Типы культур животных клеток

Типы культур
животных клеток
Лекция 9
План лекции:
1. Особенности культивирования клеток животных.
2. Способы классификации культур клеток животных.
3. Типы культур клеток животных в зависимости от их
происхождения.
4. Первичные культуры, их характеристики.
5. Получение первичной культуры животных клеток.
6. Диплоидные штаммы клеток, их преимущества по
сравнению с первичными культурами.
7. Постоянные клеточные линии, их особенности и
преимущества.
Животные клетки гораздо сложнее
культивировать in vitro по сравнению с
растительными клетками по следующим
причинам:
1. Требуются более сложные по составу питательные
среды.
2. Клетки очень чувствительны к механическим
воздействиям.
3. Рост клеток происходит
преимущественно после
прикрепления к поверхности.
4. Культуры имеют низкую
скорость роста.
Культуры клеток животных
классифицируют по ряду признаков:
•по происхождению;
•по продолжительности культивирования
in vitro;
•по способу культивирования
Типы животных клеток,
которые культивируют in vitro:
- элементы соединительной ткани
(фибробласты, лимфоциты,
клетки кости и хряща);
- мышечные ткани (скелетные,
сердечные и гладкие мышцы);
- эпителиальные ткани
(печень, легкие, почки и др.);
- клетки нервной системы;
- эндокринные клетки
(надпочечники, гипофиз и др.);
- различные опухолевые клетки
Широко используемые культуры клеток животных:
а – фибробласты; , б – эпителиальные клетки;
с – мышечные клетки; d – лимфоциты; e - нейроны
HeLa
Одна из первых и наиболее широко используемых
культур опухолевых клеток человека
• 8 января 1951 г.: выделены из раковой опухоли
шейки матки (Henrietta Lacks (1920-1951))
Henrietta Lacks (circa 1945)
Первичная культура
Субкультивирование
Клеточная линия
Ограниченная
Постоянная
Трансформация
Деградация
Первичные культуры
Синоним – первично-трипсинизированные культуры
Характеристики:
• обычно гетерогенны (включают несколько типов
клеток);
• характеризуются слабой пролиферацией;
• наиболее полно представлены типы клеток той
ткани, из которой они были получены
Схема получения первичной
культуры
Засев в
культуральные сосуды
Измельченная
ткань
Эксплант
Орган
Энзиматическая
дезагрегация
Формирование
монослоя
Преимущества диплоидных клеточных
линий по сравнению с первичными
культурами:
•однородность популяции;
•стабильность морфологических свойств;
•высокая чувствительность к вирусам;
•возможность масштабирования и хранения в
жидком азоте
После определенного количества пассажей
диплоидный штамм либо стареет и дегенерирует, либо
трансформируется и превращается в постоянную
клеточную линию
Признаки постоянной клеточной линии:
•морфологические изменения (уменьшение размера
клеток, округление, увеличение
ядерно/цитоплазматического отношения);
•увеличение скорости роста (время удвоения клеток
в культуре снижается с 36 - 48 до 12 часов);
•уменьшение зависимости клеток от добавления
сыворотки;
•нетребовательность к качеству субстрата;
•увеличение гетероплоидности (хромосомные
различия между клетками) и анеуплоидности
(изменяется количество хромосом);
•увеличение способности к образованию опухолей.