ВЫСОКОЭФФЕКТИВНАЯ ЦИРКУЛЯРНАЯ ТОНКОСЛОЙНАЯ

ВЫСОКОЭФФЕКТИВНАЯ ЦИРКУЛЯРНАЯ ТОНКОСЛОЙНАЯ ХРОМАТОГРАФИЯ
Методическое пособие для самостоятельной работы студентов фармацевтического
факультета.
Количество занятий - 2
Количество часов - 5
ЦЕЛЬ ЗАНЯТИЯ: Обучиться определению химических веществ методом ВЭТСХ.
ЦЕЛЕВЫЕ ЗАДАЧИ:
1. Изготовить камеру для Высокоэффективной тонкослойной хроматографии.
2. Методом ВЭТСХ фракционировать химические компоненты образца пробы.
3. Дать оценку полученным результатам и расшифровать хроматограммы.
СТРУКТУРА ЗАНЯТИЯ(225 мин):
Работа 1(135 минут)
1. Проверка исходного уровня знаний
2. Ознакомление с теоретическими основами метода ВЭТСХ
3. Ознакомление с приборным оснащением метода ВЭТСХ
4. Подготовка оборудования и реактивов к работе
5. Проведение анализа
6. Интерпретация результатов и написание отчета
15 мин.
35мин.
15 мин.
20 мин.
20мин.
30 мин.
Работа 2 (90 минут)
1. Ознакомление с теоретическими основами метода ВЭТСХ
2. Ознакомление с приборным оснащением метода ВЭТСХ
3. Подготовка оборудования и реактивов к работе
4. Проведение анализа
5. Интерпретация результатов и написание отчета
20мин.
15 мин.
10 мин.
20мин.
25 мин.
1.1.Вопросы для выявления исходного уровня знаний
1. Какие вещества могут быть исследованы хроматографическими методами?
2. Что такое тонкослойная хроматография? Ее отличие от других видов хроматографии.
3. Какие методические приемы используются для качественной и количественной
оценки вещества в тонкослойной хроматографии?
4. Какие сорбенты используются в качестве неподвижной фазы в тонкослойной
хроматографии?
5. Элюенты в тонкослойной хроматографии. Какие вещества используются в качестве
элюентов при определении соединений основного, кислого и нейтрального характера?
6. Цветные реакции, используемые для идентификации веществ в тонкослойной
хроматографии. Какие хромогены применимы для выявления алкалоидов?
7. Какие разновидности метода тонкослойной хроматографии используются в
аналитической химии?
8. Основные различия между циркулярной и другими видами тонкослойной
хроматографии?
1.2. Характеристика метода Высокоэффективной циркулярной тонкослойной
хроматографии
Метод тонкослойной хроматографии, ее круговой (циркулярный) вариант был открыт
провизорами И.А. Измайловым и М.С. Шрайбер в 1938 году. Они сообщили: "разработан метод
адсорбционного анализа, основанный на разделении веществ в тонком слое адсорбента на
зоны, при применении одной капли вещества. Метод можно использовать для анализа
фармацевтических препаратов и их идентификации... Новым методом было изучено 18
фармацевтических препаратов". Дальнейшее развитие и широкое внедрение в практику метод
получил в середине 60-х годов, благодаря работам Э. Шталя (5).
1
По методическому исполнению и принципам разделения метод ВЭТСХ занимает
промежуточное положение между Высокоэффективной жидкостной колоночной хроматографией
(хроматографией высокого давления) и бумажной хроматографией. Вместе с тем высокая разрешающая способность и быстрота проведения анализа дают методу ВЭТСХ значительные
преимущества. В этом методе хроматографическое разделение химических веществ проводят в
тонком слое адсорбента, нанесенного на твердую подложку. Удобны в использовании
пластины Silufol, представляющие собой алюминиевую фольгу с нанесенным на неё тонким слоем
широкопористого силикагеля. Силикагель может быть пропитан люминофором акридинового ряда,
который позволяет установить локализацию и идентифицировать бесцветные фракции на пластине
в ультрафиолетовом свете (λ254 или λ366 нм).
В тонкослойной хроматографии, как и во всех хроматографических процессах,
подвижная фаза движется сквозь неподвижную. Разделяемые компоненты в зависимости от их
физико-химических свойств перемещаются в слое адсорбента в направлении движения потока
элюента с различной скоростью. После разделения анализируемой смеси на отдельные
компоненты элюирование прекращают. Проводят качественное и количественное
определение вещества в хроматографических зонах. Для этого пластины с сорбентом, либо
опрыскивают специальными реактивами, либо облучают ультрафиолетовым светом, или
проводят экстракцию вещества с соответствующей зоны сорбента для исследования физикохимическими методами. Различают два варианта
ВЭТСХ: «Линейный вариант» и «Циркулярный вариант». Обсуждаем только
циркулярный вариант, как наиболее эффективный для анализа(7).
1.3. Достоинства циркулярного варианта тонкослойной хроматографии:
1. Метод прост в исполнении.
2. Время проведения анализа - не более 3 минут.
3. За один цикл анализа с помощью ВЭТСХ можно разделить до 40 веществ.
4. Метод позволяет работать с нанограммовыми (10-9г) и даже с фептограммовыми
(1.10-15 г ) количествами веществ.
5. Воспроизводимость метода при исследовании пробы объемом 100 нанолитров (10 9
литра) составляет ±1%.
6. Использование специальной U-камеры позволяет получить истинные значения Rf со
стандартным отклонением ± 1%.(для Rf 0,5)
1.4. Выбор адсорбента.
Сорбенты могут иметь различную физико-химическую природу. В практической
работе при выборе сорбентов исходят из свойств веществ, подлежащих разделению. Определяют растворимость разделяемых веществ. Устанавливают их гидрофильность или
гидрофобность. Затем определяют их кислотность, основность, или нейтральность. Наконец,
проверяют способность подлежащих разгонке вещества реагировать с сорбентом. В
большинстве случаев требованием отвечают три сорбента:
1. Силикагель G - кислый по отношению к сильному основанию носитель
(отечественный аналог-«силикагель КСК»). Этот сорбент пригоден для разделения не
слишком гидрофильных, нейтральных и кислых веществ. При соответствующем растворителе с его помощью можно разделить и основные соединения (алкалоиды и вещества с
гидрофильными свойствами).
2. Кизельгур Г - неактивный нейтральный носитель, предназначенный в основном для
четкого разделения сильно гидрофильных соединений и амфотерных ионов.
3. Окись алюминия Г - активней слабоосновной носитель, пригодный для разделения
нейтральных и основных соединений. Свойства этого сорбента можно и менять
соответствующим подбором растворителя, сушкой и добавлением других веществ.
В работе могут быть использованы смеси сорбентов. Так, Э. Шталь для разгонки
трудно разделяемых классов соединений (барбитураты, сахара, красители) использовал
смесь силикагеля G и окиси алюминия в соотношении 1:1. Для выделения витамина А
рекомендуют использовать силикагель, пропитанный парафиновым маслом, или смесь
2
силикагеля Г с фосфатом кальция (1:1). Для разделения каратиноидов используют смесь
гидроокиси кальция и силикагеля (6:1). В качестве сорбентов в тонкослойной хроматографии
могут быть использованы специальные сорта целлюлозы (МN300, МN300AС, МNЗ00,
ДEAE).
1.5. Выбор элюента.
В качестве элюентов используют растворители. По элюирующей способности их
располагают в элюотропный ряд (Таб. 1.1).
Во многих случаях элюирование проводят смесью растворителей. Рецептура смесей
прилагается к методикам или отрабатывается опытным путем для конкретных условий
анализа. В ВЭТСХ почти не используют двухмерный принцип анализа. При необходимости
проводят элюирование несмешивающимися растворителями. В этом случае применяют
специальный смеситель, который перемешивает жидкости непосредственно перед их
поступлением в слой сорбента.
1.6. ПОДГОТОВКА К ПРОВЕДЕНИЮ АНАЛИЗА
Приготовление пластины с закрепленным слоем сорбента:
Пластины из стекла размером 12 х 18 см тщательно моют и высушивают. Пластичную
массу сорбента готовят из силикагеля КСК. В конической колбе на 100 мл смешивают 6,9 г.
силикагеля и 0,35 г. гипса. Полученную массу наносят на поверхность пластины,
разравнивают шпателем и встряхиванием. Пластину оставляют на 20 минут в
горизонтальном положении и затем активируют нагреванием в сушильном шкафу при 110° С
в течение 30 минут. В оптимальном варианте слой сорбента должен быть ровным толщиной
0,5 мм.
ЭЛЮОТРОПНЫЙ РЯД РАСТВОРИТЕЛЕЙ, КЛАССИФИЦИРОВАННЫЙ ПО
ОТНОШЕНИЮ К СИЛИКАГЕЛЮ [по данным Халпаапа(6)].
Таблица 1.1.
№
Растворитель
Давление при 20°С Диэлектрическая
(мм.рт.ст)
проницаемость
120
1,9
1
н-Гептан
2
н-Гексан
-
-
3
н-Пентан
-
-
4
5
6
7
8
9
1
Сероуглерод
Четыреххлористый углерод
Трихлорэтилен
Ксилол
Толуол
Бензол
Хлороформ
298
91
58
5-7
6, 1
3,0
2,5
2,0
2,6
2,2
3,4
2,4
2,3
4,7
1
Дихлорэтан
1, 8
8,9
1
Диизопропиловый эфир
3,9
135
1
трет-Бутиловый спирт
12,2
31
1
Диэтиловый эфир
4,2
449
1
Изобутиловый спирт
18,2
9
1
Ацетонитрил
37,5
15
0
1
2
3
4
5
3
6
1
Изобутилметилкетон
-
-
1
.Изопропиловый спирт
18,3
32
1
н-Пропиловый спирт
20,1
14
2
Этилацетат
6,0
77
2
Метилэтилкетон
-
72
2
Ацетон
20,7
180
2
Этанол
24,3
44
2
Диоксан
2,2
30
2
Тетрагидрофуран
7,4
131
2
Метиловый спирт
32,6
96
2
Пиридин
12,3
15
2
Вода
80,6
-
7
8
9
0
1
2
3
4
5
6
7
8
1.4. СХЕМА ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА
1.7. При использовании U-камеры фирмы «Camag»: В центр установленной
горизонтально пластины с тонким слоем сорбента с помощью дозирующего устройства (4)
микрошприцем вносят нанолитровый объем жидкости, содержащей исследуемые вещества
(рис.1). К центру пластины подведен капилляр, с помощью которого осуществляют подачу
элюента (2). Постоянство объёма подачи элюента в единицу времени и скорости его потока
в U –камере обеспечиваются шаговым насосом «Orlita» (3). Парциального давления паров
растворителя, температуры и давления в U-камере регулируются.
55
1
77
Азот
66
3
3
4
2
Рис.1.1.Блок-схема U-камеры фирмы «Сamag» для высокоэффективной тонкослойной
хроматографии.
1-Ввод азота; 2-Элюэнт; 3-Насос «Orlita» AT-10; 4-Дозирующее устройство для
4
введения нанолитровых объёмов; 5-Термостабилизирующее кольцо; 6-Выход азота; 7Пластина «Silufol».
Элюент поступает в слой сорбента, увлекает за собой растворенные в нем химические
вещества и распространяется в виде круга на поверхности пластины. В силу
неоднозначности взаимодействия с сорбентом вещества, разделяется в нем на фракции в
виде концентрических окружностей.
Качественный анализ веществ проводят с помощью проявляющих химических реакций
в слое сорбента. В том случае, если пластины с сорбентом имеют заводскую пропитку
люминесцирующим красителем, локализацию фракций на хроматограмме можно видеть в
ультрафиолетовом свете. В зонах нахождения химических веществ люминесценция гасится.
Для идентификации веществ рассчитывают фактор R f. Величина R f -это отношение
расстояний, которые пройдены исследуемым веществом и подвижной фазой (соответственно
Ls, и Lm ):
R f =Ls / Lm;
Степень разделения веществ и повторяемость результатов определяются:
а) Характеристиками сорбента,
б) Параметрами элюента (растворителя),
в) Условиями проведения элюирования (постоянством скорости движения элюента в
сорбенте, непрерывностью потока элюента, способностью элюента к испарению). Во время
проведения анализа движение элюента нельзя прерывать. Это приводит к искажению
процесса разделения веществ и величин Rf. U-камера позволяет стабилизировать все условия
хроматографического процесса, поэтому для метода характерна высокая повторяемость
результатов.
Количественную оценку хроматограмм, созданных U-камерой, проводят с помощью
автоматический установки для оптического сканирования in situ.
1.8. При использовании камеры, изготовленной из подручных средств:
1.8.1. Изготовление хроматографической камеры и принцип работы с ней.
Одним из основных требований ВЭТСХ является сохранение постоянства состава
газовой фазы над слоем силикагеля. Такие условия могут быть соблюдены с помощью Gкамеры, выпускаемой фирмой «Camag». Однако хорошие результаты хроматографической
разгонки смеси веществ на компоненты можно получить с помощью камеры изготовленной
из подручных средств. В варианте изложенного ниже метода подвод элюента
осуществляется сверху, а камеру изготавливают из стеклянной воронки и мерной пипетки на
I мл (Рис.1.2).
В узкую часть воронки с помощью отрезка силиконовой трубки вставляют отпиленную
по размерам воронки часть пипетки с вытянутым носиком (внутренний диаметр носика-0,5
мм). В носик пипетки набивают вату, таким образом, чтобы получить скорость потока
налитого в пипетку элюента≈0,03-0,1 мл/мин. Коническую воронку с пипеткой растром вниз
помещают на слой сорбента и получают камеру, препятствующую испарению элюента.
Кончик пипетки располагают на высоте 0,3 мм от поверхности пластины с сорбентом, чтобы
не повредить поверхность сорбента. Фитилек, торчащий из трубки должен касаться слоя
сорбента. При использовании такой камеры раствор исследуемых веществ целесообразно
5
1
2
3
4
5
6
Рис.1.2.Камера для циркулярной тонкослойной хроматографии.
1.Пипетка;2-Стеклянныя воронка;3-Прокладка из силиконовой трубки; 4-Слой
адсорбента;5-Подложка;6-Фитилёк;7-Элюент.
наносить прямо на фитилек стеклянной палочкой (при качественном анализе), либо –
микро шприцем для количественных исследований. После нанесения пробы воронку
помещают на слой сорбента и в трубку с помощью шприца вводят 0,5-1,0 мл элюента. Фронт
растворителя распространяется от центра, в который подают элюент, к периферии. При этом
элюент увлекает за собой анализируемые вещества. Чтобы добиться симметричности
разделения веществ в радиальном направлении, системе придают горизонтальное
положение. Состав элюента можно изменять в процессе разделения не прекращая подачи
растворителя.
Разделение веществ в сорбенте при использовании описанного варианта камеры
происходит в течение 2-5 минут. По завершении процесса хроматограмма приобретает вид,
представленный на рисунке 1.3. Циркулярная тонкослойная хроматография за один цикл
позволяет разделить до 40 образцов препаратов различающегося состава. В этом случае
образцы проб наносят в виде точек по периметру воображаемой окружности на расстоянии
0.5-1,0 см от центра, куда в последующем подают элюент. Хроматограмма приобретает вид,
представленный на рисунке 1.4.
2. САМОСТОЯТЕЛЬНАЯ РАБОТА СТУДЕНТОВ
Работа 1
2.1. Разделение смеси красителей с помощью ВЭТСХ.
Цель работы: Обучиться определению химических веществ методом ВЭТСХ
ЦЕЛЕВЫЕ ЗАДАЧИ:
1. Методом ВЭТСХ фракционировать химические компоненты образца пробы.
2. Дать оценку полученным результатам и расшифровать хроматограммы.
Инструментальное оснащение анализа:
1. Хроматографическая камера, изготовленная из стеклянной воронки и пипетки,
2. Хроматографические пластины "Silufol" или пластины, изготовленные
самостоятельно путем нанесения силикагеля на стеклянную подложку.
3. Щприцы емкостью 100мкл и 1.0мл.
6
Оснащение посудой:
1. Колба объемом 50 мл.-6 шт. (для растворителей).
2. Пипетки мерные на 1,0 и 10,0 мл.
3. Стеклянная палочка.
4. Флакон из-под пенициллина.
Оснащение реактивами:
1. Набор красителем: Судан III, Судан «IV», Судан черный «Б», Родамин «Б».
2. Растворители: хлороформ, бензол, толуол, циклогексан.
Приготовление реактивов:
1. Приготовление смеси красителей: Во флакон из-под пенициллина берут по 0,1 г.
каждого из красителей и растворяют в 5 мл хлороформа.
2. Растворители используют в качестве элюентов в чистом виде.
2.1.1. ПОРЯДОК ПРОВЕДЕНИЯ АНАЛИЗА
1. На фитилек подвода элюента стеклянной палочкой наносят смесь красителей.
2. Воронку (камеру) устанавливают на пластину с сорбентом таким образом, чтобы
фитилек касался поверхности сорбента.
3. В отрезок пипетки с фитильком шприцем вводят 1,0-0,5 мл хлороформа. Через
небольшой промежуток времени фронт элюента распространяется от центра к периферии. На
пластине с сорбентом В динамике проявляется разделение красителей в виде колец.
4. Элюирование проводят в течение 2-3 минут. Его заканчивают, когда диаметр
распространения фронта растворителя или Родамина «Б» достигнет 3-5 см (Рис.1.3.-1.4.)
5. Анализ повторяют с другими элюентами - бензолом, толуолом и циклогексаном
наблюдая вариации распределения колец красителей на хроматограмме.
Работа 2
2.2.2. Разделение смеси алкалоидов с помощью ВЭТСХ
Цель работы: Научится разделению и качественному определению алкалоидов с
помощью ВЭТСХ.
Целевые задачи:
1. Методом ВЭТСХ фракционировать алкалоиды образца пробы.
2.2.3. Рекомендации к практическому использованию метода
В качестве элюента для алкалоидов наиболее часто используют хлороформ. На слое
силикагеля, имеющего слабокислые свойства, алкалоиды удерживаются довольно сильно.
Степень удержания зависит от основности и константы диссоциации алкалоидов.
Добавление к элюенту сильных оснований, например, диэтиламина способствует лучшему
разделению алкалоидов на хроматограмме. Если в этих условиях алкалоиды не разделяются,
то к хлороформу добавляют более полярный растворитель, например, 5-20 % метанол. Если
же алкалоиды концентрируются в области фронта, то к хлороформу добавляют менее
полярный циклогексан.
Выбор элюента проводят на предварительном этапе анализа. Для этого в исследуемый
образец пробы, содержащей алкалоиды, вносят краситель Родамин «Б». Затем проводят
элюирование смесью: циклогексан - хлороформ - диэтиламин (50+40+10) .Если в этих
условиях алкалоиды разгоняются в пределах кольца, образованного Родамином «Б», то
алкалоиды относят к 1-ой группе и исследуют, используя в качестве элюента смесь:
хлороформ – ацетон – диэтиламин (50+40+10). Если алкалоиды на предварительном этапе
разделения локализуются за кольцом родамина "Б", то их относят ко 2-ой группе и
исследуют, используя элюенты следующего состава:
1. Циклогексан - диэтиламин (90+10) или
7
2. Бензол-этилацетат-диэтиламин (70+20+10).
После высушивания алкалоиды проявляют на пластине иодоплатинатом, который дает
с различными алкалоидами характерные цветные реакции (табл. 1.2).
Распределение алкалоидов в порядке увеличения значений Rf и их окраска при
выявлении иодоплатинатом Элюэнт:циклогексан - хлороформ-диэтиламин /50+40+10/ (по
данным Э. Шталя).
Таблица 1.2.
№
Наименование алкалоида
Окраска
при
иодоплатинатом
Светло-коричневая
1
Эфедрин
2
Хинин
Желто-белая
3
Атропин
Фиолетово-голубая
4
Пилокарпин
Светло-коричневая
5
Кодеин
Лилово-розовая
6
Скополамин
Светло-желтая
7
Стрихнин
Желтая
8
Физостигмин
Розовая
9
Аконитин
Красно-коричневая
10
Папаверин
Желтая
опрыскивании
Реактивы для анализа:
1. Спиртовой 0,5%- раствор родамина "Б";
2. Раствор алкалоидов в хлороформе (āā 1% растворы)
3. Элюент №1 (состав: циклогексан – хлороформ - диэтиламин /50+40+10/).
4 Элюент № 2 (состав: хлороформ – ацетон - диэтиламин / 50+40+10/).
5. Элюент № 3(состав: бензол - этилацетат - диэтиламин /70+20+10/),
6. Иодоплатинат, модифицированный для выявления алкалоидов.
Приготовление иодоплатината: 3 мл 10 % раствора платино / IV /хлористо-водородной
кислоты смешивают с 97 мл воды и прибавляет 100 мл 6 % водного раствора иодидa калия.
В склянке из темного стекла раствор сохраняется длительное время.
2.2.4. Порядок проведения работы
1. Образец смеси алкалоидов наносят шприцем на слой силикагеля или на фитилек
подвода элюента стеклянной палочкой.
2. Воронку с фитильком устанавливают на пластину с сорбентом таким образом, чтобы
фитилек касался поверхности сорбента. Если проба наносилась в виде капли на сорбент, то
фитилек устанавливают в центр капли.
3. В трубку с фитильком шприцем вводят 0,5 мл элюента №1.
4. Элюирование проводят в течение 2-3 мнут, наблюдая за распространением фронта
элюента и кольцом родамина «Б».
5. Снимают "хроматографическую воронку" и высушивают пластину с силикагелем
при комнатной температуре.
6. Опрыскивают слой силикагеля раствором иодоплатината.
2.2.5. Интерпретация результатов анализа
Алкалоиды на пластине силикагеля окрашиваются иодоплатинатом в соответствующие
цвета (Табл. 2,рис.2.1).В УФ - свете фракции алкалоидов выглядит тёмными на фоне
люминесцирующего красителя (Рис.2.2). При удовлетворительном разделении анализ может
быть закончен на этом этапе. Если разделение алкалоидов неудовлетворительное, то
8
определяют принадлежность алкалоидов к группе (к 1-ой или 2-ой согласно их положению
относительно кольца родамина «Б») и повторяют анализ с использованием элюента"2"или
элюента "3". Анализ завершают идентификацией алкалоидов с помощью иодоплатината. При
отсутствии иодоплатината в работе используют пластины с силикагелем, пропитанные
люминесцируюшим красителем. В этом случае необходима предварительная
хроматографическая разгонка эталонных образцов алкалоидов с определением величины Rf .
Определение локализации алкалоидов проводят в условиях облучения пластины с
силикагелем ультрафиолетовым светом (Рис.2.2). В качестве источника света можно
использовать ртутную - кварцевую лампу сверхвысокого светового давления типа СВД-120
А.и светофильтр УФ 1-5.
ЛИТЕРАТУРА
1.Кибардин С.А., Макаров К.А.Тонкослойная хроматография в органической химии. М.- Химия.-1978.-190с.
2. Киселев А. В. Межмолекулярные взаимодействия в адсорбции и хроматографии.
//Изд. "Высшая школа. -1986.-с.350.
3.Лурье А. А. Сорбенты и хроматографические носители.// Изд. "Химия". -М. -1972 .-с.
320.
4..Максютина Н.П.и сотрудники. Анализ фармацевтических препаратов и
лекарственных форм. /Изд."Здоров'я.- Киев. -1976. -с. 246.
5.Хроматография в тонких слоях.//Под. ред. Э. Шталя. -Изд.-"Мир",-М.-1965,-с.506.
6. Halpaap H. HPTLC – chromatography.-J. Chromatogr.-78.-1973.-P.63-77.
7. HPTLC high performance thin- layer chromatography //Eds. A. Zlatkis, R. E. Kaiser. Amsterdam-Oxford-New York.-1977.-p.245.
9
4
1
2
3
Рис.1.3.Хроматограмма разделения смеси красителей Судана черного «В» (1),Судана
IV(2) и Судана III(3) на пластине «Silufol» (4).
7
1
5
*
2
*
*
*
6
3
*
*
*
4
Рис.1.4.Хроматограмма разделения смеси красителей Родамина «S» (1), Судана
черного «В» (2),Судана IV(3) и Судана III(4) на пластине «Silufol» (7).
5-Места нанесения смеси красителей; 6-Локализация фитилька
10
1
2
3
4
5
Рис.2.1. Хроматограмма разделения смеси алкалоидов посла проявления
иодоплатинатом:1Эфедрин,2-Физостигмин,3-Атропин,4-Папаверин,5-Пластина«Silufol»
Элюент: циклогексан – хлороформ - диэтиламин (50+40+10).
1
2
3
4
5
Рис.2.2. Хроматограмма разделения смеси алкалоидов посла проявления
УФсветом:1-Эфедрин,2-Физостигмин,3-Атропин,4-Папаверин, 5-Пластина«Silufol». Элюент:
циклогексан – хлороформ - диэтиламин (50+40+10).
11