.2. Задержание последа
Плодные оболочки и матка на протяжении всего периода стельности соединены посредством котиледонов и карункулов. В процессе изгнания плода и первые часы после него
под действием сокращений гладкой мускулатуры матки происходит разрыв этих соединений и изгнание последа. В норме изгнание плодных оболочек из родовых путей должно
произойти не позднее 12 часов после отела. Сохранение соединения плодных оболочек с
маткой дольше этого срока называется задержанием последа.
По данным Hoards Dairyman, частота возникновения данной патологии может колебаться от 5 до 10%. У первотелок задержание последа часто встречается при трудных отелах, а у многотельных животных – при нарушениях обмена веществ (послеродовой парез,
кетоз), а также при скрытых патологиях, оставшихся после предыдущих отелов. Высока
вероятность задержания плаценты при преждевременных отелах, многоплодии и у высокопродуктивных животных.
Задержание последа по механизму возникновения можно разделить на 2 группы:
1. возникающее из-за патологических изменений в области соединения карункулкотиледон или в тканях плодных оболочках и эндометрия;
2. возникающее в результате снижения тонуса или полного прекращения сокращений гладкой мускулатуры матки.
Рисунок 30
Задержание последа
Отделение последа представляет собой сложный механизм взаимодействия нервной,
иммунной и эндокринной систем. Созревание плаценты начинается приблизительно за 3
месяца до отела, при этом изменяется состав синтезируемых ею биологически активных
веществ, которые в комплексе влияют на все системы организма матери, подготавливая
животное к лактации, меняя ее поведение и влияя на развитие будущего теленка. Немаловажное значение имеет увеличение содержания эстрогенов. Доказано, что для успешного
отделения последа повышенный уровень эстрогенов должен сохраняться как минимум 5
дней до отела. Примерно за 2-3 недели до отела в соединении карункул-котиледон начинается миграция нейтрофилов, лизирующих связывающие эти образования ворсинки, что
также важно для успешного отделения плаценты. У коров с иммунодифецитными состониями, как правило первотелок, это также может являться причиной задержания последа.
58
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
Имеет значение и наличие спаечных очагов при возникновении плацентитов различной этиологии. Как правило, плацентиты возникают в случае осеменения коров с недолеченными эндометритами, а также при латентном течении некоторых инфекционных заболеваний (лептоспирозы, ИРТ, ВД, хламидиоз и др.), которые не всегда приводят к абортам.
Задержание последа может наблюдаться также у жирных животных, при острой нехватке каротина, ретинола, селена, йода, белковом перекорме, кетозе.
Сокращение гладкой мускулатуры играет основную роль при разъединении соединения карункул-котиледон и дальнейшем изгнании плодных оболочек. В случае необоснованного родовспоможения, механического давления на плаценту может быть недостаточно.
Лечение при задержании последа может быть двух типов: консервативное или ручное
отделение. Предпочтительней использовать консервативное лечение, т.к. манипуляции в
полости матки могут привести к дополнительным травмам и заносу инфекции, что будет
способствовать возникновению эндометрита и спаечной патологии.
Консервативное лечение направлено на повышение сократительной функции матки,
поднятие общего тонуса организма и предупреждение развития микрофлоры в матке. Лечение начинают через 8-12 часов после рождения теленка. Из общих средств, применяют внутривенно — 100-150 мл 10%-ного раствора хлорида кальция и 40%-ный раствор
глюкозы (200-300 мл). Введение препаратов повторяют через 24 часа. В комплексе с этими
способами хороший эффект дает надплевральная блокада по В.В. Мосину. Для усиления
сокращения матки применяют окситоцин или Магэстрофан® в соответствии с инструкцией по применению.
Если через 48-72 часа послед не отделился, дальнейшее лечение можно проводить в
двух направлениях:
1. Ручное отделение с соблюдением асептики и антисептики.
2. Продолжение консервативного лечения. Целью такой стратегии является контролируемый аутолиз и эвакуация тканей плаценты. Нельзя допускать гниения последа.
С целью подавления патогенной микрофлоры, внутриматочно вводят бактерицидные,
предпочтительней комплексные препараты, так как их применение не требует лишних
манипуляций руками во влагалище, что сводит к минимуму занос инфекции. С этой целью
рекомендуется для введения Эндометромаг-Т®, -К®, согласно подтитровке чувствительности микрофлоры, а в случае контроля ингибиторов в молоке - Эндометромаг-БИО®. Доза
100-120 мл интервал между введениями 48 часов, кратность – 3-5 раз. Для сокращения
гладкой мускулатуры матки и изгнания тканей плаценты – Магэстрофан®– 2-3 мл 1 раз в 48
часов или окситоцин по 50-60 ЕД 2 раза в день. После отделения последа за коровой ведут
наблюдение и лечение в течение 7-14 дней, как и при эндометрите.
В полевых условиях при полном отсутствии ветпрепаратов частое доение коров (через 1,5 - 2 часа) способствует отделению последа за счет воздействия окситоцина, рефлекторно выделяемого гипофизом при сдаивании.
8.3. Воспалительные заболевания органов репродуктивной системы
Современная технология производства молока ставит коров в более жесткие условия
содержания, что снижает резистентность и увеличивает предрасположенность к гинекологическим заболеваниям. На фоне снижения резистентности непатогенная или условно
патогенная микрофлора может быть причиной воспалительных заболеваний.
Даже при соблюдении нормативных параметров содержания животных, патогенную
микрофлору в течение 15 дней после отела можно обнаружить в матке у 90% коров, а через
50-60 дней — у 9% животных. В некоторых стадах от 50 до 90% коров имеют послеотельные
осложнения (метриты), что свидетельствует о бактериальном загрязнении органов репроМОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
59
дуктивной системы.
Видовой состав микрофлоры, способной вызывать воспаление, довольно разнообразный. Из бактерий превалируют диплококки, стрептококки, стафилококки, протей,
кишечная и синегнойная палочки. В большинстве случаев в экссудате обнаруживают различные ассоциации патогенных бактерий. Патогенные грибы и бактерии способны проникать в матку как из внешней среды (экзогенный путь), так и через кровь из молочной
железы и внутренних органов при их воспалении (эндогенный путь), поэтому маститы у
коров часто сопровождаются эндометритами и наоборот. Часто наблюдается ассоциация
бактериальной микрофлоры с вирусами (ИРТ, вирусная диарея), в таких случаях вирусы
выступают в качестве иммунодепрессирующих агентов и способствуют внедрению бактерий и грибов.
В возникновении неспецифического воспаления существенная роль принадлежит
бактериям и грибам, вносимым в половые пути со спермой и инструментами при искусственном осеменении.
Из патологий воспалительного характера у коров чаще всего регистрируют метриты
(эндометриты), сальпингиты, воспаление яичников.
Метриты — наиболее частая причина бесплодия коров. В зависимости от поражения
той или иной ткани в матке различают: эндометрит — воспаление слизистой оболочки,
миометрит - воспаление мышечной оболочки, периметрит — воспаление внешнего серозного покрова матки. Как правило, метриты в острой форме сопровождаются повышением
температуры тела.
По клиническим признакам и форме течения заболевания эндометриты подразделяются на: серозный, катаральный, хронический, скрытый (субклинический), гангренозный,
гидрометра, миксометра, пиометра.
Немного подробнее рассмотрим скрытую форму эндометрита. В 40-60% случаев основной причиной перегула коров после осеменения является субклинический и хронический эндометриты. Ректальной пальпацией матки и визуальным осмотром очень трудно
поставить диагноз на скрытую форму. Поскольку патогенная микрофлора в основном локализована в верхней части рогов матки, животные вовремя проявляют охоту и половой
цикл не нарушен. Только техник-осеменатор во время повторного (через 8-10 часов) осеменения при внимательном визуальном осмотре может заметить в слизи бледные точки
(гнойные выделения) — характерный признак скрытого эндометрита.
Существует простой и доступный метод биологического определения скрытой формы эндометрита. Для этого в каплю течковой слизи вносят каплю спермы, накрывают покровным стеклом и помещают в поле зрения микроскопа. Положительная реакция характеризуется массовой агглютинацией сперматозоидов.
При миометрите и неадекватном лечении эндометритов, в большинстве случаев происходит переход воспалительного процесса на яйцепроводы (сальпингит) и яичники (оофорит).
Лечение метритов должно преследовать следующие цели:
1. повышение резистентности организма;
2. выделение воспалительного экссудата из пораженного органа;
3. возобновление секреторной функции эндометрия;
4. повышение сократительной способности матки;
5. подавление размножения микроорганизмов;
6. предотвращение интоксикации продуктами деятельности микроорганизмов и
распада тканей.
Методы терапии метритов у коров, в основном, можно разделить на следующие: па-
60
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
тогенетические, фармакологические, физиотерапевтические и хирургические.
Метод патогенетической терапии является эффективным, но из-за трудоемкости
приготовления препарата и относительной сложности введения в ветеринарной практике
в последние годы редко применяется. Один из методов патогенетической терапии — тканевая, разработанная В.П. Филатовым.
Фармакологический метод наиболее широко применяется в ветеринарной гинекологической практике. Фармакологические препараты применяют внутривенно, подкожно,
внутримышечно и местно. При применении препаратов необходимо учитывать: растворимость, совместимость с другими препаратами, отсутствие токсического действия для
тканей и органов, а также противовоспалительные, бактерицидные и микотические свойства. Выбор антибиотиков целесообразно проводить с учетом результатов их подтитровки
к возбудителю. Однако общая антибиотикотерапия, даже с подтитровкой, мало результативна, поскольку стенки половых путей, в отличие от молочной железы, обладают весьма
ограниченной проницаемостью для лекарственных веществ и таким путем трудно создать
ингибирующие концентрации антибиотиков в очаге воспаления. Поэтому, при лечении
эндометритов антибиотические препараты целесообразно вводить внутриматочно. Из
этиотропных средств, предпочтительно применять лекарственные формы, содержащие
сокращающие компоненты, и пенообразующие таблетки. Они позволяют достигнуть высокого терапевтического эффекта при минимальных затратах труда.
Из физиологических методов (массаж, грязелечение, электролечение, лазерное и т.д.)
эффективно применение массажа матки и использование вагинальных ванночек (орошений). Массаж матки трудновыполним при острых формах эндометритов, возникающих в
первые дни после отела, из-за больших размеров матки. Метод трудоемкий. Массаж следует проводить в течение 3-5 минут, при этом не вызывая болевых реакций у животного.
Лечение 10 сеансов. Вагинальные ванночки представляют собой орошение шейки матки
теплым раствором пищевой соды (2% раствор) в течение 4-5 минут. Температура раствора
– около 45 градусов Цельсия или немного выше. Важно, чтобы не произошло ожога слизистой. Запрещается применение массажа матки при миометритах и параметритах, т.к. это
способствует разрушению демаркационного вала и распространению воспаления.
Хирургический метод в практике применяется очень редко, в основном, на высокоценных животных. Суть метода заключается в удалении (эктомии) пораженного участка
(яичник, рог матки).
Наиболее рациональной является комплексная терапия, которая включает стимуляцию иммунных механизмов защиты организма, эвакуацию экссудата, активацию сократительной функции гладкой мускулатуры, ускорение процессов регенерации эпителиальных
тканей, подавление жизнедеятельности патогенных бактерий и грибов, вызвавших воспалительный процесс.
При выборе стратегии лечения следует учитывать гормональный статус животного
на момент начала лечения. Известно, что прогестерон снижает иммунореактивность, а
эстрогены наоборот – стимулируют местный иммунитет, способствуют эвакуации экссудата за счет обильного слизеотделения (Lewis, 2003). Поэтому целесообразно определить
стадию полового цикла или наличие патологии яичников прежде чем назначить лечение.
В случае, если при обследовании выявляют желтое тело (полового цикла или персистирующее) или лютеальная киста, целесообразно применять препараты простагландина F2α
(Магэстрофан® 2-3 мл). При гипофункции яичников – стимулировать фолликулогенез
(Фоллимаг® – 1000 МЕ). Основная задача – поднять уровень эндогенных эстрогенов, что
позволит усилить фагоцитарную активность в зоне воспаления и ускорить эвакуацию эксудата. Кроме того, эстрогены способствуют пролиферативным процессам в эндометрии,
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
61
что также оказывает положительное влияние при лечении.
Важно помнить, что лечение больных эндометритом коров следует начинать как
можно раньше - не позднее 6-8 дней после отела, а не на 12-15-й и более поздние дни, как
принято на практике. Это позволяет сократить период выздоровления на 13-17 дней. Для
выявления эндометритов на ранних сроках можно использовать визуальное наблюдение
(рисунок 31) . С этой целью рано утром или вечером, когда животные лежат, нужно внимательно осмотреть выделения (лохии) из влагалища. У «эндометритных» (предрасположенных) коров лохии имеют оттенки от бледно-розового до темно-крас¬ного цвета и с неприятным запахом, у здоровых животных цвет однородный (темно-коричнево-шоколадный)
и запах отсутствует.
Рисунок 31
Осмотр отдыхающих коров с целью выявления эндометритов.
Гнойные выделения на вульве и на полу
При хронических эндометритах зачастую выявить наличие гноя можно только у коров пришедших в охоту - по наличию включений гноя в слизи. В другое время полового
цикла экссудат не выделяется. Поэтому для выявления таких коров пользуются аппаратными методами (УЗИ – наличие экссудата в полости, утолщение слизистой и т.д.) и лабораторными методами (>18% нейтрофилов в тканях матки через 21-33 дня после отела или
>10% нейтрофилов в тканях матки через 34-47 дней после отела).
62
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
Рисунок 32
Слизисто-гнойный экссудат в полости рога матки, характерный для хронического течения эндометрита
Главное правило при выборе лекарственного препарата для санации — это не прижечь слизистую эндометрия. Основным местом синтеза простагландинов является эндометрий, а пораженный эндометрий не вырабатывает простагландины. В свою очередь
именно простагландины являются одним из главных регуляторов полового цикла.
Лечение миометрита, а также некротического метрита малорезультативно. Таких животных целесообразно своевременно выбраковывать, т.к. примерно в 80% случаев, даже
после выздоровления они остаются непригодными для воспроизводства из-за формирования спаек в просветах яйцеводов, рогах, бахромке яйцеводов. При гангренозной форме,
которую можно заподозрить при сгорбленности животных в поясничной области и явно
выраженной болезненности при дефекации и мочеиспускании, коров немедленно выбраковывают, так как любые способы лечения неэффективны и животное может погибнуть в
течение нескольких часов.
Скрытые формы эндометрита у коров часто возникают при мастите. Патогенная микрофлора, проникая через железистую ткань вымени, попадает в кровь, а далее — в матку. В 60-80% случаев у больных эндометритом животных обнаруживают субклиническую
форму мастита. Поэтому нужно тщательно выявлять маститных животных и проводить
соответствующее лечение. Поскольку лечение метритов дорого и трудоемко, важна их
ранняя профилактика.
На рисунке 33 представлена схема лечения острого послеродового эндометрита с учетом стадии полового цикла.
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
63
Рисунок 33
Схема лечения острого послеродового эндометрита с учетом стадии полового цикла с
целью корректировки гормонального фона в сторону повышения уровня эстрогенов и повышения эффективности применения препаратов
Для эффективной регенерации эпителия, в том числе и эпителия эндометрия, необходим витамин А. Для эффективного устранения патогенной микрофлоры требуется активная работа иммунных факторов (клеточного и гуморального) в области патологии. В
настоящее время активно ведется поиск схем лечения хронических эндометритов не подразумевающих использования антибиотиков, что позволяет исключить попадание ингибиторов в молоко. Нами разработана схема, включающая обработку масляным раствором
витамина А (можно использовать комплексные препараты: Тривит®, Тетрамаг® и др.) с добавлением 10-12% АСД фракции 2 (рисунок 34). При этом полученная эмульсия вводится
в дозе 30-50 мл в зависимости от объема матки. Перед введением эмульсию необходимо
взбалтывать для гомогенизации препарата.
Рисунок 34
Схема лечения скрытого эндометрита без использования антибиотиков.
8.4. Гипофункция яичников.
У новотельных коров часто нарушается выделение из гипофиза гонадотропных гормонов, особенно ФСГ, что вызывает нарушение фолликулогенеза - гипофункцию яичников.
Гормональный механизм фолликулогенеза описан выше, поэтому в этой главе под-
64
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
робно на нем останавливаться не будем. Предрасполагающие причины гипофункции яичников:
• гипогликемия в крови коров, обусловленная отрицательным балансом энергии в
первый период лактации;
• высокая продуктивность в ранний период лактации; выделяется большое количество пролактина, являющегося антагонистом гонадотропных гормонов;
• снижение содержания прогестерона в крови, что вызывает задержку овуляции и
развитие начальной формы гипофункции яичников;
• низкое качество кормов и несбалансированный рацион.
Возможна вторичная гипофункция яичников в случаях нарушения технологии содержания животных. Это скученное содержание, без свободного доступа к корму, при большом количестве животных с поражениями конечностей и другими патологиями, снижающими подвижность и активность перемещения коров.
В зависимости от степени морфогистологических изменений, различают 3 формы гипофункции яичников:
Начальная форма – фолликулогенез продолжается, но овуляция не происходит.
Фолликулы атезируют. Эта форма развивается в срок 30-35 дней после отела. Морфология
яичника не изменена, наблюдается анафродизия.
Лечение направлено на увеличение концентрации ФСГ и ЛГ в крови: массаж яичников в течение 2-3 минут ежедневно в течение 3-4 дней; внутримышечно 10 мл Сурфагона
или 300-500 МЕ Фоллимага®.
Средняя форма. Характеризуется пропуском двух - трех циклов (45-60 дней послеотела), размеры яичников не изменены, но отсутствуют крупные фолликулы и желтые тела.
Фолликулогенез прекращается на стадии фолликулов 1-го порядка (рисунок 35).
Рисунок 35
Средняя форма гипофункции яичников. Фолликулогенез прекращается на стадии фолликулов первого порядка
Лечение: однократная инъекция 500-1000 МЕ Фоллимага® и 2-3 мл Магэстрофана®
одновременно в разные стороны крупа; подкожно 20-30 мл молозива или плацентарных
препаратов (Плацентин и др.); массаж яичников и матки в течение 3-5 минут ежедневно в
течение 4-5 дней.
Глубокая форма. Характеризуется существенным уменьшением размеров яичников
и матки, отсутствием фолликулов и желтых тел. Эта форма гипофункции встречается у
70-80% первотелок в послеотельный период.
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
65
Рисунок 36
Глубокая гипофункция яичников. Полностью прекратился фолликулогенез
Лечение основано на создании искусственной лютеальной фазы полового цикла, т.е.
высокого уровня прогестерона в крови. На рисунке 37 представлена схема лечения.
Рисунок 37
Схема лечения коров с глубокой гипофункцией яичников
Через 168 часов после первого введения Прогестамага® одновременно, в разные стороны крупа вводится 1000 МЕ Фоллимага® и 2 мл Магэстрофана®. Осеменение производится о факту проявления охоты. Пик прихода в охоту приходится на 3-й – 4-й дни после
окончания схемы.
8.5. Профилактика послеотельных нарушений репродуктивной функции
Система мероприятий по повышению репродуктивной функции скота должна быть
интегрирована в систему зооветеринарных мероприятий хозяйства с учетом технологической карты хозяйства. Поэтому предлагаемая система должна адаптироваться под условия хозяйства, но сохранять предложенные принципы. В таблице 10 представлена система
профилактических мероприятий, включающая элементы синхронизации охоты, что позволяет эффективно осеменить большую часть животных в оптимальное время. Одновременно применяемый в данной системе препарат Магэстрофан® способствует профилактике и выявлению скрытых форм эндометрита.
Неотъемлемой частью данной системы является гинекологическая диспансеризация
скота в указанные выше периоды. Это позволяет своевременно выявлять и лечить патологии репродуктивной функции согласно выше приведенным схемам, что значительно повышает эффективность проводимых мероприятий.
66
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
Таблица 10
Схема профилактики послеотельных осложнений и подготовки коров к осеменению
№
Выполняемые работы
п/п
Сроки выполнения
Рекомендации
1.
Профилактика возникновения эндометритов
1-й день
после отела
Внутриматочное введение Эндометромаг-БИО® 120-150 мл однократно.
2.
Сокращение сроков
инволюции матки
1-й день
после отела
Магэстрофан® 2 мл
3.
Витаминизация, повышение общей резистентности
1-й день
после отела
Аквитин® в дозе 9 мл + 1 мл АСД-2 в/м
однократно
4.
Профилактика бактериального поражения
органов репродуктивной
системы и вымени
1-й день
после отела
Антибиотики согласно подтитровки (с
учетом введения в течение 3-4 дней) *
5.
Сокращение сроков
инволюции матки
3-й день
после отела
Утеротон доза - 10 мл в/м
6.
Сокращение сроков
инволюции матки
5-й день
после отела
Утеротон доза - 10 мл в/м
7.
Сокращение сроков
инволюции матки
7-й день
после отела
Утеротон доза - 10 мл в/м
8.
Сокращение сроков
инволюции матки
9-й день
после отела
Утеротон доза - 10 мл в/м
9.
Ректальное обследование
с целью выявления пато- 9-10-й день
логии матки на ранних
после отела
стадиях
При выявлении эндометритов, разрывов, миометритов и других патологий
- лечение согласно поставленному
диагнозу
10.
Индукция фолликулогенеза
10-14 день
после отела
Сурфагон 10 мл однократно в/м + Аквитин® в дозе 9 мл с добавлением 1 мл
АСД-2 в/м однократно
11.
Диспансеризация новотельных коров
30-й день
после отела
Ректальное обследование и клинический осмотр коров на предмет выявления патологии матки и яичников.
При выявлении патологий - лечение
согласно поставленному диагнозу
12.
Индукция половой цикличности и сокращения
матки
30-й день
после отела
Магэстрофан® – 2 мл однократно в/м
13.
Индукция половой цикличности и сокращения
матки
44-й день
после отела
Магэстрофан® – 2 мл однократно в/м
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45
67
14.
Диспансеризация новотельных коров
50-й день
после отела
Ректальное обследование и клинический осмотр коров на предмет выявления патологии матки и яичников.
При выявлении патологий - лечение
согласно поставленному диагнозу
15.
Индукция половой цикличности и сокращения
матки
58-й день
после отела
Магэстрофан® – 2 мл однократно в/м
16.
ОСЕМЕНЕНИЕ коров,
пришедших в охоту
60-80-й день
после отела
Осеменяются коровы, пришедшие в
спонтанную охоту, что позволяет увеличить результативность осеменения
80-й день
после отела
Ректальное обследование и клинический осмотр коров на предмет выявления патологии матки и яичников. При
выявлении патологий - лечение согласно поставленному диагнозу. Коров, не
выявленных в охоте, но не имеющих
признаков патологии органов репродуктивной системы приводим в охоту
по схеме “Ovsinch”
80-й день
после отела
Сурфагон 10 мл однократно в/м + Аквитин® в дозе 9 мл с добавлением 1 мл
АСД-2 в/м однократно (важно! время
введения фиксированное, например 8
часов утра, скорректировать согласно
технологическим возможностям)
86-й день
после отела
Магэстрофан® – 2-3 мл однократно в/м
(важно! время введения фиксированное, например 8 часов утра, как и при
скорректировать согласно технологическим возможностям)
17.
18.
19.
68
Диспансеризация новотельных коров
Индукция фолликулогенеза (“Ovsinch”)
Лизис желтого тела
20.
Индукция созревания
фолликула
88-й день
после отела
Сурфагон 4-5 мл однократно в/м важно! время введения фиксированное,
через 60 часов после введения Магэстрофана®, скорректировать согласно
технологическим возможностям)
21.
ОСЕМЕНЕНИЕ
89-й день
после отела
Спустя 10-16 часов после последнего
введения сурфагона коров осеменяют
без признаков охоты
МОСАГРОГЕН
(495) 744-06-45