1.1. Стрептококкоз животных - Кубанский государственный

Кубанский государственный аграрный университет
На правах рукописи
ДВАДНЕНКО ОЛЬГА ВИКТОРОВНА
СТРЕПТОКОККОЗ КРУПНОГО РОГАТОГО СКОТА
В КРАСНОДАРСКОМ КРАЕ
06.02.02. – ветеринарная микробиология, вирусология, эпизоотология,
микология с микотоксикологией и иммунология
ДИССЕРТАЦИЯ
на соискание ученой степени кандидата ветеринарных наук
Научный руководитель: заслуженный работник сельского хозяйства РФ,
лауреат премии Правительства РФ в области науки,
доктор ветеринарных наук,
профессор Шевченко А.А
г. Краснодар 2014
1
СОДЕРЖАНИЕ
стр.
Введение…………………………………………………………………………..4
1. ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ……………………………………………………….10
1.1. Стрептококкоз животных…………………………………………………..10
1.2. Характеристика возбудителей стрептококкоза…………………………...13
1.3. Клинические симптомы и патологоанатомические изменения при стрептококкозе…………………………………………………………………………17
1.4. Эпизоотический процесс при стрептококкозе…………………………….21
1.5. Диагностика стрептококкоза……………………………………………….23
1.6. Иммунитет и специфическая профилактика стрептококкоза……………24
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ…………………………..39
2.1. Материалы…………………………………………………………………..39
2.2. Методы исследований……...………………………………………………40
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ…………………….45
3.1. Эпизоотическая обстановка по бактериальным инфекционным болезням
крупного рогатого скота в Краснодарском крае………………………………45
3.1.1. Нозологический профиль и место стрептококкоза в инфекционной патологии крупного рогатого скота……………………………………………….46
3.1.2. Изучение превалентности и инцидентности стрептококкоза крупного
рогатого скота……………………………………………………………………50
3.1.3. Изучение территориальных и временных границ распространения
стрептококкоза крупного рогатого скота………………………………...…….51
3.1.4. Изучение возрастной восприимчивости крупного рогатого скота к
стрептококкозу …………………………………………………………………..54
3.2. Диагностика, клинические признаки, патологоанатомические и гистологические изменения при стрептококкозе крупного рогатого скота………….56
3.2. 1. Изучение клинического проявления стрептококкоза у крупного рогатого скота …………………………………………………………………………..58
2
3.2.2. Изучение патологоанатомических и гистологических изменений при
стрептококкозе крупного рогатого скота……………………………...………66
3.2.3.Выделение и идентификация стрептококковых культур, циркулирующих в организме крупного рогатого скота…………………………………….72
3.3. Разработка технологии производства и контроля инактивированной вакцины против стрептококкоза крупного рогатого скота……………………….76
3.3.1. Разработка технологии получения и оценка качества биосырья для изготовления инактивированной вакцины против стрептококкоза крупного рогатого скота………………………………………………………………………76
3.3.2. Изучение параметров инактивации возбудителя стрептококкоза…….78
3.3.3. Изучение иммунологических свойств вакцины против стрептококкоза
крупного рогатого скота в экспериментальных и производственных условиях………………………………………………………………………………….83
3.3.3.1. Изучение иммунологических свойств инактивированной вакцины
против стрептококкоза крупного рогатого скота в экспериментальных условиях……………………………………………………………………………….83
3.3.3.2. Разработка параметров контроля вакцины против стрептококкоза
крупного рогатого скота…………………………………………………….......87
3.3.3.3. Изучение эффективности инактивированной вакцины против стрептококкоза крупного рогатого скота в производственных условиях…………89
3.4. Разработка ветеринарных мероприятий по профилактике и ликвидации
стрептококкоза крупного рогатого скота………………………………………93
3.5. Экономическая эффективность применения вакцины против стрептококкоза крупного рогатого скота в производственных условиях………………..97
3.6. Обсуждение результатов исследований…………………………………102
4. Выводы……………………………………………………………………….112
5. Предложения производству…………….…………………………………..114
6. Список использованной литературы………………………………………115
Приложения…………………………………………………………………….135
3
введение
Актуальность темы. Животноводство является важной отраслью
народного хозяйства. Однако успешное развитие животноводства сдерживает
возникновение и распространение в хозяйствах инфекционных болезней. У
крупного рогатого скота среди бактериальных и вирусных инфекций чаще
регистрируют: инфекционный ринотрахеит, рото- короновирусные инфекции, парагрипп-3, эшерихиоз, сальмонеллез, стрептококкоз, псевдомоноз,
стафилококкоз и другие. Эти болезни наносят выраженный экономический
ущерб, который складываетсяся из падежа, снижения продуктивности животных и денежных затрат на проведение лечебных и профилактических мероприятий (Бурова Л.А., 2000; Есепенок В.А., 2006; Шевченко А.А. с соавт.,
2009; Черных О.Ю., 2010).
Обеспечие населения нашей страны безопасными в ветеринарном отношении и доступными продуктами питаня животного происхождения –
приоритетная задача, осуществление которой невозможно без повышения
качества содержания животных, увеличения их продуктивности и снижения
себестоимости получаемой продукции.
В последнее время в животноводстве все более и более становятся
распространены факторные инфекционные болезни, в их этиологии главенствующая роль принадлежит условно-патогенной микрофлоре. К данной
группе микроорганизмов относят и стрептококков. Наличие нозологических
единиц, обусловленных данным микроогранизмом, частое обнаружение его в
органах и тканях у молодняка и взрослых животных, в том числе и не имеющих клинических проявлений, говорит о всеобщем его растространении.
Всвязи с данной ситуацией, встаёт необходимость всестороннего комплексного изучения стрептококкоза, как с точки зрения отдельных микроорганизмов и их свойств, так и общие эпизоотологические особенности, характерные
для этого заболевания. Для борьбы с данной инфекционной болезнью необходимо разрабатывать эффективные методы и средства. Требуется целый
4
комплек мероприятий, направленный на предотвращение возникновения и
распространения стрептококкоза.
В своих работах авторы (Кондрахин И.П., 2003; Немченко М.И., 1983)
обращают внимание, что справляться с бактериальными инфекциями желудочно-кишечного тракта и органов дыхательной системы ветеринарным врачам помогают антибактериальные препараты. Однако они не решают проблему, появляются резистентные штаммы.
Вирулентность условно-патогенных микроорганизмов повышается с
каждым годом всё больше и больше. Бесконтрольное поголовное применение
антибиотиков способствует формированию резинтентности и повышению
уровня патогенности. И в ситуации, когда эффективность известных антибактериальных препаратов снижается, а резинтентность к новым - формируется очень быстро, применение вакцин становится необходимым решением
данной проблеммы.
Стрептококкоз – инфекционная болезнь животных множества разных
видов, в основном молодняка, которую вызывают патогенные стрептококки.
При остром течении, проявление болезни характеризуется септицемией, у
новорожденных – омфалитом. При подостром, а так же хроническом течении
белезни у животных регистрируются поражения органов пищеварения, респираторной системы, глаз, суставов и других органов. У взрослых животных при стрептококкозе отмечаются аборты, метриты и маститы. Болезнь регистрируют у телят, начиная с первых дней от рождения: пупочный сепсис,
энтериты, пневмонии, артриты. Летальность молодняка может достигать
70%. Данный возбудитель и у человека вызывает различные заболевания
(ангину, скарлатину, рожу, целлюлиты, гнойные поражения кожи, отиты, менингиты, энцефалиты и т.д), поэтому многие авторы, в том числе и Покровский В.И. (2006), говорят о социальной значимости стрептококкоза.
Стрептококки наносят хозяйствам колоссальный ущерб. При анализе
данных, полученных из литературных источников, видна вся важность
стрептококков и в развитии маститов (Брагина Э.П., 1972), и энтерококковой
5
инфекции у телят (Панин А.Н., 1992), и при развитии эндометритов у коров
(Турченко А.Н., 1999, 2001). В этиологии маститов главенствующая роль отводится Str. agalactiae, хотя другие микроорганизмы тоже могут присутствовать (Bartlett P.C. и соавт., 1992). Ущерб складывается и вследствие недополучения привесов. Больные телята либо быстро гибнут, либо сильно отстают
в наборе массы тела.
Надежной защитой поголовья от болезней, вызванных возбудителями
инфекций, является вакцинопрофилактика. Применение вакцин в хозяйствах
способствует снижению стрессовых ситуаций у прививаемых животных,
снижает трудозатраты и способствует созданию напряженного иммунитета в
короткие сроки (Вачугов В.И., 1989). Многие исследователи полагают, что
инактивированные вакцины, которые производятся из штаммов микроорганизмов, выделяемых в эпизоотическом очаге, обладают высокой специфичностью, иммуногенностью и способствуют созданию напряженного иммунитета (Маннапова Р.Т., 1998; Шевченко Л.В., 2008; Шевченко А.А. с соавт.,
2009; Черных О.Ю., 2010).
В свзи с этим, изучение инфекционных заболеваний крупного рогатого
скота, а так же разработка эффективных средств для защиты животных, совершенствование мероприятий, связанных с профилактикой и ликвидацией
данных болезней, имеет важное значение для ветеринарии.
Цель и задачи исследований. Цель исследований – изучить особенности эпизоотического процесса в животноводческих хозяйствах на территории
Краснодарского края. Изучить клинические симптомы и патологоанатомические изменения при стрептококкозе крупного рогатого скота, разработать систему эффективных мероприятий для профилактики и ликвидации данного
заболевания.
Для достижения данной цели были поставлены следующие задачи:
 Провести изучение нозологического профиля бактериальных инфекций
крупного рогатого скота за 2004-2013 гг. на территории Краснодарского края, и определить удельный вес стрептококкоза в нем;
6
 провести эпизоотологический мониторинг по стрептококкозу крупного
рогатого скота в животноводческих хозяйствах на территории Краснодарского края за последние 10-ть лет;
 провести изучение территориальных границ, возрастных особенностей,
сезонности стрептококкоза крупного рогатого скота;
 изучить клинические симптомы и патоморфологические изменения у
животных при стрептококкозе крупного рогатого скота;
 выявить источники и главные причины распространения стрептококкоза крупного рогатого скота на территории хозяйств Краснодарского
края;
 разработать инактивированную противострептококковую вакцину для
использования в комплексе противоэпизоотических мероприятий для
крупного рогатого скота;
 провести изучение иммунобиологических свойств созданной противострептококковой вакцины для крупного рогатого скота;
 разработать комплекс профилактических и ликвидационных мероприятий при стрептококкозе крупного рогатого скота для животноводческих предприятий Краснодарского края.
Научная новизна. Впервые было проведено изучение эпизоотической
ситуации по инфекционным болезням бактериальной этиологии у крупного
рогатого скота на территории Краснодарского края. В нозологическом профиле установлено место, удельный вес, территориальные границы, возрастные особенности, сезонность, заболеваемость, характер проявления эпизоотического процесса, превалентность, инцидентность, клинические симптомы,
патологоанатомические изменения при стрептококкозе крупного рогатого
скота.
7
Разработана и применена технология по производству новой инактивированной противострептококковой вакцины для крупного рогатого скота,
изучены её свойства, в том числе и иммуногенность.
Были апробированы и внедрены в ветеринарную практику рекомендации,
включающие комплекс мероприятий, направленных на профилактику и ликвидацию стрептококкоза среди поголовья крупного рогатого скота в условиях животноводческих предприятий Краснодарского края. Научная новизна
проведённой работы подтверждена двумя патентами на изобретение
(№2406532, № 2406533).
Теоретическая и практическая значимость. На основании выдвинутых теорий, а так же данных, полученных в ходе проведённой работы, в том
числе и в производственных условиях, были разработаны и предложены для
использования в ветеринарии:
- система противоэпизоотических мероприятий, в которую включён эпизоотологический, бактериологический, серологический мониторинг, диагностика, проведение мероприятий по предупреждению, и при возникновении по ликвидации стрептококкоза крупного рогатого скота на животноводческих предприятиях Краснодарского края;
- «Рекомендации по диагностике, профилактике и ликвидации стрептококкоза крупного рогатого скота» (2014);
- создана новая противострептококковая вакцина для крупного рогатого скота, которая предложена для применения в крае;
- разработан и утвержден в установленном порядке проект нормативнотехнической документации на производство и применение новой вакцины
против стрептококкоза крупного рогатого скота. Вакцина производится на
ФГУП «Армавирская биофабрика»;
- подготовлены учебные пособия «Диагностика стафилококкозов и стрептококкозов» (2013), «Профилактика и мероприятия по ликвидации стрептококкоза животных» (2013).
8
Основные положения диссертации, выносимые на защиту:
1. Нозологический профиль по инфекционным болезням крупного рогатого
скота на территории Краснодарского края за 2004-2013 гг., удельный вес
стрептококкоза в нем имел тенденцию к увеличению;
2. Особенности эпизоотического процесса при стрептококкозе: факторы возникновения, распространения возбудителя, превалентность, инцидентность,
сезонность, заболеваемость у крупного рогатого скота на территории Краснодарского края;
3. Клинические симптомы и патологоанатомические изменения при стрептококкозе крупного рогатого скота в Краснодарском крае имеют свои особенности;
4. Применение новой инактивированной противострептококковой вакцины
способствует улучшению эпизоотической обстаноски в хозяйствах, неблагополучных по стрептококкозу крупного рогатого скота.
Реализация результатов исследований. Результаты исследований:
комплекс противоэпизоотических мероприятий, включающий систему диагностики, профилактики, ликвидации стрептококкоза у крупного рогатого
скота в животноводческих предприятиях на территории Краснодарского
края.
Рекомендации по проведению диагностических и профилактических
мероприятий, в случае возникновения стрептококкоза у крупного рогатого
скота в Краснодарском крае, используются государственным управлением
ветеринарии Краснодарского края при планировании и проведении противоэпизоотических мероприятий. Новая эффективная безвредная вакцина предложена для применения в крае.
Использование в ветеринарной практике, на территории Краснодарского края, системы профилактических мероприятий может способствовать сохранию поголовья крупного рогатого скота и оздоровлению его от стрептококкоза.
9
Результаты исследований, в том числе и подготовленные учебные пособия: «Диагностика стафилококкозов и стрептококкозов», «Профилактика и
мероприятия по ликвидации стрептококкоза животных» применяются в
учебном процессе на кафедре микробиологии, эпизоотологии и вирусологии
факультета ветеринарной медицины Кубанского госагроуниверситета, в государственных ветернарных учереждениях, и животноводческих предприятиях края.
Апробация работы. Отчёт о полученных данных, в результате проведённых исследований, был представлен на всероссийских и международных
научно-практических конференциях (г. Горки, республика Беларусь, 2010 г.;
г. Владимир, 2013г.; г. Покров, 2014 г.; г. Краснодар, 2009-2014 гг.); на заседаниях ученого совета Кубанского государственного аграрного университета
(г. Краснодар, 2008-2014 гг.); на студенческих научных конференциях факультета ветеринарной медицины Кубанского государственного аграрного
университета (г. Краснодар, 2010-2014 гг.).
Публикации. Было опубликовано по теме диссертации 10 научных работ. Из них 3 напечатаны в журналах, которые рекомендованы ВАК РФ.
Кроме статей опубликованы два учебных пособия и рекомендации.
Структура и объем работы. Изложение диссертационной работы представлено на 141 странице компьютерного текста. Она включает следующие
разделы: введение, обзор литературы, материалы и методы исследований,
собственные исследования, обсуждение результатов исследований, выводы,
практические предложения, список использованной литературы, включающий 135 источников, 30 из которых принадлежат зарубежным авторам, и
приложения. В работу включены иллюстрации, в том числе 35 рисунков, 10
таблиц.
10
1. обзор литературы
1.1. Стрептококкоз животных
В течение последних десятилетий поголовье крупного рогатого скота в
нашей стране постоянно уменьшается. Это не может не сказаться на продовольственной самостоятельности России. Возросший импорт животноводческой продукции, поступление более низкого по цене, а иногда и по качеству
мяса не способствует поддержке отечественного производителя. Помимо
этого, снижение численности поголовья связано и с высоким уровнем развития бактериальных инфекций. Вызывая массовые заболевания в стаде, они
способствуют более ранней выбраковке животных, увеличению сухостойного периода, снижению воспроизводительной функции. Для преодолений данных проблем, необходимо разработать и проводить комплексные мероприятия, напрвленные на борьбу с инфекционными заболеваниями.
Многие отечественные учёные (Субботин В.В., Сидоров М.А., 2001;
Бедоева З.М., 2006) пишут, что одной из важнейших проблем в ветеринарии
являются бактериальные болезни. Они поражают молодняк и взрослых животных ферм, пушных зверей, птиц, и т.д. Проявляются заболевания поражениями дыхательной системы и органов пищеварительного тракта. Они составляют 75% всех болезней, которые вызываются условно-патогенными
микроорганизмами. Среди возбудителей преобладают стрептококки, сальмонеллы, эшерихии. Болезни, вызываемые этими микроорганизмами, очень часто встречаются и в медицинской практике. Об этом можно судить по результатам проведённых исследований, о которых пишут в медицинских учереждениях разных стран. О данной информации заявляют и отечественные
учёные (Тотолян А.А., Беляков В.Д., 1994; Бурова Л.А., 2000; Ющук Н.Д.,
2009; Schaechter M., 1993). По данным медицинских источников, только на
территории Соединённых штатов, каждый год регистрируют 20-30 миллионов случаев, когда болезнь вызывается патогенными стрептококками. В ос11
новном это привычные инфекции ротовой полости, горла, фарингиты, отиты,
однако, всё чаще регистрируют форму болезни, сходную с токсическим шоком (Kaijser B., 1979; Patterson M.J., 1996). Часты и осложнения после перенесённой болезни. Одним из таких осложнений, как пишут исследователи, в
том числе и A.N. Kornblatt (1983) является острый инфекционный ревматизм,
при котором отмечается поражение сердца (клапаны). Стрептококки провоцируют развитие болезни и в послеродовой период и у матери и у ребёнка.
Ежегодно в мире регистрируют гибель огромного колличества детей от
пневмококков. А так как штаммы стрептококков могут инфицировать и людей и животных, между ними возможно взаимное перезаражение. Для минимизации этой практики, необходимо проводить мероприятия по борьбе с
данным заболеванием.
По данным Э.П. Каревой (2003), экономический ущерб, причиняемый
животноводству стрептококкозами, сальмонеллезами, эшерихиозами, составляется из недополучения привесов, высокого процента гибели молодняка,
недополучения молока, и денежных затрат на осуществление оздоровительных мероприятий.
Стрептококкоз – инфекционная болезнь, сельскохозяйственных, диких,
промысловых, лабораторных животных, птиц и пушных зверей всех возрастов. Данное заболевание проявляется при остром течении септицемией и омфалитом. При подостром и хроническом - преимущественным поражением
респираторных органов, селезёнки, органов желудочно-кишечного тракта,
суставов. Проявляется стрептококкоз у взрослых животных эндометритами и
маститами (Радчук Н.А. и соавт., 1991; Костенко Т.С., Родионова В.Б., Скородумов Д.И., 2001; Bartlett P.C. и соавт., 1992).
Уже во второй половине позапрошлого века было известно, что животные болеют стрептококккозом. Впервые о диплококковой септицемии, выявленной у ягнят и телят, сообщил Плаут в 1877 году. Л. Пастер в 1880 году
12
выявил, что они патогенны для человека, Пельс (1889) тоже занимался этой
проблемой.
Распространены патогенные стрептококки повсеместно, часто обнаруживаются на слизистых оболочках, коже, в том числе и у животных, не имеющих клинических проявлений. Входят они и в состав нормальной микрофлоры различных органов и тканей, таких как кишечник, мочеполовая система, ротовая и носовая полости. Стрептококки способны не проявляться
долгое время, пока иммунная защита организма крепка.
В случае несоблюдения зоогигиенических требований, а именно:
нарушение параметров микроклимата (скорость движения воздуха, температура, воздухообмен, влажность, концентрация вредных газов), несвоевременная уборка навоза, неполноценное кормление, стрессы, вызванные перегоном, перегруппировкой поголовья – всё это ведёт к понижению естественных
защитных сил организма и повышению вирулентности микрофлоры. Данные
наблюдения были описаны в работах J.S. Hogan и соавторов (1993) и Н.М.
Костомахина (2009). Это не может не сказаться на количестве случаев возникновения и тяжести течения стрептококкоза. Колличество больных животных будет возрастать, тяжесть течения болезни усиливаться.
Доминирующим фактором в развитии стрептококкоза С.И.Плященко
(1989) тоже называет низкую резистентность. По мнению автора, вирулент-
ность микроорганизмов важна в развитии заболевания, но главенствующая
роль принадлежит способности организма противостоять им. Поэтому, первостепенная задача в борьбе со стрептококкозом, и другими болезнями, вызываемыми условно-патогенными микроорганизмами, состоит в повышении
естественных защитных сил организма. Проводить это необходимо всесторонне. Возможно применение иммуномодулирующих препаратов.
Однако, некоторые исследователи (Cunningham M.W., 2000; De Herdt
P., 1994) считают, что роль стрептококков, как первопричины болезни в последнее время сильно увеличилась.
13
Зарубежные авторы (Hogan J.S. и соавт., 1993; Weiss W.P, 1997) занимались изучением влияния определённых витаминов и минералов на течение
стрептококкового мастита у коров. Было установлено, что дополнительное
внесение в рацион животных витамина Е и селена, витамина А и бетакаротина, а так же корректировка по меди и цинку, способствуют более
быстрому выздоровлению коров, по сравнению с контрольной группой, получавшей обычный рацион.
Человек тоже восприимчив. Существует большое колличество болезней у людей, которые вызываются патогенными видами стрептококков: рожа, целлюлиты, импетиго, эктима, фарингиты, ангина, отиты, скарлатина,
простатит, поражения суставов, гломерулонефрит и другие. По частоте регистрации в клиническом материале в медицинской практике, после стафилококков, патогенные стрептококки стоят на втором месте, об этом пишет в
своей работе Т.Н. Бурлакова (1988). В человеческой патологии главенствующая позиция принадлежит гемолитическим стрептококкам группы А (Str. pyogenes) (Вылегжанина Е.С., Панин А.Н., 2001; Брико Н.И. и соавт., 2002).
Ежегодно только в США наблюдается от 20 до 30 миллионон случаев инфекций, которые вызываются патогенными стрептококками группы А (Есепенок
В.А., 1997; Lawson P.A., 2005). В течение последних лет в ряде стран наблюдается рост распространенности заболеваемости стрептококкозами животных
и людей, в 25–30% случаев приводящих к летальному исходу (Тотолян А.А.,
Беляков В.Д., 1994; Дмитриев А.В., 2004). У большинства погибших возбудитель стрептококкоза не выявлен, вследствие затруднения в диагностике заболевания, в результате чего эти пациенты не получали своевременного квалифицированного лечения (Цинзерлинг А.В., Иокагимова К.Г., 1987; Иокагимова К.Г., 1994). В своей работе Л.А. Бурова (2000) отмечает тот факт,
что значительное носительство стрептококков у обслуживающего персонала
приводит к инфицированию животных и наоборот.
Стрептококки имеют множество серовариантов. В зависимости от вида
и серогрупповой принадлежности возбудитель способен поражать различные
14
системы и органы и вызывать артрозо-артриты, маститы, менингиты, эндокардиты менингоэнцефалиты, и т.д. Из-за более крепкого иммунитета взрослые животные часто могут переносить стрептококкоз бессимптомно, при
этом в течение длительного времени быть бактерионосителями.
От серотипа возбудителя и степени его патогенности зависит и форма
стрептококкоза и его течение. Помимо этого, главенствующее место всё же
отводится состоянию иммунитета животных. Чем он выше, тем ниже опасность развития заболевания.
На данный момент известно 36 серологических групп стрептококков.
По данным А.Н. Панина (1987, 1988,1992), наиболее значимыми серогруппами в развитии заболеваний у свиней являются: В, C, D, G, L, R (1992). Патогенные штаммы Str. suis, и его серотипы 3, 4, 5, 7, 8 и 10 вызывают у взрослых свиней и поросят развитие инфекционного заболевания. Помимо этого,
выделены стрептококки серогрупп Е, Р и W, тоже являющиеся патогенными
для свиней. Развитие стрептококкозов у свиней приводит к высоким потерям
подсвинков, животных на откорме. Понижение экономического ущерба от
данного заболевания у свиней продолжает оставаться одной из важных задач,
которые стоят перед ветеринарией. По мнению A.H. Панина (1992), в свиноводческих хозяйствах необходимо проводить постоянный мониторинг за
эпизоотической обстановкой по стрептококкозам, выявлять и изучать эпизоотические штаммы.
Ещё в первой половине двадцатого века было известно, что Str. agalactiae является возбудителем мастопатии и мастита у коров. Картина мастита
может быть острой, сопровождаться лихорадкой, либо иметь более хроническое течение. Но вне зависимо от течения болезни, ввиду массового распространения мастита в стаде, наблюдается сильное понижение молочной продуктивности (Keefe G.P., 1997).
В ходе проведённых исследований на животноводческих предприятиях
США, на территории нескольких штатов, в 82% случаев субклинического и
15
клинического мастита, от коров выделяли Str. uberis (Bartlett P.C. и соавт.,
1992).
В случае циркуляции высокопатогенных штаммов стрептококков и
сильной обсеменённости среды, даже незначительные повреждения кожи
вымени могут привести к развитию мастита (Mein G.A. и соавт., 1986; Lewis
S.И соавт., 2000; Gleeson D.E. et al., 2004).
Проблемму маститов считают одной из существенных в ветеринарии.
Они встречаются повсюду, где есть крупный рогатый скот, проявляются массово и наносят огромный ущерб. Ежегодно около 25% коров болеет маститом (Bardon В.Е., Ebeid A.B., 1990).
По мнению А.А. Конопаткина, В.А. Владимирова, Н.А. Масимова,
Э.М. Мешева (1992), в откормочных комплексах крупного рогатого скота
Белгородской, Тульской, Московской областях, патогенные виды стрептококков из носовых смывов выделялись в смеси с другими энтеробактериями
у клинически здоровых телят и в чистом виде. Об ассоциативном течении заболеваний у телят пишут и зарубежные исследователи (Wetzke J. с соавт.,
1982; Marschung F., 1988; Kjelberg E., 1997). В случае массового проявления
диареи, многие исследователи склоняются к инфекционной природе болезни,
в том числе и стрептококковой (Девришов Д.А., 1989; Воронин Е.С. с соавт.,
1998; Moon H.W. с соавт., 1976; Smith H.W., 1968). Важную причину в развитии очагов ассоциаций факторных инфекций многие учёные видят в скученном содержании (Матусявичус А.П. с соавт., 1984; Панасюк Д.И., 1984; Якубовский М.В., 1989; Жаков М.С. с соавт., 1986; Петров Ю.Ф., 1986, 1994;
Абалихин Б.Г., 1979, 1993; Колесников В.И., 1995; Горохов В.В., 1996; Гудкова А.Ю., 1997, 1998 ).
По данным отечественных исследователей (Шевченко Л.В., Шевченко
А.А., Черных О.Ю., 2008; Шевченко Л.В., 2008; Черных О.Ю., 2010) на звероводческих фермах Ставропольского края, Ростовской области и Краснодарского края, среди бактериальных инфекций нутрий преобладали: колибактериоз, стрептококкоз, энтероккоковая инфекция, сальмонеллез. В хозяй16
ствах Северного Кавказа в определённые годы заболеваемость стрептококкозом составляла 7-85 %, колибактериозом - 9-76 %, сальмонеллезом - 16-52 %,
энтерококковой инфекцией - 16-58 %. Часто эти болезни протекают в ассоциации. В этих хозяйствах у молодых нутрий болезнь вызывается преимущественно S. zooepidemicus группы С и S.pneumoniae. Болезнь может протекать
остро, подостро, хронически. Проявления болезни разнообразны: серознокатаральная, а нередко и геморрагическая бронхопневмония, гепатит,
нефрит, серозно-катаральный гастроэнтерит, геморрагический гастроэнтерит.
Уровень летальности зверей высок. У взрослых самок отмечали аборты на
всех стадиях беременности.
Инфекционная патология у пушных зверей, в частности нутрий и кроликов, вызываемая бактериями семейства Enterobacteriacae, родов Streptococcus, Enterococcus, Escherichia, Salmonella достаточно подробно изучена. Исходя из полученных данных, можно говорить о их высокой восприимчивости
к большому колличеству инфекционных возбудителей (Есепенок В.А., Конопаткин А.А., Кириллов А.К., 1989, 1997; Шевченко Л.В., 2008; Шевченко
А.А., Шевченко Л.В., 2010; Черных О.Ю., 2010).
1.2. Характеристика возбудителей стрептококкоза
Впервые стрептококки обнаружил Coze Felis (1869) в крови женщины с
родильной горячкой, а в тканях при рожистом воспалении - Бильрот (1874).
При гнойных заболеваниях и сепсисе выделил их Л. Пастер (1874), позже их
описал и А.Огстон в 1881 г. В чистой культуре стрептококки изучили и идентифицировали Ф. Розенбах (1879), а затем Ф.Фелейзен в 1883 г.
На территории нашей страны ещё в 30-е годы И.А. Садовских, С.И.
Златогоров, Л.Л. Кандыба выявили, путём проведения экспериментальных
заражений, что именно Streptococcus equi является специфическим возбудителем мыта. Роль стрептококков в развитии патологии у телят впервые выявил С.Н. Вышелесский. А известный учёный М.В. Капитанаки провёл изу17
чение стрептококкоза у кур. Академик РАСХН А.Н. Панин уже много лет занимается проблемой стрептококкоза у животных. Он разработал ряд вакцин,
гипериммунных сывороток, препаратов для проведения диагностических исследований и пробиотические перпараты для конторолирования эпизоотической ситуации по стрептококкозу. Стрептококки получили название от греческого слова (streptos).
Стрептококки – большая и разнообразная группа микроорганизмов,
шаровидных или овальных, размером 0,5–2,0 мк, грамположительных, проявляющих тенденцию к расположению в виде цепочек, которые могут быть
разной длины. В случае приготовления мазков из пораженных тканей, при
микроскопии хорошо видна капсула. Спор не образуют, неподвижны. По
Международной классификации «Определителю бактерий Берджи» (Berqey's,
Mannal of Determinative Bacteriology, 1997) стрептококки относят к 17 группе
(грамположительные
кокки),
к
семейству
Streptococcoceae,
роду
Streptococcus, который охватывает почти 40 видов. Ещё в 1933 Ребекка Лэнсфилд предложила метод серологического группирования по специфическому полисахариду (С-вещество), который входит в состав клеточной стенки
(Lancefield R.С., 1962; Patterson M. J., 1996). Стрептококки, всвязи с этой
классификацией, были разделены на 21 серологическую группу. Даные серологические группы имеют различные антигенные свойства. Для их обозначения применяются латинские буквы (от А до Н и от К до Y). Некоторые
стрептококки не содержат полисахарид (С-вещество), и не могут быть идентифицированы по данной классификации (Str. pneumoniaе и др.). Другая
классификация - Гриффита, основана на различных вариантах важного фактора патогенности - М-белка. Стрептококкоз может протекать как моноинфекция, так и в виде ассоциаций.
На сегодняшний день получены подтверждения внутриклеточного
нахождения стрептококков (Bradley S.F., 1991). Такие микроорганизмы менее
подвержены воздествию антибактериальных веществ и дольше сохраняли
свою жизнеспособность (Kaplan E.L. и соавт., 2006). Пока механизмы такой
18
локализации стрептококков изучены плохо (Beaman B.L., 1998; De Herdt P.,
1994).
От больных животных чаще выделяли следующие виды стрептококков:
Str. zooepidemicus, Str. pneumoniae, Str. agalactiae, Str. faecalis, Str. pyogenes.
По данным Н.И. Брико (1995), В.А. Есепенка, А.А. Конопаткина,
А.К. Кириллова (1997), стрептококки, за исключением энтерококков, растут
только на обогащенных питательных средах (глюкоза, кровь, сыворотка), оптимальная температура 37°С. Для выделения чистой культуры лучше использовать кровяной мясо-пептонный агар, позволяющий оценить гемолитическую активность. На плотных питательных средах преимущественно появляются мелкие, нежные, круглые с ровными краями колонии величиной 1–
2 мм. Большинство видов стрептококков растет в аэробных или факультативно анаэробных условиях, а отдельные виды в строго анаэробных условиях.
В первой половине 20-го века Браун и Шоттмюллер провели дифференциацию стрептококков на 3 группы по типу гемолитической актиности на
кровяных средах: α- зеленящие, β- гемолитические, γ- негемолитические
(Starr M.P. и соавт., 1981, Бессарабов Б.Ф. с соавт., 2007). При α-гемолизе
происходит частичное разрушение гемоглобина и образование от зеленой до
буроватой (коричневой) зоны вокруг колонии, β-гемолиз приводит к полному
разрушению эритроцитов и гемоглобина, что проявляется прозрачной гемолитической зоной, при γ-гемолизе - гемолиз не проявляется. Интересно, но
некоторые виды стрептококков, такие как Str. pneumoniaе, в зависимости от
доступа кислорода могут проявлять разные гемолитические свойства.
На жидких питательных средах рост проявляется помутнением с последующим просветлением среды и выпадением нежного или зернистого
осадка (Радчук Н.А., 1991).
Биохимическая дифференциация важнейших видов стрептококков проводится по результатам испытания ферментативной активности к углеводам и
гиппурату натрия, а также к росту в питательных средах с различным содержа19
нием хлорида натрия, в молоке с 0,1%-ной метиленовой синькой при различной
температуре и рН, а для Str. рneumoniae – на чувствительность к оптохину и
тест на растворимость желчью (Брико Н.И., 2002).
Энтерококки дифференцируют по критериям Шермана: рост в средах с
6,5% хлорида натрия, рН – 9,6, в молоке, содержащем 0,1% метиленовой
синьки при температуре 10 и 45°С. В обязательном порядке проверяются
комбинированно по КАМП-тесту и ОБФ-тесту (оптохин, бацитрацин, фурацин) для более достоверного разделения серогрупп А, В и С (Есепенок В.А.,
Конопаткин А.А., Кириллов А.К., 1997). КАМП – тест, это способ определения стрептококков группы В по специфическому антигену Лэнсфилд, проявляется гидролизом гиппурата натрия, вследствие чего образуется глицин и
бензоат натрия (Smith J.P., 1979).
Общепризнанно, что стрептококки обладают значительной устойчивостью и широко распространены во внешней среде. Это необходимо учитывать в профилактической и оздоровительной работах и в пушном звероводстве, и на предприятиях, работающих с животными других видов. При нагревании до 70-80°С погибают микроорганизмы через 30 минут, при кипячении моментально, во влажном гнойном эксудате могут сохраняться до полугода. В
сухом гное сохраняются несколько месяцев, но вирулентность при этом снижается.
При нагревании пневмококков, культура погибает за 10 мин. В течение 34 недель может сохраняться во внешней среде. Пневмококки легко аутолизируются ввиду большой активности ферментов, находящихся внутри клетки. Дезинфекцию при стрептококкозе проводят 0,5% раствором формалина, 20%-ым
раствором известкового молока, препаратами, содержащими 3% активного хлора, 5% эмульсией дезонала, 4% раствором натриевой щёлочи, 4 % эмульсией
ксилонафта, 2-3% раствором фрезота, 0,3-0,5% раствором эстостерила, 0,3%
раствором диальдегида глутаровой кислоты.
20
Факторы патогенности у вирулентных штаммов рода Streptococcus
многочисленны и проявляются различно, соответственно каждому виду (Вылегжанина Е.С., Панин А.Н., 2001). Важным фактором патогенности стрептококковых бактерий является капсула, образованная гиалуроновой кислотой. Так как она аналогична гиалуроновой кислоте, что содержится в соединительной ткани, она не распознаётся как чужеродный агент, что облегчает
адгезию. Капсульную гиалуроновую кислоту, действующую антифагоцитарно, содержат Str. pyogenes, Str. equi, Str. zooepidemicus. Капсульный полисахарид, имеющийся у Str. pneumoniae, Str. bovis, Str. suis, препятствует фагоцитозу и является фактором вирулентности.
Адгезивные структуры, выявляемые по фактору адгезивности (липотейхоевые кислоты, которые покрывают фимбрии) отмечены у Str. pyogenеs,
Str. agalactiae. Важную роль в процессе адгезии так же играют гиалуронидаза,
стрептокиназа, стрептодорназа. М-протеин (от англ. Mukoid, что значит слизистый), действующий антифагоцитарно и усиливающий воспалительный
процесс, имеется у Str. pyogenеs, Str. agalactiae. Действие М-белка напрвлено
либо непосредственно на фагоциты, либо на маскировку рецепторов для опсонинов и компонентов комплимента. Производится это путём адсорбции
фибрина, фибриногена. Гликопротеины пневмококков усиливают инвазивность возбудителя.
Патогенный Str. faecalis содержит гемолизины: кислоустойчивый
стрептолизин О (чувствительный к кислороду), является летальным для лабораторных животных. В анаэробных условиях он проявляет себя как гемолизин; стрептолизин S (устойчивый к кислороду) вызывает на кровяных средах поверхностный гемолиз; пневмолизин, обладающий дермонекротической
активностью; плазмидокодированный гемолизин.
Важным фактором патогенности является С5а-пептидаза. Данный фермент инактивирует С5а-компонент комплемента, который является хемоаттрактантом.
21
Str. pyogenеs, Str. dysagalactiae, Str. equisimilis имеют гиалуронидазу,
способствующую разрушению соединительной ткани и инвазии возбудителя.
Фибринолизин
обнаруживают
у
Str.
pyogenеs,
Str. dysagalactiae,
Str. equisimilis, а также у стрептококков группы G. Нейраминидазу синтезируют Str. dysagalactiae и пневмококки. Дезоксирибонуклеазу (разрушитель
клеток в стрептококковом гное) синтезируют Str. pyogenes, Str. dysagalactiae,
Str. equisimilis, а также стрептококки группы G. У Str. pyogenes и стрептококков группы G имеются эритрогенные токсины с пирогенным действием, ответственные за летальный шок.
Исходя из данных А.А. Конопаткина и соавт. (1993), в откормочных
комплексах крупного рогатого скота Белгородской, Тульской, Московской
областей, стрептококки, относящиеся к патогенным видам, выделялись в
смеси с другими энтеробактериями при проведении смывов из носовой полости у клинически здоровых телят в среднем в хозяйствах - 38,8%; из носовых
смывов больных телят - 62,9%, легких - 59,3%, лимфоузлов - 49,2%, селезенки - 30,7%, суставной жидкости - 17,2%, печени - 8,1%, почек - 19,5%, крови
- 32,5%. В чистом виде стрептококки у телят выделяли из легких- 17,8%, из
крови - 13,1%, из суставной жидкости - 11,8%, из селезенки - 5,6%, из почек 9,7% случаях. От павших животных и вынужденно убитых удавалось выделить культуру через 1- 5, 10- 20, 60- 80 и 90- 120 дней после поступления в
откормочные комплексы из проб легких в 50,0 - 60,0%, 60,0- 66,2%, 65,2 72,9% и 66,2 - 70,8% случаев. Выделяли стрептококки штаммов Str. agalactiae
в 38,7%, Str. dysagalactiae и Str. zooepidemicus в 53,2%, Str. faecalies в 80,0%
случаев.
Обнаруживаются стрептококки у клинически здоровых животных на коже, слизистых оболочках пищеварительного тракта, дыхательных путей, половых органов. По причине несоблюдения зоотехнических нормативов по содержанию и кормлению коров в период беременности и после родов, бактерионосительство стрептококков переходит в клинически выраженные заболевания –
22
развиваются маститы и эндометриты, что неминуемо приводит к понижению
молочной продуктивности и увеличению сервис-периода (Ивченко В.М.,
1991; Турченко А.Н., 1999; Шевченко А.А. и соавт., 2009). Профилактика бактериальных маститов у коров способствует сохранению молочной продуктивности и высокой экономической эффективности предприятий (Oliver S.P с соавт.,
1992).
На предприятиях Северного Кавказа у нутрий выделялись следующие
культуры:
стрептококки
-
Streptococcus
pneumoniae,
Streptococcus
zooepidemicus группы С, эшерихии - Escherichia coli серогруппы 01 и 055,
сальмонеллы
-
Salmonella
typhimurium,
энтерококковой
инфекции
-
Enterococcus faecalis (Шевченко Л.В., Шевченко А.А., Черных О.Ю., 2008;
Шевченко Л.В., 2008; Черных О.Ю., 2010).
Исходя из вышесказанного можно сделать вывод, что из-за существования
большого видового и серогруппового разнообразия культур, слабости или невыраженности иммунной защиты, восприимчивости многих видов животных,
эпизоотическая ситуация плохо поддаётся контролю. Следовательно, попрежнему является актуальной проблема изучения отдельных серологических групп и видов стрептококков, разработки методик для их идентификации, и средств для профилактики и борьбы с ними.
1.3. Клинические симптомы и патологоанатомические изменения
при стрептококкозе
Патогенные
виды микроорганизмов рода Streptococcus повсеместно
распространены в природе и вызывают стрептококкоз у животных. Развитие
заболевания может происходить и эндогенно (аутоинфекция), в случае понижения естественной резистентности, и экзогенно – при попадании стрептококков из вне на чувствительные органы и ткани. По данным исследователей
(Конопаткин А.А. с соавт., 1992), течение болезни может быть сверхострым,
острым, подострым и хроническим. У заболевших отмечается вялость, по23
вышение температуры тела, снижение или отсутствие аппетита, гиперемия
слизистых, выделение катарального экссудата из носовой полости, появление
кашля. Развиваютя симптомы поражения органов желудочно-кишечного
тракта, дыхание учащается. Наиболее выраженной была лихорадка у телят
при заражении их стрептококками группы D и С. Гибель животных происходила от септицемии на 4- 6 день после заражения, и сопровождалась выраженными признаками одышки и сердечно-сосудистой недостаточности.
У животных с острой формой стрептококкоза регистрируют высокую
температуру тела, поверхностное дыхание, катарально-гнойные истечения из
носовой полости, обильное слезотечение, полное отсутствие аппетита. У недавно родившихся телят отмечают воспаление пупочного канатика. При этом
из него выделяется гнойный, зловонный экссудат. При нарастающей слабости животные погибают с выраженной картиной септицемии спустя один два дня. При вскрытии находят гнойно-фибринозный полиартирит, а так же
множественные абсцессы в почках, головном мозге, лимфатических узлах,
печени.
Подострое течение клинически проявляется огромным количеством самых
разнообразных симптомов из-за включения в инфекционный процесс секундарной микрофлоры, поэтому возникает смешанная инфекция, при которой
поражаются респираторные органы, суставы, центральная нервная система,
желудочно-кишечный тракт (Жаков М.С.,1992). В брюшной полости при патологоанатомическом вскрытии выявляют геморрагический экссудат, печень
увеличена, селезёнка увеличена и отёчна, находят кровоизлияния на слизистой оболочке сычуга, отмечается отёк всех органов. Находят спайки сердечной сумки и плевры. В легких – гнойники, уплотнения. В суставной сумке
находят скопления фибринозной массы, отмечается изъязвление хрящевой
ткани.
Хроническое течение отмечается чаще у более взрослых животных.
Это ягнята и поросята старше 1 - 2 месяцев, жеребята и телята после 2 - 4 месяцев. Заболевание характеризуется перемежающейся лихорадкой, периоди24
ческой диарей, пневмониями различного проявления. На теле отмечается
большое количество абсцессов.
Формы болезни регистрируются в зависимости от типов поражения:
кишечная, легочная, септическая, суставная, кожная, однако чаще встречается смешанная форма, при которой отмечаются различные виды поражений.
Клинические признаки стрептококкоза среди нутрий отличаются от
стрептококкоза у животных других видов (Илиеш В.Д., Есепенок В.А., Клепинина А.Е., 1990; Есепенок В.А., 1991). Ряд авторов установили, что стрептококкозом болеют в основном взрослые нутрии (Абовян А.В., 1979; Ахмедов Ч.А., 1990; Клепинина А.Е., 1991; Есепенок В.А., 1998), другие – всех
возрастных групп (Терехов В.И., Малюхова Е.В., 2005). Авторами выявлено,
что стрептококкоз у нутрий протекает остро и хронически. Болезнь проявляется рядом общих признаков: вялость, апатия, угнетение, отсутствие аппетита, и специфичных: поражение органов дыхания, глаз, печени, суставов, желудочно-кишечного тракта, параличами конечностей, у самок выпадение
матки, метриты, аборты до 80%.
По данным Л.В. Шевченко (2008), О.Ю. Черных (2010) у больных
стрептококкозом нутрий происходит увеличение температуры тела до 40,141,0°С, при норме - 36,5-38,5ºС. Пульс учащался до 165-211 ударов в минуту,
при норме - 65-85. Частота дыхательных движений увеличивалась до 65-68 за
минуту, при норме - 50-60. Помимо перечисленного, отмечали у нутрий и другие симптомы: понижение аппетита, диарею, угнетение, в области хвоста
шерсть была мокрая, испачканная фекалиями. Животные отказывались от корма, лежли.
Описывая стрептококкоз пушных зверей, исследователи отмечают, что
болезнь клинически может проявляться пневмонией, плевритом, эндокардитом,
перитонитом, эндометритом, маститом, воспалением суставов, абсцессами и заканчиваться сепсисом.
25
Впервые патогенные стрептококки от нутрий были выделены в Канаде.
Первым в России стрептококкоз нутрий и голубей описал (Абовян А.В.,
1979, 1984), в последующем изучали и другие исследователи (Шевченко
Л.В., 2008; Шевченко А.А. и соавт., 2009; Черных О.Ю., 2010).
Р.А. Кадымов и соавт. (1992), изучая стрептококкоз в течение ряда лет
в «Караязском» зверосовхозе Азербайджана установили, что в большинстве
случаев стрептококкоз протекает одновременно с другими инфекциями: колибактериозом, стафилококкозом, пастереллезом. При ассоциативном течении инфекции постановка диагноза была затруднена.
Доказано, что патогенные для нутрий стрептококки вызывают стрептококкоз и у лабораторных животных. При экспериментальном заражении у
морских свинок развивается хронический гепатит, а у белых мышей – парез
задних конечностей, посинение хвоста, некроз тканей в месте введения культуры и смерть с признаками сепсиса (Белецкая Л.В., 1978; Беляков В.Л.,1978;
Есепенок В.А., Горбатова Х.С., 2006).
По данным Л.В. Шевченко (2008), О.Ю. Черных (2010) у нутрий, которые были больны стрептококкозом, в 74% случаев был выявлен гепатит.
При вскрытии щенков-сосунов были установлены признаки: геморрагический диатез (18%), спленит и спленомегалия (4%), гепатит (24%), серознокатаральная и геморрагическая пневмония (28%), нефрит (9%), кровоизлияния на эпи- и эндокарде (10%), серозно-катаральный и геморрагический гастроэнтерит (7%).
Патологоанатомические изменения у молодняка (2-6 мес.): геморрагический диатез, спленит и спленомегалия, нефрит, артриты, гепатит, серознокатаральный и геморрагический гастроэнтерит, серозно-катаральная и геморрагическая пневмония. При вскрытии взрослых животных находили признаки нефрита, спленита и спленомегалии, серозно-катаральной и геморрагической
пневмонии,
геморрагического
26
диатеза,
артрита,
серозно-
катарального и геморрагического гастроэнтерита, кровоизлияния на эпи- и
эндокарде.
Следовательно, клиническое проявление и патологоанатомические изменения при стрептококкозе животных могут быть очень разнообразными.
Это приводит к тому, что возникают определённые трудности для своевременной и адекватной диагностики при данном заболевании.
1.4. Эпизоотический процесс при стрептококкозе
Восприимчивыми к стрептококкозу являются животных всех видов.
Подвержеными болезни являются даже птицы, рыбы и т.д. Взрослые животные являются менее восприимчивыми. Причиной этому служит более крепкая иммунная защита. Чаще болезнь выявляют у ягнят и телят, реже - у поросят и жеребят.
Молодняк животных заражается от матерей, контактируя с ними, получая
инфицированное молоко, после чего сам становится источником возбудителя
инфекции для поголовья фермы (Nickerson S.C. и соавт., 1995 г.), что приводит
к развитию энзоотии. Болезнь проявляется развитием септицемии, поражением
легочной ткани (лобулярная пневмония) и органов пищеварительного тракта
(Панин А.Н., Малик Е.В., 1991; Радчук Н.А. и соавт., 1991; Черных О.Ю.,
2010).
Распространение патогенных стрептококков в природе очень широко.
(Есепенок В.А., Рыбалтовский В.О., Буй Тхань Тху, 1989; Панин А.Н., 1991;
Шевченко А.А. и соавт., 2009). Они могут обнаруживаться на коже и слизистых оболочках у клинически здоровых животных, без признаков заболевания. Следовательно, патогенные представители рода Streptococcus являются
частью нормальной микрофлоры, населяющей органы и ткани животных и
человека.
По данным О.Ю. Черных (2010) Широкое распространение заболевания возникает из-за постоянного обитания данных микроорганизмов в ки27
шечнике и органах респираторного тракта здоровых животных, а так же человека, и вследствие заражения окружающей среды от больных и бактерионосителей.
Проявляться стрептококкоз может как спорадически, отдельными случаями, так и возникновением эпизоотических вспышек. От плотности размещения молодняка, его количества, уровня нарушения зоотехнических норм
содержания беременных животных (кормление и содержание) зависит интенсивность эпизоотического процесса. В качестве способствующих факторов
принято считать смешанные инфекции, перегруппировку скота, нарушение
микробиоценоза в организме животных. (Конопаткин А.А., 1993).
Больные стрептококкозом животные и клинически здоровые – стрептококконосители, постоянно выделяя возбудителя из организма в окружающее
себя пространство, являются источником инфекции. Выделение из организма
стрептококков происходит с мочой, гнойным экссудатом (абсцессы, воспалившаяся пуповина), калом, истечениями из носовой полости и половых органов, молоком, мокротой при кашле и чихании, что приводит к инфицированию окружающей среды.
Заражение животных может осуществляться несколькими путями:
аэрогенно, алиментарно, при контакте и вертикально. Пушные звери, кролики, морские свинки также восприимчивы к патогенным стрептококкам. Были
изучены биохимические, а так же культуральные свойства стрептококков, их
патогенность, изменчивость и антигенная структура (Шевченко Л.В., 2008;
Черных О.Ю., 2010).
Звери в основном заражаются через инфицированный стрептококками
корм. Скармливание его приводит к эпизоотической вспышке болезни, охватывающей в короткий промежуток времени значительное число животных с
высокой летальностью. Однако, единичные случаи заболевания тоже возможны.
Факторами передачи стрептококков в звероводстве могут быть также
контаминированные возбудителем молоко, корнеплоды, овощи, вода, под28
стилочный материал, инвентарь, клетки, домики (Шевченко А.А. и соавт.,
2009).
При стрептококкозе нутрий чаще выделяется Str. zooepidemicus группы
С, вызывающий поражение респираторного и кишечного трактов, суставов
(Клепинина А.Е., 1987; Клепинина А.Е., 1991; Кадымов Р.А. и соавт., 1992;
Есепенок В.А., 1998). В то же время А.В. Абовян (1979) от нутрий изолировал Str. myopatamas, Р.А. Кадымов и соавт., (1992) – стрептококки серогрупп
С,
В
и
нетипированные,
В.И. Терехов,
Е.В.
Малюхова
(2005)-
Str. zooepidemicus, Str. equisimilis, группы D (Str. bovis) и энтерококки.
В Белгородской области, в откормочных хозяйствах, при выращивании
телят на откорм, среди животных, возраст которых не превышал 150-дней,
было отмечено три подъема заболеваемости респираторными болезнями. Патологии были вызваны смешанными инфекциями с патогенными стрептококками, пики подъёмов приходились на 5 - 25, 60 - 80 и 90 - 120 день после
окончания комплектования секций. При первой вспышке, заболеваемость
телят была более 60%, летальность при этом - около 15 - 17%. При втором и
третьем подъеме заболеваемости, которая составила 23%, летальность была
23,5 - 31,7%. Болезнь чаще протекала длительно и нередко переходила в хроническую форму у тех телят, заболевание которых приходилось на 60-80
день после завершения комплектования групп.
1.5. Диагностика стрептококкоза
Диагноз на стрептококкоз ставится комплексно. Основывается он на
результатах эпизоотологического обследования, клинических симптомов, патологоанатомических изменений. Только по результатам лабораторных исследований ставится окончательный диагноз.
Важное место в постановке диагноза занимает патологоанатомическое
обследование. У павших животных при остором и сверхостром течении бо29
лезни регистрируется гиперплазия лимфатических узлов, инфильтрация подкожной клетчатки кровяной жидкостью. Отмечаются так же точечные кровоизлияния на слизистых и серозных оболочках в множественном колличестве.
На сердечной сумке, плевре, сальнике находят наложения фибрина.
Внутренние органы отёчны. Печень увеличена. Цвет её от жёлтокоричневого до красного. Легкие отечны, в почках находят множественные
кровоизлияния, преимущественно в корковом слое. Характерным патологоанатомическим признаком является гиперплазия селезенки. Она имеет яркий
чёрно-вишнёвый цвет. Помимо цвета, селезёнка имеет плотную, каучукоподобную консистенцию, её капсула напряжена, края закруглённые. Нередко
обнаруживается выпот в грудной и брюшной полости.
Патологоанатомические изменения при подостром и хроническом течении болезни могут быть разнообразными. Они зависят от формы и течения
заболевания, но главными остаются изменения в селезёнке (Жаков
М.С.,1992). Отмечается гипиремия слизистых оболочек, в том числе и верхних дыхательных путей. В лёгких - признаки гепатизации, кровоизлияния
под эпикардом, дряблость миокарда. При артритах находят изъязвление поверхности воспалённых суставов.
Окончательный диагноз ставят только после проведения лабораторных
исследований, учитывая данные предварительного диагноза. Лабораторная
диагностика включает бактериоскопические, бактериологические, биологические и серологические исследования. Для проведения лабораторных исследований от больных и павших животных берётся патологический материал.
Бактериоскопическое исследование включает микроскопию мазковотпечатков, которые готовят из поражённых органов. Для проведения бактериологического исследования проводят высев микроорганизмов из патологического материала на питательные среды, и выделение чистой культуры с
последующей дифференциацией. Для проведения биологичесих исследований используются лабораторные животные. Последним этапом в проведении
лабораторной диагностики является серологическая типизация.
30
Лабораторный диагноз на стрептококкоз считается установленным при
выделении из исследуемого патологического материала культуры рода Streptococcus, соответствующей серологической группы, патогенной для белых
мышей, согласно «Методическим указаниям по лабораторной диагностике
стрептококкоза животных» (1990), «Лабораторная диагностика инфекционных болезней животных» (учебное пособие) (А.А. Шевченко с соавт., 2009;
2013).
1.6. Иммунитет и специфическая профилактика стрептококкоза
Иммунитет при стрептококкозе подразделяют на постинфекционный и
поствакцинальный. При всех видах иммунитета в организме образуются антитела против возбудителя или продуктов его метаболизма, а также возникают и дифференцируются иммунокомпетентные клетки, включая Т- и Влимфоциты (Шевченко Л.В., 2008; Черных О.Ю., 2010).
По мнению У.Д. Герберта (1984), большое значение для защиты организма от стрептококков имеют опсонины. Гладкая поверхность капсулы у
стрептококков препятствует фагоцитам поглощать их. Только тогда, когда
благодаря действию антител, поверхность этих бактерий меняется, приобретает шероховатость, фагоциты могут активно захватывать их и уничтожать.
Некапсулированные диплококки (шероховатая форма) могут фагоцитироваться без участия специфических антител. Стимуляция фагоцитов антителами выражается не только в изменении поверхности бактерий, но и в адсорбции цитофильных антител на фагоцитах, что способствует хемотаксису
и последующему поглощению возбудителя фагоцитом. Вирулентные гемолитические стрептококки могут фагоцитироваться в крови полиморфноядерными лейкоцитами. Однако в фагоцитах они уничтожаются неполностью и
снова высвобождаются из них. Такая резистентность стрептококков обуслов-
31
лена М-белками, которые у каждого типа стрептококков имеют разную
структуру.
Я.Е. Коляков (1986) тоже считает, что своеобразие противострептококковой иммунной защиты связано с тем, что клеточная стенка стрептококков
обладает активной токсической субстанцией (М-протеин) и нетоксическим
компонентом (гиалуроновая кислота стрептококка группы А), активно подавляющими защитные механизмы организма.
Противоинфекционную защиту организма обеспечивают неспецифические факторы (анатомо-физиологические), а так же органы и ткани иммунной
системы, осуществляющие иммунологическую функцию. Однако неспецифические механизмы и факторы играют большую роль в способности организма животных сопротивляться действию патогенных микроорганизмов. К
ним относятся: бактерицидность секретов, слизистые и кожные барьеры,
комплемент, лизоцим, и др. (Герберт У.Д., 1984; Есепенок В.А., 1993). По их
мнению, в течение латентного периода, неспецифические субстанции организма и являются теми факторами, которые предотвращают прогрессирование инфекционного процесса. Следовательно, очень важно изучать противострептококковый иммунитет и, на основании полученных результатов, разрабатывать защитные препараты против данной инфекционной болезни животных.
Для проведения специфической профилактики стрептококкоза крупного рогатого скота на территории нашей страны вакцина не выпускается. Ранее были разработаны и предложены исследователями инактивированные
вакцины: формолвакцина против стрептококкоза телят, ягнят, поросят (Чепуров К.П., 1943); поливалентная вакцина против диплококковой инфекции,
сальмонеллеза и пастереллёза свиней (Малявин А.Г.,1956). Формолвакцина
против стрептококкоза телят, ягнят, поросят содержит инактивированную
культуру стрептококков серологической группы D. Вакцина применяется для
профилактической иммунизации против энтерококковой инфекции соответствующих видов животных в хозяйствах, где регистрируется возбудитель En32
terococcus faecalis. А.Н. Панин в 2002 году запатентовал разработанную им
вакцину, содержащую стрептококки серогрупп В, Д и С.
С помощью данных вакцин нельзя защитить животных от стрептококкоза крупного рогатого скота, так как в них другие виды микроорганизмов.
В.А. Есепёнок (1998) разработал несколько инактивированных вакцин
и предложил их для ветеринарной практики: против стрептококкоза и пастереллеза нутрий, против стрептококкоза нутрий, против стрептококкоза крупного рогатого скота. Особый интерес представляет вакцина против стрептококкоза крупного рогатого скота, которая содержит антиген - штамм Str.
zooepidemicus, чаще выделяемый и вызывающий заболевание у птиц. Разработанная вакцина испытывалась в производственных условиях в России. По
мнению автора, применение данного биопрепарата позволяет оздоровить хозяйства, в которых регистрируется возбудитель стрептококкоза штамм Str.
zooepidemicus.
В нашей стране исследователями разработаны и применяются различные инактивированные вакцины, в том числе ассоциированные вакцины против пастереллеза и вирусной геморрагической болезни кроликов, против вирусной геморрагической болезни кроликов, против стрептококкоза, колибактериоза, сальмонеллеза и энтерококковой инфекции нутрий (Шевченко А.А.,
1993; 1994; 1995; Шевченко Л.В., 2008; Черных О.Ю., 2010).
На территории нашей страны, для проведения специфической профилактики инфекционных болезней у различных видов животных, и птиц
нашли применение живые и инактивированные вакцины. В большей мере
применяются инактивированные вакцины, так как они содержат убитых возбудителей инфекционных болезней, поэтому безопасны для животных.
Вакцина – биологический препарат, содержащий ослабленные или убитые патогенные микроорганизмы или продукты их жизнедеятельности, используемые для создания иммунитета к инфекционным болезням.
Все вакцины по применению делятся на противобактериальные, противогрибковые, противовирусные; по способности микроорганизмов к размно33
жению – живые, инактивированные, в том числе анатоксины; по сырьевым
компонентам – корпускулярные (у вирусов цельновирионные), субъединичные, вакцины из анатоксинов.
В практике ветеринарной медицины широко применяются корпускулярные инактивированные вакцины, которые зарекомендовали себя с положительной стороны. Технология изготовления корпускулярных инактивированных вакцин включает различные этапы: получение производственных
штаммов; подбор питательной среды для культивирования микроорганизмов;
получение матровой расплодки; выращивание микроорганизмов; получение
биосырья; инактивирование бакмассы; концентрирование биоматериала;
стандартизация баксырья; адсорбирование антигена на адъюванте; фасовка
вакцины и контроль вакцины (Тутов И.К., Ситьков В.И., 1997; Алимов А.М.,
1999; Шевченко Л.В., 2008; Шевченко А.А. и соавт., 2009; Черных О.Ю., 2010).
Для выбора производственных штаммов при изготовлении вакцин
необходимо включать наиболее часто выделяемые серотипы микроорганизмов. Поэтому вакцина, которая могла бы быть эффективна против всех сероваров возбудителя, должна была бы содержать большинство из них.
Главным требованием к производственным штаммам является высокая
антигенность и иммуногенность. Антигенность штаммов оценивается путем
определения титра антител в кровяной сыворотке у восприимчивых животных через конкретный период после заражения их исследуемой кльтурой
возбудителя. Антигеннось штаммов оценивают в серологических реакциях,
постановку которых ведут в сравнении с референс-штаммами и иммунными
специфическими сыворотками к ним.
Иммуногенность штаммов оценивают исходя из устойчивости вакцинированных животных к заражению летальной дозой исследуемого штамма,
или по повышению титра специфических антител в сыворотке крови.
О хорошей иммуногенности говорят, если защита составляет не менее
чем 80% привитых животных, при гибели до 80% интактных.
34
Производственные штаммы должны сохранять свои основные свойства в
течение 12 месяцев без существенного снижения уровня антител на их введение.
Безвредность производственных штаммов проверяют по выраженности
реакции у лабораторных и естественно восприимчивых животных на
3–5-кратное увеличение иммунизирующей дозы.
Производственные штаммы микроорганизмов должны обладать присущими
для
них
свойствами
в
морфологическом
и
культурально-
биохимическом, иммуногенном, антигенном, вирулентном отношении. Возраст штаммов засеваемой культуры зависит от вида микроба и может составлять 3-5, 12-14, 24 и более ч.
При работе со штаммами конкретных серотипов микроорганизмов имеются свои особенности, которые излагаются в соответствующей документации.
Для выращивания культур микроорганизмов и в лабораторных, а так
же и в промышленных условиях применяют различные питательные среды. По назначению они подразделяются на простые, очень часто используемые для выращивания микроорганизмов, кроме этого существуют специальные, а так же производственные среды.
Перечисленные варианты питательных сред должны отвечать необходимымм требованиям: стерильность, оптимальная рН, достаточная влажность, содержание необходимых для роста питательных веществ (источники
азота, углеродного питания, ростовые вещества, минеральные элементы) и
др. (Шевченко Л.В., 2008; Шевченко А.А. и соавт., 2009; Черных О.Ю., 2010).
Обычные простые питательные среды готовятся на основе мясной
воды, а также перевара Хоттингера, растительных гидролизатов. Наибольшее применение нашли обычные питательные среды (простые). К ним относятса: мясо-пептонный агар (МПА), мясо-пептонный бульон (МПБ), полужидкий мясо-пептонный агар (ПЖМПА).
35
Специальные питательные среды весьма многообразны и используются для выращивания особых групп микроорганизмов, плохо, или совсем
не растущих на простых питательных средах. Исходя из поставленных задач и отдельных этапов исследований, принято дифференцировать специальные питательные среды на: среды обогащения, консервирующие, дифференциально-диагностические, элективные (Мертвецов Н.П., 1987; Волков
М.Ю., 2006).
В качестве химических индикаторов применяют растворы бромтимолового синего, индикатор Андреде с обесцвеченным щелочью фуксином
и др. Примерами являются среды с углеводами и спиртами для определения сахаролитических свойств, среды с мочевиной, среды для определения
индолообразования, протеолитической активности, среды для анаэробов и др. (Тутов И.К., Ситьков В.И., 1997).
Производственные питательные среды являются также искусственными средами, но в отличие от вышеперечисленных, они применяются в условиях промышленного производства для выращивания производственных
штаммов микробов в больших объемах с целью получения из них микробной
биомассы или продуктов обмена. Большинство производственных питательных сред приготавливают из белковых гидролизатов и экстрактов растительного и животного происхождения.
Для получения матровой расплодки штаммов микроорганизмов проводят
посевы во флаконы емкостью 200-250 см3, заполненные по 100-150 мл производственной питательной средой. После из них в бутыли, объём которых 320 литров, производят высевы. При достаточном накоплении микроорганизмов,
культуру микробов, полученную при культивировании в таких питательных
средах, используют как матровую для дальнейшего производственного высева
ее в необходимое количество стеклянных баллонов или в реакторы. Доза посева
для получения производственной матровой расплодки составляет 8-10% к объему. Матровые расплодки культуры микроорганизмов проверяются на сохранность типичных тинкториальных, морфологических, антигенных, иммуноген36
ных, культурально-биохимических свойств, так же на отсутствие в них посторонних микроорганизмов (Мертвецов Н.П., 1987; Волков М.Ю., 2006; Шевченко Л.В., 2008; Шевченко А.А. и соавт., 2009; Черных О.Ю., 2010).
Выращивание биологической культуры и получение из неё сырья при
производстве корпускулярных вакцин используют в зависимости от этапов
технологической схемы производства биопрепаратов одним из методов: поверхностного; непрерывного культивирования или хемостатного; периодического; глубинного.
Для каждого вида микроорганизмов необходима индивидуальная питательная среда и свои параметры культивирования. Для аэробов требуется
аэрация питательной среды при выращивании, для анаэробов – полное отсутствие кислорода в питательной среде. Оптимальная температура выращивания для большинства видов микроорганизмов 37ºС. В процессе культивирования микроорганизмов важно получить бактерии с завершенным биосинтезом полноценных клеточных структур и наличием резервных веществ, что
определяет естественную устойчивость микроорганизмов к дальнейшим технологическим этапам процесса изготовления (Ярцев М.Я., 1996).
Производственное культивирование видов микроорганизмов осуществляется глубинным способом в реакторах или в стеклянных баллонах емкостью 3-20 литров.
Баллонный способ культивирования заключается в том, что матровые и
производственные расплодки культуры возбудителя каждого серологического
типа выращиваются в 20-литровых стеклянных баллонах с 14-16 литрами
определенной питательной среды при температуре 37ºС в течение 1-3 сут.
Контролем типичного роста микроорганизмов являются отобранные пробы их
культур через 1-3 сут выращивания и просмотр их на наличие, накопление
микробных клеток в 1 мл по оптическому стандарту мутности и отсутствие
контаминации культуры посторонней микрофлорой путем микроскопии.
Культура считается пригодной и может быть использована для изготовления
вакцины при оптимальной концентрации микробных клеток в 1 мл и полном
37
отсутствии в ней посторонних микроорганизмов (Тутов И.К., Ситьков В.И.,
1997; Шевченко А.А., Шевченко Л.В., 2002; 2005; Шевченко Л.В., 2008; Шевченко А.А. и соавт., 2009; Черных О.Ю., 2010).
Одним из важных моментом в технологии изготовления инактивированных вакцин является инактивирование (подавление патогенности) микробов.
При инактивировании геномы культур микроорганизмов должны быть переведены в неактивное состояние или разрушены. Но при этом главным условием является сохранение у них иммуногенности. Для этого необходимо использовать такие инактивирующие вещества, которые бы не нарушали детерминанты полипептидных цепей, обеспечивающих образование специфических
антител и активирующих функцию лимфоцитов Тц-киллеров. С этой целью
многие исследователи широко используют формалин, фенол, гидроксиламин,
этанол, β-пропилактон, УФ- и гамма-облучение, температуру, теотропин, азиридины, димеры этиленимина и др. (Шевченко А.А., 1994; Шевченко А.А.,
Шевченко Л.В., 2002; 2005; Шевченко Л.В., Шевченко А.А., 2006; Тутов И.К.,
Ситьков В.И., 1997; Шевченко Л.В., 2008; Шевченко А.А. и соавт., 2009; Черных О.Ю., 2010).
Формалин (Solutio Formaldehydi) – стандартный водный раствор формальдегида, содержание которого составляет 36,0-37,3%. Помимо него в
формалин входит метиловый спирт (6-15%), муравьиная кислота (0,020,04%). Формалин прозрачен, не имеет цвета, с характерным запахом формальдегида. Плотность формалина 1,1109-1,0764 (18ºС), рН 2,8-4,0. Противомикробное действие формальдегида основано на его взаимодействии с
протоплазмой, что ведет к коагуляции и денатурации белка бактериальной
клетки. Формалин убивает споровые, неспорообразующие (вегетативные)
формы микроорганизмы, грибы, вирусы. Сибиреязвенные споры при воздействии 4%-ного раствора муравьиного альдегида при температуре 30ºС гибнут
за 3 ч.
В процессе производства большого количества бактериальных и вирусных вакцин, и в России, и за границей наиболее часто применяется в качестве
38
инактиватора формалин (Романов Е.А. и соавт., 2000; Белова Н.Б., 2005; Элизбарашвили Э.И., Рахманина М.М., Уласов В.И., 2006), так как он способен
инактивировать микробную клетку и микробные токсины и превращать их в
анатоксины (Шевченко А.А., Шевченко Л.В., 2002; 2005; Шевченко Л.В.,
Шевченко А.А., 2006; Шевченко Л.В., 2008; Шевченко А.А. и соавт., 2009;
Черных О.Ю., 2010).
Инактивирование культуры разных видов микроорганизмов осуществляют путем добавления к ней формалина с содержанием формальдегида 36%
и выдерживания ее при температурном режиме, равном 37°С (±0,5°С) в течение 15 и более суток. При этом концентрация формалина в препарате исследователями подбирается индивидуально и должна быть не более 0,4-0,5%.
Отечественные исследователи ВНИиТИБП (Ярцев М.Я., 1996; Бушуева
Н.Б. и соавт., 1996) разработали эффективный метод инактивирования сальмонелл в процессе изготовления вакцины против сальмонеллеза телят. Он
основан на совместном действии определённого температурного режима
(выше 37°С) и формалина. Данный метод позволил уменьшить количество
вводимого в бактериальную культуру формалина в 3 раза, а так же уменьшить период инактивации микроорганизма по сравнению с традиционной
технологией в 2 раза. Используя данные о механизме синергического действия формальдегида (ФА) и ультрафиолетового (УФ) излучения в сублетальных дозах и концентрациях на жизнедеятелность микроорганизмов. М.Я.
Ярцев и соавторы (1998), создали новые, более щадящие режимы для инактивации пастерелл. Они основывались на действии веществ, имеющих разную физико-химическую природу: ФА и температуры (более 37°С); ФА и
УФ-излучения.
Эти
режимы
инактивации
вирулентного
штамма
712 Р. multocida позволили в 2-2,5 раза увеличить иммуногенность инактивированных культур пастерелл, при этом количество вводимого в бактериальную культуру формальдегида было уменьшено в 5-7 раз и сокращено время
инактивации с 24ч (по прежней методике) до 4-6 ч при изготовлении концентрированной формолквасцовой вакцины против пастереллеза поросят.
39
Российские исследователи в процессе создания инактивированных вакцин для борьбы с бактериальными инфекционными болезнями нутрий (Л.В.
Шевченко, А.А. Шевченко, 2006; Л.В. Шевченко, 2008; А.А. Шевченко и соавт., 2009; О.Ю. Черных, 2010) скорректировали режимы инактивации возбудителей стрептококкоза, сальмонеллеза, колибактериоза и энтерококковой
инфекции, которые при температуре термостата в течении 72-120 часов позволяли полностью подавить патогенность, но при этом сохранить высокую иммуногенность.
Вакцины для медицинских целей делают более очищенными от посторонних белков питательной среды и могут быть сконцентрированы центрифугированием или фильтрованием через мембранные фильтры и отмыты от
белка питательной среды.
Вакцины для ветеринарной медицины не нуждаются в столь тщательной очистке и могут вводиться вместе с белком питательной среды, не вызывая при этом побочных реакций (Тутов И.К., Ситьков В.И., 1997).
В дальнейшем проводят депонирование (адсорбирование) антигена
биосырья адъювантом. Адъюванты (adjuvans – помогающий, полезный) –
вещества, создающие депо антигена в месте введения, замедляющие его резорбцию (всасывание), что значительно усиливает иммунный ответ.
Значительный вклад в изучение адъювантов и иммуномодуляторов внёс
Н.П. Мертвецов (1987). Он изучил стимулирование гуморального и клеточного иммунитета при добавлении к растворимому антигену адъюванта,
Фрейд изучил понятие полных и неполных адъювантов и D. Stewart-Tull
(цит. по Тутову И.К., Ситькову В.И., 1997) – получение синтетического препарата мурамилдипептида – хорошего иммуностимулятора.
Из литературных данных известно, что главное действие адъювантов –
это удержание антигена в месте его введения, образование так называемого
«депо». Поэтому, последующее постепенное освобождение антигена из такого «депо» ведёт к вторичному иммунному ответу после первичного стимулирования, обусловленного ранее освобожденной частью антигена (Мертвецов
40
Н.П., 1987; Шевченко Л.В., 2008; Шевченко А.А. и соавт., 2009; Черных О.Ю.,
2010).
Адъюванты дифференцируют по их действию. Масляные эмульсии и
минеральные сорбенты помогают лучшему поглощению антигенов макрофагами. Иные адъюванты повышают пролиферацию иммунокомпетентных
клеток и секрецию активирующих факторов (интерлейкинов), третьи адъюванты обеспечивают более интенсивную дифференциацию В- и Тлимфоцитов, способствуя появлению цитотоксических клеток и плазмоцитов.
Таким образом, механизм усиления иммунного ответа при иммунизации сорбированного или эмульгированного антигена состоит в корпускулировании такого антигена микроорганизма. Только корпускулированный антиген микроорганизма эффективно захватывается макрофагами и стимулирует образование лимфокинов, активирующих лимфоциты.
Из большого разнообразия имеющихся адъювантов лишь немногие получили широкое применение при изготовлении вакцин для животных и людей. Известные адъюванты: гидроокись алюминия (ГОА), фосфат алюминия,
масляные (суспензии), минерально-солевые, сапонины и другие, в течение
многих десятилетий применяют при производстве вакцин для увеличения
образования специфических антител и повышения активности иммунокомпетентных клеток организма (Романов Е.А. и соавт., 2000; Сергеев В.А. и соавт., 2006; Шевченко Л.В., 2008; Шевченко А.А. и соавт., 2009; Черных О.Ю.,
2010).
Адъюванты должны быть свободными от посторонних примесей и
микроорганизмов, не содержать антигены других микробов, сходные с антигенами хозяина, не обладать онкогенными, тератогенными и аллергенными
свойствами, не должны быть токсичными для миелоидных и лимфоидных
клеток организма. Адъюванты должны легко метаболизироваться в организме (Белова Н.Б., 2005).
41
Для каждого вида инактивированных вакцин должны выбираться
наиболее оптимальные адъюванты и необходимые их количества, всвязи с
биологическим препаратом.
При изготовлении ветеринарных биологических препаратов в качестве
адъювантов используют минерально-солевые, водно-масляные эмульсии, реже адъюванты на основе природных субстратов и синтетические, липосомальные, поверхностно-активные адъюванты (Мертвецов Н.П., 1987).
Из минерально-солевых адъювантов широкое распространение при изготовлении вакцин получили соли алюминия (гидроокись алюминия, фосфат
алюминия, алюмокалиевые квасцы). В ветеринарной медицине при производстве инактивированных вакцин чаще применяют в качестве адъюванта
гидрат окиси алюминия (ГОА) в виде раствора определенной концентрации
(Романов Е.А. и соавт., 2000; Белова Н.Б., 2005; Сергеев В.А. и соавт., 2006;
Шевченко Л.В., Шевченко А.А., 2006; Шевченко Л.В., 2008; Шевченко А.А. и
соавт., 2009; Черных О.Ю., 2010).
В последние годы в практике ветеринарной медицины при изготовлении вакцин всё чаще применяют адъюванты, которые изготовлены на
основе минеральных масел. При изготовлении таких адъювантов, предварительно растворенный или суспендированный в воде антиген очень тонко
диспергируют в масле. В результате получают эмульсию, когда капельки
воды с антигеном находятся в масляной фазе. Если такую эмульсию
эмульгировать в воде, содержащей гидрофильный эмульгатор (например,
твин-80), то получается водно - масляная - водная эмульсия. Исследователь
Фрейд впервые установил значительное увеличение синтеза специфических
антител при иммунизации эмульгированными антигенами. Эмульгированные вакцины животным обычно вводят внутримышечно, чтобы не было поствакцинальных реакций. Минеральное масло плохо подвергается метаболизму, поэтому капли эмульсии, с находящимся внутри них антигеном,
удерживаются в месте инъекции значительное время. После введения антиген-адъювантной эмульсии животному, в месте введения образуется грану42
лема, что и обеспечивает активность клеток иммунной системы - макрофагов и лимфоцитов (Белова Н.Б., 2005; Сергеев В.А. и соавт., 2006).
В отдельных случаях сорбированный антиген микроорганизма на гидроокиси алюминия можно также эмульгировать в масле, то есть в таких
случаях адъюванты являются комбинированными.
Кроме минерально-солевых и масляных адъювантов применяются
адъюванты из природных субстратов: простые и сложные белки, гликопротеины, пептиды, полисахариды, нуклеиновые кислоты, интерлейкины и
др. Они не создают в организме так называемое «депо» антигенов, но при
введении их в организм различными методами, такие адъюванты стимулируют антителообразование и повышают активность лимфоцитов. Такие соединения называют еще адъювантами прямого действия (Тутов И.К.,
Ситьков В.И., 1997).
Вещества, обладающие адъювантным действием, имеются в составе
разных микроорганизмов. Такими адъювантами являются О-антигены - липополисахаридные эндотоксины грамположительных бактерий. Эти антигены содержатся в каждой вакцине из микроорганизмов рода сальмонелл и
действуют как адъюванты для других антигенов ассоциированных вакцин.
К поверхностно-активным адъювантам относятся сапонины. Первый
сапонин был экстрагирован из коры южно-американского дерева Gaillaja
saponaria Molina и он уже давно используется в качестве адъюванта в ветеринарной
медицине.
Очищенный
препарат
сапонина
называется
Квил-А, он, как и другие сапонины, является гликозидом, проявляет выраженную адъювантность в малых дозах, не вызывая осложнений у животных. Недавно было установлено, что сапонин обеспечивает образование иммуностимулирующего комплекса нового типа. Он, растворяясь в воде при
критической концентрации 300 мг/л, образует мицеллы, которые благодаря
гидрофобности связывают мономерные формы поверхностных белков. В результате, при этом образуются структуры, напоминающие пчелиные соты,
43
которые обеспечивают иммуностимулирующее действие, превышающее эффективность исходных белков (Тутов И.К., Ситьков В.И., 1997).
После депонирования инактивированной бакмассы адъювантом, вакцину в стерильных условиях фасуют во флаконы емкостью от 20 до 200 см3,
закрывают их пробками из нейтральной резины, и для герметичности обкатывают алюминиевыми колпачками. На флаконы наносят этикетки с указанием биофабрики изготовителя, названия препарата, номера серии и контроля, способа его применения и дозировки. После этого препарат сдают на
контроль в биологический отдел.
Методы контроля вакцин для ветеринарных целей рекомендованы Европейской фармакопеей (1977, т. 3, изд. 1). Инактивированные вакцины проверяют по внешнему виду, цвету, на стерильность, безвредность, полноту
инактивациии, и обязательно на иммуногенность.
Для специфической профилактики колибактериоза и сальмонеллеза пушных зверей в Российской Федерации используют поливалентную формолтиомерсаловую вакцину против паратифа и колибактериоза пушных зверей, птиц,
телят, поросят (Шевченко Л.В., 2008; Шевченко А.А. и соавт., 2009; Черных
О.Ю., 2010). Для ее производства применяют штаммы Е. сoli серогрупп О2, О8,
О78, выделенных при колибактериозе молодняка сельскохозяйственных животных и пушных зверей. Вакцину применяют для иммунизации здоровых щенков
серебристо-черных лисиц, голубых песцов и нутрий с 30-45-дневного возраста.
Вакцину вводят подкожно двукратно с интервалом в 7-10 дней. Взрослых лисиц,
песцов и нутрий вакцинируют однократно за 15-20 дней до гона (случки), иммунитет длится 6 мес. Однако после иммунизации неоднократно отмечалось отсутствие иммунитета у вакцинированных нутрий против колибактериоза и рекомендовали ввести в состав вакцины новые серовары, выделяемые в хозяйстве.
Для специфической профилактики колибактериоза животных в России
разработана вакцина, состоящая из адгезивных антигенов Е. coli: К88, К99,
К987 Р, F41, суспензии клеток штамма Е. сoli ВГНКИ: №№ 453-37/17, 30544
37/11, 334-37/12, взятых в равных соотношениях, инактивированных формалином и депонированных гидроксидом алюминия.
Для специфической профилактики колибактериоза поросят хорошо зарекомендовали себя при парентеральном введении маткам и молодняку
эмульгированная или формолквасцовая вакцины, изготовленные из местных
штаммов (Брем А.К., 1985; Хакимова К.М., 1985; Улендеев, И.Н. Хайруллин
А.И., 1988;).
Заключение по обзору литературы
Таким образом, анализ доступной нам научной литературы свидетельствует, что стрептококкоз имеет широкое распространение в России и за рубежом. Стрептококкоз имеет социальное значение. Патогенные виды стрептококков вызывают у человека поражение дыхательной системы, желудочнокишечного тракта, септицемию, пищевые токсикоинфекции и токсикозы.
Для возбудителя стрептококкоза, характерно наличие многих серовариантов, которые вариабельны, постоянно изменяются и растут в количественном отношении. В связи с этим существует угроза заражения животных и человека новыми серотипами стрептококков. Поэтому необходимо
проводить мониторинг за состоянием и изменением этиологической структуры данных инфекций в каждом регионе. Исследования по изучению эпизоотической ситуации, нозологического профиля, территориального, возрастного и сезонного проявления стрептококкоза крупного рогатого скота в целом
по России немногочисленны, а в Краснодарском крае не проводились.
Как показывает мировой и отечественный опыт, вакцинация является
одним из основных средств профилактики инфекционных болезней животных. В России для специфической профилактики стрептококкоза крупного
рогатого скота в ветеринарной практике применяется разработанная К.П. Чепуровым (1943) формолвакцина против энтерококковой инфекции телят, ягнят, поросят. Биопрепарат содержит инактивированную культуру стрепто45
кокков серологической группы Д. Эфф0ективность выпускаемых вакцин зависит от видового и серотипового состава, который не всегда соответствует
штаммам, выделяемым в период эпизоотии заболевания крупного рогатого
скота.
Все вышесказанное показывает необходимость разработки новых эффективных вакцин для специфической профилактики стрептококкоза крупного рогатого скота и мероприятий по диагностике, профилактике заболевания.
2. МАТЕРИАЛЫ И МЕТОДЫ ИССЛЕДОВАНИЙ
2.1 Материалы
Диссертационная работа выполнялась в период с 2009 по 2013 гг. на
базе кафедры микробиологии, эпизоотологии и вирусологии ФГБОУ ВПО
«Кубанский государственный аграрный университет» в соответствии с
утверждённой
темой,
государственный
регистрационный
номер
№ 01200113464, ГБУ «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория», в
хозяйствах Краснодарского края, в ФГУП «Армавирская биофабрика».
В условиях вивария ГБУ «Кропоткинская зональная ветеринарная лаборатория» и ФГУП «Армавирская биофабрика» проводились исследования
на лабораторных животных. Эксперименты на крупном рогатом скоте проводились в ЗАО САФ «Искра» Тимашевского района, ЗАО «Родник» Тихорецкого района, ООО «Сфера» Кореновского района Краснодарского края. В
процессе проведённых исследований от крупного рогатого скота были выделены различные виды микроорганизмов рода Streptococcus, которые и использовались в дальнейшей работе.
Патогенность возбудителей, а так же их титрование, исследования на
реактогенность, иммуногенность и безвредность вакцин, проведение пасса46
жей – для всех этих манипуляций использовались белые беспородные мыши,
масса которых 16-18 г (Мurium) в количестве 250 голов.
В работе использовались только клинически здоровые животные, подобраны они были по принципу пар-аналогов, что подразумевает их однотипность по упитанности, физиологическому состоянию, породной принадлежности, возрасту. Кормление животных соответствовало рационам, утверждённым на фермах.
В производственных условиях вакцины исследовались в хозяйствах
Краснодарского края.
Опытные серии инактивированных вакцин против стрептококкоза
крупного рогатого скота исследовались на лабораторных животных и проходили производственные испытания.
В научной работе использовались наборы антистрептококковых группоспецифических сывороток и стандартных групповых антигенов для реакции преципитации НПО «АКВАПАСТ», г. Санкт-Петербург; биохимические
тест-системы фирмы «Pliva-Lachema Diagnostika»: ENTEROtest 24, NEFERMtest
24, EN-COCCUStest, STREPTOtest 16.
2.2. Методы исследований
Для получения общей картины эпизоотологии стрептококкоза крупного рогатого скота, особенностей возникновения и распространения заболевания среди животных в хозяйствах Краснодарского края были изучены материалы отчётов и статистических обзоров ГБУ «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория» и государственного управления ветеринарии Краснодарского края,
Комплексный эпизоотологический подход, который применялся в работе, объединяет все главные современные методики эпизоотологических
исследований согласно «Методическим указаниям по эпизоотологическому
исследованию» (1982), а также некоторые методы современной диагностики
47
(Бакулов И.А., Ведерников В.А., Семенихин А.Л., 2000; Джупина С.И., 1984;
Нуйкин Я.В., 1985; 1977; Урбан В.П., Калишин Н.М., 1994).
Экспериментальные исследования на животных проводили в виварии
ГБУ «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория», в условиях хозяйств
Тимашевского,
Тихорецкого,
Кореновского
районов,
в
ФГУП «Армавирская биофабрика» Краснодарского края.
Клинические методы исследований
После введения животным инактивированных антигенов вакцинных
штаммов они подвергались визуальному наблюдению, чтобы выявить у них
те или иные реакции.
Клиническое течение болезни и её исход исследовали у телят в возрасте
от 1 до 120 дней, а так же у взрослого поголовья на фермах хозяйств. В ходе
наблюдения у животных контролировали изменения температуры тела, частоты дыхания и пульса.
Бактериологические методы
Бактериологические исследования состояли из посева исследуемых
культур микроорганизмов на питательные среды, определение их чистоты и
проведение идентификации штаммов; далее культуры высевали на специальные среды для определения их биохимических свойств, изучения их чувствительности к антибиотикам; определение концентрации бактериальных
клеток, проведение биопробы на лабораторных животных (Антонов Б.И.,
1986).
Выделение стрептококков, изучение культуральных, морфологических,
ферментативных, патогенных и антигенных свойств, проводили согласно
«Методическим указаниям по лабораторной диагностике стрептококкоза животных», утвержденных 25.09.1990 г. ГУВ СССР, «Методическим указаниям
по бактериологической диагностике смешанных кишечных инфекций»
(Москва, 2000) с использованием биохимических тест-систем.
48
Для исследования использовали патологический материал от больных и
павших животных, свежие трупы телят, а так же трубчатую кость, селезёнку,
сердце, перевязанное лигатурой у аорты, почку, долю печени с желчным пузырем, брыжеечные лимфоузлы, при необходимости и головной мозг. Для
прижизненной диагностики исследовали фекалии, кровь.
Наблюдение и исследования проводились на клинически здоровых коровах. Все животные
соответствовали необходимому принципу пар-
аналогов, то есть были одной породы, соответствовали по возрасту, упитанности и физиологическому состоянию. Исследуемые животные получали рационы, разработанные в исследуемых хозяйствах.
Иммунологические методы
Для исследования инактивированных вакцин против стрептококкоза
крупного рогатого скота на безвредность, их вводили подкожно белым беспородным мышам, масса которых была 18-20 г.
Для изучения иммуногенности инактивированной вакцины определяли
количество выживших иммунизированных белых мышей после введения им
летальной дозы вирулентного штамма возбудителя стрептококкоза, которая
была выявленна предварительным титрованием.
Титр антител в сыворотке крови животных выявляли спустя 21-28 суток
после иммунизации. А далее уже только у 5% животных, которых определяли выборочным путём, титр антител определяли спустя 60, 90, 180, 270 суток
после проведённой вакцинации.
В производственных условиях биопрепарат испытывали в скотоводческих хозяйствах Краснодарского края. Для этого использовали новую инактивированную вакцину против стрептококкоза крупного рогатого скота, которая была разратотана на кафедре микробиологии, эпизоотологии и вирусологии Кубанского государственного аграрного университета.
49
В качестве предмета научных исследований и производственных испытаний применялись опытные серии вакцин, которые были разработаны нами
для профилактики стрептококкоза крупного рогатого скота.
В процессе проведения научной работы использовались диагностикумы,
реактивы, наборы, тест-системы: технический формалин содержание формальдегида в котором соответствует ГОСТ-1625-61 и составляет соответственно не менее 36% ; гидроокись алюминия (ГОА, с 6% сухого остатка);
парфюмерное масло Marcol – 52.
Статистические методы
В процессе работы проводилась статистическая обработка цифровых
материалов на персональном компьютере IBM. В качестве рабочих программ использовались приложения пакета «Microsoft», «MicrosoftWord» и
«Microsoft Excel».
Клиническому обследованию было подвергнуто 928 голов крупного
рогатого скота. В результате проведённых манипуляций было выявлено 596
больных животных, проведено 45 патологоанатомических вскрытий трупов
павших животных, далее отбрали пробы и провели 195 бактериологических
исследований. В результате данной работы было выделено 112 культур микроорганизмов рода Streptococcus, а также проведено 89 тестов по серотипированию и 110 биохимических тестов.
В опытах были задействованы белые беспородные мыши, количество
которых составило 250 голов. Вакцина испытывалась в производственных
условиях на крупном рогатом скоте, в количестве 1000 голов.
Научные исследования по теме диссертационной работы проводили по
схеме (рисунок 1).
50
Изучение нозологического
профиля бактериальных инфекционных болезней крупного рогатого скота в Краснодарском крае
Выделение и изучение основных
свойств возбудителя стрептококкоза
Получение и оценка качества
бактериальной массы
Разработка технологии изготовления инактивированных
вакцин против стрептококкоза
крупного рогатого скота
Отработка режимов инактивации
возбудителя стрептококкоза и
контроль полноты инактивации
Получение бактериальной суспензии с расчетной концентрацией
антигенов
Изучение основных свойств
инактивированных вакцин против стрептококкоза в экспериментальных и производственных
условиях
Оценка безвредности
Контроль
иммуногенности
Изучение иммунологической реакции организма крс до и после
прививки новой вакциной против
стрептококкозакрупного рогатого
скота
Депонирование (внесение адъюванта), стандартизация, фасовка, маркировка,
контроль
крупного рогатого скота
Оценка
реактогенности
Разработка системы диагностики, профилактики стрептококкоза крупного рогатого скота
Гематологические исследования
Биохимические исследования
Иммунологические исследования
Рисунок 1 – Схема проведения исследований
51
3. РЕЗУЛЬТАТЫ СОБСТВЕННЫХ ИССЛЕДОВАНИЙ
3.1. Эпизоотическая обстановка по бактериальным
инфекционным болезням крупного рогатого скота в
Краснодарском крае
Для определения степени заболеваемости крупного рогатого скота инфекционными болезнями в условиях хозяйств Краснодарского края, мы провели ретроспективный анализ.
Согласно результатам, полученным из отчётов ГБУ «Кропоткинская
краевая ветеринарная лаборатория», мы смогли изучить и проанализировать
динамику заболеваемости инфекционными болезнями крупного рогатого
скота в Краснодарском крае за период с 2004 по 2013 годы (рисунок 2).
1000
2004
800
2005
600
2006
400
2007
2008
2012 2009
2010
2008
2010
2006
2011
2004
2012
200
0
2013
Рисунок 2 − Динамика заболеваемости крупного рогатого скота
инфекционными болезнями в Краснодарском крае (2004-2013) гг.
52
При анализе результатов статистических данных было установлено, что
в Краснодарском крае за период с 2004 по 2013 годы регулярно фиксировались случаи заболевания крупного рогатого скота разными бактериальными
инфекционными болезнями. Чаще регистрировали стрептококкоз, колибактериоз, псевдомоноз, реже сальмонеллез, стафилококкоз, злокачественный
отек, эмфизематозный карбункул, пастереллез, инфекционная энтеротоксемия, некробактериоз, лептоспироз, туберкулез, бруцеллез, сибирская язва.
Таким образом, было установлено, что на территории Краснодарского
края эпизоотическая обстановка по бактериальным инфекционным болезням
крупного рогатого скота остаётся напряженной. Крупный рогатый скот болеет разными инфекционными болезнями, преобладают стрептококкоз, колибактериоз, псевдомоноз.
3.1.1. Изучение нозологического профиля и место стрептококкоза
в инфекционной патологии крупного рогатого скота
При проведении научных исследований, которые длились с 2004 по
2013 гг. установлено, что в Краснодарском крае у крупного рогатого скота в
нозологическом профиле бактериальных инфекционных болезней регистрируются: эшерихиоз, сальмонеллез, стрептококкоз, псевдомоноз, стафилококкоз, пастереллез, эмфизематозный карбункул, инфекционная энтеротоксемия,
злокачественный отек, бруцеллез, туберкулез, некробактериоз, лептоспироз,
сибирская язва (рисунок 3).
53
Сибирская язва
0,05%
Злокачественный
отек
1,8%
Стрептококкоз
16,4%
Эмфизематозный
карбункул
0,2%
Туберкулез
0,2%
Некробактериоз
0,3%
Эшерихиоз
50%
Стафилококкоз
11,4%
Сальмонеллез
3,8%
Псевдомоноз
14,1%
Пастереллез
0,7%
Бруцеллез
0,5%
Инфекционная
энтеротоксемия
0,5%
Лептоспироз
0,05%
Рисунок 3 – Нозологический профиль инфекционной патологии
крупного рогатого скота (2004-2013 гг.)
Из представленных данных рисунка 3 видно, что в нозологическом
профиле инфекционных бактериальных болезней установлено 14 заболеваний, на первом месте стоит эшерихиоз, заболеваемость которым составляе
50%, затем стрептококкоз - 16,4%, псевдомоноз - 14,1%, стафилококкоз11,4%, сальмонеллез - 3,8%, злокачественный отек - 1,8%, пастереллез 0,7%, инфекционная энтеротоксемия - 0,5%, бруцеллез - 0,5%, некробактериоз- 0,3%, туберкулез и эмфизематозный карбункул по 0,2%, лептоспироз и
сибирская язва по 0,05%.
Анализ результатов проведенных исследований показывает, что основными причинами появления и распространения инфекционных болезней в
Краснодарском крае являются: нарушение нормативных требований по
кормлению, содержанию животных и технологии животноводства, несанкционированная реализация продуктов животноводства без должного контроля.
54
Поэтому необходимо для снижения эпизоотической напряженности по экономически значимым инфекционным болезням разрабатывать и строго выполнять противоэпизоотические мероприятия. Главное значение имеют специальные меры, направленные на своевременную диагностику и вакцинацию
восприимчивых животных.
Таблица 1- Нозологический профиль инфекционных болезней крупного
рогатого скота в Краснодарском крае (2004-2013 гг.)
2006
2007
2008
2009
2010
2011
2012
2013
Всего
выделено
В % к общ.
Всего
годы
2005
Нозологическая
822
701
650
833
470
365
424
373
273
8045
50,0
2004
единица
Эшерихиоз
1134
Псевдомоноз
345
256
157
115
356
156
125
118
356
296
2280
14,1
Стрептококкоз
436
371
236
258
392
145
186
250
154
215
2643
16,4
Стафилококкоз
63
102
37
45
101
24
38
62
662
709
1843
11,4
Сальмонеллез
151
99
43
23
91
61
26
13
72
39
618
3,8
Инфекционная
энтеротоксемия
4
2
1
9
13
7
21
9
15
6
87
0,5
Злокачественны
й отек
8
11
16
25
58
86
26
28
22
23
303
1,8
Пастереллез
0
0
0
12
11
14
2
4
20
45
108
0,7
Бруцеллез
0
0
0
0
0
12
17
2
0
0
84
0,5
Туберкулез
0
0
0
5
16
3
0
6
0
0
30
0,2
Некробактериоз
0
0
0
15
18
7
3
3
2
2
50
0,3
Лептоспироз
0
0
0
1
1
0
0
0
0
0
2
0,05
Эмфизематозны
й карбункул
0
0
0
3
4
8
8
2
4
5
34
0,2
Сибирская язва
0
0
0
0
0
0
0
0
0
2
2
0, 05
55
Из данных таблицы 1 видно, что крупный рогатый скот болеет различными бактериальными инфекционными заболеваниями, на первом месте
стоит эшерихиоз - 50%, на втором – стрептококкоз -16,4%.
При
рассмотрении
удельного
веса
стрептококкоза
за
период
наблюдения видно, что в течение 10 последних лет удельный вес
стрептококкоза в нозологическом профиле составляет около 30,0% (рис. 4).
100%
90%
80%
процент
70%
60%
50%
40%
30%
20%
10%
0%
2004
822
2005
701
2006
650
2007
833
2008
470
2009
365
2010
424
2011
1373
2012
1273
2013
535
стрептококкоз 371
236
258
392
145
186
250
154
215
235
прочие
Рисунок 4 – Удельный вес стрептококкоза в инфекционной патологии
крупного рогатого скота в Краснодарском крае (2004-2013гг.)
Исходя из полученных данных можно сделать вывод, что в
нозологическом профиле инфекционных болезней крупного рогатого скота
стрептококкоз занимает важное место, так как заболеваемость им в
животноводческих хозяйствах Краснодарского края с 2004 по 2013 года
равняется в среднем около 30%,
56
3.1.2 Изучение превалентности и инцидентности стрептококкоза
крупного рогатого скота
При изучении превалентности вспышек стрептококкоза среди поголовья крупного рогатого скота в течение последних 10 лет установлено, что за
время с 2004-2013 гг. было зарегистрировано 2321 вспышка заболевания на
фермах разного типа в 20 районах Краснодарского края.
Таблица 2 – Превалентность вспышек стрептококкоза крупного рогатого скота в хозяйствах Краснодарского края за период 2004-2013 гг.
Годы
Наименование
заболевания
2004 2005 2006 2007 2008 2009 2010 2011 2012 2013
стрептококкоз 371
236
258
392
145
186
250
154
215
114
Из данных таблицы 2 видно, что в Краснодарском крае за отрезок времени с 2004-2007 гг. превалентность вспышек стрептококкоза среди поголовья крупного рогатого скота в хозяйствах края имела тенденцию к повышению, с 2008-2013 гг. наблюдается снижение вспышек заболевания, это, повидимому, связано со снижением численности поголовья животных и выполнением ветеринарно-санитарных мероприятий в хозяйствах края. Ежегодные
совокупные показатели инцидентности вспышек сопровождались ростом.
Вспышки стрептококкоза характеризовались эпизоотическим типом, что
подтверждается широтой превалентности заболевания (20 административных
района территории края), высокой частотой заноса возбудителя на фермы,
длительностью периода неблагополучия (10 лет).
Таким образом, наблюдаемая превалентность стрептококкоза по значительной территории Краснодарского края за определённый длительный промежуток времени, персистенция возбудителя среди поголовья крупного рогатого скота различных возрастов, свидетельствует о формировании энзоотичной зоны.
57
3.1.3. Изучение территориальных и временных границ распространения
стрептококкоза крупного рогатого скота
В дальнейшем изучили территориальные и временные границы превалентности стрептококкоза крупного рогатого скота в течение 2004-2013 гг. в
Краснодарском крае.
При изучении территориального распространения стрептококкоза
крупного рогатого скота в районах Краснодарского края установлено, что
распространение стрептококкоза имеет выраженные регионарные особенности. Из 20 районов наиболее часто стрептококкоз регистрируется у крупного
рогатого скота в 8 районах: в Кавказском - 34%, Ейском - 18%, Кущевском 8%, Тимашевском - 6%, Лабинском, Славянском и Павловском районах по
5%, г. Краснодаре - 4%, в других оставшихся районах от 1 до 2% (рис. 5).
Славянский
5%
Северский
2%
Тихорецкий
2%
Тимашевский
6%
г. Краснодар
0%
4%
Армавир
2%
Брюховетский
1%
Выселковский
2%
Ейский
18%
Отрадненский
1%
Павловская
Новопокровский
5%
1%
Ленинградский
1%
Кущевский
8%
Лабинский
5%
Курганинский
1% Крымский
2%
Кавказский
34%
Каневской
1%
Кореновский
1%
Рисунок 5 – Территориальное распространение стрептококкоза среди крупного рогатого скота в районах Краснодарского края (2004-2013 гг.).
58
Из данных рисунка 5 видно, что стрептококкоз крупного рогатого скота
зарегистрирован в 20 районах Краснодарского края из 48.
Многообразие выделяемых культур в хозяйствах данных районов говорит о нестабильной изменчивой погоде в демесезонные периоды года, а
именно осенью и весной, а так же зимой. Количество осадков значительно,
что соответственно ведет к повышенной влажности воздуха. Все эти данные
позволяют говорить о погоде, как о способствующем факторе для развития и
распространения заболевания.
При изучении вспышек эпизоотий стрептококкоза крупного скота в
различных хозяйствах Краснодарского края в течение последних 10 лет выделялись разные виды патогенных стрептококков (рисунок 6). В результате
установлено, что эпизоотии стрептококкоза крупного скота в хозяйствах края
вызывали 10 видов возбудителей: Str. pneumoniae, Str.septicum, Str.pyogenes,
Str.uberis, Str.bovis, Str.vestibularis, Str.zooepidemicus, Str.salivarus, Str.mutans,
Str.gallolyticus, доминировал Str. pneumoniae.
250
количество
200
150
100
50
0
виды микробов рода Streptococcus
Рисунок 6 – Виды стрептококков, выделяемые от крупного рогатого скота,
в хозяйства Краснодарского края (2004-2013 гг.).
59
При изучении сезонности заболеваемости крупного рогатого скота
стрептококкозом проанализировали данные периода с 2008 по 2013 гг. Выделеные нами результаты представлены в таблице 2 и рисунке 7.
декабрь
ноябрь
октябрь
январь
70
60
50
40
30
20
10
0
февраль
март
апрель
сентябрь
май
август
июнь
июль
Рисунок 7 –Помесячная заболеваемость крупного рогатого скота
стрептококкозом
Данные рисунка 7 показывают, что вспышки заболеваемости крупного
рогатого скота стрептококкозом регистрировали в любой период года,
наибольшее количество наблюдали в зимний (13,7-20,3%) и весенний (4,017,3%) период.
60
Таблица 2- Сезонность заболеваемости крупного рогатого скота
стрептококкозом
месяц
2008
январь
9
февраль
12
март
8
апрель
6
май
3
июнь
1
июль
0
август
0
сентябрь
1
октябрь
1
ноябрь
2
декабрь
7
всего
51
Данные таблицы 2
2009
2010
2011
2012
2013
итого
в%
8
5
12
13
12
59
19,7
9
6
11
11
10
61
20,3
8
11
11
10
4
52
17,3
5
4
5
3
4
27
9,0
1
2
1
3
2
12
4,0
2
1
1
1
1
7
2,3
1
0
0
1
0
3
1,0
1
0
1
0
0
2
0,7
1
1
2
2
1
8
2,7
2
2
1
2
1
9
3,0
3
4
5
3
2
19
6,3
8
7
8
7
4
41
13,7
47
43
57
56
40
300
100%
показывают, что вспышки заболеваемости крупного рога-
того скота стрептококкозом регистрировали в любой период года, наибольшее количество наблюдали в зимний (13,7-20,3%) и весенний (4,0-17,3%) период. Это связано с циркуляцией высоко патогенного возбудителя, а так же с
несоблюдением зоотехнических параметров при содержании животных.
Кормление животных рационами, которые несбалансированны по витаминам, микроэлементам, питательной ценности, содержание их в грязных помещениях, где своевременно не проводится удаление навоза, где выражена
высокая влажность - все это факторы приводят к понижению естественной
резистентности организма. Вследствие этого, разные возрастые группы
крупного рогатого скота становится подвержен патогенному влиянию условно-патогенных микроорганизмов, в том числе и стрептококкам.
3.1.4. Изучение возрастной восприимчивости крупного рогатого
скота к стрептококкозу
61
Под восприимчивостью понимают способность макроорганизма реагировать на внедрение, размножение и жизнедеятельность условно-патогенных
и патогенных микроорганизмов комплексом защитно-приспособительных
реакций, развитием инфекционного процесса. Однако, по собственным
наблюдениям известно, что крупный рогатый скот различных возрастных
групп в неодинаковой степени восприимчив к инфекционным болезням, в
том числе и к стрептококкозу. Нами была проанализирована заболеваемость
животных в хозяйстве, дифференцированно по всем возростам.
Чтобы разделить подобные данные, необходимо было проананлизировать результаты клинического обследования, данные по патологоанатомическому вскрытию и лабораторной диагностики. Полученные результаты представлены в таблице 3 на рисунке 6.
Таблица 3 – Возрастная восприимчивость крупного рогатого скота
к стрептококкозу
Группы
животных
телята
1-10 дней
телята
10-20 дней
телята
20-60 дней
телята
60-120 дней
Взрослые
Всего
обследовано
Бактериологические
Патвскрытие
исследования
исследовано выявлено исслевыявледовано
но
25
19
10
5
Клинические
исследования
исследо- выяввано
лено
70
15
35
17
15
6
120
25
20
7
10
4
250
30
15
5
5
1
123
20
10
3
5
2
220
65
95
44
45
18
928
156
Из данных таблицы 3 видно, что стрептококкозом болеют различные
возрастные группы крупного рогатого скота. Взрослое поголовье, в отличие
от молодняка, болеет значительно редже, у данной возрастной группы часто
выражено бактерионосительство.
62
Данные рисунка 6 показывают, что к стрептококкозу восприимчивы различные возрастные группы: с 1-10 дней - 37%, с 10-20 дней - 33%, в 20-60
дней - 14%, в 60-120 дней - 10%, взрослые - 6%.
60-120 дн
10%
взрослые
6%
1-10 дн
37%
20-60 дн
14%
10-20 дн
33%
Рисунок 6 – Возрастная восприимчивость крупного рогатого скота
к стрептококкозу в Краснодарском крае
3.2. Диагностика, клинические признаки, патологоанатомические
и гистологические изменения стрептококкоза крупного рогатого скота
Для постановки диагноза на стрептококкоз мы учитывали все имеющиеся
данные, а именно, полученные в ходе эпизоотологического обследования, результаты полученных клинических признаков, а так же полученные при пато63
логоанатомических вскрытиях, подтверждение проводили лабораторной диагностикой.
В ходе проведения лабораторной диагностики были получены результаты бактериологического исследования. Данный тип исследований совмешал
многие манипуляции: выделение возбудителя от больных животных в исходном материале согласно «Методическим указаниям по лабораторной диагностике стрептококкоза животных», утвержденных 25.09.1990 г. ГУВ СССР,
«Методическим указаниям по бактериологической диагностике смешанных
кишечных инфекций» (Москва, 2000) с использованием биохимических тестсистем фирмы «Pliva-Lachema Diagnostika»: ENTEROtest 24, NEFERMtest 24,
EN-COCCUStest, STREPTOtest 16. Определение уровня антител в сыворотке
крови проводили в РП согласно методическим указаниям по лабораторной
диагностике стрептококкоза животных (М., 1990), утвержденным Главным
управлением ветеринарии (ГУВ).
Для исследования использовали патологический материал от больных и
павших животных, свежие трупы телят, паренхиматозные органы: сердце,
перевязанное лигатурой у аорты, долю печени с желчным пузырем, почку,
селезёнку, трубчатую кость, брыжеечные лимфоузлы, при необходимости и
головной мозг. Диагностика проводилась и при жизни животных, патологический материал в данном сличае был представлен фекалиями и кровью.
А далее, из полученного малериала по общепринятой методике в микробиологии были подготовлены материалы, а именно мазки-отпечатки, которые были окрашены по методу Грама и микроскопированы под иммерсионной системой микроскопа. При проведении микроскопии, в поле зрения были
обнаружены кругловатые, расположенные попарно и в виде коротких цепочек мелкие кокки. Микроорганизмы имели фиолетовый цвет, что характерно
для бактерий рода Streptococcus.
Культуральные свойства возбудителя исследовали путём проведения
высевов культуры на питательные среды из патологического материала, а
именно на обогащённый, до 0,2 % концентрации глюкозой и 10% инактиви64
рованной сыворотки лошади, мясо-пептонный бульон (МПБ), а так же, на
обогащённый 5% дефибринированной крови кролика и глюкозой до 0,2%
концентрации, агар (МПА).
Далее культуру инкубировали при 37˚С в течение 18-20 часов в условиях термостата. Спустя необходимое время провели счёт информации. При
визуальном осмотре МПБ было установлено, что в нём наблюдается диффузное помутнение. На плотной питательной среде, а именно на чашке петри
был отмечен рост колоний, которые имели ровные края, были слегка мутноватыми и походили на росинки. Вокруг колоний была заметна зона гемолиза.
Она имела зеленоватый цвет и располагалась в виде ободка. Полученные
данные свойственны стрептококкам.
Далее нами была проведена дифференциация микроорганизмов. Необходимо было выявить наличие стрептококков или стафилококков. Подобное
исследование проводится с помощью каталазной пробы.
Данное исследование заключиется в том, что на предметное стекло
необходимо нанести каплю 3% свежеприготовленной перекисис водорода,
туда же бакпетлёй наносят снятую исследуемую колонию. При внесении
стрептококков не выделяется пена, так как стептококки не выделяют каталазу. А вот при внесении колонии стафилококков, из-за наличия каталазы,
можно наблюдать обильное пенообразование. В нашем случае пенообразование отсутствовало.
Далее нам предстояла предварительная дифференциация энтнрококков
от стрептококков. Для проведения данного исследования производили высев
культур в пробирки с желчью, процентное содержание которой в бульоне составляло 10% и 40%. Аналогично, высев проводили в пробирки с 6,5% хлористого натрия. Для полной дифференциации необходимо было учитывать и
реакции с углеводами (сорбитом, раффинозой, маннитом), Полученные результаты совмещали с результатми на обогащённых МПА с кровью и МПБ.
Далее производили запись полученных результатов, а именно: в пробирке, содержащей 10% желчь диагностировали просветление среды, была
65
отмечена ферментация маннита. На плотной питательной среде – МПА вокруг колоний наблюдалась зона неполного гемолиза (альфа гемолиза), имеющая зеленоватый цвет. Полученные результаты указывают на наличие
стрептококков.
Далее стрептококки дифференцировали путём проведения серологического исследования, а именно в реакции преципитации (РП) в капиллярах по
известной методике. Для подтверждения патогенности использовали белых
беспородных мышей масса которых составляла 16-18 г.
В ходе проведения лабораторных исследований патологического материала, полученного от больных и павших животных, мы выделяли разные
виды микроорганизмов рода Streptococcus, доля которых составила:
Str.pneumoniae 78%, Str.septicum- 7%, Str.pyogenes- 6%, Str.uberis- 2%,
Str.bovis- 1%, Str.vestibularis- 1%, Str.zooepidemicus- 1%, Str.salivarus- 2%,
Str.mutans- 1%, Str.gallolyticus- 1%.
3.2.1. Изучение клинического проявления стрептококкоза
у крупного рогатого скота
К стрептококкозу восприимчивы все возрастные группы крупного рогатого скота, но чаще болеют телята, а также взрослые животные. Клиническое проявление стрептококкоза у данного вида животных зависит от патогенности, дозы возбудителя, степени естественной резистентности организма
и других факторов. Исходя из этого клинические симптомы данного заболевания были многообразными и отличались у разных возрастных групп. На
ферме ЗАО САФ «Искра» Тимашевского района, в ЗАО «Родник» Тихорецкого района, в ООО «Сфера» Кореновского района, у коров наблюдали дерматиты, абсцессы на теле, поражения конечностей, маститы, эндометриты и
др. Отмечали снижение удоев у коров. В молоке наблюдали увеличение ко66
личества соматических клеток, что влияет на качество молока. Животные
находятся в занавоженных помещениях, базах, навоз убирают не регулярно.
Рисунок 7 − Внешний вид коровника с подземным навозохранилищем на
ферме №2 агрофирмы «Искра»
Рисунок 8 − Выгул коров в базу на ферме №2 агрофирмы «Искра»
67
После проведения клинического обследования в хозяйстве, признанном неблагополучным по стрептококкозу диагноз был поставлен у животных всех
возрастных групп, а далее подтверждён лабораторной диагностикой.
При этом были отмечены определённые клинические признаки при
различном течении болезни.
Инкубационный период короткий и составляет около 1 - 2 дней, иногда
его продолжительность может достигать 7 дней. Болезнь протекала
сверхостро, остро, подостро и хронически.
При сверхостром теченим у больных животных выявляли повышение
температуры тела до 40 - 42°С. Животные были вялыми, даже угнетёнными,
отказывались от корма, отмечали признаки серозно-катарального конъюнктивита и ринита. Была ярко выражена одышка, пульс аритмичен, слизистые
оболочки цианотичны. При агональном состоянии отмечалось выделение из
носовой полости пенообразной жидкости вследствие отека легких.
Острое течение характеризовалось высокой температурой, обильным
слезотечением и катарально-гнойными истечениями из носовых ходов. Аппетит отсутствовал. У отдельных новорожденных телят воспаляется пупочный канатик (омфалит). Далее слабость прогрессировала и вскоре, через 1 – 2
дня отмечали гибель животного с признаками септицемии.
Подострое течение у животных проявлялось самыми разнообразными
симптомами, в том чисте
поражением органов дыхания, желудочно-
кишечного тракта суставов конечностей.
При хроническом течении у взрослых животных отмечали прогрессирующее истощение, угнетение, температура тела колебалась в пределах физиологической нормы. Наблюдали поражения венчика копыт, воспаление
межкопытной щели, пододерматиты, дерматиты, абсцессы, маститы, эндометриты и другие.
68
Рисунок 9 – Угнетение теленка при стрептококкозе
Рисунок 10– Конъюнктивит и артрит
69
Рисунок 11 − Поражение у коровы кожи в области скакательного сустава
Рисунок 12 − Поражение у коровы кожи в области вымени
70
Рисунок 13 − Поражение у коровы кожи в области скакательного сустава и
венчика копыта
Рисунок 14 − Поражение у коровы кожи в области вымени
71
Рисунок 15– Воспаление венчика копыта
Рисунок 16– Воспаление в области промежности у коровы
72
Рисунок 17– Воспаление межкопытной щели
Рисунок 18– Пододерматит
73
Таким образом, на основании полученных данных можно выделить
следующее: стрептококкозу подвержен крупный рогатый скот всех возрастных групп, начиная с 2-3- дней жизни до 120 дней и взрослые животные. течение данной болезни может быть сверхострым, острым, подострым и хроническим. Проявление различно, это и септицемия, конъюнктивиты, пневмонии, артриты, энтериты. У новорожденных отмечают воспаление пупочного
канатика (омфалит). Болезнь у животных регистрируют в течение всего года,
однако наиболее часто в период с декабря по апрель. У взрослых животных
наблюдаются поражения венчика копыт, воспаление межкопытной щели,
пододерматиты, дерматиты, абсцессы, маститы, эндометриты и другие.
3.2.2. Изучение патологоанатомических и гистологических изменений
при стрептококкозе крупного рогатого скота
В ходе исследовательской работы, нами было проведено вскрытие 45
трупов павших голов крупного рогатого скота, всем животным прижизненно
был поставлен предварительный диагноз стрептококкоз исходя из эпизоотологической ситуации, клиническим симптомам и далее подтверждён лабораторной диарностикой. Полученные данные были нами обобщены. Вскрытие трупов проводилось на фермах, согласно нормативным требованиям.
При вскрытии 1-4-месячного молодняка были выявлены следующие
признаки: спленит, гепатит, артриты, геморрагическая пневмония, серознокатаральная пневмония, геморрагический диатез, серозно-катаральный гастроэнтерит, геморрагический гастроэнтерит.
У взрослых животных был отмечен гепатит, геморрагический диатез,
спленит, серозно-катаральная пневмония, геморрагическая пневмония, артриты, серозно-катаральный гастроэнтерит, геморрагический гастроэнтерит.
(рис. 19-23).
74
Рисунок19– Серозно-катаральная пневмония
Рисунок 20 – Геморрагическая пневмония
75
Рисунок 21 – Гепатит
Рисунок 22 – Спленит
76
Рисунок 23 – Геморрагический гастроэнтерит
При гистологическом исследовании были выявлены изменения в сердечной мышце и печени при стрептококкозе крупного рогатого скота.
В препарате сердечной мышцы (рис.25) выявлены множественные кровоизлияния между волокон. В препарате печени заметны признаки дистрофических изменений, наблюдаются отдельные гепатоциты, балочное строение не выявлено, (рис. 24), В препарате лёгкого отдельные альвеолы спавшиеся, другие заполнены войлокообразной массой (фибрином), отмечено обилие экссудата, содержащего большое количество эритроцитов и нейтрофилов, и заполняющего просветы мелких бронхов и альвеол. Отмечена выраженная десквомация, а так же дистрофия клеток альвеолярного эпителия
(рис.26).
77
Рисунок 24 - Дистрофические процессы в печени при стрептококкозе.
Гематоксилин - эозин ×200.
Рисунок 25 - Кровоизлияния в сердце при стрептококкозе.
Гематоксилин - эозин ×200.
78
Рисунок 26 - Геморрагическая пневмония. Гематоксилин - эозин ×200.
Нами, в ходе проведённой работы, были сделаны следующие выводы, что
у 1-4-месячных телят при стрептококкозе чаще регистрируется спленит (7 %),
гепатит (25%), серозно-катаральная, а так же геморрагическая пневмония
(35%), артриты (10%), серозно-катаральный гастроэнтерит и геморрагический
гастроэнтерит (8%), миокардит (5%). У взрослых животных нами были выявлены: поражения копытного венчика (9%), серозно- катаральная пневмония,
геморрагическая пневмонии (29%), артриты (10%), воспаление межкопытной
щели (7%), серозно-катаральный гастроэнтерит, геморрагический гастроэнтериты (8%), пододерматиты (9%), дерматиты (5%), абсцессы (3%), маститы
(12%), эндометриты (8%).
79
3.2.3. Выделение и идентификация стрептококковых культур,
циркулирующих в организме крупного рогатого скота
Выделение стрептококков, изучение культуральных, морфологических,
ферментативных, патогенных и антигенных свойств проводили в различных
хозяйствах, расположенных на территории Краснодарского края, а та же в
условиях ГБУ «Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория», на основании «Методических указаний по лабораторной диагностике стрептококкоза животных», утвержденных 25.09.1990 г. ГУВ СССР, при использовании
«Методических указаний по бактериологической диагностике смешанных кишечных инфекций» (Москва, 2000) с использованием биохимических тестсистем, произведённых фирмой «Pliva-Lachema Diagnostika»: NEFERMtest 24,
ENTEROtest 24, STREPTOtest 16, EN-COCCUStest.
Для исследования использовали патологический материал от больных и
павших животных, свежие трупы телят, сердце, которое необходимо перевязать у аорты лигатурой, почку, трубчатую кость, брыжеечные лимфоузлы,
долю печени с прилегающим к ней желчным пузырем, селезенку, при необходимости и головной мозг. В качестве патологического материала, взятого
при жизни животных для диагностических исследований, использовали
кровь и фекалии.
Далее производили подготовку мазков-отпечатков из полученного патологического материала, которые окрашивали по методу Грама для последующей микроскопии. В процессе микроскопии приготовленных препаратов,
под иммерсионной системой, в поле зрения, наблюдали скопление чаще парных,а
иногда, расположенных небольшими цепочками, мелкие кокковые
бактерии, фиолетового цвета, что характерно для микроорганозмов рода
Streptococcus (рис. 27).
80
Рисунок 27 - Микроорганизмы рода Streptococcus при микроскопировании
Для определения свойств, характерных для возбудителя стрептококкоза делали высевы выделенной культуры микроорганизма, которые проводили из патологического материала в обогащённый 10% инактивированной
сыворотки лошади и глюкозой до 0,2% окончательной концентрации мясопептонный бульон (МПБ), а так же на плотную среду, в чашки Петри с обогащённым 5% дефибринированной крови кролика и глюкозой до 0,2% окончательной концентрации мясо-пептонным агаром (МПА). После чего среды с
культурами инкубировали в течение 18-20 часов в условиях температуры,
равной 37˚С. В ходе проведённых манипуляций было замечено, что в обогащённом МПА наблюдается рост культуры, характеризующийся диффузным
помутнением используемой питательной среды. На плотных питательных
средах - на чашках Петри, содержащих МПА, обгащённый кровью, был выявлен рост мелких, с гладкими краями колоний, немного мутноватых, имеющих вид росы. Колонии были окружены ободком немолного гемолиза (альфа
гемолиз), имеющим зеленованый цвет.
81
Рисунок 28 – Рост Str. pneumoniaе на МПА с кровью
Для дифференцирования полученных микроорганизмов проводили диагностические исследования. В частности, для дифференциации от стафилококков проводилась проба на каталазу. В ходе теста, на предметное стекло в
каплю 3% свежеприготовленного раствора перекиси водорода вносили бактериологической петлёй исследуемую колонию. Стафилококки выделяют каталазу, вследствие чего наблюдается пенообразование, а стрептококки нет,
следовательно, пенообразования нет. При проведении дифференциального
исследования пенообразование не наблюдалось.
Далее проводили дифференциацию энтерококковых бактерий от стрептококков. Для этого проводили высевы бактериологической культуры в пробирки с бульоном, содержание желчи в которых составляло 10 и 40%. Кроме
этого, высев производился в пробирки, содержащие 6,5% натрия хлорида.
Так же были проведены исследования с углеводами (сорбитом, раффинозой,
82
маннитом). В дальнейшем проводили учёт результатов роста, который был
выявлен в пробирках с жидкими средами, а так же характер гемолиза на
плотном МПА, обогащённом кровью.
При исследовании результатов было выявлено просветление среды, содержащей 10% желчи, что говорит о лизисе культуры микроорганизмов.
Кроме этого, выявили отсутствие роста в пробирках, содержащих 40% желчи
и 6,5% хлорида натрия. Была отмечена ферментация маннита. На чашках
Петри, содержащих МПА, обогащённый кровью была выявлена вокруг выросших колоний зона немолного гемолиза, имевшая зеленоватый цвет (альфа
гемолиз). Исходя из полученных данных можно судить, что исследуемая
культура относится к роду Streptococcus. Определение серогрупповой принадлежности проводили в ходе реакции преципитации в капиллярах (РП) по
известной методике. Патогенность подтверждали биологической пробой на
молодых беспородных белых мышах.
При проведении лабораторных исследований от больных и павших животных мы выделяли разные виды микроорганизмов рода Streptococcus, доля
которых составила (%): Str.pneumoniae- 78%, Str.septicum- 7%, Str.pyogenes6%, Str.uberis- 2%, Str.bovis- 1%, Str.vestibularis- 1%, Str.zooepidemicus- 1%,
Str.salivarus- 2%, Str.mutans- 1%, Str.gallolyticus- 1%. Доминирующим среди
стрептококков был Str. pneumoniae- 78% (рисунок 29).
83
Str. vestibularis
1%
Str. uberis
2%
Str. pyogenes
6%
Str.
zooepidemicus
1%
Str. bovis
1%
Str. salivarus
2%
Str. mutans
1%
Str. gallolyticus
1%
Str. septicum
7%
Str. pneumoniae
78%
Рисунок 29 – Выделение микроорганизмов рода Streptococcus от крупного
рогатого скота в Краснодарском крае
Таким образом, нами из 112 исследованных культур микроорганизмов
рода Streptococcus, которые были выделены от крупного рогатого скота в хозяйствах Краснодарского края, были изучены культуральные, морфологические, биохимические, тинкториальные и серологические свойства стрептококков: Str.pneumoniaе, Str.septicum, Str.pyogenes, Str.uberis, Str.bovis,
Str.vestibularis, Str.zooepidemicus, Str.salivarus, Str.mutans, Str.gallolyticus, среди них преобладал Str.pneumoniae, которые были использованы в ходе дальнейшей работы.
84
3.3. Разработка технологии производства и контроля инактивированной
вакцины против стрептококкоза крупного рогатого скота
3.3.1. Разработка технологии получения и оценка качества биосырья
для изготовления инактивированной вакцины против стрептококкоза
крупного рогатого скота
На территории нашей страны не производится выпуск вакцин для специфической профилактики стрептококкоза крупного рогатого скота, хотя ущерб,
наносимый животноводческим хозяйствам данным заболеванием не вызывает
сомнений. Всвязи с вышесказанным, нами были изучены наиболее часто выделяемые 112 сероваров микроорганизмов рода Streptococcus по основным биологическим свойствам. Далее, для изготовления вакцины был выбран штамм Str.
Pneumoniae по иммуногенным, антигенным свойствам и иммунологической стабильности. При культивировании штамма Str. Pneumoniae на обогащённых питательных средах (Левина, Эндо, кровяном МПА, селенитовой, глюкозосывороточном МПБ), проводили контроль накопления микробных клеток
(м.к./см3). Накопление клеток составило 10 – 20 млрд м.к./см3. Следующим этапом в работе был подбор питательной среды для выращивания бактериального
сырья. Для этих целей нами был обогащённый глюкозой МПБ, вследствие его
доступности, низкой сибистоимости в сравнении с другими средами. Данная
среда позволяет получать оптимальную концентрацию клеток возбудителя.
При производстве опытных серий инактивированных вакцин проводили
освежение вирулентного возбудителя стрептококкоза штамма Str. Рneumoniae в
пробирках с биофабричным МПБ, в который был добавлен 40%-ый раствор
глюкозы, что бы конечная концентрация в среде составляла 1%, рН бульона составил 7,2–7,4. Культивация проходила при 37ºС в условиях термостата. Период
культивации составил 18-20 ч. Чистоту выращенной культуры определяли на
МПБ, МПА, агаре и бульоне Сабуро, среде Китта-Тароцци, Плоскирёва, Эндо.
Окрашивание микроорганизмов проводили по методике Грама.
85
Далее проводили выращивание матровой расплодки. Для данных целей
использовали флаконы, ёмкость которых составляла 250 мл. В каждый флакон
была внесена питательная среда - обогащённый до 1% концентрации глюкозой
мясо - пептонный бульон, в количестве 80 – 100 мл, рН 7,2–7,4. В питательную
среду вносили культуру возбудителя - вирулентный штамм Str. Рneumoniae с
содержанием не менее 4•109 микробных клеток в 1 мл по оптическому стандарту
ГИСК им. Тарасевича в объёме 1–2 мл. Культивацию посевов осуществляли в
термостате при температурном режиме, равном 37ºС. Продолжительность культивации составляла 18-20 часов. Определение чистоты выращенных микроорганизмов осуществляли на МПБ, МПА, агаре и бульоне Сабуро, среде КиттаТароцци, Плоскирёва, Эндо. Окрашивание микроорганизмов проводили по методике Грама.
Следующим этапом в проведении нашей работы стало получение бактериологического сырья, используемого для изготовления вакцин. Выращивание
микроорганизмов осуществляли в бутылях, ёмкость которых составляет 3-5 литров. Для этого в них вносили питательную среду – обогащённый 40% глюкозой
до 1% окончательной концентрации мясо - пептонный бульон и матровую расплодку. Объём матровой расплодки от общего колличества питательной среды
ра составил 5-10%.
Период культивации составил 18-20 ч. В термостате при температуре
37ºС, рН 7,2–7,4. Для контроля чистоты роста использовали обогащённый 5%
дефибринированной крови кролика мясо - пептонный агар и бульон, среду Китта-Тароцци, агар и бульон Сабуро, окрашивание выращенных микроорганизмов
проводили, используя методику Грама.
Выращенное бактериологическое сырьё подлежит инактивации. Для этого
в полученную культуру возбудителя, в которой концентрация микробных клеток
по оптическому стандарту ГИСК им. Тарасевича в одном кубическом сантиметре
составила 4•109, вносили формалин, конечная концентрация которого составила 0,3-0,5%. Период проведения инактивации составил 48-96 часов, температура +37ºС. Для контролирования полноты инактивации осуществляли вы86
сев бактериальной массы на твёрдые и жидкие питательные среды: Плоскирёва, Эндо, мясо-пептонный бульон, мясо-пептонный агар. Контроль за средами проводят в течении 10-ти суток. При сомнительных результатах осуществляли инфицирование исследуемым материалом лабораторных мышей,
масса которых – 16-18 г. Наблюдение за животными продолжали 10 суток.
3.3.2 Изучение параметров инактивации возбудителя стрептококкоза
Чтобы создать инактивированную вакцину потребовалось определиться с
выбором инактиватора. Он должен быть эффективным, т.е. сохранять иммуногенные свойства возбудителя, при этом лишать его патогенности. В качестве такого препарата был выбран формалин. Следующим этапом работы было создание методики инактивации культуры возбудителя.
Для осуществления данной цели в исследуемую культуру - штамм Str.
рneumoniae, в которой напопление микробных клеток составило не менее
4•109 м. к./см3 по оптическому стандарту ГИСК им. Тарасевича, производили
внос формалина. Использовали инактиватор в виде растворов различной
концентрации, а именно, по активности формальдегида от 0,1 до 0,4%. Культуру возбудителя с формалином при температурных режимах 37±2°С и
22±2°С оставляли на 15 суток, осуществляя периодически помешивание.
Для контроля полноты проведения инактивации изучаемую культуру
высевали на питательные среды – мясо-пептонный агар и мясо-пептонный
бульон, готовили препараты, окраску которых производили по методике
Грама. В течение 10 суток проводился их просмотр. В сомнительных случаях
проводили биопробу, при которой проводили заражение белых лабораторных
мышей исследуемым материалом. Наблюдение за подопытными животными,
контроль их состояния осуществляли в течение 10 сут. Полученные результаты представлены в таблице 1.
87
Формалин
(по
содержанию
формальдегида
36%)
Температура, °С
Инактивирующее
вещество
Концентрация
формалина, %
Таблица 1 – Результаты кинетики инактивации штамма Str. рneumoniae
Время инактивации микроорганизма, суток
1
2
3
4
5
6 7
8
9 10 11 12 13 14 15
0,1
22±2
+
+
+
+
+ + + +
+ + + + + + +
0,1
0,2
0,2
0,3
37±2
22±2
37±2
22±2
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
+
–
0,3
0,4
37±2
22±2
+
+
+
+
+
+
0,4
37±2
+
+
0/5
– –
0/5 –
–
–
+
+
+
–
+
+
+
–
+
+
+
–
+
+
+
–
+
+
+
–
+
+
+
–
+ + + +
+ + + +
+ + + +
– – – –
– –
– –
–
–
–
–
– – –
– – –
–
–
–
–
–
–
– –
–
–
– – –
–
–
–
(+) – рост возбудителя стрептококкоза на питательных средах;
(–) – отсутствие роста возбудителя стрептококкоза на питательных средах;
числитель – количество павших мышей, знаменатель – число мышей в опыте.
Из данных таблицы 1 видно, что при концентрации формалина равной
0,4%, при температурном режиме инкубации баккультуры 37±2°С, инактивация исследуемой культуры - штамма Str. рneumoniae осуществлялась за 48
часов. Если температурный режим составлял 22±2°С – этот период был равен
72 ч.
Результаты инактивирования баккультуры штамма Str. рneumoniae
представлены на рисунке 30. Режим инактивации 22±2°С.
88
Концентрация м.к., млрд/мл
5
4,5
4
3,5
0,1
3
0,2
2,5
0,3
2
0,4
1,5
1
0,5
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9 10 11 12 13 14 15
Сутки
Рисунок 30 - Динамика инактивации штамма Str. рneumoniae
при температурном режиме 22±2°С
Из данных рисунка 30 видно, что при внесении 0,1; 0,2% концентрации
раствора формалина не происходит инактивации исследуемого штамма
Str. рneumoniae за период, равный15 суток. Если же вносится формалин, концентрация которого составляет 0,3%, то полная инактивация отмечается на 5
сутки, а при применении формалина 0,4% концентрации – на 4 сутки.
Далее был использован другой температурный режим - 37±2°С. Результаты изучения данного режима инактивации штамма Str. рneumoniae представлены на рисунке 31, где видно, что применении 0,1-0,2% концентрации
формалина не ведёт к инактивации микроорганизмов исследуемой культуры
за период, равный 15 суткам. А полная инактивация была отмечена лишь при
0,3% концентрации раствора на 4 сутки. Применение же при 37±2°С 0,4 %
концентрации раствора формалина инактивирует культуру на 3 сутки.
В результате проведённого исследования была разработана методика
проведения
полной
инактивации
биологического
сырья
штамма
Str.рneumoniae. Применяемый инактиватор – раствор формалина, концентра-
89
ция которого составила 0,4%. Температурные режимы: период инактивации
при 37±2°С - 2-3 суток, 22±2°С – 3-4- суток.
5
Концентрация м.к., млрд/мл
4,5
4
3,5
0,10%
0,20%
3
2,5
0,30%
2
0,40%
1,5
1
0,5
0
1
2
3
4
5
6
7
8
9 10 11 12 13 14 15
Сутки
Рисунок 31- Динамика инактивации штамма Str. рneumoniae. Температурный
режим 37±2°С
В результате применения разработанных режимов происходит полная
инактивация микроорганизмов штамма Str. Рneumoniae (рис. 32).
90
Концентрация м.к., млрд/мл
5
4,5
4
3,5
3
22º
2,5
37º
2
1,5
1
0,5
0
1 2 3 4 5 6 7
8 9 10 11 12 13 14 15
Сутки
Рисунок 32 - Динамика инактивации штамма Str. рneumoniae раствором формалина 0,4% концентрации. Температурные режимы 22±2°С и 37±2°С
При проведении нами иследований в области инактивации пределённой культуры микроорганизмов, была разработана методика для штамма
Str. рneumoniae. Она основана на одновременном воздействии 0,4% концентрации раствора формалина и температурного режима 37±2°С. В результате,
время, необходимое на проведение полной инактивации культуры, по сравнению со стандартной технологией было сокращено в 4 раза.
Следующим этапом работы было проведение разбавления бактериологической массы до необходимой концентрации 4•109 м. к./см3 по оптическому
стандарту ГИСК им. Тарасевича, путём внесения изотонического раствора
хлорида натрия.
Далее бактериальную массу депонировали. Для этого применяли адъювант – гидрат окиси алюминия, содержание сухого остатка в котором составило 6%. Вносили ГОА до 10; 20; 30% к объему, после чего выдержка составила 12–20 часов, температурный режим - 20–25°С.
91
Технология производства инактивированной вакцины против стрептококкоза крупного рогатого скота, разработанная нами в ходе проведённой
работы, представлена на схеме. (рис. 33).
Производственный штамм
Str. рneumoniae
Приготовление питательной среды для культивирования
производственного штамма
Освежение в МПБ культуры штамма Str. рneumoniae рН 7,2 - 7,4; температура культивирования 37±2°С; период культивации - 12 - 24 ч
Определение чистоты (высев
на среду Китта-Тароцци, Сабуро, МПБ, МПА), окрашивание по Граму
Выращивание в МПБ матровой расплодки
бак.культуры Str. рneumoniae рН 7,2-7,4; температура культивирования - 37±2°С; период культивирования - 12 - 24 ч
Определение чистоты (высев
на среду Китта-Тароцци, Сабуро, МПБ, МПА), окрашивание по Граму
Выращивание в 3 – 5 литровых бутылях с МПБ бак.массы микроорганизмов
штамма Str.рneumoniae рН 7,2 – 7,4; температура культивирования - 37±2°С;
период культивирования - 12 - 24 ч
Инактивация биомассы внесением 0,4% рас- Полноту инактивации исследотвора формалина; температура - 37±2°С; пе- вали посевом на МПА, МПБ,
риод инактивации - 48- 96 ч
биопробой на белых мышах
Стандартизация
(разбавление до необходимой концентрации)
Адсорбирование антигена штамма Str.рneumoniae
путем внесения раствора адъюванта (ГОА 6%) до
20% к объему; период адсорбции - 12–24 ч; температура – 20-25°С
Фасовка и этикетирование
Посев на среду КиттаТароцци, агар и бульон Сабуро, МПБ, МПА, для
определения стерильности
Посев на среду Китта-Тароцци, агар и бульон
Сабуро, МПБ, МПА для контролирования бактериальной стерильности; контроль безвиедности, иммуногенности
Рисунок 33 – Схема технологии производства инактивированной
вакцины против стрептококкоза крупного рогатого скота
92
3.3.3. Изучение иммунологических свойств вакцины против
стрептококкоза крупного рогатого скота в экспериментальных и
производственных условиях
3.3.3.1 Изучение иммунобиологических свойств вакцины против
стрептококкоза крупного рогатого скота в экспериментальных условиях
Далее, используя выше описанную технологию создания вакцины, было произведено несколько серий опытных вакцин на основе штамма
Str. Pneumonia, предварительно выделенного, а так же изученного возбудителя стрептококкоза у крупного рогатого скота: первая серия (№1) - гидроокисьалюминиевая (ГОА) формолвакцина против стрептококкоза крупного
рогатого скота; вторая серия (№ 2) – формолвакцина, содержащая масляный
адъювант; третья серия (№ 3) – формолвакцина, не содержащая адъювант.
Теперь настало время определить иммунизирующую дозу формолвакцины, которая была бы достаточно иммуногенной. Исследование проводили
на лабораторных белых мышах. В опыте на каждую дозу вакцины было взято
по 4 белые мыши, масса которых составляла 16-18 г. Животных иммунизировали однократно, вакцину вводили внутримышечно в область бедра. Позднее, через 14 дней после иимунизации, и вакцинированные, и неиммунизированные
мыши
были
заражены
вирулентной
культурой
штамма
Str. Pneumonia.
Полученные нами результаты показаны Результаты проведенных в
таблице 2.
93
%
0
0
0
0
4
100
0
0
0
0
4
100
4
1
25
0
0
4
100
4
2
50
1
25
3
75
4
100
4
100
0
0
2,0
4
1,0
4
0,5
0,25
–
4
Str. pneumoniae
200 млн.м.к.
Str. pneumoniae
200 млн.м.к.
Количество
животных
%
Количество
животных
Контроль
(невакцинированные)
%
Вакцина
против
стрептококкоза
крупного
рогатого скота
Количество
животных
Иммунизирующая доза
(109 м.к.)
Количество белых
мышей
Таблица 2 – Определение иммунизирующей дозы ГОА-формолвакцины против стрептококкоза крупного рогатого скота, проведённое на
белых мышах
Результаты заражения возбудителем через 14 сут после вакцинации
штамм Str. pneumoniae
Вирулент- Заболело
Пало
Выжило
ный
Название
возбудитель,
препарата
доза, млрд
м.к./см³
В ходе проведённого исследования было установлено, и это показано в
таблице 2, что иммунизирующей дозой, которая способствует созданию
100%-ой защиты вакцинированных белых мышей от вирулентного штамма
Str. Pneumonia, при гибели не привитых животных (контроль), является
1миллиард микробных клеток по оптическому стандарту ГИСК им. Тарасевича.
Далее проводили исследование иммуногенности и патогенности опытных серий вакцины. Данные испытания так же проводили на белых мышах. В
каждой опытной группе было по 10 лабораторных животных, масса которых
составляла 16-18 г. Животных, соответствующих сериям вакцин, прививали
внутримышечно иммунизирующей дозой, равной 0,5 см³ однократно. После
чего, спустя 14 суток, всех белых мышей заражали летальной дозой возбудителя стрептококкоза крупного рогатого скота - штаммом Str. Pneumonia. Летальная доза была ранее определена путём титрования на белых мышах и составила 200 млн м.к./см³. Наблюдали за животными 30 дней. (таблица 3).
94
Контроль
(невакцинированные)
%
Количество
животных
3 Формолвакцина
без адъюванта
Количество
животных
1 ГОА-формолвакцина против
стрептококкоза
крупного рогатого
скота
2 Формолакцина с
масляным
адъювантом
Результаты заражения
через 14 сут
штамм Str. pneumoniae
Пало
Выжило
Количество
животных
Вакцина
Доза
вакцины,
см³
Безвредность
Серия, №
Таблица 3 – Иммуногенность и безвредность вакцины против стрептококкоза
крупного рогатого скота после однократной вакцинации
%
0,5
безвредна
10
2
20
8
80
0,5
хромота в
течение 2–3
дней
10
4
40
6
60
0,5
безвредна
10
4
40
6
60
–
–
3
3
100
0
0
В таблице 3 показана реакция белых мышей на применение опытных
серий вакцин.
В трёх группах из четырёх были применены разные серии вакцин, а
четвёртая группа – контроль, эти животные не подвергались иммунизации.
Доза каждой вакцины составила 0,5 см³, вводили препарат внутримышечно.
Через 14 дней после иммунизации животных всех четырёх групп подвергли
заражению культурой вирулентного штамма Str. Pneumonia.
После однократной иммунизации гидроокисьалюминиевой формолвакциной через 14 суток у лабораторных животных 80% формировалась иммунная защита. Местных поствакцинальных реакций отмечено не было.
95
У белых мышей, привитых формолвакциной, не содержащей адъювант,
защита от возбудителя составила 60%.
При применении гидроокисьалюминиевой вакцины, содержащей масляный адъювант, защита животных против штамма Str. Pneumonia оказалась
равной 60%, однако у белых мышей данной опытной группы в течение 2-3дней отмечали хромоту. На основании полученных результатов из трёх
опытных серий вакцин лучшие показатели отмечены у ГОА-формолвакцины,
которую использовали в дальнейшей работе.
Далее мы изучали иммунологические свойства разработанной вакцины.
Для этого белых мышей прививали двукратно, интервал между инъекциями
составил 10 суток. Через 14 дней после ревакцинации привитых и невакицированных
(контроль)
животных
заражали
вирулентным
штаммом
Str. Pneumonia. (таблица 4).
Таблица 4 – Иммуногенность и безвредность вакцины против стрептококкоза
Контроль
(невакцинированные)
–
–
Количество
животных
Количество
животных
Безвредность
первая
ГОА-формолвакцина
доза 0,5,
против стрептококвторая
коза крупного рогачерез
того скота
10 сут 0,5
Результаты заражения
через 14 сут
штамм Str.pneumoniae
пало
выжило
Количество
животных
1
Вакцина
Доза
вакцины,
см³
безвредна
Серия, №
крупного рогатого скота после двукратной вакцинации
%
10
0
0
10
100
3
3
100
0
0
%
Исходя из полученных данных, представленных в таблице 4, следует,
что у белых мышей, двукратно привитых ГОА-формолвакциной против
96
стрептококкоза КРС в дозе 0,5 см³, через 14 дней после ревакцинации формировалась прочная иммунная защита, обеспечивающая выживаемость 100%
животных. В контрольной группе была 100% гибель.
В ходе проведённых исследований была разработана технология производства гидроокисьалюминиевой формолвакцины для борьбы со стрептококкозом у крупного рогатого скота. При лабораторных испытаниях регистрировали формирование 80 и 100% защиты животных после 1- и 2хкратной иммунизации против штамма Str.pneumoniae.
3.3.3.2. Разработка параметров контроля вакцины против
стрептококкоза крупного рогатого скота
Все производимые вакцииы должны соответствовать национальным и
международным стандартам. Применяться могут только безопасные вакцины, признанные стерильными, безвредными и иммуногенными. Защита прививаемых животных должна быть не менее 80%. При производстве вакцины
должны проходить контроль по качеству.
При производстве ГОА-формолвакцины применяли параметры контроля: внешний вид препарата, определение стерильности, безвредности,
иммуногенности, а так же полноты инактивации. При контроле внешнего
вида следили за целостностью тары, цветом, консистенцией, наличием нехарактерных включений, нарушением укупорки. Данные параметры определяли визуально. Вакцина имеет светло-желтый цвет, визуализируется
осадок, легко разбивающийся при встряхивании, образуя однородную
жидкость. Не имеет посторонних включений.
Вакцина должна быть свободной от посторонних антигенов. Чтобы
исключить контаминацию бактериями и грибами, осуществляли контроль
в соответствии с ГОСТ 28085-89, а именно путём высева вакцины различные среды: Китта-Тароцци, агар и бульон Сабуро, МПА, МПБ. Далее про97
водили культивирование при температуре 37°С в термостате 10 суток. На
питательных средах роста микрофлоры выявлено не было.
Контроль инактивации и безвредности проводили на белых мышах,
масса которых была 16-18 г. Для этого 5-ти особям вакцину инъекцировали подкожно. Доза претарата была прежней - 0,5 см3. В течение 10 дней за
животными проводили наблюдение.
В течение всего периода наблюдения белые мыши были активны, у
них не проявлялись признаки болезни, был сохранён аппетит. В месте введения вакцины никаких изменений выявлено не было.
Таблица 5 – Результаты контроля вакцины против стрептококкоза
2
против
стрептококкоза
крупного рогатого
скота
первая
доза 0,5,
вторая
через 10
сут 0,5
3
Контроль
(невакцинированные)
Количество
животных
1
Доза
вакцины,
см³
Результаты заражения
через 14 сут
штамм Str.pneumoniae
Пало
Выжило
Количество
животных
Количество
животных
Вакцина
Безвредность
Серия, №
крупного рогатого скота
%
безвредна
10
2
20
8
80
безвредна
10
1
10
9
90
безвредна
10
2
20
8
80
–
30
30
100
0
0
–
%
Чтобы оценить иммуногенность инактивированной вакцины, использовали лабораторных мышей, массой 16-18 г. Животным опытной группы,
в количестве 10-ти особей, инъекцировали препарат подкожно двукратно.
Доза вакцины – 0,5 см3, интервал между инъекциями – 10 суток. Животных
98
из контрольной группы, которых так же было 10 особей, не иммунизировали. Спустя 14 суток после ревакцинации, белых мышей обоих групп заражали культурой штамма Str.pneumoniae путём внутрибрюшинного введения летальной дозы, которая составляет 200 млн м.к./см3. Принято считать, что если выживаемость составляет 8 из 10 иммунизированных, а гибель в контроле – 8 из 10 животных, за которыми наблюдают 10 суток, то
вакцина иммуногенна. Исследование показало, что защита лабораторных
животных составила более 80%. Метод контроля был проверен при изготовлении 3-х опытных серий инактивированной ГОА-формолвакцины
(таблица 5).
Следовательно, благодаря предложенному методу осуществления
контроля, производимая вакцина является безвредной, ареактогенной, стерильной и высокоиммуногенной.
3.3.3.3. Изучение эффективности вакцины против стрептококкоза
крупного рогатого скота в производственных условиях
Испытания в производственных условиях новой инактивированной
ГОА-формолвакцины
хозяйствах
против
Тимашевского,
стрептококкоза
Кореновского
КРС
и
производилось
Тихорецкого
в
районов
Краснодарского края. С этой целью было изговлено 2 серии вакцины против
стрептококкоза КРС по разработанной методике, которые прошли контроль
по иммуногенным свойствам и безвредности на лабораторных животных. В
каждом из хозяйств провели иммунизацию крупного рогатого скота в
колличестве 100-700 голов разных возростных групп. Применяли вакцину
путём двукратного, с интервалом 7-14 дней, внутримышечного введения.
Доза для
коров составила
5,0 см3. Помимо
взрослых
животных,
иммунизировали и телят, возраст которых был 7 дней и 1 месяц. Доза для
телят составила 1,5-2,5 см3 в зависимости от возраста. Период наблюдения за
иммунизированными животными составил 9 месяцев.
99
Чтобы определить степень напряжённости иммунной защиты у привитых животных, провели оценку количества специфических антител против
возбудителя стрептококкоза в сыворотке крови у вакцинированного крупного рогатого скота. Исследование проводили спустя 9 месяцев после ревакцинации у 5% животных, которые отбирались выборочно. Титр антител выявляли в (РП) реакции преципитации в капиллярах к штамму Str.pneumoniae по
общепринятой методике.
Полученные показатели были внесены в в таблицу 6.
Таблица 6 – Иммуногенность и безвредность вакцины против
стрептококкоза крупного рогатого скота
в производственных условиях на телятах в возрасте 7-8 дней
№ Наименование
п/п хозяйства
1.
2.
Кол-во
Доза
жив-х в в см3
опыте
ЗАО
САФ
«Искра»
Тимашевского
района
телята
40 гол в
возрасте
7-8 дней
телята
40 гол в
возрасте
30 дней
ЗАО «Родник» телята
Тихорецкого
30 гол в
района
возрасте
7-8 дней
телята
30 гол в
возрасте
30 дней
первая
доза 1,5
вторая
доза 2,0
первая
доза1,5
вторая
доза2,0
первая
доза
1,5,
вторая
доза 2,0
первая
доза
1,5,
вторая
доза
2,0
100
Сохранность
Иммуногенность
(титр антител)
через через
30 сут 270 сут
забо
лело
гол.
2
95,4
1:161:64
1:16-1:32
1
96,7
1:321:128
1:16-1:64
4
86,7
1:161:64
1:16-1:32
3
90,0
1:321:128
1:16-1:64
%
Исходя из полученных данных, которые приведены в таблице 6, можно
говорить, что у телят, возраст которых 7-8, а так же 30 дней, иммунизированных противострептококковой ГОА-формолвакциной, спустя 14 суток после ревакцинации, отмечали формирование прочной иммунной защиты. Доза
вакцины составляла при первом введении – 1,0 см³, а при ревакцинации – 1,5
см³. Интервал между инъекциями был 10 суток. Уровень иммунной защиты
против возбудителя стрептококкоза крупного рогатого скота штамма Str.
рneumoniae у 7-8- дневных телят составил 86,7 - 95,4%, а у 30-тидневных 90,0 - 96,7%. Титр специфических антител к штамму Str. рneumoniae, который был определён спустя 9 месяцев после ревакцинации составил 1:16-1:64.
Уровень иммунной защиты вакцинированных коров через 14 суток
после ревакцинации составил более 92,5%. Иммунизация проводилась
внутримышечно двукратно, интервал между инъкция был равен 7-14 дней
(как правило 10 суток). Доза вакцины составила 5,0 см3. После проведения
иммунизации у животных не наблюдалось каких-либо отклонений от
физиологической нормы. При определении количества специфических
антител в сыворотке крови коров было установлено, что спустя 30 суток он
составлял 1:16 до 1:128, а через 9 месяцев был равен 1:16-1:64. Полученные
результаты внесены в таблицу 7.
101
Таблица 7 – Иммунологические свойства противострептококковой вакцины
для КРС, исследованные в производственных условиях
№ Наименование
п/п хозяйства
КолДоза
во
в см3
жив-х
в
опыте
Сохранность
кол-во
гол.
%
Иммуногенность
(титр антител)
через
30 сут
через
270 сут
1.
ЗАО
САФ коров
«Искра»
700
Тимашевского
района
первая 691
и
вторая
– 5,0
98,5
1:161:64
1:16-1:32
2.
ЗАО «Родник» 200
Тихорецкого
района
92,5
1:161:64
1:16-1:32
3.
ООО «Сфера» 100
Кореновского
района
первая 185
– 1,0,
вторая
– 1,5
первая 93
– 1,0,
вторая
– 1,5
93,0
1:161:128
1:16-1:64
Инактивированная гидроокисьалюминиевая формолвакцина прошла
производственные испытания в условиях животноводческих хлзяйств в
период эпизоотии стрептококкоза в ЗАО САФ «Искра» Тимашевского
района. В хозяйстве было иимунизировано 700 голов крупного рогатого
скота. Так как вакцина ареактогенна, иммунизации подвергались все
животные без разделения на больных и подозреваемых в заражении.
Вакцинация проводилась двукратно, интервал между инъекциями составил
7-14 дней (обычно 10), внутримышечно, доза составила 5,0 см3. Наблюдение
за животными сохранялось в течение 9 месяцев.
102
Вакцинация
Рисунок 34 – Применение инактивированной вакцины при эпизоотии
стрептококкоза крупного рогатого скота в ООО «Искра» Тимашевского
района
На рисунке 34 показано как использование противострептококковой
вакцины, которую применяли двукратно, интервал между инъекциями
составил 7-14 дней, доза – 5,0 см3, отразилось на эпизоотической ситуации в
хозяйстве. Использование данного биологического препарата в разгар
эпизоотии позволило остановить её.
В результате проведённых исследований было установлено, что
разработанная
формолвакцина
противострептококковая
для
крупного
рогатого
гидроокисьалюминивая
скота
–
это
безвредный,
высокоиммуногенный биологический препарат. В результате её применения
у животных отмечается формирование активной иммунной защиты спустя 14
суток после ревакцинации, что способно остановить эпизоотию и сихранить
стадо. На изобретение было получено 2 патента РФ: «Способ изготовления
вакцины
ассоциированной
крупного рогатого скота»,
против
стафиликоккоза
и
стрептококкоза
№2406532 от 20.12.2010 г,
103
«Вакцина
ассоциированная
против
стафиликоккоза
и
стрептококкоза
крупного
рогатого скота» №2406533 от 20.12.2010 г.
3.4. Разработка ветеринарных мероприятий по профилактике и
Ликвидации стрептококкоза крупного рогатого скота
В литературе, имеющейся в свободном доступе, отсутствуют рекомендации, включающие мероприятия по проведению профилактических и ликвидационных действий в случае возникновения стрептококкоза крупного рогатого скота в животноводческих хозяйствах. Исходя из возникшей в последние годы необходимостью, связанной с широким распространением этого заболевания на территории Краснодарского края, данные мероприятия нами
были разработаны. Была предложена система для проведения диагностических, профилактических и лечебных мероприятий при стрептококкозе крупного рогатого скота (рис. 35).
Мероприятия по профилактике заболевания
1. Мероприятия по профилактике стрептококкоза крупного рогатого
скота в хивотноводческиз хозяйствах Краснодарского края включают комплекс действий различной напрвленности. Этот комплекс включает зоогигиенические, ветеринарно-санитарные, технологические и другие действия,
направленные на поничение обсеменённости животноводческих помещений
фермы, на повышение естественной резистентности организмов животных, а
так же предотвращение заражения новорожденного молодняка от матери, и в
период выращивания через окружающие объекты, корм, воду и т.д. При этом
необходимо учитывать особенности содержания животных в каждом хозяйстве.
Необходимо, для недопущения заражения новорожденных телят иммунизировать соответствующими вакцинами стельных коров и молодняк, согласно наставлению по применению.
104
Эпизоотологическое
обследование
ДИАГНОС
ТИКА
Бактериоскопические
исследования
Клинические признаки
Выделение чистых
культур
Патологоанатомические
изменения
Серологические
исследования
Патологический
материал
Выявление и
ликвидация
бактерионосителей
ЛЕЧЕБНОПРОФИЛАКТИЧ
ЕСКИЕ
МЕРОПРИЯТИЯ
Биохимическая
идентификация
Поголовье
крупного
рогатого
скота в
хозяйстве
Контроль за
качеством
кормов
Лечение
больных
Антибиотики
пефлоксацин,
энрофлон
Подозрительным в
заболевании
поливалентную
гипериммунную
сыворотку
Здоровые
животные
Обеспечение
оптимального
кормления
Иммунизация
беременных
ОКОНЧАТЕЛЬНЫЙ
ДИАГНОЗ
Вакцинация
молодняка в
оптимальные
сроки
Регулярная
дезинфекция,
дератизация,
дезинсекция
Иммуномодуляторы
(поливедрин, вестин, ле
вамизол, полиоксидони
н,
Т- и В-активин и др.)
Поливалентная
сыворотка
ПРОФИЛАКТИЧЕСКИЕ МЕРОПРИЯТИЯ
Система диагностики, профилактики и лечения стрептококкоза крупного рогатого скота
105
Для повышения резистентности молодняка одновременно с вакцинами
можно использовать:
а) иммуномодуляторы (вестин, Т- и В-активин, тимозин, тимулин, тимопоэтин, поливедрин, полиоксидонин, и др.).Вводят препараты при иммунизации, однократно или двукратно, согласно инструкции по применению.
б) нормальные сыворотки крови, которые инъекцируются подкожно
или внутримышечно. Доза препарата составляет 0,7 мл на 1 кг массы тела
животного один раз в сутки 2-3 дня;
г) пробиотики (бифацидобактерин, бифидумбактерин, лактицин и др.).
Применяются препараты согласно наставлению.
2. Руководители, а так же специалисты и рабочие хозяйств и предприятий,
складов, связанных с приёмом, транспортировкой и переработкой животных
и животновотноводческого сырья, владельцы животных должны строго соблюдать и выполнять ветеринарно-санитарные требования для хозяйств и
ферм, связанных с животноводствои.
3. Ветеринарные специалисты животноводческих организаций (ферм, коопераций, госветсети) обязаны:
3.1. Проводить мониторинг состояния животных в обслуживаемой зоне.
3.2. Организовать плановую профилактическую иммунизацию крупного рогатого скота противострептококковыми вакцинами, особого внимания требуют животные, содержащиеся вокруг холодильников, базов, сырья, перерабатывающих предприятий.
Мероприятия по ликвидации заболевания
1. При установлении диагноза на стрептококкоз крупного рогатого скота администрация района (города) в порядке, предусмотренном Ветеринарным законодательством Российской Федерации, по представлению главного ветеринарного врача района (города) выносит решение об объявлении хозяйства
(фермы), населенного пункта (его отдельной самостоятельной части в зависимости от эпизоотической обстановки) неблагополучными по стрептококкозу крупного рогатого скота и установления ограничений. В решении указывают точные границы эпизоотического очага болезни, неблагополучного
пункта, угрожаемой зоны, а также определяют основные мероприятия по
106
ликвидации болезни в неблагополучном пункте и ее профилактике в угрожаемой зоне.
2. По условиям ограничений в неблагополучном пункте запрещают:
2.1. Ввоз и вывоз крупного рогатого скота, продуктов их убоя, шкур, инвентаря и кормов.
2.2. Перегруппировку крупного рогатого скота.
2.3. Организацию мероприятий, связанных со скоплением крупного рогатого
скота.
2.4. Торговлю крупным рогатым скотом, продуктами их убоя, шкурами.
2.5. Заготовку и скармливание крупному рогатому скоту травы, сена, других
кормов из мест, где могли находиться больные или имелись трупы этих животных.
2.3. В неблагополучном хозяйстве (пункте) проводят:
2.3.1. Точный учет всего поголовья крупного рогатого скота.
2.3.2. Применяют, согласно наставлению по применению, специфическую
сыворотку против стрептококкоза, а далее, спустя 10-14 дней проводят иммунизацию данного поголовья.
2.3.3. Проводят очень тщательно механическую очистку, а после и дезинфекцию помещений фермы, оборудования, выгульных дворов, а также помещений, где содержались животные. Дезинфекцию проводят 4%-ной эмульсией
ксилонафта, 4%-ным раствором гидроксида натрия, 0,3-0,5%-ным раствором
эстостерила, 5%-ной эмульсией дезонала, 0,3%-ный раствор глутарового альдегида, 2-3%-ным раствором фрезота. После проведения влажной или аэрозольной дезинфекции, с последующей экспозицией, проводят проветривание
помещения, участки поверхностей, которые могут быть доступны для животных, обмывают водой. Очищают поилки и кормушки от остатков дезинфицирующего раствора. Животных вводят в помещение после исчезновения
запаха применяемого дезсредства. При применении молочной кислоты из
расчета 20 мл на 1 м3 и перекиси водорода -15 мл на 1 м3, для аэрозольной
дезинфекции, животных можно не удалять.
2.3.4. Шкуры от крупного рогатого скота, полученные в неблагополучных
пунктах (хозяйствах), подвергают дезинфекции припроведении технологической обработки в условиях перерабатывающего предприятия, согласно действующей инструкции по дезинфекции шкур.
107
Мероприятия в угрожаемой зоне
1. В угрожаемую зону входит территория с населенными пунктами и хозяйствами, которые непосредственно прилегают к неблагополучному по стрептококкозу пункту, а также хозяйства, которые в течение последнего месяца
имели производственные связи с неблагополучным пунктом по ввозу крупного рогатого скота, кормов для них или другие хозяйственные связи.
2. В угрожаемой зоне проводят следующие ветеринарно-санитарные, ограничительные, и хозяйственные мероприятия:
2.1. Все восприимчивое поголовье крупного рогатого скота, находящееся в
частных и государственных хозяйствах, подвергается вакцинации против
стрептококкоза крупного рогатого скота, согласно наставлению по применению вакцины.
2.2. Проводят ограничение хозяйственных связей с неблагополучными по
стрептококкозу предприятиями и населенными пунктами.
2.3. Организуют строгий ветеринарно-санитарный контроль за содержанием
и кормлением крупного рогатого скота.
2.4. Закрепляют постоянных лиц и транспорт для обслуживания животноводческой фермы.
2.5. Запрещают ввоз и вывоз крупного рогатого скота из угрожаемой зоны,
торговлю на рынках животными, мясом.
2.6. Оповещают население об установлении ограничений, и об угрозе распространения заболевания.
2.7. Усиливают ветеринарно-санитарный надзор на предприятиях по заготовке и переработке животноводческих продуктов и сырья, а так же на рынках и
мясокомбинатах.
2.8. Проводят массово-разъяснительную работу среди населения по недопущению распространения стрептококкоза.
Снятие ограничений
1. Хозяйство (пункт) объявляют благополучным через 15 дней после последнего случая выздоровления или падежа животного, а так же после поголовной вакцинации крупного рогатого скота и заключительных ветеринарносанитарных мероприятий.
2. Ввоз крупного рогатого скота в пункт и зону, ранее считавшиеся неблагополучными, разрешается только после вакцинации против стрептококкоза
108
крупного рогатого скота в хозяйствах-поставщиках, которые обязаны сделать
об этом соответствующую запись в ветеринарном документе.
3. Ответственность за проведение ветеринарно-санитарных, технологических, зоотехнических, организационно-хозяйственных мероприятий возлагается на руководителя хозяйства, а за проведение противоэпизоотических и
лечебных мероприятий – на ветеринарных специалистов.
3.5. Экономическая эффективность применения вакцины против
стрептококкоза крупного рогатого скота в производственных условиях
Важным критерием нашей работы является расчёт экономической эффективности проводимых мероприятий, которые направлены на недопущение заболевания животных стрептококкозом и снижение связанных с этим
потерь из-за недополучения продукции, падежа, и затрат на ветеринарные
мероприятия. Расчитываются: фактический экономический ущерб, предотвращённый экономический ущерб, экономический эффект, полученный в результате проведения ветеринарных мероприятий, экономический эффект на
рубль затрат, окупаемость.
Используя исходные данные, подсчитали экономическую эффективность от проведения иммунизации крупного рогатого скота против стрептококкоза (табл. 5).
109
Таблица 5 - Исходные данные для расчета экономической эффективности
применения ГОА-формолвакцины против стрептококкоза
крупного рогатого скота
Опыт
Контроль Обозначения
Показатель
Число животных
Количество заболевших животных
Число павших животных
Среднесуточное количество продукции (молока), полученной от здоровых животных
Среднесуточное количество продукции (молока), полученной от больных животных
Период наблюдения за изменением продуктивности животных
Средняя цена реализации 1 кг продукции,
полученной от здоровых животных,
15
гол
гол
гол
л
7
л
90
дни
10
руб
160
2
0
16
9
0
Стоимость 1 л вакцины
Месячный оклад ветеринарного врача
1000
руб
9100
руб
1. Ущерб, полученный вследствие понижения продуктивности животных,
из-за заболевания определяется по формуле:
У 2 = М 3 * (В з -В б )* Т* Ц 3
Где:
М – количество голов заболевших животных;
Вз и Вб –количество продукции среднесуточное, которое получают от
здоровых и от больных животных соответственно, в расчёте на одну голову,
кг;
Т –продолжительность наблюдения за изменением продуктивности животных (средняя), дни;
Цз – цена реализации (средняя) 1 кг продукции от здоровых животных,
руб.
Теперь находим ущерб, который возникает вследствие понижения продуктивности коров из-за заболевания по опытной и контрольной группе:
Уоп = 2 гол. * (15кг – 7кг) * 90 дней * 10 руб. = 14400 руб
Ук = 9 гол. * (15кг – 7кг) * 90 дней * 10руб = 64800 руб
2. Находим общий экономический ущерб по каждой группе:
Уо = У2
110
Уо оп = 14400 руб.
Уо к = 64800 руб.
3. Определяем коэффициент ущерба на 1 заболевшее животное:
Ку заб = Уо / Мз , где:
Уо – общий ущерб,
Мз – количество заболевших животных.
Ку заб опыт = 14400 руб. / 2гол = 7200 руб.
Ку заб контр = 64800 руб. / 9 гол = 7200 руб.
4. Расчитывает коэффициент ущерба на одно наличное животное.
Ку нал = Уо / М нал, где:
Уо – общий ущерб,
М нал – количество восприимчивых животных.
Кунал оп = 14400 руб / 160 гол. = 90 руб.
Кунал контр = 64800 руб. / 9 гол = 4050 руб.
5. Вычисляем коэффициент заболеваемости
Кз = Мб / М нал, где;
Мб – количество заболевших животных;
М нал – число восприимчивых животных.
Кз оп = 2 гол / 160 гол = 0,012
Кз контр = 9 гол / 16 гол = 0,56
6. Коэффициент летальности считаем по формуле:
Кл = Мп / Мз , где;
Мп – число павших животных
Мз – число заболевших животных.
Кл опыт = 0 гол / 2 гол
Кл опыт = 0 гол / 9 гол
Коэффициент летальности составляет 0
111
7. Расчёт затрат на ветеринарные мероприятия.
Затраты на ветеринарные мероприятия складываются из:
- затрат на ветеринарные препараты;
- затрат на оплату труда ветеринарному работнику за время работы;
Исходя из вышеперечисленного, произвели необходимые расчеты по
вычислению затрат на ветеринарные мероприятия:
А) Затраты на лекарственные препараты:
Противострептококковая ГОА-формолвакцина для КРС:
Мпреп = М * Д * Кр * Дл, где;
Мпреп- количество затраченного препарата, мл;
М - количество животных, гол.
Д - доза препарата на одно животное (одну обработку), мл;
Кр - кратность введения (проведения обработки) (раз в день);
Дл - количество дней лечения (профилактики, обработки) этим препаратом (дней);
Вакцинация 1:
Мпреп =160 гол * 5 мл * 1 раза в день * 1 день = 800 мл.
Ревакцинация через 7-14 дней:
Мпреп = 160 гол * 5 мл * 1 раза в день * 1 день = 800 мл.
Мпреп = 800мл + 800 мл =1600 мл = 1,6 л
Стоимость 1 л вакцины составляет 800 руб., следовательно:
Звакц = 1,600 л * 1000 = 1600 руб.
Б) Затраты на оплату труда рассчитываются следующим образом:
1) Определяем дневную ставку врача:
Дв = Зпв / 25,6 где:
Дв – дневная ставка ветеринарного врача;
Зпв – месячный оклад ветеринарного врача
Дв = 9100 руб. / 25,6 = 355,47 руб.
2) Определяем поминутную оплату:
112
Мов = Дв / (8часов * 60 мин), где;
Мов – оплата работы ветврача за одну минуту;
Дв – дневная ставка ветеринарного врача
Мов = 355,47 руб. / (8часов * 60 мин) = 0,74 руб.
3. Определяем затраты времени: Т = t * Кр * Мб * Дл, где;
Т - затраты времени (мин);
t - время на введение препарата или на проведение обработки (мин);
Кр - кратность введения (проведения обработки) (раз в день);
Мб - количество обрабатываемых животных.
Дл - количество дней лечения (профилактики, обработки) этим препаратом (дней);
Твакц = 2 мин * 1 раз/день * 160 гол * 1 день = 320 мин
Тревакц = 2 мин * 1 раз/день * 160 гол *1 день = 320 мин
Тобщ = 320 мин + 320 мин = 640 мин
Находим затраты на заработную плату ветеринарных работников:
Зопл = 640 мин * 0,74 руб = 473,6 руб = 474 руб
Таким образом затраты на оплату труда составили 480 руб
Затраты на ветеринарные мероприятия составили всего:
Зо = Звакц + Зопл
Зо = 1600 руб. + 474 руб. = 2074 руб.
8. Расчёт предотвращённого ущерба вычисляем по формуле:
Пу = Мо * Кз * Ку заб - Уо, где –
Мо – количество восприимчивых животных, гол;
Кз – коэффицент заболеваемости (по контролю), %;
Ку заб – коэффицент ущерба на одно заболевшее животное, руб;
Уо – общий ущерб;
Пу опыт = 160 гол * 0,56 * 7200 - 14400 руб = 630720 руб
Пу конт = 16 гол * 0,56 * 7200 - 64800 руб = - 288 руб
113
9. Расчёт зкономической эффективности ветеринарных мероприятий:
Эв = Пу - Зо где:
Эв = экономическая эффективность ветеринарных мероприятий;
Пу – предотвращённый ущерб;
Зо – затраты на ветеринарные мероприятия
Эв опыт = 630720 руб - 2074 руб = 628646 руб
Эв конт = - 288 руб - 0 руб = - 288 руб
10. Окупаемость ветеринарных мероприятий:
Эр = Эв / Зо
Эр опыт = 628646 руб / 2074 руб = 303 руб
Эр конт = - 288 руб / 0 руб = 0 руб
В нашем случае при специфической профилактике стрептококкоза крупного рогатого скота получены данные, представленные в таблице:
Показатель
Опытная
Контрольная
Число животных в каждой группе, гол.
160
16
Количество животных подвергнутых вакцина-
160
-
ЧКоличество заболевших животных, гол.
2
9
Число павших животных, гол.
0
0
приятий, руб.
2074
0
Всего
12,9
0
14400
64800
ции, гол
Затраты на
проведение ветеринарных меро-
На одно животное
Фактический ущерб, руб.
114
Предотвращённый ущерб, руб.
630720
- 288
Экономическая эффективность, руб.
628646
- 288
303
0
Окупаемость, руб.
Таким
образом,
при
применении
противострептококковой
ГОА-
формолвакцины для крупного рогатого скота экономическая эффективность
составила 628646 рулей, а окупаемость на 1 рубль затрат составила 303 рубля.
3.6. Обсуждение результатов исследований
Специфическая профилактика инфекционных заболеваний животных
является одной из основных реально осуществляемых мер контроля эпизоотических процессов в практике (С.И. Джупина, 2004).
Свои исследования мы планировали и проводили начиная с оценки эпизоотической обстановки по инфекционным бактериальным заболеваниям
крупного рогатого скота и нозологического профиля в Краснодарском крае в
течение последних 10-ти лет (2004-2013 гг.).
При изучении эпизоотической обстановки в ретроспективном анализе
инфекционной патологии крупного рогатого скота по статистическим данным государственного управления ветеринарии Краснодарского края, ГБУ
«Кропоткинская краевая ветеринарная лаборатория». и результатам собственных исследований за период с 2004 по 2013 годы регистрировали заболеваемость крупного рогатого скота разными бактериальными инфекционными болезнями, чаще регистрировали стрептококкоз, колибактериоз, псевдомоноз, стафилококкоз, реже сальмонеллез, злокачественный отек, эмфизематозный карбункул, пастереллез, инфекционная энтеротоксемия, некробактериоз, лептоспироз, туберкулез, бруцеллез, сибирская язва (рис. 2).
115
Проведя ряд исследований было выявлено, что в Краснодарском крае
эпизоотическая обстановка по бактериальным инфекционным болезням у
крупного рогатого скота напряженная. Данный вид животных болеет разными инфекционными заболеваниями, превалируютют колибактериоз, стрептококкоз, псевдомоноз. В нозологическом профиле инфекционных бактериальных болезней на первом месте стоит эшерихиоз (50%), затем стрептококкоз
(16,4%), псевдомоноз (14,1%), стафилококкоз (11,4%), сальмонеллез (3,8%),
злокачественный отек (1,8%), пастереллез (0,7%), инфекционная энтеротоксемия (0,5%), бруцеллез (0,5%), некробактериоз (0,3%), туберкулез и эмфизематозный карбункул по 0,2%, лептоспироз и сибирская язва по 0,05% (рис.
3).
Анализ результатов проведенных исследований показывает, что основными причинами появления и распространения инфекционных болезней в
Краснодарском крае являются: нарушение нормативных требований по
кормлению, содержанию животных и технологии животноводства, несанкционированная реализация продуктов животноводства без должного контроля.
Поэтому необходимо для снижения эпизоотической напряженности по экономически значимым инфекционным болезням разрабатывать и строго выполнять противоэпизоотические мероприятия. Главное значение имеют специальные меры, направленные на своевременную диагностику и вакцинацию
восприимчивых животных. Полученные нами данные согласуются с результатами
исследователей
В.С. Слугина
(1974);
Ю.В Сафарова,
Е.А.
Клепининой
С.А. Джульфаева
(1987);
(1964);
А.А. Конопаткина,
В.А. Есепенок, Е.А. Клепининой (1990); Э.М. Мешева (1993); Р.А. Кадымова
и соавт. (1990; 1992, 1998); Ю.Ф. Мишанина, Е.Н. Толмасовой (2001); Ю.М.
Ибрагимова (2001) при изучении заразных заболеваний животных в разных
частях нашей страны.
При изучении превалентности вспышек стрептококкоза у крупного рогатого скота за последние 10 лет установлено, что за период 2004-2013 гг.
было зарегистрировано 2321 вспышка заболевания на фермах разного типа в
116
20 районах Краснодарского края, отмечалась тенденция к снижению превалентности вспышек стрептококкоза в животноводческих хозяйствах края.
Вспышки стрептококкоза протекали эпизоотически. За период 2004-2007 гг.
превалентность вспышек у крупного рогатого скота стрептококкоза в хозяйствах края имела тенденцию к повышению, с 2008-2013 гг. наблюдалось
снижение вспышек заболевания, это, по-видимому, связано со снижением
численности поголовья животных, выполнением ветеринарно-санитарных
мероприятий в хозяйствах края. Ежегодные совокупные показатели инцидентности вспышек заболевания сопровождались ростом. Вспышки стрептококкоза характеризовались эпизоотическим типом, что подтверждается широтой превалентности заболевания (20 административных района территории
края), высокой частотой заноса возбудителя на фермы, длительностью периода неблагополучия (10 лет).
При изучении территориальных границ стрептококкоза крупного
рогатого скота в районах Краснодарского края установлено, что распространение стрептококкоза имеет выраженные регионарные особенности, из 20
районов наиболее часто стрептококкоз регистрируется у крупного рогатого
скота в 8 районах: в Кавказском- 34%, Ейском- 18%, Кущевском- 8%,
Тимашевском- 6%, Лабинском, Славянском и Павловском районах по 5%, г.
Краснодаре- 4%, в других оставшихся районах от 1 до 2% (рис. 4, 5).
Многообразие стрептококковых культур, выделяемых в хозяйствах данных районов сигнализирует о нестабильности погоды, особенно в демисезонные периоды (осень, весна), и зимой а так же о высоком уровне влажности, вследствие значительного количества осадков. Следовательно, можно
сказать, что погода является способствующим фактором в динамике заболеваемости стрептококкозом.
При изучении у крупного рогатого скота вспышек эпизоотий стрептококкоза в течение последних 10 лет в разных животноводческих хозяйствах
Краснодарского выделялись разные виды патогенных стрептококков (рисунок 6). В результате установлено, что эпизоотии стрептококкоза крупного
117
рогатого скота в хозяйствах Краснодарского края вызывали 10 видов патогенных возбудителей: Str.pneumoniae, Str.septicum, Str.pyogenes, Str.uberis,
Str.bovis,
Str.vestibularis,
Str.zooepidemicus,
Str.salivarus,
Str.mutans,
Str.gallolyticus, доминировал Str. pneumoniae.
При изучении сезонности стрептококкоза КРС на животноводческих
фермах края установлено, что стрептококкозом подвержены заболеванию
животные всех: с 1-10 дней 37%, с 10-20 дней – 33%, в 20-60 дней – 14%, в
60-120 дней - 10%, взрослые – 6%. Взрослые животные заболевают реже, чем
молодняк, но чаще они являются бактерионосителями (рис. 7).
Постановку диагноза на стрептококкоз проводили на основании эпизоотологических данных, клинических признаков, патоморфологических изменений, с обязательным подтверждением лабораторной диагностикой. Лабораторные исследования включала результаты бактериологического исследования.
Бактериологические исследования включали выделение возбудителя от больных животных в исходном материале согласно «Методическим указаниям по
лабораторной
диагностике
стрептококкоза
животных»,
утвержденных
25.09.1990 г. ГУВ СССР, «Методическим указаниям по бактериологической
диагностике смешанных кишечных инфекций» (Москва, 2000) с использованием биохимических тест-систем фирмы «Pliva-Lachema Diagnostika»: NEFERMtest 24, ENTEROtest 24, STREPTOtest 16, EN-COCCUStest. Для определения в сыворотке крови животных титра специфических антител, проводили
постановку реакции преципитации (РП) в капиллярах, используя методические указания по лабораторной диагностике стрептококкоза животных
(М., 1990), утвержденные Главным управлением ветеринарии (ГУВ). Полученные нами данные согласуются с исследованиями Э.М. Мешева (1993),
Ю.М. Ибрагимова (2001).
При изучении клинического проявления стрептококкоза у крупного рогатого скота было установлено, что клинически болезнь протекает сверхостро, остро, подостро и хронически. Болеют животные всех возрастов, начиная
со 2-3-го дня от рождения, и до 120 дней, а так же взрослое поголовье. Бо118
лезнь проявляется септицемией, конъюнктивитами, пневмонией, артритами,
энтеритами. У новорожденных отмечают воспаление пупочного канатика омфалит. Регистрируют болезнь в течение всего года, чаще всего в период с
декабря по апрель. У взрослых животных наблюдаются поражения венчика
копыт, воспаление межкопытной щели, пододерматиты, дерматиты, абсцессы, маститы, эндометриты и другие (рис.9-18).
При стрептококкозе отмечали основные патологоанатомические и гистологические изменения: у 1-4-месячных телят более часто отмечали наличие
серозно-катаральньной пневмонии, геморрагической пневмонии (35%), спленита (4 %), серозно-катарального гастроэнтерита и геморрагического гастроэнтерита (10%), гепатита (25%), артрита (10%), миокардита (6%). У взрослых
животных находили артриты, серозно-катаральную пневмонию, геморрагическую пневмонию, серозно-катаральный гастроэнтерит, геморрагический гастроэнтерит, поражения венчика копыт, воспаление межкопытной щели,
пододерматиты, дерматиты, абсцессы, маститы, эндометриты (рис 19-23).
При гистологическом исследовании были выявлены изменения в сердечной мышце и печени при стрептококкозе крупного рогатого скота.
В препарате сердечной мышцы (рис.25) выявлены множественные кровоизлияния между волокон. В препарате печены заметны признаки дистрофических изменений, наблюдаются отдельные гепатоциты, балочное строение не выявлено, (рис. 24), В препарате лёгкого отдельные альвеолы спавшиеся, другие заполнены войлокообразной массой (фибрином), отмечено большое колличество экссудата, содержащего большое количество эритроцитов и
нейтрофилов, и заполняющего просветы мелких бронхов и альвеол. Отмечена выраженная десквомация, а так же дистрофия клеток альвеолярного эпителия (рис.26).
От павших и больных животных, в ходе проведения лабораторнодиагностических исследований, было выделено 112 разных видов микроорганизмов рода Streptococcus, доля которых составила (%): Str.pneumoniae119
78%, Str.septicum- 7%, Str.pyogenes- 6%, Str.uberis- 2%, Str.bovis- 1%,
Str.vestibularis- 1%, Str.zooepidemicus- 1%, Str.salivarus- 2%, Str.mutans- 1%,
Str.gallolyticus- 1%. Доминирующим среди стрептококков был Str. pneumoniae- 78% (рисунок 29). Самой надежной защитой животных от инфекционных
болезней является их вакцинация. Учитывая вышесказанное, создание препаратов, для осуществления специфической профилактики стрептококкоза
крупного рогатого скота, является важной задачей. Противострептококковая
вакцина для крупного рогатого скота на территории Росси не производится.
Однако, данная болезнь широко регистрируется в разичных регионах страны
и в том числе в Краснодарском крае. По мнению многих исследователей,
вакцины, которые изготовлены из штаммов культур, полученных в эпизоотическом очаге, являются специфичными, высокоиммуногенными препаратами, способствуют формированию активной иммунной защиты. (Ахмедов
А.М., 1983; Хакимова К.М., Савардинова А.К., 1985; Вачугов В.И., 1989; Кадымов Р.А. и соавт., 1990; Маннапова Р.Т. , 1998; Л.В. Шевченко, 2008; А.А.
Шевченко, Л.В. Шевченко, 2010; О.Ю. Черных, 2010).
Всвязи с этим, проводимые нами исследования были ориентированы на
создание и изучение противострептококковых вакцин, а так же на борьбу с
данным заболеванием.
Нами из 112 исследованных культур микроорганизмов, полученных от
крупного рогатого скота в животноводческих хозяйствах Краснодарского
края, изучались различные свойства наиболее часто выделяемых стрептококков: культуральные, биохимические, тинкториальные, биологические, морфологические, серологические. Всвязи с проведёнными исследованиями, и на
основании полученных результатов по стабильности, иммуногенности и антигенности, отобрали для разработки вакцины штамм Str.pneumoniae
Для того, чтобы начать работу по констуированию вакцины, было
необходимо разработать и отработать технологическую методику для её производства, а так же оценить её эффективность.
120
Ранее в России в 1943г была разработана К.П. Чепуровым формолвакцина для борьбы со стрептококкозом у телят, ягнят и поросят из штамма Str.
septicum. Позднее, в 1956 году, А.Г. Малявиным была предложена вакцина
поливалентная для борьбы с диплококковой инфекцией, сальмонеллезом и
пастереллёзом свиней. Однако, в скотоводческих хозяйствах регистрируются
другие различные патогенные виды микроорганизмов рода Streptococcus. Исходя из этого, возникла необходимость разработки методики производства и
изготовления новой противострептококковой вакцины, эффективность которой будет подтверждена в условиях хозяйств нашего края.
Одним изключевых моментов стал выбор инактиватора. Он должен сохратять иммуногенность используемой культы, но подавлять её патогенность.
Технологию режима инактивации отрабатывали путём внесения растворов формалина различной концентрации (0,1- 0,4%) в выращенную культуру возбудителя стрептококкоза. Концентрация клеток микроорганизмов
штамма Str.рneumoniae в питательной среде при этом должна составлять не
менее 4 миллиардов в 1 см3 по оптическому стандарту ГИСК имени Тарасевича. После чего культуру с инактиватором при температурных режимах
37°С и 22°С (±2°С) оставляли на 15 суток, иногда перемешивая содержимое
(рис. 30, 31, 32). Для подтверждения полноты проведения инактивации возбудителя производили высевы на стерильные среды: мясо-пептонный бульон, мясо-пептонный агар, окрашивание по методике Грама. При необходимости использовали заражение возбудителем штамма Str.рneumoniae лабораторных животных, за которыми вели наблюдение 10 суток (табл. 1).
В результате проведённой работы нами была создана методика производства инактивированной противострептококковой вакцины для крупного
рогатого скота.
Отработана кинетика инактивации культуры возбудителя штамма
Str.рneumoniae,
которая
основывается
121
на
синергетическом
действии
различных инактиваторов. Методика совместного действия температуры и
химического
вещества
позволила
снизить
количество
используемого
формалина при добавлении к культуре возбудителя. Уменьшилось и время,
потраченное на проведение инактивации в несколько раз в сравнении с ранее
используемой
методикой.
Подобные
результаты
были
получены
Н.Б. Бушуевой, М.Я. Ярцевым (1997), М.Я. Ярцевым и соавт. (1998) при
инактивации сальмонелл и пастерелл при изготовлении вакцин, Л.В.
Шевченко (2008) при инактивации патогенных стрептококков нутрий.
Используя разработанную методику производства противострептококковой вакцины, были созданы опытные серии препарата на основе штамма
Str.рneumoniae: формолвакцина, адсорбированная на гидрате окиси алюминия; формолвакцина, содержащая масляный адъювант; формолвакцина без
адъюванта. Предварительно отработали прививочную дозу. Она составила по
оптическому стандарту ГИСК имени Тарасевича 1,0 миллиард микробных
клеток. Эта доза обеспечивает 100%-ую защиту иммунизированных, при заболевании и гибели непривитых животных от вирулентного возбудителя
стрептококкоза штамма Str.pneumoniae (табл. 2).
При определении безвредности и иммуногенных свойств опытных серий вакцин проводили прививку белых мышей и через 14 суток осуществлями заражение возбудителем штамма Str.рneumoniae. В опыте участвовали три
изолированные группы лабораторных животных, в каждой из которых применялась определённая опытная серия вакцины. Доза каждого препарата была одинаковой - 0,5 см³, введение – внутримышечное. При применении противострептококковой гидроокисьалюминиевой формолвакцины уровень иммунной защиты составил 80%, местных и общих изменений после иммунизации выявлено не было, как и при использовании ГОА вакцины без адъюванта, однако защита животных была ниже – 60%.
У белых мышей, которым применялась ГОА вакцина, содержащая масляный адъювант, 2-3 дня наблюдали хромоту, уровень иммунной защиты
оказался равен 60%.
122
Новая вакцина прошла производственные испытания на крупном рогатом скоте различных возрастных групп. Взрослые животные вакцинировались двукратно в дозе 5,0 см3, внутримышечно. Интервал между инъекциями
составил 7-14 дней. Спустя 14 суток после ревакцинации было отмечено
формирование активной иммунной защиты против исследуемого возбудителя (табл. 3 и 4).
Разработанная нами методика производства противострептококковой
инактивированной ГОА-формолвакцины для крупного рогатого скота, позволяет создавать безвредный и высокоиммуногенный биологический препарат, который позволяет создавать в организме животных надёжную иммунную
защиту.
Сохранность
лабораторных
животных
против
штамма
Str.pneumoniaе после однократного применения составляет 80%, а после двукратного - 100%. Более высокие показатели отмечены при иммунизации животных гидроокисьалюминиевой формолвакциной против стрептококкоза, в
сравнении с аналогичными вакцинами с масляным адъювантом и без него,
что согласуется с результатами исследований многих ученых (Романов Е.А.
и соавт., 2000; Гаффаров Х.З. и соавт., 2003; Белова Н.Б., 2005; Сергеев В.А.
и соавт., 2006; Шевченко Л.В., 2008; Шевченко А.А., 2009; Черных О.Ю.,
2010).
При использовании противострептококковой вакцины в производственных условиях на фермах хозяйств Тимашевского, Кореновского и Тихорецкого районов иммунизации подверглись телята 7-8-дневного и 30тидневного возраста и взрослые коровы. Телята вакцинировались внутримышечно, двукратно, интервал между инъекциями составил 10 суток. Доза
при первом введении препарата составила 1,0 см³, а при ревакцинации - 1,5
см³. Уровень иммунной защиты против возбудителя стрептококкоза крупного рогатого скота штамма Str. рneumoniae, через 14 дней после ревакцинации,
у 7-8- дневных телят составил 86,7 - 95,4%, а у 30-тидневных - 90,0 - 96,7%.
Титр специфических антител к штамму Str. рneumoniae, который был определён спустя 9 месяцев после ревакцинации составил 1:16-1:64 (табл. 6).
123
В каждом хозяйстве иммунизировали животных разных возрастов.
Колличество привитых составляло от 100 – до 700 голов. Инъекцировали
препарат двукратно, интервал между введениями составлял 7-14 дней.
Взрослым коровам вводили вакцину внутримышечно в дозе 5,0 см3.
Наблюдение за иммунизированными животными сохраняли 9 мес. Через 30
дней после ревакцинации титр иммунных антител в сыворотке крови коров
штамму Str. рneumoniae составил 1:16 - 1:128, а спустя 9 месяцев - 1:16-1:64
(табл.7).
Новая
противострептококковая
инактивированная
вакцина
для
крупного рогатого скота в производственных условиях показала себя как
безвредный, высоиммуногенный биологический препарат.
Использование разработанных методов контроля на стерильность,
безвредность, иммуногенность, проведённых на белых мышах, позволяет
выпускать безопасную, высокоиммуногенную и стерильнуювакцину против
стрептококкоза крупного рогатого скота. Предложенный метод контроля
качества опробован и признан эффективным при производстве трёх серий
препарата, а это более 30 тысяч доз (табл. 5).
Проверка вакцины на стабильность показала, что иммуногенность
сохраняется не менее 12 месяцев со дня выпуска при соблюдении условий
хранения. Хранится вакцина при 2–10°С в тёмном сухом месте. В этом
случае она способствует формированию активной иммунной защиты к
штамму Str.pneumoniaе, которая составляет не менее 80%
Выпускается
противострептококковая
вакцина
для
на
ФГУП «Армавирская биофабрика», предприятие расположено на территории
Краснодарского края.
На вакцину разработана и утверждена в установленном порядке
нормативно-техническая
документация
на
опытно-промышленное
производство (регламент по изготовлению и контролю, ТУ, наставление по
применению).
124
Исходя из результатов исследований, разработанная вакцина показала
себя как безвредный, ареактогенный, высокоиммуногенный препарат для
профилактики и борьбы со стрептококкозом крупного рогатого скота. На
разработанное изобретение было получено два патента РФ: : «Способ
изготовления
вакцины
ассоциированной
против
стафилококкоза
и
стрептококкоза крупного рогатого скота», №2406532 от 20.12.2010 г,
«Вакцина
ассоциированная
против
стафилококкоза и
стрептококкоза
крупного рогатого скота» №2406533 от 20.12.2010 г.
Используя
методы
контроля,
отработанные
на
белых
мышах,
позволяют производить безвредную и высокоиммуногенную вакцину.
Вакцина
успешно
животноводческих
прошла
хозяйствах,
производственные
расположенных
в
испытания
различных
в
районах
Краснодарского края, признанных неблагополучными по стрептококкозу.
Таким образом, с учетом теоретических предпосылок конструирования
вакцинных препаратов, преимущества инактивированной вакцины, анализа
эпизоотической обстановки в Краснодарском крае по инфекционным
заболеваниям крупного рогатого скота, были выделены и изучены,
тинкториальные,
морфологические,
культуральные,
биологические
и
антигенные свойства штамма Str.pneumoniaе - вирулентного возбудителя
стрептококкоза КРС.
Разработанная нами вакцина показала себя как безвредный и
высокоиммуногенный
препарат
стрептококкоза
неблагополучных
на
для
специфической
по
данному
профилактики
заболеванию
животноводческих фермах, где доминирует штамм Str.pneumoniaе.
125
4. выводы
1. В ходе проведённых исследований была изучена эпизоотическая обстановка по бактериальным инфекциям крупного рогатого скота на территории
Краснодарского края. Было установлено, что она является напряжённой.
За 2004-2013 гг. на животноводческих фермах края были зарегистрированы
инфекционные болезни, наносящие значительный экономический ущерб:
эшерихиоз, заболеваемость которым составляет 50%, затем стрептококкоз16,4%, псевдомоноз- 14,1%, стафилококкоз- 11,4%, сальмонеллез- 3,8%, злокачественный отек- 1,8%, пастереллез- 0,7%, инфекционная энтеротоксемия0,5%, бруцеллез- 0,5%, некробактериоз- 0,3%, туберкулез и эмфизематозный
карбункул по 0,2%, лептоспироз и сибирская язва по 0,05%.
2. В нозологическом профиле бактериальных болезней КРС в Краснодарском
крае преобладает эшерихиоз и стрептококкоз. За 2004-2013 гг. неблагополучными по стрептококкозу КРС являются 20 районов края, превалентность
стрептококкоза
имеет
выраженные
регионарные
особенности,
чаще
регистрируется в 8 районах: в Кавказском- 34%, Ейском- 18%, Кущевском8%, Тимашевском- 6%, Лабинском, Славянском и Павловском районах по
5%, г. Краснодаре- 4%, в других оставшихся районах - 1 - 2%.
3. В скотоводческих хозяйствах нашего края были выделены 10 патогенных
видов микроорганизмов рода Streptococcus. Это Str.pneumoniae, Str.septicum,
Str.pyogenes,
Str.uberis,
Str.bovis,
Str.vestibularis,
Str.zooepidemicus,
Str.salivarus, Str.mutans, Str.gallolyticus, преобладал Str. pneumoniae. Проведено изучение тинкториальных, морфологических, биологических, антигенных
свойств вида Str. pneumoniae.
4. Крупный рогатый скот всех возрастов восприимчив к стрептококкозу, однако, более подвержен молодняк, возраст которого от 1- до 60 дней (33-37%).
Превалентность и инцидентность вспышек болезни чаще отмечается в зимний (13,7-20,3%) и весенний (4,0-17,3%) периоды. Взрослые животные чаще
болеют в хронической форме, при этом являясь бактерионосителями. Эпи126
зоотический процесс при стрептококкозе КРС характеризуется развитием
эпизоотий.
5. Протекает болезнь сверхостро, остро, подостро и хронически. При любом
течении отмечают вялость, угнетение, понижение аппетита, пневмонии, септицемию, конъюнктивиты, артриты, энтериты, у новорожденных часто развиваются омфалиты, заболеваемость составляет 40-75%, летальность у телят
до 65%. У взрослых животных наблюдаются дерматиты, воспаление венчика,
межкопытной щели, пододерматиты, маститы, эндометриты и др.
6. При проведении патологоанатомических вскрытий трупов 1-4-хмесячных
телят, которым прижизненно был поставлен диагноз стрептококкоз, отметили
наличие признаков серозно-катаральной пневмонии и геморрагической пневмонии (35%), гепатита (25%), спленита (4%), миокардита (6%), серознокатарального и геморрагического гастроэнтерита (10%), артритов (10%). У
взрослых животных также были отмечены: серозно-катаральная, геморрагическая пневмония (29%), серозно-катаральный и геморрагический гастроэнтерит (8%), артриты (10%), кроме этого, были отмечены и другие признаки:
пододерматиты (9%), маститы (12%), поражения копытного венчика (9%),
воспаление межкопытной щели (7%), эндометриты (8%), дерматиты (5%), абсцессы (3%).
7. Были разработаны различные режимы для подавления патогенности микроорганизмов штамма Str. рneumoniae путём инактивации. В качестве инактиватора использовался 0,4% раствор формалина. При применении температурного режима - 37°С (±2°С) и раствора формалина, полная инактивация исследуемой культуры отмечалась через 2-3 суток; инактивация при 22°С
(±2°С) отмечалась на 3-4 сутки. При применении данных режимот была отмечена полная инактивация при сохрани иммуногенности.
8. В ходе проведённых исследований, включая и лабораторные и производственные испытания, инактивированная противострептококковая вакцина
для КРС была признана безвредной, стабильной, высокоиммуногенной. В результате её двукратного применения, спустя 14 суток после ревакцинации,
127
было отмечено формирование активного иммунитета, защита против вирулентного возбудителя штамма Str. рneumoniae составила 80%. Вакцина вводится внутримышечно, период между инъекциями равен 7 – 14 суток. Доза
для коров 5,0 см3, для 1,0-1,5-месячных телят – 1,5-2,0 см3.
9. Расчитана высокая экономическая эффективность от применения разработанной вакцины для борьбы со стрептококкозом КРС, и равна – 303 рубля на
1 рубль затрат.
5. предложения производству
1. Для применения в ветеринарной практике была предложена новая
инактивированная противострептококковая вакцина для КРС, выпуск
вакцины освоен на ФГУП «Армавирская биофабрика».
2. Разработаны и изданы «Рекомендации по диагностике, профилактике и
ликвидации стрептококкоза крупного рогатого скота в Краснодарском крае».
3. Изданы учебные пособия «Диагностика стафилококкозов и стрептококкозов», «Профилактика и мероприятия по ликвидации стрептококкоза животных», которые используются при планировании противоэпизоотических мероприятий, и для повышении квалификации специалистов ветеринарной отрасли, и в учебном процессе студентов.
128
6. список использованной литературы
1. Абалихин, Б.Г. Паразитоценотические связи фасциол, дикроцелий и микробов в организме романовских овец / Б.Г. Абалихин, JI.K. Алеутская, Ю.Ф.
Петров // Сб. научн. трудов MBА. Москва, 1979. - т. 109 - С. 92 - 96.
2. Абалихин Б.Г., Петров Ю.Ф. Профилактика ассоциированного заболевания, вызываемого паразитированием дикроцелиев, бактерий и грибов / Б.Г.
Абалихин, Ю.Ф. Петров // Сб. научн. трудов MBA. Москва, 1993 - С. 100 102.
3. Абовян, А.В. Стрептококкоз нутрий / А.В. Абовян // Кролиководство и
звероводство. – 1979. – № 4. – С. 18.
4. Абовян, А.В. О кокковой инфекции голубей / А.В. Абовян // Изв. с.–х.
наук. – 1984. – № 4. – С. 12–14.
5. Алимов, А.М. Экспериментально - теоретические аспекты конструирования нового поколения вакцины для ветеринарии / А.М. Алимов, В.П. Коксин,
Н.И. Табакова и др. // Проблемы инфекционных и инвазионных болезней в
животноводстве на современном этапе // тез. докл. междунар. конф. – М.,
1999. – С. 94 – 95.
6. Антонов, Б.И. Лабораторные исследования в ветеринарии (Бактериальные
инфекции) / Б.И. Антонов. – М.: Агропромиздат, - 1986. – 352с.
7. Ахмедов, Ч.А. Изучение некоторых биологических особенностей возбудителя стрептококкоза у нутрий / Ч.А. Ахмедов // Вклад молодых ученых и
специалистов в науч.- техн. прогресс в с.-х. пр-ве. Фрунзе, 1990.- Ч. 2.- С.
116-118.
8. Бедоева, З.М. Тест-системы для иммунологического мониторинга и прогнозирования острых кишечных инфекций животных и усовершенствование
средств специфической профилактики : автореф. Дис. ... канд. с.-х. наук :
16.00.03, 03.00.23 / Бедоева Залихан Михайловна – Москва, 2006г.
9. Белецкая, JI.B. Экспериментальная стрептококковая инфекция / JI.B. Белецкая // Наука, Алма-Ата. - 1978. - 79 с.
129
10. Белова Н.Б. Эффективность ассоциированной вакцины против рота- корона - ВД – БС - вирусов крупного рогатого скота / Н.Б. Белова // Ж-л «Ветеринария». М., 2005. - № 4. – С. 18-20.
11. Беляков, В.Д. Стрептококковая инфекция / В.Д. Беляков, А.П. Ходырев,
А.А. Тотолян. // Л.: Медицина. - 1978. - 78с.
12. Бессарабов, Б.Ф. Инфекционные болезни животных / Б. Ф. Бессарабов, А.
А. Вашутин, Е. С. Воронин и др. / под ред. А. А. Сидорчука. - М.: КолосС.
2007. - 23 с
13. Брагина, Э.П. Биологические свойства стрептококков, выделенных от
больных маститом коров / Э.П. Брагина // Тр. Самаркандского СХИ Самарканд. - 1972. – 143с.
14. Брем, А.К. Эпизоотология и специфическая профилактика колиэнтеротоксемии поросят / А.К. Брем // Эпизоотология и меры борьбы с инфекционными болезнями животных. - 1985. - С.92-99.
15. Брико, Н.И. Микробиологическая диагностика стрептококковых инфекций: метод, рекомендации / Н.И. Брико, А.С. Ещина, Н.Н. Филатов и др. // М.
- 1995. - 26 с.
16. Брико, Н.И. Лабораторная диагностика стрептококковых инфекций: пособие для врачей и науч. работников / Н.И. Брико, А.С. Ещина, Л.А. Ряпис. М.: Хризосом. - 2000. – 64 с.
17. Брико, Н.И. Состояние и перспективы лабораторной диагностики стрептококковой инфекции в России / Н.И. Брико // Клиническая лабораторная диагностика. – 2000. – № 8. – С. 12–15.
18. Брико, Н.И. Выделение и идентификация стрептококков / Н.И. Брико,
А.С. Ещина, Л.А. Ряпис и др. - М.: ММА им. И. М. Сеченова, 2002. - 47с.
19. Брико, Н.И. Выделение и идентификация стрептококков / Н.И. Брико,
А.С. Ещина, Л.А. Ряпис. - М.: РУДН, 2002. – 187с.
20. Бурлакова, Т.Н. Биологические свойства стрептококков группы В / Т.Н.
Булгакова, К.Б. Грабовская, М. Риц и др. // ЖМЭИ. - 1988. - № 12. - С. 29.
21. Бурова, Л.А. Стрептококковая патология на рубеже веков / Л.А. Бурова //
130
Институт экспериментальной медицины на рубеже тысячилетий: достижения
в области биологии и медицины. – С - П.: Наука, 2000. - С. 209-227.
22. Бухарин, О.В. Персистенция патогенных бактерий / О.В. Бухарин. - М.:
Медицина, 1999. - 367с.
23. Бушуева, Н.Б. Усовершенствование технологии инактивации S. DUBLIN,
штамм 373 / Н.Б. Бушуева, М.Я. Ярцев, С.М. Пыжов и др. // Ветеринария. –
1996. – № 4. – С. 28–29
24. Вачугов, В.И. Ветеринарно-санитарные мероприятия при разведении нутрий / В.И. Вачугов // Кролиководство и звероводство. 1989. - № 2. - С. 25-26.
25. Владимиров, В.А. Проблемы научного обеспечения повышения эффективности сельскохозяйственного производства: Тез. докл./ В.А. Владимиров,
Н. А. Масимов, Э. М. Мешев // Кырг. с.-х. ин-т им. К. И. Скрябина. Бешкек,
1992. - Ч. 11. Ветеринария. - С. 148-149.
26. Волков, М.Ю. Современные биотехнологии ветеринарных препаратов /
М.Ю. Волков // Ветеринария. - 2006. - № 5. - С. 7-10.
27. Воронин, Е.С. Настоящее и будущее в профилактике болезней молодняка
сельскохозяйственных животных / Е.С. Воронин // Актуальные проблемы ветеринарной медицины в России. Новосибирск, 1998. - С. 130 -139.
28. Вылегжанина, Е.С. Факторы патогенности стрептококков групп А и С /
Е.С. Вылегжанина, А.Н. Панин // Сб. науч. тр. ВГНКИ. М. - 2001. - Т. 62. - С.
203–208.
29. Герберт, У. Д. Ветеринарная иммунология / У. Д. Герберт М.: Колос.1974.-312 с.
30. Горохов В.В. Проблемы паразитарных болезней в современных условиях
// Ветеринария. - 1996. - № 7. - С. 8 - 16.
31. Гудкова, А.Ю. Влияние гельминтов на состав микрофлоры желудочно кишечного тракта жвачных животных. РАН, ВОГ РАН / А.Ю. Гудкова // Тез.
докл. Всерос. науч. конф. Взаимоотношения паразита и хозяина. М. - 1998. С. 20 - 21.
131
32. Девришов, Д.А. Этиология и профилактика желудочно-кишечных заболеваний телят /Д.А. Девришов // Вестн. с.-х. науки. 1989. - №9. - С. 17-22.
33. Дмитриев, А.В. Геномный полиморфизм стрептококка группы В - возбудителя заболеваний человека и животных: автореф. дис. … д – ра биол. наук :
03.00.04, 03.00.07 / Дмитриев Александр Валентинович – С-П, 2004. – 33 с.
34. Есепенок, В.А. Биологические свойства стрептококков, выделенных от
телят из хозяйств Московской области / В.А. Есепенок, В.О. Рыбалтовский,
Буй. Тхань Тху // МВА. – М., 1989 - 7 с.
35. Есепенок, В.А. Инактивированная вакцина против стрептококкоза /
В.А. Есепенок, А.А. Конопаткин // Актуал. проблемы ветеринар. и зоотехн.
науки животноводства: материалы конф. – М., 1989. - С. 112-113.
36. Есепенок, В.А. Патоморфологические изменения при спонтанном стрептококкозе нутрий / В.А. Есепенок // Материалы Всесоюз. науч. конф. - Витебск, 1991. - С. 46.
37. Есепенок, В.А. Формирование иммунитета у нутрий, привитых против
стрептококкоза нутрий / В.А. Есепенок // Актуал. вопр. инфекц. и инваз. болезней животных: сб. науч. тр. - М., 1993. - С. 112-117.
38. Есепенок, В.А. Стрептококкоз сельскохозяйственных животных (методическое пособие по диагностике) / В.А. Есепенок, А.А. Конопаткин, А.К. Кириллов // М. - 1997. - 20 с.
39. Есепенок, В.А. Стрептококкоз сельскохозяйственных животных (методическое пособие по диагностике) / В.А. Есепенок // М., 1997. - 20 с.
40. Есепенок, В.А. Стрептококкоз нутрий: диагностика, меры борьбы и специфическая профилактика: дисс. доктора вет. наук /В.А.Есепенок; М., 1998.
41. Есепенок, В.А. Этиология, патогенез, лечение и профилактика стрептококкозов / В.А. Есепенок, Х.С. Горбатова // Ветеринар. консультант. - 2006. № 10. - С. 3-8.
42. Жаков, М.С. Коррекция иммунодефицитов тетрамизол 20 % гранулятом у
поросят, инвазированных эзофагостомами / М.С. Жаков, A.M. Котенко, А.И.
132
Ятусевич // X конф. Украинского об-ва паразитологов. Киев, 1986. - Ч. 1. - С.
202 - 204.
43. Жаков, М.С. Вскрытие животных и патологоанатомические диагнозы болезней / М.С. Жаков, В.С. Прудников, И.А. Анисим и др. // Ураджай. М.,
1992. - 136 с.
44. Ивченко, В.М. Эпизоотология и этиология маститов у коров на крупных
молочных фермах и система противоэпизоотических мероприятий: автореферат дис. … доктора вет. наук : 16.00.03 / Ивченко Василий Моисеевич Ленинград, 1991. - 39с.
45. Илиеш, В.Д. Патоморфологические изменения у нутрий при экспериментальном стрептококкозе / В.Д. Илиеш, В.А. Есепенок, Е.А. Клепинина // Соврем. проблемы иммунологии, биотехнологии, генной и клеточной инженерии в ветеринар. медицине: материалы докл. всесоюз. науч.– техн. конф. Н.Новгород, 1990. – С. 161–162.
46. Иокагимова, К.Г. Варианты стрептококковых поражений легких у детей в
настоящее время / К.Г. Иокагимова // Архив патологии. - 1994. - Т. 56. - вып.
2. – С. 44–49.
47. Кадымов, Р.А. Стрептококкоз нутрий / P.A. Кадымов, Ч.А. Ахмедов, Г.Э.
Дунямалиев и др. // Ветеринария. М., - 1992. №1. - С.36-38.
48. Карева, Э.П. Этиологическая структура желудочно-кишечных болезней у
поросят / Э.П. Карева, А.Г. Ирский, Н.А. Солдатенко // Ветеринар, консультант. - 2003. - №1. - С. 6.
49. Клепинина, Е.А. Стрептококкоз нутрий / Е.А. Клепинина // Кролиководство и звероводство. - 1987. - № 2. - С. 24.
50. Клепинина, Е.А. Клинико-эпизоотологическая характеристика стрептококкоза нутрий и вакцинопрофилактика: автореф. дис. … . канд. ветерин.
наук / Е.А. Клепинина. М., 1991. - 14 с.
51. Колесников В.И. Эпизоотический процесс при стронгилятозах овец, меры
борьбы и профилактика // Ставрополь, 1995. - 60 с.
133
52. Кондрахин И.П. Диспепсия новорожденных телят - успехи, проблемы //
Ветеринарния. - 2003. - №10.- С.98-99.
53. Коляков Я.Е. Ветеринарная иммунология / Я.Е. Коляков // М.: Колос,
1986. - 271 с.
54. Конопаткин, А. А. Динамика заболеваемости телят смешанными респираторными инфекциями в условиях крупного откормочного комплекса / А. А.
Конопаткин, В. А. Владимиров, Н. А. Масимов, Э. М. Мешев // Проблемы
научного обеспечения повышения эффективности сельскохозяйственного
производства: Тез. докл. / Кырг. с.-х. ин-т им. К. И. Скрябина - Бешкек, 1992.
- Ч. 11. Ветеринария. - С. 148—149.
55. Конопаткин, А.А. Эпизоотология и инфекционные болезни домашних
животных / А.А. Конопаткин // М.: Колос, 1993.
57. Костенко, Т.С. Практикум по ветеринарной микробиологии и иммунологии / Т.С. Костенко, В.Б. Родионова, Д.И.Скородумов // М.: Колос, 2001.-344
с.
58. Костомахин Н.М. Скотоводство / Н.М. Костомахин // Лань. – 2009. 25с.
59. Маннапова, Р.Т. Коррекция иммуногенеза при профилактике ассоциативного сальмонеллезно-аскариозного заболевания поросят// Ветеринария. 1998. - № 1. С. 34-36.
60. Матусявичус, А.П. Заболевания свиней, вызываемые ассоциацией гельминтов и возбудителя рожи / А.П. Матусявичус, Э.А. Данилиявичус, В.И.
Шпакускас //Паразитоценозы и ассоциативные болезни // М.: Колос, - 1984, а.
- С. 235-248.
61. Мельников, Н.И. Возбудители гнойных заболеваний и их ассоциаи // Тр.
АМН СССР. Детские инфекции. М., 1950.
62. Мертвецов, Н. П. Современные подходы к конструированию молекулярных вакцин / Н.П. Мертвецов, А.Б. Беклемишев, И.М.Савич // Новосибирск,1987. - 207 с.
63. Методические указания по лабораторной диагностике стрептококкоза
животных, утв. ГУВ СССР 25.09.1990. - М, 2000. - 9 с.
134
64. Милованов, В.А. Культурально-морфологическое и биохимическое изучение штаммов куриных стрептококков / М.А. Милованов // Вет. мед науки. 1972.-С. 18-21.
65. Москалик, Р.С. Стрептококки серологической группы С и вызываемые
ими болезни // Кишинев: Штиинца. - 1974.
66. Немченко М.И. Терапия при неонатальных болезнях телят // Ветеринария.
- 1983. - №9 - С. 53-56
67. Панасюк, Д.И. Закономерности взаимоотношений сочленов паразитоценоза // Паразитоценозы и ассоцированные болезни. М., 1984. - 27 с.
68. Панин, А.Н. Стрептококкозы свиней / А.Н. Панин // Справочник. Инфекционкые болезни животных, ВО Агропрэмиздат, 1987, с. 249-250.
69. Панин А.Н. Наставление по применению стрептококковых групповых диагностических сывороток // Ветеринария, - 1988, - № 10, с. 78.
70. Панин, А.Н. Биологические свойства стрептококков, выделенных от свиней / А.Н. Панин, Е.В. Малик // Востник сельхоз. науки, - 1991,
71. Панин, А.Н. Стрептококкозы свиней. автореф. дис. … докт. наук :
06.00.03 / Панин Александр Николаевич - М.,1992.
72. Петров, Ю.Ф. Рекомендации по профилактике ассоциативного заболевания, вызываемого паразитированием дикроцелиев, бактерий и грибов / Ю.Ф.
Петров, П.Г. Твердохлебов, Б.Г. Абалихин // М., 1986. - 14 с.
73. Петров Ю.Ф. Ассоциативные болезни свиней и их профилактика / Иваново, 1994. - 55с.
74. Радчук, Н.А. Ветеринарная микробиология и иммунология / Н.А. Радчук,
Г.В. Дунаев, Н.М. Колычев и др. / под. ред. Н.А. Радчука. // М.: Агропромиздат, - 1991.- 383с.
75. Романов, Е.А. Эффективность ассоциированной вакцины против диареи
смешанной этиологии / Е.А. Романов, Х.З. Гаффаров, Е.Л. Матвеева и др. //
Ветеринария. - 2000. - № 12. - С. 18-20.
76. Сергеев, В.А. Инактивированная культуральная вакцина против трансмиссивного гастроэнтерита свиней / В.А. Сергеев, Е.С. Федорова, Т.И. Али135
пер и др. // Ветеринария. - 2006. - № 5. - С. 20-23.
77. Субботин, В.В. Биотехнология пробиотиков ветеринарного назначения/
В.В. Субботин, М.А. Сидоров // Аграрная наука, - 1998, - № 3. - С. 70-72.
78. Субботин, В.В. Профилактика желудочно-кишечных болезней новорожденных животных с симтомокомплексом диареи / В.В. Субботин, М.А. Сидоров // Ветеринария. - 2001. - №4. - С.3-7.
79. Терехов, В.И. Стрептококкоз нутрий / В.И. Терехов, Е.В. Малюхова // Ветеринария Кубани. - 2005. - № 4. - С.10–11.
80. Тотолян, А.А. Стрептококки группы А – возбудители тяжелых инвазивных инфекций / А.А. Тотолян, В.Д. Беляков // Здоровье населения и среда
обитания. - 1994. - № 10. (19). - С. 1-3.
81. Турченко, А.Н. Разработка и усовершенствование лечебнопрофилактических мероприятий при остром послеродовом эндометрите у коров: дис. раб. / А.Н.Турченко // Воронеж, 1999.
82. Турченко, А.Н. Этиология и лечение послеродового эндометрита коров /
А.Н.Турченко // Ветеринария. - 2001.- №7.- C.33-37.
83. Тутов, И. К. Основы биотехнологии ветеринарных препаратов / И. К. Тутов, В. И. Ситьков // Ставрополь Ставроп. Госсельхозакадемия, 1997.
84. Улендеев, А.И. Вакцинопрофилактика отечной болезни поросят / А.И.
Улендеев, И.Н. Хайруллин // Новое в краевой патологии с.-х. животных и
птиц: Библиогр. 15. 1988.- С.9-13.
85. Хакимова, К.М. Изыскание специфических средств профилактики колибактериоза в условиях промышленных комплексов / К.М.Хакимова, А.К. Савардинова, Х.Х. Абдуллин // Проблемы ветеринарной иммунологии -1985.С.110-112.
86. Чепуров, К.П. Диплококковые и стрептококковые заболевания животных
/ К.П. Чепуров, А.В. Черкасова // Сельхозиздат. - Киев. - 1963. – С.24.
87. Черных, О.Ю. Инфекционные болезни нутрий в звероводческих
хозяйствах Северного Кавказа : автореф. дисс. … докт. вет наук :
Черных Олег Юрьевич - Иваново, 2010. - 47с.
136
88. Цинзерлинг, А.В. Стрептококковая инфекция и их морфологические проявления / А.В. Цинзерлинг, К.Г. Иокагимова // Архив патологии. – 1987. – №
5. - С. 3-11.
89. Шевченко А.А. Новая вакцина против геморрагической болезни кроликов/ А.А. Шевченко // М.: Колос, 1993. - 36 с.
90. Шевченко, А.А. Специфическая профилактика инфекционных болезней
кроликов: вирусной геморрагической болезни, миксоматоза и пастереллеза:
автореф. дисс. … д–ра. вет. наук : Шевченко Александр Алексеевич / Покров,
1994. – 46 с.
91. Шевченко, А.А. Изучение иммунологических свойств термоинактивированной вакцины против ВГБК/ А.А. Шевченко // Доклады РАСХН.- М. - №
3. - 1995.
92. Шевченко, А.А. Вирусные болезни кроликов /А.А. Шевченко, Л.В. Шевченко.- М.: Аквариум, 2002.- 80с.
93. Шевченко, А А. Учебно-мегодический комплекс для дисциплины «Лабораторная диагностика инфекционных болезней животных» по специальности
111210 - «Ветеринария» фак ветеринар медицины / А.А. Шевченко, Л.В.
Шевченко // Краснодар КубГАУ, 2005 - 35 с
94. Шевченко, А.А. Рекомендации по профилактике и ликвидации стрептококкоза нутрий в Краснодарском крае / А.А. Шевченко, Л.В. Шевченко, О.Ю.
Черных // КубГАУ. - Краснодар, 2005.- 25 с.
95. Шевченко, Л. В. Болезни и биологические особенности нутрий учеб пособие / Л. В. Шевченко, В. В. Стрельников, А. А. Шевченко // Краснодар,
Краснодарбланкиздат, - 2006. - 272 с.
96. Шевченко, Л.В. Специфическая профилактика и лечение ассоциативных
инфекционных болезней нутрий: автореф. дис. … доктор. вет. наук : 16 00 03
Шевченко Людмила Васильевна – Краснодар, 2008. – 47с.
97. Шевченко, А А. Рекомендации по лабораторной диагностике стафилококкозов и стрептококкозов животных / А.А. Шевченко, О.Ю.Черных, В.Н.
Шевкопляс, Л.В. Шевченко // Краснодар КубГАУ,- 2008 - 31 с.
137
98. Шевченко, А.А. Совершенствование специфической профилактики крупного рогатого скота / А.А. Шевченко, Л.В. Шевченко, А.Р. Литвинова и др. //
Труды Кубанского государственного аграрного университета. Серия: Ветеринарные науки, 2009. - №1 (ч.1). - С. 127-129.
99. Щукевич, И.О. О стрептококковой инфекции морских свинок и об опытах
иммунизации их убитыми культурами стрептококка, вызывающего эпизоотологическую инфекцию // Архив биологических наук, 1906 - Вып. 1 и 2.
Т.14 - С.19-20.
100. Элизбарашвили, Э.И. Безвредность и антигенность парвовирусного компонента вакцины щенвак / Э.И. Элизбарашвили, М.М. Рахманина, В.И. Уласов // Лекарств. средства для животных и корма: материалы всерос. конф. –
М., 2006.- С. 17-18.
101. Ющук, Н.Д. Инфекционные болезни. Национальное руководство / Н.Д.
Ющук, Ю.Я. Венгеров // ГЭОТАР-Медиа., 2009.- 44с.
102. Якубовский, М.В. Ассоциативные гельминтозы у свиней в Белоруссии и
опыт борьбы с ними // Паразитоценозы и ассоциативные болезни / Всесоюзн.
Акад. с/х. наук. М., 1989. - С.326 - 328.
103. Ярцев, М.Я. Специфическая профилактика и технология вакцинного
производства при сальмонеллёзах / М.Я. Ярцев // Ветеринария, - 1996. - № 8.
- С. 47 - 49.
104. Ярцев, М.Я.Технология промышленного производства бактериальных
вакцин / Ярцев М.Я., Бушуева Н.Б., Раевский А.А., Анисимова Л.В. и др.//
Ветеринария. - 1998. - №3. - 22 - 24с.
105. Ятусевич // X конф. Украинского об-ва паразитологов. Киев, 1986. - Ч. 1.
- С. 202 - 204.
106. Beaman B.L. ea. / B.L. Beaman // Inf. Imm. 1998. V. 66. - №10. - P.
46764689.
107. Bardon B.E., Ebeid A.B. / B.E. Bardon, A.B. Ebeid // Ind. J. Vet., -1990.- V.
67. – P. 18-25.
138
108. Bartlett, P.C., 1992. Managerial determinants of intramammary coliform and
environmental streptococci infections in Ohio . P.C. Bartlett, G.Y. Miller, S.E.
Lance, L.E. Heider. J. Dairy Sci. -1992. – V. 75.- P.1241-1252.
109. Bradley S.F. Group С streptococcal bacteremia: analysis of 88 cases / S.F.
Bradley, J.J. Gordon, D.D. Baumgartner. // Rev Infect Dis. 1991. - V. 13. №2.- P.
270-280.
110. Cunningham M.W. Types of haemolytic Streptococci in relation to scarlet fever / M.W. Cunningham //Clin Micr Rev. - 2000. - V. 13. - P. 470-511.
111. De Herdt P. ea. / P. De Herdt // Vet. Qvaterly. - 1994. - V. 16. - P. 71-74.
112. Gleeson, D.E. Effect of teat hyperkeratosis on somatic cell count of dairy
cows / D.E. Gleeson, J.M. William, E.J. O'Callaghan, M.V. Rath // Intern. J. Appl.
Res. Vet. Med. - 2004. - vol. 2, № 2. - P. 115-122.
113. Hogan, J. S. Role of vitamin E and selenium in host defense against mastitis /
J.S. Hogan J. S., W. P. Weiss, and K. L. Smith // J. Dairy Sci.- 1993. – V. 76. – P.
2795-2803.
114. Kaijser B. Pneumococcal infections and the possible need for a vaccine/ Kaijser B.//Scand. Infect. Dis. - 1979. - V. 3. - N. 11. - P. 179-184.
115. Kaplan E.L., Chhatwal G.S., Rohde M. Reduced ability of penicillin to eradicate ingested group A streptococci from epithelial cells/ E.L. Kaplan, G.S. Chhatwal, M. Rohde // Clinical and pathogenetic implications .Clin Infect Dis. - 2006. 43(11). – Р. 1398-406.
116. Kelbercturchfelle // Trierzucht. № 10. -1982. - P. 446 - 449.
117. Keefe, G.P. Streptococcus agalactiae mastitis: a review / G.P. Keefe // Can
Vet J. -1997. - №38 (3). - P. - 199-204.
118. Kjelberg E. Acta pathol. et microb. Scand. - 1997. -№ 85. - P. 5.
119. Kornblatt A.N. ea. JAVMA, - 1983. – V. – 183. - №6. - P - 700-701.
120. Lancefield R. С. The antigenic complex of Streptococcus hemolyticus./ R. С.
Lancefield // J Exp Med.- 1962. -V.47. - P. 9 -10.
139
121. Lewis S. The likelihood of sub-clinical mastitis in quarters with different
types of teat lesion in dairy cows / S. Lewis, P.D. Cockcroft, R.A. Bramley, P.G.G.
Jackson // Cattle Practise. - 2000. - V. - P. 293-299.
122. Lawson, P. A. Streptococcus marimammalium sp. nov., isolated from seals /
P. A. Lawson et al. // Int. J. Evol. Microbiol. 2005. - V. 55(9). - P. 271-274.
123. Marschung F. Neonatale Kelberdurchfelle in der Praxis // Tiererztle Umsch.
1988. - P. 101 - 106.
124. Mein, G.A. Effect on mastitis of over-milking in conjunction with pulsatin
failure / G.A. Mein, M.R. Brown, D.M. Williams // J. Dairy Res. vol. 53.- 1986.P. 17-22.
125. Moon H.W. The comparative patho-physiology of gastro intestinal tract diseases / H.W. Moon, R.E. Isaacson, B. Nagy // Proceedings rini symposium on neonatal diarrhea in calves and pigs University of Saskotchewan V.I.D.O. -1976.- P.
32-46.
126. Nickerson, S.C. Bovine mammary gland structure and function -relationship
to milk production and immunity to mastitis / S.C. Nickerson // Ar-gi. - 1994. №15. - P. 8-18.
127. , S.C. Nickerson, W. E. Owens, R. L. Boddie. Mastitis in dairy heifers/ Nickerson., W. E. Owens, and R. L. Boddie // Initial studies on prevalence and control.
J. Dairy Sci. – 1995. - V. - 78. - P. 1607-1618.
128. Oliver, S.P Influence of prepartum antibiotic therapy on intramammary infections in primigravid heifers during early lactation./ S.P.Oliver, M.J. Lewis, B.E.
Gillespie, H.H. Donlan // J. Dairy Sci. - 1992. - V. 75. - P.406-414.
129. Patterson M. J. Streptococcus. In: Baron's Medical Microbiology (Baron S et
al, eds.), 1996, 4th ed., Univ of Texas Medical Branch.- P. 34-89.
130. Schaechter, M. Mechanisms of Microbial Disease / M. Schaechter, G.
Medoff, B.I. Eisenstein // 1993, - V. 2. - P. 59-118.
131. Smith H.W., The transmissible nature of the genetic factor in E. coli that controls enterotoxin production / H.W. Smith, S. Halls // J. Gen. Microb. -1968.- V.
52. - P. 319-334.
140
132. Smith, J.P. A review of laboratory methods for identification of group B
streptococci (Streptococcus agalactiae) / J.P. Smith K.K. Durfee J.H. Marymont A
Am // J Med Technol. -1979. - №45 (3). - P. 199-204.
133. Starr, M. P. / The Prokaryotes: A Handbook on Habitats, Isolation and Identification of Bacteria .-1981. - P. 15-25.
134. Weiss, W.P., J.S. Hogan, D.A. Todhunter, and K.L. Smith. 1997. Effect of
vitamin E supplementation in diets with a low concentration of selenium on mammary gland health of dairy cows / W.P. Weiss, J.S. Hogan, D.A. Todhunter, K.L.
Smith // J. Dairy Sci. - V. 80. - P.1728-1737.
135.Wetzke, J. Ursachen und Bekempfung infektios bedingter Kelbercturchfelle /
J. Wetzke, G. Steinback, H. Meyer // Trierzucht. - 1982. - № 10. - P. 446-449.
Приложения
141