Детекция нейронных РНК в живых клетках с помошью SmartFlare
advertisement
Детекция нейронных РНК в живых клетках с помощью зондов SmartFlare™ Изучение дифференцировки основных клеточных типов, производных нейрональных стволовых клеток, лежащих в основе удивительной сложности мозга, в основном основано на анализе фиксированных образцов. Отсутствие надежных внеклеточных маркеров для дифференцировки различных типов клеток ограничивает идентификацию, не давая возможности сортировать живые клетки и проводить дальнейший анализ генетически немодифицированных целевых клеток. Идентификация нейронных клеточных типов в живой культуре клеток путем изучения наличия специфичных РНК обеспечивает уникальные возможности для изоляции, обогащения и анализа развивающихся клеток. Мониторинг нейрональной дифференциации Изучение нейронной дифференциации затруднены наличием простого способа контроля сложных событий развития клеток, которые происходят задолго до появления явных морфологических изменений. Экспрессия РНК может отслеживаться по флуоресценции в живых нейрональных клетках-предшественниках с помощью зондов SmartFlare™ без необходимости воздействия на геном. Гетерогенный анализ и сортировка нервных клеток Исследование развития нервных клеток становится всё более сложным при продолжении дифференцировки различных типов клеток мозга. Мониторинг гетерогенности и идентификация специфичных типов клеток для их изоляции является трудной задачей. Обогащение живых клеток на основе экспрессии РНК может быть осуществлено с помощью зондов SmartFlare™ и флуоресцентно-активированной сортировки клеток. Мониторинг внутриклеточных маркеров, таких как GFAP или BIII тубулин может быть осуществлен в живых клетках без потери их жизнеспособности, функциональных возможностей и целостности. Последующий анализ целевых нервных клеток Предварительная идентификация редких типов целевых нервных клеток при проведении анализа живых клеток, таких как пэтч-кламп (электрофизиологический метод исследования) или изучение роста аксона, традиционно была затруднена в связи с недостаточностью внешних маркеров. Маркеры различных типов клеток, созданные генетическими конструкциями, и другие виды манипуляций имеют ограниченную полезность. РНК зонды перемещаются в клетки и из клеток посредством механизмов эндо – и экзоцитоза, при этом исследователи могут идентифицировать и изолировать клетки для проведения дальнейшего прижизненного анализа клеток или других типов анализа, таких окрашивание антителами и ОТ-ПЦР. Merck Millipore is a division of Визуализация мРНК GFAP в живой клетке с помощью SmartFlare™ Зонды для детекции РНК в нейрональных клетках-предшественниках (красный цвет) ко-локализируются с окрашенным антителами GFAP в фиксированных клетках (зеленый цвет). Последние публикации Launey et al. (2014) Digital expression profiling of the compartmentalized translatome of Purkinje neurons. Pubmed ID: 24904046 Простой механизм функционирования зондов SmartFlare™ позволяет определять содержание РНК в живых клетках при сохранении их живыми и интактными Введение 1 Связывание Флуоресценция 2 3 В отсутствие целевой молекулы, зонд “погашен” золотом и не флуоресцирует Выход 4 t При наличии целевой молекулы, она связывается с захватывающей нитью, высвобождается репортная нить, что индуцирует флуоресцентное свечение Целевая молекула + -AAAAAAATCAACCATACACCGTGACTTTGCTTGACCC - AGTTGGTATGTGGCACT Capture Strand Reporter Strand Олигодуплексы разработаны с РНК “захватывающей” последовательностью и комплиментарной “репортной” последовательностью 1 – зонды вводятся в клетку посредством естественного процесса эндоцитоза 2 – зонды сближаются с целевой РНК 3 – зонды связываются с целевой молекулой, флуорофор высвобождается для возможности проведения детекции 4 – зонды покидают клетку путем экзоцитоза. Данные клетки можно повторно использовать для проведения других экспериментов Введение, связывание, флуоресценция, выход. Зонды SmartFlare™ вводятся в клетку с помощью собственного клеточного процесса эндоцитоза. Зонды циркулируют внутри клетки и связываются с комплементарными РНК последовательностями. Данное связывание высвобождает флуорофор, придавая клетке флуоресцентное свечение для возможности проведения детекции. Со временем зонд выходит из клетки, не внося изменений, что сохраняет возможность проведения последующего анализа. Зонды для детекции РНК SmartFlare™ в живых клетках для проведения исследований в области нейробиологии человека ABCB1 CCND1 CSF1R FGF2 ICAM1 MDM2 PARK7 SNCA AGTR1 CCR5 CTNNB1 FGFR1 IDH1 MET PAX6 SST ALB CD4 CXCR4 FGFR3 IDH2 MKI67 PDGFRA SYP ALK CD44 DCX FMR1 IFNG MMP2 PIK3CA TBP AR CDH1 DRD1 FOXP2 IGF1 MYC PINK1 TGFB1 ASCL1 CDH2 EGF GCG IGF2 NES PLAUR TLR2 BCL2 CDKN1A EGFR GFAP IL10 NGF PRL TLR4 BCL2L1 CDKN1B EPHA2 HGF IL1A NGFR PTEN TNF BDNF CDKN2A ERBB2 HIF1A IL1B NOTCH1 PTGS2 TP53 BRAF CHRM2 ERBB4 HMOX1 KDR NRG1 S100B TSC2 CCK CLU ERCC1 HTR1A KIT NTRK1 SERPINE1 TUBB3 CCL5 CNP ESR1 HTR4 LEPR NTRK3 SLC6A4 UCHL1 Совместимые клеточные линии 2102Ep Hu MSC ES derived SCC25 AGS Daudi Hu Astrocytes MDA-MB-435 Rat Astrocytes THP-1 A431 Hu skeletal muscle SK-MEL-28 BT474 F9 Hu Chondrocytes Ms Astrocytes RAW 264.7 U373MG ARPE-19 MC3T3-E1 Cl 4 SK-N-SH BxPC-3 HDF Hu Schwann Mouse NSC RIN-m5F U87MG HCC1806 MCF10-2A U251 C33 a Hec-1-A HUVEC NCI-H510A RT4 UMR-106 HCN1A MDA-MB-231 WEHI-3 CAKI-2 Hepa1c1c7 INS-1 NCI-H69 SK-N-AS WI-38 Hs578t PC-3 10T 1/2 Capan1 Hepa1-6 Jurkat NCI-N87 SU-DHL-1 H9 Human ES HT1080 RT4-D6P2T A172 CCF-STTG1 HL-60 LNCaP NIH/Ovcar3 T47D iPS Hu cardiac myocytes Saos-2 A549 Daoy HT29 MCF-7 PANC-1 T98G Хотите ли Вы попробовать зонды для детекции РНК SmartFlare™, чтобы повысить эффективность Ваших исследований? Если в настоящее время у нас нет зондов для Ваших целевых молекул, мы можем разработать их по Вашему заказу для Ваших целевых микроРНК и мРНК. www.merckmillipore.com/smartflare Для размещения заказа или получения технической информации MERCK MILLIPORE 115054, г. Москва, ул. Валовая, д. 35 Тел.: +7 (495) 937-33-04 e-mail: mm.russia@merckgroup.com Присоединяйтесь! Вступайте в сообщество Merck Millipore Biosciense в своей любимой социальной сети и получайте самые свежие новости! facebook.com/MerckMilliporeBioscience twitter.com/Merck4Bio SmartFlare является торговой маркой, Merck Millipore и логотип М являются зарегистрированными торговыми марками Merck KGaA, Дармштадт, Германия. Lit No. AN1938EN00 BS-GEN-14-10650
