CD22

Hematopathology / B-Cell Markers in Hodgkin Lymphoma. Am J Clin Pathol 2003; 120:767-777.
The B-Cell Transcription Factors BSAP, Oct-2, and BOB.1 and the Pan-B-Cell
Markers CD20, CD22, and CD79a Are Useful in the Differential Diagnosis of Classic
Hodgkin Lymphoma
Использование факторов транскрипции B- клеток BSAP, Oct-2, и BOB.1 и Bклеточных маркеров CD22, и CD79a в дифференциальном диагнозе
классической лимфомы Ходжкина.
Patrick Browne, MD, PhD,1 Karen Petrosyan, MD,1 Antonio Hernandez, and Joel A. Chan,
MD1
Резюме.
Иммуногистохимический анализ в дифференциальном диагнозе между классической
лимфомой Ходжкина (CHL), лимфомой из крупных B-клеток (DLBCL), или
анапластической лимфомой из больших клеток (ALCL) является затруднительным. В этих
случаях определение факторов транскрипции (специфичный B-клеточный активатор белка
[BSAP], октаймер - обязательный фактор транскрипции 2 [Oct-2], и обязательный Bклеточный белок 1 [BOB.1]) и B- клеточных маркеров (CD20, CD22, и CD79a), помогают в
постановке диагноза.
В 55 случаев (CHL), в 5 случаях узловой лимфомы Ходжкина с лимфоцитарным
преобладанием (NLPHL), и в 33 случаях не - Ходжкинской лимфомы (25 DLBCL и 8
ALCL), был обнаружен фактор транскрипции фенотипа BSAP+ и/или Oct-2-; BOB.1, как
фактор прогноза в CHL; BSAP+/Oct-2+/BOB.1 как фактор прогноза для NLPHL или
DLBCL, в то время как фактор BSAP, был прогностически важен для ALCL. Экспрессия
всех 3 факторов транскрипции была обнаружена только в NLPHL и DLBCL и только один
B-клеточный положительный маркер для CHL. Таким образом, факторы транскрипции и
все B-клеточные маркеры могут быть полезны в дифференциальном диагнозе CHL.
Большинство лимфом Ходжкина, классическая лимфома Ходжкина (CHL) и узловая
лимфома с лимфоцитарным преобладанием (NLPHL), как известно, возникают из Bклеток1,2. Однако причина фенотипа B-клеток и недостаточность экспрессии
иммуноглобулина в CHL полностью не объяснены. Как предполагается мутации в гене
иммуноглобулина, могут быть причиной отсутствия экспрессии гена иммуноглобулина в
CHL3. Однако недавняя работа, направленная на изучение нарушений активации
промотора иммуноглобулина, приводящее к нарушению взаимодействия и
недостаточности экспрессии факторов транскрипции, рассматривается как ведущий
механизм4. Среди большого числа факторов транскрипции B-клеток, которые были
описаны и объяснены, настоящая литература останавливается на 4 белках: октаймер обязательный фактор транскрипции 2 (Oct-2); обязательный B-клеточный белок 1 (BOB.1);
специфичный B-клеточный активатор белка (BSAP), и PU.1. Экспрессия гена
иммуноглобулина B- клеток требует взаимодействие между октаймерными участками
промотора иммуноглобулина и некоторых представителей POU семейства факторов
транскрипции (специфичный фактор транскрипции 1 [Pit-1], октаймер - обязательный фактор
транскрипции 1[Oct-1], и (Oct-2)5,6. Из этого семейства первоначальная экспрессия Oct-2, как
раньше предполагали, ограничивалась B- клетками.7
Однако, для дальнейшей активации промотора иммуноглобулина Oct-2 должен
взаимодействовать с кофактором транскрипции BOB.18,9. Как было показано в NLPHL
клетки экспрессируют оба фактора Oct-2 и BOB. 110. Напротив экспрессия двух факторов,
наблюдается только в некоторых клетках Ходжкина10-12. BSAP фактор, который кодируется
геном Pax-513, вовлечен в регуляцию некоторых генов, связанных с развитием B- клеток, в
особенности за транскрипцию гена для CD1914,15. Большинство авторов показывают, что
экспрессия BSAP наблюдается в большинстве случаев в лимфоме из крупных B-клеток
(DLBCL), и NLPHL, и в большинстве случаев в CHL, но не в T- клеточных лимфоме16-18.
Последующий продукт PU.1 онкогена spi-1, который специфично связан с пуриновой
последовательностью ДНК, принадлежит к семейству Ets факторов транскрипции, и
экспрессируется и B- клетках и в миелоцитарной линии. Известно, что происходит
регуляция экспрессии иммуноглобулина и других генов, которые являются важными для
развития B- клеток, включая CD20, CD72 и Bruton тирозинкиназа19,20, и что экспрессия
PU.1 происходит только в NLPHL, а не в CHL17.
Предыдущая литература показывает, что различные образцы экспрессии, существующие
для различных факторов транскрипции, имеются не только в CHL и NLPHL, но также и в
не - Ходжкинской лимфоме. Однако, ни в одном из предыдущих изучений, не была оценена
параллельно экспрессия всех 4 факторов. В этом изучении мы с помощью
иммуногистохимического анализа оценили экспрессию факторов BSAP, Oct-2, BOB.1, и
PU.1 в CHL и NLPHL. В частности, в виду результатов полученных Torlakovic et al17, мы
заинтересовались наличием фактора PU.1, для разграничения CHL от NLPHL. Кроме того,
мы оценили экспрессию всех 4 факторов транскрипции в DLBCL и в анапластической
лимфоме из больших клеток (ALCL), так как они тоже были включены в
дифференциальный ряд при диагностике лимфомы Ходжкина21.
Учитывая важную роль этих факторов транскрипции в фенотипе B- клеток, мы оценили
зависимость снижения экспрессии, с различной экспрессией маркеров CD20, CD22, и
CD79a в 2х типах лимфомы Ходжкина. Это было сделано, для того, чтобы оценить
важность B- клеточных маркеров в дифференциальном диагнозе между DLBCL и CHL. В
последующем мы рассмотрели все материалы по использованию факторов
транскрипции в CHL и NLPHL, сопоставляя их с полученными нами результатами,
установили прогностическую ценность факторов транскрипции, вместе с B- клеточными
маркерами в дифференциальном диагнозе CHL.
Материалы и методы.
Образцы ткани.
Фиксированные в формалине, парафин - вложенные образцы опухоли, были получены от
IMPATH и Больница Фонда Кайзер, Лос-Анджелес. Были отобраны экземпляры опухоли,
57 от случаев CHL, 5 от NLPHL, 25 от DLBCL (включая 4 случая, классифицируемые как
вариант T –клеточной/гистиоцитарной B- клеточной лимфомы из больших клеток
[TCRLBCL]), и 8 случаев ALCL (включая 5 с фенотипом T- клеток и 3 из нулевых клеток).
Список 1. вносит распределение различных типов лимфом.
Список 1. Факторы транскрипции и B- клеточные маркеры, настоящее изучение.
Число
случаев
BSAP
Oct-2
BOB.1
PU.1
CD20
CD22
CD79a
ALCL
8
0(0)
0(0)
2(25)
0(0)
ND
ND
ND
DLBCL
25
25(100)
25(100)
24 (96)
10 (40)
25/25 (100)
20/22(91)
21/21 (100)
CHL
57
52(91)
19(33)
16(28)
1 6(28)
17(30)
10/54 (19)
3/53 (6)
MC
10
9(90)
4(40)
3(30)
09(90)
6(60)
1/9(11)
1/8(13)
NS
42
38 (90)
12(29)
10 (24)
1 2(29)
7(17)
7/41 (17)
2/41 (5)
LD
1
1 (100)
0(0)
0(0)
0(0)
1 (100)
1 (100)
0(0)
LR
4
4(100)
3(75)
3(75)
0(0)
3(75)
1/3 (33)
0/3 (0)
NLPHL
5
5(100)
5(100)
5(100)
00)
5(100)
5(100)
5(100)
ALCL, анапластическая лимфома из больших клеток; BOB.1, обязательный B-клеточный белок 1; BSAP, специфичный B-клеточный
активатор белка; CHL, классическая лимфома Ходжкина; DLBCL, лимфома из крупных B-клеток; NLPHL, узловая лимфома Ходжкина с
лимфоцитарным преобладанием; NS, не дифференцируемая; Oct-2, обязательный фактор транскрипции 2.
8 образцов лимфатической ткани с фолликулярной гиперплазией, 7 образцов
лимфатического узла и миндалины, также были включены в это изучение.
Все случаи были рассмотрены независимо двумя патологами (P.B. and J.A.C.), диагнозы
были подтверждены и классифицированы, согласно Мировой
Организации
21
Здравоохранения и Классификации Опухолей . Диагнозы устанавливали, согласно
стандартным процедурам: морфологическое исследование, иммуногистохимический
анализ, цитометрический анализ, полимеразная цепная реакция (ПЦР), и когда было
необходимо, хромосомный и цитогенетический анализ с методом флуоресцентной
гибридизации in situ.
Иммуногистохимический анализ.
Парафиновые блоки были приготовлены, в 4 µm для микроскопии. После процедуры
HIER, материалы, охлаждались и промывались в 0.01-mol/L.
Иммуногистохимический анализ выполнялся с помощью TechMate 500 (Ventana
Medical Systems). Использовались следующие первичные моноклональные антитела:
анти-BSAP ( антитело 24, Лаборатория Transduction, BD Biosciences, Lexington, KY); антиPU.1 (G148-74, Лаборатория Transduction, BD Biosciences); анти-CD20 (L26, DAKO);
анти-CD22 (FPC1, Novocastra, Newcastle upon Tyne, England); и анти-CD79a (HM57,
DAKO).
Поликлональные антитела, использовались с целью определения факторов Oct-2 (sc-233,
Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, C A) и BOB.1 (sc-955, Santa Cruz Biotechnology).
Антитела для BSAP, Oct-2, BOB.1, и PU.1 использовались в разведениях 1:200, 1:1,000,
1:2,000, и 1:1,500 соответственно.
Образцы ткани выделялись вместе с первичными антителами в течение 60 минут при
комнатной температуре. Оценка результатов, независимо проводилась двумя
исследователями (P.B. and K.P.). Результаты подсчитывались в диапазоне от 0 to 3+
( отрицательный, слабый, умеренный и соответственно сильный).
Результаты.
Реактивная лимфоидная ткань.
Все 8 реактивных ткани, показывали стойкое взаимодействие B- клеток с BSAP Oct-2, и
BOB.1.
Рисунок 1. Реактивная фолликулярная гиперплазия. A. клетки зародышевого центра (FCCs) и мантийные клетки (MCs) показывают
сильную связь с (специфичным B-клеточным активатором белка [BSAP], ×200). B. отмечена связь с фактором PU.1. клетки макрофаги и
гистиоциты показывают более сильный ответ, чем FCCs и MCs (PU.1, ×400). C. Присутствие подобного BSAP, октаймер - обязательного
фактора транскрипции 2 [Oct-2]. FCCs показывают более выраженную связь с фактором, чем MCs (Oct-2, ×200). D. В отличие от других
факторов транскрипции, обязательный B-клеточный белок 1 [BOB.1] присутствовал и в ядре и в цитоплазме клеток. FCCs показывают
более выраженную связь с фактором, чем MCs (BOB.1, ×200).
Присутствие BSAP фактора наблюдалось чаще в ядре, со случайным обнаружением
в цитоплазме, больше обнаруживался в клетках зародышевого центра и мантийных
клетках. Преобладание фактора Oct-2 больше наблюдалось в цитоплазме. Это показывало
большую частоту обнаружения в клетках зародышевого центра и меньшую в мантийных
клетках. Преобладание ядерного и цитоплазматического фактора BOB.1 чаще
выявлялось в клетках зародышевого центра, чем в мантийных клетках. Было
определено наличие фактора PU.1 только в ядре, с одинаковым преобладанием, как в
клетках зародышевого центра, так и в мантийных клетках, однако обнаружение эт ого
фактора в B- клетках было ниже, чем в клетках макрофагах и гистиоцитах,
используемых как контроль.
Классическая лимфома Ходжкина.
Список 1, включает 57 исследованных случаев CHL и рисунок 2 показывает эти результаты.
Рисунок 2. Классическая лимфома Ходжкина (CHL). A. Вариант лакунарных клеток Рида- Штернберга при нодулярном склерозе CHL,
присутствующих среди большого количества маленькихB- и T- клеток (H&E, Ч1,000). B. RS клетки и некоторые другие B- клетки
имели более частое присутствие ядерного специфичного B-клеточного активатора белка [BSAP]. Вообще фактор BSAP, наблюдался чаще
в большинстве RS клеток (PU.1, Ч1,000). D. В отличие от BSAP, экспрессия октаймер-обязательного фактора транскрипции 2 (Oct-2)
снижена в RS клетках. В этой области RS клетка на 10 часах - положительна, в то время как другие на 1 и 3 часах - отрицательны (Oct-
2, Ч400). E. Подобно экспрессии Oct-2, экспрессия обязательного B-клеточного белка 1 (BOB.1) наблюдается в подтипе RS клеток, но
ниже, чем при BSAP (BOB.1, Ч400). F, Экспрессия маркера CD20 обнаруживалась только в 30% случаев (17/57); однако экспрессия
была сильнее в большинстве RS клеток (CD20, Ч400). Умеренная экспрессия маркеров CD22 (Ч400) и CD79a (Ч400), обнаруживалась
в подтипе RS клеток.
Экспрессия факторов BSAP, Oct-2, и BOB.1 отмечалась в 91% (52/57), 33% (19/57), 28%
(16/57) всех случаев, соответственно. В 10 случаях (18%), определялись факторы BSAP,
Oct-2, и BOB.1. В большинстве случаев (72% [41/57]), BSAP был отнесен к среднему
показателю (2+/3+) и наблюдался в большинстве клеток Рида – Штернберга.
В большинстве случаев (49/57 [86%]), показатели фактора BSAP были больше или равны
показателям факторов t Oct-2 или BOB.1, которые имели более слабый показатель (1+/2+)
и чаще наблюдались в RS клетках. Во всех случаях, за исключением одного, при
отсутствие фактора ВSAP (5 случаев [9%]), также наблюдалось отсутствие факторов Oct-2,
BOB.1, и PU.1.
Экспрессия маркеров B- клеток, наблюдалась в меньшем количестве случаев, 30% (17/57),
19% (10/54), и 6% (3/53) экспрессии маркеров CD20, CD22, и CD79a, соответственно.
Положительная экспрессия CD20 маркеров, наблюдалась в большинстве клеток RS. В
большинстве случаев экспрессия маркеров CD22 и CD79a была низкой. В 8 случаях (15%),
наблюдался маркер CD20 с коэкспрессией маркеров CD22 или CD79a, и в 1 случае
отмечалась экспрессия только CD22 или CD79a маркеров. Случаев экспрессии всех 3
маркеров не было. Из 11 случаев экспрессии факторов BSAP, Oct-2, и BOB.1, 7 случаев
показали экспрессию только одного B- клеточного маркера, 4 других случая показали
экспрессию двух B- клеточных маркеров.
Узловая лимфома Ходжкина с лимфоцитарным преобладанием.
Опухолевые клетки во всех 5 случаях NLPHL, показывали присутствие факторов BSAP,
Oct-2, и BOB.1, с большим преобладанием фактора Oct-2 Рисунок 3. Не отмечалось
присутствие фактора PU.1. Во всех 5 случаях отмечалась более выраженная экспрессия
только CD20 маркера, по отношению к маркерам CD22 и CD79a.
Рисунок 3. Узловая лимфома с лимфоцитарным преобладанием (NLPHL). A. H&E клетки с малыми лимфоцитами (H&E, Ч1, 000). B. Во
всех клетках определяется (специфичный B-клеточный активатор белка [BSAP], Ч1,000). C. случаев обнаружения PU.1 не было. При
этом малые B- клетки положительны (PU.1, Ч1,000). D. Обнаружение во всех случаях октаймер - обязательный фактор транскрипции 2
(Oct-2) (Oct-2, Ч1,000). E. Подобно факторам BSAP и Oct-2, наблюдается наличие во всех случаях обязательного B-клеточного белка 1
(BOB.1) (BOB.1, Ч1,000). F. Все случаи положительны для всех 3 B- клеточных маркеров (l CD20, Ч1,000; middle panel, CD22, Ч1,000;
CD79a, Ч1,000).
DLBCL, включая TCRLBCL.
Все 25 случаев показывали наличие факторов BSAP и Oct-2.
Рисунок 4. (DLBCL). A. Типичное проявление DLBCL, с преобладанием больших опухолевых клеток (H&E, Ч400). B. Во всех
больших опухолевых клетках обнаружен (специфичный B-клеточный активатор белка, Ч200). C. Почти половина случаев была
отрицательна для PU.1.В то время, как клетки гистиоциты были положительны для этого фактора (PU.1, Ч200). D. Обращает на себя
внимание присутствие во всех больших опухолевых клетках октаймер - обязательного фактора транскрипции 2 (Oct-2) (Oct-2, Ч200). E.
Присутствие фактора обязательного B-клеточного белка 1 (BOB.1) распространенно повсеместно (BOB.1, Ч200). F. Все случаи
показывают присутствие маркеров CD20 (Ч400) и CD79a (Ч400). В большинстве случаев определялся маркер CD22 (Ч400); по
сравнению с маркерами CD20 и CD79a.
За исключением 1 случая TCRLBCL, все остальные случаи были положительны
для BOB.1. Из этих 25 случаев, 10 (40%), отмечалась слабо положительная или
отрицательная индукция фактора PU.1, все 4 случая TCRLBCL были отрицательны. Во
всех этих изучениях наблюдалось присутствие маркеров CD20 и CD79a (25/25 и 21/21,
соответственно). 22 случая 20 (91%) были положительны для маркера CD22.
T/нулевые клетки ALCL.
Ни в одном из 8 случаев не обнаруживались факторы BSAP, Oct-2, PU-1 или Bклеточные маркеры. В 2 случаях имелся слабый диапазон для фактора BOB. 1.
Обсуждение.
Список 1 показывает наши результаты, а список 2 показывает публикации других
исследований.
Список 2. Опубликованные данные экспрессии факторов транскрипции в образцах тканей.
Антитела и использованные
клоны
Ссылка и год
BSAP Oct-2
Krenacs et al,23
1998
7077
Foss et al,16 1999 NS
Re et al,11 2001
—
BOB.1 PU.1
CHL
BSAP
Oct-2
NLPHL
BOB.1 PU.1
5/14
—
—
PT1
—
BSAP
Oct-2
BOB.1
PU.1
2/4
28/31
—
—
—
10/10
—
—
—
sc-955 —
—
0/20
0/18
—
—
—
—
—
—
—
4/32
8/32
—
—
35/35
35/35
—
Stein et al,10 2001 —
$
Torlakovic et al,17 24
2001
AB-1
—
G148-74
27/29
0/29
—
2/35
15/15
15/15
—
15/15
Hertel et al,22
2002
—
—
G148-74
13/18
—
—
0/18
—
—
—
—
24
Saez et al,12 2002 —
sc-233 sc-955 —
—
17/24
17/24
—
—
5/5
5/5
—
Torlakovic et al,18 24
2002
—
112/117
—
—
—
58/58
—
—
—
—
—
Marafioti et al,46
2003
—
sc-233 sc-955 —
—
—
—
—
—
—
—
—
Total
—
—
185/209
21/105
25/74
2/53
85/87
55/55
40/40
15/15
(88.59)
(20.0)
(34)
(34)
(98)
(100)
(100)
(100)
52/57
19/57
16/57
1/57
5/5
5/5
5/5
0/5
Present study
24
—
—
sc-233 sc-955 G148-74
AB, антитела; ALCL, анапластическая лимфома из больших клеток; BOB.1, обязательный B-клеточный белок 1; BSAP, специфичный Bклеточный активатор белка; CHL, классическая лимфома Ходжкина; DLBCL, лимфома из крупных B-клеток; NLPHL, узловая лимфома
Ходжкина с лимфоцитарным преобладанием; NS, не дифференцируемая; Oct-2, обязательный фактор транскрипции 2.
Фактор транскрипции иммунопрофиля, в большинстве случаев CHL был следующим: В
SAP-положительный; Oct-2-отрицательный или
BOB.1-отрицательный; и PU.1отрицательный. Этот фенотип наблюдался в 74% (42/57) случаев CHL. Хотя имеются
литературные различия, экспрессия фактор BSAP наблюдалась почти в 90% всех
сообщенных случаев CHL (Список 2).
С другой стороны экспрессия фактора Oct-2 и коактиватора BOB.1 наблюдалась в
меньшем числе случаев (20% и 34 %, соответственно).
Наши результаты для фактора BSAP в CHL соответствовали большинству публикаций в
литературе18,18,22.Исключением явилось изучения Krenacs et al23, показывающие
положительные результаты в 5 (36%) из 16 случаев CHL. В отличие от других
исследователей, была использована поликлональная подготовка. Интересно, что
поликлональные антитела также оценивались Foss et al16, при этом ответ по сравнению с
моноклональным был ниже.
Различия в экспрессии факторов Oct-2 и BOB.1 были опубликованы в литературе. Наши
результаты приближались к результатам Stein et al, однако в отличие от наших результатов
не отмечалась экспрессия сразу двух факторов Oct-2 and BOB. 1. Re et al11, показали
отсутствие Oct-2 and BOB.1 во всех изученных случаях CHL. Re et al использовали
моноклональные антитела амино-концевых Oct-2, в то время как наши антитела были
поликлональными с карбоксильной-концевой молекулой. Saez et al12, также использовали
поликлональную подготовку, и обнаруживали факторы Oct-2 и BOB.1 в 71% из 24 случаев
CHL с коэкспрессией в большинстве клеток RS, 2х факторов транскрипции. Отмеченные
несоответствия могут быть отнесены к небольшому числу проведенных изучений, и
различных методов иммуногистохимии.
Факторы транскрипции фенотипа для всех случаев NLPHL и DLBCL в нашем
изучении составили BSAP-положительный/Oct-2-положительный/BOB.1-положительный.
Наши результаты в большинстве согласовывались с результатами, опубликованными в
литературе16-18: экспрессия фактора BSAP в 100% случаев NLPHL и в большинстве
случаев DLBCL. Krenacs et al.23 обнаруживали экспрессию BSAP только в 2х из 4 случаев
NLPHL и только в 79% случаев DLBCL, эти результаты могут быть связаны с
использованием поликлональных антител. Обнаружение факторов Oct-2 и BOB.1 в
NLPHL также согласовывалось с литературой, которая показывала экспрессию факторов
Oct-2 и BOB.1 во всех случаях NLPHL10,12,17. Наши результаты для DLBCL (включая
TCRLBCL) были несколько выше, однако в литературе было показано большее число
случаев экспрессии Oct-2 и BOB.1 во всех изучаемых случаях12,17. Хотя клетки Ходжкина и
Рида - Штернберга были отнесены к зародышевым B- клеткам1,2, экспрессия маркеров CD20,
CD22, и CD79a, при этом наблюдалась в меньшем числе случаев.
Список 3 вносит результаты лечения различных изучений, которые оценивали экспрессию
B- клеточных маркеров в CHL, NLPHL, и DLBCL10,17,18,21,24,25.
В литературе, описаны в случаи CHL: экспрессия CD20 маркера наблюдалась в (23.76%
среди всех случаев), далее наличие CD22 составило (14.6%) и CD79a (10.9%). Данные
относительно экспрессии CD20 в NLPHL составили (97.0%), с относительно меньшим
числом случаев экспрессии CD22 (12/14[86%]) и CD79a (27/33[82%]). Процент
обнаружения маркера CD79a, был намного выше в исследованиях при использовании
HIER. Отмечалось снижение экспрессии B-клеточных маркеров в DLBCL. По нашим
результатам и по литературным источникам, почти во всех случаях, экспрессия CD20
была выше экспрессии CD79a. Оценка экспрессии маркера CD22 в DLBCL не
проводилась.
Список 3. Литературные данные экспрессии маркеров CD20, CD22, и CD79a в образцах тканей.
Антитела и
использованные
клоны
CHL
LPHL
CD20/ CD20/
Ссылка и год
CD20 CD22
Chittal et al,24 1990
L26
Coles etal,25 1988
L26
—
—
3/25
—
—
—
—
Hall etal,26,271988
L26
—
MB-1
(NS)
5/38
—
0/38
—
Pinkus and Said,28 1988
L26
—
—
8/63
—
—
Schmid etal,29 1991
L26
—
32/55
—
Zukerberg etal,30 1991
L26
—
—
7/20
Carbone et al,31 1992
L26
—
—
Delsol etal,32 1993
L26
Enblad etal,33 1993
CD22 CD79a 22
79a
15/16
—
—
—
—
—
3/3
—
1/5
—
—
—
—
9/9
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
11/66
—
—
—
—
—
—
—
—
—
4KB128 HM57
17/63
7/63
0/63
3/3
0/63
3/3
3/3
3/3
3/3
3/3
L26
—
—
39/151 —
—
—
—
1/1
—
—
—
—
Kurtin and Roche, 1993
L26
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
Kuzu etal,35 1993
L26
4KB128 HM-57 22/79
15/79
0/79
NS
NS
6/7
7/7
6/7
NS
6/7
Bai et al,36 1994
L26
—
—
15/64
—
—
—
—
—
—
—
—
—
Chadburn and Knowles,37
1994
L26
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
—
Korkolopoulou et al,38 1994
L26
—
JCB117 20/67
—
19/94
—
7/67
7/8
—
14/14
—
7/8
O'Grady et al,39 1994
L26
—
—
7/33
—
—
—
—
3/4
—
—
—
—
Ashton-Key et al,40 1995
L26
—
JCB117 8/15
—
6/15
—
4/15
4/4
—
3/4
—
3/4
Mason etal,41 1995
—
—
JCB117 —
—
—
—
—
—
—
—
—
—
Orazi etal,42 1995
L26
—
—
5/29
—
2/29
—
—
—
—
—
Herbst etal,43 1996
—
NS
—
29/31
2/4
—
NS
—
34
CD79a CD20
CD22
CD79a 22
79a
CD20/ CD20/
CD20
4/4
9/29
L26
MB-1
(NS)
S-HCL1 —
Vasef etal,44 1997
L26
—
NS
3/43
—
2/44
—
NS
—
—
—
—
—
Foss etal,16 1999
L26
—
—
8/27
—
—
—
—
—
—
—
—
—
Watanabe et al,45 2000
L26
—
NS
18/51
—
13/50
—
11/50
—
—
—
—
—
Stein et al,10 2001
L26
—
JCB117 6/32
—
NS
—
—
35/35
—
NS
—
—
Torlakovic et al, 2001
NS
—
—
10/35
—
—
—
—
15/15
—
—
—
—
Torlakovic etal,18 2002
L26
—
—
25/117 —
—
—
—
58/58
—
—
—
—
17
48/278 10/57
Общее количество
Настоящее изучение
—
L26
—
FPC1
—
HM57
321/
1,351
29/199 45/412 3/63
23/6324 192/198 12/14 27/33
3/3
19/22
(23.76) (14.6)
(10.9)
(5)
(10.7)
(970)
(86)
(82)
(100)
(86)
17/57
3/53
6/54
2/53
5/5
5/5
5/5
5/5
5/5
10/54
CHL, классическая лимфома Ходжкина; DLBCL лимфома из крупных B-клеток; NLPHL узловая лимфома Ходжкина с лимфоцитарным
преобладанием; NS, не дифференцируемая.
Схема 1, является алгоритмом для использования факторов транскрипции в сочетании с
B- клеточными маркерами в дифференциальном диагнозе лимфомы Ходжкина.
С тех пор как доказали, что BSAP относится к B-клеточному происхождению,
приблизительно в 90% случаев, наличие BSAP исключает диагноз ALCL. Однако важно
обратить внимание, что недостаточность экспрессии фактора BSAP, не исключает диагноз
CHL, так как подтипы CHL в (9%) случаев не экспрессируют BSAP. В нашем изучении
фактор Oct-2 был отрицательный во всех случаях ALCL, тогда как BOB.1 был слабо
положителен в 2 (25%) из 8 случаев.
При использовании поликлональных антител, совместные результаты Saez et al12 и Marafioti
et al46 показали в 15% (2/13) и 77% (10/13), присутствие Oct-2 и BOB.1, соответственно в
ALCL. Таким образом, в отличие от BSAP, факторы Oct-2 и BOB.1 не могут
использоваться в дифференциальном диагнозе между CHL и ALCL.
Дифференциальный диагноз лимфомы Ходжкина также включает DLBCL.21
В большинстве случаев CHL в нашем исследовании (74% [42/57]), обнаруживался фактор
BSAP, при отсутствии в большинстве случаев DLBCL, экспрессии факторов Oct-2 или
BOB.1, при экспрессии в большинстве случаев TCRLBCL, всех 3 маркеров. BSAP при
этом не помогает в дифференциальной диагностике, так как экспрессируется в
большинстве случаев CHL и во всех случаях DLBCL.
Наличие экспрессии сразу 3 маркеров транскрипции, также помогает в установке диагноза,
так как в большинстве случаев CHL (10/57 [18%]), экспрессируются все 3 фактора
транскрипции.
Однако наблюдается недостаточная экспрессия факторов Oct-2 или BOB.1 в CHL, начиная
со всех случаев DLBCL. Хотя, для CHL факторы Oct-2, BOB.1 могут быть положительны,
наблюдается экспрессия в слабом диапазоне.
Кроме, того, присутствие всех 3 B- клеточных маркеров говорит в пользу диагноза DLBCL,
потому что в большинстве случаев DLBCL (91%), и ни в одном случае CHL,
происходит экспрессия все 3 B- клеточных маркеров.
Обратите внимание, что основанная на нашем алгоритме, в нашем ряду, фракция всех
случаев CHL составляет (7% [4/57]), не отделяя от случаев DLBCL (8% [2/25]), при этом все
случаи имеют BSAP-позитивный/Oct-2-позитивный/BOB.1-позитивный фенотип факторов
транскрипции, при экспрессии 2 или 3 поверхностных B- клеточных маркеров.
DLBCL и CHL
DLBCL/NLPHL
BSAP
ALCL
Oct-2/BOB.1
0/1+
CHL
2+
2+
B-клеточные маркеры
CD20/CD22/CD79a
3+
0/1 +
Схема 1. Предложенный алгоритм дифференциальной диагностики классической лимфомы Ходжкина (CHL) с использованием
факторов транскрипции и B- клеточных маркеров. ALCL, анапластическая лимфома из крупных клеток; BOB.1 обязательный Bклеточный белок; специфичный B-клеточный активатор белка BSAP; DLBCL, лимфома из крупных B-клеток; NLPHL, узловая лимфома
Ходжкина с лимфоцитарным преобладанием; Oct-2, октаймер - обязательный фактор транскрипции 2; 3+, экспрессия 3 маркеров; 2+,
экспрессия 2 маркеров; 1+, экспрессия 1 маркера; нет экспрессии маркеров.
Изменения в транскрипции B- клеток и поверхностных маркеров в случаях CHL, были
положены в основу дифференциации B- клеток в CHL.
Примечательно, что в 3х из 4 случаев CHL с лимфоцитарным преобладанием (LRCHL),
обнаруживался
BSAP-положительный/Oct-2-положительный/BOB.1-положительный
фенотип, наблюдаемый и в NLPHL.
Хотя число подтвержденных случаев слишком мало, для того чтобы сделать заключение,
это наводит на мысль о том, что подтип LRCHL, связан с NLPHL, ближе, чем другие
подтипы в CHL47. Подобный фенотип факторов транскрипции для NLPHL и LRCHL,
приводит к поддержанию нормального B- клеточного фенотипа.
Как техническое примечание, мы обнаружили, что с помощью моноклональных антител для
BSAP и поликлональных для Oct-2 и BOB.1, легко получались и интерпретировались
результаты.
Кроме того, хотя наши результаты, согласовывались с Torlakovic et al17 которые
обнаруживали PU.1 положительный, только в 2 (6%) из 35 случаев CHL, мы не смогли
подтвердить экспрессию PU. 1 во всех случаях NLPHL.
Наши результаты подтверждают происхождение CHL и NLPHL из B- клеток. Также
обнаружение различных B- клеточных факторов транскрипции и B- клеточных маркеров
экспрессии в CHL, определяет спектр для дифференцирования B- клеток в пределах этой
группы.
Мы обнаружили, что из-за специфичного B- клеточного происхождения в CHL, BSAP
является лучшим маркером для дифференциальной диагностики CHL и фенотипа
нулевых/ клеток ALCL.
Таким образом, хотя рутинные морфологические и иммуногистохимические изучения
помогают в диагностике CHL от других подтипов, экспрессия различных факторов
BSAP, Oct-2, and BOB.1 и B- клеточных маркеров CD20, CD22, и CD79a в трудных
случаях помогает в диагностике CHL от NLPHL и DLBCL.
Литература.
1. Kuppers R, Rajewsky K, Zhao M, et al. Hodgkin disease: Hodgkin and Reed-Sternberg cells picked from histological sections
show clonal immunoglobulin gene rearrangements and appear to be derived from B cells at various stages of development.
Proc Natl Acad Sci USA. 1994;91:10962-10966.
2. Hummel M, Ziemann K, Lammert H, et al. Hodgkin's disease with monoclonal and polyclonal populations of Reed- Sternberg
cells. N EnglJMed. 1995;333:901-906.
3. Kanzler H, Kuppers R, Hansmann ML, et al. Hodgkin and Reed-Sternberg cells in Hodgkin's disease represent the outgrowth of a
dominant tumor clone derived from (crippled) germinal center B cells. J Exp Med. 1996;184:1495-1505.
4. Marafioti T, Hummel M, Foss H-D, et al. Hodgkin and Reed- Sternberg cells represent expansion of a single clone originating
from a germinal center B-cell with functional immunoglobulin gene rearrangements but defective immunoglobulin transcription.
Blood. 2000;95:1443-1450.
5. Scholer HR. Octamania: the POU factors in murine development. Trends Genet. 1991;7:323-329.
6. Theil J, Laumen H, Marafioti T, et al. Defective octamer- dependent transcription is responsible for silenced immunoglobulin
transcription in Reed-Sternberg cells.
Blood.2001;97:3191-3196.
7. Latchman DS. The Oct-2 transcription factor. IntJ BiochemCellBiol. 1996;28:1081-1083.
8. Chang JF, Phillips K, Lundback T, et al. Oct-1 POU and octamer DNA cooperate to recognize the Bob-1 transcription coactivator
via induced folding. J Mol Biol. 1999;288:941-952.
9. Laumen H, Nielsen PJ, Wirth T. The BOB.1/OBF.1 coactivator is essential for octamer-dependent transcription in В cells. Em]
Immunol. 2000;30:458-469.
10. Stein H, Marafioti T, Foss H-D, et al. Down-regulation of BOB. 1/OBF. 1 in classical Hodgkin disease but not in lymphocyte
predominant Hodgkin disease correlates with immunoglobulin transcription. Blood. 2001;97:496-501.
11. Re D, Muschen M, Tahaman A, et al. Oct-2 and Bob-1 deficiency in Hodgkin and Reed-Sternberg cells. Cancer Res.
2001;61:2080-2084.
12. Saez A-I, Artiga M-J, Sanchez-Beato M, et al. Analysis of the octamer-binding transcription factors Oct2 and Oct1 and their
coactivator BOB.1/OBF.1 in lymphomas.
Mod Pathol. 2002;15:211-220.
13. Adams B, Dorfler P, Aguzzi A, et al. Pax-5 encodes the transcription factor BSAP and is expressed in B lymphocytes, the
developing CNS, and adult testis.
Genes Dev. 1992;6:1589-1607.
14. Urbanek P, Wang ZQ, Fetka I, et al. Complete block of early В cell differentiation and altered patterning of the posterior
midbrain in mice lacking Pax/BSAP. Cell. 1994;79:901-912.
15. Kozmik Z, Wang S, Dorfler P, et al. The promoter of the CD19 gene is a target for the B-cell-specific transcription factor BSAP.
Mol Cell Biol. 1992;12:2662-2672.
16. Foss H-D, Reusch R, Demel G, et al. Frequent expression of the B-cell—specific activator protein in Reed-Sternberg cells of
classical Hodgkin's disease provides further evidence of its B- cell origin. Blood. 1999;94:3108-3113.
17. Torlakovic E, Tierens A, Dang HD, et al. The transcription factor PU. 1, necessary for B-cell development is expressed in
lymphocyte predominance, but not classical Hodgkin's disease.
AmJ Pathol. 2001;159:1807-1814.
18. Torlakovic E, Torlakovic G, Nguyen PL, et al. The value of anti—PAX-5 immunostaining in routinely fixed and paraffinembedded sections: a novel pan pre-B and B-cell marker. Am
JSurgPathol. 2002;26:1343-1350.
19. McKercher SR, Torbett BE, Anderson KL, et al. Targeted disruption of the PU.1 gene results in multiple hematopoietic
abnormalities. EMBOJ. 1996;15:5647-5658.
20. Oikawa T, Yamada T, Kihara-Negishi F, et al. The role of Ets family transcription factor PU. 1 in hematopoietic cell
differentiation, proliferation and apoptosis.
Cell Death Differ.1999;6:599-608.
21. Jaffe ES, Harris NL, Stein H, et al, eds. Pathology and Genetics of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. Lyon, France:
IARC Press; 2001. World Health Organization Classification of Tumours.
22. Hertel CB, Zhou X, Hamilton-Dutoit SJ, et al. Loss of B-cell identity correlates with loss of B cell-specific transcription factors in
Hodgkin/Reed-Sternberg cells of classical Hodgkin lymphoma. Oncogene. 2002;21:4908-4920.
23. Krenacs L, Himmelmann AW, Quintanilla-Martinez L, et al. Transcription factor B-cell-specific activator protein (BSAP) is
differentially expressed in B cells and in subsets of B-cell
lymphomas. Blood. 1998;92:1308-1316.
24. Chittal SM, Alard C, Rossi J-F, et al. Further phenotypic evidence that nodular, lymphocyte-predominant Hodgkin's disease is a
large B-cell lymphoma in evolution.
AmJ SurgPathol. 1990;14:1024-1035.
25. Coles FB, Cartun RW, Pastuszak WT. Hodgkin's disease, lymphocyte-predominant type: immunoreactivity with B-cell antibodies.
ModPathol. 1988;1:274-278.
26. Hall PA, d'Ardenne AJ, Stansfeld G. Paraffin section immunohistochemistry, I: non-Hodgkin's lymphoma. Histopathology.
1988;13:149-160.
27. Hall PA, d'Ardenne AJ, Stansfeld G. Paraffin section immunohistochemistry, II: Hodgkin's disease and large cells anaplastic
(Ki1) lymphoma. Histopathology. 1988;13:161-169.
28. Pinkus GS, Said JW. Hodgkin's disease, lymphocyte predominance type, nodular: further evidence for a B cell derivation: L&H
variants of Reed-Sternberg cells express L26, a pan B cell marker. AmJ Pathol. 1988;133:211-217
29. Schmid C, Pan L, Diss T, et al. Expression of B-cell antigens by Hodgkin's and Reed-Sternberg cells. AmJ
Pathol.1991;139:701-707.
30. Zukerberg LR, Collins AB, Ferry JA, et al. Coexpression of CD15 and CD20 by Reed-Sternberg cells in Hodgkin's disease.
AmJ Pathol. 1991;139:475-483.
31. Carbone A, Gloghini A, Volpe R. Paraffin section immunohistochemistry in the diagnosis of Hodgkin's disease and anaplastic
large cell (CD30+) lymphomas.
Virchows Arch A Pathol ANAT Histopathol. 1992;420:527-532.
32. Delsol G, Meggeto F, Brousset P, et al. Relation of follicular dendritic reticulum cells to Reed-Sternberg cells of Hodgkin's
disease with emphasis on the expression of CD21 antigen. Am
] Pathol. 1993;142:1729-1738.
33. Enblad G, Sundstrom C, Glimelius B. Immunohistochemical characteristics of Hodgkin and Reed-Sternberg cells in relation to
age and clinical outcome.
Histopathology.1993;22:535-541.
34. Kurtin PJ, Roche PC. Immunoperoxidase staining on non- Hodgkin's lymphomas for T-cell lineage associated antigens in
paraffin sections: comparison of the performance characteristics of four commercially available antibody preparations. Am J Surg
Pathol. 1993; 17:898-904.
35. Kuzu I, Delsol G, Jones M, et al. Expression of the Ig- associated heterodimer (mb-1 and B29) in Hodgkin's disease.
Histopathology. 1993;22:141-144.
36. Bai MC, Jiwa NM, Horstman A, et al. Decreased expression of cellular markers in Epstein-Barr virus—positive Hodgkin's
disease. J Pathol. 1994;174:49-55.
37. Chadburn A, Knowles DM. Paraffin-resistant antigens detectable by antibodies L26 and polyclonal CD3 predict the B- or T-cell
lineage of 95% of diffuse aggressive non- Hodgkin's lymphomas. Am J Clin Pathol. 1994;102:284-291.
38. Korkolopoulou P, Cordell J, Jones M, et al. The expression of the B-cell marker mb-1 (CD79a) in Hodgkin's disease.
Histopathology. 1994;24:511-515.
39. O'Grady JT, Stewart S, Lowrey J, et al. CD40 expression in Hodgkin's disease.
AmJ Pathol. 1994;144;21-26.
40. Ashton-Key M, Thorpe PA, Allen JP, et al. Follicular Hodgkin's disease.
AmJ SurgPathol. 1995;19:1294-1299.
41. Mason DY, Cordell JL, Brown MH. CD79a: a novel marker for B-cell neoplasms in routinely processed tissue samples.
Blood. 1995;86:1453-1459.
42. Orazi A, Jiang B, Lee CH, et al. Correlation between presence of clonal rearrangements of immunoglobulin heavy chain genes
and B-cell antigen expression in Hodgkin's disease. Am
JClinPathol. 1995;104:413-418.
43. Herbst H, Raff T, Stein H. Phenotypic modulation of Hodgkin and Reed-Sternberg cells by Epstein-Barr virus. JPathol. 1996;
179:54-59.
44. Vasef MA, Alsabeh R, Medeiros LJ, et al. Immunophenotype of Reed-Sternberg and Hodgkin's cells in sequential biopsy
specimens of Hodgkin's disease: a paraffin-section immunohistochemical study using the heat-induced epitope retrieval method.
AmJ Clin Pathol. 1997; 108:54-59.
45. Watanabe K, Yamashita Y, Nakayama A, et al. Varied B-cell immunophenotype of Hodgkin/Reed-Sternberg cells in classic
Hodgkin's disease. Histopathology. 2000;36:353-361.
46. Marafioti T, Ascani S, Pulford K, et al. Expression of B- lymphocyte-associated transcription factors in human T-cell
neoplasms. AmJ Pathol. 2003;162:861-871.
47. Anagnostopoulos I, Hansmann ML, Franssila K, et al. European Task Force on Lymphoma project on lymphocyte predominance
Hodgkin disease: histologic and immunohistologic analysis of submitted cases reveals 2 types of Hodgkin disease with a nodular
growth pattern and abundant lymphocytes. Blood. 2000; 96:1889-1899