Вирус оспы обезьян - Молекулярная диагностика

Метод видоспецифичной
диагностики ортопоксвирусов,
патогенных для человека, на основе
использования мультиплексной
ПЦР в реальном времени
Щербаков Дмитрий Николаевич
Научный руководитель:
д.б.н., профессор Щелкунов С.Н.
Патогенные для человека
ортопоксвирусы
1.Вирус натуральной оспы
2.Вирус оспы обезьян
3.Вирус оспы коров
4.Вирус осповакцины
Рост заболеваемости,
обусловленный ортопоксвирусными
инфекциями
1. Оспа буйволов в Индии и Пакестане.
2. Вакциноподобный вирус (VACV-like)
в Бразилии.
3. Оспа коров в Европе.
4. Оспа обезьян.
Оспа коров
1. Наблюдается значительный рост числа
заболевших. Только в Германии в течение
трех вспышек 2006/07, 2008, 2009 гг.
зафиксировано свыше 40 случаев.
2. Увеличивается патогенность вируса. Все
чаще наблюдаются серьезные
осложнения.
Осложнения, обусловленные
CPXV, вспышка 2006/07 гг.
Вирус оспы обезьян
1. Значительный подъем заболеваемости
в последние годы.
Подъем заболеваемости MPXV в
ДРК, за последние годы
1200
Количество зарегистрированных случаев
1000
2
800
600
Ликвидация
натуральной оспы
400
200
1
0
годы
1. Нет данных.
2. Данные полученные для 2 из 9 административных районов ДРК.
Вирус оспы обезьян
1. Значительный подъем заболеваемости в
последние годы.
2. Регистрация случаев в США, Судане,
Республике Конго, Гане.
Расширение географии MPXV
Судан
Гана
Республика Конго
Демократическая
республика Конго
Вирус оспы обезьян
1. Значительный подъем заболеваемости в
последние годы.
2. Регистрация случаев в США, Судане,
Республике Конго, Гане.
3. Происходит изменение вируса.
Повышается контагиозность.
4. Наблюдается до 9 генераций передачи
вируса.
Вирус оспы обезьян изменяется!
Indice
1970 - 1995
1996 - 2008
% infections
> 15 years
Rare
85%
Animal
contact index
case
72%
23%
Secondary
attack rate
3%
46%
Transmission
chains
(generations)
3
generations
from 8% of
index cases
9 generations
from 16% of
index cases
Case fatality
rate
10%
10%
David Heymann, Epidemiology in action:
past, present and future, march 2010.
Актуальность работы
1. Прекращение
вакцинации
привело к появлению и росту
прослойки невакцинированных
людей.
2. Повышается
опасность,
обусловленная MPXV, CPXV, VACV.
Единственный коммерчески доступный набор
для выявления OPV с дифференциацией VARV
Цель работы
Разработка одностадийного
метода детекции и видовой
дифференциации патогенных для
человека ортопоксвирусов на
основе мультиплексной ПЦР в
реальном времени.
Спектры флуоресценции
использованных красителей
Конструирование
положительного контроля
Олигонуклеотидные праймеры и зонды,
использованные для мультиплексной
ПЦР в реальном времени
Список штаммов вирусов, ДНК которых использовалась в работе
Аналитическая специфичность метода
Определение аналитической чувствительности,
для праймеров и зонда, специфичных VARV.
2 105 копий
2 103 копий
2 102 копий
2 10 копий
2 копии
Результаты определения аналитической
чувствительности
Диагностическая чувствительность
1. VARV. Препараты ДНК штаммов Aslam, India 387,
Brazil 128, Nepal-89, India 164, Khateen.
2. MPXV. Препараты ДНК, выделенные из крови,
селезенки, легких, печени и пустулы сурков,
зараженных MPXV штамм CDC#v79-I-005.
3. CPXV. Образцы ДНК, выделенные из крови,
селезенки, легких и печени мышей, зараженных
CPXV штамм GRI-90.
4. VACV. Препараты ДНК, выделенные из корочек
кожного поражения после вакцинации VACV штамм
ЛИВП.
Диагностическая специфичность
Образцы ДНК, выделенные из 20
препаратов цельной крови здоровых
людей.
Выводы
Впервые
разработан
метод
видоспецифичной идентификации
вируса оспы коров на основе ПЦР в
реальном времени.
Спасибо за внимание
Олигонуклеотиды для обнаружения вируса
оспы обезьян (Li et al., 2003)