Занятие 2. Методы выделения и фракционирования белков

ЗАНЯТИЕ № 2
Тема: « МЕТОДЫ ВЫДЕЛЕНИЯ И ФРАКЦИОНИРОВАНИЯ БЕЛКОВ»
Входной тест-контроль по теме «Строение, свойства и классификации белков».
ВОПРОСЫ ДЛЯ ПОДГОТОВКИ К ЗАНЯТИЮ
1. Роль белков в организме.
2. Структурная организация белков. Связи, участвующие в формировании первичной,
вторичной, третичной и четвертичной структуры. Доменная структура и ее роль в
функционировании белков.
3. Физико-химические свойства белков (молекулярная масса, форма молекул, ИЭТ,
растворимость, денатурация). Реакции осаждения белков: обратимые и необратимые.
4. Гидролиз белков, виды гидролиза (кислотный, щелочной, ферментативный),
определение конца гидролиза. Отличия гидролиза от денатурации.
5. Методы выделение, фракционирования и очистки белков:
 этапы выделения белков из тканей (гомогенизация и перевод белков в
растворенное состояние)
 высаливание
 диализ
 хроматография
 электрофорез
 ультрацентрифугирование
ПЕРЕЧЕНЬ ЛАБОРАТОРНЫХ РАБОТ:
1. Диализ.
2. Разделение аминокислот методом распределительной хроматографии на бумаге.
ЗАДАНИЯ ДЛЯ САМОСТОЯТЕЛЬНОЙ РАБОТЫ
Изучите методы фракционирования и очистки белков и решите предложенные ниже
задачи и тестовые задания.
1. При частичном гидролизе инсулина (В-цепи) получен тетрапептид глу-глу-ала-лей.
Укажите направление движения этого пептида в электрическом поле при рН 3,0 и рН
10,5.
2. Изоэлектрическая точка гемоглобина 6,8. В каком направлении будут перемещаться
молекулы гемоглобина в электрическом поле при рН 3,4?
3. Как выяснить произошло ли полное осаждение белка из биологической жидкости, в
которой создано 50%-ное насыщение сульфатом аммония (после отделения осадка
жидкость стала прозрачной)?
4. Найдите соответствие между методом фракционирования и очистки белков и
принципом, на котором эти методы основаны:
1. Гель-фильтрация
А. Различия по величине заряда
2. Ионообменная хроматография Б. Различия по молекулярной массе
3. Аффинная хроматография
В. Различия по связыванию с лигандом
4. Электрофорез на бумаге
Г. Различия по способности проходить через
полупроницаемую мембрану
5. Диализ
Д. Различия по скорости оседания белков
5. В ядерных белках – гистонах содержится большое количество аминокислотных
остатков аргинина и лизина, в белке крови альбумине – много остатков глутаминовой
и аспарагиновой кислот. Ответьте на вопросы: 1) в каких средах (>, < или = 7) лежит
ИЭТ этих белков? 2) с каким их двух белков может взаимодействовать Са++.
1.
2.
3.
4.
5.
6.
7.
ЛИТЕРАТУРА
Т.Т.Березов, Б.Ф.Коровкин "Биологическая химия", 1998, 2007, с. 22-33, 44-71.
Т.Т.Березов, Б.Ф.Коровкин "Биологическая химия", 1990, с. 19-28, 37-60.
Т.Т.Березов, Б.Ф.Коровкин "Биологическая химия", 1982, с. 41-76.
А.Я.Николаев "Биологическая химия", 1989, с. 9-53.
Краткий словарь биохимических терминов, 2004.
Сборник заданий по биохимии, 2007.
Лекционные записи.