Увеличение α7β1 интегрина повышает клеточную пролиферацию, адгезию и устойчивость к апоптозу...

Увеличение α7β1 интегрина повышает клеточную пролиферацию, адгезию и устойчивость к апоптозу мышц без
изменения экспрессии генов.
Клетки могут распознавать и взаимодействовать с окружающей средой через мембранные рецепторы,
специфичные для различных белков внеклеточного матрикса. Гетеродимерные интегрины эволюционно
консервативные рецепторы для матричных белков, обнаруженных во всех многоклеточных организмах. В
скелетных мышцах ассоциация внеклеточного матрикса с цитоскелетом имеет важное значение для поддержания
целостности сарколеммы, поддержание соответствующей архитектуры мышечных волокон, и правильная передача
усилия от мышц. Α7β1 интегрины являются частью системы связи, которая поддерживает такие ассоциации
трансмембранных белков в скелетных мышцах. Он связывается с ламинином в базальной мембране, которая
окружает мышечные волокна. В мышечных волокнах интегрины ассоциируются с субсарколемной сетью
цитоскелета через координационные комплексы адгезии. Α7β1 интегрин распространяется вдоль сарколеммы в
костамерах, и также сосредоточен в нервно-мышечных и мышечно-сухожильных соединениях. Эта локализация
предполагает, что интегрин играет ключевую роль в поддержании таких специализированных структур и их
функций в скелетных мышцах. Врожденные миопатии вызваны мутациями в человеческом гене интегрина α7
(ITGA7) подтверждают важность α7β1 интегрина в поддержании нормальной физиологии скелетных мышц.
Вторичные недостатки интегрина также распространены у пациентов с другими мышечными дистрофиями и
миопатиями неизвестной этиологии. Дистрофин-гликопротеиновый комплекс также связывает ламинин и имеет
схожие роли в скелетных мышцах, как взаимосвязь интегрин трансмембранной системы. Мутации в генах,
кодирующих компоненты дистрофинового комплекса, в результате приводят к различным типам мышечных
дистрофий, в том числе мышечной дистрофии Дюшенна (МДД). MDX мышь, генотипическая модель МДД,
широко используется для изучения этой болезни и возможных методов лечения. Однако, в отличие от пациентов с
МДД, мышь MDX имеет мягкий дистрофический фенотип и почти нормальную жизнь. Атрофин, гомолог у
млекопитающих дистрофина, увеличивается у пациентов с МДД и MDX мышей, и была выдвинута гипотеза, что
он может частично компенсировать потери дистрофина. Mdx/utrn-/- мыши с отсутствием дистрофина и атрофина
проявляют прогрессирующую мышечную дистрофию, заметно снижается мобильность и продолжительность
жизни, с серьезными отклонениями в нервно-мышечном и мышечно-сухожильном переходах. Поскольку
патология скелетной и сердечной мышцы мышей mdx/utrn-/- больше напоминает пациентов с МДД, чем патология
мышей MDX, такие мыши являются полезными, как соответствующая модель для разработки и тестирования
новых методов лечения мышечной дистрофии. В дополнение к увеличению экспрессии атрофина пациенты с
МДД и MDX мыши также имеют больше α7β1 интегрина. Другие белки цитоскелета, ассоциированные с
интегрином, такие как талин и винкулин, также повышены у MDX мышей. Это увеличение интегрина и других
компонентов адгезии комплексов привело нас к предположению, что комплексы интегрина и дистрофина имеют
перекрывающиеся роли в связи внеклеточного матрикса и цитоскелета клетки. Таким образом, увеличение
количества интегрина может функционально компенсировать отсутствие дистрофина у пациентов с МДД. Эта
гипотеза была проверена и подтверждена, показав, что трансгенная экспрессия α7 облегчает развитие тяжелой
мышечной дистрофии у mdx/utrn-/- мышей. Кроме того, в отсутствие как интегрин, так и дистрофина связи
системы (mdx/α7-/- или GMI мышей) развивалась крайняя тяжелая мышечная дистрофия. Эти результаты
подтверждают, что комплексы α7β1 интегрина и дистрофина функционально дополнительняемы и играют
важную роль в поддержании целостности скелетных мышц. Благоприятные эффекты увеличения интегрина у
mdx/utrn-/- мыши включают повышенную долговечность, сохранение структуры мышечно-сухожильных и нервномышечных синапсов, снижение апоптоза и повышение регенерации и гипертрофии. Таким образом, изучение
терапевтического потенциала увеличения α7β1 интегрина в мышцах остается недостаточно перспективным. В
качестве следующего шага в оценке интегрину-опосредованной терапии МДД, мы сформировали α7β1-интегрин
индуцибельные C2C12 миобласты и миотубы с использованием тетрациклин индуцибельных систем и оценивали
влияние увеличения α7 на клеточные функции и дифференцировку. Мы использовали Affymetrix микрочипы,
чтобы исследовать, как увеличение количества интегрина влияет на транскрипционный профиль скелетных мышц
в пробирке и в естественных условиях. Трехкратное увеличение α7 уровней в C2C12 клетках способствовал их
адгезии к ламинину, пролиферацию, снижением апоптоза. Более того, ни увеличение в три раза интегрина в
C2C12 клетках, ни восьмикратное увеличение интегрина в скелетных мышцах в естественных условиях, не
измененняло нормальной транскрипции. Кроме того, никаких открытых токсических эффектов не наблюдалось.
Поэтому повышение экспрессии α7 интегрина может быть полезно в качестве терапии для мышечной дистрофии.
РЕЗУЛЬТАТЫ.
Индуцируемая экспрессия и локализации α7 интегрина в C2C12 миогенных клетках.
Сокращение масштабов тяжелой мышечной дистрофии у мышей mdx/utrn-/- α7β1 интегрин демонстрирует
дублирование функций между интегрином и гликопротеиновым комплексом дистрофина. Для дальнейшего
изучения разработки терапии мышечной дистрофии на основе повышения α7-интегрина уровней, мы рассмотрели
функциональные и транскрипционные последствия увеличения α7β1 интегрина в мышечных клетках. Мышиные
С2С12 клетки были использованы для получения α7-интегрин тетрациклин индуцируемых клонов миогенной
клеток, которые экспрессируют α7-интегрин. ОТ-ПЦР подтвердил экспрессию α7-интегрина трансгена после
индукции тетрациклином, в то время как неиндуцированные клетки не экспрессируют α7 РНК (фиг. 1А).
Трехкратное увеличение общего интегрина было обнаружено в миобластах и 1,5-кратное увеличение
присутствовало в мышечных трубочках (рис. 1б). Чтобы быть функционально активными, интегрин должен быть
направлен к клеточной мембране. Иммунофлуоресцентное окрашивание живых клеток с антителами против
крысиного α7 (O26) показало, что индуцированный α7-интегрин был локализован на клеточной мембране и в
миобластах и мышечных трубочках (рис. 1С). Таким образом, индуцированный интегрина локализован в
клеточной мембране, чтобы сформировать α7β1 интегрина фокальную адгезию.
Индуцированный α7 интегрин избирательно способствует адгезии миобластов к ламинину. Для проверки того,
что экспрессия крысинного α7 интегрина в C2C12 клетках функциональна, мы определили, может ли
индуцированный α7 интегрин способствовать адгезии к различным белкам внеклеточного матрикса.
Индуцированные и неиндуцированные Tetα7-C2C12 клетки отделяли и высевали в полную среду на БСА, с
покрытием ламинином или фибронектином в 24-луночных планшетах. Количество клеток, которые прилипали
через 30 мин было определено (фиг.2А). Повышенное содержание интегрина способствовало клеточной адгезии на
ламинине и снижение адгезии к фибронектину (рис. 2б). Практически не оставались клетки на BSA-лунках, что
подтверждает, что сцепление было субстратспецифично.
α7β1 интегрин стимулирует клеточную пролиферацию и способствует прогрессии клеточного цикла.
Интегрины могут функционировать с рецепторами факторов роста, такие как EGF и фактор роста гепатоцитов
регулировать пролиферацию клеток. Поэтому мы проверяли, действительно ли индуцированные Tetα7 C2C12клетки, с содержанием примерно в три раза больше интегрина, имеют различную скорость пролиферации.
Индуцированные или неиндуцированные Tetα7-C2C12 клетки высевали при одинаковой плотности в ростовой
среде, содержащей различные концентрации FBS, с или без тетрациклина. Дикий тип C2C12 клеток используют,
чтобы исключить возможность того, что сам тетрациклин влияет на клеточную пролиферацию. Никаких различий
в удвоение не наблюдалось в клетках, выращенных в среде, содержащей 20% или 10% FBS. Тем не менее, более
низкие концентрации FBS (0,5%, 1%, 2% и 5%) замедляли пролиферацию неиндуцированных клеток, но делали
это в меньшей степени в клетках с повышенным уровнем интегрина (фиг. 3А). Эти результаты показывают, что
α7β1 интегрин может сенсибилизировать миобласты к факторам роста, чтобы активировать пролиферацию клеток.
Для дальнейшего тестирования для определения дополнительного действия α7β1 интегрина на миобласты по
увеличению чувствительности к факторам роста, миобласты выращивают в течение 48 ч в бессывороточной
среде с добавлением или без тетрациклин, чтобы синхронизировать клетки при G1/G0 без индукции
дифференцировки. Затем среду изменяли, до содержания 20% FBS, с или без тетрациклин, и прогрессия
клеточного цикла была определена с помощью проточной цитометрии. Tetα7-индуцированные клетки С2С12
прогрессировали в G2 / M быстрее, чем неиндуцированные клетки (рис. 3б). Это первый
отчет, который показал, что α7β1 интегрин регулирует пролиферацию миобластов и прогрессию клеточного цикла,
и это поддерживает предыдущие выводы, что миобласты размножаются быстрее, чем при выращивании на
ламинине.
Расширенная экспрессия интегрина не влияет на дифференцировку миобластов.
Α7β1-интегрин экспрессируется репликацирующимися миобластами, спутниковыми клетками и зрелыми
волокнами скелетной мышцы, и он участвует в дифференцировке миобластов и поддержании целостности мышц.
Слияние миобластов и экспрессия тяжелой цепи миозина были использованы для контроля дифференцировки
клеток с повышенным α7β1 интегрином. C2C12 и Tetα7-C2C12 клетки выращивали до слияния, в этот момент
дифференциации в среду был добавлен тетрациклин. Процент тяжелой цепи миозина-позитивных клеток и индекс
слияния клеток указывают на отсутствие значительных различий в связи с увеличением интегрина (рис. 4, А и В).
α7β1-интегрин защищает миобласты от апоптоза, индуцированного стауроспорином.
Клеточная адгезия регулирует пролиферацию, миграцию и дифференциацию, а также поддерживает выживание
клеток. Интегрин-опосредованная адгезия регулирует апоптоз в различных клетках, в том числе скелетных
мышцах. При ламинин-2-дефицитной врожденной мышечной дистрофии, количество α7β1 интегрина вторично
снижается, что приводит к потере мышечного сцепления волокон с внеклеточным матриксом, апоптозом и
атрофией мышц. Кроме того, α7-трансгенные мыши mdx/utrn-/- с повышенными уровнями интегрина также имеют
меньше апоптотических ядер чем у mdx/utrn-/- мышей как измерено при окрашивании терминальной
дезоксинуклеотидилтрансферазой. Поэтому мы использовали Tetα7-клеток С2С12 для изучения вопроса о
предотвращении апоптоза интегрином в миобластах в пробирке. Tetα7-миобласты С2С12 выращивали в
тетрациклине, чтобы получить избыток интегрина, и затем обрабатывали стауроспорином. Стауроспорининдуцированный апоптоза в С2С12 клетках может быть идентифицирован путем окрашивания для активной
каспазы-3. Апоптоз в клетках также сокращался и может быть идентифицирован морфологически (рис. 5, А, С, и
Е). Иммунофлуоресцентное окрашивание выявило меньшую активность каспазы-3 в клетках, обработанных
тетрациклином, в сравнении с неиндуцированными и контрольными C2C12 клетками (рис. 5а, б, г, е).Повышенная
экспрессия интегрина в миобластах уменьшила апоптоз, примерно в два раза в клетках, выращенных на ламинине
(рис. 5б). Таким образом, представляется, что повышенная экспрессия α7β1 интегрина миобластами может
защитить от апоптоза.
Гистологии α7 интегрина трансгенных скелетных мышц кажется нормальной. Трансгенных мышей,
экспрессирующие субъединицу интегрина α7BX2, под контролем промотора, креатинкиназы, получали, как
описано ранее (7). Иммуноблот белковых экстрактов из икроножной и камбаловидной мышц от α7-трансгенных и
мышей дикого типа показал восьмикратное увеличение α7BX2 белков в трансгенных мышцах (фиг.6А).
Иммунофлуоресцентное окрашивание с крысинными O26 моноклональными антителами и поликлональными
антителами против α7B цитоплазматического домена продемонстрировали высокий уровень экспрессии интегрина
крысы α7-трансгена (фиг. 6В). Подавляющее большинство интегрина было локализовано на сарколемме, однако
наблюдалась некоторая цитоплазматическая локализация (рис. 6б), вероятно, из-за избытка α7-цепи. Окраска
гематоксилином и эозином не обнаружила заметных различий между скелетными мышцами у трансгенных мышей
и крнтролем дикого типа (рис. 6В).
Кроме того, никаких существенных различий в массе тела (фиг. 6C) или средней площади поперечного сечения
волокна не наблюдалось (фиг. 6D), хотя было 12%-ное увеличение процента меньших волокон у трансгенных
мышей. Восьмикратная экспрессия α7 цепи в трансгенных скелетных мышцах не производит каких-либо явных
негативных изменений в нормальных физиологических условиях.
Увеличение количества α7β1 интегрина в миобластах и скелетных мышцах заметно не изменяет нормальной
транскрипции.
Интегрин α7β1 может взаимодействовать с сигнальными молекулами и факторами транскрипции, такими как
FHL2 и FHL3 в скелетных мышцах. Поэтому для сверхэкспрессии интегрина было бы лучше, если бы она не
нарушала нормальные функции клеток и экспрессию генов. Профиль не индуцированной транскрипции и
индуцированной определяли с использованием Tetα7-C2C12 клеток и мышей дикого типа и интегрин α7трансгенных мышей при помощи микрочипов Affymetrix анализа.
Сопоставление данных неиндуцированных и индуцированных Tetα7-клеток С2С12 показало относительно
небольшое различие
их общих транскрипционных профилей (фиг. 7А). Коэффициент корреляции
индуцированного и неиндуцированного массивов миобластов был 0,996, что свидетельствует о высоком сходстве
в их профиле транскрипции. Семь зондов представляют шесть генов (табл. 2) Эти шесть генов участвуют в
метаболизме клеток (АС, Ugt1a2, ANK2 и pigt), регуляции апоптоза (Trib3 и Angptl4) и эндоплазматической сети
(ER) ответе при перегрузках (Trib3). Среди шести генов было только два отдельных набора зондов, и оба показали
аналогичные изменения уровней экспрессии. Это было подтверждено полуколичественной ОТ-ПЦР (фиг. 7В).
Полный список наборов зондов показал изменения в экспрессии в 1,5 раза, с скорректированными значениями P
<0,05, данные находится в Справочной таблице 1.
Trib3, гомолог у млекопитающих 3 триббл Drosophila, впервые был идентифицирован в качестве ингибитора пути
Akt, и он экспрессируется на высоком уровне в печени. Более поздние сообщения продемонстрировали, что
экспрессия Trib3 может быть вызвана стрессом сигналов по потоку СНОР. Интересно, что CHOP, также был
увеличен в 1,6 раза в массиве анализа. Это увеличение в экспрессии Trib3, CHOP, и нескольких других генов,
участвующих в клеточном ответе может представлять собой обобщенный ответ на сверхэкспрессию мембранных
рецепторов и адаптировать миобласты к увеличению α7-цепи. Тем не менее, Trib3 обычно не экспрессируется во
взрослых скелетных мышцах, и его экспрессия резко уменьшилось после дифференцировки из клеток С2С12.
Таким образом, это увеличение Trib3 транскриптов в миобластах вряд ли существенна для ответа мышечных
волокон с увеличением α7β1 интегрина....
Анализ массива икроножной и камбаловидной мышцы от α7-трансгенных мышей был сделан, чтобы определить
эффект увеличения интегрина в естественных условиях. Двадцать девять наборов зондов из 20 генов сообщили о
более чем двукратном увеличении транскрипции, а также три набора зондов определили более чем двукратное
уменьшение экспрессии трех генов (табл. 3). 36-кратное увеличение α7-транскриптов обнаружено у трансгенных
мышах. Гены, экспрессия которых существенно изменена> 1,5 раза перечислены в Справочной таблице 2. По
аналогии с результатами анализа массива миобластов, относительно небольшое число генов, как было
обнаружено, дифференциально экспрессируются у интегрин трансгенных мышей (рис. 7а). 0,999 Коэффициент
корреляции дикого типа и α7-интегрин трансгенных мышей анализа массива указывает на высокое сходство их
профилей транскрипции. Значительные изменения нескольких генов отмечено в массиве данных (Teme58, pttg1,
hspa5 и армэ) были подтверждены полуколичественной ОТ-ПЦР (фиг. 7В)....
Анализ генной онтологии показал, многие изменения в экспрессии генов, связанных с клеточным метаболизмом,
в том числе синтез белка, посттрансляционная обработка, а также транспортные белки. Эти гены включают
рибосомный белок S4 (1110033J19Rik), разветвленные аминокислоты аминотрансферазы (Bcat2), 2-подобный
белок 1 (SDF2L1), тиреотропный гормон-рецептор 11 (Trip11 или TRIP230), трансмембранный белок 58 (Tmem58
, подобно крысе Scotin), прогрессивная миоклонические эпилепсии, тип 2 гена α-(Epm2a), дисульфидизомераза 6
(Pdia6), коатомерный белковый комплекс субъединица α-(Кубок) и белок теплового шока 70 кДа 5 (Hspa5, захват,
или Бип).
Другие группы генов, которые дифференциально транскрибируются связаны с клеточным делением, G белком
сигнализации, и индуцируемым интерфероном p200 семейства белков. Tacc2, PRC1 и pttg1, являются
регуляторами клеточного деления и характеризовались повышенной экспрессией. Их отношение к интегрину
неясно, но увеличение пролиферации спутниковых клеток было отмечено у α7mdx/utrn-/- мышей (12). RGS5 и
xpr1 участвуют в сигнализации G белка (3, 17) и их экспрессия была увеличена у интегрин трансгенных мышей.
Пять зондов, представляющих три белка в индуцируемый интерфероном p200 семье, были значительно увеличены
у интегрин трансгенных мышей (Таблица 3). Представители этого семейства имеют специфические функции в
скелетных и сердечных мышцах.
Ifi204 миобластов способствует дифференциации и увеличивается после MyoD-зависимой дифференцировки
мышечных клеток-предшественников. Таким образом, увеличение экспрессии этих генов
может усиливать дифференцировку скелетных мышц у α7-интегрин трансгенных мышей. Несколько
последовательностей тегов также дифференциально экспрессируются. Среди них повышенная экспрессия Armet,
внеклеточного белка, который может представлять собой модификацию внеклеточной среды мышечных волокон с
повышенным интегрином.
Ни экспрессии генов β1-интегрина, ни мРНК, кодирующих другие основные компоненты адгезии не увеличилась
соизмеримо с увеличением α7 цепи в миогенных клетках и скелетных мышцах. Иммунофлуоресцентное
окрашивание также не свидетельствуют об увеличении β1D в α7-трансгенных мышей (рис. 6б). Локализация α7
цепи внутри трансгенных мышечных волокон (рис. 6б, стрелки) и снижение экспрессии интегрина α4 (ITGA4)
видно из указанных данных, β1-цепь может быть ограничена у α7-трансгенных мышей. Нормальная экспрессия
β1-интегрина у α7-мышей также предполагает, что регуляция транскрипции α7 и β1 является независимым в
скелетных мышцах, и это объясняет отсутствие изменений в мРНК β1, о чем свидетельствуют наши массивы. Так
как нет изменений в транскрипции генов, кодирующих компоненты комплекса дистрофина, в обоих анализах
массив, вполне вероятно, что расширение структурной связи и сигнализации при условии увеличением интегрина
возможно для облегчения дистрофической патологии у α7-трансгенных MDX / utrn-/ - мышей....
Анализ массива adam12 трансгенных мышей, в которых увеличение adam12 частично сохранен у MDX мышей,
сообщил об увеличении α7-белка, но не мРНК в скелетных мышцах. В наших клетках и тканях никаких
существенных изменений в любой транскрипции генов adam12 не было обнаружено, которая предполагает, что
α7β1 интегрин может работать далее в последовательности или совместно с adam12 в продвижении регенерации
мышц и предотвращении мышечной дистрофии. Этот вывод подтверждает также неспособность сверхэкспресси
adam12 облегчить патологию у ламинин-2-дефицитных мышей, у которых интегрин α7β1 вторично снижается....
Анализы в настоящем исследовании показывают, что лишь немногие изменения транскрипции связаны с
повышением α7β1 интегрина в миобластах или в скелетных мышцах, и возможно развитие интегринопосредованной терапии мышечной дистрофии.
Дискуссия.
Α7β1-Интегрин ламинин рецептор мышечных клеток-предшественников и зрелые скелетных мышечных волокон.
Регулируемое развитие экспрессии и альтернативного сплайсинга α7-интегрина цепи имеют важное значение для
соответствующей миогенной клеточной пролиферации, адгезии, миграции и дифференцировки. Облегчение
мышечной дистрофии трансгенной сверхэкспрессией интегрина у мышей mdx/utrn-/- показало потенциал для
использования его в качестве терапии для мышечной дистрофии. Это привело нас к изучению биологических
эффектов повышения уровня интегрина в миобластах и скелетных мышечных волокнах. С использованием
тетрациклин индуцируемых интегрин-экспрессирующих миобластов, мы показали, что увеличение количества
α7β1 интегрина улучшает адгезию и пролиферацию миобластов и придает устойчивость к стауроспорининдуцированному апоптозу, но не мешает миогенной дифференцировке. Эти эффекты были достигнуты без
заметного изменения экспрессии генов....
Облегчение тяжелой мышечной дистрофии у мышей путем усиления экспрессии интегрина α7β1 показало
функциональное улучшение мышечного сцепления волокон, усиление мышечно-сухожильной связи и нервномышечных синапсов, расширение регенеративной способности и улучшенние сигнализации, что приводит к
снижению апоптоза и выживаемости. Как показано здесь, трансгенные сверхэкспрессии α7-цепи мыши дикого
типа не изменяет массу тела или гистологию скелетные мышц, а также не резко изменяет глобальную экспрессию
генов. Таким образом, увеличение α7 интегрина является выгодным для мышц и имеет только минимальные
побочные эффекты....
В миобластах индукция тетрациклином привела к тройной сверхэкспрессии α7 интегрина, тогда как только 1,5кратное увеличение наблюдалось в мышечных трубочках. Чем меньше кратное увеличение наблюдалось в
мышечных трубочках, скорее всего, за счет увеличения синтеза эндогенного α7 интегрина в C2C12 клетках при
дифференциации. Кроме того, в соответствии с предыдущими сообщениями, что α7-интегрин повышает
немышечно-клеточную адгезию к ламинину, подтвердился тот факт, что усиление экспрессии интегрина α7β1 в
миобластах С2С12 также увеличивает их адгезию к ламинину, однако соответственно уменьшается адгезия к
фибронектину. Подобные эффекты были зарегистрированы, когда α7 интегрин избыточно экспрессируется в
клетках яичника китайского хомячка, предполагая, что там может быть конкуренция между α7 и другими αсубъединицами интегринов с общей β1-цепью. В поддержку этой гипотезы транскрипты α4 стенограммы
интегрина был также обнаружен у α7 интегрин трансгенных мышей. Эти данные свидетельствуют о
потенциальной конкуренции между различными α-цепями интегрина для их общей β1-субъединицы в качестве
механизма регулирования сродства миобластов к различным белкам матрицы....
Повышенная способность клеток с повышенным содержанием α7β1 интегрина пролиферировать в низкой
концентрации сыворотки предполагает, что интегрины могут оказывать на влияние на спутниковые клетки,
которые более чувствительны к предельной концентрации факторов роста в естественных условиях. Эти
находящиеся в покое мышечные стволовые клетки, которые активируются при низком уровне факторов роста,
могут способствовать увеличению количества клеток-предшественников и повышению регенерации и
восстановлении, так как у α7-интегрин трансгенных мышей mdx/utrn-/- (12). Аналогично, α7β1 интегрин делает
миофибриллы высокочувствительными к низким уровням Agrin, и это способствует кластеризации рецепторов
ацетилхолина, ранний этап в развитии нервно-мышечных синапсах.
Апоптоз и мышечных волокон и миобластов наблюдается в дистрофических мышцах, как сообщалось, и
активация каспазы-3 участвовует в этом процессе. Мы наблюдали приблизительно 50%-ное снижение количества
каспазы-3 активированных клеток после обработки стауроспорином клеток с повышенной экспрессией α7β1, что
свидетельствует о том, что интегрин может функционировать в качестве антиапоптотического сигнала в
миогенных клетках. α7-интегрин трансгенные мыши mdx/utrn-/- также имеют меньше апоптотических клеток, чем
их нетрансгенные коллеги. В соответствии с этой гипотезой, увеличение интегрина имеет защиту от повреждения
при физической нагрузке. Таким образом, повышение экспрессии α7 интегрина может помочь скелетным мышцам
после травмы или апоптоза обойтись без ущерба для нормальных физиологических функций.
Несколько "дополнительных" генов, как было показано, могут облегчить патологию дистрофических мышц, когда
их уровни экспрессии возрастают. Тем не менее, транскрипционные изменения, вызванные избыточной
экспрессией этих генов в миобластах и скелетных мышцах до сих пор не в полной мере изучены. Оценка
глобального изменения транскрипции в результате дополнительных генов у трансгенных мышей, имеет важное
значение для определения возможных побочных эффектов этой генной терапии. Здесь мы использовали
множество профилей для оценки гиперэкспрессии α7-интегрина в качестве терапии для мышечной дистрофии. Ни
трех кратное увеличение α7-белка в миобластах ни восьмикратное увеличение в зрелой скелетной мышце
значительно не изменили их соответствующих транскрипционных профилей. В обоих случаях, относительно
немногие гены имели больше чем в два раза изменения в экспрессии, и большинство из этих изменений в
транскрипции, вероятно, связано с ER легким стрессом, связанным с избыточной экспрессией α7-цепи. Другие
связаны с клеточным делением, G сигнализацией, и интерферон-индуцибельным P200 семейством белков. Среди
них RGS5, маркер перицитов, эти клетки миогенной природы у человека и могут быть использованы в клеточной
терапии для мышечной дистрофии. Повышенная экспрессия RGS5 в α7-интегрина трансгенных мышей может
привести к увеличению количества перицитов и высокой регенеративной способности и снижению патологии, как
показано у α7mdx/utrn-/- мышей. Аналогично, индуцируемые интерфероном p200 семейство белков, таких как
Р204 может также способствовать мышечной дифференциации у α7-трансгенных мышей.
Несколько возможностей может объяснить отсутствие более драматических изменений в транскрипции α7
интегрин сверхэкспрессирующими миобластами и скелетными мышцами. Во-первых, α7β1 интегрин в основном
действует как рецептор, опосредующий трансмембранные связи мышечных волокон с внеклеточным матриксом.
Его относительно короткий цитоплазматический хвост предпологает, что он не имеет ферментативной активности,
и таким образом имеет меньший потенциал для инициирования сигнала по сравнению с другими рецепторами.
Поэтому, несмотря на усиленную экспрессию интегрин повышает конструктивную связь через сарколемму, это не
обязательно способствовует значительным изменениям в транскрипции. Соответственно, уменьшение патологии у
мышей с дистрофией и за счет повышения уровня интегрина, вероятно, будет в значительной степени в связи с
восстановлением трансмембранных связей и специализированных структур скелетных мышц.
Во-вторых, недавние сообщения о изменениях в сигнализации индуцированные у α7 интегрин трансгенных
мышей дикого типа предоставляют свидетельство, что интегрин механосенсор в скелетных мышцах. У α7трансгенных мышей, наш анализ также показывает, что гены, участвующие в сигнализации G белка (RGS5 и хрг)
изменяются в соответствии с увеличением α7-интегрина. Поскольку интегрин и G белок сигнализация регулируют
друг друга, и оба участвуют в инициировании механической сигнализации, согласованная экспрессии этих генов в
скелетной мышце может регулировать механосвязанную трансдукцию и адаптацию волокон к сжатию и
растяжению. Таким образом, значительно больше изменений в транскрипционном профиле может быть
результатом активации α7β1 интегрина путем механической нагрузки, что, как известно, способствовует
сигнализации. Кроме того, избыток интегрина может способствовать целостности конструкции или амплификации
переходных сигналов, которые не приводят к изменению экспрессии генов. Дальнейший анализ массива интегрин
α7-трансгенных мышей после тренировки необходимо, чтобы определить, может ли активация интегрина на
механические стимулы регулировать экспрессию генов....
В-третьих, хотя α 7-трансгенные мыши имеют 36-кратное увеличение α 7-РНК и восьмикратным увеличением α 7белка, больших изменений не было обнаружено ни в мРНК или уровнях белка ее β 1-субъединицы. Таким
образом, количество α 7 β 1-интегрина не регулирует β 1-транскрипции. Кроме того, нет никакого снижения β 1цепи у α 7-нулевых мышей. Точно так же мы не наблюдали изменения в уровнях мРНК других компонентов
фокальных комплексов адгезии в массиве анализа. Ограниченные количества β 1-цепи и / или других
компонентов фокальных комплексов адгезии (фокусной киназой адгезии, интегрин-связанных киназ, винкулина и
талина) может ограничить передачу сигналов интегрина и в результате отсутствие регуляции транскрипции.
Иммунофлуоресценция локализации α 7-цепи у трансгенных мышей показала некоторое окрашивание внутри
волокон, а это, вероятно, отражает предельное количество β 1-субъединицы.
Следует отметить, что транскрипция не является равномерной во всех ядрах в мышечных волокнах; в ядрах в
непосредственной близости от соединительных участков происходит транскрипция генов, кодирующих белки,
специфические для тех участков. Таким образом, возможно, что повышение экспрессии интегрина триггеры
локально ограниченых транскрипционных изменений ядер вблизи мышечно-сухожильных и / или нервномышечных синапсов, мест, где интегрин содержится в большом количестве. В нашем анализе такие изменения
могут быть скрыты относительно большим количеством общей РНК из других частей мышечных волокон.
Хотя повышение уровня интегрина у дикого типа скелетных мышц резко не изменяет транскрипция, в среде
дистрофических мышц это может быть не так. Дистрофические и здоровые скелетные мышцы отличаются по
составу их внеклеточного матрикса, окислительного состояния, саркоплазматической
концентрации Ca2 +, активность протеазы и других метаболических процессов, и все эти различия может
регулировать активация α7-интегрина и / или транскрипция. В самом деле, увеличение α7-РНК и белка, талина и
винкулина, видны у пациентов с Дюшенна и у MDX мышей.
Наконец, α7β1 интегрин, как недавно сообщалось, опухолевый супрессор активности в различных тканях и
мутации в α7-гене связанны с образованием опухоли. Этот интересный вывод согласуется с более ранними
результатами, в которых дефектные миогенные клетки были преобразованы и онкогенные, и не экспрессировали
H36 антигена [позднее выяснилось, что α7 интегрин (66)], а также недавно обнаруженую высокую скорость
образования опухоли у α7-нулевых мышей (DJ Буркин, неопубликованные наблюдения). Таким образом,
повышение уровней α7-интегрина также может быть полезно в качестве терапевтического подхода к раку с
минимальным эффектом транскрипции.
Таким образом, эффекты увеличения интегрина в клетках предшественниках и в скелетных мышечных волокнах
обнадеживают в отношении разработки улучшений в качестве терапии для мышечных дистрофий. В то время как
интегрин может способствовать адгезии миобластов, пролиферации и резистентности к апоптозу, повышение
интегрина в клетках-предшественниках даст увеличение числа и более эффективных клеток для восстановления
дистрофические волокон. Кроме того, мышечные волокна, полученные из таких предшественников имели бы
больше способности к укреплению связей между внеклеточным матриксом и цитоскелето. Повышенная
способность к пролиферации таких миогенных клеток может также способствовать более эффективным
регенеративным способностям и противодействию истощению популяций стволовых клеток, что лежит в основе
прогрессивной атрофии мышц, такой как у пациентов с Дюшенна. Кроме того, увеличение уровней интегрина в
миобластах и скелетных мышцах не способствует серьезным изменениям в экспрессии генов, и, следовательно,
терапии, скорее всего, не будет иметь серьезных негативных побочных эффектов....
Ссылки.
↵ Allikian MJ, Hack AA, Mewborn S, Mayer U, McNally EM. Genetic compensation for sarcoglycan loss by integrin α7β1 in
muscle. J Cell Sci 117: 3821–3830, 2004.Abstract/FREE Full Text
↵ Bao ZZ, Lakonishok M, Kaufman S, Horwitz AF. α7β1 Integrin is a component of the myotendinous junction on skeletal
muscle. J Cell Sci 106: 579–589, 1993.Abstract/FREE Full Text
↵ Battini JL, Rasko JE, Miller AD. A human cell-surface receptor for xenotropic and polytropic murine leukemia viruses:
possible role in G protein-coupled signal transduction. Proc Natl Acad Sci USA 96: 1385–1390, 1999.Abstract/FREE Full
Text
↵ Berry SE, Liu J, Chaney EJ, Kaufman SJ. Multipotential mesoangioblast stem cell therapy in the mdx/utrn−/− mouse
model for Duchenne muscular dystrophy. Regen Med 2: 275–288, 2007.CrossRef Medline
↵ Berthier C, Blaineau S. Supramolecular organization of the subsarcolemmal cytoskeleton of adult skeletal muscle fibers.
A review. Biol Cell 89: 413–434, 1997.CrossRef Medline Web of Science
↵ Bondjers C, Kalen M, Hellstrom M, Scheidl SJ, Abramsson A, Renner O, Lindahl P, Cho H, Kehrl J, Betsholtz C.
Transcription profiling of platelet-derived growth factor-B-deficient mouse embryos identifies RGS5 as a novel marker for
pericytes and vascular smooth muscle cells. Am J Pathol 162: 721–729, 2003.Medline Web of Science
↵ Boppart MD, Burkin DJ, Kaufman SJ. α7β1-Integrin regulates mechanotransduction and prevents skeletal muscle injury.
Am J Physiol Cell Physiol 290: C1660–C1665, 2006.Abstract/FREE Full Text
↵ Bulfield G, Siller WG, Wight PA, Moore KJ. X chromosome-linked muscular dystrophy (mdx) in the mouse. Proc Natl
Acad Sci USA 81: 1189–1192, 1984.Abstract/FREE Full Text
↵ Burkin DJ, Gu M, Hodges BL, Campanelli JT, Kaufman SJ. A functional role for specific spliced variants of the α7β1
integrin in acetylcholine receptor clustering. J Cell Biol 143: 1067–1075, 1998.Abstract/FREE Full Text
↵ Burkin DJ, Kaufman SJ. The α7β1 integrin in muscle development and disease. Cell Tissue Res 296: 183–190,
1999.CrossRef Medline Web of Science
↵ Burkin DJ, Kim JE, Gu M, Kaufman SJ. Laminin and α7β1 integrin regulate agrin-induced clustering of acetylcholine
receptors. J Cell Sci 113: 2877–2886, 2000.Abstract/FREE Full Text
↵ Burkin DJ, Wallace GQ, Milner DJ, Chaney EJ, Mulligan JA, Kaufman SJ. Transgenic expression of α7β1 integrin maintains
muscle integrity, increases regenerative capacity, promotes hypertrophy, and reduces cardiomyopathy in dystrophic
mice. Am J Pathol 166: 253–263, 2005.Medline Web of Science
↵ Burkin DJ, Wallace GQ, Nicol KJ, Kaufman DJ, Kaufman SJ. Enhanced expression of the α7β1 integrin reduces muscular
dystrophy and restores viability in dystrophic mice. J Cell Biol 152: 1207–1218, 2001.Abstract/FREE Full Text
↵ Campbell KP. Three muscular dystrophies: loss of cytoskeleton-extracellular matrix linkage. Cell 80: 675–679,
1995.CrossRef Medline Web of Science
↵ Chamberlain JS, Metzger J, Reyes M, Townsend D, Faulkner JA. Dystrophin-deficient mdx mice display a reduced life
span and are susceptible to spontaneous rhabdomyosarcoma. FASEB J 21: 2195–2204, 2007.Abstract/FREE Full Text
↵ Chan PC, Chen SY, Chen CH, Chen HC. Crosstalk between hepatocyte growth factor and integrin signaling pathways. J
Biomed Sci 13: 215–223, 2006.CrossRef Medline Web of Science
↵ Chen C, Zheng B, Han J, Lin SC. Characterization of a novel mammalian RGS protein that binds to Gα proteins and
inhibits pheromone signaling in yeast. J Biol Chem 272: 8679–8685, 1997.Abstract/FREE Full Text
↵ Cohn RD, Campbell KP. Molecular basis of muscular dystrophies. Muscle Nerve 23: 1456–1471, 2000.CrossRe Medline
Web of Science
↵ Crawley S, Farrell EM, Wang W, Gu M, Huang HY, Huynh V, Hodges BL, Cooper DN, Kaufman SJ. The α7β1 integrin
mediates adhesion and migration of skeletal myoblasts on laminin. Exp Cell Res 235: 274–286, 1997.CrossRef Medline
Web of Science
↵ Deconinck AE, Rafael JA, Skinner JA, Brown SC, Potter AC, Metzinger L, Watt DJ, Dickson JG, Tinsley JM, Davies KE.
Utrophin-dystrophin-deficient mice as a model for Duchenne muscular dystrophy. Cell 90: 717–727, 1997.CrossRef
Medline Web of Science
↵ Dellavalle A, Sampaolesi M, Tonlorenzi R, Tagliafico E, Sacchetti B, Perani L, Innocenzi A, Galvez BG, Messina G,
Morosetti R, Li S, Belicchi M, Peretti G, Chamberlain JS, Wright WE, Torrente Y, Ferrari S, Bianco P, Cossu G. Pericytes of
human skeletal muscle are myogenic precursors distinct from satellite cells. Nat Cell Biol 9: 255–267, 2007.CrossRef
Medline Web of Science
↵ Du K, Herzig S, Kulkarni RN, Montminy M. TRB3: a tribbles homolog that inhibits Akt/PKB activation by insulin in liver.
Science 300: 1574–1577, 2003.Abstract/FREE Full Text
↵ Echtermeyer F, Schober S, Poschl E, von der Mark H, von der Mark K. Specific induction of cell motility on laminin by α7
integrin. J Biol Chem 271: 2071–2075, 1996.Abstract/FREE Full Text
↵ Engvall E, Wewer UM. The new frontier in muscular dystrophy research: booster genes. FASEB J 17: 1579–1584,
2003.Abstract/FREE Full Text
↵ Flintoff-Dye NL, Welser J, Rooney J, Scowen P, Tamowski S, Hatton W, Burkin DJ. Role for the α7β1 integrin in vascular
development and integrity. Dev Dyn 234: 11–21, 2005.CrossRef Medline Web of Science
↵ Foster RF, Thompson JM, Kaufman SJ. A laminin substrate promotes myogenesis in rat skeletal muscle cultures: analysis
of replication and development using antidesmin and anti-BrdUrd monoclonal antibodies. Dev Biol 122: 11–20,
1987.CrossRef Medline Web of Science
↵ Gaedigk R, Law DJ, Fitzgerald-Gustafson KM, McNulty SG, Nsumu NN, Modrcin AC, Rinaldi RJ, Pinson D, Fowler SC,
Bilgen M, Burns J, Hauschka SD, White RA. Improvement in survival and muscle function in an mdx/utrn−/− double
mutant mouse using a human retinal dystrophin transgene. Neuromuscul Disord 16: 192–203, 2006.CrossRef Medline
Web of Science
↵ Gentleman RC, Carey VJ, Bates DM, Bolstad B, Dettling M, Dudoit S, Ellis B, Gautier L, Ge Y, Gentry J, Hornik K, Hothorn
T, Huber W, Iacus S, Irizarry R, Leisch F, Li C, Maechler M, Rossini AJ, Sawitzki G, Smith C, Smyth G, Tierney L, Yang JY,
Zhang J. Bioconductor: open software development for computational biology and bioinformatics. Genome Biol 5: R80,
2004. doi: 10.1186/gb-2004-5-10-r80.CrossRef Medline
↵ Gillis JM. Membrane abnormalities and Ca homeostasis in muscles of the mdx mouse, an animal model of the
Duchenne muscular dystrophy: a review. Acta Physiol Scand 156: 397–406, 1996.CrossRef Medline Web of Science
↵ Grady RM, Teng H, Nichol MC, Cunningham JC, Wilkinson RS, Sanes JR. Skeletal and cardiac myopathies in mice lacking
utrophin and dystrophin: a model for Duchenne muscular dystrophy. Cell 90: 729–738, 1997.CrossRef Medline Web of
Science
↵ Gregorevic P, Allen JM, Minami E, Blankinship MJ, Haraguchi M, Meuse L, Finn E, Adams ME, Froehner SC, Murry CE,
Chamberlain JS. rAAV6-microdystrophin preserves muscle function and extends lifespan in severely dystrophic mice. Nat
Med 12: 787–789, 2006.CrossRef Medline Web of Science
↵ Guo C, Willem M, Werner A, Raivich G, Emerson M, Neyses L, Mayer U. Absence of α7 integrin in dystrophin-deficient
mice causes a myopathy similar to Duchenne muscular dystrophy. Hum Mol Genet 15: 989–998, 2006.Abstract/FREE Full
Text
↵ Guo LT, Shelton GD, Wewer UM, Engvall E. ADAM12 overexpression does not improve outcome in mice with laminin
alpha2-deficient muscular dystrophy. Neuromuscul Disord 15: 786–789, 2005.CrossRef Medline Web of Science
↵ Hayashi YK, Chou FL, Engvall E, Ogawa M, Matsuda C, Hirabayashi S, Yokochi K, Ziober BL, Kramer RH, Kaufman SJ,
Ozawa E, Goto Y, Nonaka I, Tsukahara T, Wang JZ, Hoffman EP, Arahata K. Mutations in the integrin α7 gene cause
congenital myopathy. Nat Genet 19: 94–97, 1998.CrossRef Medline Web of Science
↵ Hilder TL, Carlson GM, Haystead TA, Krebs EG, Graves LM. Caspase-3 dependent cleavage and activation of skeletal
muscle phosphorylase b kinase. Mol Cell Biochem 275: 233–242, 2005.CrossRef Medline Web of Science
↵ Hodges BL, Hayashi YK, Nonaka I, Wang W, Arahata K, Kaufman SJ. Altered expression of the α7β1 integrin in human
and murine muscular dystrophies. J Cell Sci 110: 2873–2881, 1997.Abstract/FREE Full Text
↵ Hynes RO. Integrins: versatility, modulation, and signaling in cell adhesion. Cell 69: 11–25, 1992.CrossRef Medline Web
of Science
↵ Kato S, Du K. TRB3 modulates C2C12 differentiation by interfering with Akt activation. Biochem Biophys Res Commun
353: 933–938, 2007.CrossRef Medline Web of Science
↵ Kaufman SJ, Foster RF, Haye KR, Faiman LE. Expression of a developmentally regulated antigen on the surface of
skeletal and cardiac muscle cells. J Cell Biol 100: 1977–1987, 1985.Abstract/FREE Full Text
↵ Kaufman SJ, Parks CM, Bohn J, Faiman LE. Transformation is an alternative to normal skeletal muscle development. Exp
Cell Res 125: 333–349, 1980.CrossRef Medline Web of Science
↵ Kronqvist P, Kawaguchi N, Albrechtsen R, Xu X, Schroder HD, Moghadaszadeh B, Nielsen FC, Frohlich C, Engvall E,
Wewer UM. ADAM12 alleviates the skeletal muscle pathology in mdx dystrophic mice. Am J Pathol 161: 1535–1540,
2002.Medline Web of Science
↵ Lapidos KA, Kakkar R, McNally EM. The dystrophin glycoprotein complex: signaling strength and integrity for the
sarcolemma. Circ Res 94: 1023–1031, 2004.Abstract/FREE Full Text
↵ Laprise P, Poirier EM, Vezina A, Rivard N, Vachon PH. Merosin-integrin promotion of skeletal myofiber cell survival:
differentiation state-distinct involvement of p60Fyn tyrosine kinase and p38alpha stress-activated MAP kinase. J Cell
Physiol 191: 69–81, 2002.CrossRef Medline Web of Science
↵ Law DJ, Allen DL, Tidball JG. Talin, vinculin and DRP (utrophin) concentrations are increased at mdx myotendinous
junctions following onset of necrosis. J Cell Sci 107: 1477–1483, 1994.Abstract/FREE Full Text
↵ Li C, Xu Q. Mechanical stress-initiated signal transductions in vascular smooth muscle cells. Cell Signal 12: 435–445,
2000.CrossRef Medline Web of Science
↵ Liu CJ, Ding B, Wang H, Lengyel P. The MyoD-inducible p204 protein overcomes the inhibition of myoblast
differentiation by Id proteins. Mol Cell Biol 22: 2893–2905, 2002.Abstract/FREE Full Text
↵ Martin PT. Role of transcription factors in skeletal muscle and the potential for pharmacological manipulation. Curr
Opin Pharmacol 3: 300–308, 2003.CrossRef Medline Web of Science
↵ Martin PT, Kaufman SJ, Kramer RH, Sanes JR. Synaptic integrins in developing, adult, and mutant muscle: selective
association of α1, α7A, and α7B integrins with the neuromuscular junction. Dev Biol 174: 125–139, 1996.CrossRef
Medline Web of Science
↵ Matsuda R, Nishikawa A, Tanaka H. Visualization of dystrophic muscle fibers in mdx mouse by vital staining with Evans
blue: evidence of apoptosis in dystrophin-deficient muscle. J Biochem (Tokyo) 118: 959–964, 1995.Abstract/FREE Full
Text
↵ McArdle A, Maglara A, Appleton P, Watson AJ, Grierson I, Jackson MJ. Apoptosis in multinucleated skeletal muscle
myotubes. Lab Invest 79: 1069–1076, 1999.Medline Web of Science
↵ Moghadaszadeh B, Albrechtsen R, Guo LT, Zaik M, Kawaguchi N, Borup RH, Kronqvist P, Schroder HD, Davies KE, Voit T,
Nielsen FC, Engvall E, Wewer UM. Compensation for dystrophin-deficiency: ADAM12 overexpression in skeletal muscle
results in increased α7 integrin, utrophin and associated glycoproteins. Hum Mol Genet 12: 2467–2479,
2003.Abstract/FREE Full Text
↵ Newlands S, Levitt LK, Robinson CS, Karpf AB, Hodgson VR, Wade RP, Hardeman EC. Transcription occurs in pulses in
muscle fibers. Genes Dev 12: 2748–2758, 1998.Abstract/FREE Full Text
↵ Ohoka N, Yoshii S, Hattori T, Onozaki K, Hayashi H. TRB3, a novel ER stress-inducible gene, is induced via ATF4-CHOP
pathway and is involved in cell death. EMBO J 24: 1243–1255, 2005.CrossRef Medline Web of Science
↵ Peat R, Smith JM, Compton AG, Baker NL, Pace RA, Burkin DJ, Kaufman SJ, Lamand SR, North KN. The diagnosis and
etiology of congenital muscular dystrophy. Neurology, in press.
↵ Pegoraro E, Cepollaro F, Prandini P, Marin A, Fanin M, Trevisan CP, El-Messlemani AH, Tarone G, Engvall E, Hoffman EP,
Angelini C. Integrin α7β1 in muscular dystrophy/myopathy of unknown etiology. Am J Pathol 160: 2135–2143,
2002.Medline Web of Science
↵ Pons F, Nicholson LV, Robert A, Voit T, Leger JJ. Dystrophin and dystrophin-related protein (utrophin) distribution in
normal and dystrophin-deficient skeletal muscles. Neuromuscul Disord 3: 507–514, 1993.CrossRef Medline
↵ Ren B, Yu YP, Tseng GC, Wu C, Chen K, Rao UN, Nelson J, Michalopoulos GK, Luo JH. Analysis of integrin alpha7
mutations in prostate cancer, liver cancer, glioblastoma multiforme, and leiomyosarcoma. J Natl Cancer Inst 99: 868–880,
2007.Abstract/FREE Full Text
↵ Rooney JE, Welser JV, Dechert MA, Flintoff-Dye NL, Kaufman SJ, Burkin DJ. Severe muscular dystrophy in mice that lack
dystrophin and α7 integrin. J Cell Sci 119: 2185–2195, 2006.Abstract/FREE Full Text
↵ Ross RS. Molecular and mechanical synergy: cross-talk between integrins and growth factor receptors. Cardiovasc Res
63: 381–390, 2004.Abstract/FREE Full Text
↵ Samson T, Smyth N, Janetzky S, Wendler O, Muller JM, Schule R, von der Mark H, von der Mark K, Wixler V. The LIMonly proteins FHL2 and FHL3 interact with alpha- and beta-subunits of the muscle α7β1 integrin receptor. J Biol Chem
279: 28641–28652, 2004.Abstract/FREE Full Text
↵ Sanes JR, Johnson YR, Kotzbauer PT, Mudd J, Hanley T, Martinou JC, Merlie JP. Selective expression of an acetylcholine
receptor-lacZ transgene in synaptic nuclei of adult muscle fibers. Development 113: 1181–1191, 1991.Abstract
↵ Sanes JR, Lichtman JW. Development of the vertebrate neuromuscular junction. Annu Rev Neurosci 22: 389–442,
1999.CrossRef Medline Web of Science
↵ Schwartz MA, Schaller MD, Ginsberg MH. Integrins: emerging paradigms of signal transduction. Annu Rev Cell Dev Biol
11: 549–599, 1995.CrossRef Medline Web of Science
↵ Short SM, Boyer JL, Juliano RL. Integrins regulate the linkage between upstream and downstream events in G proteincoupled receptor signaling to mitogen-activated protein kinase. J Biol Chem 275: 12970–12977, 2000.Abstract/FREE Full
Text
↵ Smythe GM, Eby JC, Disatnik MH, Rando TA. A caveolin-3 mutant that causes limb girdle muscular dystrophy type 1C
disrupts Src localization and activity and induces apoptosis in skeletal myotubes. J Cell Sci 116: 4739–4749,
2003.Abstract/FREE Full Text
↵ Song WK, Wang W, Foster RF, Bielser DA, Kaufman SJ. H36-α7 is a novel integrin alpha chain that is developmentally
regulated during skeletal myogenesis. J Cell Biol 117: 643–657, 1992.Abstract/FREE Full Text
↵ Song WK, Wang W, Sato H, Bielser DA, Kaufman SJ. Expression of α7 integrin cytoplasmic domains during skeletal
muscle development: alternate forms, conformational change, and homologies with serine/threonine kinases and
tyrosine phosphatases. J Cell Sci 106: 1139–1152, 1993.Abstract/FREE Full Text
↵ Taverna D, Disatnik MH, Rayburn H, Bronson RT, Yang J, Rando TA, Hynes RO. Dystrophic muscle in mice chimeric for
expression of α5 integrin. J Cell Biol 143: 849–859, 1998.Abstract/FREE Full Text
↵ Team RDC. R: A Language and Environment for Statistical Computing (Online). R Foundation for Statistical Computing,
Vienna, Austria. http://www.R-project.org [13 Dec. 2007].
↵ Tidball JG, Spencer MJ. Calpains and muscular dystrophies. Int J Biochem Cell Biol 32: 1–5, 2000.CrossRef Medline Web
of Science
↵ Tinsley JM, Potter AC, Phelps SR, Fisher R, Trickett JI, Davies KE. Amelioration of the dystrophic phenotype of mdx mice
using a truncated utrophin transgene. Nature 3 84: 349–353, 1996.
↵ Tomatis D, Echtermayer F, Schober S, Balzac F, Retta SF, Silengo L, Tarone G. The muscle-specific laminin receptor α7β1
integrin negatively regulates α5β1 fibronectin receptor function. Exp Cell Res 246: 421–432, 1999.CrossRef Medline Web
of Science
↵ Vachon PH, Loechel F, Xu H, Wewer UM, Engvall E. Merosin and laminin in myogenesis; specific requirement for
merosin in myotube stability and survival. J Cell Biol 134: 1483–1497, 1996.Abstract/FREE Full Text
↵ Vachon PH, Xu H, Liu L, Loechel F, Hayashi Y, Arahata K, Reed JC, Wewer UM, Engvall E. Integrins (α7β1) in muscle
function and survival. Disrupted expression in merosin-deficient congenital muscular dystrophy. J Clin Invest 100: 1870–
1881, 1997.Medline Web of Science
↵ Van der Flier A, Sonnenberg A. Function and interactions of integrins. Cell Tissue Res 305: 285–298, 2001.CrossRef
Medline Web of Science
↵ Wixler V, Geerts D, Laplantine E, Westhoff D, Smyth N, Aumailley M, Sonnenberg A, Paulsson M. The LIM-only protein
DRAL/FHL2 binds to the cytoplasmic domain of several alpha and beta integrin chains and is recruited to adhesion
complexes. J Biol Chem 275: 33669–33678, 2000.Abstract/FREE Full Text
↵ Yacoub Wasef SZ, Robinson KA, Berkaw MN, Buse MG. Glucose, dexamethasone, and the unfolded protein response
regulate TRB3 mRNA expression in 3T3-L1 adipocytes and L6 myotubes. Am J Physiol Endocrinol Metab 291: E1274–
E1280, 2006.Abstract/FREE Full Text
↵ Yao CC, Ziober BL, Sutherland AE, Mendrick DL, Kramer RH. Laminins promote the locomotion of skeletal myoblasts via
the alpha 7 integrin receptor. J Cell Sci 109: 3139–3150, 1996.Abstract/FREE Full Text
↵ Ziober BL, Kramer RH. Identification and characterization of the cell type-specific and developmentally regulated α7
integrin gene promoter. J Biol Chem 271: 22915–22922, 1996.Abstract/FREE Full Text
Переведено проектомМОЙМИО: www.mymio.org
Оригинал статьи: http://ajpcell.physiology.org/content/294/2/C627